You are on page 1of 90

ХИМИЧЕСКИЙ

АНАЛИЗ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ
РАСТЕНИЙ
Под редакцией
проф Η И Гринкевич, доц. Л. Η Сафронич

Допущено
Министерством высшего и среднего
специального образования СССР
в качестве учебного пособия
для студентов фармацевтических вузов
в факультетов

МОСКВА «ВЫСШАЯ ШКОЛА» 4983


ББК 24.239:52.82 ПРЕДИСЛОВИЕ
Х12
УДК 547:615.11

В последние годы значительно возрос интерес к препаратам


растительного происхождения как в нашей стране, так и за рубе-
Ладыгина Е. Я., Сафронич Л. Н., Отряшенкова В. Э., Баландина И. Α., жом.
Гринкевич Н. И., Сорокина Α. Α., Сокольский И. Н., Глызин В, И , На международном фармацевтическом рынке каждый третий пре-
Молодожникова Л. М., Млтиы Ю. С., Самылииа И. Α., Ермакова В. А.
парат, применяемый в медицине, имеет растительное происхожде-
ние, а из средств, используемых для лечения сердечно-сосудистых
заболеваний, 80 % составляют препараты растительного проис-
Рецензенты: хождения.
кафедра фармакогнозии Ташкентского фармацевтического института
(зав. кафедрой проф. Р. Л. Хазанович) В Государственный реестр СССР включено около 250 наимено-
и доц. И. Д. Нешта (Тюменский медицинский институт) ваний лекарственного растительного сырья и свыше 600 препара-
тов растительного происхождения.
При разработке нормативно-технической документации (НТД)
Химический анализ лекарственных растений: Учеб. посо- ца лекарственное растительное сырье ставится задача предусмот-
ха бие для фармацевтических вузов /Ладыгина Е. Я., Сафро- реть оценку качества сырья по количественному содержанию основ-
нич Л. Н., Отряшенкова В. Э. и др. Под ред. Гринкевич Н. И., ных биологически активных веществ. При этом для определения дей-
Сафронич Л. Н. — М.; Высш, школа, 1983.— 176 с , ил. ствующих веществ используются современные методы анализа при-
40 к. родных соединений.
В пособив дана краткая характеристика, классификация, физико-химические - При выделении и разделении смеси биологически активных
свойства, распространение в растительной мире, способы выделения биологиче-
ски активных соединений из лекарственного сырья. Основное внимание уделя- веществ, полученных из лекарственного растительного сырья, с це-
ется методам анализа лекарственного сырья. Кроме того, в пособии приводятся
новейшие методы исследования,
лью их идентификации и количественного определения чаще всего
2803050000—105 „ , _ . . ББК 24.239:52.82 применяют тонкослойную, бумажную и колоночную хроматогра-
001(01)—83 547:615.11 фию. Для исследования биологически активных веществ в сырье
используют люминесцентный метод анализа, газожидкостную хро-
матографию, а также УФ, ИК и масс-спектроскопию.
Овладение современными методами исследования биологически
активных веществ при анализе сырья по НТД, а также при разра-
Екатерина Яковлевна Ладыгина, Лидия Николаевна Сафронич, ботке НТД на лекарственное растительное сырье необходимо сту-
ВЕЯ Эдуардовна Отряшенкова, Ирина Анатольевна Баландина, ,
Нелли Ивановна Гринкевич, Алла Анатольевна Сорокина, дентам высших фармацевтических заведений в процессе обучения
Игорь Николаевич Сокольский, Владимир Игнатьевич Глызин, и дальнейшей их практической деятельности. В настоящее время
Людмила Михайловна Молодожникова, Юрий Сергеевич Митин, в курсе фармакогнозии фитохимический анализ занимает значи-
Ирина Александровна Самылина, Валентина Алексеевна Ермакова тельное место.
Следует также отметить, что в последние годы появился ряд
ХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ исследований по отдельным группам биологически активных соеди-
Зав. редакцией С. Ф. Коадрашкова. Редактор Μ. М. Поплавская. Младшие редакторы
Т. С. Костяк н С, М. Ерохина. Технический редактор Е. И. Герасимова. Художественный
нений, которые не успели найти свое отражение в новом учебнике
редактор Т. М, Скворцов*. Художник А. И. Шавард. Корректор С. К· Завьялова по фармакогнозии Д. А. Муравьевой, изданном в 1978 г.
ИБ № Ш Исходя из этого, коллектив сотрудников кафедры фармакогно-
Изд. К Хнм-701. Сдано в набор 22.06.S2. ПОДП. в печать 11.01.83. Формат βΟΧ90'/ιβ· зии I ММИ им. И. М. Сеченова подготовил к изданию пособие по
Буи. тип. J6 3. Гарнитура литературная. Печать высокая. Объем 11 усл^-печ, л. ц,13 усл.
кр.-отт. 11,93 уч.-чад. л. Тираж РвООО вкл. Зак. № 588. Цена 40 КСщ.
фитохимическому анализу лекарственного растительного сырья,
Издательство «Высшая школа». Москва, K-S1, Неглннаая ул., д, 29/14 в котором приводятся современные методы исследования биологи-
Ордена Октябрьское Революция, ордена Трудового Красного Знамени Ленинградское чески активных соединений, некоторые теоретические сведения
производственно-техническое объединение «Печатный Двор» вмени А. М. Горького Сокдо
полнгрвфпреша при Государственном комитете СССР по делам издательств, полнгра* по отдельным группам этих соединений, включая их определение,
фиа в книжной торговли, 197136, Ленинград, П-136, Чкаловский просп., 15.
классификацию, физико-химические свойства, методы идентифика-
© Издательство «Высшая школа», I983J ции, качественного и количественного определения и т. д.
1*
При написании пособия «Химический анализ лекарственных ра- ВВЕДЕНИЕ.
стений» были использованы утвержденные методики на лекарствен- ПОДГОТОВКА РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ДЛЯ АНАЛИЗА
ное растительное сырье, в которые1 авторами внесены изменения
в соответствии с принятой в настоящее время терминологией.
При составлении пособия коллектив авторов ставил перед
собой задачу облегчить студентам самостоятельную подготовку при
изучении отдельных групп биологически активных соединений в рас-
тениях.
Предлагаемое пособие по фитохимическому анализу может быть На точность результатов при исследовании растительного сырья,
также использовано в химических лабораториях, где проводится особенно лри количественном определении действующих веществ,
анализ лекарственного растительного сырья. а также при определении содержания экстрактивных веществ,
В написании книги участвовали: Ладыгина Е. Я., Сафро- золы и влаги большое влияние оказывает правильность подготовки
нич Л. Н. — Введение; Отряшенкова В. Э . — г л . 1; Балан- образцов сырья для проведения анализа.
дина И. А. — гл. 2; Гринкевич Н. И., Сорокина А. А. — гл. 3, 11; Это связано с тем, что содержание действующих веществ в ле-
Гринкевич Н. И., Сорокина Α, Α., Сокольский И. Н. —гл. 4; карственном сырье невелико: чаще всего от 0,1 до 5 % (реже больше).
Глызин В. И., Молодожникова Л. М. — гл. 5; Ладыгина Е. -Я. — Причем содержание их в различных частях неодинаково. Колеба-
гл. 6; Митин Ю. С. — гл. 7; Самылина И. А. — гл. 8; Ермако- ния могут быть весьма значительными, например, в листьях, как
ва В. А. — гл. 9; Сафронич Л. Н. — гл. 10; Сафронич Л. п., Са-' правило, действующих веществ больше, чем в стеблях. Даже в от-
мылина И. А. — гл. 12, . -'·
дельных частях листа содержание действующих веществ может
Выражаем глубокую благодарность проф. Хазанович Р. Л., быть различным. Поэтому в зависимости от того, каких частей
доц. Нешта И. Д., проф. Блиновой К. Ф., доц. Изотову Б. Н. за (листьев или стеблей) взято больше для определения, результат
ценные замечания, сделанные по рукописи. может быть завышенным иди заниженным. Отсюда следует, что
Все критические замечания по предлагаемому пособию коллек- брать сырье для анализа необходимо так, чтобы не нарушить есте-
тив авторов примет с глубокой благодарностью. ственного соотношения всех частей сырья.
Необходимо строго соблюдать все правила взятия средней пробы
Авторы и выделения из - нее аналитической пробы, предназначенной для
фитохимического анализа [ГОСТ 24027.0—80, Государственная Фар-
макопея СССР, X изд., с. 854 (ГФ X)]. Второе правило, которое
необходимо соблюдать, — измельчать сырье следует полностью,
без остатка.
Отделение грубых, трудно измельчающихся элементов также
ведет к нарушению естественного соотношения отдельных частей
растительного сырья.

ГЛАВА 1. ВИТАМИНЫ

Витамины — сложные биологически активные, низкомолекуляр-


ные органические соединения, имеющие различное химическое стро-
ение. Они необходимы для нормального течения процессов обмена
веществ. Большинство из них входит в состав ферментов, являясь
их коферментами.
Витамины в организме не синтезируются или некоторые синте-
зируются, но в недостаточном количестве. Отсутствие витаминов
или недостаток их в организме приводит к развитию различных за-
болеваний — гипо- или авитаминозам. Источниками витаминов слу-
|жат в основном пищевые продукты, растения, а также продукты жи-
вотного происхождения.
Лекарственное растительное сырье, содержащее витамины, ис- § 2. Физико-химические свойства
пользуется для приготовления витаминных сборов; кроме того, из
него готовят следующие препараты: рутин, кверцетин, таблетки Аскорбиновая кислота. Представляет собой 7-лактон-2,3-дегид·
витамина Р, сироп из плодов шиповника, сок и витамин Ρ из плодов ρο-α-гулоновую кислоту· Наличие двойной связи в молекуле обу-
аронии черноплодной, пефлавит (Р витамин) из травы зверобоя, словливает цис·, транс-изомерию:
масло облепихи, масло шиповника, каротолин и др.
Как правило, лекарственные растения не накапливают один но он но
витамин, а содержат комплекс витаминов. В то же время в расти- H L = 1 Η

тельном сырье преобладает один какой-то витамин:

Ήο-
Наименование витаминов Сырье, содержащее витамины
ΤСН 2 ОН
но—сн
СН2ОЙГ
Аскорбиновая кислота Плоды шиповника, плоды и листья грецкого ijw-изомер транс-пзокер
(витамин С) ореха; листья примулы, крапивы, капусты; хвоя ЭТО белый кристаллический порошок кислого вкуса, легко
сосны; фрукты, ягоды; плоды красного перца;
цитрусовых, актинидии, черной смородины; зеленый растворимый в воде, спирте, нерастворимый в органических раст-
лук ворителях, таких, как эфир, хлороформ, бензол. Легко окисля-
Провитамин А (каро- Плоды облепихи, шиповника, рябины обыкновен- ется, поэтому принимает участие в окислительно-восстановитель-
тин) ной, красного перца, черной смородины; цветки ных процессах:
ноготков; трава череды, сушеницы топяной; лист
крапивы но он
Витамин К Кукурузные рыльца; лист крапивы; трава пас-
тушьей сумки, тысячелистника, горца почечуйного,
водяного перца >=О — * - к >=О
Витамин Ρ Бутоны софоры японской; плоды черноплодной
рябины; кожура плодов цитрусовых; трава гречихи}
лист чая НО—сн но—сн
Витамины В г , В а Плоды шиповника, облепихи; лист крапивы.
Токоферол {витамин Е) Масло облепиховое, кукурузное^ подсолнечное^ сн2он CILOH
хлопковое
Аскорбиновая кислота — нестойкое вещество — в водных раст-
ворах она легко разрушается; воздух, свет ускоряют ее окисление.
§ 1. Классификация Каротиноиды. Это группа природных пигментов желтого или
оранжевого цвета; по своей химической природе относится к тетра-
По мере открытия отдельных витаминов им давались названия терпенам (С40Н5).
букв латинского алфавита. Буквенная классификация не отражала В растениях витамины А группы А отсутствуют, однако в них
ни биологические свойства, ни химическую структуру витаминов, содержится каротин — провитамин А, который под влиянием фер-
поэтому была принята классификация, по которой витамины дели- ментов превращается в организме в витамин А, Каротин в расте-
лись на жирорастворимые и водорастворимые. К витаминам, раст- ниях может быть в форме трех изомеров: α-, β- и γ-каротина. Из них
воримым в жирах, относятся: провитамин А (каротин), D (кальци- наиболее распространен β-каротин:
ферол), Ε (токоферол), К (викасол), F (линолевая и линоленовая СН 8 СН 3 H
*Cv 'СНя
кислоты). К витаминам, растворимым в воде, относится витамины С Η [ H I Η Η Η Η Η
(аскорбиновая кислота), Вх (тиамин), В 2 (рибофлавин), В 6 (пири- C C C C C C C C C
доксин), РР (никотиновая кислота), Ρ (рутин) и др. 4
После того как была установлена химическая природа витами- Y Y Y Y Y Y c
Η Η Η Η Η Ι Η Д Η
нов, выяснилось, что все они относятся к различным классам ор- CHS CHS
ганических соединений. Поэтому стало возможным принять химиче-
скую классификацию: β-каротин
1) витамины алифатического ряда (С, В 3 , F и др.); 2) витамины Кар*отин легко образует пероксиды, поэтому может окислять
ал и циклического ряда (A, D и др.); 3) витамины ароматического различные вещества. Каротины нерастворимы в воде, растворимы
ряда (группа К); 4) витамины гетероциклического ряда (Ε, Ρ, ΡΡ, в жирных маслах, хлороформе, эфире, ацетоне, бензине и трудно
Be» Вц Вг» В 1г ). растворимы в спирте. Неустойчивы на воздухе и свету.
§ 3. Качественное определение § 4. Количественное определение
Методика количественного определения аскорбиновой кислоты
Для обнаружения и идентификации витаминов в лекарственном в плодах шиповника (Fructus Rosae) (по ГФ X, ст. 293). Метод коли-
сырье в основном используют хроматографические методы. чественного определения аскорбиновой кислоты основан на способ-
Учитывая- разнообразное строение витаминов, методы количе- ности восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол:
ственного определения их различны. Для определения аскорбино-
вой кислоты используют титрометрические методы, каротинов — НО ОН С1
колориметрический метод, витамина Ρ (рутина) — хромато-спек- Η ι
трофотометрический метод (рассматривается в разделе «Флаво- =Ο+Ο=/~4=Ν—/ \—ОН —
ноиды»).
С
С1
Методика хроматографического определения аскорбиновой кис-
лоты в плодах шиповника (Fructus Rosae). В ступке измельчают аскорбиновая 2, 6-дихлорфенолиндофенол
0,5 г плодов шиповника, заливают 5 мл воды, перемешивают, остав- кислота
ляют на 15 мин и фильтруют. Полученное извлечение наносят ка-
пилляром на пластинку (один капилляр), рядом как свидетель на- о С1
носят чистую аскорбиновую кислоту; пластинку помещают в хрома-
тографическую камеру -с системой растворителей этилацетат —
ледяная уксусная кислота (80 : 20). Хроматографирование ведут
~ 20 мин (пробег растворителя ~13 см), после чего хроматограмму
высушивают на воздухе. дегндроаскорбиновая 2, 6-днхлорфенолиндофенол
Хроматограмму обрабатывают 0,04 % (или 0,001 н.) раствором кислота (вовстан. форма)
2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия в воде. Аскорбиновая кис-
лота обнаруживается в виде белого пятна на розовом фоне. 2,6-дихлорфенолиндофенол в щелочной среде имеет синюю ок-
Методика хроматографического определения каротиноидов в пло- раску, в кислой — красную, а при восстановлении обесцвечивается:
дах рябины обыкновенной (Fructus Sorbi). 1 г измельченных плодов α • α
рябины заливают 5 мл хлороформа в колбе вместимостью 25 мл,
экстрагируют 1,5 ч, после чего фильтруют и полученное извлече- 0 = < \ = Ν — / V-ONa; O=/~~\=N- Н;
ние наносят капилляром на пластинку, рядом наносят свидетель —
β-каротин. Пластинку помещают в камеру с системой растворите- й
лей циклогексан. — эфир (80 : 20). Хроматографирование ведут синий красный
<~ 20 мин (пробег растворителя ~ 13 см). После этого хромато-
грамму высушивают на воздухе. α
Затем хроматограмму обрабатывают 10%-ным раствором фосфор-
номолибденовой кислоты в этиловом спирте. После прогревания
пластинки при температуре 60—80 °С каротиноиды проявляются
в виде пятен синего цвета на желто-зеленом фоне. ά
бесцветный
П р и г о т о в л е н и е р е а к т и в а . Ю г фосфорномолибденовой кислоты
добавляют к 100 мл этилового спирта, полученную суспензию нагревают и нера· 20 г целых или 10 г очищенных плодов шиповника в ступке
створившуюся часть отфильтровывают. растирают со стеклянным порошком (около 5 г) при постепенном
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : вода дистиллированная; аскорбино-' добавлении 300 мл дистиллированной воды. Настаивают 10 мин,
вая кислота; этилацетат; ледяная уксусная кислота; натрий 2,6-дихлорфенолиндо- затем размешивают, центрифугируют или фильтруют. В кониче-
фенолят; хлороформ; β-каротин; циклогексан; эфир; фосфорномолибденовая кис-
лота; этиловый спирт 95%-ныйг (этанол). скую колбу вместимостью 50—100 мл вносят 1 мл 2%-ного раствора
Хроматографическая пластинка «Силуфол»; вата гигроскопическая; бумага НС1, затем 1 мл полученного извлечения и 13 мл воды и титруют
фильтровальная; весы ручные; ступка фарфоровая о пестиком; капилляры стек-, из микробюретки 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята
лянные; камера хроматографическая для ТСХ; пульверизатор; колбы вмести- натрия до появления розовой окраски, не исчезающей в течение
мостью 25 мл; колбы конические вместимостью 150—200 мл; цилиндры мерные
на 100 мл; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5—10 см. 1/2—1 мин. Титрование должно проводиться не более 2 мин. В слу-
чае интенсивной окраски центрифугата или фильтрата или высо-
кого содержания аскорбиновой кислоты (расход раствора 2,6-ди-
хлорфенолиндофенолята натрия более 2 мл), обнаруженного проб- в кислой среде неустойчив, то для нейтрализации кислот при расти-
ным титрованием, их разводят перед титрованием водой в два раза рании добавляют немного карбоната натрия. После растирания
или более. в ступку постепенно прибавляют 10 мл ацетона и снова растирают
1 мл 0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия материал. Затем содержимое ступки фильтруют под вакуумом,
соответствует 0,000088 г аскорбиновой кислоты. смывают ступку ацетоном и промывают материал на фильтре не-
Процентное содержание аскорбиновой кислоты (я) в пересчете большими порциями ацетона до исчезновения окраски стекающего
на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле фильтрата. Ацетоновый экстракт переносят в делительную воронку.
ντο,οοοοβδνχίοο.ιοο Чтобы перевести пигмент в бензин, к экстракту в делительной во-
mVV(100—w) > ронке добавляют 10—20 мл бензина и смесь тщательно перемеши-
вают. Ацетон из смеси удаляют промыванием водой, добавляя ее
где V — объем 0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята в делительную воронку небольшими порциями и слегка встряхивая
натрия, пошедшего на титрование, мл; F — поправка на титр смесь. Промывные воды сливают, они не должны содержать раство-
0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия; V1 — римых в бензине пигментов.
объем извлечения, соответствующий всей навеске, мл; т — масса Полностью освобожденный от ацетона бензиновый раствор су-
навески сырья, г; V2 — объем извлечения, взятого для титрования, шат фильтрованием через безводный сульфат натрия. После этого
мл; w — потеря в массе сырья при высушивании, %.
хроматографической адсорбцией в бензиновом растворе отделяют
П р и г о т о в л е н и е 0,001 н. р а с т в о р а 2,6-д и х л о р ф е н о л и н - каротин от хлорофилла, ксантофилла, ликопина и других пиг-
д о ф е н о л я т а . 0,22 г 2,6-дихлорфенолиндофенола растворяют в 500 мл свеже- ментов.
прокипяченной и охлажденной воды при энергичном взбалтывании (для растворе- На дно хроматографической колонки (диаметр 1—1,5 см, длина
ния навеску оставляют на ночь). Раствор фильтруют в мерную колбу и доводят
объем раствора водой до 1 л. Срок годности раствора не более 7 сут при усло- 15—20 см) плотно вставляют ватный тампон толщиной 1 см, который
вии хранения в холодном, темном месте. препятствует прохождению адсорбентов в приемник. Затем в ко-
Установка т и т р а . Несколько кристаллов (3—5) аскорбиновой лонку вносят небольшими порциями оксид алюминия, слегка уплот-
кислоты растворяют в 50 мл 2% -ного раствора H 2 SO 4 . Полученный раствор в ко- няя каждую порцию стеклянной палочкой. Длина столбика адсор-
личестве 5 мл титруют из микробюретки рабочим раствором 2,6-дихлорфенолин-
дофенола до появления розового окрашивания, исчезающего в течение 1—2 мин. бента в колонке должна составлять 5—7 см. Бензиновый раствор
Другие 5 мл этого же раствора аскорбиновой кислоты титруют точно 0,001 н. пигментов при слабом отсасывании пропускают через хроматогра-
раствором иодата калия в присутствии нескольких кристаллов (около 2 мг) иодида фическую колонку (необходимо следить, чтобы на поверхности ад-
калия и 2—3 капель раствора крахмала до появления голубого окрашивания. сорбента постоянно был слой бензина, так как каротин окисляется
Поправочный коэффициент К вычисляют по формуле К — V/V\, где V —
объем точно 0,001 н. раствора иодата калия, пошедшего на титрование, мл; Vt — под действием воздуха). Затем через колонку пропускают чистый
объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование, мл. бензин, пока весь каротин, отделяясь от других пигментов в виде
Содержание аскорбиновой кислоты должно быть для цельного сырья не желтой полоски, не пройдет в приемник. Каротин адсорбируется
менее 1 % (ГФ X). оксидом алюминия слабее других пигментов. Конец хроматографи-
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : вода дистиллированная; аскорбино-
вая кислота; натрий 2,6-дихлорфенолиндофенолят; НСГ2%-ная; H 2 SO 4 2%-ная; рования определяют по исчезновению желтой окраски вытекающего
калий иодид; калий иодат; крахмал (р : р). из колонки элюата. Бензиновый раствор каротина переносят в мер-
Бумага фильтровальная; вата гигроскопическая; стеклянный порошок; весы ную колбу вместимостью 100 мл и доводят бензином до метки. Так
ручные; ступка фарфоровая с пестиком; колбы конические вместимостью 50, как химически чистый каротин нестойкое вещество, то при колори-
100, 500 мл; цилиндры мерные на 15, 50, 100 мл; колбы мерные вместимостью 1 л;
стаканы химические вместимостью 300 мл; воронки стеклянные для фильтрования метрировании в качестве стандартного раствора используют раствор
диаметром 5—10 см; бюретки вместимостью 25 мл; пипетки измерительные вме- азобензола или раствор дихромата калия. "
стимостью 25 мл. При колориметрировании в одну кювету наливают стандартный
раствор, а в другую раствор каротина. Если раствор каротина
Методика количественного определения каротина в плодах ря- получается слишком концентрированным, то рекомендуется перед
бины обыкновенной (Fructus Sorbi). Метод основан на экстракции колориметрирбванием разбавить его бензином.
каротина органическими растворителями (ацетон, бензин), очистки Процентное содержание суммы каротиноидов вычисляют по
от сопутствующих'веществ методом хроматографической адсорб- формуле
ции. Количество каротина в очищенном растворе определяют коло-
риметрически по интенсивности желтой окраски раствора срав-
*=«Л2(100-ВУ) '
нением его с раствором азобензола или раствором дихромата ка-
лия, который стандартизован по чистому каротину.
где К — количество каротина в 1 мл стандартного раствора равно
5—20 г измельченного сырья тщательно растирают в ступке 0,00208 мг, если стандартный раствор—дихромат калия, и 0,00235 мг,
с кварцевым песком или стеклянным порошком. Так как каротин если стандартный раствор—азобензол; V — объем бензинового раст-
ю-
п
вора каротина, мл; 1ц — оптическая* плотность стандартного раст- ний, относящихся к различным классам — от низших до покрыто-
вора; Л2 — оптическая плотность исследуемого раствора каротина; семянных. При этом ряд семейств выделяется особенно большим
т — масса навески абсолютно сухого сырья, г; w — потеря в массе числом эфирномасличных растений; это астровые (сложноцветные),
сырья при высушивании, %. яснотковые (губоцветные), сельдерейные (зонтичные), миртовые,
П р и г о т о в л е н и е с т а н д а р т н ы х р а с т в о р о в . Приготовле- лавровые, розоцветные и др.
ние стандартного раствора азобензола: 0,145 г предварительно перекристаллизо- Эфирные масла могут накапливаться в любых органах растений:
ванного из этилового спирта и высушенного азобензола растворяют в 100 мл. цветках розы и лаванды, плодах сельдерейных и цитрусовых,
95%-иого этилового спирта. Для работы основной раствор азобензола разбавляют листьях яснотковых, в подземных органах аира, ириса, девясила.
в 10 раз: берут 10 мл основного раствора и доводят до метки 95%-ным этило- Их содержание для различных растений составляет от тысячных
вым спиртом в мерной колбе вместимостью 100 мл. Хранят раствор в темном месте.
Приготовление стандартного раствора дихромата калия: 0,360 г перекри- долей процента до 5 %, а для некоторых видов, например бутонов
сталлизованного дихромата калия растворяют в 1 л дистиллированной воды. гвоздичного дерева, — 20 %.
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : азобензол; калия дихромат; ацетон; В растениях эфирное масло локализуется, как правило, в спе-
бензин; алюминия оксид (просеянный через сито с размером отверстий 0,25 мм); циальных образованиях. Различают экзогенные и эндогенные обра-
№2{Х)3; NajSO4 (безвод.).
Вата гигроскопическая; кварцевый песок или стеклянный порошок; ступка зования.
фарфоровая с пестиком'; колба вместимостью 25 мл; воронки стеклянные для Экзогенные: а) эфирномасличные железки, которые имеют раз-
фильтрования диаметром 3—5 см; колонка хроматографическая; воронки дели- личное строение; б) железистые волоски; в) железистые пятна.
тельные вместимостью 200 мл; колбы Бунзена; колбы мерные вместимостью 50, Эндогенные: а) эфирномасличные вместилища; б) эфирномаслич-
100 и 1000 мл; цилиндры мерные на 50 мл; фотоэлектроколориметр ФЕК-М.
ные канальцы; в) секреторные ходы; г) специализированные парен-
Вопросы для подготовки химные клетки.
1. Определение витаминов. § 1. Классификация
2. Классификация витаминов.
3. Физико-химические свойства витамина G и каротиноидов. В зависимости от количества изопреновых звеньев
4. Растения, богатые витамином С и каротиноидами,
б. Методы обнаружения витамина С и каротиноидов в растительном сырье.
6. Количественное определение витамина С и каротиноидов. ?' )
VCH2=C—СН=СНа/ терпеноиды делятся на: 1) полутерпены С 6 Н в ;
Литература 2) монотерпены С 10 Н 1в ; 3) сесквитерпены С^Нм-
Полутерпены СвН8. В основном представлены кислотами и
Гаммерман А. Ф. Kvpc фармакогнозии. — Л.: Медицина, 1967.
Кушманова О. Д., Ивченко Г. М. Руководство к практическим занятиям по альдегидами:
биологической химии. — М·: Медицина, 1974. ' —нс</~** *^>сн—сн,—соон
Машковский AL-Д. Лекарственные средства. — М.: Медицина, 1977.
Плешков Б. П. Практикум по биохимии растений. —М.: Колос, 1968. тнглиновая кислота изовалериановая кислота
Березовская Н. Н. О витаминах. — М.: Медицина, 1975.
Кислоты обычно входят в состав сложных эфиров, т. е. связаны
с различными спиртами, например борнилизовалерианат— в эфир-
ном масле валерианы.
ГЛА.ВА 2. ЭФИРНЫЕ МАСЛА Монотерпены С 10 Н 16 . Алифатические монотерпены представляют
собой главную, наиболее ценную часть эфирного масла таких ра-
Эфирные масла (Ока aeiherea) —смесь душистых летучих ве- стений, как роза, герань, лаванда, жасмин, цитрусовые. Эфирные
ществ, образующихся в растениях и относящихся к различным масла обладают тонким приятным запахом и применяются в пар-
классам органических соединений, преимущественно терпеноидам фюмерии.
(кислрродные соединения терпенов), реже к ароматическим и али-7 В состав эфирного масла часто входят также сложные эфиры
фатическим соединениям. Среди них встречаются углеводороды, гераниола и линалоола с органическими кислотами, такими, как
спирты, кетоны, альдегиды, фенолы, лактоны, кислоты, простые и уксусная, изовалериановая, реже масляная, капроновая и др.:
сложные эфиры и др.
Свое название эфирные масла получили благодаря наличию
характерного ароматного запаха и маслообразной консистенции.
В отличие от жирных масел они испаряются, не оставляя жирного сн г он
пятна. Эфирные шасла широко распространены в растительном
мире. В настоящее время известно до 2500 эфирномасличных расте- гераниол
12 13
Циклические монотерпены — это наиболее широко распростра- яна, чабреца, душицы и других растений. Анетол — главный ком-
ненная группа терпенов и, как правило, количественно преоблада- понент эфирного масла плодов аниса, фенхеля. Эвгенол содер-
ющая в эфирных маслах многих растений. жится в эфирном масле гвоздики, эвгенольиого базилика, эвгеноль-
М о н о ц и к л и ч е с к и е монотерпены используются как ной камелии и др.:
ценные лекарственные средства в индивидуальном виде (ментол) осн, он
или являются основными компонентами ряда эфирных масел. Мен- /ОСН8
тол и его кетон ментон содержатся в эфирном масле мяты перечной.
Цинеол содержится в эфирном масле листьев эвкалипта, шалфея
лекарственного, соцветии цитварной полыни: Цинеол встречается
в виде двух изомеров (1—8 и 1—4). Карвон — главный компонент iC=CH—CHg =CHf
эфирного масла плодов тмина. Лимонен содержится в эфирном анетол
масле лимона, сосны и др.:
,7 Сесквитерпены — Ci5H24. Алифатические сесквитерпены вхо-
дят в состав эфирного масла липы:

фарнезсл

Моноциклические сесквитерпены. Т и п б и с а б о л а н а . Б и -
саболен с о д е р ж и т с я ^ эфирном масле ромашки, липы и других ра-
стениях»

карвон лимонен

Д и ц и к л и ч е с к и е монотерпены; из них наибольшую цен-


ность представляют следующие соединения: камфора, борнеол, бнсаболен
пинен. Камфора — главный компонент эфирного масла камфор- Тип гермакрана:
ного лавра, камфорного базилика, некоторых видов полыни *и др.
Борнеол обычно встречается в виде сложных эфиров с уксусной
(пихта), изовалериановой (валериана) и другими кислотами. Пи-
нен — главный компонент скипидара (сосна), имеющего широкое
применение в медицине. Пинен используется в органическом син-
тезе и технике. Туйон и туйол содержатся в эфирном масле полыни
горькой, пижмы обыкновенной, шалфея лекарственного, туи и термакран
других растениях. Туйол обладает ядовитыми свойствами:
Представителем является миллефолид, который содержится в тыся-
челистнике:

сосн.
камфора борнеол пинен туйон ;ол
Ароматические соединения, как правило, обладают сильным
бактерицидным свойством, что находит использование в медицин-
ской практике. Тимол содержится в эфирном масле ажгона, тимь- миллефолид

13
14
Б ациклические сесквитерпены. Т и п г в а й а н а : Эфирные масла мало, очень мало или практически нераство-
римы в воде, но при взбалтывании с водой придают ей запах и вкус.
Они растворимы в жирных и минеральных маслах, спирте, эфире
и других органических растворителях.
Температура кипения эфирных масел колеблется в пределах от
140 до 260 °С; они оптически активны, имеют определенную темпе-
гвайазулен хамазуле»
ратуру застывания и коэффициент рефракции. Реакция масел ней-
тральная или кислая, в зависимости от их состава.
Хамазулен содержится в эфирном масле ромашки аптечной, тысяче· При охлаждении ряда эфирных масел, а иногда и при комнатной
листника обыкновенного, гвайазулен — в эвкалипте. температуре некоторые компоненты выкристаллизовываются (ане-
Тип акорана: тол, ментол, тимол, камфора). Твердую часть эфирных масел принято
называть стеароптен, жидкую часть — элеоптен.

§ 3. Методы получения
Перегонка. 1. Для получения эфирного масла из растительного
Его дикетон — акорон содержится в эфирном масле аира: сырья используют метод перегонки с водяным паром, основанный
на физическом законе парциального давления — две несмешиваю-
щиеся жидкости, нагреваемые вместе, закипают при температуре
ниже точки кипения каждой жидкости в отдельности, и на свой-
ствах эфирного " масла — летучести и практической нераствори-
мости в воде. Пары воды из парообразователя, проходя через расти-
акорон тельный материал, увлекают эфирное масло, которое конденси-
руется в холодильнике и собирается в приемник.
Тип эвдесмана (селинена): 2. В некоторых случаях для получения эфирного масла приме-
няют перегонку с водой. Этот метод требует менее сложной аппара-
туры, но дает меньший выход масла, качество которого может сни-
П жаться за счет подгорания сырья. .
3. Перегонка с перегретым паром при повышенном давлении.
4. Перегонка при пониженном давлении. Уменьшение давле-
но ния позволяет снизить температуру перегонки и тем самым сохра-
нит* составные части эфирных масел в неизменном виде.
сантонин тауремизин
Во всех случаях перегонки эфирных масел с водяным паром
Сантонин содержится в полыни цитварной, тауремизин — в полыни получается дистиллят, который собирается в приемник и отстаива-
таврической, ется. Эфирные масла с плотностью меньше единицы собираются
в верхней части приемника над водой. В случае перегонки эфирных
§ 2. Физико-химическне свойства масел с плотностью больше единицы оно собирается под водой.
Экстрагирование. Применяется, как правило, в парфюмерии для
Эфирные масла представляют собой бесцветные, реже различно получения эфирных масел, ценные компоненты которых разлага-
окрашенные жидкости (например, коричное эфирное масло — тем- ются при перегонке.
но-коричневое; тимианное — красноватое; эфирное масло тысяче- 1. Эфирные масла извлекают из сырья низкокипящими раство-
листника и ромашки — ярко-синее; аира — желтоватое). Они обла- рителями (эфиром, хлористым метилом), а также сжиженным га-
дают специфическим запахом и вкусом. Большинство эфирных ма- зом (пропаном, бутаном). Растворитель" легко удаляется, остаток
сел легче воды, и лишь некоторые из них (эфирное масло гвоздики, подвергается очистке.
корицы) имеют плотность более единицы. 2. Эфирные масла извлекают жирным маслом при t = 50—70 °С,
Под влиянием кислорода воздуха и света многие эфирные масла из которого эфирное масло можно извлечь спиртом.
изменяются, постепенно окисляясь, меняют цвет (темнеют) и за- Прессование (выжимание). Используется для получения эфир-
пах. Некоторые эфирные масла загустевают после отгонки или при ных масел из сырья, где оно содержится в крупных вместилищах
хранении. в больших количествах, например из околоплодников цитрусовых.

16 17
§ 4. Анализ растительного сырья Для определения методами 2а и 26 используют прибор (рис. 2),
Количественное определение эфирного масла в сырье проводят состоящий из колбы / для перегонки вместимостью 1000 мл, па-
объемным методом. По ГФ X определение эфирного масла проводят ропроводной изогнутой трубки 2, холодильника 3, градуирован-
перегонкой с водяным паром из растительного сырья с последую- ного приемника 4, оканчивающегося внизу краном 5 л сливной
щим измерением его объема. Перегонку проводят в колбе с обрат- трубкой 9. Между холодильни-
ным холодильником. По методу 1 приемник укрепляют внутри ком и приемником имеется рас-
колбы; по методу 2а и 26 приемник располагается вне колбы. Мето- ширение 6 с боковой трубкой 7,
дом 26 пользуются, когда эфирные масла при перегонке претерпе- которое служит для внесения
вают изменения (образуют эмульсию или легко загустевают) или растворителя в дистиллят.
имеют плотность больше или близкую единице. Отгонку проводят Перед каждым определением
с использованием декалина, который поглощает прибор очищают пропусканием
эфирное масло. пара в течение 15—20 мин. Пос-
Методики количественного определения эфир- ле 6—8 определений прибор
ного масла. Количественное определение эфир- промывают последовательно аце-
ного масла в лекарственном растительном сырье тоном и водой.
проводят по ГФ X с. 816—818 (методы 1, 2а, Метод 2а. Навеску измель-
26). Навеска сырья, степень измельчения, вре- ченного растительного сырья по-
мя перегонки и метод, которым следует прово- мещают в колбу /, приливают
дить определение, указываются в соответству· 300 мл воды, колбу соединяют
ющих, частных статьях на растительное сырье. через шлиф с паропроводящей
Метод 1. Определение проводят в приборе трубкой и заполняют водой гра-
(рис. 1). Навеску ^измельченного сырья поме- дуированную трубку через кран
щают в широкогорлую круглодонную или плос- при помощи шланга, оканчива-
кодонную колбу / вместимостью 700—800 мл, ющегося воронкой. Содержимое
приливают 300 мл воды и закрывают резиновой колбы нагревают до бурного ки-
Рио. 1. Прибор для пения и кипятят с интенсивно-
определения эфир- пробкой 2 с обратным холодильником 3. В проб- стью, при которой скорость сте-
ного масла в расти- ке снизу укрепляют металлические крючки, на кания дистиллята должна быть
тельном сырье по которые при помощи тонкой проволоки подве- 60—65 капель в 1 мин в течение
методу 1 ГФ X: шивают градуированный приемник 4 так, чтобы
/ — колба; 2 — рези- времени, указанного в соответ- Рис. 2. Прибор для определения эфир-
«овая пробка; 3 — хо- конец холодильника находился точно над ворон- ствующих статьях для каждого ного масла в растительном сырье по·
лодильник; 4 — гра- кообразным расширением приемника, не касаясь , методу 2а и 26 ГФ X:
дуированная прием- вида сырья. Через 5 мин после
ник его. Цена деления градуированной части при- окончания перегонки замеряют /трубка;
— колба; 2— паропроводная изогнутая
3 — холодильник; 4 — градуиро-
емника 0,025 мл. Приемник должен свободно ванный приемник; 5 — спускной кран;.
объем эфирного масла в гра- * — расширение приемника; 7 — боковая
помещаться в горле колбы, не касаясь стенки горла, и отстоять дуированной части приемника. трубка приемника; 8 — резиновый шланг;
от уровня воды не менее чем на 50 мм. Колбу с содержимым нагре-; Для этого открывают кран и 9 — сливная трубка
вают до кипения и слабо кипятят в течение времени, указанного; спускают часть дистиллята до уровня делений градуированной;
в соответствующих статьях для каждого вида сырья. трубки.
Пары воды и эфирного масла конденсируются в холодильнике и
жидкость стекает в приемник. Масло отстаивают в градуированном Процентное содержание эфирного масла вычисляют, как ука-
колене приемника, а вода через меньшее колено приемника выте- зано в методе 1.
кает обратно в колбу. Метод 26. Навеску измельченного растительного сырья поме-
После окончания перегонки и охлаждения отсчитывают объем Щают в колбу /, приливают 300 мл воды, колбу соединяют через;
отстоявшегося слоя эфирного масла и вычисляют его процентное шлиф с паропроводящей трубкой и заполняют водой градуирован-
содержание χ по формуле ную трубку через кран при помощи резинового шланга, оканчиваю-
^ уюо-too щегося воронкой. Затем через воздушную трубку 7 при помощи
Х пипетки приливают в приемник 0,5 мл декалина и точно замеряют
m(100—a»)' объем взятого декалина, опуская уровень жидкости в градуирован-
где V — объем эфирного масла, мл; т — масса навески сырья, г; ную часть трубки приемника. Далее поступают,-как описано в ме-
w — потеря в массе сырья при высушивании, %. , тоде 2а.
18 .
Объем декалина вычитают из объема раствора масла в декалине В о д а . Содержание воды устанавливают методом дистилляции
и вычисляют содержание эфирного масла в объемно-весовых процен- по ГФ X, с. 760.
тах χ по формуле Числовые показатели. П л о т н о с т ь эфирного масла опреде-
(V — Vj) 100·100 ляют пикнометром по ГФ X, с. 772.
=
* т(ЮО-ю) ' Угол в р а щ е н и я плоскости поляризации
определяют в поляриметре. В зависимости от природы вещества вра-
где V — объем раствора эфирного масла в декалине, мл; Vt — щение плоскости поляризации может иметь различное направление
объем декалина, мл; т — масса навески сырья, г, w — потеря и величину. Если от наблюдателя, к которому направлен свет, про-
в массе сырья при высушивании, %. ходящий через оптически активное вещество, вращение плоскости
поляризации происходит вправо (по движению часовой стрелки),
§ 5. Анализ эфирного масла то вещество называют правовращающим и перед названием ставят
индекс d или знак «+», если же вращение плоскости поляризации
При исследовании эфирного масла определяют его подлинность^, происходит влево (против часовой стрелки), то вещество назы-
отсутствие примесей и числовые показатели — плотность, угол вают левовращающим и перед названием ставят индекс / или знак
вращения, кислотное число, эфирное число до и после ацетилиро- «—». Величину отклонения плоскости поляризации от начального
вания (ГФ X, с. 48J). положения, выраженную в угловых градусах, называют углом вра-
Подлинность испытуемого масла устанавливают, определяя щения и обозначают греческой буквой а. Обычно определение опти-
цвет, запах и вкус масла. ческого вращения проводят при / =• 20 °С и длине волны линии
Цвет (и прозрачность) устанавливают, поместив 10 мл масла спектра натрия (589,3 нм).
в цилиндр из прозрачного бесцветного стекла диаметром 2—3 см, Поляриметрическую трубку наполняют исследуемым маслом так,
наблюдая в проходящем свете. чтобы в нее не попал воздух, и помещают в полярископ. Вращением
Запах определяют следующим образом: 0,1 мл (2 капли) масла алидады находят такое положение, чтобы при самом незначительном
наносят на полоску фильтровальной бумаги длиной около 12 см и повороте резкая тень заменялась хорошо освещенным полукругом и
шириной 5 см так, чтобы масло не смачивало края бумаги, и срав- наоборот. Между этими двумя положениями устанавливают сред-
нивают запах испытуемого образца через каждые 15 мин с запахом нее положение полутени, когда все поле зрения освещено ровно,
контрольного образца, нанесенного таким же образом на фильтро- закрепляют алидаду и отсчитывают угол вращения.
вальную бумагу. В течение 1 ч запах должен быть одинаков с за-* Для Oleum Menthae piperitae угол вращения должен быть не ме-
пахом контрольного образца. нее —18°, для Oleum Eucalypti — от 0 до +10°: '
Вкус устанавливают, прикладывая к языку полоску фильтро- П о к а з а т е л ь п р е л о м л е н и я определяют в рефракто-
вальной бумаги с нанесенной на нее каплей масла или крупинку метре. Показателем преломления называют отношение скорости
смеси 1 τ сахарной пудры с 1 каплей испытуемого масла. распространения света в воздухе к скорости распространения света
Температуру застывания определяют в специальном приборе,! в испытуемом веществе. Показатель преломления зависит от при-
состоящем из сосуда с охлаждающей смесью, в который помещают роды вещества, температуры и длины волны света.
пробирку с испытуемым маслом. Высота слоя масла должна состав' Рефрактометр имеет две призмы, одна из которых (верхляя)
лять не менее 5 см. С помощью термометра отмечают наиболее высо- может приподниматься. Перед проведением измерения на нижнюю
кую температуру, остающуюся короткое время постоянной с мо призму рефрактометра наносят 1—2 капли жидкости, после чего
мента застывания вещества, и принимают ее за температуру засты опускают верхнюю призму и плотно/ее прижимают. Пучок света
вания. с помощью зеркала направляют в верхнее окошко призмы. Вращая
Определение примесей. С п и р т э т и л о в ы й . Несколько ка- рукоятку, совмещают три черточки, нанесенные по диаметру круга,
пель испытуемого масла наносят на воду, налитую на часовое с границей светотени. Вращением ручки компенсатора добиваются
стекло, и наблюдают на черном фоне; не должно быть заметного по- совпадения границы темной и светлой частей поля с тремя черточ-
мутнения вокруг капли масда. ками. Отсчет показателя преломления производится по левой шкале
1 мл испытуемого масла наливают в пробирку, закрывают р •с точностью до четвертого знака.
лым комочком ваты.^в середине которого помещают кристалл фук- Время от времени рефрактометр необходимо проверять с по-
сина, подогревают до кипения; при наличии спирта его пары раст- мощью воды, имеющей показатель преломления 1,3330'при 20 °С.
воряют фуксин, окрашивая вату в красный цвет. Для Oleum Menthae piperitae показатель преломления должен
Ж и р н ы е и м и н е р а л ь н ы е м а с л а . 1 мл эфирного быть 1,459— 1,470; для Oleum Eucalypti 1,458—1,470.
масла взбалтывают в пробирке с 10 мл 90%-ного этилового К и с л о т н о е ч и с л о — это количество миллиграммов KQH,
спирта; не должно появляться мути и жирных капель. необходимое для нейтрализации свободных кислот в 1 г исследуе-
20 21
мого вещества. Обычно количество кислот в эфирном масле незна- нейтральной реакции промывных вод (индикатор — метиловый
чительно, но при длительном хранении в результате окислительных оранжевый). Затем масло промывают 20 мл воды для удаления сле-
процессов количество кислот увеличивается. дов NaCl. Промытое масло обезвоживают безводным Na2SO4 и
Пробу эфирного масла 1,5—2,0 г, взятую с точностью до 0,01 г, фильтруют.
растворяют в 5 мл 95%-ного этилового спирта, предварительно 1—2 г полученного эфирного масла (с ^погрешностью не более
нейтрализованного по фенолфталеину 0,1 н. NaOH (если нужно, 0,01 г) взвешивают в конической колбе, растворяют в 5 мл этило-
нагревают с обратным холодильником на водяной бане до полного вого спирта, нейтрализуют 0,5 н. спиртовым раствором КОН и опре-
растворения). Прибавляют 1 мл раствора фенолфталеина и титруют деляют эфирное число как описано выше, применяя для расчета ту
при постоянном перемешивании 0,1 н. NaOH до появления розо- же формулу.
вого окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. 1 мл 0,1 н. NaOH С о д е р ж а н и е с л о ж н ы х э ф и р о в или с в я з а н -
соответствует 5,61 мг КОН. Кислотное число вычисляют по фор- н ы х с п и р т о в хг (процентное содержание) вычисляют по фор-
муле . муле
эфирное число-Μ
кислотное число»
F5.61 1 =
* * 561 '
т
где V — объем 0,1 н. NaOH, израсходованный на титрование, мл| где Μ — молекулярная масса эфира или спирта.
т — масса навески эфирного масла, г. Содержание свободных спиртов х^ (процент-
Э ф и р н о е ч и с л о . Эфирным числом называют количество ное содержание) находят:
миллиграммов КОН, необходимое для омыления сложных эфиров» (эфирное число после ацетилирования—эфирное число) Μ
сбдержащихся в 1 г исследуемого вещества. Xi
~ 561—0,42 (эфирное число после ацетилирования—эфирное число)"
Эфирное число определяют в растворе, полученном после опре-
деления кислотного числа. К этому раствору прибавляют 20 мл Общее содержание спиртов х3 выражают суммой связанных и сво-
0,5 н. спиртового раствора КОН и нагревают на водяной бане в колбе, бодных спиртов.
с воздушным холодильником (диаметр трубки 1 см,-длина 100 см) С о д е р ж а н и е ф е н о л о в определяют следующим обра-
в течение 1 ч, считая с момента закипания. По окончании омыления зом: в кассиеву колбу вместимостью 200—250 мл с шейкой, градуи-
раствор разбавляют 100 мл воды и избыток КОН титруют 0,5 .н* рованной на 10 мл (с погрешностью до 0,01 мл), вносят пипеткой
H8SO4 (индикатор — фенолфталеин). 5 мл испытуемого масла и 150 мл 5%-ного NaOH и взбалтывают в те-
Эфирное число X вычисляют по формуле чение 15 мин. Отстоявшееся масло вводят в градуированную шейку
колбы прибавлением такого же раствора NaOH. Через 1 ч отсчиты-
v
_ 28,05V вают количество непрореагировавшего масла.
т Процентное содержание фенолов * 4 вычисляют по формуле
где V — объем 0,5 н. КОН, пошедший на омыление эфиров, мл; Ж4=(5-Ю2О,
т — масса навески масла, г; 28,05 — масса КОН, мг, содержаще-
гося в 1 мл его 0,5 н. спиртового раствора. где V — объем масла, не прореагировавшего с раствором NaOH, мл
Эфирное число после ацети л и ρ о в ани я — (температура масла при внесении в колбу и при отсчете должна
количество миллиграммов КОН, необходимое для омыления суммы быть одинакова).
сложных эфиров, содержащихся первоначально в 1 г масла и обра- Одним из новых методов определения компонентов эфирных ма-
зовавшихся при ацетилировании. Определение проводят следующим сел является газожидкостная хроматография.
образом. Газожидкостная хроматография основана на разделении веществ
10 г масла помещают в специальную колбу для ацетилирования между двумя несмешивающимися фазами, из которых одна непод-
с пришлифованным воздушным холодильником, приливают 10 мл вижная — жидкость, а другая подвижная — газ. Неподвижная
уксусного ангидрида и прибавляют около 2 г безводного ацетата фаза — это высокомолекулярная жидкость (полиэтиленгликоль,
натрия. Смесь кипятят на песчаной бане в течение 2 ч. После охлаж- бальзам Шостаковского и др.) предварительно наносится на твер-
дения прибавляют 20 мл воды и вновь нагревают на_водяной бане дый носитель (хромосорб и т. д.). В качестве подвижной фазы
при частом взбалтывании в течение 10—15 мин для превращения используется один из инертных газов: гелий, водород, азот. Основ-
не вошедшего в реакцию уксусного ангидрида в уксусную кислоту. ной частью хроматографа служит колонка, заполненная неподвиж-
Затем смесь переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл ной фазой, через которую движется газ-носитель. Разделение ве-
и отделяют слой масла, который затем промывают при взбалтыва- Ществ происходит за счет разности растворимости К веществ в жид-
нии 50 мл насыщенного раствора NaCl (в несколько приемов) до кости и газе.

