Изучение использования ксилоолигосахаридов в качестве пребиотиков

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ
УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«ОРЛОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
имени И.С. ТУРГЕНЕВА»
ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА
по направлению подготовки 19.03.01 Биотехнология

(шифр, направление подготовки)
направленность (профиль) Промышленная биотехнология

(наименование направленности (профиля))
Студента Во Тхыонг Зием Фук шифр 151216

(фамилия, имя, отчество)
Институт естественных наук и биотехнологии

(наименование факультета (института))
Тема выпускной квалификационной работы

«Изучение использования ксилоолигосахаридов в качестве пребиотиков»
Студент Во Т.З.Ф.
(подпись) (ФИО)
Научный
руководитель Винокуров А.Ю.
Нормоконтроль Шаяпова Л.В.

Зав. кафедрой /РОП Кузнецова Е.А.

Орел 2019

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ
УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «ОРЛОВСКИЙ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
имени И.С. ТУРГЕНЕВА»
Институт естественных наук и биотехнологии

Кафедра промышленной химии и биотехнологии
Направление подготовки (специальность) 19.03.01 Биотехнология
Направленность (профиль) Промышленная биотехнология
УТВЕРЖДАЮ
Зав. кафедрой / РОП
_____________Е.А. Кузнецова
(подпись)
« » 2019 г.
ЗАДАНИЕ
на выполнение выпускной квалификационной работы
Студента Во Тхыонг Зием Фук шифр 151216

(фамилия, имя, отчество)
1. Тема выпускной квалификационной работы: Изучение использования

ксилоолигосахаридов в качестве пребиотиков
Утверждена приказом по университету от «____» ___________ 20__ г. № _____
2. Срок сдачи студентом законченной работы «____» _____________20__ г.
3. Исходные данные к работе: журнальные статьи, учебные и методические
пособия, патенты.
4. Содержание ВКР (перечень подлежащих разработке вопросов): анализ

условии для получения ксилана при переработке стержней початков кукурузы;
получение смеси ксилоолигосахаридов путем ферментативного гидролиза в разных
условиях; определение влияния смесей ксилоолигосахаридов на изменение
численности и активности пробиотических микроорганизмов
5. Перечень графического материала: актуальность; цель и задачи; методы
исследования; блок-схема этапов проведения исследования; результаты
исследования состава сырья, методов выделения и гидролиза ксилана, изучения
состава гидролизатов и их влияния на развитие пробиотических культур.__________
__

6. Консультанты по ВКР (с указанием относящихся к ним разделов)
Подпись, дата
Раздел Консультант
Задание выдал Задание принял
Аналитический
обзор литературы
Технологическая
часть
Демонстрационный
материал
Дата выдачи задания «___» ___________20__ г.

Научный
Задание принял к исполнению Во Т.З.Ф.______

КАЛЕНДАРНЫЙ ПЛАН
Срок выполнения этапов
Наименование этапов ВКР Примечание
работы
Аналитический обзор литературы
Технологическая часть
Демонстрационный материал
Студент Во Т.З.Ф.______
Научный

АННОТАЦИЯ
Выпускная квалификационная работа на тему «Изучение использования

ксилоолигосахаридов в качестве пребиотиков».
Год защиты: 2019.
Направление подготовки: 19.03.01 Биотехнология.
Студентка группы: 41-ПБ Во Т.З.Ф.
Руководитель: к.т.н., доцент Винокуров А.Ю.
Ключевые слова: пребиотик, ксилоолигосахариды, стержни кукурузных
початков, ферментативный гидролиз, пробиотик, бифидобактерии, лактобактерии.
Пояснительная записка выпускной квалификационной работы состоит из
введения, аналитического обзора литературы, раздела объектов и методов
исследования, экспериментальной части, выводов, списка использованных
источников, приложения.
Общий объем работы составляет 69 страниц. Работа содержит
10 рисунков, 16 таблиц. Список использованных источников включает 61
наименование.
Графическая часть выпускной квалификационной работы выполнена в
редакторе презентаций Power Point 2013 и включает схемы, таблицы, графики,
представленные на 22 листах формата А4.
Данная выпускная квалификационная работа прошла проверку в системе
«Антиплагиат.ВУЗ». Справка о результатах проверки текстового документа на
наличие заимствований представлена в Приложении 1.

