SERODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS

VDRL-TPHA

H. OUKOUCHOUD INSTITUT NATIONAL D HYGIENE

SERODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS
INTRODUCTION
Le diagnostic srologique repose sur la mise en vidence des anticorps induits par linfection et retrouvs dans le srum. Le srum est trait pour retirer certaines substances qui peuvent gner la technique ce qui aboutit une certaine dilution.

Le patient doit tre de prfrence jeun.

Les ractions srologiques

selon lorigine de lantigne utilis

Raction antigne non trponmique (Ag cardiologique)

Raction antigne trponmique

Raction antigne non trponmique : VDRL( veneral disease research laboratory) Principe:
Raction dagglutination passive sur lame en verre. Antigne utilis est dorigine cardiolipidique constitu de microcristaux de cholestrol sur lesquels sont adsorbs les molcules de cardiolipide = Haptne de Wasserman. Des particules de charbon sont pigs dans la combinaison Ac-Ag pour faciliter la lecture. Rsultat du dpistage est rendu positif ou ngatif. Rsultat est rendu en titre en cas de dpistage positif.

Matriel et Mthode
Elments de la raction
Srum frais. Eau physiologique. Antigne VDRL prs lemploi. Matriel: Centrifugeuse Micropipettes rglables ( 5-50L) Plaques en verre Portoir pour tubes hmolyse Agitateur rotatif de Kline Container de dchets contamins Eau de Javel

Mode opratoire:
Deux types de ractions

Raction qualitative ( dpistage)

Raction quantitative (dpistage positif)

Raction qualitative
Distribuer 50L de srum sur chaque puit de la plaque en verre. Ajouter 16L dAntigne VDRL. Placer la plaque sur lagitateur de Kline pendant 8mn.

Lire immdiatement au microscope.

Manipulations pour le test qualitatif de dpistage :

Puits
Tmoin + Srum 50 l de S + Tmoin 50 l de S Tmoin Ag VDRL 50L deau physiologique Srum inconnu 50 l de srum inconnu. 16l

Antigne VDRL

16l

16l

16l

Placer sur un plateau rotatif (agitateur de kline) pendant 8 minutes.

Lecture

Comment lire les rsultats ?

Agglutination : +++

Agglutination : ++

Pas dagglutination
(Poussire de charbon dilue )

Agglutination : +

Raction quantitative
Lorsque la raction qualitative est positive on ralise la mme raction avec une srie de dilution du srum au (1/2, 1/4, 1/8, 1/16,1/32) avec de leau physiologique. Le titre danticorps est exprim par linverse de la dernire dilution donnant une raction positive nette.

Manipulations pour le test quantitatif

Puits
1 Eau physiologique 50l 2 50l 3 50l 4 50l 5 50l

Dilution

1/2

1/4 reporter 50

1/8 reporter 50

1 / 16 reporter 50

1 / 32 jeter 50l dans leau de Javel

Srum analyser En l

50 reporter 50

Ag VDRL

16l

16l

16l

16l

16l

agitation pendant 8 minutes. Lecture

Raction antigne trponmique : (TPHA:Treponema pallidum hemagglutination assay)

Principe:
Raction dhemmagglutination passive ralise sur des microplaques.

LAntigne utilis est un lysat de trponema pallidum adsorb sur des hmaties. Le dpistage consiste tester le serum la dilution de 1/80. Des dilutions sont effectues pour le titre dans le cas du dpistage positif.

Matriel et Mthode
Elments de la raction
Srum frais Coffret de ractif prt lemploi(TPHA) Matriel :
Centrifugeuse Micropipette rglable (5 -50 L),( 50 200 L) Pipette multicanaux Plaque de microtitration fond en U Cnes pour micropipettes Portoir pour tubes hmolyse Container de dchets contamins Eau de javel

Mode opratoire
Deux types de ractions

Raction qualitative ( dpistage)

Raction quantitative (dpistage positif)

Raction qualitative
Distribuer le diluant dans les puits de microtitration comme suit : 1r, 3me, et 4me puits: 25 l. 2me puit : 100 l. Ajouter 25 l du srum tester dans le puit numro 1. Diluer lchantillon 1/20. Ajouter 75 l de la suspension dHNS au puit 3, et le mme volume de suspension dHS au puit La dilution finale des puits 3 et 4 est 1/80. Couvrir la microplaque et laisser reposer pendant 45 60 min. Effectuer la lecture lil nu.

Raction qualitative

Schma illustrant le mode opratoire du test TPHA

Comment lire les rsultats ?

Puit 1 : voile uniforme couvrant tout le puit Fortement positif. Puit 2 : voile couvrant le 2/3 du puit Moyennement positif. Puit 3 : voile couvrant le 1/3 du puit Faiblement positifs. Puit 4 : Anneau trs serr bord nets (absence de voile) Ngatif.

