TOMA DE MUESTRAS MICROBIOLOGICAS

El diagnstico de las enfermedades infecciosas se basa en el estudio de los sntomas y signos clnicos, as como en la demostracin de la presencia del agente, de productos o de la huella que ste ha dejado en su contacto con el sistema inmune del individuo.

El diagnstico clnico es, en muchos casos, orientador luego de evaluar los datos que ofrecen la historia clnica y la exploracin pero, la confirmacin de un diagnstico clnico requiere en enfermedades infecciosas el diagnstico etiolgico que confiere el Laboratorio de Microbiologa Clnica.

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TOMA DE MUESTRAS MICROBIOLOGICAS

Toda la informacin diagnstica que el laboratorio de microbiologa puede proporcionar, depende de la calidad de la muestra recibida. Por ello, una toma mal realizada, pobremente recogida o mal transportada determinar un posible fallo en la recuperacin de los agentes patgenos, que puede inducir a errores diagnsticos, e incluso a un tratamiento inadecuado del enfermo.

La mayora de las muestras son obtenidas por otros profesionales de la salud en diversos servicios clnicos, por lo que es necesaria la educacin continua de dicho personal sanitario, al que hay que advertir del gasto intil y el error de los datos obtenidos a partir de un estudio realizado de forma inadecuada.

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NORMAS BASICAS GENERALES

Las muestras deben venir acompaadas de su respectiva hoja de pedido donde deben llenarse todos los datos solicitados por el laboratorio. En todos los casos es imprescindible: Nombre completo N de Cdula de Identidad o N de registro Edad Sexo Servicio (piso, sala, cama) Tipo de muestra : urocultivo, exudado de herida quirrgica de trax, pus de coleccin intrabdominal, etc. Consignar si el paciente recibi antibiticos en los ltimos 7 das, si es as anotar nombre del ATB , dosis y vas de administracin.

1) 2) 3) 4) 5) 6)

7)

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Los viales, tubos o frascos donde se colocan las muestras deben ser estriles con tapn hermtico. Las muestras se deben obtener antes de iniciar el tratamiento antibitico o antiviral. Cuando esto no es posible, se obtendrn justo antes de la administracin de la dosis del antimicrobiano, o tras 48 horas de finalizado el tratamiento.

Hay situaciones en que es conveniente la toma junto a la cama del enfermo, como en hemocultivos y lquido cefalorraqudeo (LCR), pero en otras es imprescindible realizarla en el propio laboratorio como en exudados genitales que requieren una observacin en fresco al microscopio y/o siembra inmediata.

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Es necesario que la toma se efecte en el sitio exacto de la lesin con las mximas condiciones de asepsia que eviten la contaminacin con microbios exgenos, que la muestra nunca se ponga en contacto con antispticos o desinfectantes, que la toma sea lo ms precoz posible y siempre se prefieran los productos purulentos recogidos por aspiracin directa con jeringa o tejidos sospechosos, a las muestras tomadas con hisopos o torundas con algodn.

Todas las situaciones no previstas se deben consultar con los especialistas en Microbiologa antes de tomar las muestras.

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CRITERIOS DE RECHAZO DE SOLICITUDES Y/O MUESTRAS

Si las solicitudes y/o las muestras no cumplen los requisitos mnimos indispensables para su correcto procesamiento el laboratorio deber aclarar las discrepancias con el servicio que las envo, previo a su realizacin y en algunos casos ser imposible su procesamiento hasta tanto se envie la muestra correcta. Los siguientes son algunos ejemplos de ello:

Discrepancia entre la identificacin del paciente que figura en la solicitud del exmen y la que figura en el contenedor de la muestra. Accin: Hablar con el servicio que envo la muestra y no procesarla hasta que se solucione la discrepancia. Para muestras nicas ( LCR , materiales quirrgicos) se procesar pero no se enviar el informe.

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No se indica en la solicitud de exmen el tipo de muestra a analizar y/o procedencia anatmica del mismo. Accin: Llamar al servicio que lo envo. No se procesar hasta tanto se conozcan esos datos, imprescindibles para la realizacin del estudio.

Muestra enviada en frasco no estril o con conservantes (formol). Accin: Informar al servicio que lo envo y solicitar nueva muestra.

Muestra enviada en envase o tubo con prdida o derrame Accin: No procesar. Esterilizar la muestra y solicitar una nueva.

Muestra inadecuada para realizar el estudio solicitado. Accin: No procesar. Informar al servicio que la muestra es inadecuada y cual muestra deber enviar.

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Cultivo anaerobio solicitado en exudado farngeo, expectoracin, orina, secreciones vaginales, lceras o fstulas entre otras. Accin: Comunicarse con el servicio y explicar las razones.