22 23
-Основные параметры газожидкостного хроматографа: длина и
диаметр колонки; фазы — подвижная и неподвижная; твердый но- оометр. Температура в термостате 200 СС, в испарителе 250, в ко-
ситель; детектор; температура испарителя, колонки и детектора; лонке 1оО С.
скорость газа-носителя и диаграммной ленты. В испаритель вводят 0,4 мкл мятного масла. Скорость газа-
Количественное определение окрашенных компонентов эфирного носителя 80 мл/мин, скорость диаграммной ленты 20 мм/мин. Мас-
масла — азуленов — проводят методом фотоэлектроколориметрии. штаб записи 1:2.
Содержание азуленовых производных устанавливают по калибро- На хроматограмме (рис. 3) обнаруживается 2 пина, соответ-
вочному графику, построенному с помощью раствора 2,6-дихлор- ствующих разным компонентам мятного масла. Качество масла оце-
нивается по времени удерживания
фенолиндофенола.
отдельных компонентов. Для иден-
Количество цинеола в эфирном масле устанавливают после пред-
тификации компонентов к пробе
варительного извлечения сырья гексаном с последующим определе- масла добавляют чистый ментол и
нием оптической плотности на приборе ИКСФ-м. Аналитическая проба вновь вводится в колонку.
полоса поглощения при 990"1 см. Количество цинеола определяют
по калибровочной кривой.
Для количественного определения компонентов эфирного масла,
имеющих кетогруппу (типа камфоры), используют кислотно-щелоч-
ное титрование продуктов оксимирования, либо определяют оптиче-
скую плотность продуктов взаимодействия полученных оксимов
с солями трехвалентного железа на ФЭК.
Кроме того, для идентификации компонентов эфирного масла
используют также методы УФ, ИК и ПМР спектроскопии.
Мещодика количественного определения ментола в- мятном мас-
ле — Oleum Menthae piperitae (ГФ X, с. 488). В колбе для омыле-
ния с пришлифованной пробкой взвешивают 1 г (с погрешностью
до 0,01 г) мятного масла. К навеске приливают точно 4 мл (автома-
тическая пипетка) ацетилирующей смеси, закрывают пробкой и
оставляют на 1 ч. Затем к колбе присоединяют пришлифованный
обратный холодильник и смесь подогревают на кипящей водяной
бане. Добавляют 20 мл воды (50—60 °С), перемешивают, приливают
автоматической пипеткой 20 мл 0,5 н. NaOH и дотитровывают из
бюретки таким же раствором NaOH в присутствии фенолфталеина
до появления слабо-розового окрашивания.
Параллельно проводят контрольный опыт. Процентное содержа-
ние свободного ментола χ вычисляют по формуле

(У-Уг) 156,26 Рис 3. Хромато- РИС 4. XpOMdTO-


*т—т—· грамма эфирного
масла мяты переч-
грамма эфирного
масла мяты переч-
ной: ной после подкалы-
где т — масса навески эфирного масла, г; V — объем 0,5 н. NaOH, А — ментол; В— вания:
израсходованного на титрование контрольной пробы, мл; Vi — ментов А — ментол; В—
объем 0,6 н. NaOH, израсходованного на титрование пробы с на-
веской, мл. На хроматограмме (рис. 4) высота пика А увеличивается про-
Содержание свободного ментола должно быть не менее 46 %. порционально введенному ментолу, следовательно, пик соответ-
Методика количественного определения ментола в мятном масле ствует ментолу.
методом газожидкостной хроматографии. Анализ проводят в лабо- Расчет процентного содержания компонентов мятного масла
раторном газовом хроматографе ГХМ-72 на s-образных насадочных проводят по формуле
колонках длиной 3 м с внутренним диаметром 4 мм. Твердый носи-
тель — хромосорб W (60—80 меш), неподвижная фаза — полиэти-
ленгликоль, газ-носитель — гелий, в качестве детектора — ката- г
де SA, SB — площадь пика, равная произведению высоты пика
24 25
25 мл; эксикатор; стекла часовые; сетки асбестовые; пробирки стеклянные; бумага
на его ширину на половине высоты; ХА — процентное содержание фильтровальная; весы лабораторные аналитические; рефрактометр; поляриметр;
ментола. набор трубок для поляриметра длиной 5—20 см; термометр ртутный стеклянный
Методика количественного определения цинеола в эвкалиптовом лабораторный с делением на 0,5 °С; пикнометр Реньо (или микропикнометр); весы
ручные до 100 г; прибор для определения эфирного масла по методу 1 ГФ X;
масле (ГФ X, с. 486). В кассиеву колбу вместимостью-100 мл с шей- прибор для определения эфирного масла по методу 2а и 26 ГФ X; лабораторный
кой, градуированной на 4 мл с погрешностью до 0,1 мл, вносят хроматограф ГХМ-72; бани водяные лабораторные; ступки фарфоровые и металли-
3 мл испытуемого масла и 75 мл раствора резорцина. Смесь взбал- ческие с пестиком; цилиндры на 100 и 1000 мл; холодильник (обратный) стеклян-
тывают в течение 15 мин и после отстаивания доли- ный лабораторный с нормальным шлифом. /
вают такое количество раствора резорцина, чтобы Вопросы для подготовки
отстоявшееся масло собралось в градуированную
часть колбы. Спустя 1 ч отсчитывают объем непро- 1. Определение эфирных масел.
реагировавшего масла. Отмеривание масла для ана- 2. Классификация эфирных масел (примеры формул из каждой группы).
3. Физические свойства эфирных масел.
лиза и отсчет непрореагировавшего масла произ- 4. Что такое «стеароптен» (примеры формул)?
водят при одинаковой температуре. Процентное 5. Какие числовые показатели определяются с целью установления подлин-
содержание цинеола по объему χ вычисляют по ности и доброкачественности эфирных масел?
формуле 6. Как определить в эфирном масле примесь спирта, жирного масла?
7. Семейства, представители которых богаты эфирным маслом.
(3 —V) 100 8. Локализация эфирных масел у растений семейств сельдерейных, яснот-
ковых, астровых, рутовых.
где V — количество непрореагировавшего мас- 9. Условия сушки и хранения растительного сырья, содержащего »фир-
ла, мл. ные масла.
10. Использование эфирномасличного сырья.
Содержание цинеола должно быть не менее 11. Методы получения эфирного масла из растительного сырья.
60 % по объему. 12. Сущность методов количественного определения эфирного масла по
Методика количественного определения цинеола ГФ X. Для каких видов сырья количественное определение эфирного масла про-
в эвкалиптовом масле методом газожидкостной водят методом 26 (ГФ X)? '
13. Устройство приемника в приборах для количественного определения
хроматографии. Анализ проводят в лабораторном эфирного масла по методу I, 2а и 26 (ГФ X).
газовом хроматографе ГХМ-72 на' s-образных на- 14. Методы количественного определения эфирного масла и идентифика-
садочных колонках длиной 3 м х с внутренним, ция его отдельных компонентов.
диаметром 4 мм. Твердый носитель—хромосорб W' 15. Формулы: линалоола, ментола, цинеола, тимола, анетола, туйона, ту-
йола, камфоры, борнеола, борнилизовалерианата, хамазулена, матрицина, пи-
(60—80 меш), неподвижная фаза — полиэтилен- нена. В каких растениях они содержатся (русские и латинские названия).
гликоль, газ-носитель — гелий, в качестве детек-
тора — катарометр. Температура в термостате Литература
200 °С, в испарителе 250, в колонке 120 °С.
Гаммерман А. Ф. Кур'с фармакогнозия. — Л . : Медицина,, 1967.
В испаритель вводится 0,5 мкл эвкалипто-j Столяров Б. В., Саванов И. М., Витенберг А. Г. Руководство к практиче-
вого эфирного масла. Скорость гелия 30 мл/мин» ским занятиям по газожидкостной хроматографии. — М.: 1978.
скорость диаграммной ленты 240 мм/ч. На хрома-j Зенин В. С. — ХПС, № 1, 1975.
тограмме обнаруживается 3 пика (рис. 5). Расчета Пигулевский Г. Ф. Терпеноиды и кумарины. — М.: Наука, 1965.
Рив. 5. Хрома-
тограмма эфир- количественного содержания цинеола — пик Αϊ
ного масла эвка- проводят πα формуле
липта: ГЛАВА 3. СЕРДЕЧНЫЕ ГЛИКОЗИДЫ
А — цинеол
sA+sB+sc*

где SA, SB, Sc — площадь пикаг равная произведению высоты пика Сердечными гликозидами называются гликозиды, агликоном ко-
на его ширину на половине высоты; ХА — процентное содержание торых являются производные циклопентанопергидрофенантрена,
цинеола. содержащие в положении 17 ненасыщенное пятичленное или шести -
членное лактонное кольцо и оказывающие специфическое действие
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); декалин!
резорцина раствор; КОН 0,5 н. раствор в этиловом спирте; NaOH 0,1 н.; фенол- на сердечную мышцу. Сердечные гликозиды нока не имеют себе
фталеин; натрия ацетат безводный; уксусный ангидрид;*фуксин; метиловый оран- равных синтетических заменителей; растения служат-единствен-
жевый; ментол синтетический чистый. : ным источником их получения. Действие сердечных гликозидов
Колбы конические вместимостью 100 и 250 мл; колбы широкогорлые вме- проявляется в изменении всех основных функций сердца. Под
стимостью 800 мл; колба с притертой пробкой вместимостью 100 мл; колба круг- влиянием терапевтических доз сердечных гликозидов наблюдается:
лодонная с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; бюретки вместимостью

26 27
а) усиление систолических сокращений сердца, длительность си- В составе сердечных гликозидов обнаружено до 30 различных
столы уменьшается, б) удлинение диастолы, ритм сердца замедля- Сахаров, причем большинство из них (кроме глюкозы, фруктозы и
ется, улучшается приток крови к желудочкам; в) понижение возбу- рамнозы) сахара, специфические для сердечных гликозидов, в дру-
димости приводящей системы сердца, удлиняется промежуток между гих веществах растительного происхождения они не встречаются.
сокращениями предсердий и желудочков. Характерная особенность специфических Сахаров, входящих в со-
Характеристика агликона. В основе строения агликонов сердеч- став сердечных гликозидов, та, что они обеднены кислородом, т. е.
ных гликозидов лежит циклопентанопергидрофенантреновая си- относятся к дезоксисахарам. Это 6-дезокси- и 2,6-дидезоксигексозы,
стема, полностью или частично гидрированная. Кольца А/В могут которые, кроме того, часто содержат метоксильные или ацетильные
иметь как цис-, так и транс-сочленение. Относительно кольца В группы в различных положениях, например дигитоксоза, цимароза,
кольцо С всегда занимает транс-положение. А кольца C/D в отли- олеандроза, дигиноза и др.:
чие от других природных стероидов имеют всегда ^ыс-сочленение.
У агликонов сердечных гликозидов могут быть заместители
у 3, 5, 10, 12, 13, 14, 16 углеродных атомов, а в положении 17 нахо- но ОН
но ОН
дится ненасыщенное лактонное кольцо:
но
н 3 со н Η
L -олеандроза'
Η Η
D -дигиноза
β -цимароза
СН 2 ОН
СН,
он Н/| О он

R,—ОН: R.-ΟΗ,-Η; R,—СН„—С^ . —СН,ОН| R 4 —ОН,-Η; R 5 -CH,; R,—OHl


R,—OH,—Η; Re—ненасыщенное лактонное кольцо
но он н он
L-рамноза D-фукоза
Кроме того, гидроксильные группы могут находиться в положе- Углеводные компоненты природных сердечных гликозидов по-
ниях 1, 2, 11, 15. Гидроксил при С1в в некоторых агликонах может строены линейно, к агликону присоединяются сначала дезоксиса-
быть этерифицирован муравьиной, уксусной или изовалериановой хара, а концевым моносахаридом служит глюкоза.
кислотами. Выделены из растений также агликоны сердечных Биологическая активность сердечных гликозидов зависит от
гликозидов, содержащие в стероидной части молекулы двойные числа групп —СН„ и особенно —ОН у углеродных атомов «скелета».
С=С-связи, кетогруппы, эпоксидные кольца. С увеличением числа гидроксильных групп повышается поляр-
Заместители у С3 находятся в α-положении, у С5 и Сы — в цис·] ность соединения и, естественно, растворимость в воде. По кардио-
положении, лактонное кольцо может находиться в а- и β-положе-' тоническому действию агликоны мало отличаются от исходных сер-
НИИ. дечных гликозидов, но быстро инактивируются в печени.
Биологическая активность сердечных гликозидов зависит от
стереохимического строения гликозидов. Активны только те глико- § 1. Классификация
зиды, у которых кольца А/В имеют ццс-сочленение.
Специфическое действие веществ этой группы на сердечную В зависимости от строения ненасыщенного лактонного кольца
мышцу обусловлено наличием в их молекуле ненасыщенного лактоЫ все природные сердечные гликозиды делятся на две группы: с пяти·
ного кольца. Любые изменения в структуре лактонного кольца ве-j членным лактонным кольцом — карденолиды, и шестичленным лак-
дут к потере этими веществами характерного сердечного действия. тонным кольцом — буфадиенолиды:
Такими изменениями могут быть: 1) расщепление лактонного кольца( сн,
под действием щелочи; 2) образование при гидрировании гидролак-
тона.
Строение сахарного компонента. Сахарные компоненты присое-
диняются к агликону за счет спиртового гидроксила в положении 3. НО'
Длина сахарной цепочки у различных гликозидов разная — от
одной молекулы до нескольких. карденолид(К 1 _сн 3 , и л и - С ^ , -СН 2 ОН) буфадиенолид (R.-CH·,, или-С^, -СН 2 ОН>

28 29
В зависимости от заместителя в положении 10 карденолиды д и д
А _- желто-зеленое; ланатозид В — голубовато-зеленое, ланато-
подразделяются на три подгруппы. Первая подгруппа — подгруппа зид С — голубое.
наперстянки; к ней относятся гликозиды, агликоны которых в по- Большинство сердечных гликозидов мало растворимы в этило-
ложении 10 имеют метильную группу (—СН3). Гликозиды этой под- вом эфире, хлороформе, петролейном эфире, в воде, но хорошо раст-
группы медленно всасываются и медленно выводятся из организма, воримы в водных растворах метилового и этилового спиртов. Чем
обладают кумулятивным действием: длиннее сахарная цепочка, тем лучше растворяются сердечные
гликозиды. Агликоны же сердечных гликозидов лучше раство-
римы в органических растворителях.
Сердечные гликозиды легко могут подвергаться гидролизу.
Гидролиз может быть кислотным, щелочным и ферментативным. Наи-
более мягкое, ступенчатое расщепление протекает при ферментатив-
дигнтокснгенин
ном гидролизе. Из первичных, нативных гликозидов при фермен-
тативном гидролизе образуются вторичные, которые отличаются
Вторая подгруппа — подгруппа строфанта включает сердечны© длиной углеводной цепи. Например, при ферментативном гидролизе
гликозиды, агликон которых в положении 10 имеет альдегидную: пурпуреагликозида А вначале образуется дигитоксин и отщепля-
О
группу (—C<f ). Эти гликозиды быстро выводятся из организма, ется молекула глюкозы, а затем образуются дигитоксигенин и
3 молекулы дигитоксозы. При кислотном или щелочном гидролизе
не обладают кумулятивным действием: сразу происходи^ глубокое расщепление до агликона и сахарных
компонентов.
сн 3
§ 3. Методы выделения
При выделении сердечных гликозидов используются органиче-
ские растворители (этиловый, метиловый спирты), которые не вызы-
он строфантидин вают гидролиза сердечных гликозидов, а если нужно получать не
нативные, а вторичные гликозиды, то заранее проводят фермента-
Третья подгруппа объединяет сердечные гликозиды, имеющие тивный гидролиз.
в положении 10 спиртовую группу (—СН2ОН): Выделение сердечных гликозидов из растительного сырья можно
разделить на следующие этапы: 1) экстракция сердечных гликозидов
из растительного сырья; 2) очистка полученного извлечения; 3) раз-
нон,с деление суммы сердечных гликозидов; 4) перекристаллизация и вы-
деление индивидуальных сердечных гликозидов.
Основная трудность при выделении сердечных гликозидов за-
ключается в том, что это крайне лабильные соединения, а поэтому
он малейшее нарушение в температурном режиме приводит к их раз-
геллебригенол рушению.
Сердечные гликозиды можно еще классифицировать по количе- Экстракцию сердечных гликозидов из растительного сырья чаще
ству сахарных остатков в углеводной части молекулы. Их можно раз- всего проводят метиловым или этиловым спиртами (концентрация
делить на монозиды, биозиды, триозиды и т. д. 70—80 %). Полученное спиртовое извлечение, содержащее сумму
сердечных гликозидов, подвергают очистке от сопутствующих ве-
§ 2. Физико-химические свойства ществ. Сопутствующими веществами бывают пигменты (хлорофилл,
ксантофилл, каротиноиды), смолы и другие органические вещества,
Сердечные гликозиды представляют собой в большинстве слу- растворимые в спиртах.
чаев кристаллические вещества бесцветные или беловатые, иногда Для очистки упаренное под вакуумом (при температуре 51 —
с кремовым оттенком, не имеющие запаха и обладающие горьким 52 °С) спиртовое извлечение подвергают многократной обработке
вкусом. Они характеризуются определенной точкой плавления и органическими растворителями, чаще всего четыреххлористым
углом вращения. Многие сердечные гликозиды обладают специфиче- углеродом, до полного удаления сопутствующих веществ или же при-
ской флуоресценцией в УФ свете. Например, ланатозиды напер- меняют сорбционные методы очистки, используя оксид алюминия,
стянки шерстистой имеют следующие свечения в УФ свете: ланато- который наносится на стеклянные фильтры.
30 31
Разделение суммы сердечных гликозидов проводят чаще всегс хара) (реакция Келлер — Килиани); 2) реакции на стероидное ядро
на хроматографических колонках, заполненных сорбентами (оксщ (реакция Либермана — Бурхарда; реакция Розенгейма и др.);
алюминия, силикагель). В дальнейшем нужные зоны элюируют опре· 3) реакции на лактонное ненасыщенное кольцо. Для установления
деленными растворителями. Так, для нативных гликозидов напер- наличия пятичленного лактонного кольца проводятся реакции:
стянки элюирование проводят смесью хлороформа с изопропиловьш Легаля (с нитропруссидом натрия); Раймонда (с ж-динитробензо-
спиртом (3:1). Полученные элюаты выпаривают под вакуумом до- лом); Кедде (с 3,5-динитробензойной кислотой); Балье (с пикрино-
суха при / = 51—52 °С, затем проводят перекристаллизацию дс вой кислотой). Реакции проводятся в щелочной среде. На шести-
получения индивидуально чистых веществ. членное лактонное кольцо не найдены достаточно специфические
Для установления строения сердечных гликозидов использу- реактивы. Для обнаружения буфадиенолидов на хроматограммах
ются различные физико-химические методы: УФ, ИК, ЯМР-спек- используют 20%-ный раствор треххлористой сурьмы в хлороформе.
троскопия и др. Методики качественных реакций. Приготовление извлечения:
Так в УФ области спектра пятичленное лактонное кольцо вы 5 г измельченных листьев наперстянки заливают 50 мл 80%-ного
зывает интенсивное поглощение при 215—220 нм, а ИК область ха- этилового спирта, настаивают 24 ч. Спирт отгоняют под вакуумом,
рактеризуется расщепленной полосой при 1750 см"1 (—С=О водный остаток промывают в делительной воронке четыреххлори-
группа) и полосой при 1625 см"1 (—С=С-связь). стым углеродом 6 раз по 10 мл. Сердечные гликозиды извлекают
Отсутствие строго специфических реактивов на шестичленнск смесью хлороформ — изопропиловьш спирт (3:1) 4 раза по 10 мл.
лактонное кольцо требует-снятия для этих веществ УФ спектров К полученному извлечению добавляют 2 г безводного Na2SO4, дают
где они показывают характерную полосу поглощения при 300 нм, постоять 3—5 мин, а затем отфильтровывают через бумажный
Поглощение в этой области использовано также для проявления фильтр.
хроматограммы при облучении УФ светом с длинами волн 290— Качественные реакции. Р е а к ц и я К е л л е р — Кили-
360 нм. В ИК области спектра шестичленное лактонное кольце а н и . Готовят два раствора: 1 — ледяная уксусная кислота, содер-
характеризуется интенсивной полосой поглощения при 1730 см" жащая следы Fe2(SO4)3; 2 — концентрированная серная кислота
(С=О-группа) и двумя полосами при 1640 и 1540 см"1 (сопряженньк также со следами Fe2(SO4)3. Сухой остаток очищенного извлечения
С=С-связи). - • растворяют в растворе 1 и осторожно по стенке пробирки вливают
Большое значение для выяснения строения вещества имеет ус- раствор 2. При наличии дезоксисахара верхний слой через некото-
тановление в нем числа спиртовых групп и числа ацетилирующихс* рое время окрасится в васильково-синий цвет.
из них, т. е. первичных и вторичных. Общее число ОН-групп можне Р е а к ц и я Л и б е р м а н а — Б у р х а р д а . Сухой оста-
установить либо методом Церевитинова (определение активного во- ток очищенного извлечения растворяют в ледяной уксусной кислоте
дорода), либо с помощью ИК спектроскопии. Однако первый MeToj и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной сер-
требует значительного количества вещества и поэтому, в основном, ной кислоты (50:1). Через некоторое время развивается окраска от
используется метод ИК спектроскопии, при использовании которой розовой к зеленой и синей.
достаточно 1—2 мг вещества. i Р е а к ц и я Р о з е н г е й м а . Сухой остаток очищенного из-
К сожалению, применение этих методов в отношении сердечньц влечения растворяют в хлороформе и смешивают с 90%-ным вод-
гликозидов и агликонов встречает препятствия. Главное из них т<3 ным раствором трихлоруксусной кислоты. Появляются сменяющие
что карденолиды и буфадиенолиды, будучи высокомолекулярным^ Друг друга окраски от розовой до лиловой и интенсивно синей.
многоатомными спиртами, дают сложные для идентификаци| Р е а к ц и я Л е г а л я . Готовят два раствора: 1 — 5%-ный
спектры. раствор нитропруссида натрия; 2 — 10%-ный раствор едкого натра.
Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в 0,5 мл 100%-
§ 4. Качественное определение ного метилового спирта. Полученный раствор вливают в пробирку
и добавляют 1—2 капли раствора 1. Затем, осторожно (не взбалты-
Несмотря на отсутствие строго специфических реакций, при вая!) по стенке добавляют 1—2 капли раствора 2. На границе 2
менение следующего комплекса проб позволяет сделать заключена растворов появляется красное окрашивание в виде кольца.
о наличии.сердечных гликозидов. Качественные реакции проводят©
либо с индивидуальными веществами, либо с очищенным извлече § 5. Количественное определение
нием из растительного сырья. Для этого несколько капель извл«
чения упаривают досуха на часовом стекле или в выпарительно; До настоящего времени не представлялось возможным устано-
чашке, а сухой остаток растворяют в нужном растворителе. ] вить содержание того или иного сердечного гликозида в присутст-
Все реакции на сердечные гликозиды можно разделить н| вии других, так как реактивы, предложенные для количественного
3 группы: 1) реакции на углеводную часть молекулы (2-дезоксиса] определения гликозидов, являются общими. Поэтому весьма пер-
32 2 α/ρ Гринкевнч и др. 33
спективным считается сочетание хроматографии с дальнейшим ис- По требованиям ГФ X биологическая стандартизация сердечных
пользованием фотометрии, потенциометрии, полярографии, флуори- гликозидов проводится на лягушках, кошках и голубях. Актив-
метрии и др. ность оценивают по сравнению со стандартным кристаллическим
Хорошие результаты получают при хроматографии на бумаге, препаратом и выражают в единицах действия (лягушачьих, коша-
пропитанной формамидом. В этом случае применение систем бен- чьих и голубиных).
зол — хлороформ (9:1); (7:5); (3:7) или смесей толуол — н-бутанол Одна лягушачья единица действия (ЛЕД) соответствует наи-
(9:1); (4:1); (2:1); (1:1), смесей состава этилацетат — бензол — меньшей дозе стандартного препарата, вызывающей систолическую
вода (84:16:50), хлороформ — бензол—н-бутанол (78:12:5) или остановку сердца стандартной лягушки (лягушка-самец массой
просто хлороформа в качестве подвижной фазы позволяет достичь 28—33 г) в течение 1 ч, если испытывают сырье и препараты напер-
четкого разделения отдельных.групп гликозидов. В последние годы стянки, ландыша и горицвета, или 2 ч, если испытывают сырье
также широко используется тонкослойная хроматография. В каче- и препараты строфанта, желтушника и олеандра. Под одной ко-
стве сорбента могут применяться тальк, силикагель, кизельгур и др. шачьей или голубиной единицей действия (1 КЕД или 1 ГЕД)
Системы используются такие же, как для бумажной хроматографии. подразумевают дозу стандартного препарата из расчета на 1 кг
Для обнаружения гликозидов на хроматограммах применяют массы животного.
реактивы, вызывающие флуоресценцию или окрашивание. Наибо- В НТД на лекарственное растительное сырье, содержащее сер-
лее широко применяют смесь 25%-ной трихлоруксусной кислоты и дечные гликозиды, обязательно указывается валор. Валор сырья —
3%-ного раствора хлорамина в этиловом спирте (15:1). В УФ свете это количество единиц действия в 1 г сырья.
производные дигитоксигенина дают четкую золотисто-желтую флуо- Наиболее часто используется стандартизация на лягушках.
ресценцию; гитоксигенина — голубую; дигоксигенина — стальную. К основным недочетам этого метода относятся следующие: 1) иссле-
Для количественного определения наиболее простыми и доступ- дования проводятся на холоднокровных животных, генетически
ными считаются фотометрические методы — фото колориметрия и далеко отстоящих от человека; 2) определяется смертельная доза,
спектрофотометрия сердечных гликозидов и их генинов в видимой тогда как для клиники важно правильно определить терапевтиче-
области спектра. Эти методы основаны на цветных реакциях сер- ские дозы; 3) лягушки используемых видов распространены не во
дечных гликозидов с различными нитросоединениями (пикрат всех районах нашей страны и не во всех странах; 4) малая точ-
натрия, 3,5-динитробензол и др.) или ксантгидролом. Для при- ность метода ( ± 20—25 %) ввиду резко изменяющейся чувстви-
готовления эталонного раствора можно использовать кристалли- тельности лягушек в зависимости от времени года и других условий.
ческие гликозиды, но ввиду трудности их получения были реко- Метод биологической стандартизации на кошках, принятый
мендованы также растворы дихромата калия и сульфита натрия. ГФ X, более точен (± 5—10 %), но также достаточно трудоемок.
Флуориметрические методы основаны на способности сердечных Методики количественного определения. Ни один из вышена-
гликозидов флуоресцировать под действием сильных кислот (кон- званных методов количественного определения сердечных гликози-
центрированные серная, фосфорная кислоты) и окислителей (пер- дов не является идеальным, каждый имеет свои недостатки. Коли-
хлорат железа, хлорное железо) после кратковременного облуче- чественное определение таких лабильных веществ, как сердечные
ния УФ светом. Эти методы применимы только к сердечным глико- гликозиды, нуждается в индивидуальном подходе в каждом кон-
-зидам, которые в результате дегидрирования образуют моно- кретном случае.
и диангидросоединения. Методика количественного определения ланатозидов А, В, С
В основе полярографических методов определения сердечных в листьях наперстянки шерстистой — Folium Digitalis lanatae'.
гликозидов лежит их способность восстанавливаться на ртутно- Методика основана на хроматографическом разделении сердечных
капельном электроде при потенциалах 1,9—2,0 В, образуя диффуз- гликозидов с последующим спектрофотометрическим определе-
ные токи, волны которых пропорциональны концентрации сердеч- нием.
ных гликозидов. 5 г измельченного сырья (точная навеска) (сито с диаметром
В последние годы для количественного определения сердечных отверстий 1 мм) помещают в склянку темного стекла с притертой
гликозидов стал применяться метод газожидкостной хроматогра- пробкой, заливают 50 мл 80%-ного метилового спирта и настаивают
фии (ГЖХ). При этом вначале сердечные гликозиды превращают в течение 24 ч. Жидкость отфильтровывают на воронке Бюхнера
в летучие производные путем силилирования, ацетилирования и и берут для исследования 40 мл извлечения (что соответствует 4 г
получения гепта.фторбутиратов, а затем подвергают анализу. сырья). Извлечение упаривают на водяной бане под вакуумом при
Нормативно-техническая документация на лекарственное расти- температуре 50—60 С до удаления спирта. К оставшемуся объему
тельное сырье, содержащее сердечные гликозиды, наряду с физико- (3 4 мл) добавляют 5—7 мл воды и помещают в делительную во-
химическими методами количественного определения требует обя- ронку. Водный раствор очищают четыреххлористым углеродом
зательной стандартизации сырья биологическими методами. 5 раз по 10 мл. Из очищенного водного раствора гликозиды извле-
34 2* 33
смесью хлороформа и изопропанола (3:1) 4 раза порциями
СН. по 10 мл. Полноту извлечения гликозидов контролируют реакцией
Легаля. Хлороформно-изопропанольное извлечение обезвоживают
сульфатом натрия и фильтруют через бумажный фильтр. Сульфат
натрия на фильтре промывают 5 мл обезвоженной смеси, которую
(4-*- 1) p-D-дигитоксоза—' присоединяют к фильтрату и отгоняют досуха под вакуумом на во-
ι
дигитоксигенин дяной бане при 50 °С. Сухой остаток количественно переносят
о в откалиброванный пикнометр вместимостью 3 мл с помощью смеси
I хлороформ — метиловый спирт (1:1). Полученный раствор подвер-
(4 ч - 1) β-£>-ΛΗΓΗΤοκοο3β
гают хроматографированию.
О Хроматография проводится в тонком слое сорбента (тальк).
(4 ч- 1) β-0-
На подготовленной хроматографической пластинке размером 13 X
X 18 см намечают стартовую линию на
О расстоянии 1,5 см от нижнего края. На
стартовую линию пипеткой с оттянутым
(4 ч- 1) β-,Ο-глюкоза в капилляр носиком наносят два пятна
Ланатозид А
раствора гликозидов по 0,01 мл и пятно
/ \
сн я (0,01 мл) — раствор абицина («свиде-
Н.С тель»). Пластинку помещают в камеру
и хроматографируют восходящим спо-
ОН собом 30—35 мин. Длина пробега по-
{5-О-дигитоксоза—О \ / \ / движной фазы 12 см. В качестве под-
о гитоксигенин вижной фазы используется система: хло-
роформ — этиловый спирт — бензол —
(4 ч- 1) β-,Ο-дигитоксоза формамид (59 : 10 : 30 : 1). , , | ,
Пластинку высушивают на воздухе
О 5 мин, затем 10 мин в сушильном шка- Рис 6. Схема тонкослойной
(4 ч- 1)β -D-ацетилдигитоксоза
фу при t — 120 °С. Одну половину пла- хроматограммы сердечных
стинки (пятно «свидетеля» и 1 пятно гликозидов наперстянки шер-
0 извлечения) обрабатывают 25%-ным стистой:
раствором трихлоруксусной кислоты в /пластинки,
— часть хроматографической
обработанная реак-
*4ч- ΐ)β -£>-глюкоза этиловом спирте с добавлением 0,2 % тивом; // — необработанная ре-
Ланатозид В активом, / — спиртовой раствор
НО хлорамина Т. После обработки пластин- «абицина»; А — ланатозид А;
ку высушивают 10 мин в сушильном Взид—С» ланатозид В; С — ланато-

л сн, 2 и о — очищенное извле-


шкафу при t = 120 °С (рис. 6). Ланато- чение из листьев наперстянки
н3с зиды проявляются в виде пятен серо-
ΛΙ'
Хук
синего цвета. Точные границы устанавливают в ультрафиолетовом
свете. Ланатозид А обладает ярко-желтой флуоресценцией; В —
P-D-дигитоксоза—Q/ х /
дигоксигенин
зеленовато-голубой; С — голубой.
.0 На второй половине пластинки (необработанной) пятна лана-
тозидов отмечают по проявленной полосе и стандарту. Rf пятен
(4 ч- 1) β-ΰ-дигитоксоза ланатозидов в этой системе: А — 0,74; В — 0,43; С — 0,24.
О После установления границ пятна ланатозидов А, В, С сни-
I мают с пластинки, количественно переносят на стеклянный
(4 ч- 1) β-0-ацетилдигитоксоза фильтр № 4 и элюируют 20 мл смеси хлороформ — метиловый спирт
О
(1 : 1). Элюат упаривают досуха на водяной бане под вакуумом
при t = 50—60 °С. К сухому остатку добавляют 5 мл ксантгидро-
(4 ч - 1) β-β-глюкоза лового реактива, нагревают 5 мин на кипящей водяной бане, охлаж-
Ланагозид С дают 5 мин в холодной воде и выдерживают 15—20 мин при ком-
36 37
натной температуре. Появляется окрашивание от розовых до Склянки темного стекла с притертой пробкой вместимостью 100 мл; воронки
малиновых тонов. Окрашенный раствор помещают в кювету толщи- Бюхнера; колбы Бунзена; колба с нормальным шлифом вместимостью 50 мл;
ной 1 см и определяют оптическую плотность при 528—532 нм воронка делительная вместимостью 200 мл; цилиндры мерные на 50 и 10 мл; колбы
плоскодонные вместимостью 25, 100 и 250 мл; колбы мерные вместимостью 25 мл;
на спектрофотометре СФ-4А на фоне контроля *. Контролем слу- воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пикнометр вместимостью
жит элюат с чистого сорбента. Калибровочный график строят 3 мл; микропипетка измерительная вместимостью 0,1 мл; пластинки стеклянные
по ланатозиду С (целаниду), процентное содержание ланатозида для ТСХ размером 13 X 18 см; пробирки стеклянные; холодильник стеклянный
в абсолютно сухом сырье рассчитывается по формуле лабораторный с нормальным шлифом; бюретка с притертым краном вместимостью
25 мл; камера хроматографическая для ТСХ; пульверизатор; игла препароваль-
! 10 ная, фильтры бумажные; штативы лабораторные.
VjmlOOOOO ' Методика количественного определения главных сердечных гли-
где а — количество вещества, найденное по калибровочному гра- козидов в листьях ландыша (Folium Convallariae). Методика осно-
фику; Vj — объем экстракта, мл (пикнометр); V3 — объем экстракта, вана на хроматографическом разделении и последующем спектро-
нанесенного на пластинку, мл; т — масса навески абсолютно фотометр и чес ком определении сердечных гликозидов.
сухого сырья, г; 1,05 — поправочный коэффициент.
Подготовка хроматографических пластинок. 4 г
талька помещают в колбу на 25 мл, приливают 7 мл 95%-ного этилового спирта и
1 мл смеси формамид — ацетон (3:7). Смесь взбалтывают 30—40 с и выливают на
пластинку, равномерно распределяя по всей площади. Пластинку высушивают
на воздухе 20—25 мин и 10 мин в сушильном шкафу при t ч= 50 — 60 °С. Для Ζ,-рамноза
хроматографии необходимы только свежеприготовленные пластинки.
Подготовка камеры для хроматографирования. строфантидин
В качестве подвижной фазы используют систему 95%-ный этиловый спирт — бен- конваллятоксин
з о л — хлороформ — формамид (10:30:59:1). Систему помещают в делительную
воронку и взбалтывают 10 мин, затем отстаивают 10 мин. Заливают в камеру так,
чтобы верхний слой формамида не попал в камеру. Насыщение камеры идет 20—
25 мин. Для лучшего насыщения камеры стенки выкладываются фильтровальной
бумагой. Снаружи камера должна быть закрыта черной бумагой. Систему необ-
ходимо менять при последующем хроматографировании.
1. П р и г о т о в л е н и е к с а н т г и д р о л о в о г о р е а к т и в а . 10мг £>-глюкоза-О-/.-рамноза
ксантгидрола растворяют в 99 мл ледяной уксусной кислоты и добавляют 1 мл
концентрированной НС1. строфаитадин
2. 25%-ный раствор трихлоруксусной кислоты с добавлением 0,2 % хлора-
мина Τ — готовится непосредственно перед проявлением. конваллозид
3. П р о в е д е н и е реакции Л е г а л я . Готовятся «ex tempore»
2 раствора: 1—5%-ный раствор нитропруссида натрия (готовится в мерной
но сн я
колбе) и 2 — 10%-ный раствор едкого натра (водный). В выпарительной чашке
3—4 капли извлечения упаривают досуха, растворяют в 0,5 мл 100%-ного мети-
лового спирта. Растворенный сухой остаток вливают в пробирку и добавляют
1—2 капли реактива 1, затем осторожно по стенке добавляют 1—2 капли реак-
тива 2 и, не взбалтывая, смотрят. Если есть сердечные гликозиды, то на гра- ί,-рамноза—О
нице 2 растворов появляется красное окрашивание в виде кольца.
4. П о с т р о е н и е к а л и б р о в о ч н о г о г р а ф и к а . Калибровоч- бипиндогевин
ный график строится по стандартному раствору ланатозида С (целанида). 25 мг локундьезид
целанида растворяют в 25 мл смеси метиловый спирт — хлороформ (1:1) в мер-
ной колбе. Наносят на хроматографическую пластинку в количестве от 0,01 до н о сн я
0,08 мл раствора, а далее поступают как с испытуемым извлечением.
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : метиловый спирт (метанол); четы-
реххлористый углерод; изопропиловый спирт (изопропанол); хлороформ; ацетон; /\ | ОН
формамид; Na2SO4 (безводн.); тальк; этиловый спирт (этанол); ксантгидрол; три-
хлоруксусная кислота; хлорамин Т; НС1 (конц.); уксусная кислота (лед.); бен- D-гулометилоза—СУ pjo
зол; NaOH 10%-ный; нитропруссид натрия 5%-ный; абицина раствор в смеси ме-
тиловый спирт — хлороформ (1:1). строфантидин
дезглюкохейротоксин

* Определение оптической плотности окрашенного раствора можно прово- В круглодонную колбу вместимостью 250 мл, снабженную
дить на фотоколориметре ФЭК-56М при зеленом светофильтре (длина волны обратным холодильником, помещают 50 мл 70%-ного этилового
540 нм).
спирта и нагревают до кипения. Затем быстро вносят 5 г измель-
38
39
ченных (сито с диаметром отверстий 3 мм) сухих листьев ландыша Вопросы для подготовки
и кипятят 30 мин. 1 Определение сердечных гликозидов
Раствор охлаждают и доводят до первоначальной массы 70%-ным 2 Классификации сердечных гликозидов. Укажите, на чем они основаны,
и приведите примеры формул к каждой группе.
этиловым спиртом. 3. Характеристика сердечных гликозидов группы наперстянки
Полученный экстракт фильтруют, отбирают 27,5 г (что соот- 4. Характеристика сердечных гликозидов группы строфанта.
ветствует 2,5 г сырья) и отгоняют спирт под вакуумом при / = 5. Характеристика сахарного компонента.
= 55—60 °С. К теплому экстракту добавляют 3 мл раствора основно- 6. Зависимость между химическим составом и биологическими свойствами
сердечных гликозидов.
го ацетата свинца, перемешивают 10 мин, затем центрифугируют 7. Семейства, богатые сердечными гликозидами
5 мин при скорости 5000 об/мин. Промывают осадок 2 раза, при- 8. Условия сушки растительного сырья, содержащего сердечные гликозиды.
бавляя по 10 мл воды с последующим 9. Физико-химические свойства сердечных гликозидов.
центрифугированием. Из очищенного вод- 10. Реакции на сахарную часть молекулы сердечного гликозида.
11. Реакции на стероидный цикл.
ного экстракта сердечные гликозиды из- 12. Реакции на лактонное ненасыщенное кольцо.
влекают смесью хлороформ — метиловый 13. Методы количественного определения сердечных гликозидов.
спирт (4 : 1). 14. Биологические методы определения сердечных гликозидов.
Экстракт фильтруют через безводный 15. Определение 1 ЛЕД
16. Понятие «валор» лекарственного сырья.
сульфат натрия, промывают фильтр. Из 17. Основные этапы выделения сердечных гликозидов из растительного
экстракта отгоняют растворитель в ваку- сырья.
уме на водяной бане до объема 3—4 мл. 18. Формулы ланатозидов А, В, С, конваллозида, конваллятоксина.
Затем раствор гликозидов упаривают до 19. На чем основано количественное определение ланатозидов в листьях
наперстянки? Основные этапы.
1 мл, остаток высушивают. Сухой остаток
растворяют в 1 мл смеси хлороформ — Литература
метиловый спирт (1 : 1). Хроматографи-
Машковский М. Д. Лекарственные средства. — М.: Медицина, 1977, т. I.
руют на бумаге восходящим способом в Лист наперстянки шерстистой. ФС 42-614-72.
Рис 7 Схема бумажной системе этилацетат — вода (2:1) в тече- Абубакиров Н. К-, Генкина Г. Л. —Узбек. Хим. журн., 1960, № 6, с. 63.
хроматограммы сердечных ние 20—24 ч. Происходит разделение кон- Гарбузова В. М., Либизов Н. И. — Фармация, 1971, № 4, с. 30.
гликозидов листьев лан- валлятоксина и дезглюкохейротоксина. Макаревич И. Ф., Кемертелидзе Э. П., Кисличенко С. Г. и др. Карденолиды
дыша: и буфадиенолиды. — Тбилиси: Мецниереба, 1975.
Если хроматографировать нисходящим Кемертелидзе Э. П. Химическое исследование наперстянки реснитчатой. —
/ — конваллятоксин; 2— способом, то происходит разделение кон-
очищенное извлечение иэ Тбилиси; Мецниереба, 1977.
листьев ландыша валлозида, локундьезида и конвалляток-
сола (рис. 7). Проявитель — насыщенный
раствор треххлористой сурьмы в метиловом спирте. Пятна глико- Г Л А В А 4. САПОНИНЫ
зидов окрашиваются в р"озово-фиолетовый цвет.
Элюируют метиловым спиртом. Растворитель отгоняют под ваку- Термин «сапонин», или «сапонозид», был впервые предложен
умом. Остаток растворяют в метиловом спирте, прибавляют пикрат в 1819 г. Мэлоном для вещества, выделенного Шрайдером в 1811 г.
натрия, отфильтровывают и измеряют оптическую плотность. Конт- из мыльнянки. Сапонины представляют собой сложные органиче-
ролем является смесь тех же количеств метилового спирта и пи- ские соединения гликозидного характера. Большинство из них
крата натрия. Измерение оптической плотности проводят на спект- вызывают гемолиз эритроцитов крови. Водные растворы сапонинов
рофотометре при длине волны 494 нм в кювете толщиной 1 см. (или извлечения из растительного сырья) образуют при встряхи-
С помощью градуировочного графика стандартного конвалля- вании обильную стойкую пену, подобно мыльной, в результате
токсина определяют содержание гликозидов в 1 мл элюата. чего эти вещества и получили название сапонинов от латинского
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт 95%-ный (этанол);
слова «заро» — мыло. Сапонины весьма токсичны для холоднокров-
свинца ацетат (основной) раствор; хлороформ; Na2SO4 (безводн.); метиловый ных животных (рыб, лягушек, червей). Они вызывают гибель (или
спирт (метанол); этилацетат; сурьма треххлористая; натрий пикрат; вода ди- парализуют) их даже в очень больших разведениях (1 : 1 000 000).
стиллированная. Молекулы сапонинов, как и других гликозидов, состоят из угле-
Колба с нормальным шлифом, круглодонная, вместимостью 250 мл; холо-
дильник обратный стеклянный лабораторный с нормальным шлифом; цилиндры водной части и агликона, который называется сапогенином.
мерные на 10 мл; пробирки для центрифугирования; воронки делительные вме- Посредством кислотного и ферментативного гидролиза сапонины
стимостью 100 мл; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см, микро- расщепляются на сахара и агликон (сапогенин). По количеству
пипетка измерительная вместимостью 1 мл; бумага хроматографическая; камера молекул моносахаридов (пентоз или гексоз) сапонины можно под-
хроматографическая для БХ; весы ручные; спектрофотометры СФ-4А, СФ-16;
бани водяные лабораторные; пульверизатор; центрифуга лабораторная. разделить на монозиды, биозиды, триозиды, тетразиды, пентозиды

40 41
и олигозиды — при числе моноз от шести и выше. Сапонины с двумя Почти все тритерпеновые сапонины растительного происхожде-
углеводными цепями при агликоне относятся к дигликозидам. ния можно подразделить на четыре группы: производные а-ами-
Так как углеводная часть сапонинов чаще всего состоит из не- рина, β-амирина, лупеола и дамарана:
скольких молекул моносахаридов, то гидролиз в определенных
условиях может протекать ступенчато, с постепенным отщеплением
Сахаров. Образующиеся при этом продукты частичного гидролиза
называются просапогенинами.
В состав углеводной части молекулы сапонинов входят следую-
щие сахара: D-глюкоза, D-галактоза, Ь-рамноза, L-арабиноза,
D-ксилоза, L-фруктоза, а также D-глюкуроновая и D-галактуро-
новая кислоты. Многие сапонины содержат в углеводной части но
ос-амирин
несколько остатков моносахаридов.
Сапонины стероидной группы менее богаты сахарами, в их со-
став входят 1—5 Сахаров, наиболее богаты сахарами тритерпеновые
сапонины (до 10 и более). Углеводная часть чаще всего присоеди-
нена к гидроксильной труппе при углеродном атоме С3 кольца А
углеродного скелета. Некоторые тритерпеновые гликозиды имеют
углеводную цепь при углеродном атоме С28, присоединенную О-ацил-
гликозидной связью. Сахарный компонент может быть представлен
линейной (как у большинства гликозидов других j-рупп) и разветв- НО
ленной цепочкой, например у аралозида В. лупеол дамаран
Производные α-амирина: азиатиковая и урсоловая кислоты
§ 1. Классификация выделены из растений семейства кутровых и вересковых:
По структуре сапогенина (агликона) сапонины разделяют на
две группы, значительно отличающиеся по свойствам: стероидные
и тритерпеновые гликозиды. В основе первых лежит ядро цикло-
пентанофенантрена, т. е. они близки по структуре к сердечным
гликозидам. При дегидрировании стероидных агликонов селеном
образуется 3-метил-1,2-циклопентанофенантрен (углеводород Диль-
са). Тритерпеновые агликоны в этих условиях образуют сапотален но
и 1,8-диметилпицен. азиатиковая кислота урсоловая кислота
Стероидные сапонины часто встречаются в растениях совместно Наиболее широко распространены в природе производные
с сердечными гликозидами, например у наперстянки, ландыша β-амирина, например олеаноловая кислота — агликон сапонинов,
и других растений. выделенных из многих лекарственных растений (аралия, патриния,
В основе большинства стероидных агликонов лежит спиросте- синюха, календула и др.); баррингтогенол С — агликон сапони-
нол. Наиболее характерным представителем стероидных агликонов нов, выделенных из конского каштана, чая китайского:
является диосгенин, содержащийся в различных видах диоскореи:

