Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Генетические основы селекции и воспроизводства животных и птицы
Генетические основы селекции и воспроизводства животных и птицы
Мясные породы впервые были выведены в Англии, в стане, где в прошлом население
веками не имело существенных достижений в улучшении крупного рогатого скота и
только во времена промышленной революции в 18 веке с преобразованием сельско-
хозяйственного производства (осушение болот, возделывание кормовых культур,
применение удобрений и улучшении пастбищ) все это способствовало быстрому
разведению культурного мясного скота. Как в прошлом, так и в настоящее время, мясные
породы разводятся в условиях обильного кормления, потому что от мясного скота
требуется высокая мясная продуктивность, а для этого необходимы соответствующие
условия для ее достижения. Мировую известность по лучшей способности адаптироваться
к различным условиям среды, но при обильном кормлении, получили выведенные в
Англии герефорды. Формированию выносливости и конституциональной крепости этой
породы способствовал отбор на ранних стадиях разведения по рабочим качествам и
использования герефордских волов на сельскохозяйственных работах. Само место
выведения породы (графство Герефорд) расположено в плодородной долине с
благоприятными климатическими условиями и наличием прекрасных пастбищ. Эта
порода изначально была приспособлена к круглогодовому пастбищному содержанию.
Зима в Англии мягкая и герефордский скот (коровы) подкармливаются сеном только в
очень суровые зимы и в период массовых отелов. Способность герефордского молодняка
перерабатывать траву на мясо (нагул) и хорошо нажировываться считается породной
особенностью как чистопородного скота, так и помесей этой породы.
При полном доминировании действие одного аллеля гена полностью подавляет действие
другого аллеля, вследствие чего фенотипы гетерозигот и доминантных гомозигот не
отличаются друг от друга. Полное доминирование наблюдалось в опытах Г. Менделя при
изучении наследования признаков гороха.
M JM JM
N JNJN
MN JMJN
У лиц с группой крови MN на поверхности эритроцитов имеются оба типа молекул, что
указывает на взаимодействие аллелей JM и JN по типу кодоминирования. Таким образом,
при кодоминировании оба аллеля одного гена имеют самостоятельное фенотипическое
проявление.
Структура белковой
Кодоминирование Молекулярный
молекулы фермента
Тем не менее и такая активность ферментов оказывается достаточной для того, чтобы
глюкоза не накапливалась и семена не набухали. Например, если принять, что у
доминантных гомозигот (ВВ) активность фермента составляет 100%, а у рецессивных
гомозигот (bb) ферментативная активность отсутствует, то у гетерозигот она будет равна
50%. На молекулярном уровне аллели гена, определяющего форму семян,
взаимодействуют между собой по типу кодоминирования, поскольку у гетерозигот
синтезируются как нормальные, так и аномальные молекулы фермента, не способные
превращать глюкозу в крахмал.
Рисунок 1. Четыре фенотипа, возникающие при различных комбинациях аллелей гена окраски
меха кроликов: а - белая окраска; б - гималайская; в - шиншилла; г - агути
Четыре фенотипа возникают при разных комбинациях множественных аллелей гена
окраски меха кроликов. Характерная для вида темно-серая окраска кролика (дикий тип)
обусловлена доминантным аллелем СА. Голубовато-серебристый мех шиншилловых
кроликов, по цвету напоминающий мех американского грызуна шиншиллы,
контролируется аллелем Cch. Аллель Ch определяет гималайскую окраску - белый цвет
тела с черными кончиками ушей, морды, хвоста и ног. Белый цвет кроликов-альбиносов
обусловлен аллелем Ca.
По степени доминирования указанные аллели образуют следующий ряд: С С А >C ch >C h >C a
.
Сa СaСa Альбинос
I(0) ii 46
IV(АВ) IАВ 3
Гаметы АВ Аb аВ аb
Гибриды, полученные при скрещивании этих пород, имеют белое оперение. Во втором
поколении гибридов происходит расщепление по цвету оперения в соотношении 13:3
(13/16 белых, 3/16 окрашенных).
