Вы находитесь на странице: 1из 302

Экзаменационные вопросы

по микробиологии для студентов 3 курса лечебного и


педиатрического факультета
1. Общие ультраструктурные признаки представителей царства эукариот и
прокариот.
Микроорганизмы — многочисленная и разнообразная группа самых мелких живых
существ планеты, занимающих низшие ступени эволюции. Микроорганизмы
относятся к трем типам организации живого:

 доклеточные формы: вирусы, плазмиды, прионы;

 прокариоты: сине-зеленые водоросли, архебактерии, эубактерии, спирохеты,


актиномицеты, риккетсии, хламидии, микоплазмы;

 эукариоты: микроскопические животные (в т. ч. простейшие), растения,


грибы.

Общие черты микроорганизмов

1. Состоят из тех же элементов, что и другие организмы.

2. Имеют в структуре те же соединения (белки, липиды, углеводы, нуклеиновые


кислоты).

3. Имеют те же механизмы обеспечения энергией и биохимические процессы.

4. Малые размеры. 

5. Относительная простота строения.

6. Высокие темпы размножения (в большинстве случаев — одна генерация до


20 минут).

7. Высокая скорость адаптации к среде:

а) синтез индуцибельных ферментов. 

б) быстрое формирование устойчивости к антибиотикам.

8.Активность и пластичность метаболизма. Большое отношение


поверхности к объему приводит к интенсивному взаимодействию с внешней средой;
с этим связан очень быстрый обмен веществами между средой и клеткой многих
микроорганизмов.

8. Генетическое разнообразие, выработанные эволюцией сложные,


совершенные и высокие темпы изменчивости, быстрое формирование
лекарственной устойчивости.

9. Клетки бактерий имеют более простое строение, чем клетки других


организмов, т.к. бактерии – это прокариоты.  У бактерий нет митохондрий,
эндоплазматического ретикулума, комплекса Гольджи, лизосом, пероксисом и
пр.
\\
2. Грибы. Особенности морфологии, виды спорообразования. Принципы
классификации. Способы микроскопического изучения.

Морфология грибов
1)Более крупных размеров
2)эукариоты
3)размножаются спорами
4) кл.ст. состоит из целлюлозоподобных и хитиноподобных веществ.
5)Гр+
6) вегетативные клетки — некислотоустойчивые

Различают гифальные и дрожжевые формы грибов. Многие виды проявляют


диморфизм
Гифальные (плесневые) грибы образуют ветвящиеся тонкие нити (гифы),
сплетающиеся в грибницу, или мицелий (плесень). Гифы, врастающие в
питательный субстрат, называются вегетативными гифами (отвечают за питание
гриба), а растущие над поверхностью субстрата — воздушными или репродуктив-
ными гифами (отвечают за бесполое размножение).
Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представлены многоядерными
клетками и называются ценоцитными.
Гифы высших грибов разделены перегородками, или септами с отверстиями.
Дрожжевые грибы (дрожжи), в основном, имеют вид отдельных овальных клеток
(одноклеточные грибы). По типу полового размножения они распределены среди
высших грибов — аскомицет и базидиомицет. При бесполом размножении дрожжи
образуют почки или делятся, что приводит к одноклеточному росту. Могут
образовывать псевдогифы и ложный мицелий (псевдомицелий) в виде цепочек
удлиненных клеток — «сарделек». Грибы, аналогичные дрожжам, но не имеющие
полового способа размножения, называют дрожжеподобными. Они размножаются
только бесполым способом — почкованием или делением. 
Размножение грибов происходит двумя способами: вегетативным и
репродуктивным. К последнему относится бесполое и половое размножение.
Грибы, размножающиеся половым и бесполым путем, относятся к совершенным.
Несовершенными называют грибы, у которых отсутствует или еще не описан
половой путь размножения. Бесполое размножение осуществляется у грибов с
помощью эндогенных спор, созревающих внутри круглой структуры — спорангия,
и экзогенных спор — конидий, формирующихся на кончиках плодоносящих гиф.

Виды спорообразования
1)Вегетативные –образование на любом участке мицелия – отшнуровка, обычных
гиф путем их септирования(бластоспоры, артроспоры, хламидоспоры)
2)Бесполый способ – споры на мицелии образуются при помощи плодоносящих
гифов(конидиев и спорангиев) – макроконидии, конидиоспорты, спорангиоспоры.
Выделяют эндо- и экзоспоры(конидии – образуются на концевых участках особых
гиф – конидиеносцы, которые могут быть простыми или разветвленными. У
аспергиллов кониединосец на конце имеет округлое вздутие, на поверхности
которого сплошным слоем расположены клетки в один или два ряда – стеригмы).
3) Половой способ(зигоспоры – рузультат слияния гифов, аскоспоры – в сумках
образуются споры)

Принципы классификации
1)По структуре (одноклеточные, многоклеточные)
2)По содержанию ядер(многоядерные, одноядерные)
3)По строению (мицелиальные, псевдомицелиальные, дрожжевые)
4) По способу размножения(совершенные – способны к половому размножению,
несовершенные – не способны к половому размножению)
5)По септированию (высшие, низшие)

Способы микроскопического изучения

При микозах в лабораторию направляют соскобы с кожи с захватом волос на


границе со здоровой тканью, соскобы со слизистых оболочек ротовой полости,
молоко, трупы птиц и мелких животных и др.

1)Исследуют нативные и окрашенные препараты

2)Окрашивают по Граму, по Цилю-Нильсену, окраска PAS-


методом(прокариоты PAS-отрицательны)

3) Нативные препараты изучают в затемненном поле зрения, фазово-


контрастной микроскопией и темнопольной

4)Для микроскопического исследования на дерматоксикозы патологический


материал предварительно обрабатывают раствором щелочи(чтобы убрать
кератин)

5) Для выделения чистой культуры микроскопических грибов проводят


посевы на специальные питательные среды: сусло-агар(неохмеленное пивное
сусло и 2 % агар-агара), Сабуро(глюкоза, пептон и агар-агар), Чапека(глюкоза,
набор минеральных солей и агар-агар) и др.
При определении рода и вида грибов изучаются их морфологические особенности в
динамике на питательных средах при соответствующих условиях. С этой целью
колонии грибов, выросших на средах, микроскопируют под стереоскопическим или
обычным микроскопом с объективом х8. Далее готовят препараты «раздавленная
капля». Для этого препаровальными иглами или микологическим крючком отделяют
небольшой участок мицелия с плодоносящими гифами и прилегающим к нему
слоем питательной среды, переносят на предметное стекло в каплю 50%-ного
водного раствора глицерина и придавливают покровным стеклом. Такие
неокрашенные препараты микроскопируют как обычно.

Для выявления дрожжей и дрожжеподобных организмов готовят препараты для


микроскопии, фиксируют физическим или химическим методами, окрашивают
раствором метиленовой сини и микроскопируют.

3. Простейшие. Особенности морфологии и жизненного цикла. Принципы


классификации. Способы микроскопического изучения.

Особенности морфологии
1) Размеры от 5 до 30 мкм. 
2) Покрыты плотной эластичной мембраной
— пелликулой, образуемой периферическим слоем цитоплазмы
3)  К ней прилегает внешний более плотный и гомогенный слой цитоплазмы
эктоплазма. 
4)эукариоты
5)одно или несколько ядер
6)имеют органоиды передвижения
7)образуют цисты – как способ защиты от неблагоприятных факторов окружающей
среды(особенность, в отличие от спор – циста – это целая клетка, покрытая
защитной оболочкой)
8) Для проникновения в клетку хозяина у простейших имеются специальные
приспособления, например у токсоплазм – сложный комплекс органелл – коноид с
фибриллами, трихомонады и лямблии имеют специальные присоски.
9) Органоиды пищеварения
10) Большинство простейших - одноклеточные, реже колониальные организмы. 
Особенности жизнедеятельности простейших
Подавляющее большинство простейших — гетеротрофы. Непереваренные остатки
удаляются через порошицу (специальное, постоянно существующее отверстие (у
инфузорий)) или через любое место клетки (у амебы). Через сократительные
вакуоли осуществляется осмотическая регуляция, удаляются продукты обмена.
Дыхание, т. е. газообмен, происходит через всю поверхность клетки.
Раздражимость представлена таксисами (двигательными реакциями).
Размножение простейших
Бесполое — митозом ядра и делением клетки надвое (у амебы, эвглены, инфузории),
а также путем шизогонии — многократного деления (у споровиков).
Половое — копуляция. Клетка простейшего становится функциональной гаметой; в
результате слияния гамет образуется зигота.
Для инфузорий характерен половой процесс — конъюгация. Он заключается в том,
что клетки обмениваются генетической информацией, но увеличения числа особей
не происходит.
Многие простейшие способны существовать в двух формах
— трофозоита (вегетативной формы, способной к активному питанию и
передвижению) и цисты. При этом клетка обездвиживается, обезвоживается,
покрывается плотной оболочкой, обмен веществ резко замедляется. В такой форме
простейшие легко переносятся на большие расстояния животными, ветром и
расселяются. При попадании в благоприятные условия обитания происходит
эксцистирование, клетка начинает функционировать в состоянии трофозоита. Таким
образом, инцистирование не является способом размножения, но помогает клетке
переживать неблагоприятные условия среды.

Особенности жизненного цикла


Жизненный цикл заключается в закономерном чередовании жизненных форм. Как
правило, происходит смена поколений с бесполым и половым размножением.
Образование цисты не является частью закономерного жизненного цикла.
Время генерации для простейших составляет 6—24 ч. Это означает, что, попав в
организм хозяина, клетки начинают размножаться по экспоненте и теоретически
могут привести его к гибели. Однако этого не происходит, так как вступают в силу
защитные механизмы организма хозяина.
1)Смена одного хозяина другим
2)Наличие пропагативных стадий – во время которых происходит приспособление к
осуществлению перехода от одного хозяина к другому
3) Заражение может происходить цистами или измененными формами
простейших(личинки и тд)
4) Наличие организмов-переносчиков(промежуточных хозяев)
5) Наличие основных хозяев(где осуществляется половое размножение паразитов)
6) Инвазионные стадии – подготовление к внедрению в тело окончательного
хозяина
7) Развиие прямого(без замены хозяев) и непрямого типа
8) В жизненном цикле простейших наблюдается качественная перестройка их
организации, что обеспечивает им высокую выживаемость в разнообразных
условиях
9) Дефинитивный хозяин – в котором паразит развивается для дальнейшего
полового развития
Резервуарный хозяин – в котором паразит прибывает длительное время(нет
ущерба хозяину)
Переносчик – хозяин, осуществляющий перенос паразита и заражение других
организмов

Принципы классификации
Основной принцип классификации – вид органоида передвижения

Простейшие включены в царство Animalia, подцарство Protozoa, разделённое на 7


типов. Виды, патогенные для человека, входят в состав трёх типов —
Sarcomastigophora, Apicomplexa и Ciliophora.

Тип Sarcomastigophora включает подтипы Sarcodina и Mastigophora.

Подтип Sarcodina
1) ложноножки-псевдоподии.
2)Размножаются делением
3) способны образовывать цисты
4)патогенные виды, поражающие кишечник (Entamoeba histolytica) и органы ЦНС
(Naegleriafowleri и виды Acanihamoeba).

Подтип Mastigophora Характерная особенность


1) жгутики. Принципиальное отличие жгутиков простейших от жгутиков бактерий
заключается в наличии кинетопласта — особой органеллы, расположенной у
основания жгутика и вырабатывающей энергию для его движения. У некоторых
видов движение обеспечивает ундулирующая мембрана — тонкая гребнеобразная
перепонка, продольно соединяющая жгутик с телом простейшего.
2) патогенные виды входят в состав родов — Trichomonas, Giardia, Leishmania и
Trypanosoma.

Тип Ciliophora
1) реснички
2)размножаются путём деления, способны к конъюгации.
3) образуют цисты
4) патогенное значение имеет Balantidium coli

Тип Apicomplexa
1) только паразитические виды
2) исключительно половой путь развития или чередование полового и бесполого
поколений, обычно связанное с переменой хозяев.
3) Своим названием обязаны способности образовывать скопления клеток,
защищенные общей плотной оболочкой.

Способы микроскопического изучения


Для выявления простейших используется микроскопия нативных и окрашенных
препаратов из исследуемого материала с применением иммерсионного, фазово-
контрастного или люминесцентного микроскопов. Для изучения ультраструктуры
используется электронная микроскопия.

Для идентификации с помощью световой микроскопии простейших красят по


методу Романовского-Гимзы или Райта (цитоплазма окрашивается в синий, ядро – в
красный цвет).

4. Актиномицеты. Особенности морфологии и ультраструктуры. Сходство с


грибами и отличия от грибов. Способы микроскопического изучения.

Особенности морфологии и ультраструктуры

Клетки актиномицетов имеют те же структурные элементы, что и бактерии:


клеточную стенку, ЦПМ; в цитоплазме содержатся нуклеоид, рибосомы, мезосомы,
внутриклеточные включения. Некоторые актиномицеты образуют микрокапсулу.
 В организме больных актиномикозом людей и животных патогенные актиномицеты
образуют своеобразные скопления измененного мицелия — друзы.

Семейство Actinomycetaceae. Нитевидные клетки актиномицетов часто распадаются


на отдельные фрагменты, напоминающие бациллы. Размножаются они путем
фрагментации нитей, спор не образуют. Большинство актиномицетов — сапрофиты,
живущие за счет разложения органических веществ в почве. Нокардии могут
вызывать сходные с туберкулезом заболевания человека и животных — нокардиозы,
а актиномицеты — актиномикозы.

Семейство Streptomycetaceae. Имеют наибольшее сходство с грибами. Образуют


длинный разветвленный воздушный мицелий, состоящий из тонких
нефрагментированных нитей. Размножаются спорами-конидиями, которые
образуются на вершине отдельных нитей-конидиофоров. Конидии менее
термоустойчивы, чем споры бактерий, и гибнут при  65°С через 10 - 30 мин.
Большинство стрептомицетов играет активную роль в разложении разнообразных
органических остатков в почве. Представители стрептомицетов являются
продуцентами антибиотика стрептомицина. Некоторые из них вызывают
заболевания животных и сельскохозяйственных растений.

Семейство Mycobacterium. В патологии человека наиболее важную роль играют


микроорганизмы рода Mycobacterium. Микобактерии могут образовывать
слабоветвящийся короткий мицелий, склонный к распаду на отдельные фрагменты.
Чаще микобактерии имеют вид палочек, поэтому их относят к истинным бактериям.
Размножаются они поперечным делением. Среди микобактерий имеются
возбудители очень тяжелых заболеваний человека: туберкулеза и лепры (проказа).

Сходство с грибами

1)Гр+
2)имеют ветвящуюся структуру(образуют видимый, не имеющий перегородок
мицелий)
3)размножаются обрывками мицелия или спорами – образуют конидии(образование
спор – сходство с бактериями, но не по функции)

Отличия от грибов
1)ядро типа нуклеоида(прокариот, как и бактерии)
2)Не содержат в клеточной стенке хитина, стенка имеет строение
грамположительных бактерий
3) Резистентны к противогрибковым средствам.
4) Мицелий примитивен

Способы микроскопического изучения

Морфологию актиномицетов изучают в окрашенных мазках и при помощи фазово-


контрастной микроскопии, а также методом электронной микроскопии.
Окрашиваются простыми методами или по методу Грама.
Для культивирования актиномицетов используют различные питательные среды,
как плотные, так и жидкие: среду Сабуро(пептон, глюкоза, агар-агар), мозговые
среды, жидкое пивное сусло и др

5. Спирохеты. Особенности морфологии и ультраструктуры. Принципы


классификации. Способы микроскопического изучения.

Особенности морфологии и ультраструктуры.


1)тонкие, длинные, спиралевидные
2)Гр-
3)Очень подвижны: активное движение вращательное, изгибательное,
поступательное
4)Имеется осевая нить , фибриллы проходят через все тело
5)тонкая клеточная стенка
6)чувствительны к кислым красителям
7)образуют цисту
Аксиальная нить находится под наружной мембраной и как бы закручивается вокруг
протоплазматического цилиндра спирохеты, при этом образуются первичные
завитки, что придает бактерии винтообразную форму.
Среди спирохет имеются возбудители инфекционных заболеваний человека:
возвратного,тифа, сифилиса и лептоспирозов. Некоторые спирохеты являются
сапрофитами. Они встречаются на слизистой оболочке полости рта и половых
органов здоровых людей. Аксиальная нить состоит из фибрилл – аналогов жгутиков
бактерий, в состав которых входит сократительный белок флагеллин. Они
прикреплены к концам клетки и направлены навстречу друг другу, другой конец
фибрилл свободен.
Различные виды – анаэробы, факультативные анаэробы и аэробы

Принципы классификации.
Тип, число завитков, шаг, высота, угол наклона спирали играют играют важную
систематическую роль
Патогенные спирохеты подразделяются на 3 рода: Borrelia; Treponema; Leptospira.

Спирохеты рода Borrelia  содержат много нуклеопротеидов, хорошо воспринимают


анилиновые красители. Боррелии вызывают болезнь Лайма, возвратный тиф и
другие боррелиозы.
Род Treponema  Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в розовый цвет, так как
содержат мало нуклеопротеидов и много липидов. Форма и движения хорошо
видны в живом состоянии в темном поле зрения микроскопа. К облигатно-
патогенным для человека относится Т.pallidum – возбудитель сифилиса.Среди
трепонем много сапрофитов, которые обитают в полости рта или в иле водоемов.

Представители рода Leptospira в виде закрученной веревки. Концы этих нитевидных


спирохет изогнуты наподобие крючков с утолщениями на концах. Образуя
вторичные завитки, они приобретают вид букв S или С, почти не окрашиваются
анилиновыми красителями. Изучают лептоспиры в темном поле, фазово-
контрастном микроскопе. Патогенный представитель – Leptospira interrogans,
возбудитель лептоспироза. Сапрофитные представители обитают в воде.

Род Число и характер Характер движения Окраска по


завитков методу
Романовского-
Гимзе
Borellia 3-10, крупные, толчкообразное, сине-фиолетовая
Гр- неравномерные сгибательно-
поступательное
Treponem 8-12, мелкие, плавное, сгибательно- бледно-розовая
a равномерные поступательное
Leptospir многочисленные очень активное, розово-сиреневая
a первичные завитки, вращательно-
вторичные завитки в поступательное
виде буквы S

Способы микроскопического изучения.


Морфологию спирохет изучают и в препаратах «раздавленная» капля(определение
подвижности)
Нативные препараты микроскопируют в темном поле или с помощью фазово-
контрастного микроскопа, наблюдая за активным и характерным движением
спирохет и особенностями их формы.

6. Прокариоты – внутриклеточные паразиты. Морфологические особенности


риккетсий. Морфологические особенности хламидий. Морфо –
ультраструктурные особенности микоплазм.

Морфологические особенности риккетсий.

1)разнообразная форма(палочковидные, нитевидные, кокковидные)


2)облигатные внутриклеточные паразиты
3)ферменто-зависимые
4)есть клеточная стенка, в которой много липидов(поэтому их характерная
особенность – возможность окрашиваться по Здрадовскому – аналог Циль-
Нильссена – окрашиваются  в рубиново-красный цвет, а клеточные элементы – в
голубой (цитоплазма) или синий (ядро) цвет., как микобактерии)
5) Гр-
6)Небольшие размеры(0,5мкм)
7) В отличие от вирусов их можно наблюдать в обычном световом микроскопе, они
выращиваются в желточном мешке куриного эмбриона,  культурах живых клеток и
тканях животных.
8)Окрашиваются по методу Романовского-Гимзы в розово-красный цвет
9) Вызывают заболевания:
 Группа тифов – эпидемический сыпной тиф; эндемический (крысиный) сыпной
тиф.
 Группа пятнистых лихорадок – пятнистая лихорадка Скалистых Гор;
средиземноморская прыщевая лихорадка; бразильский сыпной тиф;
североазиатский клещевой риккетсиоз.
 Группа лихорадок цуцугамуши – лихорадка цуцугамуши японская; малайский
скребковый тиф; суматранский клещевой тиф.
 Смешанная группа – окопная лихорадка; Ку-лихорадка; осповидный
риккетсиоз.

Морфологические особенности хламидий.

1)облигатный внутриклеточный паразит


2) Е-зависимый(не способны синтезировать АТФ)
3)имеют кл.ст.
4) Гр-
5)имеют особый жизненный цикл:
 элементарное тельце хламидии (ЭТ) - мелкая сферическая внеклеточная
структура с трёхслойной клеточной стенкой. Метаболически малоактивно и
адаптировано к внеклеточному выживанию. Элементарные тельца хламидий -
инфекционные единицы, заражающие клетки;
 ретикулярное тельце хламидии (РТ) - репродукционная внутриклеточная
форма. Представлено более крупным образованием с тонкой клеточной
стенкой, они обладают активным метаболизмом, более крупными размерами и
активным бинарным делением Развивается в течение 5-6 часов из ЭТ,
проникшего в цитоплазму и претерпевшего структурные изменения.
Первоначально из ЭТ образуется инициальное тельце (вегетативная форма).
Затем инициальное тельце превращается в РТ. После образования РТ
хламидийная клетка начинает бинарно делиться, образуя тельца включений в
виде вакуолей в цитоплазме инфицированной клетки. Тельца включений
хламидий обычно располагаются околоядерно. В тельцах включений
находятся делящиеся РТ, готовые трансформироваться в ЭТ и покинуть
клетку. Выход ЭТ сопровождается гибелью инфицированной клетки.
Цикл развития хламидий осущесвляется в цитоплазматическом включении
— фагосоме (вакуоле), куда ЭТ попадают путем стимулирования
эндоцитоза( антигены хламидий). ЭТ подавляют фагосомо — лизосомальное
слияние и преобразуются при участии главного поверхностного протеина в
РТ. Тельца включений выявляются в клетках при помощи световой и
иммунолюминесцентной микроскопии.
6)неподвижные
7)кокковидные
8)способны трансформироваться в L-формы
9) Для человека имеют значение преимущественно представители двух родов —
Chlamydia и Chlamydophila. Из них:
 Chlamydia trachomatis , различные серотипы которого вызывают трахому,
венерическую лимфогранулему и наиболее
распространенные урогенитальные хламидиозы.
 Chlamydophila psittaci вызывает орнитоз и зоонозные хламидиозы.
 Chlamydophila pneumoniae вызывает антропонозные пневмонии, ОРЗ, с
этим возбудителем связывают развитие некоторых форм бронхиальной
астмы, атеросклероза.
10)Используются ms(окрашивание по Романовскому-Гимзе), серологические и
иммунофлюорисцирующие мотоды

Морфо – ультраструктурные особенности микоплазм

1)НЕТ кл.ст.(не окрашиваются по Граму)


2)НЕТ определенной формы(полиморфизм)
3)структурнозависимые паразиты( потребность в стеролах (холестерине), они
стабилизируют
мембрану)
4) самые мелкие прокариоты (125-150 нм)
5) не образуют спор, жгутиков
6) некоторые виды обладают скользящей подвижностью
7) в патологии человека наибольшую роль играют несколько представителей рода
Mycoplasma:
 M. pneumoniae,
 M. hominis,
 M. anthritidis и единственный вид рода Ureaplasma – U. urealyticum
(названный так из-за уреазной активности).
8) В живом состоянии их изучают в темнопольном и фазово-контрастном
микроскопе, ультраструктурные компоненты выявляют при помощи
электронной микроскопии.

7. Структура клеточной стенки, как принцип классификации прокариот.


Формы бактерий и принципы деления на роды.

 Клеточная стенка прочная и упругая поверхностная структура.

Функции:

1) придает  форму клетке;

2) защита;

3) поддержание осмотического давления;

4) транспорт веществ, питание, деление;

4) антигенность.

В стенке - три слоя:

1) один слой пептидогликана;

2)  волнообразная наружная мембрана;  она соединена с пептидогликаном


молекулами липопротеидов; 
3) липополисахаридный слой.

Жесткий каркас бактерии представляет собой одну крупную мешкообразную


молекулу сложного гетерополисахарида (пептидогликана или муреина).
Муреиновые мешки состоят из параллельных полисахаридных цепей, связанных
друг с другом в поперечном направлении короткими пептидными цепями . Остов
молекулы пептидогликана — дисахарид. Его образуют N-ацетилглюкозамин и N-
ацетилмурамовая кислота, соединённые через р-гликозидные связи. Таким образом,
основная черта муреинового мешка — наличие в нем сети параллельных
полисахаридных цепей, связанных многочисленными пептидными поперечными
связями. Эта сеть замкнута со всех сторон, благодаря чему бактерия полностью
окружена структурой, не имеющей разрывов. 

При нарушении образования клеточной стенки (под влиянием лизоцима,


пенициллина) образуются протопласты, сферопласты, L- формы.

При обработке грамположительных бактерий ферментами, разрушающими


пептидогликан, возникают полностью лишенные клеточной стенки
структуры- протопласты. Обработка грамотрицательных бактерий лизоцимом
разрушает только слой пептидогликана, не разрушая полностью внешней мембраны;
такие структуры называют сферопластами. Протопласты и сферопласты имеют
сферическую форму (это свойство связано с осмотическим давлением и характерно
для всех безклеточных форм бактерий).
L- формы бактерий. Под действием ряда факторов, неблагоприятно действующих
на бактериальную клетку (антибиотики, ферменты, антитела и др.),
происходит L- трансформация бактерий, приводящая к постоянной или временной
утрате клеточной стенки. L- трансформация является не только формой
изменчивости, но и приспособления бактерий к неблагоприятным условиям
существования. В результате изменения антигенных свойств (утрата О- и К-
антигенов), снижения вирулентности и других факторов L- формы приобретают
способность длительно находиться (персистировать) в организме хозяина,
поддерживая вяло текущий инфекционный процесс. Утрата клеточной стенки
делает L- формы нечувствительными к антибиотикам, антителам и различным
химиопрепаратам, точкой приложения которых является бактериальная клеточная
стенка. Нестабильные L- формы способны реверсировать в классические
(исходные) формы бактерий, имеющие клеточную стенку. Имеются также
стабильные L- формы бактерий, отсутствие клеточной стенки и неспособность
реверстровать которых в классические формы бактерий закреплены генетически.
Строение клеточной стенки  грам"+" бактерий:

1) толстая кл стенка - однослойная

 2) несколько слоев пептидогликана (40-90%) поверх ЦПМ;

3) есть тейхоевые кислоты – фосфорилированные многоатомные спирты – их


молекулы пронизывают пептидогликан;
 4) некоторые содержат липиды(mycobacterium, corynebacterium)

5) наружной мембраны нет

6) некоторые содержат белок(staphylococcus aureus – белок А)

7) фиолетовое окрашивание по Граму

Строение клеточной стенки  грам "-" бактерий:

 1) тонкая стенка (10-15 нм);

 2) 3 слоя пептидогликана (5-10%);

3) нет тейхоевых кислот;

4) много липидов (10-20%). 

5)пептидогликановый мешок покрыт наружной мембраной

6) наружная мембрана содержит порины, др. белки, лпс и фосфолипиды

7) между пептидогликаном и наружной мембраной – периплазма

8) окрашивание розовое – пурпурное по Граму

К царству Бактерии относятся 4 отдела:


отд. Gracilicutes – Грациликуты; грамотрицательные бактерии с тонкой клеточной
стенкой;
отд. Firmicutes – Фирмикуты; грамположительные бактерии с толстой клеточной
стенкой;
отд. Tenericutes – Тенерикуты; бактерии без клеточной стенки;
отд. Mendosicutes – Мендозикуты; бактерии с дефектной клеточной стенкой.

По морфологическим свойствам различают 4 группы бактерий:


кокки, палочки, извитые и нитевидные формы.
1. Кокки имеют шаровидную (округлую) форму и размеры 0,5-1,5 мкм.

По расположению клеток различают:

а) микрококки (р. Micrococcus) – клетки располагаются одиночно;

б) диплококки (р. Diplococcus) – располагаются по две клетки, к патогенным


диплококкам относятся пневмококки – возбудители пневмонии; гонококки –
возбудители гонореи; менингококки – возбудители менингита; пневмококки имеют
овальную форму, а гонококки и менингококки – бобовидную форму;

в) стрептококки (р. Streptococcus) – располагаются в виде цепочек;

г) тетракокки (р. Tetracoccus) – располагаются по 4 клетки;


д) сарцины (р. Sarcina) – располагаются в виде пакетов (кубиков) клеток;

е) стафилококки (р. Staphylococcus) – образуют беспорядочные скопления в виде


виноградной грозди.

2. Палочки имеют цилиндрическую форму и размеры 1-8 х 0,5-2 мкм. Палочки


могут быть правильной и неправильной формы, прямыми или слегка изогнутыми в
виде запятой – вибрионы (например, холерный вибрион). Концы палочек могут
быть обрезанными, закругленными, заостренными или в виде утолщения.

Аэробные палочки, образующие споры, называются бациллами. Анаэробные


палочки, образующие споры, называются клостридиями. .

Большинство палочек располагается беспорядочно, поодиночке.

3. Извитые формы имеют изгибы в виде одного или нескольких оборотов спирали.
Клетки отличаются по длине и толщине, по количеству и характеру завитков. Длина
клеток варьирует от 5 до 30 мкм при толщине 0,25-1 мкм.

К извитым формам относятся спириллы, которые имеют изгибы, напоминающие


спираль. Представители рода Campylobacter  имеют изгибы как у крыла летящей
чайки.

К этой группе бактерий можно отнести и спирохеты, которые  имеют ряд


отличительных особенностей.

4. Нитевидные формы  бактерий имеют клетки в виде нитей. К ним относятся


серо- и железобактерии – обитатели водоемов. К нитевидным формам относятся
актиномицеты.

Колония — это видимое изолированное скопление представителей одного вида


микроорганизмов, образующееся при размножении одной колониеобразующей
единицы (КОЕ) на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине её).
Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии,
цвету и другим культуральным признакам.

Чи́стая культу́ра (или аксеничная культура) —


совокупность микроорганизмов одного вида, имеющих одинаковые
морфологические и биохимические свойства и одинаковые свойства их культур.

Клон - совокупность особей, происходящих от одной родительской клетки. К-
ры, полученные клонированием,генетически идентичны и фенотипически относител
ьно однородны. К. выделяют из одной изолированнойклетки путем 
ее культивирования или из одной колонии.

Штамм — чистая культура вирусов, бактерий, других микроорганизмов или


культура клеток, изолированная в определённое время и в определённом месте.

По отношению к окраске по Грамму различают  грамположительные (грам"+") и


грамотрицательные (грам"-") бактерии.
Окраска по Граму позволяет определить строение клеточной стенки внутри
определенных групп микроорганизмов(кокков, палочек и извитых). Принципы
классификации по родам для каждой группы микроорганизмов особенные:

1) Кокки – ведущий родовой признак – расположение бактерий в


пространстве

2) Палочки Гр+ - кислотоустойчивость, характерное расположение


спор, зерна волютина,

3) Извитые – ведущий родовой признак – количество завитков

8. Морфология и классификация бактерий. Назначение окрасок по Граму,


Бурри, Циль-Нильсену, Нейссеру. Способы изучения и назначение препаратов
“раздавленная” или ‘висячая капля”.

Морфология бактерий
У бактерий выделяют обязательные и необязательные органоиды клетки.

Обязательные органоиды: клеточная стенка, цитоплазматическая


мембрана (ЦПМ), цитоплазма, нуклеоид, мезосомы, рибосомы.

Цитоплазма - сложный раствор с органоидами, заполняющий полость клетки. 


Функции: объединяет в одно целое нуклеоид и другие органоиды клетки,
обеспечивает их взаимодействие и деятельность клетки как единой целостной
живой системы.

 Нуклеоид – аналог ядра (образование, подобное ядру). Строение: одна кольцевая 


двунитчатая молекула ДНК (одна хромосома),  немного РНК и негистоновых
белков; нет мембраны, ядрышка, не делится митозом. Функции: хранение и
передача наследственной информации.

 Рибосомы. Строение: 50% РНК и 50% белки; имеют округлую форму;  две
субъединицы (малая и большая). Функция: биосинтез белка. Рибосомы бактерий
имеют 70 S (коэффициент осаждения), а у эукариот – 80 S. Поэтому некоторые
антибиотики, которые подавляют биосинтез белка на рибосомах, связываются с
рибосомами бактерий, но не с рибосомами эукариотических клеток.

Мезосомы.  Строение: впячивания ЦПМ внутрь клетки в виде клубков, петель,


пластинок, трубочек. В мембранах мезосом находятся ферменты дыхания, пигменты
фотосинтеза. Функции: организация и координация ферментных систем в клетке,
обеспечивают энергией деление клетки, синтез клеточной стенки, образование спор,
секрецию веществ.
Необязательные структуры: капсула, жгутики, фимбрии (пили), споры,
плазмиды, включения.

Капсула. Строение: наружный толстый слой слизи определенной формы и


упорядоченного строения ( микрокапсула –  более тонкое слизистое образование,
выявляемое при электронной микроскопии).Состоит из полисахаридов или белков
(возбудители сибирской язвы и чумы).

Патогенные бактерии образуют капсулу внутри организма хозяина (например,


пневмококки, бациллы сибирской язвы). В чистых культурах бактерий капсула
не образуется.

Функции: 1) защита от повреждений и высыхания (капсулы  гидрофильны и хорошо


связывают воду); 2) защита от фагоцитоза патогенных бактерий в макроорганизме
(капсула -  признак вирулентности этих бактерий).

Капсулы окрашиваются по методу Бурри-Гинса. Клетки окрашиваются в красный


цвет, капсулы бесцветные, тушь создает темный фон (негативное
контрастирование).

 Жгутики. Строение: тонкие нити, отходящие от ЦПМ. Состоят из  фибрилл,


покрытых чехлом. Фибриллы  состоят из сократительного белка флагеллина.
Жгутики прикрепляются к ЦПМ и клеточной стенке специальными дисками
(базальное тело). Импульсы в базальном теле вызывают сокращение белка
флагеллина  и жгутики совершают вращательные движения. Функция: движение
клеток.

 По количеству и расположению жгутиков выделяют следующие группы бактерий:

- монотрихи –  один жгутик на одном из концов клетки (холерный вибрион);

- перитрихи –  20-30 жгутиков по всей клетке (кишечная палочка);

- лофотрихи –  пучок  (несколько) жгутиков на одном конце клетки (синегнойная


палочка);

- амфитрихи –  один или пучок жгутиков на противоположных концах клетки


(спириллы).

Жгутики  выявляют:

1) метод серебрения по Морозову; 2) в препаратах "раздавленная" или


"висячая" капля (витальные - прижизненные препараты);  вывод о том, что есть
жгутики, делают по подвижности микробов; 3) при помощи электронной
микроскопии.

 Ворсинки (фимбрии и пили). Строение: поверхностные нити, более тонкие и


короткие, чем жгутики. Состоят из белка пилина.  Ворсинки выполняют различные
функции.
  Ворсинки общего типа покрывают всю поверхность клетки и  прикрепляют
бактерии к поверхности и к поражаемым клеткам (адгезия), участвуют в питании,
водно-солевом обмене.  Половые ворсинки или пили участвуют в конъюгации. Их
образуют мужские клетки – доноры, которые содержат F-плазмиды.

 Включения: гликоген, гранулеза,  полиметафосфаты (волютин), жиры, кристаллы


солей. Функция: запасные питательные вещества, нерастворимые конечные
продукты.

Волютин(характерно свойства метахромазии и хроматофилии)  окрашивается


метиленовым синим в красно-фиолетовый цвет, а цитоплазма клетки – голубая.
Зерна волютина окрашивают и по методу Нейссера. Они окрашиваются в темно-
синий цвет, а цитоплазма – в желтый цвет.

 Гликоген раствором Люголя окрашивается в красно-бурый цвет, а гранулеза – в


серо-синий цвет. Капли жира растворами судана III  окрашиваются в красно-
оранжевый цвет. Пары осмиевой кислоты окрашивают жировые капли в черный
цвет.

Споры. Образование и строение:  образуются внутри клетки вокруг нуклеоида.


Нуклеоид покрывается плотной многослойной оболочкой, а остальная часть клетки
отмирает. В составе споры мало воды, много липидов. В оболочке содержится
дипиколинат кальция, который придает термоустойчивость. Споры имеют
различную форму (круглая, овальная) и расположение в клетке.  Расположение
бывает: 1) центральное (возбудитель сибирской язвы); 2) терминальное – на конце
палочки (возбудитель столбняка); 3) субтерминальное – ближе к концу палочки
(возбудитель ботулизма, газовой гангрены). Диаметр споры может быть меньше,
чем клетка и форма клетки не изменяется (возбудитель сибирской язвы). Но диаметр
споры может быть больше, чем клетка, и форма клетки изменяется: в виде
теннисной ракетки у возбудителя ботулизма, в виде барабанной палочки у
возбудителя столбняка.

Споры образуют не все бактерии, а бактерии с грамположительным типом строения


клеточной стенки (фирмикутные бактерии). Патогенные бактерии образуют споры
вне организма человека и животных.

Функция: перенесение неблагоприятных условий среды. Споры обладают высокой


устойчивостью к действию неблагоприятных физических (высушивание, высокая
температура, УФ-лучи, замораживание) и химических факторов (спирты, кислоты и
др.). Они находятся в состоянии покоя и сохраняют жизнеспособность в течение
длительного времени (споры возбудителя сибирской язвы хранятся в почве десятки
лет). В благоприятных условиях спора прорастает и превращается в вегетативную
форму.

 Обычными методами споры не окрашиваются. Споры окрашивают по методу


Ожешко. Сущность метода. Используют сильные воздействия для разрыхления
оболочки (протравливание HCl при подогревании), сильные красители (5 %
карболовый фуксин Циля). Споры медленно воспринимают краску и с трудом
отдают ее обесцвечивающим растворам (5 % H2SO4), т.е. не обесцвечиваются.
Споры  окрашиваются фуксином в красный цвет, а вегетативные формы
окрашиваются метиленовым синим в синий цвет.

Плазмиды — автономно реплицирующиеся кольцевидные молекулы двунитевой


ДНК с меньшей, чем хромосома бактерий молекулярной массой. Они находятся
наряду с нуклеоидом в цитоплазме, хотя могут быть и интегрированы в него, и
несут наследственную информацию, не являющуюся жизненно необходимой для
микробной клетки, но обеспечивающую ей те или иные селективные преимущества
в окружающей среде. Наиболее известны плазмиды:
1. (F-плазмиды), обеспечивающие конъюгационный перенос между
бактериями;
2. (R-плазмиды) — плазмиды лекарственной устойчивости,
обеспечивающие циркуляцию среди бактерий генов, детерминирующих
устойчивость к используемым для лечения различных заболеваний
химиотерапевтическим средствам.

Классификация бактерий

В основе методов идентификации бактерий лежат их физико-иммунологические или


молекулярные свойства.

Согласно современной систематике, микроорганизмы относятся к трем


царствам:
1. Vira — к ним относятся вирусы;
2. Eucariotae — к ним относятся простейшие и грибы;
3. Procariotae — к ним относятся истинные бактерии, риккетсии, хламидии,
микоплазмы, спирохеты, актиномицеты.
Также как для растений и животных, для названия микроорганизмов применяется
бинарная номенклатура, — то есть родовое и видовое название, но если видовую
принадлежность исследователям определить не удается и определена только
принадлежность к роду, то употребляется термин "species". Чаще всего это имеет
место при идентификации микроорганизмов имеющих нетрадиционные пищевые
потребности или условия существования.
Название рода обычно или основано на морфологическом признаке
соответствующего микроорганизма (например, Staphylococcus, Vibrio,
Mycobacterium) либо являются производными от фамилии автора, который открыл
или изучил данный возбудитель (например, Neisseria, Shigella, Escherichia, Rickettsia,
Gardnerella).
Видовое название часто связано с наименованием основного вызываемого этим
микроорганизмом заболевания (например, Vibrio cholerae — холеры, Shigella
dysenteriae — дизентерии, Mycobacterium tuberculosis — туберкулеза) или с
основным местом обитания (например, Escherihia coli — кишечная палочка).
Кроме того, в русскоязычной медицинской литературе возможно использование
соответствующего русифицированного названия бактерий (например, вместо
Staphylococcus epidermidis — эпидермальный стафилококк; Staphylococcus aureus —
золотистый стафилококк и т. д.).
Царство прокариот включает в себя отдел цианобактерий и отдел эубактерий,
который, в свою очередь, подразделяется на порядки:
1. собственно бактерии (отделы Gracilicutes, Firmicutes, Tenericutes,
Mendosicutes);
2. актиномицетов;
3. спирохет;
4. риккетсий;
5. хламидий.
Бактерии — это прокариотические, преимущественно одноклеточные
микроорганизмы, которые могут также образовывать ассоциации (группы) сходных
клеток, характеризующиеся клеточными, но не организменными сходствами.
Основными таксономическими критериями, позволяющими отнести штаммы
бактерий к той или иной группе, являются:
• Окраска по Граму
• Форма: кокки, палочки или спирали.
• Эндоспоры, их наличие и расположение в бактериальной клетке (терминальные,
субтерминальные или центральные).
• Отношение к кислороду: для существования аэробных микроорганизмов
необходим кислород, в то время как анаэробные бактерии способны выживать в
среде с малым его содержанием или полным отсутствием. Факультативные
анаэробы могут жить как в присутствии кислорода, так и без него. Микроаэрофилы
быстро размножаются при низком парциальном давлении кислорода, а капнофилы
— в среде с высоким содержанием СО2.
• Эссенциальные ферменты (ферментативная активность): например, недостаток
лактозы в среде указывает на присутствие сальмонелл, а уреазный тест помогает
определить Helicobacter.
• Серологические реакции возникают при взаимодействии антител с
поверхностными структурами бактерий (некоторые виды сальмонелл, Haemophilus,
менингококки и др.).
•По источникам энергии и способам утилизации питательных веществ
Вид является эволюционно сложившейся совокупностью особей, имеющих единый
генотип, который в стандартных условиях проявляется сходными
морфологическими, физиологическими, биохимическими признаками.
Для дифференцировки видов исходят из
1)бх св-в
2)патогенетических
3)АГ
4)фаголизабельности
Существует внутривидовая дифференцировка бактерий на варианты:
1. по биологическим свойствам (биовары или биотипы);
2. по биохимической активности (ферментовары);
3. по антигенному строению (серовары или серотипы);
4. по чувствительности к бактериофагам (фаговары или фаготипы);
5. по устойчивости к антибиотикам (резистентовары).
В микробиологии широко применяют специальные термины — культура, штамм,
клон.

Назначение окрасок
1) По Граму
Сущность окраски по Граму: так как грамм + бактерии содержат в клеточной
стенке мало липидов, красители хорошо впитываются клеточной стенкой, при
этом комплекс генцианового фиолетового и йода прочно связывается с
большим количеством пептидогликана и присутствующими тейхоевыми
кислотами. После обработки спиртом поры в клеточной стенке суживаются,
что задерживает красители, и клеточная стенка приобретает сине-фиолетовую
окраску.
Методика:
1.Генцианвиолет – 2 мин
2.Р-р Люголя – 1 мин
3.Спирт – 20сек
4.Фуксин – 3 мин
2) Окрашивание по Бурри-Гинсу является негативным методом окраски:
окрашивается фон, а не сами микроорганизмы. Для этого используют
красители, не окрашивающие бактерии, например тушь. Готовят тушевой
препарат: каплю материала смешивают с каплей туши, готовят мазок (как
мазок крови) и высушивают. Клетки окрашиваются в красный цвет(фуксин),
капсулы бесцветные, тушь создает темный фон (негативное
контрастирование).

3) Окрашивание по Циль-Нильсену предназначено для дифференциации


кислотоустойчивых бактерий (возбудителей туберкулеза и лепры) от
некислотоустойчивых.

Методика
1.Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при
нагревании 3-5 мин.
2.Обесцвечивают раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в
течение 1-2 мин.
3.Промывают водой.
4.Докрашивают 3-5 мин метиленовым синим (дополнительный краситель).

Сущность
Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий отличается высоким
содержанием липидов. Они с трудом окрашиваются, но затем удерживают
основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые
бактерии легко окрашиваются, а затем легко обесцвечиваются кислотой и
окрашиваются дополнительным красителем.

4) По Нейссеру используется для выявления зерен волютина.


Методика
1.Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислой синей 4 мин, затем
сливают краску.
2.Промывают водой и наливают раствор Люголя на 20-30 сек.
3.Не промывая водой, окрашивают везувином 1-3 мин.
4.Промывают водой, высушивают.
NB! Тела бактерий окрашиваются в нежный светло-коричневый цвет, зерна
волютина - в темно-синий, почти черный цвет.

Сущность
Мазок окрашивается уксуснокислым метиленовым синим 2-3 минуты, при этом
происходит химическое взаимодействие красителя и волютина. Зерна волютина
окрашиваются в черный цвет. При промывке водой тело клетки
обесцвечивается и затем в течение 1 мин докрашивается везувином в желто-
коричневый цвет.

Способы изучения и назначение препаратов “раздавленная” или ‘висячая


капля”
Раздавленная капля — это метод приготовления препаратов для
микроскопического изучения живых объектов. Применяется при исследовании
бактерий, клеток культуры тканей, простейших, ряда водорослей и других мелких
организмов. Для приготовления препаратов по методу раздавленной капли на
поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды,
физиологического раствора или культуральной жидкости. Стеклянной палочкой или
бактериологической петлей в каплю вносят небольшое количество исследуемой
культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной
взвеси. При работе с культурой тканей на предметное стекло наносят каплю
суспензии клеток в культуральной жидкости. Если суспензия клеток слишком густая
предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. Готовые препараты
рассматривают в сухих и иммерсионных системах. Для получения наибольшего
контраста применяют темнопольную или фазово-контрастную микроскопию.
Метод висячей капли. Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой,
покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина На
покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стекло
стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре. Склеившиеся стекла быстро
переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере
и сохраняется долгое время
Назначение методов – изучение в нативных препаратах подвижности
микроорганизмов.
9. Вирусы. Ультраструктура и химический состав. Функции отдельных
ультраструктур вириона.

Вирусы – микроорганизмы, составляющие царство Vira.


Отличительные признаки:
1) содержат лишь один тип нуклеиновой кислоты (РНК или ДНК);
2) не имеют собственных белоксинтезирующих и энергетических систем(нет
собственного метаболизма);
3) не имеют клеточной организации;
4) обладают дизъюнктивным (разобщенным) способом репродукции (синтез
белков и нуклеиновых кислот происходит в разных местах и в разное время);
5) облигатный паразитизм вирусов реализуется на генетическом уровне;
6) вирусы проходят через бактериальные фильтры(очень малые размеры)
7) Вирусы не способны к росту и бинарному делению

Выявляемые проявления вирусной инфекции клеточных культур.

1.Цитопатический эффект.
2.Выявление телец включений.
3. Выявление вирусов методом флюоресцирующих антител (ИФА), электронной
микроскопией, авторадиографией.
4.Цветная проба. Обычный цвет  используемых культуральных сред,
содержащих в качестве индикатора рН феноловый красный, при оптимальных для
клеток условиях культивирования (рН около 7,2)- красный. Размножение клеток
меняет рН и соответственно- цвет среды с красного на желтый за счет смещения рН в
кислую сторону. При размножении в клеточных культурах вирусов происходит лизис
клеток, изменения рН и цвета среды не происходит.
5.Выявление гемагглютинина вирусов- гемадсорбция, гемагглютинация.
6.Метод бляшек (бляшкообразования). В результате цитолитического действия
многих вирусов на клеточные культуры образуются зоны массовой гибели клеток.
Выявляют бляшки- вирусные “ клеточно- негативные” колонии.

Вирусы могут существовать в двух формах: внеклеточной (вириона) и


внутриклеточной (вируса).
Внеклеточная форма — вирион — включает в себя все составные элементы
(капсид, нуклеиновую кислоту, структурные белки, ферменты и др.).
Внутриклеточная форма — вирус — может быть представлена лишь одной
молекулой нуклеиновой кислоты, так как, попадая в клетку, вирион распадается на
составные элементы.
В центре вириона – вирусная нуклеиновая кислота, покрытая белковой
оболочкой – капсидом, который имеет строго упорядоченную структуру. Капсидная
оболочка построена из капсомеров. Существуют два способа упаковки капсомеров в
капсид- спиральный (спиральные вирусы) и кубический (сферические вирусы).
При спиральной симметрии белковые субъединицы располагаются по спирали, а
между ними, также по спирали, уложена геномная нуклеиновая кислота (нитевидные
вирусы). При кубическом типе симметриивирионы могут быть в виде
многогранников, чаще всего- двадцатигранники — икосаэдры.
Нуклеиновая кислота и капсидная оболочка составляют нуклеокапсид.
Просто устроенные вирусы имеют только нуклеокапсид, т.е. комплекс генома с
капсидом и называются “голыми”.
Нуклеокапсид сложноорганизованных вирионов покрыт внешней оболочкой –
суперкапсидом, которая может включать в себя множество функционально
различных липидных, белковых, углеводных структур. Такие вирусы называют
“одетыми”.
Кроме вирусов, имеются еще более просто устроенные формы способных
передаваться агентов — плазмиды, вироиды и прионы.
Строение ДНК– и РНК-вирусов принципиально не отличается от НК других
микроорганизмов. У некоторых вирусов в ДНК встречается урацил.
ДНК может быть:
1) двухцепочечной;
2) одноцепочечной;
3) кольцевой;
4) двухцепочечной, но с одной более короткой цепью;
5) двухцепочечной, но с одной непрерывной, а с другой фрагментированной
цепями.
РНК может быть:
1) однонитевой;
2) линейной двухнитевой;
3) линейной фрагментированной;
4) кольцевой;
5) содержащей две одинаковые однонитевые РНК.

Вирусные белки подразделяют на:


1) геномные – нуклеопротеиды. Обеспечивают репликацию вирусных
нуклеиновых кислот и процессы репродукции вируса. Это ферменты, за счет которых
происходит увеличение количества копий материнской молекулы, или белки, с
помощью которых на матрице нуклеиновой кислоты синтезируются молекулы,
обеспечивающие реализацию генетической информации;
2) белки капсидной оболочки – простые белки, обладающие способностью к
самосборке. Они складываются в геометрически правильные структуры, в которых
различают несколько типов симметрии: спиральный, кубический (образуют
правильные многоугольники, число граней строго постоянно) или смешанный;
3) белки суперкапсидной оболочки – это сложные белки, разнообразные по
функции. За счет них происходит взаимодействие вирусов с чувствительной клеткой.
Выполняют защитную и рецепторную функции.

Среди белков суперкапсидной оболочки выделяют:


а) якорные белки (одним концом они располагаются на поверхности, а другим
уходят в глубину; обеспечивают контакт вириона с клеткой);
б) ферменты (могут разрушать мембраны);
в) гемагглютинины (вызывают гемагглютинацию);
г) элементы клетки хозяина.