соон

олеановая кислота баррингтогенол С


Производные лупеола — бетулин и бетуловая кислота — выде-
лены из березы.
К подгруппе дамарана относятся агликоны сапонинов, выделен-
диосгенин ных из женьшеня.
4? 43
§ 2. Физико-химические свойства Обычно суммарный экстракт для выделения сапонинов полу-
Физико-химические свойства сапонинов изменяются в широких чают обработкой сырья полярными растворителями: метиловым
пределах и зависят от строения сапогенинов и углеводных компо- или этиловым спиртом и водой. Сырье предварительно обрабатывают
нентов. Сапонины представляют собой, как правило, аморфные петролейным эфиром или четыреххлористым углеродом для раз-
вещества. В кристаллическом виде получены лишь те представи- рушения комплексов сапонинов со стеринами.
тели этого класса соединений, которые имеют в своем составе Методы выделения суммы сапонинов из экстракта зависят
до 4 моносахаридных остатков. от их строения. Гликозиды с небольшим числом моносахаридных
Сапонины — вещества, обладающие сильной поверхностной ак- остатков (3—4) обычно плохо растворимы в воде и выпадают в оса-
тивностью, что связано с наличием в одной молекуле гидрофиль- док при разбавлении спиртовых растворов водой. Полярные сапо-
ного и гидрофобного остатка. Сапонины оптически активны. нины плохо растворимы в метиловом и этиловом спиртах и выпа-
Как правило, тритерпеновые гликозиды нерастворимы в хлоро- дают в осадок при охлаждении или продолжительном стоянии
форме, ацетоне, петролейном эфире. Растворимы в этиловом и спиртовых растворов, либо при добавлении спирта к водным и водно-
метиловом спиртах. Растворимость сапонинов в воде определяется спиртовым растворам. Кислые сапонины растворимы в водных
в первую очередь количеством моносахаридов и увеличивается растворах щелочей и выпадают в осадок при подкислении. Из спир-
с возрастанием числа последних. Гликозиды с 1—4 моносахарид- товых растворов тритерпеновые сапонины осаждают этиловым
ными остатками обычно плохо растворимы в воде. Прибавление эфиром, ацетоном, этилацетатом, а некоторые — бутиловым и изо-
этилового эфира или ацетона к спиртовым растворам сапонинов амиловым спиртами. Из водных растворов сопутствующие мало-
вызывает их осаждение, что используется в качестве метода очистки. полярные примеси извлекают этиловым эфиром, хлороформом,
Из водных растворов различные группы тритерпеновых гликозидов четыреххлористым углеродом, а тритерпеновые гликозиды — бути-
могут осаждаться различными солями свинца и гидроксидом ба- ловым или изоамиловым спиртом.
рия. На этом была основана первичная классификация сапонинов, Полученные сапониновые фракции очищают повторным пере-
сохранявшая свое значение до установления их химической при- осаждением, что, однако, не приводит к полной очистке от поляр-
роды. ных сопутствующих веществ: неорганических примесей, моно-
Важное химическое свойство тритерпеновых сапонинов — это и олигосахаридов, гликозидов других классов, органических кис-
способность образовывать комплексы с фенолами, высшими спир- лот и др. Ряд методов основан на способности сапонинов образо-
тами и стеринами. Комплекс гликозидов со стеринами распадается вывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с гидрокси-
при нагревании в ксилоле или пиридине. Это свойство иногда ис- дом бария или ацетатом свинца и комплексы с холестерином, тани-
пользуется для выделения суммы сапонинов из экстрактов расте- нами, белками. Соли затем разлагают угольной или серной кисло-
ний. тами; холестериновые комплексы — извлечением холестерина бен-
Тритерпеновые гликозиды бывают нейтральными и кислыми, золом, толуолом, этиловым эфиром или пиридином; таниновые —
что обусловлено карбоксильной группой в агликоне или присут- кипячением с водной суспензией оксида цинка; белковые — извле-
ствием уроновых кислот в углеводной цепи. чением гликозидов подходящими органическими растворителями.
Все сапонины неустойчивы по отношению к кислым агентам, Эта группа методов дает более чистую сумму сапонинов, но
под действием которых расщепляются гликозидные связи. Сапо- не является общей методикой и не гарантирует количественного
нины, для которых характерно наличие О-ацилгликозидных связей, выделения и отсутствия значительного содержания балластных
неустойчивы к действию щелочей. Тритерпеновые гликозиды, эте- веществ в отдельных случаях.
рифицированные карбоновыми кислотами, легко омыляются щело- Сапонины, образующие коллоидные растворы, очищают от при-
чами. Следует отметить, что для многих сапонинов нет строгого месей, дающих истинные растворы (моносахариды, минеральные
доказательства индивидуальности в связи с их способностью обра- вещества), с помощью диализа и электролиза. Хорошие результаты
зовывать устойчивые комплексы между собой и с другими природ- очистки сапониновых фракций от растительных пигментов и вос-
ными соединениями и поэтому их физико-химические свойства станавливающих Сахаров получены при гельфильтрации на сефа>
могут изменяться в широких пределах. дексах У-25, У-50, А-25.
Значительное распространение нашли хромЬтографические ме-
§ 3. Методы выделения тоды очистки суммы сапонинов. Гликозиды, содержащие свободные
карбоксильные группы, могут быть отделены от сопутствующих
Выделение сапонинов из растительного сырья включает следую- веществ, в том числе и от минеральных примесей, с помощью ионо-
щие стадии: 1) получение экстракта; 2) выделение из него суммы обменной хроматографии. Хроматографическую очистку суммы
сапонинов и их очистка от сопутствующих веществ; 3) разделение сапонинов проводят на оксиде алюминия, силикагеле, активирован-
сапонинов на индивидуальные гликозиды. ном угле.
44 45
В отличие от других классов природных соединений (амино- сильных после перевода в карбонильные, положение двойной
кислот, углеводов и т. п.) для сапонинов нет универсальных систем связи, конфигурация отдельных асимметрических центров).
элюирования. Для нейтральных сапонинов наиболее подходящие Установление строения углеводного остатка тритерпеновых
системы: н-бутиловый спирт — этиловый спирт — вода; «-бутило- и стероидных сапонинов осуществляется с помощью методов струк-
вый спирт — уксусная кислота — вода (в различных соотношениях, турной химии олиго- и полисахаридов. Сюда входит: 1) определе-
верхний слой); хлороформ — метиловый спирт — вода (65 : 35 : 10). ние качественного и количественного состава моносахаридов;
Для обработки хроматограмм можно использовать те же реак- 2) установление последовательности моносахаридных остатков
тивы, что и при проведении цветных реакций на сапонины. Так, в углеводной цепи; 3) определение положения гликозидных связей
для обнаружения стероидных сапонинов хроматограмму сначала в моносахаридных остатках; 4) определение размеров оксидных
опрыскивают 1%-ным спиртовым раствором SbCl3, а затем после циклов моносахаридов; 5) установление конфигурации гликозид-
высушивания H2SO4 с уксусным ангидридом образуются желтые ных центров.
пятна.
Для обнаружения тритерпеновых сапонинов применяют раствор
20%-ной H2SO4. После обработки хроматограммы этим раствором § 4. Качественное определение
с последующим нагреванием в сушильном шкафу при / = 115— Для обнаружения сапонинов в растительном сырье пользуются
120 °С в течение 15 мин появляются фиолетовые пятна. Используют реакциями, которые можно разделить на три группы: 1) реакции,
также насыщенный хлороформный раствор SbCl3 со следами SbCl6,
который дает с тритерпеновыми сапонинами розово-фиолетовое основанные на физических свойствах сапонинов; 2) реакции, осно-
окрашивание. ванные на химических свойствах сапонинов; 3) реакции, основан-
ные на биологических свойствах сапонинов.
При выяснении структуры сапонинов, как и других гликозидов, К первой группе реакций относится реакция (проба) на цено-
определяется строение агликона и углеводной части, а также образование. ShO не только чувствительная проба, но и довольно
выясняется место и способ присоединения углеводной составляющей
к агликону. характерная, так как других веществ, обладающих такой способ-
ностью к пенообразованию, в растениях не встречается.
При установлении строения санонинов помимо традиционных Ко второй группе качественных реакций относятся реакции
методов (элементарный анализ, определение молекулярной массы) осаждения сапонинов и цветные реакции.
широко используются методы УФ спектроскопии, ИК спектроско-
пии, ПМР спектроскопии. Из водных растворов сапонины осаждаются гидроксидами ба-
рия и магния, солями меди, ацетатом свинца. Причем тритерпено-
ИК спектроскопия при исследовании тритерпенов применяется вые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца, а стероидные —
для обнаружения и характеристики двойных связей, гидроксиль- основным.
ных групп, О-ацильных группировок, карбонильных, карбоксиль- Из спиртовых извлечений (или растворов) стероидные сапо-
ных, геминальных и ангулярных метильных групп. По характер-1 нины и тритерпеновые сапонины выпадают в осадок при добавле-
ным полосам поглощения СН3-групп в области 1245—1392 см"
отличают тетрациклические тритерпены от пентациклических нии спиртового раствора холестерина в виде холестеридов.
групп а- и β-амирина, а также последние друг от друга. По ИК Стероидные сапонины, так же как и сердечные гликозиды, дают
спектрам продуктов окисления оксидом рутения (IV) предложен реакцию Либермана — Бурхарда.
метод доказательства положения изолированной двойной связи Для качественных реакций готовят водный настой 1 : 10, на-
в тритерпенах. гревая измельченное растительное сырье на водяной бане в тече-
ние 10 мин. Настой после охлаждения фильтруют и проводят с ним
Строгое отнесение сапонинов к стероидам может быть сделано необходимые реакции.
на основании ИК спектров и их генинов: наличие полос 1
поглоще- Учитывая, что многие из перечисленных химических реакций
ния при 852 (866), 900 (900), 922 (922), 987 (982) см" (спирокеталь- могут давать и другие соединения, проводят еще и биологические
ная группировка нормального и изо-рядов) позволяет однозначно испытания.
отнести сапонины к стероидному ряду.
Большинство сапонинов вызывают гемолиз эритроцитов крови.
В последнее время при исследовании структур пентацикличе- Для проведения этой реакции из растительного сырья готовят
ских тритерпенов получила, распространение масс-спектрометрия настой на изотоническом растворе.
и методы ПМР спектроскопии.
Методики качественных реакций. Качественные реакции. 1. Реак-
Систематическое исследование дисперсии оптического враще- ция на пенообразование. Берут две пробирки, в одну приливают
ния оксопроизводных пентациклических тритерпенов позволяет 5 мл 0,1 н. НС1, а в другую — 5 мл 0,1 н. NaOH. Затем в обе про-
решать вопросы, связанные с доказательством их строения и сте- бирки добавляют по 2—3 капли извлечения или раствора сапони-
реохимии (установление положения карбонильных групп и гидрок- нов и сильно встряхивают. При наличии в сырье тритерпеновых
46
47
сапонинов в обеих пробирках образуется пена, равная по объему станку сушат в течение 10 мин, затем помещают в хроматографиче-
и стойкости. Если сырье содержит сапонины стероидной группы, скую камеру со смесью растворителей: безводный хлороформ —
то в щелочной среде образуется пена в несколько раз больше по метиловый спирт — вода (61 : 32 : 7) и хроматографируют при
объему и стойкости. температуре 20—25 °С. Когда фронт растворителей пройдет 16 см,
2. К 2 мл водного настоя в пробирке прибавляют несколько пластинку вынимают из камеры и влажную опрыскивают 20%-ной
капель ацетата свинца. Образуется осадок. H2SO4, затем нагревают«.в сушильном шкафу при t = 110 °С в те-
3. К 1 мл спиртового раствора сапонинов прибавляют несколько чение 10 мин. Аралозиды проявляются в виде пятен вишневого
капель 1 %-ного спиртового раствора холестерина. Образуется цвета. Допускается наличие посторонних пятен — до шести ве-
осадок. ществ неустановленной природы: пять пятен, находящихся выше
4. Реакция Либермана — Бурхарда. Для проведения этой реак- пятна аралозида А и одно пятно ниже аралозида А.
ции испытываемое вещество растворяют в ледяной уксусной кислоте Приготовление хроматографической пластинки.
и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной сер- 3 г силикагеля смешивают с 0,3 г сульфата кальция, растирают в ступке, посте-
ной кислоты (50 : 1). Через некоторое врем)? развивается окраска пенно добавляют 10 мл воды, тщательно перемешивают и ровным слоем наносят
от розовой до зеленой и синей. на стеклянную пластинку размером 13 X 18 см, которую после этого сушат на
5. Реакция Лафона. К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл воздухе в течение суток или в сушильном шкафу при t= 120—140 °С в тече-
ние 30—40 мин.
концентрированной серной кислоты, 1 мл этилового спирта и 1 каплю П р и г о т о в л е н и е 20%-н о й H2SO4. К 500 мл воды осторожно при
10%-ного раствора сернокислого железа. При нагревании появ- постоянном перемешивании приливают 100 мл концентрированной H2SO4·
ляется сине-зеленое окрашивание. Раствор после охлаждения разбавляют водой до плотности 1,136—1,142.
6. К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл 10%-ного раствора
нитрата натрия и 1 каплю концентрированной серной кислоты. § 5. Количественное определение
Появляется кроваво-красное окрашивание.
7. Гемолиз эритроцитов. К 1 мл настоя на изотоническом ра- Для количественного определения сапонинов в растительном
створе добавляют 1 мл 2%-ной взвеси эритроцитов в изотоническом сырье применяют методы, основанные на использовании биологиче-
растворе. Кровь становится прозрачной, ярко-красной (гемолиз). ских и физических свойств сапонинов, т. е. определении гемоли-
Методика качественного определения аралозидов в корнях ара- тического, рыбьего индексов и пенного числа, а также химические
лии маньчжурской (Radix Araliae mandshuricae). 10 г измельчен- методы.
ных корней аралии маньчжурской (с погрешностью не более 0,01), Количественное определение сапонинов гемолитическим мето-
проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают дом основано на предположении, что гемолитическое действие
в шлифовую колбу вместимостью 500 мл, приливают 50 мл хлоро- прямо пропорционально количеству вещества в растворе.
форма и нагревают на водяной бане с обратным холодильником Из настоя растительного сырья на изотоническом растворе
в течение 1,5 ч (температура бани 60 °С). Хлороформное извлече- готовят ряд разведений различной концентрации, затем к каждому
ние фильтруют через вату и фильтрат отбрасывают. Вату с осадком разведению добавляют по 1 мл взвеси эритроцитов (2%-ной свежей
помещают в колбу с сырьем, снова приливают 50 мл хлороформа, дефибринированной бараньей крови в изотоническом растворе)
нагревают в течение 1,5 ч. Хлороформное извлечение фильтруют и встряхивают. Через некоторое время наблюдают результаты
через воронку Бюхнера с бумажным фильтром. Сырье вместе гемолиза.
с фильтром переносят в фарфоровую чашку и оставляют стоять Ввиду того, что различные сапонины при одинаковой концен-
на сутки. Затем сырье переносят обратно в колбу, приливают трации имеют разный гемолитический индекс (механизм гемолиза
100 мл метилового спирта. Колбу с содержимым взвешивают, также различен), каждое сырье должно иметь свой стандарт —
нагревают на водяной бане с обратным холодильником и поддер- раствор чистого сапонина.
живают кипение жидкости в течение 5 ч (кипятят с капиллярами, Предложен видоизмененный метод определения гемолитического
температура бани 80 °С), по охлаждении колбу с содержимым снова индекса, который заключается в измерении диаметра гемолитиче-
взвешивают, потерю в массе пополняют метиловым спиртом, затем ского пятна, образующегося при соприкосновении кружка филь-
перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр (раствор 1). тровальной бумаги, смоченного раствором сапонина, с желатино-
1 мл раствора 1 разбавляют вдвое метиловым спиртом, получают вой суспензией эритроцитов. Однако положительный результат
раствор 2. 0,02 мл раствора 2 наносят микропипеткой на стартовую гемолитической пробы еще не является доказательством наличия
линию хроматографической пластинки размером 13 X 18 см с за- сапонинов, так как другие растительные вещества (некоторые
крепленным слоем силикагеля марки КСК. Одновременно на стар- эфирные масла, кислоты, спирты) также дают гемолиз. Надежность
товую линию той же пластинки в качестве «свидетеля» наносят пробы повышается, если гемолиз блокируется добавлением холе-
0,01 мл 0,5%-ного раствора сапарала в метиловом спирте. Пла- стерина и восстанавливается после разрушения образовавшегося
48 49
комплекса. Некоторые сапонины (хедерин, примуловые кислоты Метод основан на осаждении глицирризиновой кислоты из аце-
и др.) не образуют холестеридов. Сапонины могут также нахо- тонового извлечения 25%-ным раствором аммиака с последующим
диться в растении в виде комплекса со стеролами и не проявлять спектрофотометрическим определением.
гемолитической активности до разрушения этого комплекса. Около 2 г измельченного сырья, проходящего сквозь сито
Методы определения сапонинов, основанные на повышенной с диаметром отверстий 2 мм (точная навеска), помещают в колбу
токсичности этих соединений для холоднокровных животных с нормальным шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 20 мл
(рыб, головастиков, жаб, -червей), не имеют преимущества по срав- 3%-ного ацетонового раствора HNOg и настаивают в течение 1 ч
нению с гемолитическим индексом и сохраняют его главный недо- при частом и сильном взбалтывании. Извлечение отфильтровывают
статок — невысокую надежность, невозможность строгого отне- в цилиндр вместимостью 100 мл. Порошок корня в колбе промы-
сения исследуемых веществ к классу сапонинов. вают 10 мл ацетона и фильтруют через этот же фильтр. В колбу
Методы количественного определения сапонинов, основанные с сырьем приливают еще 20 мл ацетона, которым одновременно
на биологических и физических свойствах последних, так же как смывают порошок с фильтра, и смесь кипятят с обратным холодиль-
определение поверхностной активности, гемолитического действия ником на водяной бане в течение 5 мин. Извлечение отфильтровывают
и токсичности сапонинов, дают результаты, которые нельзя взаимно через тот же фильтр в тот же цилиндр. Экстракцию горячим ацето-
сравнивать, так как эти свойства друг от друга не зависят. Уста- ном повторяют таким образом еще 2 раза. Порошок корня промы-
новив одно из них, нельзя говорить о степени проявления второго вают ацетоном до тех пор, пока объем жидкости в цилиндре не до-
или третьего. Ни один из перечисленных методов не основан на стигнет 100 мл. Жидкость из цилиндра выливают в стакан вмести-
определении абсолютного содержания сапонинов в сырье. мостью 200 мл. Цилиндр ополаскивают 40 мл этилового спирта,
Что касается химических методов определения сапонинов в ра- который затем выливают в тот же стакан. Далее по каплям при
стительном сырье, то общих методов не существует. Описанные интенсивном помешивании добавляют концентрированный раствор
для некоторых сапонинов химические методы большей частью аммиака до появления обильного светло-желтого творожистого
недостоверны для других. Применяются гравиметрические, титро- осадка (рН 8,3—8,6 устанавливают по порозовению влажной фенол-
метрические и фотометрические методы. Особенно широко для фталеиновой бумаги).
количественного определения сапонинов используются колориме- Осадок вместе с маточной жидкостью переносят на фильтр,
трические и спектрофотометрические методы анализа. При разра- помещенный в воронку Бюхнера, жидкость отсасывают. Стакан
ботке новых методов количественного определения сапонинов прежде и фильтр с осадком промывают 50 мл ацетона в 3—4 приема. Оса-
всего учитывается химическая структура того или другого сапо- док с фильтром переносят в стакан, в котором проводилось осажде-
нина. ние, и растворяют в 50 мл воды. Полученный раствор количественно
Методика количественного определения глицирризиновой кис- переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл. Фильтр несколько
лоты в корне солодки (Radix Glycyrrhizae) (ГФ X, ст. 573, раз промывают небольшими порциями воды, присоединяя их к основ-
ст. 260): ному раствору. Доводят объем раствора водой до метки (раствор А).
30 мл полученного раствора А помещают в мерную колбу вмести-
Н3С СООН мостью 500 мл и доводят объем раствора водой до метки (раствор Б).
Определяют оптическую плотность полученного раствора на
О спектрофотометре при длине волны 258 нм в кювете с толщиной
слоя 1 см, применяя в качестве контрольного раствора воду.
Процентное содержание глицирризиновой кислоты χ вычисляют
по формуле
£>822 • 250 · 500 • 100
=
* тПООО-ПООО '
где D — оптическая плотность раствора Б; т — масса навески
глицирретиновая кислота сырья, г; V — объем раствора А, использованного для приготовле-
соон соон
ния раствора Б,, мл; 822 — молекулярная масса глицирризиновой
ч кислоты; 11 000 — молярный показатель поглощения.
.он- А о х Кон Содержание глицирризиновой кислоты в сырье должно быть
ОН не менее 6 %.
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : ΗΝΟ. 3%-ный ацетоновый раствор;
D-глюкуроновая ацетон; этиловый спирт 95%-ный (этанол); аммиак 25%-ный раствор; вода дистил-
кислота лированная.

51
Бумага фенолфталеиновая; колбы плоскодонные с нормальным шлифом содержат соответственно 0,005; 0,01; 0,015; 0,02; 0,03 г хлорида кобальта в 1 мл.
вместимостью 150 мл; цилиндры мерные на 50 и 100 мл; воронки стеклянные для Оптическую плотность растворов измеряют на спектрофотометре при длине
фильтрования диаметром 5 см; холодильник (обратный) стеклянный лаборатор- волны 518 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, и по полученным данным строят
ный с нормальным шлифом; стаканы стеклянные вместимостью 250 мл; воронки калибровочный график. Для построения графика необходимо по 3 измерения
Бюхнера; колбы Бунзена; колбы мерные вместимостью 250 и 500 мл. в каждой точке. По оси ординат откладывают значение оптической плотности, а по
оси абсцисс — содержание хлорида кобальта в 1 мл в граммах.
Методика количественного определения сапонинов в корневище Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт 95%-ный (этанол);
с корнями диоскореи ниппонской (Rhizoma cum radicibus Dioscoreae n-диметиламинбензальдегид 1%-ный раствор в 4 н. спиртовом растворе НС1;
nipponicae) (ФС 42-1521-80). От аналитической пробы сырья, измель- кобальт хлорид; НС1 (конц.); НС1 1%-ный раствор в этиловом спирте.
ченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром Колбы мерные вместимостью 50 и 100 мл; колбы конические вместимостью
100 мл; колбы плоскодонные вместимостью 100мл; магнитные мешалки; воронки
отЕерсгий 10 мм, отбирают около 20 г и измельчают до размера стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пипетки измерительные вмести-
частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. мостью 5 мл; пробирки стеклянные с нормальным шлифом; ультратермостат;
Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в пло- спектрофотометр; сита с диаметром отверстий 2 и 10 мм; весы ручные; ступка ме-
скодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют пипеткой таллическая с пестиком; мельница; шкаф сушильный лабораторный; бюретки вме-
стимостью 25 мл; бюксы с притертыми крышками; эксикатор.
50 мл 95%-ного этилового спирта и вносят остеклованный переме-
шиваюший стержень. Колбу с содержимым взвешивают (с погреш- Методика количественного определения аралозидов в корнях
ностью до 0,1 г) и нагревают на магнитной мешалке в течение 1 ч аралии маньчжурской (Radix Araliae mandshuricae):
с момента закипания растворителя. По окончании указанного
времени экстракт охлаждают до комнатной температуры, потерю
в массе восполняют 95%-ным этиловым спиртом, перемешивают
и фильтруют через бумажный фильтр 30—40 мл раствора. 5 мл
фильтрата переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 50 мл.
Объем раствора доводят до метки 95%-ным этиловым спиртом и
тщательно перемешивают (раствор А).
5 мл раствора А пипеткой переносят в стеклянную пробирку
с нормальным шлифом и сюда же прибавляют пипеткой 5 мл 1 %-ного о -'
п-диметиламинобензальдегида в 4 н. спиртовом растворе соляной
кислоты. Пробирку закрывают стеклянной пробкой, резиновым но
колпачком, встряхивают для перемешивания жидкости и нагре-
вают в течение 2 ч в ультратермостате при температуре 58 гр 0,5 °С.
Раствор охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры он
и определяют его оптическую плотность на спектрофотометре при аралозид А
длине волны 518 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см. В качестве
раствора сравнения используют смесь 5 мл раствора А и 5 мл 4 н.
спиртового раствора соляной кислоты, который также выдержи-
вают в ультратермостате при 58 ± 0,5 °С.
Процентное содержание фурастаноловых гликозидов χ в пере-
счете на абсолютно сухую массу вычисляют по формуле
α0,0101·50·10· 100-100 = а50 • 500
=
* m(100 — w)K ~ т (100 — w)K '
где а — количество хлорида кобальта, найденного по калибро-
вочному графику, г; 0,0101 — коэффициент пересчета концентра-
ции хлорида кобальта на концентрацию фурастаноловых гликози-
дов; 50 — исходный объем извлечения, мл; 10 — число разведе-
ний; т — масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья при
высушивании, %; К — поправочный коэффициент на титр кислоты.
П о с т р о е н и е к а л и б р о в о ч н о г о г р а ф и к а : 5 г хлорида ко-
бальта помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют дистилли-
рованную воду, 1 каплю концентрированной НС1 и доводят объем до метки во-
дой. В мерные колбы вместимостью 25 мл отмеряют бюреткой 2,5; 5,0; 7,5; 10,0|
12,5; 15 мл исходного раствора и объем доводят до метки. Полученные растворы ОН
аралозид В
52 , 63
вместимостью 250 мл, а водный слой — обратно в колбу для гидро
лиза и повторяют исчерпывающее извлечение бензолом 3 раза
порциями по 20 мл, каждый раз нагревая жидкость до кипения.
К объединенному бензольному извлечению прибавляют 80 мл воды,
и жидкость нагревают до кипения, затем ее переносят в делитель-
ную'воронку и после полного расслоения жидкости отбрасывают
водный слой. Бензольное извлечение отмывают от кислоты таким
образом 3—4 раза до нейтральной реакции по универсальной инди-
каторной бумаге, затем фильтруют в круглодонную колбу для отгон-
ки вместимостью 250 мл через бумажный фильтр, на который пред-
варительно помещают 5 г свежепрокаленного Na2SO4, промытого
он 10 мл бензола. Воронку и фильтр промывают 20 мл горячего бен-
•но зола 3 раза. Бензол отгоняют под вакуумом на водяной бане досуха.
Сухой остаток растворяют в смеси растворителей: метиловый
спирт — хлороформ (1:9), количественно переносят в мерную колбу
вместимостью 25 мл и объем раствора доводят этой же смесью раст-
ворителе.й до метки. 10 мл полученного раствора переносят в пло-
скодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 100 мл той же
он смеси растворителей и 5 г силикагеля марки КСК. Смесь перемеши-
аралозид С вают встряхиванием, затем количественно переносят на стеклян-
10,0 г (с погрешностью до 0,01) измельченных корней аралии ный фильтр № 4 и продукты гидролиза полностью извлекают смесью
маньчжурской, проходящих сквозь сито № 1, помещают в шлифо- растворителей: метиловый спирт — хлороформ (1 : 9) 10 раз пор-
вую колбу вместимостью 500 мл, приливают 50 мл хлороформа циями по 20 мл, после чего проводят пробу на полноту извлечения.
и нагревают с обратным холодильником на водяной бане в тече- Для этого сухой остаток от нескольких капель фильтрата раство-
ние 1,5 ч (температура бани 60 °С). Хлороформное извлечение филь- ряют в 0,2 мл уксусного ангидрида и прибавляют 1—2 капли кон-
труют через вату и фильтрат отбрасывают. Вату с осадком помещают центрированной H2SO4. Если появляется малиновое окрашивание,
в колбу с сырьем, снова приливают 50 мл хлороформа, нагревают то силикагель промывают еще.
в течение 1,5 ч. Хлороформное извлечение фильтруют через воронку Объединенный фильтрат отгоняют досуха на водяной бане под
Бюхнера с бумажным фильтром. Сырье вместе с фильтром пере- вакуумом. Сухой остаток растворяют в 30 мл пропилового спирта
носят в фарфоровую чашку и оставляют стоять на сутки. Затем при нагревании (температура бани около 50 °С), количественно
сырье переносят обратно в колбу, приливают 100 мл метилового переносят в стакан для титрования и титруют 0,1 н. NaOH в смеси
спирта. Колбу с содержимым взвешивают, нагревают на водяной бензола и метилового спирта потенциометрически. В качестве
бане с обратным холодильником и поддерживают кипение жид- индикаторного электрода применяют стеклянный электрод, элект-
"кости в течение 5 ч (кипятят с капиллярами, температура бани рода сравнения — насыщенный (в метиловом спирте) каломельный
80 °С), по охлаждении колбу с содержимым снова взвешивают, электрод. Параллельно проводят контрольный опыт. 1 мл 0,1 н.
потерю в массе пополняют метиловым спиртом, затем перемешивают NaOH соответствует 0,10422 г аммонийных солей аралозидов А,
и фильтруют через бумажный фильтр. 50 мл фильтрата (5 г исход- В, С (считая на аммонийную соль аралозидов усредненной моле-
ного сырья) помещают в колбу вместимостью 100 мл и метиловый кулярной массы). Процентное содержание аммонийных солей ара-
спирт отгоняют на водяной бане с вакуумом. Остаток растворителя лозидов А, В, С χ вычисляют по формуле:
в колбе удаляют продуванием воздуха. Сухой остаток растворяют
в 20 мл смеси: СН3СООН (лед.) — НС1 (конц.) — Н2О (3,5 : 1 : 5,5) 0,10422 (V —1^)50 0 00
и кипятят в колбе с нормальным шлифом вместимостью 100 мл m(100 — w)
с обратным холодильником на солевШ15ане (69 г хлорида кальция
С
на 100 мл воды) при температуре не выше 120 С в течение 2 ч. где V — объем 0,1 н. NaOH, израсходованного на титрование
По окончании гидролиза из выпавшего осадка проводят извлечение пробы, мл; У, —объем 0,1 н. NaOH, израсходованного на титро-
продуктов гидролиза, дважды добавляя по 20 мл бензола через вание контрольной пробы, мл; т — масса навески сырья, г; w —
холодильник при взбалтывании и нагревании жидкости до кипения, потеря в массе сырья при высушивании, %. Содержание аммоний-
затем горячий раствор переносят в делительную воронку. После ных солей аралозидов А, В, С в пересчете на абсолютно сухое
расслоения жидкости бензольное извлечение сливают в колбу сырье должно быть не менее 4,5 %.
55
54
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : силикагель марки КСК; хлороформ; § i. Классификация
метиловый спирт (метанол); H2SO4 (конц.); H2SO4 20%-ная, H2SO4 2 н.; CaSO4
(гипс); сапарал, спиртовой р-р; уксусная кислота (лед.); НС1 (конц.); СаС12; бен-
зол; Na2SO4 (безводн.); уксусный ангидрид; пропиловый спирт. В зависимости от характера заместителей в бензольном кольце
Бумага индикаторная универсальная; колбы шлифовые круглодонные с нор- фенологликозиды можно разделить на 3 группы.
мальным шлифом вместимостью 100 и 250 мл; колбы плоскодонные с нормаль- К первой группе относится арбутин, содержащийся в листьях
ным шлифом вместимостью 200 и 500 мл; цилиндры мерные на 50 мл; холодиль-
ник (обратный) стеклянный лабораторный с нормальным шлифом; воронки дели- толокнянки, брусники и бадана. Наряду с арбутином в этих расте-
тельные вместимостью 250 мл; воронки стеклянные для фильтрования диамет- ниях присутствует метиларбутин. Агликонами этих гликозидов
ром 5 см; колбы плоскодонные вместимостью 100 и 250 мл; колбы мерные вме- являются соответственно гидрохинон и метилгидрохинон:
стимостью 25 мл; воронки Бюхнера; колбы Бунзена; чашки фарфоровые; бюксы
с притертыми крышками; стекло часовое; фильтр стеклянный № 4; стаканы
стеклянные вместимостью 100 и 300 мл; микропипетка измерительная вместимо-
стью 0,2 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X 18 [см]; камера хро-
матографическая для ТСХ; пульверизатор стеклянный герметически закрытый;
сн,
бани солевые; шкаф сушильный'лабораторный; электрокофемолка бытовая.
НО
Вопросы для подготовки
.он
1. Определение сапонинов. арбутин
2. Классификация сапонинов. Примеры формул для каждой группы.
3. Характеристика сахарного компонента. Вторая группа фенольных гликозидов представлена, например,
4. Физические свойства сапонинов.
5. Основные химические свойства сапонинов. салидрозидом и салицином. Агликоны этих гликозидов 4-оксифе-
6. Методы обнаружения сапонинов в растительном сырье. нилэтанол и 2-оксифенилметанол (салициловый спирт). Наряду
7. Выделение сапонинов из растительного сырья. с фенольными гидроксилами эти агликоны имеют спиртовые гидрок-
8. На чем основано определение глицирризиновой кислоты в корне солодки? сильные группы, и гликозидирование их может быть по фенольным
9. На чем основано определение сапонинов в корневищах с корнями ди-
оскореи? и спиртовым группам:
10. Формулы диосгенина, глицирризиновой кислоты, аралозидов А, В, С.
сн,он.
Литература сн 2 он
сн2—с он
Машковский М. Д. Лекарственные средства. Т. 1.—М.: Медицина, 1977.
Мальчуковский Л. Б., Либизов Н. И. — Фармация, 1971, № 2, с. 68—71.
но
он
ГЛАВА 5. ФЕНОЛОГЛИКОЗИДЫ И ФЛОРОГЛЮЦИДЫ салидроэид
Представителем третьей группы является гликозид салициловой
ФЕНОЛОГЛИКОЗИДЫ (ГЛИКОЗИДЫ ПРОСТЫХ ФЕНОЛОВ)
кислоты, агликон которого содержит карбоксильную группу:
В группу гликозидов простых фенолов относят такие гликозиды,
которые при гидролизе расщепляются на агликоны, содержащие соон
одну или несколько гидроксильных фенольных групп при одном
бензольном кольце. Кроме фенольных гидроксилов в качестве
заместителей в агликонах могут быть оксиметильная, оксиэтильная
или карбоксильная группы.
Фенольные гликозиды достаточно широко представлены в расте- но
ниях различных семейств, например ивовых, камнеломковых, тол- он
стянковых, брусничных и др § 2. Физико-химические свойства
Фенольные гликозиды, например арбутин, обладают антимикроб-
ной и диуретической активностью. Гликозид салидрозид, впервые Фенольные гликозиды в индивидуальном состоянии представляют
изолированный из коры ивы и позднее обнаруженный в корневи- собой белые кристаллические вещества, растворимые в воде, эти-
щах и корнях родиолы розовой, обладает стимулирующим и адап- ловом спирте, ацетоне, нерастворимые в этиловом эфире и хлоро-
тогенным действием. форме. Все фенольные гликозиды оптически активны в связи с при-
56 57
дствием в их молекуле углеводного компонента (как правило, козидов широко используются химические превращения (гидро-
1ЮК03Ы). лиз, ацетилирование, метилирование и т. д.) и сравнение констант
Фенольные гликозиды, как и все О-гликозиды, характеризуются продуктов превращения с литературными данными для предпола-
юсобностью к гидролизу при нагревании с минеральными кисло- гаемого гликозида.
1ми или при термостатировании с ферментами.
При гидролизе расщепление происходит до углеводного компо- § 4. Качественное определение
:нта и соответствующего агликона. Подобный гидролиз происхо-
ΐτ и в живом организме под действием ферментов; при этом пер- Фенольные гликозиды, имеющие свободную гидроксильную
1чными продуктами метаболизма фенольных гликозидов являются группу, дают все реакции, характерные для фенолов, например,
ликон и сахар. с железоаммониевыми квасцами, реакцию диазотирования и др.
В случае если фенольный гидроксил гликозилирован, как
у салицина, реакции проводят после предварительного гидролиза
§ 3. Методы выделения и идентификация гликозида кислотами либо ферментами. Эти же качественные реак-
ции используют для обнаружения феноль-
Фенольные гликозиды извлекают из растительного материала ных гликозидов на хроматограммах.
иловым и метиловым спиртами (96, 70 и 40°). В дальнейшем В случае хроматографирования в тонком
истку спиртовых извлечений ведут общепринятым для гликози- слое силикагеля хроматограммы можно обра-
в методом. ботать кроме перечисленных реактивов еще
Выделение индивидуальных соединений проводят, как правило, и 4%-ной H2SO4 в абсолютном этиловом
годом адсорбционной хроматографии на полиамиде, силикагеле, спирте.
члюлозе. В качестве элюирующих смесей используются вода При этом фенольные гликозиды в зави-
юдный спирт, если адсорбентом служит полиамид или целлюлоза, симости от строения обнаруживаются в виде
5о различные смеси органических растворителей для всех пере- желтых, красных, оранжевых или голубых
менных адсорбентов. пятен.
Фенольные гликозиды в лекарственном растительном сырье При обработке хроматограмм раствором
~ут быть идентифицированы хроматографией в тонком слое нитрата серебра и щелочью фенольные гли-
>бента или на бумаге. козиды обнаруживаются в виде коричневых
Для хроматографирования в тонком слое сорбента используют пятен с различным оттенком. При обработке
темы растворителей: 1) н-бутанол — уксусная кислота — вода хроматограмм реактивом Паули фенольные
1 ι 5); 2) н-бутанол — уксусная кислота — вода — ксилол гликозиды в зависимости от строения прояв- Рис. 8. Схема бумаж-
2 : 3 : 4 ) ; 3) хлороформ — метиловый спирт (8 : 2). ляются в виде желтых, оранжевых или крас- ной хроматограммы
При хроматографировании на бумаге используют 5, 10, 15%-ную ных пятен. (БХ) фенологликози-
усную кислоту. Методики обнаружения арбутина в ли- дов толокнянки и бру-
Для индивидуальных веществ определяют температуру плавле- сники:
стьях толокнянки и брусники. 1. 0,5 г из-
, удельное вращение, снимают УФ и ИК спектры. Рассмотрим мельченного сырья кипятят с 10 мл воды ев толокнянки;из2—из-
/ — извлечение листь-
и ИК спектры на примере арбутина. В связи с наличием в моле- 2—3 мин и после охлаждения фильтруют. сники; 3 — раствор бру-
влечение из листьев
ар-
е фенольных гликозидов ароматических С=С-связей фенольные К 1 мл фильтрата прибавляют кристаллик бутина
козиды имеют максимум поглощения в УФ спектре при 2*70— сульфата закисного железа; жидкость окра-
нм. Максимум поглощения арбутина находится при 287 нм шивается сначала в сиреневый, затем темно-фиолетовый цвет, и,
ожет быть использован как для качественной характеристики, наконец, образуется темно-фиолетовый осадок (арбутин).
и количественного определения арбутина в растительном мате- 2. К 1 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 4 мл
ле. раствора аммиака и 1 мл 10%-ного раствора натрия фосфорно-молиб-
3 ИК спектре арбутина имеются характерные полосы при деновокислого в 10%-ной НС1; появляется синее окрашивание
1
)—3400 см" , обусловленные наличием спиртовых и фенольных (арбутин).
юксильных групп; полоса 1515, 1460, 1440 см"1 типична для 3. 0,5 г мелкоизмельченного растительного сырья заливают
этических С=С-связей. Имеется ряд полос в области 800— 5 мл этилового спирта и экстрагируют при периодическом встря-
1
см"1 (область «отпечатка пальцев»). Совпадение спектров иссле- хивании и слабом нагревании на водяной бане в течение 1 ч. Полу-
юго гликозида со спектром достоверного образца указывает ченное извлечение с помощью капилляра наносят на бумагу (3—
[дентичность соединений. Для идентификации фенольных гли- 4 прикосновения капилляра) и хроматографируют восходящим
59
способом в 5%-ной уксусной кислоте до прохождения фронта натрия, добавляют еще 2 г гидрокарбоната натрия и после его
растворителя 15—17 см (хроматограмма проходит в течение 1 ч растворения фильтруют в сухую колбу. К 50 мл фильтрата прибав-
при использовании бумаги FN-3). Хроматограмму вынимают, вы- ляют 200 мл воды и немедленно титруют из полумикробюретки
сушивают, обрабатывают раствором 10%-ной спиртовой щелочи 0,1 н. раствором иода до синего окрашивания, не исчезающего
и затем реактивом Паули. Арбутин имеет самое высокое значе- в течение 1 мин (индикатор — крахмал).
ние Rf = 0,75, отделяется от сопутствующих гликозидов и про- 1 мл 0,1 н. раствора иода соответствует 0,01361 арбутина.
является в виде ярко-красного пятна (рис. 8). Аналогичные Процентное содержание арбутина в растительном материале χ
результаты можно получить на пластинке «Силуфол» при хрома-' в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле
тографировании в системе хлороформ — этиловый спирт (7 : 3)
с последующей обработкой раствором щелочи и реактивом _ У0.01361 -2.100.100
Паули. *~ /п(100—w) '
Хроматограммы до и после обработки реактивами целесообразно
просматривать в УФ свете с целью идентификации сырья по отдель- где V — объем 0,1 н. раствора иода, израсходованного на титро-
ным компонентам. вание, мл; т — масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья
при высушивании, %.
Содержание арбутина в сырье регламентируется НТД.
§ 5. Количественное определение
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); уксусная
кислота 5%-ная; NaOH, 10%-ный раствор в метиловом спирте; реактив Паули;
Нормативно-техническая документация (НТД) предусматривает свинца ацетат (раствор); H2SO4 (конц.); сульфат закисного железа; цинковая
количественное определение арбутина в листьях толокнянки и брус- пыль; натрия гидрокарбонат; иод 0,1 н. раствор; крахмал.
Бумага хроматографическая; пластинки стеклянные; камера хроматогра-
ники. Метод определения основан на иодометрическом титровании фическая для БХ; колбы конические вместимостью 100 и 500 мл; полумикробю-
гидрохинона, полученного после извлечения и гидролиза арбутина. ретки; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; бумага фильтро-
Разработан спектрофотометрический метод определения салидро- вальная.
зида в экстракте из корневищ с корнями радиолы розовой, который
можно использовать для количественного определения салидро-
зида в растительном материале. Исходя из строения фенольных ФЛОРОГЛЮЦИДЫ
гликозидов и их УФ спектров, возможно количественное хромато-
спектрофотометрическое определение всех представителей этой Флороглюциды — одна из групп природных соединений, доволь-
группы. но широко распространенных у представителей рода щитовник.
Методика количественного определения арбутина в листьях Они представляют большой интерес для практической медицины,
толокнянки (Folium Uvae ursi) и листьях брусники (Folium Vitis имеют еще не совсем изученный химический состав. В настоящее
idaeae). Около 0,5 г (точная навеска) сырья, измельченного и про- время насчитывается не более 50 природных веществ с установлен-
сеянного через сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают в колбу ной структурой.
вместимостью 100 мл, заливают 50 мл воды и кипятят 30 мин. Эти соединения обладают различным биологическим действием:
Горячее извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью антигельминтным, желчегонным, противовирусным, противонар-
100 мл, избегая попадания растительного материала на фильтр. котическим и др. В качестве официнального в СССР и в большинстве
Растительный материал в колбе заливают 25 мл воды и кипятят фармакопеи других стран включено корневище мужского папорт-
20 мин. Горячее извлечение вместе с растительным материалом ника семейства многоножковых. Некоторые фармакопеи зарубеж-
переносят на фильтр, фильтруют и остаток на фильтре промывают ных стран допускают использование корневищ папоротников авст-
дважды по 10 мл горячей водой. К фильтрату в мерной колбе добав- рийского, игольчатого, раскидистого.
ляют 3 мл раствора ацетата свинца, перемешивают и по охлажде-
нии доводят объем до метки. Колбу нагревают на кипящей водяной
бане до полного створаживания осадка. Горячую жидкость филь- § 6. Классификация
труют в колбу, охлаждают, добавляют 1 мл концентрированной
H2SO4, колбу взвешивают, соединяют с обратным холодильником Флороглюциды являются соединениями, производными флоро-
и кипятят при слабом кипении 1,5 ч. После охлаждения потерю глюцина или пирона. Они встречаются в виде мономеров или ве-
в массе восстанавливают добавлением воды и жидкость фильтруют, ществ, связанных группой (—СН2) в димеры, тримеры или тетра-
к фильтрату добавляют 0,1 г цинковой пыли и встряхивают 5 мин. меры. Мономерные соединения в свою очередь подразделяются на:
Жидкость нейтрализуют по лакмусовой бумажке гидрокарбонатом а) бутирилфлороглюцин и его производные; б) метилбутирилфло-
60 61
роглюцин и его "метоксилированные производные; в) филициновая филиксовая кислота:
кислота и ее производные:
н>с
х_
СН„
сн а
НО-/Ч-ОН НО— •он
V-C-СзН, Ο
О
он о оно о
бутирилфлороглюция метилбутирилфлоро- филициновая
К тетрамерным соединениям относят два известных в настоящее
глюцин кислота время природных вещества, одно из них метилен-быс-норфлаваспи-
К димерным веществам относятся: а) производные бутирилфло- довая кислота.
роглюцина и метилбутирилфлороглюцина, например флораспиди-
нол; б) производные ацилфилициновых кислот: альбаспидин и его § Л. Физико-химические свойства флороглюцидов
гомологи; в) производные ацилфилициновых кислот, бутирил-
флороглюцина, метилбутирилфлороглюцина, флаваспидовая кис- Флороглюциды обладают кислотным характером, обусловлен-
лота и ее гомологи, и др., например, флаваспидовая кислота; ным гидроксильными группами, связанными с ароматическим
г) производные 2,3-дигидро-2-окси-6-пропил-у-пирона (флораспирон кольцом. Бензольное кольцо, вступая в реакцию с целым рядом
и флоропирон): реагентов, дает соединения с характерной окраской, что использу-
СН 3
ется для обнаружения флороглюцидов в растениях. Флороглюцино-
вые производные при отсутствии в их структуре пространственных
затруднений способны к образовалию межмолекулярных и внутри-
молекулярных связей. Они имеют характерную область поглощения
II Г
в УФ спектрах (215—240 и 240—380 нм); кристаллизуются в виде
веществ желтого, реже белого цвета; нерастворимы в воде, раствори-
он о
0
ОН
мы в органических растворителях (избирательно), хорошо — в ще-
флораспидинол лочах и жирных маслах.
Н3-СЧ/СН3 НзО^^Нз
§ 8. Методы выделения и идентификация
но-/\_он он-/\-он Выделение производных флороглюцина из растительного сырья
проводят экстракцией различными органическими растворителями:
о о \ с н / оА о этиловым эфиром, хлороформом, ацетоном, этиловым и метиловым
альбаспидин
т.%
сн 3
НО—/\—ОН
НА
||
о ^ Пг ' он о
флаваспидовая кислота

20 V
„-( \=о н 3 соу\-он
3600 3200 2800' 2400 2000 1800 Шо 1Ш
*Х он о Рис. 9. И К спектр аспидинола
флораспирон
спиртами. Получаемый после отгонки растворителя густой экстракт
Из тримерных соединений известно не более 5 веществ с уста- обрабатывают водным раствором гидроксида бария, оксида магния
новленной структурой. Так, из папоротника мужского выделена и т. д., в результате чего флороглюциды переходят в феноляты.
62
63
Водные растворы затем подкисляют концентрированными соляной, 2. К 1 мл извлечения добавляют 2—3 капли реактива Паули
серной или уксусной кислотами, при этом в осадок выпадает сумма по Кутачеку: вишнево-красная окраска переходит в оранже-
флороглюцидов, называемая сырым филицином. вую.
Хроматографический метод считается наиболее подходящим для 3. К 1 мл извлечения прибавляют раствор ванилина в концентри-
разделения производных флороглюцина и чаще всего используется рованной НС1: появляется красное окрашивание.
при изучении этих веществ. Для 4. К 1 мл извлечения добавляют раствор FeCl3, K4Fe(CN)e (I : 1)
iff ε этих целей применяют бумажную и 10 капель концентрированной HNO3.
хроматографию, хроматографию в Образуется темно-бурое окрашивание.
тонком слое сорбента и хромато- 5. Хроматографическое определение.
4,0 На пластинку «Силуфол», пропитанную
графический метод разделения на
колонках. Адсорбентом служат си- личонно-фосфатным буфером (рН 6,0), с
ликагель, диоксид кремния, поли- последующим активированием пластинки
3.5 амид, оксид алюминия. В качестве при температуре 70—80 °С (1 ч) наносят
подвижной фазы используются 1 °о-ный сырой филицин из мужского па-
смеси: петролейный эфир — хло- поротника (5—6%-ный раствор из иголь-
3.0 роформ (1 : 1); бензол — хлоро- чатого папоротника) в хлороформе капил-
форм (1 : 1); циклогексан — хло- ляром в одно касание на стартовую линию
роформ (1 : 1); гексан — петролей- хроматографической пластинки, высота
210 260 310 350 λ,ι
н ы й Э
ФИР (1 ! 1) с 5 % этилового жидкости в капилляре 1,5—2 см, диаметр
спирта и др. На хроматограмме для полученного пятна 2—3 мм. Высушенную
Рио. 10. УФ спектр аспидинола обнаружения производных флоро- пластинку помещают в хроматографиче-
глюцина используют их свойства скую камеру со свежеприготовленной, на-
флуоресцировать в УФ свете, а также давать окрашенные соеди- сыщенной системой н-гексан — хлороформ
нения с диазореактивами. (1 1) с 5 % этилового спирта. Время
Строение веществ устанавливается на основании элементного хроматографирования 1 ч. Хроматограмму Рис. 11. Схема хромато
анализа, температуры плавления, получения производных, в ре- высушивают на воздухе и просматривают граммы (ТСХ) флороглю-
зультате щелочного гидролиза (у ди- и полимеров), УФ, ИК, ПМР в УФ свете, отмечая зону флуоресценции. цинов игольчатого и муж-
ского папоротников:
и масс-спектроскопии. На рис. 9 и 10 приведены данные спектра Проявляют флороглюциновые производ- 1 — раствор сырого филици-
УФ и ИК для мономера аспидинола, выделенного из корневищ ные реактивом Паули по Кутачеку, отме- на из корневищ игольчатого
папоротника; 2 — раствор
мужского папоротника. чая цвет пятен (рис. 11). сырого филицина из корне-
В мужском папоротнике обнаружива- авищ мужского папоротника;
— аспидин, б — дезаспи-
§ 9. Качественное определение ются не менее 6 пятен, из них иденти- дин, я — аспидивол; гг, —
флаваспидовая кислота (тау-
Получение извлечения: 1 г измельченного сырья помещают в кол- фицированы флаваспидовая кислота, ас- томерные формы); д — а л ь
бу с притертой пробкой, заливают 4-кратным количеством хлоро- пидинол, альбаспидин; в игольчатом папо- баспидин

форма (этиловый, метиловый спирт) и оставляют на сутки, перио- ротнике не менее 8 пятен, для 4 из них
дически взбалтывая. Затем фильтруют через бумажный фильтр установлено строение (флаваспидовая кислота, аспидинол, дезас-
(извлечение «А»). пидин и аспидин).
Получение сырого филицина. 10 г измельченных корневищ сырья Хроматографическое разделение можно проводить в тонком слое
заливают восьмикратным количеством этилового спирта, взбалты- силикагеля марки КСК, смешивая 4 г силикагеля с 10 мл лимонно-
вают в течение 30 мин и оставляют на 3 ч для экстракции. Извле- фосфатного буфера с рН 6,0 и последующим активированием· пла-
чение фильтруют и упаривают в вакууме при температуре 55—60 °С стинки в течение 1 ч при t = 105—110 °С в той же системе.
до густой консистенции. Остаток обрабатывают несколько раз насы-
щенным раствором гидроксида бария и фильтруют. Фильтрат под-
кисляют концентрированной НС1 до рН 2,0. Выпавший осадок сы- § 10. Количественное определение
рого филицина отфильтровывают, промывают дистиллированной
водой и высушивают в эксикаторе. Методы количественного определения производных флороглю-
Методики качественных реакций. 1. К 1 мл извлечения добавляют цина ограничивались в фармакопеях различных стран только опре-
3—5 капель смеси равных объемов 1 %-ного раствора FeCl3 и делением сырого филицина. В литературе имеются сведения о раз-
K4Fe(CN)e. Образуется темно-зеленое окрашивание. работке хроматоспектрофотометрических методов определения фло-
64 3 п/р Гринкевич и др. 65
роглюцидов в кристаллическом порошке и сырье, в частности для Вопросы для подготовки
флаваспидовой, ацетилфлаваспидовой кислот, аспидина, аспиди-
нола. Метод основан на способности поглощать фенольные соеди- 1. Физико-химические свойства фенольных соединений.
2. Качественные реакции на арбутин и флороглюциды.
нения в УФ области при определенных длинах волн, характерных 3. Хроматографический анализ.
для этого класса соединений. 4. Качественные реакции на фенольные соединения.
Методика определения суммы сырого филицина из корневищ муж- 5. Методы количественного определения флороглюцидов и фенологликози-
дов в лекарственном сырье.
ского папоротника — Rhizoma Filicis maris (Dryopteris filix mas L.)
(ГФ X, ст. 584). 50 г псрошка корневищ экстрагируют около 2 ч
в аппарате Сокслета этиловым эфиром до тех пор, пока эфир не будет Литература
стекать бесцветным и 10 мл эфирного извлечения не перестанут Шталь Э. М. Хроматография в тонких слоях. — М.: Мир, 1965.
оставлять при испарении видимого остатка. Извлечение фильтруют,
эфир отгоняют на водяной бане до 30 мл, после чего остаток взбал-
тывают в делительной воронке с 30 мл насыщенного раствора гидро-
ксида бария в течение 5 мин. После разделения слоев водный слой ГЛАВА 6. АНТРАЦЕНПРОИЗВОДНЫЕ И ИХ ГЛИКОЗИДЫ
фильтруют. 24 мл фильтрата (40 г сырья) смешивают с 4 мл концен-
трированной НО и последовательно взбалтывают с 30, 20, 15 мл Производные антрацена широко распространены в природе.
этилового эфира. Объединенные эфирные извлечения обезвоживают Они обнаружены в высших растениях, лишайниках, некоторых
4 г безводного Na2SO4 и фильтруют через складчатый фильтр во взве- низших грибах, а также найдены в некоторых насекомых и морских
шенную колбу. Сульфат натрия и фильтр промывают этиловым организмах.
эфиром дважды по 10 мл. Эфир отгоняют на водяной бане, а остаток
Около половины известных антраценпроизводных (примерно
сушат в течение 1 ч при 100 °С. Процентное содержание филицина χ
100 соединений) выделено из высших растений. Здесь они наиболее
рассчитывают по формуле
часто встречаются в растениях семейств мареновых, гречишных,
αϊ 00-100 крушиновых, бобовых, лилейных, зверобойных, вербеновых и др.
m(100 —ш) ' Растения, содержащие антраценпроизводные, издавна находят
применение для лечения различных заболеваний кожи, а также
где а — количество сырого филицина, полученного после отгонки в качестве слабительных средств; получены препараты нефролити-
этилового эфира, г; т — масса навески сырья, вычисленная по ческого действия и антибиотики. Некоторые растения известны
отмеренному объему фильтрата, г; w — потеря в массе сырья при как источники природных красителей.
высушивании. Антраценпроизводными называют группу природных соедине-
Содержание сырого филицина в корневищах должно быть не ний, в основе которых лежит ядро антрацена различной степени
менее 1,8 %. окисленности по среднему кольцу (I, кольцо В):

Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : лимонная кислота; натрия фосфат


двузамещенный; Ва(ОН)2; стрептоцид белый; NaNO2; FeCl3; K4Fe(CN)e; ванилин;
хлороформ; к-гексан; этиловый спирт (этанол); я-бутанол (бутанол-1); НС1 (конц.);
этиловый эфир; Na2SO4; реактив Паули по Кутачеку [белый стрептоцид (3 г);
н-бутанол (14 мл); НС1 (конц., 6 мл); вода дистиллированная (200мл), хранятв тем-
ной склянке, в реактив перед употреблением добавляют натрий нитрит кристал-
лический]; лимонно-фосфатный буфер с рН 6,0 [смесь двух растворов (раствор
А — 0,2 Μ Na 2 HPO 4 и раствор В —0,1 Μ лимонной кислоты)]. Для получения
20 мл буфера смешивают 12,63 мл раствора А и 7,37 мл раствора В (рН прове- § 1. Классификация
ряют по универсальному индикатору).
Аппарат Сокслета; силикагель марки КСК; шкаф сушильный лаборатор- В зависимости от структуры углеродного скелета природные
ный; колба круглодонная с нормальным шлифом вместимостью 500 мл; бани во-
дяные лабораторные; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 ^ антраценпроизводные можно разделить на 3 основные группы:
10 см; холодильник стеклянный лабораторный; фильтры бумажные; пробирки 1) соединения, в основе которых лежит 1 ядро антрацена (мономеры);
стеклянные; камера хроматографическая для ТСХ; капилляры стеклянные; пла- 2) соединения с 2 ядрами антрацена (димеры); 3) конденсированные
стинки «Силуфол»; пластинки стеклянные для ТСХ размером 20 X 20 см; пуль- антраценпроизводные.
веризатор; колбы конические вместимостью 100 мл; весы ручные; весы лабора-
торные аналитические; ступки фарфоровые с пестиком или кофемолка электри- I. Первая группа соединений в зависимости от степени окислен-
ческая бытовая. ности основного ядра в свою очередь подразделяется на 2 под-
группы:

