Вы находитесь на странице: 1из 6

Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ
О. Г. Смалюх1, С. В. Сур2

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ИДЕНТИФИКАЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
В РАСТИТЕЛЬНОМ ЛЕКАРСТВЕННОМ СРЕДСТВЕ СЕДАВИТ, ТАБЛЕТКАХ

АО «Галичфарм», г. Львов, Украина


1
2
Корпорация «Артериум», г. Киев, Украина

Выбраны группы биологически активных веществ и разработаны методики


для их идентификации и определения в растительном лекарственном средстве
Седавит, таблетках. Разработаны методики высокоэффективной жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ) для идентификации полифенольных соединений и количе-
ственного определения пиридоксина и никотинамида; газовой хроматографии (ГХ)
для идентификации изовалериановой кислоты, спектрофотометрии (СФ) для ко-
личественного определения флавоноидов.
Ключевые слова: растительные лекарственные средства, Седавит, идентифи-
кация, количественное определение, методики контроля.

ВВЕДЕНИЕ держания индивидуальных соединений,


групп БАВ или маркеров в ГЛС;
Растительные лекарственные средства – выбор и обоснование критериев для
содержат сложный комплекс веществ раз- стандартизации с учетом требований фар-
личных химических классов, при этом в макопейных монографий, научных литера-
результате воздействия технологических турных данных и особенностей техноло-
процессов или внутренних ферментатив- гии производства.
ных реакций могут происходить химиче- Рассмотрим каждый из этапов на при-
ские преобразования этих веществ. Задача мере разработки готового лекарственного
стандартизации лекарственного расти- средства на растительной основе Седавит,
тельного сырья и лекарственных средств таблетки.
на их основе часто осложняется отсут-
ствием определенных параметров контро- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ля, а уже существующие не пригодны для
проверки качественных и количественных Объектом наших исследований было
характеристик. Целью нашей работы была лекарственное средство Седавит, таблет-
разработка подхода к стандартизации го- ки, активными фармацевтическими ин-
тового лекарственного средства (ГЛС) на гредиентами которого являются густой
растительной основе, гарантирующего экстракт, состоящий из пяти растительных
эффективность и безопасность для по- компонентов (корневища с корнями вале-
требителей, обеспечивающего разработку рианы, плоды боярышника, трава зверо-
спецификации и методов контроля каче- боя, листья мяты перечной, шишки хме-
ства, пригодных, в том числе, для обнару- ля), витамины – никотинамид (витамин Р)
жения фальсифицированных лекарствен- и пиридоксина гидрохлорид (витамин В6).
ных средств [1, 2]. Стандартизация пред- В работе использовали методы газовой
усматривала следующие взаимосвязанные (ГХ) и высокоэффективной жидкостной
этапы при фармацевтической разработке (ВЭЖХ) хроматографии. Исследования
продукта: методом ГХ проводили на газовом хрома-
– выбор индивидуальных соединений, тографе Agilent 6890 N” с пламенно-иони-
групп биологически активных веществ зационным детектором ("Agilent", США).
(БАВ) или маркеров, по которым прово- Для ВЭЖХ-исследований использовали
дится оценка качества ГЛС; жидкостный хроматограф Agilent 1200 с
– выбор методов и разработка методик детектором диодная матрица ("Agilent",
идентификации и / или определения со- США). Количественное определение сум-
52
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

мы флавоноидов проводили на спектрофо- ет разработку стратегии контроля, в том


тометре Cary 100 («Varian», Австралия). В числе качественного или количественного
работе были использованы стандартные определения биологически активных ве-
образцы хлорогеновой, кофейной, феруло- ществ или веществ-маркеров, присущих
вой и розмариновой кислот (Fluka), рутин, для отдельных видов лекарственного рас-
гиперозид, лютеолин, кверцетин, апигенин тительного сырья (ЛРС), т.к. в экстракте
(Fluka). Для исследований использовали будут присутствовать как общие для раз-
реактивы, соответствующие требованиям ных видов ЛРС, так и характерные для од-
Европейской Фармакопеи (ЕР) и Государ- ного вида ЛРС вещества. В связи с этим
ственной Фармакопеи Украины (ГФУ). нами был проведен литературный обзор
Растворы реактивов готовили согласно БАВ исследуемых видов сырья [5–7], в ре-
требованиям ЕР/ГФУ [3, 4]. зультате которого были выбраны группы
веществ, наличие и содержание которых
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ могло бы использоваться для идентифика-
ции и количественного определения (ре-
Выбор индивидуальных соединений, зультаты обзора представлены в таблице).
групп БАВ или маркеров. Каждый рас- Согласно данным литературы [5–7], в
тительный компонент комплексного экс- составе БАВ четырёх видов ЛРС (плоды
тракта содержит различные классы БАВ, боярышника, трава зверобоя, листья мяты
которые по составу и соотношению могут перечной, шишки хмеля) присутствуют
меняться в зависимости от географиче- фенольные соединения, которые были вы-
ских и климатических условий произрас- браны для качественных и количествен-
тания и культивирования, сбора, сушки ных характеристик. Для доказательства
и т.д. Комплексный экстракт производят, присутствия в ГЛС корневищ с корнями
одновременно экстрагируя смесь пяти ви- валерианы в качестве маркера выбрали
дов растительного сырья. Это затрудня- изовалериановую кислоту.

