Fisiologa de semillas

Regulacin del desarrollo de la semilla

Germinacin

Dormicin

Dormicin
Definiciones Mecanismos Implicancias
Pregerminado Brotado

En qu especies se presenta?
Especies no domesticadas (nativas, malezas): implicancias ecolgicas y de adaptacin Especies domesticadas:
Cereales: dilema sobretodo en cebada Oleaginosas: soja y canola (sin problemas de pregerminado), girasol

Desarrollo de semillas ortodoxas

Histodiferenciacin
Divisin celular Expansin celular Deposicin de reservas

Maduracin

Desecacin Secado
Metabolismo reducido Quiescencia (semilla madura y seca)

Dormicin
(a veces)

Intolerante a la desecacin

Tolerante a la desecacin

Qu entendemos por dormicin?

Bloqueo interno propio de la semilla que determina que la misma no germine en condiciones consideradas como favorables durante determinado perodo de tiempo (Black et al. 1987)

Caracterstica adaptativa que determina que las semillas germinen en un momento o lugar favorables a su sobrevivencia.
Se trata de una caracterstica heredable, cuya expresin es modificada por las condiciones ambientales que se dan durante el proceso de maduracin de la semilla sobre la planta madre. (Pelton, 1965).

CONCEPTO Y CLASIFICACION DE DORMICION EN SEMILLAS (segn Lang, 1987)

DORMICION: es la suspensin temporaria del crecimiento visible, de cualquier estructura que contenga meristemos. Paradormicin: impedimento para la germinacin dentro de la semilla, pero por fuera de la estructura durmiente (embrin). Ej.: cubiertas duras y/o impermeables a los gases y al agua inhibidores individuales o balances inhibidores en la cubierta interna (endosperma o perisperma). Endodormicin: impedimento dentro de la estructura durmiente. Ej.: embriones inmaduros balances hormonales inhibitorios.

Ecodormicin: limitante para el crecimiento en el medio ambiente en el que se encuentra la semilla (falta de agua, temperatura, oxgeno, luz).

Dormicin primaria y secundaria

Segn el momento en que se da se distinguen dos tipos: Primaria: es inducida sobre la planta madre durante el desarrollo de la semilla. Secundaria: ocurre luego de la dispersin de la semilla y generalmente est sujeta a ciclos anuales (semillas de malezas).

DORMICION
Semilla con D. Primaria
Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales
Luz, temperatura, after-ripening

SEMILLA SIN DORMICION

Luz, temperatura, after-ripening

GERM.

Semilla en formacin

Semilla con D. Secundaria

Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales

Semilla sin Dormicin

Dormicin absoluta y relativa

Segn el grado de expresin del fenmeno se distingue:

Dormicin absoluta: Nivel extremo de dormicin, la semilla no germina en ningn ambiente de incubacin.

Dormicin

relativa: La condicin de dormicin se expresa solamente en determinados ambientes (se asocia con cambios a nivel de membranas celulares).

Dormicin primaria en cebada

Dormicin relativa en trigo y cebada (Bewley y Black, 1985)

120 100

% de germinacin

80 60 40 20 0 5 10 14 18 Te m pe ratura (C) 30 Trigo Cebada

Mecanismos de dormicin:
Embrin: la remocin de las cubiertas no permite a los embriones germinar normalmente . Se dan dos casos: - inmadurez del embrin - en embriones maduros: inhibidores presentes en cotiledones. Cubiertas: los embriones aislados pueden germinar normalmente, la limitante la imponen los tejidos que rodean el embrin (endosperma, pericarpio, testa o glumas)

DORMICION EMBRIONARIA
Especie Estudios totales 1 13 8 1 10 1 5 D.embrionaria 0 2 2 0 4 1 0 Fuente: Simpson, 1990

Avena sativa Hordeum vulgare Oriza sativa Secale cereale Triticum aestivum Triticum durum Zea mays

Efecto de la remocin de los cotiledones sobre la dormicin en embriones de manzana. (Bewley y Black, 1985)
60
S in c o t ile d n

50

M it a d c o t ile d n C o t ile d n e n t e r o

Germ inacin (% )

40 30 20 10 0 0 20 40 D a s a 2 0 c 60 80

CAUSAS DE DORMICION IMPUESTA POR LAS CUBIERTAS

1- Interferencia con absorcin de agua Semillas duras (leguminosas), donde la constitucin de la testa es responsable de la impermeabilidad (cutcula cerosa, suberina y osteosclereidas).

