Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ
«ГОМЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРИКЛАДНАЯ
МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Рабочая тетрадь
для студентов 2 курса лечебного факультета
Гомель
ГомГМУ
2019
ПРАВИЛА РАБОТЫ В
УЧЕБНОЙ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
Подnись_____________________
2
ЗАНЯТИЕ № 1ТЕМА: ОСНОВНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ГРУППЫ МИКРООРГАНИЗМОВ.
МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Предмет, задачи, методы и связи микробиологии. Задачи медицинской микробиологии. История микробиологии.
Эволюция микроорганизмов.
2. Формы и размеры истинных бактерий. Характеристика шарообразных, палочковидных и извитых форм истинных
бактерий.
3. Структура бактерий. Основные отличия прокариотной клетки от эукариотной. Клеточная стенка
грамположительных и грамотрицательных бактерий.
4. Типы микроскопических препаратов. Техника приготовления фиксированных препаратов.
5. Тинкториальные свойства микробов. Красители. Простые способы окраски фиксированных препаратов.
6. Техника микроскопии в световом микроскопе.
7. Систематика и номенклатура микроорганизмов. Принципы классификации патогенных прокариот.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
1►Ознакомление с организацией работы кафедры, оснащением и режимом работы бактериологической
лаборатории.
2►Приготовление препаратов-мазков стафилококка со скошенного агара, фиксация, окраска водно-
спиртовым раствором метиленового синего.
3►Изучение правил и техники иммерсионной микроскопии.
4►Приготовление мазков из смеси бульонных культур кишечной палочки (Escherichia coli), бацилл
(Bacillus сereus), сарцин (Micrococcus flava), зафиксировать, окрасить водным раствором фуксина.
3
Классификация микроорганизмов
Классификация - это распределение организмов на основе учета их общих признаков на группы или таксоны.
Классификация основывается на внешних признаках организмов (фенотипе) и генетических особенностях организмов
(генотипе). В настоящее время мир микробов подразделяют на следующие формы:
1. Неклеточные 2. Клеточные формы:
формы:
2.1. Прокариоты: 2.2. Эукариоты:
- прионы; Домен Bacteria: - бактерии без клеточной - простейшие;
- вироиды; - бактерии с тонкой клеточной стенкой стенки (микоплазмы). - грибы.
- вирусы. (грамотрицательные); Домен Archaea:
- бактерии с толстой клеточной стенкой - архебактерии
(грамположительные);
В классификации микробов используются следующие таксономические категории: царство, отдел, класс,
порядок, семейство, род, вид. Основной таксономической единицей является вид. Название микроорганизмам
присваивается в соответствии с правилами Международного кодекса номенклатуры бактерий. Для обозначения видов
бактерий принята двойная (бинарная) номенклатура, предложенная еще в XVIII веке Карлом Линнеем. Согласно
номенклатуре, латинскими буквами сначала пишется название рода (родовое название) с заглавной буквы, а затем -
название вида (видовое название) со строчной буквы. В тексте все название выделяется курсивом. Если микроорганизм
идентифицирован только до рода, то вместо видового названия пишется слово sp. (species - вид). Родовую
принадлежность микроба обозначает какой-либо морфологический признак или фамилия ученого, открывшего микроб, а
видовую принадлежность обозначает либо вид колоний, либо среда обитания микроорганизма. Например, Escherichia
coli указывает на то, что микроб открыл Т. Эшерих, а обитает микроб в кишечнике. Образование и применение научных
названий микроорганизмов регламентируют “Международный кодекс номенклатуры бактерий”, “Международный
кодекс ботанической номенклатуры” (грибы), “Международный кодекс зоологической номенклатуры” (простейшие) и
решения Международного комитета по таксономии вирусов.
Бактерии обладают высокой изменчивостью. Для внутривидовой дифференциации бактерий, отличающихся
по определенному признаку, используют понятие “вариант” (сокращенно – «вар»). Выделяют варианты, отличающиеся
по антигенным признакам (серовары), варианты, устойчивые к бактериофагам (фаговары), а также варианты,
различающиеся по биохимическим (хемовары), биологическим или культуральным признакам (биовары).
В микробиологии используются специализированные термины: чистая культура, смешанная культура,
штамм, клон.
Культура - это совокупность микроорганизмов, выращенных на плотной или жидкой питательной среде в
условиях лаборатории. Культуру микроорганизмов, состоящую из особей одного вида называют чистой культурой.
Смешанной культурой называют смесь микроорганизмов разных видов, выросших в питательной среде при посеве
исследуемого материала или при попадании в питательную среду, засеянную одним видом микроба, других видов
микроорганизмов из внешней среды.
Штамм (нем. Stamm, буквально — ствол, основа) - это чистая культура определенного вида микроорганизма,
выделенная из исследуемого материала, взятого в определенный момент из конкретного объекта. Может быть выделен
из различных источников (почвы, воды, пищевых продуктов и т.д.) или из одного источника в разное время. Поэтому
один и тот же вид бактерий, дрожжей, микроскопических грибов может иметь большое число штаммов, отличающихся
по ряду свойств, например по чувствительности к антибиотикам, способности к образованию токсинов, ферментов и др.
Клон (греч. klon – отводок) - это потомство (культура) одной материнской клетки (вирусной частицы)
определенного вида микроорганизмов.
4
В микробиологии созданы определители для идентификации микроорганизмов: “Определитель бактерий и
актиномицетов” Н.А. Красильникова (1949 г.), “Определитель микробов” Р.А. Циона (1948 г.) и “Определитель
бактерий” Д.Х. Берджи. Наиболее распространенной является классификация американского бактериолога Д.Х. Берджи,
систематизирующий все известные бактерии на 4 отдела:
Отдел I. Gracilicutes (лат. gracilis - изящный, тонкий, cutis – кожа) - виды с тонкой клеточной стенкой,
окрашивающиеся грамотрицательно.
Отдел II. Firmicutes (лат. firmus - крепкий, cutis – кожа) - бактерии с толстой клеточной стенкой,
окрашивающиеся грамположительно.
Отдел III. Tenericutes (лат. tener - нежный, cutis – кожа) - бактерии, не имеющие клеточной стенки –
микоплазмы.
Отдел IV. Mendosicutes (лат. mendosus - неправильный, cutis – кожа) - архебактерии. В этот отдел включены
метанобразующие, сероокисляющие, микоплазмоподобные, термоацидофильные и другие наиболее древние
по происхождению бактерии.
Морфология бактерий
Бактерии невооруженным глазом не видны. Клетки бактерий измеряют в микрометрах (1 мкм равен 10 -3 мм), а
элементы тонкого строения бактерий измеряют в нанометрах (1 нм равен 10-3 мкм). Средние размеры бактерий
составляют 0,5-3 мкм. По форме клеток бактерии подразделяются на 3 основные группы:
- шаровидные формы или кокки; - палочковидные формы; - извитые формы.
Кокки имеют сферическую форму в виде правильного шара, эллипса, боба. В зависимости от взаимного
расположения клеток после деления различают следующие виды кокков:
- микрококки делятся в разных плоскостях и располагаются одиночно, парами или беспорядочно;
- стафилококки делятся в различных плоскостях и располагаются гроздьями;
- диплококки делятся в одной плоскости, располагаются попарно;
- стрептококки делятся в одной плоскости, располагаются в виде цепочки;
- тетракокки делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях, располагаются по четыре;
- сарцины делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и образуют правильные пакеты по 8-16
клеток.
Палочковидные бактерии имеют цилиндрическую форму с округлыми, заостренными или тупыми концами.
Палочковидные бактерии подразделяются на 2 группы:
1. бактерии – не образующие спор палочки; 2. бациллы - палочки, образующие споры. Палочки, у которых
диаметр споры превышает ширину вегетативной клетки, называют клостридиями. Извитые бактерии объединяют:
- вибрионы - имеют цилиндрическую изогнутую форму, образуя 1/2-1/4 завитка спирали, по форме
напоминают запятую;
- спириллы имеют форму спирально извитых палочек с 4-6 витками;
- спирохеты спирально извитые формы, у которых существуют 2 типа витков: первичные витки, образованные
изгибами протоплазматического цилиндра, и вторичные витки, представляющие изгибы всего тела.
5
ЗАНЯТИЕ № 2
6
Основные морфологические группы бактерий
1►Окраска по Граму мазков из бульонной культуры стафилококка, агаровой культуры кишечной палочки и их
смеси. Зарисовка препаратов.
Смесь бактерий
Обозначить на рисунке:
1 - Staphylococcus aureus,
2 - Escherichia coli
Окраска по Граму
Увеличение x 630
7
4►Приготовление препарата «раздавленная капля» или «висячая капля» из сенного настоя для изучения
подвижности (указать особенности микроскопии препарата)
8
Метод Циля-Нильсена предназначен для выявления кислотоустойчивых бактерий
(возбудителей туберкулеза и лепры).
1. Фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают карболовым фуксином Циля или
окрашенной фуксином бумагой с подогреванием до появления паров, но не доводя краситель
до кипения
2. Дают препарату остыть, бумагу снимают, сливают избыток красителя, препарат промывают
водой.
3. Окрашенный препарат обесцвечивают 5 % раствором серной кислоты в течение 3-5 сек.
4. Тщательно промывают водой.
5. Докрашивают 3-5 мин метиленовым синим (дополнительный краситель).
Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий отличается высоким содержанием липидов. Они с
трудом окрашиваются, но затем удерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой.
Некислотоустойчивые бактерии легко окрашиваются, а затем легко обесцвечиваются кислотой и
окрашиваются дополнительным красителем.
Метод Ожешко используется для выявления спор. Для этого на нефиксированный мазок наносят
0,5% р-р HСl, подогревают 1-2 минуты над пламенем, промывают водой, фиксируют и далее
окрашивают по методу Циля-Нильсена. При этом цитоплазма клетки окрашивается в синий цвет, а
споры в красный.
