Лекция 1. Введение.

Цитологические, биохимические и
молекулярные основы наследственности.

Введение в медицинскую генетику. Основные положения и

понятия.
Термин «генетика» в 1906 г. предложил английский ученый У. Бэтсон. Генетика
изучает закономерности, наследственности и изменчивости у человека на всех уровнях
его организации(молекулярном, клеточном, организменном ,популяционном), а также
стремится найти способы управления ими. Современная генетика, руководствуясь
общими принципами организации всего живого, тесно взаимодействует с
фундаментальными науками: физикой, химией, математикой, биологией, экологией и
другими науками.
Благодаря тесной связи современной генетики и фундаментальных наук в
середине прошлого столетия появились самостоятельные специализированные разделы
генетики: генетика человека, популяционная генетика, цитогенетика, иммуногенетика
онкогенетика, фармакогенетика.
Несомненно, генетика человека, наряду с молекулярной генетикой и
молекулярной медициной, относится к самым прогрессирующим разделам генетики в
целом. Днем рождения генетики как науки принято считать 1900 г., когда три ботаника –
голландец Г. де Фриз, немец К. Корронг и австриец К. Чермак - независимо друг от друга
переоткрыли важнейшие закономерности наследования признаков в потомстве,
установленные за35 лет до них чешским естествоиспытателем Г. Менделем.
Историю генетики, в том числе и медицинскую, условно можно поделить на три
основных этапа:
 1-й этап– эпоха классической генетики (с 1900 по 1930 гг.), в этот период:
– создана теория гена и хромосомная теория наследственности;
– разработано учение о взаимодействие генов, о фенотипе и генотипе.
– открыты группы крови и механизм их наследования.
 2-й этап – эпоха неоклассицизма в генетике (с 1930 по 1953 гг.), в этот период:
– открыта возможность искусственного получения изменений в генах и в
хромосомах (экспериментальный мутагенез);
– обнаружено, что ген – это сложная система, дробимая на части;
– обоснованы принципы генетики популяций и эволюционной генетики;
– посредством биохимической генетики доказано, что молекулы ДНК являются
основой для записи генетической информации.
 3-й этап – эпоха синтетической генетики (с 1953 г. по настоящее время), в этот
период:
– раскрыта структура ДНК и показана ее генетическая значимость;
– установлено точное число хромосом у человека;
– возникла новая дисциплина – клиническая цитогенетика;
– получили дальнейшее развитие теории гена и теории мутаций;
– были получены новые данные в области биохимической и эволюционной генетики,
иммуногенетики, онкогенетики,
– экологической генетики, генетики человека и других разделах общей и частной
генетики;
 – создана технология рекомбинантных ДНК (генная инженерия);
– вместе с геномом человека расшифрован (секвенирован) геном ряда бактерий,
дрожжей, дрозофилы, нематоды, некоторых растений, мыши; возможно, скоро
будет расшифрован и геном других организмов (крысы, кролика, свиньи,
шимпанзе).
В России в середине 19 века над проблемами наследственных болезней человека
работал В.М. Флоринский, который указывал на значение среды в формировании
наследственных признаков, вред близкородственных браков, наследственный характер
пороков развития, гдухонемоты, альбинизма. В 1919 году организована кафедра
генетики в Петроградском университете. В это же время Н.И. Вавилов сформулировал
важнейший генетический закон о генетических основах селекции и закон
гомологических рядов в наследственной изменчивости. Основоположник клинической
генетики в России признана врач-невропатолог С.Н. Давиденков . В 1930 году в
Москве был организован Медико-биологический институт, который вскоре был закрыт
с приходом к власти в биологической науке Т.Д. Лысенко. После разоблачения его
учения с 1964 г. началось возрождение медицинской генетики. Первая медико-
генетическая консультация в Росси была организована в 1929 г Давыденковым в
институте нервно-психологической профилактики, где изучались наследственные
болезни нервной системы и были разработаны основы медико-генетического
консультирования, пренатальной диагностики, массовая диагностика у
новорожденных наследственных болезней обмена веществ, поддающаяся диетической
и лекарственной коррекции. Внедрение этой системы обеспечивает снижение частоты
рождения детей с врожденными пороками развития и наследственными болезнями на
70%.
Медицинская генетика является составной частью генетики человека. Она
изучает закономерности наследственности и изменчивости точки зрения патологии
человека, а именно: причины возникновения наследственных болезней, характер их
наследования в семьях, распространение в популяциях, специфические процессы на
клеточном и молекулярном уровнях. Особый раздел медицинской генетики составляет
клиническая генетика, исследующая вопросы патогенеза, клиники, диагностики,
профилактики и лечения наследственных болезней.
Задачами медицинской генетики являются:
 изучение роли генетических и внешних факторов в развитии наследственной
патологии, а также характера наследования и проявления патологических генов;
 разработка принципов классификации, диагностики и профилактики
наследственных заболеваний;
 изучение характера наследственной патологии на молекулярном, клеточном,
организменном и популяционном уровне;
 выявление распространения наследственных болезней и врожденных пороков
развития;
 совершенствование методов генной инженерии с целью генотерапии и получения
новых лекарственных веществ;
 широкое и повсеместное внедрение медико-генетического консультирования:
 развитие методов пренатальной диагностики;
 выявление мутагенных факторов внешней среды разработка методов их
нейтрализации.
 Человек как объект генетических исследований чрезвычайно сложен.
Трудности, которые возникают при изучении человека как генетического объекта, состоят
и том, что:
 в его кариотипе довольно много хромосом и групп сцепления;
 он поздно созревает, имеет мало потомства и у него редко происходит смена
поколений;
 над ним невозможно экспериментировать;
 для него и его семьи невозможно создать одинаковые условия жизни.

Значение генетики для медицины. Благодаря внедрению в практическое

здравоохранение новейших методов молекулярной генетики и молекулярной
цитогенетики удается не только картировать гены человека, но и идентифицировать в них
некоторые конкретные мутации, вызывающие развитие наследственных заболеваний. В
последние годы медицинская генетика составляет фундамент современной медицины и её
значение в понимании этиологии и патогенеза любой патологии человека постоянно
возрастает. Любой патологический процесс имеет определённую молекулярную основу, а
в последней гены и(или) их продукты обязательно играют важную роль. Практическая
медицина постоянно внедряет в свою ежедневную работу достижения общей генетики.
Прикладным разделом медицинской генетики является клиническая генетика, которая с
успехом осваивает методы медицинской генетики – клинико-генеалогический,
близнецовый, биохимический, цитогенетический, популяционный, молекулярно-
цитогенетический, метод ДНК-диагностики; значительное место в медицинской генетике
в настоящее время уделяется онтогенетическому методу, который позволяет
рассматривать развитие нормальных и патологических признаков в процессе
индивидуального развития организма. С помощью только биохимического и
цитогенетического методов в настоящее время удалось установить этиологию многих
болезней обмена веществ и практически всю группу хромосомных аномалий. Удалось
разработать эффективные методы борьбы со многими инфекционными болезнями,
значительны достижения в лечении других болезней, например, авитаминозов. Активно
исследуются генетические основы таких заболеваний как диабет, онкологические
заболевания, гипертония.
Важна роль медицинской генетики в развитии профилактической медицины:
ранее предупреждение рождения больного ребёнка в семье с наследственной патологией
или даже в популяции в целом с помощью специальных мероприятий было не только
наиболее типичным, но и единственным способом действия медицинских генетиков.
Сейчас положение меняется в связи с разработкой методов генной терапии– введение
больному генов, играющих ключевую роль в патогенезе соответствующих заболеваний.