2- Restriccin mecnica Ejemplo: semillas de lechuga (endosperma con paredes gruesas compuestas por mananos, polmero de manosa, rodea completamente al embrin).
3- Interferencia en el intercambio gaseoso Entrada de oxgeno y salida de CO2

Efecto de la testa sobre la permeabilidad al agua. (Bewley y Black, 1985)

S e m illa s e m b e b id a s ( % )

100 80 60 40 20 0 0 3 16 34 59 72 99 118 134

P r o f u n d id a d ( u m )

Efecto de las cubiertas sobre el intercambio gaseoso

Impiden la remocin de INHIBIDORES Alta actividad polifenol oxidasa en glumelas reduce la cantidad de O2 que llega al embrin en cebada.

Las cubiertas no imponen dormicin por la disminucin en la cantidad de oxgeno disponible para la respiracin.

b) gr anos e nte r os 120 100 80

Q. P a lo ma r B 1215

Efecto de las cubiertas en cebada

IG

60 40 20

MF MC

a) e m brione s
0 15 22 29 36 43 50 das pos t-ante s is 64

120 100 80

IG

b) cariopses desnudos 120 100 80

60 40 20 0 15 22 29 36 43 50 das pos t-ante s is 64

Q. P alo mar B 1215

IG

60 40 20 0 15 22 29 36 43 das post-antesis 50 64
Q. Palo mar B 1215

Fuente:Benech-Arnold et al., 1999

ABA en embriones en desarrollo 800

ABA ( pg/mg peso seco)

600 400 200 0 15 Q. Palomar 22 B 1215 64

Cambios en el contenido de ABA y sensibilidad al ABA de embriones de cebada

29 36 43 50 das post-antesis

120 100 80

Sensibilidad al ABA de embriones en desarrollo Q. Palomar B 1215

IG

60 40 20

Fuente: Benech-Arnold et al., 1999

0 15 22 29 36 43 das post-antesis 50 64

Efectos del ambiente durante el desarrollo de las semillas sobre el nivel de dormicin primaria
Temperatura: temperaturas bajas sobre el final del llenado de grano imponen dormicin en cebada Dficit hdrico: el efecto depende del tipo de dormicin y del momento en que se produce. Cebada: un dficit hdrico al inicio del llenado aumenta el nivel de dormicin, mientras que al final del mismo, disminuye la dormicin. Sorgo: semillas desarrolladas en condiciones de sequa tienen menor dormicin (disminucin del contenido y de la sensibilidad al ABA). Nutricin: altos niveles de N disminuyen dormicin. Efectos posicionales: diferencias en nivel de dormicin segn la posicin inflorescencia. Fotoperodo: en general la dormicin es incrementada por das largos. en la

Efecto de la temperatura durante el crecimiento de la semilla y la salida de dormicin primaria (cebada)

(Rodrguez, et al. 2001)

Correlacin entre el IG (12 dpmf) y la temperatura media del aire desde antesis a MF, en cebada para 9 fechas de siembra en 3 aos.
80 70 60 50
C2 B3 B4 C4 C3

G I (1 2 D AP M)

40
C1 B2 A1

30 20
B1

10 0 18 19 20 21 22 23 24

M e a n T e m p . ( A - P M ) ( C )

Coeficiente de correlacin para el IG (12 dpmf) y la temperatura media para intervalos de 50 da desde antesis a MF.
1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 -0 , 2 -0 , 4

0-50

50-100

100-150

150-200

200-250

250-300

300-350

T T in te rv a ls (C .D a y )

(Rodriguez, et al. 2001)

350-400

Regresin lineal entre el IG (12 dpmf) y la temperatura media del aire en el intervalo 300-350 C desde antesis, para 9 fechas de siembra en 3 aos

(Rodriguez, et al. 2001)

% de germinacin promedio en funcin de poca de siembra, en cebada

100 90 80

a b b

%Germ.

70 60 50 40 30 20 10 0

poca 1

poca 2

poca 3

% de germinacin para 5 variedades de cebada en funcin de dos pocas de siembra (EEMAC, 1998)

Efecto de la disponibilidad del agua y N, durante el crecimiento del grano, sobre el nivel de dormicin en cebada (interaccin con temperatura)

Momento de ocurrencia del dficit hdrico y el nivel de dormicin

Gualano, et al., 2009

Rol hormonal en el control de la dormicin

ABA: evidencias en Arabidopsis y Maz
Mutantes deficientes en ABA Uso de inhibidores de sntesis de ABA (fluoridone)

En la mayora de los casos no se encuentra una alta correlacin entre el contenido de ABA en embriones y la salida de dormicin, excepto en cebada.

GA s
Promotor de germinacin. Rol diferente a GA en remobilizacin de reservas Proceso intervinientes
Disminucin de la resistencia mecnica de los tejidos que rodean al embrin Promocin del crecimiento potencial del embrin

Modelo sobre regulacin hormonal del fenmeno de dormicin y rol de ROS

Bases genticas de la dormicin

Carcter complejo Regulado por genes cuantitativos En cebada se han descripto 26 QTLs Muchas veces presentan epistasis Interaccionan con muchos factores del ambiente

Anlisis de QTL que afectan dormicin en cebada (poblacin ORO)

Castro el al. 2005

DORMICION
Semilla con D. Primaria
Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales
Luz, temperatura, after-ripening

SEMILLA SIN DORMICION

Luz, temperatura, after-ripening

GERM.