Метод Бурри-Гинса используется для окраски капсул бактерий и основан на том, что капсула не
воспринимает красители. Капсулу выявляют негативным контрастированием фона по Бури. Для
этого черную тушь смешивают в культурой и высушивают. После этого проводят фиксацию в
пламени горелки, окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным фуксином в течение 1
минуты и промывают водой 5-10 секунд. В результате на темном фоне хорошо видна бесцветная
капсула и красные тела микробов.
Нейссера метод окраски используют для выявления зерен волютина у возбудителей дифтерии и др.
коринебактерий. Фиксированный мазок 2 - 3 мин красят уксуснокислым синим,10 - 30 с
обрабатывают р-ром Люголя, слегка промывают водой и докрашивают в течение 30 с р-ром
везувина, высушивают и микроскопируют. Бактерии окрашиваются в желтый цвет, волютин -в
темно-синий.
Здродовского метод (холодный Циль-Нильсен) используют для выявления риккетсий внутри
пораженных клеток. Для этого: 1. Окрашивают мазок разведенным фуксином Циля (10—15 капель
на 10 мл дистиллированной воды) в течение 5 мин.;. 2. Промывают водой; 3.Обрабатывают мазок
0,5% раствором лимонной кислоты или 0,01% раствором НCl; 4. Промывают водой. 5. Окрашивают
метиленовым синим в течение 1 мин.; 6. Промывают водой, высушивают препарат. Риккетсии
окрашиваются в красный цвет, цитоплазма клеток, в которых они паразитируют,— в голубой, ядра
— в синий.
Окраска по Романовскому-Гимзе (азур II +эозин) основной метод изучения морфологии
риккетсий, хламидий, спирохет, простейших, а также форменных элементов крови. Непосредственно
перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды нейтральной реакции прибавляют 10 капель
готовой фабричной краски и тотчас же наливают на препарат, предварительно фиксированный
жидким фиксатором, на один час. Затем краску сливают, препарат промывают водой, высушивают
на воздухе и микроскопируют. Окрашивание происходит быстрее (30-40 минут), если препарат с
краской поместить в термостат при 37°С. Бактерии вследствие окрашивания приобретают
фиолетово-красный оттенок, цитоплазма клеток — голубой цвет, ядра — красный.
9
ЗАНЯТИЕ № 3ТЕМА: МОРФОЛОГИЯ СПИРОХЕТ, АКТИНОМИЦЕТОВ, РИККЕТСИЙ,
ХЛАМИДИЙ, МИКОПЛАЗМ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Спирохеты. Систематическое положение и морфология спирохет. Особенности ультраструктуры и химического
состава. Методы исследования.
2. Актиномицеты, морфология, ультраструктура, химический состав. Патогенные виды. Роль актиномицетов в природе
и медицине. Методы выявления.
3. Таксономия хламидий. Морфология, структура, способы выявления. Цикл развития хламидий.
4. Риккетсии, морфология, ультраструктура, химический состав. Патогенные виды.
5. Микоплазмы. Классификация. Филогенез. Способы выявления.
Дефектные формы микробов: протопласты, сферопласты, L-формы
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
1► Микроскопия и зарисовка риккетсий Провацека в готовом препарате, окрашенного по
Здродовскому (холодный Циль-Нильсен).
Rickettsia prowazekii
вакцинный штамм
Окраска Окраска по Здродовскому
Увеличение х 1000
2► Заполнение таблицы:
Особенности структуры и
Микроорганизм Способы выявления
жизнедеятельности
1. Спирохеты – грамотрицательные Отличаются строением органа 1.Микроскопия: (трепонемы плохо
извитые, тонкие, подвижные движения. Фибриллы, состоящие красятся , поэтому их.выявляют:
микроорганизмы. Царство: Procaryotae; из флагеллина - белка жгутиков 1. по подвижности в темном поле;
Отдел: Gracilicutes; Порядок: Spirochetales: прикреплены к блефаропластам ― 2.негативной окраской по Бурри;
1.Семейство: Spirochaetaceae ; дисковидным образованиям на 3.серебрением по Морозову;
1. Род: Treponema (8 -12 изгибов): обоих концах цилиндра и 4.окраской по Романовскому-Гимзе;
Вид: T. pallidum – возбудитель сифилиса ; расположены внутри клетки (трепонемы бледно-розовые,
2.Род: Borrelia (3-10изгибов ): Вид Borrelia между наружной мембраной и боррелии сине-фиолетовые,
recurrentis – возвратный тиф; Вид Borrelia цитоплазмой. Сокращения лептоспиры розовые)
burgdorferi – болезнь Лайма фибрилл вызывают вращательные, 2.Культивируют лептоспиры и
2.Семейство: Leptospiraceae сгибательные и поступательные боррелии на питательных средах, а
Род: Leptospira (20 -40 изгибов), движения. трепонемы в яичке кролика, так как
Вид: Leptospira interrogans –возбудитель на питательных средах они не
желтушного лептоспироза. растут
2. Актиномицеты от греч. actis - луч, Почвенные анаэробы 1. Микроскопия: Грам + палочки
mykes - гриб - палочковидные или факультативные или облигатные. (0,2-1,0 х 2,0-5,0мкм) или нити.
нитевидные (10-50мкм) ветвящиеся Некоторые обитают в полости рта, Неподвижны. В гное образуют
бактерии, образующие как и грибы, мицелий ЖКТ, влагалище. Размножаются скопления - актиномикотические
- нитевидные переплетающиеся клетки. поперечным делением, а также друзы - образования в виде
Царство: Procaryotae; Отдел: Firmicutes; спорами и почкованием как грибы. желтоватых зерен, состоящие из
Порядок: Actinomycetales ; A. bovis , A. israelii вызывают густо переплетенных гиф.
Семейство: Actinomycetaceae : актиномикоз - хронический 2. Культивирование на среде
Род: Actinomyces 1.Сем-во: Nocardiaceae гнойный процесс с развитием Сабуро (МПА + 2% глюкозы)
Род: Nocardia Вид Nocardia asteroides гранулем, абсцессов и свищей.
Виды: A. Bovis и A. Israelii
3. Риккетсии – мелкие грамотрицательные Облигатные внутриклеточные Микроскопия при окраске по:
кокковидные или палочковидные бактерии. паразиты (используют АТФ клетки), 1.Романовскому (азур – синий,
Царство: Procaryotae; не растущие на питательных эозин - красный): в цитоплазме или
Отдел: Gracilicutes; Порядок: Rickettsiales; средах. Культивируют риккетсии: ядре сине-фиолетовые риккетсии на
1.Сем-: Rickettsiaceae : Роды: Rickettsia и 1. В организме морских свинок голубом фоне.
Orientia Вид: Rickettsia prowazekii ― или белых мышей. 2. Здродовскому (аналог метода
эпидемический сыпной тиф; Orientia 2. В организме членистоногих: Циля – Нильсена, но без кипячения)
tsutsugamushi – лихорадка цуцугамуши вшей, клещей, блох и др. ― рубиново-красные на голубом
2. Семейство: Bartonellaceae Род: Bartonella 3. В желточном мешке куриного фоне цитоплазмы клетки хозяина.
Bartonella quintana ― возбудитель эмбриона. 3.по Граму ― грамотрицательны.
волынской лихорадки 4. На клеточных культурах.
10
Особенности структуры и
Микроорганизм Способы выявления
жизнедеятельности
4. Хламидии ― грамотрицательные Облигатные внутриклеточные 1.Окраска по Романовскому-Гимзе:
кокковидные бактерии, облигатные паразиты, не растущие на пурпурные на фоне голубой
внутриклеточные паразиты, не питательных средах. В отличие от цитоплазмы клетки.
синтезирующие АТФ (энергетические риккетсий существуют в 2 х 2.Метод РИФ : обработка мечеными
паразиты). Царство: Procaryotae ; Отдел: формах: активной (заразной)- флюорохромами сыворотками -
Gracilicutes; Порядок: Chlamydiales ; элементарное тельце и люминисценция.
Сем-во: Chlamydiaceae 1.Род: Chlamydia пассивной (репродуцирующей) 3.Цитологическое обнаружение
Вид: Chlamydia trachomatis ― возбудитель ретикулярное тело. Вызывают внутриклеточных включений -
трахомы, коньюктивитов и венерического поражения глаз, урогенитального приядерных шапочек (метод
лимфогранулематоза. тракта, легких и др. инфекции. Туревича, Муромцева и др. ).
2.Род: Chlamydophila: Вид C. psittaci ―
возбудитель орнитоза; Вид C. pneumoniae
― возбудитель пневмонии
5. Микоплазмы мелкие сферические или Произошли от грамположительных 1 Молекулярно-генетические
овоидные клетки диаметром 0,2 мкм.. бактерий утративших клеточную методы по ДНК.
Царство: Procaryotae; Отдел: Tenericutes; стенку в результате мутации. Роль 2. Культивирование:
Класс: Mollicutes; Порядок: клеточной стенки выполняет а) на плотных питательных средах
Mycoplasmatales ;Сем-во: Mycoplasmataceae цитоплазматическая мембрана, (уреаплазмы растут виде «яичницы
1.Род: Mycoplasma Виды: M. pneumoniae ― отличающаяся высоким – глазуньи»);
возбудитель. пневмонии и M. hominis ― содержанием стеролов. Способны б) на жидких изменяют цвет
возб. урогенитальных инфекций. 2. к размножению. Чаще всего это индикатора из-за биохимической
Род: Ureaplasma; Вид U. urealyticum – клетки сферической формы. активности.
возбудитель урогенитальных инфекций Воспалительные процессы 3.Электронная микроскопия или
вызываемые микоплазмами - цитоиммунно-элетронная
причина преждевременных родов, микроскопия.