Вирусные РНК представлены одно- или двухнитевыми молекулами.


Однонитевые молекулы могут быть сегментированными. Наличие сегментов ведёт к
увеличению кодирующей ёмкости генома.
Вирусные РНК подразделяют на следующие группы:
 плюс-нити РНК (+РНК),
 минус-нити РНК (-РНК).

У различных вирусов геном могут образовывать нити +РНК либо -РНК, а также
двойные нити, одна из которых -РНК, другая (комплементарная ей) — +РНК.

Плюс-нити РНК представлены одиночными цепочками, имеющими характерные


окончания («шапочки») для распознавания рибосом. К этой группе относят РНК,
способные непосредственно транслировать генетическую информацию на рибосомах
заражённой вирусом клетки, то есть выполнять функции мРНК. Плюс-нити
выполняют следующие функции:
 служат мРНК для синтеза структурных белков,
 матрицей для репликации РНК,
 упаковываются в капсид с образованием дочерней популяции.
Минус-нити РНК не способны транслировать генетическую информацию
непосредственно на рибосомах, то есть они не могут функционировать как мРНК.
Однако такие РНК служат матрицей для синтеза мРНК.

Вирусные ДНК образуют циркулярные, ковалентно-сцёпленные


суперспирализованные или линейные двухнитевые структуры. Транскрипция
вирусной ДНК (синтез мРНК) осуществляется в ядре заражённой вирусом клетки. В
вирусной ДНК на концах молекулы имеются прямые или инвертированные
повторяющиеся нуклеотидные последовательности. Их наличие обеспечивает
способность молекулы ДНК замыкаться в кольцо. Эти последовательности,
присутствующие в одно- и двух-нитевых молекулах ДНК, — своеобразные маркёры
вирусной ДНК.

10. Бактериофаги. Природа и особенности взаимодействия с бактериальной


клеткой.

Бактериофаги (фаги) — это вирусы, поражающие бактериальные клетки. Вирионы


фагов состоят из головки, содержащей нуклеиновую кислоту вируса, и более или
менее выраженного отростка. Нуклеокапсид головки фага имеет кубический тип
симметрии, а отросток — спиральный тип, т. е. бактериофаги имеют смешанный тип
симметрии нуклеокапсида.

Большинство фагов содержит кольцевую двунитчатую ДНК, и лишь некоторые РНК


или однонитчатую ДНК. Фаги обладают антигенными свойствами и содержат
группоспецифические (по ним делятся на серотипы) и типоспецифические
антигены. Сыворотки, содержащие антитела к этим антигенам (антифаговые
сыворотки) нейтрализуют литическую активность фагов. Взаимодействие
бактериофага с клеткой происходит в соответствии с основными типами
взаимодействия, характерными для всех вирусов,
 продуктивная (литическая),
 абортивная вирусная
 латентная (лизогения, вирогения) инфекция,
 а также вирус-индуцированная трансформация.

Размножение и выход дочерних популяций вируса из бактерии сопровождается её


гибелью и разрушением (лизисом). Бактериофаги широко распространены в
природе.

В основу классификации положены антигенная структура, морфология фагов,


спектр действия, химический состав и др.

По спектру действия выделяют


 типовые фаги (Т-фаги), лизирующие бактерии отдельных типов внутри вида,
 моновалентные фаги, лизирующие бактерии одного вида
 поливалентные фаги, лизирующие бактерии нескольких видов.

Строение бактериофагов наиболее полно охарактеризовано на основе изучения


Т-фагов кишечной палочки. Внешне большинство бактериофагов напоминают
сперматозоиды или головастиков, но среди них встречают и другие формы, на
основании которых выделяют пять основных типов бактериофагов.
• К типу I бактериофагов относят ДНК-содержащие нитевидные фаги,
лизирующие бактерии, содержащие F-плазмиды.
• Фаги типа II представлены головкой и рудиментом хвоста. Геном
большинства из них образован молекулой РНК и лишь у фага jc-174 —
однонитевой ДНК.
• Бактериофаги типа III имеют короткий хвост (например, Т-фаги 3 и 7).
• К типу IV относят фаги с несокращаюшимся хвостом и двухнитевой ДНК
(например, Т-фаги 1 и 5).
• Фаги типа V имеют ДНК-геном, сокращающийся чехол хвоста, который
заканчивается базаль-ной пластиной (например, Т-фаги 2 или 4).

По характеру взаимодействия фага с клеткой все бактериофаги делятся на:


 вирулентные (литические), вызывающие продуктивную инфекцию и лизис
бактериальной клетки,
 умеренные, вызывающие латентную инфекцию и ассоциацию генома вируса с
бактериальной хромосомой.
Умеренные фаги, в отличие от вирулентности, не вызывают гибель бактериальных
клеток, и при взаимодействии с ней переходят в неинфекционную форму фага,
называемую профагом.
Профаг — геном фага, ассоциированный с бактериальной хромосомой. Профаг,
ставший частью хромосомы клетки, при ее размножении реплицируется синхронно
с геномом бактерии, не вызывая ее лизиса, и передается по наследству от клетки к
клетке в неограниченном числе поколений.
Бактериальные клетки, содержащие в своей хромосоме профаг, называются
лизогенными. Профаг в лизогенных бактериях самопроизвольно или под влиянием
различных индуцированных агентов может переходить в вегетативный фаг. В
результате такого превращения бактериальная клетка лизируется и продуцирует
новые фаговые частицы. В ходе лизогенизации бактериальные клетки могут
дополнительно приобретать новые признаки, детерминируемые геномом вируса.
Такое явление — изменение свойств микроорганизмов под влиянием профага,
называется фаговой, или лизогенной конверсией (проявление вирус-
индуцированной трансформации).
Умеренные фаги, неспособные ни при каких условиях переходить из профага в
вегетативный фаг (образовывать зрелые фаговые частицы), называются
дефектными, чаще это происходит в результате нарушения стадии сборки
вирусных частиц. Некоторые умеренные фаги называются трансдуцирующими,
поскольку с их помощью осуществляется один из механизмов генетической
рекомбинации у бактерий — трансдукции. Такие фаги могут использоваться, в
частности в генной инженерии в качестве векторов для получения рекомбинантных
ДНК и/или приготовлении рекомбинантных (генно-инженерных) вакцин.

Основные этапы взаимодействия фагов и бактерий.


1.Адсорбция (взаимодействие специфических рецепторов).
2.Внедрение вирусной ДНК (инъекция фага) осуществляется за счет лизирования
веществами типа лизоцима участка клеточной стенки, сокращения чехла,
вталкивания стержня хвоста через цитоплазматическую мембрану в клетку,
впрыскивание ДНК в цитоплазму.
3.Репродукция фага.
4.Выход дочерних популяций.

Практическое использование бактериофагов


1.Для идентификации (определение фаготипа).
2.Для фагопрофилактики (купирование вспышек).
3.Для фаготерапии (лечение дисбактериозов).
4.Для оценки санитарного состояния окружающей среды и эпидемиологического
анализа.

11. Особенности катаболизма у разных групп микробов. Виды энергетического


обмена. Классификация микробов в зависимости от особенностей
энергообмена.

Катаболизм (дыхание, диссимиляция, биологическое окисление) характеризуется


расщеплением (окислением) сложных органических веществ до более простых
продуктов с освобождением заключенных в них энергии. Эта энергия используется
микроорганизмами для синтеза веществ данной клетки.

Источники энергии у микроорганизмов


(АВТОТРОФЫ-ФОТО- И ХЕМО-
ГЕТЕРОТРОФЫ ХЕМО- И ФОТО-)
У фотоавтотрофов источником энергии служит видимый свет. Световая энергия
улавливается фотоактивными пигментами клетки в процессе фотосинтеза,
трансформируется в химическую энергию и обеспечивает энергетические
потребности клетки.
Источником энергии у хемоавтотрофов (Е за счет ОВР)служит химическая
энергия, получаемая при окислении неорганических соединений (аммиак,
сероводород и др.).
Хемогетеротрофы   получают энергию в процессе окисления органических
соединений. Любое природное органическое вещество и многие синтетические
могут быть использованы хемогетеротрофами.
Поскольку все микроорганизмы - возбудители порчи пищевых продуктов и
используемые при переработке  пищевого сырья относятся к хемогетеротрофам,
ниже рассматриваются именно их энергодающие процессы. К ним относят дыхание
(1) и брожение(2)(ВИДЫ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО ОБМЕНА). 
В зависимости от акцептора протонов и электронов среди бактерий различают
аэробы, факультативные анаэробы и облигатные анаэробы. Для аэробов
акцептором является кислород. Факультативные анаэробы в кислородных условиях
используют процесс дыхания, в бескислородных – брожение. Для облигатных
анаэробов характерно только брожение, в кислородных условиях наступает гибель
микроорганизма из-за образования перекисей, идет отравление клетки.

Дыхание (биологическое окисление)- сложный процесс окисления различных


органических соединений и некоторых минеральных соединений (нитратов и
сульфатов). Нитратное дыхание - восстановление нитратов до молекулярного азота.
Сульфатное дыхание - восстановление сульфатов до сероводорода,
сопровождающееся выделением такого же количества энергии.

В итоге окислительно-восстановительных процессов и брожения образуется


тепловая энергия, часть которой используется микробной клеткой, а остальное
количество выделяется в окружающую среду. В настоящее время окисление
определяют как процесс отнятия водорода (дегидрирование), а восстановление
- его присоединение. Эти термины применяют к реакциям, связанным с переносом
протонов и электронов, или только электронов. При окислении вещества
происходит потеря электронов, а при  восстановлении – их присоединение.
Различают два типа биологического окисления: прямое и непрямое. При
прямом окислении органические вещества, такие как молекулярный водород, оксид
углерода, метан, сера, аммиак, соли азотистой кислоты, железо и др. окисляются
атмосферным кислородом с помощью ферментов оксидаз. При прямом
окислении неорганических веществ получают энергию автотрофные почвенные
бактерии.
При непрямом окислении происходит отщепление водорода от донора и его
присоединение к акцептору. Поэтому непрямое окисление называют
дегидрированием. Непрямому окислению путем дегидрирования подвергаются
органические вещества при помощи дегидрогеназ. Различают аэробное и
анаэробное дегидрирование. При аэробном дегидрировании микроорганизмы
используют в качестве конечного акцептора водорода атмосферный кислород.
Водород отщепляется от донора с помощью фермента дегидрогеназы и передается
акцептору не сразу, а проходит ряд промежуточных этапов.
При аэробном дегидрировании происходит полное и неполное окисление. В случае
полного окисления конечными продуктами являются вода и диоксид углерода,
происходит высвобождение всей энергии. При неполном окислении освобождается
лишь часть энергии. Конечными продуктами неполного аэробного окисления сахара
могут быть органические кислоты: лимонная, яблочная, щавелевая, янтарная и др.,
которые образуются плесневыми грибами.
При анаэробном дегидрировании микробы используют в качестве акцептора
водорода не кислород, а азот, серу, углерод и другие соединения, которые
образуются при распаде субстрата (пировиноградной кислоты). При этом водород
довольно легко соединяется с азотом, серой, углеродом, которые восстанавливаются
до аммиака, сероводорода и метана.
Дегидрирование углеводов называют брожением, оно чаще проходит в
анаэробных условиях. Конечными продуктами брожения являются органические
кислоты, этиловый и бутиловый спирты, ацетон и другие продукты. Таким
образом, прямое окисление и дегидрирование приводят к одному результату -
окислению субстрата, т.е. отщеплению от субстрата водорода и присоединению его
к акцептору ( восстановление). Перенос электрона всегда сопровождается
освобождением энергии, которая немедленно утилизируется клеткой с помощью
особых соединений АТФ и АДФ (аденозинтрифосфата и аденозиндифосфата). В них
она накапливается в органических фосфатных (макроэргических) связях и
расходуется клеткой по мере необходимости.

Молекулы АТФ образуются двумя метаболическими путями:

1.Субстратное фосфорилирование
•Гликолитический путь – присущ облигатным и факультативным анаэробам,
бродильный метаболизм

Молочнокислое брожение (роды Lactobacillus, Streptococcus,


Bifidobacterium)

Муравьинокислое брожение (сем. Enterobacteriaceae)

Маслянокислое брожение (род Clostridium)

•Гексозомонофосфатный путь – характерен для большинства


микроорганизмов

•Кетодезоксифосфоглюконатный путь – в основном у аэробов (род


Pseudomonas), окислительный метаболизм

2.Окислительное фосфорилирование – аэробы и факультативные анаэробы

По типу дыхания микроорганизмы разделяют на четыре основные  группы:


облигатные аэробы, облигатные и факультативные- анаэробы и микроаэрофиллы.
Облигатные (строгие) аэробы растут при свободном доступе кислорода воздуха,
имеют ферменты, обеспечивающие передачу водорода от донора электронов
(субстрата) конечному акцептору - кислороду воздуха. Размножаются при наличии в
атмосфере до 21% кислорода, на питательных средах растут на верхних слоях
(уксуснокислые бактерии, возбудитель туберкулеза, пигментные гнилостные
бактерии, многие плесени и др. микроорганизмы).
Облигатные анаэробы способны к размножению только в атмосфере, свободной от 
кислорода, или при его содержании не более 5%. У этих микроорганизмов
конечным акцептором водорода является субстрат  (азотсодержащие вещества,
углеводы и др.). Эти микробы растут на дне пробирке под значительным слоем
питательной среды. В эту группу входят маслянокислые и пропионовокислые
бактерии, гнилостные клостридии, возбудитель ботулизма, бифидобактерии и др.
Для некоторых строгих анаэробов кислород является ядом.
Факультативные анаэробы развиваются как при доступе кислорода, так и в его
отсутствии. Они имеют набор ферментов, обеспечивающих аэробный и анаэробный
тип биологического окисления (дыхания). Развиваются по всей толщине
питательной среды. Это многочисленная группа микроорганизмов, к которым
относятся молочнокислые бактерии, стафилококки, бактерии группы кишечной
палочки, гнилостные бактерии рода Протеус.
Микроаэрофиллы нуждаются в значительно меньшем количестве кислорода, чем
аэробы. Они развиваются при концентрации кислорода в окружающей среде не
более 10%, т.е. у них преобладает  аэробный тип дыхания (актиномицеты,
лептоспиры, возбудители бруцеллеза, некоторые плесневые грибы).
Классификация по типам питания.  При классификации по типам питания на
первое место ставится вид используемой энергии, в соответствии с этим
микроорганизмы делят на  фототрофы и хемотрофы. Каждую из этих групп в
зависимости от  окисляемого вещества в свою очередь делят на литотрофы( лито-
минерал, камень) и органотротрофы:
1.Фототрофы                               2. Хемотрофы(Е за счет ОВР)
способны использовать 2.1. Хемолитотрофы -использующие в качестве
доноров
солнечную энергию электронов неорганические соединения
2.2. Хемоорганотрофы.

Особенности метаболизма у бактерий состоят в том, что:


• высокая скорость метаболизма, что возможно обусловлено гораздо большим
соотношением поверхности к единице массы, чем у многоклеточных;
• процессы диссимиляции преобладают над процессами ассимиляции;
•поступление пит. в-в в кл. осуществляется всей поверхностью тела(голофитное – у
бактерий,тк не имеют специальных органов питания, а у эукариот – голозойное)
• субстратный спектр потребляемых бактериями веществ очень широк — от
углекислого газа, азота, нитритов, нитратов до органических соединений, включая
антропогенные вещества — загрязнители окружающей среды (обеспечивая тем
самым процессы ее самоочищения);
• бактерии имеют очень широкий набор различных ферментов — это также
способствует высокой интенсивности метаболических процессов и широте
субстратного спектра.
•быстрая адаптационная способность
•направленность всех процессов метаболизма на обеспечение процессов
размножения

Ферменты бактерий по локализации делятся на 2 группы:


• экзоферменты — ферменты бактерий, выделяемые во внешнюю среду и
действующие на субстрат вне клетки (протеазы, полисахариды, олигосахаридазы);
• эндоферменты — ферменты бактерий, действующие на субстраты внутри клетки
(расщепляющие аминокислоты, моносахара, синтетазы).
Синтез ферментов генетически детерминирован, но регуляция их синтеза идет за
счет прямой и обратной связи, т. е. для одних — репрессируется, а для других —
индуцируется субстратом. Ферменты, синтез которых зависит от наличия
соответствующего субстрата в среде (бета-галактозидаза, бета-лактамаза),
называются индуцибельными.
Другая группа ферментов, синтез которых не зависит от наличия субстрата в среде,
называется конститутивными (ферменты гликолиза). Их синтез имеет место всегда,
и они всегда содержатся в микробных клетках в определенных концентрациях.
Изучают метаболизм бактерий с помощью физико-химических и биохимических
методов исследования в процессе культивирования бактерий в определенных
условиях на специальных питательных средах, содержащих то или иное соединение
в качестве субстрата для трансформации.
 
В микробной клетке ферменты являются биологическими катализаторами. По
строению выделяют:
1) простые ферменты (белки);
2) сложные; состоят из белковой (активного центра) и небелковой частей;
необходимы для активизации ферментов.
Различают также:
1) конституитивные ферменты (синтезируются постоянно независимо от наличия
субстрата);
2) индуцибельные ферменты (синтезируются только в присутствии субстрата).
Набор ферментов в клетке строго индивидуален для вида. Способность
микроорганизма утилизировать субстраты за счет своего набора ферментов
определяет его биохимические свойства.
По месту действия выделяют:
1) экзоферменты (действуют вне клетки; принимают участие в процессе распада
крупных молекул, которые не могут проникнуть внутрь бактериальной клетки;
характерны для грамположительных бактерий);
2) эндоферменты (действуют в самой клетке, обеспечивают синтез и распад
различных веществ).
В зависимости от катализируемых химических реакций все ферменты делят на
шесть классов:
1) оксидоредуктазы (катализируют окислительно-восстановительные реакции
между двумя субстратами);
2) трансферазы (осуществляют межмолекулярный перенос химических групп);
3) гидролазы (осуществляют гидролитическое расщепление внутримолекулярных
связей);
4) лиазы (присоединяют химические группы по двум связям, а также осуществляют
обратные реакции);
5) изомеразы (осуществляют процессы изомеризации, обеспечивают внутреннюю
конверсию с образованием различных изомеров);
6) лигазы, или синтетазы (соединяют две молекулы, вследствие чего происходит
расщепление пирофосфатных связей в молекуле АТФ).

12. Типы дыхания у микробов. Способы культивирования микробов с


различным типом дыхания.

Аэробное дыхание микроорганизмов — это процесс, при котором акцептором


водорода (протонов и электронов) является молекулярный кислород. В
результате окисления, главным образом сложных органических соединений,
образуется энергия, которая выделяется в среду или накапливается в
макроэргических фосфатных связях АТФ. Различают полное и неполное
окисление.

Полное окисление. Основной источник энергии у микроорганизмов— углеводы.


При их расщеплении, которое происходит разными путями, получается важный
промежуточный продукт — пировиноградная кислота. Полное окисление
пировиноградной кислоты происходит в цикле трикарбоновых кислот (цикл
Креб-са) и дыхательной цепи. В результате расщепления глюкозы в аэробных
условиях процесс окисления идет до конца-—до образования углерода диоксида
и воды с освобождением большого количества энергии: С6Н12О6 + 6О2 -*■ 6СО2 +
6Н2О + 2874,3 к Дж.

Неполное окисление. Не все аэробы доводят реакции окисления до конца. При


избытке углеводов в среде образуются продукты неполного окисления, в которых
заключена энергия. Конечными продуктами неполного аэробного окисления
сахара могут быть органические кислоты: лимонная, яблочная, щавелевая,
янтарная и другие, они образуются плесневыми грибами. Например,
осуществляется аэробное дыхание уксуснокислыми бактериями, у которых при
окислении этилового спирта образуется уксусная кислота и вода:

СН3СН2ОН + О2 -* СН3СООН + Н2О + 494,4 к Дж.

У некоторых бактерий в процессе дыхания происходит окисление


неорганических соединений. Примером окисления неорганических соединений
могут служить процессы нитрификации, при которых нитрифицирующие
бактерии вначале окисляют аммиак до азотистой кислоты, а затем до азотной. В
каждом случае при этом выделяется энергия: в первой фазе 274,9 кДж, во второй
—87,6 кДж.

Анаэробное дыхание осуществляется без участия молекулярного кислорода.


Различают анаэробное нитратное дыхание, анаэробное сульфатное дыхание и
брожение. При анаэробном дыхании акцептором водорода являются окисленные
неорганические соединения, которые легко отдают кислород и превращаются в
более восстановленные формы, что сопровождается выделением энергии.

1. анаэробное нитратное дыхание — восстановление нитратов до молекулярного


азота

2. анаэробное сульфатное дыхание — восстановление сульфатов до


сероводорода.

3. Брожение — расщепление органических углеродсо-держащих соединений в


анаэробных условиях. Оно характеризуется тем, что последним акцептором
водорода служит молекула органического вещества с ненасыщенными связями.
Вещество при этом разлагается только до промежуточных продуктов,
представляющих собой сложные органические соединения (спирты, органиче-
ские кислоты). Заключенная в них энергия в небольших количествах выделяется
в окружающую среду. При брожении энергии освобождается меньше. Например,
при брожении глюкозы освобождается в 24,5 раза меньше энергии, чем при ее
аэробном окислении.

По типу дыхания микроорганизмы разделяют на четыре основные  группы:


1.Аэробы – для получения энергии нуждаются в свободном доступе кислорода

 строгие – не могут жить и размножаться в отсутствие молекулярного


кислорода

2.Анаэробы – получают энергию без доступа кислорода путём расщепления


питательных веществ

 облигатные (строгие) – не переносят присутствия даже следов кислорода,


который для них является ядом (напр., патогенные клостридии)
 факультативные – могут расти и размножаться как в присутствии кислорода
воздуха, так и без него

Посевы на анаэробную микрофлору производят в строго анаэробных


условиях.
Для культивирования анаэробов, помимо соответствующих питательных сред,
необходимо создать бескислородные условия среды. Методов культивирования
анаэробных микробов существует много. По принципам, положенным в основу этих
методов, их можно разделить на химические, физические и биологические.

Химические методы.
1.  Прибор Омелянского — для поглощения кислорода используется пирогаллол.
2.  Среда Вильсон — Блера. Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид
железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-
кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа,
образуют осадок черного цвета -сернистое железо.
Физические способы.
1.Удаление воздуха из питательных сред перед засевом кипячением в водяной бане
в течение 15 минут и последующим быстрым охлаждением до 45—50°. Для того
чтобы не дать возможности воздуху вновь проникнуть в среду, пробирки запаивают,
либо поверхность среды заливают стерильным парафиновым маслом.
2.Получение изолированных колоний в глубоких слоях среды по способу Виньяля.
Метод Виньяль-Вайона основан на том, что исследуемый материал разводят в
расплавленном до 45 °С сахарном МПА. Затем из каждой пробирки быстро
насасывают агар в стерильную пастеровскую пипетку. Тонкий конец пипетки
запаивают. Запаянные пипетки помещают в термостат в стеклянном цилиндре. В
зависимости от исходной концентрации в той или иной пипетке через 2-3 суток
после посева можно наблюдать образование изолированных колоний. При
необходимости исследовать колонию, трубку надпиливают и разламывают, а
столбик агара выдавливают в чашку Петри и извлекают колонии
бактериологической петлей
.3.Удаление воздуха (а следовательно, и кислорода) из среды механическим путем.
Для этого пользуются особыми приборами — анаэростатами (газ-пак)
4. Получить изолированные колонии анаэробов можно, используя метод
Перетца. Для этого в чашки Петри помещают стеклянные палочки или спички и на
них укладывают стеклянные пластинки размером 6x6 см. Исследуемый материал
разводят расплавленным и остуженным сахарным МПА. Содержимое пробирок
быстро перемешивают и выливают в чашки таким образом, чтобы агар заполнил
пространство между стеклянной пластинкой и дном чашки. Толщина агарового слоя
под стеклом должна быть равна 1-2 мм. Посевы инкубируют в термостате при 37°С.
Через 18 ч под пластинкой вырастают колонии анаэробов. 
5. Метод Битнера. К крушке чашки Петри с посевом исследуемого материала
прикрепляют пакет из фильтровальной бумаги, чашку герметизируют при помощи
парафина. Кислород поглощается
6. Аппарат Киппа — замена воздуха индифферентным газом (водородом).
Биологические методы.
Метод Фортнера. Чашку Петри с толстым слоем агара делят на 2 половины на
одну половину засевают облигатный аэроб — «чудесную» палочку, на другую
половину чашки засевают исследуемую анаэробную культуру. Чашку заливают
растопленным парафином. Через 24 — 48 часов в чашке вырастают аэробы, затем,
когда запас кислорода исчерпывается, начинают размножаться анаэробы.

Питательные среды для выращивания анаэробов – сахарные, с добавлением


органических веществ, сульфатов, карбонатов:
1. Среда Китта-Тароцци – питательный бульон + 0,5% глюкозы + кусочки
печени или мясного фарша
2. Ср. Вильсона-Блера (железосульфитный агар) – питательный
агар+глюкоза+сульфит натрия+хлорид железа(2)
3. Ср. Цейсслера – мясопептонный агар+глюкоза+кровь дифибринированная
4. Тиогликолевый бульон с гемином

13. Особенности анаболизма у разных групп микробов. Способы поступления


питательных веществ в клетку, классификация микробов по этому принципу.

Под питанием понимают процессы поступления и выведения питательных веществ


в клетку и из клетки. Питание в первую очередь обеспечивает размножение и
метаболизм клетки.
Среди необходимых питательных веществ выделяют органогены – это восемь
химических элементов, концентрация которых в бактериальной клетке превосходит
10—4 моль. К ним относят углерод, кислород, водород, азот, фосфор, калий,
магний, кальций.
Вода. Значение воды в жизнедеятельности клетки велико. Все вещества
поступают в клетку с водой, с ней же удаляются продукты обмена. Вода в
микробной клетке находится в свободном состоянии как самостоятельное
соединение, но большая часть ее связана с различными химическими
компонентами клетки (белками, углеводами, липидами) и входит в состав
клеточных структур.
Свободная вода принимает участие в химических реакциях, протекающих в
клетке, является растворителем различных химических соединений, а также
служит дисперсной средой для коллоидов. Содержание свободной воды в клетке
может изменяться в зависимости от условий внешней среды, физиологического
состояния клетки, ее возраста. Так, у споровых форм бактерий значительно
меньше воды, чем у вегетативных клеток. Наибольшее количество воды
отмечается у капсульных бактерий.
Белки (50-80% сухого вещества) определяют важнейшие биологические
свойства микроорганизмов. Это простые белки - протеины и сложные - протеиды.
Большое значение в жизнедеятельности клетки имеют нуклеопротеиды -
соединение белка с нуклеиновыми кислотами (ДНК и РНК). Кроме
нуклеопротеидов, в микробной клетке содержатся в незначительных количествах
липопротеиды, гликопротеиды, хромопротеиды.
Белки распределены в цитоплазме, нуклеоиде, они входят в состав структуры
клеточной стенки. К белкам принадлежат ферменты, многие токсины (яды
микроорганизмов).
Видовая специфичность микроорганизмов зависит от количественного и
качественного состава белковых веществ.
Нуклеиновые кислоты в микробной клетке выполняют те же функции, что и
в клетках животного происхождения. ДНК содержится в ядре (нуклеоиде) и
обусловливает генетические свойства микроорганизмов. РНК принимает участие
в биосинтезе клеточных белков, содержится в ядре и цитоплазме. Общее
количество нуклеиновых кислот колеблется от 10 до 30% сухого вещества
микробной клетки и зависит от ее вида и возраста.
Углеводы (12-18% сухого вещества) используются микробной клеткой в
качестве источника энергии и углерода. Из них состоят многие структурные
компоненты клетки (клеточная оболочка, капсула и другие). Углеводы входят
также в состав тейхоевой кислоты, характерной для грамположительных
бактерий.
Клетки микроорганизмов содержат простые (моно- и дисахариды) и
высокомолекулярные (полисахариды) углеводы. У ряда бактерий могут быть
включения, по химическому составу напоминающие гликоген и крахмал, они
играют роль запасных питательных веществ в клетке. Углеводный состав
различен у разных видов микроорганизмов и зависит от их возраста и условий
развития.
Липиды (0,2-40% сухого вещества) являются необходимыми компонентами
цитоплазматической мембраны и клеточной стенки, они участвуют в
энергетическом обмене. В некоторых микробных клетках липиды выполняют
роль запасных веществ.
Липиды состоят в основном из нейтральных жиров, жирных кислот,
фосфолипидов. Общее количество их зависит от возраста и вида микроорганизма.
Например, у микобактерий туберкулеза количество липидов достигает 40%, что
обусловливает устойчивость этих бактерий к воздействию факторов внешней
среды.
В клетках микроорганизмов липиды могут быть связаны с углеводами и
белками, составляя сложный комплекс, определяющий токсические свойства
микроорганизмов.
Минеральные вещества - фосфор, натрий, калий, магний, сера, железо, хлор
и другие - в среднем составляют 2-14% сухого вещества.
Фосфор входит в состав нуклеиновых кислот, фосфолипидов, многих
ферментов, а также АТФ (аденозинтрифосфорной кислоты), которая является
аккумулятором энергии в клетке. Натрий участвует в поддержании
осмотического давления в клетке. Железо содержится в дыхательных ферментах.
Магний входит в состав рибонуклеата магния, который локализован на
поверхности грамположительных бактерий.
Для развития микроорганизмов необходимы микроэлементы, содержащиеся в
клетке в очень малых количествах. К ним относят кобальт, марганец, медь, хром,
цинк, молибден и многие другие. Микроэлементы участвуют в синтезе
некоторых ферментов и активируют их. Соотношение отдельных химических
элементов в микробной клетке может колебаться в зависимости от вида
микроорганизма, состава питательной среды, характера обмена и условий
существования во внешней среде.

Кроме органогенов, необходимы микроэлементы. Они обеспечивают активность


ферментов. Это цинк, марганец, молибден, кобальт, медь, никель, вольфрам, натрий,
хлор.
В зависимости от источника получения углерода бактерии делят на:
1) аутотрофы (используют неорганические вещества – СО2);
2) гетеротрофы;
3) метатрофы (используют органические вещества неживой природы);
4) паратрофы (используют органические вещества живой природы).
Факторами роста бактерий являются витамины, аминокислоты, пуриновые и
пиримидиновые основания, присутствие которых ускоряет рост.
Среди бактерий выделяют:
1) прототрофы (способны сами синтезировать необходимые вещества из
низкоорганизованных);
2) ауксотрофы (являются мутантами прототрофов, потерявшими гены;
ответственны за синтез некоторых веществ – витаминов, аминокислот, поэтому
нуждаются в этих веществах в готовом виде).
Микроорганизмы ассимилируют питательные вещества в виде небольших молекул,
поэтому белки, полисахариды и другие биополимеры могут служить источниками
питания только после расщепления их экзоферментами до более простых
соединений.
Пути поступления метаболитов и ионов в микробную клетку.
1. Пассивный транспорт (без энергетических затрат):
1) простая диффузия;
2) облегченная диффузия (по градиенту концентрации, с помощью белков-
переносчиков).
2. Активный транспорт (с затратой энергии, против градиента концентрации; при
этом происходит взаимодействие субстрата с белком-переносчиком на поверхности
цитоплазматической мембраны).
3. Транслокация. Встречаются модифицированные варианты активного
транспорта – перенос химических групп. В роли белков-переносчиков
выступают фосфорилированные ферменты, поэтому субстрат переносится в
фосфорилированной форме. Такой перенос химической группы называется
транслокацией.
По источникам азота:
• азотфиксирующие микроорганизмы — способны усваивать молекулярный азот
атмосферы;
• микроорганизмы, ассимилирующие неорганический азот:
• солей аммония — аммонифицирующие;
• нитратов — нитратредуцирующие;
• нитритов — нитритредуцирующие.
Однако большинство патогенных для человека микроорганизмов способны
ассимилировать только азот органических соединений.
Источники азота. В зависимости от источника азота все микроорганизмы можно
разделить также на две группы:аминоавтотрофы и аминогетеротрофы.
Аминоавтотрофы усваивают азот из неорганических источников. Они
представлены двумя подгруппами: азотфиксирующие и нитритно-нитратные
микроорганизмы. Азотфиксирующая подгруппа способна усваивать молекулярный
азот воздуха (актиномицеты, азотфиксирующие - свободноживущие и
симбиотические). Нитритно - нитратные микроорганизмы окисляют аммиак до
солей азотистой и азотной кислот и усваивают эти окисленные формы азота.
Аминогетеротрофы используют органические источники азота. К ним относятся
дезаминирующие, пептонные, протеолитические и паротрофные микроорганизмы.
Дезаминирующие микроорганизмы могут усваивать только  аминокислоты
(некоторые патогенные бактерии). Пептонные бактерии потребляют только
органические соединения типа пептонов, так как не способны расщеплять цельную
белковую молекулу (молочнокислые, пропионовокислые бактерии, энтерококки,
микрококки и кишечные палочки). Протеолитические микроорганизмы  или
гнилостные в качестве источника азота используют натуральные белки, которые
предварительно разлагаются их экзоферментами (гнилостные бактерии,
актиномицеты, плесени). Паротрофные микроорганизмы в качестве источника азота
используют белковые вещества живого организма (патогенные).
Установить резкую грань между автотрофами и гетеротрофами не всегда удается.
Некоторые патогенные микроорганизмы во внешней среде ведут сапрофитный
образ жизни, и наоборот, некоторые сапрофиты в зависимости от состояния
микроорганизма могут вызвать заболевания.
Степень гетеротрофности у различных бактерий неодинакова. Среди бактерий
выделяют сапрофиты (от греч. sapros - гнилой, phyton - растение), которые
питаются мертвым органическим материалом и независимы от других организмов,
и паразиты (от греч. parasites - нахлебник) - гетеротрофные микроорганизмы,
получающие питательные вещества от макроорганизма.

Среди паразитов различают облигатные и факультативные. Облигатные паразиты


полностью лишены возможности жить вне клеток макроорганизма. К ним относятся
представители родов Rickettsia, Coxiella, Ehrlichia, Chlamydia и др.,
размножающиеся только внутри клеток
макроорганизма. Факультативные паразиты могут жить и без хозяина и
размножаться, так же как и сапрофиты, на питательных средах in vitro, т.е. вне
организма.
Минеральные элементы. Микробная клетка нуждается в минеральных веществах.
Потребность в них невелика, но без некоторых элементов невозможны рост и
развитие микрооргнизмов. Калий активизирует ферментативные процессы, ускоряет
течение физиологических процессов. Магний входит в состав хлорофилла у зеленых
и пурпурных серобактерий, активизирует карбоксилазу, пептидазу и другие
ферменты. Фосфор входит в состав нуклеиновых кислот, принимает активное
участие в процессах дыхания (окисления). Сера – один из компонентов белков ,
входит в состав некоторых аминокислот. Железо необходимо в малых количествах,
входит в состав дыхательных ферментов, ускоряет процессы окисления.
Микроэлементы нужны микробной клетке еще в меньших количествах, но их
недостаток ведет к нарушению нормального роста и развития. Молибден, бор,
марганец, кобальт, медь и др. микроэлементы являются компонентами многих
ферментов и  витаминов. Для получения этих химических элементов в питательные
среды для  микроорганизмов вводят  минеральные соединения.
Факторы роста. Активаторы биологических процессов по своему действию
являются витаминами и витаминоподобными соединениями. Одни микроорганизмы
должны получать витамины в готовом виде, а другие синтезируют витамины в
количествах, значительно превышающих собственные потребности. На этом
основан микробиологический путь получения рибофлавина (витамин В2),
каротиноидов (провитамин А), эргостерина (провитамин Д).
Культивирование микробов в условиях лабораторий осуществляется на
искусственных питательных средах. Для гетеротрофов среды должны содержать
экстракты из продуктов животного и растительного происхождения  с добавлением
пептона. Пептон - универсальный источник азота, являющийся продуктом
неполного расщепления белков посредством фермента пепсина в кислой среде. В
отличие от животных многие микробы могут использовать самые различные
субстраты в качестве продуктов питания. Они растут на бумаге, дереве, коже,
резине и т.д. Одни из них для своей жизнедеятельности используют парафиновые
углеводороды, нефть, керосин; а другие - элективные (избирательные, селективные)
среды,  имеющие  определенный состав.

14. Физиологическое значение экзоферментов микробов. Функциональное


значение продуктов биосинтеза в микробных клетках: белков, липидов,
полисахаридов, нуклеиновых кислот.

Экзоферменты играют большую роль в обеспечении бактериальной клетки


доступными для проникновения внутрь источниками углерода и энергии.
Большинство гидролаз являются экзоферментами, которые, выделяясь в
окружающую среду, расщепляют крупные молекулы пептидов, полисахаридов,
липидов до мономеров и димеров, способных проникнуть внутрь клетки. Ряд
экзоферментов, например гиалуронидаза, коллагеназа, являются ферментами
агрессии. Некоторые ферменты локализованы в периплазматическом пространстве
бактериальной клетки. Они участвуют в процессах переноса веществ в
бактериальную клетку. Ферментативный спектр является таксономическим
признаком, характерным для семейства, рода и в некоторых случаях для видов.
Поэтому определением спектра ферментативной активности пользуются при
установлении таксономического положения бактерий. Наличие экзоферментов
можно определить при помощи дифференциально-диагностических сред. Для
идентификации бактерий разработаны специальные тест-системы, состоящие из
набора дифференциально-диагностических сред.
ферменты агрессии – факторы вирулентности патогенных бактерий:

- гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту(посев в пробирку с


субстратом, содержащим гиалуроновую кислоту, после внесения сгустка
уксусной кислоты не должно быть сгустка)

- дезоксирибонуклеаза – расщепляет ДНК клеток;

- фибринолизин – расщепляет коллаген(посев на сгусток крови, появление


лизиса)

- плазмокоагулаза – свертывает плазму крови(посев в цитратную плазму, наличие


коагуляции)

- нейраминидаза – расщепляет нейраминовую кислоту;

- лецитовителлаза – расщепляет лецитин (посев на желточную среду, появление


участков помутнения)

-антифагин – токсическое действие на фагоциты

Функциональное значение продуктов биосинтеза в микробных клетках


1)Белкии определяют важнейшие биологические свойства микроорганизмов. Это
простые белки – протеины и сложные белки – протеиды. Большое значение в
жизнедеятельности клетки имеют нуклеопротеиды – соединение белка с
нуклеиновыми кислотами (ДНК и РНК). Кроме нуклеопротеидов в микробной
клетке содержатся в незначительных количествах липопротеиды, гликопротеиды,
хромопротеиды.
Белки распределены в цитоплазме, нуклеоиде. Οʜᴎ входят в состав структуры
клеточной стенки. Белковую природу имеют ферменты, многие токсины (яды
микроорганизмов).
От количественного и качественного состава белковых веществ зависит видовая
специфичность микроорганизмов.
2)Нуклеиновые кислоты в микробной клетке выполняют те же функции, что и в
клетках животного происхождения.
ДНК содержится в нуклеоиде и обуславливает генетические свойства
микроорганизмов. РНК принимает участие в биосинтезе клеточных белков,
cодержится в ядерной субстанции и в цитоплазме.
3)Углеводы используются микробной клеткой в качестве источника энергии и
углерода. Из них состоят многие структурные компоненты клетки (клеточная
оболочка, капсула и пр.).
Углеводы входят также в состав тейхоевой кислоты, характерной для
грамположительных бактерий.
Клетки микроорганизмов содержат простые (моно- и дисахариды) и
высокомолекулярные (полисахариды) углеводы. У некоторых бактерий бывают
включения, напоминающие по химическому составу гликоген и крахмал, играющих
роль запасных веществ в клетке.
4)Липиды, являются необходимыми компонентами цитоплазматической мембраны
и клеточной стенки. Οʜᴎ участвуют в энергетическом обмене. В некоторых
микробных клетках липиды выполняют роль запасных веществ.
Липиды состоят в основном из нейтральных жиров, жирных кислот, фосфолипидов.
Общее количество их зависит от возраста и вида микроорганизмов. В клетках
микроорганизмов липиды бывают связаны с углеводами и белками, составляя
сложный комплекс, определяющий токсические свойства микроорганизмов.

15. Особенности метаболизма у прокариот – внутриклеточных паразитов.


Особенности энергетического обмена у хламидий. Особенности
конструктивного обмена у риккетсий и микоплазм.

А. Риккетсии Окисление осуществляется по циклу Кребса с образованием


цитрата, CO2 и трансаминированием глютаминовой кислоты в аспарагиновую,
что свидетельствует об их энергетической активности. Вместе с тем, облигатный
характер внутриклеточного паразитизма риккетсий требует для их развития
веществ и энзимов, содержащихся в клетках хозяина.

Б. Хламидии по той же причине, что и риккетсии, являются облигатными


внутриклеточными паразитами, но, кроме этого они еще и не способны
самостоятельно синтезировать АТФ – их часто называют «энергетическими
паразитами».

В. Патогенные микоплазмы - «мембранные паразиты». У микоплазм нет


клеточной стенки. Они не способны синтезировать предшественников
пептидогликана (мураминовую и диаминопимелиновую кислоты) и окружены
лишь тонкой трехслойной мембраной. Большинство видов микоплазм для роста
нуждаются в стеролах и включают их непосредственно в свою трехслойную
мембрану, которая состоит главным образом из липидов и белков. Поэтому
микоплазмы являются паразитами мембран эукариотных клеток и способны
длительное время персистировать на мембранах различных клеток человека,
млекопитающих, птиц, рыб, моллюсков, насекомых и растений.

16. Дисбактериоз. Причины развития. Лабораторная диагностика. Эубиотики в


лечении дисбактериоза.

Виды микрофлоры организма


1. Резидентная микрофлора – постоянная, индигенная, аутохтонная
2. Транзиторная – непостоянная, аллохтонная
 
Функция микрофлоры
1. Колонизационная резистентность – нормальная микрофлора, предотвращает
колонизацию биотопов организма посторонними в т.ч. патогенными
микроорганизмами.
2. Переваривание и детоксикация экзогенных субстратов и метаболитов
3. Иммунизация организма
4. Синтез витаминов, аминокислот, белков
5. Участие в обмене желчных кислот, мочевой кислоты, липидов, углеводов,
стероидов
6. Антиканцерогенное действие
Отрицательная роль микрофлоры
1. Условно-патогенные представители нормальной микрофлоры могут стать
источником эндогенной инфекции. В норме эти микроорганизмы неприятностей не
вызывают, а при ослабление иммунной системы, например стафилакок – может
вызвать гнойную инфекцию. Кишечная палочка – в кишечнике, а если окажется в
мочевом пузыре – цистит, а если попадет в рану – гнойная инфекция.
1. Под влиянием микрофлоры может увеличиваться выделение гистамина –
аллергические состояния
1. Нормофлора – хранилище и источник плазмид антибиотикорезистентности.
 
Основные биотопы организма –
1. Заселяемые биотопы – в этих биотопах бактерии живут, размножаются и
выполняют определенные функции.
2. Стерильные биотопы – в этих биотопах в норме бактерии отсутствуют,
выделение бактерий из них имеет диагностическое значение.

Состояния, развивающиеся в результате утраты нормальных функций


микрофлоры, называютсядисбактериозом и дисбиозом.

При дисбактериозе происходят стойкие количественные и качественные изменения


бактерий, входящих в состав нормальной микрофлоры. При дисбиозе изменения
происходят и среди других групп микроорганизмов (вирусов, грибов и др.). Дисбиоз
и дисбактериоз могут приводить к эндогенным инфекциями.
Дисбиозы классифицируют по этиологии (грибковый, стафилококковый,
протейный и др.) и по локализации (дисбиоз рта, кишки, влагалища и т. д.).
Изменения в составе и функциях нормальной микрофлоры сопровождаются
различными нарушениями: развитием инфекций, диарей, запоров, синдрома
мальабсорбции, гастритов, колитов, язвенной болезни, злокачественных
новообразований, аллергий, мочекаменной болезни, гипо- и гиперхолестеринемии,
гипо- и гипертензии, кариеса, артрита, поражений печени и др.
Нарушения нормальной микрофлоры человека определяются следующим
образом:
1. Выявление видового и количественного состава представителей микробиоценоза
определенного биотопа (кишки, рта, влагалища, кожи и т. д.) — путем высева из
разведений исследуемого материала или путем отпечатков, смыва на
соответствующие питательные среды (среда Блаурокка — для бифидобактерий;
среда МРС-2 — для лактобактерий; анаэробный кровяной агар — для бактероидов;
среда Левина или Эндо — для энтеробактерий; желчно-кровяной агар — для
энтерококков; кровяной агар — для стрептококков и гемофилов; мясопептонный
агар с фурагином — для синегнойной палочки, среда Сабуро — для грибов и др.).
2. Определение в исследуемом материале микробных метаболитов — маркеров
дисбио-за (жирных кислот, гидроксижирных кислот, жирнокислотных альдегидов,
ферментов и др.). Например, обнаружение в фекалиях бета-аспартил-глицина и
бета-аспартиллизина свидетельствует о нарушении кишечного микробиоценоза, так
как в норме эти дипеп-тиды метаболизируются кишечной анаэробной микрофлорой.
Для восстановления нормальной микрофлоры: а) проводят селективную деконтами-
нацию; б) назначают препараты пробиотиков (эубиотиков), полученные из
лиофильно высушенных живых бактерий — представителей нормальной
микрофлоры кишечника — бифидобактерий (бифидумбактерин), кишечной палочки
(колибактерин), лактобактерий (лактобактерин) и др.

Нормальная микрофлора выстилает слизистые оболочки человека. Микробные


клетки выделяют полисахариды (высокомолекулярные углеводы), слизистая
оболочка выделяет муцин (слизь, белковые вещества) и из этой смеси образуется
тонкая биоплёнка, которая покрывает сверху сотни и тысячи микроколоний клеток
нормальной флоры.

Эта плёнка толщиной не более  0,5 мм создаёт защищает микроорганизмы от 


химического и физического воздействия. Но если факторы самозащиты
микроорганизмов превышают компенсаторные возможности человеческого
организма, то могут возникнуть нарушения, с развитием патологических состояний
и неблагоприятными последствиями. К таким последствиям можно отнести
 — формирование устойчивых к антибиотикам штаммов микроорганизмов;
 — образование новых микробных сообществ и изменение физико-
химического состояния биотопов (кишечника, кожи и др.);
 — увеличение спектра микроорганизмов,  которые вовлекаются в
инфекционные процессы и расширение спектра патологических состояний
человека;
 — рост инфекций различной локализации; появление лиц с врожденной и
приобретенной сниженной устойчивостью к возбудителям инфекционных
болезней;
 — снижение эффективности химиотерапии и химиопрофилактики,
гормональных противозачаточных средств.
тонкий кишечник — Bifidobacterium (Бифидобактерии), Clostridium
(Клостридии), Eubacterium (Эубактерии), Lactobacillus (Лактобактерии),
Peptostreptococcus (Пептострептококки), Veillonella (Вейлонелла);
толстый кишечник —Bacillus (Бациллы), Bacteroides (Бактериоиды),
Bifidobacterium (Бифидобактерии), Campylobacter (Кампилобактер),
Clostridium (Клостридии), Escherichia (Эшерихия), Eubacterium (Эубактерии),
Fusobacterium (Фузобактерии), Lactobacillus (Лактобактерии), Peptococcus
(Пептококки), Peptostreptoccocus (Пептострептококки, Spirochaeta
(Спирохета), Streptococcus (Стрептококки), Veillonella (Вейлонелла),

Факторы, влияющие на состояние нормальной микрофлоры.


1. Эндогенные:
1) секреторная функция организма;
2) гормональный фон;
3) кислотно-основное состояние.
2. Экзогенные условия жизни (климатические, бытовые, экологические).

Микробиологическими показателями дисбиоза служат:


1) снижение численности одного или нескольких постоянных видов;
2) потеря бактериями тех или иных признаков или приобретение новых;
3) повышение численности транзиторных видов;
4) появление новых, несвойственных данному биотопу видов;
5) ослабление антагонистической активности нормальной микрофлоры.

Причинами развития дисбактериоза могут быть:


1) антибиотико– и химиотерапия;
2) тяжелые инфекции;
3) тяжелые соматические заболевания;
4) гормонотерапия;
5) лучевые воздействия;
6) токсические факторы;
7) дефицит витаминов.

В зависимости от выраженности этих проявлений различают несколько фаз


дисбактериоза:
1) компенсированную, когда дисбактериоз не сопровождается какими-либо
клиническими проявлениями;
2) субкомпенсированную, когда в результате дисбаланса нормальной микрофлоры
возникают локальные воспалительные изменения;
3) декомпенсированную, при которой происходит генерализация процесса с
возникновением метастатических воспалительных очагов.
Лабораторная диагностика дисбактериоза
увеличено или уменьшено
общее количество
кишечных палочек.
Кишечные палочки с
атипичными свойствами
отсутствуют. Количество
бифидобактерий и
лактобацилл не изменено.

незначительно снижено
количество бифидобактерий и
лактобацилл. Наблюдаются
количественные и
качественные (появление
форм с атипичными
биологическими свойствами)
изменения кишечных палочек.
Высеваются в незначительном
количестве условно-
патогеннные кишечные
микроорганизмы.

значительное снижение количества


бифидобактерий (105-106) ,
снижение лактобацилл, резкое
изменениетипичных свойств
кишечных палочек ( преобладание
гемолитических, лактозонегативных
форм). Увеличение количества
условно-патогенных бактерий с
патогенными свойствами и
дрожжеподобных грибов (рода
Кандида, Геотрихум и др.).

резкое снижение или отсутствие


бифидобактерий, значительное
уменьшение количества
лактобацилл, резкое уменьшение
количества или отсутствие
кишечных палочек с типичными
свойствами, значительное
возрастание количества как
облигатных, так и факультативных
видов (в норме не встречающихся)
кишечных бактерий и
дрожжеподобных грибов с
патогенными
свойствами.Выявляются патогенные
бактериии (сальмонеллы, шигеллы,
иерсинии).

1.  Бактериологический анализ (определение состава фекальной микрофлоры,


отражающей микробный состав лишь дистальных отделов кишечника —
наиболее доступный метод, однако недостаточно точный).

2.  Биохимический экспресс — метод определения протеолитической


активности супернатантов фекалий.
3.  Высоковольтный электрофорез на бумаге для обнаружения β-
аспартилглицина, β-аспартиллизина, β-аланина, 5-аминовалериановой и γ-
аминомасляной кислот и др.

4.  Ионная хроматография, определяющая в фекалиях биогенные амины,


желчные и карбоновые кислоты, ароматические соединения.

5.  Газожидкостная хроматография для определения в фекалиях летучих


жирных кислот.

6.  Микроскопия фекального мазка.