Muestra en cantidad insuficiente para realizar los exmenes solicitados: Accin: Solicitar muestra adicional, si no es posible establecer prioridades de procesamiento en acuerdo con el mdico tratante.

Muestras repetidas por ms de una vez en el mismo da, excepto hemocultivos. Accin: procesar una sola muestra por da y comunicarse al servicio para que justifique el procesamiento de las muestras restantes.

Muestra evidentemente contaminada. Accin: Descartar la muestra y solicitar otra.

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MUESTRAS DE ORINA INFORMACION GENERAL

Aunque la orina es normalmente estril o slo est transitoriamente colonizada con pequeo nmero de bacterias, la contaminacin de la muestra de orina por bacterias normalmente presentes en la uretra o en las reas periuretrales puede permitir la proliferacin de estos organismos que causarn resultados confusos del cultivo. En pacientes sintomticos, una muestra es usualmente adecuada para el diagnstico y otra debe ser tomada 48 a 72 horas despus del inicio del tratamiento. En pacientes asintomticos, 2 o 3 muestras pueden ser necesarias. En casos de sospecha de tuberculosis, 5 muestras consecutivas de la maana deben ser enviadas al laboratorio. Orina colectada de 24 horas es inaceptable para cultivo.

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MUESTRAS DE ORINA INFORMACION GENERAL

La solicitud de laboratorio debe llevar un diagnstico, indicar si el paciente recibe antibiticos y si est cateterizado. Esta informacin es crtica para la interpretacin de cultivos cuantitativos. La orina que se deja a temperatura ambiente soporta el crecimiento tanto de patgenos como de contaminantes de ah que la orina debe ser refrigerada si no se cultiva dentro de los primeros 30 minutos de la recoleccin. La muestra refrigerada debe cultivarse antes de 24 horas.

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MUESTRAS DEL TRACTO URINARIO

Orina obtenida por Chorro medio A. MATERIAL NECESARIO. - Gasas estriles. - Jabn neutro. - Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermtico y estril. B. OBTENCIN DEL PRODUCTO. La muestra idnea es la primera miccin de la maana, ya que permite la multiplicacin de bacterias durante la noche.

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TCNICA PARA MUJERES. - Lavarse las manos cuidadosamente con agua y jabn, enjuagar con agua y secar con una toalla limpia. - Se separarn los labios mayores y menores, y los mantendr separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina. - Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasndola de delante hacia atrs, se repetir el proceso un total de 4 veces. - Enjuagar cuidadosamente con agua para eliminar los restos de jabn. - Se indicar a la paciente que orine desechando el primer chorro ( 20-25 primeros mililitros ) tras lo cual y sin interrumpir la miccin, se recoger el resto de la orina en el recipiente , el cual se cerrar inmediatamente. - El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva o ropa del paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior.

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TCNICA PARA HOMBRES. - Lavado de las manos con agua y jabn. - Retraer completamente el prepucio, que se mantendr as en todo momento, hasta que se haya recogido la orina. - Limpiar el glande con jabn neutro. - Eliminar los restos de jabn enjuagndolo con agua. - Se pedir al paciente que orine desechando el primer chorro, los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir la miccin, recoger el resto de la orina en el recipiente estril.

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MUESTRAS DE ORINA DE PACIENTES CON CATETER URINARIO

La coleccin de la orina con cateterizacin uretral es asociada con un pequeo riesgo de causar bacteriuria pues la flora uretral puede ser forzada a entrar en la vejiga durante la insercin del catter. Orina colectada de la bolsa del catter es inaceptable para cultivo. La punta del catter es inaceptable para cultivo ya que existe colonizacin con flora uretral. Procesar rutinariamente orina de pacientes con catter urinario puede no ser de valor excepto epidemiolgicamente; probablemente estarn colonizados con mltiples grmenes despus de 48 a 72 hs de la cateterizacin. La muestra ideal es la orina colectada del tubo del catter mediante una jeringa.
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PACIENTE CON SONDA VESICAL MATERIAL NECESARIO. - Gasas. - Alcohol 70 o yodo povidona 10%. - Jeringa o aguja estril. -Recipiente estril. OBTENCIN DE LA ORINA. 1. Si es posible realizar la toma inmediatamente luego del recambio de la sonda. 2. Pinzar la sonda a 10 cm del meato durante 1 a 2 dos horas como mximo. 3. Sin despinzar, desinfectar la sonda con yodo al 10 %, a 3-4 cm por encima de la pinza. 4. Extraer orina puncionando la sonda con jeringa y aguja. 5. Colocar la orina en frasco estril.

