На правах рукописи

ООБОЛО^*-*"

ДОЛГОВ Владимир Николаевич

ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ ГИНОХЛОРИТА НА СОСТОЯНИЕ МЕМБРАН

КЛЕТОК КРОВИ И ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ
ПРИ Ж Е Л Ч Н О М ПЕРИТОНИТЕ

(экспериментальное исследование)

14.01.17-хирургия

АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учёной степени
кандидата медицинских наук

- 7

Краснодар-2012
Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном
учреждении высшего профессионального образования «Кубанский
государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения
и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ
Минздравсоцразвития России).

Научный руководитель: заслуженный изобретатель РФ,

лауреат премии Правительства РФ и РАМН,
доктор медицинских наук профессор
Петросян Эдуард Арутюнович
Научный консультант: доктор медицинских наук
Лайпанов Хаджи Ислам Хаджи Мекерович.
Официальные оппоненты:
Гуменюк Сергей Евгеньевич, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ
ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России, заведующий кафедрой
хирургии педиатрического и стоматологического факультетов

Виниченко Алексей Викторович, доктор медицинских наук, ГУЗ Краевого

онкологического диспансера №1 департамента здравоохранения
Краснодарского края, врач
Ведущая организация: государственное бюджетное образовательное
учреадение высшего профессионального образования «Волгоградский
государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения
и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО ВолГМУ
Минздравсоцразвития России).

Защита состоится 20 июня 2012 г. в 10.00 часов на заседании

диссертационного совета Д208.038.01 на базе ГБОУ ВПО КубГМУ
Минздравсоцразвития России (350063, Краснодар, ул. Седина, 4 тел
(861)262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КубГМУ

Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан « 2012 г.

Ученый секретарь
диссертационного совета Л ^
профессор I ^ Шейх-Заде Юрий Решацович
 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время желчнокаменная болезнь

(ЖКБ) является чрезвычайно распространенной патологией органов
пищеварения во всех странах и регионах мира. Так, П.С.Ветшев и др. (1998)
считают, что холелитиаз встречается более чем у 10% населения земного
шара, а количество больных каждое десятилетие удваивается. В сложившейся
ситуации количество хирургических вмешательств на желчевыводящей
системе существенно увеличилось и достигло около 2.5 млн. По образному
выражению В.И.Малярчука и др. (1999), калькулезный холецистит является
"эпидемией века". Тяжесть течения, возможность развития серьезных
осложнений, выключение пациента из активной трудовой деятельности
позволяют расценивать ЖКБ как проблему не только медицинскую, но и
социальную.

Согласно данным Э.И.Гальперина (2009), частота повреждений

внепеченочных желчных протоков при открытой холецистэктомии составляет
от 0,1% до 0,8%, в то время, как при лапароскопической холецистэктомии в
период освоения метода и накопления опыта их количество возрастает до 3%.
В результате данных повреждений у 94,5% пациентов развивается желчный
перитонит (Э.И.Гальперин, А.Ю.Чевокин, 2009; О.Ыагс1е11о е1 а]., 2003).
Отсюда, проблема диагностики и лечения желчного перитонита (ЖП)
на фоне роста количества больных с ЖКБ становится крайне актуальной
(Э.И.Гальперин, П.С.Ветшев, 2006; Ю.И.Галлингер, 2007; И.Н.Григорьева,
С.К.Малютина, М.И.Воевода, 2010; М.:.Сиге1 е1 а1., 2002).
В последнее годы накоплены факты, указывающие о перспективности
изучения неспецифической реакции организма на повреждение в виде
синдрома системной воспалительной реакции (ССВР), сопровождающегося
структурно-функциональной перестройкой мембран клеток крови и
эндотелия сосудов (Е.Ю.Гусев, В.А.Черешнев, Л.Н.Юрченко, 2007).
 Одной из причин гибели больных при перитоните различного генеза
является почечная недостаточность, при которой нарушения наступают
раньше клинических проявлений и исчезают позже последних (А.В.Назаров,
Т.В.Жданова, В.А.Багин, О.В.Добрынина, 2010). Подобное состояние
проблемы требует проведения поиска диагностических критериев и лечебных
мероприятий, способных с одной стороны - объективно охарактеризовать
состояние регуляторно-адаптивных возможностей организма, а с другой -
повысить эффективность лечения желчного перитонита.
В настоящее время особый интерес по-прежнему представляет метод
непрямого электрохимического окисления крови с использованием натрия
гипохлорита (НГХ), имитирующего функцию нейтрофильных гранулоцитов и
цитохрома Р-450 печени (В.И.Сергиенко, 1987; В.К.Гостищев,
Н.М.Федоровский, 1991).

Цель исследования - повысить эффективность лечения

экспериментального желчного перитонита.