мужского и женского бесплодия и
6. Протопласты и сферопласты бактерии Сферопласты - Можно наблюдать в виде
лишенные клеточной стенки и не грамотрицательные - бактерии шаровидных или нитевидных
способные к размножению. Возникают частично лишены клеточной клеток при микроскопии в темном
при обработке ферментами или стенки (слоя пептидогликана), поле препаратов, приготовленных
антибиотиками, разрушающими наружная мембрана сохраняется. из питательной среды, при условии
пептидогликан (например, лизоцимом - Протопласты – сбалансирования осмотического
ферментом, содержащимся в яичном белке, грамположительные бактерии, давления внутри клетки с
слезной жидкости или пенициллином) . В полностью лишенные клеточной давлениием питательной среды.
живых организмах переходят в L-формы. стенки.
7. L-формы – это способные к Осмотически чувствительные, 1. Культивируют на средах с
размножению сферо- или протопласты, шаровидные или колбовидные высоким осмотическим давлением.
утратившие способность к синтезу клетки различной величины, часто На плотной среде образуют
пептидогликана под влиянием антибиотиков проходящие через бактериальные колонии, врастающие в агар и
или других факторов в живых организмах . фильтры. При удалении фактора, напоминающие форму
приведшего к изменениям, перевернутой шляпы.
реверсируют в исходную 2. Микроскопия мазков из чистых
бактериальную клетку с культур в темном поле –
восстановлением вирулентности, шаровидные, нитевидные клетки
приводя к рецидиву болезни. Не содержащие т крупные вакуоли.
чувствительны к препаратам,
действующим на клеточную
стенку
11
ЗАНЯТИЕ № 4
ТЕМА: ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ (КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ)
МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Питание бактерий. Питательные вещества – источники углерода и азота. Классификация бактерий по типам
питания. Аутотрофы и хемоорганотрофы. Факторы роста и их источники. Источники минеральных элементов.
Способы и механизмы переноса питательных веществ через мембрану.
2. Энергетические потребности бактерий. Пути получения энергии у аутотрофов (фотосинтез, хемосинтез). Источники
и пути получения энергии у хемоорганотрофов.
3. Аэробный и анаэробный типы биологического окисления у бактерий. Аэробные, анаэробные, факультативно
анаэробные и микроаэрофильные бактерии. Способы создания анаэробных условий.
4. Задачи, этапы, преимущества и недостатки бактериологического (культурального) метода исследования.
5. Рост и размножение микроорганизмов. Способы размножения. Бинарное (простое) деление, механизм.
Размножение бактериальных популяций.
6. Принципы и методы культивирования бактерий. Питательные потребности микробов. Питательные среды для
культивирования бактерий. Требования к питательным средам. Классификация питательных сред.
7. Условия и техника культивирования бактерий. Техника посева на питательные среды. Закономерности и характер
роста бактерий на плотных и жидких питательных средах.
8. Способы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Свойства, используемые для идентификации
выделенных культур.
3. По составу: простые - питательные среды (мясо- пептонный бульон- МПБ, мясо- пептонный
агар- МПА) и сложные МПА или МПБ + добавки каких либо компонентов, например кровяной агар
- КА это МПА +5- 10% крови барана
4. По целевому назначению:
1.Общего назначения - универсальные , предназначенные для культивирования любых
микроорганизмов (МПА, КА );
2.Специальные для выращивания микроорганизмов не растущих на универсальных средах
(например, среда: Левенштейна – Йенсена для микобактерий возбудителей туберулеза);
элективные (селективные) для выделения определенных видов микроорганизмов и подавления
роста сопутствующих – (солевой агар для стафилококков c 10% NaCl);
12
дифференциально-диагностические (ДДС) - среды, позволяющие дифференцировать
(различать) виды микроорганизмов по ферментативной активности; В состав этих сред входят:
1)МПА или КА); 2)дифферецирующий фактор - химический субстрат (например, углевод), различное
отношение к которому является диагностическим признаком для данного микроба.3) Индикатор,
изменение цвета которого свидетельствует о биохимической реакции. (это среды Эндо,
Плоскирева, Гисса и другие).
дифференциально-селективные (ДС) - среды, позволяющие выделять бактерии
определенного вида по их физиологическим особенностям. Содержат: 1) МПА 2) элективный
химический субстрат, препятствующий росту других видов бактерий.; 3.) Индикатор, изменение
цвета которого свидетельствует о биохимической реакции. (например, желточно-солевой агар
(ЖСА) для выделения стафилококков).
3.Хромогенные питательные среды позволяют выявить ферментативные активность
специфическую для разных микроорганизмов. Поэтому идентификация микроорганизмов возможна
уже на этапе первичного посева по изменению цвета индикатора что ускоряет исследование
(например на среде Рамбах кишечная палочка образует колонии синего цвета, а сальмонеллы
красного.);
4.Среды обогащения применяют для размножения и накопления бактерий определенного вида в
клиническом материале ( например 20% желчный бульон среда обогащения для сальмонелл при
выделении их из крови.);
5.Транспортные и консервирующие среды применяют для забора и доставки (консервации)
клинического материала , например универсальная среда Амиеса (полужидкий агар+уголь
активированный).)сохраняет неизменным клинический материал 48 часов, что позволяет
доставить его в любую лабораторию современного мира.
Солевой агар Тип среды селективная для стафилококков.. Питательная основа МПА Элективный
фактор хлористый натрий 10% . При такой концентрации соли растут только стафилококки
Солевой бульон Тип среды Селективная для стафилококков Питательная основа МПБ Элективный
фактор хлористый натрий 10% . При такой концентрации соли растут только стафилококки
Кровяной агар Тип среды универсальная, сложная по составу. Питательная основа МПА +5- 10%
крови барана. Позволяет культивировать все микроорганизмы, растущие на питательных средах;
13
желток .S. aureus имеет фермент – лецитовителлазу, разрушающий лецитин желтка, поэтому
колонии S. aureus окружены «радужным» венчиком из липидов в отличие от других стафилококков
► 3-й этап:
Идентификация выделенных чистых культур:
а) морфологические и тинкториальные свойства (приготовление мазка со скошенного агара, окраска по
Граму, при необходимости – другие способы окраски);
б) культуральные свойства;
в) биохимические свойства;
г) антигенные свойства.
Также в ряде случаев проводится определение чувствительности культуры к антибиотикам.
14
б) транспортировка, хранение, подготовка к исследованию;
в) приготовление мазков из патологического материала, окраска по Граму и микроскопия;
г) посев патологического материала на жидкие питательные среды для анаэробов. Инкубация в
термостате в анаэробных условиях.
15
Схема микробиологического исследования с определением чувствительности к
антимикробным препаратам диско-диффузионным методом (бумажными дисками,
содержащими АМП)
1Й-
ДЕНЬ
1. Доставка образцов материала от больного, приготовление и окраска мазков; 2)Микроскопия мазка из образца для
выбора питательной среды для выращивания бактерий; 3) посев исследуемого материала на питательную среду в
чашку Петри.
Культивирование ( выращивание) 16-18 часов при + 37 °С в термостате
2Й-
ДЕНЬ
1)Выбор 1-2 колоний болезнетворной бактерии 2) пересев пробирку для получения чистой культуры бактерий в
количестве, необходимом для постановки тестов.
Культивирование 16-18 часов при + 37 °С в термостате
3Й-
ДЕНЬ
1) 2) 3) 4)
1)Постановка биохимических тестов для определения вида; 2)Приготовление взвеси в 0,9 % р-ре NaCl по стандарту
мутности McFarld → содержащей 150 млн. микробов в 1 мл или 0,5 ЕД McFarld ;3)Нанесение взвеси (посев) бактерий
на среду для определения чувствительности – среду Мюллера-Хинтона; 4) Постановка бумажных дисков с АМП на
чашку со средой Мюллера-Хинтона с посевами бактерий
Культивирование 16-18 часов при + 37 °С в термостате
4Й-
ДЕНЬ
1)Определение вида бактерии по биохимическим тестам 2) Измерение диаметров задержки роста бактерий
вокруг дисков с АМП и определение чувствительности по таблицам;3)Выдача результатов
Чувствительные S - (susceptible, англ.) к антибиотику бактерии не имеют механизмов резистентности→ терапия успешна при
использовании обычных доз; Устойчивые R- (resistant, англ.) бактерии имеют механизмы резистентности→ нет эффекта от
терапии при использовании даже максимальных доз; Промежуточные I (intermediate, англ.) субпопуляци бактерий, находящиеся
между чувствительной и резистентной→ терапия успешна при использовании максимальных доз или при локализации инфекции в
местах, где АМП накапливается в высоких концентрациях
16
ЗАНЯТИЕ № 5ТЕМА: БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДЫ
ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБНЫХ И АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ.
БАКТЕРИОФАГИЯ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Ферменты бактерий, классификация. Способы изучения биохимических свойств микроорганизмов. Практическое
использование биохимической активности в идентификации бактерий
2. Определение сахаролитических свойств, состав сред Гисса; определение протеолитических свойств, определение
каталазной и оксидазной активности.
3. Принцип работы и особенности применения приборов автоматической идентификации бактериальных культур
(гемокультиватор, автоматический анализатор).
4. Особенности культивирования риккетсий и хламидий.
5. Бактериофаги (фаги). История открытия. Морфология, структурные особенности, химический состав и свойства
фагов.
6. Вирулентные фаги. Фазы взаимодействия с бактериальной клеткой. Результаты взаимодействия фага и клетки.
Умеренные фаги. Профаг. Явление лизогении. Фаговая конверсия.
7. Методы выделения и титрования бактериофагов на плотных и жидких питательных средах.
8. Применение фагов в микробиологии и медицине. Фагодиагностика и фаготипирование.