Таблица – Биологически активные вещества исследуемых видов сырья


Сырье Состав
Листья мяты Эфирное масло (от 2,40 до 3,75%). Эфирное масло в своей основе состоит
перечной из ментола (41-65%), ментона и ментилацетата. Каротин, флавоноиды:
апигенин, гесперидин, рутин, хлорогеновая, розмариновая, урсоловая и
олеаноловая кислоты; микроэлементы: медь, марганец, стронций и др.
Трава зверобоя Флавоноиды: гиперицин, гиперозид, рутин, кверцитрин, кверцетин,
хлорогеновая, кофейная кислоты, дубильные вещества, кумарины,
каротиноиды, витамины С и РР.
Плоды боярышника Флавоноиды: кверцетин, гиперозид, рутин и др.; хлорогеновая, кофейная
кислоты, гликозиды, каротиноиды, дубильные вещества, жирные масла,
сапонины, пектиновые вещества и др.
Корневища с корнями Эфирное масло (от 0,5 до 2 %), главной частью которого является
валерианы валериано-борнеоловый эфир, различные органические кислоты:
валериановая, изовалериановая, муравьиная, уксусная и др.,
валепотриаты, алкалоиды: валерин, хатинин и др.
Шишки хмеля Горькие вещества гумулон, лупулон, гумуленовая кислота, изомеры
гумулинона, эфирное масло, флавоноиды рутин, кверцитрин, дубильные
вещества и др.

Выбор критериев и методов идентифи- средств являются высокоселективные хро-


кации и / или определения содержания инди- матографические методы контроля [8].
видуальных соединений, групп БАВ или мар- Для идентификации и количественного
керов в ГЛС. При выборе методов контроля определения синтетических компонентов
необходимо учитывать селективность и чув- никотинамида (витамин Р) и пиридоксина
ствительность методик, приемлемость для гидрохлорида (витамин В6) было предложе-
контроля качества в цепочке ЛРС – жидкий но использование жидкостной хроматогра-
экстракт – густой экстракт – ГЛС. Наибо- фии. Условия проведения анализа позволя-
лее подходящими этим требованиям и при- ют одновременно проводить идентифика-
годными для стандартизации растительных цию и количественное определение.
53
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Для идентификации фенольных со- представители биологически активных


единений в ГЛС избран метод жидко- веществ растительных компонентов, вхо-
стной хроматографии. Идентификацию дящих в состав лекарственного средства.
веществ проводили путем сравнения вре- Хроматографирование проводили на жид-
мен удерживания пиков на хроматограм- костном хроматографе с УФ-детектором с
ме испытуемого раствора с временами использованием хроматографической ко-
удерживания стандартных веществ. При лонки C18; подвижная фаза А: 0,6 г/л рас-
разработке методики в качестве стандарт- твор натрия дигидрофосфата моногидрат с
ных веществ были использованы образ- рН 2,5 (с помощью кислоты фосфорной),
цы хлорогеновой, кофейной, феруловой и подвижная фаза В: ацетонитрил; скорость
розмариновой кислот, рутина, гиперозида, подвижной фазы – 1,0 мл/мин; детектиро-
лютеолина, кверцетина, апигенина. Для вание при длине волны 330 нм. Типичные
рутинного контроля были избраны хлоро- хроматограммы раствора сравнения и ис-
геновая, розмариновая, кофейная кислоты пытуемого раствора представлены на ри-
и кверцетин как наиболее специфические сунках 1.1 и 1.2.