Задачи исследования.
1. Оценить эффективность влияния натрия гипохлорита на структурно-
функциональное состояние мембран клеток крови у животных с
экспериментальным желчным перитонитом.
2. Изучить эффективность применения натрия гипохлорита на
состояние эндогенной интоксикации при экспериментальном желчном
перитоните.
3. В опытах на животных с экспериментальным желчным перитонитом
изучить влияние натрия гипохлорита на метаболизм оксида азота.
4. У животных с экспериментальным желчным перитонитом установить
влияние натрия гипохлорита на характер нарушений сосудисто-
тромбоцитарного звена гемостаза.
 5. На основании морфогистохимических и морфометрических
изменений в почках у животных с экспериментальным желчным перитонитом
оценить эффективность применения натрия гипохлорита

Новизна исследования. В результате проведенных исследований

впервые:
1) определён комплекс наиболее информативных клинико-
лабораторных и морфофункциональных показателей для ранней диагностики
и оценки эффективности лечения животных с экспериментальным желчным
перитонитом;
2) установлено более раннее восстановление структурно-
функциональной организации мембран клеток крови при комплексном
применении натрия гипохлорита у животных с экспериментальным желчным
перитонитом;
3) обнаружено повышение продукции оксида азота при комплексном
применении натрия гипохлорита;
4) установлено повышение эффективности лечения экспериментального
желчного перитонита при комплексном применении натрия гипохлорита
путем двукратного снижения летальности животных;
5) расширены и углублены современные представления механизма
действия натрия гипохлорита на структурно-функциональную организацию
мембран клеток крови и эндотелий сосудов при экспериментальном желчном
перитоните.
Научно-практическая значимость работы
Теоретическая значимость работы обоснована тем, что полученные
данные углубляют представления о патогенезе и морфогенезе желчного
перитонита, а также раскрывают механизм непрямого электрохимического
окисления крови с использованием натрия гипохлорита на состояние мембран
клеток крови и эндотелия сосудов. Полученный материал может служить
 основой для оптимизации известных схем лечения больных с желчным
перитонитом.

Практическая значимость исследования заключается в обосновании

применения выявленного комплекса наиболее информативных клинико-
лабораторных и морфофункциональных показателей для ранней диагностики
желчного перитонита и оценки эффективности его лечения. Полученные
результаты доказывают целесообразность комплексного применения натрия
гипохлорита для повышения эффективности лечения желчного перитонита.

Структура и объем работы.

Работа изложена на 175 страницах компьютерного текста и состоит из

введения, обзора литературы, главы, характеристика материала и методов
исследования, двух глав собственных исследований, заключения, выводов,
литературного указателя, включающего 441 источника (258 отечественных и
183 иностранных) и приложения. Работа иллюстрирована
23 микрофотографиями, 7 таблицами и 11 диаграммами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 50 беспородных собаках-самцах, весом 15,3+
1,1 кг. Все животные были разделены на четыре фуппы: в 1-ю контрольную
группу для определения лабораторных показателей нормы включены 50
животных, 5 из которых выводились из эксперимента для забора биоптатов
почки; во 2-ю фуппу вошли оставшиеся 45 животных, которым создавапи
модель 24-часового экспериментального желчного перитонита, суть которой
заключалась в том, что предварительно на наружной поверхности задней
лапы собаки создавали очаг деструкции мягких тканей введением 10%
раствора хлористого кальция из расчега 0,25 мл/кг. Через 48 часов после
создания очага деструкции в брюшную полость троекратно, каждые 8 часов
вводили аптечную желчь из расчега 1,5 мл/кг (Э.А.Петросян и др., «Способ
моделирования желчного перитонита». Патент РФ № 2175784, Бюл., 2001,
№31). После создания модели 24-часового экспериментального желчного
перитонита во 2-ой группе из опыта выводили также 5 собак для забора
биоптатов. Оставшиеся 40 животных с 24-часовым экспериментальным
желчным перитонитом были распределены еще на две группы: 3-я - группа
сравнения и 4-я - опытная группа, по 20 животных в каждой.
Схема лечение животных с экспериментальным желчным пер1ггонитом
заключается в следующем: животным 3-ей группы сравнения и 4-ой опытной
группы проводили лапаротомию, интрапоперационную санацию с
последующим введением в брюшную полость 0,04% раствора НГХ в качестве
бактерицидного средства и зашиванием краев раны. Далее животным 3-ей
группы сравнения проводили инфузию 0,9% раствора натрия хлорида в
качестве средства дезинтоксикации, а животным 4-ой опытной группы -
инфузию 0,04% раствора НГХ в качестве средства детоксикации. Инфузию
растворов проводили сразу и через 12 часов после санации брюшной полости
из расчета '/,о ОЦК (С.А.Шалимов и др., 1989). НГХ получали электролизом
0,9% раствора натрия хлорвда в аппарате ЭДО-4.
Определение клинико-лабораторных показателей крови проводили на
автоматическом анализаторе «Мес1оп1с 620» (Швеция). Качественный состав
лейкоцитов определяли унифицированным методом (В.В.Меньшиков, 1987).
Лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) изучали по методике
Я.Я.Кальф-Калифа. (1941).
Определение тиоловых (8Н-групп) в крови (И.В.Веревкина,
А.И.Точилкина, Н.А.Попова, 1977).
Определение сорбционной способности эритроцитов (ССЭ)
(А.А.Тогайбаев и др., 1988).
Определение диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида
(МДА) в плазме и эритроцитах (В.С.Камышников, 2000).
Определение концентрации метаболитов оксида азота (N0)
(нитраты/нитриты) в плазме и тромбоцитах (П.П.Голикова и др., 2000).
 8

