С. В. Кавешникова, В. М.
Иванов
Биохимические особенности крови крыс линии Вистар в постнатальном онтогенезе…
Биологические науки
БИОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КРОВИ КРЫС
ЛИНИИ ВИСТАР В ПОСТНАТАЛЬНОМ
ОНТОГЕНЕЗЕ ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ИХ
ОКСИДАМИ АЗОТА
С. В. Кавешникова, В. М. Иванов
BIOCHEMICAL CHARACTERISTIC OF
VISTAR RATS’ BLOOD IN POSTNATAL
ONTOGENESIS UNDER NITRIC OXIDES
INTOXICATION
Kaveshnikova S. V., Ivanov V. M.
The article gives the detailed characteristics
of nitrogen oxides, shows the ways of their com-
ing into the environment and the results of the
toxic influence on the rat organism in a dose of
50,0 mg/m3. The protein metabolism, the fat
metabolism and the carbohydrate metabolism of
the experimental animals changes and their
ferment activity increases.
Key words: postnatal ontogenesis, nitric ox-
ides, intoxication, metabolism, regularity.
В статье даётся подробная характеристи-
ка оксидам азота, показаны пути их поступ-
ления в окружающую среду и результаты
токсического воздействия на организм крыс
в дозе 50,0 мг/м3. У подопытных животных
изменяется обмен белков, жиров и углево-
дов, повышается активность ферментов.
Ключевые слова: постнатальный онтоге-
нез, оксиды азота, интоксикация, обмен ве-
ществ, закономерность.
УДК 576.3 /.7
100
В конце ХХ века природные циклы азо-
та претерпели существенные изменения. С
одной стороны, интенсификация земледелия
привела к быстрому снижению запасов гу-
муса и азота в почвах, с другой – резко воз-
росло поступление в окружающую среду
оксидов азота (см. рис. 1) в результате раз-
вития транспорта, авиации, теплоцентралей.
Значительное количество оксидов азота в
окружающую среду поступает и в результа-
те сжигания ископаемого топлива. При ра-
боте теплоэнергетических объектов при вы-
соких температурах в ядре факела топочных
камер котлов большой мощности происхо-
дит частичное окисление азота воздуха и
азота топлива с образованием оксида и ди-
оксида азота.
Техногенные выбросы азота в атмосфер-
ный воздух включают в основном оксид азота
и его диоксид. Мировое количество этих вы-
бросов приближается к 37 млн. тонн в год.
Максимальное количество оксидов азо-
та дают промышленно развитые страны,
причем около 97 % этого количества прихо-
дится на промышленно развитое Северное
полушарие. Однако в небольших концен-
трациях диоксид азота обнаруживается и на
значительном расстоянии от источников вы-
бросов – над Тихим океаном, Северной Ат-
лантикой и Гавайях.
Оксиды азота активно участвуют в фо-
тохимических реакциях, продуцируя озон и
азотную кислоту. В настоящее время серь-
езную проблему представляет не глобаль-
ное, а региональное и локальное загрязнение
воздуха оксидами азота.

Вестник Ставропольского государственного университета
Рис. 1. Азот образует несколько соединений с кислородом
Попадая в атмосферу оксид азота посте-
пенно превращается в диоксид путем взаи-
модействия с озоном и гидроперекисными
радикалами. Таким образом, оксиды азота
накапливаются в нижних слоях атмосферы.
Их присутствие вызывает кислотные дожди
и сказывается на последующих превращени-
ях химически активного компонента атмо-
сферы – кислорода.
Оксиды азота, поглощая естественную
радиацию как в ультрафиолетовой, так и в
видимой части спектра, снижают прозрач-
ность атмосферы и способствуют образова-
нию фотохимического тумана-смога.
Оксид азота, образующийся главным
образом естественным путем, безвреден для
человека. Он представляет собой бесцвет-
ный газ со слабым запахом и сладковатым
вкусом. Вдыхание небольших количеств
N2O приводит к притуплению болевой чув-
ствительности, вследствие чего этот газ ино-
гда в смеси с кислородом применяют для
наркоза. В малых количествах N2O вызыва-
ет чувство опьянения (отсюда название
«веселящий газ»). Вдыхание чистого N2O
быстро вызывает наркотическое состояние
и удушье (5, 7).