Srum n 1

Raction quantitative
Lorsque la raction qualitative est positive (1/80) on ralise une srie de dilution du srum (1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560) Le titre danticorps est exprim par linverse de la plus haute dilution donnant encore une raction positive

Serum n 1 :
Cupule
A B C D E F G H

Tampon en l
Srum 1/20 en l HS en l Dilution

25

25

25

25

25

25

25

25

25 *

**

75

75

75

75

75

75

75

75

1 / 80

1 / 160

1 / 320

1 / 640

1 / 1280

1 / 2560

1 / 5120

1 / 10240

Lecture

Titre retenu 1280 ( dernire cupule prsentant une hmagglutination nette ). * : reporter 25 l dans la cupule suivante gauche. **: jeter 25 l dans l'eau de javel.

INTERPRETATION DES RESULTATS

VDRL TPHA
Diagnostic probable Examens complmentaires

Syphilis exclue ou contamination trs rcente

refaire une srologie dix quinze jours plus tard

Forte probabilit de syphilis

Situer le stade de linfection par une srologie quantitative

+ -

Syphilis rcente traite ou ancienne (traite ou non traite) Il faut confirmer le TPHA ngatif par une autre raction (FTA)

Une srologie quantitative,

Si cette raction est ngative, il sagit dun faux positif en VDRL

AVANTAGES
sensibilit bonne facile et peu coteux Bon marqueur de suivi de l efficacit thrapeutique

INCONVENIENTS
spcificit moyenne lecture subjective (" l'il") Prsence de faux ngatifs (phnomne de zone) et de faux positifs ( infections virales parasitaires ou bactriennes; grossesse; maladie auto-immune..) Dans ce cas le TPHA et le FTA sont gnralement ngatifs

Recherche d'antignes cardio-lipidiques par agglutination (VDRL)

Trponema Pallidum Haemaglutination Assay (TPHA) (hmaties sensibilises avec de l'antigne trponmique)
spcificit excellente simplicit de mise en oeuvre Prsence de faux ngatif en excs danticorps ( phnomne de zone ) Rare faux positifs (positivit faible) notamment chez la femme enceinte ou lors de maladies auto-immunes

Test onreux, adaptable de grandes comme de petites sries

Cintique de la raction srologique dans la syphilis non traite :

Les anticorps dtectables par les ractions dimmunofluorescence FTA-abs et le TPHA sont les premiers apparatre quelques jours aprs lapparition du chancre (25 30 aprs contamination).

Le VDRL se positive les jours suivants (30 40 jours aprs contamination)

Les anticorps atteignent les titres les plus levs, la fin de la priode secondaire aprs 6 18 mois dvolution.

Un dclin progressif des titres des anticorps un deux ans aprs contamination est dtectable la phase latente. Le VDRL peut se ngativer alors que les ractions trponmiques restent positives.
A la phase de syphilis tertiaire, lors des manifestations viscrales ou cutanes tardives, les anticorps trponmiques sont dtects des taux variables, avec un VDRL pouvant tre ngatif dans 50% des cas. La recherche des anticorps au niveau du LCR peut simposer.

Evolution des anticorps : syphilis non traite

Cintique de la raction srologique dans la syphilis traite :

Traitement prcoce :
En cas de traitement ds les premiers jours dapparition du chancre, la srologie sera ngative et le demeurera. Au stade de syphilis primaire un traitement efficace entranera une baisse rapide du taux des anticorps et leur disparition dans un dlai de 3 6 mois.

Traitement au stade secondaire prcoce (3 6 mois)

Une ngativation de toutes les ractions est encore possible La premire se ngativer sera le VDRL

Traitement au stade secondaire tardive (1 an dvolution) ou au stade latent :

+VDRL peut se ngativer (1 cas sur 2) +TPHA et FTA restent positifs.

Traitement au stade tardif symptomatique :

Les ractions srologiques sont peu ou pas influences par le traitement.

Evolution des anticorps selon le moment du traitement

ALGORITHME POUR LE DIGNOSTIC DE LA SYPHILIS

Conclusion
Le dpistage syphilitique repose sur la combinaison VDRL-TPHA en raison de: La grande efficacit pour la dtection de T. Pallidum et lexclusion de toute autre forme dinfection trponmique. la lecture des rsultats peut seffectuer aprs une dure courte de la ralisation des tests. Ce sont les meilleurs tests pour effectuer un dpistage de routine Pour poser le diagnostic, un bilan srologique complet est conseill afin de mieux situer lancient de linfection, surtout en labsence de signes cliniques.