Реагент С:

Набор реагентов для определения кислой Ацетатный буфер 1 х 5,5 мл

фосфатазы

КОД 981893 8 х 3 мл Состав

Реагент А:
Назначение α-нафтилфосфат 3 ммоль/л
Набор реагентов предназначен для Fast Red TR 1 ммоль/л
количественного определения in vitro активности Лимонная кислота 20 ммоль/л
общей и непростатической (устойчивой к тартратам) Цитрат натрия 60 ммоль/л
кислой фосфатазы в сыворотке крови человека с рН 5,3 ± 0,1 при 20оС
помощью анализаторов Konelab. Все результаты
анализов следует интерпретировать с учетом Реагент В:
клинических данных. L-тартрат натрия 2 моль/л (100% в сухом виде)

Общие сведения (1,2) Реагент С:

Под названием кислая фосфатаза (КФ) Ацетатный буфер 3 моль/л (19,7%)
подразумеваются все фосфатазы с оптимумом
активности ниже рН 7.0. Таким образом, это группа Меры предосторожности
ферментов. Высокая активность кислой фосфатазы Только для диагностики in vitro. При работе со всеми
наблюдается в печени, селезенке, молоке, лабораторными реагентами необходимо соблюдать
эритроцитах, тромбоцитах, костном мозге и стандартные меры предосторожности.
предстательной железе. Внимание: сухой порошок реагента А содержит 17%
Простатическая железа является богатым лимонной кислоты. Избегайте контакта с кожей и
источником и вносит небольшую долю фермента, глазами. Зону поражения промойте большим
представленного в сыворотке здоровых мужчин. количеством воды. Для глаз требуется срочная
Активность КФ простаты и тромбоцитов медицинская помощь. После восстановления
ингибируется тартратом. Следовательно, доля реагента А содержание лимонной кислоты
общей КФ, ингибируемая тартратом, определяется составляет < 10%, что не является повреждающей
как простатическая кислая фосфатаза. концентрацией. Соблюдайте осторожность при
открывании стеклянных флаконов, чтобы не
Методика определения (3,4,5) пораниться металлическим язычком.
Для простатической КФ в качестве специфического
субстрата Бабсон с соавторами был предложен α- Приготовление
нафтилфосфат. Однако Амодор с соавторами было Растворите содержимое флакона с реагентом А в
показано, что этот субстрат может гидролизоваться 3,0 мл дистиллированной или деионизированной
ферментами других тканей. α-нафтол, воды.
освобождающийся под воздействием кислой Растворите содержимое флакона с реагентом В в
фосфатазы, взаимодействует с диазотированным 2- 5,0 мл дистиллированной или деионизированной
амино-5-хлортолуолом (Fast Red TR) формируя воды.
диазокраситель в реакции, впервые описанной Реагент С готов к использованию.
Хиллманом. Этот краситель обладает стойкой
абсорбцией при длине волны 405 нм, и увеличение Для определения общей кислой фосфатазы
абсорбции пропорционально уровню кислой используется реагент А.
фосфатазы в пробе. Анализ основан на следующих Для определения непростатической кислой
реакциях: фосфатазы следует добавить в 3,0 мл реагента А
КФ 30 мкл реагента В. В набор входят два пустых
α-нафтилфосфат + Н2О -- --> α-нафтол + фосфат флакона для восстановленного реагента А и два
пустых флакона для смеси реагентов А+В.
α-нафтол + Fast Red TR → диазокраситель Примечание: перед установкой реагента на борт
анализатора Konelab необходимо удостовериться в
L-тартрат ингибирует простатическую кислую отсутствии пузырьков во флаконе на поверхности
фосфатазу, но не влияет на изменение цвета. реагента.
Следовательно, если провести исследование в
присутствии и в отсутствии L-тартрата, различие Хранение и стабильность
между результатами в двух параллельных тестах Невскрытые реагенты стабильны при температуре
даст уровень простатической КФ в сыворотке. 2-8°C до срока годности, указанного на этикетке
флакона (коробки).
Форма выпуска Реагент А непригоден к использованию, если сразу