Гаметы IС Ic iC ic
Гаметы АС Ас аС ас
Рисунок 2. Расщепление 15:1 во втором поколении гибридов при скрещивании пастушьей сумки с
овальными и треугольными плодами (каждому генетическому классу соответствует свой цвет
семени)
В данном примере доминантные аллели генов, обусловливающих треугольную форму
стручков, обозначены как С и D, а их рецессивные аллели - как с и d.
У большинства видов пчел и муравьев половых хромосом нет. Диплоидные самки у них
развиваются из оплодотворенных яиц, гаплоидные Трутни - из неоплодотворенных. Этот
тип определения пола называется гаплодиплоидией.
Первый пример плейотропии был описан еще Г. Менделем, который установил, что
растения гороха с пурпурными цветками имеют также красные пятна в пазухах листьев и
семена, покрытые бурой кожурой. Г. Мендель полагал, что все эти признаки зависят от
одного наследственного фактора.
У кур ген коротконогости доминирует над аллельным геном нормальной длины ног ср и
одновременно вызывает укорочение клюва и нарушение развития. Гомозиготные по этому
гены эмбрионы на третий-четвертый день инкубации останавливаются в развитии и к
концу первой недели почти все гибнут.
Пластидная наследственность.
зеленое зеленое
белое белое
зеленое белое
белое либо белое
Как видно из табл. 4, характер окраски листьев потомков зависит исключительно от того,
на каких ветвях растения находились цветки, давшие начало семенам.
Митохондриальная наследственность.
Сравнение геномов организмов разных видов (про- и эукариот) показало, что существует
фундаментальный набор генов, общий для всех организмов, белковые продукты которых
легко распознаются у всех них. Это подтверждает гипотезу об общем предшественнике
для всех организмов.
"Обратная генетика"
Геномика использует методы так называемой "обратной генетики ", которая в отличие от
классической генетики, изучающей вначале признаки, а затем контролирующие их гены (признак
>ген), идет в обратном направлении - от идентификации гена при отсутствии всякой информации
о нем к изучению его функции (ген>признак). Обратная генетика получила развитие в процессе
разработки международной программы "Геном человека".
Традиционно работы по изучению функций генов проводились так - искусственно получали или в
природных популяциях находили мутантные организмы, в которых какая - то функция (признак)
была нарушена, например, мух с нарушениями пигментации глаз, микроорганизмов с серией
биохимических мутаций, и с помощью классических генетических экспериментов пытались
определить, какой ген "отвечает" за данную функцию. Такой подход называют прямой генетикой.
Как уже отмечалось выше, сегодня расшифрована полная нуклеотидная последовательность
многих генов различных организмов, однако функция большинства из них неизвестна. "Обратная
генетика" пытается выявить функции гена, исходя из известной нуклеотидной
последовательности. Например, если какой - то ген с неизвестной функцией гомологичен уже
известному гену другого организма, то можно сказать, что функции этих генов сходны.
Но что же делать, если сравнение последовательности изучаемого гена не выявляет гомологии с
уже известными генами? Один из возможных способов решения этой проблемы - использование
недавно открытого для растений и некоторых животных феномена - РНК-интерференции.В 2006
год Нобелевской премии по физиологии и медицине (Э. Файер и К. С. Мелло) "за открытие
фундаментального явления РНК-интерференции - подавления экспрессии генов с помощью
двухцепочечной РНК".
Суть в следующем: при введении искусственно синтезированной двухцепочечной РНК,
гомологичной изучаемому гену, происходит "выключение" его работы, организмы становятся
мутантными по дан ному гену, т.е. нарушается функция соответствующего гена. Например,
введение в нематоду Caenorhabditis elegans двуцепочечной РНК, гомологичной гену rol, заставляет
червяков сворачиваться в кольца, так как у них нарушается синтез специальных мышечных белков
- актинов. Особенно много подобных работ проводят на классических объектах генетики - мушке
дрозофиле и нематоде.
Стратегия " обратной генетики " применительно к поиску генов получила воплощение в
позиционном клонировании, которое подразумевает локализацию гена при отсутствии всякой
информации о его функции, т.е. о кодируемом геном белке. Предварительно место гена на
хромосомной карте устанавливают по его сцеплению с известным генетическим маркером,
например, с установленным геном, ответственным за определение наследственного заболевания.
