BIOLATEST ®

Метод постоянного времени

Определение проводят по схеме приведенной в таблице:
Отмерить (мл) Проба Контроль. раствор
ЩЕЛОЧНАЯ ФОСФАТАЗА 120 (ALP 2x60) Раствор 2 1,00 1,00
Сыворотка крови 0,02 –
Ном. номер 10003197 Хранить
(с +2 до +8) °C Перемешивают, преинкубируют 5 мин при 37 °С и прибавляют
Раствор 1 0,20 0,20
Набор реактивов для приготовления 120 мл рабочего раствора, применяемого
при определении каталитической концентрации щелочной фосфатазы в сыворотке Инкубируют точно 10 мин при 37 °С и прибавляют
крови кинетически или методом константного времени. Раствор ингибитора 0,50 0,50
Сыворотка крови – 0,02
Принцип метода
Щелочная фосфатаза (щелочная фосфогидролаза моноэстеров ортофосфорной Перемешивают и до 30 мин измеряют оптическую плотность пробы (А1) и контрольного
кислоты, К.Ф.3.1.3.1. – ЩФ) расщепляет в N‑метил-D-глюкаминовом буфере раствора (А2) против воды и вычисляют разность оптических плотностей: А1 – А2 = (∆A).
4-нитрофенилфосфат с образованием 4‑нитрофенола и фосфата. ЩФ активирована
хлоридом натрия. Мерой каталитической концентрации фермента является Расчет
количество освобожденого 4-нитрофенола, который определяют фото­метрически Каталитическую концентрацию ЩФ в пробе рассчитывают по формуле:
либо кинетическим методом, либо методом постаянного времени после остановки ЩФ (мккат/л) = 7,899 х ∆А (405 нм)
ферментативной реакции ингибитором ЩФ, который блокирует активный центр 8,373 х ∆А (410 нм)
фермента. 10,263 х ∆А (420 нм)
14,546 х ∆А (430 нм)
Литература
Chromý, V., Kulhánek, V., Fischer, J.: Clin. Chem. 24, 279 (1978) Калибровка
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Clin. Chem. 27, 1729 (1981) Если производите измерение при иной длине волны или на фильтровом фотометре,
Ceriotti, G.: Giorn. Chim. Clin. 9, 167 (1984) или же с некалиброванными пипетками, то можете определи­ть собственный кали
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Biochem. Clin. Bo­he­mo­slov. 18, 57 (1989) -бровочный фактор, действительный для ваших условий. Фактор для кинетического
Schmidt, E.: Fresenius J. Anal. Chem. 337, 145 (1990) определения: 1,00 мл раствора 2 смешивают с 0,20 мл дист. воды и 0,02 мл
реактива 3, прибавляют 0,50  мл раствора ингибитора и измеряют оптическую
Реактивы плотность (А) против воды.
1 Субстрат (2 флакона) F1 = 40/(А).
4-нитрофенилфосфат, 0,92 ммоль/флакон Фактор для метода константного времени: 1,00 мл раствора 2 смешивают с 0,20
2 Буфер (1 флакон) мл дист. воды и 0,02 мл реактива 3, прибавляют 0,50 мл раствора ингибитора
N-метил-D-глюкаминовый буфер, и измеряют оптическую плотность (А) против воды.
42,6 ммоль/флакон F2 = 4/(А).
3 Стандартный раствор (2 мл)
4-нитрофенол, 2,4 ммоль/л Примечания
Кинетическим методом можно без разведения анализировать сыворотки до
Состав инкубационной смеси каталитической концентрации ЩФ до 25 мккат/л. Методом константого времени можно
N-метил-D-глюкаминовый буфер, pH 10,1 (37 °C) 0,35 моль/л без разведения анализировать пробы до 7 мккат/л. При каталитической концентрации
Хлорид натрия 70 ммоль/л ЩФ, превышающей эти величины, пробы следует развести физиологическим
Хлорид магния 0,50 ммоль/л раствором и анализ произвести повторно (результат х разведение). Объемы
4-нитрофенилфосфат, двунатриевая соль 15 ммоль/л отдельных растворов и  пробы можно модифицировать при условии соблюдения
Соотношениe объемов сыворотка/инкубационная смесь 1/61 взаимных соотношений объемов, указанных в описании хода инкубационной смеси.
В обоих случаях ход анализа можно модифицировать следующим образом:
Референтные величины приготавливают инкубационную смесь, содержащую раствор 2 и раствор 1,
(нтБ) С – Щелочная фосфатаза, каталит. конц. фермента при 37 °C (мккат/л) выдерживают ее до требуемой температуры и стартуют реакцию сывороткой крови.