Наследственность и здоровье
Известно, что наследственные заболевания являются результатом тесного
взаимодействия наследственных и средовых факторов. Если для одних наследственных
болезней в развитии патологического процесса ведущая роль принадлежит генетическим
факторам или только генетическим факторам (болезни обмена веществ, хромосомные
болезни), то для развития других заболеваний необходимо тесное взаимодействие как
генетических, так и внешне средовых факторов (диабет, подагра, ишемическая болезнь
сердца, хронический алкоголизм, бронхиальная астма, язвенная болезнь и др.).
Наследственные болезни занимают существенное место в работе медицинского
работника. Выявлено, что наследственная изменчивость высока – в течении жизни
человека приблизительно у 70% людей проявляются те или иные наследственные болезни.
С наследственными и врожденными заболеваниями рождается около 5% детей. Известно
более 10000 наследственных признаков, половину которых составляют наследственные
болезни. Интенсивное изучение наследственных болезней в клиниках многих стран
увеличило их число почти до 9000 (в 1966 году было изучено около 1500 наследственных
болезней). Для более чем 3900 из этих недугов изучена локализация мутантных генов в
хромосомах и проведен молекулярный анализ продуктов их деятельности.
К настоящему времени обнаружено около 1000 вариантов патологических
изменений хромосом и уже возможна ДНК-диагностика более 100 наследственных
патологий. В расчете на 1000 новорожденных эти заболевания встречаются у 6-7 детей.
К наследственной патологии человека относится обширный круг заболеваний
различных нозологических классов: сердечно-сосудистые заболевания, болезни обмена
веществ, эндокринной системы, кожи, глаз, мочеполовой системы, нервные и психические
заболевания и т.д. Существует ряд широко распространенных наследственных болезней и
предрасположений (сахарный диабет и шизофрении - 1% популяции).К числу
наследственных относятся такие широко распространенные пороки зрения, как
близорукость, дальнозоркость, цветовая слепота (она встречается у0,5% женщин и 8%
мужчин). К болезням с наследственным предрасположением принадлежат атеросклероз,
гипертоническая болезнь, ишемическая болезнь сердца, шизофрения, хронический
алкоголизм, многие врожденные пороки развития.
В настоящее время описано более 13тыс. наследственных признаков и
примерно50% из них составляют наследственные заболевания и врожденные пороки
развития, из которых более 2 тыс. это тяжелые инвалидизирующие расстройства. Из этого
огромного количества наследственных заболеваний сегодня около 1 тыс. уже могут быть
выявлены еще до рождения ребенка. По обобщенной сводке ВОЗ, ежегодно
регистрируется в среднем три новых наследственных заболевания, которые встречаются в
практике врача любой специальности. В 70-х годах XX в. объем генетического груза
(хромосомные, моногенные, мультифакторные болезни) на весь период жизни человека
составлял 10,5%. В 2000г. этот груз увеличился до 75%. Исходя из этого, можно
предположить, что в начале XXI в. у каждого человека, доживающего в среднем до 70 лет,
должен проявиться какой-нибудь наследственный дефект. По данным медиков, в нашей
стране только 10% здоровых людей. По сводным данным многих отечественных и
зарубежных исследователей, в педиатрических клиниках около 50% больничных коек
занято больными с наследственными заболеваниями или болезнями с наследственным
предрасположением.
Обобщая данные научной литературы за 30 лет, к неутешительному заключению
пришел Ю.П. Алтухов. По его заключению, около50% первичного генофонда не
воспроизводится в следующем поколении (спонтанные аборты – 15%; мертворожденные –
3%; неонатальная смертность – 2%; смертность до наступления репродуктивного периода
– 3%; 20% лиц не вступают в брак; 10% браков бесплодны). В мире каждый 16-й
новорожденный имеет серьезные генетические отклонения, которые возникают за счет
плохой экологии, воздействия вредных химических веществ, некоторых видов инфекций,
попадающих в организм будущей матери, а также кровнородственных браков и поздних
родов.
Некоторые заболевания встречаются только у людей определенной национальности или в
некоторых регионах— это так называемые эндемичные заболевания.
Национальные болезни могут быть связаны с генетической предрасположенностью или с
особенностями питания и образа жизни некоторых народов. У многих народов возникают
дефекты в генах, которые обуславливают появление специфических болезней,
характерных для людей одной национальности.
Существует и расовая предрасположенность к некоторым заболеваниям, например,
чернокожие люди чаще страдают артериальной гипертензией, которая протекает у них
тяжелее, чем у белых.

Наследственные национальные болезни

Генетические заболевания связаны с нарушениями в геноме клеток и передаются по
наследству.
Периодическая болезнь (средиземноморская лихорадка, Familial Mediterraneanfever)
– яркий пример национальной болезни, передающейся от родителей к детям.
Заболеванием страдают представители этнических групп, чьи предки проживали в
средиземноморском бассейне. Это армяне, евреи, баски, арабы. Болезнь относят к
амилоидозам— патологиям, симптомы которых вызваны отложением в органах
аномального белка (амилоида). Проявляется лихорадка периодическими приступами с
выраженным болевым синдромом и воспалительными процессами – плевритом,
перикардитом, перитонитом.

Талассемии – группа заболеваний, вызванных повышением патологического гемоглобина

и разрушением эритроцитов. Эти национальные болезни встречаются чаще всего в
Азербайджане, Узбекистане, Таджикистане, а также в Грузии и Армении. Жители этих
стран страдают тяжелой формой талассемии – болезнью Кули, легкая форма (малая
талассемия) встречается в Греции и Италии.

Серповидно-клеточная анемия– форма наследственного малокровия с появлением

атипичных эритроцитов, имеющих изогнутую форму. Распространена в странах
Средиземноморья ив Северной Африке. Данный регион является природным очагом
малярии. Появление генетической мутации, изменяющей форму эритроцитов, связывают с
защитой от заражения малярийным плазмодием. Отмечено, что люди, которые являются
носителями дефектных генов, менее подвержены малярии.

Синдром Ямагучи – форма гипертрофической кардиомиопатии, встречающаяся

преимущественно в Японии.
Наследственная чувствительность к алкоголю – у народов Крайнего Севера, Японии,
Кореи и некоторых других понижен уровень ферментов, расщепляющих алкоголь.
Поэтому они быстрее достигают стадии опьянения, чем представители других народов, у
них чаще развивается алкоголизм.
Болезни, связанные с особенностями питания
Национальные болезни могут быть связаны с избытком или недостатком в питании
некоторых веществ. К таким заболеваниям относят эндемические болезни, вызываемые
дисбалансом в почве и воде микроэлементов.
Болезнь Кешана – эндемическая кардиомиопатия, встречается в регионах с низким
содержанием селена. Зона распространения – Китай и районы Забайкалья.

Эндемический зоб – заболевание щитовидной железы, вызванное недостатком йода.

Районы зобной болезни имеются в Швейцарии, Германии, Франции, Испании, США и
других странах. В России он бывает на Урале, Кавказе, Алтае.

Флюороз – отложение фтора в организме при его избыточном попадании из окружающей

среды. Проявляется появлением пятен на зубной эмали и поражением скелета.
Некоторые особенности питания и национальные традиции иногда приводят к развитию
патологий. Например, квашиоркор – заболевание, известное также под названием
«детская пеллагра». Распространено в районах Африки и Азии, где пища бедна белком,
что приводит к развитию тяжелой дистрофии.
В странах Азии, где основной пищей являлся полированный рис, встречался
гиповитаминоз витамина B1(болезнь бери-бери) и связанные с ним неврологические
расстройства.
Национальной болезнью азиатских народов можно считать и рак пищевода – из-за
традиции употребления чрезмерно острой и горячей пищи он диагностируется на Востоке
чаще, чем в других регионах.
В России из генетических отклонений часто встречаются муковисцидоз, фенилкетонурия,
спинальная амиотрофия и нейросенсорная тугоухость.
В Чувашии рождается много детей с врожденным остеопорозом, а в Марий Эл и
Удмуртии – с ихтиозом (генерализованным нарушением ороговения кожи).
Дубайский центр генетических исследований среди арабов выявил, что среди коренного
населения распространены 119 наследственных болезней. Особенно высок уровень
распространения сахарного диабета, талассемии и рака груди в ОАЭ, Омане и Бахрейне,
достигающих эпидемического порога. 

ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ НАСЛЕДСТВЕННОСТИ.

Структура и функция клеточного ядра.

