Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего

образования
«Национальный исследовательский университет ИТМО»
Факультет низкотемпературной энергетики
Кафедра экологии и техносферной безопасности

Лабораторная работа № 8
Экология
Определение LC50 и IC50 по результатам биотестирования
Вариант 1
Цель работы: определить LC50 и IC50 по результатам биотестирования в остром опыте с
различными концентрациями тестируемого вещества на трёх тест-объектах из различных
систематических групп.
Объект исследования: растворы тестируемого вещества в различных концентрациях,
зелёная водоросль Scenedesmus quadricauda, ракообразное Daphnia magna, рыба Poecillia
reticulata.
Задачи, решаемые в работе: Определение LC50(96) тестируемого вещества для Daphnia
magna и Poecillia reticulata и IC50(72) для Scenedesmus quadricauda, по результатам серии
острых опытов с его различными концентрациями с использованием пробит-анализа.

Выполнил:

Долматов Н.С., группа L3216

Проверила:

Ляшенко О.А.

Санкт-Петербург 2020
 Задание 1

Таблица 1 - Результаты биотестирования препарата на Scenedesmus quadricauda (72 ч).

Численность клеток в начале эксперимента – 32 тыс. кл. / см3.

№
Численность Отклонени
№ Концентрация, Повтор е от
водорослей,
пробы мг/л - контроля,
тыс. кл./см3 %
ностей

Контрол 1 542,5 529,3

ь 2 517,1 586,3

1 99,8 102,6
3 -80
2 123,7 108,94
Опыт
1 12,3 16,3
6 -97
2 20,1 16,556
 Таблица 2 - Результаты биотестирования препарата на Scenedesmus quadricauda (72 ч).
Численность клеток в начале эксперимента – 29 тыс. кл. / см3.

№
Численность Отклонени
№ Концентрация, Повтор е от
водорослей,
пробы мг/л - контроля,
тыс. кл./см3 %
ностей

Контрол 1 495,7 547,1

ь 2 563,1 552,9

1 246,3 216,7
1,5 -54
2 281,2 246,7

1 423,4 535,8
0,75 -12
2 437,3 369,4
Опыт
1 537,6 561,6
0,375 -6
2 601,3 587,8

1 514,3 510,3
0,15 -1
2 556,7 550,7

Используя графический метод определения IC50 для водорослей получаем IC50(72) = 1,41
мг/л.
Таблица 3 - Результаты оценки токсичности препарата в различных концентрациях для
Daphnia magna в (96 ч) остром опыте.
 Повторности Заключение о
степени острой
3 гибель
Концентрация токсичности пробы
дафний
растворов, мг/л 1 2
за 96 ч.
%

0,06 10 10 10 0

0,125 9 9 10 3,5

0,25 9 8 9 10,4

0,5 7 7 8 24,1

1,0 5 6 5 44,9

2,0 3 2 3 72,4

4,0 1 0 0 96,5

8,0 0 0 0 100

Контроль 10 10 9 -

По результатам графического метода определения LC50(96) для Daphnia magna составила

1,05 мг/л.

Таблица 4 - Результаты острого (96 ч) опыта c Poecilla reticulata для оценки токсичности
препарата
Повторности Заключение о
степени острой
1 2 3 гибель
Концентрация токсичности пробы
рыб за
растворов, мг/л
96 ч., %
 0,5 10 10 10 0

1,0 9 10 9 6,7

2,0 9 8 7 20

4,0 5 5 6 46,7

8,0 0 0 0 100

16,0 0 0 0 100

Контроль 10 10 10

По результатам графического метода определения LC50(96) для Poecilla reticulata

составила около 3,5 мг/л.

Отчет по работе и вывод:

Таким образом, наибольшее токсичное воздействие препарат оказал на Daphnia magna

LC50(96) = 1,05 мг/л. Для Scenedesmus quadricauda IC50(72) =1,41 мг/л, для Poecilla
reticulata – 3,5 мг/л.

Литература:

Методические материалы по лабораторным работам для НИУ ИТМО.

Вопросы к работе:

1. Каким образом характеризуют токсичное воздействие вещества на живой организм,

какой из показателей является наиболее применяемым и используется для паспортизации
веществ (препаратов, материалов)?
Поскольку смерть тест-объекта после действия токсиканта – реакция, реализующаяся по
принципу «все или ничего», показатель смертности считается наиболее объективным для
оценки токсичности веществ, его используют для определения величины среднелетальной
дозы – LD50 (или концентрации – LC50), под которой понимают количество токсиканта
(или его концентрацию), вызывающее гибель 50 % тест-объектов при определенной
продолжительности наблюдения.

2. Какие тест-объекты используются для определения среднелетальной (средней

ингибирующей) концентрации и по результатам какого опыта она оценивается?

LD50 (LC50) - один из наиболее широко применяемых показателей, характеризующий

токсичность для живых организмов веществ, материалов, препаратов и используемый, в
частности, для их паспортизации. Ввиду того, что реакции организмов различной
систематической принадлежности на воздействие одной и той же дозы (концентрации)
вещества могут существенно различаться, определение LC50 вещества, материала,
препарата и др. производится на тест-объектах разных систематических групп, для
каждого устанавливается полулетальная концентрация. Биотестирование осуществляется
при различных концентрациях вещества по программе острого опыта с водорослями,
ракообразными и рыбами

3. Как осуществляется определение среднелетальной (средней ингибирующей)

концентрации графическим методом?

Если экспериментально не удалось получить точного значения концентрации,

вызывающей 50% ингибирование роста культуры водорослей за 72 часа или 50%-ную
гибель дафний или мальков рыб за 96 часов, то для 44 получения точного значения LC50
без выполнения дополнительных экспериментов используют графический метод
определения. Чтобы получить на графике линейную зависимость, используют
пробитанализ. Результаты экспериментов по установлению острого токсического
действия заносят в таблицы, где указывают концентрации, с которыми проводили опыт, а
также долю погибших дафний или рыб (в случае водорослей – долю прироста от
контроля) в %. Значения пробитов устанавливают по таблице 10. Определяют десятичные
логарифмы концентраций вещества (материала, препарата), с которыми проводились
опыты по биотестированию. По значениям пробитов и десятичных логарифмов
исследованных концентраций строят график. По оси абсцисс откладывают значения
логарифмов процентных концентраций исследуемого вещества (материала, препарата), по
оси ординат - пробиты от доли (%) погибших дафний или рыб, или доли (%) прироста от
контроля водорослей.
По значениям логарифмов концентраций (ось абсцисс) и пробитов (ось ординат) строится
график. Для нахождения точных значений величин логарифмов концентраций,
соответствующих 50%-ной смертности (или ингибирования роста), график строят в
программе Excel (пакет Microsoft Office), указывая в опции «тип диаграммы» параметр
«точечная». Уравнение прямой, описывающее взаимосвязь между этими величинами,
получают выбором в параметре «диаграмма» опции «добавить линию тренда». Далее в
опции «тип» указывается «линейная», а в опции «линия тренда», «параметры» выбирают
«уравнение на диаграмме». Из полученного уравнения линии тренда получают значения
величин х = lgC, соответствующие величинам у (значениям пробитов). Пробитное
значение 5,0 соответствует логарифму концентрации вещества (материала, препарата),
вызывающей гибель 50% тест-объекта (дафнии, рыбы) за 96 часов экспозиции или 50%
ингибирование роста культуры водорослей за 72 часа экспозиции. Соответствующая
этому логарифму концентрация равняется LC50(96) или IC 50(72).