Мужщины 0,90 – 2,30 Величины ЩФ можно пересчитать на температуру 30 °C с помощью фактора 0,70.
Женщины 0,74 – 2,10
Дети (мальчики до 14 лет, девочки до 12 лет) 1,20 – 6,30 Пересчет единиц
Приведеный диапазон референтных значений является ориенти­ровочным. 1 кат/л = 1 моль/л.с
Рекомендуется каждой лаборатории вычислять свои диапазоны нормальных величин. 1 мккат/л = 60 Е/л
Калибровка и контроль Рабочие (аналитические) характеристики
Для калибровки употребить стандарт, который входит в состав набора или ЛИОНОРМ Диапазон измерений: до 25 мккат/л
КАЛИБРАТОР, Ном. номер BLT00069. Оптический предел измерения (изменение оптической плотности не более А/
Для контроля употребить ЛИОНОРМ ГУМ  Н, Ном. номер BLT00070, ЛИОНОРМ мин=) 0,048 мккат/л
ГУМ П, Ном. номер BLT00071. Чувствительность / Предел определения: 0,15–25 мккат/л
Вспомогательный реактив (не входит в состав набора) Воспроизводимость (при 37 °C)
Раствор ингибитора:
Комплексон III 30 ммоль/л Внутрисерийная Среднеарифметическое значение SD CV
NaOH 1 моль/л (число измерений n =20) (мккат/л) (мккат/л) (%)
Приготовление: растворяют 40 г NaOH и 11 г двунатриевой соли этилендиаминтет- Образец 1 2,43 0,02 0,82
рауксусной кислоты дигидрата (Комплексон III) в дист. воде и объем доводят до 1000
мл. При температуре (с  +2 до  +25) °C раствор устойчив. Образец 2 5,73 0,04 0,77
Образец 3 9,76 0,10 1,04
Приготовление растворов
Раствор 1 Содержимое флакона с реактивом 1 растворяют в 10 мл дист. воды. Межсерийная Среднеарифметическое значение SD CV
Устойчивость: 1 месяц при –20 °C в темноте (число измерений n =10) (мккат/л) (мккат/л) (%)
5 дней при (с +2 до +8) °C в темноте Образец 1 2,24 0,05 2,18
5 ч при (с +15 до +25) °C в темноте.
Раствор 2 Содержимое флакона с реактивом 2 растворяют в 100 мл дист. воды. Образец 2 3,19 0,07 2,19
Устойчивость: 1 месяц при (с +2 до +8) °C Образец 3 5,72 0,10 1,75
2 недели при (с +15 до +25) °C.
Сравнение методов
Проведение анализа Сравнение было проведено с использованием реагентов Erba Lachema s.r.o.
Образцы: сыворотка, гепарин. плазма и имеющихся в продаже реагентов с коммерчески доступной методикой.
Длина волны (405 – 430) нм Результаты: N=100, r=0,995, y=0,985 x +0,052 мккат/л
Кювета 1 см
Температура (37 ± 0,1) °C Меры предосторожности
Рекомендуется длина волны 420 нм. Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики профессионально обученным
лаборантом.
Кинетический метод Набор не классифицируется как опасный.
В кювете, выдержанной до постоянной температуры при 37 °C, сме­шивают 1,00 мл Реактив 3 содержит 5% этанола.
раствора 2 и 0,02 мл пробы сыворотки, смесь предва­рительно инкубируют 5 минут, При случайном приеме внутрь организма следует выпить 0,5 л воды. При случайном
после чего стартуют реакцию 0,20 мл раствора 1, предварительно выдержанного попадании на кожный покров или в глаза следует промыть их током чистой воды.
до одинаковой температуры. Измеряют оптическую плотность в течение около Пострадавшему необходимо оказать квалифицированную медицинскую помощь.
210 с и по линейному участку функции (обычно в интервале от 30-ой до 210-ой
секунды) вычисляют изменение оптической плотности за 1 мин (∆А). Ликвидация мусора
Все тестированные пробы считают материалом, который может быть инфицирован,
Расчет и совместно с возможными остатками реактивов подлежит уничтожению в соот-
Каталитическую концентрацию ЩФ в пробе рассчитывают по формуле: ветствии с утвержденными внутрибольничными правилами. Бумажную упаковку
ЩФ (мккат/л) = 56,100 х ∆А (405 нм) сдайте в макулатуру, выполосканую заводскую тару в сортированный мусор.
59,389 х ∆А (410 нм)
72,796 х ∆А (420 нм) Дата проведения контроля: 13. 10. 2017
103,174 х ∆А (430 нм)
Представительство в Российской Федерации: ЗАО «Эрба Рус»
109029 г.Москва, ул.Нижегородская 32, корп.15, офис 503
тел. +7 (495) 755 55 80; 755 78 51, e-mail: erba@erbamannheim.com,
www.erbarus.com