Эукариотические клетки содержат оболочку, цитоплазму с органоидами и оформленное
ядро. Генетическая информация, которую передает одно поколение клеток или
организмов другому, заключена преимущественно в ядре клеток. Оболочка ядра состоит
из наружной и внутренней мембран, а также содержит ядерную пластинку. Наружная
мембрана связана с ЭР, на ней расположены рибосомы. Синтезированные здесь белки,
переносятся в перинуклеарное пространство, которое связано с ЭР. Внутренняя мембрана
содержит белки, выступающие в качестве сайтов связывания ядерной пластинки,
контактирует с хроматином и РНК ядра. Нуклеоплазма — содержимое клеточного ядра,
состоит из ядерного матрикса, хроматина и ядрышка. Белки связывают определенные
последовательности ДНК, образующие основание петель хроматина. Матрикс участвует в
образовании хромосом, определяет локализацию генов, регулирует транскрипцию и
репликацию ДНК. Хроматин: основными компонентами хроматина являются ДНК,
гистоны и негистоновые белки (ДНП). Соотношение ДНК и белка составляет ~1:1,3, а
основная масса белков хроматина представлена гистонами. Различают 2 вида хроматина:
гетерохроматин (интенсивно окрашенные гранулы) и эухроматин (светлые
мелкозернистые участки). Эухроматин характеризуется меньшей по сравнению с
гетерохроматином компактизацией ДНК, в нем находятся активно функционирующие
гены. В процессе митоза, спирализуясь, хроматин образует хромосомы. Нити хроматина
составлены из расположенных друг за другом микрочастиц – нуклеосом. Нуклеосома
имеет белковый остов, вокруг которого закручена молекула ДНК. Размеры молекул ДНК
значительные. Каждая хромосома представлена одной молекулой ДНК. Они могут
достигать сотен микрометров и даже сантиметров. Из хромосом человека самая большая
первая. Ее ДНК имеет общую длину до 7 см. Суммарная длина молекул ДНК всех
хромосом составляет 170см. Ядрышко — высокоорганизованная шаровидная структура
ядра. Содержит большие петли ДНК, выступающие из хромосом, при этом каждая петля
содержит кластер генов рРНК (клетки человека содержат около 200 таких генов,
распределенных в виде кластеров по пяти хромосомам). Каждый кластер — это район
ядрышкового организатора. Функции ядра: 1) хранение и передача генетической
информации; 2) регуляция процессов жизнедеятельности клетки. Характеристика,
строение и классификация хромосом. Метафазная хромосома состоит из двух продольных
нитей ДНП — хроматид, соединенных друг с другом в области первичной перетяжки
(центромеры). Центромера делит тело хромосомы на два плеча. В зависимости от
расположения центромеры различают следующие типы хромосом: 1) акроцентрические
— центромера смещена к одному концу хромосомы и одно плечо очень короткое; 2)
субметацентрические — центромера смещена от середины хромосомы, и плечи имеют
разную длину; 3) метацентрические — центромера расположена посередине, и плечи
примерно одинаковой длины. Участок каждого плеча вблизи центромеры называется
проксимальным, удаленный от нее — дистальным. Концевые отделы дистальных участков
называются теломерами. Теломеры препятствуют соединению концевых участков
негомологичных хромосом. При потере этих участков наблюдаются хромосомные
перестройки. Некоторые хромосомы могут иметь вторичные перетяжки, отделяющие от
тела хромосомы участок, называемый спутником. У человека имеются у пяти пар
хромосом (13-15 и 21-22 пары) Совокупность хромосом соматической клетки,
характеризующая организм данного вида, называется кариотипом. Хромосомы
подразделяют на аутосомы (одинаковые у обоих полов) и гетерохромосомы, или
половые хромосомы, (разный набор у мужских и женских особей). Каждый организм
имеет определенный набор хромосом, их число, размеры и структуру, который называется
кариотипом. Кариотип будущего организма формируется в процессе слияния двух
половых клеток, с объединением их хромосомных наборов. Кариотип это паспорт вида.
Например, кариотип человека содержит 22 пары аутосом и две половые хромосомы: Х и
Х у женщины и Х и Y у мужчины (46, ХХ и 46, ХY соответственно). В соматических
клетках организмов содержится диплоидный — 2n (двойной) набор хромосом, а в гаметах
— гаплоидный — 1n (одинарный).
Идиограмма — это систематизированный кариотип, в котором хромосомы располагаются
по мере убывания их величины. Точно расположить хромосомы по величине удается
далеко не всегда, так как некоторые пары хромосом имеют близкие размеры.
В 1960 г. была предложена Денверская классификация хромосом, которая помимо
размеров хромосом учитывает их форму, положение центромеры и наличие вторичных
перетяжек и спутников. 23 пары хромосом человека разбили на 7 групп от А до G.
Важным параметром является центромерный индекс (ЦИ), который отражает отношение
(в %) длины короткого плеча к длине всей хромосомы.
 К группе А относят 1–3 пары хромосомы. Это большие, метацентрические и
субметацентрические хромосомы, их центромерный индекс от 38 до 49. Группа В (4 и 5
пары). Это большие субметацентрические хромосомы, ЦИ 24–30. Группа С (6–12 пары).
Хромосомы среднего размера, субметацентрические, ЦИ 27–35. К этой группе относят и
Х-хромосому. Группа D (13–15 пары). Хромосомы акроцентрические, сильно отличаются
от всех других хромосом человека, ЦИ около 15. Группа Е (16–18 пары). Относительно
короткие, метацентрические или субметацентрические, ЦИ 26 – 40. Группа F (19–20
пары): две короткие, субметацентрические хромосомы, ЦИ 36–46. Группа G (21 и 22
пары): это маленькие акроцентрические хромосомы, ЦИ 13–33. К этой группе относят и
Y-хромосому. В основе Парижской классификации хромосом человека (1971 г.) лежат
методы специальной дифференциальной их окраски, при которой в каждой хромосоме
выявляется характерный только для нее порядок чередования поперечных светлых и
темных сегментов. G-окрашивание — обработка трипсином и окрашивание красителем
Гимзы. Под микроскопом видны светлые и темные полосы (G-сегменты). R-окрашивание
дает картину противоположную G-окрашиванию: включает обработку хромосом горячим
фосфатным буфером с последующим окрашиванием красителем Гимза либо
флуорохромом оранжевым акридином. С-окрашивание — анализ центромерных районов
и дистальной части Y-хромосомы. Т-окрашивание — анализ теломер и районов
ядрышковых организаторов при окрашивании азотнокислым серебром. Короткое плечо
хромосом обозначают латинской буквой p, а длинное — q. Каждое плечо хромосомы
разделяют на районы, нумеруемые по порядку от центромеры к теломере. В некоторых
коротких плечах выделяют один такой район, а в других (длинных) — до четырех.
Полосы внутри районов нумеруются по порядку от центромеры. Если локализация гена
точно известна, для ее обозначения используют индекс полосы. Например, локализация
гена, кодирующего эстеразу D, обозначается 13p14 — четвертая полоса первого района
короткого плеча тринадцатой хромосомы. Основная функция хромосом — хранение,
воспроизведение и передача генетической информации при размножении клеток и
организмов.

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПРЕЕМСТВЕННОСТИ НАСЛЕДСТВЕННЫХ

СВОЙСТВ.
Временная организация клетки

Клеточный цикл — это период жизнедеятельности клетки от момента ее появления до

гибели или образования дочерних клеток. Митотический цикл — это период
жизнедеятельности клетки от момента ее образования и до разделения на дочерние
клетки. Митотический цикл включает интерфазу и митоз. Интерфаза — это период
функционирования и подготовки клетки к делению. Она подразделяется на три периода:
пресинтетический (постмитотический) — G1, синтетический — S и постсинтетический
(премитотический) — G2. Содержание генетической информации в клетке обозначают
следующим образом: n — набор (число) хромосом, chr — число хроматид в одной
хромосоме и с — набор (число) молекул ДНК. Образовавшаяся после митоза клетка
содержит диплоидный набор хромосом, каждая хромосома имеет одну хроматиду, в
клетке 2 набора молекул ДНК — 2n1chr2с. Такая клетка вступает в пресинтетический
период (G1) интерфазы, продолжительность которого колеблется от нескольких часов до
нескольких месяцев и даже лет. В этот период клетка выполняет свои функции,
увеличивается в размерах, в ней идет синтез белков и нуклеотидов, накапливается энергия
в виде АТФ. В синтетический период (S) происходит репликация молекул ДНК и ее
содержание в клетке удваивается, т. е. каждая хроматида достраивает себе подобную, и
генетическая информация к концу этого периода становится: 2n2chr4c. Одновременно
клетка продолжает выполнять свои функции. Продолжительность этого периода 6–8
часов. В постсинтетический период (G2) клетка готовится к митозу: накапливается
энергия, постепенно затухают все синтетические процессы, необходимые для
репродукции органоидов, меняется вязкость цитоплазмы и ядерно-цитоплазматическое
отношение, прекращается выполнение клеткой основных функций, накапливаются белки
для построения ахроматинового веретена и удваиваются центриоли. Изменяется вязкость
цитоплазмы. Содержание генетической информации не изменяется (2n2chr4с). Клетка
вступает в митоз.

