CARACTERSTICAS BSICAS

PRINCIPIOS Y ESTRATEGIAS

PROYECTO GENOMA HUMANO

Cartografa genmica Secuenciacin Papel de la informtica

CONCEPTO

AVANCES RECIENTES DEL PROYECTO GENOMA HUMANO

PROYECTO GENOMA HUMANO

fue un proyecto de investigacin cientfica con el objetivo fundamental de determinar la secuencia de pares de bases qumicas que componen el ADN e identificar y cartografiar los aproximadamente 20.000-25.000 genes del genoma humano desde un punto de vista fsico y funcional. El proyecto GENOMA HUMANO permite describir por primera vez las caractersticas generales del GENOMA HUMANO. Esta etapa que es la del completamiento de ADN Humano, no es sino la base necesaria para traducir toda esta gran masa de datos de ADN en conocimientos funcionales y muchos de ellos aplicados a la medicina Por otra parte el proyecto GENOMA HUMANO se planifico como uno de los objetivos de impacto social, legal y tico de los avances de la gentica. Este objetivo es tratado por el (ELSI). Sin embargo los logros en biotica es mucho menor que los obtenidos en ciencias bsicas.

Un dato importante de recalcar es q se cree q existen 28000 genes aproximadamente en el ser humano

CARACTERSTICAS FUNDAMENTALES

El nmero exacto de genes no est bien definido pero se estima que es alrededor de 28,000 genes en una cadena de ADN. La distribucin del nmero de exones por cada gen es muy asimtrica. La estructura exnica de los genes tienes importancia funcional, porque el incremento del nmero de exones aumenta la probabilidad de mutaciones. Los secretores ricos en G+C (que se corresponden con bandas G-) poseen mayor concentracin de genes que los sectores pobres en esas bases (bandas G oscuras).

PRINCIPIOS Y ESTRATEGIAS

CARTOGRAFIA GENOMICA

SECUENCIACION

EL PAPEL DE LA INFORMATICA
Las cuestiones de gestin de datos que plantea el PGH suponen un autntico "revulsivo" para la informtica. Aunque para algunas de las tareas se puede recurrir a enfoques tradicionales, con slo aumentar la escala del procesamiento, para otros problemas se necesitan arquitecturas y programas informticos totalmente diferentes.

El PGH hace uso de dos tipos de cartografa para caracterizar el genoma, aunque en ltima instancia los mapas emanados de los distintos mtodos han de ser correlacionados e integrados: cartografa gentica de ligamiento, y cartografa fsica.

Cada ddNTP se marca con un colorante fluorescente diferente. Ello permite hacer la electroforesis en el mismo callejn del gel. Las bandas de ADN son detectadas por su fluorescencia segn pasan delante del detector. Si el detector lo hacemos mover en horizontal, podr leer varias secuenciaciones al mismo tiempo. Los datos pasan a un sistema computerizado.

En 1987 se construyeron mapas genticos de ligamiento usando polimorfismos de tipo RFLP, con una resolucin an baja: 10-15 cM

1989 era un proyecto que algunos tachaban de loco, por lo caro, superfluo y utpico que pareca, es ahora una realidad deseada y aceptada por todos,

El primer mapa gentico de ligamiento del Gnthon supuso una revolucin inmediata en el anlisis de ligamiento de las enfermedades con base gentica

La tercera versin del Gnethon se public y ya contena unos 5000 marcadores microsatlites, separados los consecutivos una media de 0.7 cM (aprox. 700 kb),

1987

1989

1992

1996

La informacin contenida en el genoma humano no se distribuye de forma uniforme a lo largo de la secuencia sino que se concentra sobre todo en secuencias denominadas genes.

ORGANIZACIN DEL GENOMA HUMANO

Los genes son la regin fsica del DNA sea son las unidades funcionales del genoma y tpicamente la informacin contenida en ellos sirve para dar lugar a protenas, tienen una longitud entre 3000 y 10000 pares de bases. Hay aproximadamente unos 25000 a 35000 genes repartidos entre todos los cromosomas.