После этого осуществляют позиционное клонирование и секвенирование гена, функция которого
неизвестна. Процедура секвенирования, как уже было сказано выше, сейчас полностью
автоматизирована, как и сравнение геномов, и они представляют собой "компьютероемкие" и
"интеллектуальноемкие" процедуры.
Протеом и протеомика
В протеомике сразу был взят медицинский уклон: в первую очередь стали изучать те
белки, которые важны для понимания механизма заболевания и диагностики. Протеом
человека содержит 250 тыс. различных белков, в то время как число белок-кодирующих
генов всего 32 тыс. Такое оказалось возможным благодаря альтернативному сплайсингу и
свидетельствует о том, что в геноме осуществляется принцип экономии генетического
материала (компактная запись), а с другой стороны, благодаря регулируемой
комбинаторике экзонов (участков гена (ДНК) эукариот, несущих генетическую
информацию, кодирующую синтез продукта гена (белка)) достигается большой выбор
генных продуктов - белков.
За время, прошедшее с конца 60-х годов, когда метод электрофореза белков стал широко
использоваться в популяционных исследованиях, биохимическая наследственная
изменчивость открыта уже у более чем 2000 различных видов - от микроорганизмов до
человека.
p2+2pq+q2 =1,
Кроме того, и это очень важно, генетически эффективная численность (N) популяции
всегда и существенно меньше ее общей численности (Nt) уже по той простой причине, что
старшие и младшие возрастные группы исключены из процесса воспроизводства. У
человека, например, если обратиться к сельскому населению, величина N составляет
примерно треть от величины Nt. У природных видов отношение Nе/Nt может быть еще
меньше, порядка 0,1-0,2.
Селекционная ценность
Характер доминирования
малая средняя большая
Полное aa -- AA, Aa
Отсутствие доминирования aa Aa AA
Сверхдоминирование aa AA Aa
При этом при полном доминировании только особи «аа» будут иметь пониженную
численность (отбор будет вестись на нивелировку «аа»), при отсутствии доминирования
самая низкая ценность особей будет по генотипу «аа», пониженная у гетерозигот «Аа», то
есть отбор будет вестись против этих двух групп. И при сверхдоминировании
преимущество будет свойственно гетерозиготам «Аа», а гомозиготы будут несколько
угнетены. Эти генетические изменения при селекции следует учитывать для каждого
случая доминирования (более подробное описание выявления частоты генов можно найти
у Н.П. Дубинина, Я.Л. Глембоцкого, 1967; П.Ф. Рокицкого, 1969).
Наряду с этим, общее уравнение связи между сдвигом при отборе и селекционным
дифференциалом с учетом коэффициента наследуемости, а также величину отклонения
потомства племенного ядра от популяционной средней, что является критерием
селекционной ценности отобранной группы по сумме генов, позволяет использовать
разработанные уравнения при следующих допущениях:
Кроме того, И.М. Лернер (1950, 1954, 1958) сформулировал идею о генетическом или
генетико-популяционном гомеостазисе. Под ним следует понимать свойство популяции
поддерживать генетическое равновесие или такое соотношение между генами, которое
наиболее оптимально для жизни представителей популяции в конкретных условиях
окружающей среды. Всякое отклонение, в том числе и вызываемое односторонним
отбором, при котором меняется взаимоотношение между генами разных локусов, а также
соотношение между генотипом в целом и внешней средой, а это чаще всего приводит к
неблагоприятным результатам - понижению жизнеспособности, плодовитости и других
жизненно важных свойств. Наступает своего рода селекционная депрессия. Эта
генетическая теория гомеостазиса даст возможность понять ситуации, при каких случаях
достижения высоких показателей продуктивности, путем одностороннего отбора,
наблюдаются неблагоприятные последствия эффективности отбора за счет снижения
резистентности организма к экстремальным условиям среды и наметить меры по
восстановлению жизнеспособности и повышению плодовитости у животных таких
популяций.
Считают, что эти факторы мало значат в генетическом улучшении стад. Исходя из наших
исследований, правильнее было бы говорить не о малом их значении, а относительно
редком их влиянии. Когда же они проявляются, это может приводить к очень
существенным сдвигам в генетической структуре популяций. В истории создания и
совершенствования большинства пород можно обнаружить имена животных,
использование которых повлияло на прогресс всей породы.