66 3» 67
а) окисленные формы — в их основе лежит антрахиноновое применяются для лечения почечнокаменной болезни:
ядро (II); б) восстановленные формы — производные антранола (III), О ОН
антрона (IV), оксиантрона (V):
Ч'0Н
О он о о
II ί|
О
XI
III Восстановленные формы антраценпроизводных в своей основе
О T i n содержат ядро антранола, антрона, оксиантрона. Эти соединения
II IV ν очень лабильны и легко окисляются кислородом воздуха до соот-
ветствующих антрахинонов. В связи с этим они изучены меньше.
Большинство природных производных антрацена относится Выделены фисцион-антранол (XII), франгулаэмодин-антрон
к антрахиноновому типу. (XIII), алоэ-эмодин-антрон и ряд других соединений:
Внутри подгруппы соединения разделяются в зависимости от НО ОН ОН НО О ОН
характера и расположения заместителей. В качестве заместителей
антраценпроизводные содержат гидроксильные и метоксильные У\А У\/\/Ч
группы, а также метильную группу, которая может быть окислен-
ной до спиртовой, альдегидной и кислотной. χΐΐ
Наиболее известны производные 1,8-диоксиантрахинона, или Η Η
хризацина (VI). К их числу относятся соединения, названные эмо- XIII
динами—франгулаэмодин (VII), алоэ-эмодин (VIII) и другие При лечении различных кожных заболеваний (экзема, Псориаз
аналогичные им соединения: реин (IX), хризофановая кислота (X): и др.) применяется препарат хризаробин, получаемый из южно-
американского дерева Andira araroba; основной компонент хриза-
робина — 3-метил-1,8-диоксиантранол. Это соединение может быть
получено также восстановлением хризофановой кислоты.
II. Димеры антраценпроизводных обнаружены в высших расте-
ниях, лишайниках и несовершенных грибах. В основе соединений
:нг0Н этой группы встречаются как окисленные, так и восстановленные
формы. Восстановленные формы соединены в димеры, как правило,
по среднему кольцу (в γ-положении), антрахиноны могут быть со-
VIII единены в а- и β-положениях. Молекула димерного соединения мо-
жет быть симметрична, т. е. состоять из одинаковых остатков, или
НО О ОН несимметрична — из разных. В высших растениях чаще встреча-
ΛΛλ ются димеры восстановленных форм: эмодиндиантрон (XIV), хри-
зофанолдиантрон (XV), пальмидин В и др., выделенные из различных
видов рода жостер; сеннидин А (XVI) и др. — из видов кассии.
он В кассии содержатся также и димеры антрахинона — вассианин
о (XVII), кассиамин:
IX НО О ОН НО О ОН

Указанные соединения и их гликозиды содержатся в коре кру- /Ч |


шины ольховидной, корне ревеня тангутского, листьях кассии
остролистной и узколистной, листьях алоэ, плодах жостера и дру- \/\У\ /
НО
гих видах лекарственного сырья, обусловливая их слабительное
действие.
Ч/\/\/Ч /ч / .СНз
Производные антрахинона, содержащие оксигруппы в а- и β-πο- I
но о он
ГI У
ложениях,—ализарин (XI), луцидин, пурпурин, рубиадин и их но о I
гликозиды — обладают нефролитическим действием и с успехом XIV XV
он
68
69
но о он но о он видов алоэ:
I I I О ОН
О—Кс—О-Гл
ААЛ
:оон I \ 1 I
соон о Ч/Ч/Ч/'
/Ч/Ч о
XIX
но о он
ч
но о он НО О О—Г л Гл-0 О ОН
XVI ι ι
XVII

Димеры антрахинона наиболее широко распространены в несо-


вершенных грибах (различные плесени родов Penicilliutn, Asper-
gillus).
III. Конденсированные антраценпроизводные выделены из раз-
личных видов зверобоя — гиперицин (XVIII) и др., из гречихи —
фагопирин:
НО О ОН Гл—О—Рамн—
Гл-О—Рамн—

но А/\/у\сн.,
но СНз 1 i 1
чЛЛА/ Гл—О О ОН
XXIII

но о он но о он
XVIII

Препарат зверобоя — новоиманин, содержащий конденсированные


он
2

антраценпроизводные, обладает высокой антибактериальной актив- XXIV


ностью.
Антраценпроизводные в растениях встречаются как в свободном § 2. Физико-химические свойства
виде, так и в виде гликозидов, которые называются антрагликози-
дами. В качестве агликонов в составе антрагликозидов встреча-
ются все группы антраценпроизводных, за исключением диантра- Антраценпроизводные — кристаллические вещества желтого,
хинонов. Сахарный компонент может быть представлен глюкозой, оранжевого или красного цвета. Свободные агликоны хорошо
рамнозой, ксилозой, арабинозой. Большинство антрагликозидов — растворяются в этиловом эфире, хлороформе, бензоле и других
О-гликозиды; при этом сахарный компонент может быть присоеди- органических растворителях; в воде не растворяются, но хорошо
нен к агликону в а- и β-положениях. Наиболее известные антра- растворимы в водных растворах щелочей за счет образования фено-
гликозиды лекарственных растений: руберитриновая кислота (XIX), лятов.
луцидинпримверозид, выделенные из марены красильной; хризо- В форме гликозидов антраценпроизводные хорошо растворя-
фанеин (XX), глюко-алоэ-эмодин (XXI), глюкореин — из видов ются в воде, еще лучше — в щелочи, хуже — этаноле и метаноле;
ревеня, щавеля и др.; франгуларозид (XXII) — из крушины; нерастворимы в органических растворителях — бензоле, этиловом
сеннозиды А и В (XXIII) — из кассии и т.д. Обнаружены эфире, хлороформе и др.
также С-гликозиды [барбалоин (XXIV) и др.], выделенные из При нагревании до 210 °С антраценпроизводные сублимируются.
71
70
Большинство антраценпроизводных флуоресцирует при воз- УФ спектроскопия широко используется в структурных иссле-
ждении УФ и сине-фиолетовым светом. При этом характер флуо- дованиях антраценпроизводных. В УФ области эти соединения имеют
гценции зависит как от степени окисленности основного ядра, несколько максимумов поглощения выше 200 нм. Каждый тип за-
к и от числа и расположения заместителей: антрахиноны харак- мещения характеризуется определенным набором спектральных
ризуются, как правило, оранжевой, розовой, красной и огненно- характеристик, что используется
асной флуоресценцией; антроны и антранолы — желтой, голу- при установлении структуры новых
й, фиолетовой. соединений этой группы (рис. 12).
ИК спектроскопия нашла наи-
§ 3. Методы выделения и идентификация более широкое применение при
изучении структуры антраценпро-
Для выделения антрагликозидов растительный материал экстра- изводных, так как ИК спектры
руют водой, спиртами (этиловым, метиловым) или водно-спирто- этих соединений специфичны и мо-
,ши смесями. Агликоны лучше растворимы в органических раство- гут быть использованы для иден-
ггелях, но растворимость их избирательная. Для получения агли- тификации. Наличие ароматичес-
)нов гликозиды в растительном материале»подвергают гидролизу, ких колец в антрахиноне обуслов-
1гревая с кислотой, или энзиматическому расщеплению, после ливает появление интенсивной по-
:го извлекают свободные агликоны этиловым эфиром, бензолом лосы в области 1578—1596 см"1
1и хлороформом. Антрахиноны, имеющие в качестве заместителя (рис. 13). Производные антрахи-
нона, не имеющие а-гидроксилов, 200 250 300 350 № 450 500Я,нм
зрбоксильную группу, растворяются в водных растворах карбо-
атов и гидрокарбонатов щелочных металлов и их гидроксидов дают одну сильную полосу в обла- Рис. 12. УФ спектр реина
образованием солей. Антрахиноны с гидроксилом в β-положении сти 1678—1653 см"1, обусловленную
г взаимодействуют с гидрокарбонатами, а с водными растворами карбонильными группами хиноидного кольца. α-Гидроксилы харак-
арбонатов и гидроксидов щелочных металлов дают феноляты. теризуются широкой полосой с центром 2900 см"1, что объясняется
1ещества, содержащие α-гидроксил, образуют феноляты только образованием внутримолекулярной водородной связи между а-гиД-
растворах щелочей. Различие свойств оксигрупп в а- и β-положе- роксилами и хиноидным карбонилом. β-Гидроксильные группы мо-
иях объясняется тем, что а-гидроксилы образуют внутримолеку- гут быть определены по появлению полосы в области 3400—3150 см"1,
ярную водородную связь с соседней карбонильной группой и по-
тому обладают меньшей реакционной способностью:
80
о он ο···Η-ο
60

40
о
20
На различии свойств антраценпроизводных в зависимости от
сарактера и расположения заместителей основаны все классические
летоды разделения этих соединений. Основным методом разделения 1 I I I I I I I tI I _L J_
3800 3200 2600 2000 1800 WOO №00 1200 ЮООцсм-
штраценпроизводных является хроматографический. В качестве
:орбента при этом наиболее успешно применяется полиамид; хоро- Рис. 13. ИК спектр реина
шие результаты дает также силикагель. Растворителями при раз-
целении антрагликозидов служат главным образом водно-спиртовые что типично для оксигрупп, способных образовывать межмолеку-
смеси, а при разделении агликонов — бензол, толуол, хлороформ. лярные водородные связи. У производных антрона свободная кар-
Идентификация проводится с помощью химических и физических бонильная группа хиноидного кольца поглощает в области 1654 см"1.
методов, которые дополняют друг друга. Из физических методов Таким образом, при изучении структуры антраценпроизводных
с помощью инфракрасной спектроскопии используют главным об-
наиболее полную информацию дают спектральные, которые позво- разом частоту поглощения отдельных групп и заместителей соеди-
ляют установить класс соединений, а также наличие и характер нения.
заместителей.
72 73
ЯМР спектроскопия также находит применение для изучения Таблица 1
:труктуры антраценпроизводных. Характер спектра ядерного маг-
нитного резонанса в основном определяется числом и положением Хроматограмма после проявления КОН
ароматических протонов, а также положением и строением водород- № п/п
пятна Название вещества
содержащих заместителей. рисунков
цвет пятна в флуоресценция в
видимом свете Уф свете
§ 4. Качественное определение
Рис. 14 1 Бесцветный Светло-зеленая
Методики качественных реакций. 1. Реакция со щелочью. 0,2 г 2 Слабо-фиолетовая
измельченного растительного материала кипятят в течение 2 мин 3 Ярко-фиолетовая
с 5 мл 10%-ного NaOH. После остывания смесь разбавляют 5 мл 4 Слабо-желтый Слабо-оранжевая
5 Красный Оранжево-красная
воды и фильтруют. 3 мл фильтрата помещают в пробирку, добавляют 6 Светло-желтый Светло-голубая
3 мл 10%-ной НС1 и 10 мл бензола. Осторожно перемешивают и 7 Слабо-желтый Я^ко-фиолетовая
после расслоения жидкости сливают бензольный слой, фильтруя 8 Темно-желтый Те шо-коричневая
9 Серо-коричневый Темно-серая
его через небольшой комочек ваты. Фильтрат встряхивают с 3 мл 10 Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин
10%-ного раствора аммиака.
При наличии антраценпроизводных аммиачный слой принимает
вишнево-красное (1,8-диоксиантрахиноны), пурпурное (1,4-диокси- Рис. 15 1 Бесцветный Слабо-оранжевая
2 > »
антрахиноны) или фиолетовое (1,2-диоксиантрахиноны) окрашива- 3 Слабо-желтый Слабо-темно-фиоле-
ние. товая
Сущность реакции в следующем: при кипячении растительного 4 » Светло-зеленая
материала со щелочью происходит гидролиз-антрагликозидов с об- 5 Слабо-красный Фиолетовая
6 Красный Оранжево-красная Антрагликозиды
разованием свободных агликонов. Одновременно антрон- и антра- 7 Слабо-красный Фиолетово-красная »
нолпроизводные окисляются до антрахинонов. Образовавшиеся 8 Слабо-желтый Слабо-оранжевая
оксиантрахиноны за счет фенольных гидроксилов дают феноляты, 9 Темно-желтый Темно-коричневая
растворимые в воде. При подкислении водно-щелочного извлечения 10 Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин
диссоциация фенольных гидроксилов подавляется и соединения
становятся липофильными, в результате чего при встряхивании Рис. 16 1 Розоватый Оранжево-красная
с бензолом они из водного слоя переходят в бензол; бензольный 2 Слегка сероватый Светло-зеленая
слой при этом принимает желтую окраску оксиантрахинонов. При ЗГ Красный Ярко-оранжевая ГлюкофранТулин
встряхивании бензольного слоя с раствором аммиака вновь проис- 4 > Красно-оранжевая
5 Бесцветный Светло-зеленая
ходит образование фенолятов антрахинонов и они переходят в ам- 6 Розовый Розовая
"миачный слой. Феноляты оксиантрахинонов имеют яркий вишнево- 7 Оранжевый Оранжево-красная Франгулин
красный, пурпурный или фиолетовый цвет в зависимости от поло- 8 Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин
жения оксигрупп.
2. Сублимация антраценпроизводных. На дно сухой пробирки
Рис. 17 1 Ярко-желтый Темно-желтая
помещают 0,2 г измельченного растительного материала и осто- 2 > »
рожно нагревают, держа пробирку почти горизонтально. Темпе- 3 Бесцветный Светло-зеленая
ратура сублимации 210 °С, время сублимации 10 мин. 4 Слабо-желтый Красная
Сублимат конденсируется на холодных участках пробирки 5 > Розовая
6 Слабо-оранжевый Оранжево-красная Франгулин
в виде желтых капель или желтых игольчатых кристаллов. После 7 Слабо-желтый Желтая
остывания пробирки к сублимату прибавляют 1 каплю 5%-ного 8 Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин
NaOH в этиловом спирте; появляется яркое красное или фиолето- 9 Слабо-зеленый Розовая Хлорофилл
вое окрашивание в зависимости от состава антраценпроизводных
(образование фенолятов). Сущность реакции: содержащиеся в ра- Рис. 18 1 Оранжевый Оранжевая Луцидинпримве-
стительном материале антрагликозиды при высокой температуре розид
расщепляются с образованием свободных агликонов; одновременно 2 Красный Огненно-красная Руберитриновая ки-
производные антрона и антранола окисляются до антрахинонов, слота
которые возгоняются.
74 75
Продолжение табл. 1

Хроматограмма после проявления КОН


№ π /π Название вещества
рисунков • пятна
цвет пятна в флуоресценция в
видимом свете Уф свете

3 Слабо-желтый Слабо-оранжевая
4 > >
5 Бесцветный Слабо-розовая
6 > >
7 > Слабо-фиолетовая
8 Пурпурно-фиолето- Темно-коричневая Ализарин
вый

Рис. 19 1 Бесцветный Фиолетовая •ч 11 S


0 II
0

2 Слабо-желтый Желто-зеленая о. в
3 Ярко-желтый >
0
4 Слабо-оранжевый Красная
5 Очень слабо-оран- Розовая i l i i
жевый 0

6 Бесцветный Голубая
7 Слабо-фиолетово-
красный
Красно-фиолетовая Рейн 0 0 0 0 00 о о 2 я χ
8 Зеленовато-серый Желтая ν.
9 Зеленый Красная Хлорофилл

Методики хроматографического определения. При анализе ле-


карственного растительного сырья, содержащего антраценпроиз-
водные, используется хроматография на бумаге и в тонком слое
сорбента.
При исследовании состава антрагликозидов готовят водные
извлечения; при анализе состава агликонов сырье экстраги-
руют бензолом, этиловым или метиловым спиртом, которые при о о* оопо оо по
нагревании более или менее удовлетворительно экстрагируют
как свободные антраценпроизводные, так и их гликозидные
формы.
0,3 г измельченного растительного материала нагревают с 3 мл
этилового спирта в течение 5 мин, доводя до слабого кипения. После
О И U
остывания фильтруют. 0,1 мл фильтрата наносят на линию старта Ί Η Я И
га о о
и хроматографируют в системе этилацетат — метиловый спирт — S см
вода (100 : 17 : 13) на пластинках «Силуфол». Время хроматогра-
10 S i s
фирования 30—40 мин. Хроматограмму высушивают на воздухе, 1
I
S
=
О
S

обрабатывают 5%-ным NaOH в этиловом спирте и рассматривают 1


при дневном свете и УФ свете до и после обработки. Одновременно
хроматографируют стандарт «свидетель», нанося его раствор рядом
1
1
coo оо«а оо О
к
ОО
с исследуемым извлечением. По величине Rf, характеру окраски
1* > 03 .
и флуоресценции пятен идентифицируют антраценпроизводные ис- S.'
следуемого сырья (рис. 14—19). В табл. 1 даны пояснения к рисун-
кам.
76
Продолжение табл. 1

Хроматограмма после проявления КОН


№ π /η № Название вещества
>исунков пятна
цвет пятна в флуоресценция в
видимом свете Уф свете

3 Слабо-желтый Слабо-оранжевая
4 > >
5 Бесцветный Слабо-розовая
6 > »
7 > Слабо-фиолетовая
8 Пурпурно-фиолето- Темно-коричневая Ализарин
вый
Ото
1
Рис. 19 1
2
Бесцветный
Слабо-желтый
Фиолетовая
Желто-зеленая 1
0 я о2 ξ 1*1.
I
0
О. X
3 Ярко-желтый >
4 Слабо-оранжевый Красная
5 Очень слабо-оран- Розовая
жевый !0 ' .к,
I l i l

6 Бесцветный Голубая 1 4 $
7 Слабо-фиолетово-
красный
Красно-фиолетовая Рейн
Ю 0 0 0 00 О о .^ S3
8 Зеленовато-серый Желтая
9 Зеленый Красная Хлорофилл за
ο.ε-2

Методики хроматографического определения. При анализе ле-


карственного растительного сырья, содержащего антраценпроиз-
водные, используется хроматография на бумаге и в тонком слое
сорбента.
При исследовании состава антрагликозидов готовят водные
извлечения; при анализе состава агликонов сырье экстраги-
руют бензолом, этиловым или метиловым спиртом, которые при ΟΌΟΟΟΟΟ оо
нагревании более или менее удовлетворительно экстрагируют
как свободные антраценпроизводные, так и их гликозидные
формы.
0,3 г измельченного растительного материала нагревают с 3 мл
этилового спирта в течение 5 мин, доводя до слабого кипения. После
остывания фильтруют. 0,1 мл фильтрата наносят на линию старта
и хроматографируют в системе этилацетат — метиловый спирт —
вода (100 : 17 : 13) на пластинках «Силуфол». Время хроматогра-
фирования 30—40 мин. Хроматограмму высушивают на воздухе,
обрабатывают 5%-ным NaOH в этиловом спирте и рассматривают
при дневном свете и УФ свете до и после обработки. Одновременно
хроматографируют стандарт «свидетель», нанося его раствор рядом
с исследуемым извлечением. По величине Rf, характеру окраски
и флуоресценции пятен идентифицируют антраценпроизводные ис-
следуемого сырья (рис. 14—19). В табл. 1 даны пояснения к рисун-
кам.
76
колбу с нормальным шлифом вместимостью 100 мл, соединяют
ри исследовании антрагликозидов хроматографирование ведут
с обратным холодильником и подвергают гидролизу путем кипяче-
стеме этилацетат — муравьиная кислота — вода (Ш : 2. : о); ния в течение 15 мин с 7,5 мл ледяной уксусной кислоты (при иссле-
из свободных антраценпроизводных ведут в толуоле (хромато- довании коры крушины ольховидной, корня ревеня) или с 7,5 мл
ия на бумаге). ледяной уксусной кислоты и 1 мл концентрированной НС1 (при
исследовании листьев сенны, корневища и корня марены). Во время
нагревания колбу слегка покачивают, чтобы не допустить приго-
рания растительного материала. После остывания в колбу, не сни-
мая холодильника, прибавляют 30 мл хлороформа и кипятят на
водяной бане в течение 15 мин для экстрагирования свободных
антраценпроизводных. После остывания (колбу вместе с холо-
дильником снять с водяной бани) хлороформное извлечение фильт-
руют через вату в делительную воронку вместимостью 300 мл.
Колбу дважды ополаскивают хлороформом (по 10 мл) и, пропуская
через эту же вату, выливают в делительную воронку; вату дважды
промывают хлороформом (по 5 мл).
К хлороформному извлечению в делительной воронке прибав-
ляют 40 мл воды и, слегка покачивая воронку, добиваются пере-
мешивания слоев жидкости, чтобы отмыть избыток кислоты. После
полного расслоения нижний, хлороформный, слой сливаю^ в ко-
ническую колбу вместимостью 250 мл, а водный слой отбрасывают.
Из колбы хлороформное извлечение вновь переносят в делитель-
ную воронку и приливают туда щелочно-аммиачного раствора
(5%-ного NaOH, содержащего 2%-ный аммиак), предварительно
ополоснув им колбу. Покачивая делительную воронку в виде «8»,
добиваются тщательного перемешивания слоев жидкости, чтобы
извлечь антраценпроизводные щелочно-аммиачным раствором из
Рис. 18. Схема хромато- Рис. 19. Схема хромато- хлороформа. Через 5 мин делительную воронку оставляют в покое,
граммы антраценпроизвод- граммы антраценпроиз- и после полного расслоения жидкости сливают нижний, хлороформ-
водных кассии остроли-
ных марены красильной:
стной:
ный, слой в коническую колбу; красный или фиолетовый, прозрач-
А — этанольное извлечение
А этанольное извлечение
ный водно-щелочной слой сливают в мерную колбу вместимостью
корней и корневищ марены
красильной; Б — рубери- из листьев кассии остро- 250 мл. Хлороформный слой вновь переносят в делительную во-
триновая кислота; В — лу- листной; £ — реин ронку, приливают туда 20 мл щелочно-аммиачного раствора, пред-
цидинпримверозид; Г — али-
зарин варительно ополоснув им колбу, и вновь извлекают антраценпроиз-
водные, как описано выше, до тех пор, пока водно-щелочной слой
§ 5. Количественное определение перестанет окрашиваться.
Собранные водно-щелочные извлечения доводят в мерной колбе
Большинство методов количественного определения антра- до метки щелочно-аммиачным раствором и перемешивают. 25 мл
производных предусматривает определение суммы свободных полученного окрашенного раствора помещают в круглодонную
иантрахинонов после предварительного гидролиза антраглико- колбу с нормальным шлифом, соединяют с обратным холодильни-
ов. ком и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После
В настоящее время наиболее широко применяется колориметри- остывания измеряют оптическую плотность раствора на фотоэлектро-
кий метод предложенный Аутергофом, в различных модифика- колориметре с зеленым светофильтром (λ = 525 нм) в кювете тол-
х Метод принят ГФ X для определения антраценпроизводных щиной слоя 10 мм (нулевую точку устанавливают по дистиллиро-
екарственном растительном сырье. Метод ГФ X с некоторыми ванной воде). При получении слишком интенсивной окраски рас-
мнениями (в целях безопасности работы этиловый эфир заме- твор перед колориметрированием разбавляют щелочно-аммиачным
[ хлороформом) приводится ниже. раствором.
Методика количественного определения суммы антраценпроиз- Концентрацию антраценпроизводных в колориметрическом рас-
ных (свободных и связанных в виде гликозидов). 0,05 г (точная творе, выраженную в истизине, определяют по калибровочному
1еска) порошка исследуемого сырья помещают в круглодонную
79
зфику, построенному по хлориду кобальта (СоС12-6Н2О). Для Концентрацию производных антрацена в растворе, выражен-
)го готовят от 0,2 до 3,0%-ные растворы хлорида кобальта (10— ную в хризофановой кислоте, определяют по калибровочному гра-
растворов равномерно возрастающей концентрации) и измеряют фику, построенному по растворам хлорида кобальта. Процентное
оптическую плотность на этом же фотоэлектроколориметре (ка- содержание антраценпроизводных (в пересчете на антрагликозиды)
бровочный график студенты получают готовым). По оси ординат х вычисляют по формуле
кладывают значение оптической плотности, а оси абсцисс — α100· 100-50-100-100· 1,59 _ α8·1,59
нцентрацию антраценпроизводных в миллиграммах на 100 мл, х=-
1000· 1000m25-25(100 — to) ~
ходя из того, что 1 %-ный хлорид кобальта по оптической плот-
сти соответствует 0,36 мг истизина в 100 мл щелочно-аммиачного где а — концентрация антраценпроизводных испытуемого раство-
створа. Приготовление эталонных растворов и определение их ра, найденная по калибровочному графику, мг/л; т — масса на-
тической плотности производят не менее 3 раз. вески сырья, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %;
Процентное содержание антраценпроизводных в пересчете на 1,59 — отношение средней массы антрагликозидов к средней массе
солютно сухое сырье вычисляют по формуле агликонов.
Для определения отдельных соединений антраценпроизводных
aVK пользуются хроматоспектрофотометрическими методами. Из расти-
х
тЮЦОО — w) ' тельного материала антраценпроизводные экстрагируют в виде
е а — концентрация антраценпроизводных в мг на 100 мл, най- гликозидов или свободных агликонов и разделяют с помощью
нная по калибровочному графику; V — первоначальный объем хроматографии на бумаге или в тонком слое силикагеля. Дл-я раз-
БЛОЧНОГО извлечения, мл; т — масса навески сырья, г; w — по- деления антраценпроизводных, извлекаемых метиловым спиртом
ря в массе сырья при высушивании, %; К — коэффициент разбав- (антрагликозиды и свободные агликоны), предложен метод тонко-
ния раствора перед колориметрированием. слойной хроматографии на силикагеле марки КСК в системе раство-
Методика количественного определения антрагликозидов. Около рителей бензол — метиловый спирт (4 : 1). Пятна антраценпроиз-
5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу водных на хроматограмме отмечают в УФ свете и собирают каждое
1естимостыо 150 мл, приливают 100 мл воды, перемешивают 10 мин пятно на стеклянный фильтр № 4. Фильтр промывают 0,5 н. NaOH,
нагревают с обратным холодильником в кипящей водяной бане количественно переносят в мерные колбы емкостью 50 мл и дово-
течение 15 мин при периодическом перемешивании (покачивании), дят объем до метки 0,5 н. NaOH. Через 20 мин определяют оптиче-
осле охлаждения под струей воды смесь перемешивают, дают скую плотность растворов по максимуму поглощения в УФ области.
'стояться 10 мин и фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : хлороформ; толуол; метиловый
ί мл полученного извлечения помещают в колбу вместимостью спирт (метанол); этиловый спирт (этанол); этилацетат; бензол; муравьиная кис-
лота; уксусная кислота (лед.); НС1 (конц. и 10%-ная); H2SO4 (50%-ная); NaOH
)0 мл, прибавляют 2,5 мл 50%-ной H2SO4 и нагревают в кипящей (0,5 н. и 10%-ный); NaOH (5%-ный в этиловом спирте); аммиак (10%-ный); ще-
>дяной бане при периодическом перемешивании в течение 30 мин. лочно-аммиачный раствор (NaOH 5%-ный, содержащий 2%-ный аммиак); ко-
осле охлаждения раствор переносят в делительную воронку вме- бальта хлорид; магния ацетат (1%-ный раствор в этиловом спирте).
гимостью 300 мл, а колбу ополаскивают 10 мл воды и 60 мл хлоро- Пластинки «Силуфол».
эрма. Промывные воды и хлороформ присоединяют к основному Хроматографическая бумага «С»; фотоэлектроколориметр; спектрофотометр;
УФ лампа; колбы конические вместимостью 50, 100, 250 мл; колбы круглодонные
звлечению в делительной воронке vr взбалтывают в течение 5 мин. с нормальным шлифом вместимостью 50, 100 мл; колбы мерные вместимостью
осле отстаивания хлороформный слой отделяют, а извлечение 25, 50, 100, 250 мл; воронки делительные вместимостью 100, 250, 300 мл, холодиль-
)балтывают с новой порцией (30 мл) хлороформа. К объединенному ники (обратные) стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; камеры хрома-
чороформному извлечению прибавляют 50 мл щелочно-аммиач- тографические для ТСХ; камеры хроматографические для БХ; пробирки стек-
лянные; штативы для делительных воронок; фильтры стеклянные № 4, воронки
эго раствора и осторожно взбалтывают в течение 5 мин. После стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; штативы лабораторные, плитки
гстаивания прозрачный водный слой сливают в мерную колбу электрические; бани водяные лабораторные; весы лабораторные аналитические.
яестимостью 100 мл, доводят щелочно-аммиачным раствором до
етки и перемешивают. 25 мл полученного раствора помещают Вопросы для подготовки
коническую колбу с обратным холодильником и нагревают в кипя-
1. Какие природные вещества называют антраценпроизводными?
lefl водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения жидкость 2. Что лежит в основе классификации антраценпроизводных, на какие груп-
оличественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и пы их разделяют?
оводят объем щелочно-аммиачным раствором до метки. 3. В каком виде антраценпроизводные находятся в растении?
4. Какими реакциями можно открыть антраценпроизводные в раститель-
Оптическую плотность раствора измеряют с помощью спектро- ном сырье?
отометра при λ = 525 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, исполь- 5. Что происходит с антраценпроизводными и их гликозидами при нагре-
уя в качестве раствора сравнения щелочно-аммиачный раствор. вании растительного сырья?

81
6. Чем обусловлена растворимость свободных антраценпроизводных в вод·
IX растворах щелочи? ние их в растениях колеблется от 0,5 до 30 %. Как правило, флаво-
7. Какое свойство антраценпроизводных можно использовать для установ- ноиды в растениях содержатся в клеточном соке. Максимальное
ния их локализации в тканях растения? содержание флавоноидов наблюдается в надземных частях расте-
8. Какими физико-химическими свойствами характеризуются свободные
траценпроизводные и их гликозиды? ний в период бутонизации и цветения.
9. В чем сущность метода количественного определения антраценпроиз-
дных в лекарственном растительном сырье?
10. Какие реакции можно использовать для проявления антраценпроизвод- § 1. Классификация
IX на хроматограммах?
В зависимости от степени окисления и гидроксилирования ске-
лета С„—Cg—Q, флавоноиды подразделяются на несколько групп:
Литература флавоны, флавонолы, флаваноны, флаванонолы, изофлавоны, анто-
Георгиевский В. П., Казаринов Η. Α., Каррыев М. О. Физико-химические цианы, халконы, катехины, ауроны и др.:
тоды анализа биологически активных веществ растительного происхожде-
[я. — Ашхабад: Ылым, 1976.
ФЛАВОНЫ
Смолянская П. Г., Стуккей К. Л., Александров С. В. — Фармация. 1967, ФЛАВОНОЛЫ
ι 1, с. 38.
Хайс И. М-, Мацек И. К· Хроматография на бумаге. — М.: Мир, 1962.
Шталь Э. Хроматография в тонких слоях. — М.: Мир, 1965.

хемпферол
ГЛАВА 7. ФЛАВОНОИДЫ ФЛАВАНОНЫ
ФЛАВАНОНОЛЫ

Флавоноиды представлены многочисленной группой природных


иологически активных соединений — производных бензо-у-пирона, ОН
основе которых лежит фенилпропановый скелет, состоящий из нарингенин
ОН О
аромадендрин
β—С3—Св-углеродных единиц:
ИЗОФЛАВОНЫ
АНТОЦИАНИДИНЫ
РН

6' 5' О
формонетин

Под термином флавоноиды объединены различные соединения, КАТЕХИНЫ


енетически связанные друг с другом и обладающие различным
>армакологическим действием.
Свое название они получили от латинского слова «flavus» —
келтый, поскольку первые выделенные из растений флавоноиды
шели желтую окраску. ОН
изоликвиритегенин
эпикатехин
Флавоноиды широко распространены в высших растениях, зна-
[ительно реже встречаются в микроорганизмах и насекомых. КСАНТОНЫ АУРОНЫ
Около 40 % флавоноидов приходится на группу производных
НО-
элавонола, несколько меньше группа производных флавона, зна-
[ительно реже встречаются флаваноны, халконы, ауроны.
Наиболее богаты флавоноидамй растения семейства бобовых,
О
1стровых (сложноцветных), сельдерейных (зонтичных), яснотковых
ауреузидии
[губоцветных), розоцветных, гречишных, березовых, рутовых мангиферин
ι др. В растениях флавоноиды локализуются главным образом в
хветках, листьях и плодах, реже — в корнях и стеблях; содержа- (l-C-β -D - глюкопиранозил-1,3,6,7
-тетраоксиксантон)
S2
В растениях флавоноиды встречаются как в свободном виде, Агликоны и гликозиды флаваноидов лишены запаха; некоторые
ак и в виде гликозидов. В качестве Сахаров в флавоноидных глико из них обладают горьким вкусом. Например, все известные флаво-
(идах встречаются D-глюкоза, D-галактоза, D-ксилоза, D-манноза, нон-7^-неогесперидозиды — горькие вещества. Самыми горькими
L-арабиноза, L-рамноза; из уроновых кислот обычно встречается веществами являются нарингин и понцирин, они примерно в 5 раз
Э-глюкуроновая кислота. более горькие, чем гидрохлорид хинина, причем их горький вкус
В настоящее время все известные флавоноидные гл и коз иды раз- обусловлен строением углеводного компонента неогесперидозы
(2-О-а-/.-рамнопиранозил-/)-глюкопираноза).
целяются на 3 группы.
Первая (основная) группа представлена О-гликозидами, в ко- Флавоноидные гликозиды обладают оптической активностью.
торых сахара связаны с агликоном • полуацетальной связью через Одна из характерных особенностей флавоноидных гликозидов —
ΪΤΟΜ кислорода. О-гликозиды в зависимости от количества Сахаров,
способность к кислотному и ферментативному гидролизу. Скорость
гидролиза и условия его проведения различны для различных гру*пп
положения и порядка присоединения, делятся на монозиды, био- флавоноидов. Так, флавонол-3-гликозиды легко гидролизуются при
шды, дигликозиды. Монозиды относятся к более простым соедине- нагревании со слабыми минеральными кислотами (0,1—1 %), а
ниям; биозиды при одном и том же наборе Сахаров могут разли- флавон-7-гликозиды гидролизуются лишь при нагревании с 5—10%-
заться последовательностью и порядком присоединения Сахаров, ными минеральными кислотами в течение нескольких часов. Флаво-
величиной оксидных циклов и конфигурацией гликозидных связей. ноидные С-гликозиды не гидролизуются ферментами и разбавлен-
Например, известна группа рамногликозидов, в которых рамноза ными кислотами, их гидролиз осуществляют смесью Килиани (смесь
связана с глюкозой по 2,4- или 6-углеродному атому. Далее, услож- концентрированной НС1 и уксусной кислот).
няясь, биозиды переходят в триозиды и олигозиды, у которых са-
хара могут сочетаться в прямые и разветвленные цепи. Сахара мо-
гут быть, кроме того, у двух атомов углерода (дигликозиды). § 3. Методы выделения и идентификация
Вторую группу представляют С-гликозиды, или гликофлавоно-
иды, которые можно подразделить на С-моногликозиды, С-диглико- Для выделения флавоноидов проводят экстракцию раститель-
зиды, С—О-дигликозиды, С—О-биозиды. В гликофлавоноидах угле- ного материала, как правило, одним из низших спиртов. Спиртовое
водные заместители связаны с агликоном через углеродный атом извлечение упаривают, к остатку добавляют горячую воду и после
в 6- или 8-положениях. охлаждения удаляют^нёполярные соединения (хлорофилл, жирные
К третьей группе флавоноидных гликозидов относятся так на- масла, эфирные масла и др.) из водной фазы хлороформом или
зываемые комплексные соединения. Они представляют собой аци- четыреххлористым углеродом. Флавоноиды из водной фазы извле-
кают последовательно этиловым эфиром (агликоны), этилацетатом
лированные гликозиды и в зависимости от положения ацильного (в основном монозиды) и бутанолом (биозиды, триозиды и т. д.).
заместителя делятся на гликозиды депсиноидного типа и гликозидьй
со сложноэфирной связью в сахарных заместителях. В депсиноидаж Для разделения компонентов каждой фракции используют ко-
агликоны обычно связаны с ароматическими кислотами, но известны лоночную хроматографию на силикагеле, полиамидном -сорбенте
и сложные эфиры с алифатическими кислотами. Из кислот, выде^ или целлюлозе. Элюирование веществ проводят смесью хлороформа
ленных из комплексных гликозидов, идентифицированы бензойная; с метиловым спиртом с возрастающей концентрацией метилового
п-оксибензойная, протокатеховая, n-оксикорйчная, кофейная, фе* спирта, спирто-водными смесями с возрастающей концентрацией
руловая, синаповая, уксусная, пропионовая и др. спирта, если сорбентом служит полиамид, или 5—30 %-ной уксус-
ной кислотой в случае целлюлозы.
§ 2. Физико-химические свойства Для выделения отдельных флавоноидов существуют специфиче-
ские методы. Так, для выделения рутина из бутонов софоры япон-
В чистом виде флаваноиды представляют собой кристалличе^ ской экстракцию проводят горячей водой. При охлаждении водных
ские соединения с определенной температурой плавления, желтые извлечений рутин выпадает в осадок, его отфильтровывают и очи-
(флавоны, флавонолы, халконы и др.), бесцветные (изофлавонЦ щают перекристаллизацией из. спирта.
кэтехины, флаваноны, флаванонолы), а также окрашенные в крас- Для идентификации флавоноидов используют их физико-хими-
ный или синий цвет (антоцианы) в зависимости от рН среды. В кис? ческие свойства: 1) определение температуры· плавления; 2) опре-
лой среде они имеют оттенки красного или розового цветов; в ще· деление удельного вращения ([a] D гликозидов); 3)-сравнение УФ,
лочной — синего. ' ИК, масс-, ПМР спектров со спектрами известных образцов.
Агликоны флавоноидов растворяются в этиловом эфире, ацетоне, УФ спектр флавоноидов характеризуется наличием, как пра-
спиртах, практически, нерастворимы в воде. Гликозиды флавонои- вило, двух максимумов поглощения. Положение максимумов и их
дов, содержащие более трех остатков сахара, растворяются в воде; интенсивность характерны для различных групп флавоноидов.
но нерастворимы в эфире и хлороформе. Флавоноловые гликозиды производные кверцетина (например, ру-
85
гин) имеют 2 максимума поглощения при 258 и 361 им и «плечо» 2. Борно-лимонная реакция. 5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы
266 нм. Для целей идентификации вещества используются положе- взаимодействуют с борной кислотой в присутствии лимонной (или
яия максимумов и «плеча», величина £|%,· Эта величина для рутина щавелевой), образуя ярко-желтое окрашивание с желто-зеленой
равна 325,5, в случае моногликозида кверцитрина она лежит в пре- флуоресценцией (образование батохромного комплекса):
целах 350, в то время как у агликона (кверцетина) составляет 718.
УФ спектроскопия успешно используется для установления сво-
бодных ОН-групп в молекуле флавоноида путем добавления различ-
ных реактивов (ацетата натрия, метилата натрия, борной кислоты
: ацетатом натрия, хлористого алюминия и т. д.). При добавлении
этих реактивов происходит смещение максимумов поглощения, ха-
рактерное для гидроксильных групп в различных положениях.
В ИК спектре флавоноидов имеются полосы поглощения, ха-
рактерные для различных группировок. Так, рутин имеет широкую
полосу 3200—3500 см"1, обусловленную фенольными и спиртовыми
гидроксильными группами: полоса 1660 см"1 принадлежит карбо-
нильной группе; ароматические С=С-связи дают ряд полос 1610,
1580, 1510, 1460 см"1. Важной для идентификации флавоноидов
является так называемая область «отпечатка пальцев» 800— 3. Реакция с треххлористой сурьмой. 5-оксифлавоны и 5-окси-
флавонолы, взаимодействуя с треххлористой сурьмой, образуют
1200 см"1. Совпадение полос указанных группировок и области
комплексные соединения, окрашенные в желтый или красный цвет:
«отпечатка пальцев» служит надежным признаком- идентичности
веществ.

§ 4. Качественное определение
Общие реакции, специфичные для всех групп флавоноидов, от-
сутствуют. Наиболее часто используются следующие реакции.
1. Дианидиновая реакция или проба Chinoda. Флавонолы, фла-
ваноны и флавоны при восстановлении магнием в присутствии соля-
ной кислоты дают красное или оранжевое окрашивание, обуслов-
ливаемое образованием антоцианидинов: ·

НС
хм 4. С раствором аммиака флавоны, флаваноны, флавонолы и
ОН Mg+HCi флаванонолы дают желтое окрашивание, при нагревании перехо-
[2Н]+ дящее в оранжевое или красное; халконы и ауроны тотчас же дают
Ч красное или пурпурное окрашивание. Чистые катехины окраши-
НОН' ОН вания не дают, однако присутствие даже в небольшом количестве
хроменол примесей (продуктов окисления) вызывает появление желтой окрас-
ки. Антоцианы в присутствии аммиака или карбоната натрия дают
синее или фиолетовое окрашивание.
5. Катехины с 1%-ным- ванилином в концентрированной НС1
С1- образуют красно-малиновое окрашивание (производные флороглю-
цина и резорцина).
6. Флавоны, халконы, ауроны, содержащие свободные орто-
он гидроксильные группировки в кольце В, при обработке спиртовых
цианиднн хлорид растворов средним уксуснокислым свинцом образуют осадки, окра-
Халконы νί ауроны цианидиновой реакции не дают, но при до! шенные в ярко-желтый и красный цвета. Антоцианы образуют
бавлении концентрированной НС1 (без магния) образуют красной] осадки, окрашенные как в красный, так и в синий цвета.
окрашивание за счет образования оксониевых солей. I 7. С целью обнаружения флавоноидов в растительном материале
87
широко используется хроматография на бумаге и в тонком слое лота (15%-ная); A1C1S (10%-ный раствор в этиловом спирте); рутин; квер-
цетин.
сорбента. Обнаружение компонентов на хроматограмме осуществля- Бумага хроматографическая; бумага фильтровальная; колбы с нормальным
ется просматриванием их в УФ свете. При этом флавоны, флаво- шлифом вместимостью 25 мл; колбы конические вместимостью 25 мл; воронки
нол-3-гликозиды, флаваноны, халконы обнаруживаются в виде ко- стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пробирки стеклянные; капилляры
стеклянные; чашки Петри; УФ лампа.
ричневых пятен; флавонолы и их 7-гликозиды — в виде желтых
или желто-зеленых пятен; ксантоны в виде оранжевых пятен. Изо-
флавоны при этом не проявляются. После просматривания в УФ
свете хроматограммы можно обработать одним из реактивов § 5. Количественное определение
(5%-ным спиртовым раствором А1С13 с последующим нагреванием
при 105 °С в течение 3—5 мин; 5%-ной SbCls в четыреххлористом
углероде; 2%-ным спиртовым раствором щелочи), что позволяет В последние годы все большее распространение получают раз-
получить зоны с более яркой флуоресценцией в УФ свете. личные физико-химические методы анализа, которые имеют ряд
Методики качественного определения. Приготовление извлечения существенных преимуществ в сравнении, например, с гравиметри-
из растительного сырья: 1 г измельченного сырья (трава гречихи, ^ ческими и титрометрическими методами, а именно быстрота и точ-
бутоны софоры японской, цветки пижмы, копеечника желтеющего ность определения, обнаружение даже незначительных количеств
и др.) помещают в колбу вместимостью 25 мл и заливают 10 мл эти- и, что особенно^ажно, возможность выделения отдельных флаво-
лового спирта. Колбу соединяют с обратным холодильником и на- ноидов из растительного сырья. К таким методам относятся фото-
электроколориметрия, спектрофотометрия, денситометрия с ис-
гревают на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания пользованием хроматографии на бумаге и в тонком (закрепленном
спирта в колбе. После охлаждения полученное извлечение фильт- и незакрепленном) слое сорбента. Хроматография используется
руют через бумажный фильтр. как для очистки, так и разделения суммы флавоноидов на отдель-
Качественные реакции. 1. Цианидиновая проба (проба Chinoda). ные компоненты.
К 2 мл извлечения добавляют 5—7 капель концентрированной НС1
и 10—15 мг металлического Mg или Zn, через 3—5 мин наблюдается Особенно ценным считается хроматоденситометрический метод,
красное, оранжевое, розовое окрашивание. Для ускорения реакции сущность которого заключается^ в выделении и разделении флаво-
и усиления окраски рекомендуется подогреть реакционную смесь ноидов с непосредственной количественной денеитометрической
(2—3 мин) на кипящей водяной бане. оценкой окрашенной зоны на хроматограмме. Метод имеет преиму-
щества в быстроте проведения анализа и точности определения,
2. Реакция с раствором основного ацетата свинца. К 1 мл извле-
так как в данном случае исключается стадия элюирования.
чения добавляют 3—5 капель 2%-ного основного ацетата свинца. Фотоколориметрический метод основан на цветных реакциях
Появление желто-оранжевого окрашивания свидетельствует о на- флавоноидов с солями различных металлов (алюминия, циркония,
личии флавоноидов. титана, хрома, сурьмы), с лимонно-борным реактивом и на реакции
Х р о м а т о г р а ф и ч е с к о е о п р е д е л е н и е . На круг-4 восстановления цинком или магнием в кислой среде. Известна
лый диск хроматографической бумаги на расстоянии 0,5 см от центру цветная реакция флавоноидов с азотнокислым и уксуснокислым
наносят исследуемые извлечения травы гречихи, бутонов софоры» уранилом, позволяющая количественно определять рутин в смеси
травы копеечника желтеющего и в качестве «свидетелей» — спирте** с кварцетином.
вые растворы рутина и кверцетина. Диаметр пятна не должен npej Учитывая проявление флавоноидными соединениями слабо вы-
вышать 5 мм. В центр диска вводят фитиль из хроматографической раженных кислотных свойств (что обусловлено наличием в моле-
бумаги. Хроматографирование проводят в чашках Петри, в качеству куле фенольных гидроксил"ов), для анализа может быть применен
растворителя используют 15%-ную уксусную кислоту. Экспозиций метод кислотно-основного титрования в неводных растворителях:
20—25 мин. Хроматограммы высушивают до испарения раствори·! диметилформамиде, диметилсульфоксиде, а также ацетоне.
теля и просматривают в УФ свете. Отмечают зоны: рутина (корич^ Сравнительно редко для количественного определения флаво-
невая), хлорофилла (красная), кверцетина (желтая), ксантонод ноидов применяют полярографию и метод амперометрического
(оранжевая). Обрабатывают хроматограмму парами аммиака, от! титрования.
мечают переход окраски в желто-зеленую или опрыскивают 1 %-ньп| Методика количественного определения рутина в траве гречихи
спиртовым раствором хлорида алюминия или хлорокиси циркония! (Herba Fagopyri). Рутин широко распространен в природе. Основ-
После высушивания хроматограммы повторно просматривают i ными источниками его получения являются бутоны софоры япон-
УФ свете. Образуются ярко флуоресцирующие желто-зелены^ ской (Sophora japonica L. сем. бобовых — Fabaceae (Leguminosae))
комплексы с А1 (III) или Zr (III). ι и трава гречихи (Fagopyrum sagittatum Gilib, сем. гречишных —
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); Η Polygonaceae). Определение содержания рутина в сырье проводят
(конц.); Mg (металл.); свинца ацетат основной (2%-ный раствор); уксусная кв
88
спектрофотометрическим методом: этанольного экстракта, взятый для нанесения на хроматограмму,
мл; V3 — объем элюата; Dm — оптическая плотность раствора
при λ = 363 нм; Djc% — удельный показатель поглощения рутина
при λ = 363 нм (268,4); т — масса навески сырья, г; w — потеря
в массе сырья при высушивании, %; 0,667 — коэффициент пере-
счета на 20 мл экстракта; / — толщина слоя, см.
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); бутиловый
спирт (м-бутанол); уксусная кислота (лед.); диоксан; силикагель марки ЛС 5/40;
рутин.
Бумага фильтровальная; тсолбы круглодонные с нормальным шлифом вме1
стимостью 100 мл; колбы мерные вместимостью 20 мл; колбы плоскодонные вме-
стимостью 50 мл; холодильники (обратные) стеклянные лабораторные с нор-
мальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пла-
стинки стеклянные для ТСХ размером 9 X 15 см; фильтры стеклянные № 4; пи-
но он н( петки измерительные вместимостью 1 мл; бюксы с притертыми крышками; сита
' он с диаметром отверстий 1 мм; весы ручные; весы лабораторные аналитические;
рутин-З-рутинознд кверцетина шкаф сушильный лабораторный; эксикатор; спектрофотометр СФ-4А.

1 г (точная навеска) измельченной травы гречихи (размер частиц Методика количественного определения суммы флавоноидов в со-
1 мм) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, до- цветиях пижмы обыкновенной (Flores Tanaceti). 1 г (точная на-
бавляют 30 мл 95%-ного этилового спирта. Содержимое колбы веска) измельченных соцветий пижмы помещают в пакетик из
взвешивают. Затем к колбе присоединяют обратный (шариковый) фильтровальной бумаги и экстрагируют в аппарате Сокслета (вме-
холодильник и проводят экстракцию на кипящей водяной бане стимостью 100 мл) хлороформом в течение 3 ч. Хлороформное из-
в течение 1,5 ч. После этого колбу охлаждают до комнатной темпе- влечение отбрасывают, а пакетик с навеской высушивают и экстра-
ратуры, взвешивают и доводят до первоначальной массы спиртом. гируют в круглодонной колбе с обратным холодильником на водя-
Этанольный экстракт фильтруют через бумажный фильтр. 20 мл ной бане 30 мл метилового спирта в течение 3 ч, периодически пере-
полученного экстракта упаривают досуха, сухой остаток раство- мешивая. Берут 20 мл извлечения и метиловый спирт отгоняют
ряют в 5 мл этилового спирта, фильтруют через бумажный фильтр. досуха. Сухой остаток растворяют в 20 мл дистиллированной воды,
количественно переносят в делительную воронку вместимостью
0,03—0,05 мл полученного экстракта наносят на линию старта 50 мл и очищают дважды по 15 мл четыреххлористым углеродом.
стеклянной пластинки 9 X 15 см с закрепленным слоем силикагеля
марки ЛС 5/40 (Чехословакия) в виде полос — три полосы иссле- Очищенный водный экстракт пятикратно обрабатывают 20 мл
дуемого раствора и одну полосу «свидетеля». Пластинку сушат на этил ацетата, дожидаясь' каждый раз полного расслаивания фаз.
воздухе в течение 10 мин и хроматографируют в системе н-бутанол— Объединенный этил ацетатный'экстракт упаривают в вакууме до-
ледяная уксусная кислота — вода ( 4 : 1 : 2). После того как фронт суха и сушат остаток в течение I ч в сушильном шкафу при / = 65 °С.
растворителя пройдет 11—12 см, пластинку вынимают из камеры Высушенный остаток растворяют в небольшом объеме этилового
и сушат на воздухе до исчезновения запаха растворителей. В УФ спирта и переносят количественно в мерную колбу вместимостью
свете отмечают пятна рутина, флуоресцирующие темно-коричневы^ 25 мл, доводят объем до метки этиловым спиртом (раствор А).
светом (Rf ~ 0,68). Отмеченные зоны силикагеля с рутином и зон}! 0,5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл
холостого опыта количественно переносят в колбы вместимостьк] и объем доводят этиловым* спиртом до метки (раствор Б).
25 мл и элюируют 10 мл смеси диоксан — вода 1 : 1 при встряхич Определяют оптическую плотность раствора Б на спектрофото-
вании в течение 1 ч. Раствор фильтруют через бумажный фильтр! метре в кювете с толщиной слоя 1 см при λ = 330 нм.
Оптическую плотность полученных элюатов измеряют на спею Процентное содержание суммы флавоноидов χ вычисляют по
формуле
трофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волна _ 25Щ-Ю0
363 нм на фоне элюата холостого опыта. , Х
Процентное содержание рутина в сырье в пересчете на абсолютна
сухое сырье вычисляют по формуле где D — оптическая плотность испытуемого раствора; 25 — объем
, 100 ' раствора А, мл; К — коэффициент разведения раствора А, равный
Х
" VaD}0/SMm(100-ю) · 0,667/' 100; £}ί4 — удельный показатель поглощения, равный 560,8; т —
где Κι — коэффициент элюирования (1,195); Vt — объем этанолу навеска сырья в расчете на взятый аликвот, г; w — потеря в массе
ного экстракта после растворения сухого остатка, мл; У2 — объе| сырья при высушивании, %; / — толщина слоя, см.