El primer cromosoma en secuenciarse fue el cromosoma 22 y en l se han descrito 577 genes y 234 pseudogenes (contienen aberraciones en su secuencia y no son expresados por la maquinaria celular).Hay mucho DNA entre gen y gen que aparentemente no contiene informacin, a medida que se conoce m{as sobre este DNA que separa a los genes se han descubierto posibles funciones

Estas regiones llamadas promotoras pueden considerarse tambin como parte de los genes. Dentro de cada gen hay secuencias no codificantes (intrones). Este DNA presente en los intrones podra tener la funcin de incrementar la frecuencia de recombinacin meitica aumentando la generacin de combinaciones allicas en la especie humana.

ORGANIZACIN DEL GENOMA HUMANO

Las personas estamos formadas por un ingente nmero de clulas y, aunque las que constituyen la piel, el hgado, el msculo, la sangre, el sistema nervioso, etc., muestran caractersticas morfolgicas y funcionales diferentes, todas ellas encierran, en compartimentos especficos, una informacin gentica idntica, la cual no se expresa de forma simultnea en una misma clula sino que a lo largo del desarrollo se seleccionan grupos de genes que determinan su futuro estructural y funcional.

En este sentido, todas las clulas de nuestro organismo proceden, por divisiones sucesivas, de una clula precursora comn que comparte una informacin materna y paterna para constituir su propio genoma, y las caractersticas morfo-funcionales propias de cada tipo celular dependen bsicamente del particular grupo de genes que han sido seleccionados para manifestarse.
El ADN es la molcula responsable del soporte de la informacin gentica, la cual est basada en una secuencia especfica de otras molculas muchsimo menores denominadas nucletidos. El orden de estos nucletidos en el ADN es de cruciaI importancia porque define la secuencia especfica de aminocidos que tendr la futura protena.

DEFINICIN Y DENOMINACIN DE LOS GENES HUMANOS

La informacin del proyecto GENOMA HUMANO han obligado a usar normas de nomenclatura para genes, secuencias, mutaciones y otros fenmenos

Los nombres de los genes pueden referirse a la funcin del gen normal enfermedad o sndrome causado por mutacin de ese gen, a la familia de genes a la que pertenece o regin del cromosoma que se le asigna

El reconocimiento del gen por su sigla ahorra tiempo y es necesario para su bsqueda en base de datos. Esta nomenclatura fue propuesta por un comit de organizacin para el genoma humano (Hugo).

Los nombres de los genes pueden referirse a la funcin del gen normal enfermedad o sndrome causado por mutacin de ese gen, a la familia de genes a la que pertenece o regin del cromosoma que se le asigna; en muchos casos se desconoce la funcin y el significado de un gen se alude a l como Corf, en castellano (marco abierto de lectura)

ejm

C17 orf 2 es el marco abierto de lectura 2, cromosoma 17. Para encontrar el nombre correcto de un gen es aconsejable recurrir a cualquiera de las dos bases de datos que mencionen aqu.

Se unan solo letras maysculas (la misma sigla, salvo la letra inicial ,generalmente indica el mismo gen en un organismo)
CARACTERSTICAS DE LA DEFINICIN Y DENOMINACIN

El primer smbolo es siempre una letra. Se prefiere que el nombre del gen no tenga mas de 6 letras o smbolos. Solo se usa nmeros arbigos y letras latinas , sin ningn signo de puntuacin interpuesta

PROTEOMICA

Es el estudio y caracterizacin de todo el conjunto de protenas expresadas en un gen (proteoma). Permite identificar, categorizar y clasificar las protenas con respecto a su funcin y a las interacciones que establecen entre ellas. La proteomica se est aplicando en la identificacin de nuevos marcadores para el diagnstico de enfermedades, identificacin de nuevos frmacos y anlisis de proceso de traduccin de seales