Рисунок 1.1 – Типичная хроматограмма раствора сравнения, полученная


при идентификации фенольных соединений

Рисунок 1.2 – Типичная хроматограмма испытуемого раствора Седавит, таблеток,


полученная при идентификации фенольных соединений

Для идентификации в ГЛС кислоты изо- пика кислоты изовалериановой, которая яв-
валериановой, содержащейся в корневищах ляется специфическим веществом для кор-
с корнями валерианы, использовали газовую невищ с корнями валерианы Хроматогра-
хроматографию. Идентификацию проводи- фирование проводили на газовом хромато-
ли путем сравнения времени удерживания графе с пламенно-ионизационным детекто-
основного пика на хроматограмме испы- ром, используя капиллярную колонку дли-
туемого раствора с временем удерживания ной 60 м с внутренним диаметром 0,53 мм,
54
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

неподвижной фазой которой является ма- полупродуктах и особенности технологии.


крогол 20000 Р с толщиной слоя 1 мкм; Требования должны отображать реальный
газ-носитель – гелий для хроматографии Р, уровень БАВ, который характеризует эф-
скорость газа-носителя 5 мл/мин, деление фективность ГЛС. При этом, если в ГЛС
потока 1:1. Типичные хроматограммы рас- содержится незначительное количество
твора сравнения кислоты изовалериановой БАВ или маркера, в спецификацию вво-
и испытуемого раствора Седавит, таблеток дятся требования только для идентифи-
представлены на рисунках 2.1 и 2.2. кации, а в количественных испытаниях
При выборе критериев для количе- определяют сумму БАВ, в этом случае ис-
ственного определения нужно учитывать пытания могут быть проведены, например,
содержание БАВ в растительном сырье, в спектрофотометрическим методом.

Рисунок 2.1 – Типичная хроматограмма раствора сравнения кислоты изовалериановой,


полученная при ее идентификации

Рисунок 2.2 – Типичная хроматограмма испытуемого раствора Седавит, таблеток,


полученная при идентификации кислоты изовалериановой

В состав Седавит, таблеток входит чета содержания действующих веществ


комплексный экстракт, состоящий из пяти учитывали его доступность для рутинного
видов ЛРС. Его терапевтическое действие контроля, входит ли избранное вещество в
определяет сложный комплекс БАВ, экс- определяемую группу соединений, необ-
трагированных из растительного сырья. ходимость использования коэффициентов
В связи с этим нерациональным является пересчета [9]. В качестве стандартного об-
определение каждого отдельного компо- разца избран рутин, который в условиях
нента хроматографическим методом с по- анализа дает максимум поглощения при
следующим суммированием площадей пи- 415 нм и по ходу спектра существенно не
ков при количественном анализе действу- отличается от такового для анализируемо-
ющих веществ. Для таких целей достаточ- го раствора. Для рутинного контроля пред-
но использовать спектрофотометрический ложено использовать значение показателя
метод, которым определяют суммарную поглощения рутина с алюминия хлори-
оптическую плотность определяемых дом, что позволило упростить и удешевить
компонентов в условиях анализа [9]. При методику количественного определения
выборе стандартного образца для перерас- суммы флавоноидов, которые являются

55
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

типичной группой для использованных проводили измерения оптической плот-


видов ЛРС. Оптическую плотность испы- ности раствора стандартного образца ру-
туемого раствора определяли после обра- тина с алюминия хлоридом, используя в
зования цветного комплекса извлеченных качестве компенсационного раствора ис-
этилацетатом флавоноидов с алюминия ходный раствор стандартного образца ру-
хлоридом. В качестве компенсационного тина без добавления реактива алюминия
раствора использовали исходный раствор хлорида.
(этилацетатное извлечение) без добавле- Типичные дифференциальные спек-
ния реактива алюминия хлорида, что по- тры поглощения комплекса алюминия хло-
зволило избежать влияния на результаты рида с флавоноидами исследуемого (ком-
анализа сопутствующих веществ, экстра- плексного экстракта) и стандартного об-
гированных этилацетатом. Параллельно разца рутина представлены на рисунке 3.

Рисунок 3 – Дифференциальные электронные спектры поглощения комплекса


алюминия хлорида с флавоноидами исследуемого раствора Седавит, таблеток (1)
и стандартного раствора рутина (2)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ of pyridoxine and nicotinamide; gas chroma-