Основной метод – бактериологическое исследование. При этом в оценке его


результатов превалируют количественные показатели. Проводится не видовая
идентификация, а только до рода.
Посевы изучают на наличие патогенных микроорганизмов и на нарушение
соотношения различных видов микробов. Результаты исследования следует считать
объективными при анализе роста изолированных колоний в том случае, если можно
изучить морфологию и подсчитать количество колоний на чашку Пётри. После
идентификации проводят пересчёт содержания микроорганизмов каждого вида на 1
г исследуемого материала. При обнаружении патогенной микрофлоры необходимо
изучить ее чувствительность к антибактериальным препаратам и бактериофагам.
При определении чувствительности следует отдавать предпочтение антибиотикам
узкого спектра для возможно более направленного подавления патогенов. • К оценке
результатов следует подходить осторожно, поскольку состав кишечной микрофлоры
варьирует. Необходимо отличать истинный дисбактериоз от дисбактериаяьнъа
реакций {сдвиги в составе микрофлоры незначительны, либо кратковременны и не
требуют специфической коррекции). При истинном дисбактериозе нарушения
микробного ценоза обычно коррелируют с клиническими проявлениями, и их
нормализация достаточно длительна (20-30 сут). При оценке результатов следует
указать наличие или отсутствие патогенной микрофлоры и дать состав
присутствующих микроорганизмов.

Дополнительный метод – хроматография спектра жирных кислот в исследуемом


материале. Каждому роду соответствует свой спектр жирных кислот.

Повторные исследования при дисбактериозе. Следует отразить положительную или


отрицательную динамику изменения в составе микробных сообществ.

Эубиотики – это препараты, содержащие живые бактерициногенные штаммы


нормальной микрофлоры (колибактерин, бифидумбактерин, бификол и др.). В
отечественной практике широко применяют бактерийные препараты в виде
высушенных живых культур различных бактерий, например, коли-, лакто- и
бифидобактерины (содержащие соответственно Escherichia coli, виды Lactobacillus и
Bifidobacterium), бификол (содержащий | виды Bifidobacterium и Escherichia coli),
бактисубтил (культура Bacillus subtilis) и др.

Пробиотики – это вещества немикробного происхождения и продукты питания,


содержащие добавки, стимулирующие собственную нормальную микрофлору.
Стимулирующие вещества – олигосахариды, гидролизат казеина, муцин, молочная
сыворотка, лактоферин, пищевые волокна.

Лечение дисбактериозов должно быть комплексным и направленным в


основном:
• на выявление и устранение причин его развития;
• восстановление состава нормальной микрофлоры.

Наиболее логичной коррекиией состава микрофлоры при дисбак-териозе выглядит


заместительная терапия живыми бактериями, населяющими толстый кишечник. Она
проводится с помощью эубиотиков — препаратов, содержащих леофилизированные
живые штаммы микроорганизмов — представителей нормальной микрофлоры.
К наиболее известным в настоящее время такого рода препаратам относятся:
•бифидумбактерин;
•колибактерин;
•бификол (комбинированный препарат из 2 предыдущих);
•эубактерин;
•лактобактерин;
•бактисуптил;
•энтерол;
•бифи-форм (комбинированный препарат из бифидобактерий и энтерококков —
Enterococcus faecalis);
•линнекс;
•мутафлор;
•нормофлор;
• бифилакт и др.

По существующей классификации препараты для коррекции микрофлоры


кишечника можно разделить на 6 групп:
 I - препараты, содержащие монокультуры живых микроорганизмов
представителей нормальной микрофлоры кишечника;
 II - препараты, содержащие комплекс живых микроорганизмов;
 III - препараты, содержащие вещества, которые при оральном введении
стимулируют рост и размножение индигенной флоры, и прежде всего бифидо- и
лактобактерии;
 IV - препараты, содержащие монокультуры или комплекс микроорганизмов и
веществ, стимулирующих их приживление, рост и размножение;
 V - препараты, содержащие генноинженерные колонии микроорганизмов с
заданными характеристиками;
 VI - препараты, содержащие помимо микроорганизмов или средств,
стимулирующих их рост и размножение, другие соединения, влияющие на функции
клеток органов и тканей человека.
Положительное действие этих препаратов на организм связано с влиянием на
различные звенья функционирования микрофлоры кишечника:
 препараты обладают угнетающими свойствами по отношению к широкому
спектру болезнетворных и условно-болезнетворных микроорганизмов за счет
выработки антибактериальных веществ и конкуренции за лимитируемые
питательные вещества и места адгезии на клетках тканей слизистой кишечника:
 влияют на ферментативную и синтетическую активность кишечных
микроорганизмов;
 стимулируют иммунную систему всего организма.
Для того чтобы препараты-эубиотики могли оказать положительное влияние на
организм, прежде всего необходимо, чтобы содержащиеся в них представители
нормальной микрофлоры могли прижиться и заселить кишечник. Чтобы обеспечить
успешную колонизацию бактерий в кишечнике, необходимо сочетание целого ряда
благоприятных факторов: определенный вид и штамм микроорганизмов, рост
микроорганизмов и оптимальная диета. Высококачественные коммерческие
продукты, такие как кефир, содержат микроорганизмы, которые оказывают
благоприятный эффект, но являются транзитными и не заселяют кишечник, поэтому
ограничиваться потреблением подобных продуктов как источником улучшения
состояния микрофлоры кишечника не следует.

Препараты-эубиотики должны обладать способностью к выживанию и


жизнедеятельности в условиях кишечного микроокружения и сохранять
жизнеспособность бактерий в течение длительного срока хранения.

17. Принципы классификации вирусов. Типы и фазы взаимодействия вируса с


клеткой – хозяином.

Принципы классификации вирусов


1) тип нуклеиновой кислоты – ДНК или РНК;

2) их структура (однонитевая, двунитевая, линейная, кольцевая,


фрагментированная, нефрагментированная с повторяющимися и инвертированными
последовательностями);

3) структура, размеры, тип симметрии, число капсомеров;

4) наличие или отсутствие внешней оболочки (суперкапсида);

5) антигенная структура;

6) феномены генетических взаимодействий;

7) круг восприимчивых хозяев;

8) географическое распространение;
9) внутриядерная или цитоплазматическая локализация;

10) чувствительность к эфиру и детергентам;

11) путь передачи инфекции.

Классификация вирусов по Балтимору основывается на механизме


образования мРНК. Вирусы обязаны синтезировать мРНК из собственных
геномов для образования белков и репликации своей нуклеиновой кислоты, в
тоже время каждое семейство вирусов имеет собственный механизм
осуществления этого. Вирусные геномы могут быть одноцепоченые (оц) или
двухцепочечные (дц), ДНК- или РНК-содержащие, могут использовать или не
использовать обратную транскриптазу. Кроме того, одноцепочечные РНК-
вирусы могут иметь положительную (+) или отрицательную (-) цепь РНК в
составе своего генома.

Эта система включает в себя семь основных групп:

 (I) Вирусы, содержащие двуцепочечную ДНК и не имеющие РНК-стадии (к


примеру, герпесвирусы, поксвирусы, паповавирусы, мимивирус).
 (II) Вирусы, содержащие одноцепочечную молекулу ДНК (например,
парвовирусы). В этом случае ДНК всегда положительной полярности.
 (III) Вирусы, содержащие двуцепочечную РНК (например, ротавирусы).
 (IV) Вирусы, содержащие одноцепочечную молекулу РНК положительной
полярности (например, пикорнавирусы, флавивирусы).
 (V) Вирусы, содержащие одноцепочечную молекулу РНК негативной или
двойной полярности (например, ортомиксовирусы, филовирусы).
 (VI) Вирусы, содержащие одноцепочечную положительную молекулу РНК
и имеющие в своем жизненном цикле стадию синтеза ДНК на матрице
РНК, ретровирусы (например, ВИЧ).
 (VII) Вирусы, содержащие двуцепочечную ДНК и имеющие в своём
жизненном цикле стадию синтеза ДНК на матрице РНК, ретроидные
вирусы (например, вирус гепатита B).

Основные этапы взаимодействия вируса с клеткой хозяина.

1.Адсорбция- пусковой механизм, связанный со


взаимодействием специфических рецепторов вируса и хозяина.
2.Проникновение- путем слияния суперкапсида с мембраной клетки или путем
эндоцитоза (пиноцитоза).
3.Освобождение нуклеиновых кислот- “раздевание” нуклеокапсида и
активация нуклеиновой кислоты.
4.Синтез нуклеиновых кислот и вирусных белков, т.е. подчинение систем
клетки хозяина и их работа на воспроизводство вируса.
5.Сборка вирионов- ассоциация реплицированных копий вирусной нуклеиновой
кислоты с капсидным белком.
6.Выход вирусных частиц из клетки, приобретения суперкапсида оболочечными
вирусами.

Исходы взаимодействия вирусов с клеткой хозяина.

1.Абортивный процесс- когда клетки освобождаются от вируса:


- при инфицировании дефектным вирусом, для репликации которого нужен
вирус- помощник, самостоятельная репликация этих вирусов невозможна ( так
называемые вирусоиды). Например, вирус дельта (D) гепатита может
реплицироваться только при наличии вируса гепатита B, его Hbs — антигена,
аденоассоциированный вирус- в присутствии аденовируса);
- при инфицировании вирусом генетически нечувствительных к нему клеток;
- при заражении чувствительных клеток вирусом в неразрешающих условиях.

2.Продуктивный процесс- репликация (продукция) вирусов:


- гибель (лизис) клеток (цитопатический эффект)- результат интенсивного
размножения и формирования большого количества вирусных частиц — характерный
результат продуктивного процесса, вызванного вирусами с высокой
цитопатогенностью. Цитопатический эффект действия на клеточные культуры для
многих вирусов носит достаточно узнаваемый специфический характер;
- стабильное взаимодействие, не приводящее к гибели клетки (персистирующие
и латентные инфекции) — так называемая вирусная трансформация клетки.
3.Интегративный процесс- интеграция вирусного генома с геномом клетки
хозяина. Это особый вариант продуктивного процесса по типу стабильного
взаимодействия. Вирус реплицируется вместе с геномом клетки хозяина и может
длительно находиться в латентном состоянии. Встраиваться в ДНК- геном хозяина
могут только ДНК- вирусы (принцип “ДНК- в ДНК”). Единственные РНК- вирусы,
способные интегрироваться в геном клетки хозяина- ретровирусы, имеют для этого
специальный механизм. Особенность их репродукции- синтез ДНК провируса на
основе геномной РНК с помощью фермента обратной транскриптазы с последующим
встраиванием ДНК в геном хозяина.

18. Культивирование микробов на искусственных питательных средах.


Свойства и состав искусственных питательных сред. Классификация
искусственных питательных сред по назначению.

Питательной средой
в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения
сложного или простого состава, которые применяются для размножения
микроорганизмов, их культивирования и сохранения в лабораторных или
промышленных условиях.

ПРИНЦИПЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ


Микроорганизмы (за исключением облигатных внутриклеточных паразитов —
риккетсий, хламидий, вирусов и простейших) культивируют, как правило, на
искусственных питательных средах. В зависимости от пищевых потребностей того
или другого вида питательные среды должны содержать соответствующие
исходные вещества, необходимые для пластического и энергетического
метаболизма.
Выделение микроорганизмов из различных материалов и получение их культур
широко используется в лабораторной практике для микробиологической
диагностики инфекционных заболеваний, в научно-исследовательской работе и в
микробиологическом производстве вакцин, антибиотиков и других биоло-
гически    активных   продуктов    микробной    жизнедеятельности.
Условия культивирования также зависят от свойств соответствующих
микроорганизмов. Большинство патогенных микробов выращивают на питательных
средах при температуре 37 °С в течение 1—2 сут. Однако некоторые из них
нуждаются в более длительных сроках. Например, бактерии коклюша — в 2—3 сут,
а микобактерии туберкулеза — в 3—4 нед.
Для стимуляции процессов роста и размножения аэробных микробов, а также
сокращения сроков их выращивания используют метод глубинного
культивирования, который заключается в непрерывном аэрировании и
перемешивании питательной среды. Глубинный метод нашел широкое применение
в биотехнологии.
Для культивирования анаэробов применяют особые методы, сущность которых
заключается в удалении воздуха или замены его инертными газами, в
герметизированных термостатах — анаэростатах. Анаэробов выращивают на
питательных средах, содержащих редуцирующие вещества (глюкозу,
муравьинокис-лый натрий и др.). уменьшающие окислительно-восстановительный
потенциал.

Требования, предъявляемые к средам


1) быть питательными, т. е. содержать в легко усвояемом виде все вещества,
необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. Ими
являются источники органогенов и минеральных (неорганических) веществ,
включая микроэлементы. Минеральные вещества не только входят в структуру
клетки и активизируют ферменты, но и определяют физико-химические свойства
сред (осмотическое давление, рН и др.). При культивировании ряда
микроорганизмов в среды вносят факторы роста - витамины, некоторые
аминокислоты, которые клетка не может синтезировать;
2) Микроорганизмы, как все живые существа, нуждаются в большом
количестве воды.
3) иметь оптимальную концентрацию водородных ионов - рН, так как
только при оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки,
микроорганизмы могут усваивать питательные вещества.
Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (рН
7,2-7,4). Исключение составляют холерный вибрион - его оптимум находится в
щелочной зоне (рН 8,5-9,0) и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в
слабокислой реакции (рН 6,2-6,8).
Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их
жизнедеятельности не изменили рН, среды должны обладать буферностью, т. е.
содержать вещества, нейтрализующие продукты; обмена;
4) быть изотоничными для микробной клетки; т. е. осмотическое давление в
среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства
микроорганизмов оптимальна среда, соответствующая 0,5% раствору натрия
хлорида;
5) быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту
изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды
(состав, рН и др.);
6) плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для
микроорганизмов консистенцию;
7) обладать определенным окислительно-восстановительным
потенциалом, т. е. соотношением веществ, отдающих и принимающих
электроны, выражаемым индексом RH2. Этот потенциал показывает насыщение
среды кислородом. Для одних микроорганизмов нужен высокий потенциал, для
других - низкий. Например, анаэробы размножаются при RH2 не выше 5, а
аэробы - при RH2 не ниже 10. Окислительно-восстановительный потенциал
большинства сред удовлетворяет требованиям к нему аэробов и факультативных
анаэробов;
8) быть по возможности унифицированным, т. е. содержать постоянные
количества отдельных ингредиентов. Так, среды для культивирования
большинства патогенных бактерий должны содержать 0,8-1,2 г/л аминного азота
NH2, т. е. суммарного азота аминогрупп аминокислот и низших полипептидов;
2,5-3,0 г/л общего азота N; 0,5% хлоридов в пересчете на натрия хлорид; 1%
пептона.
9)Желательно, чтобы среды были прозрачными - удобнее следить за ростом
культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.
 

Классификация сред
Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов
микроорганизмов неодинакова. Это исключает возможность создания
универсальной среды. Кроме того, на выбор той или иной среды влияют цели
исследования.
В настоящее время предложено огромное количество сред* в основу
классификации которых положены следующие признаки.
1. Исходные компоненты. По исходным компонентам различают натуральные и
синтетические среды. Натуральные среды готовят из продуктов животного и
растительного происхождения. В настоящее; время разработаны среды, в которых
ценные пищевые продукты (мясо и др.) заменены непищевыми: костной и рыбной
мукой, кормовыми дрожжами, сгустками крови и др. Несмотря на то что состав
питательных сред из натуральных продуктов очень сложен и меняется в
зависимости от исходного сырья, эти среды нашли широкое применение.
Синтетические среды готовят из определенных химически чистых органических и
неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и
растворенных в дважды дистиллированной воде. Важное преимущество этих сред в
том, что состав их постоянен (известно, сколько и какие вещества в них входят),
поэтому эти среды легко воспроизводимы. Искусственные среды разделяют на
животные [например, мясопептонный агар (МПА) или мясопептонный бульон
(МПБ)] и растительные (например, настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей
или фруктов, пивное сусло и др.).
2. Консистенция (степень плотности). Среды бывают жидкие, плотные и
полужидкие. Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым для
получения среды нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар или
желатин.
Агар-агар - полисахарид, получаемый из определенных сортов морских
водорослей. Он не является для микроорганизмов питательным веществом и
служит только для уплотнения среды. В воде агар плавится при 80-100° С,
застывает при 40-45° С.
Желатин - белок животного происхождения. При 25-30° С желатиновые среды
плавятся, поэтому культуры на них обычно выращивают при комнатной
температуре. Плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается, и
они плохо застывают. Некоторые микроорганизмы используют желатин как
питательное вещество - при их росте среда разжижается.
Кроме того, в качестве плотных сред применяют свернутую сыворотку крови,
свернутые яйца, картофель, среды с селикагелем.
3. Состав. Среды делят на простые и сложные. К первым относят
мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), бульон и агар
Хоттингера, питательный желатин и пептонную воду. Сложные среды готовят,
прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества,
необходимые для размножения того или иного микроорганизма.
4. Назначение:
а) основные (общеупотребительные) среды служат для культивирования
большинства патогенных микробов. Это вышеупомянутые МПА, МПБ, бульон и
агар Хоттингера, пептонная вода;
б) элективные (избирательные) среды служат для выделения определенного
вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя
рост сопутствующих микроорганизмов. Так, соли желчных кислот, подавляя рост
кишечной палочки, делают среду элективной для возбудителя брюшного тифа.
Среды становятся элективными при добавлении к ним определенных
антибиотиков, солей, изменении рН.
Выделяют кровяные и сывороточные среды (например, Леффлера, Борде-Жангу),
яичные среды (например, Левенштайна-Йенсена) и др
( среды Уилсона-Блэра, Эндо, Плоскирева, Мак-Конки)
Жидкие элективные среды называют средами накопления. Примером такой
среды служит пептонная вода с рН 8,0. При таком рН на ней активно
размножается холерный вибрион, а другие микроорганизмы не растут;
в) дифференциально-диагностические среды позволяют отличить
(дифференцировать) один вид микробов от другого по ферментативной
активности, например среды Гисса с углеводами и индикатором. При росте
микроорганизмов, расщепляющих углеводы, изменяется цвет среды;
Дифференциально-диагностические среды (например, среды Хисса, Кларка)
применяют для изучения и идентификации отдельных типов, видов и групп
бактерий. В качестве основы применяют различные органические и неорганические
соединения, гидролизаты казеина, пептонную воду, бульон Хоттингера-Мартена,
дополненные углеводами, спиртами, мочевиной и другими веществами; при их
расщеплении происходит сдвиг рН в кислую (углеводы, спирты, липиды) или
щелочную (белки) сторону. Соответственно, выделяют среды с углеводами и
спиртами, среды с мочевиной, среды для определения индолообразоваиия, среды
для определения протеолитической активности и комбинированные (политропные)
среды. В такие среды также часто вносят различные индикаторы (например,
бромтимоловый синий, индикатор Андраде, бромкрезоловый пурпурный и
крезоловый красный), помогающие визуально определить изменение рН,
характерное для различных микроорганизмов. В частности, сдвиг в кислую сторону
вызывает покраснение среды с реактивом Андраде или пожелтение при
использовании среды с бромтимоловым синим, тогда как при защелачивании
реактив Андраде и индикатор бром-тимоловый синий не меняют цвет среды. Все
дифференциально-диагностические среды разделяют на четыре основные группы.
Среды, содержащие белки, дающие характерные изменения под действием
бактериальных ферментов (кровь, желатина, молоко и др.), применяют для
определения гемолитических или протеолитических свойств. Наиболее
распространены мясопептонная желатина (МПЖ), свернувшаяся лошадиная
сыворотка, молоко и кровяной агар (КА).

г) консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировки


исследуемого материала; в них предотвращается отмирание патогенных
микроорганизмов и подавляется развитие сапрофитов. Пример такой среды -
глицериновая смесь, используемая для сбора испражнений при исследованиях,
проводимых с целью обнаружения ряда кишечных бактерий. Консервирующие
питательные среды предупреждают отмирание патогенов и подавляют рост
сапрофитов. Наибольшее применение нашли глицериновая смесь (среда Тйга),
гипертонический раствор, глицериновый консервант с LiCl2, раствор цитрата
натрия и дезоксихолата натрия (среда Бенгсанга-Эллиота).

Д) среды обогащения (например, среда Китта-Тароцци, селенитовый бульон,


тиогликолятная среда) применяют для накопления определённой группы бактерий
за счёт создания условий, оптимальных для одних видов и неблагоприятных для
других. Наиболее часто в качестве подобных агентов используют различные
красители и химические вещества — соли жёлчных кислот, тетратионат Na+,
теллурит К , антибиотики, фуксин, гендиановый фиолетовый, бриллиантовый
зелёный и др. Элективные и селективные питательные среды для выращивания
бактерий
4. При классификации питательных сред по составу выделяют белковые,
безбелковые и минеральные среды.

В зависимости от потребностей бактериологов питательные среды


разделяются на пять основных групп.
Первая группа – универсальные (простые) среды. К ним принадлежат мясо-
пептонний бульйон (МПБ) и мясо-пептонний агар (МПА). За своим составом,
наличием питательных веществ они пригодны для культивирования многих видов
бактерий.
Вторая группа – специальные среды. Они используются в тех случаях, когда
микроорганизмы не растут на простых. К ним принадлежит кровяной,
сывороточный агары, сывороточный бульйон, асцитический бульйон, асцит-агар и
другие.
Третья группа – елективные среды, на которых микроорганизмы
определенного вида растут быстрее, более интенсивно, опережают в своем развитии
другие виды бактерий. Например, 1 % щелочная пептонная вода
является елективним средой для холерных вибрионов, среды Ру и Леффлера – для
возбудителей дифтерии.
Четвертая группа  селективные среды, которые благодаря добавлению
определенных компонентов (желчь, краски, антибиотики и др.) способны подавлять
развитие одних видов микроорганизмов, но не влияют на другие виды. ДА, среда
Мюллера является селективной для тифо-паратифозных бактерий, фуразолидоно-
твиновий агар – длякоринебактерій и микрококков. Добавление антибиотиков в
состав сред делает их селективными для грибов (напр. среда Сабуро и др.).
Пятая группа – дифференциально–диагностичнеские среды. Это большая
группа сред, которые позволяют определить определенные биохимические свойства
микроорганизмов и проводить их дифференциацию. Они разделяются на среды для
определения протеолитических, пептолитических, сахаролитических,
гемолитических, липолитических, редуцирующих свойств (среды Ендо, Левина,
Плоскирева, Гисса).

Классификация питательных сред

Простые Сложные
Жидкие: ПВ, МПБ Специальные: сахар. МПА (Рис. 1), МПБ,

Плотные: МПЖ, МПА сывороточный. МПА, кровяной МПА (Рис. 7),

асцитический МПА

Обогащения, накопления: селенитовый МПБ,

среды Мюллера, Кауффмана, Китт-Тароцци

Элективные: Ру, 1% щелочная ПВ

Диференциально-диагностические:

1)    для определения сахаролитических свойств

(среды Гисса (Рис. 5), Эндо (Рис. 2), Левина (Рис.

4), Плоскирева(Рис. 3))

2)    для определения протеолитических свойств

(свернутая сыворотка, МПЖ (Рис. 8), кусочки

мышц, белка куриного яйца)

3)    для определения пептолитических свойств

(МПБ, ПВ)

4)    для определения гемолитических свойств

(кров.МПА)

5)    для определения редуцирующих свойств

(среды с разными красителями)


Мясная вода. Для ее изготовления используют свежую говядину, которую
предварительно очищают от жира, фасций, сухожилий и тому подобное, разрезают
на мелкие куски и пропускают через мясорубку. Полученный фарш заливают
водопроводной водой в соотношении 1:2, размешивают и на сутки оставляют в
прохладном месте. Полученный настой кипятят в течение 30-60 мин, периодически
снимая накипь, а затем отстаивают. Отделяют жидкость от фарша, фильтруют через
фильтровальную бумагу или полотно и доливают водопроводной водой к
первичному объему, потом разливают в флаконы и стерилизуют при 1 атмосфере
(температура 120  °С) в течение 30 мин. Стерильная мясная вода прозрачна, имеет
желтоватый цвет, а на стенках флакона и на дне образуется осадок из белков,
которые свертывались. Потому при последующем использовании среды его опять
фильтруют. Активная реакция среды – 6,2.
Мясо-пептонный бульйон (МПБ). Чтобы изготовить МПБ, к мясной воде
добавляют 1 % пептону и 0,5 % хлориду натрия, устанавливают необходимое рН с
помощью 20 % раствору NAOH и кипятят 30-40 мин, постоянно
перемешивая. Бульйон фильтруют через бумажный или полотняный фильтры,
разливают в флаконы, пробирки, проверяют активную реакцию среды и
стерилизуют при 120 °С в течение 20 мин.
М’ясо-пептонний агар (МПА). К мясо-пептонного бульйону добавляют мелко
нарезанный агар-агар (2-2,5 %). Полученную смесь кипятят к растворению агар-
агара, фильтруют, устанавливают рН и разливают в флаконы. Стерилизацию
проводят в течение 20 мин при температуре 120 °С.
Среды с кровью, сывороткой или асцитической жидкостью. Поскольку эти
среды не могут долго сохраняться, их готовят непосредственно перед применением.
Для этого к растопленному и охлажденному до 45-50 °С МПА додают стерильно 5-
10 % свежей или дефибринированной крови барана, кролика или другого
животного. Флаконы с агаром тщательным образом перемешивают и разливают в
чашки Петри, следя за отсутствия пены.
Идентично готовят сывороточный (5-10 % сыворотки крови)
или асцитичный агар (25 % асцитичной жидкости).
Триптичний перевар за Хоттингером. Бульйон из него более экономический
чем другие мясо-пептонные среды, поскольку позволяет из одной порции мяса
получить в несколько раз больше бульйона. В этой среде содержится большое
количество аминокислот, следовательно, повышается его буферність, и за счет этого
стабильнее является значение активной реакции среды.
Для изготовления перевара берут один килограмм мяса без сухожилий и жира,
порезанный на мелкие куски размером до 1-2 см, окунают в кастрюлю с двойным
объемом воды, которая кипит, и кипятят 15-20 мин, пока мясо не станет серым, что
свидетельствует о коагуляции белков. Его вынимают из жидкости и пропускают
через мясорубку. В жидкости, которая осталась, устанавливают рН 8,0, опускают
туда фарш и охлаждают до 40 °С. Потом добавляют 10 % (к объему жидкости)
свежей поджелудочной железы, предварительно очищенной от соединительной
ткани, жиру и дважды пропускают через мясорубку. Вместо железы используют
сухой препарат панкреатина (0,5 %). Полученную смесь тщательным образом
взбалтывают и доводят рН до 7,8-8,0. Через 30  мин проверяют рН. Если активная
реакция среды не изменяется в кислую сторону, это свидетельствует о
недоброкачественности фермента. Когда рН среды стабилизируется, смесь
переливают в большие бутыли, заполняя их на 1/3. Добавляют до 3 % хлороформу,
закрывают посуду резиновими пробками и интенсивно взбалтывают для
перемешивания жидкостей. Избыток паров хлороформа выпускают. Через 1-
2 год опять проверяют рН среды, устанавливая его на 7,4-7,6. Полученную смесь
оставляют при комнатной температуре сроком до 16 дней. В течение первых 3-4
дней ежедневно проверяют и корректируют рН среды, а также взбалтывают
флаконы не меньше, чем 3 разы в сутки. Позже эту процедуру можно не проводить
и взбалтывать среду следует не так часто. За 1-2 дня до окончания цикла
переваривания взбалтывания среды прекращают.
О завершенном качественном переваривании свидетельствуют просветления
жидкости, которая приобретает соломенно-желтый цвет, а также образование на дне
пылевидного осадка. Жидкость легко фильтруется, ее проверяют на
наличие триптофана с помощью пробы с бромной водой (до 3-4 мл фильтрата
добавляют 3-4 каплибромной воды). При наличии триптофана (до 2,0-3,0 г/л) цвет
среды изменяется на розово-фиолетовый. Определяют общий азот, который в норме
достигает 11,0-12,0 г/л, иаминный азот (до 7,0-9,0 г/л).
Гидролизат фильтруют через бумажный или полотняный фильтр, разливают в
бутыли и автоклавують при 120 °С в течение 30 мин. В таком виде он может
сохраняться длительное время.
Его используют для получения бульйона Хоттингера. С этой целью до 100-
200 мл гидролизат у добавляют 800-900 мл дистиллированной воды, 0,5 % хлориду
натрия и 0,2 % однозамещенного фосфорнокислого натрия. Доводят рН до 7,4-7,6,
разливают в флаконы и стерилизуют 20 мин при 120 °С.
Мясо-пептонний агар на основе гидролизат у Хоттингера готовят за рецептурой
обычного МПА.
Сегодня, как правило, бактериологи пытаются пользоваться стандартными
сухими питательными средами, которые выпускает бактериологическая
промышленность. Такие среды позволяют существенно улучшить результаты
микробиологических исследований и стандартизировать их.
Для культивирования бактерий широко применяют безбелковые среды, в которых
хорошо растут много органотрофних, в том числе патогенных видов бактерий. В эти
среды входят много компонентов.
Культивирование в синтетических средах с использованием метода меченых
атомов дает возможность детальнее дифференцировать бактерии за характером
их биосинтеза.
Для дифференциации прототрофних и ауксотрофних бактерий
широко используют селективные среды. Прототрофы растут на минимальной среде,
которая содержит только соли и углеводы, поскольку они сами могут синтезировать
нужные им для развития метаболиты, тогда как ауксотрофы нуждаются в среде,
которая содержит определенныеаминокислоты, витамины и другие вещества.
На густых питательных средах бактерии образуют разные по форме и
величине к о л о н и и   — видимые скопления микроорганизмов одного вида,
которые формируются в результате размножения из одной или нескольких
клеток. Колонии бывают плоскими, выпуклыми, куполообразными, вдавленными, их
поверхность — гладкой (S-фор-ми), шершавой (R-формы), исчерченной, бугорчатой,
края — ровными, зазубренными, волокнистыми, бахромчатыми. Форма
колоний также разнообразна: круглая,розеткообразная, звездчатая, деревовидная.
По  величине (диаметру) колонии разделяются на большие (4— 5 мм, средние
(2—4 мм), мелкие (1—2 мм) и карликовые (меньше 1 мм).
Колонии отличаются и за консистенцией, плотностью, цветом. Они могут быть
прозрачными и непрозрачными, окрашенными и бесцветными, влажными, сухими и
слизистыми. В жидких питательных средах бактерии растут с образованием
диффузной мути, пленки, осадка, которые видно невооруженным глазом.
В лабораторных условиях бактерии выращивают в пробирках, чашках Петр и, в
флаконах.
В институтах, которые изготовляют вакцины и сыворотки,
микроорганизмы культивируют глубинным способом, который дает возможность
более рационально использовать питательный субстрат и получать бактериальную
массу в большом количестве. Культуры выращивают в реакторах с
большим объемом питательной среды. Аэрации достигают пропусканием струи
воздуха через толщу среды. Метод аэрации используют и для лабораторных
исследований с целью быстрого выращивания аеробних бактерий и изучения
некоторых процессов обмена веществ.
В условиях лаборатории анаэробы выращивают в стационарных анаеростатах или
портативных мікроанаеростатах с разжижением воздуха до 1—8 мм или в вакуум-
ексикаторах.
Культивирование анаэробов возможно в условиях замещения
кислорода атмосферным азотом или другим инертным газом. Анаэробные
условия можно создать и более простыми способами: с помощью вазелинового масла,
которое вмещают слоем поверх питательной среды, или высеиванием материала в
толщу агара. Применяют специальные стеклянные трубки, которые
заполняют МПА и запаивают на концах. Выращивают анаэробы обычно в средах
Китта — Тароцци, Вильсона — Блера  и   др.
По целевому назначению питательные среды делят на несколько групп:
 основные или универсальные простые среды , например, МПА, МПБ; на них
могут расти многие виды неприхотливых микроорганизмов;
 специальные или сложные среды используют для культивирования тех
бактерий, которые не могут расти на основных простых средах; в состав
специальных сред вводят, например, углеводы для роста стрептококков, желчь
для культивирования сальмонелл, дефибринированную кровь для
дифтерийной палочки.

19. Основные принципы выделения чистых культур микробов,


культивируемых на искусственных питательных средах. Этапы выделения
чистых культур этих микроорганизмов.

ЭТАПЫ СМ. В ТЕТРАДИ!!!

Выделение чист культ


1)на пит ср.
2)на живых объектах

Чистая культура –
совокупность микробов одного вида или варианта, полученная из одного образца ма
териала исодержащаяся в определенном объеме среды 

Методы, основанные на принципе механического разделения микроорганизмов


Рассев шпателем по Дригальскому.
Метод Пастера (метод разведений)
Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды Метод Коха (метод
заливок)
Рассев петлей (посев штрихами)
Метод фильтрации.

Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов

Метод Шукевича.
Метод прогревания.
Бактериостатический метод (метод ингибирования)
Метод заражения лабораторных животных.

Создание оптимальных условий для размножения при использовании методов,


основанных на био св-вах м-организмов

 Создание оптимального температурного режима для избирательного


подавления размножения сопутствующей микрофлоры при низкой
температуре и получения культур психрофильных или термофильных
бактерий. Большинство микробов неплохо развиваются при 35-37°С,
иерсинии хорошо растут при 22°С, лептоспиры культивируют при 30°С.
Термофильные бактерии растут при температурах, лежащих за пределами
температурных режимов прочих сопутствующих видов бактерий (так,
кампилобактер культивируют при 42°С).

 Создание условий для аэробиоза или анаэробиоза. Большинство


микроорганизмов хорошо растут в присутствии атмосферного кислорода.
Облигатные анаэробы растут в условиях, исключающих присутствие
атмосферного кислорода (возбудители столбняка, ботулизма,
бифидумбактерии, бактероиды и др.). Микроаэрофильные микроорганизмы
растут только при низком содержании кислорода и повышенном содержании
СО2(кампилобактер, геликобактер).

 Метод обогащения. Исследуемый материал засевают на элективные


питательные среды, способствующие росту определенного вида
микроорганизмов.

Выделение чистой культуры позволяет изучить морфологические,


культуральные , биохимические, антигенные и другие признаки, по
совокупности которых определяется видовая и типовая
принадлежность возбудителя, то есть производится его
идентификация.
Для выделения чистых культур микроорганизмов используют методы,
которые можно разделить на несколько групп.
    * Метод Пастера - последовательное разведение исследуемого
материала в жидкой питательной среде до концентрации одной клетки в
объеме (имеет историческое значение). Из исследуемого материала
готовят ряд последовательных, чаще десятикратных серийных
разведений в жидкой стерильной среде или физиологическом растворе в
пробирках. Далее высевают материал газоном по 1 мл из каждой
пробирки. Предполагают, что в какой-то из пробирок останется
количество микроорганизмов, поддающихся подсчету при высеве на
пластинчатые среды. Этот метод дает возможность подсчитать
микробное число в исследуемом материале. (Микробное число -
количество колоний на последней чашке с ростом микроорганизмов,
умноженное на степень разведения материала).
    * Метод Коха («пластинчатые разводки») - последовательное
разведение исследуемого материала в расплавленном агаре
(температура 48-50 ° С), с последующим разливом в чашки Петри, где
агар застывает. Высевы делают, как правило, из трех-четырех последних
разведений, где бактерий становится мало и, в дальнейшем, при росте на
чашках Петри появляются изолированные колонии, образующиеся из
одной исходной материнской клетки. Из изолированных колоний в
глубине агара получают чистую культуру бактерий пересевом на свежие
среды.
    * Метод Шукевича - применяется для получения чистой культуры
протея и других микроорганизмов обладающих «ползущим» ростом.
Посев исследуемого материала производят в конденсационную воду у
основания скошенного агара . Подвижные микробы (протей) способны
подниматься вверх по скошенному агару , неподвижные формы остаются
расти внизу на месте посева. Пересевая верхние края культуры можно
получить чистую культуру.
    * Метод Дригальского(поверхностный посев) - широко применяется в
бактериологической практике, при этом исследуемый материал разводят
в пробирке стерильным физиологическим раствором или бульоном.
Одну каплю материала вносят в первую чашку и стерильным стеклянным
шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем
(не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и
третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все
меньше и меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут
распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от
друга. Через 1-7 сут выдерживания чашек в термостате (в зависимости от
скорости роста микроорганизмов) на третьей чашке каждая бактерия
дает клон клеток, образуя изолированную колонию, которую пересевают
на скошенный агар с целью накопления чистой культуры.
    * Метод Вейнберга . Особые трудности возникают при выделении
чистых культур облигатных анаэробов. Если контакт с молекулярным
кислородом не вызывает сразу же гибели клеток, то посев производят по
методу Дригальского , но после этого чашки сразу помещают в анаэростат
. Однако чаще пользуются методом разведения. Сущность его
заключается в том, что разведения исследуемого материала проводят в
расплавленной и охлажденной до 45-50 ° С агаризированной
питательной среде. Делают 6-10 последовательных разведений, затем
среду в пробирках быстро охлаждают и заливают поверхность слоем
смеси парафина и вазелинового масла, чтобы помешать проникновению
воздуха в толщу питательной среды. Иногда питательную среду после
посева и перемешивания переносят в стерильные трубки Бурри или
капиллярные пипетки Пастера, концы которых запаивают. При удачном
разведении в пробирках, трубках Бурри , пипетках Пастера вырастают
изолированные колонии анаэробов. Чтобы изолированные колонии
хорошо были видны, используют осветленные питательные среды. Для
извлечения изолированных колоний анаэробов, пробирку слегка
нагревают, вращая ее над пламенем, при этом агар , прилегающий к
стенкам, плавится и содержимое пробирки в виде агарового столбика
выскальзывает в стерильную чашку Петри. Столбик агара разрезают
стерильным пинцетом и извлекают колонии петлей. Извлеченные
колонии помещают в жидкую среду, благоприятную для развития
выделяемых микроорганизмов (например, среду Китта-Тароцци ).
Агаризированную среду из трубки Бурри выдувают, пропуская газ через
ватную пробку.
    * Метод Хангейта - когда хотят получить изолированные колонии
бактерий с особенно высокой чувствительностью к кислороду (ст рогие
аэробы) используют метод вращающихся пробирок Хангейта . Для этого
расплавленную агаризированную среду засевают бактериями при
постоянном токе через пробирку инертного газа, освобожденного от
примеси кислорода. Затем пробирку закрывают резиновой пробкой и
помещают горизонтально в зажим, вращающий пробирку, среда при
этом равномерно распределяется по стенкам пробирки и застывает
тонким слоем. Применение тонкого слоя в пробирке, заполненной
газовой смесью, позволяет получить изолированные колонии, хорошо
видимые невооруженным глазом.
    * Выделение отдельных клеток с помощью микроманипулятора .
Микроманипулятор - прибор, позволяющий с помощью специальной
микропипетки или микропетли извлекать одну клетку из суспензии. Эту
операцию контролируют под микроскопом. На предметном столике
микроскопа устанавливают влажную камеру, в которую помещают
препарат «висячая капля». В держателях операционных штативов
закрепляют микропипетки ( микропетли ), перемещение которых в поле
зрения микроскопа осуществляется с микронной точностью благодаря
системе винтов и рычагов. Исследователь, глядя в микроскоп, извлекает
отдельные клетки микропипетками и переносит их в пробирки со
стерильной жидкой средой для получения клона клеток.
Рассев петлей (посев штрихами).Берут одну чашку Петри с питательным агаром и
делят ее на 4 сектора, проводя разграничительные линии на внешней стороне дна
чашки. Исследуемый материал петлей вносят в первый сектор и проводят ею па-
раллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой
же петлей, не изменяя ее положения по отношению к агару, проводят такие же
линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое
количество микробных клеток, рост микроорганизмов будет в виде сплошного
штриха. На секторах с небольшим количеством клеток вырастают отдельные
колонии. Кроме того, можно наливать разведенные растворы смешанной культуры
на поверхность твердых сред в чашках.

Метод фильтрации.Основан на пропускании исследуемого материала через


специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделении содержащихся
микроорганизмов по величине. Этот метод применяется главным образом для
очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате
- чистый фаг, очищенный токсин).
Метод прогревания.Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых
форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10—15 мин.
При этом погибают вегетативные формы, а споры сохраняются и при посеве на
соответствующую питательную среду прорастают.

Бактериостатический метод (метод ингибирования).Основан на различном


действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы.
Определенные вещества угнетают рост одних микроорганизмов и не оказывают
влияния на другие. Например, небольшие концентрации пенициллина задерживают
рост грамположительных микроорганизмов и не влияют на грамотрицательные.
Смесь пенициллина и стрептомицина позволяет освободить нитчатые грибы и
дрожжи от бактериальной флоры. Серная кислота (5% раствор) быстро убивает
большинство микроорганизмов, а туберкулезная палочка выживает в этих условиях.
Необходимо учитывать, что селективные факторы часто включены в состав среды в
бактериостатических концентрациях, поэтому сопутствующие микрооорганизмы
остаются жизнеспособными и при переносе колоний исследуемой культуры на
обычные среды могут быть причиной получения смешанной культуры.

Метод заражения лабораторных животных. Применяют в целях выделения и


идентификации патогенных микроорганизмов и отделения их от сапрофитной
флоры. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому
возбудителю инфекции виды животных. После появления у зараженных организмов
признаков болезни их убивают и производят посев органов и тканей на питательные
среды. При выделении и изучении облигатных паразитов этот метод является
основным и единственным. Биопроба – метод, который позволяет не только
выделить возбудитель из патологического материала, но также изучить
вирулентность чистой культуры. Организм животного представляет собой
биологический «фильтр», который в силу выраженности своих защитных свойств
уничтожает сопутствующую непатогенную микрофлору, но не способен подавить
размножение вирулентных бактерий. Биопроба проводится при выделении чистой
культуры пневмококка, микобактерий туберкулеза, франциселл и т.п.

Свойства микроорганизмов, учитываемые при выделении культуры


1. Тип дыхания. Среди бактерий выделяют группы аэробных и анаэробных
представителей. Для получения анаэробных микробов материал для исследования
прогревают. Следующий этап – культивирование микроба в анаэробных условиях.
Методики получения аэробных и анаэробных бактерий различны.(м.Фортнера)
2. Спорообразование. Способность некоторых бактерий к спорообразованию
обеспечивает защиту и сохранность микроорганизмов.
3. Устойчивость бактерий к агрессивному воздействию щелочей и кислот
(кислотоустойчивость) Устойчивость некоторых видов бактерий к данным
веществам обеспечивает максимальное очищение исследуемого материала от
примеси других бактерий с применением растворов щелочи либо кислоты.
4. Подвижность бактериальных организмов. Для отделения чистой культуры
подвижных микроорганизмов используются методы отделения культур микробов в
капле конденсата.
5. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам, некоторым
химическим веществам и другим антимикробным средствам. Для некоторых
возбудителей наиболее предпочтительны методы выделения культур с применением
селективных (специфических) питательных сред.
6. Антибиотики. Очищают материал от дополнительных микроорганизмов.
7. Способность бактерий проникать сквозь неповрежденные кожные
покровы. Это свойство присуще некоторым разновидностям, которые обладают
факторами агрессии.
8. Чувствительность животных к некоторым болезням инфекционного генеза.
9. Температурный оптимум
10. Избирательная чувствительность лабораторных животных к бактериям
20. Основные принципы выделения чистых культур внутриклеточных
паразитов, культивируемых на живых объектах. Этапы выделения чистых
культур. Методы индикации вирусов.

СМОТРИ ТЕТРАДЬ –ВСЕ ЭТАПЫ РАСПИСАНЫ!!


Этапы
1 этап.
Забор исследуемого материала
Ориентировочная микроскопия(есть / нет сопутствующей мфлоры)
Добавление Аб при необходимости
Заражение живого обекта
Цель: получение любых регистрируемых изменений в клетках зараженного
объекта
2 этап. Индикация возбудителя
3 этап. Идентификация возбудителя по антигенным
свойствам(сероидентификаця, реже – патогенетическая)

Принципы выделения
1.микроскопия не является основным методом, а ориентировочным, чтобы
определить сопутствующую микрофлор(если имеется – добавление аб)

2.внутриклеточные паразиты очень малы, сложно наблюдать какие-либо


изменения на микроскопическом уровне, их сложно обнаружить. Поэтому
проводится заражение живых объектов или культур клеток

3.заражение живого объекта проводится с учетом необходимого уровня Е


обмена клеток(возбудитель культивируется в клетках с низким или высоким
уровнем Е обмена)

4.индикация внутриклеточных паразитов проводится по характерным


признакам(клиническим, бляшкообразованию и тд)

Для культивирования облигатных внутриклеточных паразитов (риккетсии,


хламидии, вирусы) используют живые объекты – клеточные культуры,
куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Клеточные
культуры подразделяют на неперевиваемые (клетки эпителиальной или
соединительной ткани в питательной среде), полуперевиваемые (диплоидные
клетки человека) и перевиваемые (в основном опухолевые клетки –
постоянное существование in vitro).
Куриные эмбрионы используют в возрасте 8 – 12 дней, они устойчивы к
различным воздействиям. При заражении лабораторных животных
недостатком является необходимость последующего заражения клеточной
культуры для получения чистой линии.

Методы индикации вирусов:


• гибель или заболевание живой системы
• цитопатическое действие
• реакция гемадсорбции («зонтик» - положительная, «пуговка» -
отрицательная)
• обнаружение вирусных включений
• цветная проба
• метод бляшек во флаконе

21. Методы определения родовой и видовой идентификации прокариот.


Диагностическое значение экзоферментов прокариот. Диагностическое
значение бактериофагов.

Методы определения родовой идентификации прокариот(по свойствам –


морфологическим, культуральным, тинкториальным)
1.ms(световая, люминисцентная, электронная, эмиссионная, фазово-контрастная,
темнопольная)+окрашивание
2.метод выделения чистой культуры
3. окраска по Граму(Ожешко, Циль-Нильсену и тд)

Методы определения видовой идентификации прокариот(по свойствам – бх,


патогенетическим, АГ, фаголизабельности)
1.Бх метод
-по способности к ферментации ув(пестрый ряд, стеклянные поплавки)
-по способности расщепления белков(по изменению рН – окраска среды,
разжижение МПЖ в виде воронки)
-тест на нитратредуктазную активность( «+» - красные кольца – по способности
восстанавливания нитритов и нитратов)
-хроматография(ж.к-ты кл.ст)
-индикаторные бумажки
-автоматические системы
-метод идентификации нуклеиновых кислот(гибридизация НК в растворах или на
тв.средах, ПЦР)
2.Серологические методы
3. Аллергологические методы(аллергические реакции)
-ГНЗ
-ГЗТ
-иммунокомплексные
-цитотоксические
4.Биологические методы
5.Метод определения чувствительности бактерий к аб
-метод дисков
-метод серийных разведений
-бета-лактамазный тест
6. метод на определение чувствительности к бактериофагам

Диагностическое значение экзоферментов прокариот

Экзоферменты играют большую роль в обеспечении бактериальной клетки доступными для


проникновения внутрь источниками углерода и энергии.
Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства,
рода и — в некоторых случаях — для видов. Поэтому определением спектра ферментативной
активности пользуются при установлении таксономического положения бактерий. Наличие
экзоферментов можно определить при помощи дифференциально-диагностических сред.

Наиболее часто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз, используя


специальные методы и среды.

Для определения протеолитической активности микроорганизмы засевают в столбик желатина


уколом. Через 3—5 дней посевы просматривают и отмечают характер разжижения желатина.
При разложении белка некоторыми бактериями могут выделяться специфические продукты —
индол, сероводород, аммиак. Для их определения служат специальные индикаторные
бумажки, которые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку с МПБ или (и)
пептонной водой, засеянными изучаемыми микроорганизмами. Индол (продукт разложения
триптофана) окрашивает в розовый цвет полоску бумаги, пропитанной насыщенным раствором
щавелевой кислоты. Бумага, пропитанная раствором ацетата свинца, в присутствии
сероводорода чернеет. Для определения аммиака используют красную лакмусовую бумажку.

Для многих микроорганизмов таксономическим признаком служит способность разлагать


определенные углеводы с образованием кислот и газообразных продуктов. Для выявления
этого используют среды Гисса, содержащие различные углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу,
лактозу и др.). Для обнаружения кислот в среду добавлен реактив Андреде, который изменяет
свой цвет от бледно-желтого до красного в интервале рН 7,2—6,5, поэтому набор сред Гисса с
ростом микроорганизмов называют «пестрым рядом».

Для обнаружения газообразования в жидкие среды опускают поплавки или используют


полужидкие среды с 0,5% агара.

Для того чтобы определить интенсивное кислотообразование, характерное для брожения


смешанного типа, в среду с 1% глюкозы и 0,5% пептона (среда Кларка) добавляют индикатор
метиловый красный, который имеет желтый цвет при рН 4,5 и выше, и красный —при более
низких значениях рН.

Гидролиз мочевины определяют по выделению аммиака (лакмусовая бумажка) и


подщелачиванию среды.

При идентификации многих микроорганизмов используют реакцию Фогеса — Проскауэра на


ацетоин — промежуточное соединение при образовании бутандиола из пировиноградной
кислоты. Положительная реакция свидетельствует о наличии бутандиолового брожения.

Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же


после смешивания микробных клеток с 1 % раствором перекиси водорода.

Для определения цитохромоксидазы применяют реактивы: 1) 1% спиртовый раствор сс-


нафтола-1; 2) 1% водный раствор N-диметил-р-фенилендиамина дигидро-хлорида. О наличии
цитохромоксидазы судят по синему окрашиванию, появляющемуся через 2—5 мин.

Для определения нитритов используют реактив Грисса: Появление красного окрашивания


свидетельствует о наличии нитритов.
Диагностическое значение бактериофагов
Диагностические бактериофаги широко применяются для идентификации бактерий,
выделенных от больного или из инфицированных объектов внешней среды. С
помощью бактериофагов вследствие их высокой специфичности можно определить
виды бактерий и с большей точностью отдельные типы выделенных бактерий. В
настоящее время разработаны фагодиагностика и фаготипирование бактерий рода
Salmonella, Vibrio и стафилококков. Фаготипирование помогает устанавливать
источник инфекции, изучать эпидемиологические связи, отличать спорадические
случаи заболеваний от эпидемических.
В основе фагодиагностики и фаготипирования лежит принцип совместного
культивирования выделенного микроорганизма с соответствующими видовыми или
типовыми фагами. Положительным результатом считается наличие хорошо
выраженного лизиса исследуемой культуры с видовым, а затем с одним из типовых
фагов.
22. Действие физических факторов на микробов. Температурные критерии
жизнедеятельности микробов. Механизмы устойчивости микробов к
высушиванию, излучениям.

