Вы находитесь на странице: 1из 23

Лекция № 5

Белки
Синтез пептидов и белков
При синтезе дипептида необходимо:
 защитить карбоксильную группу
С-концевой аминокислоты;
 защитить аминогруппу N-концевой
аминокислоты;
 образовать пептидную связь;

 снять защиту с С-концевой аминокислоты;

 снять защиту с N-концевой аминокислоты.


Для обратимой защиты аминогруппы применяют:
O
-карбобензоксихлорид CH2-O-C
Cl
O
-п-толуолсульфохлорид СН3 S Cl
O

-трифенилхлорметан
С
Сl
О О
R-C + NH2-CH-COOH R-C NH-CH-COOH
Cl -HCl
CH3 CH3
Карбоксильные группы обратимо
защищают превращая их в эфиры:
- метиловые;
- этиловые;
- третбутиловые;
- бензиловые

NH2-CH2-COOH + R’-OH
-H2O

NH2-CH2-COOR’
О
R-C NH-CH-COOH + NH2-CH2-COOR’ -H O
2
CH3

О гидролиз
R-C NH-CH-CO-NH-CH2-CO-OR’
-R-COOH
CH3 -R’-OH

NH2 -CH-CO- NH-CH2-COOH


CH3
аланилглицин (Ala-Gly)
Для синтеза рибонуклеазы – белка, содержащего
124 аминокислотных остатка необходимо провести
369 химических реакций,
включающих 11931 стадию.

При проведении многостадийных синтезов белков


в настоящее время применяют твердофазный метод
*предложен американским ученым Мерифильдом
в 1960 г.
Твердофазный метод
ионнообменная
смола
O O
См CH2-Cl + Na-O-C-CH-NH-C-R
-NaCl
CH3
O O
гидролиз
См CH2- O-C-CH-NH-C-R
-R-COOH
CH3
«якорная связь»

O
наращивание цепи
См CH2- O-C-CH-NH2
CH3
Аминокислоты, синтезируемые в организмах
животных из кетокислот и аммиака, называются
заменимыми (12)

Незаменимые аминокислоты (8)

 Валин Val;  Метионин Met;


 Изолейцин Ilc;  Треонин Thr;
 Лейцин Leu;  Триптофан Trp;
 Лизин Lys;  Фенилаланин Phe.
Классификация белков и общие сведения

Белки – это биополимеры, в состав которых


входит от 50 до 5000 аминокислотных остатков,
соединенных между собой пептидной связью.

Любой функционально значимый белок представляет


собой индивидуальное вещество, состоящее из
идентичных молекул, не только содержащих
одинаковый набор различных аминокислотных
остатков, но и одинаковую последовательность ,
в которой эти остатки собраны в линейную
полипептидную цепь.
Белки

протеины протеиды

- склеропротеины; - нуклеопротеиды (+НК);


- альбумины; - фосфопротеиды (+H3PO4);
- глобулины; - хромопротеиды
- проламины и др. (+окрашенные в-ва);
-гликопротеиды
(+олиго и полисахариды).
Белки • М=104-107;
• коллоидно растворимы в воде (многие);
• при добавлении в коллоидный раствор
солей тяжелых металлов,
органических растворителей
или при нагревании – денатурируют
(выпадают в осадок).
Для выделения и очистки белков используют:
• диализ (полупроницаемые мембраны);
• электрофорез;
• хроматографирование на ионно-обменных
смолах и молекулярных ситах.
Качественные реакции на белки

1. Ксантопротеиновая – желтое окрашивание при действии


концентрированной HNO3, которое при действии
NH3 переходит в оранжевое. (все белки)
2. Биуретовая – фиолетовое окрашивание при действии
солей меди в щелочной среде. (все белки)
3. Реакция Миллона – выпадение красно-коричневого
осадка при кипячении раствора белка
с раствором Hg(NO3)2 c HNO3 и HNO2.
(реакция на наличие фенольной группировки
– тирозин)
4. Нингидринная реакция – сине-фиолетовое окрашивание
при кипячении с нингидрином. (все белки)
5. Сульфгидрильная реакция – выпадение черного осадка
при нагревании белка с раствором плюмбита
Строение белков
Специфическая последовательность аминокислотных
остатков в цепи, характерная для каждого белка, называется
первичной структурой белка
У трипептида, состоящего из трех разных
аминокислот, возможно 6 различных
первичных структур.

У олигопептида, состоящего из двадцати


разных аминокислот, разнообразие
первичных структур это ≈ 2×1018.

Разнообразие первичных структур


среднего по размеру белка
(примерно 500 аминокислот)
составляет уже ≈ 20500 вариантов
Вторичная структура белка
это упорядоченное строение полипептидных
цепей, обусловленное водородными связями
между группами С=О и N-H разных
аминокислот, разделенных 3-4 аминокислот-
ными остатками.

α-спираль

0,55 нм

•на один виток спирали приходится


3,6 аминокислотных остатка
β-складчатые слои

O= R H-N
N-H … O= R
R N-H … O=
=O R N-H
H-N =O R
R H-N =O
O= R H-N
N-H … O= R
R N-H … O=
=O R N-H
H-N =O R
R H-N =O
Вторичная cтруктура белка
состоит из ассоциаций
локальных фрагментов
Третичная структура белка
-это пространственная конформация полипептида,
имеющего вторичную структуру, и обусловленная
взаимодействиями между радикалами.

Типы взаимодействий между радикалами:


• ковалентные связи между остатками двух цистеинов
(дисульфидные мостики).
• ионные (электростатические) взаимодействия
между противоположно заряженными аминокислотными
остатками (три радикала со знаком "+" и два со знаком "-").

• водородные связи. Участвуют все аминокислоты, имеющие


гидроксильные, амидные или карбоксильные группы.

•.гидрофобные взаимодействия. Образуются между


неполярными радикалами в водной среде.
Участвуют 8 аминокислот (первый класс).
Четвертичная структура белка
-это агрегация двух или большего числа полипептидных
цепей, имеющих третичную структуру, в олигомерную
функционально значимую композицию.
Белки

глобулярные фибриллярные

95% 5%
растворимы в воде нерастворимы в воде
(ферменты) (соединительные ткани)
Функции белков
 структурная функция  (коллаген, эластин);
 каталитическая функция (ферменты (энзимы) -
пепсин );
 защитная функция (антитела);
 регуляторная функция  (инсулин) ;
 транспортная функция (гемоглобин);
 энергетическая функция;
 запасная (резервная) функция (овальбумины,
казеин);
 моторная и сократительные функции (миозин).
Установление первичной структуры белка
-для определения С-концевой аминокислоты
используют фермент – карбоксипентидазу

-для определения N-концевой аминокислоты


используют:
NO2
2,4-динитрофторбензол O2N F

фенилизотиоцианат
N=C=S
(метод Эдмана)