TEMA 8

PROCESOS BSICOS EN CITOLOGA

CITOPREPARACIN

PROCESOS BSICOS EN CITOLOGA

1.-DEFINICIONES BSICAS. 2.-TIPOS DE MUESTRAS CITOLGICAS. 3.-TCNICA GENERAL DE PREPARACIN Y COLORACIN CITOLGICA. 4.-FROTIS Y EXTENSIONES. 5.-TINCIONES ESPECIALES EN CITOLOGA.

8.1.-DEFINICINES BSICAS
Citodiagnosis /Citodiagnstico: Procedimiento diagnstico basado en el examen de las clulas obtenidas en un exudado o trasudado. // Resultado de este examen. Citogentica: Estudio de la estructura y funcin de los cromosomas celulares. Citologa: Parte de la biologa que estudia la clula. Citlogo/ga: Persona especializada en citologa.

8.1.-DEFINICINES BSICAS
CITOPATOLOGA PARTE DE LA ANATOMA PATOLGICA QUE, MEDIANTE DIVERSOS PROCEDIMIENTOS, ESTUDIA ALTERACINES MORFOLGICAS DE ESTAS CLULAS.

8.1.-DEFINICINES BSICAS
CITODIAGNSTICO Es el diagnstico morfolgico basado en los caracteres microscpicos de clulas y componentes extracelulares, desprendidos de los rganos espontneamente u obtenidos por procedimientos que, en general, son menos invasivos que la biopsia.

OBJETIVOS DEL CITODIAGNSTICO 1) Colaboracin en el diagnstico y tipificacin de neoplasias malignas, mediante la evaluacin de las alteraciones de la morfologa del ncleo, del citoplasma y de las relaciones entre las clulas.

OBJETIVOS DEL CITODIAGNSTICO

2) Diagnstico especfico de algunas lesiones benignas, por ejemplo:

tumores benignos, hiperplasias, ciertas infecciones virales o micticas.

OBJETIVOS DEL CITODIAGNSTICO

3) Eleccin de pacientes que deben ser estudiados ms profundamente en grupos de alto riesgo para un tipo especfico de cncer.

OBJETIVOS DEL CITODIAGNSTICO

4) En hematologa, examen cualitativo y cuantitativo de los elementos figurados de la sangre perifrica(hemograma) y de la mdula sea (mielograma).

VENTAJAS
SIMPLICIDAD RAPIDEZ POCO AGRESIVIDAD BAJO COSTE
PERMITE IDENTIFICAR EN POCO TIEMPO LA MAYORA DE LAS LESIONES PERMITE REALIZAR UN MUESTREO DE LA LESIN MUCHO MS AMPLIO Y REITERADO PERMITE HACER UN SEGUIMIENTO DINMICO DE LA CONDUCTA DE LAS LESIONES

2.-TIPOS DE MUESTRAS CITOLGICAS.

dependiendo de la cantidad de lquido que presenten

Mtodo directo: se emplea cuando la muestra es rica en clulas, es decir, presenta muy poca cantidad de lquido por lo que el material colectado se coloca directamente sobre un portaobjetos para realizar el frotis, como ejemplos tenemos la puncin aspiracin con aguja fina, los raspados e improntas. Mtodo indirecto: en caso de que las muestras obtenidas sean lquidas y para realizar el frotis habr que concentrar la poblacin celular mediante centrifugacin, ejemplos son la orina y lquidos procedentes de lavado.

Mtodos de Obtencin de la Muestra

1.-Por exfoliacin forzada, mediante el frotamiento o raspado con diversos instrumentos. Esta tcnica es aplicada en piel y rganos fcilmente accesibles desde el exterior. Una variante son las muestras obtenidas por cepillado a travs de endoscpio. 2.-A travs de lquidos emitidos de forma espontnea que trasportan los elementos descamados (esputo, orina, secrecin mamaria, secrecin nasal) 3.-A travs de lquidos extrados mediante mediante instrumentos de exploracin (endoscopia), con clulas en suspensin procedentes de zonas orgnicas internas (tracto respiratorio, tubo gastrointestinal, cavidades serosas). Estos lquidos pueden proceder de acmulos originados espontneamente en dichas zonas o ser el resultado de lavados hechos con suero fisiolgico. 4.-Por puncin-aspiracin con aguja fina (PAAF) de lesiones en rganos sin acceso directo y que no tienen secrecines espontnea.