tography procedures for identification of is-
В результате проведенной работы ovaleric acid, spectrophotometry procedures
предложен алгоритм стандартизации ГЛС for quantitative determination of flavonoids.
растительного происхождения, на примере Keywords: herbal medicinal products,
Седавит, таблеток, который включил усло- Sеdavit, identification, quantitative determi-
вия выбора групп БАВ и маркеров, мето- nation, control methods.
дик их идентификации и количественного
определения, качественных и количествен- ЛИТЕРАТУРА
ных критериев для оценки ГЛС.
1. Сур, С. В. Методология оценки каче-
SUMMARY ства растительных лекарственных средств
на основании результатов, полученных с
O. G. Smalyuh, S. V. Sur помощью современных аналитических
DEVELOPMENT OF IDENTIFICATION методов / С. В. Сур // Фармацевтический
AND QUANTITATIVE DETERMINATION журнал. – 2002. – № 6. – С. 64 – 71.
METHODS OF BIOLOGICALLY ACTIVE 2. Guidelines for the assessment of herb-
SUBSTANCES IN HERBAL MEDICINAL al medicines / WHO Expert Committee on
PRODUCT SEDAVIT, TABLETS Specification for Pharmaceutical Prepara-
The groups of biologically active sub- tion. – Thirty-fourth Report. – Geneva: World
stances were selected and methods for their Health Organization, 1996. – (WHO Techni-
identification and determination in herbal cal Report Series, No. 863).
medicinal product Sedavit, tablets were de- 3. Державна Фармакопея України /
veloped. The following procedures have been Державне підприємство «Науково-ек-
developed: HPLC procedures for identification спертний фармакопейний центр». – 1-е
of polyphenolic compounds and quantification вид. – Доповнення 2. – Харків: Державне
56
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

підприємство „Науково-експертний фар- карственных средств растительного про-


макопейний центр”, 2008. – 620 с. исхождения / С. В. Сур, О. М. Гриценко //
4. Державна Фармакопея України / Ліки України. – 2002. – № 4. – С. 47–49.
Державне підприємство «Науково-екс- 9. Гризодуб, А. И. Особенности фар-
пертний фармакопейний центр». – 1-е вид. макопейных подходов к количественному
– Харків: РІРЕГ, 2001. – 556 с. определению лекарственного растительного
5. Растительные лекарственные сред- сырья и суммарных фитопрепаратов / А. И.
ства / Н. П. Максютина [и др.] // К.: Здоров’я, Гризодуб, О. А. Евтифеева, К. И. Проскури-
1985. – 280 с. на // ФАРМАКОМ. – 2012. – №6. – С. 7–30.
6. Муравьева, Д. А. Фармакогнозия / Д. Адрес для корреспонденции:
А. Муравьева. – Москва.: Медицина, 1981.
– 656 с. Украина,
7. Фармацевтическая энциклопедия г. Львов, ул. Опрышковськая 6/8,
Украины / Голова ред. ради В. П. Черних. ПАО «Галичфарм»,
–2-е изд. – К.: «МОРІОН», 2010. – 1632 с. e-mail: osmalyuh@gmail.com,
8. Сур, С. В. Проблемы и перспективы Смалюх О. Г.
разработки и внедрения современных ле- Поступила 03.11.2014 г.

Н. Е. Блажеевский, О. И. Коретник

ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ D(+)-БИОТИНА


В ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ В ВИДЕ СООТВЕТСТВУЮЩЕГО
СУЛЬФОКСИДА

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина

Разработана методика количественного определения d(+)-биотина в таблет-


ках ВОЛВИТ® 5 мг методом постояннотоковой полярографии на ртутном капель-
ном электроде в виде соответствующего сульфоксида d(+)-биотина, полученного
посредством действия гидропероксомоносульфата калия в кислой среде. На фоне
0,25 моль/л Н3PO4 (рН 1,4) градуировочный график сохраняет линейный характер:
І = 1,15×104с + 0,63, r=0,996. Исследовано влияние вспомогательных веществ, а так-
же массы образца на определение d(+)-биотина разработанной методикой. При
определении d(+)-биотина в таблетках по 5 мг RSD<3%, δ=1,3% (n=5, P=0,95%). Пре-
дел обнаружения (LOD) и предел количественного определения (LOQ) равны 1,1×10-5
и 3,6× 10-5 моль/л соответственно.
Ключевые слова: d(+)-Биотин, гидропероксомоносульфат калия, полярография,
определение, таблетки.

ВВЕДЕНИЕ скую активность имеет только природный


d(+)-биотин.
d(+)-Биотин (Витамин Н) по химиче-
скому строению является гексагидро-2-
1Н-тиено[3,4-d]-имидазол-4-пентановой
кислотой – соединение, содержащее кон-
денсированную гетероциклическую си-
стему имидазолового и тиофенового колец
с остатком н-валериановой кислоты (рису-
нок 1). Благодаря наличию трех асимме-
тричных атомов углерода возможно суще-
ствование 8 оптических изомеров биотина
и четырех рацематов. Однако биологиче- Рисунок 1 – Структурная формула
d(+)-биотина
57