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PUNCIN SUPRAPBICA Es un procedimiento mdico. Indicaciones. Evidencia clnica de infeccin urinaria con recuentos bajos o nulos, neonatos y lactantes y urocultivos repetidos con dos o ms bacterias. La puncin suprapbica requiere un buen conocimiento de la tcnica y de las precauciones que hay que adoptar, con rigurosa asepsia, descartando problemas de hemostasia y con la vejiga palpable y previa desinfeccin y anestesia local; se punciona sta a 1,5 cm de la snfisis pubiana, en la lnea media, estando el paciente en decbito supino, con una jeringa de 10 ml y con aguja larga (calibre 19) se aspira el contenido vesical. En caso de orina obtenida por puncin suprapbica se enviar al laboratorio lo antes posible. Colocar la muestra en frasco estril. Se debe indicar en la hoja de pedido la tcnica empleada para su extraccin (dato importante a la hora de valorar el recuento de colonias).

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VOLUMEN MNIMO DE LA MUESTRA. Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml. TRANSPORTE. La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe refrigerarse a 4C durante un tiempo mximo de 12 horas. OBSERVACIONES. Para la bsqueda de micobacterias, la orina se recoge por tcnica de chorro medio, durante 5 das consecutivos. En este caso el volumen de orina puede ser inferior a 50 ml por muestra. Se elegir preferentemente la primera miccin de la maana.

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MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS INFORMACION GENERAL

El trmino secrecin es inapropiado para describir la fuente de la muestra, se requiere el nombre del sitio anatmico especfico. Distinguir heridas superficiales de profundas o heridas quirrgicas. Las heridas superficiales no deben ser cultivadas para anaerobios. La decontaminacin de la piel es crtica. La calidad del cultivo de heridas puede ser valorado por tincin de gram. La presencia de clulas epiteliales indica contaminacin con flora de la piel y puede invalidar el resultado del cultivo.

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MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS

El espcimen de eleccin en el caso de infecciones de piel y partes blandas depende del carcter de la lesin y no de los microorganismos que se sospechen. Para las lesiones abiertas, se debe remover la microbiota y detritus superficiales antes de recolectar la muestra de los mrgenes de avance de la lesin. En caso de lesiones secas o costrosas los cultivos no estn recomendados salvo que presenten exudado. En el caso de abscesos cerrados la recoleccin se realizar con aguja y jeringa de la pared del mismo, previa antisepsia de piel. En el caso de abscesos abiertos se debe descontaminar primero como en el caso de heridas abiertas. Las quemaduras se cultivan luego de una extensa limpieza y debridamiento. Se recomiendan cultivos de biopsia ya que los cultivos superficiales pueden ser poco representativos de lo que sucede en la profundidad del tejido.

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HERIDAS SUPERFICIALES Y ABSCESOS ABIERTOS. MATERIAL NECESARIO. - Suero fisiolgico. -Jeringa y aguja estriles. -Recipientes estriles con tapa de rosca. -Hisopos con medio de transporte tipo Stuart TECNICA. - Lavar con suero fisiolgico estril cuidadosamente la superficie de la herida para retirar la microbiota colonizante. - Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas. - Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solucin de Ringer lactato y aspirarlo nuevamente en la jeringa. - Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podr efectuarse un frotis de los bordes de la herida con un hisopo.

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NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN. Para muestras lquidas se intentara obtener 1-10 ml. En el resto de las ocasiones se enviar la mxima cantidad posible. TRANSPORTE Y CONSERVACIN. El envo al laboratorio debe ser inmediato. Se utilizar para el envo tubos estriles con tapa rosca. La jeringa de la extraccin ser evacuada en el recipiente en que se har el envo. La prctica de colocar un tapn de goma en la aguja ( usando la jeringa como recipiente de transporte) debe deshecharse por el riesgo para el personal de sufrir un pinchazo con una aguja contaminada con lquidos orgnicos. No olvidar identificar la muestra adecuadamente y si no puede procesarse antes de 2 horas usar medio de transporte. OBSERVACIONES. Las muestras recibidas en hisopo son de escasa rentabilidad y deben obtenerse slo en circunstancias muy excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por otros mtodos. Es importante especificar sitio anatmico de donde se realiz la toma de muestra.