Иcполъзуемые cимволы
Перед использованием
Номер каталога Номер партии Срок годности
Внимательно изучайте инструкцию

Национальный знак
Ин витро диагностика Производитель Температура хранениа
соответствия для Украины

Erba Lachema s.r.o., Karásek 2219/1d, 621 00 Brno, CZ

e-mail: diagnostics@erbamannheim.com, www.erbamannheim.com B/PI/003/17/I
BIOLATEST ®
Constant time method
Proceed as described in the following table:
Pipette (ml) Sample Blank
ALKALINE PHOSPHATASE 120 (ALP 2 x 60) Solution 2 1.00 1.00
Serum 0.02 –
Mix well and preincubate for 5 min at 37 °C and add
Cat. No. 10003197 Store at
(+2 to +8) °C Solution 1 0.20 0.20
Incubate for exactly 10 min at 37 °C and add
For 2 × 60 ml of working solution for determining catalytic con­cen­tra­ti­on of alkaline
phosphatase in serum by means of the kinetic or constant time methods. Inhibitor solution 0.50 0.50
Serum – 0.02
Principle Mix well and read the absorbances of the sample (A1) and blank
Alkaline phosphatase (alkaline phosphohydrolase of ortho­phos­pho­ric monoesters, (A2)  against water within max. 30 min and calculate the difference
E.C.3.1.3.1. – ALP) splits 4-nitro­phenyl­phos­phate into 4­‑nitrophenol and phosphate in A1 – A2 = (∆A).
N-methyl-D-gluca­mine buffer. ALP is activated by sodium chloride. The enzyme activity
is measured by the amount of the liberated 4-nitrophenol which can be determined
either by the kinetic method or by the constant time method using inhibitor blocking Calculation
the active enzyme center. ALP (µkat/l) =   7.899 x ∆A  (405 nm)
  8.373 x ∆A  (410 nm)
References 10.263 x ∆A  (420 nm)
Chromý, V., Kulhánek, V., Fischer, J.: Clin. Chem. 24, 279 (1978) 14.546 x ∆A  (430 nm)
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Clin. Chem. 27, 1729 (1981)
Ceriotti, G.: Giorn. Chim. Clin. 9, 167 (1984) Calibration
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Biochem. Clin. Bohemoslov. 18, 57 (1989) For reading performed at other wavelengths or on a  filter photometr or using non
Schmidt, E.: Fresenius J. Anal. Chem. 337, 145 (1990) -calibrated pipettes, the calibration factor itself can be determined refered to your
special conditions.
Reagents The factor for kinetic procedure: Mix 1.00 ml of Solution 2 with 0.20 ml of
1 Substrate (2 vials) dist. water and with 0.02 ml of Reagent 3. Read the absorbance against
4-nitrophenylphosphate, 0.92 mmol/vial water (A). F1 = 40/(A).
2 Buffer (1 vial) For the constant time method, mix 1.00 ml of Solution 2 with 0.20 ml of dist. water
N-methyl-D-glucamine, and 0.02 ml of Reagent 3. Add 0.50 ml of Inhibitor solution and read the absorbance
42.6 mmol/vial against water (A). F2 = 4/(A).
3 Standard solution (2 ml)
4-nitrophenol, 2.4 mmol/l Notes
Both kinetic and constant time methods can be used with undiluted serum containing
Incubation mixture ALP up to 25 or 7 µkat/l, respectively dilute serum with higher ALP with physiol. saline
N-methyl-D-glucamine, pH 10.1 (37 °C) 0.35 mol/l and repeat the analysis (result x dilution).
NaCl 70 mmol/l Volumes of individual solutions and sample can be modified provided that the mu‑
MgCl2 0.50 mmol/l tual volume ratios given in working procedures granting the optimum composition of
4-nitrophenylphosphate, 2Na-salt 15 mmol/l incubation mixture are adhered to.