Оксид азота NO и диоксид азота N2O в
атмосфере встречаются вместе, поэтому ча-
ще всего оценивают их совместное воздей-
ствие на организм человека. Только вблизи
от источника выбросов отмечается высокая
концентрация NO. При сгорании топлива в
автомобилях и в тепловых электростанциях
примерно 90 % оксидов азота образуется в
74/2011
форме монооксида азота. Оставшиеся 10 %
приходятся на диоксид азота. Однако в ходе
химических реакций значительная часть NO
превращается в N2O – гораздо более опасное
соединение. Монооксид азота NO представ-
ляет собой бесцветный газ. Он не раздража-
ет дыхательные пути, и поэтому человек
может его не почувствовать. При вдыхании
NO, как и CO, связывается с гемоглобином.
При этом образуется нестойкое соединение,
которое быстро переходит в метгемоглобин,
при этом Fe2+ переходит в Fe3+. Ион Fe3+ не
может обратимо связывать O2 и таким обра-
зом выходит из процесса переноса кислоро-
да. Концентрация метгемоглобина в крови
на 60–70 % считается летальной. По мере
удаления от источника выброса все большее
количество NO превращается в NO2 – бу-
рый, обладающий характерным неприятным
запахом газ. Диоксид азота сильно раздра-
жает слизистые оболочки дыхательных пу-
тей. Вдыхание ядовитых паров диоксида
азота может привести к серьезному отравле-
нию (1, 2). Диоксид азота вызывает сенсор-
ные, функциональные и патологические эф-
фекты (3, 4, 6). К сенсорным эффектам мож-
но отнести обонятельные и зрительные ре-
акции организма на воздействие NO2. Даже
при малых концентрациях, составляющих
всего 0,23 мг/м3, человек ощущает присутст-
вие этого газа. Эта концентрация является
порогом обнаружения диоксида азота. Од-
нако способность организма обнаруживать
NO2 пропадает после 10 минут вдыхания, но
при этом ощущается чувство сухости и
101
 С. В. Кавешникова, В. М. Иванов
Биохимические особенности крови крыс линии Вистар в постнатальном онтогенезе…
першения в горле. Хотя и эти признаки ис-
чезают при продолжительном воздействии
газа в концентрации, в 15 раз превышающей
порог обнаружения. Таким образом, NO2
ослабляет обоняние.
Но диоксид азота воздействует не толь-
ко на обоняние, но и ослабляет ночное зре-
ние – способность глаза адаптироваться к
темноте. Этот эффект же наблюдается при
концентрации 0,14 мг/м3, что, соответствен-
но, ниже порога обнаружения.
Функциональным эффектом, вызывае-
мым диоксидом азота, является повышенное
сопротивление дыхательных путей. Иными
словами, NO2 вызывает увеличение усилий,
затрачиваемых на дыхание. Эта реакция на-
блюдалась у здоровых людей при концен-
трации NO2 всего 0,056 мг/м3, что в четыре
раза ниже порога обнаружения. А люди с
хроническими заболеваниями легких испы-
тывают затрудненность дыхания уже при
концентрации 0,038 мг/м3.
Патологические эффекты проявляются в
том, что NO2 делает человека более воспри-
имчивым к патогенам, вызывающим болез-
ни дыхательных путей. У людей, подверг-
шихся воздействию высоких концентраций
диоксида азота, чаще наблюдаются катар
верхних дыхательных путей, бронхиты и
воспаление легких. Кроме того, диоксид
азота сам по себе может стать причиной за-
болеваний дыхательных путей. Попадая в
организм человека, NO2 при контакте с вла-
гой образует азотистую и азотную кислоты,
которые разъедают стенки альвеол легких.
При этом стенки альвеол и кровеносных ка-
пилляров становятся настолько проницае-
мыми, что пропускают сыворотку крови в
полость легких. В этой жидкости растворя-
ется вдыхаемый воздух, образуя пену, пре-
пятствующую дальнейшему газообмену.
Возникает отек легких, который зачастую
ведет к летальному исходу. Длительное воз-
действие оксидов азота вызывает расшире-
ние клеток в корешках бронхов (тонких раз-
ветвлениях воздушных путей альвеол),
ухудшение сопротивляемости легких к бак-
териям, а также расширение альвеол. Неко-
торые исследователи считают, что в районах
с высоким содержанием в атмосфере диок-
102
сида азота наблюдается повышенная смерт-
ность от сердечных и раковых заболеваний.