Генетические ресурсы животного мира постоянно находятся под угрозой сокращения из-
за бессистемных скрещиваний, отсутствия селекционной стратегии и программ, давления
искусственного от бора, природных и социальных катаклизмов, конъюнктуры рынка. На
состояние генофонда действуют и такие факторы, как интенсификация производства,
замещение пород более продуктивными, широкое использование искусственного
осеменения и трансплантации эмбрионов. Эти процессы снижают внутрипопуляционное
разнообразие и границы генетической изменчивости.
Репродуктивное клонирование
В середине 80-х гг. прошлого столетия началось коммерческое применение этого метода в
скотоводстве. Приживляемость «полуэмбрионов» составляет 50,2 %. В период с 1982 по
2006 гг. с применением метода эмбрионального сплиттинга только в США было получено
2664 теленка.
Первые трансгенные животные были получены в 1974 г. Рудольфом Янишем (Rudolf Jaenisch) в
результате инъекции в эмбрион мыши ДНК вируса обезьяны SV40. В России в 1987 г. академик
Л.К. Эрнст и соавторы сообщили о рождении трансгенных кроликов, содержащих ген
поверхностного антигена вируса гепатита В человека.
В своей работе W.H. Eyestone (1999) сообщает, что после процедуры микроинъекции ДНК
в мужской пронуклеус только 6,3 % зигот КРС (2300/36500) при культивировании в
лабораторных условиях развились до стадии бластоцисты. После нехирургической
пересадки 1472 преимплантационных зародышей 1324 самкам-реципиентам автор
диагностировал развитие беременности у 28 % из них. Сохранность развившейся
стельности составила 60 %. От коров с выношенной беременностью в общей сложности
было получено 226 телят, из которых только 18, или 7,96 % экспрессировали трансген (ген
человеческого альфалактальбумина).
Вместе с тем генотип нельзя рассматривать как мозаику дискретных единиц — генов. В
процессе онтогенеза он проявляет себя как единая система, регулирующая все процессы
развития органов и признаков.
В 90-е годы XX века M.F. Rotschild, Т.Н. Short начали поиски генов, определяющих
генетические различия по воспроизводительным качествам у свиней. Учитывая то, что
эстрогены оказывают большое влияние на организм самки, вызывая значительные
изменения обмена веществ, стимулируя рост яйцеводов, матки и влагалища,
пролиферативные изменения эндометрия, развитие вторичных половых признаков и
проявление половых рефлексов, предположили, что изучение структуры генов,
кодирующих эти гормоны, даст ключ к решению проблемы. В настоящее время у свиней
известен ряд генов представляющих интерес при селекции на многоплодие. В табл. 1
приведен перечень генов кандидатов, влияющих на репродуктивную функцию животных.
Вид
Ген Хромосома Автор
животных
Как показано на рисунке 42, прослеживается четкая тенденция связи частот встречаемости
аллелей гена ESR с породной принадлежностью свиней: у животных пород сального и
мясосального направлений продуктивности частота аллеля В значительно выше по
сравнению с данным показателем у свиней мясных и беконных пород. У свиней трех
пород канадской селекции, аллель В выявлен не был. Отсутствие аллеля В в популяциях
свиней канадской селекции вполне объяснимо, так как по данным Rothschild с соавторами
[1996] данный аллель не был идентифицирован ни у одной из 10-и исследованных ими
североамериканских пород свиней. Отсутствие полиморфизма гена ESR не позволяет
использовать данный маркер в селекции, направленной на повышение многоплодия, у
свиней, завозимых из-за рубежа.
Рисунок 1. Распределение аллелей гена ESR у свиней различных пород. Данные
представлены в порядке уменьшения частоты встречаемости желательного аллеля В гена
ESR.
генотип АВ генотип ВВ
Крупная белая, 1 +0,35 +0,65
Крупная белая, 2 +0,41 +1,39
Дюрок +0,66 **
Уржумская +0,59 +1,29
* многоплодие, рассчитанное в среднем по 3-4 опоросам.
