Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Современные Методы Иссл Инфекционных Заболеваний Ермекова Ж.А.
Современные Методы Иссл Инфекционных Заболеваний Ермекова Ж.А.
лабораторной диагностики
инфекционных заболеваний
Ермекова Жазгуль Азаматовна
Лабораторная диагностика
С.П. Боткин – Р. Вирхов
Современные тенденции и перспективы
лабораторной диагностики инфекций
• этиологическая диагностика
• этиологическая диагностика
Anti-HIV Env
Anti-HIV Core
Anti-HIV IgM
HIV HIV Ag
Ag
± 1+ 3+
Биочипы
Повышение информативности
серологической диагностики:
КЛАССЫ И ПОДКЛАССЫ
СВОЙСТВА Ig
A1 A2 G1 G2 G3 G4 D E M
Активация комплемента - - ++ + ++ - - - -
• Использование Fab-фрагментов
антител при конструировании
биосенсоров
• Использование аптамерных и
пептидных лигандов
• Проточная цитометрия
Перспективные методы
серологической диагностики
• Клеточно-опосредованная детекция
• Химическая детекция
• этиологическая диагностика
• этиологическая диагностика
• Компьютеризация
Современные тенденции и перспективы
лабораторной диагностики инфекций
• этиологическая диагностика
• этиологическая диагностика
• этиологическая диагностика
• Саузерн-блоттинг
• Пульс-электрофорез
• ДНК-секвенирование
Мультиплексная (мультипраймерная) ПЦР
Достоинства метода:
Высокая аналитическая чувствительность -
достаточно 10-15 – 10-18 вещества
Быстрая и простая пробоподготовка: 10 –
15 минут
Высокая скорость измерения: 1 минута на
образец
Возможность автоматизации и роботизации всех
стадий исследования
Возможность идентификации более 3000
бактерий и
Nobel Prize 2011 and Shaw Prize 2011
(medicine)
«Лекции о
сравнительной
патологии
воспаления»
1892 год
Строение бактериальной клеточной стенки
Свойства патоген-ассоциированных
молекулярных паттернов (ПАМП)
• Синтезируются только микроорганизмами, их
синтез отсутствует в клетках макроорганизма.
• NF-kB
• AP-1
• Fos
• Jun
Биологические эффекты цитокинов
свободных радикалов
Зрелые Т-
и В- клетки Зрелые Т- и В-клетки – усиле-
ние функций (увеличение продукции
Ig, активация киллеров)
Положительный Отрицательный
результат результат
(сифилис)
Сифилис
Определение исключается
IFN-γ, IL-1β, IL-2, ФЧ
Определение
IFN-γ ↑, IL-1β ↑ IFN-γ, IL-1β, IL-8, CD19+↑, IL-8↑
CD19+↓, IL-8(N) CD19+ IFN-γ(N), IL-1β(N)
Th1 Th2
Неблагоприятный
Ig A ↑ прогноз течения Ig G ↑
ХГС
ФЧ ↓
Прогноз при инфекционных заболеваниях
определяется активацией иммунной
системы в направлении наиболее
эффективного пути (Th1/Th2) элиминации
этиологического агента
АЛГОРИТМ ОЦЕНКИ
ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА В ПРОФИЛАКТИКЕ И ДИАГНОСТИКЕ
ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Генетически Фенотипически
е факторы е факторы
Предрасположенность
к инфекции
Геномный анализ-
определение SNP
rs1585213 G/A
TRAF6 rs5030419 С/G IFN-γ
IRAK1 rs1059703 6434С/Т***
IRAK3 rs3782347 48836A/G вакциноиндуцированные Ig
rs4251520 13423Т/С
? 877С/T
IL-1, IL-18
IRAK4 ? 620–621del
провоспалительные
? 34C/T (Arg12Cys)
цитокины
Jun rs11688 750G/A IL-6, TNF-
Ассоциации генотипа по HLA и фенотипа при инфекции
Ген Аллели и гаплотипы Патоген Фенотипическая ассоциация
DRB1*1101 HCV устойчивость к инфекции
DRB1*1101 спонтанный клиренс инфекции
DRB1*06, *08, *16 хронический гепатит
HLA-C Cw4
ускоренное
HIV прогрессирование
С*1507 хроническая инфекция
Ассоциация полиморфизмов генов цитокинов с инфекциями и их исходом
Полиморфизмы и
Ген Патоген Фенотипическая ассоциация
гаплотипы
+874A/T
HBV хроническая инфекция
СА-повторы
IFNG +874A/T M. tuberculosis туберкулез
–764G/С HСV спонтанный клиренс
–238G/A
HBV хронический гепатит В
–857C/T
Фармакогенетика
Идентификация фармако-
логических мишеней
Молекулярная диагностика
Возможности технологии
• SNP-генотипирование
• Количественный анализ экспрессии генов
• Идентификация микроорганизмов(практически
все бактерии, грибы, определенные
вирусы,
простейших,
виды в числе информация
лекарственной
том устойчивости,
о
вирулентности,
токсикогенности)
• Количественный анализ метилирования ДНК
• Профилирование редких соматических мутаций
Апопто
з
Энергозависимый, генетически
детерминированный
процесс
упорядоченной гибели отдельных
клеток, который происходит в
нормальных и патологически
измененных тканях эукариотов под
действием внутри- и
внеклеточных стимулов.
“Термин “апоптоз” предложен для обозначения до сих
пор недостаточно понятного механизма
контролируемого разрушения клеток … это
активный, по сути программируемый феномен, для
которого доказана возможность активации или
подавления различными стимулами окружающей
среды, как физиологическими, так и
патологическими”.
• Внутриклеточный
- митохондриальные рецепторы (белки
суперсемейства Bcl-2)
- каспазы
- протеазы
- белки теплового шока
Методология исследования апоптоза
• Маркеры апоптотических процессов отличаются
лабильностью, а изменения регуляции апоптоза зачастую
предшествуют развитию клинической картины;
• При различных патологических процессах устойчивость
клеток к индукции апоптоза, механизмы его развития
могут существенно искажаться;
• Применение адекватных методов исследования
апоптоза при различных патологических процессах
является
необходимым условием изучения патогенеза
заболеваний;
• В лабораторной практике требуется определение
нескольких показателей, а комплекс методов должен быть
взаимодополняющим по информативности
(феноменологические признаки, состояние молекулярных
Выделяют две группы
исследований
- Морфофункциональные (клеточный и
субклеточный уровень)
- Молекулярно-диагностические
(уровни: генетический, рецепторный,
регуляторный, эффекторный)
Морфофункциональные исследования
• Выявление интегральных структурно-
функциональных признаков
апоптоза
Акридиновый
+ + зелѐная красно-оранжевая
оранжевый
а б в
Морфофункциональные исследования
• Выявление интегральных структурно-
функциональных признаков
апоптоза
Не позволяют определить
состояние ключевых
молекулярно-
патологических
звеньев апоптоза
Молекулярно-диагностические
исследования
• Оценка эффективности рецепторных
механизмов активации апоптоза
• Идентификация спонтанных и
индуцированных апоптотических процессов