Определение активности аланинаминотрансаминазы (АЛТ) и

аспартатаминотрансаминазы (ACT) проводили с использованием набора для
лабораторной диагностики собак продукции компании «Cusabio Biotech»
Canine Elisa Assay Kit на аппарате Stat Fax 4200 (США) в соответствии с
протоколами фирмы разработчика.
Определение сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза (СТЗ)
проводили путем подсчёта количества тромбоцитов (Тр) в крови и
определения агрегационной активности тромбоцитов с использованием
гемолизат-агрегационного теста («Технология-Стандарт», г. Барнаул).
Гистологическое исследование почек проводили на срезах, окрашенных
гематоксилин-эозином.
Гистохимические исследования почек проводили на срезах,
окрашенных по методу Пикро-Маллори (Д.С.Саркисов , 1996).
Морфометрические исследования параметров среднего размера (CP,
мкм^) и объемной доли (ОД, %) «зрелого» фибрина, проводили на срезах
почки с использованием светового микроскопа Olympus (Япония) и
окулярной сетки (Г.Г.Автандилова, 2002).
Исследования проводили до, после создания модели желчного
перитонита, на 1, 3, 7, 10 и 30 сутки. В 3-ей группе сравнения и 4-ой опытной
группе на каждый срок выводили из эксперимента по 4 собаки для забора
биоптатов почки.
Выполненные эксперименты руководствовались основными
принципами, заложенными в Конституции РФ и Хельсинской декларации
(1964); Рекомендациями комитетов по этике, проводящих экспертизу
биомедицинских исследований ВОЗ и EF GCP; Федеральным законом «Об
обращении лекарственных средств» (№ 61-ФЗ от 12.04.2010г.);
утвержденным приказом Федерального агентства по техническому
регулированию и метрологии от 27.09.2005г. №232-ст; правилами
лабораторной практики, утвержденными пр. Министерства здравоохранения
и социального развития Российской Федерации №708н от 23.08.2010г.
Статистические исследования выполнены с помощью пакета
прикладных программ "Microsoft Exel" и "Statistica 6,0" для "Windows"
(StatSoft.Inc). Оценку достоверности различий для нормально
распределенных признаков проводили с использованием t-критерия
Стьюдента (В .Госсета), а в противном случае - критериев Манна-Уитни и
Вилкоксона (для зависимых и независимых признаков, соответственно). При
проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони.
Для оценки достоверности межгрупповых различий применялся
непараметрический критерий Манна-Уитни. Данные в тексте и таблицах
представлены в виде среднего арифметического значения и стандартной
ошибки среднего М + т . Для всех проведенных анализов различия считались
достоверными при двустороннем уровне значимости р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
При лапаротомии у животных с 24-часовым экспериментальным
желчным перитонитом определялось до 250 мл серозно-фибринозного
экссудата с примесью желчи. При осмотре брюшной полости отмечалась
гиперемия брюшины с очагами геморрагии и фибринозным налетом. Петли
кишечника паретически расширены, покрыты геморрагическими очагами с
фибринозным налётом. Сосудистый рисунок брыжейки тонкой кишки резко
выражен. Вышеописанная макроскопическая картина брюшной полости
соответствует острому серозно-фибринозному желчному перитониту.
У животных с 24-часовым желчным перитонитом наблюдалось
увеличение в 7,2 раза ЛИИ (р<0,05), который в последующие сроки
постепенно снижался, приходя к исходным величинам в 3-ей группе
сравнения на 30-е сутки (р>0,05), а в 4-ой опытной группе - уже на 10-е сутки
(р>0,05) (рис.1). Полученный эффект в опытной группе объясняется
детоксицирующими свойствами натрия гипохлорита.
 10

^24-часЖП фуппа сравнения

ЕДПЗ опытная гоуппа контрольная группа

Рис. 1. Динамика ЛИИ при лечении экспериментального желчного

перитонита.