Реагент А: после восстановления абсорбция бланка по воде
Кислая фосфатаза 8 х 3 мл (сухой субстрат) при 405 нм выше 0,300.
Реагент В:
L-тартрат 1 х 5 мл (сухой порошок)
1
В случае появления кристаллического осадка в Величина абсорбции (dА/мин) преобразуется в
реагенте В следует нагревать флакон при результат с помощью коэффициента пересчета
температуре 40-50°C до полного растворения. (фактора).
Информация о стабильности реагентов на борту
анализатора Konelab указана в руководстве по Контроль качества
эксплуатации прибора. Используйте образцы для контроля качества не
Восстановленный реагент А и смесь реагентов А и В реже одного раза в день и после каждой
стабильны в течение 5 дней при температуре 2-8°C калибровки, а также каждый раз, когда используется
и защите от воздействия прямого солнечного света. новый флакон с реагентом. Следуйте
Восстановленный реагент В стабилен до 90 дней и внутрилабораторным и федеральным правилам
реагент С стабилен до срока годности, указанного выполнения контроля качества.
на этикетке флакона (коробки) при температуре 2- Имеющиеся контрольные материалы:
8°C. Nortrol, код 981043
Abtrol, код 981044
ОТБОР ПРОБ Интервалы и диапазон для контроля должны
устанавливаться согласно индивидуальным
Тип образца требованиям лабораторий. Результаты анализа
Негемолизированная сыворотка, отделенная от образцов для контроля качества должны
клеточной составляющей как можно скорее. укладываться в пределы, установленные
Нельзя использовать плазму. лабораторией.
Если анализ не может быть выполнен немедленно,
необходимо подкислить пробу, добавив к 1 мл ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
сыворотки 20 мкл реагента С. Результаты вычисляются автоматически
анализатором Konelab следующим образом:
Примечание: во избежание получения ошибочных
результатов, точно следуйте рекомендация Общая КФ и непростатическая (тартрат-
производителя вакуумных пробирок при взятии резистентная) КФ:
пробы. Обратите особое внимание на
преаналитическую подготовку, такую как активность в Е/л = dА/мин х фактор
смешивание, время до центрифугирования, режим
центрифугирования. Фактор = Vобщ. х 1000
12,9 х Vпр. х Р
Меры предосторожности
Исследовать, хранить и утилизировать образцы где:
крови человека следует как потенциально Vобщ. - общий объем реакционной смеси в мл
инфекционно-опасные материалы. Vпр. - объем пробы в мл
12,9 - коэффициент экстинкции диазо-красителя при
Хранение (6) 405 нм
Пробы без стабилизатора можно хранить в течение Р - длина светового пути = 1
2 часов при температуре 20-25°C, 8 часов при Коэффициент пересчета мккат/л = (Е/л)/60
температуре 4-8°C или 1 день при температуре
-20°C. Подкисленные образцы можно хранить в Простатическая КФ:
течение 8 дней при температуре 20-25°C или 4-8°C, Простатическая КФ(Е/л) = общая КФ(Е/л) -
или 4 месяцев при температуре -20 °C. непростатическая КФ (Е/л)

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА

См. справочное руководство и примечания к
применению для автоматизированной процедуры
вашего анализатора Konelab. На любое
применение, которое не было утверждено Thermo
Fisher Scientific Oy, гарантия работы прибора не
распространяется, поэтому оно должно быть
проверено пользователем.
Материалы, входящие в набор
Реагенты в соответствии с приведенным выше
описанием.
Диагностическая оценка полученных результатов
должна проводиться с учетом истории болезни
пациента, клинического обследования и других
имеющихся данных.
Интерференция (10)
Исследование было выполнено в соответствии с
рекомендациями документа ЕР7-А2 CLSI (института
Клинических Лабораторных Стандартов). Критерий:
попадание в пределы +/- 10% от первоначального
значения.