Митоз — это основной способ деления соматических клеток. Главными

причинами митоза являются: 1) изменение ядерно-цитоплазматического отношения (от
1/6–1/8 до 1/69–1/89); 2) «митогенетические лучи» — делящиеся клетки стимулируют к
митозу расположенные рядом клетки; 3) «раневые гормоны» — поврежденные клетки
выделяют особые вещества, способствующие митозу неповрежденных клеток.
Непрерывный процесс митоза подразделяют на 4 стадии: 1) профазу; 2) метафазу; 3)
анафазу; 4) телофазу.

В профазу происходит увеличение объема ядра, начинается спирализация хроматиновых

нитей, расхождение центриолей к полюсам клетки и формирование веретена деления. К
концу профазы растворяются ядрышки и ядерная оболочка, хромосомы «выходят» в
цитоплазму. К центромерам хромосом прикрепляются нити веретена деления, и
хромосомы устремляются к центру клетки. Содержание генетической информации при
этом не изменяется (2n2chr4с). Метафаза — самая короткая фаза, когда хромосомы
располагаются на экваторе клетки. Это стадия, в которую хромосомы максимально
спирализованы. Содержание генетической информации остается прежним — 2n2chr4с. В
анафазе происходит разделение хроматид в области центромер. Нити веретена деления
сокращаются и хроматиды (дочерние хромосомы) расходятся к полюсам клетки.
Содержание генетической информации становится 2n1chr2с у каждого полюса. В
телофазу формируются ядра дочерних клеток: хромосомы деспирализуются, строятся
ядерные оболочки, в ядре появляются ядрышки. Митоз заканчивается цитокинезом —
делением цитоплазмы материнской клетки. В конечном итоге образуются две дочерние
клетки, каждая из которых имеет 2n хромосом, 1 хроматиду в хромосоме и 2с ДНК.
Основное значение митоза заключается в точном распределении генетической
информации между дочерними клетками и в поддержании постоянства числа хромосом.
Митоз — не единственный способ деления клеток. Эукариотические клетки могут
делиться и прямым делением — амитозом. Амитоз — прямое деление клеток и ядер,
находящихся в условиях физиологической и репаративной регенерации, или опухолевых
клеток. При этом не происходит образования видимых хромосом и веретена деления.
Типичный амитоз начинается с образования перетяжки ядра, затем цитоплазмы, и
разделения их на две части. Разновидностями митоза являются эндомитоз, политения и
мейоз. При эндомитозе происходит удвоение хромосом без деления ядра, что приводит к
образованию полиплоидных клеток. При политении наблюдается многократное удвоение
хроматид, но они не расходятся, и в результате образуются политенные (многонитчатые,
гигантские) хромосомы, например, в слюнных железах мухи дрозофилы. Мейоз — это
деление особых соматических клеток половых желез, в результате которого образуются
половые клетки (гаметы).
 Мейотическое деление протекает в два этапа — мейоз I и мейоз II. Каждое
мейотическое деление подразделяют на 4 фазы: профазу, метафазу, анафазу и телофазу.

Профаза I состоит из 5 стадий: – лептотена (leptos — тонкий): происходит спирализация

хромосом, они видны в виде тонких нитевидных стру тур; 2n2chr4с; – зиготена (zygon —
парный): происходит конъюгация гомологичных хромосом, образуются биваленты и
синаптемальный комплекс, гомологи плотно присоединены друг к другу по всей длине;
1nbiv4chr4с; – пахитена (pahys — толстый): происходит кроссинговер обмен одинаковыми
участками несестринских хроматид гомологичных хромосом, образуются хиазмы (места
перекреста); 1nbiv4chr4с; – диплотена (diplos — двойной): между центромерами хромосом
возникают силы отталкивания, синаптемальные комплексы разрушаются, но хромосомы
остаются соединенными в области хиазм; 1nbiv4chr4с; – диакинез: продолжается
спирализация хромосом, разрушается ядерная оболочка и ядрышки, центросомы
расходятся к полюсам клетки, формируется митотический аппарат; 1nbiv4chr4с.

В метафазу I в экваториальной плоскости клетки отчетливо видны биваленты,

прикрепленные центромерами к нитям веретена деления. Содержание генетической
информации остается прежним; 1nbiv4chr4с В анафазу мейоза I гомологичные
хромосомы, состоящие из двух хроматид, отходят к противоположным полюсам клетки.
Расхождение хромосом носит случайный характер. Содержание генетической
информации становится: 1n2chr 2с у каждого полюса клетки. Телофаза мейоза I не
отличается от таковой митоза (но хромосомы не деспирализуются). В результате мейоза I
образуются две дочерние клетки, содержащие гаплоидный набор хромосом, но каждая
хромосома имеет две хроматиды (1n2chr2c). Следовательно, в результате мейоза I
происходит редукция (уменьшение вдвое) числа хромосом, откуда и название этого
деления — редукционное. После окончания мейоза I наступает короткий промежуток —
интеркинез, в течение которого не происходит репликации ДНК и удвоения хроматид.
Мейоз II протекает по типу обычного митоза. Профаза мейоза II непродолжительная, так
как хромосомы после телофазы мейоза I остаются спирализованными. Изменений
содержания генетического материала не происходит (1n2chr2с). В метафазе мейоза II
хромосомы располагаются в экваториальной плоскости клетки. Содержание
генетического материала — 1n2chr2с. В анафазу мейоза II к полюсам отходят хроматиды
(дочерние хромосомы), и содержание генетического материала становится 1n1chr1с у
каждого полюса клетки. В телофазе мейоза II после цитокинеза образуются клетки с
гаплоидным набором хромосом, содержащих одну хроматиду (1n1chr1с). Таким образом,
в результате двух последовательных делений мейоза из одной диплоидной клетки
образуются 4 гаплоидные. Значение мейоза: 1) редукция числа хромосом, 2) конъюгация
гомологичных хромосом, 3) рекомбинация генетического материала, обусловленная
кроссинговером и случайным расхождением гомологичных хромосом.

Сравнительная характеристика процессов митоза и мейоза

Гаметогенез.

Процесс образования половых клеток называется гаметогенезом.Этот процесс

протекает в половых железах (семенниках и яичниках) и подразделяется на
сперматогенез – образование сперматозоидов и оогенез – образование
яйцеклеток.

Фаза размножения: многократный митоз сперматогоний.

Фаза роста:клетки утрачивают способность к митозу и увеличиваются в размере.
Теперь они называются сперматоциты I порядка, которые вступают в длительную
(около 3-х недель) профазу 1-го деления мейоза.

Этапы сперматогенеза

Зоны половой железы Этапы

1. Размножения Сперматогонии (2n4C)

2. Роста Сперматоциты I (2n4C)

3. Созревания - Мейоз I - Мейоз II   Сперматоциты II (1n2C) Сперматиды (1n1C)

4. Формирования Сперматозоиды

Фаза созревания:Включает два последовательных деления мейоза: в результате 1-го

(редукционного) деления из сперматоцитов I порядка образуются гаплоидные
сперматоциты II порядка (1n 2 хроматиды 2c). Они имеют меньшие размеры, чем
сперматоциты I порядка и располагаются ближе к просвету канальца. Второе деление
мейоза (эквационное) приводит к образованию четырех сперматид – сравнительно
мелких клеток с гаплоидным набором ДНК (1n 1 хроматида 1c).

Фаза формирования: Заключается в преобразовании сперматид в сперматозоиды.

