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OBSERVACIN DE MICROORGANISMOS A TRAVS DEL MICROSCOPIO

El Microscopio ptico
El microscopio ptico tiene un limite resolucin de cerca de 200 nm (0.2 m ). Las clulas observadas bajo el microscopio ptico pueden estar vivas o fijadas y teidas.

Recorrido de la luz Aumento Imagen visualizada ojo

Lente ocular Imagen intermedia (invertida respecto a la muestra)

Lente objetivo Muestra Ninguno Condensador Fuente de luz

Microscopio ptico

Microscopio ptico de campo oscuro


El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dipersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada. Las porciones transparentes del espcimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partculas se ven brillantes. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin de muestras metalogrficas para la observacin de detalles en superficies con alta reflectancia.

Microscopio de contraste de fases


Es un microscopio ptico modificado que permite contrastar sustancias de diferente grosor o densidad. Mediante un condensador y un objetivo especial se controla la iluminacin de tal manera que vaya en diferentes rutas a travs de las distintas partes de una clula. El resultado es una imagen con diferentes grados de brillo y oscuridad. Con este mtodo, el material denso aparece brillante, mientras que las partes de la clula que tienen una densidad cercana al agua (citoplasma) aparecen oscuras. Se utiliza para visualizar estructuras celulares sin necesidad de usar colorantes o matar microorganismos.

Microscopio de contraste de fases

Microscopa de Fluorescencia
El microscopio de fluorescencia es una variacin del microscopio ptico, dotado de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiacin electromagntica emitida por las molculas que han absorbido la excitacin primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar slo la emisin secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.

Diagrama de Microscopio de Fluorescencia

Biologa II Enero 2009

Microscopio electrnico
Microscopios electrnicos: Estos microscopios son grandes y complejos. Utilizan electrones en vez de luz y aumentan los objetos hasta 250.000 veces. Las imgenes que se producen son en blanco y negro y muchas veces tienen colores falsos.

Microscopio Electrnico

Transmisin

Barrido

Microscopio electrnico
En el Microscopio Electrnico la luz se sustituye por un haz de electrones que pasan por un tubo (con vaco para mejorar el paso de los electrones). Permite la observacin de las estructuras interiores de las clulas. Sirve para visualizar virus. Tiene una resolucin de 10 A (se pueden ver objetos muy pequeos, incluyendo algunas molculas).

Microscopio electrnico
Un haz de electrones es lanzado por un can en el que se establece una diferencia de potencial, entre el ctodo y el nodo. El chorro de electrones pasa a travs de la muestra a observar, que est colocada en una rejilla. Los electrones chocan con la muestra y se desvan, y estas desviaciones son recogidas por la pantalla. Observamos la imagen a travs de una pantalla que es excitada por los electrones que llegan a ella (mecanismo similar a la televisin). Las imgenes las recogemos mediante una placa fotogrfica que es impresionada directamente por los electrones.

El Microscopio Electrnico de Transmisin(MET)


El microscopio electrnico de transmisin (MET) tiene un limite de resolucin de cerca de 2 nm. Un MET mira a replicas de clulas muertas , despus de haber sido fijadas y teidas con ones de metales pesados. Los electrones son dispersados cuando pasan a travs de una fina seccin del espcimen, y luego detectados y proyectados hacia una imagen sobre una pantalla fluorescente.

El microscopio electrnico de transmisin (MET) trabaja iluminando, un ejemplar en la platina con un haz de electrones y enfocando y aumentando la imagen con lentes magnticas. Esta imagen electrnica, que es invisible, se transforma en una imagen normal, visible mediante una pantalla especial.

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN

El Microscopio Electrnico de Barrido (MEB)


El microscopio elctrnico de barrido (MEB) tambin tiene un limite de 2nm. Al igual que el MET, el MEB permite mirar a clulas muertas, despus de haber sido fijadas y teidas con ones de metales pesados. Con esta tcnica los electrones son reflectados sobre la superficie del espcimen.

El microscopio electrnico de barrido (MEB) sirve para examinar la superficie de los objetos. Produce imgenes de gran aumento (ms de cien mil veces) y muestra la forma real de los objetos. Adems de mostrar increbles figuras, el microscopio electrnico investigador muestra detalles que pueden ser de vital importancia para cientficos en muchas reas, como la medicina. Trabaja examinando la superficie de un objeto con un delgado haz electrnico.

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

Microscopio de Campo Claro


Alga verde (eucariota)

Microscopio de Fluorescencia
Bacteria filamentosa Teida con naranja de acridina

Microscopio de Contraste de Fases


Saccharomyces cerevisiae

Microscopa Confocal por Lser


Cianobacteria filamentosa

TINCIN SIMPLE
Tincin de clulas para la observacin microscpica

Extensin de una fina capa de clulas sobre el porta

Adicin del colorante lavado y secado Secado al aire

Fijacin por flameado del porta

Se coloca una gota de aceite de inmersin sobre el porta y se observa con el objetivo de 100X

Tincin de Gram
Tincin del frotis Paso 1
Previamente fijado al calor, con cristal violeta Durante 1 minuto. Todas las clulas se tien de color azul-violeta.

TINCIN DIFERENCIAL

Paso 2

Aadir Lugol, dejar actuar 2 minutos Todas las clulas siguen de color azul-violeta.

Gram +

Decolorar con alcohol Paso 3


Las clulas Gram + siguen de color azul-violeta. Las Gram negativas se decoloran.

Tincin de contraste
Con safranina 2 minutos. Las clulas G+ se ven azul-violeta. Las G- rosas o rojas.

Paso 4

Gram -