Serum/incubation mixture 1/61 In both cases, it is possible to prepare the combined working solution containing the
buffer and substrate and to start the reaction with serum. The ALP values can be
Reference values recalculated to the temperature 30 °C using the factor  0.70.
fS ALP (µkat/l) 37 °C
Men 0.90 – 2.30 Recalculation of units
Women 0.74 – 2.10 1kat/l = 1 mol/l.s
Children (boys up to 14 and girls up to 12 years) 1.20 – 6.30 1µkat/l = 60 U/l
The range of reference values is only approximate, it is re­com­men­ded to all laboratories
to verify the extention of reference interval for their concrete examined population. Performance characteristic
Linearity: up to 25 µkat/l
Calibration and quality control Detection limit: 0.048 µkat/l
For calibration use standard, which is included in the set or LYONORM CALIBRATOR, Measuring range: 0.15–25 µkat/l
Cat. No. BLT00069.
For control use LYONORM HUM N, Cat. No. BLT00070, LYONORM HUM P, Cat. Precision (at 37°C)
No. BLT00071.
INTRA-ASSAY Mean SD CV
(n =20) (µkat/l) (µkat/l) (%)
Auxiliary reagent (not included in the set)
Inhibitor solution Sample 1 2.43 0.02 0.82
EDTA, disodium salt 30 mmol/l Sample 2 5.73 0.04 0.77
NaOH 1 mol/l
Sample 3 9.76 0.10 1.04
Dissolve 40 g of NaOH and 11 g of EDTA in 1000 ml of dist. water. Inhibitor solution INTER-ASSAY Mean SD CV
is stable at (+2 to +25) °C. (n =10) (µkat/l) (µkat/l) (%)
Working solutions
Sample 1 2.24 0.05 2.18
Solution 1 Dissolve the contents of vial with Reagent 1 in 10 ml of dist. water.
Stability: 1 month at –20 °C in dark Sample 2 3.19 0.07 2.19
5 days at (+2 to +8) °C in dark Sample 3 5.72 0.10 1.75
5 hours at (+15 to +25) °C in dark.
Solution 2 Dissolve the contents of vial with Reagent 2 in 100 ml of dist. water.
Stability: 1 month at (+2 to +8) °C Accuracy
2 weeks at (+15 to +25) °C. Test was compared with commercially available test. Results:
Procedure N = 100, r = 0.995, y = 0.985 x + 0.052 µkat/l
Samples: serum, heparinized plasma
Wavelength (405 – 430) nm Health protection
Cuvette 1 cm For in vitro diagnostic use.
Temperature (37 ± 0.1) °C To be handled by entitled and professionally educated person.
The recommended wavelength is 420 nm. The kit is not classified as dangerous.
Reagent 3 contains 5 % ethanol.
Kinetic method If swallowed it is necessary to drink of about 0.5 l of water. On skin or eye contact
In a  cuvette termostatted to 37 °C, mix. 1.00 ml of Solution 2 with 0.02 ml of serum, rinse the place with jet of tap water. If necessary, consult a  physician.
incubate for 5 min and start the reaction by 0.20 ml of Solution  1 temperated to the
same temperature. Read the absorbance within 30–210  s  and calculate the absor‑ Waste disposal
bance change (∆A/min). All tested samples should be treated as potentially infectious and with the contingent
rest of the reagents should be liquidated in accordance with any other local and
Calculation national regulations relating to the safe handling of such materials.
Calculate the catalytic concentration of ALP in the sample according to the following Put packaging paper waste and rinsed containers to recycling.
equations:
ALP (µkat/l) =   56.100 x ∆A  (405 nm)
  59.389 x ∆A  (410 nm) Date of revision: 13. 10. 2017
  72.796 x ∆A  (420 nm)
103.174 x ∆A  (430 nm)