Из физических факторов наибольшее влияние на развитие микроорганизмов


оказывают температура, высушивание, лучистая энергия, ультразвук.
Температура. Жизнедеятельность каждого микроорганизма ограничена
определенными температурными границами. Эту температурную зависимость
обычно выражают тремя основными точками: минимум - температура, ниже
которой размножение микробных клеток прекращается; оптимум - наилучшая
температура для роста и развития микроорганизмов; максимум - температура,
выше которой жизнедеятельность клеток ослабляется или прекращается.
Оптимальная температура обычно соответствует температурным условиям
естественной среды обитания.
Все микроорганизмы по отношению к температуре подразделяются на
психрофилы, мезофилы и термофилы.
Психрофилы (от греч. psychros - холодный, phileo - люблю), или
холодолюбивые микроорганизмы, растут при относительно низких
температурах: минимальная температура - 0° С, оптимальная - 10-20° С,
максимальная - 30° С. Эта группа включает микроорганизмы, обитающие в
северных морях и океанах, почве, сточных водах. Сюда же относятся светящиеся
и железобактерии, а также микробы, вызывающие порчу продуктов на холоду
(ниже 0° С).
Мезофилы (от греч. mesos - средний) - наиболее обширная группа,
включающая большинство сапрофитов и все патогенные микроорганизмы.
Оптимальная температура для них 28-37° С, минимальная - 10° С, максимальная
- 45° С.
Термофилы (от греч. termos - тепло, жар), или теплолюбивые
микроорганизмы, развиваются при температуре выше 55° С, температурный
минимум для них 30° С, оптимум - 50-60° С, а максимум - 70-75° С. Они
встречаются в горячих минеральных источниках, поверхностном слое почвы,
самонагревающихся субстратах (навозе, сене, зерне), кишечнике человека и
животных. Среди термофилов много споровых форм.
Высокие и низкие температуры оказывают различное влияние на
микроорганизмы. Одни более чувствительны к высоким температурам. Причем,
чем выше температура за пределами максимума, тем быстрее наступает гибель
микробных клеток, что обусловлено денатурацией (свертыванием) белков
клетки.
Вегетативные формы бактерий мезофилов погибают при температуре 60° С в
течение 30-60 мин, а при 80-100° С - через 1-2 мин. Споры бактерий гораздо
устойчивее к высоким температурам. Например, споры бацилл сибирской язвы
выдерживают кипячение в течение 10-20 мин, а споры клостридий ботулизма - 6
ч. Все микроорганизмы, включая споры, погибают при температуре 165-170° С в
течение часа (в сухожаровом шкафу) или при действии пара под давлением 1 атм
(в автоклаве) в течение 30 мин.
Действие высоких температур на микроорганизмы положено в основу
стерилизации - полного освобождения разнообразных объектов от
микроорганизмов и их спор (см. ниже).
К действию низких температур многие микроорганизмы чрезвычайно
устойчивы. Сальмонеллы тифа и холерный вибрион длительно выживают во
льду. Некоторые микроорганизмы остаются жизнеспособными при температуре
жидкого воздуха (-190° С), а споры бактерий выдерживают температуру до -250°
С.
Только отдельные виды патогенных бактерий чувствительны к низким
температурам (например, бордетеллы коклюша и паракоклюша, нейссерии
менингококка и др.). Эти свойства микроорганизмов учитывают в лабораторной
диагностике и при транспортировке исследуемого материала - его доставляют в
лабораторию защищенным от охлаждения.
Действие низких температур приостанавливает гнилостные и бродильные
процессы, Что широко применяется для сохранения пищевых продуктов в
холодильных установках, погребах, ледниках. При температуре ниже 0° С
микробы впадают в состояние анабиоза - наступает замедление процессов
обмена веществ и прекращается размножение. Однако при наличии
соответствующих температурных условий и питательной среды жизненные
функции микробных клеток восстанавливаются. Это свойство микроорганизмов
используется в лабораторной практике для сохранения культур микробов при
низких температурах. Губительное действие на микроорганизмы оказывает также
быстрая смена высоких и низких температур (замораживание и оттаивание) - это
приводит к разрыву клеточных оболочек.
Высушивание. Для нормальной жизнедеятельности микроорганизмов
необходима вода. Высушивание приводит к обезвоживанию цитоплазмы,
нарушению целостности цитоплазматической мембраны, вследствие чего
нарушается питание микробных клеток и наступает их гибель.
Сроки отмирания разных видов микроорганизмов под влиянием высушивания
значительно отличаются. Так, например, патогенные нейссерии (менингококки,
гонококки), лептоспиры, бледная трепонема и другие погибают при
высушивании через несколько минут. Холерный вибрион выдерживает
высушивание 2 сут, сальмонеллы тифа - 70 сут, а микобактерии туберкулеза - 90
сут. Но высохшая мокрота больных туберкулезом, в которой возбудители
защищены сухим белковым чехлом, остается заразной 10 мес.
Особой устойчивостью к высушиванию, как и к другим воздействиям
окружающей среды, обладают споры. Споры бацилл сибирской язвы сохраняют
способность к прорастанию в течение 10 лет, а споры плесневых грибов - до 20
лет.
Неблагоприятное действие высушивания на микроорганизмы издавна
используется для консервирования овощей, фруктов, мяса, рыбы и
лекарственных трав. В то же время, попав в условия повышенной влажности,
такие продукты быстро портятся из-за восстановления жизнедеятельности
микробов.
Для хранения культур микроорганизмов, вакцин и других биологических
препаратов широко применяют метод лиофильной сушки. Сущность метода
состоит в том, что предварительно микроорганизмы или препараты подвергают
замораживанию, а затем их высушивают в условиях вакуума. При этом
микробные клетки переходят в состояние анабиоза и сохраняют свои
биологические свойства в течение нескольких месяцев или лет.
Лучистая энергия. В природе микроорганизмы постоянно подвергаются
воздействию солнечной радиации. Прямые солнечные лучи вызывают гибель
многих микроорганизмов в течение нескольких часов, за исключением
фотосинтезирующих бактерий (зеленых и пурпурных серобактерий).
Губительное действие солнечного света обусловлено активностью
ультрафиолетовых лучей (УФ-лучи). Они инактивируют ферменты клетки и
повреждают ДНК. Патогенные бактерии более чувствительны к действию УФ-
лучей, чем сапрофиты. Поэтому хранить микробные культуры в лаборатории
лучше в темноте. В этом отношении демонстративен опыт Бухнера.
В чашку Петри с тонким слоем агара производят обильный посев какой-либо
культуры бактерий. На наружную поверхность засеянной чашки наклеивают
вырезанные из черной бумаги буквы, образующие, например, слово "typhus".
Чашку, обращенную дном вверх, подвергают облучению прямыми солнечными
лучами в течение 1 ч. Затем бумажки снимают, и чашку ставят на сутки в
термостат при 37° С. Рост бактерий наблюдается лишь в тех местах агара,
которые были защищены от действия УФ-лучей наклеенными буквами.
Остальная часть агара остается прозрачной, т. е. рост микроорганизмов
отсутствует 
Велико значение солнечного света как естественного фактора оздоровления
внешней среды. Он освобождает от патогенных бактерий воздух, воду
"естественных водоемов, верхние слои почвы.
Бактерицидное (уничтожающее бактерий) действие УФ-лучей используется
для стерилизации воздуха закрытых помещений (операционных, перевязочных,
боксов и т. д.), а также воды и молока. Источником этих лучей являются лампы
ультрафиолетового излучения, бактерицидные лампы.
Другие виды лучистой энергии - рентгеновские лучи, α-, β-, γ-лучи оказывают
губительное действие на микроорганизмы только в больших дозах, порядка 440-
280 Дж/кг. Гибель микробов обусловлена разрушением ядерных структур и
клеточной ДНК. Малые дозы излучений стимулируют рост микробных клеток.
Микроорганизмы значительно устойчивее к радиоактивным излучениям, чем
высшие организмы. Известны тионовые бактерии, обитающие в залежах
урановых руд. Бактерии обнаруживали в воде атомных реакторов при
концентрации ионизирующей радиации 20-30 кДж/кг.
Бактерицидное действие ионизирующего излучения используется для
консервирования некоторых пищевых продуктов, стерилизации биологических
препаратов (сывороток, вакцин и др.), при этом свойства стерилизуемого
материала не изменяются.
В последние годы радиационным методом стерилизуют изделия для
одноразового использования - полистироловые пипетки, чашки Петри, лунки для
серологических реакций, шприцы, а также шовный материал - кетгут и др.
Ультразвук вызывает значительное поражение микробной клетки. Под
действием ультразвука газы, находящиеся в жидкой среде цитоплазмы,
активируются, и внутри клетки возникает высокое давление (до 10000. атм). Это
приводит к разрыву клеточной оболочки и гибели клетки. Ультразвук
используют для стерилизации пищевых продуктов (молока, фруктовых соков),
питьевой воды.
Высокое давление. К механическому давлению бактерии и особенно их
споры устойчивы. В природе встречаются бактерии, живущие в морях и океанах
на глубине 1000-10000 м под давлением от 100 до 900 атм. Некоторые виды
бактерий выдерживают давление до 3000-5000 атм, а бактериальные споры -
даже 20000 атм.

Возможность существования при высокой температуре обусловлена


следующими особенностями:

1. составом липидных компонентов клеточных мембран, а именно высоким


содержанием длинноцепочечных С17—С19 насыщенных жирных кислот с
разветвленными цепями;

2. высокой термостабильностью белков и ферментов (последние имеют низкую


молекулярную массу и содержат значительное количество ионов кальция);

3. термостабильностью клеточных ультраструктур.

4. высоким содержанием липидов в клеточной стенке

5. спорообразование

6. внутривидовая изменчивость микроорганизмов, наличие плазмид

23. Определение понятий “стерилизация” и “асептика”. Основные методы


стерилизации. Методы контроля эффективности стерилизации.

СМОТРИ МЕТОДИЧКУ!!
Асептика – система мероприятий, направленная на предотвращение попадания
микроорганизмов в рану.
Стерилизация – полное уничтожение вегетативных форм микроорганизмов и их
спор в различных материалах.
Основные методы:
1.Физические
• воздействием высокой температуры
 прокаливание в пламени спиртовки или газовой горелки – стерилизуют
бактериологические петли, препаровальные иглы, пинцеты; режим – пламя.
 кипячением кипятильником – не менее 30 мин; стерилизуют мелкий
хирургический инструментарий, предметные и покровные стёкла. Режим- 100
 сухим жаром в сухожаровом шкафу – воздух нагревается до 165 – 170˚С в
течении 2 часа т; стерилизуют стеклянную посуду
текучим паром в автоклаве – температура 100 ˚С, -30 минут 3 х кратно.
паром под давление в автоклаве - давление 0,5 – 2 атм, время 15 – 30 мин
 тиндализация на водяной бане– дробная стерилизация при 56–58 ˚С в течение 1 ч
5 – 6 дней подряд; для стерилизации легко разрушающихся при высокой t˚ веществ
(сыворотка крови, витамины и др.)
 пастеризация в специальных стерилизаторах – нагревание при t˚ 60 в течение 1
часа с последующим быстрым охлаждением; не уничтожает споры;
• воздействием ионизирующих излучений
пастеризуют напитки и продукты путём ультрафиолетового облучения –
используется УФ-излучение с длиной волны 260 – 300 мкм; используют
бактерицидные лампы разной мощности (БУВ-15, БУВ-30) для стерилизации
воздуха в боксах, операционных, детских учреждениях
2.Механическая стерилизация (фильтрование) – через асбестовые и мембранные
фильтры с разным диаметром пор; стерилизация жидких материалов,
невыдерживающих нагревания (сыворотка крови, антибиотики, компоненты
питательных сред для бактерий и культур клеток)
3.Химические – 70% этиловый спирт, 5% спиртовой раствор йода, 2% раствор
хлорамина, 0,1% раствор перманганата калия, перекись водорода, окись этилена и
др.
Методы контроля эффективности стерилизации
Используют биологические индикаторы – известные микроорганизмы, наиболее
устойчивые к данному способу обработки:
- споры Bacillus stearothermophilus для контроля эффективности автоклавирования
- Bacillus subtilis – для контроля сухожаровой стерилизации
Физико-химические индикаторы – вещества, которые претерпевают видимые
изменения (изменяют цвет, агрегатное состояние и т.д.) только при соблюдении
правильного режима обработки.
Микробиологический контроль объектов, подвергшихся стерилизации в
повседневной практике не производится. Его заменяет косвенный контроль –
контроль работы стерилизаторов.
Для проведения микробиологического контроля производят посев кусочков
материала, смывов с предметов, подвергшихся стерилизации, на среды,
позволяющие обнаружить аэробные и анаэробные бактерии, грибы. Отсутствие
роста после 14 дней инкубации в термостате свидетельствует о стерильности
предмета

24. Определение понятий “дезинфекция”, “антисептика”. Основные методы


дезинфекции. Микробиологический контроль эффективности дезинфекции.
СМОТРИ МЕТОДИЧКУ!!
Антисептика – совокупность способов подавления роста и размножения условно-
патогенных для человека микробов на интактных или поврежденных (раневых)
поверхностях кожи, слизистых оболочках и в полостях. С целью антисептики
используют химические и биологические антисептики (бактериофаги и препараты
из бактерий-антагонистов); физические и механические факторы (хирургическая
обработка, промывание, дренирование, сорбция).

Дезинфекция – обеззараживание объектов окружающей среды: уничтожение


патогенных для человека и животных микроорганизмов с помощью
дезинфицирующих средств, обладающих антимикробными свойствами. В отличие
от стерилизации дезинфекция приводит к гибели большинства, но не всех форм
микробов и обеспечивает только снижение микробного загрязнения, а не полное
обеззараживание объекта.

Механические методы(встряхивание, выколачивание, влажная уборка,


вентиляция) – приводит к уменьшению числа патогенных микробов

Физические методы.

Воздействие высоких температур.

Кипячение. Шприцы, мелкий хирургический инструментарий, предметные и


покровные стекла и некоторые другие предметы помещают в стерилизаторы, в
которые наливают воду. Для устранения жесткости и повышения температуры
кипячения к воде добавляют 1—2 % раствор бикарбоната натрия. Кипячение
производят не менее 30 мин. При кипячении некоторые вирусы (например, вирус
гепатита В) и споры бактерий сохраняют жизнеспособность.
Пастеризация основана на антибактериальном действии температуры в отношении
вегетативных клеток, но не бактериальных спор. Нагревание материала
производится при температуре 50—65 "С в течение 5—10 мин с последующим бы-
стрым охлаждением. Обычно пастеризуют напитки и пищевые продукты (вино,
пиво, соки, молоко и др.).

Воздействие ионизирующих излучений.

Ультрафиолетовое излучение (УФ) с длиной волны 260—300 мкм обладает


достаточно выраженным микробицидным действием, однако некоторые виды
микробов и споры резистентны к УФ. Поэтому УФ-облучение не способно
обеспечить полного уничтожения микрофлоры — стерилизацию объекта. Обработку
УФ обычно используют для частичного обеззараживания (дезинфекции) крупных
объектов: поверхностей предметов, помещений, воздуха в медицинских
учреждениях, микробиологических лабораториях и т.д.

Гамма-излучение обладает выраженным микробицидным действием на большинство


микроорганизмов, включая вегетативные формы бактерий и споры большинства
видов, грибы, вирусы. Применяют для стерилизации пластиковой посуды и меди-
цинских инструментов одноразового использования. Следует иметь в виду, что
обработка гамма-излучением не обеспечивает уничтожения таких инфекционных
агентов, как прионы.

Химические методы. Это обработка объекта дезинфектантами —


микробицидными химическими веществами. Обработке подлежат отработанный
патологический материал, градуированные и пастеровские пипетки, стеклянные
шпатели, стекла.

1. Галогенсодержащие соед-я. Антимикробный эффект растворов этих в-в


связан с наличием активных галогенов, которыевступают во
взаимодействие с белками микробов и повреждают их(хлорная известь,
хлорамин Б 1-3%)

2. Окислители(Н2О2 – 6%)

3. ПАВ – катионные, анионные и амфолиты. Антимикробный эффект


связан с изменением проницаемости ЦПМ и нарушением осмотического
равновесия.

4. Спирты (90-95%) – вызывают коагуляцию белков(неэффективно для


грибов, вирусов и спор)

5. Альдегиды. Действие основано на алкилировании амино-


сульфгидрильных и карбоксильных групп белков. (Формалин)
6. Фенолы – денатурируют белки кл.ст.(карболовая кислота, фенол)

При испытании антимикробной активности дезинфектантов и антисептиков


используют стандартные тест-культуры микроорганизмов(золотистый стафилококк,
кишечная палочка, бациллы, микобактерии, грибы-трихофитоны и кандиды)

Контроль качества дезинфекции - Качество дезинфекционных мероприятий


устанавливается контролем, который проводится визуальным, химическим и
бактериологическим методами. В практических условиях указанные методы
используют одновременно.

Визуальный контроль. Выясняют санитарное состояние объекта, своевременность


проведения дезинфекционных мероприятий, обоснованность выбора объектов и
методов обеззараживания, полноту обеззараживания поверхностей помещений,
отдельных вещей, предметов и объектов, количество вещей, взятых для камерной
дезинфекции.

Химический контроль. Этот вид контроля используют для определения


содержания действующих веществ, соответствия концентрации рабочих растворов
концентрациям, предусмотренным инструкциями. При отборе проб отмечают дату
их взятия, когда и кем приготовлен дезинфицирующий раствор, какая концентрация
указана на этикетке. При контроле заключительной дезинфекции пробы для
химического анализа лучше всего отбирать в то время, когда дезинфекторы
находятся в очаге. Особенно важно взятие проб из более концентрированных
растворов дезинфицирующих препаратов, применяемых в очагах туберкулеза,
грибковых болезней, вирусного гепатита. Само определение количества
действующего вещества в растворах или сухих препаратах проводится в
лабораторных условиях. Обнаружение во взятых пробах меньшего, чем требуется,
количества действующего вещества служит доказательством плохого выполнения
дезинфекции.

При контроле за проведением профилактической дезинфекции, а в некоторых


случаях (при отсутствии бактериологической лаборатории) и при проведении
очаговой дезинфекции может быть применен йодкрахмальный метод контроля за
применением хлор-содержащих препаратов. Метод основан на цветной реакции
йода с крахмалом. При взаимодействии с раствором йодида калия хлор вытесняет из
раствора йод и занимает его место. Выделившийся йод окрашивает крахмал в сине-
бурый цвет.

Бактериологический контроль. Этот контроль дезинфекции в очагах кишечных


инфекций проводят путем обнаружения санитарно-показательной кишечной
палочки методами смыва или соскобов. Бактериологический контроль качества
заключительной дезинфекции проводят внезапно. При текущей и профилактической
дезинфекции качество контролируют в любое время. После окончания
заключительной дезинфекции пробы берут не позже чем через 30 - 45 мин.

Для взятия смывов готовят ватные талоны на палочках, вмонтированных в ватную


пробку, и стерилизуют в бумажных пакетах. При отборе проб тампон вынимают из
пакета и смачивают в 1 % растворе тиосульфата натрия или в среде обогащения.
Смывы с помощью тампонов производят не менее чем с 10 предметов в квартирах и
не менее чем с 30 предметов в детских дошкольных и лечебно-профилактических
учреждениях. Каждый смыв производят с площади не менее 200 - 300 см на 2 - 3-х
смежных участках обследуемого объекта. При заборе проб с игрушек, посуды
смывы осуществляют с поверхности всего объекта.

После взятия пробы погружают в пробирку с мясо-пептонным бульоном. При


контроле качества обработки белья хлорсодержащими растворами в питательный
бульон добавляют 1 мл 1 % раствора стерильного тиосульфата натрия. Засеянные в
очаге пробирки и чашки Петри в тот же день доставляют в лабораторию и
помещают в термостат при температуре 37°С на 24 ч. По истечении указанного
срока: а) посев из чашек Петри исследуют на кишечную палочку по общепринятой
методике; б) из пробирок производят высев на чашки со средой Эндо и помещают в
термостат при температуре 37°С на 24 ч, после чего ведут исследования на
кишечную палочку по общепринятой методике.

Одноэтапная методика исследования смывов с использованием среды Хейфеца


основана на возможности учета роста кишечной палочки в посевах по изменению
цвета среды (без выделения чистой культуры и ее идентификации). Среда Хейфеца
дает возможность получить окончательные результаты через 18 - 24 ч после посева
смывов. В сомнительных случаях пользуются трехэтапным методом исследования
смывов.

Готовую среду стерилизуют кипячением или нагреванием в кипящей водяной бане в


течение 5 мин. Среду разливают в пробирки вместимостью 8 - 10 мл, подвергают
однократному прогреванию текучим паром в течение 20 - 30 мин. Удобнее готовить
и стерилизовать элективную среду в колбах вместимостью 200 - 500 мл и по мере
надобности разливать ее в пробирки при соблюдении правил асептики. Засеянные
пробирки ставят в термостат при 37°С на 18 ч, после чего результаты учитывают по
признаку изменения цвета среды. При наличии зеленого цвета среды и обильной
характерной мутности регистрируют рост кишечной палочки.

Если изменение цвета среды при росте кишечной палочки бывает недоостаточно
отчетливым, то рекомендуют отлить из пробирки 1 - 2 мл среды в фарфоровую
чашку и добавить 1 каплю 1 % спиртового раствора метилового красного (1 г
метилового красного, 62 мл спирта и 38 мл дистиллированной воды). При наличии
кишечной палочки жидкость принимает устойчивый малиновый или кирпично-
красный цвет, во всех остальных случаях - желтый, оранжевый или (редко)
красноватый, медленно исчезающий цвет.

Удовлетворительную оценку качества дают при отсутствии роста кишечной


палочки во всех исследованных пробах, неудовлетворительную оценку - при
обнаружении кишечной палочки хотя бы в одной из проб.

При инфекциях дыхательных путей, включая туберкулез, при контроле ведут


поиск стафилококка. Контрольные смывы делают так же как и при кишечных
инфекциях. Тампон отмывают в 20 мл стерильной водопроводной воды в
широкогорлой пробирке с бусами, в течение 10 мин. Для выделения стафилоккока
переносят 0,1 мл отмытой жидкости на дно стерильной чашки Петри и заливают 8 -
10 мл остуженного 2% мясопептонного или казеинового агара. Осторожным
покачиванием распределяют пробу в агаре. Посевы инкубируют при 37°С, 24 ч,
выдерживают в течение суток при комнатной температуре и учитывают рост
колонии стафилококка на ангаре. Оценка результатов такая же, как и при кишечных
инфекциях.

25. Определение понятия “химиотерапия”. Основные группы


химиотерапевтических веществ. Механизмы антимикробного действия.
Химиотерапевтический индекс.

Химиотерапия – уничтожение патогенных микроорганизмов в организме


человека при помощи химических препаратов.

Химиопрофилактика – неспецифическая, экстренная профилактика


инфекционных болезней у контактных.

Химиопрепараты – лекарственные средства, обладающие избирательностью.


Химические препараты в большей степени губительно воздействуют на
микроорганизм, чем на клетку макроорганизма.
Применяют следующие препараты:

• Производные мышьяка, сурьмы и висмута – при паразитарных инфекциях,


сифилисе; в наст. время практически не используются

• Препараты акридина (риванол, трипафлавин, акрицид, флавицид и др.) – при


гноеродных заболеваниях, воспалит. процессах зева и носоглотки

• Сульфаниламиды (стрептоцид, этазол, альбуцид, сульфадиметоксини др.) –


при гноеродных заболеваниях, ангинах, скарлатине, роже, пневмонии,
дизентерии, гонорее, анаэробной инфекции и др.; механизм действия состоит
в том, что они представляют собой структурные аналоги парааминобензойной
кислоты, т.е. являются микробными антиметаболитами

• Диаминопиримидины (триметоприм, пириметамин, тетроксоприм) – также


являются антиметаболитами, подменяя пиримидиновые основания; спектр
действия шире

• Нитрофураны (фуразолидон, фурациллин, фурадонин, фурагинид) – при


кишечных инфекциях; блокируют ферментные системы микробной клетки

• Хинолоны (неграм, нитроксолин, ципролет и др.) – нарушают различные


этапы синтеза ДНК микробной клетки

• Азолы (кандид, низорал, флуконазол и др.) – противогрибковые; механизмы


действия – ингибирование биосинтеза стеролов клеточной стенки,
ингибирование разл. внутриклеточных процессов, приводящее к накоплению
перекиси водорода и повреждению клеточных органелл, ингибирование
трансформации бластоспор в инвазивный мицелий (род Candida)

• Противовирусные (интерферон и интерфероногены, дезоксирибонуклеаза и


рибонуклеаза, бензамидазол и гуанидин, ремантадин, ацикловири др.)

• Антибластомные (азотиприты, антиметаболиты, диэпоксиды и др.)

• Антибиотики
По направленности действия химиотерапевтические препараты делят на:
1) противопротозойные;
2) противогрибковые;
3) противовирусные;
4) антибактериальные.
По химическому строению выделяют несколько групп химиотерапевтических
препаратов:
1) сульфаниламидные препараты (сульфаниламиды) – производные сульфаниловой
кислоты. Они нарушают процесс получения микробами необходимых для их жизни
и развития ростовых факторов – фолиевой кислоты и других веществ. К этой группе
относят стрептоцид, норсульфазол, сульфаметизол, сульфометаксазол и др.;
2) производные нитрофурана. Механизм действия состоит в блокировании
нескольких ферментных систем микробной клетки. К ним относят фурацилин,
фурагин, фуразолидон, нитрофуразон и др.;
3) хинолоны. Нарушают различные этапы синтеза ДНК микробной клетки. К ним
относят налидиксовую кислоту, циноксацин, норфлоксацин, ципрофлоксацин;
4) азолы – производные имидазола. Обладают противогрибковой активностью.
Ингибируют биосинтез стероидов, что приводит к повреждению наружной
клеточной мембраны грибов и повышению ее проницаемости. К ним относят
клотримазол, кетоконазол, флуконазол и др.;
5) диаминопиримидины. Нарушают метаболизм микробной клетки. К ним относят
триметоприм, пириметамин;
6) антибиотики – это группа соединений природного происхождения или их
синтетических аналогов.

Химиотерапевтический индекс – отношение минимальной лечебной дозы к


максимально переносимой дозе. Химиотерапевтический индекс должен быть
меньше единицы.

ХТИ= мин акт.доза/макс переносимая доза (меньше 1 – тем меньше


токсичность препарата) между 1 и 3 – как антисептик, больше 1 - дезинфектант

ХТИ = макс переносим доза/мин акт. Доза (больше 3) между 1 и 3 – антисептик,


меньше 1 -дезинфектант

26. Антибиотики. Принципы классификации антибиотиков. Механизмы


антимикробного действия.

Принципы классификации антибиотиков.


1. По механизму действия:
1) нарушающие синтез микробной стенки (b-лактамные антибиотики; циклосерин;
ванкомицин, тейкоплакин);
2) нарушающие функции цитоплазматической мембраны (циклические
полипептиды, полиеновые антибиотики);
3) нарушающие синтез белков и нуклеиновых кислот (группа левомицетина,
тетрациклина, макролиды, линкозамиды, аминогликозиды, фузидин, анзамицины).
2. По типу действия на микроорганизмы:
1) антибиотики с бактерицидным действием (влияющие на клеточную стенку и
цитоплазматическую мембрану);
2) антибиотики с бактериостатическим действием (влияющие на синтез
макромолекул).
3. По спектру действия:
1) с преимущественным действием на грамположительные микроорганизмы
(линкозамиды, биосинтетические пенициллины, ванкомицин);
2) с преимущественным действием на грамотрицательные микроорганизмы
(монобактамы, циклические полипептиды);
3) широкого спектра действия (аминогликозиды, левомицетин, тетрациклины,
цефалоспорины).
4. По химическому строению:
1) b-лактамные антибиотики. К ним относятся:
а) пенициллины, среди которых выделяют природные (аминипенициллин) и
полусинтетические (оксациллин);
б) цефалоспорины (цепорин, цефазолин, цефотаксим);
в) монобактамы (примбактам);
г) карбапенемы (имипинем, меропинем);
2) аминогликозиды (канамицин, неомицин);
3) тетрациклины (тетрациклин, метациклин);
4) макролиды (эритромицин, азитромицин);
5) линкозамины (линкомицин, клиндамицин);
6) полиены (амфотерицин, нистатин);
7) гликопептиды (ванкомицин, тейкоплакин).
5. По источникам и методам получения различают антибиотики
1)природные,
2)синтетические
3)полусинтетические.
Антибиотики природного происхождения /получают путём биосинтеза
1/ микробного происхождения /их большинство/ - образуются актиномицетами
/тетрациклины, аминогликозиды, эритромицин, актиномицины/, некоторыми
бактериями /полимиксины/, грибами /пенициллин, гризеофульвин/ для их
получения штаммы-продуценты выращивают в жидкой питательной среде, после
чего клетки удаляют, а препарат в неизменённом виде выделяют из питательной
среды и очищают;
2/ растительного происхождения /фитонциды/ получают физико-химическими
методами из растений - листьев эвкалипта /хлорофиллипт/, зверобоя /иманин/, из
лука и чеснока /летучие эфирные масла/;
3/ животного происхождения - из лейкоцитов /интерфероны, лизоцим/,
эритротроцитов /эритрин/, молоки рыб /экмолин/; их получают из соответствующих
клеток и тканей, а интерфероны также путем биосинтеза /генно-инженерный
препарат /.
II- Синтетические - их полностью получают путём химического синтеза /в
основном, как аналоги природных соединений/ - левомицетин, циклосерин и другие.
III. Полусинтетические антибиотики получают на основе природных соединений,
как правило, микробного происхождения, у которых путём химического синтеза
изменяют структуру /например, радикалы/; этот путь наиболее перспективен,
поскольку позволяет повысить активность, растворимость антибиотиков, добиться
снижения их токсичности. Например, полусинтетические пенициллины
/ампициллин, карбенициллин и др./ получены путём химической модификации ядра
пенициллина - беталактамного кольца.

1. Антибиотики, подавляющие синтез бактериальной клеточной стенки.


Пенициллины – продуцируются грибами рода Penicillium, блокируют
последнюю стадию синтеза муреина, антибактериальный спектр бензилпенициллина
(фермент бактерий пенициллиназа, или β-лактамаза, гидролизует его β-лактамное
кольцо и лишает активности) включает патогенные кокки, спирохеты и некоторые
грамположительные бактерии (дифтерия, сибирская язва, анаэробной
инфекции),полусинтетические пенициллины (ампициллин) эффективны также
против ряда грамотрицательных бактерий (кишечная палочка, сальмонеллы,
шигеллы, клебсиеллы).
Цефалоспорины – продуцируются грибами рода Cephalosporium, механизм
действия тот же, полусинтетический аналог цефалоспорина – цефалоридин
=ампициллин.
2. Антибиотики, нарушающие функции ЦПМ микроорганизмов.
Полиеновые антибиотики (нистатин, леворин) – продуцируются
актиномицетами, к ним чувствительны патогенные грибы, в том числе рода Candida,
микоплазмы и некоторые простейшие, механизм действия связан с их адсорбцией на
ЦПМ и взаимодействием с её стерольным компонентом → потеря водорастворимых
веществ и гибель клетки.
Грамицидин – продуцируется палочкой B. Brevis, угнетает энергетические
реакцииклетки, наиболее чувствительны к нему стафилококки, стрептококки,
клостридии, токсичен (применяется только местно).
Полимиксин – продуцируется Bacillus polymyxa, нарушает жизненно важные
функции ЦПМ бактерий, эффективен против грамотрицательных бактерий
(энтеробактерии, синегнойная палочка и др.).
3. Антибиотики, ингибирующие синтез белка на рибосомах
бактериальных клеток. Продуцентами являются актиномицеты.
Аминогликозиды – блокируют синтезбелка путём воздействия на 30S
субъединицу рибосомы, а также нарушаютсчитывание генетического кода,
стрептомицин эффективен против микобактерий туберкулёза и многих
грамотрицательных бактерий (энтеробактерии, бруцеллы, бактерии чумы,
туляремии, холерный вибрион и др.), канамицин и неомицин эффективны против
многих грамположительных бактерий, гентамицин более эффективен в отношении
синегнойной и кишечной палочек, протеев и стафилококков.
Тетрациклины – нарушают связывание аминоацил-тРНК с рибосомально-
матричным, а также подавление окисления глутаминовой кислоты у риккетсий
Провацека, антибактериальный спектр включает многие грамположительные и
грамотрицательные бактерии, спирохеты, риккетсии, хламидии, микоплазмы.
Левомицетин – подавление пептидилтрансферазной реакции с 50S субъединицей
рибосомы, то же + пневмококки, гонококки. Макролиды (эритромицин,
олеандомицин) – блокируют синтез белка путём воздействия на 50S субъединицу
рибосомы, активны в отношении патогенных кокков, некоторых
грамположительных бактерий, риккетсий и хламидий; антибиотики«резерва».
4. Антибиотики, подавляющие синтез белка на уровне транскрипции.
Рифамицины – подавляют активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы,
эффективны в отношении грамположительных бактерий и микобактерий
туберкулёза.
5. Антибиотики, подавляющие репликацию ДНК.
Новобиоцин – угнетает ДНК-полимеразу, а также блокирует синтез РНК и
клеточной стенки бактерий, антибактериальный спектр включает стафилококки,
стрептококки, менингококки, гонококки, палочки инфлюэнцы, дифтерийные
бактерии и др.; антибиотик «резерва».

27. Механизмы развития лекарственной устойчивости у микробов. Методы


определения чувствительности микробов к химиопрепаратам в лабораторной
практике.

Механизмы резистентности могут быть подразделены на первичные и


приобретенные.
К первичным механизмам относятся те, которые связаны с отсутствием «мишени»
для действия данного препарата; к приобретенным - изменением «мишени» в
результате модификаций, мутаций, рекомбинаций. 
Механизмы резистентности (устойчивости) микроорганизмов к различным
химиотерапевтическим препаратам сложны и разнообразны. Главным образом они
связаны со следующими процессами:

 превращением активной формы антибиотика в неактивную форму путем


ферментативной инактивации и модификации; Одним из таких широко известных
ферментов является бета-лактамаза, обеспечивающая устойчивость
микроорганизмов к бета-лактамным антибиотикам за счет прямого расщепления
бета-лактамного кольца этих препаратов. Другие ферменты способны не
расщеплять, а модифицировать активную часть молекулы антибиотиков, как это
имеет место при энзиматической инактивации аминогли-козидов и левомицетина;

 утратой проницаемости клеточной стенки для определенного


химиотерапевтического препарата; Этот механизм лежит в основе устойчивости к
тетрациклину
 нарушениями в системе специфического транспорта данного препарата в
бактериальную клетку;
 возникновением у микроорганизмов альтернативного пути образования
жизненно важного метаболита (продукта метаболизма), заменяющего основной
путь, блокированный препаратом.
• изменение структуры компонентов микробной клетки, например изменение
структуры бактериальных рибосом, сопровождается повышением устойчивости к
аминогликозидам и макролидам, а изменение структуры РНК-синтетаз — к
рифампицину.
Скорость развития и степень выраженности устойчивости связаны с видом и даже
штаммом возбудителя. Наиболее быстро и часто резистентность к
антибактериальным препаратам возникает у стафилококков, эшерихий, микоплазм,
протея, синегнойной палочки. Среди пастерелл, эризипелотриксов, клостридий,
стрептококков группы А, сибиреязвенных и гемофильных полочек резистентные
штаммы выделяют сравнительно редко.
Наиболее частой генетической основой резистентности служит наличие в бактериях
внехромосомных факторов устойчивости к лекарственным веществам – плазмид и
транспозонов. 
Бактериальные плазмиды, связанные с переносом маркеров лекарственной
устойчивости в процессе конъюгации клеток, получили название R-факторов.
Плазмиды резистентности R (конъюгирующие) состоят из двух компонентов –
фактора переноса устойчивости RTF, обеспечивающего передачу генетической
информации, и r-фактора, отвечающего за резистентность к антибиотикам.
Транспозонные элементы — это фрагменты ДНК, которые свободно
перемещаются от одного репликона к другому. Транспозоны определяют различные
фенотипические признаки бактериальной клетки, в частности
антибиотикорезистентность, и способствуют переносу детерминант устойчивости к
антибиотикам между хромосомой, плазмидами и фагами. Они не подчиняются rec-
системам клетки, которые ограничивают передачу хромосомных маркеров между
неродственными видами. Гены, входящие в состав транспозонов, окружены
особыми нуклеотидными последовательностями (IS-элементами), которые и
обеспечивают их включение в негомологичный геном.

Способность R-факторов передаваться от клетки к клетке путем конъюгации или


трансдукции объясняет быстрое распространение их по микробной популяции.
Нередко в результате автономной репликации в одной клетке находятся десятки
копий плазмид, что способствует быстрому развитию внехромосомной
резистентности.
При трансдукции детерминанты устойчивости к антимикробным препаратам
переходят от клетки к клетке с помощью бактериофага, играющего роль
переносчика. Фаговая ДНК встраивается в бактериальный геном и при репликации,
высвобождаясь из хромосомы или плазмиды, может захватывать генетические
элементы, отвечающие за резистентность. Фаговая трансдукция играет важную роль
в распространении лекарственной устойчивости у грамположительных
микроорганизмов, особенно стафилококков и стрептококков.
Перенос плазмид при конъюгации осуществляется посредством половых пилей при
установлении контакта между двумя клетками. При этом в донорской клетке (R+)
происходит репликация плазмидной ДНК, одна цепь которой проникает в
реципиентную клетку (R-), где образует новую плазмиду. Если плазмиды
интегрированы с хромосомой, то при конъюгации возможен захват генетического
материала из хромосомы плазмидной ДНК. При этом могут передаваться
детерминанты резистентности, локализованные в хромосоме.
Передача генетической информации между микроорганизмами с
помощью трансформации имеет значение только для лабораторных исследований
и не принимает участия в распространении лекарственной устойчивости в условиях
производства.
В то же время R-плазмидная передача устойчивости к лекарственным веществам
является наиболее важным механизмом возникновения резистентности в
бактериальной популяции, особенно в семействе энтеробактерий. С эпизоотической
точки зрения наиболее опасна передача детерминант устойчивости от одного вида
микроорганизмов к другому.
Циркуляция плазмид от животных к животным, от животных к человеку и от
человека к животным способствует быстрому распространению лекарственной
резистентности во всем мире. Плазмиды резистентности распространяются в
результате контактного перезаражения лекарственно-устойчивыми
микроорганизмами больших групп животных, сконцентрированных на
ограниченных площадях животноводческих помещений. Отмечена передача R-
факторов от животных к человеку. Так, у персонала, работающего в
животноводстве, количество резистентной микрофлоры в несколько раз выше, чем у
людей, не контактирующих с животными. Высокая обсемененность туш забитых
животных и птицы лекарственно-устойчивыми микроорганизмами способствует
распространению R-факторов среди работников мясокомбинатов, а также лиц,
занятых переработкой мясопродуктов и употребляющих в пищу мясо, не
подвергнутое необходимой термической обработке.
Большинство штаммов Е. coli — комменсалы кишечника, которые легко
перемещаются как внутри популяции животных и человека, так и между ними, о
чем свидетельствует сходный набор плазмид резистентности. Основная масса этих
штаммов устойчива к большинству антибактериальных соединений. Апатогенные
эшерихии служат постоянным резервуаром плазмид резистентности, в котором
попадающий в организм возбудитель, сам по себе не несущий R-фактор, при
конъюгации может приобрести детерминанты устойчивости к лекарственным
препаратам. 
Использование антимикробных средств в заниженных дозах, увеличение интервалов
между введением препарата приводят к созданию в организме субтерапевтических
концентраций антибактериальных соединений и, как следствие этого, к селекции
резистентных форм микроорганизмов.
Применение антибиотиков, предназначенных для этиотропной терапии, с целью
повышения продуктивности животных привело к селекции микрофлоры,
резистентной к лечебным препаратам. В результате широкого употребления в
животноводстве тетрациклиновых антибиотиков в качестве кормовой добавки
большинство штаммов сальмонелл и эшерихий приобрело резистентность к
препаратам этой группы. 
Устойчивость микроорганизмов к антимикробным препаратам в случае как
плазмидной, так и хромосомной локализации детерминант резистентности может
быть обусловлена несколькими механизмами.

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы:


диффузионные и методы разведения.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам:


диффузионные методы
 с использованием дисков с антибиотиками
 с помощью Е-тестов
методы разведения
 разведение в жидкой питательной среде (бульоне)
 разведение в агаре

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность


агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности
(обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают
диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика
в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг
дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35о-37оС в течение
ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в
миллиметрах (рис. 1).

Рисунок 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным


методом.

Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится


аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том,
что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую
градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис. 2). В
месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста
получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов.


Несомненным достоинством диффузионных методов является простота
тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической
лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы
обычно используют диско-диффузионный метод.

Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных


разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например
от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом
антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду
(бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности,
соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с
антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи
при температуре 35о-37оС проводят учет полученных результатов. Наличие роста
микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара
свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы
подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика
рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию
антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не
определяется бактериальный рост принято считатьминимальной подавляющей
концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).

Минимальная подавляющая концентрация (МПК) - наименьшая концентрация


антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый
рост бактерий

Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной


среде.

Интерпретация результатов определения чувствительности

На основании получаемых количественных данных (диаметра зоны подавления


роста антибиотика или значения МПК) микроорганизмы подразделяют на
чувствительные, умеренно резистентные и резистентные (рис. 4). Для
разграничения этих трех категорий чувствительности (или резистентности) между
собой используют так называемые пограничные концентрации (breakpoint)
антибиотика (или пограничные значения диаметра зоны подавления роста
микроорганизма).
Рисунок 4. Интерпретация результатов определения чувствительности бактерий в
соответствии со значениями МПК.

Пограничные концентрации не являются неизменными величинами. Они могут


пересматриваться, в зависимости от изменения чувствительности популяции
микроорганизмов. Разработкой и пересмотром критериев интерпретации
занимаются ведущие специалисты (химиотерапевты и микробиологи), входящие в
специальные комитеты. Одним из них является Национальный комитет по
клиническим лабораторным стандартам США (National Committee for Clinical
Laboratory Standards - NCCLS). В настоящее время стандарты NCCLS признаны в
мире и используются как международные для оценки результатов определения
чувствительности бактерий при многоцентровых микробиологических и
клинических исследованиях.

Существуют два подхода к интерпретации результатов определения


чувствительности: микробиологический и клинический. Микробиологическая
интерпретация основана на анализе распределения значений концентраций
антибиотика, подавляющих жизнеспособность бактерий. Клиническая
интерпретация основана на оценке эффективности антибактериальной терапии.

Чувствительные микроорганизмы (susceptible)

Клинически к чувствительным относят бактерии (с учетом параметров,


полученных in vitro), если при лечении стандартными дозами антибиотика
инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, наблюдают хороший
терапевтический эффект.

При отсутствии достоверной клинической информации подразделение на категории


чувствительности базируется на совместном учете данных, полученных in vitro, и
фармакокинетики, т.е. на концентрациях антибиотика, достижимых в месте
инфекции (или в сыворотке крови).
Резистентные микроорганизмы (resistant)

К резистентным (устойчивым) относят бактерии, когда при лечении инфекции,


вызванной этими микроорганизмами, нет эффекта от терапии даже при
использовании максимальных доз антибиотика. Такие микроорганизмы имеют
механизмы резистентности.

Микроорганизмы c промежуточной резистентностью (intermediate)

Клинически промежуточную резистентность у бактерий подразумевают в случае,


если инфекция, вызванные такими штаммами, может иметь различный
терапевтический исход. Однако лечение может быть успешным, если антибиотик
используется в дозировке, превышающей стандартную, или инфекция локализуется
в месте, где антибактериальный препарат накапливается в высоких концентрациях.

С микробиологической точки зрения к бактериям с промежуточной


резистентностью относят субпопуляцию, находящуюся в соответствии со
значениями МПК или диаметра зон, между чувствительными и резистентными
микроорганизмами. Иногда штаммы с промежуточной резистентностью и
резистентные бактерии объединяют в одну категорию резистентных
микроорганизмов.

Необходимо отметить, что клиническая интерпретация чувствительности бактерий


к антибиотикам является условной, поскольку исход терапии не всегда зависит
только от активности антибактериального препарата против возбудителя.
Клиницистам известны случаи, когда при резистентности микроорганизмов, по
данным исследования in vitro, получали хороший клинический эффект. И наоборот,
при чувствительности возбудителя может наблюдаться неэффективность терапии.

В определенных клинических ситуациях, когда недостаточно результатов


исследования чувствительности обычными методами, определяют минимальную
бактерицидную концентрацию.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) - наименьшая концентрация


антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при исследовании in vitro вызывает гибель
99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определенного периода времени.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) - это наименьшая


концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при
исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного
уровня в течение определенного периода времени

Значение МБК используют при терапии антибиотиками, обладающими


бактериостатическим действием, или при отсутствии эффекта от
антибактериальной терапии у особой категории больных. Частными случаями для
определения МБК могут быть, например, бактериальный эндокардит, остеомиелит
или генерализованные инфекции у пациентов с иммунодефицитными состояниями.

В заключение хотелось бы отметить, что на сегодняшний день не существует


методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать
клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. Однако,
данные результатов определения чувствительности могут служить хорошим
ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии.

Таблица 1. Критерии интерпретации чувствительности бактерий


Категория
Микробиологическая
чувствительности Клиническая характеристика
характеристика
микроорганизма
Чувствительный Не имеет механизмов Терапия успешна при
резистентности использовании обычных доз
С промежуточной Субпопуляция, Терапия успешна при
резистентностью находящаяся между использовании максимальных
чувствительной и доз или при локализации
резистентной инфекции в местах, где
антибиотик накапливается в
высоких концентрациях
Резистентный Имеет механизмы Нет эффекта от терапии при
резистентности использовании максимальных
доз

28. Особенности структуры и функционирования генетического аппарата у


эукариот, прокариот, ДНК- и РНК- содержащих вирусов.

В состав нуклеотида бактерий входят ДНК, РНК и белки. Число нуклеотидов в


бактериальной клетке может варьировать от одного (в культурах, находящихся в
стационарной фазе роста) до двух (в стадии задержки размножения после переноса
клеток в свежую среду) и четырех (в культурах с постоянной скоростью роста).
Каждый нуклеотид содержит двухцепочечную замкнутую в кольцо молекулу ДНК.
В молекуле ДНК нуклеотида закодирована вся генетическая информация,
необходимая для жизнедеятельности клетки, в связи с этим нуклеотид
рассматривают как бактериальную хромосому. Хромосомы имеют кольцевое
строение. Гигантская молекула ДНК бактериальной хромосомы поддерживается
связанными с ней молекулами РНК и белка в форме компактной структуры,
свернутой в отдельные сверхспирализованные петли (домены), число которых
колеблется от 12 до 80.
Помимо хромосомной ДНК в состав генома многих прокариот входят также
сверхскрученные, ковалентно-замкнутые кольцевые молекулы внехромосомной,
или плазмидной, ДНК.
Способы передачи наследственной информации у бактерий:
1. трансформация – перенос изолированных фрагментов молекулы ДНК из одного
организма к другому.
2. трансдукция это способность переносить наследственную информацию от одного
организма к другому при помощи вирусов.
3. конъюгация – обмен наследственной информацией.
Вирусы, представляют из себячастицы (вирионы), стоящие на грани между живой и
неживой природой и обладающие инфекционными свойствами. В дословном
переводе термин ʼʼвирусʼʼ обозначает яд, ядовитое вещество.
Генетический материал вируса представлен одной молекулой нуклеиновой кислоты,
ДНК или РНК, не связанной с белком. В связи с этим вирусы подразделяются на
ДНК- и РНК-содержащие. Вирусы бактерий чаще содержат ДНК, а почти всœе
вирусы растений и подавляющее большинство вирусов человека – РНК.
Нуклеиновая кислота вируса бывает одно- или двухцепочечной и может иметь
кольцевую или линœейную форму. Кольцевая форма ДНК более стабильна и
свойственна большинству вирусов. Кольцо ДНК (РНК) обычно бывает перекручено,
в связи с этим она имеет суперспирализованный вид.
В нуклеиновой кислоте вируса закодирована информация о всœех его структурных
белках. Многие вирусы содержат гены специфических полимераз (репликаз) —
ферментов, контролирующих репликацию молекул нуклеиновых кислот. Но чаще
вирусы используют для репликации ферментов клетки-хозяина. Некоторые мелкие
вирусы содержат только три гена. Гены вирусов могут существовать в виде
фрагментов ДНК, разделœенных генетически инœертными нуклеотидными
последовательностями. Эти последовательности в момент работы генов
ʼʼвырезаютсяʼʼ, и целостность генетической информации восстанавливается.
Генетическое вещество у вирусов заключено в белковую оболочку, которая вместе с
нуклеиновой кислотой образует так называемый капсид или нуклеокапсид.
Большинство вирусов растений и РНК-содержащих бактериальных фагов состоит
только из нуклеиновой кислоты и белка.

29. Определение понятия “фенотип” и формы фенотипической изменчивости.


Фенотипическая изменчивость у эукариот, формы проявления.
Модификационная изменивость-изменчивость фенотипов,в пределах нормы
реакции под действием факторов среды. Модфикационная изменчивость не
передается по наследству и возникает как приспособление организма ,т.е .
представляет собой адаптацию. Норма реакции-передел модификационной
изменчивости признака ,обусловленный генотипом,всязи с чем наследуется.Метод
изучения модификационнаой изменчивости вариационно-статистический и
гнеалогический.Вариационный ряд-ряд модификационной изм.признака,слагающий
из отдельных значений,расположенных в порядке увел. или умен.колличественного
выражения признака(размеры листьев,число цветков в колосье и т.д.)