Следует сказать отдельно несколько слов о породе ландрас. При исследовании влияния
полиморфизма гена ESR на многоплодие у свиноматок этой породы в ряде
сельхозпредприятий России нами была выявлена обратная зависимость. Животные с
генотипом АА гена ESR достоверно превосходили аналогов с генотипом ВВ. Эти данные
согласуются с результатами, полученными зарубежными авторами при исследовании
влияния на многоплодие свиноматок генотипов другого маркера - FSHR. Было
установлена отличная от других пород обратная связь между генотипами FSHR и
многоплодием свиноматок породы ландрас. По всей видимости, действие аллелей
некоторых генов плодовитости проявляется по-разному в окружении аллелей,
свойственных определенным породам. Поэтому при внедрении ДНК-диагностики
плодовитости необходимо учитывать породную принадлежность животных.
Применительно к гену ESR следует отметить, что прежде чем рекомендовать внедрение
ДНК-диагностики многоплодия на основе ESR в селекцию, необходимо предварительно
провести экспериментальные исследования, направленные на выявление связи между
генотипами ESR и многоплодием на животных каждой конкретной породы.
Меньшие различия между генотипами у свиней породы йоркшир могут быть обусловлены
обратным действием аллелей других маркеров плодовитости. Подтверждением данной
гипотезы служит тот факт, что в случае генетической однородности изучаемых групп по
другим маркерам плодовитости - ESR и NCOA1 (все животные имеют генотипы АА /
А1А1) различия в многоплодии свиноматок с разными генотипами по FSHB были более
существенные (табл. 3).
генотипы
число поросят число живых число поросят число живых
при рождении поросят при рождении поросят
- Тока Feci1 -
II: некоторые признаки
бесплодия
Возможные гетерозиготы: OR олкуска
- - - -
+1,0; LS +0,6
Высокая вариабельность OR белле-иле
- - - - (1-8) и L! (1-7), высокая
повторяемость OR (0,8)
Экспрессия гена Борола, по всей видимости, ограничена полом, так как рост семенников,
их размер и дневная продукция сперматозоидов баранов не отличается от этих
показателей у обычных мериносов.
Помимо местных локальных пород Индии и Индонезии, несущих аллель Борола, этот
аллель посредством скрещивания с австралийскими мериносами Борола был привнесен в
целый ряд других пород, разводимых, по меньшей мере, в 13 странах (Thimonier et al.,
1991).
В середине 90-ых годов в стаде овец породы ромни-марш Мак Хана в Вайкато был найден
ген (FecXH), проявляющий такой же характер наследования и фенотип, как ген
Инвердейл. Изучение характера наследования аллелей Инвердейл и Хана позволило
предположить, что ген плодовитости в обоих стадах был локализован на X хромосоме.
Ген FecX картирован в регионе 10сМ X хромосомы, в котором локализован ген костного
морфогенетического белка 15 (ВМР15) - член семейства TGF-β. ВМР15 - это белок,
который специфически экспрессируется в ооцитах, с неизвестными до настоящего
времени функциями. Было установлено, что мутация в гене ВМР15, обуславливающая
неконсервативную замену V31D в высококонсервативном регионе зрелого белка,
находится в сцеплении с FecX1. Единичная нуклеотидная замена С→Т в позиции 67
зрелого белка ВМР15 вводит стоп-кодон в аллель FecXH. Доказано, что обе замены
приводят к образованию неактивной формы ВМР15.
Наряду с этим, данная популяция овец является носителем мутации в аутосомальном гене
GDF9 (FecGH), локализованном на хромосоме 5, которая также обуславливает
повышенную степень овуляции у гетерозиготных маток и бесплодие гомозиготных
носителей.
Исследование характера наследования плодовитости привело к открытию другого
локализованного на X хромосоме гена плодовитости - Вудланд (FecX2W ) у
многоплодного стада купворзских овец. Однако сцепленный с данным признаком
плодовитости ген и соответствующая мутация в нем до настоящего времени не
идентифицированы.
Скрининг высоко плодовитой линии овец Исландии, показал, что все многоплодные овцы
этой линии берут свое происхождение от одной высоко плодовитой овцы по кличке Тока.
Это наблюдение позволило сделать предположение о наличии главного гена (FecI).