Used Symbols

Catalogue number Lot number In vitro diagnostics Expiry date Manufacturer Storage temperature See instruction for use

Erba Lachema s.r.o., Karásek 2219/1d, 621 00 Brno, CZ

e-mail: diagnostics@erbamannheim.com, www.erbamannheim.com B/PI/003/17/I
BIOLATEST ®
Metoda konstantního času
postupuje se podle schématu uvedeného v  tabulce:
Odměřit (ml) Vzorek Kontrolní roztok
ALKALICKÁ FOSFATASA 120 (ALP 2 x 60) Roztok 2 1,00 1,00
Sérum 0,02 –
Promíchá se a preinkubuje se 5 min při 37 °C a přidá se
Kat. č. 10003197 Skladovat Roztok 1 0,20 0,20
(+2 až +8) °C
Inkubuje se přesně 10 min při 37 °C a přidá se
Souprava činidel pro přípravu 2 × 60 ml pracovních roztoků ke stanovení katalytické Roztok inhibitoru 0,50 0,50
koncentrace alkalické fosfatasy v  séru kineticky nebo metodou konstantního času.
Sérum – 0,02
Princip metody Promíchá se a do 30 min se změří absorbance vzorku (A1) a kontrolního roztoku
Alkalická fosfatasa (alkalická fosfohydrolasa monoesterů kyseliny orthofosforečné,
E.C.3.1.3.1. - ALP) štěpí v N-methyl-D-gluka­minovém pufru 4-nitrofenylfosfát na 4-nitro‑ (A2) proti vodě a vypočte se rozdíl absorbancí A1 – A2 = (∆A).
fenol a fosfát. ALP je aktivována chloridem sodným. Mírou aktivity enzymu je množství
uvolněného 4‑nitro­fenolu, který se stanovuje foto­metricky buď ki­ne­tic­kým po­stu­pem, Výpočet
nebo metodou konstantního času po zastavení enzymové reakce inhibitorem ALP, Katalytická koncentrace ALP ve vzorku se vypočte podle vztahu:
který blokuje aktivní centrum enzymu. ALP (µkat/l) = 7,899 x ∆A  (405 nm)
8,373 x ∆A  (410 nm)
Literatura 10,263 x ∆A  (420 nm)
Chromý, V., Kulhánek, V., Fischer, J.: Clin.Chem. 24, 279 (1978) 14,546 x ∆A  (430 nm)
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Clin. Chem. 27, 1729 (1981)
Ceriotti, G.: Giorn. Chim. Clin. 9, 167 (1984) Kalibrace
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Biochem. Clin. Bohemoslov. 18, 57 (1989) Pro měření při jiné vlnové délce nebo na filtrovém fotometru nebo s ne­kalibrovanými
Schmidt, E.: Fresenius J. Anal. Chem. 337, 145 (1990) pipetami, lze stanovit vlastní kalibrační faktor, který platí pro vaše podmínky.
Faktor pro kinetické stanovení: 1,00 ml roztoku 2 se smíchá s  0,20 ml dest. vody
Činidla a  0,02 ml činidla 3 a  změří se absorbance (A) proti vodě. F1 = 40/(A).
1 Substrát (2 lahvičky) Pro metodu konstantního času se smíchá 1,0 ml roztoku 2 s  0,20 ml dest. vody
4-nitrofenylfosfát, 0,92 mmol/lahvičku a  0,02 ml činidla 3, přidá se 0,50 ml roztoku inhibitoru a  změří se absorbance (A)
2 Pufr (1 lahvička) proti vodě. F2 = 4/(A).
N-methyl-D-glukaminový pufr,
42,6 mmol/lahvičku Poznámky
3 Standardní roztok (2 ml) Při kinetickém postupu lze bez ředění analyzovat katalytické koncentrace ALP do
4-nitrofenol, 2,4 mmol/l 25 µkat/l. Metodou konstantního času lze bez ředění analyzovat vzorky do 7 µkat/l.
Přesáhne-li katalytická koncentrace ALP tyto hodnoty, je nutné vzorek zředit fyziol.
Složení inkubační směsi roztokem a  analýzu opakovat (výsledek x ředění). Objemy jednotlivých roztoků
N-methyl-D-glukaminový pufr, pH 10,1 (37 °C) 0,35 mol/l a  vzorku lze modifikovat za předpokladu, že budou dodrženy vzájemné objemové
NaCl 70 mmol/l poměry uvedené v  pracovních postupech, zaručující optimální složení inkubační
MgCl2 0,50 mmol/l směsi. V  obou případech lze postup modifikovat tak, že se připraví inkubační směs
4-nitrofenylfosfát, disodná sůl 15 mmol/l obsahující roztok 2 s  roztokem 1, vytemperuje se na požadovanou teplotu a  reakce
Objemový poměr sérum/inkubační směs 1/61 se startuje sérem. Hodnoty ALP lze přepočítat pro teplotu 30 °C pomocí faktoru 0,70.