Свойства модификаций: 1) ненаследуемость; 2) групповой характер изменений; 3)


соотнесение изменений действию определенного фактора среды; 4)
обусловленность пределов изменчивости генотипом.
30. Фенотипическая изменчивость у прокариот. L-трансформация.
Морфофизиологическая характеристика протопластов, сферопластов, L-форм.
Фенотипическая (модификационная, ненаследственная) изменчивость —
фенотипические, временные, наследственно не закрепленные изменения у
бактерий. Модификации также контролируются геномом бактерий, но в отличие
от мутаций не сопровождаются изменениями первичной структуры ДНК.
Модификации возникают как адаптивные (лат. adaptatio — приспособление)
реакции бактерий на изменения окружающей среды. Это позволяет бактериям
быстро приспосабливаться к изменяющимся условиям среды и сохранять
численность популяции. После устранения причины бактерии реверсируют к
исходному фенотипу.
Фенотип (от греч. phaino— являю) — совокупность экспрессированных
(реализованных) генетически детерминированных признаков, т. е.
индивидуальное проявление генома. При этом микроорганизм наследует не
признак, а потенциальную способность к проявлению этого признака. Условия
окружающей среды способствуют проявлению (экспрессии) генов или, наоборот,
подавляют их функциональную активность.
Генотип микроорганизмов проявляется в фенотипе в виде определенных
признаков: в способности к образованию жгутиков, капсулы, ферментации
углеводов, образованию токсинов. При изменении условий существования
фенотип бактерий изменяется при сохранении генотипа.
Фенотип бактерий обозначают теми же знаками, что и генотип, но с прописной
буквы.
Виды модификаций у бактерий:
1) морфологические — проявляются обратимыми изменениями морфологии
(обратимая утрата капсулы, жгутиков, фимбрий, КС, способности к
спорообразованию). Напр., образующиеся под действием пенициллина L-формы
бактерий, лишенные КС, могут сохраняться и даже размножаться внутри клеток
хозяина, а после прекращения действия пенициллина вновь реверсировать к
исходной форме. При выращивании многих бактерий на питательной среде с
суббактериостатическими концентрациями антибиотиков и антисептиков также
можно получить их модификации, характеризующиеся изменением
морфологических признаков. Напр., B. anthracis при 42,50С спор не образует, а
при 35–370С — образует споры.
2) биохимические — проявляются индуцибельным синтезом ферментов. Напр.,
кишечная палочка только в присутствии лактозы синтезирует ферменты,
необходимые для ее ферментации. Стафилококки только в присутствии
пенициллина синтезируют фермент пенициллиназу, разрушающий данный
антибиотик.
3) антигенные — проявляются сменой антигенов микроорганизмов в ходе
инфекционного заболевания в результате включения «молчащих» генов (без их
перестройки). К модификациям такого рода относятся изменения антигенной
структуры гонококка, трепонемы сифилиса, боррелий возвратного тифа,
холерного вибриона.
4) L-формы – утрачивание кл ст Гр+ ---протопласты, Гр- ------сферопласты, при
этом меняются свойства: устойчивость, тинкториальные свойства, морфология.
Это приспособившиеся к делению формы, цель Аб-терапии перевести эти формы
в стабильные
L-трансформация
Она может быть обратимой и необратимой. В случае если генетический контроль
синтеза клеточной стенки сохраняется, L-формы при благоприятных условиях могут
возвращаться в исходную бактериальную форму с восстановлением всех основных
биологических свойств, включая патогенность. Если же генетический контроль
синтеза клеточной стенки нарушен необратимо, L-трансформация приобретает
необратимый характер, а такие L-трансформанты по своим морфологическим,
культуральным и иным свойствам становятся неотличимыми от микоплазм.
Различают стабильные и нестабильные L-формы бактерий. Первые полностью
лишены ригидной клеточной стенки, что сближает их с протопластами; они крайне
редко реверсируют в исходные бактериальные формы. Вторые могут обладать
элементами клеточной стенки, в чем они проявляют сходство со сферопластами; в
отсутствие фактора, вызвавшего их образование, реверсируют в исходные клетки. L-
трансформации могут подвергаться, по-видимому, все бактерии, имеющие
клеточную стенку, а все образующиеся L-формы, независимо от вида бактерий, из
которого они возникли, обладают следующими общими для них особенностями:
1. Сходство морфологических изменений: образование нитевидных, волокнистых,
колбасовидных, шаровидных и гранулярных форм.
2. Сходные культуральные свойства: анаэробные или микроаэрофильные условия
роста, потребность в холестерине и сывороточном белке, рост на плотных средах в
виде характерных колоний двух типов – А и В (рис. 8). Колонии типа А растут на
поверхности агара, имеют очень мелкие размеры. Они состоят главным образом из
гранулярных структур, лишенных клеточной стенки, и очень похожи на
микоплазмы. Колонии типа В состоят из центральной зоны, врастающей в агар, и
прозрачной фестончатой периферической зоны. Они похожи по внешнему виду на
колонии типа «глазуньи», образуемые микоплазмами, но более крупные и грубые. В
этих колониях обнаруживаются крупные тела, содержащие компоненты клеточной
стенки, сходные со стенкой родительских бактерий, но лишенные ригидности.
Многие бактерии образуют колонии А и В типов, однако грамположительные
бактерии (Streptococcus, Staphylococcus) чаще образуют колонии только типа А. L-
формы бактерий из колоний типа В легко ревертируют в исходные формы. Колонии
типа А более стабильны и ревертируют в исходные формы значительно реже.
3. Постепенное (по мере нарушения синтеза клеточной стенки) превращение из
грамположительных в грамотрицательные структуры.
4. Образование стабильных и нестабильных L-форм (в зависимости от степени
полноты утраты способности синтезировать клеточную стенку).
5. Изменение антигенных свойств (утрата К– и О-антигенов как следствие
нарушения синтеза клеточной стенки).
6. Снижение вирулентности по сравнению с исходными родительскими формами в
связи с утратой различных факторов патогенности (адгезии, инвазии, эндотоксина и
т. п.).
7. Способность длительно персистировать (переживать) в организме. Утрата
клеточной стенки делает L-формы нечувствительными к различным
химиопрепаратам и антителам.
8. Способность при неполной утрате синтеза клеточной стенки возвращаться в
исходную бактериальную форму.
L-трансформация происходит как in vitro, так и in vivo (в организме человека и
животных). Факторами, индуцирующими ее, являются различные антибиотики,
угнетающие биосинтез клеточной стенки (пенициллин, цефалоспорины,
циклосерин, ванкомицин и т. п.); ферменты (лизоцим, амидаза, эндопептидаза);
антимикробные антитела; высокие концентрации некоторых аминокислот, особенно
глицина и фенилаланина.
Исключительное значение L-трансформации патогенных бактерий заключается в
том, что она является частой причиной перехода острых форм заболеваний в
хронические и их обострений. L-трансформацию надо рассматривать не просто как
одно из проявлений изменчивости бактерий, а как своеобразную, присущую всем
бактериям форму приспособления к неблагоприятным условиям существования
(подобно спорообразованию), которая способствует сохранению вида бактерий в
природе. Клеточная стенка и ее синтез чувствительны к действию антител и
различных химиопрепаратов. Освобождение от нее не лишает бактерии
жизнеспособности, но позволяет переживать действие этих неблагоприятных для
них факторов, а по их устранении – возвращаться в свое исходное состояние.
Инфекционный процесс, вызванный L-формами бактерий, характеризуется
атипичностью, длительностью течения, тяжестью заболевания, трудно поддается
химиотерапии.

Морфофизиологическая характеристика протопластов, сферопластов, L-форм.


При обработке грамположительных бактерий ферментами, разрушающими
пептидогликан, возникают полностью лишенные клеточной стенки
структуры- протопласты. Обработка грамотрицательных бактерий лизоцимом
разрушает только слой пептидогликана, не разрушая полностью внешней мембраны;
такие структуры называют сферопластами. Протопласты и сферопласты имеют
сферическую форму (это свойство связано с осмотическим давлением и характерно
для всех безклеточных форм бактерий).

31. Определение понятия “генотип”, формы генотипической изменчивости.


Виды мутационной изменчивости, мутагены.

Генотип - вся совокупность имеющихся у организма генов.

ИЗМЕНЧИВОСТЬ
1.ЭПИГЕНЕТИЧЕСКАЯ
2.ГЕНОТИПИЧЕСКАЯ
 Рекомбинантная(трансформация, трансдукция, конъюгация)
 Мутация
 Диссоциация – связана с ростом на одной и той же среде. Под влиянием
продуктов метаболизма образуются S-формы (гладкие)и R-
форм(шероховатые)
3. ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ

Функциональными единицами генома бактерий, кроме хромосомных генов,


являются:
1) IS-последовательности;
2) транспозоны;
3) плазмиды.
IS-последовательности – это короткие фрагменты ДНК. Они не несут структурных
(кодирующих белок) генов, а содержат только гены, ответственные за транспозицию
(способность перемещаться по хромосоме и встраиваться в различные ее участки).
Транспозоны – это более крупные молекулы ДНК. Помимо генов, ответственных за
транспозицию, они содержат и структурный ген. Транспозоны способны
перемещаться по хромосоме. Их положение сказывается на экспрессии генов.
Транспозоны могут существовать и вне хромосомы (автономно), но неспособны к
автономной репликации.
Плазмиды – дополнительный внехромосомный генетический материал.
Представляет собой кольцевую, двунитевую молекулу ДНК, гены которой
кодируют дополнительные свойства, придавая селективные преимущества клеткам.
Плазмиды способны к автономной репликации, т. е. независимо от хромосомы или
под слабым ее контролем. За счет автономной репликации плазмиды могут давать
явление амплификации: одна и та же плазмида может находиться в нескольких
копиях, тем самым усиливая проявление данного признака.

Мутации. Под мутацией (от mutatio — изменение) понимают внезапные,


скачкообразные изменения наследственных свойств.
Генотипическая изменчивость. Изменениям подвержен также и генотип.
Генотипическая изменчивость играет большую роль в эволюции организмов: если
бы клетки не обладали способностью к изменению генотипа, то любое
неблагоприятное изменение условий среды привело бы к вымиранию вида.
В основе генотипической изменчивости лежат мутации и рекомбинации. Они
происходят в структуре ДНК — генетическом аппарате клетки — и проявляются в
стабильности изменений каких-либо свойств.
Мутации. Под мутацией (от mutatio — изменение) понимают внезапные,
скачкообразные изменения наследственных свойств. Основу этого явления
составляют качественные или количественные изменения последовательности
нуклеотидов в ДНК, которые могут возникать при жизнедеятельности бактерий под
влиянием эндогенных факторов или при действии химических и физических
мутагенов.
По направленности мутации:
 прямые,
 обратные мутации.
По локализации различают мутации:
1) генные (точечные);
2) хромосомные;
3) плазмидные.
По происхождению мутации могут быть:
1) спонтанными (мутаген неизвестен);
2) индуцированными (мутаген неизвестен).
Рекомбинации – это обмен генетическим материалом между двумя особями с
появлением рекомбинантных особей с измененным генотипом.
У бактерий существует несколько механизмов рекомбинации:
1) конъюгация;
2) слияние протопластов;
3) трансформация;
4) трансдукция.
Конъюгация – обмен генетической информацией при непосредственном контакте
донора и реципиента. Наиболее высокая частота передачи у плазмид, при этом
плазмиды могут иметь разных хозяев. После образования между донором и
реципиентом конъюгационного мостика одна нить ДНК-донора поступает по нему в
клетку-реципиент. Чем дольше этот контакт, тем большая часть донорской ДНК
может быть передана реципиенту.
Слияние протопластов – механизм обмена генетической информацией при
непосредственном контакте участков цитоплазматической мембраны у бактерий,
лишенных клеточной стенки.
Трансформация – передача генетической информации в виде изолированных
фрагментов ДНК при нахождении реципиентной клетки в среде, содержащей ДНК-
донора. Для трансдукции необходимо особое физиологическое состояние клетки-
реципиента – компетентность. Это состояние присуще активно делящимся клеткам,
в которых идут процессы репликации собственных нуклеиновых кислот. В таких
клетках действует фактор компетенции – это белок, который вызывает повышение
проницаемости клеточной стенки и цитоплазматической мембраны, поэтому
фрагмент ДНК может проникать в такую клетку.
Трансдукция – это передача генетической информации между бактериальными
клетками с помощью умеренных трансдуцирующих фагов. Трансдуцирующие фаги
могут переносить один ген или более.
Трансдукция бывает:
1) специфической (переносится всегда один и тот же ген, трансдуцирующий фаг
всегда располагается в одном и том же месте);
2) неспецифической (передаются разные гены, локализация трансдуцирующего фага
непостоянна).
Рекомбинации у бактерий отличаются от рекомбинаций у эукариот:
Во-первых, у бактерий имеется несколько механизмов рекомбинаций (обмена
генетическим материалом).
Во-вторых, при рекомбинациях у бактерий образуется не зигота, как у эукариот, а
мерозигота (несет полностью генетическую информацию реципиента и часть
генетической информации донора в виде дополнения).
В третьих, при рекомбинациях у бактериальной клетки-рекомбината изменяется не
только качество, но и количество генетической информации.

Мутагены - физ. или хим. факторы, повреждающие ДНК и ведущие к


возникновению мутаций. Активностью М. обладают ультрафиолетовая и
ионизирующая радиация, аналоги оснований ДНК, алкилирующие агенты
(гидроксиламин, азотистая к-та), акридины. Определенные М. часто индуцируют
однотипные мутации.

Мигрирующие генетические элементы – отдельные участки ДНК, способные


осуществлять собственный перенос (транспозицию) внутри генома или переходить
от одного генома к другому (например, от плазмидного к бактериальному).
Транспозиция связана со способностью мигрирующих элементов кодировать
специфический элемент рекомбинации – транспозазу. К ним относятся
инсерционные последовательности, транспозоны и эписомы.
Инсерционные (вставочные) последовательности (IS-элементы) состоят из 800-
1500 пар оснований. Они самостоятельно не кодируют распознаваемых
фенотипических признаков, их функции – регуляция активности генов, индукция
мутаций типа делеций или инверсий, координация взаимодействия плазмид,
транспозонов и профагов как между собой, так и с бактериальной хромосомой.
Транспозоны (Tn-элементы) – более крупные сегменты ДНК, помимо генов,
обеспечивающих их транспозицию, содержат и другие гены, например, гены
лекарственной устойчивости. Транспозоны обнаружены в геномах плазмид,
вирусов, прокариот и эукариот.
Эписомы – еще более крупные и сложные саморегулирующиеся системы,
содержащие IS-элементы и транспозоны и способные реплицироваться в любом из
двух своих альтернативных состояниях - автономном или интегрированном – в
хромосому клетки-хозяина. К эписомам относят различные умеренные лизогенные
фаги: они имеют собственную белковую оболочку и сложный цикл репродукции.
Это могут быть и вирусы, обладающие способностью в интактной форме
переходить из одного генома в другой.
Все вышеперечисленные особенности генетического материала бактерий
обусловливают разнообразные изменения генотипа и многообразие фенотипических
свойств. Изменение генотипа в результате мутации генов или их рекомбинации
лежат в основе генотипической изменчивости микроорганизмов.
Генотипическая изменчивость может быть мутационной, обусловленной
изменениями в ДНК под влиянием мутагенов, и комбинативной, связанной с
процессом образования новых комбинаций генов в генотипе.

32. Диссоциация бактерий. Характеристика S-форм и R-форм, клиническое


значение.
Стандартное проявление модификации — распределение однородной популяции
на несколько типов — диссоциация. Обычно диссоциации возникают в условиях,
неблагоприятных для исходной популяции. Примером диссоциации может
служить изменение вида и структуры бактериальных колоний на твердых
питательных средах.
Для обозначения диссоциирующих колоний используют первые буквы английских
названий: S–колонии (англ. smooth — гладкий); R–колонии (англ. rough—
шероховатый); М–колонии (англ. mucoid — слизистый) и D–
колонии (англ. dwarf — карликовый).

Диссоциация обычно протекает в направлении S -» R, иногда через образование


промежуточных слизистых (М) колоний. Обратный (R S) переход наблюдают
значительно реже. Большинство патогенных для человека бактерий образует S-
колонии; исключение составляют возбудители туберкулёза, чумы, сибирской
язвы и немногие другие.

Следует помнить, что диссоциации сопровождаются изменениями


биохимических, морфологических, антигенных и патогенных свойств
возбудителей.

SR–диссоциация — появление в чистой культуре, образующей S-формы колоний,


R-форм колоний как внешнее проявление изменений свойств образующих их
бактериальных клеток.
Механизмы SR–диссоциации:
– инсерционная мутация, приводящая к утрате генов, контролирующих синтез
полисахаридных звеньев ЛПС наружной мембраны КС (у E. coli);
– лизогенизация фагами (у C. diphtheriae);
– интеграция в хромосому R-плазмиды, транспозонов или IS-последовательностей;
– рекомбинации (у S. pyogenes).
Биологическое значение SR–диссоциации:в процессе диссоциации одновременно с
изменением морфологии колоний изменяются другие свойства бактерий:
– R–формы более резистентны к физическим и химическим факторам внешней
среды, дольше сохраняются в воде, молоке как факторах передачи инфекций;
– S–формы более резистентны к фагоцитозу и действию антител;
– так как диссоциации сопровождаются изменениями биохимических,
морфологических, антигенных и вирулентных свойств возбудителей, это
значительно усложняет этиологическую диагностику.

Мутации, которые приводят к S-R-диссоциации, относятся к инсертационным,


поскольку они возникают после встраивания внехро-мосомных факторов
наследственности, в том числе и умеренных фагов в бактериальную хромосому.
Если эта мутация приводит к утрате генов, контролирующих образование
детерминантных полисаха-ридных звеньев ЛПС у грамотрицательных бактерий, то
образуются R-мутанты. Они формируют шероховатые колонии, изменяют свои
антигенные свойства и резко ослабляют патогенность. У дифтерийных бактерий S-
R-диссоциация связана с их лизогенизацией соответствующими бактериофагами.
При этом R-формы образуют токсин. У других бактерий R-формы возникают после
интеграции в их хромосому R-плазмиды, транспозонов или Is-последовательностей.
R-формы пиогенных стрептококков и ряда других бактерий образуются в результате
рекомбинаций.
Признаком Д. б., доступным наблюдению, является изменение морфологии колоний
на плотной питательной среде. Эти изменения типичны для филогенетически
родственных групп микроорганизмов и, как правило, необратимы. Обычно за норму
принимают характер роста культуры при рассеве на плотной среде в виде
блестящих, гладких колоний маслянистой консистенции — S-формы (англ. smooth
гладкий), в отличие от шероховатых или складчатых R-колоний (англ. rough грубый,
шероховатый), характеризующих резко выраженный процесс диссоциации.
Структурные различия этих основных типов колоний, наблюдающихся при
диссоциации большинства бактерий, определяются физ.-хим. факторами (состав
среды, условия роста и развития), а также особенностями измененных клеток, при
делении различно перемещающихся относительно друг друга. В зависимости от
типа деления и силы сцепления клеточных элементов проявляется рыхлость
строения и мутантность поверхности колоний у R-вариантов
R-колонии образуются при замедленном разделении укрупненных клеток,
складывающихся в виде неэластичных цепочек, при скоплении в популяции
дающих характерные «изломы», что отражается и на особенностях макроструктуры
колоний (рис. 2). Диссоциированную культуру легко отличить и по росту в жидкой
питательной среде. Для гладкой формы типично равномерное помутнение среды, за
к-рым следует образование вязкого осадка, при встряхивании поднимающегося в
виде косы; развитие в жидкой среде шероховатой формы бактерий характеризуется
образованием крошковатого придонного осадка и иногда такого же пристеночного
роста; среда при этом остается прозрачной, а на поверхности может образоваться
пылевидная, а затем морщинистая пленка.
При суспендировании в физиол, р-ре диссоциированных бактерий, выросших на
плотной среде, также выпадает крошковатый осадок, особенно интенсивный при
нагревании суспензии.
Представления о S-формах как о нормальных, типичных и R-формах— как о
неполноценных, дегенеративных применимы не ко всем видам бактерий. Так, для
микобактерий туберкулеза, бацилл сибирской язвы, картофельной и сенной палочек,
так же как для многих видов грибков, нормальным является шероховатая структура
колоний на плотной среде и соответствующий тип роста в жидкой среде,
остающейся прозрачной.
В процессе диссоциации у большинства патогенных микроорганизмов снижается
токсичность или вирулентность.
У многих бактерий известна промежуточная форма колоний между S и R —
слизистая, М-форма (англ. mucoid), однако она нестабильна. Для некоторых видов
бактерий, кроме названных, применяются также обозначения: D — карликовая
форма (англ. dwarf карлик) и G — гонидиальная форма (англ. gonidial).
Правильное представление о Д. б. имеет практическое значение для предотвращения
дегенеративных изменений в свойствах ценных типовых культур или штаммов
продуцентов в производстве бактерийных препаратов, поэтому основные признаки,
характеризующие бактерии в S- и R-формах, сохраняют значение. Кроме различий,
указанных в таблице, R-формы кишечных бактерий отличаются от S-форм большей
устойчивостью к УФ-лучам, выраженными антикомплементарными свойствами
(см. Комплемент) и высокой резистентностью к бактериолизинам нормальной
сыворотки крови. Степень и характер диссоциативных изменений популяции
бактерий могут быть определены с использованием современных методов
генетического анализа мутационных изменений и их фенотипической экспрессии.
Феноменологические данные и микробиол, тесты идентификации основных
диссоциативных форм бактерий сохраняют свое значение при диагностических
исследованиях.
Клиническое значение S-R-диссоциации состоит в приобретении бактериями
определенных селективных преимуществ, обеспечивающих их существование в
организме человека или во внешней среде. К ним относится более высокая
устойчивость S-форм к фагоцитозу макрофагами, бактерицидному действию
сыворотки крови. R-формы обладают большей устойчивостью к факторам
окружающей среды. Они более длительное время сохраняются в воде, молоке.
Вместе с тем S-R-диссоциация во многих случаях усложняет бактериологическую
диагностику ряда инфекционных заболеваний, например дизентерии Зонне,
эшерихиоза, вызванного Е. coli О124 и др.

33. Рекомбинация у бактерий: трансформация, трансдукция, коньюгация.


Рекомбинации (обмен генетическим материалом) у
бактерий отличаются от рекомбинаций  у эукариот:
• у бактерий имеется несколько механизмов рекомбинаций;
• при рекомбинациях у бактерий образуется не зигота, как у эукариот,
а мерозигота (несет полностью генетическую информацию реципиента и часть
генетической информации донора в виде дополнения);
• у бактериальной клетки-рекомбината изменяется не только качество, но
и количество генетической информации.
Трансформация — это обмен генетической информацией у бактерий путем
введения в бактериальную клетку-реципиент готового препарата
ДНК (специально приготовленного или непосредственно выделенного из клетки-
до нора). Чаще всего передача генетической информации происходит при
культивировании реципиента на питательной среде, содержащей ДНК донора. Для
восприятия донорской ДНК при трансформации клетка-реципиент должна
находиться в определенном физиологическом
состоянии(компетентности), которое достигается специальными методами
обработки бактериальной популяции.
При трансформации передаются единичные (чаще 1) признаки.
Трансформация является самым объективным свидетельством связи ДНК или ее
фрагментов с тем или иным фенотипическим признаком, поскольку в
реципиентную клетку вводится чистый препарат ДНК.
Трансдукция — обмен генетической информацией у бактерий путем
передачи ее от донора к реципиенту с помощью умеренных (трансдуцирующих)
бактериофагов.
Трансдуцирующие фаги могут переносить 1 или более генов (признаков).
Трансдукиия бывает:
• специфической — переносится всегда один и тот же ген;
• неспецифической — передаются разные гены.
Это связано с локализацией трансдуиируюших фагов в геноме донора:
• в случае специфической трансдукции они располагаются всегда в одном
месте хромосомы;
• при неспецифической их локализация непостоянна.
Конъюгация — обмен генетической информацией у бактерий путем
передачи ее от донора к реципиенту при их прямом контакте. После образования
между донором и реципиентом конъюгационного мостика одна нить ДНК-донора
поступает по нему в клетку-реципиент. Чем дольше контакт, тем большая часть
донорской ДНК может быть передана реципиенту.
Основываясь на прерывании конъюгации через определенные промежутки
времени, можно определить порядок расположения генов на хромосоме бактерий
— построить хромосомные карты бактерий (произвести картирование
бактерий).

34. Плазмиды. Виды плазмид. Роль плазмид в изменчивости бактерий.


Плазмиды — внехромосомные мобильные генетические структуры бактерий,
представляющие собой замкнутые кольца двунитчатой ДНК. По размерам
составляют 0,1—5 % ДНК хромосомы. Плазмиды способны автономно
копироваться (реплицироваться) и существовать в цитоплазме клетки, поэтому в
клетке может быть несколько копий плазмид. Плазмиды могут включаться (интег-
рировать) в хромосому и реплицироваться вместе с ней. Разли-
чают трансмиссивные  и нетрансмиссивные  плазмиды. Трансмиссивные
(конъюгативные) плазмиды могут передаваться из одной бактерии в другую.
Среди фенотипических признаков, сообщаемых бактериальной клетке плазмидами,
можно выделить следующие:
1) устойчивость к антибиотикам;
2) образование колицинов;
3) продукция факторов патогенности;
4) способность к синтезу антибиотических веществ;
5) расщепление сложных органических веществ;
6) образование ферментов рестрикции и модификации.
Термин «плазмиды» впервые введен американским ученым Дж. Ледербергом (1952)
для обозначения полового фактора бактерий. Плазмиды несут гены, не обязательные
для клетки-хозяина, придают бактериям дополнительные свойства, которые в
определенных условиях окружающей среды обеспечивают их временные
преимущества по сравнению с бесплазмидными бактериями.
Некоторые плазмиды находятся под строгим контролем. Это означает, что их
репликация сопряжена с репликацией хромосомы так, что в каждой бактериальной
клетке присутствует одна или, по крайней мере, несколько копий плазмид.
Число копий плазмид, находящихся под слабым контролем, может достигать от 10
до 200 на бактериальную клетку.
Для характеристики плазмидных реплико-нов их принято разбивать на группы
совместимости. Несовместимость плазмид связана с неспособностью двух плазмид
стабильно сохраняться в одной и той же бактериальной клетке. Несовместимость
свойственна тем плазмидам, которые обладают высоким сходством репликонов,
поддержание которых в клетке регулируется одним и тем же механизмом.
Некоторые плазмиды могут обратимо встраиваться в бактериальную хромосому и
функционировать в виде единого репликона. Такие плазмиды
называются интегративными  или эписомами.
У бактерий различных видов обнаружены R-плазмиды, несущие гены,
ответственные за множественную устойчивость к лекарственным препаратам —
антибиотикам, сульфаниламидам и др., F-плазмиды, или половой фактор бактерий,
определяющий их способность к конъюгации и образованию половых пилей, Ent-
плазмиды, детерминирующие продукцию энтеротоксина.
Плазмиды могут определять вирулентность бактерий, например возбудителей чумы,
столбняка, способность почвенных бактерий использовать необычные источники
углерода, контролировать синтез белковых антибиотикоподобных веществ —
бактериоцинов, детерминируемых плазмидами бактериоциногении, и т. д.
Существование множества других плазмид у микроорганизмов позволяет полагать,
что аналогичные структуры широко распространены у самых разнообразных
микроорганизмов.
Плазмиды подвержены рекомбинациям, мутациям, могут быть элиминированы
(удалены) из бактерий, что, однако, не влияет на их основные свойства. Плазмиды
являются удобной моделью для экспериментов по искусственной реконструкции
генетического материала, широко используются в генетической инженерии для
получения рекомбинантных штаммов. Благодаря быстрому самокопированию и
возможности конъюгаци-онной передачи плазмид внутри вида, между видами или
даже родами плазмиды играют важную роль в эволюции бактерий.
Плазмиды содержат структурные гены, наделяющие бактериальную клетку
разными, весьма важными для нее свойствами:
• R-плазмиды — лекарственной устойчивостью;
• Col-плазмиды — способностью синтезировать колицины; Кодируют синтез
бактериоцинов. Это бактерицидные вещества, действующие на
близкородственные бактерии;
• F-плазмиды — передавать генетическую информацию;
• Шу-плазмиды — синтезировать гемолизин;
• Тох-плазмиды — Кодируют выработку экзотоксинов;
• плазмиды биодеградации — Кодируют ферменты, с помощью которых
бактерии могут утилизировать ксенобиотики.
Потеря клеткой плазмиды не приводит к ее гибели. В одной и той же клетке
могут находиться разные плазмиды.
Плазмиды могут быть интегрированы в хромосому (в отличие от IS-
последовательностей и транспозонов, встраиваются в строго определенные
участки), а могут существовать автономно. В этом случае они обладают
способностью к автономной репликации, и именно поэтому в клетке может
быть 2, 4, 8 копий такой плазмиды.
Многие плазмиды имеют в своем составе гены трансмиссивности и
способны передаваться от одной клетки к другой при конъюгации (обмене
генетической информацией). Такие плазмиды называются трансмиссивными.
Наличие F-плазмиды (фактор фертильности, половой фактор)
придает бактериям функции донора, и такие клетки способны передавать
свою генетическую информацию другим, F-клеткам. Можно сказать,
что наличие F-плазмиды является фенотипическим
выражением(проявлением) пола у бактерий: с F-плазмидой связана не только
донорская функция, но и некоторые другие фенотипические признаки
— наличие F-пилей (половых ресничек) и чувствительность к L-фагам. С
помощью F-ресничек устанавливается контакт между донорскими и
реципиентными клетками. Через их канал и передается донорская ДНК при
рекомбинации. На половых ресничках расположены рецепторы для мужских
fj-фагов. F-клетки не имеют таких рецепторов и нечувствительны к таким
фагам.

35. Генная инженерия и современная биотехнология. Примеры использования в


микробиологической практике.

Генная инженерия – раздел молекулярной генетики, связанный с


конструированием не существующих в природе сочетаний генов при помощи
генетических и биохимических методов.
Методы генной инженерии
Возможность выделения отдельных генов в составе относительно небольших
фрагментов ДНК была продемонстрирована незадолго до возникновения генной
инженерии в экспериментах in vitro . В 1969 г. Дж. Беквит, Дж. Шапиро и другие
опубликовали работу по выделению генов лактозного оперона Е.coli, основанную на
сочетании традиционных методов генетики микроорганизмов и физических методов
выделения и гибридизации молекул ДНК.
Отдельные гены с целью их последующего молекулярного клонирования в
составе рекомбинантных ДНК методами генной инженерии могут быть получены
следующими способами:
1)непосредственным выделением из природных источников;
2)путем химического синтеза;
3) копированием соответствующей гену и РНК для получения комплиментарной
ДНК-вой
Получены и клонированы гены, кодирующие глобины человека, животных и птиц,
белок хрусталика глаза быка, яичный белок, фиброин шелка, продуцируемый
тутовым шелкопрядом, и др. Этот же принцип был применен для получения,
клонирования и экспрессии генов интерферона человека в бактериях. Интерферон —
ценный лекарственный препарат, широко используемый для борьбы с вирусными
инфекциями и лечения ряда других заболеваний, включая злокачественные опухоли.
Интерферон вырабатывается в клетках животных и человека, но обладает
выраженной видоспецифичностью. Ю. А. Овчинников и В. Г. Дебабов с
сотрудниками получили микроорганизмы, эффективно синтезирующие интерфероны
человека. Этим исследователям удалось сконструировать рекомбинантные плазмиды,
обуславливающие синтез интерферона человека в Е. coli (рис. 16.2). Очищенный из
клеток бактерий интерферон по своим физико-химическим и биологическим
свойствам оказался близок интерферону, находящемуся в крови доноров. За счет
введения в векторную плазмиду сигнальных последовательностей, инициирующих
синтез иРНК и белка, удалось получить бактерии, способные синтезировать до 5 мг
интерферона а расчете на 1 л суспензии бактерий. Это в 5000 раз больше, чем
содержится в 1 л крови доноров. Замена Е. coli намикробы некоторых других видов
позволяет еще больше увеличить производительность такой «фабрики интерферона»

Биотехнология [от греч. bios, жизнь, + techne, мастерство] — наука, изучающая


производственные процессы, основанные на использовании с различными целями
микроорганизмов, биокатализаторов и различных биологических систем (культур
растительных и животных тканей, протопластов и т.д.). Её отличие от
традиционной микробиологической и бродильной промышленности заключается
в том, что биотехнология возникла на основе достижений генной инженерии
и инженерной энзимологии (науки о применении ферментов в
микробиологической промышленности). Современная биотехнология базируется
на применении последних достижений в области создания рекомбинантных ДНК
и генетически модифицированных организмов.
Области применения биотехнологии
Новые методы получения промышленно важных продуктов — прежде всего
методы биотехнологии, и в особенности, промышленной
микробиологии. Промышленная микробиология основывается на применении
микроорганизмов в промышленности для получения коммерчески ценных
продуктов и лекарств. Важнейшие продукты микробного синтеза —
специальные вещества, используемые для фармацевтических и пищевых целей
(антибиотики, ферменты,ингибиторы ферментов, витамины, ароматизаторы,
добавки для пищевой промышленности и др.). Гибкость метаболизма и высокая
способность микробов к адаптации, простота культивирог ния, изученность
генетики, разработанные методы направленного создания штаммов с задаш ми
свойствами — преимущества, делающие микробную биотехнологию одним из
перспективных направлений промышленности. Целесообразность
промышленного производства определяется такими факторами, каквысокий
выход продукта (образование больших количеств из исходного
материала),низкая стоимость производства идоступность сырья.
Примеры использования: антибиотики, ферменты, аминокислоты,
иммунорегуляторы, вакцины, гормональные препараты
36. Химиотерапевтические препараты бактериостатического и бактерицидного
действия. Тактика их клинического применения.

I. Бактерицидные препараты
1. Ингибиторы синтеза клеточной стенки (пенициллины, цефалоспорины, другие
бета-лактамные антибиотики, ристомицин, циклосерин, бацитрацин, ванкомицин,
рифампицин). Препараты подавляют активность ферментов, участвующих в синтезе
пептидогликана, лишая клетку основного каркаса, а также способствуют активации
аутолитических процессов. Действуют только на делящиеся клетки.

2. Препараты, нарушающие проницаемость цитоплазматической мембраны


(полимиксины, полиеновые антибиотики). Действуют на делящиеся и покоящиеся
клетки.

3. Препараты, нарушающие проницаемость цитоплазматической мембраны, и


ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот и белка [аминогликозиды, грамицидин,
хлорамфеникол (активны в отношении некоторых видов Shigella)].Препараты
оказывают бактерицидное и бактериостатическое действие. Точка приложения
эффекта — делящиеся и покоящиеся клетки.

II. Бактериостатические препараты — ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот и


белка (хлорамфеникол, тетрациклины, макролиды, линкомицин, клинфамицин,
фузидин и др.).

Тактика клинического применения

1. Антимикробный препарат следует назначать только при наличии обоснованных


показаний: наличия документированной или пред- полагаемой бактериальной
инфекции (кроме ограниченных случаев антибиотикопрофилактики).

2. Выбор оптимального режима антибактериальной терапии следует осуществлять с


учетом фармакокинетики и фармакодинамики анти- биотика, это подразумевает
назначение адекватного антибиотика в адекватной дозе при планируемой
адекватной длительности терапии.

3. При выборе антимикробного препарата необходимо знать регио- нальную


ситуацию с антибиотикорезистентностью наиболее акту- альных возбудителей и
учитывать наличие у пациента риска инфи- цирования данными устойчивыми
возбудителями.

4. Избегать назначения антимикробных препаратов низкого качества и с


недоказанной эффективностью.
5. Избегать необоснованного профилактического назначения антибак- териальных,
антифунгальных и противовирусных средств.

6. Оценку эффективности антимикробной терапии следует проводить в интервале


48–72 часа после начала лечения.

7. Объяснять пациентам вред несоблюдения предписанного режима


антибактериальной терапии и опасности самолечения антибиоти- ками.

8. Способствовать соблюдению пациентами предписанного режима применения


антимикробного препарата (препарат, суточная доза, кратность приема,
длительность применения).

9. Использовать в практической работе возможности микробиологи- ческой


лаборатории и активно внедрять экспресс-методы по этио- логической диагностике
инфекций.

10.Использовать в качестве руководства практические рекомендации экспертов,


основанные на доказательной медицине.

37. Принципы рациональной и комбинированной химиотерапии.

Основные принципы рациональной химиотерапии:


 нужна ли химиотерапия
 возбудитель должен быть чувствителен к антибиотикам;
 своевременное начало лечения, как можно раньше
 антибиотик должен действовать в эффективной концентрации в очаге
инфекции - выбор наиболее активного и наименее токсичного для
макроорганизма препарата;
 оптимальный режим дозирования; оптимальная продолжительность лечения;
-- лечение должно проводиться строго по схеме
 учёт факторов пациента (тяжесть состояния, состояние иммунной системы,
аллергический анамнез, ф-ции печени и почек, возраст и пол);

К основным показаниям для проведения комбинированной


антибиотикотерапии относят:
· тяжёлое течение инфекций, требующее немедленного начала лечения до
установления бактериологического диагноза; сразу после взятия материала для
бактериологического исследования вплоть до установления точного диагноза
заболевания, а также в профилактических целях.

· смешанную инфекцию с выделением различных микробных ассоциаций (перитонит,


пневмония и т.д.);

· предупреждение развития токсического действия за счёт достижения быстрого и


более полного эффекта при одновременном воздействии двух (или нескольких)
препаратов в меньших, чем обычные терапевтические, дозах;
· предупреждение или замедление развития устойчивости возбудителя;

· возможность усиления антибактериального эффекта в расчёте на синергидное


действие антибиотиков;

· воздействие на малочувствительные возбудители.

Антибиотикопрофилактика всегда должна носить этиотропный характер. Её


назначение – предупреждение развития известного или предполагаемого возбудителя
в организме.

 
Рациональная антибиотикотерапия должна строиться на основе знания
индивидуальных особенностей больного, течения заболевания, характера
возбудителя и свойств препарата. К ним можно отнести:
· химиотерапию, назначаемую строго по показаниям, т.е. только в тех случаях,
когда без нее нельзя обойтись;
· химиотерапию, назначаемую с учетом противопоказаний, например,
повышенной чувствительности или аллергической реакции к препаратам той или
иной группы. Выбор препарата для химиотерапии может проводиться в различных
вариантах возникающих ситуаций;
· при этиологически расшифрованных заболеваниях выбор препарата должен
определяться с учётом чувствительности возбудителя (антибиотикограмма),
выделенного от данного конкретного больного в результате бактериологического
исследования;
· при выделении возбудителя без определения его чувствительности к
химиопрепаратам, или при эмпирической инициальной химиотерапии заболевания
с не идентифицированным, но предполагаемым возбудителем выбор препарата для
химиотерапии должен основываться на показателях антибиотикочувствительности
соответствующих микроорганизмов - наиболее вероятных возбудителей данной
нозологической формы заболевания, по данным литературы, или при ориентации на
данные о региональной чувствительности тех или иных инфекционных агентов -
возбудителей заболевания;
·
· и проведение курсов антибиотикотерапии необходимой продолжительности вплоть
до стойкого закрепления лечебного эффекта;
·, рекомендованной для выбранного химиопрепарата (способ и кратность введения
препарата, длительность лечения), а также с учетом коэффициента увеличения
концентрации препарата в целях создания эффективных концентраций препарата
непосредственно в органах и тканях (примерно 4 МПК - минимальная подавляющая
концентрация, определённая, по возможности, методом серийных разведений);
· длительность приёма химиопрепаратов должна составлять как минимум 4-5
дней в целях профилактики формирования устойчивости возбудителя к данному
препарату, а также формирования бактерионосительства;

· при дерматомикозе, кандидозе и трихомониазе влагалища с целью предупреждения


рецидивов лечение продолжают в течение 2-4 недель после исчезновения симптомов
заболевания;
· химиотерапию желательно дополнить применением средств, способствующих
повышению активности защитных механизмов макроорганизма (принцип
иммунохимиотерапии);
· при эмпирической терапии, т.е. при неизвестной чувствительности возбудителей,
желательно комбинировать препараты с взаимодополняющим спектром действия -
для расширения спектра действия фторхинолонов на анаэробы и простейшие во
многих случаях рекомендуется их комбинация с метронидазолом (трихополом),
обладающая бактерицидным действием в отношении этих микроорганизмов;
· весьма эффективны при проведении химиотерапии комбинации препаратов с
различными механизмами и спектром действия. Например, в настоящее время в
гинекологической практике широко используется для местного лечения вагинитов
неясной этиологии препарат полижинакс, представляющий собой комбинацию
неомицина, полимиксина и нистатина;
· знание характера и частоты побочных явлений при назначении антибиотиков,
особенно при некоторых патологических состояниях, например, при нарушении
выделительной функции почек;
· комбинирование антибиотиков между собой с целью усиления антибактериального
эффекта и предупреждения формирования антибиотикорезистентности
микроорганизмов;
· щадящую терапию с использованием минимума антибиотиков, при этом
клинический эффект достигается за счёт низких и субингибирующих концентраций
антибиотиокв в результате угнетения адгезии и стимуляции фагоцитоза;
· ступенчатую терапию с переходом от парентерального на пероральный путь
введения в возможно короткие сроки, определяемые клиническим состоянием
пациента;
· использование экспресс-метода определения совокупной микрофлоры,
позволяющей ориентироваться в выборе «стартовой» антибиотикотерапии.

Однако при комбинированном применении препаратов необходимо учитывать


несколько факторов:

· лекарственную совместимость предполагаемых к совместному использованию


химиопрепаратов. Например, совместное назначение тетрациклинов с
пенициллинами противопоказано, так как тетрациклины уменьшают бактерицидное
действие пенициллинов;
· возможность того, что препараты, содержащие одно и то же вещество в качестве
активного действующего начала, могут носить различные торговые названия, так как
выпускаются разными фирмами и могут быть дженериками (препаратами,
производимыми по лицензии с оригинала) одного и того же химиопрепарата.
Например, комбинированный препарат из сульфаниламидов и триметоприма -
котримоксазол, в странах СНГ больше известен как бисептол или бактрим, а один из
фторхинолонов - ципрофлоксацин известен в СНГ и широко применяется в практике
как ципробай, цифран, квинтор, неофлоксацин;
· комбинированное применение антибиотиков повышает риск развития дисбаланса
нормальной микрофлоры.

Обязательным условием успешного лечения любого инфекционного заболевания


является установление этиологического фактора и определение его
антибиотикочувствительности. Однако при отсутствии или отдаленности
бактериологической лаборатории и по жизненным показаниям в зависимости от
клинических симптомов или же этиологического фактора, вызвавшего данное
заболевание, может быть назначен один из препаратов широкого спектра действия
(ампициллин, канамицин, тетрациклин и др.). После установления
антибиотикограммы следует продолжить антибиотикотерапию тем препаратом, к
которому наиболее чувствителен данный возбудитель.
При антибиотикотерапии концентрация препарата, достигаемая в очаге поражения,
должна превышать уровень чувствительности данного возбудителя к антибиотику и
обеспечивать максимальный бактерицидный эффект, только тогда
антибиотикотерапию можно считать эффективной и успешной. Следует избегать
применения доз и методов, обеспечивающих лишь суббактериостатические
концентрации антибиотика в организме больного, так как это может привести к
формированию антибиотикорезистентности у микроорганизмов.
Одним из испытанных методов повышения эффективности антибиотикотерапии,
предупреждения или замедления формирования устойчивости возбудителей к
действию этих препаратов является комбинированное лечение антибиотиками.
Основные принципы комбинированного применения антибиотиков
сформулировались с учётом свойств возбудителя, механизма и спектра действия
антибиотиков на бактериальную клетку, характера течения патологического процесса
в очаге инфекции, состояния больного и др.
Комбинированная антибиотикотерапия особенно показана при смешанных
инфекциях, подтверждённых бактериологически. Она проводится также при
тяжёлых, опасных для жизни состояниях
Следует иметь в виду, что комбинированная антибиотикотерапия должна быть строго
обоснована и, применяться лишь тогда, когда не удаётся достигнуть хорошего
лечебного эффекта при применении одного антибиотика в достаточных дозах, при
оптимальных методах его введения и необходимой длительности лечения.
Профилактическое применение антибиотиков направлено, прежде всего, на
предупреждение развития инфекции в организме больного и в основном
используется для предупреждения генерализации инфекции у больного, борьбы с
латентным её течением и носительством возбудителей.
Назначаются строго индивидуально в соответствии с этиологией процесса, по
жизненным показаниям, с учётом эффективности препарата, а также возможного
побочного действия и по определенным показаниям. Например, в хирургической
практике антибиотики применяют при операциях, диагностических и лечебных
эндоскопиях (бронхи, мочевые пути и т.д.). В перечень показаний для пред- и
послеоперационного применения антибиотиков входят: сильно загрязненные раны,
осложнённые переломы костей, ожоги, трансплантация органов и тканей.

38. Классификация антибиотиков по принципу химического строения. Понятие


о полусинтетических антибиотиках.
Классификация:
1.азотсодержащие гетероциклические соединения, имеющие в своём составе
β-лактамное кольцо (пенициллины, цефалоспорины)

2.ароматические соединения, производные диоксиаминофенилпропана


(левомицетин)

3.тетрациклины, содержащие четыре конденсированных шестичленных


цикла(тетрациклин и его производные)
4.аминогликозидные соединения, в составе которых имеются аминосахара
(стрептомицин, мономицин, канамицин, гентамицин и др.)
5.макролиды, содержащие макроциклическое лактонное кольцо, связанное с
аминосахарами (эритромицин, олеандомицин и др.)

6.ациклические соединения с несколькими сопряжёнными двойными связями


–(СН=СН)– (полиены – нистатин, леворин)

К полусинтетическим антибиотикам относятся различные препараты,


получаемые биологическим и химическим способами. Исходным продуктом
для их получения является вещество, которое синтезируется непосредственно
микроорганизмами. Путём присоединения различных химических групп
получают его разнообразные аналоги, отличающиеся биологическими
свойствами: устойчивостью, антибактериальным спектром. Например,
фермент бактерий пенициллиназа, или β-лактамаза, гидролизует β-лактамное
кольцобензилпенициллина и лишает его активности, а его полусинтетический
аналог оксациллинустойчив к пенициллазе. Другой полусинтетический
пенициллин – ампициллин – обладает более широким антибактериальным
спектром действия (эффективен также против ряда грамотрицательных
бактерий) за счёт введения в его молекулу 6-аминопенициллановойкислоты,
повышающей способность препарата проникать через поверхностный
липополисахаридный слой клеточной стенки.

39. Микрофлора почвы. Источники и пути попадания патогенных микробов в


почву. Санитарно-показательные микробы почвы. Методы санитарно-
бактериологической оценки почвы.
Санитарно-микробиологическое исследование почвы. 
Среди них имеются свободноживущие азотфиксирующие бактерии рода
=Azotobacter,
=некоторые виды родов Nocardia и Clostridium,
=нитрифицирующие бактерии родов Nitrobacter, Pseudomonas и
=аммонифицирующие бактерии,
=грибы, простейшие, актиномицеты
=а также разнообразные серо- и железобактерии и др.

Анализ почвы включает в себя определение микробного числа, коли-тит-ра,


перфрингенс-титра и титра термофильных бактерий.
Могут микробы попадать в почву
--с отбросами и трупами животных и человека, погибших от инфекционных и
других заболеваний,
--а также с их испражнениями, мочой и прочими выделениями
--антропогенное, или искусственное, загрязнение— влияние на окружающую
среду, вызванное деятельностью человека, мировым хозяйством.соли тяжёлых
металлов, нефтепродукты.
По эпидемиологическим признакам проводят определение в почве патогенных
микроорганизмов: сальмонелл, шигелл, возбудителей столбняка, ботулизма,
злокачественного отека, сибирской язвы. Бактериологический анализ почвы
нужен при выборе территории под пастбище, ферму, хозяйственные постройки,
детские сады, больницы и др.
Предварительно делают отбор проб почвы. На обследуемой территории
площадью до 1000 м3 выделяют два участка по 25 м3 (один — вблизи источника
загрязнения, другой — в отдалении от него), берут пробы из 5 точек (4 — по
углам участка, 1 — в центре) на глубине 10...20 см стерильным совком (из более
глубоких мест — с помощью специального бура Некрасова или Френкеля).
Пробы почвы по 200...300 г отбирают в широкогорлые стеклянные банки с
ватными пробками (можно все взятые с одного участка пробы перемешать и на
исследование направить 1 кг). На банки наклеивают этикетки, отправляют с
нарочным и сопроводительным письмом. Пробы почвы полагается исследовать
сразу же или в течение 6... 18 ч, сохраняя их при температуре не выше 1...5ºС.
В лаборатории почву измельчают, освобождают от камней, осколков стекол,
корней растений, просеивают через сито, тщательно перемешивают и
отвешивают 30 г. В колбу на 500 мл наливают 270 мл стерильной водопроводной
воды и вносят в нее отвешенную пробу почвы, все интенсивно встряхивают 10
мин, не давая отстояться частицам суспензии, готовят серию десятикратных
последовательных разведений. Для относительно чистых почв достаточно 4
степени разведения, для загрязненных — 6...9 разведений. В штатив ставят
нумерованные пробирки с 9 мл стерильной воды в каждой. В первую вносят 1 мл
суспензии пробы почвы, смешивают, затем 1 мл из первой пробирки вносят во
вторую, смешивают, из нее — 1 мл в третью и т. д. В результате в пробирке № 1
получается разведение 1 : 100, № 2 — 1 : 1000 и т.д. Подготовленные таким
образом пробы почвы исследуют.
Определение общего микробного числа. Из последних 3...4 пробирок с
разведенной суспензией отдельными стерильными пипетками вносят по 1 мл в
стерильные чашки Петри (каждое разведение в отдельности). В каждую чашку
добавляют еще по 10... 15 мл расплавленного и охлажденного до 45 ºС МПА.
Равномерными осторожными круговыми движениями содержимое чашек
перемешивают, оставляют на столе для уплотнения (затвердения) агара. С
застывшей средой чашки перевертывают вверх дном, надписывают и помещают
в термостат для культивирования на 24...48 ч при 37 °С. Выросшие колонии
подсчитывают в каждой чашке, умножают на степень разведения, полученные
числа суммируют и вычисляют среднеарифметическое число, что составит
количество микробов, содержащихся в 1 г почвы.
Определение коли-титра, перфрингенс-титра и титра термофильных
бактерий почвы. Для определения коли-титра почвы различные разведения
почвенной взвеси засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера (на 1л
дистиллированной воды — 10г пептона, 50 мл бычьей желчи — 2,5 г лактозы, 4
мл 1%-го водного раствора генцианвиолета) и инкубируют при 43 ºС в течение
48 ч. В дальнейшем исследования проводят по схеме, применяемой при
определении коли-титра воды. Наибольшее разведение почвенной суспензии, в
котором отмечена ферментация лактозы (газообразование), соответствует коли-
титру почвы. Для определения перфрингенс-титра почвы различные разведения
почвенной суспензии по 1 мл засевают в пробирки со стерильным обез-
жиренным молоком или железосульфитной средой Вильсона— Блера,
приготовленной ex tempore. Посевы инкубируют при 43 °С в течение 24...48 ч,
после чего учитывают результаты по свертыванию молока или по образованию
черных колоний С. perfringens в агаровом столбике среды Вильсона—Блера. Из
колоний делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и вычисляют
перфрингенс-титр, который соответствует наибольшему разведению почвы,
вызвавшему почернение и разрыв среды Вильсона— Блера в первые 12 ч роста.
Для определения титра термофильных бактерий разведения почвенной
суспензии по 1 мл вносят в чашки Петри, заливают расплавленным и
охлажденным агаром. Посевы инкубируют в течение суток при 60 ºС, а затем
подсчитывают количество выросших колоний и пересчитывают на 1 г почвы.
Санитарно-микробиологическую оценку почвы проводят по комплексу
показателей, из которых наиболее важный ление степени фекального
загрязнения.
Содержание микробов в почве широко колеблется в зависимости от её
химического состава, влажности, температуры, pH и других свойств. В бедных
влагой и питательными веществами песчаных почвах находится до 10 5, в
обрабатываемых образцах – до 10 8– 10 9 микробов в 1 г. «Живая» масса разных
микроорганизмов на 1 га почвы в среднем составляет 1 т. Наибольшее количество
отмечается в верхнем слое почвы на глубине 5 – 15 см, затем их число снижается.
Почва населена разнообразными микроорганизмами. Среди них имеются
свободноживущие азотфиксирующие бактерии рода Azotobacter, некоторые виды
родов Nocardia и Clostridium, клубеньковые бактерии рода Rhisobium,
нитрифицирующие бактерии родов Nitrobacter, Pseudomonas и грибы,
денитрифицирующие бактерии Thiobacillus denitrificans, аммонифицирующие
бактерии, а также разнообразные серо- и железобактерии и др. В почве, богатой
органическими остатками, большое количество гнилостных анаэробных и аэробных
бактерий, актиномицетов, грибов и простейших. Патогенные и условно-патогенные
микроорганизмы могут попадать в почву с отбросами и трупами животных и
человека, погибших от инфекционных и других заболеваний, а также с их
испражнениями, мочой и прочими выделениями. Санитарно-гигиеническое
состояние почвы оценивается на основании показателей, указывающих на
количественное содержание термофильных бактерий (спорообразующие
грамположительные бактерии и актиномицеты) и степень её фекального
загрязнения. В качестве показателей фекального загрязнения используют санитарно-
показательные бактерии (представители нормальной микрофлоры кишечника).
Разные сроки выживаемости этих бактерий в окружающей среде позволяют
определить давность её загрязнения фекалиями. Наличие в почве E. coli и Str.
faecalis свидетельствует о свежем фекальном загрязнении, обнаружение бактерий
родов Citrobacter и Enterobacter расценивается как несвежее фекальное загрязнение,
а Clostridium perfringens – как давнее загрязнение. Резкое увеличение количества
термофильных бактерий может свидетельствовать о загрязнении почвы
разлагающихся отбросах.
Для санитарно-бактериологической оценки почвы определяют микробное
число (общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г почвы), коли-титр
(титр – минимальная масса или объём, в котором обнаруживаются данные
бактерии), перфингенс-титр и титр термофильных бактерий почвы.