5

Содержание
Введение ............................................................................................................................. 7
ГЛАВА 1 ПРЕБИОТИКИ: ПОНЯТИЕ, ВИДЫ, ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ... 10
1.1 Понятие «пребиотик»................................................................................................. 10
1.2 Характеристика важнейших олигосахаридных пребиотиков ................................. 15
1.2.1 Фруктоолигосахариды (ФОС) ................................................................................ 15
1.2.2 Галактоолигосахариды (ГОС) ................................................................................ 16
1.2.3 Ксилоолигосахариды ( КОС ) ................................................................................. 17
Выводы по главе 1 ............................................................................................................ 30
ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ............................................... 31
2.1 Объекты и материалы исследований ........................................................................ 31
2.2 Методы исследований................................................................................................ 33
2.2.1 Определение массовой доли влаги в стержнях кукурузных початков ............... 33
2.2.2 Определение содержания гемицеллюлозы и ксилана в стержнях кукурузных
початков ............................................................................................................................ 34
2.2.3 Определение условий выделения ксилана ............................................................ 36
2.2.4 Определение оптимального значения pH для выделения ксилана ..................... 37
2.2.5 Определение выхода ксилана при разных условиях выделения ......................... 37
2.2.6. Определение оптимального pH для проведения гидролиза................................ 38
2.2.7 Определение накопления редуцирующих сахаров феррицианидным
методом ............................................................................................................................ 38
2.2.8 Влияние времени и доза фермента на процессе гидролизa ................................. 39
2.2.9 Хроматографическое обнаружение смеси ксилоолигосахаридов ............. 40
2.2.10 Подготовка среды для культивирования пробиотических микроорганизмов . 41
2.2.11 Культивирование пробиотических микроорганизмов ....................................... 42
2.2.12 Определение концентрации клеток в среде, используя светопоглощающие
свойства клеточной культуры ......................................................................................... 42
6

2.2.13 Определение концентрация молочной кислоты и pH среды с культурой
бактерий ............................................................................................................................ 42
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ
АНАЛИЗ ........................................................................................................................... 44
3.1 Определение содержания гемицеллюлозы и ксилана в стержнях кукурузных
початков ............................................................................................................................ 44
3.2 Определение оптимального значения pH для выделения ксилана ........................ 46
3.3 Сравнение количества осадка, полученного при разных уровнях pH ................... 49
3.4 Построение калибровочный график для определения накопления редуцирующих
сахаров феррицианидным методом ................................................................................ 50
3.5 Определение оптимального pH для проведения гидролиза ................................... 51
3.6 Влияние продолжительности и дозы фермента на процесс гидролизa ................. 52
3.7 Хроматографическое обнаружение смеси ксилоолигосахаридов .......................... 54
3.8 Определение концентрации клеток в среде, используя светопоглощающие
свойства клеточной культуры ......................................................................................... 55
3.9 Определение концентрация молочной кислоты и pH среды с культурой
бактерий ............................................................................................................................ 57
Выводы по главе 3 ............................................................................................................ 60
ВЫВОДЫ ПО РАБОТЕ ................................................................................................... 62
Список использованной литературы ..................... Ошибка! Закладка не определена.
Приложение 1 70

7

Введение
Диета является важным фактором профилактики риска заболеваний для всех

групп населения. Появляются свидетельства того, что функциональные пищевые
ингредиенты могут оказывать влияние на ряд заболеваний и дисфункций кишечника,
связанных с изменением образа жизни и возраста. Выявление важности микробиоты
толстой кишки для здоровья и благополучия человека является крупным прорывом
как в медицинских исследованиях, так и в исследованиях в области питания.
Симбиоз между прокариотами и толстой кишкой все чаще признается в качестве
основного игрока в области здоровья и благополучия, и для достижения этой цели
была предложена концепция пребиотиков.
Ксилоолигосахариды имеют большой пребиотический потенциал и могут быть
включены во многие пищевые продукты. Ксилоолигосахариды демонстрируют
преимущества в качестве пребиотиков для различных видов животных, кишечный
тракт которых населен сложной бактериальной кишечной экосистемой.
Производство ксилоолигосахариды в промышленном масштабе осуществляется из
лигноцеллюлозных материалов, богатых ксиланом, химическими и
ферментативными методами. Последний является предпочтительным в пищевой
промышленности из-за отсутствия нежелательных побочных реакций и продуктов.
Сегодня ксилоолигосахариды предлагают новое измерение для разработки
функциональных продуктов. Одним из подходов, который может стать
приоритетным для будущих исследований, является сочетание пребиотиков и
пробиотиков (т.е. создание т.н. синбиотиков). В связи с этим существует важность
изучения синбиотических отношений между микробиотой толстой кишки,
пробиотиками (например, ксилоолигосахаридами) и физиопатологией всего тела.
8