Referenční hodnoty Přepočet jednotek

fS ALP (µkat/l) 37 °C 1 kat/l = 1mol/l.s
Muži 0,90–2,30 1 µkat/l = 60 U/l
Ženy 0,74–2,10
Děti (chlapci do 14 let, dívky do 12 let) 1,20–6,30 Výkonnostní charakteristiky
Referenční rozmezí je pouze orientační, doporučuje se, aby si každá laboratoř ověřila Linearita: do 25 µkat/l
rozsah referenčního intervalu pro populaci, pro kterou zajišťuje laboratorní vyšetření. Limit detekce: 0,048 µkat/l
Pracovní rozsah: 0,15–25 µkat/l
Kalibrace a kontrola
Ke kalibraci použijeme standard, který je součástí soupravy nebo LYONORM Kalib‑ Přesnost (při 37°C)
rátor, kat. č. BLT00069.
Ke kontrole použijeme LYONORM HUM N, kat. č. BLT00070, LYONORM HUM P, INTRA-ASSAY Průměr SD CV
(n =20) (µkat/l) (µkat/l) (%)
kat. č. BLT00071.
Vzorek 1 2,43 0,02 0,82
Pomocné činidlo (není součástí soupravy) Vzorek 2 5,73 0,04 0,77
Roztok inhibitoru
Chelaton III 30 mmol/l Vzorek 3 9,76 0,10 1,04
NaOH 1 mol/l INTER-ASSAY Průměr SD CV
Připraví se rozpuštěním 40 g NaOH a 11 g disodné soli kyseliny ethyl­endiamintetraoctové, (n =10) (µkat/l) (µkat/l) (%)
dihydrátu (chelaton III) v  dest. vodě a  objem se doplní na 1000 ml. Při teplotě (+2
Vzorek 1 2,24 0,05 2,18
až +25) °C je stálý.
Vzorek 2 3,19 0,07 2,19
Příprava roztoků Vzorek 3 5,72 0,10 1,75
Roztok 1 Obsah lahvičky s  činidlem 1 se rozpustí v  10 ml destilované vody.
Stabilita: 1 měsíc při –20 °C v  temnu
5 dní při (+2 až +8) °C v  temnu Správnost
5 h při (+15 až +25) °C v  temnu Srovnání bylo provedeno s  komerčně dostupnou metodou. Výsledky:
Roztok 2 Obsah lahvičky s  činidlem 2 se rozpustí ve 100 ml destilované vody. N = 100, r = 0,995, y = 0,985 x + 0,052 µkat/l
Stabilita: 1 měsíc při (+2 až +8) °C
2 týdny při (+15 až +25) °C Ochrana zdraví
Určeno pro in vitro diagnostické použití oprávněnou a profesionálně vyškolenou osobou.
Postup analýzy Souprava není klasifikovaná jako nebezpečná.
Vzorky: sérum, heparin. plazma Činidlo 3 obsahuje 5 % ethanolu.
Vlnová délka (405 – 430) nm Při náhodném požití se vypije asi 0,5 l vody, při potřísnění pokožky nebo vniknutí do
Kyveta 1 cm oka se pokožka nebo oko vypláchnou proudem čisté vody. Postiženému zajistíme
Teplota (37 ± 0,1) °C kvalifikovanou lékařskou pomoc.
Doporučuje se vlnová délka 420 nm. Roztok 1 se vytemperuje na teplotu (37 ± 0,1) °C.
Likvidace odpadů
Kinetický postup Na všechny zpracované vzorky je nutné pohlížet jako na potencionálně infekční a spolu
V  kyvetě vytemperované na 37 °C se smíchá 1,00 ml roztoku 2 s  0,02  ml vzorku s  případnými zbytky činidel je likvidovat podle vlastních interních předpisů jako nebez‑
séra, směs se preinkubuje 5 min a  reakce se nastartuje 0,20 ml roztoku 1. Měří se pečný odpad v souladu se Zákonem o od­pa­dech. Papírové a vypláchnuté ostatní obaly
absorbance během 30.–210. s  a  vypočte se změna absorbance za min. (∆A/min). se likvidují podle druhu materiálu jako tříděný odpad (papír, sklo, plasty).

Výpočet Datum revize: 13. 10. 2017

Katalytická koncentrace ALP ve vzorku se vypočte podle vztahu:
ALP (µkat/l) = 56,100 x ∆A  (405 nm)
59,389 x ∆A  (410 nm)
72,796 x ∆A  (420 nm)
103,174 x ∆A  (430 nm)

Použité symboly

Katalogové číslo Číslo šarže In vitro diagnostikum Datum expirace Výrobce Тeplota skladování Čtěte návod k použití