19
А) на жидких
Б) на плотных
питательных
средах; зоны
среда лизиса
просветление
свидетельствуют
бульона
о присутствии
свидетельствует о
фагов
присутствии фагов
Зона лизиса
Отсутствие
роста
21
Штамм N1 S. aureus 3В/53/81; Штамм N2 S. aureus 3В/42E/187
На штаммы S.aureus, посеянные газоном, в квадраты нанесены капли индикаторных стафилококковых
фагов (21 фаг).
Разные фаготипы стафилококков свидетельствуют о разных источниках заражения, одинаковые о
едином источнике. (Например, совпадение фаготипа стафилококков, выделенных из послеоперационной
раны и с поверхности хирургического инструмента или с рук хирурга указывает на источник инфекции.)
22
ЗАНЯТИЕ № 6 ТЕМА: ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Наследственность. Организация генетического аппарата у бактерий (нуклеоид, плазмиды, IS-последовательности,
транспозоны). Принципы функционирования бактериального генома. Организация оперона. Генотип и фенотип.
2. Плазмиды, классификация, структура и свойства плазмид. R-плазмида, особенности структуры и функции. Плазмиды
бактериоциногении.
3. Изменчивость микробов. Модификации у бактерий, значение, основные проявления и свойства
(ненаследственный характер, адаптивность, высокая частота прямых и обратных изменений, множество
индуцирующих факторов).
4. Генотипическая изменчивость. Мутации и их классификация. Мутагены. Фенотипические проявления мутаций.
Судьба мутантов. Диссоциация у бактерий. Влияние отбора. Система репарации повреждений генома.
5. Рекомбинационная изменчивость. Механизмы образования комбинированных геномов. Частота изменений
отдельных признаков. Трансформация, трансдукция, конъюгация.
6. Практическое значение знаний о генетике микробов. Принципы генетического картирования.
7. Методы генетического анализа (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция ПЦР,
секвенирование).
8. Понятие о генной инженерии и использование ее методов в микробиологии и биотехнологии. Получение и
применение генно-инженерных вакцин и цитокинов.
ЛАК +
ЛАК-
24
2.Опыт по трансдукции:
Лак +
Рекомбинат (указать генотип) E.coli
Пример трансдукции
Способность продуцировать токсин у коринебактерий
дифтерии
3.Опыт по конъюгации:
Конъюгация передача генетической информации (ДНК) между бактериальными клетками путем
непосредственного контакта.
Донор (указать генотип) ) E.coli TRP+, Leu+
Материал
Реципиент (указать генотип) E.coli TRP-, Leu-
исследования Среда без триптофана и лейцина растет только E.coli TRP+, Leu+
Приготовить смыв реципиентной культуры. Смыв внести в две пробирки. В
пробирку №1 добавить физраствор (контроль). В пробирку №2 внести смыв
Ход исследования
культуры донора. Инкубация в термостате. Пересев из обеих пробирок на
среду без триптофана и лейцина
Рекомбинат (указать генотип) растет рекомбинант E.coli TRP+, Leu+
Учет опыта Пример коньюгации: Способность бактерий передавать гены
резистентности
25
Принцип метода определения бактериоциногенности: исследуемые культуры бактерий засевают
уколом в чашку с МПА. Выросшие культуры
убивают парами хлороформа. После испарения
хлороформа поверхность агара заливается
расплавленным и остуженным 0,7% МПА,
смешанным с индикаторной культурой. Учет
результатов проводится через сутки после
посева по зонам подавления роста
индикаторной культуры вокруг колоний,
обладающих бактериоциногенностью.
Молекулярно-генетический метод
исследования основан на анализе
нуклеиновых кислот микроорганизмов
Реакция молекулярной
гибридизации (метод ДНК-зондов)
основана на способности одноцепочечной молекулы изучаемой ДНК/РНК специфически
соединяться с комплементарными одноцепочечными зондами (молекулами-свидетелями) с
образованием гибридных дуплексов, которые флюоресцируют или меняют цвет реакционной смеси.
Позволяет ыявлять степень сходства двух молекул ДНК, что используется для эволюционного
анализа, для идентификации и типирования микроорганизмов, а также для изучения экспрессии
генов.
Варианты проведения молекулярной гибридизации. 1). В растворе. 2). В тканевых
срезах (in situ). Тканевые срезы депарафинируют, демаскируют нуклеиновые кислоты в них и
наносят гибридизационный раствор, содержащий специфические меченые зонды. Проводят
денатурацию ДНК, гибридизацию, отмывку несвязавшихся зондов, после чего осуществляют
детекцию гибридизировавшихся зондов по флюоресценции.3) На микрочипах (эррей гибридизация –
наиболее совершенный метод. Позволяет наносить и фиксировать до нескольких сотен тысяч
ДНК-зондов на поверхность стеклянного чипа, что дает возможность изучать одновременно все
гены, присутствующие в ДНК микроорганизма. 4) На мембранах. Изучаемую ДНК фиксируют на
мембранах и к ней добавляют гибридизационный раствор, содержащий специфические меченые
зонды. В случае комплементарности зонд связывается с ДНК, после отмывки несвязавшихся зондов
регистрируют флюоресценцию.
27
ЗАНЯТИЕ № 7 ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ХИМИОТЕРАПИИ
БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ. АНТИСЕПТИКА.
Препарат со среды
кровяной агар
количество и характер
36 различных Окраска по Граму
колоний на кровяном
колоний Увеличение 90 х
агаре
100
Препарат со среды
Эндо
Окраска по Граму
количество и характер 12 однотипных
Увеличение 90 х
колоний на среде Эндо колоний
100
28
Антисептика уничтожение или ограничение роста микроорганизмов в живых тканях; Способы:
физические (хирургическая обработка ран, наложение повязки,) , химические ( 3% H2O2, иод и др.),
биологические (антибиотики, бактериофаги);
29
Чувствительным (Susceptible) считают микроорганизм, у которого нет механизмов
резистентности к данному АМП и при лечении стандартными дозами этого препарата отмечается
хорошая терапевтическая эффективность.
Устойчивым (Resistant) к АМП считают микроорганизм, если он имеет механизмы
резистентности к данному препарату и при лечении инфекций, вызванных этим микроорганизмом,
нет клинического эффекта даже при использовании максимальных терапевтических доз этого
препарата.
Умеренно-устойчивый (Intermediate) микроорганизм занимает промежуточное значение
между чувствительными и устойчивыми штаммами и при лечении инфекций, вызванных данным
возбудителем. Хорошая клиническая эффективность наблюдается только при использовании
высоких терапевтических доз АМП (или при локализации процесса в местах концентрации
антимикробного препарата, например в почках при инфекциях МПС)).
Для определения категорий чувствительности (или резистентности) используют
пограничные концентрации (breakpoint) АП или пограничные значения диаметра зоны задержки
роста микроорганизма.
Пограничные концентрации не являются неизменными величинами. Они пересматриваются, в
зависимости от изменения чувствительности популяции микроорганизмов. Разработкой и пересмотром
критериев интерпретации занимаются химиотерапевты и микробиологи специальных институтов. Ведущими
являются институт клинических лабораторных стандартов США (Clinical and Laboratory Standards
Institute (CLSI) и Европейский комитет по определению чувствительности к антимикробным
препаратам (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing - EUCAST).
В настоящее время в Беларуси и России для оценки результатов определения чувствительности
бактерий применяются стандарты EUCAST.
Cамым точным методом определения МИК («золотым стандартом» ) является метод серийных
разведений в жидкой питательной среде, который однако, отличается высокой трудоемкостью и
стоимостью. Создание микробиологических анализаторов типа «Vitec 2 (Франция), «Sceptor» (США), в основе
которых заложен этот метод, позволил снизить его трудоемкость, но стоимость исследования остается
достаточно высокой, для того чтобы широко использовать метод разведений в клинической микробиологии.
Из-за высокой стоимости диагностических полосок не получил широкого распространения и метод Е-
тестов. По этой причине наиболее часто для определения чувствительности микроорганизмов в большинстве
практических лабораторий используют диско-диффузный метод определения чувствительности
микроорганизмов, что связано с технологичностью и относительно невысокой себестоимостью исследований.
30
Механизмы действия АМП
1. Ингибиторы синтеза клеточной стенки (пенициллины, монобактамы, цефалоспорины,
карбапенемы, гликопептиды);
2. Ингибиторы функции цитоплазматической мембраны (полимиксин);
3. Ингибиторы синтеза белка (тетрациклины, аминогликозиды, макролиды, хлорамфеникол,
линкомицин);
4. Ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот (рифампицин, хинолоны
31
Метод Е-тестов
Принцип: метод аналогичен диско-
диффузионному. Только вместо диска с АМП
применяют Е-тест - пластисковую полоску со
стабильным градиентом из 15 концентраций
АМП (от максимальной к минимальной),
нанесенным с использованием инновационной
технологии сухой химии. В месте пересечения
эллипсовидной зоны подавления роста с
полоской Е-теста получают значение
минимальной подавляющей концентрации
(МПК).
Метод серийных разведений в жидкой среде
Принцип: в пробирках с жидкой средой,
готовят серийные двукратные разведения АМП,
например 32 мкг/мл – 1-я, 16 мкг/мл – 2-я, 8
мкг/мл – 3-я, 4 мкг/мл – 4-я и т.д. Затем в
каждую пробирку вносят 0,1 мл испытуемой
бактериальной суспензии. Одновременно ставят
контроль роста (1 мл жидкой среды + 0,1 мл
суспензии бактерий). Посевы инкубируют при
37°С в течение 18-24 ч., после чего отмечают
результаты. Отсутствие помутнения среды
свидетельствует о задержке роста бактерий в
МПК (МИК) = 4 мкг/мл
присутствии данной концентрации препарата.