Люди, страдающие хроническими забо-
леваниями дыхательных путей (эмфиземой
легких, астмой) и сердечно-сосудистыми
болезнями, могут быть более чувствительны
к прямым воздействиям NO2. У них легче
развиваются осложнения (например, воспа-
ление легких) при кратковременных респи-
раторных инфекциях. Полагают, что около
10–15 % населения США страдает хрониче-
скими респираторными заболеваниями. Ис-
ходя из этого, в США установлен стандарт
на содержание NO2 на уровне, предохра-
няющем население от респираторных ин-
фекций. Среднегодовой стандарт качества
воздуха в США предусматривает концен-
трацию NO2 0,1 мг/м3.
В Германии принята максимально до-
пустимая эмиссионная концентрация (МЭК)
NO2 – 9 мг/м3.
В Украине установлены следующие
экологические стандарты на содержание ок-
сидов азота в атмосферном воздухе населен-
ных мест: для NO2 максимальная разовая
предельно допустимая концентрация
(ПДКм.р.) составляет 0,085 мг/м3, а средне-
суточная предельно допустимая концентра-
ция (ПДКс.с.) – 0,04 мг/м3; для NO ПДКм.р
= 0,4 мг/м3, ПДКс.с = 0,06 мг/м3.
На Ставрополье среди многих промыш-
ленных предприятий выделяется воздейст-
вием на окружающую среду ОАО «Невин-
номысский Азот», который не только произ-
водит многочисленные химические соеди-
нения, используемые в промышленности,
сельском хозяйстве и в быту, но и выбрасы-
вает в природные экосистемы отходы своего
производства, среди которых значительное
место занимают оксиды азота.
В связи с этим изучение биохимических
показателей крови крыс линии «Вистар» в
зоне влияния ОАО «Невинномысский Азот»
с учётом особенностей загрязнения террито-
рий актуально и имеет большое научное и
практическое значение. Подобные исследова-
ния помогут выявить негативные изменения,
которые происходят в организме животных в
постнатальном онтогенезе и разработать на-
учных основ коррекции его нарушений.

Вестник Ставропольского государственного университета
Материал и методы исследований.
Эксперимент проводили на 32 крысах линии
«Вистар» живой массой 250–310 г, содер-
жащихся на стандартном виварном рационе.
Для опытов были сформированы 4 группы
крыс: первая группа – контрольная, осталь-
ные три – опытные, по 8 животных в каждой
группе. Ингаляционному воздействию под-
вергались животные только опытных групп,
которые находились в специальной камере.
Контрольная группа крыс оксидом азота не
обрабатывалась. Ингаляция крыс оксидом
азота проводилась три раза в день по 30
мин., время эксперимента соответственно по
группам составляла 15, 30 и 60 дней. Кон-
центрация оксида азота в камере определя-
лась калореметрическим методом и равня-
лась в среднем 50,0 мг /м3 (0,05 мг/л), что
соответствовала уровню загрязнения атмо-
сферы Невинномысским Азотом и не приво-
дила к летальному исходу.
Забор крови для биохимического ана-
лиза осуществляли утром до кормления
крыс из сонной артерии в количестве 10 мл с
использованием гепарина в качестве анти-
коагулянта. После охлаждения кровь цен-
трифугировали на протяжении 15 мин (при
обороте 3000 в мин). Полученную сыворот-
ку отбирали в сухую, химически чистую
пробирку. Определяли содержание общего и
связанного билирубина, общего белка, мо-
чевины, мочевой кислоты, креатинина, хо-
лестерина, глюкозы, активность ферментов
(АсАТ, АлАТ, б – амилазы, гамма – глута-
милтранспептидазы – ГГТП, лактатдегидро-
геназы – ЛДГ, креатинфосфокиназы – КФК,
щелочной фосфотазы), а также содержание
триглицеридов и тимоловую пробу по об-
щепринятым методикам.
Результаты исследований. При дли-
тельном воздействии различных токсиче-
ских веществ в концентрациях, не вызы-
вающих внешне обнаруживаемого эффекта,
проявляются скрытые изменения ряда фи-
зиологических, биохимических показателей
функции отдельных органов и систем. Вме-
шиваясь в молекулярные механизмы функ-
ционирования биохимических систем, хи-
мические агенты изменяют процессы кле-
74/2011
точного и тканевого гомеостаза, которые
приводят к серьёзным функциональным из-
менениям в деятельности всего организма.