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ABSCESOS CERRADOS. Es un procedimiento mdico MATERIAL NECESARIO. - Gasas estriles. - Alcohol etlico o isoproplico al 70%. - Yodo al 10%. - Jeringa estril. - Aguja IM. - Medio de transporte para anaerobios. TECNICA. - Realizar antisepsia de la zona a puncionar con alcohol al 70%, de forma concntrica comenzando por el centro. Abarcar una zona de unos 10 cm. - Repetir la operacin con yodo. En pacientes con hipersensibilidad al yodo, se utilizar alcohol 70 % dos veces consecutivas. - Dejar secar al menos 1 minuto para que el antisptico ejerza su accin. - Realizar una puncin-aspiracin del absceso con jeringa y aguja, la muestra ms til es la obtenida contra la pared del absceso y puncionando en el lado superior para evitar la fistulizacin espontnea. - Traspasar la muestra a un contenedor estril. Si se requiere bsqueda de anaerobios introducir en un medio de transporte para anaerobios.

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NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN. Deber enviarse un volumen de muestra entre 1-5 ml. TRANSPORTE Y CONSERVACION. Las muestras deben enviarse al laboratorio tan pronto como sea posible. Hasta que esto suceda, mantener las muestras y el medio de transporte a temperatura ambiente. OBSERVACIONES. Es muy importante especificar en la solicitud la localizacin del absceso con vistas a la interpretacin de los resultados. Si se carece de recipiente para transporte de muestra para anaerobios consultar al laboratorio.

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HERIDA QUIRRGICA La toma de muestra se realizar con tcnica asptica luego de limpieza de la zona con suero fisiolgico para eliminar la contaminacin superficial. Se realizar por puncin y se colocar la muestra en recipiente estril con tapa de rosca, si se sospecha presencia de anaerobios comunicarse con el laboratorio para solicitar medio de transporte. S la muestra es obtenida con hisopo realizar primero la limpieza de la zona y luego embeber en el pus el mismo. QUEMADURAS El tipo de toma de muestra es controvertido, pero los mejores resultados se han logrado con punch de tejido de 3 o 4 mm para realizar cultivos cuantitativos. Se transportan en tubos con tapa rosca estriles. Pueden hacerse tomas de exudado con hisopo haciendo las siguientes salvedades: solo se cultivaran para bsqueda de aerobios, no se har cuantificacin y adems el resultado obtenido puede no ser representativo de la infeccin.

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MUESTRAS DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

LCR POR PUNCIN LUMBAR Es un procedimiento mdico MATERIAL NECESARIO. - Campos estriles. - Guantes estriles. - Gasas estriles. - Alcohol etlico o isoproplico al 70%. - Yodo al 10%. -Jeringas de 5-10 ml. -Agujas de puncin IM. -Trcares de puncin lumbar de varios tamaos. -Tubos cnicos limpios y estriles con tapn de rosca. Es necesario que estn totalmente limpios, no alcanza con que estn slo estriles pues la presencia de bacterias muertas por la esterilizacin puede inducir a errores por tinciones falsamente positivas. No se deben usar tampoco frascos que hayan contenido

3/25/12 medicamentos como por ejemplo antibiticos aunque estn estriles, porque restos

OBTENCIN DE LA MUESTRA. - Se obtendr antes de instaurar cualquier teraputica antibitica. - Quien realice la toma de la muestra deber lavarse las manos previo al procedimiento, colocarse sobretnica y guantes estriles. - Se localiza la zona elegida para la puncin lumbar mediante palpacin de los espacios intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicin adecuada. - Se desinfecta con alcohol al 70% una zona de uso 10 cm de dimetro en el rea elegida, la aplicacin del desinfectante se hace de forma concntrica del centro a la periferia. - Se coloca campo estril - Se repite la operacin con Yodo que se deja secar durante un minuto. - Realizar la puncin entre los espacios intervertebrales L3-L4, L4-L5 o L5-S1, siguiendo las normas de la ms estricta asepsia. - Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el lquido cefalorraqudeo que se recoger en tres tubos, sin conservantes, con tapn de rosca.

El primer tubo es el que debe enviarse para el estudio bioqumico, el segundo para 3/25/12

VOLUMEN MNIMO. - Para el estudio bacteriolgico rutinario es suficiente 1 ml, aunque es preferible disponer de volmenes superiores. - Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 ml adicionales ms por cada uno de los estudios, siendo deseable llegar a los 10 ml.
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Para estudio de virus se necesita por lo menos 1 ml ms.

TRANSPORTE. El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio, pues alguno de los agentes etiolgicos como S. pneumoniae, pueden lisarse rpidamente a partir de una hora tras su recogida. Si no es posible se mantendr en estufa a 35-37C y una parte se incubar en un frasco de hemocultivo que se mantendr en idnticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio. Si no se dispone de estufas se mantendr a temperatura ambiente. Nunca deber refrigerarse pues se puede afectar la viabilidad de N. meningitidis y H. influenzae. En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios. En caso de solicitar esta investigacin se enviar en un medio de transporte de lquidos para estudio de anaerobios o en frasco de hemocultivo anaerobios.