Автоматизированные методы определения
чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам. Принцип: В основе метод
серийных разведений в жидкой среде, однако
разведения АМП на панелях представлены
только в 2- концентрациях минимальной и
максимальной. Результаты исследования
определяются по наличию роста в лунках
панели и сравнению с контролем и могут быть
представлены как: чувствителен, умеренно-
устойчив и устойчив (S, I, R). Микробиологический анализатор Vitec 2
Молекулярно-генетические методы
выявления у микроорганизмов ифических
генов резистентности. Принцип: метод ПЦР и
секвенирование нуклеиновых кислот
(мультилокусное секвенирование (MLST),
мультилокусный анализ областей генома с
вариабельным числом тандемных повторов
(MLVA), полногеномное секвенирование),
секвенирование следующего поколения «next-
generation sequencing (NGS)».
32
ЗАНЯТИЕ № 8
ТЕМА: ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ №1 ПО ТЕМЕ: «МОРФОЛОГИЯ, ФИЗИОЛОГИЯ И ГЕНЕТИКА
МИКРООРГАНИЗМОВ».
34
ЗАНЯТИЕ № 9ТЕМА: ЭКОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ. ИНФЕКЦИЯ. ПАТОГЕННЫЕ
МИКРООРГАНИЗМЫ. ТОКСИНЫ МИКРОБОВ. БИОЛОГИЧЕСКИЙ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ)
МЕТОД.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
1► Изучения нормальной микрофлоры.
Посев для изучения нормальной микрофлоры кожи рук на среду Эндо и кровяной агар методом реплик.
Принцип метода: стерильные кусочки фильтровальной бумаги 1х1 см в чашке Петри увлажнить стерильным
физ. раствором. Стерильным пинцетом поместить кусочек бумаги на исследуемую поверхность кожи рук на
0,5 мин. Поместить бумагу на поверхность плотной питательной среды (отпечаток) на 1 мин. Бумагу удалить.
Чашки с отпечатками инкубировать при 370С, 24-48 часов.
Провести учет посева микрофлоры, приготовить препараты из разных типов колоний, окрасить по Граму,
микроскопировать (в демонстрационных посевах).
Учет посева микрофлоры:
биотоп
количество и характер колоний на кровяном агаре 36 различных колоний
количество и характер колоний на среде Эндо 12 однотипных колоний
Микроскопия препаратов
Препарат со среды Эндо Окраска по Граму Препарат со кровяного агара Окраска по Граму
Увеличение 90 х 100 Увеличение 90 х 100
35
1► Оценка адгезивности E.coli по их способности к адсорбции на поверхности эритроцитов
Принцип метода: к суспензии эритроцитов добавляют испытуемую культуру микроорганизмов. После
инкубации готовят мазки, окрашивают и под микроскопом определяют среднее количество бактерий,
адсорбировавшихся на одном эритроците.Эритроциты в данном случае используются в качестве модели
клетки восприимчивого микроорганизма.
Окраска по Романовскому
Увеличение x1350
1 – эритроцит
2 - E.coli
Вывод: (перечислите ферменты вирулентности каждого из двух изученных штаммов) Штамм № 1 S. аureus
вирулентный (плазмокоагулаза+, фибринолизин+, гиаоуронидаза+, лецитовителлаза+); Штамм № 2 S.
аureus не вирулентный (плазмокоагулаза- , фибринолизин-, гиалуронидаза-, лецитовителлаза-).
Бактериальные токсины
Токсичность свойство эндотоксина бактерий вызывать нарушение функций отдельных клеток,
органов и тканей макроорганизма. Эндотоксин липополисахаридный комплекс клеточной стенки
бактерий, освобождающийся после ее гибели
Токсигенность свойство бактерий продуцировать и выделять во внешнюю среду экзотоксин
белковый яд продуцируемый и выделяемый бактериями во внешнюю среду.
36
Анатоксин экзотоксин утративший свои токсические свойства в результате химической и
термической обработки
37
ЗАНЯТИЕ № 10
ТЕМА: МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ СИСТЕМЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
МАКРООРГАНИЗМА. АНТИГЕНЫ.
Гем+ Гем+ Гем+ Гем+ Гем - Гем- Гем- Гем - Гем - Гем - Гем - Гем -
38
3. Определение активности лизоцима
Титр лизоцима - это максимальное разведение исследуемого материала, в котором еще проявляется
литическая активность лизоцима по отношению к эталонному штамму микроорганизмов.
Ингредиенты реакции: Исследуемый материал сыворотка крови обследуемого Тест-объект: Micrococcus
lysodeicticus
Разведения 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 КК КС
слюны
Лизис +/- Нет осадка Нет осадка Нет осадка осадок осадок осадок осадок Нет
Лизис + Лизис + Лизис + Лизис - Лизис - Лизис - Лизис - осадка
Вывод: Титр активности лизоцима 1/8.
Методы определения Лизоцима. основаны на измерении ФЭК-М оптической плотности стандартной живой
суспензии М. lysodeikticus (штамм 2665) У здоровых людей среднее значение активности Л. с-ки крови по
этому методу равно 10,66± 00,34 мкг/мл., носовой слизи - 76,6 7± 04,81 мкг/мл.
4. Оценка фагоцитоза.
►Определение фагоцитарного числа (процент активных фагоцитов)
Принцип метода: в цитратную кровь вносят культуру стафилококка инкубируют в термостате 30 минут.
Затем готовят мазки, окрашивают их по Романовскому-Гимзе, микроскопируют, подсчитывают 100
лейкоцитов, из них – число фагоцитирующих. Считаем также число фагоцитированных микробов в активных
фагоцитах.
Фагоцитарное число (ФЧ) или процент активных фагоцитов - это число фагоцитирующих клеток,
деленное на общее число лейкоцитов (в %). В норме – не менее 50%.
Фагоцитарный индекс (ФИ) – это среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом, т. е.
число фагоцитированных микробов делят на число активных фагоцитов. В норме - 4-8.
39
ЗАНЯТИЕ № 11 ТЕМА: В-ЛИМФОЦИТЫ. ГУМОРАЛЬНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Иммунокомпетентные органы (центральные и периферические), иммунокомпетентные клетки, факторы
межклеточного взаимодействия иммунной системы. Главный комплекс гистосовместимости (ГКГС). Молекулы I, II
и III классов ГКГС, строение, распределение на клетках и тканях. Биологическое значение молекул ГКГС, роль в
распознавании и элиминации чужеродного материала.
2. В-лимфоциты: развитие, маркеры. В-клеточный рецептор: структура (константные и вариабельные участки,
полипептидные цепи). Механизмы В-клеточной активации. Функция В-лимфоцитов.
3. Антитела. Структура молекулы иммуноглобулинов: вариабельные и константные области, расположение и
структура доменов. Антигенсвязывающие участки. Механизм взаимодействия антител с антигенами.
Валентность, аффинность и авидность антител. Полные и неполные антитела. Иммунные комплексы.
4. Классы и субклассы иммуноглобулинов; изотипы, аллотипы, идиотипы.
5. Антителогенез, динамика синтеза антител. Поликлональные и моноклональные антитела
6. Биологические эффекты взаимодействия антител с антигенами: активация комплемента, нейтрализация
токсинов и вирусов, лизис, агглютинация и опсонизация микроорганизмов, торможение адгезии, инвазии,
подавления фагоцитарной реакции.
7. Гуморальный иммунный ответ, динамика развития. Первичный и вторичный иммунный ответ, переключение
биосинтеза классов иммуноглобулинов.
8. Прямая и непрямая реакция Кумбса.
9. Простая радиальная иммунодиффузия в агаре по Манчини.
Отметьте на рисунке:
1 – H-цепь
2 – L-цепь
3 - Шарнирный участок
4 – Fab-фрагмент
5 – Fc-фрагмент
6 – Вариабельный домен легкой цепи
7 – Константный домен легкой цепи
8 – Эпитоп антигена
9 – Паратоп антитела (активный центр)
10 - Вариабельный домен тяжелой цепи
11 – Константные домены тяжелой цепи
Валентность данного Ig = 2
40
Характеристика иммуноглобулинов
Концент-
Класс Ig Характеристика
рация (г/л)
Молекулярная масса 154 кДа. 85% всех иммуноглобулинов. Четыре субкласса.
Мономер. Единственный класс антител, проникающий через плаценту и
IgG 12
обеспечивают иммунологическую защиту плода, активирующий систему
комплемента и обладающий цитофильной активностью.
Молекулярная масса 900 кДа. 5-10% всех иммуноглобулинов. Пентамер.
Ig M 1
Образуются преимущественно при первичном иммунном ответе.
Молекулярная масса 160 кДа. 5-15% всех иммуноглобулинов. Два субкласса.
Мономерные, димерные, тримерные. Сывороточный является мономером, а
IgA 2,5
секреторный ди- или триммером. Секреторный выделяется на поверхность
слизистой, обеспечивая местный иммунитет.
Молекулярная масса 190 кДа. ‹ 1% всех иммуноглобулинов. Мономер. Высокая
IgE 0,00025
цитофильность. Участвуют в аллергических реакциях немедленного типа.
Молекулярная масса 185 кДа. 1% всех иммуноглобулинов. Мономер.
IgD 0,03 Экспрессируются в основном на мембране В-лимфоцитов, участвуют в их
дифференцировке, выполняют рецепторную функцию.
Нарисовать схему
Принцип метода: на стеклянную пластинку (или чашку Петри) наливают агар, смешанный с антителами против
IgG. После застывания в агаре делают лунки диаметром 2 мм. В один ряд лунок вносят разведения стандартной
сыворотки с известной концентрацией IgG. В другие лунки добавляют исследуемые сыворотки крови больных.
Иммуноглобулины диффундируют в агар и на месте встречи с антителами, которые находятся в агаре,
образуется зона кольца преципитации. Диаметр этого кольца зависит от концентрации Ig (чем больше Ig, тем
больше диаметр). Измеряют диаметр зоны преципитации для трех разведений стандартной сыворотки и по ней
на полулогарифмической бумаге строят график зависимости квадрата диаметра кольца преципитации (Д) от
количества Ig в сыворотке крови. Затем измеряют диаметр кольца преципитации исследуемой сыворотки,
наносят на построенный график и определяют концентрацию Ig. Стандарт IgG = 10-20 г/л.- содержание в крови у
человека.