40. Микрофлора воды. Источники и пути попадания патогенных микробов в


воду. Санитарно-показательные микробы воды. Методы санитарно-
бактериологической оценки воды.
Нормативы питьевой воды (ГОСТ 2874-82) – МИКРОБНОЕ ЧИСЛО НЕ
БОЛЕЕ 100, ЧИСЛО БГКП (БАКТЕРИЙ ГРУППЫ КИШЕЧНЫХ
ПАЛОЧЕК) В 1 МЛ ВОДЫ (коли-индекс) НЕ БОЛЕЕ 3 и (коли-титр) НЕ
МЕНЕЕ 333.
Численность и состав микроорганизмов в воде обусловлены физико-химическим
состоянием, содержанием питательных веществ, флорой и фауной, глубиной
водоёма, выпуском сточных и промышленных вод без очистных сооружений и др. В
сравнительно чистых водоёмах встречаются разнообразные микроорганизмы,
поступающие из почвы. К ним относятся палочки, кокки, спириллы, грибы,
простейшие, вирусы и плазмиды. При поступлении в воду большого количества
органических веществ в ней обнаруживаются клостридии и другие анаэробы,
аэробные бактерии, вибрионы, спирохеты. Загрязнение водоёмов патогенными,
условно-патогенными микроорганизмами происходит в результате поступления в
них сточных вод из прибрежных населённых пунктов, а также промышленных вод,
богатых органическими соединениями. Микрофлора почвы, вымываемой
грунтовыми и поверхностными водами, загрязняет водоёмы, реки, озёра и
прибрежные воды морей. Кроме того, выпуск сточных вод с судов, стирка белья,
купание лошадей, попадание вводу трупов животных, погибших от инфекций, также
способствует загрязнению водоёмов патогенными микробами. При загрязнении
водоёмов сточными водами в них обнаруживаются E. coli, Enterobacter, Str.faecalis,
Cl. perfringens и др. Несмотря на процессы самоочищения водоёмов от условно-
патогенных и патогенных микроорганизмов, последние могут стать причиной
возникновения водных эпидемий, острых кишечных инфекций: сальмонеллёзов,
дизентерии, холеры. Они возникают при авариях канализационной системы и
поступлении сточных вод в открытые водоёмы, особенно в водопроводную сеть.
Санитарно-гигиеническая оценка воды производится не только по наличию в ней E.
coli, но и по степени обсеменённости воды этим микробом. Для этого
определяют микробное число воды (количество микробов в 1мл воды), коли-
титр (титр –наименьшее количество воды в мл в кот. содержится 1 кишечная
палочка) и коли-индекс (количество кишечных палочек в 1 л воды). Для
определения коли-титра и коли-индекса применяют метод мембранных
фильтров  (через нитроцеллюлозный фильтр фильтруют определенный объем воды,
кот. затем засевают на среду Эндо. Киш-я палочка дает красные колонии с
металлич-м блеском). Так же применяется двухфазный бродильный метод (берут 9
проб: 3 пробы по 100мл, 3 пробы по 10 мл, 3 по 1 мл и засевают в среду Эйкмана
(глюкозо пептонная среда + индикатор Андреде). Если есть киш-я палочка то среда
мутнеет из индикатор становится желтый, затем сеют на среду Эндо, чтобы
убедиться что это киш-я палочка. По госту коли-титр – 333, коли-индекс – 3.
Санитарно-показательные микробы воды: кишечная палочка, палочка перфрингенс,
протей, энтерококк.
Санитарно-микробиологическое исследование воды. Вода — естественная
среда обитания микробов, которые в большом количестве поступают из почвы,
воздуха, с отбросами, стоками. Особенно много микроорганизмов в открытых
водоемах и реках. Кроме сапрофитов в воде могут находиться возбудители
инфекций животных и человека.
При контроле санитарного состояния воды исследованию подлежат: вода
централизованного водоснабжения, колодцев, открытых водоемов (реки, озера),
плавательных бассейнов, сточные жидкости.
Отбор проб воды. Из открытых водоемов пробы воды отбирают с глубины
10...15 см от поверхности и на расстоянии 10... 15 см от дна. Водопроводную
воду набирают в стерильные флаконы объемом 0,5 л с притертой пробкой.
Предварительно кран обжигают и спускают воду в течение 10... 15 мин.
Хлорированную воду перед исследованием нейтрализуют тиосульфатом натрия
из расчета 10 мл на 1л воды. Бактериологическое исследование проб воды
следует проводить в течение двух часов после отбора или шести часов при
температуре хранения 1...5°С.
Определение микробного числа воды. Водопроводную воду засевают в
количестве 1мл, воду открытых водоемов — по 1,0; 0,1; 0,01 мл. Все пробы
вносят в стерильные чашки Петри, после чего их заливают 10...12 мл
расплавленного и охлажденного до 40...45 °С питательного агара, который
тщательно перемешивают с водой. Посевы инкубируют при 37 °С в течение
1...2сут. Воду из открытых водоемов засевают параллельно на две серии чашек,
одну из которых инкубируют при 37 ºС в течение суток, другую — 2 сут при 20
°С. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глубине
колоний и вычисляют микробное число воды — количество микроорганизмов в
1 мл.
Определение коли-титра и коли-индекса воды. Минимальное количество
воды в мл, в котором обнаруживают бактерии группы кишечных палочек
(БГКП), называют коли-титром воды, количество БГКП, содержащихся в 1л
исследуемой воды, называют кол и-и ндексом воды. Коли-титр и коли-индекс
воды определяют титрационным (бродильным) методом или методом
мембранных фильтров.
Титрационный метод. В глюкозо-пептонную среду (1%-я пептонная вода, 0,5%-
й раствор хлорида натрия, 0,5%-й раствор глюкозы, индикатор Андреде и
поплавок) проводят посевы различных объемов воды.
Воду открытых водоемов исследуют в объемах 100; 10; 1 и 0,1 мл. Для анализа
водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10
мл и трех объемов по 1 мл. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. О
брожении судят по образованию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших
или помутневших проб делают посевы на среду Эндо. Из выросших колоний
готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, с помощью
которого дифференцируют бактерии родов Escherichia,
Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства
Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в
воде. С этой целью 2...3 изолированные колонии наносят «штрихом» на
фильтровальную бумагу, смоченную диметил-n-фенилендиамином. При
отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при положительном
она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин. Грамотрицательные палочки, не
образующие оксидазу, вновь исследуют в бродильном тесте — вносят в
полужидкий питательный агар с 0,5 % глюкозы и инкубируют при 37 °С в
течение суток. При положительном результате определяют коли-титр и коли-
индекс по статистической таблице.
Метод мембранных фильтров. Определенный объем воды пропускают под
давлением через мембранный фильтр № 3, предварительно стерилизованный
кипячением в дистиллированной воде. Водопроводную воду и воду
артезианских скважин фильтруют в объеме 333 мл. Чистую воду открытых
водоемов фильтруют в объеме 100, 10, 1 и 0,1 мл, более загрязненную воду
перед фильтрованием разводят стерильной водой. Фильтры накладывают на агар
Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37 °С в течение суток
подсчитывают количество выросших красных колоний. Из двух-трех колоний
делают мазки, окрашивают их по Граму и ставят оксидазный тест.
Грамотрицательные палочки, не образующие оксидазу, принадлежат к БГКП. По
существующим нормативам (ГОСТ 2874—82) питьевую воду считают
качественной, если ее коли-индекс не более 3, а микробное число — не более
100.
Общепринятым дополнительным показателем фекального загрязнения воды
служит количество S.faecalis. Для определения его титра цельную воду и ее 10-
кратные разведения засевают в жидкую элективную среду (щелочная
полимиксиновая среда). После инкубирования при 37 ºС в течение двух суток, а
затем еще через сутки и двое суток делают высевы на плотные элективные
среды. Фекальные стрептококки идентифицируют по морфологическим,
культуральным и тинкториальным свойствам.
Есть данные о корреляции между содержанием в воде фекальных кишечных
палочек и фагами бактерий группы кишечных палочек. Поэтому определение
данных фагов служит косвенным показателем возможного присутствия
кишечных палочек в исследуемой пробе воды.

41. Микрофлора воздуха. Источники и пути попадания патогенных микробов в


воздух. Санитарно-показательные микробы воздуха. Методы санитарно-
бактериологической оценки воздуха.

В воздух попадают микроорганизмы из дыхательных путей и с каплями слюны


человека и животных. Здесь обнаруживаются кокковидные и палочковидные
бактерии, бациллы, клостридии, актиномицеты, грибы и вирусы.

Золотистый стафилококк и гемолитические стрептококки являются


представителями микрофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь
выделения с патогенными микроорганизмами, передающимися воздушно-
капельным путем. Появление в воздухе спорообразующих бактерий — показатель
загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных
бактерий — показатель возможного антисанитарного состояния.

По эпидемиологическим показаниям в воздухе определяют наличие сальмонелл,


микобактерий, вирусов.
Воздух — среда, не поддерживающая размножение микроорганизмов; это
определяется отсутствием питательных веществ и недостатком влаги.

Кроме того, в воздухе более выражено микробицидное действие солнечных лучей


УФ-спектра. Жизнеспособность микроорганизмов в воздухе обеспечивают
взвешенные частицы воды, слизи, пыли и фрагментов почвы.

Атмосферный воздух и воздух закрытых помещений значительно различаются по


количественному и качественному составу микрофлоры.

Бактериальная обсеменённость жилых помещений всегда выше, чем атмосферного


воздуха; это справедливо и в отношении патогенных микроорганизмов,
попадающих в воздух от больных людей, животных и бактерионосителей.
Микрофлору воздуха условно разделяют на резидентную (постоянно
обнаруживаемую) и временную (обнаруживают спорадически). Наибольшее
количество микробов содержится в околоземных слоях атмосферы. По мере
удаления от земной поверхности воздух становится чище.

Постоянная микрофлора атмосферного воздуха формируется почвенными


микроорганизмами. Более или менее регулярно в её состав входят Micrococcus
roseus, M.flavus, M. candicam, Sarcina/lava, S. alba, S. rosea, Bacillus subtills, B.
mycoides, B. mesenterieus, виды Actinomyces, грибы родов Penicillium, Aspergillus,
Mucor и др.

Временная микрофлора атмосферного воздуха также формируется за счёт


микроорганизмов почвы и видов, поступающих с поверхности водоёмов.
Находящиеся в атмосферном воздухе микроорганизмы подвергаются солнечному и
температурному воздействию, атмосферным осадкам и ветру. Поэтому микрофлора
воздуха весьма динамична, непрерывно меняется и обновляется. Контаминация
воздуха патогенными микроорганизмами происходит капельным путём; микробы
содержатся в составе аэрозоля, образующегося при разговоре, кашле, чиханьи.
Кроме того, микроорганизмы попадают в воздух со слущивающимся эпителием
кожных покровов, пылью из загрязнённого постельного белья и заражённой почвы.
• Аэрозоль — коллоидная система, состоящая из воздуха, капелек жидкости или
твёрдых частиц, и включающая различные микроорганизмы. Размер аэрозольных
частиц варьирует от 10 до 2000 нм. При чихании может образовываться до 40 000
капель. В зависимости от размера частиц, электрического заряда, скорости
движения в воздухе различают капельную и пылевую фазы аэрозоля, а также
капельные ядрышки.

Капельная фаза представлена мелкими каплями, длительно сохраняющимися в


воздухе, но испаряющимися до оседания.

Пылевая фаза — крупные, быстро оседающие частицы, в результате, образующие


пыль, способную подниматься в воздух.

Капельные ядрышки — мелкие капельки аэрозоля (до 100 нм); высыхая, остаются в
воздухе во взвешенном состоянии и образуют устойчивую аэродисперсную систему.
В них частично сохраняется влага, поддерживающая жизнеспособность
микроорганизмов. Последние в составе капельных ядрышек могут переноситься на
значительные расстояния.

При санитарно-бактериологическом исследовании воздуха проводят:


1) определение общей бактериальной об- семененности воздуха (общее число
бактерий в 1 м3);
2) выявление саиитарно-показательных микроорганизмов;
3) по эпидемическим показаниям выделение вирусов и патогенных бактерий из
воздуха закрытых помещений;
4) при исследовании атмосферного воздуха дополнительное определение
качественного состава микрофлоры с учетом наличия спорообразующих аэробов и
анаэробов, которые служат показателем загрязненности воздуха микроорганизмами
почвы.

Методы отбора проб воздуха для бактериологического исследования


подразделяют на:

1) аспирационные, основанные на активном просасывании воздуха с помощью


различных приборов;

2) седиментационные, основанные на принципе механического оседания микробов.


Пробы воздуха берут на уровне сидящего или стоящего человека, выделяя одну
точку взятия проб на каждые 20 м2 площади.

Аспирационные методы используют при исследовании воздуха как закрытых


помещений, так и атмосферного. Наиболее широкое применение в последние годы
получил аппарат Кротова (рис. 44), который позволяет пропускать от 25 до 50 л
воздуха в минуту. В аппарате Кротова воздух засасывается сквозь узкую щель
крышки прибора и ударяется о поверхность плотной питательной среды в чашке
Петри, которая медленно вращается на подвижном столике. Поверхность
питательной среды равномерно обсеменяется микроорганизмами.
Существуют также другие приборы: ПОВ-1, бактериоуловител Речменского,
Дьяконова, в которых воздух просасывается с помощью насосов, воздуходувок,
аспираторов через материал, задерживающий бактериальный аэрозоль. В качестве
такого материала используют стерильную воду, питательные среды, стерильный
ватный тампон, пенистые или порошковые фильтры из растворимых материалов.
Объем просасываемого воздуха измеряют с помощью газовых часов. После взятия
пробы 1 мл жидкости засевают в чашку с мясо-пептонным агаром для определения
общего числа бактерий. Через 24 ч инкубации в термостате при 37°С подсчитывают
число колоний и делают пересчет на 1 м3 воздуха. С целью определения санитарно-
показа^ тельных микроорганизмов и патогенных микробов делают посевы на
различные элективные среды.

Седиментационный метод наиболее старый (метод оседания Коха). Его используют


только при исследовании воздуха закрытых помещений. Для этого чашки Петри с
питательными средами при исследовании общей бактериальной загрязненности
воздуха оставляют открытыми в местах отбора проб в течение 5—10 мин. По
окончании экспозиции чашки зарывают и помещаю в термостат при 37°С на 24 ч, а
затем при комнатной температуре выдерживает еще сутки. О степени
загрязненности воздуха судят по количеству выросших колоний. Несмотря на
неточность, данный метод пригоден для сравнительных оценок чистоты воздуха.

В настоящее время бактериологическое исследование воздуха проводится в


основном в больницах согласно «Инструкции по бактериологическому контролю
комплекса санитарно-гигиенических мероприятий в лебечно- профилактических
учреждениях: отделениях хирургического профиля, в палатах и отделениях
реанимации и интенсивной терапии» (Приложение к приказу № 720 от 31.07.1978 г.
МЗ СССР). Определяют общую бактериальную обсемененность и наличие Staph,
aureus.

Для установления общей бактериальной обсемененности воздуха закрытых


помещений, согласно инструкции, отбирают две пробы воздуха с помощью аппарата
Кротова по 100 л каждая.

С целью исследования воздуха на наличие стафилококка берут пробы воздуха на


две чашки с желточно-солевым агаром или молочно-желточно-солевым агаром,
пропуская 250 л воздуха.

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха имеет большое значение в


хирургических отделениях больниц, родильных домах, где имеется опасность
возникновения внутрибольничной инфекции. Обнаружение Staph, aureus в этих
отделениях является недопустимым. Нарастание количества Staph, aureus
определенных фаготипов следует рассматривать как грозный предвестник
возможного появления госпитальной инфекции.

Выявление вирусов и патогенных бактерий из воздуха закрытых помещений


проводят по эпидемиологическим показаниям при оценке эффективности
обеззараживания воздуха, при контроле санитарно-микробиологического
содержания больничных учреждений и т. д.

Для выявления микобактерий туберкулеза отбор проб производят при помощи


прибора ПОВ-І, в котором в качестве улавливающей используют среду
Школьниковой. Исследуют 250—500 л воздуха (см. Микробиологическая
диагностика туберкулеза).

Эталоном чистоты атмосферного воздуха считают показатель бактериальной


обсемененности в зеленой зоне (зеленая зона ВДНХ—350 микробов в 1 м3). Пример
значительного обсеменения воздуха — места скопления людей и транспорта.
Воздух операционных до начала операции должен содержать не более 500, а после
нее — не более 1000 микробов в 1 м3. Staph, aureus не должны обнаруживаться при
исследовании 250 л воздуха. В предоперационных и перевязочных до начала работы
количество микробов в 1 м3 не должно превышать 750. В больничных палатах
летом число микробов должно быть менее 3500, а зимой — менее 5000 в 1 м3. Здесь
допускают наличие стафилококков в воздухе: летом — 24, зимой — 52 при
исследовании 250 л воздуха.

Санитарно-показательными микроорганизмами загрязнения воздуха


закрытых помещений являются стафилококки (Staph, aureus), а также зеленящие и
гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке
верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре,
кашле, чиханье. Во внешней среде стрептококки сохраняют жизнеспособность в
течение примерно тех же сроков, что и возбудители дифтерии, а стафилококки —
даже дольше.  Чем большее количество стрептококков обнаруживают в воздушной
среде, тем вероятнее возможность заражения человека воздушно-капельными
инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph, aureus и частое его
обнаружение свидетельствуют о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии. В
лечебных учреждениях вторичным источником обсеменения воздуха Staph, aureus
могут быть загрязненные постельные принадлежности, белье, с которых эти
микроорганизмы попадают в воздух, Наиболее полную картину воздушно-
капельного загрязнения воздуха дает определение и стрептококков и стафилококков.
Однако ввиду того, что стрептококки довольно трудно культивировать, в
лабораторной практике ограничиваются выделением Staph, aureus.

42. Микрофлора пищевых продуктов. Источники и пути попадания патогенных


микробов в пищевые продукты. Методы санитарно-бактериологической
оценки пищевых продуктов.

Источники и пути попадания патогенных микробов в пищевые


продукты( перечислить по логике)

Обсеменение

1) Прижизненное или первичное – загрязнение собственной


микрофлорой в случае если продукт животного происхождения(при
заболеваниях животного, при травмах или неблагоприятных условиях
содержания) При этом выделяются:

–стафилококки
- энтерококки
- кишечные палочки
- протей
- клостридии и тд

2) Вторичное – возникает в результате попадания микроорганизмов при


забое животных, доении коров, отлове рыбы, при переработке и
хранении продуктов – т е источник загрязнения – объекты окружающей
среды и люди – больные и бактерионосители.

– псевдомонады

- протей
- пенициллы

- аспергиллы

Многие пищевые продукты являются благоприятной средой не только для


сохранения, но и для размножения микроорганизмов.
Всю микрофлору пищевых продуктов условно делят на специфическую и
неспецифическую.
К специфической микрофлоре относятся штаммы микроорганизмов,
применяющихся в процессе технологического производства продуктов питания
(молочнокислые продукты, хлебные изделия, пиво, вина и др).
К неспецифической микрофлоре относится случайная микрофлора, попадающая в
пищевые продукты при их заготовке, доставке, переработке и хранении.
Источником этих микробов может быть сырье, воздух, вода, оборудование,
животные, человек.
Инфицирование пищевых продуктов микроорганизмами может приводить к
возникновению у людей пищевых токсикоинфекций и др. заболеваний.
Микробиологические критерии безопасности пищевых продуктов делятся на четыре
группы:
Санитарно-показательные микроорганизмы: БГКП, при этом учитываются бактерии
рода Escherichia,Klebsiella,Citrobacter,Enterobacter,Serratia.
Потенциально-патогенные микроорганизмы: коагулазоположительные
стафилококки, бактерии рода Proteus, сульфитредуцирующие клостридии,B.cereus.
Патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы.
Микроорганизмы – показатели микробиологической стабильности продукта
(дрожжи, грибы-плесени).
Санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов
Взятие проб. Отбор проб проводят стерильно, стерильными приспособлениями, в
стерильную посуду. Пробы помещают в соответствующую тару, пломбируют.
Транспортировку осуществляют в сумках-холодильниках в кратчайшие сроки.
Санитарно-микробиологическая оценка пищевых продуктов включает определение
общего микробного числа и титра санитарно-показательных микроорганизмов.
Определение общего микробного числа (ОМЧ)
ОМЧ – общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г (см3) продукта.
Для его определения используют метод кратных разведений.
Метод кратных разведений. При исследовании плотных субстратов навеску
измельчают в гомогенизаторе или растирают в ступке с кварцевым песком и готовят
исходную взвесь в разведении 1:10. Из полученной взвеси или исходного жидкого
материала готовят ряд последующих разведений с таким расчетом, чтобы при
посеве двух последних разведений на чашке Петри в агаре выросло от 50 до 300
колоний. Из последних двух разведений по 1 см3вносят в чашку и заливают 10-15
мл расплавленного и остуженного до 450С МПА. Чашки инкубируют при 370С 48 ч,
подсчитывают количество выросших колоний. ОМЧ определяют с учетом
разведения исследуемого материала.
Метод предельных разведений (титр). Из исходного жидкого материала готовят ряд
десятикратных разведений до тех пор, пока в последней пробирке можно будет
предположить наличие одной бактериальной клетки. Посев делают в жидкую
селективную среду с последующим выделением микроорганизмов на твердой
питательной среде и изучением их характеристики.
За титр принимают, то наименьшее количество субстрата, в котором обнаружена
одна особь искомого микроорганизма.
Определение санитарно-показательных микроорганизмов
Санитарно-показательные микроорганизмы характеризуют продукт с точки зрения
эпидемической опасности.
Основными санитарно-показательными микроорганизмами считают БГКП и для
количественного учета используют методы определения количества и титра. При
этом под количеством понимают определение наиболее вероятного числа (НВЧ)
БГКП в единице массы или объема продукта.
Определение НВЧ БГКП.
Для определения НВЧ из жидкого продукта или исходной взвеси плотного,
последовательно делают разведения 10-1, 10-2, 10-3, из которых по 1 см3засевают в
три пробирки со средой Кесслера для каждого разведения. Через 24 ч инкубации
при 370С в пробирках регистрируются изменения цвета среды и газообразование. В
зависимости от количества проросших пробирок определяют НВЧ колиформных
бактерий.
Определение титра БГКП
Готовят десятикратные разведения анализируемого материала и высевают на среду
Кесслера для выявления наименьшего количества продукта, в котором присутствует
кишечная палочка. Посевы термостатируют при 430С в течение 18-24 ч. Из каждой
пробирки производят высев на чашки Петри со средой Эндо так, чтобы получить
рост отдельных колоний. Посевы инкубируют при 370С – 18-24 ч, после чего из
выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму. При выявлении в мазках
грамотрицательных палочек, колонии пересевают на среды Гисса с глюкозой.
Наличие газообразования в пробирках с посевами указывает на присутствие БГКП.
Титр устанавливают по наименьшему количеству продукта, в котором обнаружены
БГКП или по стандартным таблицам.
В оценке пищевых продуктов по микробиологическим показателям необходимо
учитывать возможность обнаружения патогенных и условно-патогенных
микроорганизмов. Продукты питания анализируют на наличие сальмонелл,
сульфитредуцирующих клостридий, стафилококков, протея. При более широком
исследовании продукты исследуют на грибковую флору.
Для исследования на сальмонеллы из анализируемых продуктов готовят суспензию
и засевают на среды накопления (селенитовый, хлористо-магниевый бульоны).
После суточной инкубации при 370С производят пересев на среды Эндо, Левина,
Плоскирева или висмут-сульфит агар. Далее колонии идентифицируют путем учета
характеристики роста на средах Гисса, Ресселя, Олькеницкого и в реакции
агглютинации с монорецепторными сыворотками.
Для выявления сульфитредуцирующих клостридий проводится посев исследуемого
материала в 2 пробирки со средой Китта-Тароцци, Вильсона-Блер или казеиново-
грибную среду. Одну пробирку прогревают при 800С для уничтожения
сопутствующей микрофлоры. Инкубируют посевы при 370С 5 сут. При наличии
характерного роста достаточно констатировать в мазках специфическую
микрофлору и при необходимости провести проверку токсинообразования в
биопробе на белых мышах.
Для выявления стафилококков исследуемый материал засевают на желточно-
солевой агар. Посевы инкубируют в термостате 24 ч. Подозрительные на
стафилококки колонии окрашивают по Граму, делают их пересев на молочный агар
и проводят дальнейшую идентификацию выделенной культуры.
Для выявления протея производят посев исследуемого материала на скошенный
агар методом Шукевича. После суточной инкубации с верхнего края роста делают
мазки и при наличии в них грамотрицательных полиморфных бактерий делают
заключение о выделении протея, при необходимости используют биохимическое и
антигенное типирование.

43. Рост и размножение бактерий. Механизм и скорость размножения. Фазы


размножения микробов.
Для микробиологической диагностики, изучения микроорганизмов и в
биотехнологических целях микроорганизмы культивируют на искусственных
питательных средах.
Под ростом бактерий понимают увеличение массы клеток без изменения их
числа в популяции как результат скоординированного воспроизведения всех
клеточных компонентов и структур. Увеличение числа клеток в популяции
микроорганизмов обозначают термином "размножение". Оно характеризуется
временем генерации (интервал времени, за который число клеток удваивается) и
таким понятием, как концентрация бактерий (число клеток в 1 мл).
В отличие от митотического цикла деления у эукариотов размножение
большинства прокариотов (бактерий) идет путем бинарного деления, а
актиномицетов — почкованием. При этом все прокариоты существуют в гаплоидном
состоянии, поскольку молекула ДНК представлена в клетке в единственном числе.
2. При изучении процесса размножения бактерий необходимо учитывать, что
бактерии всегда существуют в виде более или менее многочисленных популяций, и
развитие бактериальной популяции в жидкой питательной среде в периодической
культуре можно рассматривать как замкнутую систему.
В этом процессе выделяют 4 фазы:
• 1-я — начальная, или лаг-фаза, или фаза задержки размножения, —
характеризуется началом интенсивного роста клеток, но скорость их деления
остается невысокой;
• 2-я — логарифмическая, или лог-фаза, или экспоненциальная фаза, —
характеризуется постоянной максимальной скоростью деления клеток и
значительным увеличением числа клеток в популяции;
• 3-я — стационарная фаза — наступает тогда, когда число клеток в
популяции перестает увеличиваться. Это связано с тем, что наступает равновесие
между числом вновь образующихся и гибнущих клеток. Число живых
бактериальных клеток в популяции на единицу объема питательной среды в
стационарной фазе обозначается как М-концентрация. Этот показатель является
характерным признаком для каждого вида бактерий;
• 4-я — фаза отмирания (логарифмической гибели) — характеризуется
преобладанием в популяции числа погибших клеток и прогрессивным снижением
числа жизнеспособных клеток популяции. Прекращение роста численности
(размножения) популяции микроорганизмов наступает в связи с истощением
питательной среды и/или накоплением в ней продуктов метаболизма микробных
клеток. Поэтому, удаляя продукты метаболизма и/или заменяя питательную среду,
регулируя переход микробной популяции из стационарной фазы в фазу отмирания,
можно создать открытую биологическую систему, стремящуюся к устранению
динамического равновесия на определенном уровне развития популяции.
Такой процесс выращивания микроорганизмов называется проточным
культивированием (непрерывная культура). Рост в непрерывной культуре
позволяет получать большие массы бактерий при проточном культивировании в
специальных устройствах (хемостатах и турбидистатах) и используется при
производстве вакцин, а также в биотехнологии для получения различных
биологически активных веществ, продуцируемых микроорганизмами.
Для изучения метаболических процессов на протяжении цикла клеточного
деления возможно также использование синхронных культур — таких культур
бактерий, все члены популяции которых находятся в одной фазе цикла. Это
достигается с помощью специальных методов культивирования.
Однако через несколько одновременных делений синхронизированная
клеточная суспензия постепенно снова переходит к асинхронному делению, так что
число клеток увеличивается в дальнейшем уже не ступенчато, а непрерывно.
3. При культивировании на плотных питательных средах бактерии образуют
колонии — видимое невооруженным глазом скопление бактерий одного вида,
являющееся чаще всего потомством одной клетки.
Колонии бактерий разных видов отличаются:
• формой;
• величиной;
• прозрачностью;
• цветом;
• высотой;
• характером поверхности и краев;
• консистенцией.
Характер колоний — один из таксономических признаков бактерий.

44. Определение и сущность понятий “биосфера” и “биоценоз”. Современные


представления об эволюции микробов.

В природе микроорганизмы заселяют практически любую среду (почва, вода,


воздух) и распространены гораздо шире, чем другие живые существа. Благодаря
разнообразию механизмов утилизации источников питания и энергии, а также
выраженной адаптации к внешним воздействиям, микроорганизмы могут обитать там,
где другие формы жизни не выживают.
Биоценоз (от греч. βίος — «жизнь» и κοινός — «общий») — это исторически
сложившаяся совокупность животных, растений, грибов и микроорганизмов,
населяющих относительно однородное жизненное пространство (определённый
участок суши или акватории), они связаны между собой и со средой. Биоценозы
возникли на основе биогенного круговорота и обеспечивают его в конкретных
природных условиях. Наиболее важными количественными показателями биоценозов
являются биоразнообразие (совокупное количество видов в нём) и биомасса
(совокупная масса всех видов живых организмов данного биоценоза).
Биосфе́ра (от др.-греч. βιος — жизнь и σφαῖρα — сфера, шар) — оболочка
Земли, заселённая живыми организмами, находящаяся под их воздействием и занятая
продуктами их жизнедеятельности. Биосфера начала формироваться не позднее, чем
3,8 млрд. лет назад, когда на нашей планете стали зарождаться первые организмы.
1Эволюция микробов - подчиняется общим закономерностям эволюции
органического мира, впервые разработанным Чарльзом Дарвином и развитым
авторами современной синтетической теории эволюции. Главной особенностью Э.м
является то, что они возникли тогда, когда др. органических форм на Земле не было
Прямые находки ископаемых микробов относят к периоду 3,6 -3,8x10^9 лет назад.
Многоклеточные организмы возникли спустя 3 млрд лет. Предполагается, что за эти 3
млрд лет 2на модели микроорганизмов были «отработаны» главные условия
существования и развития органических форм материи: морфологическая и хим.
структура, главные пути обмена веществ и энергии, механизмы наследственности,
изменчивости и эволюции, основные закономерности взаимодействия живых
организмов между собой и с окружающей неживой средой.
По современным представлениям, микробы сыграли ведущую роль в переходе
Земли из восстановительного периода в окислительный, в формировании первичных
экосистем и биосферы в целом и механизмов поддержания местного и глобального
экологического баланса. Исследования показывают, что Э. м. подчиняется тем же
законам, к-рые действуют в эволюции др. организмов, на них влияют те же
эволюционные факторы: 3мутация, скрещивание, изоляция, мутационные и
эпигенетические ограничения и отбор.
4В то же время темпы эволюции многих микроорганизмов выше, примером чего
являются вирус гриппа А и СПИДа, больничные эковары бактерий.
Эта особенность Э м. связана с малым периодом генерации и большим числом
генераций в ед. времени, гаплоидностью хромосомы, большей доступностью
генетического материала внешним воздействиям, возможностью передачи
генетического материала особям др. видов и родов. В то же время выраженная
способность к фенотипической адаптации и переходу в стадию покоя на очень
длительное время, большие ареалы и численность популяций, высокие возможности к
миграции на глобальном уровне оказывают консервативное влияние на Э.м.
В некоторых биотопах биосферы существуют виды бактерий, образовавшиеся
более 2x109 лет. Предполагается, что 5первичными микроорганизмами были формы,
подобные современным микоплазмам, имеющие минимум структур, необходимых для
жизни. В последующем морфологическая эволюция шла по пути совершенствования
оболочек, ядерного аппарата, органоидов. Так, постепенно возникали
прокариотические бактерии, эукариотические грибы и протозоа.
6Метаболическая эволюция, вероятно, началась с анаэробных гетеротрофов,
которые дали 2 метаболические ветви: факультативно-анаэробных и аэробных
гетеротрофов и фото- и хемосинтезирующих аутотрофов.
Экологическая эволюция шла по пути установления экологических отношений с
вновь возникающими органическими формами и адаптации к обитанию в новых
средах, особенно в живых организмах и их мертвых остатках. Так появились
сапрофиты, эпифиты, тканевые, внутриклеточные и внутригеномные паразиты.
7Э.м. шла периодами замедления и ускорения. Имеются основания утверждать,
что XX в., особенно вторая его половина, является периодом ускоренной эволюции
микроорганизмов. Это ускорение связано с влиянием антропогенных факторов НТР.
Массовые выбросы токсических отходов производств в окружающую среду угнетают
деятельность азотфиксирующих, аммонифицирующих, нитрифицирующих и др. групп
микробов, принимающих участие в поддержании экологического баланса экосистем и
биосферы. Многообразные изменения отмечены у патогенных для человека микробов
и вызываемых ими болезней. За последние 20 лет выявлено около 30 новых
инфекционных агентов. Возросли удельный вес и количество вирусных, хронических,
смешанных, вторичных, внутрибольничных инфекций.
Резко увеличились число и тяжесть заболеваний, вызванных условно-
патогенными микробами. Приобретают эпидемический характер ранее спорадические
болезни. Произошло расширение ареала микробов как внутри хозяина, так и числа
поражаемых видов и территорий, на которых они обитают. Широкое распространение
получили устойчивые к химиопрепаратам, антисептикам и дезинфектантам варианты.
Эволюция вирусов - подчиняется общим закономерностям эволюционного
процесса органической материи. Особенностью Э.в. являются высокие темпы, тесная
взаимосвязь и взаимовлияние с эволюцией хозяев. Особенно высокие темпы Э.в.
отмечены у вирусов с фрагментарным геномом, РНК-вирусов, образующих ДНК-
копию генома, вирусов с геномом однонитчатой РНК. В первом случае она
определяется высокой частотой рекомбинаций при смешанной инфекции, во втором и
третьем - частыми ошибками при транскрипции генетической информации. В
современный период темпы Э.в. еще более ускорились в результате усиливающегося
давления антропогенных факторов.

45. Характер взаимоотношений живых организмов в природе: симбиоз,


метабиоз, саттелизм, синергизм, антагонизм. Характер взаимоотношений
микробов с организмом человека: cапрофиты, коменсалы, паразиты.

Симбиоз [от греч. symbiosis, совместное проживание] — совместное


длительное существование микроорганизмов в долгоживущих сообществах.
Взаимоотношения, при которых микроорганизм располагается вне клеток хозяина
(более крупного организма), известны как эктосимбиоз: при локализации внутри
клеток — как эндосимбиоз. Типичные эктосимбиотические микробы — Escherichia
coli, бактерии родов Bacteroides и Bifidobacterium, Proteus vulgaris, а также другие
представители кишечной микрофлоры. Как пример эндосимбиоза можно рассмат-
ривать плазмиды, обеспечивающие, например, резистентность бактерий к ЛС.
Симбиотические отношения также разделяют по выгоде, получаемой каждым из
партнёров.
Мутуализм [от лат. mutuus, взаимный] — взаимовыгодные симбиотические
отношения. Так, микроорганизмы вырабатывают БАВ, необходимые организму
хозяина (например, витамины группы В). При этом обитающие в макроорганизмах
эндо- и эктосимбионты защищены от неблагоприятных условий среды (высыхания и
экстремальных температур) и имеют постоянный доступ к питательным веществам.
Из всех видов мутуализма наиболее удивительно культивирование некоторых
грибов насекомыми (жуками и термитами). С одной стороны, это способствует
более широкому распространению грибов, с другой — о \
mjбеспечивает постоянный источник питательных веществ для личинок. Это
напоминает выращивание человеком полезных растений и микроорганизмов.
Комменсализм — разновидность симбиоза, при которой выгоду извлекает
только один партнер (не принося «видимого» вреда другому); микроорганизмы,
участвующие в таких взаимоотношениях, — комменсалы [от лат. сот-, с, + mensa,
стол; буквально — сотрапезники]. Микроорганизмы-комменсалы колонизируют
кожные покровы и полости организма человека (например, ЖКТ), не причиняя
«видимого» вреда; их совокупность — нормальная микробная флора (естественная
микрофлора). Типичные эктосимбиотические организмы-комменсалы — кишечная
палочка, бифидобактерии, стафилококки, лактобациллы. Многие бактерии-
комменсалы принадлежат к условно-патогенной микрофлоре и способны при
определённых обстоятельствах вызывать заболевания макроорганизма (например,
при внесении их I кровоток во время медицинских манипуляций).
Антагонистический симбиоз — симбиотические отношения, наносящие
хозяину более in менее выраженный вред; его крайнее проявление — паразитизм [от
греч. para, при, + Ля, пища]. Если микроорганизмы-сапрофиты [от греч. sapros,
гнилой, + phyton, растение] ути- Иуют мёртвые органические субстраты, то
паразитические виды живут за счёт живых тка- ||астении или животных. Проникая в
организм хозяина, они могут вызывать у него заболели, поэтому их обозначают как
патогенные микроорганизмы, [шразитические микроорганизмы разделяют на
внутри- и внеклеточные. Внутриклеточные ■юиты - вирусы, риккетсии и хламидии.
Внеклеточные паразиты — большинство бактерий I простейших.
Факультативные паразиты. В зависимости от внешних условий некоторые
микроорганиз- jjfc могут вести себя как паразиты, либо как сапрофиты. Поэтому их
так и называют — ■«ультативные паразиты. К ним относят большинство условно-
патогенных бактерий. Облигатные паразиты полностью утратили собственные
метаболические возможности и *пут, разрушая ткани хозяина.
МЕТАБИОЗ
В ряде биотопов, особенно в почве, некоторые микроорганизмы утилизируют
продукты жизнедеятельности других; например, нитрифицирующие бактерии
используют аммиак, который образуют аммонифицирующие бактерии. Подобные
взаимоотношения известны как метабиоз.
САТЕЛЛИЗМ - усиление роста одного вида микроорганизма под влиянием
другого вида микроорганизма. Например, колонии дрожжей или сарцин, выделяя в
питательную среду метаболиты, стимулируют рост вокруг них колоний других
микроорганизмов. При совместном росте нескольких видов микроорганизмов могут
активизироваться их физиологические функции и свойства, что приводит к более
быстрому воздействию на субстрат.
Некоторые микроорганизмы способны выделять метаболиты, стимулирующие
рост другая микроорганизмов. Например, сарцины или стафилококки выделяют
ростовые факторы, стимулирующие рост бактерий рода Haemophilus. Нередко
совместный рост нескольких видов миг бов активирует их физиологические
свойства. Подобные взаимоотношения известны как сат лизм [от лат. safeties,
сопровождающий].
АНТАГОНИЗМ
Ситуации, когда один микроорганизм угнетает развитие другого, известны как
микробный антагонизм [от греч. antagonizmai, соперничество] и отражают
сложившиеся эволюционно мы борьбы микроорганизмов за существование (то есть
за источники питания и энергии). А гонистические взаимоотношения особенно
выражены в местах естественного обитания больс го числа различных видов и типов
микроорганизмов (например, в почве или ЖКТ), имеют одинаковые пищевые и
энергетические потребности. При этом воздействие на конкурента i жет быть
пассивным или активным. В первом случае микроорганизмы быстрее утилизиру;:
субстрат, лишая соперника «сырьевых ресурсов»; во втором — «объявляют войну до
уничтожения». Формы истребления могут быть вариабельными — от банального
поглощен более мелких видов до выделения высокоспецифичных продуктов,
токсичных для конкурент::
Метабиоз — взаимоотношение микроорганизмов, при котором один из них
использует для своей жизнедеятельности продукты жизнедеятельности другого.
Метабиоз характерен для почвенных нитрифицирующих бактерий, использующих
для своего метаболизма аммиак — продукт жизнедеятельности аммонифицирующих
почвенных бактерий.
Комменсализм (от лат. commensalis — сотрапезник) — сожительство особей
разных видов, при котором выгоду из симбиоза екает один вид, не причиняя
другому Комменсалами являются бактерии — Чхдставители нормальной
микрофлоры человека

Антагонистические взаимоотношения, или антагонистический симбиоз,


выражаются в виде неблагоприятного воздействия одного вида микроорганизма на
другой, приводящего к повреждению и даже гибели последнего. М икроорганизмы-
антагонисты распространены в почве, воде и в организме человека и животных.
Хорошо известна антагонистическая активность против посторонней и гнилостной
микрофлоры представителей нормальной микрофлоры толстого кишечника человека
— бифидобактерий, лактобактерий, кишечной палочки и др.
Механизм антагонистических взаимоотношений разнообразен.
Распространенной формой антагонизма является образование антибиотиков —
специфических продуктов обмена микроорганизмов, подавляющих развитие
микроорганизмов других видов. Существуют и другие проявления антагонизма,
например большая скорость размножения, продукция бактериоцинов, в частности
колицинов, продукция органических кислот и других продуктов, изменяющих рН
среды.
Антагонизм может развиваться в форме конкуренции в основном за источники
питания: интенсивно развиваясь и истощая питательную среду, микроорганизм-
антагонист подавляет рост других микроорганизмов. При хищничестве
микроорганизм, например амеба кишечника, захватывает и переваривает бактерии
кишечника. Наконец, такая форма антагонизма, когда микроорганизм использует
другой организм как источник питания, называется паразитизмом. Примером пара-
зитизма является взаимоотношение бактериофага и бактерии, а также
взаимоотношение бделловибрионов (маленькие бактерии, паразиты обычных
грамотрицательных бактерий).
Сапрофиты(уст.) – организмы, питающиеся остатками растений и животных и
превращающие органические вещества в неорганические. B общебиол.
литературе в настоящее время термин употребляется редко; в
микробиол. используется как антоним паразитов, т. е. организмов, питающихся
также готовыми органическими веществами, но живых организмов–хозяев. Напр.,
говорят о патогенных микроорганизмах – сапрофитах (возбудитель ботулизма) и
паразитах (развивающихся в организме больного). Ср. сапротрофы.

Синергизм - усиление физиологических функций микроорганизмов при


совместном развитии. Витамины, синтезируемые дрожжами, стимулируют развитие
молочнокислых бактерий, а молочная кислота создает благоприятную среду для
развития дрожжей.
ТЫ МОЛОДЕЦ! ВСЕ ПОЛУЧИТСЯ! ВПЕРЕД ЗА ПЯТЕРКОЙ!

46. Нормальная микрофлора тела человека: локализация, качественный и


количественный состав.
Нормальная микрофлора человека – это совокупность множества
микробиоценозов, характеризующихся определенными взаимосвязями и местом
обитания, сопутствует своему хозяину на протяжении всей его жизни.
Нормальная микрофлора отдельных биотопов различна, но подчиняется
ряду основных закономерностей:
• она достаточно стабильна;
• образует биопленку;
• представлена несколькими видами, среди которых выделяют доминантные
виды и виды-наполнители;
• преобладающими являются анаэробные бактерии.
Нормальная микрофлора характеризуется анатомическими особенностями —
каждая экологическая ниша имеет свой видовой состав.
Некоторые биотопы стабильны по своему составу, а другие (транзиторная
микрофлора) постоянно меняются в зависимости от внешних факторов.
Микроорганизмы, составляющие нормальную микрофлору, образуют четкую
морфологическую структуру — биопленку, толщина которой колеблется от 0,1 до
0,5 мм.
В состав нормальной микрофлоры входят как анаэробные, так и аэробные
бактерии, соотношение которых в большинстве биоценозов составляет 10 : 1—100 :
1.
Заселение бактериями различных областей тела начинается в момент
рождения человека и продолжается на протяжении всей его жизни.
Формирование качественного и количественного состава нормальной
микрофлоры регулируется сложными антагонистическими и синергическими
отношениями между отдельными ее представителями в составе биоценозов.
Состав транзиторной микрофлоры может меняться в зависимости:
• от возраста;
• условий внешней среды;
• условий труда, рациона питания;
• перенесенных заболеваний;
• травм и стрессовых ситуаций.
В составе нормальной микрофлоры различают:
• постоянную, или резидентную микрофлору, — представлена
относительно стабильным составом микроорганизмов, обычно обнаруживаемых в
определенных местах тела человека у людей определенного возраста;
• транзиторную, или временную микрофлору, — попадает на кожу или
слизистые оболочки из окружающей среды, не вызывая заболеваний и не обитая
постоянно на поверхностях тела человека. Она представлена сапрофитными
условно-патогенными микроорганизмами, которые обитают на коже или слизистых
оболочках в течение нескольких часов, дней или недель. Присутствие транзиторной
микрофлоры определяется не только поступлением микроорганизмов из
окружающей среды, но и состоянием иммунной системы организма хозяина и
составом постоянной нормальной микрофлоры.
В норме многие ткани и органы здорового человека свободны от
микроорганизмов, т. е. стерильны.
К ним относятся:
• внутренние органы;
• головной и спинной мозг;
• альвеолы легких;
• внутреннее и среднее ухо;
• кровь, лимфа, спинномозговая жидкость;
• матка, почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре.
Это обеспечивается наличием неспецифических клеточных и гуморальных
факторов иммунитета, препятствующих проникновению микробов в эти ткани и
органы.
На всех открытых поверхностях и во всех открытых полостях формируется
достаточно стойкая микрофлора, специфичная для данного органа, биотопа или его
участка — эпитопа.
Наиболее богаты микроорганизмами:
• ротовая полость;
• толстый кишечник;
• верхние отделы дыхательной системы;
• наружные отделы мочеполовой системы;
• кожа, особенно ее волосистая часть.

В составе резидентной микрофлоры кожи и слизистых оболочек


присутствуют:
• Staphylococcus epidermidis;
• Staphylococcus aureus;
• Micrococcus spp.;
• Sarcina spp.;
• коринеформные бактерии;
• Propionibacterium spp.
В составе транзиторной:
• Streptococcus spp.;
• Peptococcus spp.;
• Bacillus subtilis;
• Escherichia coli;
• Enterobacter spp.;
• Acinetobacter spp.;
• Lactobacillis spp.;
• Candida albicans и многие другие.
В нормальной микрофлоре глаза (конъюнктивы) доминирующими
микроорганизмами на слизистых оболочках глаза являются следующие:
• дифтероиды (коринеформные бактерии);
• нейссерии;
• грамотрицательные бактерии, преимущественно рода Moraxella.
Нередко обнаруживаются:
• стафилококки;
• стрептококки;
• микоплазмы.
На количество и состав конъюнктивальной микрофлоры значительное влияние
оказывает слезная жидкость, в которой содержится лизоцим, обладающий
антибактериальной активностью.
Особенностью нормальной микрофлоры уха является то, что в среднем ухе в
норме микробов не содержится, так как ушная сера обладает бактерицидными
свойствами. Но они все же могут проникать в среднее ухо через евстахиеву трубу
из глотки.
В наружном слуховом проходе могут находиться обитатели кожи:
• стафилококки;
• коринебактерии;
• реже встречаются бактерии рода Pseudomonas;
• грибы рода Candida.
Собственная микрофлора носа представлена:
• коринебактериями (дифтероидами);
• нейссериями;
• коагулазо-отрицательными стафилококками;
• альфа-гемолитическими стрептококками.
В качестве транзиторных видов могут присутствовать:
• Staphylococcus aureus;
• Escherihia coli;
• бета-гемолитические стрептококки.
Микробиоценоз зева еще более разнообразен, поскольку здесь смешивается
микрофлора полости рта и воздухоносных путей.
Представителями резидентной микрофлоры считаются:
• нейссерии;
• дифтероиды;
• альфа-гемолитические;
• гамма-гемолитические стрептококки;
• энтерококки;
• микоплазмы;
• коагулазо-отрицательные стафилококки;
• моракселлы;
• бактероиды;
• боррелии;
• трепонемы;
• актиномицеты.
В верхних дыхательных путях преобладают:
• стрептококки;
• нейссерии; встречаются:
• стафилококки;
• дифтероиды;
• гемофильные бактерии;
• пневмококки;
• микоплазмы;
• бактероиды.
Представителей нормальной микрофлоры полости рта может разделить на
3 категории:
• количество бактерий, измеряемое в 105—108 КОЕ/мл — стрептококки,
нейссерии, вейлонеллы;
• 103—104 КОЕ/мл — стафилококки, лактобактерии, нитевидны
бактерии;
• 10—102 КОЕ/мл — дрожжеподобные грибы.
В составе оральной микрофлоры основная масса представлена:
• гетерогенной группой грамположительных кокков — зеленящих
(альфа-гемолитических) стрептококков;
• пептококками, вейлонеллами и коринебактериями, нейссериями (3—
5% от общего количества), лактобациллами (1%).
Стрептококки с вейлонеллами составляют также большую часть флоры
слюны, в которую они попадают главным образом со спинки языка.
Постоянство качественного состава микрофлоры поддерживается
физиологическими процессами, обеспечивающими нормальное функциональное
состояние слизистой оболочки и слюнных желез, а также взаимодействием
микробных видов.
Непосредственное регулирующее влияние на состав микрофлоры оказывают
фагоциты (нейтрофилы) слюны и растворенные в слюне вещества, многие из
которых являются продуктами жизнедеятельности самих микроорганизмов
(микробные ферменты и витамины, продукты расщепления питательного субстрата
и распада микробных клеток).
К образуемым клетками организма антибактериальным факторам слюны
относятся лейкины, иммуноглобулины и некоторые ферменты. Наиболее
выраженным антибактериальным действием обладает лизоцим.
2. На протяжении остальной части желудочно-кишечного тракта
выделяют несколько биотопов, существенно отличающихся по составу
микробиоценоза, что связано с различными морфологическими, функциональными
и биохимическими особенностями соответствующих его отделов.
У здоровых людей микрофлора пищевода достаточно скудная, состоит из
микроорганизмов, поступающих со слюной и пищей.
В проксимальной его части можно обнаружить бактерии, типичные для
микрофлоры полости рта и глотки, в дистальных отделах — стафилококки,
дифтероиды, молочнокислые бактерии.