Erba Lachema s.r.o., Karásek 2219/1d, 621 00 Brno, CZ

e-mail: diagnostics@erbamannheim.com, www.erbamannheim.com B/PI/003/17/I
BIOLATEST ®
Metóda konštantného času
postupuje sa podľa schémy uvedenej v  tabuľke:
Odmerať (ml) Vzorka Kontrolný roztok
ALKALICKÁ FOSFATASA 120 (ALP 2 x 60) Roztok 2 1,00 1,00
Sérum 0,02 –
Premieša sa a preinkubuje 5 min pri 37 °C a pridá sa
Kat. č. 10003197 Skladovať
(+2 až +8) °C Roztok 1 0,20 0,20
Inkubuje sa presne 10 min pri 37 °C a pridá sa
Súprava činidiel pre prípravu 2 x 60 ml pracovných roztokov na stanovenie katalytickej
koncentrácie alkalickej fosfatázy v  sére ki­ne­tic­ky alebo metódou konštantného času. Roztok inhibítora 0,50 0,50
Sérum – 0,02
Princíp metódy Premieša sa a  do 30 min sa zmeria absorbancia vzorky (A1) a  kontrol-
Alkalická fosfatáza (alkalická fosfohydroláza monoesterov kyseliny orthofosforečnej, ného roztoku (A2) oproti vode a  vypočíta sa rozdiel absorbancií
E.C.3.1.3.1. – ALP) štepí v N-metyl-D-glu­ka­mí­no­vom tlmivom roztoku 4-nitrofenylfosfát A1 – A2 = (∆A).
na 4‑nitrofenol a fosfát. ALP je aktivovaná chloridom sodným. Mierou aktivity enzýmu
je množstvo uvoľneného 4-nitrofenolu, ktorý sa stanovuje fotometricky buď ki­ne­tic­ Výpočet
kým postupom, alebo metódou konštantného času po zastavení enzýmovej reakcie Katalytická koncentrácia ALP vo vzorke sa vypočíta podľa vzťahu:
inhibítorom ALP, ktorý blokuje aktívne centrum enzýmu. ALP (µkat/l) = 7,899 x ∆A  (405 nm)
8,373 x ∆A  (410 nm)
Literatúra 10,263 x ∆A  (420 nm)
Chromý, V., Kulhánek, V., Fischer, J.: Clin.Chem. 24 279 (1978) 14,546 x ∆A  (430 nm)
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Clin.Chem. 27, 1729 (1981)
Ceriotti, G.: Giorn. Chim. Clin. 9. 167 (1984) Kalibrácia
Chromý, V., Zahradníček, L., Vozníček, J.: Biochem. Clin. Bo­hemslov. 18, 57 (1989) Pre meranie pri inej vlnovej dĺžke alebo na filtrovom fotometri alebo s nekalibrovanými
Schmidt, E.: Fresenius J. Anal. Chem. 337,145 (1990) pipetami, je možné stanoviť vlastný kalibračný faktor, ktorý platí pre vaše podmienky.
Faktor pre kinetické určenie: 1,00 ml roztoku 2 sa zmieša s 0,20 ml dest. vody a 0,02
Činidlá ml činidla 3 a  zmeria sa absorbancia (A) oproti vode. F1  =  40/(A).
1 Substrát (2 fľaštičky) Pre metódu konštantného času sa zmieša 1,00 ml roztoku 2 sa s 0,20 ml dest. vody
4-nitrofenylfosfát, 0,92 mmol/fľaštičku a  0,02 ml činidla 3, pridá sa 0,50 ml roztoku inhibítora a  zmeria sa absorbancia (A)
2 Tlmivý roztok (1 fľaštička) oproti vode. F2 = 4/(A).
N-metyl-D-glukamínový tlmivý roztok,
42,6 mmol/fľaštičku Poznámky
3 Štandardný roztok (2 ml) Pri kinetickom postupe je možné bez riedenia analyzovať katalytické koncentrácie ALP
4-nitrofenol, 2,4 mmol/l do 25 µkat/l. Metódou konštantného času je možné bez riedenia analyzovať vzorky
do 7 µkat/l. Ak katalytická kon­cen­t­rá­cia ALP presiahne tieto hodnoty, je nutné vzorku
Zloženie inkubačnej zmesi zriediť fyziol. roztokom a analýzu opakovať (výsledok x riedenie). Objemy jednotlivých
N-metyl-D-glukamínový tlmivý roztok, roztokov a vzoriek je možné modifikovať za predpokladu, že budú dodržané vzájomné
pH 10,1 (37 °C) 0,35 mol/l objemové pomery uvedené v  pracovných postupoch, zaručujúce optimálne zloženie
NaCl 70 mmol/l inkubačnej zmesi. V oboch prípadoch je možné postup modifikovať tak, že sa pripraví
MgCl2 0,50 mmol/l inkubačná zmes obsahujúca roztok  2 s  roztokom 1, vytemperuje sa na požadovanú
4-nitrofenylfosfát, disodná soľ 15 mmol/l teplotu a  reakcia sa štartuje sérom. Hodnoty ALP je možné prepočítať pre teplotu
Objemový pomer sérum/inkubačná zmes 1/61 30 °C pomocou faktora 0,70.