Хроматин в ядре уплотняется, размеры ядра уменьшаются. Комплекс Гольджи
преобразуется в акросому, содержащую литические ферменты, необходимые для
расщепления оболочек яйцеклетки. Акросома прилежит к ядру и постепенно
распластывается над ним в виде шапочки. Центриоли перемещаются к
противоположному полюсу клетки. Из дистальной центриоли формируется жгутик,
который затем становится осевой нитью развивающегося сперматозоида. Избыток
цитоплазмы сбрасывается в просвет канальца и фагоцитируется клетками Сертоли.

Сперматогенез у человека осуществляется на протяжении всего периода половой

зрелости в извитых семенных канальцах. Развитие сперматозоида длится 72-75 суток.

Оогенез – совокупность последовательных процессов развития женской половой

клетки. Оогенез включает периоды размножения, роста и созревания (Табл. 13). В
период размножения путем митозов увеличивается число диплоидных половых
клеток – оогоний; после прекращения митозов и репликации ДНК в премейотической
интерфазе они вступают в профазу мейоза, совпадающую с периодом роста клеток,
называемых ооцитами I порядка. В начале периода роста (фаза медленного роста)
ооцит увеличивается незначительно, в его ядре происходят конъюгация
гомологичных хромосом и кроссинговер. В цитоплазме увеличивается количество
органоидов. Эта фаза у человека длится годами. В фазе быстрого роста объем
ооцитов увеличивается в сотни и более раз в основном за счет накопления рибосом и
желтка. В период созревания происходит 2 деления мейоза. В результате 1-го
деления образуется ооцит II порядка и редукционное тельце. К концу периода
созревания ооциты приобретают способность оплодотворяться, а дальнейшее
деление их ядер блокируется. Мейоз завершается в процессе оплодотворения
образованием одной яйцеклетки и выделением 3-х редукционных телец. Последние в
дальнейшем дегенерируют.

Этапы оогенеза

Зоны половой железы Этапы

1. Размножения Оогонии (2n4C)

2. Роста Ооцит I (2n4C)

3. Созревания - Мейоз I -   Ооциты II + полярное тельце (1n2C) Яйцеклетка + 3

Мейоз II полярных тельца (1n1C)

Фазы гаметогенеза

Отличия оогенеза от сперматогенеза:

1. Период размножения оогониев заканчивается к моменту рождения.

2. Период роста при оогенезе длиннее, чем при сперматогенезе и имеет период
медленного роста, когда происходит увеличение размеров ядра и цитоплазмы, и
период быстрого роста – накопление желточных включений.

3. При оогенезе из одного ооцита I образуется одна полноценная половая клетка,

при сперматогенезе из сперматоцита I – четыре.
 4. Фаза формирования характерна только для сперматогенеза. Формирование
яйцеклетки происходит в период оплодотворения.

У человека яйцеклетки и сперматозоиды развиваются из первичных половых

клеток, которые образуются во внезародышевой мезодерме. Первичные половые
клетки впоследствии мигрируют к месту своей окончательной локализации – в
бисексуальную гонаду. У многих животных участки цитоплазмы, ответственные за
выделение первичных половых клеток, отличаются пигментацией или гранулами.
Это половые детерминанты. Половая цитоплазма сосредотачивается на
вегетативном полюсе клетки.

Генная инженерия

Генная инженерия — это отрасль молекулярной биологии и генетики, целью

которой является получение с помощью лабораторных приемов организмов с новыми, не
встречающимися в природе, комбинациями генов. В основе генной инженерии лежит
возможность целенаправленного манипулирования с фрагментами нуклеиновых кислот.
Эти эксперименты стали возможными благодаря установлению универсальности
генетического кода и благодаря успехам генетической энзимологии, которая
предоставила набор ферментов, позволяющих получать в изолированном виде отдельные
гены или фрагменты нуклеиновой кислоты, осуществлять in vitro синтез фрагментов
нуклеиновых кислот и объединять их информации. Цель генной инженерии —
конструирование генетических структур по намеченному плану (создание организмов с
новой генетической программой, путем переноса генетической информации из одного
организма в другой).

Этапы методов генной инженерии

Схема опыта по генетической инженерии (в самых общих чертах). Вектором может быть не только
плазмида, но и вирус, но в этом случае на конечных этапах происходит 'трансдукция', а не
'трансформация'
Схема рестрикции ДНК (А) и образование рекомбинантной (химерной) ДНК (Б): 1. Рестриктазы
распознают определенные нуклеотидные последовательности ДНК и «разрезают» ее в местах,
обозначенных стрелками. 2. Фрагмент исходной ДНК с «липкими концами», готовыми к
комплементарному взаимодействию. 3. Фрагмент «чужой» ДНК, полученный также после
рестрикции тем же видом рестриктаз. 4. Рекомбинантная (химерная) ДНК, состоящая из «своих» и
«чужих» генов.
 I. Получение генетического материала: 1. Химико-ферментативный синтез
генов: in vitro синтезируют короткие (8–16) одноцепочечные фрагменты ДНК, которые
затем соединяют с помощью лигаз и отжигают (дают возможность образоваться
двухнитевым молекулам ДНК). Для этого метода ген должен быть секвенирован
(расшифрована нуклеотидная последовательность). К. Мюллис (1980) разработал метод,
который получил название полимеразной цепной реакции (ПЦР). Использование
методики ПЦР позволяет амплифицировать (размножать) ДНК или ее фрагмент in vitro,
увеличивая количество копий в миллионы раз за несколько часов. 2. Ферментативный
синтез сложных генов: выделяют и-РНК, и на ней, с помощью ревертазы синтезируют
нить ДНК, которую затем реплицируют. Гены, синтезированные с помощью ревертазы, не
имеют регуляторной части и промотора, поэтому не могут функционировать в клетках.
При переносе в бактерию, к структурным генам присоединяют промотор оперона,
вследствие чего, ген (транскриптон) начинает работать. 3. Выделение природных генов с
помощью рестриктаз: эти ферменты вызывают гидролиз ДНК с образованием «липких
либо тупых (ровных) концов». Они действуют на ДНК любых организмов, если в ней есть
распознаваемые сайты (строго специфичные для каждого фермента участки длиной в 4–6
пар нуклеотидов). Сейчас в генной инженерии существует более 500 рестриктаз,
способных разрезать ДНК примерно в 120 различных местах.

II. Анализ и использование фрагментов ДНК. При помощи ферментов рестрикции

можно получать фрагменты ДНК организмов любых видов, которые разделяют методам
электрофореза в агарозном геле. Затем они денатурируются до одноцепочечных молекул,
и весь электрофоретический спектр ДНК отпечатывается (blotting) за счет капиллярных
сил на приложенной к гелю нитроцеллюлозной мембране (пленке), после чего
фиксируется высокой температурой. Затем мембрана помещается в специальный буфер,
содержащий радиоактивно меченый ДНКовый зонд, который способен гибридизоваться с
определенным комплементарным фрагментом ДНК из всего электрофоретического
спектра полученных рестрикционных фрагментов ДНК. Затем к нитроцеллюлозной
мембране, содержащей все полученные фрагменты ДНК, прикладывают рентгеновскую
пленку. На пленке (авторадиограмме) после экспозиции выявляются засвеченные места,
соответствующие расположению меченых фракций ДНК. Это метод получил название
Саузерн-блот гибридизации в честь разработавшего его Э. Саузерна.

III. Включение генов в автономно реплицирующуюся векторную молекулу и создание

рекомбинантной ДНК. В качестве вектора используются: плазмиды, космиды, фазмиды
и др.

IV. Введение рекомбинантных ДНК в клетку-реципиент и включение ее в

хромосомный аппарат. Для этого используют следующие методы: конъюгация у
бактерий, трансдукция, трансформация, трансфекция и др.

V. Селекция клонов клеток, содержащих молекулы гибридной ДНК: отбирают

трансформированные клетки, в геном которых включен переносимый ген, а в дальнейшем
— клонируют (размножают клетки с рекомбинантной ДНК) и получают клон клеток с
заданными свойствами.
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ НАСЛЕДСТВЕННОСТИ
Строение молекул ДНК и РНК
ДНК – молекула наследственности, ген – отрезок молекулы ДНК. ДНК способна
самовоспроизводиться, передавать в поколениях клеток или организмов содержащуюся в
ней информацию. Данные способности обусловлены особенностями химической
структуры.Молекула нуклеиновой кислоты представляет собой полимер (полинуклеотид),
состоящий из последовательно соединенных друг с другом мономеров (нуклеотидов). В
свою очередь, каждый нуклеотид представляет собой соединение, в котором
присутствуют три различные молекулы: остаток фосфорной кислоты (фосфат), углевод
(пентоза) и азотистое основание (пуриновое либо пиримидиновое). Принципиальная
схема строения нуклеотида приводится на рис. 1.1.