1.В желудке кислая реакция среды (действие соляной кислоты) и наличие


лизоцима, различных ферментов желудочного сока способствуют резкому
снижению содержания микроорганизмов до 103—104 КОЕ/мл содержимого.
Видовой состав представлен:
• лактобактериями;
• бифидобактериями;
• бактероидами;
• стрептококками;
• дрожжеподобными грибами.
Гипохлоргидрия (пониженная кислотность) или закупорка привратника
способствуют размножению грамположительных факультативно-анаэробных
кокков и грамположительных анаэробных палочек (лактобацилл).
2. По мере того как реакция содержимого кишечника становится более
щелочной, в начальных отделах кишечника — двенадцатиперстной кишке и
тонкой кишке — постепенно увеличивается количество постоянной микрофлоры, но
все микроорганизмы присутствуют сравнительно в небольших количествах — 104—
105 КОЕ/мл содержимого. Это связано с целым рядом неблагоприятных для них
факторов:
• действием соляной кислоты, желчи и ферментов;
• присутствием богатого фагоцитирующими нейтрофилами лим-
фатического аппарата,
• действием секреторных иммуноглобулинов слизистой оболочки
кишечника
• кишечной перистальтикой, обеспечивающей быстрое удаление
микроорганизмов.
Микрофлора представлена в основном: молочнокислыми бактериями
(лактобактериями); бифидобактериями; бактероидами; энтерококками;
в дистальных отделах тонкого кишечника появляются фекальные
микроорганизмы, характерные для толстой кишки. По мере продвижения к
Остальному отделу толстого кишечника действие бактерицидных и
бактериостатических факторов ослабевает, и у входа в толстый кишечник для
бактерий благоприятные условия — определенные рН и температура, много
питательных субстратов, что способствует интенсивному размножению бактерий.
Из-за слабощелочной реакции рН в этих отделах кишечника и наличия
большого количества продуктов распада углеводов и белков постоянная
нормальная микрофлора толстого кишечника у взрослых занимает первое место по
численности (10й— 1012 КОЕ/г фекалий) и многообразию (более 100 различных видов
микроорганизмов постоянно).
В связи с анаэробными условиями у здорового человека в составе нормальной
микрофлоры в толстом кишечнике преобладают (96—98%) анаэробные
бактерии:
-бактероиды (особенно Bacteroides fragilis);
-анаэробные молочнокислые бактерии (например, Bifidumbacte-
rium);
-клостридии {Clostridium perfringens);
-анаэробные стрептококки;
-фузобактерии;
-эубактерии;
-вейлонеллы.
И только 14% микрофлоры составляют аэробные и факультативно-
анаэробные микроорганизмы:
грамотрицательные колиформные бактерии (прежде всего кишечная
палочка); энтерококки;
в небольшом количестве:
- стафилококки;
- протеи;
-псевдомонады;
-лактобациллы;
-грибы рода Candida;
-отдельные виды спирохет, микобактерий, микоплазм, простейших и
вирусов.
Всегда необходимо помнить, что при диареях количество бактерий в
значительной степени снижается, тогда как при кишечном стазе их содержание
увеличивается.

1. В наружной части уретры как у мужчин, так и у женщин находятся в


небольшом количестве в основном те же микроорганизмы, которые
обнаруживаются на коже и в промежности, они представлены:
• коринебактериями;
• микобактериями;
• грамотрицательными бактериями фекального происхождения;
• неспорообразующими анаэробами (пептококки, пептострепто-
кокки, бактероиды).
Эти микроорганизмы обычно выявляются в нормальной моче в количестве
10 —104 КОЕ/мл.
2

На наружных половых органах мужчин и женщин локализуются


микобактерий смегмы (Mycobacterium smegmatis), морфологически сходные с
микобактериями туберкулеза. Они обнаруживаются в секрете сальных желез,
находящихся на головке полового члена у мужчин и малых половых губ у
женщин.
Кроме того, здесь встречаются стафилококки, микоплазмы и сапрофитные
трепонемы, морфологически сходные с возбудителем сифилиса.
Необходимо отметить, что качественный и особенно количественный состав
микрофлоры наружных отделов мочеполовой системы у разных людей варьирует в
достаточно широких пределах.
Для наружных половых органов мужчин характерна добавочная микрофлора:
• стафилококки;
• коринебактерии;
• микоплазмы;
• энтеробактерии;
• из анаэробов — бактероиды, фузобактерии, анаэробные кокки. В
настоящее время установлено, что нормальный бактериальный пейзаж уретры
взрослого человека (мужчины) составляют:
• стафилококки;
• дифтероиды;
• диплококки и палочки;
• анаэробы (пептококки, бактероиды, энтеробактерии, клостридии);
• дифтероиды.
Основная масса аэробных бактерий обитает в области ладьевидной ямки.
Бактериальное обсеменение уменьшается по мере продвижения вглубь
мочеиспускательного канала.
Задняя уретра и предстательная железа обычно в норме стерильны.
2. Маточные трубы, яичники и полость матки в норме стерильны, поскольку
цервикальная слизь содержит лизоцим и обладает антибактериальной активностью.
Тем не менее в цервикальном канале могут быть обнаружены различные
микроорганизмы, количество которых меньше, чем во влагалище.
Половые пути женщины представлены совокупностью микроучастков
нескольких гистотипов. Это участки:
• плоского вагинального эпителия;
• цилиндрического эпителия шейки матки;
• уникальная область цервикальных желез.
Они характеризуются определенными биохимическими и физиологическими
особенностями. Поэтому каждому из них присуща своя, несколько отличная от
других популяция микроорганизмов.
Микробами заселены лишь нижние отделы мочеполового тракта:
• наружные половые органы;
• влагалище;
• цервикальный канал.
Видовой состав микрофлоры женских половых органов, как и других
эпитопов, относительно стабилен. Определенные различия обусловлены:
• возрастом;
• беременностью;
• фазой менструального цикла.
Микрофлора влагалища находится в прямой зависимости от возраста и
гормонального статуса женского организма. Она начинает формироваться через 12—
14 ч после рождения ребенка — во влагалищном содержимом появляются
молочнокислые бактерии — аэробные лактобациллы {палочка Дедерлейна),
полученные от матери при родах, которые обитают здесь до тех пор, пока реакция
среды остается кислой или слабощелочной (несколько недель).
Когда она становится нейтральной (рН среды равна 7,6), что сохраняется до
полового созревания, в микробиоценоз влагалища включается и развивается
смешанная флора — анаэробы, энтерококки, стрептококки, стафилококки,
коринебактерии. С наступлением половой зрелости под влиянием эстрогенов ва-
гинальный эпителий увеличивается и в нем сильно возрастает уровень гликогена.
Гликоген — идеальный субстрат для лактобактерий, в связи с этим
происходят изменения микробиоценоза влагалища, которые характеризуются
преобладанием лактобацилл. В результате образования лактобациллами кислоты из
углеводов, в том числе из гликогена, происходит понижение рН влагалищного
секрета до 4,0-4,2—4,5.
На протяжении всего детородного периода лактобациллы обеспечивают
поддержание кислой реакции среды на этом уровне. Это важный механизм в
предупреждении колонизации влагалища другими, потенциально патогенными
микроорганизмами. 3. У здоровых женщин детородного возраста общее
количество микроорганизмов в вагинальном отделяемом составляет 6—8 х 104
КОЕ/мл.
В зависимости от состава микрофлоры различают следующие степени
чистоты влагалища здоровых женщин:
• 1-я степень: реакция среды кислая, большое количество палочек
Дедерлейна (лактобациллы), других видов микроорганизмов почти нет;
• 2-я степень: реакция среды слабокислая, палочек Дедерлейна мало, в
микробиоценозе появляется кокковая флора — стрептококки, стафилококки,
обнаруживаются единичные лейкоциты;
• 3-я степень: реакция среды нейтральная или слабощелочная,
единичные палочки Дедерлейна, кокки превалируют, лейкоцитов — до 40 в поле
зрения;
• 4-я степень: реакция щелочная, палочек Дедерлейна нет вообще,
большое количество кокков, могут быть другие виды микроорганизмов —
энтеробактерии, бактероиды, лейкоциты в огромном количестве.
3-я и 4-я степени чистоты влагалища женщины свидетельствуют о наличии
воспалительного процесса урогенитального тракта.
После наступления менопаузы снижается продукция эстрогенов, рН
поднимается до 6,0, вагинальный эпителий становится тоньше — количество
лактобацилл вновь уменьшается, появляется смешанная микрофлора. В состав
нормальной влагалищной микрофлоры в этот период обычно входят:
• клостридии;
• анаэробные стрептококки (пептострептококки);
• стафилококки;
• аэробные гемолитические стрептококки группы В;
• колиформные бактерии;
• дифтероиды;
• иногда листерии.

Виды нормальной микрофлоры:


1) резидентная – постоянная, характерная для данного вида;
2) транзиторная – временно попавшая, нехарактерная для данного биотопа;
она активно не размножается.
Нормальная микрофлора формируется с рождения. На ее формирование
оказывают влияние микрофлора матери и внутрибольничной среды, характер
вскармливания.
Факторы, влияющие на состояние нормальной микрофлоры.
1. Эндогенные:
1) секреторная функция организма;
2) гормональный фон;
3) кислотно-основное состояние.
2. Экзогенные условия жизни (климатические, бытовые, экологические).
Микробное обсеменение характерно для всех систем, имеющих контакты с
окружающей средой. В организме человека стерильными являются кровь, ликвор,
суставная жидкость, плевральная жидкость, лимфа грудного протока, внутренние
органы: сердце, мозг, паренхима печени, почек, селезенки, матка, мочевой пузырь,
альвеолы легких.
Нормальная микрофлора выстилает слизистые оболочки в виде биопленки.
Этот полисахаридный каркас состоит из полисахаридов микробных клеток и
муцина. В нем находятся микроколонии клеток нормальной микрофлоры. Толщина
биопленки – 0,1–0,5 мм. В ней содержится от нескольких сотен до нескольких тысяч
микроколоний.
Формирование биопленки для бактерий создает дополнительную защиту.
Внутри биопленки бактерии более устойчивы к действию химических и физических
факторов.
Этапы формирования нормальной микрофлоры желудочно-кишечного
тракта (ЖКТ):
1) случайное обсеменение слизистой. В ЖКТ попадают лактобациллы,
клостридии, бифидобактерии, микрококки, стафилококки, энтерококки, кишечная
палочка и др.;
2) формирование сети из ленточных бактерий на поверхности ворсинок. На
ней фиксируются в основном палочковидные бактерии, постоянно идет процесс
формирования биопленки.
Нормальная микрофлора рассматривается как самостоятельный
экстракорпоральный орган с определенной анатомической структурой и функциями.
Наибольшей обсемененностью характеризуются:
1) толстый кишечник;
2) ротовая полость;
3) мочевыделительная система;
4) верхние дыхательные пути;
5) кожа.

47. Физиологическая и патогенетическая роль нормальной микрофлоры тела


человека.
Нормальная микрофлора выполняет важные физиологические функции.
Участвует:  
 в обменных процессах – регуляции газового состава кишечника, в
расщеплении белков, липидов, нуклеиновых, жирных и желчных кислот;
 в регуляции моторной функции кишечника;  
 в синтезе витаминов группы В, К, никотиновой, фолиевой кислот;
 в детоксикации  эндогенных и экзогенных токсических продуктов;
 в процессах стимуляции формирования иммунной системы у новорожденных
и поддержания иммунного статуса у взрослых;
 в предотвращении колонизации слизистых оболочек транзиторными, в том
числе  патогенными или условно-патогенными   микроорганизмами.
     Антагонистическая активность нормальной микрофлоры реализуется с
помощью следующих механизмов:
 Образование кислых продуктов, подавляющих рост микроорганизмов-
конкурентов (молочная кислота, уксусная кислоты). Кислая среда
препятствует размножению гнилостной и патогенной микрофлоры,
стимулирует перистальтику кишечника;  
 Биосинтез веществ, обладающих активностью антибиотиков
(бактериоцинов);
 Конкуренция бактерий за пищевые субстраты;
 Конкуренция за площадь адгезии на клетках эпителия.

  Биосинтез витаминов бактериями


 
Витами Витами Витами
Никоти Пантоте Фолиева
н В1 н В2 н В6 Биоти Витами
Бактерии -новая -новая я
(тиамин (рибо- (пири- н нК
кислота кислота кислота
) флавин) доксин)
Staphylococcu
+ - - - - - + -
s aureus
Bacillus
+ - - - + - - +
sublilis
Bacillus
+ + - + + - - -
vulgaris
Bacillus lactis
+ + - + + - - -
aerogenes
Bacillus
+ - - - - - - -
aerogenes
Bacillus
+ - - - - - - -
bifidus
Escherichia
+ + - + + - - +
coli
Lactobacillus
- + + - - - - -
arabinosus
Streptococcus
- + - - - - - -
lactis
Proteus
+ + + + + + + -
vulgaris
Clostridium
+ + + + + + + -
butylicum
Pseudomonas
- + + + + + - -
fluorescens
Azotobacter
+ + + + + + - -
chroococcum
  

Нормальная микрофлора выстилает слизистые оболочки человека. Микробные


клетки выделяют полисахариды (высокомолекулярные углеводы), слизистая
оболочка выделяет муцин (слизь, белковые вещества) и из этой смеси образуется
тонкая биоплёнка, которая покрывает сверху сотни и тысячи микроколоний клеток
нормальной флоры.
Эта плёнка толщиной не более  0,5 мм создаёт защищает микроорганизмы от 
химического и физического воздействия. Но если факторы самозащиты
микроорганизмов превышают компенсаторные возможности человеческого
организма, то могут возникнуть нарушения, с развитием патологических состояний
и неблагоприятными последствиями. К таким последствиям можно отнести
 — формирование устойчивых к антибиотикам штаммов микроорганизмов;
 — образование новых микробных сообществ и изменение физико-
химического состояния биотопов (кишечника, кожи и др.);
 — увеличение спектра микроорганизмов,  которые вовлекаются в
инфекционные процессы и расширение спектра патологических состояний
человека;
 — рост инфекций различной локализации; появление лиц с врожденной и
приобретенной сниженной устойчивостью к возбудителям инфекционных
болезней;
 — снижение эффективности химиотерапии и химиопрофилактики,
гормональных противозачаточных средств.

48. Понятие о внутрибольничных инфекциях. Основные возбудители


внутрибольничных инфекций и пути их распространения в стационаре.

Внутрибольничная (госпитальная, нозокомиальная) инфекция – это инфекция,


заражение которой происходит в больничных учреждениях; наслаиваясь на
основное заболевание, она утяжеляет клиническое течение болезни, затрудняет
диагностику и лечение, ухудшает прогноз и исход заболевания, нередко приводят к
смерти больного. ВБИ является одной из форм ятрогенных, т.е. связанных с
медицинскими вмешательствами, заболеваний. Возбудителями ВБИ могут быть
патогенные микробы, например при госпитализации инфекционного больного в
соматические отделения, неправильной или несовершенной изоляции больных в
инфекционных отделениях, заносе возбудителей в больницы посетителями во время
эпидемий. Однако в настоящее время ВБИ в основном встречаются в соматических
больницах, т.е. в неинфекционных клиниках и вызываются условно-патогенными
микробами (УПМ).

Понятие о клинической микробиологии как самостоятельном разделе медицинской


микробиологии (отличном от разделов ин- фекционной, санитарной
микробиологии), ее задачах и методах формируется только в последние
десятилетия. Выделение этого раздела обусловлено главным образом тем, что в
результате эволюции микробов, темпы которой резко усилились во второй половине
ХХ века, произошло резкое увеличение удельного веса и абсолютного количества
гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных УПМ. Большинство таких больных
госпитализируются в неинфекционные стационары. Биологические особенности
УПМ, широкое и часто нерациональное применение антибиотиков, рас- ширение
спектра и утяжеление оперативных вмешательств, ши-

рокое внедрение в практику здравоохранения диагностических и лечебных


процедур, ведущих к нарушению целостности покровов, и ряд других факторов
привели к возникновению в больничных стационарах ряда сложных проблем
практического и научного порядка, таких, как циркуляция множественно-
устойчивых и больничных вариантов бактерий, нарастание внутрибольничных,
хронических, смешанных, вторичных инфекций и сепсиса и др. Решение
микробиологических аспектов ВБИ и является задачей клинической микробиологии

ВБИ могут вызываться более чем сотней видов УПМ. Чаще всего в их
этиологии играют роль представители следующих родов: Staphylococcus,
Streptococcus, Peptostreptococcus, Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter,
Serratia, Proteus, Hafnia, Providencia, Pseudomonas, Haemophilus, Branhamella,
Acinetobacter, Moraxella, Alcaligenes, Flavobacterium, Vibrio, Propionibacterium,
Bacteroides, Fusobacterium, Bacillus, Mycobacterium, Eikenella, Mycoplasma,
Actinomyces, Candida, Cryptococcus, Pneumocysta.
Для возникновения ВБИ необходимо наличие следующих звеньев
инфекционного процесса:
 источник инфекции (хозяин, пациент, медработник);
 возбудитель (микроорганизм);
 факторы передачи
 восприимчивый организм
Источниками в большинстве случаев служат:
 медицинский персонал;
 носители скрытыми формами инфекции;
 больные с острой, стёртой или хронической формой инфекционных
заболеваний, включая раневую инфекцию;
Посетители стационаров очень редко бывают источниками ВБИ.
Факторами передачи чаще всего выступают пыль, вода, продукты питания,
оборудование и медицинские инструменты.
Ведущими путями заражения в условиях ЛПУ являются контактно-бытовой,
воздушно-капельный и воздушно-пылевой. Также возможен парентеральный путь
(характерно для гепатитов В, С, D и др.)
Механизмы передачи инфекции: аэрозольный, фекально-оральный,
контактный, гемоконтактный
На развитие и течение оппортунистических инфекций влияет несколько
факторов, зависящих от свойств микроба, состояния организма и условий их
взаимодействия. Все оппортунистические инфекции развиваются на фоне снижения
иммунного статуса организма, что наблюдается у онкологических больных, больных
хроническими инфекционными заболеваниями, у лиц, перенесших обширные
оперативные вмешательства, у лиц преклонного воз- раста, недоношенных
младенцев, больных сердечно-сосудистыми заболеваниями с регионарными
нарушениями кровообращения (ишемия и некрозы тканей), при ожирении и сахарном
диабете, у больных, получающих иммунодепрессивную лекарственную те- рапию
(кортикостероидные гормоны, цитостатики, ряд антибиотиков и другие препараты), и
т.п.
Так как УПМ являются преобладающими представителями нормальной
микрофлоры организма человека, то подавляющее большинство оппортунистических
инфекций носит эндогенный характер. При целом ряде патологических состояний,
ведущих к снижению иммунореактивности организма, УПМ нормофлоры
приобретают способность преодолевать тканевые барьеры, в норме для них
непреодолимые, и транслоцироваться во внутреннюю стерильную среду организма.
Попадание УПМ во внутреннюю среду организма влечет колонизацию ими
различных органов и систем организма, что клинически проявляется в виде гнойно-
септического процесса различной локализации и степени тяжести.
Для оппортунистических инфекций характерны следующие особенности.
•  Возбудители не имеют строго выраженного органного тропизма: один и тот
же вид может быть причиной развития различных нозологических форм (бронхитов, пневмоний, эмпием,
синуситов, отитов, менингитов, остеомиелитов, холециститов, пиелонефритов, конъюнктивитов, инфекции

травматических, послеоперационных и ожоговых ран и др.).

•  Полиэтиологичность нозологических форм, т.е. одна и та же нозологическая


форма может быть обусловлена любым УПМ.
•  Клиническая картина не зависит от вида возбудителя, а определяется
характером пораженного органа. Например, пиелонефрит, вызванный
псевдомонадами, кишечной палочкой, энтеробактером, энтерококком, клебсиеллами,
стафилококками, неразличим по клинической картине, хотя антибактериальная
терапия этих форм должна иметь особенности в зависимости от свойств возбудителя.
•  Часто протекают как смешанные инфекции.
•  Хроническое течение. У одних лиц болезнь с самого начала приобретает
медленное, торпидное, хроническое течение, у других острая фаза болезни переходит
в хроническую. Хронизации оппортунистических инфекций способствуют:
предшествующая заболеванию недостаточность иммунитета, усугубление или
вторичное развитие иммунодефицита в процессе болезни, пожилой или старческий
возраст; слабая иммуногенность антигенов УПМ, недостаточное количество
возбудителя, чтобы вызвать активный иммунный процесс, например, в случаях
поверхностной локализации патологического процесса или небольшого по
территории очага поражения, неправильная терапия и неадекватное состоянию
поведение больного.
•  Выраженная тенденция к генерализации, развитию септикопиемии.
•  Трудности лечения, что обусловлено широким распространением
множественно-устойчивых к антимикробным химиотерапевтическим препаратам
штаммов, гетерогенностью и изменчивостью популяций и биоценозов возбудителей,
недостаточной активностью факторов естественной резистентности и сниженной
способностью к развитию эффективного иммунного ответа на антигены
возбудителей.
•  Широкое распространение в стационарах, частая связь с оказанием
медицинской помощи, частые случаи эндогенной инфекции, множественность
источников инфекции, частая массивная контаминация объектов внешней среды
микробами, способность ряда микробов размножаться в объектах больничной среды,
избирательностью поражения населения (группы риска - иммунодефицитные
хозяева), низкая контагиозность больных и носителей, низкая восприимчивость
здоровых людей.
 Множественность механизмов, путей и факторов передачи.
•  Оппортунистические инфекции могут вызывать практически все УПМ.
Клинически они протекают в форме гнойновоспалительных процессов различной
локализации и степени тяжести. Клинически поставить этиологический диагноз
заболевания не представляется возможным, поэтому основное значение в постановке
такого диагноза приобретают методы лабораторной микробиологической
диагностики.
Основным методом микробиологической диагностики оппортунистических
инфекций является бактериологический.
При использовании этого метода следует учитывать:
•  в материале от больного, как правило, присутствует ассоциация микробов, в
которую входят как возбудители заболевания, так и заносные из других органов и
внешней среды виды, а также микробы, которые могут попасть в материал при его
заборе и доставке;
•  количественный и видовой состав микрофлоры варьирует у разных больных
и меняется в процессе болезни, особенно при использовании антибактериальных
препаратов.
Достоверность бактериологического исследования зависит: от правильного
забора материала от больного; применения эффективного набора дифференциально-
диагностических и селективных питательных сред; использования количественного
посева материала; этапности идентификации выделенных чистых культур (семейство, род, вид и в
необходимых случаях вариант); определения свойств, указывающих на патогенность культур и их принадлеж- ность к

госпитальным штаммам.

Обязательным должно быть определение антибиотикограммы, а также свойств


культур, необходимых для эпидемиологического анализа, - фаговара, серовара,
резистенсвара и др.
С целью определения смены возбудителей и изменения их свойств
микробиологический мониторинг следует проводить через каждые 5-7 дней.
Микроскопический метод позволяет выявлять в мазках патологического
материала бактерии только в случае их массивного содержания (105 КОЕ/мл и более)
и из-за близости морфологии бактерий позволяет только ориентировочно судить о
возбудителе, относя его к крупным таксонам (палочки, кокки, спирохеты,
грамположительные или грамотрицательные и т.п.). Результаты микроскопии могут
быть использованы при выборе питательных сред для дальнейшего выделения
возбудителя. При идентификации грибов и простейших возможности
микроскопического метода несколько шире. Введение в практику РИФ расширяет
возможности микроскопического метода, но и в этом случае он не может заменить
бактериологический метод, поскольку не позволяет определить чувствительность
возбудителя к химиотерапевтическим препаратам и ряд других необходимых для
практики свойств.
Серологический метод имеет вспомогательное значение. С его помощью не
удается установить спектр и уровень активности антимикробных препаратов по
отношению к возбудителю болезни и провести внутривидовое типирование.
Возможности серологического метода ограничивают выраженная мозаичность
антигенной структуры многих УПМ, наличие к ним антител у здоровых людей и
слабая выраженность иммунного ответа на антигены УПМ. Тем не менее при
затяжных и хронических формах болезни серологический метод иногда позволяет
установить этиологию болезни. Серологические реакции ставятся с парными
сыворотками больного и аутокультурой, результат оценивается по сероконверсии в 4
раза и более. На сегодняшний день слабо разработаны диагностические препараты, основанные на
иммунных реакциях (ИФА, иммунофлюоресцентные диагностикумы, моноклональные антитела) к УПМ.

Биологический метод обычно не используется из-за неспецифичности


клинической картины, вызываемой УПМ у лабораторных животных, и содержания в
патологическом материале микробных ассоциаций, которые при заражении
животных претерпевают изменения.
Аллергологический метод в связи с отсутствием сенсибилизации или ее малой
специфичностью не используется.

49. Основы эпидемиологии: сущность и определение понятий “эпидемический


процесс”, “эпидемия”,”эпизоотия”, “пандемия”, “карантинная инфекция”.
Эпидемиология - это наука, которая изучает объективные закономерности, которые
лежат в основе распространения и прекращения инфекционной болезни в
человеческом коллективе, а также изучает методы профилактики инфекционной
болезни. В основе лежит эпидемиологический процесс- это распространение
инфекционной болезни в человеческом коллективе, зависит от биологических
моментов (возбудителей) и от социальных факторов (плотность населения,
материальная обеспеченность и другие). Эпидемиологический процесс обусловлен 3
звеньями: источник заражения, механизм передачи, восприимчивость населения.
Источником заражения является больной человек либо животное. Также существует
такое понятие как бактерионоситель, то есть почти здоровый человек, но носящий в
себе возбудителя инфекции и при этом нет ни каких симптомов заболевания.
Наибольшую эпидемиологическую опасность представляют: бактерионосители,
больные со стертыми и атипичными формами заболевания.

Эпидемический процесс - это процесс возникновения и распространения


среди населения специфических инфекционных состояний от
бессимптомного носительства до манифестных заболеваний, вызванных
циркулирующим среди населения возбудителем.

Эпидемический процесс обусловлен непрерывностью взаимодействия трех


его элементов:

1) источника инфекции;
2) механизмов, путей и факторов передачи;
3) восприимчивости коллектива.

Отсутствие любого из этих звеньев приводит к прерыванию эпидемического


процесса. На развитие эпидемического процесса большое влияние оказывают
также социальные факторы окружающей среды.

1) Источник инфекцииили «источник возбудителя инфекции» означает


живой или абиотический объект, являющийся местом естественной
жизнедеятельности и размножения патогенных микробов, из которого
происходит заражение людей или животных. Источником инфекции могут
быть организмы человека и животного (больного или носителя), а также
абиотические объекты окружающей среды (вода, пища и др.). Инфекции, при
которых источником инфекции служит только человек,
называются антропонозными, а инфекции, при которых источником
являются больные животные, но может болеть и человек
- зоонозными.Кроме того, выделяют группу сапронозов, при которых
источником инфекции служат объекты окружающей среды. К сапронозам,
например, относятся легионеллезы, иерсиниозы.

2) Подмеханизмом передачи(табл. ) понимают способ перемещения


возбудителя инфекционных и инвазивных заболеваний из зараженного
организма в восприимчивый. Этот механизм включает
последовательную смену трех фаз (стадий):

1) выведение возбудителя из организма хозяина в окружающую среду;

2) пребывание возбудителя в объектах окружающей среды (биотических или


абиотических);

3) внедрение возбудителя в восприимчивый организм.

Различают фекалъно-оралъный, аэрогенный (респиратор-
ный), кровяной (трансмиссивный), контактный ивертикальный (от одного
поколения к другому, т.е. от матери плоду трансплацентарно) механизмы
передачи.

Факторы передачи- элементы внешней среды, обеспечивающие перенос


микробов из одного организма в другой. К ним относятся вода, воздух,
почва, пища, живые членистоногие, предметы окружающей обстановки.
Путь передачи- конкретные элементы внешней среды или их сочетание,
обеспечивающие попадание возбудителя из одного организма в другой при
определенных внешних условиях. Для фекально-орального механизма
передачи характерны алиментарный (пищевой), водный и контактный
(непрямой контакт) пути передачи; для аэрогенного - воздушно-капельный и
воздушно-пылевой; для кровяного - через укусы кровососущих
эктопаразитов, парентеральный и половой; для контактного - раневой и кон-
тактно-половой (прямой контакт); для вертикального - трансплацентарный
путь.

3) Следующим элементом эпидемического процесса


является восприимчивость людей в коллективе. Установлено, что если
иммунная «прослойка» в популяции составляет 95% и выше, то в данном
коллективе достигается состояние эпидемического благополучия, и
циркуляция возбудителя прекращается. Поэтому задачей по
предупреждению эпидемий является создание в коллективах иммунной
«прослойки» путем проведения массовой вакцинации против определенных
возбудителей.

Интенсивность эпидемического процесса выражается в показателях


заболеваемости и смертности на 10 000 или 100 000 населения, с указанием
названия болезни, территории и исторического отрезка времени.
Эпидемиологи различают 3 степени интенсивности эпидемического
процесса:

• спорадическая заболеваемость - обычный уровень заболеваемости данной


нозологической формой на данной территории в
данный исторический отрезок времени;

• эпидемия - уровень заболеваемости данной нозологической


формой на данной территории в конкретный отрезок времени
резко превышает уровень спорадической заболеваемости;

• пандемия - уровень заболеваемости данной нозологической


формой на данной территории в конкретный отрезок времени
резко превышает уровень обычных эпидемий. Как правило, такой
уровень заболеваемости трудно удержать в рамках определенного
географического региона, и инфекция обычно быстро распространяется,
захватывая новые и новые территории (например,
пандемии чумы, холеры, гриппа, ВИЧ-инфекции и др.).

Эпидемический процесс — непрерывное взаимодействие на видовом и


популяционном уровнях неоднородных по эволюционно-сопряженным признакам
отношения друг к другу возбудителя-паразита и организма человека в необходимых
и достаточных социальных и природных условиях, проявляющееся манифестными и
бессимптомными формами инфекции, распределяющимися среди населения по
территории, времени и группам риска заражения и (или) заболевания.
Эпидемия – это широкое распространение инфекции в популяции с охватом
больших территорий, характеризующееся массовостью заболеваний.
Пандемия – распространение инфекции практически на всю территорию
земного шара с очень высоким процентом случаев заболеваний.
Эндемичные заболевания (с природной очаговостью) – это заболевания,
для которых отмечены территориальные ареалы с повышенной заболеваемостью
данной инфекцией.
Карантинные болезни - условное название группы инфекционных
заболеваний, отличающихся высокой заразительностью (контагиозностью) и часто
заканчивающихся смертью заболевшего.
Карантин - комплекс ограничительных медико-санитарных и
административных мероприятий, направленных на предупреждение заноса и
распространения карантинных инфекционных болезней.
Эпизоотия -это одновременное прогрессирующее во времени и пространстве
в пределах определенного региона распространение инфекционной болезни среди
большого числа одного или многих видов сельскохозяйственных животных,
значительно превышающее обычно регистрируемый на данной территории уровень
заболеваемости.

Выделяются следующие виды эпизоотий


1.по масштабам распространения - частные, объектовые, местные и региональные;
2. по степени опасности - легкие, средней тяжести, тяжелые и чрезвычайно тяжелые;
3. по экономическому ущербу - незначительные, средние и большие.

50. Источники антропонозных и зоонозных инфекций. Факторы и пути


передачи возбудителей инфекционных заболеваний. Входные ворота
инфекции.

Деление инфекций в зависимости от источника, т. е. резервуара возбудителя,


достаточно условно, однако по этому признаку можно выделить несколько
групп:
1. сапронозные инфекции — заболевания, основным местом обитания и
размножения возбудителей которых являются объекты окружающей среды,
откуда и попадают в организм человека. К таким инфекциям можно отнести
заболевания, вызванные легионеллами, синегнойной палочкой и другими;
2. антропонозные инфекции — заболевания, при которых единственным
источником возбудителя является человек. К ним относятся менингококковая
инфекция, дизентерия, холера, дифтерия, сифилис, гепатит В, эпидемический
сыпной тиф, эпидемический возвратный тиф и другие;
3. зоонозные инфекции — заболевания, при которых единственным
источником возбудителя являются животные. К ним относят туляремию,
бруцеллез, бешенство;
4. зооантропонозные инфекции — заболевания, при которых источником
являются животное и больной человек (в том числе и трупы умерших). К ним
относятся чума, сибирская язва, туберкулез, риккетсиозы.
Для возникновения и развития инфекционного заболевания большое
значение имеют:
• инфицирующая доза — минимальное количество микробных клеток,
способных вызвать инфекционное заболевание;
• входные ворота инфекции — ткани организма, через которые
микроорганизм проникает в макроорганизм.
Входные ворота инфекции часто определяют локализацию возбудителя в
организме человека, а также патогенетические и клинические особенности
инфекционного заболевания.
Для одних микроорганизмов существуют строго определенные входные
ворота.
Вирус кори, гриппа - верхние дыхательные пути, энтеробактерии -В
желудочно-кишечный тракт.
Для других микроорганизмов входные ворота могут быть различны, и они
вызывают разные по своим клиническим проявлениям заболевания.
Стафилококки, стрептококки, протеи при попадании на слизистую верхних
дыхательных путей вызывают бронхиты, пневмонии, а при попадании на слизистую
оболочку уретры - гнойные уретриты.
С понятием "входные ворота инфекции" очень тесно связано понятие о путях
передачи возбудителей инфекционных болезней.
Входные ворота инфекции могут определять клиническую форму заболевания
— один и тот же микроорганизм-возбудитель, попадая в макроорганизм различными
путями, вызывает разные клинические формы заболевания, как это имеет место при
сибирской язве:
• кожная форма — вызывается при проникновении микроорганизмов в
организм через кожу;
• легочная — через слизистые оболочки верхних дыхательных путей;
• кишечная — желудочно-кишечного тракта.
С другой стороны, от пути передачи зависит, какую именно но зологическую
форму заболевания может вызвать микроорганизм-возбудитель:
• при попадании воздушно-капельным путем стрептококки вызывают ангину;
• контактно-бытовым — стрептодермию (гнойно-воспалительное заболевание
кожных покровов).
Выделение того или иного пути передачи инфекционных заболеваний
достаточно условно, но существуют следующие:
• воздушно-капельный — характерен для ветряной оспы, туберкулеза,
коклюша, гриппа;
• фекально-оральный, в котором иногда выделяют: . водный — характерный
для холеры;
. алиментарный — характерный для дизентерии;
• трансмиссивный путь — связан с передачей возбудителя через укусы
кровососущих насекомых (клещевой энцефалит, блошиный и вшивый сыпной тиф);
• контактно-бытовой, который, в свою очередь, делится:
• на прямой контакт — от источника к хозяину — в том числе заболевания,
передающиеся половым путем, включая ВИЧ-инфекцию;
• косвенный контакт - через промежуточный объект — это могут быть руки
(при раневой инфекции, кишечных инфекциях) или различные предметы, в том
числе медицинского назначения (при гнойно-воспалительных заболеваниях и
парентеральных гепатитах);
• в последнее время отдельным считается искусственный (арти-фициалъный)
путь распространения инфекционных заболеваний, связанный в первую очередь с
врачебными манипуляциями. Он может моделировать:
• трансмиссивный путь передачи — парентеральные и особенно
внутривенные инъекции;
• контактно-бытовой — различного рода лабораторные обследования с
использованием приборов медицинского назначения — бронхоскопов, цистоскопов
и т. д.
3. В соответствии с преобладанием того или иного пути передачи — по
эпидемиологическому принципу — все инфекиионные болезни делятся:
• на кишечные;
• воздушно-капельные, или респираторные;
• трансмиссивные;
• инфекции кожных покровов.
Близка к этой классификации клиническая классификация инфекционных
заболеваний в зависимости от поражаемой системы органов.
Выделяют:
• кишечные инфекции;
• респираторные инфекции;
• менингоэнцефалиты;
• гепатиты;
• инфекции мочеполовой сферы (урогенитальные);
• инфекции кожных покровов.

51. Учение об инфекции. Определение и сущность понятий “инфекция”,


“инфекционный процесс”, “смешанная инфекция”, “вторичная инфекция”,
“аутоинфекция”, ”реинфекция”, “суперинфекция”, “рецидив”,
“бактерионосительство”, “бактериемия”, “токсинемия”, “сепсис”.

Инфекция – это совокупность биологических реакций, которыми


макроорганизм отвечает на внедрение возбудителя. Диапазон проявлений инфекций
может быть различным.
Крайними формами проявления инфекций являются:
1) бактерионосительство, персистенция, живая вакцинация;
2) инфекционная болезнь; имеются клинические проявления инфекции, эти
реакции могут привести к летальному исходу.
Инфекционный процесс – ответная реакция коллектива популяции на
внедрение и циркуляцию в ней микробных агентов.
Инфекционные болезни имеют ряд характерных особенностей, отличающих
их от других болезней:
1) инфекционные болезни имеют своего возбудителя – микроорганизм;
2) инфекционные болезни контагиозны, т. е. способны передаваться от
больного к здоровому;
3) инфекционные болезни оставляют после себя более или менее выраженную
невосприимчивость или повышенную чувствительность к данному заболеванию;
4) для инфекционных болезней характерен ряд общих признаков: лихорадка,
симптомы общей интоксикации, вялость, адинамия;
5) инфекционные болезни имеют четко выраженную стадийность, этапность.
СМЕШАННАЯ ИНФЕКЦИЯ - инфекция, возникающая вследствие
внедрения в организм микробов двух или неск. видов, напр. туберкулёза и
бруцеллёза .
Вторичная Инфекция - инфекция др. видом микроорганизма, к-рая развилась
на фоне уже имеющегося инфекц. заболевания. Проявляется в ухудшении состояния
б-ного и появлении необычных локализации и признаков поражения.
Аутоинфекция - (греч. autos сам + инфекция ; синоним: аутогенная инфекция,
эндогенная инфекция) — болезни, вызванные собственной условно-патогенной
микробной флорой, которая приобретает болезнетворные свойства при
неблагоприятных для организма условиях. Возбудителями А. являются различные
микроорганизмы, входящие в состав микрофлоры кожи и слизистых оболочек
дыхательных путей, пищеварительного тракта, половых органов, конъюнктивы:
стафилококки, стрептококки, пневмококки, кишечные палочки, протей, синегнойные
палочки, клебсиеллы, некоторые грибки и др. Возникновение аутоинфекционных
процессов связано с ослаблением защитных иммунобиологических свойств
организма под влиянием таких факторов, как переутомление, переохлаждение,
гиповитаминозы, инфекционные болезни, сахарный диабет, болезни крови,
злокачественные опухоли, воздействие ионизирующего излучения,
иммунодепрессивных препаратов
Реинфекция - (reinfectio; ре- + инфекция , син. инфекция повторная) —
повторное заражение переболевшего какой-либо инфекционной болезнью
возбудителями той же болезни, приведшее к развитию инфекционного процесса.
Суперинфекция - повторное заражение новым инфекционным заболеванием в
условиях незавершившегося инфекционного заболевания, вызванное другим
микроорганизмом, обычно устойчивым к лекарственному веществу, которое
применялось для лечения первичной инфекции. Возбудителем новой инфекции
может быть один из тех микроорганизмов, которые в норме являются безвредными
обитателями человеческого организма, но становятся патогенными при удалении
других микроорганизмов в результате приема лекарственных веществ; или же он
может являться устойчивой разновидностью возбудителя первичной инфекции.
Рецидив — повторение, возврат клинических проявлений заболевания после
их временного ослабления или исчезновения
Бактериемия - (bacteriaemia; бактерия + греч. haima кровь) — наличие
бактерий в циркулирующей крови; часто возникает при инфекционных болезнях в
результате проникновения возбудителей в кровь через естественные барьеры
макроорганизма. Бактериемия лучевая (b. radialis) — неспецифическая Б. при
радиационном поражении, обусловленная повышенной проницаемостью
биологических барьеров и угнетением иммунологической резистентности
организма. Бактериемия неспецифическая (b. nonspecifica) — Б. за счет условно-
патогенных микроорганизмов — представителей нормальной микрофлоры
кишечника, кожи и слизистых оболочек; возникает в случае ослабления
резистентности организма, например при лейкозах, радиационных и ожоговых
поражениях и т.п.
Сепсис – Тяжелое инфекционное заболевание организма, вызываемое
разнообразными возбудителями и их токсинами. Характеризуется своеобразной
реакцией организма с однотипной клинической картиной, несмотря на различие
вызвавших его возбудителей.
Се́псис (др.-греч. σῆψις — гниение) — тяжёлое состояние, вызываемое
попаданием в кровь и ткани возбудителей инфекции человека и животных,
например, гноеродных микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности —
токсинов. Характеризуется воспалительным процессом не в каком-либо отдельном
органе, а во всем организме.
Бактерионосительство — это носительство человеком возбудителей заразной
болезни, нередко при отсутствии признаков заболевания. Длительное носительство
часто поддерживается сопутствующими воспалительными заболеваниями (ангины,
колиты, холециститы и др.), а также гельминтозами.
Выделяют три категории носителей: здоровые люди, реконвалесценты и иммунные.
Здоровые носители (носительство без предшествующего заболевания) выделяют
обычно возбудителей в течение короткого времени.
К числу здоровых носителей относят и людей, выделяющих возбудителя в
последние дни инкубационного периода.
Носители- реконвалесценты выделяют возбудителя некоторое время после
клинического выздоровления. Чаще такое носительство кратковременное. После
некоторых инфекционных болезней носительство переболевших становится
хроническим и продолжается 3—4 мес. (дифтерия) и даже 10 лет и более (брюшной
тиф).
Иммунные носители — лица, не заболевшие вследствие перенесенного ранее
заболевания или в результате эффективной иммунизации.
Если в патогенезе инфекционного заболевания ведущим звеном служит
интоксикация, вызванная циркуляцией экзо- или эндотоксинов возбудителя в крови,
то такие состояния определяют термином токсинемия.
Токсинемия -состояние, при к-ром бактер. экзотоксин или иной токсин циркулирует
в кровеносной системе и доставляется ею к клеткам-мишеням. Характерна для
таких заболеваний, как дифтерия, столбняк, газовая анаэробная инфекция, ботулизм
и др., вследствие чего эти болезни называют токсинемическими. В отличие от
токсемии при Т. возбудитель в крови, как правило, отсутствует, нейтрализация
токсина антитоксической с-кой обычно ведет к выздоровлению. Антибактер. с-ки
при этих заболеваниях неэффективны. Выявить экзотоксин в крови можно РП со
стандартными антисыворотками или постановкой РН на животных.

52. Патогенетические факторы микробов. Патогенетическая роль


капсулообразования у бактерий, адгезивные свойства и значение их в
вирулентности бактерий.
СМОТРИ 57 ВОПРОС

К основным факторам патогенности (вирулентности) относят


способность микроорганизма к колонизации, их устойчивость к разным
микробицидным факторам организма, свойства инвазивности и токсигенности, а
также способность к длительному персистированию.
1-Размножению бактерий в первичном очаге инфицирования предшествует
адгезия [от лат. ad-haesio, прикрепляться к чему-либо], то есть закрепление
бактерий на поверхности клетки, что, собственно, и служит началом инфекционного
процесса. 2-Прикрепление к поверхности клеток (например, к эпителию слизистых
оболочек) обеспечивают адгезины, или факторы колонизации — различные
микробные продукты — молекулы адгезии (белки, ЛПС, липотейхоевые кислоты).
Молекулы адгезии могут располагаться непосредственно 3-на поверхности
бактериальной клетки либо входить в состав микроворсинок или капсул.
Взаимодействие инфекционного агента с эпителиальными клетками происходит в
результате нескольких типов связей, различных по природе и специфичности.
Выделяют связи, основанные на
-взаимодействии электростатических сил, микроворсинки грамотрицательных
бактерий снижают заряд бактерий и уменьшают электро¬статические силы
отталкивания.
-обусловленные гидрофобными свойствами поверхности, Бескапсульные
бактерии обладают высокой гидрофобностью, усиливающей адгезивность;
гидрофобные участки обладают сродством к лигандам на поверхности
эукариотических клеток, что и приводит к прочности связи.
-лиганд-рецепторные взаимодействия. На поверхности бактерий имеются
молекулы, способные к стереоспецифичному связыванию с комплементарными
молекулами на мембранах эукариотических клеток (например, гемагглютинины
или тейхоевые кислоты).

Другие механизмы колонизации. Некоторые бактерии способны «заранее


подготавливать» место для дальнейшего размножения; например, нейраминидаза
облегчает проникновение холерного вибриона через слой слизи и контакт с
сиалосодержащими рецепторами эпителия кишечника. Микроорганизмы также
способны сорбироваться на бактериях, уже колонизировавших поверхность
слизистых оболочек, либо связывать белки (например, фибронектин), рецепторы к
которому имеются на многих клетках макроорганизма. У капсулированных бак-
терий в прикреплении активно участвуют полисахариды капсулы.
Для успешной колонизации очага первичного инфицирования бактерии
должны выдержать I действие многочисленных и разнообразных микробицидных
факторов хозяина. Для защиты от них микроорганизмы активно используют ряд
структур (например, капсулы) и синтезируемых I веществ (например, ферменты).
Капсула (или её менее выраженный аналог — слизистый слой) ингибирует
начальные этапы защитных реакций — распознавание и поглощение.
 Капсулы «экранируют» бактериальные структуры, активирующие систему
комплемента, а также структуры, распознаваемые иммунокомпетентными
клетками. Например, слой капсульного вещества защищает тейхоевые кислоты
стафилококков от связывания опсонинами.
 Гидрофильность капсул затрудняет их поглощение фагоцитами, а само
капсульное вещество защищает бактерию от действия лизосомальных ферментов
и токсичных оксидантов, выделяемых фагоцитирующими клетками.
 Большое значение имеет лёгкая отделяемость капсул или слизистого слоя от
поверхности бактерий. В частности, при поглощении капсулированных бактерий
(например, синегнойной палочки), последние легко «снимают с себя» капсулы и
избегают прямого контакта с фагоцитом.

53. Стадии патогенеза инфекционного заболевания. Способы распространения


микробов в организме человека. Периоды инфекционного процесса:
инкубационный, продромальный, клинических проявлений,
реконвалесценции.
Инфекционный процесс — это одна из наиболее динамичных форм взаимо-
действия между микробами и макроорганизмом, сложившаяся в ходе эволюции.
Процесс протекает с постоянной сменой причинно-следственных взаимоотношений.
Условно его можно разделить на несколько стадий.
Первая стадия — проникновение микробов в макроорганизм. Пусковым мо-
ментом инфекционного процесса является внедрение и адаптация микробов (от
позднелат. adaptatio— приспособление) в месте входных ворот инфекции —
заражение (инфицирование), а также адгезия (прилипание) микробов к клеткам
макроорганизма. Входные ворота — это ткани и органы, через которые микробы
попадают в организм. В большинстве случаев микробы проникают в макроорганизм
через поврежденные кожные покровы и проницаемые для микробов
неповрежденные слизистые оболочки.
Второй стадией является колонизация (от лат. поселение) — горизонтальное
заселение кожных покровов и слизистых оболочек в месте входных ворот
инфекции. При инфекционном процессе распространение микробов происходит не
только горизонтально, по поверхности клеток, но и в глубину клеток и тканей
макроорганизма. Способность микробов проникать внутрь клеток макроорганизма
называется пенетрацией. При этом происходит размножение микробов и
образование новых поколений возбудителя при наличии благоприятных условий, а
также высвобождение продуктов метаболизма микробов, их ферментов и токсинов
и, кроме того, образование токсических продуктов распада клеток макроорганизма,
которые оказывают местное или отдаленное повреждающее воздействие на ткани и
органы.
Третья стадия — диссеминация (от лат. disseminare — рассеивать,
распространять), т. е. распространение микробов за пределы первичного очага
внедрения и колонизации микробов лимфо-гематогенным путем, бронхогенно или
периневрально, по ходу нервных стволов, что ведет к генерализации инфекционного
процесса (генерализация — это переход от общего к частному, распространение по
всему макроорганизму).
Четвертая стадия — мобилизация защитных факторов макроорганизма. В
ответ на проникновение микробов и их болезнетворное воздействие макроорганизм
мобилизует все присущие ему первоначально неспецифические, а затем
специфические факторы защиты, действие которых направлено на нейтрализацию
как самих микробов, так и их токсинов и на восстановление нарушенного гомеостаза
в макроорганизме.
Пятая стадия — окончание и исходы инфекционного процесса. В большинстве
случаев наступает санация макроорганизма (от англ. sanative— целебный,
оздоровляющий), т.е. полное освобождение макроорганизма от микроба и
приобретение им нового качества — формирование иммунитета. В ряде случаев
инфекционный процесс заканчивается летальным исходом. В тех случаях, когда
между микробом и макроорганизмом устанавливается равновесие, происходит
формирование микробоносительства.
Периоды инфекционного процесса
Инкубационный период [от лат. incubatio, лежать, спать где-либо]. Обычно
между проникновением инфекционного агента в организм и проявлением
клинических признаков существует определённый для каждой болезни промежуток
времени — инкубационный период, характерный только для экзогенных
инфекций. В этот период возбудитель размножается, происходит накопление как
возбудителя, так и выделяемых им токсинов до определённой пороговой величины,
за которой организм начинает отвечать клинически выраженными реакциями.
Продолжительность инкубационного периода может варьировать от часов и суток
до нескольких лет.
Продромальный период [от греч. prodromes, бегущий впереди,
предшествующий). Как правило, первоначальные клинические проявления не несут
каких-либо патогномоничных [от греч. pathos, болезнь, + gnomon, показатель, знак]
для конкретной инфекции признаков. Обычны слабость, головная боль, чувство
разбитости. Этот этап инфекционной болезни называется продромальный период,
или «стадия предвестников». Его продолжительность не превышает 24-48 ч.
Период развития болезни. На этой фазе и проявляются черты
индивидуальности болезни либо общие для многих инфекционных процессов
признаки — лихорадка, воспалительные изменения и др. В клинически выраженной
фазе можно выделить стадии нарастания симптомов (stadium incrementum), расцвета
болезни (stadium acme) и угасания проявлений (stadium decrementum).
Реконвалесценция [от лат. re-, повторность действия, + convalescentia,
выздоровление]. Период выздоровления, или реконвалесценции как конечный
период инфекционной болезни может быть быстрым (кризис) или медленным
(лизис), а также характеризоваться переходом в хроническое состояние. В
благоприятных случаях клинические проявления обычно исчезают быстрее, чем
наступает нормализация морфологических нарушений органов и тканей и полное
удаление возбудителя из организма. Выздоровление может быть полным либо
сопровождаться развитием осложнений (например, со стороны ЦНС, костно-
мышечного аппарата или сердечно-сосудистой системы). Период окончательного
удаления инфекционного агента может затягиваться и для некоторых инфекций
(например, брюшного тифа) может исчисляться неделями.