Genmica

Se define como Genmica a la disciplina que estudia el genoma de los seres vivos. Tiene como objetivo catalogar todos los genes que tiene un organismo, estudiar la organizacin y estructura de cada uno de ellos pero tambin descubrir la funcin, los mecanismo simplificados en la regulacin de la expresin y el modo en que unos genes interaccionan con otros. Las aproximaciones de la genmica en cambio permiten el estudio conjunto de los miles de genes, protenas y metabolitos que constituyen un organismo as como las complicadas redes de interacciones que entre ellos se establecen en el interior de las clulas durante su ciclo vital

VARIOMA

TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINATE

Esta tecnologa nos permite obtener fragmentos de ADN en cantidades ilimitadas, que llevar adems el gen o los genes que se desee. Este ADN puede incorporarse a las clulas de otros organismos (vegetales, animales, bacterias...) en los que se podr "expresar" la informacin de dichos genes. (De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano y se lo "pegamos" al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que regula la fabricacin de insulina, lo que haramos al ponrselo a una bacteria es "obligar" a sta a que fabrique la insulina.

CORTE ESPECIFICO DEL ADN

en fragmentos pequeos y manejables mediante la utilizacin de un tipo de enzimas conocidas como enzimas de restriccin que pueden considerarse como las "tijeras moleculares". Estas enzimas se aislaron en bacterias y se identifican con distintos nombres, siendo lo caracterstico de ellas estos dos principios: Cada enzima de restriccin reconoce una secuencia especfica de nucletidos y corta en ese punto cada una de las cadenas de ADN Los extremos libres que quedan se llaman extremos pegajosos, porque pueden unirse a otros fragmentos de ADN que hayan sido cortados por la misma enzima de restriccin.

En este esquema se indica el lugar en el que corta la enzima de restriccin. Se aprecia la actuacin en ambas hebras

En este esquema se ve el resultado de la actuacin de la enzima de restriccin. Ha quedado rota la molcula de ADN, quedando unos bordes pegajosos por donde puede unirse este ADN, con otro aunque sea de una especie diferente

Los fragmentos obtenidos despus de la actuacin de las distintas enzimas de restriccin, se pueden separar por tamaos, es decir, segn el nmero de pares de nucletidos que llevan, mediante la tcnica de electroforesis y as estudiar los distintos trozos. Segn donde se hallen las secuencias de reconocimiento, un gen determinado puede estar fragmentado en varios trozos, o bien un trozo puede contener varios genes, posibilidades que hay que confirmar.

En el proceso de la electroforesis se prepara una mezcla de fragmentos de ADN y se ponen en distintas soluciones. Los fragmentos se desplazan en relacin inversa con su tamao, los fragmentos ms pequeos se mueven rpidamente, mientras que los grandes lo hacen muy lentamente

En principio se denomina as a todas las tcnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza, visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo (nacimiento de la Ingeniera gentica), amplificar una regin en una enorme cantidad de molculas (clonacin de fragmentos en bacterias u otros vectores como virus y PCR), corte de una determinada regin con enzimas de restriccin para ver si por una mutacin se gana o se pierde un sitio de restriccin (anlisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment lengt polymorphism), que siginifica: diferencias en los tamaos de los fragmentos de restriccin debido a polimorfismos en el ADN entre otras.

TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Las tcnicas de biologa molecular estn basadas en la asociacin de alteraciones de los cidos nucleicos con el cncer.

Las clulas tumorales se caracterizan por presentar alteraciones genticas y epigenticas. Las mutaciones somticas puntuales en oncogenes o genes supresores del tumor y son caractersticas del fenotipo maligno. Estas alteraciones son utilizadas como marcadores moleculares para poder detectar las clulas tumorales en las muestras clnicas.

La mayor ventaja de estos ensayos es la gran estabilidad de la molcula de DNA, si lo comparamos con la de las protenas o RNA, ya que la prdida de sensibilidad debida a la degradacin enzimtica durante el almacenamiento o transporte de las muestras clnicas es menos crtica en este tipo de estudio (Jeannine et al., 2001).