Цель работы заключается в подборе условии для получения смеси
ксилоолигосахаридов при переработке стержней початков кукурузы, и оценке
влияния их на развитие некоторых пробиотических культур микроорганизмов.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
1) аналитический обзор литературы в области получения смеси
ксилоолигосахаридов и принципов их взаимодействия с микроорганизмами;
2) выбор объектов и методов исследования;
3) получение ксилана из природных объектов;
4) получение смеси ксилоолигосахаридов путем ферментативного гидролиза в
разных условиях;
5) определение влияния смесей ксилоолигосахаридов на изменение
численности и активности пробиотических микроорганизмов.
В качестве объектов исследования в работе выступали стержни кукурузных
початков, ферментные препараты ксиланазы, а также культуры пробиотических
микроорганизмов.
Предметом исследования является изучение использования смеси
ксилоолигосахаридов с повышенной эффективностью на развитие некоторых
пробиотических культур микроорганизмов.
Основными теоретическими методами исследования является анализ
литературных источников, изучение строения и свойств ксилоолигосахарид,
основные принципы получения и применения смеси ксилоолигосахаридов. В данной
работе использовали следующие методы экспериментального исследования:
оптическая микроскопия, спектрофотометрия тонкослойная хроматография,
потенциометрия.
Пояснительная записка содержит введение, 3 главы, 16 таблиц, 10 рисунков,
выводы по работе и список литературы, включающий 61 источник, из которых 55 –
иностранные.
9

Теоретическая значимость работы заключается в выявлении связи между
пребиотической активностью смеси ксилоолигосахаридов, условиями их получения
и молекулярной массой.
Практическая значимость заключается в подборе условий гидролиза ксилана,
выделенного из стержней початков кукурузы, для получения смеси
ксилоолигосахаридов с нужным уровнем пребиотической активности.
10

ГЛАВА 1 ПРЕБИОТИКИ: ПОНЯТИЕ, ВИДЫ,
ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ
1.1 Понятие «пребиотик»
Микробиота человека представляет собой сложную, динамичную экосистему

разнообразных микробов, охватывающую более 1000 видов бактерий, и тесно
переплетается с общим состоянием здоровья. Исследование пользы для здоровья,
связанной с приемом полезных бактерий, охватывает многие десятилетия.
Современные исследования позволили понять, как полезные бактерии
восстанавливают баланс микрофлоры ободочной кишки для улучшения здоровья
желудочно-кишечного тракта и, следовательно, для достижения других связанных со
здоровьем преимуществ.
В 1980-х годах японские исследователи уже продемонстрировали, что
определенные неперевариваемые олигосахариды (особенно фруктоолигосахариды)
избирательно ферментируются бифидобактериями и обладают способностью при
введении в рацион питания стимулировать их рост в фекалиях человека. Эти
наблюдения были подтверждены и далее расширены Гибсон и Роберфроид в 1995
году, которые представили концепцию пребиотиков, представляющие собой
«неперевариваемый пищевой ингредиент, который благотворно влияет на хозяина,
избирательно стимулируя рост и / или активность одной или ограниченного числа
бактерий в толстой кишке, и, таким образом, улучшая здоровье хозяина» [1].
Однако, поскольку научный и промышленный интерес увеличивался с годами,
пребиотическая природа была приписана многим компонентам пищи. Вот почему в
2004 году было сформулировано новое определение пребиотиков. Сегодня
пребиотик определяется как «избирательно ферментируемый ингредиент, который
допускает специфические изменения как в составе, так и / или в активности
микрофлоры желудочно-кишечного тракта, что приносит пользу благополучию и
здоровью хозяина» [1].
11