Сегрегационный анализ данных плодовитости овец семейства Тока в Великобритании
показал наличие аддитивного аутосомального главного гена плодовитости (Walling et al.,
2002). Хромосомальная локализация гена пока не известна.
Скрещивание овец, несущих мутацию ВМР15, с овцами несущими мутацию в гене BMPR-
IB, показало, что все дочери имели полностью функциональные яичники и
характеризовались высокой степенью овуляции (в среднем 4,36). Наличие у овец одной
копии мутантного BMP 15 и одной копии мутантного BMPR-IB характеризуется
мультипликативным действием на степень овуляции. Действие ВМР15 увеличивает
степень овуляции на 44%, a BMPR-IB - на 90%. Исходя из этого, можно предположить,
что на действие одного гена присутствие другого не оказывает влияния.
Действие одной копии мутации BMP 15 совместно с одной копией мутации GDF9
является эквивалентным. Большинство полученных на сегодня данных показывает
аддитивное влияние двух генов на степень овуляции, однако некоторые данные
тестирования потомства предполагают несколько меньшее влияние копии GDF9 в случае
присутствия мутации ВМР15 (Hanrahan et al, 2004). Все полученные на сегодня данные
показывают, что индивидуумы с мутациями GDF9 и BMP15 имеют большую степень
овуляции по сравнению с животными, несущими по одной мутации. Дочь, несущая по
одной копии каждой из трех мутаций (ВМР15, BMPR-IB и Вудланд), полученная
скрещиванием потомства барана-носителя аллеля Вудланд (FecX2W/Y ) с маткой-
носителем аллелей FecX1 и FecBB, имела полностью функциональные яичники и
характеризовалась степенью овуляции 5 и 8 в возрасте 1,5 лет и степенью овуляции 12 в
возрасте 2,5 лет (Davis, 2005).
Первый этап оплодотворения, длящийся около 2—3 мин, связан с действием фермента
гиалуронидазы акросомы спермия. Этот фермент освобождает ооцит от фолликулярных
клеток и клеток яйценосного бугорка. Тем самым создаются условия для успешного
продвижения спермиев. Ферментативный процесс, в котором участвуют гиалуронидаза и
акрозин акросомы спермия, сопровождается преобразованием хромосом спермия из
компактного состояния в упорядоченное распределение и превращением их в пронуклеус
самца в цитоплазме ооцита. Это второй этап оплодотворения, который длится около 30
мин. Фермент акрозин активирует подвижность спермия и способствует выделению
хроматина из головки спермия, проникшего в цитоплазму ооцита. На втором этапе
оплодотворения спермий погружается в протоплазму яйца акросомой, всей головкой и
жгутиком.
В первые дни жизни зигота иммунно защищена в яйцеводе прозрачной зоной ооцита. В
этот период гиалуроновая и сиаловая кислоты прозрачной зоны благодаря своим
электроотрицательным свойствам отталкивают отрицательно заряженные лимфоциты,
ослабляя возможный их фагоцитоз против зиготы (бластоцисты), и снижают
проницаемость прозрачной зоны для молекул антигенов и антител матери, охраняя
специфические рецепторы зиготы. Питание зиготы (морулы) не связано с организмом
матери, а обеспечивается накопленными веществами из фолликула в процессе
формирования ооцита. В этот период легче, чем в более поздний, осуществлять успешную
пересадку зигот или бластоцист в организм другой самки-реципиента или для
искусственного культивирования в условиях in vitro и даже хранить в замороженном виде,
что и принято в современной генетической инженерии и биотехнологии.
Иммунные различии беременной самки и эмбриона могут вызвать его отторжение в матке
и гибель. О ранней гибели можно, до некоторой степени, судить по удлинению периода
между смежными половыми циклами самки, так как в яичнике сохраняется желтое тело
после гибели эмбриона и распада его тканей. Вместе с тем иммунные реакции между
матерью и плодом проявляют не только антагонистические отношения в реакции антиген
— антитело. Этим реакциям принадлежит важная роль в формообразовательных
процессах эмбриогенеза при закладке органов и тканей. Иммунные реакции организма
матери стимулируют интенсивность органогенеза эмбриона. Если это влияние
ослабляется, то происходит затухание эмбриогенеза и гибель эмбриона.