Semilla en formacin

Semilla con D. Secundaria

Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales

Semilla sin Dormicin

FACTORES QUE INDUCEN DORMICION SECUNDARIA

Condiciones anaerbicas Oscuridad Exposicin prolongada a rojo lejano Temperaturas por encima de las mximas para germinacin Temperaturas por debajo de las mnimas para germinacin Stress hdrico (dficit exceso)

Factores que levantan dormicin

- Afterripening: almacenamiento de las semillas con bajo

contenido de humedad - Bajas temperaturas o chilling: semillas embebidas se someten a temperaturas de 1 a 10 C (prctica comn en horticultura y forestacin). - Temperaturas alternadas - Exposicin a la luz: (semillas fotoblsticas) (Rojo vs. Rojo lejano) - Reguladores de crecimiento: giberelinas, citokininas, etileno -Escarificacin: natural (ataques microbianos, pasaje por el tracto digestivo, alternancia de temperaturas) artificial (abrasin mecnica)(semillas duras, ej: leguminosas) -Tratamientos con PEG o Nitrato de potasio

Efecto de la edad de la semilla y chilling, en paspalum

80

70

30C

35C

4 meses 11 meses

60

% germinacin

50

40

30

20

10

0
CRTL Frio CTRL Frio

Glison et al, 2010

Laboreo de da Laboreo de noche

Laboreo de da cubriendo la disquera

Laboreo nocturno con

luz artificial

Efecto de la luz sobre el levantamiento de dormicin

Luz roja (660 nm)

Pr
Rojo lejano (730 nm)

Pfr

Forma activa del fitocromo

Germinacin

Promocin e inhibicin de la germinacin por fitocromos

Modo de accin: Promocin: LFR (low fluence response) (phy B y phyE) VLFR (very low fluence response) ( phyA) Inhibicin: HIR (high irradiance response) (phyA) Proceso fisiolgico (lechuga cv Grand rapids) LFR levanta dormicin impuesta por cubiertas Pfr induce en el embrin un incremento de GAs activas (expresin de GA,3-Bhidroxilasa y un factor de sealizacin PHOR) e incremento de sensibilidad a GAs. En el endosperma estimulan la expresin de genes de protenas que ablandan las cubiertas (expansina, mananasa)

El pastoreo intenso puede promover la germinacin de Raygrass (Lolium multiflorum) a travs de la percepcin de la relacin rojo/rojo lejano de la luz que llega al suelo. (Deregibus et al., 1994)
1200 30 cm 1000 10 cm 2 cm

Dens. de raygrass (pl./m2)

800 600 400 200 0 0 35 60

D a s d e s p u s d e l p a s to r e o

Relacin R/RL a nivel del suelo bajo canopeos de diferentes alturas obtenidas por diferentes intensidades de pastoreo.
1 ,2 1 ,0 0 ,8

R /R L

0 ,6 0 ,4 0 ,2 0 ,0 0 10 20 30

A ltu ra d e c a n o p y (c m )

Implicancias de la falta de dormicin

Pregerminado: comienzo del proceso de germinacin, cuando la semilla se encuentra en la planta madre, sin pasar al punto de no retorno.
Como identificarlo?
En forma directa: Test de actividad alfa amilasa. En forma indirecta: Falling number. Se relacionan en forma inversa

Consecuencias:
Prdida de calidad (crtico en cebada) Disminuye la viabilidad de la semilla

Brotado: germinacin de la semilla en la planta madre, superando el punto de no retorno.

Cmo identificarlo?
Escalas visuales

Consecuencias:
Prdida completa de viabilidad y calidad

Tolerancia al brotado vs. dormicin

Existiran factores diferentes a los que determinan dormicin que condicionan el brotado

Actividad alfa amilasa (mU/g) en dos variedades de cebada en distintos ambientes en Australia
Precipitaciones Alta Stirling 10 Harrington 620

Alta
Alta Media Media Media baja

180
10 30 20 20 10

830
890 500 890 410 780

Li, et al. 2003

Sntesis
El fenmeno de dormicin tiene implicancias ecolgicas vinculadas con la sobrevivencia de las especies a un hbitat particular Es un carcter complejo con fuerte interaccin genotipo x ambiente. Existen distintos tipos de dormicin y mecanismos asociados. Fisiolgicamente se basa en la relacin ABA/GA y en la sensibilidad a ambas hormonas por parte del embrin