Рис. 1.1. Два варианта схематического изображения строения нуклеотида: 1' 5'
атомы углерода в молекуле углеводорода (пентозы)

Следует отметить, что нуклеотиды молекул ДНК (дезоксирибонуклеотиды)

содержат углевод дезоксирибозу и одно из четырех азотистых оснований – аденин (А),
гуанин (Г), тимин (Т) и цитозин (Ц), первые два из которых являются производными
пурина, а два последних — производными пиримидина. В состав нуклеотидов РНК
(рибонуклеотидов) входит другая пентоза (рибоза) и также одно из четырех азотистых
оснований – аденин, гуанин, урацил (У) и цитозин (вместо тимина здесь включается
пиримидиновое основание урацил). Поскольку в составе молекулы пентозы имеется 5
атомов углерода, то каждый из них можно пронумеровать индексом от 1' до 5' (рис. 1.1). В
каждом нуклеотиде присоединение азотистого основания происходит к первому
углеродному атому (1') пентозы с помощью гликозидной связи. Соединение, состоящее
из углевода (пентозы) и азотистого основания, называется нуклеозидом (рис. 1.2).

Рис. 1.2. Строение нуклеозида

 Формирование линейной полинуклеотидной цепочки (первичной структуры
молекулы нуклеиновой кислоты) происходит при соединении пентозы одного нуклеотида
с фосфатом другого нуклеотида путем образования фосфодиэфирной связи (рис. 1.3).
При этом в зависимости от порядкового номера углеродного атома (3'либо 5') концевой
молекулы пентозы, участвующего в образовании фосфодиэфирной связи с фосфатом,
такая цепочка имеет маркированный 3'-конец и 5'-конец. Таким образом, нуклеотидные
цепи ДНК полярны. Последовательность нуклеотидных оснований принято записывать в
направлении от5'- к 3'-концу. Две нити ДНК антипараллельныдруг другу, так как идут
в противоположных направлениях 5'-концу одной цепи соответствует 3'-конец другой
цепи.

Рис. 1.3. Образование полинуклеотида

Рис. 1.4. Схематическое изображение первичной структуры фрагмента двух-

цепочечной молекулы ДНК: А - аденин; Г - гуанин; Т -тимин; Ц - цитозин

В 1953 г Уотсон и Крик опубликовали историческую статью о физической

структуре ДНК. Согласно модели молекула ДНК представляет собой двойную спираль.
ДНК человека – правозакрученная спираль (В-форма). Каждая спираль обвивается вокруг
другой спирали вдоль общей оси. состоит из двух полинуклеотидных цепочек (нитей,
тяжей), соединенных друг с другом с помощью поперечных водородных связей между
азотистыми основаниями по комплементарному принципу: аденин одной цепочки
соединен двумя водородными связями с тимином противоположной цепочки, а гуанин и
цитозин разных цепочек соединены друг с другом тремя водородными связями. Это
свойство нуклеотидов комплементарно спариваться обеспечивает основу для точного
воспроизведения последовательности нуклеотидов каждой цепи ДНК, или
конвариантной редупликации.
Правило Чаргафа: в любой молекуле ДНК количество пуринов соответствует
количеству пиримидинов (А = Т и Г = Ц).
 Рис. 1.5. Модель вторичной структуры ДНК Уотсона Крика

Молекулы РНК в зависимости от их структурно-функциональных особенностей

подразделяют на несколько типов: информационные (матричные) РНК (иРНК, или мРНК),
рибосомные РНК (рРНК), транспортные РНК (тРНК), малые ядерные РНК (мяРНК) и др.
В отличие от ДНК молекулы РНК всегда являются одноцепочечными (однонитевыми).
Однако они могут формировать более сложные (вторичные) конфигурации за счет
комплементарного соединения отдельных участков такой цепочки на основе
взаимодействия комплементарных азотистых оснований (А–У и Г–Ц). В качестве примера
можно рассмотреть такую конфигурацию, имеющую форму «листа клевера», для
молекулы фенилаланиновой транспортной РНК.

СОХРАНЕНИЕ ИНФОРМАЦИИ ОТ ПОКОЛЕНИЯ К ПОКОЛЕНИЮ.

Репликация ДНК– воспроизведение нити ДНК в соответствии с принципами

комплиментарности.
Специальный фермент разрывает слабые водородные связи, которые соединяют
между собой нуклеотиды двух цепей. В результате цепи ДНК разъединяются, и из каждой
цепи «торчат» свободные азотистые основания (возникновение так называемой вилки
репликации). Особый фермент ДНК-полимераза начинает двигаться вдоль свободной
цепи ДНК от 5’ к 3’ – концу (лидирующая цепь), помогая присоединиться свободным
нуклеотидам, постоянно синтезируемым в клетке, к 3’-концу вновь синтезируемой цепи
ДНК. На второй нити ДНК (отстающая нить) новая ДНК образуется в виде небольших
сегментов, состоящих из 1000-2000 нуклеотидов (фрагменты Оказаки). Для начала
репликации фрагментов этой нити требуется синтез коротких фрагментов РНК как
затравок, для чего используется особый фермент – РНК-полимераза (праймаза).
Впоследствии праймеры РНК удаляются, в образовавшиеся бреши встраивается ДНК с
помощью ДНК полимеразы І. Образованные соседние фрагменты ДНК соединяются ДНК-
лигазой.
Таким образом, каждая цепь ДНК используется как матрица или шаблон для
построения комплементарной цепи, и репликация ДНК является полуконсервативной (т.е.
одна нить в новой молекуле ДНК – «старая», а вторая – «новая»).
Для репликации лидирующей и отстающей цепей клеткой используют разные
ферменты. В результате репликации образуются две новые абсолютно идентичные
молекулы ДНК, идентичные также исходной молекуле ДНК до начала её редупликации.
 Феномен точного удвоения молекулы ДНК, в основе которого лежит
комплементарность оснований этой молекулы, составляет молекулярную основу
наследственности.
В молекуле ДНК любой хромосомы имеется множество мест инициации
репликации (репликонов). От каждого репликона репликация идёт в обоих направлениях
до тех пор, пока соседние репликоны не сливаются. Поэтому репликация ДНК в каждой
хромосоме протекает относительно быстро.

Генетический код
Последовательность нуклеотидов ДНК является кодом для построения всех белков
организма (+разных типов РНК).
Свойства генетического кода:
1. Триплетность — значащей единицей кода является сочетание трёх
нуклеотидов (триплет, иликодон).Каждая аминокислота кодируется тройкой
нуклеотидов.При триплетном коде, количество комбинаций нуклеотидов
составляет 64, что достаточно для построения 20 аминокислот, которые
входят в состав белков.
2. Вырожденность (избыточность) — одной и той же аминокислоте может
соответствовать несколько кодонов.
3. Непрерывность — между триплетами нет «знаков препинания», то есть
информация считывается непрерывно.
4. Неперекрываемость — один и тот женуклеотидне может входить
одновременно в состав двух или более триплетов.Каждую последовательную
новую аминокислоту полипептидной цепи кодирует последовательно новый
триплет ДНК.
5. Однозначность (специфичность) — определённый кодон соответствует
только одной аминокислоте.
 6. Универсальность — генетический код работает одинаково в организмах
разного уровня сложности — отвирусовдочеловека.
7. Помехоустойчивость —мутациизамен нуклеотидов, не приводящие к смене
класса кодируемой аминокислоты, называютконсервативными; мутации замен
нуклеотидов, приводящие к смене класса кодируемой аминокислоты,
называютрадикальными.
8. Однонаправленность- считывание кода всегда происходит в одном
направлении — от 5′- к 3′-концу.
В таблице представлены триплетные коды ДНК и иРНК. Все аминокислоты,
кроме триптофана и метионина, кодируются более чем одним кодоном. Наиболее
важны первые два нуклеотида каждого кодона. Третий нуклеотид неспецифичен.
Три кодона определяют сигнал прекращения синтеза полипептидной цепи
(терминация трансляции): УАА, УАГ и УГА.Это означает, что в том месте иРНК
(мРНК), где находится любой из этих кодонов, синтез полипептидной цепи белка
прекращается. Кодоны, указывающие на терминацию синтеза полипептидной цепи,
называют стоп-кодонами.