3/25/12 Las muestras para el estudio de virus se enviarn en hielo, si el envo se retrasa ms

OBSERVACIONES. Como la meningitis suele surgir por un proceso bacterimico se solicitarn simultneamente hemocultivos, pudiendo ser as mismo estudiadas las posibles lesiones metastsicas cutneas. Es necesario que el mdico seale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias habituales, micobacterias, anaerobios, hongos o virus). LCR EN PACIENTES CON SHUNTS VENTRICULARES: LCR obtenido de reservorio subcutneo , Ommaya . Esta toma debe ser consultada previamente con el especialista, neurocirujano a ver si es factible su realizacin. Hacer la toma del lugar de recoleccin del reservorio previa desinfeccin y antisepsia. LCR obtenido del circuito del derivacin. Si no es posible obtener LCR por puncin del reservorio se obtendr abriendo el circuito

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MUESTRAS DE OTROS LQUIDOS BIOLGICOS : PERITONEAL (ASCITIS), PERICRDICO, PLEURAL, ARTICULAR

MATERIAL NECESARIO. - Campos estriles. - Gasas estriles. - Guantes estriles. - Jeringas y agujas estriles. No se deben utilizar jeringas heparinizadas, pues la heparina lleva conservantes que pueden interferir la viabilidad de los microorganismos - Yodo al 10%. - Recipientes estriles con tapn de rosca. - Recipientes estriles de boca ancha (ejemplo: .el frasco de urocultivo). - Sistemas de transporte de lquidos para estudio de anaerobios. - Alcohol etlico o isoproplico al 70%. - Frascos de hemocultivos.

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OBTENCIN DE LA MUESTRA. Vara dependiendo del lquido corporal que se trate, pero siempre deber seguirse una tcnica rigurosamente asptica. La muestra se obtiene por puncin y se coloca en recipientes adecuados para su envo al laboratorio. Siempre que sea posible evitar el uso de hisopos. -Realizar antisepsia de piel con alcohol, haciendo crculos concntricos desde el centro hacia la periferia en una zona de unos 10 cm de dimetro. - Repetir el paso anterior con Yodo al 10%, dejando secar durante un minuto. En pacientes con hipersensibilidad al yodo, realizar la desinfeccin con alcohol 70%, dos veces consecutivas. - La toma se hace por puncin percutnea (toracocentesis, paracentesis, puncin pericrdica o puncin articular) de forma asptica para evitar la contaminacin por la microbiota cutnea o ambiental.
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Una vez realizada la toma se retira la yodo de la piel con un apsito impregnado en alcohol al 70%.

- Ms raramente se pueden realizar tomas de estas localizaciones en el transcurso de intervenciones quirrgicas. En esta circunstancia debe desaconsejarse el uso de hisopos, siendo preferible tambin la aspiracin; se utilizarn hisopos slo si el

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VOLUMEN MNIMO. Para el estudio bacteriano rutinario es suficiente de 1 a 10 ml. Cuando se requiera la investigacin de Mycobacterium spp. u hongos se enviar un volumen superior a 10 ml. TRANSPORTE. Si es necesario evitar la coagulacin de algunos de estos lquidos se usar heparina sin conservantes; otros anticoagulantes pueden tener accin antibacteriana. Los recipientes idneos son tubos estriles de tapn de rosca o de presin negativa sin conservantes. Se llenarn hasta cerca del tapn, de esta forma pueden ser tiles para el estudio de anaerobios, especialmente si la muestra es purulenta. Los viales o tubos prerreducidos para el transporte de muestras para el estudio de anaerobios se emplearn en aquellos casos en que se sospeche este tipo de microorganismos. Frascos de Hemocultivos: Este es un sistema adicional a los anteriores. Est particularmente indicado cuando el envo se puede retrasar o en los lquidos que pueden coagularse. Si se sospecha anaerobios emplear uno adecuado para estas bacterias. Con su uso se ha incrementado el aislamiento bacteriano en peritonitis espontneas o en las asociadas a dilisis peritoneal ambulatoria crnica. Tambin se

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OBSERVACIONES. Cuando se utilice una anestesia local, hay que cambiar de jeringa y aguja para hacer la extraccin de la muestra, ya que los anestsicos pueden inhibir el crecimiento bacteriano. LQUIDO DE DIALISIS PERITONEAL CRNICA AMBULATORIA - La muestra del lquido de dilisis peritoneal crnica ambulatoria debe ser la propia bolsa que lo contiene. - La bolsa se enviara de inmediato al Laboratorio para su procesamiento o se conservar en la heladera hasta 12 horas.