54. Определение и сущность понятий “патогенность” и “вирулентность”


микроба. Единицы измерения вирулентности.

Патогенность и вирулентность
Оба понятия близки, но не идентичны. Патогенность — не абсолютная, а
относительная величина, поэтому для определения степени патогенности
возбудителя применяют термин «вирулентность».
Патогенность [от греч. pathos, болезнь, + genos, рождение] определяет
специфичность патологических процессов, вызываемых конкретным возбудителем,
что проявляется развитием соответствующего типа инфекционного заболевания
(кишечного, дыхательного и т.д.). Генотип патогена фенотипически проявляется его
вирулентными и токсигенными свойствами. Так, условно-патогенные
микроорганизмы способны вызывать заболевания лишь при значительных
нарушениях функциональных свойств местных и общих защитных факторов.
Характерными свойствами патогенных микроорганизмов являются специфичность
(способность вызывать определённую инфекционную болезнь после проникновения
в организм) и органотропность (способность предпочтительно поражать
определённые органы или ткани).
Вирулентность [от лат. virulentus, ядовитый] отражает степень
патогенности различных изолятов или штаммов конкретного патогенного вида.
Критерии вирулентности. К критериям, определяющим вирулентность
микроорганизмов, относят инфекционность, способность к колонизации,
инвазивность, токсигенность и способность к длительному персистированию. С
известным допущением столь внушительный набор факторов, определяющих
вирулентность, можно расценивать как «ответ» инфекционного агента на
многообразие защитных механизмов организма хозяина.
Инфекционность — собственно способность заражать макроорганизм.
Способность к колонизации — свойство заселять очаги первичного
инфицирования.
Инвазивность — способность проникать в ткани, лежащие за пределами
входных ворот инфекции, и размножаться в них.
Токсигенность — способность образовывать ядовитые вещества, вызывающие
болезнетворное действие.
Способность к персистированию — свойство длительно циркулировать либо
сохраняться в определённом очаге, что обусловлено способностью долгое время
противодействовать влиянию защитных факторов макроорганизма.
Летальная доза. За единицу измерения вирулентности принята летальная
доза (DL. от лат. dosis letalis) наименьшее количество патогенных
микроорганизмов или токсина, способное вызвать гибель определённого количества
лабораторных животных. На практике примет ют несколько производных от
величин DL.
DCL (dosis certe letalis) — количество микробов или токсина, вызывающее
гибель 100% лабораторных животных.
LD50 — количество патогенных микроорганизмов, способное вызывать гибель
50% экспериментально заражённых лабораторных животных. Применяют также
величины LD?0, LD75, LD90 и т.д.
Инфицирующая доза (ID [от англ. infectious dose]) — минимальное
количество патогенны микроорганизмов, способное вызвать развитие заболевания у
определённого количества лабораторных животных. По аналогии с летальным
эффектом определяют ID100, ID50 и т.д.

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ПАТОГЕННОСТИ И ВИРУЛЕНТНОСТИ


Все вышеназванные факторы и параметры патогенности и вирулентности
подвержены фея типическим и генотипическим изменениям. Причины таких
изменений — эффекты различных физических и химических факторов. В первую
очередь патогенные свойства бактерий находятся под контролем хромосомных и
плазмидных генов. Способность к образованию экзотоксинов детерминируют
внехромосомные tox-гены конвертирующих бактериофагов и плазмид (например,
синтез дифтерийного гистотоксина, ботулинического нейротоксина и др.).
Образование эндотоксинов кодируют хромосомные гены.
Генотипическое снижение вирулентности возможно при мутациях,
рекомбинациях, утере внехромосомных наследственных факторов (плазмид,
транспозонов, вставочных (IS-) последовательностей).
Фенотипическое снижение вирулентности возможно при попадании
возбудителя в неблагоприятные условия. In vitro оно возникает в результате
неблагоприятного режима культивирования и состава питательной среды,
воздействия селективных неблагоприятных факторов либо обработки популяции
гомологичной антисывороткой. In vivo снижение вирулентности возникает
вследствие селекции маловирулентных штаммов в гетерогенной популяции возбу-
дителя под действием защитных факторов, антимикробных препаратов и др.
Выжившая популяция приобретает устойчивость к этим воздействиям, но «платит»
своими патогенными свойствами (например, за счёт утери плазмидных или
хромосомных генов патогенности). Со времён Пастёра искусственное снижение
вирулентности — аттенуация [от лат. atteiu ослаблять] — положено в основу
производства ряда вакцин.
Таким образом, патогенность - качественный признак болезнетворного
микроба, а вирулентность — количественное проявление патогенности.

55. Патогенетические факторы микробов. Виды и характеристика токсинов.


СМОТРИ 57 ВОПРОС

СВ-ВА ЭКЗОТОКСИН ЭНДОТОКСИН


состав Пептиды(белок) – липополисахарид
продуцирует живая клетка
Услвоия +формалин  анатоксин +трихлоруксусная кислота
выделения из разрушение микробной
микробной кл клетки,дальнейшая очистка
Отношение к t- термолабильны термостабильны
ре
Степень высокотоксичны слаботоксичны
токсичности
Избирательность Органо- и цитотропны Не обладают
действия избирательностью действия
Бактерии- Гр+, Гр- Гр-
продуценты
Тактика АБ АБ с б-цидным действием АЮ с б-статическим
терапии действием

НАЗВАНИЕ ПРОБА ЛАБОРАТОРНОГО ВИДИМЫЙ РЕЗУЛЬТАТ


ФРАКЦИИ ВЫЯВЛЕНИЯ
эндотоксина
ГЕМОЛИЗИНЫ Посев на кровяной агарНаличие зон просветления,
гемолиза
ЛЕЙКОЦИДИН Биопроба с заражением Наличие разрушенных
животных. лейкоцитов
Микроскопирование мазков
крови
ЭНТЕРОТОКСИН Пероральное заражение лаб. Развитие клиники
Животных(наблюдение в
клинике)
НЕЙРОТОКСИН Заражение Развитие клиники
лаб.животного(наблюдение в
клинике)
НЕКРОТОКСИН Дермо-некротическая проба Наличие сероватого
на животных(наблюдение в налета – отмирание клеток
клинике)

ЛЕТАЛЬНЫЙ Заражение Токсический эффект, при


ТОКСИН лаб.животных(наблюдение в больших дозах –
клинике) летальный исход

56. Патогенетические факторы микробов. Виды и характеристика


бактериальных ферментов агрессии.

СМОТРИ 57 ВОПРОС
ферменты агрессии – факторы вирулентности патогенных бактерий:

- гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту(посев в пробирку с


субстратом, содержащим гиалуроновую кислоту, после внесения сгустка
уксусной кислоты не должно быть сгустка)
- дезоксирибонуклеаза – расщепляет ДНК клеток;

- фибринолизин – расщепляет коллаген(посев на сгусток крови, появление


лизиса)

- плазмокоагулаза – свертывает плазму крови(посев в цитратную плазму, наличие


коагуляции)

- нейраминидаза – расщепляет нейраминовую кислоту;

- лецитовителлаза – расщепляет лецитин (посев на желточную среду, появление


участков помутнения)

-антифагин – токсическое действие на фагоциты

57. Патогенетические факторы микробов. Способы “экранирования”


патогенных микробов в организме. Факторы персистенции микроорганизмов.

Патогенетические факторы микробов


Классификация факторов патогенности по назначению и механизму действия
включает патогенетически значимые продуктыбактерийной клетки, определяющие
этапность развития инфекционного процесса и его исход.

Эти факторы объединяют в 4 группы:


 колонизации,
 инвазии,
 токсигенности
 персистенции.

Факторы адгезии– фимбрии и пити,

Факторы проникновения в макроорганизм –гиалуронидаза, нейраминидаза.

Факторы распространения в макроорганизме –фибринолизин, коллагеназа,


эластаза.

Факторы повреждения в макроорганизме –гемолизин, лейкоцидин,


энтеротоксины, нейротоксины, летальный токсин, эритрогенин, эксфолиатин,
лецитиназа, гепариназа, ДНКаза.

Факторы «экранизации» - АГ-мимикрия, капсулообразование, образованиеL-


форм, плазмокоагулаза, формирование рецепторов для инактивации антимикробных
факторов, внутриклеточное паразитирование.
Персистенция - длительное переживание возбудителя в организме
. Факторы колонизации патогена
Колонизация - расселение микроорганизмов в определенном биотопе хозяина.
Этот этап инфицирования организма начинается садгезии -прикрепления возбудителя
к клеткам организма у входных ворот инфекции. За прикрепление микроба отвечают
специальные структуры - адгезины. У грамотрицательных бактерий в этот процесс
включаются пили (ворсинки), белки наружной мембраны, а у грамположительных
микроорганизмов - тейхоевые кислоты, поверхностные белки. Адгезия специфична у
каждого возбудителя с учетом его тропности к тканям, клеткам хозяина, где и
осуществляется рецепторлигандное прикрепление возбудителя. Последующее
закрепление возбудителя на эукариотических клетках организма вызывает
расселение микроорганизмов в инфицированном биотопе хозяина. Этому
способствуют участие бактериальных протеаз, блокирующих секреторную защиту
организма IgA, продукция бактериоцинов, антиоксидантов, продукция сидерофоров,
конкурирующих с лактоферрином за ионы Fe. Таким образом, адгезия и
последующая колонизация - начальные (ранние) стадии патогенеза инфекционного
процесса.
Факторы инвазии микроорганизмов
Инвазия - проникновение возбудителя внутрь клеток организма (пенетрация),
преодоление естественных барьеров организма (кожа, слизистые оболочки,
лимфатическая система и др.). Этим процессом управляют инвазины - молекулы
бактерий, способствующие проникновению патогена в клетку. В этот период
усиливается действие токсичных продуктов - уреаза осуществляет гидролиз
мочевины с образованием в организме аммиака, токсичных биогенных аминов.
Микроорганизмы продуцируют гемолизин, разрушающий эритроциты, лейкоцидин,
разрушающий лейкоциты, спридинг-факторы - ферменты агрессии, способствующие
генерализации инфекции за счет распространения возбудителя в организме.
Включаются в работу такие ферменты
агрессии, как лецитовителлаза, расщепляющая липопротеид мембран клеток
хозяина, фибринолизин,устраняющий сгусток фибрина для дальнейшего
распространения микроба по организму; гиалуронидаза, расщепляющая
гиалуроновую кислоту - вещество соединительной ткани; нейраминидаза - фермент
распространения патогена, IgA-протеаза, обеспечивающая устойчивость возбудителя
к перевариванию фагоцитами и действию антител и др. Процесс инвазии у некоторых
грамотрицательных бактерий обеспечивается III типом секреторной системы, которая
отвечает за секрецию факторов инвазии, в частности, у сальмонелл и шигелл,
молекул сигнальной трансдукции энтеропатогенной кишечной палочки. В процессе
инвазии в эпителиальные клетки возбудитель (S. Typhimurium) вступает в интимные
отношения с клетками и использует физиологические механизмы обеспечения их
жизнедеятельности для обслуживания собственных нужд, вызывая массивную
реаранжировку цитоскелета клетки хозяина и активацию вторичных мессенжеров -
транзитное повышение уровня инозитолтрифосфата и выброс Ca2+.

В защите от фагоцитоза принимают участие как поверхностные структуры


бактериальной клетки, так и продуцирумые ею вещества. Антифагоцитарной
активностью обладают капсулы (S. pneumoniae, N. meningitidis), поверхностные
белки: А белок у S. aureus, M-протеин у S. pyogenes. Некоторые бактерии, например
возбудитель коклюша, продуцируют внеклеточную аденилатциклазу, ингибирующую
хемотаксис, таким образом позволяя бактерии избежать захвата фагоцитами.
Ферменты супероксиддисмутаза и каталаза инактивируют высокореактивные
кислородные радикалы при фагоцитозе (Y. pestis, L. pneumophila, S. Typhi).Отмечено
участие секреторной системы III типа у некоторых бактерий в реорганизации
цитоскелета фагоцита, предотвращающее образование фаголизосомы.
. Факторы токсигенности бактерий
Токсигенность - продукция бактериями токсичных веществ, повреждающих клетки
и ткани организма хозяина.
Наличие токсина у бактерий является патогенетически значимым в ходе развития
инфекционного процесса. Токсичный компонент присутствует практически при
любой инфекции и проявляет свое действие, хотя и в разной степени.
Токсины, секретируемые возбудителем в среду, обнаруживаются в фазе роста и
накапливаются в цитоплазме. Это белки - экзотоксины. Эндотоксины входят в
состав клеточной стенки и высвобождаются лишь при гибели микробной клетки.
К эндотоксинам относят ЛПС клеточной стенки грамотрицательных бактерий,
пептидогликан, тейхоевые и липотейхоевые кислоты, гликолипиды микобактерий.
Хорошо изучены эндотоксины энтеробактерий (эшерихии, шигеллы, сальмонеллы,
бруцеллы). Некоторые бактерии одновременно образуют как экзо-, так и
эндотоксины (холерный вибрион, некоторые патогенные кишечные палочки и др.).

 Экзотоксины секретируются живой бактериальной клеткой, являются


белками, полностью инактивируются под действием высокой температуры (90-100
°С). Они обезвреживаются формалином в концентрации 0,3-0,4% при 37 °С в течение
3-4 нед, при этом сохраняют свою антигенную специфичность и иммуногенность, т.е.
переходят ввакцину-анатоксин(столбнячный, дифтерийный, ботулиновый,
стафилококковый и др.).
Экзотоксины обладают специфичностью действия на клетки и ткани организма,
определяя клиническую картину заболевания.
Специфичность экзотоксина определяется механизмом его действия на
определенные мишени. Способность микробов к продукции экзотоксинов
обусловлена в основном конвертирующими бактериофагами.
 Информация об эндотоксинах заложена в хромосомных генах бактерий, как и в
любом другом клеточном компоненте.
Эндотоксины, в отличие от экзотоксинов, обладают меньшей специфичностью
действия. Эндотоксины всех грамотрицательных бактерий (E. coli, S. Typhi, N.
meningitidis, Brucella abortus и др.) угнетают фагоцитоз, вызывают падение сердечной
деятельности, гипотонию, повышение температуры, гипогликемию. Большое
количество поступившего в кровь эндотоксина приводит к токсикосептическому
шоку.
Как и вирулентность, сила действия токсинов измеряется величиной летальных доз
DLM, LD50, DCL, определяемая на животных.
Токсины, повреждающие ЦПМ клеток организма, способствуют лизису клеток:
эритроцитов (гемолизины стафилококков, стрептококков и др.), лейкоцитов
(лейкоцидин стафилококков).
Персистенция может проявляться в форме:
микробоносительства (бактерио-, паразите-, вирусо- или миконосительства),
представляющего собой инфекционный процесс насубклиническом уровне, при
котором микроб короткий или длительный промежутоквремени, а в ряде случаев
пожизненносохраняется
в макроорганизме, не вызывая клинических проявлений, и выделяется в
окружающую среду. Микробоносительство сопровождается иммунологическими
изменениями в макроорганизме. Морфологические и функциональные изменения
в макроорганизме слабо выражены. Исключение составляет здоровое
микробоносительство, при котором морфофункциональных и иммунологических
изменений нет. Носительство может формироваться как в результате
перенесенного заболевания (брюшной тиф, сальмонеллез, дифтерия), так и
являться одной из стадий инфекционного процесса, предшествуя его
генерализации (менингококковая инфекция);
латентной инфекции (син. дремлющая инфекция), являющейся своеобразной
формой микробоносительства, при которой микроб длительно находится в
макроорганизме, но не выделяется в окружающую среду. Как правило, латентная
инфекция является закономерной стадией инфекционного процесса при
заболеваниях, склонных к хроническому течению (бруцеллез, сифилис,
герпетическая инфекция, токсоплазмоз);
хронической инфекции, которая длится свыше 6 месяцев и может протекать
в виде непрерывной или рецидивирующей формы, характеризующейся сменой
периодов ремиссий и обострений, при которых микробы выделяются в
окружающую среду в течение многих месяцев и даже лет. К первично-
хроническим заболеваниям относятся бруцеллез, туберкулез, лепра, малярия и
сифилис.
В вирусологии в отдельную группу выделены медленные вирусные
инфекции.

58. Учение об антигенах. Определение и сущность понятий “антиген”,


“антигенная детерминанта”, “гаптен”. Основные свойства антигенных
молекул.

Аг — вещества различного происхождения, несущие признаки генетической


чужеродности и вызывающие развитие иммунных реакций (гуморальных,
клеточных, состояние иммунной толерантности, индуцирование иммунной памяти).
Свойства Аг определяются комплексом признаков: иммуногенность, антигенность,
специфичность, чужеродность.
Иммуногенность — способность индуцировать иммунный ответ.
Антигенность — способность Аг избирательно реагировать со специфичными к
нему AT или Аг-распознающими рецепторами лимфоцитов.
С понятием «антигенность» связан другой термин «чужеродность»: без
чужеродности нет антигенности применительно к конкретному организму.
Например, альбумины мыши не проявляют антигенные свойства по отношению к
другим мышам, но являются Аг для морской свинки.
Специфичность — структурные особенности, отличающие один Аг от другого.
Способностью вызывать развитие иммунного ответа и определять его
специфичность облада- ttфрагмент молекулы Аг — антигенная детерминанта
(эпитоп), избирательно реагирующая с Аг распознающими рецепторами и AT.
Антигенные детерминанты располагаются в областях Аг, обращенных к его
микроокружению. Эпитоп — наименьшая распознаваемая единица Аг, молекула Аг
может иметь несколько эпитопов, то есть быть поливалентной. Чем сложнее
молекула Аг и чем больше у неё эпитопов, тем больше вероятность развития
иммунного ответа. Структура многих антигенных детерминант известна. Например,
в полипептидной последовательности эпитопом может быть фрагмент из 7-8
аминокислотных остатков; свойства антигенности и специфичности определяются
также пространственной конфигурацией фрагмента.
Моноклональные AT специфически распознают только одну Аг-
детерминанту и связываются с ней. Поликлональные AT, как правило, распознают
несколько антигенных детерминант в составе Аг.
Валентность Аг. Белки содержат несколько Аг-детерминант. Количество
молекул AT, связывающих все эпитопы, определяет валентность Аг (возрастает
пропорционально увеличению молекулярной массы белковой молекулы).
Классификация Аг
Аг разделяют на иммуногёны, гаптёны и толерогёны.
ИММУНОГЕНЫ
Большая часть Аг способна запускать иммунные реакции, выступая в
последующем в качестве мишени, в отношении которой эти реакции реализуются.
Иначе иммуногены известны как полные Аг. Часть Аг имеют малые размеры и
простое строение, тогда как другие представляют крупные и сложные молекулы,
содержат множество эпитопов, каждый из которых распознают различные
рецепторы лимфоцитов и/или AT.
ГАПТЕНЫ
Гаптены [от греч. hapto, прикрепляться] обладают антигенностью (то есть
взаимодействуют со специфическими AT), но не иммуногенны- (то есть не способны
запускать иммунные реакции). Иначе гаптены известны как неполные Аг. Как
правило, они имеют небольшую молекулярную массу и не распознаются
иммунокомпетентными клетками. Гаптены могут быть простыми и сложными:
простые гаптены взаимодействуют с AT в организме, но не способны реагировать с
ними in vitro сложные гаптены взаимодействуют с AT in vivo и in vitro. Гаптены
могут стать иммуногенными при связывании с высокомолекулярным носителем,
обладающим собственной иммуногенностью. Например, хром и никель, связываясь
с белками кожи, способны вызвать аллергический контактный дерматит,
развивающийся при повторных соприкосновениях кожи с хромированными или
никелированными предметами. При этом антигенные детерминанты гаптена
полностью маскируют аналогичные структуры носителя. Непреципитирующие
гаптены взаимодействуют с AT, блокируют их, но не образуют видимых
преципитатов. AT, связавшиеся с такими гаптенами, не реагируют с полными Аг,
вызывающими образование AT. Преципитирующие гаптены образуют видимые
преципитаты при взаимодействии со специфическими AT. Свойствами
преципитирующих гаптенов обладают полисахариды энтеробакте- рий и
пневмококков.
Полугаптены — неорганические вещества (например, йод или хром),
присоединение которых к молекуле белка меняет его иммуногенные свойства.
Образующиеся AT специфичны к йоду или хрому, то есть к детерминантам на
поверхности полного Аг, но не к белку-носителю.
Проантигены — гаптены, способные присоединяться к белкам организма и
сенсибилизировать его как аутоантигены. Например, метаболиты грибов
пенициллов или продукты распада пенициллинов могут связывать белки и вызывать
развитие к ним иммунных реакций.
АДЪЮВАНТЫ
Адъюванты [от лат. adjuvans, помогать] — вещества, введение которых
одновременно с Аг (или гаптеном) усиливает иммунный ответ. Другими словами,
адъювант — носитель, повышающий иммуногенность различных Аг и гаптенов.
Распространённые адъюванты — суспензии неорганических веществ, на которых
адсорбируется Аг. Классический пример — коллоидная суспензия из убитых
туберкулёзных палочек, вазелина, ланолина, известная также как полный адъювант
Фройнда.
ТОЛЕРОГЕНЫ
Особую группу составляют Аг, способные подавлять иммунные реакции с
развитием специфической неспособности отвечать на них. Это состояние известно
как иммунная толерантность. Благодаря генетическому разнообразию
индивидуумов, вещество-иммуноген для одного из них может быть толерогеном для
другого. Действуя как иммуноген при парентеральном введении (например,
внутримышечно), то же вещество может быть толерогеном при введении другим
путём (например, пероральным).

59. Обозначение и локализация отдельных антигенов бактерий и вирусов.


Видовая и типовая специфичность микробов.

Антигены бактерий

Существуют следующие разновидности бактериальных антигенов:


1) группоспецифические (встречаются у разных видов одного рода или
семейства);
2) видоспецифические (встречаются у различных представителей одного вида);
3) типоспецифические (определяют серологические варианты – серовары,
антигеновары – внутри одного вида).

В структуре бактериальной клетки различают жгутиковые, соматические,


капсульные и некоторые другие антигены.
Жгутиковые, или Н-антигены, локализуются в локомоторном аппарате
бактерий — их жгутиках. Они представляют собой эпитопы сократительного белка
флагеллина. При нагревании флагеллин денатурирует, и Н-антиген теряет свою
специфичность. Фенол не действует на этот антиген.
Соматический, или О-антиген, связан с клеточной стенкой бактерий. Его
основу составляют ЛПС. О-антиген проявляет термостабильные свойства — он не
разрушается при длительном кипячении. Однако соматический антиген подвержен
действию альдегидов (например, формалина) и спиртов, которые нарушают его
структуру.
Если проиммунизировать животное живыми бактериями, имеющими жгутики,
то будут вырабатываться антитела, направленные одновременно против О- и Н-
антигенов. Введение животному прокипяченной культуры стимулирует биосинтез
антител к соматическому антигену. Культура бактерий, бработанная фенолом,
вызовет образование антител к жгутиковым антигенам.
Капсульные, или К-антигены, располагаются на поверхности клеточной
стенки. Встречаются у бактерий, образующих капсулу. Как правило, К-антигены
состоят из кислых полисахаридов (уроновые кислоты). В то же время у бациллы
сибирской язвы этот антиген построен из полипептидных цепей. По
чувствительности к нагреванию различают три типа К-антигена: А, В, и L.
Наибольшая термостабильность характерна для типа А, он не денатурирует даже
при длительном кипячении. Тип В выдерживает непродолжительное нагревание
(около 1 часа) до 60 °С. Тип L быстро разрушается при этой температуре. Поэтому
частичное удаление К-антигена возможно путем длительного кипячения
бактериальной культуры.
На поверхности возбудителя брюшного тифа и других энтеробактерий,
которые обладают высокой вирулентностью, можно обнаружить особый вариант
капсульного антигена. Он получил название антигена вирулентности, или Vi-
антигена. Обнаружение этого антигена или специфичных к нему антител имеет
большое диагностическое значение.
Антигенными свойствами обладают также бактериальные белковые токсины,
ферменты и некоторые другие белки, которые секретируются бактериями в
окружающую среду (например, туберкулин). При взаимодействии со
специфическими антителами токсины, ферменты и другие биологически активные
молекулы бактериального происхождения теряют свою активность. Столбнячный,
дифтерийный и ботулинический токсины относятся к числу сильных полноценных
антигенов, поэтому их используют для получения анатоксинов для вакцинации
людей.
В антигенном составе некоторых бактерий выделяется группа антигенов с
сильно выраженной иммуногенностью, чья биологическая активность играет
ключевую роль в формировании патогенности возбудителя. Связывание таких
антигенов специфическими антителами практически полностью инактивирует виру-
лентные свойства микроорганизма и обеспечивает иммунитет к нему. Описываемые
антигены получили название протективных. Впервые протективный антиген был
обнаружен в гнойном отделяемом карбункула, вызванного бациллой сибирской
язвы. Это вещество является субъединицей белкового токсина, которая
ответственна за активацию других, собственно вирулентных субъединиц — так
называемого отечного и летального факторов.
Антигены вирусов
В структуре вирусной частицы различают несколько групп антигенов:
ядерные (или коровые), капсидные (или оболочечные) и суперкапсидные. На
поверхности некоторых вирусных частиц встречаются особые V-антигены —
гемагглютинин и фермент нейраминидаза. Антигены вирусов различаются по
происхождению. Часть из них — вирусоспецифические. Информация об их
строении картирована в нуклеиновой кислоте вируса. Другие антигены вирусов
являются компонентами клетки хозяина (углеводы, липиды),] они захватываются во
внешнюю оболочку вируса при его рождении путем почкования.
Антигенный состав вириона зависит от строения самой вирусной частицы.
Антигенная специфичность простоорганизованных вирусов связана с рибо- и
дезоксирибонуклеопротеинами. Эти вещества хорошо растворяются I в воде и
поэтому обозначаются как S-антигены (от лат. solutio — раствор). У сложноорга-
низованных вирусов часть антигена связана с нуклеокапсидом, а другая —
локализуется во внешней оболочке — суперкапсиде.
Антигены многих вирусов отличаются высокой степенью изменчивости. Это
связано с постоянным мутационным процессом, который претерпевает
генетический аппарат вирусной частицы. Примером могут служить вирус гриппа,
вирусы иммунодефицитов человека.

Антигены вирусов:
1) суперкапсидные антигены – поверхностные оболочечные;
2) белковые и гликопротеидные антигены;
3) капсидные – оболочечные;
4) нуклеопротеидные (сердцевинные) антигены.
Все вирусные антигены Т-зависимые.

60. Учение об иммунитете. Определение и сущность понятия “иммунитет”.


Основные формы иммунного ответа.

Формы иммунного ответа


Иммунный ответ – это цепь последовательных сложных кооперативных процессов,
идущих в иммунной системе в ответ на действие антигена в организме.
Различают:
1) первичный иммунный ответ (возникает при первой встрече с антигеном);
2) вторичный иммунный ответ (возникает при повторной встрече с антигеном).
Любой иммунный ответ состоит из двух фаз:
1) индуктивной; представление и распознавание антигена. Возникает сложная
кооперация клеток с последующей пролиферацией и дифференцировкой;
2) продуктивной; обнаруживаются продукты иммунного ответа.
При первичном иммунном ответе индуктивная фаза может длиться неделю, при
вторичном – до 3 дней за счет клеток памяти.
В иммунном ответе антигены, попавшие в организм, взаимодействуют с
антигенпредставляющими клетками (макрофагами), которые экспрессируют
антигенные детерминанты на поверхности клетки и доставляют информацию об
антигене в периферические органы иммунной системы, где происходит стимуляция
Т-хелперов.
Далее иммунный ответ возможен в виде по одного из трех вариантов:
1) клеточный иммунный ответ;
2) гуморальный иммунный ответ;
3) иммунологическая толерантность.
Иммунитет - это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ
экзогенного и эндогенного происхождения, направленный на поддержание и
сохранение гомеостаза, структурной и функциональной целостности организма и
генетической индивидуальности каждого организма и вида в целом.
Иммунитет как общебиологическое и общемедицинское явление, его анатомические
структуры, механизмы функционирования в организме изучает специальная наука -
иммунология. Эта наука возникла более 100 лет назад. По мере прогресса
человеческих знаний менялись взгляды на иммунитет, на его роль в организме, на
механизмы иммунных реакций, расширялась сфера практического использования
достижений иммунологии, а в соответствии с этим менялось само определение
иммунологии как науки. Зачастую иммунологию трактуют как науку, которая
изучает специфическую невосприимчивость к возбудителям инфекционных
болезней и разрабатывает способы защиты от них. Это однобокий взгляд, который
не дает всестороннего, всеобъемлющего понимания науки, исходя из сущности и
механизмов иммунитета и его роли в жизнедеятельности организма. На
современном этапе развития учения об иммунитете иммунологию можно
определить как общебиологическую и общемедицинскую науку, которая изучает
способы и механизмы защиты организма от генетически чужеродных веществ
экзогенного и эндогенного происхождения с целью поддержания гомеостаза,
структурной и функциональной целостности организма и генетической
индивидуальности отдельного индивидуума и вида в целом. Такое определение
подчеркивает, что иммунология как наука едина независимо от объекта изучения:
человека, животных или растений. Конечно, анатомо-физиологическая основа, набор
механизмов и реакций, а также способов защиты от антигенов у представителей животного

и растительного мира будут варьировать, однако принципиальная сущность


иммунитета от этого меняться не будет. В иммунологии выделяют три направления:
медицинскую иммунологию (гомоиммунологию), зооиммунологию и
фитоиммунологию, изучающие соответственно иммунитет у человека, животных и
растений, а в каждом из них - общую и частную. Одним из важнейших ее разделов
является медицинская иммунология. Сегодня медицинская иммунология решает
такие важные проблемы, как диагностика, профилактика и лечение инфекционных
болезней (иммунопрофилактика или вакцинология), аллергических состояний
(аллергология), злокачественных опухолей (иммуноонкология), болезней, в
механизме которых играют роль иммунопатологические процессы
(иммунопатология), иммунные взаимоотношения матери и плода на всех стадиях
репродукции (иммунология репродукции), изучает иммунные механизмы и вносит
практический вклад в решение проблемы трансплантации органов и тканей
(трансплантационная иммунология); можно также выделить иммуногематологию,
изучающую взаимоотношения донора и реципиента при переливании крови,
иммунофармакологию, изучающую влияние на иммунные процессы лекарственных
веществ. В последние годы выделились клиническая и экологическая иммунология.
Клиническая иммунология изучает и разрабатывает проблемы диагностики и
лечения болезней, возникающих в результате врожденных (первичных) и
приобретенных (вторичных) иммунодефицитов, а экологическая иммунология -
влияние на иммунную систему всевозможных экологических факторов
(климатогеографических, социальных, профессиональных и т.д.).

Хронологически иммунология как наука уже прошла два больших периода


(Ульянкина Т.И., 1994): период протоиммунологии (от античного периода до 80-х
годов XIX века), связанный со стихийным, эмпирическим познанием защитных
реакций организма, и период зарождения экспериментальной и теоретической
иммунологии (с 80-х годов XIX века до второго десятилетия XX века). В течение
второго периода завершилось формирование классической иммунологии, которая
носила в основном характер инфекционной иммунологии. С середины XX века
иммунология вступила в третий, молекулярно-генетический, период, который
продолжается до наших дней. Этот период характеризуется быстрыми темпами развития
молекулярной и клеточной иммунологии и иммуногенетики.

Предохранение от заболевания натуральной оспой путем прививки человеку


коровьей оспы предложил более 200 лет назад английский врач Э. Дженнер, однако
это наблюдение носило чисто эмпирический характер. Поэтому основоположниками
научной иммунологии по праву считаются французский ученый-химик Л. Пастер,
открывший принцип вакцинации, русский ученыйзоолог И.И. Мечников - автор
учения о фагоцитозе и немецкий врач-биохимик П. Эрлих, сформулировавший
гипотезу об антителах. В 1888 г. за выдающиеся заслуги Л. Пастера перед
человечеством на народные пожертвования был учрежден Институт иммунологии
(ныне Институт Пастера), который явился школой, вокруг которой группировались
иммунологи многих стран. Российские ученые активно участвовали в становлении и
развитии иммунологии. Более 25 лет И.И. Мечников был заместителем директора по
науке в Институте Пастера, т.е. был его ближайшим помощником и
единомышленником. В Пастеровском институте работали многие выдающиеся
русские ученые: М. Безредка, Н.Ф. Гамалея, Л.А. Тарасович, Г.Н. Габричевский,
И.Г. Савченко, С.В. Коршун, Д.К. Заболотный, В.А. Барыкин, Н.Я. и Ф.Я.
Чистовичи и многие другие. Эти ученые продолжали развивать традиции Пастера и
Мечникова в иммунологии и по существу создали русскую школу иммунологов.

Российским ученым принадлежат многие выдающиеся открытия в области


иммунологии: И.И. Мечников заложил основы учения о фагоцитозе, В.К.
Высокович одним из первых сформулировал роль ретикулоэндотелиальной системы
в иммунитете, Г.Н. Габричевский описал явление хемотаксиса лейкоцитов, Ф.Я.
Чистович стоял у истоков открытия тканевых антигенов, М. Райский установил
феномен ревакцинации, т.е. иммунологической памяти, М. Сахаров - один из
основоположников учения об анафилаксии, акад. Л.А. Зильбер стоял у истоков учения об антигенах опухолей, акад.
П.Ф. Здродовский обосновал физиологическое направление в иммунологии, акад. Р.В. Петров внес весомый вклад в

развитие неинфекционной иммунологии.

Российские ученые по праву являются лидерами в разработке фундаментальных и


прикладных проблем вакцинологии и иммунопрофилактики в целом. Хорошо
известны в нашей стране и за рубежом имена создателей вакцин против туляремии
(Б.Я. Эльберт и Н.А. Гайский), сибирской язвы (Н.Н. Гинзбург), полиомие-

лита (М.П. Чумаков, А.А. Смородинцев), кори, паротита, гриппа (А.А.


Смородинцев), Ку-лихорадки и сыпного тифа (П.Ф. Здродовский), полианатоксинов
против раневых инфекций и ботулизма (А.А. Воробьев, Г.В. Выгодчиков, П.Н.
Бургасов) и др. Активное участие российские ученые принимали в разработке
вакцин и других иммунобиологических препаратов, стратегии и тактики
иммунопрофилактики, глобальной ликвидации и снижении уровня инфекционных
болезней. В частности, по их инициативе и с их помощью ликвидирована
натуральная оспа на земном шаре (В.М. Жданов, О.Г. Анджапаридзе), успешно
ликвидируется полиомиелит (М.П. Чумаков, С.Г. Дроздов).

Иммунология за сравнительно короткий исторический период добилась


существенных результатов в снижении и ликвидации болезней человека,
сохранении и поддержании здоровья людей нашей планеты.

9.1.2. Виды иммунитета

Способность к распознаванию чужеродных структур и защите собственного


организма от интервентов сформировалась довольно рано. Элементарные системы
защиты от любых чужеродных веществ имеют уже низшие организмы, в частности
беспозвоночные (губки, кишечнополостные, черви). Организм человека, как и всех
теплокровных животных, уже имеет сложноорганизованную систему
противодействия генетически чужеродным агентам. Однако анатомическое строение, физиологические
функции и реакции, обеспечивающие такую защиту у отдельных видов животных, у человека и низших организмов в

соответствии с уровнем эволюционного развития существенно различаются.

Так, фагоцитоз и аллогенная ингибиция как одни из ранних филогенетических


защитных реакций присуща всем многоклеточным организмам;
дифференцированные лейкоцитоподобные клетки, выполняющие функции
клеточного иммунитета, появляются уже у кишечнополостных и моллюсков; у
круглоротых (миноги) возникают зачатки тимуса, Т-лимфоциты, иммуноглобулины,
отмечается иммунная память; у рыб уже есть типичные для высших животных
лимфоидные органы - тимус и селезенка, плазматические клетки и антитела класса
М; птицы обладают центральным органом иммунитета в виде сумки Фабрициуса, у
них появляется способность реагировать в виде гиперчувствительности немедлен-

ного типа. Наконец, у млекопитающих иммунная система достигает наиболее


высокого уровня развития: формируются Т-, В- и А-системы иммунных клеток,
осуществляется их кооперативное взаимодействие, появляется способность синтеза
иммуноглобулинов разных классов и формы иммунного реагирования.

В зависимости от уровня эволюционного развития, особенностей и сложности


сформировавшейся иммунной системы, способностей последней отвечать теми или
иными реакциями на антигены в иммунологии принято выделять отдельные виды
иммунитета.

Так, введено понятие о врожденном и приобретенном иммунитете (рис. 9.1).


Врожденный, или видовой, иммунитет, он же наследственный, генетический,
конституциональный - это выработанная в процессе филогенеза генетически
закрепленная, передающаяся по наследству невосприимчивость особей данного
вида к какому-либо чужеродному агенту. Примером может служить
невосприимчивость человека к некоторым возбудителям, в том числе к особо
опасным для сельскохозяйственных животных (чума крупного рогатого скота,
болезнь Ньюкасла, поражающая птиц, оспа лошадей и др.), нечувствительность
человека к бактериофагам, поражающим клетки бактерий. Объяснить видовой
иммунитет можно с разных позиций: неспособностью чужеродного агента к адгезии
на клетках и молекулах-мишенях, определяющих запуск патологического процесса
и активацию иммунной системы, его быстрой деструкцией ферментами
макроорганизма, отсутствием условий для колонизации макроорганизма.

Видовой иммунитет может быть абсолютным и относительным. Например,


нечувствительные к столбнячному токсину лягушки реагируют на его введение при
повышении температуры их тела. Лабораторные животные, нечувствительные к
какому-либо чужеродному агенту, реагируют на него на фоне введения
иммунодепрессантов или удаления центрального органа иммунитета - тимуса.

Приобретенный иммунитет - это невосприимчивость к чужеродному агенту


чувствительного к нему организма человека, животных, приобретаемая в процессе
индивидуального развития, т.е. развития каждой особи в отдельности. Основой ее
является потенция к иммунной защите, которая реализуется лишь при
необходимости и в определенных условиях. Приобретенный иммунитет, точнее его
конечный результат, сам по себе не наследуется (в отличие, конечно, от потенции),
это индивидуальный прижизненный опыт.
Рис.
9.1. Классификация видов иммунитета

Различают естественный и искусственный приобретенный иммунитет. Примером


естественного приобретенного иммунитета у человека может служить
невосприимчивость к инфекции, возникающая после перенесенного инфекционного
заболевания (так называемый постинфекционный иммунитет), например после
скарлатины. Искусственный приобретенный иммунитет создается преднамеренно
для формирования невосприимчивости организма

к определенному агенту путем введения специальных иммунобиологических


препаратов, например вакцин, иммунных сывороток, иммунокомпетентных клеток
(см. главу 14).

Приобретенный иммунитет может быть активным и пассивным. Активный


иммунитет обусловлен непосредственным вовлечением системы иммунитета в
процесс его формирования (например, поствакцинальный, постинфекционный
иммунитет). Пассивный иммунитет образуется за счет введения в организм уже
готовых иммунореагентов, способных обеспечить необходимую защиту. К таким
препаратам относятся антитела (препараты иммуноглобулинов и иммунные сыворотки)
и лимфоциты. Пассивный иммунитет формируется у плода в эмбриональном периоде за счет проникновения

материнских антител через плаценту, а в период грудного вскармливания - при поглощении ребенком антител,

содержащихся в молоке.

Поскольку в формировании иммунитета принимают участие клетки иммунной


системы и гуморальные факторы, принято активный иммунитет дифференцировать
в зависимости от того, какой из компонентов иммунных реакций играет ведущую
роль в формировании защиты от антигена. В связи с этим различают гуморальный,
клеточный иммунитет. Примером клеточного иммунитета может служить
трансплантационный иммунитет, когда ведущую роль в иммунитете играют
цитотоксические Т-лимфоцитыкиллеры. Иммунитет при токсинемических
инфекциях (дифтерия) и интоксикациях (столбняк, ботулизм) обусловлен в
основном антителами (антитоксинами).

В зависимости от направленности иммунитета, т.е. природы чужеродного агента,


выделяют антитоксический, противовирусный, противогрибковый,
антибактериальный, антипротозойный, трансплантационный,
противоопухолевый и другие виды иммунитета.

Иммунитет может поддерживаться, сохраняться либо в отсутствие или только в


присутствии чужеродного агента в организме. В первом случае такой агент играет
роль пускового фактора, а иммунитет называют стерильным, во втором
- нестерильным. Примером стерильного иммунитета является поствакцинальный
иммунитет при введении убитых вакцин, а нестерильного - иммунитет при
туберкулезе, который поддерживается постоянным присутствием в организме
микобактерий туберкулеза.

Иммунитет может быть системным, т.е. генерализованным, распространяющимся


на весь организм, и местным, при котором на-

блюдается более выраженная резистентность отдельных органов и тканей. Как


правило, учитывая особенности анатомического строения и организации
функционирования, понятие «местный иммунитет» используется для обозначения
резистентности слизистых оболочек (поэтому его называют иногда мукозальным) и
кожных покровов. Такое подразделение также условно, так как в процессе
формирования невосприимчивости эти виды иммунитета могут переходить друг в друга.

9.2. Врожденный иммунитет

Врожденный (видовой, генетический, конституциональный, естественный,


неспецифический) иммунитет - это выработанная в процессе филогенеза,
передающаяся по наследству, присущая всем особям одного вида устойчивость к
инфекционным агентам (или антигенам).

Основной особенностью биологических факторов и механизмов, обеспечивающих


такую устойчивость, является наличие в организме готовых (преформированных)
эффекторов, которые способны обеспечить деструкцию патогена быстро, без
длительных подготовительных реакций. Они составляют первую линию защиты
организма от внешней микробной или антигенной агрессии.

9.2.1. Факторы врожденного иммунитета

Если рассматривать траекторию движения патогенного микроба в динамике


инфекционного процесса, то легко заметить, что организм на этом пути выстраивает
различные линии защиты (табл. 9.1). Прежде всего это покровный эпителий кожи и
слизистых оболочек, обладающий колонизационной резистентностью. Если
возбудитель вооружен соответствующими инвазивными факторами, то он
проникает в субэпителиальную ткань, где развивается острая воспалительная
реакция, ограничивающая возбудителя во входных воротах. Следующая станция на
пути патогена - регионарные лимфатические узлы, куда он транспортируется
лимфой по лимфатическим сосудам, дренирующим соединительную ткань.
Лимфатические сосуды и узлы отвечают на внедрение развитием лимфангита и
лимфаденита. После преодоления этого барьера микробы по эфферентным
лимфатическим сосудам проникают в кровь - в ответ может развиться системный
воспалительный от-

вет. Если микроб не гибнет в крови, то он гематогенно разносится во внутренние


органы - развиваются генерализованные формы инфекции.

Таблица 9.1. Факторы и механизмы антиинфекционного иммунитета (принцип эшелонированности


антимикробной защиты по Маянскому А.Н., 2003)
К факторам
врожденного иммунитета относят:

•  кожу и слизистые оболочки;

•  клеточные факторы: нейтрофилы, макрофаги, дендритные клетки, эозинофилы,


базофилы, естественные киллеры;

•  гуморальные факторы: система комплемента, растворимые рецепторы к


поверхностным структурам микроорганизмов (pattern-структуры), антимикробные
пептиды, интерфероны.

Кожа и слизистые оболочки. Тонкий слой эпителиальных клеток, выстилающий


поверхность кожи и слизистых оболочек, является тем барьером, который
практически непроницаем для микроорганизмов. Он отделяет стерильные ткани
организма от заселенного микробами внешнего мира.

Кожа покрыта многослойным плоским эпителием, в котором различают два слоя:


роговой и базальный.
Кератиноциты рогового слоя - это погибшие клетки, устойчивые к агрессивным
химическим соединениям. На их поверхности отсутствуют рецепторы для
адгезивных молекул микроорганизмов, поэтому они обладают значительной
устойчивостью к колонизации и являются самым надежным барьером на пути
большинства бактерий, грибов, вирусов, простейших. Исключение составляют S.
aureus, Pr. acnae, I. pestis, да и они скорее всего проникают либо через
микротрещины, либо с помощью кровососущих насекомых, либо через устья
потовых и сальных желез. Устье сальных и потовых желез, волосяных фоликулов в
коже наиболее уязвимы, поскольку здесь слой ороговевшего эпителия истончается.
В защите этих участков важную роль играют продукты потовых и сальных желез,
содержащих молочную, жирные кислоты, ферменты, антибактериальные пептиды,
оказывающие антимикробное действие. Именно в устьях придатков кожи
располагается глубокая резидентная микрофлора, образующая микроколонии и
продуцирующая защитные факторы (см. главу 4).

В эпидермисе, помимо кератиноцитов, содержатся еще два типа клеток - клетки


Лангерганса и клетки Гринстейна (отростчатые эпидермоциты, составляющие 1-3%
кариоцитов базального слоя). Клетки Лангерганса и Гринстейна имеют миелоидное
происхождение и относятся к дендритным. Предполагается, что по функции эти
клетки являются оппозитными. Клетки Лангерганса участвуют в презентации антигена,
индуцируют иммунный ответ, а клетки Гринстейна продуцируют цитокины, подавляющие им-

мунные реакции в коже. Типичные кератиноциты и дендритные клетки эпидермиса


в совокупности с лимфоидными структурами дермы принимают активное участие в
реакциях приобретенного иммунитета (см. ниже).

Здоровая кожа обладает высокой способностью к самоочищению. Это легко


доказать, если нанести на ее поверхность нетипичные для кожи бактерии - через
некоторое время такие микробы исчезают. На этом принципе основаны методы
оценки бактерицидной функции кожи.

Слизистые оболочки. Большинство инфекций начинается не с кожи, а со слизистых


оболочек. Это связано, во-первых, с большей площадью их поверхности (слизистые
оболочки около 400 м2, кожа около 2 м2), во-вторых, с меньшей защищенностью.

Слизистые оболочки не имеют многослойного плоского эпителия. На их


поверхности располагается лишь один слой эпителиоцитов. В кишечнике это
однослойный цилиндрический эпителий, бокаловидные секреторные клетки и М-
клетки (мембранные эпителиальные клетки), располагающиеся в слое
эпителиоцитов, покрывающие лимфоидные скопления. М-клетки наиболее уязвимы
для проникновения многих патогенных микроорганизмов изза целого ряда
особенностей: наличия специфических рецепторов для некоторых микроорганизмов
(сальмонелл, шигелл, патогенных эшерихий и др.), которые не обнаружены на
соседних энтероцитах; истонченного слизистого слоя; способности к эндоцитозу и
пипоцитозу, благодаря чему обеспечивается облегченный транспорт антигенов и
микроорганизмов из кишечной трубки в мукозоассоциированную лимфоидную
ткань (см. главу 12); отсутствия мощного лизосомального аппарата, характерного
для макрофагов и нейтрофилов, благодаря чему бактерии и вирусы перемещаются в
субэпителиальное пространство без разрушения.

М-клетки относятся к эволюционно сформировавшейся системе облегченного транспорта антигенов к

иммунокомпетентным клеткам, а бактерии и вирусы используют этот путь для своей транслокации через

эпителиальный барьер.

Аналогичные М-клеткам кишечника эпителиоциты, ассоциированные с лимфоидной


тканью, имеются у слизистых оболочек бронхоальвеолярного дерева, носоглотки,
половой системы.

Колонизационная резистентность покровного эпителия. Любой инфекционный


процесс начинается с адгезии возбудителя на по-

верхности чувствительных эпителиоцитов (за исключением микроорганизмов,


передающихся через укусы насекомых или вертикально, т.е. от матери к плоду).
Только закрепившись, микробы приобретают возможность размножиться во
входных воротах и образовывать колонию. В колонии накапливаются токсины,
ферменты патогенности в количестве, необходимом для преодоления
эпителиального барьера. Этот процесс называется колонизацией. Под
колонизационной резистентностью понимают устойчивость эпителия кожи и
слизистых оболочек к заселению посторонними микроорганизмами.
Колонизационную резистентность слизистых оболочек обеспечивает муцин,
секретируемый бокаловидными клетками и образующий на поверхности
сложноорганизованную биопленку. В этот биослой встроены все защитные
инструменты: резидентная микрофлора, бактерицидные вещества (лизоцим,
лактоферрин, токсичные метаболиты кислорода, азота и т.д.), секреторные
иммуноглобулины, фагоциты.

Роль нормальной микрофлоры (см. главу 4.3). Важнейшим механизмом участия


резидентной микрофлоры в колонизационной резистентности является их
способность продуцировать бактериоцины (антибиотикоподобные субстанции),
короткоцепочечные жирные кислоты, молочную кислоту, сероводород, перекись
водорода. Такими свойствами обладают лакто-, бифидобактерии, бактероиды.

Благодаря ферментативной активности анаэробных бактерий в кишечнике происходит деконъюгация желчных кислот
с образованием дезоксихолиевой кислоты, токсичной для патогенных и условно-патогенных бактерий.
Муцин наряду с полисахаридами, продуцируемыми резидентными бактериями (в
частности, лактобактериями), образует на поверхности слизистых оболочек
выраженный гликоналикс (биопленку), который эффективно экранирует сайты
адгезии и делает их недоступными для случайных бактерий. Бокаловидные клетки
образуют смесь сиало- и сульфомуцинов, соотношение которых различается в
различных биотонах. Своеобразие состава микрофлоры в различных экологических
нишах в значительной степени определяется количеством и качеством муцина.

Фагоцитирующие клетки и продукты их дегрануляции. В слизистый биослой на


поверхности эпителия мигрируют макрофаги и