Вывод: диаметр кольца преципитации равен (2,5 мм)2 =6,25 концентрация иммуноглобулина ~5 г /л
, т.е. она снижена (норма содержания в крови у здорового человека IgG = 10-20 г/л).
42
ЗАНЯТИЕ № 12 ТЕМА: Т-ЛИМФОЦИТЫ. КЛЕТОЧНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ.
ИММУНОДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
Критерии серодиагностики:
1) Диагностический титр- разведение исследуемой сыворотки образующее видимый иммунный
комплекс антиген+ антитело, свидетельствующий о заболевании;
2) Нарастание титра Ат - увеличение титра разведения исследуемой сыворотки, свидетельствующее
об активности инфекционного процесса;
43
Основные серологические реакции
а) Реакция агглютинации (лат.склеивание) взаимодействие нерастворимого (корпускулярного)
антигена с антителом с образованием видимого иммунного комплекса (мелкозернистого осадка);
Агглютинирующая диагностическая сыворотка содержит антитела (агглютинины) получают
гипериммунизацией кроликов стандартными антигенами (убитыми микроорганизмами или
отдельными их антигенами;
Титр агглютинирующей сыворотки максимальное разведение агглютинирующей сыворотки
способное вызвать видимую агглютинацию (склеивание) бактерий;
Агглютинирующие диагностические сыворотки бывают адсобированными и
неадсорбированными (в зависимости от степени очистки), поливалентными (могут давать
реакцию агглютинации с 2-3 родственными бактериями, имеющими общий антиген), и
моновалентными, содержащими антитела только к одному антигену.
Диагностический препарат:
адсорбированная поливалентная
дизентерийная сыворотка к
шигеллам Зонне I-II типов.;
Поливалентная шигеллезная
сыворотка + взвесь исследуемой
Физиологический р-р + взвесь Вывод: выделен возбудитель
исследуемой культуры дизентерии шигелла Зонне .;
культуры
Результат
Диагностический титр 1:200 : Титр Ат в реакции 1:400 ; Вывод: обследуемый болен брюшным тифом.
Диагностический титр 1:80 : Титр Ат в реакции 1:80; Вывод: обследуемый болен брюшным тифом.
45
Схема постановки и учета реакции Асколи — реакции преципитации
(термопреципитации) для обнаружения возбудителя сибирской язвы или его
антигенов в различных субстратах (кожа, шерсть, войлок, щетина, сукно, мясо,
земля, испражнения животных и т. д.). Из исследуемого материала готовят
вытяжку в изотоническом растворе хлорида натрия путем кипячения в течение 5—
45 мин. или экстрагируют антиген 0,5% карболовой или уксусной кислотой в
изотоническом растворе хлорида натрия. Экстракт фильтруют через бумажный
фильтр или центрифугируют при 1000—3000 об/мин. В узкую пробирку для
преципитации наливают иммунную преципитирующую противосибиреязвенную
сыворотку и осторожно наслаивают на нее испытуемый экстракт. В течение 10
минут на границе между сывороткой и экстрактом в положительных случаях
появляется кольцо помутнения (кольцепреципитация).
а) Схема взаимодействия; б) Положительная реакция Асколи.
Обе линии преципитации полностью сливаются, что говорит об идентичности обоих антигенов.
46
ЗАНЯТИЕ № 13 ТЕМА: СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕЧЕНЫХ КОМПОНЕНТОВ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Реакции иммунного лизиса и связывания комплемента: методика постановки, учета и оценки, применение в
диагностике инфекционных заболеваний.
2. Реакции иммунофлюоресценции. Диагностическое значение, информативность, варианты постановки реакций:
прямой и непрямой.
3. Иммуноферментный анализ. Варианты постановки. Возможные ошибки и ограничения метода,
иммуноферментного анализа.
4. Иммуноблотинг (вестерн- блотинг). Проведение и учет результатов. Варианты применения метода.
5. Радиоиммунный анализ, сущность, способы постановки, методы учета и оценки реакций, достоинства и недостатки
метода.
В настоящее время используют для только in vitro и только для диагностики лептоспирозов. Для этого к 0,2 мл
разведенной сыворотки (1:100, 1:200 ,1:400,1:800 и т.д) обследуемого добавляют 0,2 мл взвеси культуры лептоспир
инкубируют 2 часа в термостате и микроскопируют в темном поле. Лизис характеризуется сильным набуханием и
зернистостью лептоспир, потерей подвижности с последующим распадом на отдельные зерна, которые иногда
полностью растворяются. Лизис лептоспир сывороткой крови обследуемого пациета в титрах 1:200 и выше позволяет
подтвердить диагноз лептоспироза (Leptospira interrogans)
47
Б) Титрование комплемента в реакции иммунного гемолиза. Рабочая доза комплемента на 20-25% выше титра
(обычно берут предыдущее разведение). Так если титр комплемента составляет 0,25 мл, то рабочая доза будет 0,2 мл.
1.Применение РСК в серодиагностике (выявлении антител) сифилиса.
Исследуемый материал: сыворотка крови пациента, содержит антитела против возбудителя сифилиса
(Treponema palidum) Диагностические препараты: 1.комплемент (сыворотка крови морской свинки
2.кардиолипиновый антиген или антиген из убитых ультразвуком трепонем 3. гемолитическая система
состоящая из : а) гемолитической сыворотки (сыворотка кролика, иммунизированного эритроцитами
барана) б) эритроцит антигена - 3% взвеси эритроцитов барана
Результат
Гем- Гем- Гем+
Вывод: Исследуемая сыворотка содержит антитела против возбудителя сифилиса, обследуемый болен
сифилисом;
Радиоиммунный метод, или анализ (РИА) , основан выявлении иммунных комплексов антиген — антитело
с помощью меченных радионуклидами (125J, 14С, 3Н, 51Сr и др.) антигенов или антител. Измерение
49
интенсивности бета- или гамма-излучения образовавшегося радиоактивного иммунного комплекса прямо
пропорционально количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Иммунохроматографический анализ (ИХА) — иммунохимический метод, основан на принципе
тонкослойной хроматографии и включает реакцию между антигеном и соответствующем ему антителом в
биологических материалах. Проводится с помощью специальных тест-полосок, панелей или тест-кассет.
Биологическая жидкость вместе с антителами с красителем движется вдоль полоски по принципу
тонкослойной хроматографии. Исследуемый антиген (гормон, инфекционный или онкологический маркер)
связывается антителами тестовой и контрольной зон, что является уже иммунологическим методом анализа.
В тестовой зоне ИХА-полоски происходит накопление антител с красителем вокруг иммобилизованных
антител, что проявляется в виде яркой темной полосы. Не связавшиеся антитела с красителем мигрируют
далее вдоль полоски и взаимодействуют со вторичными антителами в контрольной зоне, где наблюдается
вторая темная полоса. Контрольная полоса должна проявляться всегда, независимо от присутствия
исследуемого антигена в жидкости (см. рис). Результаты определяются визуально или компьютерной
обработкой отсканированного изображения
50
ЗАНЯТИЕ № 14ТЕМА: АЛЛЕРГИЯ. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ.
ИММУНОПРОФИЛАКТИКА И ИММУНОТЕРАПИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Аллергия, определение, стадии аллергии. Аллергены. Бытовые, пыльцевые, эпидермальные, пищевые, химические,
лекарственные, микробные экзоаллергены. Пути проникновения аллергенов в организм. Эндоаллергены.
2. Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ). Медиаторный тип ГНТ (I). Анафилактический шок, механизм развития.
Атопии, механизм развития, клинические формы. Цитотоксический тип ГНТ (II). Иммунокомплексный тип ГНТ (III).
3. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ, IV). Контактная аллергия. Инфекционная аллергия.
4. Методы диагностики аллергических болезней. Кожные пробы. Провокационные тесты. Элиминационные тесты.
Методы аллергодиагностики in vitro – определение антигенспецифических и антигеннеспецифических IgЕ.
5. Общие принципы специфической и неспецифической профилактики и терапии аллергических заболеваний.
Проведение специфической аллерговакцинации. Профилактика аллергических заболеваний на производстве, в быту,
при оказании медицинской помощи.
6. Противоинфекционный иммунитет. Понятие о естественном и искусственном, активном и пассивном, общем и
местном, постинфекционном и инфекционном (нестерильном) типах иммунитета.
7. Иммунопрофилактика инфекционных болезней. Определение. Активная иммунопрофилактика. Вакцины,
требования, предъявляемые к ним (иммуногенность, безопасность, ареактогенность, стабильность,
ассоциируемость). Типы вакцин (инактивированные, живые, анатоксины, химические, субъединичные, генно-
инженерные). Адъюванты. Основные бактериальные, вирусные и паразитарные вакцины. Методы оценки
поствакцинального иммунитета. Защитный титр антител.
8. Пассивная иммунопрофилактика. Определение. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Типы и способы
получения. Показатели активности. Показания к применению.
9. Иммунотерапия. Определение. Препараты для иммунотерапии. Механизм действия. Показания к применению.
Осложнения иммунопрофилактики и иммунотерапии.
51
Основные
Принципы диагностики
Тип Ведущее звено патогенеза клинические
аллергических заболеваний
формы
III тип Фиксированные иммунные
Иммунокомплексные комплексы антиген-антитело,
Сывороточная
аллергические образующиеся при избытке
болезнь, Выявление иммунных комплексов
реакции развиваются антигена откладываются в
инфекционный
в течение 3-10 часов кровеносных сосудах и других
эндокардит,
методом осаждения
(феномен Артюса) тканях, активируют систему полиэтиленгликолем
некоторые формы
или 6-7 дней комплемента и привлекают к
громелуронефрита.