Нарушение процессов СРО считается неспецифическим механизмом

повреждения, который у животных с 24-часовым экспериментальным
желчным перитонитом характеризуется ростом в 2,5 раза уровня ДК в плазме
(р<0,05) и в 3,9 раза в эритроцитах (р<0,05). Дальнейшее окисление ДК
приводит к образованию вторичных продуктов (МДА) рост которого
превышает показатели в плазме контрольных животных в 2,2 раза и в
эритроцитах в 1,74 раза, соответственно (р<0,05) (табл. 1).
Таблица 1
Первичные и вторичные продукты свободнорадикального окисления в плазме
и эритроцитах у контрольных животных и животных с 24-часовым

Исслед"уемые группы
Исследуемый Животные
Контрольная группа
показатель с 24-часовым ЖП
ДКпл, отн. ед. 6,65±0,98 16,51±1,77*
ДКэр, отн. ед. 2,95+0,49 11,50+1,09*
МДАпл, мкмоль/л 4,64±0,38 10,11±0,84*
МДДэр, мкмоль/л 5,00±0,23 8,70±0,76*
Примечание:* - достоверность отличий от показателя в контрппе (р<0

Таким образом, поскольку реакции СРО протекают на мембранах

эритроцитов ДОС которых на фоне эндотоксикоза нарушена, высокий
уровень ДК эритроцитов - результат снижения ДОС мембран эритроцитов, а
 11

менее интенсивный рост МДА эритроцитов - результат подавления

процессов СРО на уровне первичных продуктов.
На 1-е сутки лечения в группе сравнения отмечался достоверный рост
ДК плазмы до 20,96+1,21 отн. ед. против 16,51±1,77 отн. ед. у животных с 24-
часовым желчным перитонитом (р<0,05), в то время, как показатели ДК
эритроцитов снижались (р<0,05), что может быть связано с высоким уровнем
липопероксидации. Оба показателя на 10-е сутки уже не отличались от
контроля (р>0,05) (табл. 2). В 4-ой опытной группе ДК плазмы уже на 3-й
сутки, а ДК эритроцитов на 7-е сутки не отличались от показателей
контрольных животных (р>0,05). Начиная с 1-х суток лечения в исследуемых
группах концентрация МДА плазмы снижалась, но при этом оставалась
высокой в 3-ей группе сравнения вплоть до 10-х суток (р<0,05) относительно
контрольных животных, а в опытной группе до 7-х суток (р<0,05) (табл. 2).

Таблица 2
Динамика первичных и вторичных продуктов СРО в плазме и эритроцитах

Исследуемые показатели
Исследуемые ДКпл, отн.ед. 1 ДКэр, отн.ед. | МДАпл,мкмоль/л | МДАэр,мкмоль/л
Сроки Группа сравнения
1 сутки 20,96±1,41*" 6,72±0,78* 8,05±1,02* 10,01+0,78*
3 сутки 15,86±1,35 * 5,94±0,32* 8,35+0,87* 8,82±0,75*
7 сутки 10,24±0,86 * 5,28+0,94* 5,63±0,52* 7,76+0,66*
10 сутки 7,32±0,56 3,12±0,24 5,02+0,20 4,88+0,36
Опытная группа
1 сутки 18,44±1,12 8,16±0,69* 9,84+0,75 * 13,59+1,32 *"
3 сутки 12,14+0,94* 5,12±0,32* 7,60±0,57 * 8,73+0,58 *
7 сутки 7,22±0,71 4,02±0,27 8,02+0,77 4,87+0,67
10 сутки 6,22±0,95 3,23+0,34 5,07±0,44 5,14+0,41

(р<0,05); "-достоверность отличий от показателя с 24-часовым ЖП (р<0,05).

Полученные данные свидетельствуют, что в группе сравнения помимо

интенсивно протекающих процессов СРО имеет место и задержка выведения
гидрофобных токсинов. В пользу этого указывает наблюдаемая у животных
опытной группы уже на 3-й сутки нормализация МДА плазмы за счет
 12

детоксицирующих свойств натрия гипохлорита. В группе сравнения напротив

на 1-е сутки лечения отмечается недостоверный рост концентрации МДА
эритроцитов (р>0,05), в то время, как в опытной группе его рост был
достоверно значим относительно животных с 24-часовым желчным
перитонитом (р<0,05), что объясняется деблокирующим эффектом натрия
гипохлорита токсинов на мембранах эритроцитов. В дальнейшем происходит
снижение МДА, которое в 3-ей группе сравнения приходит к контрольным
цифрам на 30-сутки (р>0,05), а в 4-ой опытной - на 7-е сутки (р>0,05).
Таким образом, полученные результаты можно объяснить процессами
СРО, сопровождающиеся деструктивными изменениями белково-липидного
комплекса мембран эритроцитов с нарушением их транспортной
составляющей. Исходя из этого, становится понятно, почему в группе
сравнения нормализация показателей МДА эритроцитов происходит позже,
чем в основной группе.
Известно, что эндогенная интоксикация сопровождается повреждением
структурно-функциональной организации мембран клеток крови, что
подтверждается двукратный ростом количества 8Н-групп в плазме у
животных с 24-часовым ЖП по сравнению с контролем (р<0,05) (рис. 2). Не
исключено, что выход в 8Н-групп эта защитная реакция организма,
направленная на нейтрализацию АФК.