RGANOS MAS ESTUDIADOS

APARATO GENITAL FEMENINO RBOL RESPIRATORIO APARATO DIGESTIVO VAS URINARIAS Y PRSTATA PIEL CAVIDADES ORGNICAS
PERITONEAL PLEURAL PERICRDICA RAQUDEA ARTICULAR

Tipos de muestras segn su procedencia

Muestras procedentes de lquidos fisiolgicos como por ejemplo sangre, orina lquido cefalorraqudeo, liquido pleural, liquido prosttico, contenido gstrico Muestras procedentes de lquidos y fluidos patolgicos, liquido de derrames, pleural, peritoneal, contenido de un quiste, expectoracin bronquial, liquido procedente del lavado de esfago, estmago, colon. Y las procedentes de cito punciones como por ejemplo la puncin de mdula sea, la puncin heptica Muestra procedentes de frotis legrados como por ejemplo el frotis vaginal y el cepillado bronquial. Piezas operatorias.

MUESTRAS QUE LLEGAN AL LABORATORIO

Frotis fijados: lo constituyen aquellos frotis que han sido extendidos y fijados por el clnico inmediatamente despus de la obtencin de la muestra. Deben llegar al laboratorio adecuadamente identificadas con el nombre del paciente y uniformemente extendidos, normalmente se fijan con cito spray, estos portas que ya llegan al laboratorio fijados estn listos para proceder a la tincin rutinaria que se suele realizar al de papanicolau, ejemplos son las secreciones de mama, las muestras procedentes de cepillados y otros tipos de muestras citolgicas. Frotis secados al aire: son frotis extendidos por el clnico inmediatamente despus de la obtencin de la muestra y secados al aire, estos frotis no fijados van destinados a ser teidos con la tincin de Romanowsky. Muestras no fijadas ni secadas al aire: este tercer grupo incluye las muestras frescas que llegan a laboratorio generalmente en forma de fluido lquido o semislido, requiere mayor dedicacin y habilidad.

El procesamiento de estas muestras puede ser por:

Extensin directa: es la tcnica ms rudimentaria especialmente til para muestras mucosas (esputo, lquido de aspecto mucoso, aspirado bronquial) Centrifugacin: es una tcnica til para muestras seromucosas y grandes volmenes de lquidos serosos (liquido qustico y procedentes de lavados). Citocentrifugacin: esta tcnica se hace con una centrifuga llamada citospyn. Pequeas alcuotas (cantidades iguales) de muestra lquida se hacen girar lateralmente sobre un porta para formar una monocapa de clulas. Es una tcnica de gran utilidad y rapidez para la preparacin de muestras lquidas. Filtros de membrana: constituyen una tcnica de concentracin de clulas en muestras lquidas de baja densidad celular (orina) ya que rescatan mayor nmero de clulas que la citocentrifugacin. Estos filtros son membranas porosas de plstico cuyos poros van de 10 - 8 micras.

Extensin directa
Identificar dos o ms portas con el nombre o nmero de orden del enfermo. Observar la muestra y anotar su aspecto microscpico. Se seleccionan aquellas partes de la muestra que son representativas de la misma y las de apariencia patolgica. Se deben colocar las partes seleccionadas sobre un porta y extenderlas con otro hasta conseguir frotis uniformes, tambin se pude hacer con el asa de platino previamente esterilizada. Los portas preparados pueden introducirse en la solucin fijadora (caso de la tensin de Papanicolau) o se deja secar al aire (si se van a teir con Romanowsky).

centrifugacin
Anotar el aspecto mucoso de la muestra. Agitar la muestra para despus resuspender las clulas que contiene y verter igual cantidad en dos tubos de centrifuga. Se centrifuga a una velocidad aproximada de 2000rpm, durante 5 minutos, una vez centrifugado se decanta el sobrenadante, mezclar el sedimento con unas gotas de sobrenadante para resuspender las clulas y depositar con una pipeta pasteaur una gota de este sedimento sobre un porta previamente identificado. Realizar una extensin directa con esta parte de la muestra o citocentrifugarla. Fijar rpidamente con la solucin fijadora.