Referenčné hodnoty Prepočet jednotiek

fS ALP (µkat/l) 37 °C 1 kat/l = 1 mol/l.s
Muži 0,90 – 2,30 1 µkat/l = 60 U/l
Ženy 0,74 – 2,10
Deti (chlapci do 14 rokov, dievčatá do 12 rokov) 1,20 – 6,30 Výkonnostné charakteristiky
Rozsah referenčných hodnôt je iba orientačný, odporúča sa, aby si každé laboratórium Linearita: do 25 µkat/l
overilo rozsah referenčného inter­valu pre po­pu­lá­ciu, pre ktorú zaisťuje laboratórne Limit detekcie: 0,048 µkat/l
vyšetrenie. Pracovný rozsah: 0,15–25 µkat/l

Kalibrácia a kontrola Presnosť (pri 37°C)

­­Ku kalibrácii použijeme štandard, ktorý je súčasťou súpravy alebo LYONORM Kalibrátor,
kat. č. BLT00069. INTRA-ASSAY Priemer SD CV
Ku kontrole použijeme LYONORM HUM N, kat. č. BLT00070, LYONORM HUM P, (n =20) (µkat/l) (µkat/l) (%)
kat. č. BLT00071. Vzorka 1 2,43 0,02 0,82

Pomocné činidlo (nie je súčasťou súpravy) Vzorka 2 5,73 0,04 0,77

Roztok inhibítora Vzorka 3 9,76 0,10 1,04
Chelaton III 30 mmol/l
NaOH 1 mol/l INTRA-ASSAY Priemer SD CV
(n =10) (µkat/l) (µkat/l) (%)
Pripraví sa rozpustením 40 g NaOH a  11 g disodnej soli kyseliny etylendiaminte‑
traoctovej, dihydrátu (chelaton III) v  dest. vode a  objem sa doplní na 1000 ml. Pri Vzorka 1 2,24 0,05 2,18
teplote (+2 až +25) °C je stály.
Vzorka 2 3,19 0,07 2,19
Príprava roztokov Vzorka 3 5,72 0,10 1,75
Roztok 1 Obsah fľaštičky s  činidlom 1 sa rozpustí v  10 ml dest. vody.
Stabilita: 1 mesiac pri –20 °C v  tme
5 dní pri (+2 až +8) °C v  tme Správnosť
5 h pri (+15 až +25) °C v  tme Srovnanie bolo vykonané s  komerčne dostupnou metódou. Výsledky:
Roztok 2 Obsah fľaštičky s  činidlom 2 sa rozpustí v  100 ml destilovanej vody. N = 100, r = 0,995, y = 0,985 x + 0,052 µkat/l
Stabilita: 1 mesiac pri (+2 až +8) °C
2 týždne pri (+15 až +25) °C Ochrana zdravia
Určené pre in vitro diagnostické použitie oprávnenou a profesionálne vyškolenou osobou.
Postup analýzy Súprava nie je klasifikovaná ako nebezpečná.
Vzorky: sérum, heparin. plazma. Činidlo 3 obsahuje 5 % etanolu.
Vlnová dĺžka (405 – 430) nm. Pri náhodnom požití sa vypije asi 0,5 l vody. Pri zasiahnutí pokožky alebo pri vniknutí
Kyveta 1 cm. do oka sa pokožka alebo oko vypláchnu prúdom čistej vody. Postihnutému zaistíme
Teplota (37 ± 0,1) °C. kvalifikovanú lekársku pomoc.
Doporučuje sa vlnová dĺžka 420 nm. Roztok 1 sa vytemperuje na teplot (37 ± 0,1) °C.
Likvidácia odpadov
Kinetický postup Na všetky spracované vzorky je nutno pozerať ako na potencionálne infekčné a spolu
V  kyvete vytemperovanej na 37 °C sa zmieša 1,00 ml roztoku 2  s  0,02 ml vzorky s  prípadnými zvyškami činidiel ich likvidovať podľa vlastných interných predpisov
séra, zmes sa preinkubuje 5 min a reakcia sa naštartuje 0,20 ml roztoku 1. Meria sa v  súlade s  národnou legislatívou. Papierové a  ostatné vypláchnuté obaly sa likvidujú
absorbancia v priebehu 30. – 210. s a vypočíta sa zmena absorbancie za min. (∆A/min). podľa druhu materiálu ako triedený odpad (papier, sklo, plasty).

Výpočet Dátum revízie: 13. 10. 2017

Katalytická koncentrácia ALP vo vzorke sa vypočíta podľa vzťahu:
ALP (µkat/l) = 56,100 x ∆A  (405 nm)
59,389 x ∆A  (410 nm)
72,796 x ∆A  (420 nm)
103,174 x ∆A  (430 nm)

Použité symboly

Katalógové číslo Číslo šarže In vitro diagnostikum Dátum expirácie Výrobca Тeplota skladovania Čítajte návod k použitiu

Erba Lachema s.r.o., Karásek 2219/1d, 621 00 Brno, CZ

e-mail: diagnostics@erbamannheim.com, www.erbamannheim.com B/PI/003/17/I