90 £1
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); метило-ί фотометрируют при λ = 353 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
спирт (метанол); хлороформ; четыреххлористый углерод; этилацетат; вода| Процентное содержание суммы флавоноидов χ в абсолютно сухом
тил. \ сырье в пересчете на гомоориентин рассчитывают по формуле
Бумага фильтровальная; аппарат Сокслета; колбы плоскодонные вмести- <а
тью 200 мл; колбы круглодонные с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; * 50-50-1,0ШЛС100 ШОК
бы мерные вместимостью 2& и 50 мл; пипетки измерительные вместимостью ι *~ 381,4/п(100—к;) *" т(Ю0—ш)'
20 мл; цилиндры мерные на 50 и 100 мл; воронки делительные вместимостью
ил; бюксы с притертыми крышками; весы ручные; весы лабораторные анали-·; где т — масса навески сырья, г; D — оптическая плотность иссле-
еские; эксикатор; установка для отгонки растворителей; шкаф сушильный j дуемого раствора при λπ,βχ = 353 нм; 50 — объем раствора А, мл;
ораторный; спектрофотометр СФ-4А. < 50 — число разведения; 381,4 — удельный показатель поглощения
Методика количественного определения суммы флавоноидоб в траве\ (Е\%) гомоориентина при Хюах = 353 нм; w — потеря в массе сырья
педецы копеечниковой (НегЪа Lespedezae hedysaroidis). В основу^ при высушивании, %; К — инструментальная поправка; 1,01 —
}работанного метода количественного определения суммы флаво-j поправочный коэффициент при элюировании суммы флавоноидов
ядов в надземной части леспедецы копеечниковой (Lespedezd с полиамидного сорбента.
lysazoides сем. бобовых — Fabaceae (Leguminosae)) положено вы-1
гение суммы флавоноидов и определение оптической плотности| Величину инструментальной поправки (К) на используемые кюветы и спек-
трофотометр определяют следующим образом. Точную навеску дихромата ка-
:твора в этиловом спирте при длинноволновом максимуме поглсГ-J лия (ДК). высушенного до постоянной массы 50 мг (квалификация «ХЧ»,
ния (353 нм) с последующим расчетом процентного содержания! ГОСТ 4220—75), растворяют в 1 л Ο,ΌΟδ Μ HaSO4 и определяют оптическую плот-
удельному показателю поглощения чистого гомоориентина: } ность D раствора при λ = 353 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Вычисляют экс-
периментальную величину удельного показателя поглощения дихромата калия
•он ; (£}%) по формуле
ЮУР353

где т — масса навески дихромата калия, г; V — объем раствора, л.


Величину К вычисляют по формуле

НОН2С к 65.38
№)дк'
где 65,38 — значение удельного показателя поглощения раствора дихромата калия
при λ = 358 нм, полученное на приборе, на котором- разработана методика.
но Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); NaCl
10%-ный; HjSC^; калия дихромат.
гомоорнентин Аппарат Сокслета; колонки стеклянные диаметром 2,5 см; колбы мерные
(лютеолнн-6-С-р-0-глюкопираноэнд) вместимостью 50 мл; пипетки измерительные вместимостью 1 и 10 мл; цилиндры
мерные на 10, 100 и 1000 мл; весы ручные; весы лабораторные аналитические;
Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья (размер частиц сита с размером отверстий 1—2 мм; бюксы с притертой крышкой; эксикатор;
шкаф сушильный лабораторный; спектрофотометр СФ-4А.
-2 мм) экстрагируют этиловым спиртом в аппарате Сокслетй
течение 4 ч. Извлечение упаривают досуха, сухой остаток раствор Вопросы для подготовки
нот в 10 мл горячего 10%-ного NaCl, раствор охлаждают, фильтр 1. Что такое флавоноиды?
тот через вату в колонку полиамидного сорбента (диаметр κοή 2. Классификация флавоноидов. Формулы.
шки 2,5 см, количество полиамида 1,5 г). Колбу повторно промыв 3. Распространение флавоноидов в растительном мире.
нот 5 мл 10%-ного NaCl и раствор фильтруют в колонку с полйай] 4. Локализация флавоноидов в растениях.
адом. з 5. Физико-химические свойства флавоноидов.
Сумма флавоноидов адсорбируется в верхнем слое полиамида! 6. Методы выделения флавоноидов нэ лекарственного растительного сырья.
олонку с полиамидом промывают 30 мл воды. Элюирование суммц 7. Качественные реакции на флавоноиды.
8. Хроматографический анализ.
навоноидов с сорбента проводят 50 мл этилового спирта. Когда 9. Методы количественного определения флавоноидов в лекарственно»
>на флавоноидов подходит к нижней части сорбента (в УФ свет! растительном сырье.
фактерное свечение), раствор собирают в мерную колбу вмести^
хтью 50 мл. Раствор доводят спиртом до метки и тщательно nepej Литература
ешивают (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колб^ Януляс В. П., Глызии В. И. Тезисы докл. II съезда фармацевтов Литов-
ской ССР. Каунас, 1977, С. И.
иестимостью 50 мл и объем доводят до метки этиловым спиртом) Адиходжаева К- Б., Банысовскяй А. И., Глызин В. И., Смирнова Л. П. Ж- —
олученный раствор после тщательного перемешивания спектру Фармация, 1977, № 3, с. 24.
А
ι · i 93
ГЛАВА 8. КУМАРИНЫ 1. Кумарин, дигидрокумарин и их гликозиды:
Кумарины — природные соединения, в основе которых лежит
s/Ч У\/\ S\/\
бензо- α-пирон (лактон цыс-ор/ло-оксикоричной кислоты):

кумарин дигидрокумарин n
Гл
мелилотозид
Все эти соединения обнаружены в траве донника лекарственного.
2. Окси-, метокси- (алкокси-) и метилендиоксикумарины: а) с
ццс-орто-оксикоричная кислота
кумарин гидроксильными или алкоксильными группами в бензольном
кольце (умбеллиферон, эскулетин, остхол и др.):
Кумарины широко распространены в растительном мире, осо-|
бенно среди представителей семейств сельдерейных (зонтичных),!
бобовых, рутовых. В природе чаще всего встречаются наиболее!
простые производные кумарина и фурокумарина. Основное коИ
личество представителей соединений этой группы найдено в свобод-; D e n
ном состоянии и лишь незначительное число в виде гликозидов. умбеллиферон эскулетнн
Кумарины локализуются в различных органах растений, чаще Эти соединения широко распространены в растениях семейства·
всего в корнях, коре, плодах. Содержание кумаринов в разных сельдерейных (зонтичных), рутовых;
растениях колеблется от 0,2 до 10 %, причем часто можно встре- б) с гидроксильными или алкоксильными группами в пироно-
тить 5—10 кумаринов различной структуры в одном растении. вом кольце (феруленол). Феруленол обнаружен в различных видах
Кумарины обладают антикоагулянтными свойствами. Дикумарол ферул сем. сельдерейных (зонтичных).
был предложен как препарат для профилактики и лечения тромбозов 3. Фурокумарины, содержащие заместители в бензольном и фу-
и тромбофлебитов. На основе дикумарола получены синтетические рановом кольце: а) производные псоралена, т. е. фурокумарины,
препараты, обладающие более высокими антикоагулянтными свой- фурановое ядро которых сконденсировано с кумарином в 6,7-поло-
ствами, i жении (псорален, ксантотоксин, бергаптен, изопимпинеллин и др.):
Некоторые кумарины обладают фотодинамической активностью,^
т. е. способны повышать чувствительность кожи к ультрафиолето- 14'
вым лучам, и поэтому находят применение в терапии витилиго та·*
кие препараты, как аммифурин из плодов амми большой, бероксаа ^^Р^
из плодов пастернака посевного, псорален из плодов псоралеи ко-,
стянковой и др. \ осн 3
Ьсорален
Многие кумарины обладают спазмолитической активностью; ко- ксантотоксин
ронарорасширяющее действие оказывают виснадин и дигидросами-
дин из корней вздутоплодника сибирского, атамантин из корней осн,
и плодов горичника горного, птериксин из порезника густоцветного
и др. Некоторым кумаринам свойственна антимикробная актив-;
ность (остхол из жгун-корня); ряд кумаринов обладает экстрогенноЯ
активностью (куместролы клевера). Таким образом, кумарины хЫ
растеризуются разнообразным действием на организм человека^
однако широкого использования в медицине они не получили и» бергаптен
пеуцедашш
за отсутствия оптимальных лекарственных форм, создание который ОСН,
затруднено плохой растворимостью кумаринов в воде. ^

§ 1. Классификация ;
Все известные кумарины в зависимости от их химической струю
туры делят на следующие группы.
5
осн 3
юошшшшеллин
94
Псорален выделен из плодов и корней псоралеи костянковой и дру- 5. 3,4-бензокумарины:
гих видов сем. бобовых: ксантотоксин, бергаптен, изопимпинеллив он
выделены из пледов амми большой и пастернака посевного сем.
сельдерейных (зонтичных); пеуцеданин — из корней горичника Мо- V Y V "
риссона и других видов сем. сельдерейных (зонтичных); г
б) производные ангелицина, т. е. фурокумарина, фурановое]
ядро которого сконденсировано с кумарином в 7,8-положении (ан-,
гелицин, атамантин и др.):
/
он
эллаговая кислота
Эллаговая кислота обнаружена в растениях сем. сумаховых, розо-
цветных и др.
6. Кумарины, содержащие систему бензофурана, сконденсиро-
\ н "нс - о - с - с н — сн(сн3)2 ванную с кумарином в 3,4-положениях:
С II
о
,—СН(СН 3 ) 2

н3с
ангелицнн
(изопсорален) куместрол
Куместролы выделены из различных видов клевера сем. бобовых.
7. Некоторые другие более сложные соединения, в состав ко-
Вйе эти соединения широко распространены в растениях сем. сель8! торых входит, кумариновая система.
дерёйных (зонтичных). *\
4. Пиранокумарины, содержащие ядро пирана, сконденсирован^ § 2. Физико-химические свойства
ное с кумарином в 5,6; 6,7; 7,8-положениях и имеющие замеспЦ
Выделенные в индивидуальном состоянии кумарины — кристал-
тель в пирановом, бензольном или пироновом кольце (дигидроеами1
лические вещества, бесцветные или слегка желтоватые. Кумарины
дин, виснадин, ксантилетин, птериксин и др.): хорошо растворимы в органических растворителях: хлороформе,
этиловом эфире, этиловом спирте, жирах и жирных маслах-. В воде
кумарины, в большинстве случаев, нерастворимы; гликозиды раст-
воряются, как правило, в воде и практически нерастворимы в орга-
нических растворителях.. Кумарины хорошо растворяются в водных
растворителях щелочей (особенно при н азван ии) за счет образо-
вания ^солей оксикоричных кислот. При нагревании до 100 °С
кумарины возгоняются в виде игольчатых кристаллов.
Многие кумарины проявляют очень характерную флуоресцен-
I /CH, цию при УФ возбуждении в нейтральных спиртовых растворах,
в растворах щелочей и концентрированной серной кислоте в ви-
ь
О—С-СНа-СН<(
Ν:Η

дигндросамиднн
8

внснадив
димой области спектра. Особенно этим отличаются производные
умбеллиферона, "проявляя ярко-голубую флуоресценцию. В ще-
лочной среде флуоресценция наиболее интенсивная, при подкисле-
нии флуоресценция становится менее интенсивной и характер
флуоресценции меняется.
Дигидросамидин и виснадин выделены из корней и плодов вздутй В электронных спектрах поглощения кумаринов наблюдаются
плодника сибирского сем. сельдерейных (зонтичных). ' характеристические частоты. В области выше 200 нм имеется две
4 и/р Гринкевнч в др. 97
96
полосы поглощения — соответственно 210—270 и 290—350 нм спектры кумаринов характеризуются интенсивным пиком молеку-
(рис. 20). Характеристичность этих Спектров поглощения обуслов- лярного иона (М+), а также пиками М+ = 28 и М+ = 2-28, отвеча-
лена хромофором, включающим в себя сопряженные между собой ющими однократной и двукратной потере СЮ.
α-пироновое и бензольное кольцо. Фрагментация кумарина под действием электронного удара
Кумарины имеют характерные спектры поглощения в инфракрас- может быть представлена следующей схемой:
ной области. В кумаринах, как и в α-пиронах, полосы валентных
колебаний карбонильной группы лежат -со -со
ige в области 1750—1700 см"1, кроме того,
is кумарины дают сильные полосы погло-
щения в области 1620—1470 см"1; обус- В циклической системе кумарина, · состоящей из бензольного
10 ловленные колебаниями ароматических и гетероциклического α-пиронового цикла, заложены возможности
двойных связей (рис. 21). для разнообразных химических реакций. Одним из самых характер-
Наряду с УФ и ИК спектроскопией ных свойств кумаринов как лактонов является их специфическое
огромное значение за последние годы отношение к щелочи (с кислотами и аммиаком кумарины не взаимо-
1
приобрели ЯМР спектры высокого раз- действуют). При действии горячей разбавленной щелочи кумарины
200 250 300 350Л,нм решения. ЯМР спектроскопия, как и медленно гидролизуются, при этом образуются желтые растворы
другие физические методы исследова- солей кумаровой кислоты (цис-, ор/ио-оксикоричной). При подки-
Рис. 20. УФ спектр кума- ния, используется в структурно-хими- слении щелочных растворов или при насыщении их СО2 регене-
рина ческих целях и базируется на корреля- рируются кумарины в неизменном состоянии:
циях между спектрами и строением,
Η
установленными на соединениях с известной структурой. Анализ
спектров позволяет определить тип замещения кумаринового ядра.
Масс-спектры возникают вследствие диссоциативной ионизации
при бомбардировке молекул электронами. При бомбардировке хими-
ческих соединений электронами с энергией, достаточной для иони-
зации этих соединений, т. е. лишь немного .превышающей иониза-

При взаимодействии солей диазония с кумаринами в слабоще-


лочной среде группа ArNa вступает в 6-положение кумариновой
системы, т. е. в «αρα-положение к фенольному гидроксилу цис-,
орто-оксикоричной кислоты:

1т Шд ' 'то ' 1800 woo то то то ш цсм-f '.


Рис. 21. ИК спектр кумарина ϊ

ционный потенциал, в спектрах наблюдаются молекулярные ионы i—NH,


С увеличением энергии электронов возрастает степень ионизаци!
и молекулярные ионы, приобретая избыток энергии, могут образа
вывать осколочные ионы. Метод масс-спектроскопии применяете!
для количественного и качественного анализа и установления стро#
ния органических соединений. Установлено, что не у всех кумарн)
новых соединений хорошо проявляется молекулярный ион. Mad
98 99
Некоторые кумарины димерязуются под действием ультрафио-1 ровании кумарвнов чаще всего используются оксид алюминия и
летового света, образуя циклобутановые структуры по следующему ι силикагель. Кумарины хорошо элюируются с колонки смесью
типу: '\ петролейного эфира с хлороформом, бензолом, смесью бензола
4
Нзсо^^^о^=о с этилацетатом, смесью бензола с метиловым спиртом (в различных
соотношениях) и др. Эфирные масла, глицериды, стероиды и тритер-
пены обычно появляются в первых фракциях элюата, затем следуют
кумарины. Кумарины на колонке и в элюатах обнаруживаются
по флуоресценции в УФ свете. Проведение хроматографического
сн. разделения кумаринов на колонке облегчается применением бу-
мажной и тонкослойной хроматографии для качественного анализа
§ 3. Методы выделения элюатов. Методы бумажной и тонкослойной хроматографии по-
зволяют быстро устанавливать однородность элюата, обнаружив
Для выделения кумаринов из растительного сырья обычно при- даже незначительные количества примесей.
меняются различные растворители: метиловый и этиловый спирт,
бензол, хлороформ, этиловый и петролейный эфиры.
Наиболее исчерпывающая экстракция кумаринов как свободных, § 4. Качественное определение
так и связанных (гликозидов) достигается этиловым спиртом. По-
лучаемый после отгонки спирта густой экстракт чаще всего после- Для обнаружения кумаринов в растительном сырье используют
довательно обрабатывается растворителями: хлороформом, эти- их лактонные свойства, способность флуоресцировать при УФ осве-
ловым эфиром и др. щении и давать окрашенные растворы с диазосоединениями, микро-
В некоторых случаях целесообразно растительный материал сублимацию и хроматографический анализ спиртовых или хлоро-
предварительно обрабатывать петролейным эфиром, а затем исчер- формных экстрактов сырья.
пывающе экстрагировать хлороформом, этиловым, метиловым спир- Ввиду плохой растворимости кумаринов в водных и лучшей
том. в неполярных фазах разделение их осуществляется путем р"аспр"е-
' С целью отделения кумаринов от сопутствующих веществ часто делительной хроматографии на импрегнированной бумаге. В ка-
сконцентрированный экстракт из растительного сырья обрабатывают честве подвижной фазы используют бензин, петролейный эфир
0,5 %-ным водным раствором КОН для удаления кислых и феноль- {tKm = 60—100 °С), смесь петролейный эфир — бензол — метило-
ных компонентов. Затем экстракт обрабатывается 5 %-ным водно- вый спирт ( 5 : 4 : 1 ) , в качестве неподвижной фазы — 20 %-ный
спиртовым раствором КОН в течение 1/2—1 ч. При этом кумарины водный раствор этиленгликоля или пропиленгликоля, 10 %-ный
образуют соли кумариновых кислот. Одновременно происходят формамид в метиловом спирте. Как правило, неподвижной фазой
и другие реакции, а именно: омыление жиров и других сложных' предварительно пропитывается хроматографическая бумага. Хро-
эфиров. Индифферентные составные части экстракта (стерины,, матографирование осуществляется нисходящим способом в течение
спирты, углеводороды и др.) удаляются обработкой этиловым эфиз 1,5—2 ч. Хроматограммы после высушивания просматривают в УФ
ром щелочного раствора, разбавленного предварительно 6—β- крат* свете. Кумарины в зависимости от структуры имеют голубую, си-
ным количеством воды. Водно-щелочной раствор подкисляется раз- нюю, фиолетовую, зеленую, желтую флуоресценцию, флуоресци-
бавленной НС1. При этом освобождаются органические кислоты, рующие пятна кумаринов отмечают и хроматограммы обрабаты-
а присутствующие кумариновые кислоты переходят с отщеплением вают щелочью. После этого их высушивают в сушильном шкафу
элементов воды в кумарины. Смесь кислот и кумаринов извлекает* при / = 120 °С и вновь просматривают под УФ лампой; как пра-
ся этиловым эфиром (многократное повторное встряхивание). Кис^ вило, флуоресценция усиливается. Затем хроматограмму обраба-
лые составные части из лактонной фракции можно удалить добаЕЙ тывают диазотированным сульфаниламидом, от действия которого
лением по каплям 0,5 %-ной водной щелочи в раствор, в которыа кумарины в зависимости от структуры окрашиваются в оранжевый,
они переходят, в то время как нейтральные кумарины как боле! красно-оранжевый, фиолетовый цвета. В некоторых случаях после
устойчивые по отношению к разбавленной'щелочи остаются в этв| просматривания хроматограммы в УФ свете ее обрабатывают ре-
ловом эфире. ί активом Драгендорфа или иодом. Кумарины проявляются в виде
При описанном методе выделения суммы кумаринов трудна пятен, окрашенных в коричневый цвет.
избежать некоторого расщепления кумаринов, поэтому как дпц Помимо бумажной хроматографии широко используется метод
очистки кумаринов от сопутствующих веществ, так и для выделений тонкослойной хроматографии. Хроматография проводится в тонком
индивидуальных соединений широкое использование получили xpqs слое оксида алюминия' или силикагеля. Хорошее разделение кума-
матографические методы. В качестве сорбента при хроматографа! ринов в тонком слое было достигнуто при применении следующих
100 101
тстем растворителей: этилацетат — бензол (1 : 2); хлороформ — падение осадка, то это указывает на вероятное присутствие кумари-
етролейный эфир (1 : 2). нов в сырье (лактонная проба).
Проявление кумаринов на хроматограммах проводится точно Хроматографическое определение. 3 а. Из оставшейся части
ак же, как в случае проявления бумажных хроматограмм. спиртового извлечения берут 0, 01 мл и наносят на пластинку
Методику, качественного анализа. Приготовление извлечения из «Силуфол» или силикагеля (закрепленный слой) и хроматографи-
астительного сырья. 2 г измельченного сырья (плоды <амми боль- руют в системе «-гексан — бензол — метиловый спирт ( 5 : 4 : 1 )
юй, пастернака посевного, псоралеи костянковой, корней горич- до тех пор, пока линия фронта не достигнет расстояния 10 см от
ика и порезника густоцветного и др.) заливают 20 мл этило- линии старта. После этого хроматограмму высушивают на воздухе
ого спирта и кипятят в течение 15 мин с обратным холодиль- в течение 10 мин, опрыскивают 10%-ным КОН в метаноле и высу-
ником. После охлаждения шивают в сушильном шкафу при i = 110—120 СС в течение 2—3 мин.
фильтруют. Затем опрыскивают свежеприготовленным реактивом Паули по
Качественные реакции. 1. Кутачеку. При наличии кумаринов в сырье на хроматограмме
К 3—5 мл спиртового извле- проявляются яркие пятна от кирпично-красного до сине-фиолетово-
чения прибавляют 10 капель го окрашивания в зависимости от структуры кумаринов (рис. 22,23).
10 %-ного КОН в метиловом 36. 0,01 мл спиртового извлечения наносят на полосу хрома-
тографической бумаги марки «Б» размером 14 X 65 см, предвари"
тельно импрегнированной 10 %-ным формамидом в метиловом
о о
——— спирте, и хроматографируют нисходящим методом в смеси раство-
8 Г рителей петролейный эфир — бензол — метиловый спирт ( 5 : 4 : 1 )
о о в течение 3—4 ч. Хроматограмму высушивают на воздухе в течение
О о · · • 10 мин, опрыскивают 10 %-ным КОН в метиловом спирте и высу-
о О шивают в сушильном шкафу при / = 110—120 °С в течение 2—3 мин,
о затем опрыскивают диазореактивом Паули по Кутачеку. При на-
о о личии кумаринов в сырье на хроматограмме появляются яркие
о О
пятна от кирпично-красного до сине-фиолетового окрашивания.

о о о
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); КОН,
10%-ный раствор в метиловом спирте; НС1 10%-ная; CaSO4; н-гексан; бензол;
метиловый спирт (метанол), 10%-ный раствор в метиловом спирте; петролей-
ный эфир (/кип = 6 0 — 100 °С)
1 α δ 2 в г 3 соиа 2 сВид сбид.
3 Бумага хроматографическая марки Б; пластинка «Силуфол»; силикагель
марки КСК; камеры хроматографические для ТСХ и БХ; колбы с нормальным
шлифом вместимостью 50 мл; холодильники (обратные) стеклянные лабораторные
Рис. 22. Схема хроматограммы (ТСХ) Рис 23. Схема хромато- с нормальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см;
кумаринов плодов псоралеи костянко- граммы (ТСХ) кумаринов пробирки стеклянные; шкаф сушильный лабораторный; микропипетки измери-
вой (1), амми большой (2) и пастер- корней горичника Мори- тельные вместимостью 0,2 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X
нака посевного (3): сона (/), порезника густо- X 18 см; цилиндры мерные на 250 мл.
цветкового (2), вздуто-
а — псорален; б — ангелицин; β — изопим-
пинеллнн; г — бергаптен; д — ксантоксин
плодника сибирского (3): »
α — пеуцедании; б — птерик- § 5. Количественное определение
снн; β — дигндросамидии
При количественном определении кумаринов учитывается то
спирте и нагревают в течение 5 мин на водяной бане (при нали* или иное специфическое свойство кумарина. Способность лактон-
чии кумаринов раствор желтеет), затем прибавляют 5 капель све*; ного кольца кумарина к обратимому размыканию и замыканию
жеприготовленного диазореактива Паули по Кутачеку. При нали* в зависимости от рН среды используется в гравиметрическом ме-
чии кумаринов раствор приобретает окрашивание от коричнево* тоде определения суммы кумаринов в растительном сырье. Специ-
красного до вишневого. ί фическое отношение кумаринов к щелочи лежит в основе метода
2. К 3—5 мл спиртового извлечения добавляют 10 капель 10 Щ нейтрализации (обратное титрование), которое применяется как для
ного КОН в метиловом спирте; раствор нагревают на водяной бане^ определения суммы кумаринов, так и для индивидуальных компо-
Затем добавляют 5—10 мл дистиллированной воды и хорошо nepq нентов. Способность кумаринов давать устойчивые красно-оранже-
мешивают, после чего раствор нейтрализуют 10 %-ной НС1 д^ вые и красно-пурпурные растворы с диазотированным сульфанила-
кислой реакции. Если при этом наблюдается помутнение или вы| мидом в щелочной среде используется в колориметрических ме-

102 103
тодах количественного определения суммы кумаринов и индиви- и бергаптена χ вычисляют по формуле
дуальных компонентов. Флуоресценция при УФ возбуждении в ви- 1,045. 100
димой области лежит в основе флуориметричеекнх методов коли-
чественного определения кумаринов. \
Для количественного определения кумарина применяются спек· где Vx — объем извлечения, мл; Va — объем извлечения, нанесен-
трофотометрические методы, где учитывается изменение оптиче- ного на хроматограмму, мл; Va — объем элюата, мл; т — масса
ской плотности растворов кумаринов при длине волны максимума, навески сырья, г; £'°/^ — удельный показатель поглощения: изо-
поглощения в УФ области спектра того или иного кумарина в заЧ пимпинеллина-518, бергаптена-651; £>а — оптическая плотность элю-
висимости от его концентрации на основе удельных показателей! ата; w — потеря в массе сырья при высушивании, %.
поглощения. Колориметрическим, флуориметрическим и спектро-у Содержание изопимпинеллина в сырье должно быть не менее
фотометрическим методам чаще всего предшествует хроматографи^ 0,3 %, бергаптена — не менее 0,15 % в пересчете на абсолютно су-
ческое разделение кумаринов на бумаге и в тонком слое сорбента^ хое сырье.
поэтому эти методы называются хромато-оптическими методами! Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е * хлороформ; метиловый спирт (ме-
Количественное определение кумаринов проводят также полярой танол); формамид; к-гептан; бензол; этиловый спирт (этанол).
графическим методом. ' Бумага хроматографическая марки «С»; бюксы с притертыми крышками;
Многообразие методов количественного определения в сыр пикнометры вместимостью 5 мл; микропипетки измерительные вместимостью
позволяет провести правильный выбор метода для анализа расти 0,2 мл; колбы с нормальным шлифом вместимостью 10—15 мл; воронки стеклян-
ные для фильтрования диаметром.5 см; весы лабораторные аналитические; набор
тельного сырья, учитывая структуру природных кумаринов. сит; аппарат Сокслета; камеры хроматографические для ТСХ; шкаф сушильный
Методика количественного определения кумаринов в плодазй лабораторный; УФ лампа; бани водяные лабораторные; спектрофотометры СФ-4А,
амми большой Fructus Amtni maidis (ФС 42-540-72). Зрелые плодьй СФ-16.
амми большой (Ammi таjus L.) семейства сельдерейных (зонтичч| Методики количественного определения кумаринов в корнях
ных) Apiaceae (Umbelliferae) используются в качестве лекарствен^ горичника Radix Peucedani (ФС 42-538-72). Корни горичника Мо-
ного сырья для получения npenapafa «Аммифурин», который преда рисона (Peucedanum morisonii Bess.) и горичника русского (Р.
ставляет собой сумму фурокумаринов — изопимпинеллина и бер·! ruthenicum M". В.) семейства сельдерейных (зонтичных) Apiaceae
гаптена. Количественное определение этих соединений проводя^ (Umbelliferae) используются в качестве лекарственного сырья
хроматоспектрофотометрическим методом. j для получения препарата «Пеуцеданин».
Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья, просеянного! Количественное определение пеуцеданина в корнях горичника
сквозь сито с размером отверстий 0,16 мм, извлекают 120 мл хлорсН проводят методом нейтрализации.
форма в аппарате Сокслета в течение 2 ч (12—ί5 сливов). Хлоро-j Около 15 г (с погрешностью не более 0,01 г) измельченного сырья
формное извлечение отфильтровывают и упаривают в вакууме до* (сито с размером отверстий 1 мм) помещают в колбу вместимостью
суха. Сухой остаток растворяют при слабом нагревании в хлоро| 250 мл, заливают 150 мл 95 %-ного этилового спирта и оставляют
форме и количественно переносят в калиброванный пикнометр вме| при периодическом встряхивании на сутки. 100 мл спиртового из-
стимостью 5 мл. 0,02 мл полученного раствора наносят микропипет! влечения, соответствующее навеске сырья 10 г, отфильтровывают
кой на старт хроматограммы. Хроматограмму затем импрегнирую! и отгоняют досуха в присутствии 1 г СаСО3.
10 %-ным формамидом в метиловом спирте, подсушивают на воз? Остаток в колбе извлекают порциями этилового эфира по 25 мл
духе в течение 4 мин и ведут хроматографирование восходящи^ 4—5 раз при* слабом нагревании' с обратным холодильником. Эфир-
способом в системе м-гептан — бензол (4:1) при t == 19—20 "G ные извлечения сливают в делительную-воронку вместимостью
в течение 5—6 ч на бумаге марки «С». Затем хроматограмму суша! 250 мл и обрабатывают 5 %-ным КОН 3 раза по 5 мин порциями
в сушильном шкафу в течение 2 ч при температуре 40—50 °С и про] по 25 мл. Объединенные эфирные извлечения промывают один раз
сматривают в УФ свете. Пятна бергаптена с Rf — 0,63 и изопиш 25 мл воды, сушат безводным сульфатом натрия, отфильтровывают
пинелина с Rf — 0,53 обводят карандашом и вырезают. Вырезанный и отгоняют досуха. Остаток растворяют в 20 мл 95 %-ного этило-
участки бумаги помещают соответственно в колбочки со шлифов вого спирта (на холоду, при интенсивном перемешивании), добавляют
вместимостью 10—15 мл, заливают 5 мл 95 %-ного спирта и оста! 20 мл 0,1 н. раствора NaOH и смесь оставляют при комнатной тем-
вляют стоять на 10—12 ч, затем нагревают на водяной бане npi пературе на 20 мин. К щелочному раствору добавляют 5—6 капель
ί ~ 40 °С в течение 10 мин. Элюат отфильтровывают и спектрофотд 0,1 %-ного спиртового раствора тимолового синего, 10 мл хлоро-
метрируют в кювете с толщиной слоя 1 см на фоне элюата чистоп форма. Смесь взбалтывают, дают отделиться хлороформному слою
кусочка той же хроматограммы. Оптическую плотность раствора (2—3 мин) и избыток щелочи оттитровывают 0,1 н. H2SO4 (до желтого
измеряют при следующих длинах волн: изопимпинеллина — 313 не окрашивания). 1 мл 0,1 н. NaOH соответствует 0,0258 г пеуцеданина.
бергаптена — 311 нм. Процентное содержание изопимпинеллий!
105
104
Процентное содержание пеуцеданина χ вычисляют по формуле где А — содержание ксантотоксина в стандартном растворе, г;
Η — высота волны стандартного раствора, мм; Нх — высота волны
У0.0258 · 100 • 100 исследуемого раствора, мм; У2 — объем извлечения, полученного
Х
~ m (100-ю) из навески плодов, мл; Vl — объем извлечения, взятого для поля-
где γ — количество 0,1 н. NaOH, пошедшего на титрование, мл; рографирования, мл; т — навеска абсолютно сухого сырья, г.
т — масса навески сырья, соответствующая объему спиртового Процентное содержание суммы фурокумаринов в пересчете на
извлечения, взятого для анализа, г; w — потеря в массе сырья абсолютно сухое сырье должно быть не менее 1 %.
при высушивании, %. Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); тетраэтил-
Содержание пеуцеданина в абсолютно сухом сырье должно быть аммоний иодид; ксантотоксин (ст. р-р).
не менее 1,5 %. Бкжсы с притертыми крышками; колбы с нормальным шлифом вместимостью
25, 50 мл; колбы мерные вместимостью 10 мл; холодильники обратные стеклян-
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); СаСО3; ные лабораторные с нормальным шлифом; весы лабораторные аналитические;
этиловый эфир; КОН; Na2SO4 (безводн.); NaOH, 0,1 н.; тимолового синего, 0,1%- набор сит; бани водяные лабораторные; полярограф.
ный раствор в этиловом спирте; хлороформ; H2SO4.
Набор сит; колбы с нормальным шлифом вместимостью 15, 20, 250 мл; аппа- Методика количественного определения кумаринов в плодах
рат вибрационный; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; псоралеи костянковой (Fructus Psoraleae) (МРТУ 42 № 3856-70).
колбы конические вместимостью 250 мл; холодильники (обратные) стеклянные Плоды псоралеи костянковой семейства бобовых (Psoralea drupacea
лабораторные с нормальным шлифом; бани водяные лабораторные; воронки де-
лительные вместимостью 250 мл; бюретки вместимостью 25 мл; капельницы Beg.) [Fabaecae (Leguminosae)] используются в качестве лекар-
стеклянные; цилиндры мерные на 250 мл. ственного сырья для получения препарата «Псорален», представля-
ющего собой смесь псоралена и ангелицина.
Методика количественного определения кумаринов в плодах Количественное определение псоралена и ангелицина в плодах
пастернака Fructus Pastinacae sativae (МРТУ 42 №3043-71). Плоды псоралеи костянковой проводится хроматоколориметрическим ме-
пастернака посевного (Pastinaca sativa L) семейства сельдерейных тодом.
(зонтичных) [Apiaceae (Umbelliferae)] используются в качестве 10 г (точная навеска) измельченных на кофейной мельнице и
сырья для получения препаратов «Бероксан» (смесь бергаптена просеянных сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм плодов вносят
и ксантотоксина) и «Пастинацин» (смесь ксантотоксина, изопимпи- в мерную колбу вместимостью 50 мл, заливают 25 мл 80 %-ного
неллина, бергаптена). этилового спирта и взбалтывают 2 ч на вибрационном аппарате. Из-
«Бергаптен» и «Пастинацин» стандартизуются по ксантотоксину. влечение доводят тем же спиртом до метки, хорошо перемешивают
Количественное определение ксантотоксина проводится поляро- и фильтруют через стеклянный фильтр № 1.
графическим методом. Полоску хроматографической бумаги марки «Б» размером
Около 2 г (точная навеска) измельченных плодов (сито с раз- 18 X 52 см предварительно импрегнируют 15 мл 10 %-ного фор-
мером отверстий 0,5 мм) извлекают 100 мл 95 %-ного этилового мамида в метиловом спирте. На стартовую линию, отстоящую на
спирта при нагревании на кипящей водяной бане в колбе с обратным 10 см от верхнего края узкой стороны листа бумаги, отступая по
холодильником в течение 2 ч. Спиртовое извлечение помещают 4,5 см с обеих боковых сторон бумаги, микропипеткой сплошной
в колбу для отгонки. Операцию извлечения повторяют еще с 50 мл линией наносят 1 мл извлечения. Бумагу слегка подсушивают
95 %-ного этилового спирта при нагревании в течение 10 мин. и помещают в камеру для хроматографирования. Система раствори-
Из объединенных спиртовых извлечений отгоняют спирт, а ос- телей: гексан — бензол — метиловый спирт ( 5 : 4 : 1 , по объему).
таток переносят количественно в мерную колбу вместимостью 10 мл Способ хроматографирования нисходящий. Хроматографирование
и доводят объем раствора 95 %-ным этиловым спиртом до метки. ведут 2,5—3 ч, т. е. до тех пор, пока фронт растворителя не дости-
0,2—0,4 мл (точный объем) полученного извлечения доводят гнет линии, на 2—3 см отстоящей от нижнего края бумаги. Высу-
до 5 мл 95 %-ным этиловым спиртом, добавляют 3 мл 5 %-ного шенную хроматограмму просматривают на химископе УЧ-1 и пятна
тетраэтиламмонийиодида в 50 %-ном этиловом спирте, пропускают фурокумаринов обводят карандашом. Первое от старта пятно
водород 5—10 мин и полярографируют при катодной поляризации соответствует псоралену (Rf ~ 0,67), второе — изопсоралену
в интервале 1,00—1,6 В (относительно внутреннего анода). (Rf ~ 0,71). Участки бумаги с пятнами фурокумаринов режут
Параллельно полярографируют стандартный спиртовой раствор, на мелкие кусочки, вносят в две колбы с притертой пробкой и при-
содержащий 0,0001 г ксантотоксина в 1 мл раствора. ливают по 40 мл 95 %-ного этилового спирта. Элюирование про-
Процентное содержание суммы фурокумаринов χ в пересчете на водят при комнатной температуре на вибрационном аппарате в те-
ксантотоксин вычисляют по формуле чение 2 ч. Элюат фильтруют через стеклянный фильтр № 1. В колбу
вместимостью 25 мл к 5 мл элюата приливают 3 мл 0,05 н. NaOH
АН xVtl00
и 2 мл диазореактива (ГФ X, с. 370). Одновременно в другой колбе

106 107
смешивают 10 мл 95 %-ного этилового спирта, 6 мл 0,05 н. NaOH мещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью
и 4 мл диазореактива — готовят раствор для контрольных кювет. 250 мл; заливают 50 мл 60 %-ного водного ацетона и интенсивно
Содержимое колб перемешивают спустя 1 ч, переливают в кюветы встряхивают в течение 3 ч на вибрационном аппарате и настаивают
с толщиной слоя 0,5 см и определяют оптическую плотность окрашен- 15 ч. Извлечение отфильтровывают через складчатый бумажный
ных растворов по шкале правого барабана фотоколориметра ФЭК-М. фильтр.
Псорален определяют с зеленым (область максимального пропу- Стеклянную пластинку размером 13 X 18 см с незакрепленным
скания 500—530 нм), изопсорален с синим светофильтром (область слоем нейтрального оксида алюминия (II) делят на 4 части. На
максимального пропускания 480—500 нм), измерение повторяют стартовую линию двух частей наносят в виде полосы по 0,1 мл по-
и вычисляют среднюю величину оптической плотности (£>). лученного извлечения: на третью — 25 мл раствора стандартного
Стандартные растворы готовят из стандартных образцов псора- образца псоралена (раствор А); четвертая часть служит фоном (кон-
лена и изопсоралена в концентрации 0,0025—0,0030 мг/мл на 95 %· трольная проба) при спектрофотометрировании. Пластинку с на-
ном этиловом спирте. Одновременно с колориметрированием элюа- несенными пробами высушивают на воздухе в течение 10 мин,
тов берут по 5 мл раствора стандартного образца каждого фуроку- а затем помещают в камеру с этиловым эфиром и хроматографируют
марина и способом, описанным выше, определяют их оптическую восходящим методом. Когда фронт растворителя дойдет до конца
плотность. пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до исчезно-
Процентное содержание отдельных фурокумаринов χ в сырье вения запаха этилового эфира (1—2 ч) и просматривают в УФ све-
вычисляют по формуле те при λ = 254 нм. Псоберан проявляется в виде голубого пятна
50·40Ρ 1 Λ100 на уровне пятна стандартного образца псоралена. Отмеченную
* = 1 0 · 1,0£»2(100—w) ' зону сорбента с псобераном переносят в колбу со шлифом вмести-
мостью 50—100 мл, заливают 20 мл 95 %-ного этилового спирта,
где 50 — общий объем извлечения, мл; 40 — объем спирта, исполь- закрывают пробкой и элюируют в термостате при t = 40—50 °С
зованного для элюирования отдельных фурокумаринов с бумаги, в течение 3 ч.
мл; D x — оптическая плотность элюата; D 2 — оптическая плотность
раствора стандартного образца; А — концентрация стандартного После охлаждения элюат отфильтровывают через воронку со
раствора, мг/мл; 1,0 — количество извлечения, нанесенного на стеклянным фильтром № 4 (элюат должен быть прозрачным) и опре-
хроматографическую бумагу, мл; w — потеря в массе сырья при деляют его оптическую плотность на спектрофотометре при длинах
высушивании, %. волн 246, 268 и 298 нм в кювете с толщиной слоя 1 см по отношению
Сумма псоралена и изопсоралена в пересчете на абсолютно сухую к элюату (95 %-ный этиловый спирт) с равным по площади окси-
массу должна быть не менее 0,9 %. дом алюминия, хроматографированного в тех же условиях без ве-
щества (контрольная проба).
Стандартные образцы псоралена и изопсоралена готовит и распределяет Параллельно при тех же длинах волн измеряют оптическую плот-
институт химии растительных веществ АН УзССР.
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); формамид; ность раствора стандартного образца псоралена.
метиловый спирт (метанол); я-гексан; бензол; NaOH, 0,05 н; диазореактив (ГФ X); Процентное содержание псоберана χ в пересчете на абсолютно
изопсоралена и псоралена стандартный раствор (0,0025—0,0030 мг/мл в 95%-ном сухую массу вычисляют по формуле
этиловом спирте).
Бумага хроматографическая марки «Б»; бюксы с притертыми крышками; DtAVΎгЮО · 100
набор сит; кофемолка; колбы с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; стек-
лянные шарики; вибрационный аппарат, термостат; мерные колбы вместимостью
50 мл; фильтры стеклянные № 1; микропипетки измерительные вместимостью 1 мл; где D1 — оптическая плотность испытуемого раствора при λ =
камеры хроматографические для БХ; химископ 4П-1; колбы конические вмести- = 298 нм; D o — оптическая плотность раствора стандартного
мостью 25 мл; фотоэлектроколориметр ФЭК-М.
образца псоралена при λ = 298 нм; А — концентрация раствора
Методика количественного определения кумаринов в листьях стандартного образца псоралена, г/мл; т — масса навески, г;
инжира Folium Ficus caricae (ВФС42-878-79). Листья культиви- V — общий объем извлечения, мл; Vx — объем извлечения, на-
руемого кустарника или дерева смоковницы обыкновенной (ин- несенного на хроматограмму, мл; V2 — объем элюата, мл; w —
жира) (Ficus carica L) семейства тутовых (Moraceae) используются потеря в массе сырья при высушивании, %.
в качестве лекарственного сырья для получения препарата «Псо- Процентное содержание псоралена χ в пересчете на абсолютно
беран», представляющего собой смесь псоралена и бергаптена. сухую массу вычисляют по формуле
Количественное определение псоралена и бергаптена проводится
хроматоспектрофотометрическим методом. (Р,8*6—£>»'*) AVVtl00 • 100
Около 5 г (с погрешностью до 0,01 г) листьев инжира, измельчен- * V, (100 — w) '
ных и просеянных сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, по- где D* 4e s
и D\* — оптическая плотность испытуемого раствора
108 — 109
при длинах волн 246 и 268 нм; D 2 4 8 и Ош — оптическая плотность Г Л А В А 9. ДУБИЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА
раствора стандартного образца псоралена при длинах волн 246
и 268 нм; А — концентрация раствора стандартного образца псо- Дубильными веществами называют растительные полифеноль-
ралена, г/мл; т — масса навески сырья, г; У — общий объем из- ные соединения различной молекулярной массы, способные дубить
влечения, мл; Ух — объем извлечения, нанесенного на хромато- кожу. В настоящее время из растений выделены также многочислен-
грамму, мл; У2 — объем элюата, мл; w — потеря в массе сырья ные низкомолекулярные полиоксифенольные соединения, не обла-
при высушивании, %. дающие дубящим действием, но являющиеся биогенетическими
Содержание псоберана не менее 0,7 %. Содержание псоралена предшественниками дубильных веществ.
не менее 0,42 %. Термин «дубильные вещества» был впервые использован в 1796 г.
Приготовление стандартного образца псоралена.
французским исследователем Сегеном для обозначения присут-
0,05 г (точная навеска) стандартного образца псоралена (ВФС 42-532-76) раство- ствующих в экстрактах некоторых растений веществ, способных
ряют при энергичном встряхивании в 95%-ном этиловом спирте в мерной колбе осуществлять процесс дубления. Практические вопросы кожевенной
вместимостью 200 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки (раст- промышленности в середине прошлого века положили начало изу-
вор А). 0,6 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят чению химии дубильных веществ.
объем раствора 95%-ным этиловым спиртом до метки (раствор В). Раствор хранят
в темноте в колбе с притертой пробкой. Срок хранения 6 мес 1 мл раствора стан-
дартного образца содержит 0,000006 г псоралена § 1. Классификация
Приготовление 60% - н о г о в о д н о г о раствора аце-
т о н а . Смешивают 600 мл ацетона и 400 мл воды. По классификации Г. Проктера (1894) дубильные вещества
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : ацетон; А1(ОН)3; псорален; этиловый
эфир; этиловый спирт (этанол). в зависимости от природы продуктов их разложения при температуре
Колбы с притертой пробкой вместимостью 250 мл, с нормальным шлифом 180—200 °С (без доступа воздуха) разделяются на две основные
вместимостью 100 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X 18 см; группы: 1) пирогалловые (дают при разложении пирогаллол);
фильтры стеклянные № 4; бумага фильтровальная; термостат; спектрофотометры 2) пирокатехиновые (образуется пирокатехин):
СФ-4А, СФ-6; УФ-лампа; колбы мерные вместимостью 25, 250 мл; камера хро-
матографическая для ТСХ; весы лабораторные аналитические. ОН ОН
I I
Вопросы для подготовки но—/\-он
1. Современное определение кумаринов.
2. Классификация кумаринов. пирогаллол пирокатехин
3. Химические свойства кумаринов.
4. Физические свойства кумаринов. В результате дальнейшего исследования химизма танидов
5. Как обнаружить кумарины в лекарственном растительном сырье? К. Фрейденберг уточнил классификацию Проктера и рекомендовал
6. Как выделить кумарины из лекарственного растительного сырья? обозначить первую группу (пирогалловые дубильные вещества) как
7. Как разделить сумму кумаринов на отдельные компоненты?
8. Какие свойства кумаринов лежат в основе методов количественного опре- гидролизуемые дубильные вещества, а вторую (пирокатехиновые
деления кумаринов в лекарственном растительном сырье: а) метода нейтрализа- дубильные вещества) — конденсированные.
ции; б) хромато-колориметрического метода; в) хромато-спектрофотометрического Большинство дубильных веществ растений невозможно одно-
метода; г) полярографического метода; д) хромато-флуориметрического метода? значно отнести к типу гидролизуемых или конденсированных, по-
скольку эти группы во многих случаях недостаточно резко разгра-
Литература ничены. В растениях часто содержится смесь дубильных веществ
Терпеноиды и кумарины/Под ред. Г. В. Пигулевского. — М.—Л.: Наука, обеих групп.
1965. В настоящее время наиболее часто пользуются классификацией
Кузнецова Г. А. Природные кумарины и фурокумарины. — М.: Наука, Фрейденберга:
1967.
Георгиевский В. П., Казаринов Η. Α., Каррыев Л. О. Физико-химиче- I. Гидролизуемые дубильные вещества: а) галлотанины — эфи-
ские методы анализа биологически активных веществ растительного происхож- ры галловой кислоты и Сахаров; б) несахаридные эфиры фенолкар-
дения. — Ашхабад: Ылым, 1976. боновых кислот; в) эллаготанины — эфиры эллаговой кислоты
Кемертелидзе Э. П., Георгиевский В. П. Физико-химические методы анализа и Сахаров.
некоторых биологически активных веществ растительного происхождения —
Тбилиси: Мецниереба, 1977. II. Конденсированные дубильные вещества: а) производные
Плод аммиа большой. ФС 42-540-72. флаванолов — 3; б) производные флавандиолов—3, 4; в) производ-
Корень горичника. ФС 42-538-72. ные оксистильбенов.
Плод пастернака. МРТУ 42 № 3043-71. Гидролифемые дубильные вещества. Представляют собой слож-
Плод псоралеи костянковой. МРТУ 42 № 3856-70.
Лист инжира. ВФС 42-878-79. ные эфиры сахаридов и фенолкарбоновых кислот, которые в услови-
ПО Ш
ях кислотного или энзиматического гидролиза распадаются на наличие в турецком танине небольшого количества эллаговой ки-
простейшие составные части. Дубильные вещества группы галло- слоты. Позднее Фрейденберг суммировал все представления о строе-
танинов наряду с сахаридом образуют галловую кислоту, а эллаго- нии турецкого танина и предположил, что в среднем одна из пяти
танины — гексаоксидифеновую кислоту, или такую кислоту, ко- гидроксильных групп глюкозы свободна, другая — этерифициро-
торая может образоваться из галловой кислоты простыми хими- вана л<-дигалловой, а остальные — галловой кислотой.
ческими превращениями (окисление, восстановление). Доказана идентичность строения китайского танина и танина
Галлотанины — эфиры галловой кислоты, наиболее важные в сумаха, которые представляют собой окта- или нонагаллоилглюкозу
группе гидролизуемых дубильных веществ. Встречаются моно-, в отличие от турецкого танина, являющегося гекса- или гептагал-
ди-, три-, тетра-, пента- и полигаллоильные эфиры. лоилглюкозой.
Представителем моногаллоильных эфиров является β-£)-ππο- Танин (галлотанин) используется как вяжущее средство при
когаллин, выделенный из корня китайского ревеня и обнаруженный ожогах и желудочно-кишечных заболеваниях, а также для мягкого
также в других растениях: дубления.
Несахаридные эфиры галловой кислоты. Помимо эфиров галло-
сн,он •он вой кислоты, с сахаридами выделены и идентифицированы ее
эфиры с хинной и оксикоричной кислотами и с флаванами. В зе-
леном чае обнаружен аморфный полиоксифенол, названный тео-
галлином, и имеющий строение 3-О-галлоилхинной кислоты:
Н
Η ОН

Важнейшие источники галлотанинов: галлы — наросты на листь- Η


Н
ях сумаха полукрылатого (китайский танин), ветках дуба лузитан- >с А-о-с^" 4
ского (турецкий танин); листья сумаха дубильного и скумпии ко- НО/ \ / | ΐ Γ ^
жевенной и др. СΗ О Х>Н
Изучение структуры китайского танина проводилось на протя-
жении многих'лет. Э. Фишер предложил для него строение β-пента- теогаллин
м-дигаллоил-О-глюкозы. Все гидроксильные группы глюкозы эте-
рифицированы ж-дигалловой кислотой. Фишер допускал, что ки- Таратанин, выделенный из спиртового экстракта дубильных ве-
тайский танин содержит не только остатки дигаллоил, но и три-, ществ Caesalpinia spinosa, представляет собой галлотанин, в состав
и тетрагаллоила. П. Каррер (1923) первый обнаружил, что китай- которого входит не сахарид, а хинная кислота. Эфиры хинной,
ский танин представляет собой гетерогенную смесь веществ различ- n-кумароилхинной, хлорогеновой, шикимовой, оксикоричной и
ного строения: кофейной кислот очень широко распространены в растительном
мире.
он Эллаговые дубильные вещества. Значительно сложнее по строе-
он нию, чем галловые. Их сырьевыми источниками служат тропиче-
- /- \ = он ские растения — плоды терминалии хебула, цезальпинии дубиль-
ной и другие, а также корка гранатника. Эллаговая кислота обна-
китайский танин
ружена в гидролизатах экстрактов двудольных растений (примерно
CH,OR, (один из возможных
вариантов)
75 семейств), что свидетельствует о широком распространении
эллаговых дубильных веществ. В растениях содержится гексаокси-
дифеновая кислота (продукт окисления галловой кислоты), которая
переходит в эллаговую кислоту:
OR,
р-пента-м-дигатчои1-
-глюкоза (китайский танин НО ОН
по Э. Фишеру)
Н<
ххюн но/ \эн
Д л я турецкого танина многие исследователи принимали строе- гексаоксидифеновая кислота
н и е Р-пента-£>-галлоил-О-глюкозы. Ф и ш е р и Ф р е й д е н б е р г д о к а з а л и эллаговая кислота