Filtros de membrana
Los ms utilizados son: Tipo millipore (de acetato de celulosa). Filtros nucleopore (de policarbonato). Se realiza una filtracin con la muestra y posteriormente se examina el filtro. En citologa se usan sobre todo los filtros SM, cuyos poros van de 1 - 2 a 5 micras, cada cm2 de superficie contiene millones de poros capilares que ocupan ms del 80 % del volumen total. Este filtrado no necesita ningn fraccionamiento del lquido y no hay que extraer el sedimento y colocarlo sobre el pota objetos; ello permite una estimacin cuantitativa de las clulas cancerosas en un volumen de lquido dado pero en cambio pueden haber superposiciones celulares molestas y la membrana filtrante experimentar una desecacin rpida. El lquido se filtra a la presin atmosfrica o a una presin negativa de 25 mm de mercurio, una presin negativa ms fuerte no es aconsejable ya que podra deformar las clulas. La fijacin debe hacerse nicamente con alcohol etlico de 95 pues el alcohol absoluto, el ter o la acetona provocaran la disolucin del filtro. El filtro con la muestra sujeto con una pinza se coloca sobre un portaobjetos y se tie.

TOMA DE MUESTRAS EN CITOLOGIA

El principal objetivo de la "Toma de Muestras en Citologa" es obtener un nmero significativo de clulas y otros elementos acompaantes que al ser evaluados "en conjunto", reflejen la composicin del material a ser analizado. Por ello son de primordial importancia el "mtodo de muestreo" y la eleccin del "sitio adecuado de toma de muestra".

TOMA DE MUESTRAS EN CITOLOGIA

1.-RASPADO O ABRASIN 2.-SONDAJES-LAVADOS 3.-IMPRONTAS 4.-PUNCIN DE CAVIDADES CORPORALES 5.-TOMA DE MASAS SLIDAS 6.-HISOPADOS

1.-RASPADO ABRASION
Materiales : se utilizan esptulas, portaobjetos, hojas de bistur , esptula , etc. Indicaciones : esta metodologa es recomendada para aquellos casos donde predomina la superficie sobre la profundidad , tales como piel mucosas , conjuntiva palpebral*, bucal , vaginal , lesiones ulcerativas , etc. * En las lesiones de tipo supurativo, se aconseja tomar la muestra de conjuntiva palpebral y ocular superior para evitar recolectar detritus celulares y otros elementos que pudieren ser arrastrados por las lgrimas acumulndose en fondo de saco conjuntival inferior. Tcnica : se procede a recolectar el material y se lo extiende sobre un portaobjetos limpio y desengrasado procurando que la extensin sea lo ms delgada posible evitando la formacin de grumos y capas densas . Al tiempo de extradas las muestras del animal vivo (excresis quirrgica, biopsia, etc.) o como hallazgo de necropsia, comienzan a producirse en los tejidos los llamados "procesos de autlisis". Estos, se deben fundamentalmente, al cese de los fenmenos de oxigenacin y nutricin que conducen, en forma irremediable, a la alteracin de las estructuras biolgicas . Este acontecimiento es particularmente importante en los rganos parenquimatosos con tejidos ms nobles , como por ejemplo nervioso, heptico y renal. Para detener dichos fenmenos autolticos debe procederse entonces a la fijacin. Esta, debe interpretarse como un mtodo histolgico de preservacin destinado a obtener preparaciones duraderas que mantengan

2.-SONDAJES-LAVADOS
Materiales: sondas , solucin fisiolgica , tubos para recoleccin, portaobjetos.

Indicaciones : para recolectar por arrastre material de regiones de difcil acceso (cavidad nasal , tracto respiratorio inferior, urinario, etc.) Tcnica : consiste bsicamente, en instilar una solucin de lavado (solucin fisiolgica) y al recuperarla por aspiracin obtener material por arrastre.

3.-IMPRONTAS
Materiales :
portaobjetos limpios y desengrasados

Indicaciones:
lesiones erosivas , TVT lesiones primarias de piel (pstulas) piezas quirrgicas e intraoperatorias.

Tcnica: - Consiste simplemente en apoyar un portaobjetos sobre la superficie a ser estudiada. Si sta se hallara cubierta por sangre, suero u otra secrecin, conviene lavarla previamente con solucin fisiolgica . Es conveniente no utilizar antispticos pues podran afectar posterior tincin y morfologa celular.