Рис. 2. Динамика 8Н-групп при лечении экспериментального желчного

перитонита.
 13

На 1-е сутки лечения в 3-ей фуппе сравнения содержание 8Н-фупп в

плазме уже не отличается от животных с 24-часовым желчным перитонитом
(р>0,05), в то время, как в 4-ой опытной группе оно было достоверно ниже
(р<0,05). В последующие сроки содержание 8Н-групп приходило к
контрольным цифрам в группе сравнения на 10-е сутки (р>0,05), а в опытной
группе на 7-е сутки (р>0,05). Лечебный эффект натрия гипохлорита, по-
видимому, можно объяснить окислением 8Н-групп в плазме.
Общеизвестно, что токсины сорбируются на гликокаликсе эритроцитов
для их доставки к органам детоксикации. Для определения степени
эндогенной интоксикации мы изучали ССЭ, которая у животных с
24-часовым желчным перитонитом снижалась в 1,8 раза относительно
контрольных данных (р<0,001) (рис. 3).

Е2Ха24-насЖП в фуппа сравнения

^Зопьп-наяфуппа ~ контрольная группа

Рис. 3. Динамика ССЭ при лечении экспериментального желчного

перитонита.

На фоне лечения в 3-ей группе сравнения в течение первых трех суток

заболевания наблюдается тенденция к росту ССЭ, которая однако остается
достоверно низкой относительно контрольных данных (р<0,05). В 4-ой
опытной фуппе уже на 3-й сутки ССЭ не отличается от исходных данных
(р>0,05), что объясняется, окислением НГХ элиминационного пула ВНСММ
и тем самым деблокированием мембран эритроцитов.
Несмотря на большое количество экспериментальных данных об
активации синтеза N0 эндотелиоцитами, нейтрофилами, моноцитами.
 14

тромбоцитами и клетками Купфера в условиях эндотоксинемии, остается

малоизученным вопрос синтеза N 0 при перитоните вообще и при желчном
перитоните в частности.
Так, у животных с 24-часовым экспериментальным желчным
перитонитом наблюдается рост содержания метаболитов N 0 плазмы 1,36 раза
относительно контроля (р<0,05) (рис. 4), как ответная реакция на боль. На 1-е
сутки лечения наблюдается дальнейший рост содержания N 0 . При этом в 3-
ей группе сравнения данный рост не превышает значения у животных с 24-
часовым желчным перитонитом (р>0,05), в то время как в 4-ой опытной
группе он был в 1,26 раза выше (р<0,05). В последующие сроки в группе
сравнения происходит снижение содержания N 0 , которое к 7-м суткам уже
не отличается от контроля (р>0,05). В опытной же группе продолжается его
рост, который достигает своего максимума на 3-й сутки, превышая в 1,32 раза
показатели животных с 24-часовым экспериментальным желчным
перитонитом (р<0,05) с последующим возвращением к контрольным данным
на 10-е сутки (р>0,05).

Рис. 4. Динамика содержания метаболитов N 0 плазмы при лечении

экспериментального желчного перитонита.

Таким образом, возможным механизмом нарушения метаболизма

оксида азота при желчном перитоните является повреждение мембран клеток
крови и дисфункция эндотелия, как отражение ССВР с нарушением
дисбаланса медиаторов. Не исключено, что рост метаболитов оксида азота в
 15

опытной группе животных имеет антитромбогенный механизм действия,

направленный на ингибирование экспрессии адгезивных молекул эндотелия.
Сосудисто-тромбоцитарное звено гемостаза представляет собой один из
этапов свертывающей системы крови, где происходит не только активация
тромбоцитов и образование фибрина, но и активация эндотелия и лейкоцитов.
Так, у животных с 24-часовым экспериментальным желчным
перитонитом обнаружено достоверное повышение количества тромбоцитов
до 301,28+36,04 хЮ'/л против 207,07+20,08 х 1 0 % в контрольной группе
(р<0,05), что является отражением активации сосудисто-тромбоцитарного
звена гемостаза за счет перераспределения тромбоцитов в сосудистом русле и
их участия в процессах воспаления и репарации.