сывороточная месту фиксации нейтрофилы ,
болезнь. т.е воспалительной реакции.
Все аллергические
IV тип проявления при
аллергические инфекционных
реакции клеточного болезнях, проба с Кожно-аллергические пробы
Взаимодействие Т-лимфоцитов (отличаются временем и
типа или туберкулином,
(Т киллеров или
аллергические
цитотоксических ) с антигеном
отторжение критериями оценки при учете
реакции трансплантата, реакции). Например, проба Манту (
при участии макрофагов
замедленного типа контактный туберкулиновый тест).
развиваются в дерматит,
течение 1-3 суток противоопухолевый
иммунитет.
Вакцина (от лат. vacca — корова) — препарат приготовленный из ослабленных или убитых
микроорганизмов, продуктов их жизнедеятельности, или из их антигенов, полученных генноинженерным или
химическим путём и, предназначенный для создания искусственного иммунитета к инфекционным болезням.
Живые вакцины воспроизводят в организме человека легко протекающую инфекцию, в ходе которой
формируются и активируются те же механизмы защиты, что и при развитии инфекционного иммунитета,
создают напряженный и длительный иммунитет. По способам получения различаю аттенуированные,
дивергентные и векторные рекомбинантные живые вакцины. Аттенуированные вакцины - АТТЕНУАЦИЯ
(от лат. attenuatio - уменьшение) - искусственное стойкое ослабление вирулентности патогенных
микроорганизмов, сохраняющих способность вызывать иммунитет. Дивергентные штаммы - штаммы
близкородственных в антигенном отношении, неболезнетворных для человека микроорганизмов, например,
для прививки против оспы используют вирус оспы коров. Векторные рекомбинантные вакцины-
конструируют, встраивая в геном (ДНК) вакцинного штамма вируса или бактерий ген чужеродного
антигена.
Убитые (корпускулярные) вакцины готовят из микроорганизмов, инактивированных прогреванием,
УФ-лучами, химическими веществами, в условиях, исключающих денатурацию антигенов. Это вакцины
против коклюша, гриппа, гепатита А, герпеса, клещевого энцефалита
Химические вакцины субъединичные содержат химически чистые антигены возбудителей, выделенные
из бактерий или вирусов после их разрушения. Их приготовление сложнее, чем цельноклеточных убитых,
52
однако они содержат меньше балластных компонентов микроорганизмов. Примеры вакцины против
брюшного тифа (на основе О-, Н- и Vi-антигенов), дизентерии, гриппа (на основе нейраминидазы и
гемагглютинина), сибирской язвы (на основе капсульного антигена) и др. Обладают слабой иммуногенностью
Генно-инженерные вакцины получают с помощью рекомбинантныхе штаммов, продуцирующих
антигены бактерий и вирусов в молекулярной форме. Например вакцина против гепатита В содержит
антигены вируса гепатита В, продуцируемые рекомбинантными клетками дрожжей.
Анатоксин (столбнячный, дифтерийный, ботулиновый, стафилококковый, против газовой гангрены)
получают путем выращивания возбудителей,продуцирующих токсины. После отделения микробных клеток
сепарированием культуральную жидкость (токсин) обезвреживают формалином в концентрации 0,3.0,4 %
при 37ºС в течение 3.4 нед. Обезвреженный токсин – анатоксин, потерявший токсичность, но
сохранивший антигенность, подвергают очистке и концентрированию, стандартизации и фасовке. К
очищенным анатоксинам добавляют консервант и адъювант. Такие анатоксины называют очищенными
сорбированными. Применяют анатоксины подкожно, внутримышечно; 2-3 прививки с последующими
ревакцинациями
Иммунные сыворотки получают из крови гипериммунизированных (интенсивно иммунизированных)
животных (лошади, ослы, кролики) соответствующей вакциной или крови иммунизированных людей
(используется донорская, плацентарная, абортная кровь). Очищенные от балластных белков (спиртами,
ферментами, ультрафильтрацией) и концентрированные иммунные сыворотки называют
иммуноглобулинами. Иммунные сыворотки, полученные из крови животных, называют гетерологичными, а
из крови людей – гомологичными. Сывороточные иммунные препараты применяют для специфического
лечения и экстренной профилактики. Основной механизм лечебного и профилактического действия сводится
к связыванию и нейтрализации антителами бактерий, вирусов и их антигенов, в том числе токсинов в
организме. В связи с этим различают противовирусные, антибактериальные, антитоксические иммунные
сывороточные препараты.
Антитоксические сыворотки: противодифтерийная очищенная, получают иммунизируя лошадей
дифтерийным анатоксином, используют для лечения дифтерии; противогангенозные сыворотки, получают
иммунизируя лошадей анатоксинами клостридий возбудителей газовой гангрены; противоботулиновые и
противостолбнячные атитоксические лечебные сыворотки.
Антимикробные (антивирусные) сыворотки получают из крови лошадей, гипериммунизированных
соответствующими убитыми бактериями, вирусами или их антигенами. Эти сыворотки не нашли широкого
применения в связи с аллергическими реакциями (анафилактический шок, сывороточная болезнь). Из них
получают Гамма-глобулины.
Гамма-глобулины получают спиртовым осаждением сыворотки крови при низких температурах. Из
крови человека получают гомологичные иммуноглобулины - иммуноглобулин нормальный человеческий
(для профилактики кори, менингококковой инфекции, полиомиелита), антирезусный иммуноглобулин, для
иммунопрофилактики гемолитической болезни новорожденных. Его вводят первородящим резус-
отрицательным женщинам. Из крови животных, иммунизированных вакцинными штаммами вирусов или
соответствующими вирусами получают гетерогенные иммуноглобулины- гамма-глобулин против
клещевого энцефалита, антирабический гамма-глобулин и др.
Для вакцинотерапии используют лечебные вакцины они нужны людям, которые уже инфицированы,
и их цель вызвать эффективный иммунный ответ. Это гонококковая , стафилококковая , дизентерийная,
протейная, бруцеллезная, герпетическая вакцины. Вакцина БЦЖ (имуром) может использоваться для
лечения рака мочевого пузыря -, лечебные аллерговакцины- содержащие солевые экстракты аллергенов для
лечения аллергий.
53
Приложение 1 к постановлению Министерства здравоохранения Республики Беларусь 18.07.2012 № 106 с изменениями
от 12.02.2016 г. (постановление Министерства здравоохранения РБ 12.02.2016 г. № 25)
Национальный календарь профилактических прививок
Перечень Группы физических лиц и
инфекций, против сроки проведения Наименование вакцины
которых профилактических
проводятся прививок
ВГВ – вакцина против вирусного гепатита В (генно-
профилактические Новорожденные в первые
инженерная дрожжевая жидкая - антиген вируса
прививки
Вирусный гепатит В 12 часов жизни, дети 1 и 5
гепатита В (HBsAg), выделенный из штамма
месяцев
продуцента Saccharomyces cerevisae
БЦЖ – вакцина против туберкулеза, или БЦЖ-М –
вакцина против туберкулеза с уменьшенным
Новорожденные на 3–5-й
Туберкулез содержанием антигена (сухая для внутрикожного
день жизни
введения- живые бактерии Mycobacterium bovis
вакцинного штамма БЦЖ-1)
Пневмококковая Дети в возрасте 2, 4 и 12 Пневмо-23 (содержит полисахариды капсулы 23
инфекция * месяцев основных серотипов пневмококков )
АКДС – адсорбированная (цельноклеточная) коклюшно-
дифтерийно-столбнячная вакцина, состоит из взвеси
убитых коклюшных микробов и очищенных
дифтерийного и столбнячного анатоксинов,
Дифтерия, столбняк, Дети в возрасте 3, 4, 5, 18
сорбированных на геле гидроксида алюминия или
коклюш месяцев
АаКДС (Инфанрикс) – адсорбированная
(ацеллюлярная) коклюшно-дифтерийно-столбнячная
вакцина сдержит антигены возбудителя коклюша и
очищенных дифтерийный и столбнячный анатоксины
Дети в возрасте 3, 4, 5
Полиомиелит ИПВ – инактивированная полиомиелитная вакцина
месяцев, 7 лет
Хиберикс – вакцина против гемофильной инфекции
Гемофильная Дети в возрасте 3, 4, 5, 18
типа b (cодержит капсульные полисахариды
инфекция * месяцев
гемофильной палочки тип b)
Комбинированная тривакцина «Тримовакс» (
Корь,
Дети в возрасте 12 месяцев содержит живые аттенуированные штаммы вирусов
эпидемический
и 6 лет кори, краснухи и эпидемического паротитаи) или
паротит, краснуха
живые моновакцины)
Дети в возрасте 6 лет, 16 АДС – адсорбированный дифтерийно-столбнячный
Дифтерия и лет, взрослые в 26 лет и анатоксин, или АДС-М – адсорбированный
столбняк каждые последующие 10 лет дифтерийно-столбнячный анатоксин с
до 66 лет уменьшенным содержанием антигенов
АД-М – адсорбированный дифтерийный анатоксин с
Дифтерия Дети в возрасте 11 лет
уменьшенным содержанием антигенов
Грипп ** Дети с 6 месяцев и взрослые Гриппол, Ваксигрип, Инфлювак и др.
Для определения Т- и В-лимфоцитов более доступным и простым, но менее точным и устаревшим является
метод розеткообразования. Определение количества Т-лимфоцитов (CD3+) методом иммунных розеток в
готовых препаратах Принцип метода: На 1 этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови
выделяют лимфоциты. На 2 этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами барана определяют
процент Т-лимфоцитов от общего числа лимфоцитов. Реакция розеткообразования основана на наличии на
поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. При добавлении к суспензии
лимфоцитов эритроцитов барана, последние адсорбируются Т-лимфоцитами, а образующиеся при этом структуры
называются розетками. Общее количество лимфоцитов подсчитывают под микроскопом по количеству розеток.