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MUESTRAS DE SANGRE
MATERIAL NECESARIO. frascos de hemocultivo proporcionados por el Laboratorio de Microbiologa.. ligadura de goma. jeringas y agujas de puncin i/v. gasas estriles. guantes estriles. alcohol etlico o isoproplico al 70%. Yodo al 10%.

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OBTENCION DE LA MUESTRA. El procedimiento de extraccin de sangre para la realizacin de hemocultivos se debe realizar cumpliendo las mximas precauciones de asepsia. 1. Lavarse las manos. 2. Colocar ligadura y campo estril. 3. Palpar la vena a puncionar. 4. Realizar antisepsia con alcohol 70% en una zona de piel de unos 10 cm de dimetro alrededor del sitio de puncin. Se comenzar por el centro y se irn haciendo crculos concntricos hacia el exterior. 5. Repetir el procedimiento utilizando Yodo al 10%. 6. Dejar actuar 1-2 minutos, esto es : hasta que se seque el antisptico sobre la piel.

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7. Mientras acta el iodforo, desinfectar el tapn de goma del frasco de hemocultivo con alcohol 70%. 8. Colocarse los guantes estriles. 9. Extraer la sangre sin tocar en ningn momento el campo desinfectado. Si fuera necesario palpar nuevamente la vena se cambiarn los guantes estriles y se realizar nueva antisepsia de piel. 10. Inyectar directamente la sangre en el frasco. No es necesario cambiar de aguja. 11. Mover los frascos para que la sangre y el medio de cultivo se mezclen. 12. Para frascos de sistemas automatizados, retirar las tirillas de las botellas y pegarlas en la hoja de pedido correspondiente al paciente. En ningn caso se rotular o pegar ningn tipo de etiqueta adhesiva sobre los cdigos de barras de las botellas.

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VOLUMEN DE LA MUESTRA. La cantidad de sangre a introducir en cada botella es de 10 ml en el caso de pacientes adultos. En caso de neonatos y nios pequeos en que no se pueden obtener volmenes grandes de sangre, es suficiente una cantidad 1-5 ml por frasco. En estos casos se utilizan botellas de hemocultivo peditrico. NMERO DE MUESTRAS.

Dos hemocultivos por paciente, previos al tratamiento antimicrobiano. El intervalo de tiempo entre las extracciones es suficiente con una hora, pero cuando exista una gran urgencia en iniciar el tratamiento, este intervalo puede acortarse hasta 15 minutos o se pueden extraer dos muestras simultaneas de diferentes sitios de puncin. En caso de endocarditis subaguda se recomienda aumentar a tres frascos de hemocultivo repartidos en 24 horas y en caso de que la primera serie sea negativa, obtener tres muestras ms al da siguiente. Si el paciente est recibiendo antibiticos puede ser necesario obtener otra serie de hemocultivos al tercer da.

TRANSPORTE. Deben enviarse en forma inmediata al laboratorio una vez finalizada la serie. Mientras,

3/25/12 mantener a temperatura ambiente. Nunca debe refrigerarse ni congelarse.

OBSERVACIONES. Cuando no haya venas accesibles puede realizarse la extraccin de sangre arterial. No son adecuadas las muestras extradas a travs de catteres. En caso de sospecha de determinados microorganismos (Brucella spp, Leptospiras, Micobacterias, Hongos, etc) ponerse Microbiologa. En caso que el paciente est recibiendo antibiticos realizar la toma previo a la administracin de la dosis de antimicrobiano. Si se evita conversar durante la toma de la muestra no es necesario colocarse tapabocas. En sala de inmunodeprimidos s es aconsejable el uso de gorro y tapabocas. en contacto con el Laboratorio de

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MUESTRAS DE CATETERES INTRAVASCULARES

El estudio de catteres que se realiza en forma rutinaria a nivel del Laboratorio de Microbiologa es la tcnica semicuantitativa de Maki. Esta tcnica permite valorar la contaminacin extraluminal del catter, principal mecanismo por el cual se contaminan los catteres de corta permanencia y pueden llegar a ser el origen de una bacteriemia. MATERIAL NECESARIO. - Guantes estriles. - Gasas estriles. - Pinzas y tijeras estriles. - Recipiente estril con tapa de rosca. - Alcohol etlico o isoproplico al 70%. - Yodo al 10%

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OBTENCIN DEL PRODUCTO. - Desinfectar con alcohol al 70% una zona de piel de unos 10 cm correspondiente a la zona de entrada del catter. Hacerlo en forma de crculos comenzando por el centro. - Repetir la misma operacin, pero con iodforo, dejando que se seque. - Retirar el catter con la mxima asepsia. - Ayudndonos de las pinzas y las tijeras estriles, cortar los 5 cm dstales del catter que corresponden a la porcin intravascular. - Introducir el segmento de catter en un recipiente estril correctamente identificado. TAMAO DE LA MUESTRA. 5 cm de la porcin ms distal. Porciones mayores dificultan el procesamiento en el laboratorio. TRANSPORTE. La muestra deber enviarse al laboratorio en un periodo inferior a 30 minutos. Cuando esto no sea posible deber conservarse a 4C por 12 horas como mximo.