4.-PUNCION DE CAVIDADES CORPORALES

Materiales : Jeringas de 2,5 , 5 , 10 cc. ; agujas de diferentes medidas (2518 , 40112 , 50/12); tubos de recoleccin; portaobjetos. Indicaciones: Cuando hay un diagnstico clnico o por RX. y/o ECOGRAFICO de colecta lquida. Tcnica:
CAVIDAD PLEURAL Tricotoma y antisepsia de la zona, previa placa de trax. Sitio: del 4to. al 8vo. espacio intercostal a la altura de la articulacin condrocostal. Realizar tunelizacin en piel y subcutneo y abordar la cavidad por borde anterior de la costilla. La aguja debe introducirse acoplada y en posicin perpendicular al animal. Realizar poca succin. CAVIDAD PERICARDICA Tricotoma y antisepsia de la zona. Sitio : entre 4to. y 5to. espacio intercostal preferentemente del lado derecho. Lo ideal es realizarlo con monitoreo cardaco. CAVIDAD ABDOMINAL Tricotoma y antisepsia de la zona. Sitio : tomando como referencia la cicatriz umbilical, la puncin se realiza dos cm. por detrs y dos cm. hacia lateral de la lnea media. Previa palpacin para evitar punzar vejiga, hgado, bazo, intestino, etc. Debe realizarse tunelizacin en piel y sc. La jeringa se introduce acoplada.

5.-DE MASAS SLIDAS

Materiales : en general similares a los utilizados para puncin de cavidades corporales. Indicaciones: presencia de masas palpables en superficie y/o en profundidad, slidas qusticas. Tcnica: Inmovilizar la masa a ser susceptible de puncin. Introducir la aguja con la jeringa acoplada directamente en la masa realizando una toma en abanico (tres veces) ejerciendo en cada una de ellas presin negativa, tratando de obtener as una muestra representativa . En el caso de masas slidas el material, generalmente quedar contenido en la aguja. Retirar la jeringa con la aguja acoplada, separar, tomar aire en la jeringa, acoplar nuevamente y depositar el material obtenido sobre un portaobjetos limpio .
Para el supuesto de muestras con mucha sangre a veces es recomendable introducir y reintroducir en abanico la aguja sola en la lesin. Una vez extrada, se acopla a la jeringa, se proyecta el material extrado sobre los portas realizndose los extendidos como de costumbre .

6.-HISOPADOS
Materiales : hisopos limpios de buena calidad y portaobjetos. Indicaciones : Sectores de difcil acceso como aberturas naturales (orificio nasal, odo, prepucio, vagina, conjuntiva ), etc. Tcnica: Presionar topicar con el hisopo el rea afectada. Una vez obtenida la muestra realizar los extendidos ya sea topicando con el extremo del hisopo varias veces en la parte central del portaobjetos rotndolo sobre s mismo.

Tipos de estudios citolgicos

Citologa vaginal: Citologa de toma nica del fondo vaginal o de crvix uterino. Citologa triple toma (Wied): Cuando de forma protocolizada se toman muestras de fondo vaginal, crvix uterino y de endocrvix. Citologa endometrial: Cuando por mtodos de sondas o cnulas se realiza toma endouterina. Citologa de secrecin: Cuando se obtiene material citolgico por medio de la expresin de una glndula o zona anatmica. Citologa de excrecin. Cuando se realiza de residuos metablicos, como la orina. Citologa por puncin (PAAF). Cuando se obtiene material citolgico mediante puncin con aguja de una lesin habitualmente no accesible externamente. Impronta. Cuando se obtienen clulas por aproximacin de un tejido u rgano al portaobjetos.

Mtodos de Obtencin de la Muestra

1) Citologa exfoliativa
a) Muestra de mucosa crvico-vaginal, por raspado con esptula de madera b) Muestra de lquido de una serosa aspirado con aguja, en caso de derrame (acumulacin anormal de lquido) peritoneal, pleural o pericrdico c) Muestra de superficie del peritoneo por lavado en una intervencin quirrgica para detectar metstasis d) Muestra de esputo, espontneo o inducido, o de lavado broncoalveolar e) Muestra de orina obtenida por miccin espontnea

2) Citologa por aspiracin con aguja fina

a) Puncin directa de lesiones superficiales palpables
b) Puncin de lesiones profundas no palpables, dirigida por imgenes

CITOLOGA EXFOLIATIVA