В России, в соответствии с ГОСТ Р 52349-2005, под термином «пребиотик»
понимают «физиологически функциональный пищевой ингредиент в виде вещества
или комплекса веществ, обеспечивающий при систематическом употреблении в
пищу человеком в составе пищевых продуктов благоприятное воздействие на
организм человека в результате избирательной стимуляции роста и/или повышения
биологической активности нормальной микрофлоры кишечника» [2].
Пребиотик обладает главной характеристикой – способностью противостоять
гидролизу в верхней части пищеварительного тракта, а затем подвергаться
ферментации в толстой кишке, что оказывает благоприятное влияние на состав ее
микробиоты и здоровье человека. Простое присутствие увеличенного числа
конкретного рода или вида микроорганизмов, или связанное с этим уменьшение
других микробов, может изменить коллективный иммуно-интерактивный профиль
микробиоты. Различные пребиотики могут стимулировать рост различных групп
кишечных бактерий. Пребиотики обладают огромным потенциалом для
модификации кишечной микробиоты, но эти модификации происходят на уровне
отдельных штаммов и видов и не могут быть легко предсказаны априори. Кроме
того, кишечная среда, особенно рН, играет ключевую роль в определении
результатов межвидовой конкуренции и зачастую определяет качественный состав
популяции микроорганизмов (рисунок 1).
12

Рисунок 1 – Качественный состав популяций микроорганизмов различных

отделов желудочно-кишечного тракта человека
Как по соображениям эффективности, так и безопасности, разработка

пребиотиков, предназначенных для улучшения здоровья человека, должна
учитывать весьма индивидуальные профили видов, которые могут быть получены.
Потребление пребиотиков в значительной степени влияет на состав кишечной
микробиоты и ее метаболическую активность. Это связано с модуляцией липидного
обмена, повышенной усвояемостью кальция, влиянием на иммунологическую
систему и модификацией функции кишечника [3, 4, 5].
При разработке каждого пребиотика проводят исследования:
 неперевариваемости в пищеварительной системe человека. Tестирование
пребиотической устойчивости к кислотности желудка, гидролизу ферментами
млекопитающих и желудочно-кишечной абсорбции. Методы in vitro включают
определение устойчивости к кислотным условиям и ферментативному (ферменты
слюны, поджелудочной железы и тонкого кишечника) гидролиз;
 ферментации кишечной микрофлорой. Для изучения ферментации
пищевых углеводов у человека используются два основных подхода. Первый
является косвенным и заключается в сборе воздуха для дыхания через регулярные
промежутки времени для измерения концентрации газов, в основном водорода, у
13

добровольцев, ранее получавших однократную пероральную дозу углевода. Другой
подход состоит в сборе фекалий после перорального кормления и измерении
восстановления тестируемого углевода;
 селективной стимуляции роста и / или активности кишечных бактерий.
Более значимым методом in vitro для изучения пребиотических олигосахаридов
является использование фекального образца, который гарантирует, что
репрезентативный спектр видов бактерий подвергается воздействию исследуемого
материала. Изучение изменений в популяциях отдельных родов или видов может
затем установить, является ли ферментация селективной. Использование кала,
вероятно, дает точное представление о событиях в дистальной части толстой кишки
[6].
Большинство идентифицированных пребиотиков представляют собой
углеводы различной молекулярной структуры. Здесь стоит отметить, что
«пребиотики» и «пищевые волокна» являются терминами, используемыми в
качестве альтернативы для пищевых компонентов, которые не перевариваются в
желудочно-кишечном тракте. Существенное различие между этими двумя
терминами заключается в том, что пребиотики ферментируются строго
определенными группами микроорганизмов, а пищевые волокна используются
большинством кишечных микроорганизмов. Поэтому, рассматривая один из
основных критериев классификации, оказывается, что альтернативное
использование этих терминов не всегда правильно. Пребиотики могут быть
пищевыми волокнами, но пищевые волокна не всегда являются пребиотиками [7].
На основании количества мономеров, связанных вместе, пребиотики могут
быть классифицированы как:
 мономерные (однозвеньевые молекулы);
 димерные (в молекуле присутствует два мономерных звена);
 олигомерные (в состав молекулы входит 2 – 10 звеньев);
 полимерные (более 10 звеньев).
14