На фоне проводимого лечения в исследуемых группах отмечается

достоверное снижение количества тромбоцитов относительно животных с 24-
часовым желчным экспериментальным перитонитом (р<0,05), которое в 3-ей
группе сравнения приходило к контролю на 3-й сутки, а в 4-ой опытной
группе только на 7-е сутки (р>0,05), что может свидетельствовать о скрытом
механизме действия натрия гипохлорита на красный костный мозг.
В ходе исследования у животных с 24-часовым экспериментальным
желчным перитонитом наблюдается укорочение времени агрегации
тромбоцитов до 8,83+0,65 сек против 12,54+0,82 сек в контроле (р<0,05)
(рис.6), что может быть результатом экспрессии адгезивных молекул
сосудистым эндотелием.
Анализ времени агрегации тромбоцитов в исследуемых группах на фоне
проводимого лечения показал достоверное удлинение времени агрегации
тромбоцитов (р<0,05) относительно животных контрольной группы, которое
в 3-ей группе сравнения приходило к исходным цифрам уже на 3-й сутки
(р>0,05), а в 4-ой опытной группе продолжалось до 7-х суток.
 16

20.0

ш
17,0

14,0

11,0

8,0

5,0

Е323 2 4 - ч а с Ж П Я ф у п п а сравнения
ГТуП опытная фуппа - контрольная фуппа

Рис. 6. Динамика времени агрегации тромбоцитов при лечении

экспериментального желчного перитонита.
При этом в фуппе сравнения удлинение времени агрегации может быть
связано с ростом концентрации метаболитов оксида азота тромбоцитов,
способных ингибировать агрегацию тромбоцитов, а в 4-ой опытной группе
агрегационная активность тромбоцитов была более низкой, как результат
взаимодействия метаболитов оксида азота с гипохлорит анионом {ОС1 ).
Таким образом, применение натрия гипохлорита при лечении
экспериментального желчного перитонита приводит к ингибированию
активности сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза в результате
взаимодействия метаболитов оксида азота с гипохлорит анионом, что
предотвращает риск развития ДВС-синдрома.
В патогенезе и морфогенезе желчного перитонита почкам отводится

главная роль.
Так, при исследовании препаратов почки у животных с 24-часовым
экспериментальным желчным перитонитом выявлены изменения,
характеризующиеся отеком межуточной ткани, лейкоцитарной
инфильтрацией, дистрофическими и некробиотическими изменениями
эпителиальных и соединительнотканных структур., полнокровием сосудов,
стазами, афегацией эритроцитов (рис. 7,а), эритроцитарными и гиалиновыми
тромбами (рис. 7, б).
 17

Рис. 7. Гистологическая (а) и гистохимическая (б) картина почек у животных

с 24-часовым экспериментальным желчным перитонитом. Ув. х280.
На 1-е сутки в группе сравнения наблюдались очаги кровоизлияния в
корковом слое почек, лейкоцитарная инфильтрация, ярко выраженная
гиалиново-капельная дистрофия эпителия канальцев и клубочков, в то время
как в опытной группе данные процессы были менее выраженными. В
исследуемых группах прогрессировали явления дистрофии стенок сосудов в
виде мукоидного и фибриноидного набухания, выполненных «зрелым»
фибрином с тенденцией к некробиозу в группе сравнения.
На 3-й сутки исследуемых фупп в почках сохранялась сосудистая
реакция на воспаление в виде полнокровия капилляров, стаза, агрегации
эритроцитов, очагов дистрофии и некробиоза эпителия канальцев и
клубочков (рис.8,а-б) с преобладанием процесса в группе сравнения (рис.8,6).

а б
Рис. 8. Гистологическая картина почек в группе сравнения (а) и в опытной
фуппе (б) на 3-й сутки при лечении экспериментального желчного
перитонита. Ув. х280.
 18

Гистохимически в просвете капилляров у животных фуппы сравнения

выявляются эритроцитарные, гиалиновые и фибриновые тромбы,
выполненные в основном «зрелым» фибрином (рис.9, а), в то время как в
опытной группе в основном «старым» фибрином (рис. 9, б).

а б
Рис. 9. Отложение «зрелого» и «старого» фибрина в капиллярах клубочков
почки в фуппе сравнения (а) и опытной группы (б) на 3-е сутки при лечении
экспериментального желчного перитонита. Ув. х280.

На 30-е сутки у животных фуппы сравнения в почках оставался слабо

выраженный отек, периваскулярная лимфогистиоцитарная инфильтрация
коркового слоя и очаговый фиброз (рис. 10, а), в то время как в опытной
группе наблюдалось практически полное восстановление морфрологической
структуры почки (рис. 10, б).

а б
Рис. 10. Гистологическая картина почек в группе сравнения (а) и в опытной
Фуппе (б) на 30-е сутки при лечении экспериментального желчного
перитонита. Ув. х280.
 19

При гистохимическом исследовании почек у животных в фуппе

сравнения определяются участки фиброза с активной коллагенезацией по
типу очагового нефросклероза с инкапсулированными фрагментами
«старого» фибрина (рис. 11, а), в то время, как в опытной фуппе отложение
«старого» фибрина отсутствует (рис. 11,6).