Необходимые материалы, которые не входят в Общая КФ:

набор Интерфериру Конц. Целевое Отличие от
Контрольные материалы в соответствии с ющее Интерферента значение целевого
приведенным ниже описанием. вещество Общ КФ значения %
Билирубин 68 мкмоль/л 13,2 1,7
Калибровка несвяз. (4 мг/дл) 44,2 -1,2
68 мкмоль/л 13,3 -5,3
2
 Билирубин (4 мг/дл) 43,9 -3,1 Расширенный диапазон измерений после
связ. 34 мкмоль/л 13,3 1,8 вторичного разведения: 0,5 - 60 Е/л (0,01 – 1,00
(2 мг/дл) 44,7 -0,2 мккат/л).
Intralipid® 1 г/л 13,6 9,7
(Fresenius Kabi 44,1 6,2 РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ (10)
Ab). Результаты, полученные в разных лабораториях,
Гемолиз: не используйте гемолизованные образцы, могут отличаться от указанной рабочей
так как кислая фосфатаза эритроцитов выходит в характеристики.
сыворотку. (2)
Предел обнаружения
Непростатическая КФ: Исследование было выполнено в соответствии с
Интерфер Конц. Цел. Отличие рекомендациями документа ЕР17-А CLSI (Института
ирующее Интерферента Знач. от цел. Клинических Лабораторных Стандартов).
вещество Общ КФ знач. %
Билирубин 68 мкмоль/л 4,5 3,5 Предел бланка (LoB)
несвяз. (4 мг/дл) 13,1 0,7 Общая КФ: 0,26 Е/л (0,004 мккат/л)
68 мкмоль/л 4,7 -18,8 Непростатическая КФ: 0,17 Е/л (0,003 мккат/л)
Билирубин (4 мг/дл) 12,9 -4,0 Предел бланка – это наивысший результат
связ. 34 мкмоль/л 5,2 -3,7 измерения, полученный при исследовании пробы,
(2 мг/дл) 15,5 -3,5 не содержащей аналита (n = 59).
Intralipid® 1 г/л 5,1 15,8
(Fresenius 15,2 8,6 Предел обнаружения (LoD)
Kabi Ab). Общая КФ: 0,33 Е/л (0,006 мккат/л)
Гемолиз: не используйте гемолизованные образцы, Непростатическая КФ: 0,25 Е/л (0,004 мккат/л)
так как кислая фосфатаза эритроцитов выходит в Предел обнаружения представляет собой
минимальную концентрацию определяемого
сыворотку. (2)
Имеется слабая корреляция между мутностью и вещества, которую можно отличить от нуля (n=59).
содержанием триглицеридов.
Предел определения (LoQ)
Для информации о других интерферентах,
Общая КФ: 0,33 Е/л (0,006 мккат/л)
обращайтесь по ссылке 7.
Непростатическая КФ: 0,30 Е/л (0,005 мккат/л)
В очень редких случаях гаммапатия при
Предел определения – это наименьшая
определенном типе иммуноглобулина M
концентрация аналита в пробе, которая может быть
(макроглобулинемия Вальденстрема) может
количественно измерена. Это концентрация
приводить к неверным результатам (8). Не
аналита, при которой CV%( коэф. вариации) = 20%.
тестировано Thermo Fisher Scientific Oy.
Если CV%< 20%, LoQ = LoD. (n = 59).
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Воспроизводимость (Е/л)
1) По литературным данным (9)
Мужчины: Общая КФ
Общая КФ: ≤ 4,7 Е/л Среднее Среднее Среднее Среднее
Простатическая КФ: ≤ 1,6 Е/л 4,2 11,9 152 45,3
Женщины: . SD CV SD CV SD CV SD CV
Общая КФ: ≤ 3,7 Е/л % % % %
2) по данным Термо Фишер Сайентифик,
полученным при исследовании здоровых взрослых Внутрис 0,11 2,7 0,39 3,2 0,45 2,0 0,32 0,7
(N=22). (10) ер.
Общая КФ: ≤ 6,5 Е/л Общая 0,42 10,0 0,40 3,7 0,61 2,6 0,52 1,2
Простатическая КФ: ≤ 1,6 Е/л
Указанные значения служат только в качестве Непростатическая КФ
справочных величин. Рекомендуется, чтобы каждая Среднее Среднее Среднее Среднее
лаборатория проверила этот диапазон или 1,6 4,5 8,6 15,8
определила соответствующий диапазон для группы . SD CV SD CV SD CV SD CV
населения, которую она обслуживает. % % % %
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ
Внутрис 0,04 2,4 0,10 2,5 0,14 1,6 0,18 1,1
Общая КФ:
ер.
0,5 - 50 Е/л (0,01 - 0,83 мккат/л)
Общая 0,18 11,3 0,13 3,3 0,23 2,6 0,26 1,6
Расширенный диапазон измерений после
вторичного разведения: 0,5 – 150 Е/л (0,01 - 2,50
мккат/л). Простатическая КФ
Непростатическая КФ: Среднее Среднее Среднее Среднее
0,5 - 20 Е/л (0,01 - 0,33 мккат/л) 2,6 7,4 14,8 29,5
. SD CV SD CV SD CV SD CV
% % % %

