INSTUTUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

Laboratorio de Microbiologa PRCTICA. AISLAMIENTO Y CULTIVO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y LEVADURAS

Laboratorio 3. Equipo 4: Escamilla Armenta Jess Hernndez Villa Norma Gabriela Laboratorio 4. Equipo ___: Garcilazo Gonzlez Alejandra Galvn Vidals Lizette Profesores: M. En C. Consuelo Tovar Torres M. En C. Lizeldi Bernardino Varo Dra. Araceli Contreras Rodrguez

Introduccin.
Hongos Son unicelulares (levaduras) Multicelulares (mohos) Hbitat: suelo, agua, aire. Existen alrededor de 200,000. Muy pocas son patgenos (100) Reproduccin sexual y asexual. Sus efectos son mas bien beneficiosos:
Degradan materia orgnica, sintetizan antibiticos,

corticosteroides, cidos orgnicos, utilizados en la industria de alimentos.

Estructura y crecimiento
Conserva las caractersticas de las clulas eucariotas.

Pared celular rgida formada por polisacridos, polipptidos y quitina

Principal esterol de la membrana plasmtica:

ergosterol

Reproduccin
Sexual y asexual
Esporangiosporas

Estructuras Asexuales

Conidios
-artroconidios -microconidios -macroconidios -dictioconidios -blastoconidios

Estructura y crecimiento
Hongos Microscpicos
Ej. Levaduras

Macroscpicos
Ej. Basidiomicetos

Morfologa microscpica
Estructuras de inters: Micelio Conidios Cabeza conidial
Conidiforo Microconidios Poroconidios Filides o esterigma

Hifas
Elementos filamentosos cilndricos constituidos

por una fila de clulas alargadas envueltas por la pared celular que, reunidas, forman el micelio.

Micelio
Reproductivo

(areo): sobresale del medio de cultivo, origina unidades de reproduccin (conidiosporas) Vegetativo: adyacente al sustrato Sumergido:asegura nutricin

Micelio
Microsifonado < 1 m ( solo los

actinomicetos) Macrosifonado > 1 m

Septado hongos superiores

Cenoctico hongos inferiores

Unicelular levaduras

Micelio
Pigmentado

Por su coloracin Hialino

Carotenoide

Fuliginoso o melnico

Morfologa colonial
Aspecto
Trichotecium Roseum

Textura
Forma Consistencia Superficie Color (anverso y reverso)

Pigmento difusible
Penicillium sp

Textura
Aterciopelado

Algodonoso
Granuloso/polvoso/terroso

Trichothecium roseum

Aspergillus fumigatus

Geotrichum candidum

Superficie

Pigmento difusible
***Debe cuidarse no confundir al pigmento difusible con un micelio pigmentado, hay hongos que siendo hialinos producen este pigmento.

Penicillium sp con pigmento rojo difusible al medio de cultivo

Relacin entre morfologa colonial y microscpica

Por lo general

Textura vellosa o algodonosa Micelio continuo Esporangiosporas (esporas endgenas) Micelio septado Micelio pigmentado Conidios (esporas exgenas

Relacin entre morfologa colonial y microscpica

Ejemplo: Rhizopus nigricans

Curvularia lunata

Aspergillus sp.

Fusarium

Geotrichum

El crecimiento en placas es parecido a una levadura. Se le conoce como moho lcteo por

su presencia en productos lcteos

Penicillium

Levaduras: Son hongos de forma unicelular. La reproduccin vegetativa normal es por gemacin

Sacharomyces cerevisiae

Objetivos
Aislar cultivar y reconocer la morfologa colonial y

microscpica de algunos hongos.

Material
Colorante azul de lactofenol Nigrosina Equipo de tincin de Ziehl-Neelsen Alcohol-cido lctico

Mtodos
Aislamiento por diluciones
A partir de una muestra de alimento con crecimiento de hongos.