112
Кроме эллаговой кислоты при расщеплении эллаготанинов об- другой молекулы:
разуются и другие соединения, как, например, бревифолинкарбо-
ОН Η
новая (выделена из альгарабиллы), хебуловая кислоты и др.
НО
О
ОН

со,н ш он

НО Η СН—СН2—СО2Н
он Η
СО 2 Н
хебуловая кислота HOv f \ ш
х
Конденсированные дубильные вещества. Не расщепляются при
он
он он
действии минеральных кислот, а образуют красноткоричневые про-
дукты конденсации, называемые флабофенами. Кроме того, из Исследования последнего десятилетия показали, что многие
растений выделен также ряд мономерных полиоксифенолов биоге- конденсированные дубильные вещества представляют собой смешан-
нетических предшественников конденсированных дубильных ве- ные полимеры, построенные на основе катехина и лейкоантоциани-
ществ. Такие соединения катехинового типа выделены, например, дина:
из листьев чая китайского и некоторых других растений. НО.
Конденсированные дубильные вещества — производные, глав-
ным образом катехинов и лейкоантоцианидинов; значительно реже
в их образовании принимают участие стильбены и, возможно, фла-
ΥΥ°4.
ванонолы:

он
ОН

он
он НО НО Η

α-ί-катехин лейкоцианндин

Одно из первых химических исследований конденсированных К числу растений, содержащих конденсированные дубильные
дубильных веществ было проведено И. Берцелиусом в 1827 г. Си- вещества, относятся: зверобой, черника, чай китайский.
стематические исследования химии конденсированных дубильных Чаще всего в растениях встречается смесь гидролизуемых и
веществ были начаты лишь в 20-е годы нашего столетия Фрейден- конденсированных дубильных веществ с преобладанием соединений
бергом с сотр. Несмотря на успехи органической химии и химии той или иной группы (дуб черешчатый, змеевик, кровохлебка, бадан
полимеров, строение конденсированных дубильных веществ до сих толстолистный, лапчатка прямостоячая и др.).
пор во многом остается неясным.
На основании модельных опытов Фрейденберг пришел к вы- §-2. Физико-химические свойства
воду, что образование конденсированных дубильных веществ
происходит в результате окислительной конденсации катехинов. Дубильные вещества (таниды) имеют среднюю молекулярную
При этом пирановое ядро катехиновой молекулы разрывается массу порядка 1000—5000 (до 20 000) и представляют собой, как
и С2-атом соединяется углерод-углеродной связью с Св-атомом правило, аморфные соединения, образующие при растворении в воде
114 115
коллоидные растворы. Из органических растворителей таниды Свободная эллаговая кислота дает красно-фиолетовую окраску
растворимы в ацетоне, этиловом спирте, смеси этилового спирта при добавлении нескольких кристаллов нитрита натрия и трех-четы-
и этилового эфира, отчасти в этиловом эфире, этилацетате, пиридине; рех капель уксусной кислоты. Для обнаружения связанной элла-
нерастворимы в хлороформе, петролейном эфире, бензоле и серо- говой кислоты (или гексаоксидифеновой) уксусную кислоту заме-
углероде. Многие дубильные вещества оптически активны; обладают няют 0,1 н. серной или соляной кислотой (кармино-красная окрас-
вяжущим вкусом, легко окисляются на воздухе, приобретая более ка, переходящая в синюю).
или менее темную окраску.
Катехины — бесцветные кристаллические вещества, хорошо ра- § 3. Методы выделения и идентификация
створимые в воде и органических растворителях (спирты, ацетон
и т. д.). Они легко окисляются при нагревании и на свету. Окисле- Дубильные вещества — это смесь различных полифенолов, име-
ние катехинов особенно быстро протекает в щелочной среде, а также ющих нередко сложную структуру, и очень лабильных, поэтому
при действии окислительных ферментов (полифенолоксидаза, перо- выделение и анализ индивидуальных компонентов представляет
ксидаза). собой большие трудности.
Молекула катехина содержит два асимметричных атома углеро- При выделении из растительного материала получают фрак-
да (С2 и С3), и поэтому каждый из катехинов может быть представ- ции дубильных веществ. Для этого используют экстракцию ра-
лен четырьмя изомерами и двумя рацематами. В зависимости от стительного материала органическими растворителями: обрабаты-
конфигурации кольца В и гидроксильной группы у С3-атома раз- вают сырье петролейным эфиром, бензолом или смесью бензол —
личают (±)-катехины и (±)-эпикатехины. В растениях катехины хлороформ ( 1 : 1 ) для удаления основной массы хлорофилла, терпе-
встречаются в изомерных формах, соответствующих (+)-катехину и ноидов и липидов, затем экстрагируют этиловым эфиром, который
(—)-эпикатехину. Для УФ спектра катехинов характерен основной извлекает некоторые фенольные соединения, в том числе оксикорич-
максимум поглощения в области 270—280 нм. ные кислоты и катехины; после этого проводят экстракцию этила-
Лейкоантоцианиды — бесцветные аморфные вещества, окисля- цетатом, в результате которой в экстракт переходят лейкоантоциа-
ющиеся легче, чем катехины. Они растворимы в воде, этаноле, ны, димерные проантоцианидины, эфиры оксикоричных кислот
ацетоне, хуже в этилацетате, нерастворимы в этиловом эфире. и др. В завершение растительный материал экстрагируют метило-
Лейкоантоцианидины содержат три асимметричных атома углеро- вым или этиловым спиртом, при этом в раствор переходят многие
да (Cs, С3, С4), и поэтому каждый из лейкоантоцианидинов может дубильные вещества и другие фенольные соединения.
быть представлен восемью изомерами и четырьмя рацематами. Для получения суммы дубильных веществ используются и дру-
В УФ спектре лейкоантоцианидинов имеется максимум поглощения гие способы: растительное сырье вначале экстрагируют горячей
в области 270—280 нм. При нагревании с разбавленными кислотами водой, а затем охлажденный водный экстракт обрабатывают после-
лейкоантоцианидины превращаются в ярко окрашенные антоцианы. довательно вышеперечисленными растворителями.
. Дубильные вещества, как и другие фенольные соединения, обра- Широко распространено выделение фенольных соединений, в
зуют окрашенные комплексы с солями тяжелых металлов. Конден- том числе и некоторых компонентов дубильных веществ, осаждени-
сированные дубильные вещества дают с раствором железоаммо- ем из водных или спирто-водных растворов солями свинца. По-
ниевых квасцов черно-зеленую окраску, гидролизуемые — черно- лученные осадки затем обрабатывают разбавленной серной кисло-
синюю. Дубильным веществам свойственна также реакция сочета- той.
ния с диазониевыми соединениями, при этом образуются окрашен- Суммарные извлечения дубильных веществ разделяют на инди-
ные продукты. Для них характерна реакция с ванилином (в при- видуальные компоненты с помощью хроматографических методов.
сутствии концентрированной НС1 или 70 %-ной H2SO4 развивается Для выделения индивидуальных компонентов дубильных ве-
яркая красная окраска). Кахетины образуют при этой реакции ществ (катехинов, лейкоантоцианидинов и др.) используют раз-
окрашенный продукт следующего строения: личные виды хроматографии: 1) адсорбционную хроматографию на
колонках целлюлозы, полиамида (иногда вместо полиамида исполь-
ОН зуют гольевой порошок); 2) ионообменную — на колонках катио-
+
нита Дауэкс-50 В в Н -форме; 3) распределительную хроматогра-
фию на колонках силикагеля; 4) противоточное распределение;
5) гельфильтрацию на колонках Сефаде,кса Г-50, Г-100 и др.
V - V Идентификация индивидуальных компонентов дубильных ве-
H s C O ществ основана на хроматографических методах (хроматография
| ОН на бумаге и тонкослойная), спектральных исследованиях, каче-
ственных реакциях и изучении продуктов расщепления.
116 117
Хроматограммы дубильных веществ просматривают в УФ свете перемешивают. В случае наличия гидролизуемых дубильных ве-
и отмечают характер флуоресценции зон адсорбции. Некоторые ществ появляется синее или фиолетовое окрашивание (в нейтральной
производные катехинов имеют слабую голубую флуоресценцию, среде).
усиливающуюся после обработки хроматограмм парами аммиака. 5. К 2—3 мл извлечения прибавляют по каплям бромную воду
Чаще всего для обнаружения катехинов и лейкоантоцианидинов (5 г брома в 1 л воды) до того момента, когда в жидкости станет
и их производных на хроматограммах используют 1 %-ный ва- ощущаться запах брома. При наличии конденсированных дубиль-
нилин в концентрированной НС1. Лейкоантоцианидины можно от- ных веществ сразу образуется осадок.
личить от катехинов при выдерживании хроматограммы в парах 6. К 1 мл извлечения добавляют 2 мл 10 %-ной уксусной кисло-
соляной кислоты с последующим нагреванием при 105 °С в течение ты и 1 мл 10 %-ной средней соли ацетата свинца — гидролизуемые
2 мин, при этом лейкоантоцианидины переходят в антоцианидины дубильные вещества образуют осадок. При на-
(розовый, красно-фиолетовый цвет), а катехины остаются бесцвет- личии конденсированных дубильных веществ
ными или желтеют. фильтрат окрасится в черно-зеленый цвет от
Для более детальной идентификации веществ используют так : прибавления 5 капель 1 %-ных железоаммо-
же методы УФ, ИК и ПМР спектроскопии. ниевых квасцов и 0,1 г ацетата свинца.
Для изучения структуры дубильных веществ широко применяют 7. К 2 мл извлечения прибавляют несколь-
гидролиз (в частности, ферментативный с помощью танназы), ще- ко кристаллов NaNO3 и 2 капли 0,1 н. НС1.
лочное расщепление с последующим анализом полученных продук- При наличии гидролизуемых дубильных ве-
тов. ществ появляется коричневое окрашивание.
Хроматографическое определение (катехи-
§ 4. Качественное определение нов листа чая ТСХ). 0,1 г измельченного
сырья (лист чая) заливают 2 мл 95 %-ного
Дубильные вещества в растительном сырье определяют качест- этилового спирта и нагревают на водяной
венными реакциями, которые можно подразделить на две группы: бане до кипения, охлаждают, фильтруют.
реакции осаждения и цветные реакции. Для проведения качествен- Полученный этанольный экстракт наносят
ных реакций из растительного сырья готовят водное извлечение. с помощью капилляра на стартовую линию
Методики качественного определения. Приготовление извлече- хроматографической пластинки «Силуфол»
ния. 1 г измельченного растительного сырья заливают 100 мл во- (высота столбика жидкости в капилляре Рис. 24. Схема хрома-
ды. Нагревают на водяной бане 20—30 мин, процеживают через 1,5—2 см; диаметр пятна на стартовой линии тограммы (ТСХ) кате-
хинов листьев чая ки-
вату и полученное извлечение используют для проведения качест- не более 5 мм). Рядом с исследуемым экстрак- тайского:
венных реакций. том на стартовую линию наносят в качестве / — извлечение из лис-
1. К а ч е с т в е н н ы е реакции извлечения. К «свидетеля» раствор очищенной суммы кате- тьев чая; 2 — очищенная
2—3 мл извлечения добавляют по каплям 1 %-ный раствор желати- хинов листа чая. После высушивания плас- сумма катехинов; а_—
( + ) катехины; б — ( + )
ны. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка жела- тинку помещают в хроматографическую ка- эпикатехин
тины. меру с системой растворителей н-бутанол —
2. К 2—3 мл извлечения прибавляют несколько капель 1 %-ного уксусная кислота — вода (40 : 12 : 28). Хроматографирование про-
хлорида хинина (антипирина). Появляется аморфный осадок. водят в течение 1,5 ч (пробег фронта растворителя 10—12 см).
3. При добавлении к 2—3 мл извлечения 4—5 капель раствора Затем хроматограмму высушивают на воздухе и обрабатывают
железоаммониевых квасцов в случае гидролизуемых дубильных ве- раствором 1 %-ного ванилина в концентрированной НС1. Кате-
ществ появляется черно-синее окрашивание или осадок, а конден- хины проявляются в виде красно-оранжевых пятен (рис. 24).
сированных — черно-зеленое окрашивание или осадок (эта реакция
используется для открытия дубильных веществ в растительном ма-
териале). § 5. Количественное определение
4. К 10 мл извлечения прибавляют 5 мл смеси (2 мл НС1, раз-
веденной в соотношении 1 : 1, и 3 мл 40 %-ного раствора формаль- В литературе описано около 100 различных способов количест-
дегида). Полученную смесь кипятят 30 мин в колбе, снабженной венного определения дубильных веществ, которые можно подраз-
обратным холодильником. При наличии конденсированных дубиль- делить на следующие основные группы.
ных веществ они выпадают в осадок. Осадок отфильтровывают. 1. Гравиметрические — основаны на количественном осаждении
К 2 мл фильтрата добавляют 10 капель 1 %-ных железоаммониевых дубильных веществ желатиной, ионами тяжелых металлов или ад-
квасцов и около 0,2 г кристаллического ацетата свинца, раствор сорбцией гольевым порошком.
118 119
2. Титрометрические — на окислительных реакциях, прежде поправка на титр (по щавелевой кислоте); D — коэффициент пере-
всего с применением перманганата калия (метод ГФ X). счета на танин: для гидролизуемых дубильных веществ равен
3. Фотоколориметрические — на реакциях с солями окисного 0,004157, для конденсированных — 0,00582; V — общий объем
желеЗа, фосфорновольфрамовой кислотой, с реактивом Фолина — экстракта, мл; т — масса навески сырья, г; V3 — объем экстракта,
Дениса и др. взятого для титрования, мл.
4. Методы нефелометрические, хроматоспектрофотометрические Методика количественного определения танина в листьях скум-
в основном используются в исследованиях. пии и сумаха. Около 1 г сырья, измельченного и просеянного сквозь
В СССР и за рубежом стандартным для технических целей яв- сито с размером отверстий 1 мм, взвешивают с точностью до 0,0002 г,
ляется гравиметрический метод с применением гольевого порошка помещают в плоскодонную колбу вместимостью 150—250 мл, при-
[весовой единый метод (ВЕМ)]. бавляют 30 %-ного этилового спирта, колбу присоединяют к обрат-
В ГФ X входит титрометрический метод Левенталя в модифика- ному водяному холодильнику и нагревают на кипящей водяной
ции А. Л. Курсанова, основанный на способности дубильных ве- бане в течение 30 мин, периодически смывая частицы сырья со стенок
ществ быстро окисляться перманганатом калия. встряхиванием смеси. Затем смесь отстаивают 10—15 мин и жид-
Для количественного определения танина в листьях скумпии кость сливают через стеклянный фильтр (ПОР-160) в мерную колбу
и сумаха предложен метод осаждения дубильных веществ сульфа- вместимостью 200 мл. Извлечение повторяют еще раз указанным
том цинка с последующим комплексонометрическим титрованием. способом, предварительно смыв частицы сырья с фильтра 30 %-ным
Для количественного определения катехинов в листе чая этиловым спиртом. После охлаждения полученного извлечения до-
Μ. Η. Запрометовым разработан фотоколориметрический метод водят объем раствора 30 %-ным этиловым спиртом до метки.
с использованием бумажной хроматографии для разделения кате- Отбирают из мерной колбы 10 мл извлечения, помещают в пробирку
хинов и реакции катехинов с 1 %-ным ванилином в концентриро- для центрифугирования вместимостью 25—50 мл, прибавляют
ванной НС1, в результате которой образуется окрашенный раствор. 10 мл реактива осаждения (см. ГОСТ 4564—79). Смесь перемеши-
Методика количественного определения дубильных веществ вают палочкой, палочку промывают 5 мл дистиллированной воды,
(ГФ X). Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья, просеян- которую присоединяют к основной смеси.. Через 30 мин смесь
ного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, помещают в кони- центрифугируют в течение 5—10 мин с частотой вращения 5—6 тыс.
ческую колбу вместимостью 100 мл, заливают 50 мл кипящей об/мин, жидкость с осадка сливают, а осадок в пробирке взмучивают
воды и нагревают на водяной бане в течение 30 мин при частом в 20 мл 0,25 %-ного аммиака той же палочкой, которую затем
перемешивании. Жидкость отстаивают в течение нескольких минут промывают 5 мл раствора аммиака указанной концентрации, при-
и осторожно процеживают через вату в мерную колбу вместимостью соединяя его к центрифугируемой смеси. После центрифугирования
250 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на вату. Сырье в колбе промывную жидкость сливают и отбрасывают. Осадок в пробирке
повторно извлекают кипящей водой, как указано выше, процежи- растворяют в 3 мл 30 %-ной уксусной кислоты. Раствор количест-
вая жидкость в ту же мерную колбу. Извлечение повторяют не- венно переносят в колбу вместимостью 250 мл с помощью 80—100 мл
сколько раз до отрицательной реакции на дубильные вещества дистиллированной воды. Жидкость нейтрализуют 25 мл 5 %-ного
(проба с раствором железоаммониевых квасцов). Жидкость в мерной гидрокарбоната натрия, прибавляют 0,5 мл ксиленолового оран-
колбе охлаждают и объем извлечения доводят водой до метки. 25 мл жевого и титруют 0,01 Μ раствором трилона Б до изменения красно-
полученной жидкости помещают в коническую колбу вместимостью фиолетовой окраски раствора в желтую.
1 л, добавляют 750 мл воды и 25 мл раствора индигосульфокислоты 1 мл 0,01 Μ раствора трилона Б соответствует 0,0013 г танина.
и титруют ""при постоянном перемешивании 0,1 н. перманганатом Процентное содержание танина χ в пересчете на абсолютно су-
калия до золотисто-желтого окрашивания. хое сырье вычисляют по формуле
1 мл 0,1 н. раствора перманганата калия соответствует 0,004157 г _ Щ),00130 - 200 · 100 • 100
дубильных веществ в пересчете на танин. Параллельно проводят
контрольный опыт, титруя 25 мл индигосульфокислоты в 750 мл *~ /niO (100—w)
воды. где V — расход трилона Б, мл; К — поправка к титру 0,01 Μ
Процентное содержание дубильных веществ определяют по фор- раствора трилона Б; т — масса навески сырья, г; w — потеря
муле в массе сырья при высушивании, %.
...(Pi —У*)/СРУ100-Ю0 Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : калий перманганат 0,1 н.; инди-
mV3(l00—w) госульфокислота; этиловый эфир; желатина 1%-ная; квасцы железоаммониевые
[аммоний железо (III) сульфат], 1%-ный раствор; НС1 (конц ,0,1 н ); формальде-
где Vt — объем 0,1 н. КМпО4, пошедшего на титрование, мл; F 2 — гид 40%-ный; свинца ацетат (кристал , 10%-ный); бромная вода; уксусная кис-
лота 10 и 30%-ная; NaCl, НО, 0,1 н ; ванилин 1%-ный в конц. НО; и-бутанол;
объем 0,1 н. КМпО4, пошедшего на контрольный опыт, мл; К — уксусная кислота (лед.); NaOH (1%-ный); оксид цинка; цинк (метал.); этило-
120 121
вый спирт 30%-ный (этанол); аммония хлорид; аммиак водный (конц., 0,25%-ный);
H2SO4 (16%-ная); натрия ацетат; натрия гидрокарбонат 5%-ный; вода (дистил.); Алкалоиды у некоторых растений содержатся в значительном
трилон Б (0,01 М); ксиленоловый оранжевый 0,1%-ный; сумма катехинов листа количестве во всех его частях (красавка обыкновенная, красавка
чая. кавказская), но у большинства растений они преобладают или со-
Колбы плоскодонные вместимостью 100 мл; колбы плоскодонные конические держатся только в каком-либо одном органе или части растения.
вместимостью 100, 150, 250, 500, 1000 мл; холодильник (обратный) стеклянный
лабораторный с нормальным шлифом; колбы мерные вместимостью 200 и 250 мл; У одних растений наибольшее количество алкалоидов накапли-
микробюретки и пипетки измерительные вместимостью 10, 25 мл; воронки стек- вается в листьях (чай китайский, белена черная, секуринега полу-
лянные для фильтрования диаметром 5 см; палочки стеклянные; пробирки стек- кустарниковая); у других — в плодах или семенах (дурман индей-
лянные вместимостью 10 мл; пробирки центрифужные вместимостью 25—50 мл; ский, мордовник шароголовый, мордовник обыкновенный, чили-
цилиндры мерные емкостью 1000 мл, 100, 25 и др.; камеры хроматографические
для ТСХ; сито с диаметром отверстий 1 мм; кофемолка; весы лабораторные анали- буха); у третьих — в подземных органах (раувольфия змеиная,
тические; весы ручные; центрифуга лабораторная на 5—6 тыс. об/мин; капилляры безвременник великолепный, скополия карниолийская) или в коре
стеклянные; вата гигроскопическая; пульверизатор; фотоэлектроколориметр (цинхона красносоковая, цинхона Ледгера).
ФЭК-56М, пластинки «Силуфол»; баня водяная лабораторная; фильтр стеклян-
ный ПОР 160. Большинство растений содержит несколько алкалоидов. У ряда
растений обнаружено 20—35 алкалоидов (мак снотворный, споры-
нья, цинхона (хинное дерево) и др.), а у некоторых — около 50 ал-
Вопросы для подготовки калоидов (раувольфия змеиная, барвинок прямой). Чаще всего
1. Определение дубильных веществ. у одного растения количественно преобладает один или 2—3 алка-
2. Классификация дубильных веществ. лоида, содержание же других — значительно меньше. Алкалоиды
3. Физические и химические свойства.
4. Локализация дубильных веществ. одного растения, как правило, имеют довольно близкое строение и
5. Методы выделения дубильных веществ из растительного сырья, очистка. образуют группу «родственных» алкалоидов.
6. Качественные реакции на дубильные вещества.
7. Хроматографический анализ.
8. Методы количественного определения дубильных веществ в раститель- § 1. Классификация
ном сырье.
Все алкалоиды, как уже отмечалось, содержат в своем составе
Литература азот, причем подавляющее большинство алкалоидов — гетероцик-
лические соединения (с азотом в цикле). Небольшое число алкалои-
Запрометов Μ. Η. Физиология растений, т. 5, 3, 1958, с. 408—416. дов — ациклические соединения или содержат азот в боковой цепи.
Биохимия растений: Пер. с англ./Под ред. Кретовича В А. — М··" Мир, В основу современной классификации алкалоидов положена
1968, с. 329—348.
Лист скумпии. ГОСТ 4564—79. классификация, предложенная акад. А. П. Ореховым, который раз-
Лист сумаха. ГОСТ 4565—79. делил алкалоиды на группы в зависимости от строения основного
Блажей Α., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхожде-
ния. — М·: Мир, 1977, с. 60—86.
углеродно-азотного цикла или положения азота в молекуле алка-
лоида.
I. Алкалоиды — производные пирролидина:

ГЛАВА 10. АЛКАЛОИДЫ

Алкалоидами называют группу азотсодержащих органических j.


соединений основного характера, имеющих обычно довольно слож- пирролидин
ный состав и часто обладающих сильным специфическим физиоло-
гическим действием. 1. Простые производные пирролидина. К алкалоидам этой под-
_ Название «алкалоид» происходит от двух слов: арабского «ал- группы относятся, например, гигрин, кускгигрин (содержатся в ли-
кали» (alcali) — щелочь и греческого «ейдос» (eidos) — подобный. стьях кокаинового куста сем. эритроксилоновых, в корнях скопо-
Содержание алкалоидов в растениях невелико и колеблется от лии дурманолистной сем. пасленовых); карпаин (в листьях и семе-
тысячных долей процента до нескольких процентов. И только весьма нах дынного дерева сем. кариковых) и др.
редко некоторые растения содержат около десяти процентов алка- 2. Производные пирролизидина (конденсированная бицикли-
лоидов, а иногда значительно больше. Например, в коре хинного ческая система, состоящая из двух циклов пирролидина):
дерева содержание алкалоидов достигает 15—20 %. В лекарствен-
ном сырье общее содержание алкалоидов (суммы алкалоидов) чаще
всего колеблется в пределах 0,1—2 %.
пирролнзндин
122
123
Алкалоиды производные пирролизидина встречаются в растениях например, анабазин, который содержится в анабазисе (ежовник
семейства астровых (сложноцветных), бурачниковых, бобовых. Наи- безлистный) сем. маревых.
более известны алкалоиды платифиллин, который выделен из кре-
стовника плосколистного, а также саррацин — из крестовника ром-
болистного:
CH_CH S СН 3 СН 3
сн-сн„ Η
о=с_с_сн2-сн-с-с=о анабазин

он 4. Производные бициклической конденсированной системы пи-


-СН 2 —ι
перидина и пирролидина. а. Тропановые алкалоиды. Широко из-
вестны алкалоиды атропин, гиосциамин, скополамин:
саррацин
платифиллин
сн2он сн,он
II. Алкалоиды — производные пиридина и пиперидина:
I л ^ \
N-СНз -С—С Η ι
Ν—снЛ-о—с-сн
II I
О С6Н5
О г,н.
атропин скополамин

пиридин Источниками этих алкалоидов являются некоторые растения


& семейства пасленовых: красавка обыкновенная, красавка кавказ-
пиперидин ская, скополия карниолийская, дурман индейский и др. К этой
Алкалоиды этой группы встречаются в большом числе лекарствен- подгруппе, относится алкалоид кокаин, который найден в листьях
ных растений. Они имеют различную степень сложности и подраз- кокаинового куста:
деляются на несколько групп. о
1. Простые производные пиридина и пиперидина. Как пример
можно отметить кониин, который содержится в болиголове пятнистом •с—о—сн3
сем. сельдерейных (зонтичных); лобелии, выделенный из лобелии [—СН о—с—с 6 н 5
сем. лобелиевых:
/ \ кокаин

,н7 б. Производным бициклической конденсированной системы пипе-


ридина и пирролидина является секуринин, который содержится
н в секуринеге полукустарниковой сем. молочайных:

2. Производные бициклической неконденсированной системы,


состоящей из циклов пиридина и пирролидина. К этой подгруппе
относится никотин, который обнаружен во многих растениях,
например в табаке и махорке сем. пасленовых; в некоторых видах
хвоща сем. хвощевых и плауна сем. плауновых:

секуринин

5. Производные бициклической конденсированной системы, со-


сна стоящей из двух циклов пиперидина или пиридина и пиперидина
(хинолизидина):

3. Производные бициклической неконденсированной системы,


состоящей из циклов пиридина и пиперидина. Сюда относится,
хннолизидин
124
125
К этой подгруппе относятся цитизин, пахикарпин и многие Алкалоиды этой группы широко распространены в природе.
другие, так называемые лупиновые или хинолизидиновые алка- Они имеют разнообразное строение и степень сложности.
лоиды.
Отметим 5 подгрупп, алкалоиды которых чаще всего встречаются
Алкалоиды этой подгруппы широко распространены в растениях в лекарственных растениях.
сем. бобовых. Цитизин содержится в термопсисе ланцетовидном, 1. Простые производные изохинолина. К простым производным
термопсисе очередноцветковом; пахикарпин — в софоре толсто- изохинолина принадлежат, например, сальсолин, сальсолидин —
плодной, термопсисе ланцетовидном:
алкалоиды солянки Рихтера сем. маревых:
Ν—Η

Э СНЯ

пахикарпин сальсолин

III. Алкалоиды — производные хинолина: 2. Производные бензилизохинолина. Некоторые алкалоиды мака


снотворного сем. маковых, например папаверин, наркотин, являются

• оо
производными бензилизохинолина:

хинолнн НдСО-У4/^
К этой группе относятся алкалоиды хинного дерева (цинхона
красносоковая) сем. мареновых: хинин, хинидин, цинхонин и др.;
эхинопсин, который выделен из плодов мордовника обыкновенного CHj
и мордовника шароголового сем. астровых (сложноцветных):
папаверин
3. Производные фенантренизохинолина. К этой подгруппе отно-
н сятся морфин, кодеин, тебаин и др. (содержатся в маке снотворном):

н 3 со но
сн.
эхинопсии

IV. Алкалоиды — производные акридина:


морфин
4. Производные фенантридинизохинолина. Фенантридиновые ал-
калоиды, например галантамин, найдены в подснежнике Воронова,
акридин в унгернии Виктора сем. амариллисовых:
Алкалоиды — производные акридина встречаются довольно он
редко. К этой группе относятся в основном алкалоиды некоторых
тропических растений сем. рутовых.
V. Алкалоиды — производные изохинолина:
/
1

нзохинолин
галантамин
126
127
5. Производные диизохинолина. В эту подгруппу входят, на- пин, который найден в пилокарпусе хаборанди и других видах
пример, алкалоиды типа берберина. Берберин встречается в расте- пилокарпуса сем. рутовых:
ниях довольно часто, например в барбарисе обыкновенном, барба-
рисе амурском сем. барбарисовых; в бархате амурском сем. руто- -CH2— N-CHa
вых и др.:

пилокарпин

ЭТОЙ
VIII Алкалоиды — производные хиназолина:
сн 3
осн, линазолин
берберин группе относятся фебрифугин и изофебрифугин, содержа-
щиеся в дихрое противолихорадочной сем. камнеломковых; пега-
VI. Алкалоиды — производные индола: нин — в гармале обыкновенной сем. парнолистниковых:
О НО
• >
•N·

f| Ν—СН2-С-СНа-
Η •Ν'
индол

Многие индольные алкалоиды имеют сложное строение. До- фебрифугин
вольно большое число лекарственных растений содержат алкалоиды
этой группы, например спорынья сем. спорыньевых. В склероциях
спорыньи находится значительное число алкалоидов производных IX. Алкалоиды — производные пурина:
лизергиновой и изолизергиновой кислот: эргометрин, эрготамин,
эргокристин и др.:
/ ^ N-H

пурин
N-CH.
Производными пурина являются кофеин, теобромин, теофил-
лин; они найдены в чае китайском сем. чайных; в шоколадном де-
реве и в стеркулии платанолистной сем. стеркулиевых:

лизергиновая кислота
Ν—СН.
HSC-N
Алкалоиды этой группы содержатся также в ряде растений сем.
кутровых (раувольфия змеиная и другие виды; барвинок прямой,
барвинок малый и другие виды), а также в чилибухе сем. логание-
вых и других растениях.
ϋ N-H кбфепи
VII. Алкалоиды — производные имидазола: 1 I Эта
X. Алкалоиды — производные циклопентанпергидрофенантрена
\[^ (стероидные алкалоиды). Алкалоиды этой группы обнаружены в
имидазол
ряде растений сем. пасленовых: паслен дольчатый (соласонин и
группа небольшая; основным представителем является пилокар-
б п/р Гринкевич и др. 129
128
соламаргин — агликонсоласодин), картофель (соланин и чаконин — § 2. Физико-химические свойства
агликон соланидин) и другие, а также в растениях сем. спаржевых
(лилейных) — чемерица Лобеля и др.! В состав большинства алкалоидов входят углерод, водород,
азот и кислород. Кроме того, некоторые алкалоиды содержат в своем
составе еще и серу (алкалоиды кубышки желтой). Алкалоиды,
в состав которых входит кислород, обычно кристаллические веще-
ства. Некоторые алкалоиды не содержат кислорода и представляют
собой чаще всего летучие маслянистые жидкости. Большинство
алкалоидов оптически активные вещества, без запаха, горького
вкуса, с четкой температурой плавления или кипения.
Значительное большинство алкалоидов — бесцветные вещества,
но известно небольшое число окрашенных алкалоидов, такие, как,
например, берберин, серпентин, хелеритрин, имеющие желтую
соласодин окраску; сангвинарин — оранжевую.
Ряд алкалоидов в УФ свете имеют характерное свечение. Основ-
XI. Алкалоиды дитерпеновые. Дитерпеновые алкалоиды обна- ные (щелочные) свойства у различных алкалоидов выражены
ружены в различных видах живокости (метилликаконитин, элатин, в разной степени. В природе чаще всего встречаются алкалоиды,
дельсемин и др.) и аконита (аконитин, зонгорин и др.): которые по своему строению относятся к третичным аминам, реже —
к вторичным, а также алкалоиды, которые являются четвертичными
осн аммонийными основаниями.
СН, Константы диссоциации известных алкалоидов колеблются в
он
очень больших пределах: от I · 10"1 до 1 • 10~12 и более. В соответст-
н,с вии с этим алкалоиды образуют соли различной степени прочности.
Алкалоиды с очень малой величиной диссоциации, например ко-
феин, колхицин, прочных солей не образуют.
Соли алкалоидов, как правило, хорошо растворимы в воде и
метилликаконитин зонгорин этиловом спирте (особенно в разбавленном при нагревании). Плохо
XII. Алкалоиды с азотом в боковой цепи и ациклические алка- или совсем нерастворимы в большинстве органических растворите-
лоиды. К алкалоидам с азотом в боковой цепи относятся, например, лей (хлороформ, этиловый эфир, дихлорэтан и др.). Но известны
эфедрин, который содержится в эфедре хвощевой сем. эфедровых; соли некоторых алкалоидов, плохо растворимые в воде (сульфат
колхицин и колхамин — в безвременнике великолепном сем. спар- хинина, сульфат таспина), а также соли алкалоидов, которые раст-
жевых (лилейных); воряются в органических растворителях. Например, гидробромид
скополамина растворяется в хлороформе.
СН—CH—NH ИзС0
Основания алкалоидов в большинстве своем хорошо растворимы
ι ι н со
•NHCH, в органических растворителях и нерастворимы или плохо раство-
римы в воде. Однако имеются алкалоиды, которые хорошо раство-
сн 3 сн3 з римы не только в органических растворителях, но и в воде. Напри-
н,со мер, цитизин, метилцитизин, кофеин и некоторые другие.
В растениях алкалоиды находятся чаще всего в виде солей и
растворены в клеточном соке. Алкалоиды связаны с широко распро-
осн, страненными в растительном мире органическими кислотами: щаве-
8федрив
левой (НООС—СООН), яблочной [НООС—СН2—СН(ОН)—СООН],
лимонной [НООС—СН2—С(ОН)(СООН)—СН2—СООН], винной
К ациклическим алкалоидам относится, например, сферофизин,
[НООС—СН(ОН)—СН(ОН)—СООН] и др. В некоторых же расте-
выделенный из сферофизы соланцовой сем. бобовых:
ниях алкалоиды связаны еще со специфическими органическими
кислотами, характерными для растений определенного семейства

> —сн=сн—ιNH—(СН ) —NH—С/


вферофизан
2 4
·ΝΗ 2
или даже отдельного растения. Так, например, меконовая (β-окси-
γ-пирон-а, а'-дикарбоновая) кислота характерна для мака снотвор-
ного; хинная (циклогексан-1,3,4,5-тетраоксикарбоновая)—для
130 5* 131
хинного дерева!
извлечения алкалоидов:
н · НаСО3

НООС
OOH Извлечение свободных оснований алкалоидов из растительного
сырья проводится различными органическими растворителями. Для
более полного извлечения следует подобрать растворитель, облада-
ющий хорошей растворяющей способностью по отношению к извле-
каемым алкалоидам. Чаще всего применяются дихлорэтан, хлоро-
меконовая кислота хинная кислота форм, этиловый эфир, бензол и др. Вместе с алкалоидами в извлече-
ние переходят сопутствующие вещества: смолы, жирные масла,
Иногда алкалоиды связаны с неорганическими кислотами: серной, хлорофилл и другие пигменты, от которых алкалоиды необходимо
фосфорной (мак снотворный). отделить.
Извлечение алкалоидов в виде солей. Соли алкалоидов в боль-
§ 3. Методы выделения шинстве своем хорошо растворимы в воде и спиртах (этиловый,
метиловый). Поэтому при извлечении алкалоидов из растительного
В большинстве случаев процесс выделения (получения) алка- сырья в виде солей применяют один из названных растворителей,
лоидов из растительного сырья подразделяют на 3 основные стадии: содержащий 1—2 % какой-либо кислоты. Обычно для подкисления
I) извлечение алкалоидов из растительного сырья; 2) очистка по- используют серную, соляную, винную, уксусную или другую кис-
лученных извлечений; 3) разделение суммы алкалоидов и очистка лоту, дающую с алкалоидами хорошо растворимые в воде или спирте
алкалоидов. соли.
Извлечение алкалоидов из растительного сырья. Из раститель- Извлечение проходит быстро и достаточно полно, но вместе с
ного сырья алкалоиды могут быть извлечены в виде свободных осно- алкалоидами извлекается большое количество сопутствующих ве-
ваний и в виде солей. ществ (дубильные вещества, слизи, сапонины, белки и др.).
Извлечение алкалоидов в виде оснований. Алкалоиды в расти- Очистка извлечений. Очистка извлечений, основанная на различ-
тельлом сырье обычно содержатся в виде солей, поэтому до извле- ной растворимости свободных оснований алкалоидов и их солей.
чения необходимо перевести соли алкалоидов в свободные основа- 1. Извлечение алкалоидов из растительного сырья, полученное
ния, что достигается обработкой сырья различными щелочами щелочной (после подщелачивания) экстракцией органическим раст-
(NH4OH, NaOH, Са(ОН)2, Ba(OH)2 и др.). При подборе щелочи ворителем (несмешивающимся с водой), обрабатывают 1—5%-ной
учитывают свойства алкалоидов. Сильные щелочи, например NaOH, кислотой. Основания алкалоидов с кислотой образуют соответствую-
используют при выделении сильных оснований алкалоидов и алка- щие соли, которые, растворяясь в воде, переходят в водный слой,
лоидов, находящихся в растительном сырье в виде прочных соеди- а основная масса сопутствующих веществ остается в органическом
нений с дубильными веществами (кора хинного дерева, кора грана- растворителе. К водному раствору солей алкалоидов добавляют ще-
тового дерева), но не применяют при выделении алкалоидов, имею- лочь для переведения солей алкалоидов в основания. Если содер-
щих в молекуле фенольные гидроксилы. Такие алкалоиды, как, жание алкалоидов высокое, основания алкалоидов выпадают в оса-
например, морфин, сальсолин, некоторые алкалоиды спорыньи, док, который можно собрать на фильтре. Но чаще водные извлече-
вследствие образования фенолятов органическим растворителем не ния после подщелачивания обрабатывают несмешивающимся с во-
извлекаются, так как феноляты, как правило, хорошо растворимы дой органическим растворителем. Алкалоиды в виде оснований пе-
в воде и нерастворимы в органических растворителях. Для переве- реходят в органический растворитель. Если требуется, эти операции
дения их солей в основания используют обычно аммиак. При вы- повторяют два раза или более, с тем чтобы как можно полнее отде-
делении алкалоидов, имеющих сложноэфирную группировку (атро- лить алкалоиды от сопутствующих веществ.
пин, гиосциамин, скополамин и др.) также используют аммиак и Органический растворитель отгоняют. Остаток, полученный
другие слабые щелочи, так как сильные щелочи могут вызывать раз- после отгонки растворителя, представляет смесь (сумму) алкалои-
ложение алкалоидов. Не следует применять NaOH и при выделении дов.
алкалоидов из семян, содержащих жирные масла, так как едкие 2. Извлечение алкалоидов из растительного сырья, полученное
щелочи вызывают омыление жиров. Мыла же способствуют образо- экстракцией 1—2%-ным раствором кислоты, подщелачивают и после
ванию эмульсий. этого основания алкалоидов извлекают органическим растворите-
При применении карбоната натрия следует полностью (путем лем. Если алкалоиды извлекали спиртом (этиловый, метиловый),
встряхивания) удалять углекислоту, которая может, взаимодейст- то спирт отгоняют, а полученный остаток растворяют в воде. При
вуя с алкалоидами, давать соли, что создает опасность неполного атом соли алкалоидов растворятся в воде, а та часть сопутствующих
132 133
веществ, которая в воде не растворилась, отделяется фильтрова- Разделение суммы алкалоидов на основании их различной раство-
нием. Водный раствор солей алкалоидов подвергают дальнейшей римости в органических растворителях.
очистке, как было уже указано. 1. В некоторых случаях частичное разделение происходит уже
Очистка извлечений хроматографическим методом (на колонке). при обработке органическим растворителем первоначального водно-
Адсорбционная хроматография основана на избирательной адсорб- кислотного извлечения после подщелачивания. При его обработке,
ции одного или нескольких веществ из растворов или из парогазо- например, этиловым эфиром в органический растворитель могут
образной смеси твердыми веществами — сорбентами (адсорбентами). перейти не все, а только часть алкалоидов. Оставшиеся в перво-
Хроматографический метод очистки и разделения алкалоидов при- начальном растворе алкалоиды можно извлечь, используя для
меним как к водным растворам солей алкалоидов, так и к раство- этого другие органические растворители (хлороформ, дихлорэтан
рам оснований алкалоидов в органических растворителях. Адсорб- и др.). Иногда таким способом можно достигнуть хороших резуль-
ционные процессы, применяемые в химико-фармацевтической про- татов. Но чаще у алкалоидов одного растения различие в раствори-
мышленности, делят на две группы: 1) процессы очистки, при кото- мости бывает выражено не очень резко и поэтому достигается только
рых поглощаются примеси (сопутствующие вещества), а алкалоиды частичное разделение. В таких случаях требуется или повторное
остаются в растворе; 2) процессы очистки, при которых поглощаются проведение этой операции, или применение другого способа разде-
алкалоиды, а сопутствующие вещества остаются в растворе. ления.
Различают два вида адсорбции: молекулярную и ионообменную. 2. При последовательной обработке остатка (суммы алкалои-
В первом случае происходит переход молекулы растворенного ве- дов), полученного после отгонки растворителя, различными органи-
щества из подвижной фазы в неподвижную — твердую. Адсорбция ческими растворителями (петролейный эфир, бензол, хлороформ и
осуществляется на поверхности твердого сорбента без химической др.) в некоторых случаях можно достигнуть частичного разделения
реакции. суммы алкалоидов.
Во втором случае происходит обмен ионов растворенного ве- Разделение суммы алкалоидов по различной силе основности.
щества с ионами сорбента. 1. Если к водному раствору суммы солей алкалоидов с различно
Таким образом, ионообменная хроматография является методом, выраженными основными свойствами прибавить щелочь в недоста-
при котором для очистки (разделения) используется процесс обмена точном количестве для переведения всех солей алкалоидов в осно-
ионов между растворенным веществом и ионообменными сорбентами. вания, то в первую очередь в реакцию вступят соли алкалоидов со
По природе ионообменные сорбенты делятся на минеральные и ор- слабо выраженными основными свойствами, а более сильные основа-
ганические, а по характеру обмениваемых ионов — на аниониты и ния останутся в виде солей. При обработке такого раствора орга-
катиониты. ническим растворителем образовавшиеся свободные основания алка-
В качестве ионитов обычно используют ионообменные высоко- лоидов перейдут в органический растворитель, а соли более силь-
молекулярные соединения — ионообменные смолы кислого или ос- ных оснований алкалоидов останутся в водном слое. После этого
новного характера, нерастворимые в воде и органических раствори- к водному раствору вторично добавляют определенное (недостаточ-
телях. Полученные извлечения пропускают через колонку, запол- ное) количество щелочи и затем этот раствор вновь обрабатывают
ненную сорбентом. Сорбент и условия адсорбции должны быть органическим растворителем. Вытесненные из солей более сильные
выбраны такие, чтобы адсорбция извлекаемого вещества (или ве- основания алкалоидов перейдут в новую порцию органическою
ществ) была избирательной и максимальной. Десорбция (элюирова- растворителя. К оставшемуся водному слою еще добавляют щелочь
ние) алкалоидов проводится подходящим растворителем, обеспечи- и т. д. до полного переведения солей алкалоидов в свободные
вающим максимальное элюирование. основания.
Разделение суммы алкалоидов. В растительном сырье обычно Таким образом, более слабые основания алкалоидов будут
содержится не один, а несколько алкалоидов, и в большинстве слу- в первых фракциях органического растворителя, а более сильные —
чаев при обработке растительного сырья в извлечение переходят в последних.
все или большинство алкалоидов (сумма). Отделить один «нужный» 2. Если к раствору суммы свободных оснований алкалоидов
алкалоид от остальных, а тем более разделить сумму алкалоидов в органическом растворителе прибавить недостаточное количество
на индивидуальные соединения очень сложно. Так как боль- кислоты, то в первую очередь в реакцию с кислотой вступят алка-
шинство алкалоидов обладает различными физическими и хи- лоиды с сильно выраженными основными свойствами, тогда как
мическими свойствами, предложить единую схему разделения более слабые основания останутся в свободном состоянии. Таким
трудно. Описано большое число методов и их различных моди- образом, при дробном извлечении алкалоидов из раствора их в ор-
фикаций, позволяющих разделить сумму алкалоидов на отдель- ганическом растворителе небольшими порциями кислоты, так же
ные алкалоиды. Отметим только основные принципы разделения как и при дробном подщелачивании, можно получить ряд фракций,
суммы алкалоидов. в которых алкалоиды распределяются по «силе основности» — в пер-
134 135
вых фракциях будут находиться сильные основания алкалоидов, органические соединения кислотного характера. Для проведения
в последующих — более слабые. качественных реакций из растительного сырья обычно готовят
Разделение По этому принципу не бывает полным и требует кислотное извлечение. При добавлении соответствующих реактивов
повторной обработки обогащенных фракций. в присутствии алкалоидов тотчас или через некоторое время обра-
Разделение суммы алкалоидов путем получения солей или других зуется осадок. Обилие осадка зависит как от количественного содер-
производных. Этот метод основан на том, что в некоторых случаях жания алкалоидов, так и от чувствительности их к реактиву. Однако
при обработке суммы алкалоидов каким-либо реактивом в реакцию следует учитывать, что с общими реактивами образуют осадки еще
вступают не все алкалоиды смеси, а часть или один из алкалоидов. и некоторые другие органические соединения, которые могут со-
Например, так можно разделить- фенольные и нефенольные алка- держаться в неочищенных извлечениях (холин, бетаин, белки, про-
лоиды (эметин и цефаэлин). Можно разделить довольно сложную дукты их разложения и др.). Поэтому, чтобы получить более досто-
смесь алкалоидов путем получения различных солей алкалоидов верные результаты, общие реакции проводят еще и с очищенными
(гидрохлориды, гидробромиды, оксалаты, иодиды, пикраты и др.) извлечениями.
и дальнейшей перекристаллизацией их. Ввиду того, что чувствительность различных алкалоидов к «оса-
Разделение суммы алкалоидов хроматографическим методом. дочным реактивам» неодинакова, реакции обычно проводят не с од-
Этот метод используется как для очистки, хак и разделения алка- ним каким-либо реактивом, а с несколькими (5—7) различными
лоидов. Разделение алкалоидов основано на том, что они обычно реактивами. Наиболее часто используются следующие реактивы:
имеют различную адсорбционную способность. Например, хромато- Майера (раствор дихлорида ртути и иодида калия), Вагнера и Бу-
графическим методом из сложной смеси алкалоидов мака можно шарда (растворы иода в растворе иодида калия), Драгендорфа
выделить морфин, из суммы алкалоидов эфедры — эфедрин. (раствор нитрата висмута основного и иодида калия с добавлением
Через колонку, заполненную соответствующим сорбентом, про- уксусной кислоты), Марме (раствор иодида кадмия в растворе иодида
пускают раствор или извлечение, содержащее несколько алкалои- калия); раствор танина, растворы кремневольфрамовой, фосфорномо-
дов. Десорбцию (элюирование) проводят подходящим растворите- либденовой, фосфорновольфрамовой, пикриновой кислот и др.
лем или смесью растворителей. При этом получают несколько фрак- Специфические реакции на алкалоиды. Если необходимо уста-
ций, содержащих индивидуальные алкалоиды или менее сложную новить присутствие определенного алкалоида или определенной
смесь алкалоидов. Если необходимо, отдельные фракции подвергают группы алкалоидов в растительном сырье, проводят специ-
повторному хроматографированию (см. с. 134). фические реакции (цветные) и микрокристаллоскопические реак-
Разделение суммы алкалоидов по различной температуре кипения.. ции.
В случае присутствия в смеси летучих алкалоидов разделить их Специфические реакции проводят с индивидуальными алкалои-
можно путем фракционной перегонки. Так, например, кониин и дами или с очищенной суммой алкалоидов.
конгидрин (алкалоиды болиголова пятнистого) сильно отличаются Алкалоиды из растительного сырья извлекают 1—5%-ным раст-
по температуре кипения. Перегонку обычно проводят при пони- вором какой-либо кислоты (соляная, серная или другая). Кислот-
женном давлении. ное извлечение подщелачивают раствором аммиака или другой
щелочи и затем алкалоиды извлекают органическими растворите-
§ 4. Качественное определение и идентификация лями (хлороформом, дихлорэтаном, этиловым эфиром и т. д.). Орга-
нический растворитель отгоняют или выпаривают в фарфоровой
Для обнаружения алкалоидов в растительном сырье чаще всего чашке и с остатком проводят соответствующие реакции. В качестве
используют общие (осадочные) реакции и хроматографию. Кроме специфических реактивов на алкалоиды при проведении реакций
того, учитывают еще некоторые свойства алкалоидов: их раствори- окрашивания довольно часто используют концентрированную H2SO4
мость в кислотах и выпадение в осадок после подщелачивания, ще- и HNO3, а также концентрированную H2SO4, содержащую формалин
лочную реакцию спиртовых растворов оснований алкалоидов и др. (реактив Марки), концентрированную H2SO4 с молибдатом аммония
С целью идентификации алкалоидов проводят специфические (цвет- (реактив Фреде) и др. При проведении микрокристаллоскопических
ные) реакции, микрокристаллоскопические реакции и хроматографи- реакций — пикриновую, пикролоновую и стифниновую кислоты,
ческий, спектроскопический, люминесцентный анализы и т. д. роданидные и иодидные комплексы металлов и др.
Общие реакции на алкалоиды (реакции осаждения). Реакции Специфические реакции на индивидуальные алкалоиды подробно
осаждения позволяют установить наличие алкалоидов даже при описаны в руководствах по фармацевтической и токсикологической
незначительном их содержании. Основаны они на том, что алкалоиды химии.
при взаимодействии с некоторыми веществами образуют нераство- Хроматографический анализ. Хроматография на бумаге и в тон-
римые в воде соединения. Это главным образом соли тяжелых ме- ком слое сорбента является ведущим аналитическим методом в фи-
таллов, комплексные иодиды, комплексные кислоты и некоторые тохимическом анализе.
136 137
При проведении фитохимического анализа вообще и, в частности, Хроматография в тонком слое сорбента.
анализа растительного сырья, содержащего алкалоиды, эти методы Тонкослойная хроматография (ТСХ) может быть использована для
могут быть использованы как для обнаружения и идентификации идентификации и при количественном определении алкалоидов
алкалоидов, так и для контроля степени очистки и разделения в растительном сырье. Хроматографирование проводят на пластин-
суммы алкалоидов. ках с закрепленным и незакрепленным слоем сорбента. В качестве
Х р о м а т о г р а ф и я н а б у м а г е . Существует большое сорбента используют «оксид алюминия для тонкослойной хромато-
число различных методов «бумажной хроматографии» (БХ). Наи- графии», силикагель марки КСК и др.
более простыми и часто применяемыми являются методы восходя- Для приготовления пластинок с закрепленным слоем сорбента
щей, нисходящей и радиальной хроматографии. При восходящей и в качестве фиксатора применяют CaSO, ·1 / 2 Н а О; основой служат
нисходящей хроматографии на стартовую линию полосы хромато- стеклянные пластинки размером 12—20 X 8—15 см.
графической бумаги наносят капилляром или специальной пипеткой Извлечение и раствор «свидетеля» наносят капилляром или
исследуемое извлечение и раствор «свидетеля». Объемы испытуемого специальной пипеткой на стартовую линию, которая отстоит от ниж-
извлечения и раствора «свидетеля», наносимые на хроматограмму, него края пластинки на 1,5—2 см. Для разделения обычно приме-
зависят от концентрации извлечения и раствора, а также чувстви- няют способ восходящей хроматографии. Край пластинки погру-
тельности алкалоидов к реактиву. жают в жидкость, которую наливают в хроматографическую камеру.
Способ закрепления подготовленной хроматограммы в хромато- Слой жидкости должен быть около 5 мм. Пластинку с закрепленным
графической камере зависит от метода хроматографирования. Си- слоем помещают в хроматографическую камеру, насыщенную па-
стема растворителей должна обеспечивать максимальное разделе- рами растворителя, вертикально, с незакрепленным слоем — под
ние алкалоидов, содержащихся в извлечении. При соприкосновении углом 15—20°. Экспозиция от 30 мин до 1,5 ч.
хроматограммы с жидкостью растворитель начинает медленно рас- Чаще всего используют следующие системы растворителей:
пространяться вдоль бумаги. Когда растворитель проходит через 1) хлороформ — ацетон —диэтиламин ( 5 : 4 : 1); 2) хлороформ —
участок, где нанесена сумма алкалоидов, происходит растворение диэтиламин (9 : 1); 3) н-бутанол — метиловый спирт —диэтиламин
веществ, и они перемещаются вместе с жидкостью. На каждом уча- ( 1 7 : 1 : 2 ) ; 4) хлороформ — метиловый спирт — уксусная кислота
стке хроматограммы происходит многократное перераспределение <18 : 1 : 1); 5) бензол — метиловый спирт (19 ι 1); 6) хлороформ —
вещества между подвижной и неподвижной фазой, и поэтому ско- этиловый спирт (9 : 1); 7) ацетон — раствор аммиака (95 ι 5); 8) хло-
рость перемещения веществ по бумаге различна и зависит от его роформ — этиловый спирт (8 : 2).
коэффициента распределения. Расстояние между стартовой линией После высушивания ТС хроматограммы обрабатывают теми же
и фронтом растворителя может быть различным (20—40 см) и за- реактивами, что и хроматограммы на бумаге.
висит от разницы между Rf веществ, содержащихся в извлечении. Спектральный анализ. С целью идентификации алкалоидов
Чем меньше разница между Rf, тем больше должно быть расстоя- кроме качественных реакций и хроматографического анализа опре-
ние от стартовой линии до фронта растворителя. Экспозиция обычно деляют температуру плавления, удельное вращение, брутто фор-
от 3 до 20 ч, что определяется маркой хроматографической:бумаги, мулу, молекулярную массу, получают ряд производных, определяют
системой растворителей и др. Чаще всего используют следующие их константы. Кроме того, для идентификации алкалоидов широко
системы растворителей; 1) н-бутанол — уксусная кислота — вода используют УФ, ИК, ПМР, масс-спектры. При этом нет необходи-
( 5 : 1 : 4); 2) н-бутанол — уксусная кислота — вода (10 : 2 : 5); мости снимать одновременно спектры исследуемого вещества и
3) н-бутанол — соляная кислота — вода (100 : 4: вода до насыще- известного образца, поскольку последний можно взять из литера-
ния); 4) этилацетат — уксусная кислота — вода (11 ι 21 : 85); туры.
5) н-бутанол — пиридин — вода (10 : 2 : 5) и др. УФ, ИК, ПМР, масс-спектры особенно широко используются
Для обнаружения алкалоидов высушенную хроматограмму при установлении структуры алкалоидов, так как интерпретация
обрабатывают каким-либо реактивом, дающим с алкалоидами спектров позволяет установить наличие или отсутствие сопряжен-
окрашенные соединения. Чаще всего для этого используют ных двойных связей и различных функциональных групп (карбо-
реактив Драгендорфа. При обработке хроматограммы этим реак- нильной, N-метильной, гидроксильной и др.), ароматического цикла
тивом появляются оранжевые или оранжево-красные пятна (алка- и др. Так, например, в ИК спектре атропина (рис. 25) полосы погло-
лоиды) на желтом фоне. Можно для обнаружения алкалоидов 1
щения при 1740 см" указывают на наличие карбонила сложноэфир-
использовать пары иода (образуются бурые пятна).* Для обна- 1
ной связи; 2940 см" — спиртового гидроксила. В УФ спектре атро-
ружения стероидных алкалоидов можно использовать насыщен- пина (рис. 26) отмечаются λπ,βχ = 252, 258, 262 нм, характерные
ный хлороформный раствор треххлористой сурьмы с последую- Для сопряженных двойных связей в ароматическом цикле.
щим нагреванием при 105 °С. Появляется кирпично-красное окра- Полосы поглощения при 3220—3480 см"1 в ИК спектре морфина
шивание. (рис. 27) типичны для фенольного и спиртового гидроксилов. В УФ
138 139
спектре морфина (рис. 28) 284 нм указывает на присутствие 2. Реактивы Вагнера и Бушарда. С большинством алкалоидов
ароматического цикла. в слабокислых растворах эти реактивы образуют бурые осадки.
3. Реактив Драгендорфа. Многие алкалоиды в кислых раство-
рах дают оранжево-красные или кирпично-красные осадки.
80