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MUESTRAS DE ESPUTO
En las condiciones habituales de la clnica diaria, no es una muestra representativa de la situacin existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con secreciones procedentes de todo el rbol traqueo-bronquial y con la microbiota saprfita de la orofaringe. No obstante es un mtodo fcil y rpido cuya utilidad o relacin entre resultado obtenido y verdadera etiologa depende en gran medida de su correcta obtencin, control de calidad antes de iniciar su procesamiento, tipo de agente que se pretenda detectar y valoracin adecuada del resultado. MATERIAL NECESARIO. - Frasco estril de boca ancha y hermtico. - Suero fisiolgico estril y nebulizador ocasionalmente.

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TCNICA O METODOLOGA DE OBTENCIN DE LA MUESTRA. - Enjuagar la boca con agua destilada estril o solucin salina. - Obtener el esputo tras una expectoracin profunda luego de un esfuerzo de tos, preferentemente matinal. - La muestra debe provenir del sector bajo del tracto respiratorio. La saliva no sirve para realizar este estudio. - De no producirse expectoracin espontnea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de suero fisiolgico estril tibio (15 ml durante 10 minutos), siendo til adems realizar un drenaje postural o fisioterapia respiratoria. VOLUMEN MNIMO. De 2 a 10 ml, si es posible. TRANSPORTE Y CONSERVACION. Envo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).

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OBSERVACIONES. - Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibitico. - No es til para anaerobios. - No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia. - La expectoracin debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25 leucocitos polimorfonucleares y menos de 10 clulas epiteliales por campo 100x). - Si no se obtiene muestra representativa del tracto respiratorio inferior, es intil insistir con esta tcnica diagnstica. - Si el pedido incluye baciloscopa se deben recoger 3 muestras en 3 das sucesivos. Mientras conservar en la heladera a 4C hasta el tercer da y llevar las 3 muestras juntas al laboratorio.

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MUESTRAS DE ASPIRADO TRAQUEAL O SECRECIONES TRAQUEALES

Esta muestra se utiliza fundamentalmente para valorar la colonizacin del tracto respiratorio en el paciente ventilado. Tiene valor anlogo al esputo por su contaminacin con la flora orofarngea. No obstante un resultado de cultivo semicuantitativo de 3 o 4 cruces ( desarrollo en 3 o 4 cuadrantes de la placa de Petri ) se correlaciona bien con la etiologa de la neumona en el paciente ventilado. Esta muestra se obtiene con sonda de aspiracin por personal de enfermera debidamente entrenado. Se enviar al laboratorio en tubo estril. Tiene las mismas consideraciones que la expectoracin.

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MUESTRAS DE PUNCION TRANSTRAQUEAL

Es un procedimiento mdico. MATERIAL NECESARIO. - Guantes, campos, gasa estriles. - Alcohol etlico o isoproplico al 70%. - Yodo al 10% - Suero fisiolgico. - Jeringas estriles. - Aguja y catter n 14-16 (de subclavia). - Anestsico local / lidocana al 1-2% con adrenalina.

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TCNICA O METODOLOGA DE OBTENCIN DEL PRODUCTO. - Tcnica a realizar por personal entrenado. - Desinfeccin de la piel con Yodo. - Introduccin del catter por puncin a travs de la membrana cricotiroidea, inyectar suero fisiolgico y aspirar. VOLUMEN DE LA MUESTRA. La mxima cantidad de aspirado posible. TRANSPORTE Y CONSERVACION. Colocar la muestra en un medio de transporte para anaerobios. Envo inmediato al laboratorio. (no superior a 2 horas) OBSERVACIONES. - til

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OBSERVACIONES. - til en el diagnstico de anaerobios. - til en enfermos graves que no expectoran o lo hacen con esputos de mala calidad. - Indicado ante neumonas que responden mal al tratamiento emprico y neumona nosocomial. - No aconsejable en enfermedad obstructiva crnica ni en enfermos hospitalizados durante largo tiempo ya que pueden encontrarse muy colonizados. Contraindicado en hipoxia severa y trastornos de coagulacin. Posibles complicaciones como enfisema subcutneo o hemoptisis.