Tomar aproximadamente 1 g de muestra, usando pinzas y bistur y aadir al tubo 1 con 9 mL de agua destilada

Aislamiento por diluciones

Muestras

Procedimiento

Gelosa Sabouraud Rosa de Bengala

Aislamiento por diluciones

Sembrar con una

alcuota de 0.1 mL en los medios Sabouraurd y Rosa de bengala a partir de las tres ltimas diluciones.

 Extender con una

varilla acodada previamente esterilizada

Resultados

Caractersticas a considerar
Anverso Reverso Pigmento Difusible

Color

Superficie
Algodonosa Vellosa Aterciopelada Granulosa Pulvurulenta Cremosa

Plana Acuminada Crateriforme Plegada Umbilicada Cerebriforme

Textura

Clculo de UFC

PREPARACION DE MICROCULTIVOS

1.-Utilizando pinzas estriles, colocar el portaobjetos sobre la varilla de vidrio.

2.-Con un bistur cortar cuadros de 1.5cm de lado del medio de PDA grueso.

3.- Con ayuda de las pinzas estriles colocar el cuadro de PDA sobre el portaobjetos.

4.-Con el asa doblada en ngulo recto inocular el hongo proporcionado (Geotrichum sp.) en los cuatro costados del cuadro de PDA. 5.- Colocar el cubreobjetos estril sobre el cuadro de PDA .

6.-Agregar el glicerol al 10% en el fondo de la base de la caja Petri.

7.- Tapar la caja e incubar a 28C durante 72 92 h, con la tapa arriba

8.- Extraer el glicerol con una pipeta Pasteur y desecharlo en un tubo de ensaye .

9.- Inactivar los hongos con formaldehido al 10% durante una hora .

10.- Desprender cuidadosamente el cubre objetos y colocarlo sobre un portaobjetos al que previamente se le ah colocado una gota de azul de algodn lactofenol. Con el portaobjetos se puede hacer otra preparacin similar colocando una gota del colorante y un cubreobjetos limpio.

11.- Eliminar el exceso de colorante, sellar las preparaciones con barniz de uas transparente.

12.- Observar las preparaciones a seco dbil y seco fuerte.

13.- Describir las caractersticas de la morfologa microscpica de los hongos.

OBSERVACIN DE LAS ASCOSPORAS

Es una espora (meiospora) contenida en un asca. Esta clase de espora es especfica a los hongos clasificados como ascomycetes (Ascomycota).

OBSERVACION DE CIGOSPORAS

OBSERVACION DE UN BASIDIOMICETO

IMPORTANCIA DE LOS HONGOS

Importancia mdica
Blastomyces dermatitidis

Histoplasma capsulatum

Malassezia furfur

Importancia Agrcola
Colletotrichum musae

Glomerella cingulata

Phyllosticta musae

Importancia Industrial
Penicillium griseofulvum

Saccharomyces cerevisiae

Tolypocladium inflatum

Hongos comestibles
Pleurotus dryinus

Agaricus bisporus

Pleurotus ostreatus

Hongos Alucingenos
Panaeolina foenisecii

Psilocybe cubensis

Psilocybe caerulescens

Hongos Venenosos
Boletus satanas

Russula emetica

Amanita phalloides

ESPORAS
Hongos Produccin de un nuevo organelo por mitosis Proteccin y reproduccin Bacterias No producen un nuevo organelo Etapa inactiva proteccin Forman endosporas

Micorriza: asociacin de las hifas de un hongo con las races de una planta

Liquen: organismos que surgen de la simbiosis entre un hongo llamado micobionte y un alga o cianobacteria llamada ficobionte

hongo

Bacterias

Diferencias Eucariotas procariotas Reproduccin (sexual y asexual) asexualmente Tienen organelo No tienen organelo Unicelulares y Pluricelulares Unicelulares Tamao mayor que las bacterias Tamao microscpico Pared celular de quitina Pared celular de Peptidoglicano Semejanzas

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