3
 Внутрис 0,12 4,4 0,39 5,2 0,45 3,0 0,25 0,9
ер.
Общая 0,34 12,9 0,40 5,8 0,58 4,0 0,44 1,6

Воспроизводимость определялась согласно

протоколу EP5-А2 Института клинических
лабораторных стандартов (CLSI), исследования
проводились на анализаторе Konelab 60 в течение
20 дней с количеством измерений = 80.
Сравнение метода
В соответствии с требованиями протокола ЕР9-А2 Библиография
Института клинических лабораторных стандартов 1 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz
(CLSI), проводилось сравнение метода с Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W
предыдущим тестом для определения кислой B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 382-
фосфатазы (981765). 384.
Общая КФ: 2 2. Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory
линейная регрессия (Е/л): Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
у = 1,064 х + 0,5 Laboratory Results, 1st edition, TH-Books
r = 0,999 Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
n = 108 Germany, 1998, pp. 98-100.
Исследование проводилось на пробах с 3 3. Babson, AL, Read, PA and Phillips, GE. The
концентрацией от 0,8 до 99 Е/л. importance of the substrate in assays of acid
phosphatase in serum. Am. J. Clin Path. 32, 83-87,
Простатическая КФ: 1959.
линейная регрессия (Е/л): 4 4. Amador, E, Price, JW and Marshall G. Serum
у = 1,140 х + 0,4 acid α-naphtyl phosphatase activity. Am. J. Clin
r = 0,997 Path. 51, 202, 1969.
n = 107 5 5. Hillman, G. Fortlaufende photometrische
Исследование проводилось на пробах с Messung der sauren Prostataphosphatase-Aktivität.
концентрацией от 0 до 63 Е/л. Z. klin Chem. u. klin Biochem. 3, 273-274, 1971.
6 6. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B.
List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure
in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT
Verlag GmbH, Darmstadt, 1996.
7 7. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical
Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press,
Washington, D.C., 3-4 – 3-5. 2000.
8 8. Bakker A.J. et. al. Gammopathy interference in
clinical chemistry assays: mechanisms, detection
and prevention. Clin Chem Lab Med 2007; 45(9),
1240 -1243.
9 9. Seiler D, Nagel D, Tritschler W, Looser S. Acid
phosphatase in serum (substrate α-naphthyl phosphate):
reference interval and clinical assessment. J Clin
Chem Clin Biochem 1983; 21, 519 -525.
10 10. Data on file at Thermo Fisher Scientific Oy
11
12
13
14 Произведено
15 Thermo Fisher Scientific Oy
16 Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa, Finland
Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab

Дата версии (yyyy-mm-dd)

2008-04-30