" 6
Рис. 11. Отложение «старого» фибрина в участках фиброза канальцев почки в
Фуппе сравнения (а) и его отсутствие в опытной фуппе (б) на 30-е сутки при
лечении экспериментального ЖП. Ув. х280.

Для подтверждения морфологических изменений в почках у животных с

экспериментальным желчным перитонитом проведены морфометрические
измерения СР и ОД «зрелого» фибрина.
Так, у животных с 24-часовым экспериментальным желчным
перитонитом выявлено достоверное увеличение СР «зрелого» фибрина до
1647,0±242,0 мкм' (р<0,001) и ОД до 63,2±2,0% (р<0,001) относительно
животных контрольной группы, что подтверждают наличие маркеров ДВС-
синдрома в микроциркуляторном русле почки.
На 1-е сутки лечения в фуппе сравнения наблюдался дальнейший
достоверный рост параметров СР и ОД «зрелого» фибрина относительно
показателей животных с 24-часовым экспериментальным желчным
перитонитом (р<0,05), в то время как в опытной фуппе рост параметров был
не достоверным (р>0,05). Полученные результаты свидетельствуют о
профессировании гемокоагуляционных расстройств на микроциркуляторном
 20

уровне почек в группе сравнения. Подобные морфометрические изменения в

Фуппе сравнения можно объяснить, продолжающейся экспрессией
эндотелиальными клетками адгезивных молекул, запускающих процесс
свертывания крови и блокаду растворения фибрина. В опытной же фуппе на
фоне комплексного применения натрия гипохлорита, изменения
морфометрических параметров были резко замедлены, что может быть
обусловлено прерыванием преобразования фибриногена в нерастворимый
фибрин натрия гипохлоритом за счет вступления его в реакцию
гидроксилирования с растворимыми фибрин-мономерными комплексами. В
последующие сроки в исследуемых фуппах отмечалось снижение параметров
СР и ОД «зрелого» фибрина относительно животных с 24-часовым
экспериментальным желчным перитонитом (р<0,05), которое было более
значимо в опытной фуппе. Эти данные согласуются с данными
гистохимических исследований, которые свидетельствовали о более раннем
купировании гемокоагуляционных расстройств у животных опытной фуппы.
Подтвержденный морфогистохимическими и морфометрическими
исследованиями положительный эффект комплексного применения натрия
гипохлорита при лечении экспериментального желчного перитонита нашел
подтверждение в двукратном снижении процента летальности животных в
опытной ф у п п е по сравнению с фуппой сравнения.

ВЫВОДЫ
1. Комплексное применение натрия гипохлорита при лечении
экспериментального желчного перитонита способствует ранней стабилизации
структурно-функциональной организации мембран клеток крови, что
проявилось увеличением сорбционной способности эритроцитов, снижением
суммарного содержания тиоловых ф у п п и падением активности трансаминаз
в крови.
2. В ходе комплексного применение натрия гипохлорита при лечении
экспериментального желчного перитонита происходит нормализация
 21

процессов первичной и вторичной липопероксидации на трое суток раньше,

чем в группе сравнения.
3. У животных с экспериментальным желчным перитонитом при
комплексном применении натрия гипохлорита наблюдается повышение
продукции метаболитов оксида азота, имеющие антитромбогенный механизм
действия, направленный на ингибирование экспрессии адгезивных молекул
эндотелия.
4. Применение натрия гипохлорита при лечении экспериментального
желчного перитонита приводит к ингибированию активности сосудисто-
тромбоцитарного звена гемостаза в результате взаимодействия метаболитов
оксида азота с гипохлорит анионом, что предотвращает риск развития ДВС-
синдрома.

5. Эффективность комплексного применения натрия гипохлорита у

животных с экспериментальным желчным перитонитом отражается в полном
восстановлении морфогистохимической структуры почек и
морфометрических параметров «зрелого» фибрина.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ НО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

*1. Боташев, A.A. Состояние мембран эритроцитов при экспериментальном
желчном перитоните / А.А.Боташев, О.А.Терещенко, М.А.Хасаева,
В.Н.Долгов, В.Е.Рыкунова, Э.А.Петросян // Кубанский научный медицинский
вестник. - 2010. - №3-4. - С. 36-39.
*2. Терещенко, O.A. Метаболические нарушения при экспериментальном
желчном перитоните / О.А.Терещенко, А.А.Боташев, В.Н.Долгов,
М.А.Хасаева, Э.А.Петросян // Кубанский научный медицинский вестник. -
2 0 1 0 . - № 3 - 4 . - С . 178-183.
3. Долгов, В.Н. Морфогистохимические изменения почек при
экспериментальном желчном перитоните / В.Н.Долгов, О.А.Терещенко,
А.А.Боташев, А.С.Багдасарьян, Э.А.Петросян // Гастроэнтерология Санкт-
Петербурга: Материалы 7-й научной сессии Института гастроэнтерологии и
клинической фармакологии СПбГМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург,
25-26 ноября). - 2010. - №4. - С. 9.
4. Долгов, В.Н. Морфометрические изменения параметров структур почек
при лечении экспериментального желчного перитонита / В.Н.Долгов,
 22