ВО

40

20

3800 JW 3000 2600й 1800 1600


Рио. 25. ИК спектр атропина

Методики качественного анализа. П р и г о т о в л е н и е из- -J I


3600 2800 2000 1500 '
в л е ч е н и я и з р а с т и т е л ь н о г о с ы р ь я , а) 1 г измель- 1200 1000 кем*
ченного растительного сырья помещают в колбу вместимостью Рио. 27. ЙК спектр морфина
100 мл, заливают 25 мл 1%-ной НС1 и нагревают на кипящей водя-
ной бане в течение 5 мин. После охлаждения извлечение фильтруют 4. Реактив Марме. С алкалоидами реактив Марме дает белые
через бумажный фильтр (извлечение А). или желтоватые осадки, часто растворимые в избытке реактива.
б) 2 г измельченного растительного сырья помещают в колбу Чувствительность некоторых алкалоидов к этому реактиву неве-
вместимостью 100 мл, добавляют 1 мл ГО%-ного раствора аммиака и лика. Атропин, колхицин, вератрин и некоторые другие алкалоиды
20 мл хлороформа и оставляют на 1 ч при осаждаются из сравнительно концентрированных растворов, а ко-
периодическом перемешивании. Хлоро- феин этим реактивом совсем не осаж-
формное извлечение отфильтровывают че- дается. Иге
рез вату в делительную воронку вмести- 5. Раствор танина. В подкислен-
мостью 100 мл и алкалоиды извлекают ных растворах алкалоиды дают с та-
3,0 15 мл 1%-ной НС1 (извлечение Б). нином беловатые или желтоватые
Качественные реакции (общие реакции, аморфные осадки.
реакции осаждения). Извлечение А или Б 6. Раствор кремневольфрамовой
разливают в пробирки по 1 мл и в каж- кислоты. Большинство алкалоидов 3,5
2,5 дую пробирку осторожно, по каплям, до- весьма чувствительны к этому реак-
бавляют соответствующий реактив на ал- тиву и в слабокислых растворах
калоиды. При наличии алкалоидов тотчас образуют беловатые осадки.
или через некоторое время должен обра- 7. Раствор фосфор номолибденовой
2,0 зоваться осадок. кислоты. Это один из наиболее чув-
Интенсивность осадка зависит как от ствительных реактивов. С алкалои-
количественного содержания алкалоидов, дами он образует желтоватые осад-
200 250 λ, НИ
так и от чувствительности алкалоида к ки, которые приобретают через не- 2,5
которое время синее или зеленое '200 250 300Х,нм
Рио. 26. УФ спектр атро- реактиву.*
пина 1. Реактив Майера. С большинством окрашивание вследствие восстанов- Рио. 28. УФ спектр морфина
алкалоидов в слабокислых и нейтральных ления молибденовой кислоты.
растворах этот реактив образует белый или желтоватый осадок. 8. Раствор фосфорновольфрамовой кислоты. Фосфорновольфра-
Чувствительность алкалоидов к этому реактиву весьма разли- мовая кислота со многими алкалоидами дает беловатые осадки.
чна: стрихнин и бруцин осаждаются в разведении 1 : 150 000, 9. Раствор пикриновой кислоты. Пикриновая кислота образует
морфин — 1 ι 25 000, а кофеин, колхицин реактив Майера не с рядом алкалоидов осадки (пикраты) желтого цвета. Некоторые
осаждает. алкалоиды пикриновой кислотой не осаждаются (кофеин, морфин,
но 141
аконитин, теобромин), другие же осаждаются только из концентри- 1. Хроматография на бумаге (трава термопсиса ланцетовидного,
рованных растворов (например, атропин). семена термопсиса ланцетовидного). На полоску хроматографиче-
10. Раствор пикролоновой кислоты. Со многими алкалоидами ской бумаги (длина 30—40 см, ширина 12 см) на стартовую линию,
пикролоновая кислота дает желтые осадки (пикролонаты). находящуюся на расстоянии 2—3 см от нижнего края, капилляром
П р и г о т о в л е н и е р е а к т и в о в . 1. Реактив Майера: или специальной пипеткой наносят около 0,1 мл извлечения В из
1,358 г дихлорида ртути растворяют в 60 мл воды, приливают раст- травы термопсиса и из семян термопсиса, растворы цитизина, ме-
вор 5 г иодида калия в 10 мл воды и общий объем доводят водой до тилцитизина и пахикарпина. Расстояние от бокового края полоски
100 мл. хроматографической бумаги и между пятна-
2. Реактив Вагнера: 1,27 г иода растворяют в 100 мл раствора ми — 2 см. Диаметр пятен не должен пре-
2 г иодида калия в воде. вышать 5 мм.
3. Реактив Бушарда: 1 г иода растворяют в 50 мл раствора 2 ρ Полоску хроматографической бумаги с на-
иодида калия в воде. несенными на нее растворами (после высу-
4. Реактив Драгендорфа: раствор 1 — 0,85 г нитрата висмута шивания) помещают в хроматографическую
основного растворяют в 40 мл воды и добавляют 10 мл уксусной камеру, в которую предварительно (за сутки)
кислоты; раствор 2—20 г иодида калия растворяют в 50 мл воды. налита разделительная система: м-бутанол —
Смешивают равные объемы растворов 1 и 2. К 10 мл полученной уксусная кислота — вода (5 ! 1 ι 4).
смеси добавляют 100 мл воды и 20 мл уксусной кислоты. Нижний край хроматограммы погружают
5. Реактив Марме: 10 г Cdl 2 растворяют в 100 мл 20%-ного го- в жидкость примерно на 3—5 мм (экспози-
рячего водного раствора K.I. ция — 14—15 ч).
6. Раствор танина: 10 г танина растворяют в 90 мл воды и до- После высушивания хроматограмму обра-
бавляют 10 мл этилового спирта. батывают (опрыскивают из пульверизатора)
7. Раствор кремневольфрамовой кислоты (SiCy 12WCynH2O): реактивом Драгендорфа. На желтом фоне
1 г кремневольфрамовой кислоты растворяют в воде и объем доводят проявляются оранжевые или оранжево-крас-
водой до 100 мл. ные пятна (алкалоиды) (рис. 29).
8. Раствор фосфорномолибденовой кислоты [Η,Ρ(Μο2Ο7)β · Н 2 О]: 2. Хроматография в тонком слое сорбента
1 г фосфорномолибденовой кислоты растворяют в воде и объем (трава термопсиса ланцетовидного, семена
доводят водой до 100 мл. термопсиса ланцетовидного). На стеклянную
10. Раствор фосфорновольфрамовой кислоты (Р2О5 · 12W0 3 x пластинку (размер 12 X 9 см) с закреплен-
χ42Η 2 Ο): 1 г фосфорновольфрамовой кислоты растворяют в воде ным слоем силикагеля марки· КСК на стар-
и объем доводят водой до 100 мл. товую линию, находящуюся на расстоянии
10. Раствор пикриновой кислоты [C6H2(OH)(NO2)sh 1,23 г пик- 1,5 см от нижнего края, наносят капилля- ТОграммы (БХ) алка-
риновой кислоты растворяют в 100 мл воды. ром или специальной пипеткой около 0,1 мл лоидов травы р
и семян
11. Раствор пикролоновой кислоты извлечения В из травы термопсиса, семян термопсиса ланцето-
термопсиса, растворы цитизина, метилцити- видного·
.CsN2(OH)(NH2)(CH3)]: зина, пахикарпина. Расстояние от бокового
1 г пикролоновой кислоты растворяют в воде и объем доводят водой края и между пятнами около 1,5 см. Диаметр В Ы p H , ( £ ИЗ
влечение В из семян тер-
до 100 мл. пятен не должен превышать 5 мм. После
Хроматографический анализ. П р и г о т о в л е н и е извле- ВЫСуШИВаНИЯ ПЛаСТИНКу Помещают В ХрО- пахикарпин
ч е н и я и з р а с т и т е л ь н о г о с ы р ь я . 1г измельченного матографическую камеру, в которую пред-
растительного сырья (трава термопсиса ланцетовидного, семена варительно налита разделительная система: хлороформ — ацетон —
термопсиса ланцетовидного, листья красавки, листья дурмана обык- диэтиламин (5 : 4 ι 1). Экспозиция 30—40 мин. После тщательного
новенного, семена дурмана индейского и др.) помещают в колбу высушивания хроматограмму обрабатывают (опрыскивают из пуль-
вместимостью 100 мл, заливают 25 мл 1 %-ной НС1 и оставляют на веризатора) реактивом Драгендорфа. На желтом фоне появляются
1 ч при периодическом перемешивании или нагревают на кипящей" оранжевые пятна (алкалоиды) (рис. 30).
водяной бане в течение 5 мин. После охлаждения извлечение фильт- 3. Хроматография в тонком слое сорбента (листья красавки,
руют через вату в делительную воронку вместимостью 100 мл. семена дурмана индейского). На стеклянную пластинку (размер
Фильтрат подщелачивают концентрированным раствором аммиака 12 X 9 см) с закрепленным слоем силикагеля марки КСК на старто-
до щелочной реакции по фенолфталеину, и алкалоиды извлекают вую линию, находящуюся на расстоянии 1,5 см от нижнего края»
5 мл хлороформа (извлечение В). наносят капилляром или специальной пипеткой около 0,1 мл извле-
142 14а
чения В из листьев красавки, семян дурмана индейского, растворы § 5. Количественное определение
гиосциамина, скополамина и атропина. Расстояние от бокового
края и между пятнами около 1,5 см. Диаметр пятен не должен пре- Весь процесс количественного определения алкалоидов в ра-
вышать 5 мм. После высушивания пластинку помещают в хромато- стительном сырье можно разделить на три основных этапа (стадии):
графическую камеру, в которую предварительно налита раздели- 1) извлечение алкалоидов из растительного сырья; 2) очистка по-
тельная система: хлороформ — ацетон — диэтиламин ( 5 : 4 : 1 ) — лученных "извлечений и, если требуется по методике, разделение
система I или ацетон — раствор аммиака (95 : 5) — система II. смеси алкалоидов на индивидуальные соединен-ия; 3) определение
содержания алкалоидов.
И з в л е ч е н и е а л к а л о и д о в . При количественном оп-
ределении алкалоиды из растительного сырья, так же как и при их
выделении (получении), извлекают или в виде оснований, или
О солей.
1. Извлечение алкалоидов в виде основания. При извлечении
О О алкалоидов в виде оснований соли алкалоидов, в виде которых
они содержатся в растениях, переводят в основания. Это дости-
гается обработкой сырья различными щелочами. При количествен-
ном определении алкалоидов в растительном сырье чаще всего
используют растворы аммиака и едкого натра, а также карбонат
φ © # натрия и гидроксид кальция. Выбор щелочи зависит от свойств и
строения алкалоидов. Извлечение свободных оснований алкалоидов
О О проводится органическими растворителями, не смешивающимися
с водой, обычно хлороформом, этиловым эфиром или дихлорэтаном.
2. Извлечение алкалоидов в виде солей. Соли алкалоидов в боль-
3 4- шинстве своем хорошо растворяются в воде и спиртах (этиловый,
Рис. 32. Схема хрома- метиловый). Обычно алкалоиды экстрагируют 1—2%-ной серной,
Рио. 30. Схема хромато- Рис. 31. Схема хромато- соляной, винной, уксусной кислотой или подкисленным спиртом.
граммы (ТСХ) алкалои- граммы (ТСХ) листьев тограммы (ТСХ) лис-
дов травы и семян тер- красавки и семян дурма- тьев красавки и семян О ч и с т к а и з в л е ч е н и я . Для очистки извлечений чаще
мопсиса ланцетовидного: на индейского (система1): дурмана индейского всего проводится повторное переведение солей алкалоидов в водный
/— извлечение В из листьев
(система II): раствор и свободных оснований в органический растворитель (см.
/ — извлечение В из трава
термопсиса; 2 — извлечение красавки; 2 — извлечение В 1 — извлечение В из ли-
В из семян термопсиса; 3— из семян дурмана индейс- стьев красавки; 2 — из-
с. 133). Кроме того, для очистки извлечений, а также для разделения
цитизин; 4 — метилцитизин: кого; 3 — гиосциамин; 4 —
скополамин;В — атропин
влечение В из семян дур- алкалоидов широко используется хроматографический метод (ко-
5 — пахикарпин мана индейского; 3 —
гиосциамин; 4 — скопо- лоночная хроматография, хроматография в тонком слое сорбента
ламин; 5 — атропин и на бумаге).
О п р е д е л е н и е с о д е р ж а н и я а л к а л о и д о в . Ко-
Толщина слоя жидкости около 5 мм. Экспозиция 30—40 мин. После личественное содержание алкалоидов можно определить: гравимет-
тщательного высушивания хроматограмму обрабатывают (опрыски- рическим, титрометрическим, колориметрическим, полярометриче-
вают из пульверизатора) реактивом Драгендорфа. На желтом фоне ским, полярографическим, спектрофотометр ическим.денситометриче-
появляются оранжевые пятна (алкалоиды), рис. 31 и 32. ским или другими методами.
Методика количественного определения алкалоидов в листьях
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : НС1 1%-ная; аммиак, конц. р-р; красавки (Folium Belladonnae), траве красавки (Herba, Belladonnae),
СН3СООН; н-бутанол; хлороформ; ацетон; диэтиламин; кремневольфрамовая
кислота; фосфорновольфрамовая кислота; фосфорномолибденовая кислота; пик- корнях красавки (Radix Belladonnae), листьях белены (Folium
риновая кислота; пикролоновая кислота; танин; реактивы Майера, Бушарда, Hyoscyami) и листьях дурмана (Folium Stramonii).
Вагнера, Марме, Драгендорфа; силикагель марки КСК; CaSO4; цитизин; метил- В листьях, траве и корнях красавки (Airopa bellodonna L.),
цитизин; пахикарпин; гиосциамин; скополамин; атропин.
Фенолфталеиновая бумага; бумага хроматографическая марки «С»; бумага листьях белены (Hyoscyamus niger L.) и дурмана обыкновенного
фильтровальная; воронки делительные вместимостью 100 мл; колбы плоскодон- (Datura stramonium L) сем. пасленовых (Solanaceae) содержатся
ные вместимостью 100 мл; цилиндры мерные на 10, 50 и 100 мл; воронки стеклян- алкалоиды производные тропана. В этих видах растительного
ные для фильтрования диаметром 5 см; пробирки стеклянные; камеры хромато- сырья преобладает гиосциамин, переходящий под влиянием щело-
графические для ТСХ и БХ; пластинки стеклянные для ТСХ размером 12 X чей в оптически инактивный атропин. Кроме того, в значительно
X 9 см; капилляры стеклянные; весы ручные; штативы для делительных воро-
нок; штативы для пробирок; бани водяные лабораторные; пульверизатор. меньшем количестве содержится скополамин и другие близкие по
144 6 п/р Гринкевич и др. 145
строению алкалоиды: 1 мл 0,02 н. НС1 соответствует 0,005780 г алкалоидов (считая на
гиосциамин). Процентное содержание в пересчете на абсолютно
CH2OH сн,он сухое сырье χ вычисляют по формуле
о " W C H A - O - C J —с н (15 —К) 0,005780- 100- 100
:—с н, *~ /п (100—да)
о с6н5
о с6н5 где V — объем 0,02 н. NaOH, пошедшего на титрование, мл; т —
скополамнн
масса навески сырья, соответствующая объему эфирного извлече-
гиосциамин
ния, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %.
По данной методике определяется содержание суммы алкалои- " Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : аммиак(конц., 10%-ный р-р); НС1
дов. Определение проводится титрометрическим методом (обратное (1%-ная, 0,02 н.); NaOH (0,02 н.); хлороформ; эфир этиловый; NaaSO4 (безводн.);
реактив Майера; кремневольфрамовая кислота; фенолфталеин; метиловый крас-
титрование). ный;
10 г измельченного сырья, проходящего сквозь сито с диамет- Бумага лакмусовая синяя; бумага фильтровальная; вата гигроскопическая;
ром отверстий 1 мм, помещают в колбу вместимостью 250 мл, при- колбы с притертой пробкой вместимостью 150 мл; колбы конические с нормаль-
ливают 7 мл концентрированного раствора аммиака, 150 мл этило- ным шлифом вместимостью 100 мл; колбы конические вместимостью 100 мл; во-
ронки делительные вместимостью 200 мл; цилиндры мерные на 10, 20 и 100 мл;
вого эфира * и в течение I ч смесь часто и энергично взбалтывают, воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; стекла часовые; палочки
эфирное извлечение быстро фильтруют через вату в колбу вмести- стеклянные; бюксы с притертой крышкой; бюретки вместимостью 25 мл; капель-
мостью 200 мл, прикрывая воронку часовым стеклом. К фильтрату ницы стеклянные лабораторные; установка для отгонки хлороформа; шкаф су-
прибавляют 5 мл воды, энергично взбалтывают и оставляют в покое шильный лабораторный; весы ручные; весы лабораторные аналитические; экси-
катор; штативы для делительных воронок; штативы лабораторные; бани водя-
до просветления эфирного слоя, после чего отмеривают с помощью ные лабораторные; сито с диаметром отверстий 1 мм.
мерного цилиндра 90 мл эфирного извлечения в делительную во-
ронку вместимостью 200 мл. Цилиндр дважды ополаскивают этило- Методика количественного определения скопрламина в семенах
вым эфиром порциями по 10 мл, которые присоединяют к отмерен- дурмана индейского (Semen Daturae innoxiae) (ФС 42-1005-75).
ному эфирному извлечению. Плоды и семена дурмана индейского (Datura innoxia Mill.) сем. па-
Из эфирного извлечения алкалоиды извлекают последовательно сленовых (Solanaceae) содержат тропановые алкалоиды (скопола-
20, 15, 10 мл 1%-ной НС1 до полного их извлечения (проба с ре- мин, гиосциамин, норгиосциамин и др.). Большее количество при-
активом Майера или раствором кремневольфрамовой кислоты), ходится на долю скополамина.
каждый раз фильтруя через смоченный водой фильтр (диаметром Определение содержания скополамина в растительном сырье
5 см) во вторую делительную воронку такой же вместимости. Фильтр проводится гравиметрическим методом.
дважды промывают 1 %-ной НС1 по 5 мл, присоединяя промывную, 100* г сырья, измельченного и просеянного сквозь сито с отвер-
жидкость к общему кислотному извлечению. стиями диаметром 1 мм, взвешенного с погрешностью не более
Кислотное извлечение подщелачивают 10%-ным раствором ам- 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 1 л, заливают 800 мл ди-
миака до щелочной реакции по фенолфталеину и алкалоиды извле- хлорэтана и 50 мл раствора аммиака, встряхивают в течение 20 мин
кают последовательно 20, 15, 10 мл хлороформа, взбалтывая по и оставляют до следующего дня. Затем содержимое колбы вновь
3 мин. взбалтывают в течение 20 мин и после отстаивания дихлорэтановое
Каждую порцию хлороформного извлечения фильтруют через извлечение фильтруют, точно измеряют его объем, переносят в де-
бумажный фильтр, на который предварительно помещают 4—5 ρ лительную воронку вместимостью 1 л, алкалоиды извлекают 10%-ной
свежепрокаленного безводного сульфата натрия, смоченного хлоро- уксусной кислотой 6 раз по 20 мл до полного извлечения (проба
формом. Фильтрование проводят в колбу для отгонки вместимостью с кремневольфрамовой кислотой).
100 мл. Фильтр промывают хлороформом дважды по 5 мл. Хлоро- Полученное уксуснокислое извлечение промывают 2—3 раза
форм отгоняют на водяной бане до 1—2 мл, остаток хлороформа хлороформом порциями по* 20 мл, затем уксуснокислое извлечение
в колбе удаляют продуванием воздуха до полного исчезновения подщелачивают карбонатом калия по фенолфталеиновой бумаге и
запаха растворителя. алкалоиды извлекают этиловым эфиром 5—6 раз порциями по 30 мл
Сухой остаток растворяют в 15 мл О,02 н. НС1 при подогревании (проба с кремневольфрамовой кислотой). Эфирные извлечения
на водяной бане'и оттитровывают избыток последней 0,02 н. NaOH фильтруют через бумажный фильтр с 3—4 г безводного Na2SO4
.до появления желтой окраски (индикатор — метиловый красный). в предварительно взвешенную (с погрешностью не более 0,0001 г)
круглодонную колбу вместимостью 200 мл, фильтр с Na2SO4 про-
* На лабораторных занятиях в целях безопасности работы этиловый эфир мывают 30 мл сухого этилового эфира, который присоединяют
заменяется хлороформом. к основному эфирному извлечению, эфир отгоняют досуха на водя-
146 6· 147
ной бане. Остаток растворяют в 15—20 мл хлороформа, приливают реакции по фенолфталеину, взбалтывают на вибрационном аппарате
20—25 мл 1 %-ной пикриновой кислоты в хлороформе, 2—3 мл в течение 1,5 ч·. Хлороформное извлечение процеживают через вату
воды и 20 мл бензола. Содержимое колбы перемешивают стеклян- в мерный цилиндр. Точно отмеренный объем хлороформного извлече-
ной палочкой в течение 45 мин и оставляют на 24 ч. ния, соответствующий определенной навеске сырья, переносят в
Выпавший осадок пикрата скополамина отфильтровывают на колбу и хлороформ отгоняют до объема 5 мл. Остаток переносят
предварительно взвешенном стеклянном фильтре № 3. Фильтр в делительную воронку вместимостью 100 мл, колбу дважды промы-
с осадком и колбу с пикратом скополамина, оставшимся на стенках, вают 5 мл хлороформа, который присоединяют к основному хлоро-
сушат в сушильном шкафу при 100—105 °С в течение 3 ч до постоян- формному раствору. Хлороформный раствор взбалтывают с 1 %-ной
ной массы и после охлаждения взвешивают. Масса пикрата скопола- НС1 по 10 мл, затем по 5 мл до полного извлечения алкалоидов
мина, находящегося в колбе и собранного на стеклянном фильтре, (проба с реактивом Майера или с раствором кремневольфрамовой
составляет общее количество выделенного пикратаГ скополамина. кислоты). Объединенные солянокислые извлечения подщелачивают
1 г пикрата скополамина содержит 0,559 г скополамина-основания. 10%-ным NaOH по фенолфталеину и трижды извлекают хлорофор-
Процентное содержание скополамина-основания χ на абсолютно мом порциями по 15, 10 и 5 мл. Хлороформные извлечения фильт-
сухое сырье вычисляют по формуле руют через фильтр, в который помещают 2 г безводного Na2SO4.
_ 0,559α100·100 Фильтр с Na2SO4 трижды промывают хлороформом порциями по
Х
~ m(100-Di>) ' 10 мл, которые присоединяют к основному фильтрату. Хлороформ
отгоняют на водяной бане до 2—3 мл и его остаток удаляют проду-
где т — масса навески сырья, соответствующая объему дихлорэта- ванием воздуха. Полученный в колбе остаток растворяют в 5 мл
нового извлечения, взятого для анализа, г; α — количество пи- этилового спирта и прибавляют 15 мл воды, 2 капли раствора ме-
крата скополамина, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, тилового красного и 1 каплю метиленового синего и титруют 0,1 н.
%; 0,559 — коэффициент пересчета пикрата скополамина на ско- НС1 до появления сине-фиолетового окрашивания.
пол амин-основание. 1 мл 0,1 н. НС1 соответствует 0,0244 г алкалоидов термопсиса:
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : аммиак 10%-ный; СН3СООН _0,0244У-100-100-200
10%-ная; К2СО3; Na2SO4; пикриновая кислота; кремневольфрамовая кислота; Х
дихлорэтан; этиловый эфир; бензол; хлороформ; фенолфталеин " Vim(100 —да)
Бумага фильтровальная; колбы с притертой пробкой вместимостью 1 л; где V — объем 0,1 н. НС1, израсходованный на титрование, мл;
колбы конические вместимостью 1 л; колбы круглодонные с нормальным шли- т — масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья при высу-
фом вместимостью 200 мл; цилиндры мерные на 10, 100 и 1000 мл; фильтры стек-
лянные № 3, воронки делительные вместимостью 200 и 1000 мл, воронки стеклян- шивании, %; Vt — объем хлороформного извлечения, взятого для
ные для фильтрования диаметром 7 см; бюксы с притертыми крышками; эксика- анализа, мл.
тор; палочки стеклянные; сито с диаметром отверстий 1 мм; установка .для от- Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : NH4OH 10%-ный; хлороформ;
гонки эфира; бани водяные лабораторные; весы ручные; весы лабораторные ана- этиловый спирт (этанол); НС1, 0,1 н., 1%-ная; NaOH; фенолфталеин; Na2SO4
литические; штативы для делительных воронок; шкаф сушильный лабораторный. (безводн.); метиленовый синий; метиловый красный; реактив Майера; кремне-
вольфрамовая кислота.
Методика количественного определения алкалоидов в траве тер- Колбы с притертой пробкой вместимостью 500 мл; колбы конические с нор-
мопсиса (Herba Thermopsidis) (Г Φ X, ст. 327). В траве термопсиса мальным шлифом вместимостью 100 мл; колбы конические вместимостью 100 мл;
(Thermopsis lanceolata R. Br.) сем. бобовых — Fabaceae (Legumino- воронки делительные вместимостью 100 мл; цилиндры мерные на 10, 25 и 200 мл;
sae) содержатся алкалоиды — производные хинолизидина (термоп- воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; бюретки вместимостью
25 мл; капельницы стеклянные лабораторные; установка для отгонки хлороформа;
син, гомотермопсин, пахикарпин, анагирин, метилцитизин и др.): бюксы с притертой крышкой; штативы для делительных воронок; штативы лабора-
торные; шкаф сушильный лабораторный; эксикатор; весы аналитические лабора-
N—СН, торные; весы ручные; сито с диаметром отверстий 1 мм.
Методика количественного определения цитизина в траве тер-
мопсиса очередноцветкового (Herba Thermopsidis alterniflorae
ФС 42-1281-79). Трава термопсиса очередноцветкового (Thermopsis
пахикарпин анагирин (термопсин) метилцитизив alterniflora Rgl. et Schmath.), сем. бобовых — Fabaceae (Legumino-
По данной методике определяется сумма алкалоидов титромет- sae) содержит алкалоиды производные хинолизидина; основным
рическим методом (прямое титрование). является цитизин:
Около 10 г (точная навеска) травы термопсиса, измельченной ί—Η
и просеянной сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают
в колбу вместимостью 400—500 мл, приливают 200 мл хлороформа,
подщелачивают 10%-ным раствором аммиака до ясно щелочной
148 149
Трава термопсиса очереднощсеткового наряду с семенами тер- Оптическую плотность полученного элюата измеряют на спек-
мопсиса ланцетовидного служит промышленным источником полу- трофотометре СФ-4А или СФ-16 в кювете с толщиной слоя 10 мм
чения цитизина. Определение содержания цитизина в траве термоп- при длине волны 311 нм, используя в качестве раствора сравнения
, сиса очередноцветкового проводят хроматоспектрофотометрическим элюат с контрольной полосы.
методом. Процентное содержание цитизина χ в пересчете на абсолютно
Около 10 г (с погрешностью до 0,01 г) сырья, измельченного сухое сырье вычисляют по формуле
и просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают _ 100-20- 100-1,11 · 100^ _ D- 111- 400/C
в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, приливают 100 мл хло- Х
~ т50.У-434(100 — w) ~ mV -434 (100—ш) '
роформа, подщелачивают 5 мл концентрированного раствора
NH4OH, закрывают пробкой и встряхивают на вибрационном аппа- где 100 — объем хлороформа, взятого для извлечения суммы алка-
рате в течение 2 ч или оставляют при комнатной температуре на лоидов из сырья, мл; 50 — объем хлороформного извлечения, взя-
12—15 ч, после чего встряхивают полчаса. того для анализа, мл; 20 — объем солянокислого раствора суммы
Хлороформное извлечение фильтруют через вату в мерный ци- алкалоидов, мл; V — объем солянокислого раствора суммы алка-
линдр; 50 мл фильтрата переносят в коническую колбу вместимо- лоидов, нанесенного на хроматограмму, мл; 10 — объем элюата,
стью 100 мл и хлороформ отгоняют до объема 1—2 мл. Остатки мл; 434 —удельный показатель поглощения цитизина Е\°^ при длине
хлороформа удаляют продуванием воздуха. К остатку пипеткой при- волны 311 нм, полученный на приборе, использованном при раз-
ливают 2 мл 0,1 н. раствора NaOH и растирают стеклянной палоч- работке метода; т — масса навески сырья, г; w — потеря в массе
кой до полного удаления комочков, затем прибавляют 8 мл воды и сырья при высушивании, %; D — оптическая плотность элюата
перемешивают. К содержимому приливают пипеткой 10 мл 0,2 н. при длине волны 311 нм; 1,11 — поправочный коэффициент на не-
НС1, перемешивают 5—&мин и фильтруют через тройной бумажный полное элюирование цитизина с хроматограммы; К — инструмен-
складчатый фильтр диаметром 7 см. тальная поправка на используемые кюветы и спектрофотометр.
По 0,04 мл фильтрата (70—90 мкг) наносят калиброванной мик- П р и г о т о в л е н и е с о р б е н т а . 2 кг силикагеля марки КСК (ГОСТ
ропипеткой на линию старта (на 4 средние полосы) хроматографи- 3966—76) измельчают на шаровой мельнице и переносят в бутыль вместимостью
ческой пластинки; первую полосу оставляют контрольной; на ше- 10 л, заливают 6 л 2 н. НО, перемешивают и оставляют на 15—20 ч, после чего
стую полосу наносят в качестве «свидетеля» 0,04 мл (80 мг) 0,2%-ного НС1 сливают сифоном и силикагель промывают дистиллированной водой декан-
тацией с отстаиванием в течение 7 ч до отрицательной реакции промывной воды
спиртового раствора цитизина-основания. на хлориды (проба с AgNO3). Затем силикагель заливают таким же, количеством
Растворы наносят полосами длиной 1—1,2 см каждая. Во время воды, тщательно перемешивают и через 20· мин быстро сливают суспензию в низ-
нанесения проб пластинку подсушивают теплым воздухом. Пла- кий кристаллизатор. Осевшие крупные частицы отбрасывают, суспензию после
стинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение отстаивания переносят на воронку Бюхнера с тройным бумажным фильтром и
промывают 3—4 раза 95%-ным этиловым спиртом. Силикагель сушат на воздухе
5 мин, затем помещают в предварительно насыщенную (не менее в течение 4—5 ч, хранят в стеклянной банке с притертой пробкой.
2 ч) вертикальную камеру со смесью растворителей: 95%-ный эти- Приготовление хроматографических пластинок.
ловый спирт — хлороформ — концентрированный раствор аммиака 0,3 г CaSO4 тщательно растирают в фарфоровой ступке, прибавляют 2,7 г сили-
(40 : 80 : 0,05) и хроматографируют восходящим методом при ком- кагеля КСК и перемешивают. Прибавляют 5 мл 0,1 н. NaOH, перемешивают пе-
стиком 30—40 с, затем добавляют еще 5 мл NaOH, продолжая размешивать 30 —
натной температуре. 40 с. Гомогенную массу, не содержащую пузырьков воздуха, наносят ровным
Через 1,5—2 ч, когда фронт растворителей пройдет около 16 см, слоем на пластинку размером 13 X 18 см и оставляют на 17—20 ч в строго гори-
пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 3 мин зонтальном положении на воздухе. Высушенную пластинку делят на 6 продоль-
и просматривают в УФ свете при длине волны 360 нм. Отмечают ных полос шириной 2 см каждая (толщина разделительных линий 1—2 мм).
П р и г о т о в л е н и е 0,2%-ного с п и р т о в о г о р а с т в о р а ци-
участки с пятнами на уровне «свидетеля». Цитизин просматривается т и з и н а. 0,1 г (точная навеска) цитизина-осневания (ст. 199 ГФ X) помещают
на синем фоне пластинки в виде фиолетовых пятен. Для проверки в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 95%-ном этиловом спирте, до-
полосу со «свидетелем» и одну полосу с испытуемым раствором про- водят спиртом до метки и тщательно размешивают.
являют реактивом Драгендорфа. О п р е д е л е н и е и н с т р у м е н т а л ь н о й п о п р а в к и «К» н а
используемый спектрофотометр и к ю в е т ы . Инструмен-
Участки сорбента с пятнами, находящимися на уровне проявлен- тальная поправка устанавливается по дихромату калия на спектрофотометре и
ного пятна цитизина (испытуемого раствора и пятна «свидетеля»), в кюветах, которые будут использованы при проведении анализа. Кюветы должны
и такой же участок сорбента с контрольной полосы количественно быть постоянными — одна для контроля, другая Д-ия используемого раствора.
переносят в колбы со шлифом, заливают 10 мл 95%-ного этилового 10 мг (точная навеска) высушенного до постоянной массы при 105 °С дихро-
мата калия растворяют в 100 мл 0,005 Μ H2SO4. Полученный исходный раствор
спирта и встряхивают на вибрационном аппарате в течение 1 ч. разбавляют 0,005 Μ H2SO4 в соотношениях 1:1, 1:2; 1:3, 1.4; 1:5. Оптическую плот-
Затем растворы переносят в пробирки для центрифугирования и ность полученных растворов определяют на спектрофотометре в кювете с тол-
центрифугируют 15 мин при скорости вращения 4000 об/мин или щиной слоя 10 мм при длине волны 311 нм. В качестве раствора сравнения исполь-
фильтруют через двойной бумажный складчатый фильтр. зуют 0,005 Μ H2SO4. Удельный показатель поглощения (Е$!°) дихромата ка-

150 151
стоять в течение 6 ч при периодическом встряхивании и затем
лия вычисляют по формуле
lOVnD кислотное извлечение фильтруют через бумажный фильтр.
С
1 см 100 мл фильтрата помещают в делительную воронку, подщела-
где т — масса навески дихромата калия, мг; V — объем раствора, мл; η — чивают концентрированным раствором аммиака (по фенолфталеину)
число разведения, D — оптическая плотность дихромата калия и алкалоиды исчерпывающе извлекают этиловым эфиром пор-
Инструментальная поправка К вычисляется по формуле К =· ^ О ^ / ^ й д к · циями 70, 30, 30 мл и т. д. (пробы на полноту извлечения с 1 %-ным
где 50,62 — значение удельного показателя поглощения дихромата калия при раствором кремневольфрамовой кислоты). Эфирные извлечения
длине волны 311 нм, полученное по прибору, на котором проводился анализ объединяют, сушат безводным Na2SO4, отфильтровывают и отго-
количественного определения цитизина при разработке метода (СФ-4А); £}/£,дк —
няют досуха на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 5 мл
удельный показатель поглощения дихромата калия при длине волны 311 нм по
прибору, на котором проводят анализ количественного определения цитизина.
хлороформа. 0,05 мл полученного раствора наносят на линию
Содержание цитизина в пересчете на абсолютно сухое сырье старта стеклянной пластинки размером 6 X 18 см с закрепленным
слоем силикагеля марки КСК. Пластинку с нанесенной пробой
должно быть не менее 0,6 %.
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : хлороформ, аммиак (конц. р-р); высушивают на воздухе в течение 5—10 мин, а затем помещают
NaOH (0,1 н.); НС1 (0,1 н.; 2 н.); этиловый спирт 95%-ный (этанол); реактив в хроматографическую камеру с метиловым спиртом и хроматогра-
Драгендорфа; силикагель марки КСК; CaSO4; HsSO4, 0,005 Μ; вода дистиллиро- фируют восходящим способом. Когда фронт растворителя дойдет
ванная; AgNO3; цитизин; калия дихромат. до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат сначала на воз-
Бумага фильтровальная; колбы плоскодонные с притертой пробкой вме-
стимостью 250 мл; колбы конические с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; духе в течение 5 мин, затем в сушильном шкафу 30 мин при тем-
цилиндры мерные на 10 и 100 мл; установка для отгонки хлороформа; пипетки пературе 50 °С, охлаждают на воздухе и опрыскивают реактивом
измерительные вместимостью 1 и 2 мл; бюксы с притертой крышкой; вибра- Драгендорфа. При этом на пластинке должно появиться пятно
ционный аппарат; ступки фарфоровые с пестиком; палочки стеклянные; вата гиг- платифиллина (Rf около 0,36) и* выше — пятно сенецифиллина
роскопическая; колба Бунзена; воронки Бюхнера; воронки стеклянные для филь-
трования диаметром 5 и 10 см; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X (Rf около 0,50). Проявленное пятно платифиллина обводят пре-
X 18 см; камера хроматографическая для ТСХ; весы лабораторные аналитиче- паровальной иглой. Отмеченный участок счищают в делительную
ские; весы ручные; сита с диаметром отверстий 1 мм; шкаф сушильный лабора- воронку вместимостью 50 мл, в которую затем прибавляют 15 мл
торный; УФ лампа; центрифуга лабораторная; спектрофотометры СФ-4А, СФ-16; 1%-ной НС1 и встряхивают в течение 3 мин. При этом образовав-
бани водяные лабораторные; штативы для делительных воронок.
шийся на адсорбенте комплекс алкалоида с реактивом Драген-
Методика количественного определения платифиллина в траве дорфа разрушается. Затем в воронку прибавляют 0,2 мл 1 %-ного
крестовника плосколистного (Herba Senecionis platyphylloidis). Кре- раствора тропеолина 000— II и 10 мл хлороформа, вновь встря-
стовник плосколистный (Senicio platyphylbides Somm. et. Lev) хивают в течение 3 мин и окрашенный хлороформный слой, содер-
сем. астровых — Asteraceae (сложноцветных — Compositae) содер- жащий соединение алкалоида с тропеолином, фильтруют через
жит алкалоиды — производные пирролизидина (платифиллин, сене- бумажный фильтр, предварительно смоченный хлороформом, в мер-
цифиллин). В растительном сырье они содержатся в основном ную колбу вместимостьюЖ) мл. Экстракцию хлороформом повторяют
в виде N-оксидов: еще два раза, объем раствора в колбе доводят до метки хлороформом,
СН—CHg CH3 СНз СН—СН 8 СН 3 СН, перемешивают и интенсивность окраски раствора определяют при