56
Принцип метода: Т-лимфоциты под воздействием некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре in
vitro способны превращаться в большие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно
синтезирующие ДНК.
Пример иммунограммы
.
57
ЗАНЯТИЕ № 16 ТЕМА: ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО РАЗДЕЛАМ «ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И
ПРИКЛАДНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ»
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность. Облигатно-патогенные и
условно-патогенные микроорганизмы. Факторы, повышающие и снижающие вирулентность микробов.
Методы определения вирулентности, единицы. Генетический контроль патогенности и вирулентности.
2. Факторы патогенности микроорганизмов. Адгезины. Факторы колонизации. Инвазины. Факторы агрессии
микробов. Токсичность и токсигенность микроорганизмов. Эндотоксины, свойства, получение, применение.
Экзотоксины, свойства, получение, единицы измерения. Типы экзотоксинов, механизм действия.
3. Роль макроорганизма в развитии и течении инфекционных болезней. Наследственные факторы. Анатомо-
физиологическое состояние организма. Роль условий жизни в развитии и течении инфекционных болезней.
Природные и социальные факторы.
4. Отличия инфекционных болезней от неинфекционных. Механизмы и пути передачи инфекции. Входные
ворота. Динамика инфекционного процесса, его особенности.
5. Классификация инфекционных процессов по тяжести, характеру возбудителя, по источнику инфекции,
способу передачи возбудителя и механизму заражения, по распространенности. Классификация
инфекционных процессов по локализации микробного очага, длительности течения и кратности заражения.
6. Биологический (экспериментальный) метод исследования, этапы, оценка. Лабораторные животные. Способы
заражения.
7. Иммунология. Определение. История возникновения и развития. Задачи медицинской иммунологии,
межпредметные связи, значение для практической медицины.
8. Факторы и механизмы неспецифической резистентности. Барьерные и противомикробные свойства кожи,
слизистых оболочек, лимфатических узлов, ареактивность тканей, нормальная микрофлора.
9. Гуморальные факторы неспецифической защиты: эндогенные пептиды-антибиотики, пропердин, лизоцим,
-лизины, фибронектин, белки острой фазы воспаления.
10. Интерфероны. Группы интерферонов по продуцентам, типы ИФН по способу образования. Механизм
действия интерферонов.
11. Система комплемента. Структура. Пути активации (классический, альтернативный). Активаторы системы
комплемента. Ингибиторы и инактиваторы комплементарного каскада. Биологические функции
активированных компанентов комплемента. Биологически активные фрагменты, их функции.
Анафилатоксины, их биологическая роль. Мембраноатакующий комплекс (МАК). Методы определения
активности системы комплемента.
12. Полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты (происхождение, характеристика, функции).
Фагоцитарная реакция (фазы, механизмы и факторы внутриклеточной бактерицидности). Исходы
фагоцитоза.Показатели фагоцитоза и методы их определения.
13. Естественные киллеры. Механизмы распознавания и цитолиза клетки-мишени.
14. Антигены: определение, принцип строения, свойства антигенов. Классификации антигенов. Групповые,
видовые, вариантные, стадийные антигены. Перекрестные антигены. Антигенная мимикрия. Антигены
бактерий. Антигенные свойства грибов.
15. Иммунокомпетентные органы (центральные и периферические), иммунокомпетентные клетки, факторы
межклеточного взаимодействия иммунной системы. Главный комплекс гистосовместимости (ГКГС).
Молекулы I, II и III классов ГКГС, строение, распределение на клетках и тканях. Биологическое значение
молекул ГКГС, роль в распознавании и элиминации чужеродного материала.
16. В-лимфоциты: развитие, маркеры. В-клеточный рецептор: структура (константные и вариабельные
участки, полипептидные цепи). Механизмы В-клеточной активации. Функция В-лимфоцитов.
17. Антитела. Структура молекулы иммуноглобулинов: вариабельные и константные области, расположение и
структура доменов. Антигенсвязывающие участки. Механизм взаимодействия антител с антигенами.
Валентность, аффинность и авидность антител. Полные и неполные антитела. Иммунные комплексы.
18. Классы и субклассы иммуноглобулинов; изотипы, аллотипы, идиотипы.
19. Антителогенез, динамика синтеза антител. Поликлональные и моноклональные антитела
20. Биологические эффекты взаимодействия антител с антигенами: активация комплемента, нейтрализация токсинов
и вирусов, лизис, агглютинация и опсонизация микроорганизмов, торможение адгезии, инвазии, подавления
фагоцитарной реакции.
21. Гуморальный иммунный ответ, динамика развития. Первичный и вторичный иммунный ответ,
переключение биосинтеза классов иммуноглобулинов.
22. Прямая и непрямая реакция Кумбса. Простая радиальная иммунодиффузия в агаре по Манчини.
58
23. Т-лимфоциты: развитие, маркеры. Субпопуляции Т-лимфоцитов (Т-хелперы нулевые, Т-хелперы 1, 2
типов, Т-регуляторы; Т-эффекторы: цитотоксические Т-лимфоциты, Т-лимфоциты памяти).
24. Т-клеточный рецептор: строение, типы, генетический контроль, разнообразие, его роль. Т-зависимые
антигены.
25. Клеточный иммунный ответ, динамика развития, мишени действия Т-килеров, проявления.
26. Серологический метод исследования: задачи, этапы, оценка. Общая классификация иммунологических
методов диагностики: серотипирование, серодиагностика
27. Диагностикумы. Диагностические иммунные сыворотки. Методы их получения. Поливалентные,
монорецепторные адсорбированные (поликлональные) и моноклональные диагностические сыворотки и тест-
системы.
28. Качественная и количественная оценка серологических реакций: титр иммунных сывороток,
диагностический титр, нарастание титра антител, аффинность и авидность антител.
29. Механизмы течения и проявления реакций агглютинации. Нагрузочные реакции агглютинации: постановка
и учет реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латекс-агглютинации. Реакция ко-агглютинации. Оценка
результатов.
30. Реакции иммунопреципитации: варианты постановки.(кольцепреципитация по Асколи, двойная диффузия
в агаре, иммуноэлектрофорез), методы учета и оценки.
31. Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой.
32. Реакции иммунного лизиса и связывания комплемента: методика постановки, учета и оценки, применение
в диагностике инфекционных заболеваний.
33. Реакции иммунофлюоресценции. Диагностическое значение, информативность, варианты постановки
реакций.
34. Иммуноферментный анализ. Варианты постановки. Возможные ошибки и ограничения метода.
35. Иммуноблотинг (вестерн-блотинг). Проведение и учет результатов. Варианты применения метода.
36. Радиоиммунный анализ, сущность, способы постановки, методы учета и оценки реакций, достоинства и
недостатки.
37. Аллергия, определение, стадии аллергии. Аллергены. Бытовые, пыльцевые, эпидермальные, пищевые,
химические, лекарственные, микробные экзоаллергены. Пути проникновения аллергенов в организм.
Эндоаллергены.
38. Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ). Медиаторный тип ГНТ (I). Анафилактический шок,
механизм развития. Атопии, механизм развития, клинические формы. Цитотоксический тип ГНТ (II).
Иммунокомплексный тип ГНТ (III).
39. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ, IV). Контактная аллергия. Инфекционная аллергия.
40. Методы диагностики аллергических болезней. Кожные пробы. Провокационные тесты. Элиминационные
тесты. Методы аллергодиагностики in vitro – определение антигенспецифических и антигеннеспецифических
IgЕ.
41. Общие принципы специфической и неспецифической профилактики и терапии аллергических заболеваний.
Проведение специфической аллерговакцинации. Профилактика аллергических заболеваний на производстве, в
быту, при оказании медицинской помощи
42. Противоинфекционный иммунитет. Понятие о естественном и искусственном, активном и пассивном,
общем и местном, постинфекционном и инфекционном (нестерильном) типах иммунитета.
43. Иммунопрофилактика инфекционных болезней. Определение. Активная иммунопрофилактика. Вакцины,
требования, предъявляемые к ним. Типы вакцин (инактивированные, живые, анатоксины, химические,
субъединичные, генно-инженерные). Адъюванты. Основные бактериальные, вирусные и паразитарные
вакцины. Методы оценки поствакцинального иммунитета. Защитный титр антител.
44. Пассивная иммунопрофилактика. Определение. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Типы и
способы получения. Показатели активности. Показания к применению.
45. Иммунотерапия. Определение. Препараты для иммунотерапии. Механизм действия. Показания к
применению. Осложнения иммунопрофилактики и иммунотерапии.
46. Иммунный статус организма. Популяционные и возрастные особенности иммунного статуса. Показатели и
методы определения и оценки.
47. Иммунограмма. Показания к назначению иммунограммы. Основные правила интерпретации
иммунограмм. Принципы постановки иммунологического диагноза.
48. Иммунодефициты: наследственные и приобретенные. Клинические синдромы.
49. Аутоиммунные болезни. Механизмы развития. Клинические формы. Аутоантигены.
50. Противоопухолевый иммунитет. Концепция иммунного надзора. Характеристика антигенов опухолей.
Механизм элиминации опухолевых клеток под действием цитотоксических лимфоцитов и естественных
киллеров. Гуморальный тип иммунного ответа на опухолевые антигены, роль в противоопухолевом
иммунитете. Механизмы ускользания опухолей от иммунного надзора.
59
51. Трансплантационный иммунитет. Типы трансплантатов. Трансплантационные антигены. Условия развития
реакции иммунного отторжения трансплантата и его механизмы. Способы подавления трансплантационной
реакции Осложнения.
52. Особенности изменений иммунного статуса при различных иммунопатологических состояниях: первичных
и вторичных иммунодефицитах, органоспецифических и органонеспецифических аутоиммунных
заболеваниях, аллергических заболеваниях, опухолях.
60