Поэтому проблема токсического воздейст-
вия оксидов азота на организм крыс может
быть объяснена лишь на основе глубокого
понимания изменения всего комплекса био-
логических процессов у животных. Резуль-
таты наших опытов представлены в табли-
це 1, которые свидетельствуют, что некоторые
исследуемые показатели у подопытных живот-
ных претерпели значительные изменения.
Нами были выявлены изменения в ак-
тивности ферментов (АЛТ, АСТ, а – амила-
зы), которые оказались значительно повы-
шенными, особенно в третьей (на 12,4 %) и
четвёртой (на 17,2 %) группах при степени
достоверности (Р ≥ 0,999). В частности из-
менения а-амилазы показывает нарушения
окисления углеводов с замедленным распа-
дом их в тканях, а увеличение глюкозы сви-
детельствует о нарушении обмена углево-
дов. По-видимому, и снижение активности
а-амилазы и увеличение уровня глюкозы
связано с токсическим действием оксидов
азота.
Содержание общего и связанного били-
рубина в крови подопытных животных из-
меняется несущественно и в принципе соот-
ветствует физиологической норме.
Щелочная фосфотаза увеличилась во
второй, третьей и четвёртой группах соот-
ветственно на 3,3; 4,3 и 5,8 % при Р ≥ 0,95.
Увеличение активности ферментов мо-
жет свидетельствовать о неблагополучных
изменениях в клетках паренхимы лёгких.
Изменения белка в сыворотке крови
подопытных крыс не существенно, а тимо-
ловая проба у всех животных оказалась в
пределах физиологической нормы.
Снижение уровня мочевины по данным
литературных источников может быть свя-
зано с угнетением синтеза мочевины в пече-
ни. И по результатам наших опытов в треть-
ей и четвёртой группах содержание мочеви-
ны уменьшилось по сравнению с контроль-
ной на 11,39 и 16,80 % при средней степени
достоверности.
103
 С. В. Кавешникова, В. М. Иванов
Биохимические особенности крови крыс линии Вистар в постнатальном онтогенезе…

Таблица 1
Биохимические показатели крови крыс при интоксикации животных оксидами азота
Показатели Ед. изм. 1 2 3 4
АЛТ нмоль/с*л 313±8,4 318±7,6 352±8,8 367±9,2
АСТ нмоль/с*л 320±10,1 325±11,1 348±12,5 355±12,9
Билирубин
общий мкмоль/л 14,25±0,42 14,51±0,39 14,65±0,41 14,78±0,43
Билирубин
связанный мкмоль/л 5,11±0,17 5,12±0,16 5,19±0,22 5,17±0,21
Щелочная
фосфотаза Ед/л 395±28,4 408±27,8 412±28,6 418±29,1
Общий
белок г/л 72±1,9 71±2,0 73±2,2 72,8±2,1
Тимоловая
проба ед/мут 1±0,1 1±0,1 1±0,2 1±0,2
Мочевина моль/л 5,18±0,38 5,05±0,41 4,59±0,31 4,31±0,29
Мочевая кислота ммоль/л 218±0,6 221±0,7 232±0,9 238±0,8
Креатинин мкмоль/л 55,5±0,45 54,5±0,38 55,8±0,44 55,3±0,39
Холестирин моль/л 1,55±0,33 1,75±0,44 1,89±0,48 2,01±0,64
Триглицириды моль/л 1,06±0,06 1,26±0,11 1,48±0,18 1,54±0,23
Глюкоза моль/л 6,5±0,62 6,9±0,98 7,6±1,12 7,9±2,01
А-амилаза мг/с*л 62,15±1,89 63,28±1,96 75,34±2,11 78,89±2,89
ГГТП Ед/л 8±0,34 7±0,29 7±0,38 8±0,35
ЛДГ Ед/л 420±7,8 429±9,9 438±12,4 444±12,5
КФК Ед/л 689±49,9 699±54,8 717±55,6 738±62,5

И наоборот, содержание мочевой кисло- Увеличение креатинфосфокиназы (КФК) в

ты увеличилось на 1,4; 6,4 и 9,2 % при
Р ≥ 0,95 во второй группе и при Р ≥ 0,99 в
третьей и четвёртой группах.
Содержание креатинина в сыворотке
крови у животных всех подопытных групп
незначительно отличалось друг от друга.
Увеличение уровня триглициридов в
крови на 18,8; 39,6 и 45,2 % и холестерина
на 12,9; 21,9 и 29,6 % при высокой степени
достоверности подтверждает изменения в
липидных обменных процессах при воздей-
ствии оксидов азота.