ч
помощи фотоэлектроколориметра ФЭК-56М со светофильтром № 5
О=С—С—СНг-СН—С—С=О 0=С—С—СН г —СН—С—С=0 (λ =~ 490 нм) на фоне хлорофбрма в кювете с толщиной слоя 10
Ан1 или 50 мм в зависимости от интенсивности окраски раствора.
Количество платифиллина в пятне хр'оматограммы в мкг находят
-сн* -СНг-0 по калибровочному графику. Процентное содержание платифиллина
в виде основания в абсолютно сухом сырье χ вычисляют по формуле
о платифнллив
платифиллин N-оксид 1000000(100-ш) '
По данной методике проводится определение платифиллина где а—содержание алкалоидов в пятне хроматограммы, найденное по
в восстановленной форме хроматофотоэлектроколориметрическим калибровочному графику, мг; V — объем хлороформного раствора,
методом. полученного при растворении сухого остатка, мл; Vx — объем хлоро-
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц формного раствора, нанесенного на хроматограмму, мл; т — масса
2 мм, берут навеску сырья массой 20 г (с погрешностью не более навески сырья, г; до — потеря массы сырья при высушивании, %.
0,01 г), помещают в колбу вместимостью 1 л, заливают 500 мл Содержание платифиллина-основания должно быть не менее
5%-ной H2SO4; сюда же добавляют 4 г цинковой пыли, смесь пере- 0,3 %.
мешивают, встряхивают, закрывают ватным тампоном, оставляют
153
152
При необходимости после хроматографического разделения и проявления Количественное определение алкалоидов проводится колориметри-
алкалоидов аналогичным способом можно определить сенецифиллин, пользуясь ческим методом. 3 г (с погрешностью не более 0,01 г) свежеизмель-
тем же калибровочным графиком
П о с т р о е н и е к а л и б р о в о ч н о г о г р а ф и к а . 0,2890 г (точная ченного порошка спорыньи, просеянного сквозь сито с размером
навеска) гидротартрата платифиллина помещают в мерную колбу вместимостью отверстий 0,315 мм, обезжиривают в аппарате Сокслета в течение
100 мл, растворяют в 50 мл дистиллированной воды, объем раствора доводят 8 ч петролейным эфиром (температура кипения 40—60 °С). Обезжи-
до метки "95%-ным этиловым спиртом и перемешивают. Получают таким обра- ренный порошок высушивают при температуре не выше 30 °С и пе-
зом 0,2% -ный исходный раствор платифиллина-основания. Для построения ка-
либровочного графика, рассчитанного на работу в кювете с толщиной слоя раст- реносят количественно в колбу с притертой пробкой вместимостью
вора 50 мм, наносят на стартовую линию хроматограммы в разные точки (0,01; 100 мл, приливают 30 мл этилового эфира и оставляют на 10 мин.
0,02; 0,03; 0,04; 0,05; 0,06; 0,07 мл) исходного раствора, что соответствует 20, Затем прибавляют 0,13 г свежепрокаленного оксида магния, тща-
40, 60, 80, 100, 120 и 140 мкг платифиллина-основания, и далее анализируют, тельно растертого с 6 мл воды; смесь непрерывно встряхивают
как описано выше. Для кюветы с толщиной слоя раствора 10 мм берут 0,05; 0,10;
0,15; 0,20; 0,25 мл исходного раствора, что соответствует 100, 200, 300, 400 и в течение 2 ч, затем прибавляют 6 г безводного Na2SO4, сильно
500 мкг платифиллина-основания, и далее анализируют, как описано выше встряхивают в течение 5 мин, дают отстояться и быстро процежи-
При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают коли- вают через вату. 15 мл фильтрата (1,5 г спорыньи) помещают в де-
чество мкг вещества, содержащегося в пятне хроматограммы, а на оси ординат — лительную воронку и извлекают 4 раза по 20 мл 2%-ным раствором
оптические плотности соответствующих колориметрируемых растворов.
Приготовление пластинок для хроматограммы. винной кислоты; колбу с объединенными виннокислыми извлече-
Смешивают 95 г порошка силикагеля с 5 г CaSO4; к 1,5 г этой смеси добавляют 4 мл ниями помещают на водяную баню и нагревают до 40—50 СС для
0,1 н. раствора NaOH и размешивают до консистенции «жидкой сметаны». Полу- удаления остатков эфира.
ченную смесь наливают ровным слоем на стеклянную пластинку 6 X 18 см. Пла- Охлажденный раствор процеживают через вату в мерную колбу
стинку с сорбентом сушат на воздухе в течение 18 ч.
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : H2SO4 5%-ная; НС1 1%-ная; аммиак вместимостью 200 мл, колбу и воронку с ватой тщательно промы-
(конц. р-р); цинк металлический (цийковая пыль); этиловый эфир; этиловый вают 2%-ным раствором винной кислоты и доводят объем раствора
спирт; хлороформ; фенолфталеин; кремневольфрамовая кислота; Na2SO4 (без- до метки той же кислотой (раствор А). К 2 мл раствора А прибав-
водн.); CaSO4; тропеолин ООО-П; реактив Драгендорфа; платифиллин гидротарт- ляют 4 мл реактива ван-Урка, перемешивают и оставляют раствор
рат; вода дистиллированная; силикагель марки КСК; бумага фильтровальная;
вата гигроскопическая; колбы вместимостью 100, 200 и 1000 мл; колбы мерные на свету на 30 мин, после чего колориметрируют* на ФЭК-М с зеле-
вместимостью 50 мл; воронки делительные вместимостью 250—300 мл; воронки ным светофильтром (длина волны 530—540 нм) в кювете с толщиной
стеклянные для фильтрования диаметром 5 и 10 см; цилиндры мерные на 10, слоя 10 мм.
100 и 500 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 6 X 18 см; камеры хро-
матографические для ТСХ; микропипетки измерительные вместимостью 0,2 мл; Процентное содержание эргоалкалоидов в сырье χ вычисляют
бюксы с притертой крышкой; эксикатор; бани водяные лабораторные; весы руч- по формуле
ные; весы лабораторные аналитические; сито с диаметром отверстий 2 мм; ступка α200·100·100
Ш о в а я с пестиком; электрокофемолка бытовая; фотоэлектроколориметр Х
~ 1,5(100-ш) '
> М; шкаф сушильный лабораторный; штативы лабораторные.
Методика количественного определения алкалоидов в рожках^ где а — количество эргоалкалоидов в 1 мл раствора А, г, найден-
спорыньи эрготаминового штамма (Cornua Secalis cornuti stamm ное по калибровочному графику; w — потеря в массе сырья при
Ergotamini) (ФС 42-1432-80). Рожки спорыньи, паразитирующей высушивании, %.
на ржи, содержат индольные алкалоиды — производные лизерги- П о с т р о е н и е к а л и б р о в о ч н о г о г р а ф и к а . Для
новой и изомерной ей изолизергиновой кислот. Основными являются построения калибровочного графика готовят серию разведений
эргометрин, эрготамин, эргокристин, эргокриптин, эргокорнин и др.: эрготамина тартрата-стандарта (ФС 42-1070-76) в 2%-ной винной
Η СН Я кислоте разбавлением исходного раствора эрготамина тартрата-
стандарта. Для этого сначала готовят исходный раствор: точную
I навеску 0,0113 г эрготамина тартрата-стандарта (0,0100 г основания)
Η—Ν С
СН 2 ОН растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 2%-ной винной
кислоте и доводят этой же кислотой до метки. Полученный раствор
содержит 0,0001 г эрготамина-основания в 1 мл (исходный раствор).
В пробирках вместимостью 10 мл готовят следующий ряд разбав-
СН 2 С„Н Б Ν—СН. лений раствора (см. табл. на стр. 156).
К полученным растворам прибавляют 4 мл раствора ван-Урка,
тщательно перемешивают и оставляют раствор на свету на 30 мин,
после чего колориметрируют в тех же условиях, что и в основном
Η—Ν н-к-! опыте. Строят калибровочный график, откладывая на оси абсцисс
эрготамин
эргометрин количество граммов эрготамина-основания, а на оси ординат —
154 155
полоской наносят из микропипетки на первый лист 0,05 мл, на второй — 0,1,
Количество Количество Количество Количество на третий —0,15, на четвертый —0,2 мл этого раствора (50, 100, 150, 200 мкг),
Количество 2 % ного раст эрготамина· Количество 2 %-ного раст- эрготамина-
исходного ра- вора винной основания исходного ра- вора винной основания
далее поступают, как описано выше.
створа, мл кислоты, мл в 1 мл, г створа, мл кислоты, мл в 1 мл, г При количественном определении алкалоидов в рожках спорыньи на лабо-
раторных занятиях указанную навеску сырья (3 г) предварительно обезжиривают;
калибровочный график студенту дается готовый.
0,10 1,90 0,000005 0,60 1,40 0,00003 Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : петролейный эфир (<киП = 40—60
0,20 1,80 0,00001 0,70 1,30 0,000035 и 70—100 °С); этиловый эфир; бензол; этиловый спирт (этанол); MgO, Na2SO4
0,30 1,70 0,000015 0,80 1,20 0,00004 (безводн.); винная кислота; эрготамин тартрат; формамид (50%-ный раствор
0,40 1,60 0,00002 0,90 1,10 0,000045 в этиловом спирте); реактив ван-Урка (H2SO4 конц., FeCl3, л-диметиламинобен-
0,50 1,50 0,000025 1,00 1,00 0,00005 зальдегид).
Бумага хроматографическая; бумага фильтровальная; колбы с притертой
пробкой вместимостью 100 мл; колбы конические вместимостью 100 мл; воронки
соответствующее значение оптической плотности колориметрируе- стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; воронки делительные вместимостью
100 мл; стаканы химические вместимостью 200 мл; колбы мерные вместимостью
мых растворов. 100 и 200 мл; пипетки измерительные вместимостью 2 и 5 мл; цилиндры мерные
Для определения содержания эрготамина на стартовую линию на 10 и 100 мл; бюксы с притертой .крышкой; пробирки вместимостью 10 мл; ка-
хроматографической бумаги марки «С» (55 X 16 см) узкой полоской мера хроматографическая для БХ; эксикатор; пульверизатор; штативы для де-
наносят из микропипетки 0,4 мл эфирного извлечения (0,04 г спо- лительных воронок; бани водяные лабораторные; аппарат Сокслета; шкаф су-
шильный лабораторный; УФ лампа; весы ручные; весы лабораторные аналити-
рыньи). Бумагу импрегнируют 50%-ным спиртовым раствором ческие; сито с размером отверстий 0,315 мм; фотоэлектроколориметр ФЭК-М.
формамида, рН которого 7,05—7,20, оставляя стартовую линию
в 2 см сухой; тщательно отжимают избыток формамида между Методика количественного определения секуринина в побегах
листами фильтровальной бумаги, стартовую линию опрыскивают секуринеги (Cormus Securinegae) (ФС 42-109). Побеги секуринеги
из пульверизатора тем же раствором формамида. В течение 10 мин полукустарниковой Securinega suffruticosa (Pall.) Rend. сем. моло-
полоску бумаги высушивают на воздухе в темном месте. чайных — Euphorbiaceae содержат алкалоиды — производные кон-
Хроматографирование проводится в затемненной камере нисхо- денсированной бициклической системы пиперидина и пирролидина:
дящим методом, в системе бензол — петролейньга эфир (/Ktm =
= 70—100 °С) (6:1) до продвижения фронта 40—45 см, после
чего бумагу высушивают и просматривают в ультрафиолетовом
свете, отмечают светящуюся полоску эрготамина. Эту полоску
вырезают по всей ширине бумаги — с одного конца вырезают
зубчики, другим концом помещают в кювету с 1%-ной винной
кислотой, которая находится в камере, насыщенной водой, и алка-
лоиды элюируют 1 %-лой винной кислотой, элюат собирают в про-
бирку с делениями. За 18 ч собирают 3—6 мл элюата, доводят
водой до 8 мл, тщательно перемешивают. К 2 мл полученного раст- секуринан
вора прибавляют 4 мл реактива ван-Урка и через 30 мин колори-
метрируют в тех же условиях, что и при определении суммы алка- Количественное определение секуринина в сырье проводится
лоидов. полярометрическим методом. 100 г воздушно-сухого сырья, измель-
По калибровочному графику находят содержание эрготамина ченного до величины частиц 2 мм, помещают в коническую колбу
в 1 мл испытуемого раствора. Процентное содержание χ вычисляют вместимостью 2000 мл и заливают 1000 мл дистиллированной воды.
по формуле Содержимое колбы взбалтывают 5 мин и оставляют до следующего
_ а8 · 100 • 100 дня. После этого повторно взбалтывают 5 мин и водную вытяжку
Xl
~ 0,04(100—w) ' отфильтровывают.
где а — количество эрготамина в 1 мл испытуемого раствора, г, 600 мл водного фильтрата помещают в делительную воронку
найденное по калибровочному графику; w — потеря в массе сырья вместимостью 1000 мл, подщелачивают концентрированным раство-
при высушивании, %. Содержание эрготамина в пересчете на абсо- ром аммиака (проба с фенолфталеиновой бумагой) и алкалоиды
лютно сухое сырье должно быть не менее 0,2 %. исчерпывающе извлекают хлороформом 3—4 раза порциями 100, 50
и 50 мл до полного извлечения (проба с раствором кремневольфра-
П о с т р о е н и е к а л и б р о в о ч н о г о г р а ф и к а . Для построения МОВО.Й КИСЛОТЫ).
калибровочного графика точную навеску 0,0113 г эрготамина тартрата-стандарта
(0,0100 г эрготамина-основания) растворяют в 10 мл метилового спирта. На Из объединенного хлороформного извлечения алкалоиды извле-
стартовую линию хроматографической бумаги марки «С» (55 X 16 см) узкой кают 10%-ной H2SO4 2—3 раза по 50 мл в делительной воронке
156 157
вместимостью 500 мл. Объединенный сернокислый раствор вновь основания (I), так и в альдегидной (II) или карбинольной форме (III):
подщелачивают концентрированным раствором аммиака (проба
с фенолфталеиновой бумагой) и алкалоиды исчерпывающе извле- х>.
кают этиловым эфиром 4—5 раз по 30—50 мл (проба с раствором
кремневольфрамовой кислоты). Объединенные эфирные извлечения
сушат безводным NaaSO4 (10—15 г) и фильтруют через бумажный
NOH-
\оА/\//Н
фильтр в сухую колбу. Промывают сульфат натрия небольшими 1\О
порциями этилового эфира до отсутствия алкалоидов и фильтруют н. / V O C H ,
через тот же фильтр. Эфир отгоняют на водяной бане досуха. Оста-
ток эфира удаляют струей воздуха.
II
Сухой остаток в колбе растворяют в 5 мл 95%-ного этилового
спирта и количественно переносят в мерную колбу вместимостью
25 мл, объем раствора доводят до метки этиловым спиртом, тща-
тельно перемешивают и определяют угол вращения в трубке дли-
ной 0,5—2,0 дм (поляриметр марки СМ).
1. Для приготовления 10%-ной HSSO4 берут 1 часть конц H2SO4 и 9,5 ча-
стей Н г О.
2. При отгонке эфира следует избегать перегрева кристаллизующихся алка-
лоидов. Выделенные алкалоиды необходимо сразу же растворить в 95%-ном эти-
ловом спирте, не оставляя на следующий день.
Количественное определение берберина
Процентное содержание секуринина χ вычисляют по формуле с п е к т р о ф о т о м е т р и ч е с к и м м е т о д о м (ФС 42-1152-
100 78). Количественное определение берберина в корнях барбариса
Va/n/1080(100—ш) » по данной методике основано на селективном извлечении берберина
в его карбинольной форме и отделении от алкалоидов фенольной
где α — измеренный угол вращения, градусы; V — объем раство- природы на стадии экстракции сырья.
рителя, взятого для извлечения алкалоидов, мл; V^r— объем извле- В УФ спектре бисульфата берберина в 2%-ной H2SO4 имеется
чения, взятого для анализа, мл; V2 — объем этилового спирта, ряд интенсивных полос поглощения- Для количественного опреде-
взятого для растворения алкалоидов, мл; т — масса навески ления в данном методе используется наиболее длинноволновая
сырья·, г; / — толщина слоя жидкости (длина трубки), дм; w — полоса поглощения (Я т а х = 420 нм).
потеря в массе сырья при высушивании, %; 1080 — удельное вра- Для определения· содержания берберина от средней пробы
щение чистого секуринина. цельного сырья отделяют не менее 1 кг, который измельчают до
Содержание секуринина должно быть не менее 0,1 % на абсо- частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм, тща-
лютно сухое сырье. тельно перемешивают, отбирают не менее 250 г сырья, которые
измельчают до частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отвер-
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : аммиак (конц. р-р); HJSOJ 1%-ная;
кремневольфрамовая кислота; этиловый эфир; этиловый спирт (этанол); вода ди- стий 3 мм. Затем отбирают 25 г сырья и доводят его измельчение
стиллированная; хлороформ; Na2SO4 (безводн.); фенолфталеиновая бумага. до частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм.
Бумага фильтровальная; колбы конические вместимостью 250 и 2000 мл; 0-.5 г (с погрешностью не более 0,0001 г) сырья помещают в ко-
цилиндры мерные на 10, 100 и 1000 мл; колбы мерные вместимостью 25 мл; во- ническую плоскодонную колбу вместимостью 100 мл (с притертой
ронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 и 10 см; воронки делительные
вместимостью 500 и 1000 мл; установка для отгонки этилового эфира; поляри- пробкой), прибавляют 0,5 мл 25%-ного NaOH, тщательно пере-
метр; штативы для делительных воронок; весы лабораторные аналитические; мешивают стеклянной палочкой до получения однородной увлаж-
весы ручные; бюксы с притертой крышкой, эксикатор; сушильный шкаф лабора- ненной массы, закрывают пробкой и оставляют при комнатной
торный "· температуре на 2 ч. Затем в колбу прибавляют 50 мл этилового
Методики количественного определения берберина в корнях эфира, закрывают пробкой, взвешивают (с погрешностью не бо-
барбариса обыкновенного (Radix Berberidis vulgaris). лее 0,01 г). Содержимое колбы осторожно перемешивают круго-
Корни барбариса обыкновенного (Berberis vulgaris L.) сем. выми движениями в течение 10 мин, взвешивают и потерю массы
барбарисовых — Berberidaceae содержат алкалоиды производные пополняют этиловым эфиром. Содержимое колбы вновь осторожно
изохинолина: берберин, ятроррицин, пальматин и др. Считают, перемешивают, дают отстояться, затем берут осторожно, не взму-
что берберин может быть как в форме четвертичного аммонийного чивая сырье, пипеткой 15 мл эфирного извлечения, помещают

15S 159
в делительную воронку вместимостью 100 мл и проводят извлече- кратно. Толщина слоя растворителей в хроматографической камере
ние алкалоидов 2 %-ной H2SO4 порциями 20, 10 и 10 мл (до отрица- около 5 мм; экспозиция при комнатной температуре 30—40 мин.
тельной реакции с кремневольфрамовой кислотой). Объединенные Хроматограмму после высушивания просматривают в УФ свете,
кислотные извлечения помещают в мерную колбу вместимостью отмечают на хроматограмме зону, соответствующую берберину,
50 мл и доводят объем раствора до метки 2%-ной H2SO4, После и соскабливают этот участок сорбента скальпелем в колбу вмести-
тщательного перемешивания раствор спектрофотометрируют при мостью 25 мл. Берберин 4 раза элюируют 0,1 н. H2SO4 при нагре-
длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. вании в течение 1 мин на водяной бане. Кислоту отмеряют с по-
Процентное содержание берберина бисульфата χ в пересчете мощью бюретки: первый раз 4 мл, а затем три раза по 2 мл. Пол-
на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле ноту элюирования определяют по отсутствию флюоресценции сили-
50 • 50 · 100D кагеля в УФ свете. Элюат каждый раз сливают декантацией в дру-
гую колбу вместимостью 25 мл. Для удаления следов силикагеля
15· 128т (100 — w) ' объединенный элюат центрифугируют в течение 5 мин (1000 об/мин).
где 50 — объем эфирного извлечения, мл; 50 — объем сернокислого Оптическую плотность элюата измеряют на спектрофотометре
извлечения, мл; 15 — объем эфирного извлечения, взятого для ана- СФ-4А на фоне контроля при длине волны 345 нм в кювете с тол-
лиза, мл; 128 — удельный показатель поглощения Е1%м берберина щиной слоя 1 см. Контролем служит элюат чистого силикагеля
бисульфата при длине волны 420 нм; D — оптическая плотность с той же пластинки, снятый с площади, равной площади пятна
сернокислого извлечения; т — масса навески сырья, г; w — по- берберина. Процентное содержание берберина в образце χ рассчи-
теря в массе сырья при высушивании, %. тывают на абсолютно сухую массу сырья в пересчете на бисульфат
берберина:
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : NaOH; этиловый эфир; H2SO4
2%-ная; кремневольфрамовая кислота
Колбы конические с притертой пробкой вместимостью 100 мл; колбы мер- (100—да) '
ные вместимостью 50 мл; воронки делительные вместимостью 100 мл; пипетки из-
мерительные 1 и 15 мл; цилиндры мерные на 10 и 50 мл; бюксы с притертой крыш- где V — объем этилового спирта, взятого для извлечения, мл;
кой; эксикатор; штативы для делительных воронок; шкаф сушильный лаборатор- Vx — объем извлечения, нанесенного на хроматограмму, мл; Уг —
ный; весы лабораторные аналитические, технические, ручные; сита с диаметром объем элюата берберина, мл; D — оптическая плотность элюата;
отверстий 1, 3 и 7 мм, спектрофотометр СФ-4А.
w — потеря в массе сырья при высушивании, %; т — масса на-
Количественное определение берберина вески сырья, г; Е\^ (646) — удельный показатель поглощения
с п е к т р о ф о т о м е т р и ч е с к и м методом с приме- берберина бисульфата.
н е н и е м х р о м а т о г р а ф и и в TQHKOM с л о е сор-
б е н т а . Метод основан на разделении алкалоидов в тонком слое Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый спирт (этанол); CaSO4;
сорбента и определении содержания берберина спектрофотометри- аммиак (конц); H2SO4 (0,1 н.); хлороформ; силикагель марки КСК-
Колбы с нормальным шлифом вместимостью 50 мл; холодильники обратные
ческим методом. стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; микропипетки измерительные
Точная навеска (0,5—1 г) измельченных корней барбариса, вместимостью 0,2 мл; капилляры стеклянные; бюретки вместимостью 10, 25 мл;
проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают колбы конические вместимостью 25 мл; бани водяные лабораторные; цилиндры
в колбу вместимостью 50 мл, приливают 10 мл 95%-ного этилового мерные на 10 и 100 мл; бюксы с притертой крышкой; камера хроматографическая
для ТСХ; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X 18 см; штативы лабора-
спирта и нагревают с обратным холодильником на водяной бане, торные; центрифуга лабораторная; УФ лампа; шкаф сушильный лабораторный;
поддерживая слабое кипение этилового спирта в течение 30 мин. сито с диаметром отверстий 1 мм; весы ручные; весы лабораторные аналитиче-
После охлаждения до комнатной температуры отмеряют микро- ские, спектрофотометр СФ-4А
пипеткой 0,2 мл извлечения (надосадочной жидкости) и наносят
на стартовую линию хроматографической пластинки с закреплен- Вопросы для подготовки
ным слоем силикагеля сплошной полосой длиной 5—7 см на рас-
стоянии 1,5 см от нижнего края пластинки. Для определения зоны 1. Какие природные вещества называют алкалоидами (определение)?
берберина в правой части пластинки на стартовую линию наносят 2 Классификация алкалоидов (примеры алкалоидов каждой группы, их
раствор берберина бисульфата (3—5 капилляров) в виде пятна формулы и растения, содержащие эти алкалоиды).
3 Физико-химические свойства алкалоидов.
(диаметр пятна 0,5—0,7 мм). 4. В каком виде (форме) алкалоиды находятся в растительном сырье?
После высушивания пластинку помещают в хроматографическую - 5. Локализация алкалоидов
камеру. Для проявления используется система: раствор аммиака 6 Качественные реакции на алкалоиды
7. Хроматографический анализ.
концентрированный — хлороформ —'этиловый спирт ( 1 : 3 : 3). Си- 8. Извлечения алкалоидов из растительного сырья и очистка извлечений.
стема растворителей используется для хроматографирования одно- 9. Разделение суммы алкалоидов.
160 161
10. Какие свойства алкалоидов лежат в основе методов количественного В нашей стране гликоалкалоиды используются для получения
определения алкалоидов в растительном сырье?
11. Сущность методов количественного определения алкалоидов в лекарствен- гормональных препаратов типа кортизона.
ном растительном сырье (формулы и лекарственные растения, содержащие эти Строение агликона и сахарного компонента. В основе струк-
алкалоиды). туры стероидных алкалоидов лежит скелет циклопентанопергидро-
фенантрена, связанный с гетероциклической системой. В 3-м по-
Литература ложении находится группа ОН, через которую происходит присо-
Семя дурмана индейского. ФС 42-1005-75. единение углеводной части молекулы. В положениях 10, 13, 18 име-
Трава термопсиса очередноцветкового. ФС 42-1281-79. ются метальные группы (—СН3). У большинства гликоалкалоидов
Рожки спорыньи эрготаминового штамма. ФС 42-1432-80. в кольце В в положении 5, 6 содержится двойная связь. Углевод-
Побеги секуринеги. ФС 42-100-81 ная часть молекулы стероидных алкалоидов представлена, как
Корень барбариса обыкновенного. ФС 42-1152-78. и у сапонинов, сахарами: D-глюкозой, D-галактозой, L-рамнозой,
Орехов А. П. Химия алкалоидов. — М.: Изд-во АН СССР, 1955.
Юнусов С. Ю. Алкалоиды. — Ташкент: Изд-во ФАН, 1968. L-арабинозой, D-ксилозой, L-фруктозой и кислотами D-глюкуро-
Садыков А. С, Асланов Χ. Α., Кушмурадов Ю. К. Алкалоиды хинолизидино- новой и D-галактуроновой.
вого ряда. — М.: Наука, 1975
Орехов А. П. Химия алкалоидов растений СССР. — М.: Наука, 1965.
Цесько А. И. Фармакологическое изучение барбариса: Автореферат канди- § 1. Классификация
датской диссертации. М., 1973.
Биохимия растений/Под ред. Кретовича В. А. — М.: Мир, 1968 Стероидные алкалоиды можно разделить на две группы. Первая
Кретович В. А. Биохимия растений. — М . : Высшая школа, 1980. группа — азотсодержащие аналоги сапонинов; они чаще всего
Хроматография в тонких слоях/Под ред. Шталя Э. — М.: Мир, 1965.
Menske RHT. The alkaloids Chemistry and Physiology, v. IX, London, 1967. встречаются в представителях рода паслен. Как и производные спи-
ростана, гликоалкалоиды этой группы образуют нормальные (сола-
содин) и изо-ряды соединений (томатидин):
ГЛАВА И. ГЛИКОАЛКАЛОИДЫ

Гликоалкалоиды, или стероидные алкалоиды, — это производ-


ные циклопентанопергидрофенантрена с гетероциклическим атомом
азота, сочетающие в себе свойства стероидных сапонинов и алкалои-
дов. Строение их очень сходно со строением стероидных сапонинов:
н

гоматидин

Вторая группа — азотсодержащие стероиды, в которых кольца


Ε и F сконденсированы. Эти соединения чаще всего встречаются
в представителях родов паслен и чемерица. Представителем этой
группы является соланидин:

н,

Эта группа в свою очередь подразделяется на две подгруппы:


диосгенин 1) йервератровые стероидные гликоалкалоиды, молекула которых
содержит до 3 атомов кислорода; к типичным представителям дан-
162 163
ной подгруппы относятся йервин, рубийервин, изорубийервин, Экстракция подкисленными спиртами приводит к загрязнению
верамарин, вертицин и т. д.: экстрактов большим количеством сопутствующих веществ, которые
затрудняют дальнейшее проведение анализа и препаративного выде-
СН„ ления гликоалкалоидов и их агликонов.
При разделении гликоалкалоидов методом колоночной хрома-
тографии в качестве сорбента применяют нейтральный оксид алю-
сн 3 | миния (II) и (III) степени активности по Брокману, а элюирование

,/γγν проводят смесью бензола с хлороформом.


Свободные агликоны хорошо разделяются на неактивном ней-
тральном оксиде алюминия, элюирование проводится смесью этил-
но^\/Ч/ ацетата и гексана в соотношении 7 : 3 по объему.
йервин Для идентификации· и установления строения гликоалкалоидов
2) цевератровые стероидные алкалоиды, в молекуле которых широко используются методы УФ, ИК, ПМР спектроскопии.
более 3 атомов кислорода. Основные гликоалкалоиды этой под-
группы — сабин, верацевин, термин.
§ 4. Качественное определение
§ 2. Физико-химические свойства
Для обнаружения стероидных алкалоидов и их агликонов в рас-
Стероидные алкалоиды, в основном, кристаллические вещества, тительном сырье применяются реакции осаждения и окрашивания,
хорошо кристаллизующиеся из 80%-ного .этилового спирта. Встре- а также хроматографические методы анализа (тонкослойная, бу-
чаются аморфные гликоалкалоиды, как, например, соланокапсидин. мажная хроматография).
Гликоалкалоиды — оптически активные соединения, имеющие Гликоалкалоиды осаждаются холестерином, дигитонином; дают
определенный угол вращения. Они почти не растворяются в воде, реакции окрашивания с n-оксибензальдегидом, анисовым альдеги-
этиловом эфире, хлороформе, растворяются в горячем этиловом дом, резорцином, формальдегидом. Наиболее часто используется
спирте. реакция Альберта (формальдегид в сильнокислой среде) — в при-
В результате наличия атома азота в агликоне стероидные алка- сутствии гликоалкалоидов появляется малиново-красное окраши-
лоиды обладают основными свойствами и могут образовывать соли. вание.
Соли большинства гликоалкалоидов — аморфные вещества, кроме При обнаружении стероидных алкалоидов методом бумажной
кристаллического хлоргидрата соланина, температура плавления хроматографии используются различные смеси растворителей: ме-
которого 212 °С (с разложением). Как и соли других алкалоидов, тилэтилкетон, насыщенный водой; н-бутанол — уксусная кислота —
соли гликоалкалоидов растворимы в воде. вода ( 1 0 : 2 : 5); н-бутанол — пиридин — вода ( 1 0 : 2 : 5 ) и др.
Стероидные алкалоиды подвергаются ферментативному и кислот- Для обработки хроматограмм чаще всего применяются реактив
ному гидролизам. Щелочной гидролиз проводится редко, так как Драгендорфа (оранжевые пятна) или концентрированный хлоро-
некоторые гликоалкалоиды устойчивы к щелочам. Например, со- формный раствор треххлористой сурьмы с последующим непро-
ланин устойчив по отношению к щелочи, но при нагревании его должительным нагреванием при 105 °С (кирпично-красное окраши-
с разбавленной НС1 происходит расщепление на соланидин (агли- вание).
кон) и три молекулы Сахаров: D-глюкозу, D-галактозу, L-рамнозу. При применении тонкослойной хроматографии в качестве сор-
бентов используют силикагель. Системы растворителей, также
§ 3. Методы выделения весьма разнообразны: н-бутанол — метиловый спирт — диэтиламин
( 1 7 : 1 : 2); хлороформ — метиловый спирт — уксусная кислота
Одним из распространенных методов выделения гликоалкалои- (18 : 1 : 1); хлороформ — 25%-ный раствор аммиака (1000 : 1);
дов является кислая экстракция разбавленными кислотами с по- гексан — ацетон (4:1) и др. Хроматограммы обрабатываются
ледующим осаждением аммиаком. Используются разведенная сер- парами иода.
ная кислота, 0,5—2%-ный раствор азотной и ортофосфорной кислот, Методика качественных реакций. Приготовление извлечения:
2%-ный раствор холодной метафосфорной кислоты, 5%-ная уксус- измельченное растительное сырье заливают 5%-ным раствором
ная кислота и др. Недостаток кислотной экстракции — плохая уксусной кислоты в соотношении 1 : 10, взбалтывают на вибраторе
фильтрация рыхлого осадка «сырых» гликоалкалоидов, что частично 40 мин, затем отфильтровывают через бумажный фильтр. К 1 мл
можно избежать, применяя для подщелачивания не раствор амми- извлечения прибавляют несколько капель 1%-ного раствора холе-
ака, а известковое молоко. стерина в этиловом спирте. Образуется осадок.

164 165
§ 5. Количественное определение пробкой, в которую вставляют термометр. Затем уксуснокислое
извлечение фильтруют через воронку Бюхнера или складчатый
Существующие методы количественного определения стероидных фильтр.
алкалоидов можно разделить на следующие группы. 200 мл прозрачного фильтрата помещают в стеклянный стакан
/. Титрометрические методы. Гликоалкалоиды хорошо отти- вместимостью 400 мл, прибавляют 60 мл 25%-ного раствора аммиака
тровываются соляной кислотой с диметиловым желтым, а также и нагревают на водяной бане до температуры внутри стакана 60—
потенциометрически с сурьмяным или стеклянным электродами. 65 °С. Охлаждают' на льду в течение 2—3 ч и выпавшие технические
Недостаток титрометрических методов — длительность промывания гликоалкалоиды отфильтровывают с помощью воронки Бюхнера
технических гликоалкалоидов от аммиака. через двойной бумажный фильтр при слабом отсасывании или через
2. Методы бронирования. Гликоалкалоиды, имеющие двойну% складчатый фильтр. Остатки гликоалкалоидов из стакана количе-
связь в положении 5, 6, могут количественно бронироваться пири- ственно переносят на фильтр, смывая стакан маточником или
динсульфатбромидом. Этот метод пригоден только для анализа 1%-ным раствором аммиака. Жидкости с фильтра дают полностью
препаратов соласодина, а не растительного сырья и полупродук- стечь, после чего фильтр с гликоалкалоидами высушивают в су-
тов его производства. шильном шкафу при 50—90 °С (в развернутом виде на чашке Петри).
3. «Сахарные» методы. После проведения кислого гидролиза Сухой фильтр с гликоалкалоидами помещают в колбу № 1 вмести-
гликоалкалоидов и осаждения агликонов проводят титрование мостью 250 мл, приливают 100 мл этилового спирта и гликоалка-
отщепившихся Сахаров 0,1 н. перманганатом калия. Недостатком лоиды экстрагируют при нагревании на водяной бане с обратным
«сахарных» методов является то, что некоторые сахара могут выпа- холодильником в течение 30—40 мин. Затем колбу снимают, эта-
дать в осадок вместе с «сырыми» гли коал кал оидами и, таким обра- нольный раствор, декантируя, фильтруют через воронку с ватным
зом, завышать результаты анализа. тампоном в колбу № 2 вместимостью 250 мл. Этиловый спирт
отгоняют на водяной бане досуха. В колбу № 1 добавляют
4. Гравиметрические метрды. Эти методы разработаны в основ- этиловый спирт примерно до 100 мл и вновь экстрагируют
ном для препаративных целей и часто комбинируются с колоночной 30—40 мин. Экстрагирование проводят 3—4 раза, собирая фильт-
хроматографией. Если метод не комбинируется с предварительным раты в колбу № 2, и отгоняют каждый раз этиловый спирт
разделением на колонке, то определяется сумма гликоалкалоидов досуха.
или их агликонов.. Схема метода сводится к следующему: гликоал-
калоиды экстрагируют из растительного сырья разбавленным раст- Полноту извлечения гликоалкалоидов устанавливают с помощью
вором H2SO4 с последующим осаждением их раствором аммиака. раствора формальдегида в серной кислоте или паров иода.
Полученный осадок гликоалкалоидов обрабатывают Кипящим эти- После отгонки четвертой порции остатки этилового спирта
ловым спиртом и гидролизуют разбавленным раствором НС1 при выдувают воздухом (при нагревании на водяной бане, под тягой).
кипячении. После подщелачивания агликоны исчерпывающе экстра- К сухому остатку примешивают 5—10 мл 1 %-ной уксусной кислоты
гируют бензолом. Растворитель отгоняют, остаток высушивают и растворяют гликоалкалоиды при слабом нагревании на водяной
при 120 °С до постоянной массы и взвешивают. бане.
•5. Колориметрические методы. Хотя стероидные алкалоиды К уксуснокислому раствору гликоалкалоидов приливают 5—
дают реакции окрашивания со многими альдегидами, для количе- 10 мл 25%-ного раствора аммиака и нагревают на водяной бане
ственного определения применяется лишь реакция с формальдеги- до 60—65 °С. Выпавшие гликоалкалоиды охлаждают в течение 1 ч
дом в сильнокислой среде (малиново-красное окрашивание), так на льду, жидкость с гликоалкалоидов фильтруют декантацией
как окрашивание с другими альдегидами не подчиняется закону через складчатый фильтр, промывая гликоалкалоиды небольшими
Ламберта — Бера. порциями 1 %-ного аммиака. (Осадок гликоалкалоидов для лучшей
Методика количественного определения соласодина в траве промывки нужно оставлять в колбе).
паслена дольчатого (Herba Solani laciniati) (ОСТ 64-4-118—74). Промывание проводят до тех пор, пока фильтрат не станет
Методика основана на осаждении гликоалкалоидов аммиаком бесцветным. Фильтр и колбу с осадком высушивают досуха в сушиль-
из уксуснокислого извлечения с последующим потенциометриче- ном шкафу при температуре 80—90 °С. Высушенный фильтр с осад-
ским титрованием НС1. ком помещают в колбу № 2 и гликоалкалоиды растворяют при
30 г (с точностью до 0,01 г) измельченного сырья (сито № 3) нагревании на водяной бане в 100 мл 95 %-ного этилового спирта,
помещают в плоскодонную колбу вместимостью 1,0—1,5 л и зали- прибавляя его небольшими порциями в колбу, и переносят раствор
вают 600 мл 5%-ной уксусной кислоты. Колбу с содержимым поме- в стакан для потенциометрического титрования. Полученный
щают на нагретую водяную баню и поддерживают внутри колбы раствор титруют потенциометрически 0,1 н. НС1. В начале титро-
температуру 50—60 °С в течение 4 ч при периодическом поме- вания прибавляют по 0,5—1 мл 0,1 н. НС1, а когда разность потен-
шивании. Во избежание испарения колбу закрывают корковой циалов достигнет заметной величины — по 0,05 мл.
166 167
1 .мл 0,1 н. НС1 соответствует 0,04137 г соласодина. Процент- Пластинку закрепляют вертикально в камере, погружая нижний
ное содержание соласодина в пересчете на абсолютно сухую массу край пластинки в растворитель не более чем на 1—2 мм. В качестве
сырья χ вычисляют по формуле подвижной фазы используют систему хлороформ — метиловый
^0,04137-600^100· 100 спирт — вода (61 ι 32 ι 7). Для лучшего насы-
т(100—а>)200 щения с 3 сторон камеры помещают фильт-
ровальную бумагу. Когда растворитель под-
где V — объем 0,1 н. НС1, израсходованный на титрование, мл;
т — масса навески воздушно-сухого сырья, г; w — потеря в массе
нимается до верхнего края пластинки, ее
вынимают и сушат в течение 5 мин в су- © /
при высушивании сырья, %. шильном шкафу при 100 °С. Пластинку
Содержание соласодина в траве паслена дольчатого должно охлаждают на воздухе в течение 2—3 мин, φ 2
быть не менее 0,8 %. равномерно опрыскивают 20%-ной HaSO4 в
1. Раствор формалина в H2SO4 готовят смешением 10 мл концентрирован- этиловом спирте. Пластинку высушивают в m © J
ной H 2 SO 4 с 0,2 мл формалина Срок хранения не более 1 мес. течение 2—3 мин на воздухе и помещают в
2. 2—3 капли последнего этанольного экстракта наносят на фильтровальную
•открытый сушильный шкаф при 100 СС на
бумагу, высушивают и помещают в камеру с парами иода (не должно быть жел-
того пятна). 2—3 мин до появления малиновых пятен. ш
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : уксусная кислота 5 и 1%-ная; Хроматограмму закрывают стеклом и визу-
аммиака раствор 1 и 25%-ный; этиловый спирт (этанол) 95%-ный; HSSO4 (кона); .ально сравнивают размер и интенсивность
формальдегид; иод; НС1 (0,1 н.),
Колбы плоскодонные вместимостью 1,0—1,5 л; стаканы стеклянные вмести- окраски пятен анализируемых и контроль-
мостью 500 мл; воронки Бюхнера; колбы Бунзена; чашки Петри; колбы кругло- ных образцов. Через 20—30 мин, когда
донные с нормальным шлифом вместимостью 250 мл; холодильники обратные пятна начинают исчезать, хроматограмму
стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; установка для отгонки раство- просматривают повторно (рис. 33). Конт- Рис. 33. Схема (ТСХ)
рителей; стаканы для потенциометрического титрования; бани водяные лабора-
торные; термометр ртутный стеклянный, лабораторный; фильтры бумажные; рольный экстракт, из которого готовят ра- стероидных соедине-
ний листьев паслена
шкаф сушильный лабораторный; медицинская резиновая груша бочий раствор, можно хранить в плотно дольчатого:
закрытой колбе в холодильнике 1 мес (если / — рабочий раствор из
Методика определения содержания соласодина в траве паслена не образуется осадок). листьев анализируемого
дольчатого экспресс-методом. Экспресс-метод предназначен для образца паслена дольча-
того; II — «контроль» —
быстрой оценки образцов паслена для отбора селекционных образ- Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : этиловый рабочий раствор из ли-
цов с содержанием соласодина выше заданного значения. Метод спирт (этанол) 95%-ный; метиловый спирт (метанол); стьев паслена дольчато-
хлороформ; H 2 SO 4 (конц.); вода дистиллированная го, содержащего опреде-
имеет ориентировочное значение. В дальнейшем количественными Пластинки «Силуфол»; колбы плоскодонные с нор- ленное количество сола-
содина; / — диосренин;
методами устанавливается точное содержание соласодина. Пред- мальным шлифом вместимостью 25 мл; холодильники 2 — соласодвн; S — гра-
варительная оценка проводится при хроматографическом разделе- обратные стеклянные лабораторные с нормальным циллнн; 4 — гликоалка-
лоиды
нии по размеру пятна и интенсивности окраски после проявления. шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диа-
метром 5 см; колбы конические вместимостью 25 и
0,5 г измельченных листьев паслена (сито № 2) помещают 50 мл; колбы мерныегвместимостью 25 мл; микропипетка измерительная вмести-
в колбу вместимостью 25 мл, заливают 10 мл этилового спирта мостью 0,01 мл; пульверизатор стеклянный герметический; камера хроматогра-
и экстрагируют с обратным холодильником в течение 30 мин на ки- фическая для ТСХ; шкаф сушильный лабораторный; бани водяные лаборатор-
пящей водяной бане. Содержимое колбы фильтруют в горячем ные; плитка электрическая бытовая; бюретки вместимостью 10 мл; вата гигро-
скопическая.
виде через стеклянную воронку с плотным тампоном ваты в кони-
ческую колбу вместимостью 50 мл. Осадок на фильтре промывают
15 мл этилового спирта (дробно). Фильтрат количественно перено- Вопросы для подготовки
сят в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем экстракта доводят
спиртом до 25 мл, раствор перемешивают. Отбирают пипеткой 1. Определение гликоалкалоидов (стероидных алкалоидов).
2. На какие группы делятся гликоалкалоиды? Примеры формул для каждой
из колбы 1 мл раствора и из бюретки добавляют к данной пробе группы;
3 мл этилового спирта (рабочий раствор). Пипеткой наносят 3. Физические свойства гликоалкалоидов.
0,005 мл рабочего раствора на пластинку «Силуфол» на расстоя- 4. Химические свойства гликоалкалоидов.
нии 1 см от края пластинки. На одну пластинку можно наносить 5. Методы обнаружения гликоалкалоидов в растительном сырье.
несколько проб. Расстояние между точками нанесения 12—15 мм.. 6. Способы выделения гликоалкалоидов из растительного сырья.
7. Методы количественного определения гликоалкалоидов е растительном
Диаметр пятна на старте не должен превышать 5 мм. В качестве сырье
контроля используют рабочий раствор из листьев паслена доль- 8. Ориентировочное определение соласодина в листьях паслена дольчатого.
чатого, содержащих точно определенное количество соласодина. 9. Формула соласодина Основные этапы количественного определения
соласодина в траве паслена дольчатого по ОСТ 64-4-118—74.
168 169
Литература где т — масса сухого остатка в чашке, г; т1 — масса сырья, г;
Трава паслена дольчатого резаная. ОСТ 64-4-118—74. w — потеря в массе сырья при высушивании, %.
Азаркова А. Ф., Коган Л. М. Экспресс-метод оценки селекционных образ- Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е растворители (этиловый спирт раз-
цов паслена дольчатого на содержание соласодина. — Хим.-фарм. журнал, личной концентрации или др. см. НТД), СаС12 (плавлен ).
1976, № 1, с. 104—106. Эксикатор; колбы конические вместимостью 150—200 мл; колбы конические
Прашурович А. К-, Борискова Е. И., Субботина А. П. — В сб.: Результаты с нормальным шлифом вместимостью 250 мл; холодильник обратный стеклян-
научных исследований по стероидсодержащим и другим лекарственным расте- ный лабораторный с нормальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрова-
ниям, 1975, 7, — М: ВИЛР, с. 62—65. ния диаметром 5 см; бумага фильтровальная; чашки фарфоровые диаметром
7—9 см; весы лабораторные аналитические; весы ручные; бани водяные лабора-
торные; шкаф сушильный лабораторный; пипетки измерительные вместимостью
ГЛАВА 12. ЭКСТРАКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА, ВЛАГА, ЗОЛА 25 мл; сита с диаметром отверстий 1 мм; бюксы с притертой крышкой; штативы ла-
бораторные; ступка фарфоровая с пестиком; электрокофемолка бытовая.
§ 1. Определение экстрактивных веществ
Экстрактивными веществами лекарственного растительного сырья § 2. Определение влаги в лекарственном растительном сырье
условно называют комплекс органических и неорганических ве- Под влагой сырья понимают потерю в массе сырья за счет гигро-
ществ, извлекаемых из растительного сырья соответствующим раст- скопической влаги и летучих веществ, которую обнаруживают
ворителем и определяемых количественно в виде су*хого остатка. при высушивании сырья до постоянной массы.
Содержание экстрактивных веществ в лекарственном раститель- Содержание влаги в лекарственном растительном сырье служит
ном сырье — важный числовой показатель, определяющий его доб- одним из числовых показателей, характеризующих его доброкаче-
рокачественность,, особенно для тех видов сырья, у которых коли- ственность. Лекарственное растительное сырье не должно содержать
чественное определение действующих веществ не проводится. влаги выше допустимых норм, так как при повышенной влажности
В зависимости от химического состава лекарственного расти- при хранении создаются условия, способствующие снижению его
тельного сырья и используемого растворителя в извлечение пере- качества.
ходят те или иные действующие и сопутствующие вещества. Для большинства видов лекарственного растительного сырья
Растворитель, который следует брать при определении экстрак- допустимый предел влажности обычно. 12—15 %.
тивных веществ, указан в соответствующей НТД на данный вид 'Методика определения влажности лекарственного растительного
сырья. Обычно это тот же растворитель, который применяют при сырья.
приготовлении настойки или экстракта из этого сырья. Чаще всего 3—5 г (с погрешностью не более 0,1 г) сырья, измельченного
это этиловый спирт (40 или 70%-ный) или вода. до размера частиц около 10 мм, помещают в предварительно высу-
Методика количественного определения экстрактивных веществ. шенный и взвешенный бюкс. Бюкс с навеской (вместе со снятой
1 г сырья, измельченного и просеянного сквозь сито с отверстиями крышкой) ставят в нагретый до 100—105 °С сушильный шкаф.
диаметром 1 мм, помещают в коническую колбу, приливают 50 мл При этом температура в шкафу падает. Время, в течение которого
растворителя, указанного в НТД на данный вид сырья. Колбу за- сырье должно сушиться, отсчитывают с момента, когда температура
крывают пробкой, взвешивают с погрешностью не более 0,01 ν в шкафу вновь достигнет 100—105 °С. ,
и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодиль- Первое взвешивание для листьев, трав и цветков проводят
ником, нагревают до кипения и поддерживают слабое кипение через 2 ч; для корней, корневищ, кор, плодов, семян и других
жидкости в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимым видов сырья — через 3 ч. Сырье высушивают до постоянной массы.
вновь закрывают той же пробкой, взвешивают и потерю в массе Постоянная масса считается достигнутой, если разница между
дополняют тем же растворителем. Содержимое тщательно взбал- двумя последующими взвешиваниями после 30 мин высушивания
тывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу и 30 мин охлаждения в эксикаторе не превышает 0,01 г.
вместимостью 150—200 мл. 25 мл фильтрата переносят в фарфоро-
вую чашку диаметром 7—9 см, предварительно высушенную при Определение влаги сырья для пересчета содержания действую-
100—105 °С до постоянной массы и взвешенную на аналитических щих веществ в абсолютно сухом сырье проводят в навесках 1—2 г
весах, выпаривают на водяной бане досуха, сушат при температуре (точная навеска), взятых из аналитических проб, предназначенных
100—105 °С в течение 3 ч, затем охлаждают в эксикаторе и быстро для определения содержания золы и действующих веществ выше
взвешивают. описанным методом, но при разнице между взвешиваниями, не пре-
вышающей 0,0005 г.
Процентное содержание экстрактивных веществ χ в абсолютно Процентное содержание влаги в сырье χ вычисляют по формуле
сухом сырье вычисляют по формуле
т200 · 100 _ (т — тх) 100
т
170 171
где т — масса навески сырья до высушивания, г; тх — масса землей и камешками. Таким образом, повышенное содержание
навески сырья после высушивания, г. нерастворимой в соляной кислоте части золы указывает на значи-
За окончательный результат определения принимают среднее тельное содержание в растительном сырье минеральной примеси.
арифметическое двух параллельных определений, вычисленных Методика определения содержания золы. 1—3 г (при определе-
до десятых долей процента. Допускаемое расхождение между нии только общей золы) и 5 г (при определении общей золы и золы,
результатами двух параллельных определений не должно превы- нерастворимой в 10%-ной НС1) измельченного сырья (точная на-
шать 0,5 %. веска), проходящего сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм,
помещают в предварительно прокаленный до постоянной массы
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : СаС12 (плавлен.).
Эксикатор, бюксы с притертой крышкой, щипцы тигельные; весы ручные; фарфоровый тигель и равномерно распределяют по дну тигля.
весы лабораторные аналитические; шкаф сушильный лабораторный, ножницы. Навеску сырья в тигле осторожно обугливают над слабым пламенем
газовой горелки, стараясь, чтобы конец пламени не касался дна
§ 3. Определение золы в лекарственном растительном сырье тигля, или на электроплитке. В этом случае на нее помещают
асбестовую сетку, на которую устанавливают тигли с навесками.
Золой растительного сырья называют остаток неорганических После полного обугливания сырья тигли переносят в муфельную
веществ, получаемый после сжигания сырья и последующего про- печь для сжигания угля и полного прокаливания остатка. Прокали-
каливания остатка до постоянной массы. вание ведут при красном калении (550—650 °С) до постоянной массы,
Зола растений (общая зола) состоит из смеси различных неор- избегая сплдвления золы и спекания ее со стенками тигля. По окон-
ганических веществ, находящихся в самом растении (свойственных чании прокаливания несколько остывшие, но еще горячие тигли
растению), и минеральных примесей (земля, песок, камешки, пыль), ставят в эксикатор, охлаждают и взвешивают. Постоянная масса
которые могут попасть в сырье при сборе и сушке. считается достигнутой, если разница между двумя последующими
Количество золы в растительном сырье колеблется в определен- взвешиваниями не превышает 0,0005 г.
ных пределах и зависит как от специфики самого сырья, так и спо- Если после охлаждения остаток еще содержит частицы угля,
соба его сбора и условий сушки. Значительные отклонения от ука- то добавляют несколько капель пероксида водорода, концентриро-
занных в НТД норм обычно свидетельствуют о загрязнении сырья ванной ΗΝΟ3 или 10%-ного нитрата аммония, выпаривают под'
минеральной примесью или о несвоевременном сборе сырья и др. тягой на водяной бане и вновь прокаливают до тех пор, пока оста-
В золе чаще всего содержатся следующие элементы: К, Na, Mg, ток не станет белым или примет равномерную окраску.
Са, Fe, С, Si, Ρ, реже и в меньшем количестве Си, Μη, ΑΙ и др. Для определения содержания золы, нерастворимой в 10%-ной
Эти элементы находятся в золе в виде оксидов или солей уголь- НС1, в тигель с общей золой приливают 10 мл 10%-ной НС1, тигли
ной, фосфорной, серной и других кислот. покрывают часовыми стеклами и нагревают на кипящей водяной
При определении содержания золы необходимо- помнить, что, бане в течение 10 мин, затем снимают их н после остывания содер-
результаты зависят от длительности и температурного режима жимое фильтруют через беззольный фильтр; тигель, часовое стекло
всего процесса озоления. Первое, на что следует обратить внима- и фильтр промывают дистиллированной водой до прекращения
ние, — это полнота сжигания. При быстром сжигании и высокой появления мути в промывных водах от капли 2%-ного AgNO8.
температуре может произойти сплавление частичек" золы: сплавлен- Тигли и фильтры высушивают, фильтры осторожно сжигают в тиг-
ные частички захватывают и покрывают собой несгоревшие еще лях, после чего прокаливают до постоянной массы.
частички сырья, в результате чего озоление проходит не полностью. Процентное содержание общей золы хг в абсолютно сухом сырье
На результат анализа влияют также длительность и темЪература вычисляют по формуле
прокаливания остатка, полученного после сгорания сырья. При lOQ. 100
нарушении температурного режима возможны изменения состава 1
m2(10 —w) '
золы. Для того чтобы провести полное озоление растительного где т1 — масса золы, г; т2 — масса навески сырья, г; w — потеря
сырья, его следует проводить вначале при небольшом пламени в массе сырья при высушивании, %.
горелки. После прекращения выделения газов температуру можно
Процентное содержание золы, нерастворимой в 10%-ной НО
немного повысить, крышку тигля открыть. Затем тигель с обуглив-
дс2, в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле
шимся сырьем переносят в муфельную печь.
В растительном сырье проводится определение золы общей (т,—т) 100- 100
и золы, нерастворимой в 10%-ной НС1, которая представляет собой /Па (100— w) '
остаток после обработки общей золы НС1 и состоит в основном из где щ — масса золы, г; т — масса золы фильтра (если зола по-
силикатов, являющихся для некоторых объектов естественной следнего более 0,002 г); т 2 — масса навески сырья, г; w — потеря
составной частью, но чаще результатом загрязнения сырья песком, в массе сырья при высушивании, %.
172 173
Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е : НС1 10%-ная; Н 2 О 2 , HNO3, AgNO3, ОГЛАВЛЕНИЕ
NH 4 NO 3 ; вода дистиллированная; СаС12 (плавлен.)·
Фильтры беззольные; тигли фарфоровые; эксикатор; печь муфельная; элек-
троплитка бытовая; баня водяная лабораторная; щипцы тигельные; воронки
стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; весы ручные; весы лабораторные
аналитические; стекла часовые; сита с диаметром отверстий 1 и 2 мм.

Вопросы для подготовки


1. Что такое экстрактивные вещества растительного сырья? Предисловие 3
2. Какие растворители используются при определении содержания экстрак- Введение. Подготовка растительного сырья для анализа 5
тивных веществ? Глава 1. Витамины 5
3. Сущность методики определения содержания экстрактивных веществ § 1. Классификация 6
в растительном сырье. § 2. Физико-химические свойства 7
4. В каких видах лекарственного растительного сырья чаще всего опреде- § 3. Качественное определение 8
' § 4. Количественное определение 9
ляют содержание экстрактивных веществ? Вопросы для подготовки 12
5. Что такое влага лекарственного растительного сырья? Литература 12
6. В каких случаях и с какой точностью определяют содержание влаги Глава 2. Эфирные масла 12
(потеря в массе сырья при высушивании)? § 1. Классификация , 13
7. Сущность методики определения влажности лекарственного раститель- § 2. Физико-химические свойства 16
ного сырья. § 3. Методы получения 17
8. Влияние на качество сырья отклонений содержания влаги от нормы, § 4. Анализ растительного сырья 18
указанной в соответствующей НТД. § 5. Анализ эфирного масла 20
9. Что такое зола растительного сырья? Вопросы для подготовки 27
10. Что такое зола, нерастворимая в 10%-ной НС1? Литература 27
11. Сущность методики определения общей золы и золы, нерастворимой Глава 3. Сердечные гликозиды 27
в 10% -ной НС1. § 1. Классификация 29
12. От чего зависит содержание золы в растительном сырье? § 2. Физико-химические свойства 30
§ 3. Методы выделения 31
Литература § 4. Качественное определение 32
Государственный стандарт Союза ССР. Сырье лекарственное растительное. § 5. Количественное определение 33
Правила приемки и методы отбора проб. ГОСТ 24027.0—80. — М.: Изд-во стан- Вопросы для подготовки 41
Литература 41
дартов, 1980. Глава 4. Сапонины 41
Государственный стандарт Союза ССР. Сырье лекарственное растительное. § 1. Классификация 42
Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубиль- § 2. Физико-химические свойства 44
ных веществ, эфирного масла. ГОСТ 24027.2—80. — М.: Изд-во стандартов, 1980. § 3. Методы выделения 44
§ 4. Качественное определение 47
ОБЩАЯ ЛИТЕРАТУРА § 5. Количественное определение 49
Муравьева Д. А. фармакогнозия. — М.: Медицина, 1978. Вопросы для подготовки 56
Государственная фармакопея СССР. Х-е изд. — М.: Медицина, 1968. Литература 56
Глава 5. Фенологликозиды и флороглюциды 56
Фенологликозиды (гликозиды простых фенолов) 56
§ 1. Классификация 57
§ 2. Физико-химические свойства 57
§ 3. Методы выделения и идентификация 58
§ 4. Качественное определение 59
§ 5. Количественное определение 60
Флороглюциды , 61
§ 6. Классификация 61
§ 7. Физико-химические свойства флороглюцидов 63
§ 8. Методы выделения и идентификация 63
§ 9. Качественное определение 64
\ § 10. Количественное определение 65
Вопросы для подготовки 67
Литература 67
Глава 6. Антраценпроизводные и их гликозиды 67
§ 1. Классификация 67
§ 2. Физико-химические свойства 71
§ 3. Методы выделения и идентификация 72

175
§ 4. Качественное определение 74
§ 5 Количественное определение 78
Вопросы для подготовки 81
Литература 82
Глава 7. Флавоноиды 82
§ 1. Классификация ' 83
§ 2. Физико-химические свойства 84
§ 3. Методы выделения и идентификация 85
§ 4. Качественное определение 86
§ 5. Количественное определение 89
Вопросы для подготовки 93
Литература 93
Глава 8. Кумарины 94
§ 1. Классификация 94
§ 2. Физико-химические свойства 97
§ 3. Методы выделения 100
§ 4. Качественное определение 101
§ 5. Количественное ^определение 103
Вопросы для подготовки" 110
Литература 110
Глава 9. Дубильные вещества 111
§ 1. Классификация Ш
§ 2. Физико-химические свойства 115
§ 3. Методы выделения и идентификация 117
§ 4. Качественное определение 118
§ 5. Количественное определение 119
Вопросы для подготовки 122
Литература 122
Глава 10 Алкалоиды 122
§ 1. Классификация 123
§ 2. Физико-химические свойства 131
§ 3. Методы выделения 132
. § 4 . Качественное определение и идентификация 136
§ 5. Количественное определение 145
Вопросы для подготовки 161
Литература 162
Глава 11. Гликоалкалоиды . .' 162
§ 1. Классификация 163
§ 2. Физико-химические свойства 164
§ 3. Методы выделения 164
§ 4. Качественное определение 165
§ б. Количественное определение 166
Вопросы для подготовки *» . 169
Литература 170
Глава 12. Экстрактивные вещества, влага, зола 170
§ 1. Определение экстрактивных веществ 170
§ 2. Определение влаги в лекарственном растительном сырье . . . . 171
§ 3. Определение золы в лекарственном растительном сырье 172
Вопросы для подготовки 174
Литература , . . 174
Общая литература 174