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MUESTRAS OBTENIDAS A TRAVS DE FIBROBRONCOSCOPIO

Son todos procedimientos mdicos. En trminos generales las muestras obtenidas por fibrobroncoscopa salvo el cepillado bronquial por catter protegido, son muestras contaminadas en mayor o menor grado con microbiota orofarngea. MATERIAL NECESARIO.
-

Material especfico para broncoscopa. Recipiente estril hermtico. Tubo estril con 1 ml de suero fisiolgico. - Material de corte estril.

TRANSPORTE V CONSERVACION. Enviar inmediatamente al laboratorio. TCNICA O METODOLOGA DE OBTENCIN DEL PRODUCTO. Tcnica a realizar por personal entrenado.

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Pueden emplearse las siguientes: BRONCOASPIRADO (BAS). Recogida de secreciones respiratorias a travs de fibrobroncoscopio, pudiendo introducirse de 3 a 5 ml de suero fisiolgico previo a la aspiracin. Con menor grado de contaminacin que el esputo. CEPILLADO BRONQUIAL CON CATTER PROTEGIDO Cepillado de la mucosa bronquial del lbulo afectado a travs de un fibrobroncoscopio mediante un cepillo protegido por un doble catter ocluido distalmente para evitar la contaminacin de vas altas.

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LAVADO BRONCOALVEOLAR Lavado de un segmento pulmonar (lbulo medio o lngula) previo anclado del broncoscopio, introduciendo de 20 a 50 ml de suero fisiolgico. Los primeros 10 ml que se aspiran se deben descartar. Indicado especialmente en procesos pulmonares intersticiales. (Neumona en pacientes en asistencia respiratoria mecnica) De escasas complicaciones, pero no obvia la contaminacin orofarngea cuyo problema puede disminuirse si se inserta un tubo endotraqueal para pasar el broncoscopio

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LAVADO BRONCOALVEOLAR A CIEGAS Utiliza los mismos principios que los lavados a travs de fibrobroncoscopio pero se realiza sin este. Esta maniobra debe ser realizada por personal mdico debidamente entrenado. BIOPSIA TRANSBRONQUIAL. Obtencin de tejido pulmonar mediante tcnica broncoscpica. Posible contaminacin de la pinza de biopsia. Complicaciones: neumotrax, hemorragia.

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MUESTRAS OBTENIDAS POR ABORDAJE PERCUTNEO

Son todos procedimientos mdicos. Dentro de las tcnicas invasivas son las que permiten la obtencin de muestras ms representativas del parnquima pulmonar, no obstante, slo deben emplearse cuando fracasen otros mtodos menos invasivos o cuando la situacin del enfermo haga imprescindible conocer el diagnstico etiolgico. MATERIAL NECESARIO. - Material quirrgico especfico para puncin. - Recipiente estril y hermtico. - Formol al 10%. - Suero fisiolgico. VOLUMEN MNIMO. Si es un producto de aspiracin, la mayor cantidad posible. Si es una pieza de biopsia, una cua de 3ml, cuando sea posible.

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TRANSPORTE Y CONSERVACIN. Si es un producto de aspiracin, depositar en tubo estril. Si es una pieza de biopsia se divide en dos fragmentos: uno se coloca en suero fisiolgico para estudio microbiolgico y otro en formol al 10% para estudio anatomopatolgico. Debe enviarse inmediatamente al laboratorio. TCNICA O METODOLOGIA DE OBTENCION DEL PRODUCTO. Tcnica a realizar por personal entrenado. Pueden emplearse las siguientes:

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PUNCION PULMONAR ASPIRATIVA TRANSTORCICA. Obtencin del exudado de las lesiones pulmonares a travs de una puncin transtorcica con aguja ultrafina con control radioscpico o ecogrfico. Debe aplicarse ante infiltraciones densas (no intersticiales) y sobre todo si son perifricas. Contraindicado en pacientes con bullas, trastornos de coagulacin y sospecha de hidatidosis. Posibles complicaciones, como neumotrax y hemoptisis. Es una muestra ideal para estudio en infeccin anaerobia grave en nios, especialmente en edades tempranas. PUNCION BIPSICA PULMONAR. Biopsia transtorcica con trocar. Slo en casos excepcionales y en caso de lesiones muy perifricas debido al alto riesgo de neumotrax. BIOPSIA PULMONAR CON TORACOSCOPIO. BIOPSIA PULMONAR POR TORACOTOMA. Permite la seleccin visual del rea neumnica a cielo abierto.

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