Уровень ГГТП несколько понижен, но
находится в пределах физиологической
нормы.
А достаточно заметные изменения ак-
тивности ЛДГ, КФК имеют место при раз-
личных патологических состояниях млеко-
питающих, в том числе при тяжёлых формах
интоксикаций.
сыворотке крови подопытных животных
объясняется повышением активности ткане-
вых ферментов, переходящих в кровь.
Выводы
1. Воздействие подопытных животных
оксидами азота в дозе 50,0 мг/м³ вызывает в
организме изменения в обмене белков, жи-
ров и углеводов.
2. В проведённых опытах отмечалось
повышение активности ферментов.
3. Со стороны углеводного обмена на-
блюдалось повышение уровня глюкозы и
понижение а-амилазы, что связано с нару-
шением функции поджелудочной железы и
снижения уровня инсулина в крови крыс.
4. В жировом обмене наблюдалось по-
вышение триглициридов и холестерина, что
связано с нарушением функции печени.

104

Вестник Ставропольского государственного университета
ЛИТЕРАТУРА
1. Вётош А. Н. Терморегуляторные реакции
млекопитающих в условиях действия повы-
шенного давления азота / А. Н. Вётош,
Ю. И. Лучаков, А. А. Попов, О. С. Алексеева,
Г. Б. Морозов // Российский физиологический
журнал им. И. М. Сеченова. – 2003. – № 2. –
С. 139–145.
2. Галанжа Е. И. Участие оксида азота в регу-
ляции функций лимфатических микрососу-
дов / Е. И. Галанжа, Г. Е. Бриль, А. В. Со-
ловьёва, Т. В. Степанова // Российский фи-
зиологический журнал им. И. М. Сеченова. –
2002. – №8. – С. 983–989.
3. Гуцаева Д. Р. Роль оксида азота и углекисло-
го газа в нейротоксическом действии кисло-
рода под давлением / Д. Р. Гуцаева, А. Н. Мо-
сквин, С. Ю. Жиляев, В. Б. Косткин,
И. Т. Демченко // Российский физиологиче-
ский журнал. – 2004. – № 4. – С. 428–435.
4. Новожилов А. В. Динамика гематологиче-
ских показателей крови белых крыс в пост-
натальном онтогенезе / А. В. Новожилов,
Л. Н. Катюхин // Журнал эволюционной био-
химии. – 2008. – Т. 44. – № 6. – С. 613–621.
5. Пшенникова М. Г. Катехоламины, оксид
азота и устойчивость к стрессовым по-
вреждениям: влияние адаптации к гипок-
сии / М. Г. Пшенникова, Е. Г. Попкова,
Н. А. Бондаренко, И. Ю. Малышев, М. В. Шим-
кович, Б. В. Смирин, Е. Б. Манухина // Рос-
сийский физиологический журнал им.
И. М. Сеченова. – 2002. – № 4. – С. 485–493.
74/2011
6. Фадюкова О. Е. Антистрессорное и ангио-
протекторное влияние оксида азота на крыс
линии Крушинского-Молодкиной, генетиче-
ски предрасположенных к аудиогенной эпи-
лепсии / О. Е. Фадюкова, В. С. Кузенков,
В. П. Реутов, А. Л. Крушинский, С. В. Бурав-
ков, В. Б. Кошелев // Российский физиологи-
ческий журнал. – 2005. – № 1. – С. 89–95.
7. Федин А. Н. Динамика сокращений гладкой
мышцы трахеи и бронхов крыс при ингаля-
ции диоксидом азота / А. Н. Федин,
Т. Ю. Постникова, Н. А. Кузубова, Л. Н. Да-
нилов, Е. С. Лебедева // Российский физиоло-
гический журнал им. И. М. Сеченова. –
2007. – № 10 – С. 1163–1169.
Об авторах
Иванов Виктор Михайлович, ГОУ ВПО
«Ставропольский государственный универси-
тет», доктор сельскохозяйственных наук, про-
фессор кафедры безопасности жизнедеятельно-
сти. Сфера научных интересов – исследование
роли внешних факторов в обеспечении онтогене-
тических процессов.
sport @ stavsu.ru
Кавешникова Светлана Владимировна, ГОУ
ВПО «Ставропольский государственный универ-
ситет», специалист по учебно-методической ра-
боте экономического факультета. Сфера научных
интересов – изучение биологии развития живых
организмов в постнатальном онтогенезе.
sport @ stavsu.ru
105