ГЕНЫ И ИХ СТРУКТУРА

Тонкая структура гена

Согласно современным представлениям, ген- это участок молекулы геномной ДНК,
состоящий из набора нуклеотидов, представляющий собой единицу функции, отличной от
функции других генов и способный измениться путем мутирования.
Экзон-интронная организация гена. Гены человека представляют собой
чередование смысловых, кодирующих полипептидную цепь, которые называются
экзонами, и не кодирующих интронов и фланкирующих последовательностей,
расположенных до и после кодирующей части. Межгенные участки ДНК называются
спейсерами, которые состоят из повторяющихся последовательностей ДНК различных
типов и нетранскрибируемых последовательностей, не являющиеся генами. Их функции
не известны. Первоначально образовавшаяся путем транскрипции РНК содержит копии
экзонов и интронов. Затем из этой РНК удаляются участки интронов, происходит
сплайсинг - вырезание. Экзоны связываются между собой и возникает матричная РНК,
которая направляется в цитоплазму для соединения с рибосомой. Размеры мРНК в
несколько десятков раз меньше образовавшейся путем транскрипции первичной РНК. На
границы экзонов и интронов располагается консенсусная, то есть эволюционно
консервативная последовательность, которая распознаётся ферментами сплайсинга, то
есть ферментами для вырезания интронов из первичного транскриптамРНК. На 3’-конеце
гена уже в некодирующей части расположен сайт, обеспечивающий добавление 100-200
остатков аденина к мРНК для обеспечения её стабильности. Для гена характерна так
называемая открытая рамка считывания, то есть наличае последовательности триплетов,
кодирующих аминокислоты, не перебиваемые стоп-кодонами или бессмысленными
триплетами.Молекула ДНК может содержать множество генов. По современным оценкам,
у человека имеется около 30-40 тыс.генов. Принято считать, что средний размер генов
составляет около 30000 пар оснований. Но величина конкретного гена может сильно
отличаться от этого показателя. Самый маленький из известных генов у человека
содержит 21 пару оснований, а самый большой – 2 200 000 пар оснований. Гены отделены
друг от друга фрагментами ДНК, содержащими нетранскрибируемые повторяющиеся
последовательности нуклеотидов.
В настоящее время продолжается изучение генов у человека, общее количество
которых предположительно равно 32000. Уже исследованы гены практически всех частых
наследственных заболеваний и около 200 разных патологических состояний.
Выделяют основные группы генов.
1.РНК-кодирующие гены, которые кодируют образование тРНК, рРНК,процессы
сплайсинга и регуляторные РНК, влияющие на функции других генов.
2. Геномные гены, которые кодируют белки. Они в свою очередь делятся на а)
гены, обеспечивающие жизнедеятельность клетки; б) гены терминальной
дифференцировки, определяющие специфические свойства клеток в определенных
тканях, кодирующие белки. Они характерны для зрелых, активных клеток ( гемоглобин
эритроцитов); в) гены, обеспечивающие образование белков, способных регулировать
работу других генов.
3. Митохондриальные гены.
Данные о механизмах, регулирующих активность генов в клетке были впревые
получены в 1961 году Ф.Жакобом и Ж.Моно. Они предложили механизм «включения « и
«выключения» генов.
Активность всех генов регулируется геном-регулятором, который препятствует
преходу структурных генов в активное состояние. Этот ген содержит генетическую
информацию для синтеза репрессора, который препятствует активности структурных
генов, оказывая влияние на участок, примыкающий к структурным генам, называется
оператором. Рядом с оператором располагается промотор, действующий между ним и
геном-регулятором, контролируя правильность взаимодействия фермента РНК-
полимеразы с ДНК. Иногда промотор контролирует транскрипцию нескольких генов.
Работу генов контролируют еще участки молекулы ДНК, которые могут существенно
влиять на образование РНК. Так, на расстоянии до 1000 пар нуклеотидных оснований от
начала гена обычно обнаруживаются последовательности, способные значительно
ускорять процесс транскрипции – энхансеры. Для некоторых генов идентифицированы
участки ДНК, подавляющие транскрипцию – аттенюаторы, которые препятствуют
продвижению РНК-полимеразы.
 Иногда гены образуют группы, которые получили название мультигенных
семейств. Мультигенные семейства делятся на два основных типа. Первый тип – это
классические семейства генов, когда гены в семействе обнаруживают высокую степень
сходства в структуре, то есть в последовательности нуклеотидов. Примером такого рода
семейств являются различные рРНК, которые собраны в тандемные последовательности в
ядрышковых организаторах акроцентрических хромосом, семейства генов тРНК,
разбросанных по геному, пучки генов α- β- глобинов, кератинов и кристаллинов
хрусталика. При втором типе, так называемом суперсемействе генов, гены
обнаруживают не очень высокую гомологию в последовательностях нуклеотидов, но
связаны между собой функционально. Наиболее яркими примерами этого типа
мультигенных семейств являются гены комплекса гистосовместимости(HLA) и гены
иммуноглобулинов.
Необходимо также упомянуть о псевдогенах - по своей нуклеотидной
последовательности похожи на структурные гены, но, как правило, не функциональны из-
за разнообразных мутаций, накопленных такими генами.

Рис. Организация гена у эукариот.

Описанная структура гена составляет менее 2% всего генома. Остальная часть

генома представлена последовательностями ДНК, не кодирующими белки. Около 73%
составляют так называемые однокопийные ДНК – представлены в геноме однажды или
несколько раз, состоят в основном из ДНК-последовательностей интронов и
последовательностей, расположенных между генами. Оставшиеся 25% генома – это
повторяющиеся последовательности, которые встречаются в геноме сотни или тысячи раз.
В настоящее время установлено, что гены контролируют происходящие в клетке
процессы путем синтеза ферментов и других белков. Эти ферменты в свою очередь,
определяют синтез прочих веществ клетки. Бензер в 1955 г. создал концепцию цистрона,
как единицы функции. Цистрон – это участок ДНК, несущий информацию, необходимую
для синтеза одной полипептидной цепи, которая может функционировать самостоятельно
или быть частью макромолекулы. В настоящее время концепция «один ген – один
признак» сменила концепция «один цистрон - один полипептид».

РЕАЛИЗАЦИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ

Биосинтез белка

Информационная РНК и процесс транскрипции

 Для того, чтобы произошло списывание последовательности нуклеотидов гена,
кодирующих первичную структуру определённой полипептидной цепи белка на м РНК к
цепи ДНК на некотором расстоянии от гена, к специальной последовательности
нуклеотидов, называемых промотором. (промотор и прилегающие к нему участки
являются последовательностями нуклеотидов ДНК, которые выполняют очень важную
функцию – они должны распознаваться белками, имеющими отношение к транскрипции
РНК и контролю за этим процессом; промотор генов у эукариот обычно включает
ТАТА-бокс, ГЦ или ГГГЦГГГ конценсусную (т.е. эволюционно консервативную)
последовательность и ЦЦААТ или ЦАТ-бокс – короткие последовательности
нуклеотидов, которые распознаются РНК-полимеразой.), присоединяется РНК-
полимераза. Этот фермент разрывает фосфорные связи между нуклеотидами ДНК
доступными для считывания. Присоединению РНК-полимеразы к промоторной области
генов способствуют так называемые общие и специфические транскриптационные
факторы (к ним относят энхансеры, которые значительно ускоряют процесс
транскрипции. Для того, чтобы энхансеры могли осуществить свою функцию, они
должны связаться со специфическими транскриптационными факторами, которые
называются активаторы. Активаторы в свою очередь связываются с коактиваторами,
также специфическими, т.е. разными для разных генов. Наконец образовавшийся
комплекс связывается с неспецифическими транскрипционными факторами с самим
геном. Параллельно энхансерам, усиливающим транскрипцию, в геноме существуют
последовательности ДНК, ослабляющие её (сайленсеры). Эти последовательности
также связываются с комплексом специфических и неспецифических транскрипционных
факторов и геном, снижая транскрипционные возможности последних), которые, как и
РНК-полимераза, являются продуктами других генов. В транскрипции могут участвовать
и другие белки, так что в целом процесс транскрипции является достаточно сложным и
зависящим от действия многих генов. Белки, участвующие в транскрипции, в своей
структуре содержат так называемые мотивы, обеспечивающие их связь с ДНК.
Принципиально обе нити ДНК могут считываться, но обычно считывается только одна, и
это зависит от последовательности нуклеотидов промотора. РНК-полимераза движется от
3’- к 5’-концу вдоль соответствующей нити ДНК, способствуя комплементарному
присоединению нуклеотидов синтезируемой молекулы мРНК к цепи ДНК в направлении
от 5’- к 3’- концу. Стартовой точкой транскрипции служит основание ДНК,
соответствующее основанию РНК, которое первым включается в транскрипт.
Транскрипция мРНК продолжается до тех пор, пока РНК-полимеразе II не встретится
сигнал терминации транскрипции. Первичный транскриптмРНК расщепляется
специфической эндонуклеазой сразу за последовательностью нуклеотидов ААУАА и к 3’
– концу МРНК пришивается с помощью поли-А-полимеразы хвост из 100-200 остатков
аденина, которые, по-видимому, защищают мРНК от деградации во время её продвижения
из ядра в цитоплазму. Кроме того, вскоре после начала синтеза мРНК её 5’- конец
«кэпируется», т.е. к нему присоединяется модифицированный нуклеотид – 5-
метилцитозин. Кэппирование происходит в месте начала транскрипции. Обычно
транскрипция продолжается, и мРНК удлиняется ещё на несколько тысяч пар
нуклеотидов, комплиментарных ДНК, после чего молекула мРНК отъединяется от
матрицы ДНК и РНК-полимеразы. Прежде чем такая мРНК попадет в цитоплазму, она
должна созреть. Созревание, или процессинг, заключается в том, что из первичного
транскриптамРНК вырезаются (сплайсируются) специальным ферментами участки гена,
транскрибированные в мРНК, которые содержат обычно (но не всегда) некодирующие
последовательности. Эти некодирующие участки имеются практически во всех генах
высших организмов и называются интронами. От молекулы мРНК отрезаются также
последовательности нуклеотидов за поли-А-хвостом. Кодирующие участки гена
называются экзонами. Экзоны гена, представленные в мРНК, соединяются с помощью
специальных ферментов вместе, образуя функционально зрелую мРНК. Именно
последовательность кодонов мРНК кодирует последовательность аминокислот в белке,
который будет создаваться на её основе. Зрелая мРНК перемещается в цитоплазму.

Биосинтез полипептидной цепи

В полипептидной цепи происходят расшифровка информации, закодированной с
помощью генетического кода, и построение на матрице мРНК полипептидной цепи
определённого белка. В этом процессе участвуют ещё два вида РНК – рибосомальная
(рРНК) и транспортная (тРНК). Для обоих видов РНК в геноме имеются многочисленные
гены, на матрице которых эти РНК синтезируются. Принципиально транскрипция для
рРНК и тРНК ничем не отличается от только что описанной транскрипции мРНК. В то же
время рРНК и тРНК являются конечными продуктами. Таким образом, в геноме, кроме
генов, контролирующих синтез всех белков организма, существуют гены, кодирующие
тРНК, рРНК и ряд других типов РНК; тРНК обеспечивает связь между кодонами мРНК и
аминокислотами будущей полипептидной цепи. Для каждой из 20 аминокислот
существует не менее одной тРНК. Различные тРНК отличаются по нуклеотидной
последовательности и по содержанию некоторых редких нуклеотидов, которые возникают
с помощью особой посттранскрипционной модификации молекулы тРНК. Все виды тРНК
содержат около 80 нуклеотидов и на двухмерной изображении имеют форму клеверного
листа. К 3’- концу тРНКковалентно присоединяется её аминокислота. Внутренняя петля
содержит 7 неспаренных оснований и антикодон – тройку нуклеотидов, комплементарных
кодону мРНК. Комплементарность антикодона тРНК кодону мРНК является тем
специфическим механизмом, который обеспечивает строгую реализацию
последовательности кодонов мРНК и соответствующего гена, в последовательность
аминокислот кодируемой им полипептидной цепи. Связывание аминокислоты с
соответствующей тРНК обеспечивается особым ферментом, который называют
аминоацил-тРНК-синтетазой. Для каждой аминокислоты имеется особая форма этого
фермента. Фермент узнаёт свою аминокислоту и свою тРНК и ковалентно связывает их
между собой. В результате образуется комплекс, который называют аминоацил-тРНК.
Аминоацил-тРНК-синтетаза обеспечивает также контроль за правильностью соединения
тРНК со своей аминокислотой и способна исправить ошибку в случае её возникновения.

Образование полипептидной цепи из последовательно доставляемых к мРНКтРНК

с соответствующими аминокислотами происходит на рибосомах. Рибосомы представляют
собой нуклеопротеидные структуры, в которые входят три вида рРНК и более 50
специфических рибосомных белков. Рибосомы состоят из малой и большой субъединиц.
Инициация синтеза полипептидной цепи начинается с присоединения малой субъединицы
рибосомы к центру связывания на мРНК и всегда происходит при участии
метиониновойтРНК особого типа, которая связывается с метиониновым кодоном АУГ и
прикрепляется к так называемому Р-участку большой субъединицы рибосомы.
Следующий кодон мРНК, расположенный вслед за АУГ-инициирующим кодоном,
попадает в А-учаток большой субъединицы рибосомы, где он «подставляется» для
взаимодействия с аманоацил-тРНК, имеющей соответствуюий антикодон. После того, как
подходящая тРНК связалась с кодоном мРНК, находящимся в А-участке, происходит
образование пептидной связи с помощью пептидилтрансферазы, входящей в состав
большой субъединицы рибосомы, и аминоацил-тРНК превращается в пептидил-тРНК. Это
заставляет рибосому продвинуться на один кодон, переместить образованную пептидил-
тРНК в Р-участок и освободить А-участок, который занимает следующий по порядку
кодон мРНК, готовый к соединению с аминоацил-тРНК, имеющий подходящий
антикодон. Происходит рост полипептидной цепи за счёт многократного повторения
описанного процесса. Рибосома движется вдоль мРНК, высвобождая её инициирующий
участок. На инициирующем участке происходит сборка следующего активного
рибосомного комплекса и начинается синтез новой полипептидной цепи. Таким образом к
одной молекуле мРНК может присоединиться несколько активных рибосом с
образованием полисомы. Синтез полипептида продолжается до тех пор, пока в А-участке
не окажется один из трёх стоп-кодонов. Стоп-кодон распознаётся специализированным
белком терминации, который прекращает синтез и способствует отделению
полипептидной цепи от рибосомы и от мРНК. Рибосома и мРНК также разъединяются и
готовы начать новый синтез полипептидной цепи.
Посттрансляционная модификация полипептидапредставляет собой
завершающий этап реализации генетической информации в клетке, приводящий к
превращению синтезированного полипептида в функционально активную молекулу белка.
При этом первичный полипептид может претерпевать процессинг, состоящий в
ферментативном удалении инициирующих аминокислот, отщеплении других (ненужных)
аминокислотных остатков и в химической модификации отдельных аминокислот. Затем
происходит процесс сворачивания линейной структуры полипептида за счет образования
дополнительных связей между отдельными аминокислотами и формирование вторичной
структуры белковой молекулы (рис. 1.20). На этой основе формируется еще более
сложная третичная структура молекулы.
В случае белковых молекул, состоящих более чем из одного полипептида,
происходит образование комплексной четвертичной структуры, в которой объединяются
третичные структуры отдельных полипептидов. В качестве примера можно рассмотреть
модель молекулы гемоглобина человека (рис. 1.21), состоящей из двух α-цепочек и двух
β-цепочек, которые формируют стабильную тетрамерную структуру с помощью
водородных связей. Каждая из глобиновых цепочек содержит также молекулу гема,
который в комплексе с железом способен связывать молекулы кислорода, обеспечивая их
транспортировку эритроцитами крови.