О.А.Терещенко, А.А.Боташев, А.С.Багдасарьян, Э.А.Петросян //

Гастроэнтерология Санкт-Петербурга: Материалы 7-й научной сессии
Института гастроэнтерологии и клинической фармакологии СПбГМА
им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 25-26 ноября). - 2010. - №4. - С. 9.
*5. Петросян, Э.А. Влияние натрия гипохлорита на некоторые звенья
гомеостаза при лечении экспериментального желчного перитонита /
Э.А.Петросян, В.В.Иванов, В.Н.Долгов, О.А.Терещенко, А.А.Ботащев //
Фундаментальные исследования. - 2010. - №11. - С. 98-103.
•6. Петросян, Э.А. Экстра- и интракорпоральная гемокоррекция синдрома
эндогенной интоксикации при желчном перитоните / Э.А.Петросян,
О.А.Терещенко, А.А.Боташев, В.Н.Долгов, М.А.Хасаева // Вестник
Российской военно-медицинской академии. - 2011. - № 1 . - С . 284-286.
7. Боташев, A.A. Состояние процессов про- и антиоксидантной системы
крови при желчном перитоните / А.А.Боташев, О.А.Терещенко,
Э.А.Петросян, М.А.Хасаева, В.Н.Долгов // XI съезд хирургов Российской
Федерации. Волгоград, 25-27 мая 2011 г. - Волгоград, 2011, С. 58.
8. Боташев, A.A. Интегральные показатели крови, характеризующие
состояние окислительного стресса при желчном перитоните / А.А.Боташев,
О.А.Терещенко, Э.А.Петросян, М.А.Хасаева, В.Н.Долгов // XI съезд хирургов
Российской Федерации. Волгоград, 25-27 мая 2011 г. - Волгофад, 2011, С.
58-59.
9. Петросян, Э.А. Лечение натрия гипохлоритом коагулопатических
нарушений при желчном перитоните / Э.А.Петросян, О.А.Терещенко,
А.А.Боташев, В.Н.Долгов, М.А.Хасаева // XI съезд хирургов Российской
Федерации. Волгоград, 25-27 мая 2011 г. - Волгоград, 2011, С. 274-275.
10. Петросян, Э.А. Комплексное лечение синдрома эндогенной интоксикации
при желчном перитоните / Э.А.Петросян, Ю.В.Помещик, О.А.Терещенко,
A.А.Боташев, В.Н.Долгов // Вестник хирургической гастроэнтерологии. -
2 0 1 1 . - № 3 . - С . 49-50.
11. Петросян, Э.А. Гемокоррекция синдрома эндогенной интоксикации при
желчном перитоните / Э.А.Петросян, О.А.Терещенко, А.А.Боташев,
B.Н-Долгов, М.А.Хасаева // Вестник хирургической гастроэнтерологии. -
2 0 1 1 . - № 3 . - С . 50-51.
опубликовано в журналах, входящих в перечень изданий, рекомендуемых
ВАК при Минобрнауки России для опубликования материалов докторских и
кандидатских диссертаций.
 23

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АЛТ - аланинаминотрансаминаз
АОС - антиоксндантная система
АСТ - аспартатаминотрансаминаза
АФК - активные формы кислорода
д в е - диссеминированный внутрисосудистын синдром свертывания
ДК -диеновые коньюгаты
ЖП - жёлчный перитонит
ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации
МДА - малоновый диальдегид
НГХ - натрия гипохлорит
ОД - объемная доля
ПОЛ - перекисное окисление липидов
СР - средний размер
СРО - свободнорадикальное окисление
ССВР - синдром системной воспалительной реакции
ССЭ - сорбционная способность эритроцитов
СТЗ - сосудисто-тромбоцитарное звено
N 0 - оксид азота
8Н - тиоловые группы
 долгов Владимир Николаевич

ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ ГИПОХЛОРИТА НА СОСТОЯНИЕ МЕМБРАН

КЛЕТОК КРОВИ И ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ
ПРИ ЖЕЛЧНОМ ПЕРИТОНИТЕ

Подл, в печать 14.05.2012 г. Бумага офсетная. Формат 60/84 1/16

Зак. № 127ЭКЗ . Усл. печ. лист 1,0. Тираж 100 экз.

Цех оперативной полиграфии СНИИЖК

г. Ставрополь, пер. Зоотехнический