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA

Hasta mediados de la dcada del ochenta, la nica estrategia posible para aislar un gen y obtener grandes cantidades del mismo en estado puro era el "clonado molecular". Pero en 1986, K. Mullis, un investigador de la Corporacin Cetus, invent un mtodo para lograr la multiplicacin in vitro de fragmentos definidos de ADN sin necesidad de recurrir a los vectores y su replicacin en bacterias.

Este mtodo revolucionara en corto tiempo el conjunto de tcnicas de la biologa molecular. Se trata de la reaccin en cadena de la polimerasa, ya muy conocida como PCR, siglas provenientes del ingls Polymerase Chain Reaction. La reaccin en cadena de la polimerasa, ya ms conocida como PCR, es una tcnica que permite replicar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeas cantidades de ADN.

La muestra se calienta, en el primer paso, hasta lograr la separacin de las dos cadenas que constituyen el ADN, hecho que se conoce como "desnaturalizacin".

Proceso

En el segundo paso, la temperatura se reduce para permitir el "apareamiento" de cada una de dos cadenas cortas de nucletidos con cada una de las hebras separadas del ADN molde. Obviamente, para que se pueda producir el apareamiento, cada uno de estos oligonucletidos, a los que se denomina "iniciadores" o primers, debe ser complementario del tramo al que tienen que unirse en las cadenas separadas del ADN molde.

El mtodo se basa, en su forma ms simple en la realizacin de tres reacciones sucesivas llevadas a cabo a distintas temperaturas. Estas reacciones se repiten cclicamente entre veinte y cuarenta veces.

. En tercer lugar, una enzima ADN polimerasa extiende los

primers, en el espacio comprendido entre ambos, sintetizando las secuencias complementarias de las hebras del ADN molde. Para ello, la ADN polimerasa usa desoxidonuclesidos trifosfato (dNTPs) agregados a la mezcla de reaccin

DESNATURALIZACION

HIBRIDACION

EXTENSION

El resultado de la aplicacin de numerosos ciclos "en cadena" da lugar a la amplificacin geomtrica del segmento de ADN delimitado por los primers. El producto que se obtiene al finalizar la reaccin es una gran cantidad de un fragmento gnico con alto grado de pureza la cual favorece la tarea de los investigadores empeados en ampliar nuestros conocimientos sobre la estructura y funcin de los genes Por su alta sensibilidad, esta tcnica permite identificar un gen a partir de un solo cabello, una clula somtica o un espermatozoide.

RESULTADOS

El descubrimiento de las mutaciones de un gen responsables de una determinada enfermedad hereditaria permite realizar un diagnstico etiolgicos en las prcticas clnicas. Aparte se sabe que los conocimientos en etiologa aportan un pronstico y abren las puertas a la prevencin y tratamiento de enfermedades hereditarias. El primer paso en el anlisis gentico suele constituir en la obtencin de una muestra de sangre venosa q se enva al laboratorio de anlisis gentico.

Tambin es posible partir de otro tipo de muestras tales como biopsias o fluidos corporales . Una vez q tenemos la muestra de sangre o de otro tipo son recibidas en el laboratorio de anlisis gentico , suele procederse a la extraccin del DNA y a la amplificacin del gen de inters a travs de la reaccin en cadena de la polimerasa o PCR .

En algunos casos la observacin del producto de PCR despus de su electroforesis aporta directamente informacin diagnostica. Por ejemplo: la deteccin de amplificacin de secuencias de microorganismos (helicobacter pilori en un paciente con problemas gstricos ). La informacin gentica puede orientar hacia un tratamiento. Aporta un pronstico y permite el estudio de otros miembros de la familia. En muchos casos la deteccin pre sintomtica de la alteracin molecular en familiares o individuos q sirve para la prevencin de la enfermedad . este en otros casos de la deteccin prenatal permite realizar un programa de revisiones peridicas .

Uffffffffffffff.!!!!! Eso es todo gracias