Мономерные пребитики проявляют бифидогенное действие в ротовой полости
и пищеводе; димерные – в желудке и тонком кишечнике; олигомерные – в тонком
кишечнике и верхних отделах толстого кишечника; полимерные – на протяжении
всей толстой кишки.
Наиболее многообещающими и эффективными критериями для
классификации пребиотических веществ, о чем свидетельствуют исследования in
vitro и in vivo, являются олигосахариды, в том числе: фруктоолигосахариды (ФОС),
галактоолигосахариды (ГОС), ксилоолигосахариды (КOС), изомальтоолигосахариды
(ИМО). Олигосахариды и их производные стали полезными для применения в
здравоохранении в различных областях благодаря своей специфической
биологической активности. В пищевой промышленности нескольким
олигосахаридам уделяется все больше внимания в качестве ключевых компонентов
для функциональных пищевых продуктов и нутрицевтических продуктов.
Обширные исследования были проведены на различных типах
олигосахаридов-пребиотиков. Они отличаются по природе мономерных сахаров и
названы так. Они имеют различные источники происхождения и различаются по
своим преимуществам, предоставляемым потребителю (таблица 1).
Таблица 1 – Природные источники и процесс промышленного производства

пребиотического олигосахаридов
Процесс Ссылка на
Источники
Пребиотик Формула промышленного литературный
выделения
производства [11] источник
Спаржа, сахарная
Фруктоолиго- Синтез и
(Fr)n- свекла, чеснок, [8]
сахарид экстракция из
Glu лук, пшеница,
(ФОС) сахарозы
мед, ячмень и др.
15

Продолжение таблицы 1:
Процесс Ссылка на
Источники
Пребиотик Формула промышленного литературный
выделения
производства [11] источник
Галактоолиго- (Ga)n- Грудное молоко, Ферментативный
[9]
сахарид (ГOС) Glu коровье молоко. синтез из лактозы
Побеги бамбука,
початки
кукурузы,
Ксилоолиго-
багассы, Ферментативный
сахарид (Xy)n [10]
подсолнечник, гидролиз ксиланов
(КОС)
рисовые сомолы
и миндальная
скорлупа и др.
1.2 Характеристика важнейших олигосахаридных пребиотиков
1.2.1 Фруктоолигосахариды (ФОС)
Фруктоолигосахариды содержат 2-4 фруктофуранозных звена, связанных

-1,2-гликозидными связями, с концевым α-D-глюкозным остатком.
Разнообразные природные источники, такие как ячмень, помидоры, пшеница,
мед, лук, чеснок и банан, в различных концентрациях содержат ФОС. Ячмень и
помидоры содержат 0,15 % ФОС, банан и коричневый сахар содержат 0,30 % ФОС,
мед содержит 0,75 % ФОС [12].
Ранее известными преимуществами ФОС для здоровья были ингибирующее
действие на патогенные микроорганизмы и стимулирующее действие на
бифидобактерии. Дополнительный анализ ФOC подчеркнул его детальное
взаимодействие с бифидобактерии, что проложило путь к концепции синбиотиков
[12].
Фруктоолигосахариды имеют калорийность по сравнению с дозой сахара,
необходимой для достижения той же интенсивности сладкого вкуса. Эти соединения
16

обладают меньшей энергетической ценностью, чем сахарозы (сахароза – 3,86 ккал/г,
а ФОС – 2,5 ккал/г). Поэтому ФОС обычно используется для замены сахара.
1.2.2 Галактоолигосахариды (ГОС)
Галактоолигосахариды содержат 2-4 галактозильных звена, связанных

-1,6-гликозидными связями, и концевой α-D-глюкозный остаток.
Галактоолигосахариды содержатся в материнском молоке, коровьем молоке,
йогурте и, возможно, синтезируются из лактозы с участием -галактозидазы. ГОС в
материнском молоке могут достигать концентрации до 8-12 г/л, что в 100 раз больше,
чем в коровьем молоке, в основном состоящем из сиаловой кислоты,
N-ацетилглюкозамина, L-фукозы, D-глюкозы и D-галактозы. Одной из
характеристик олигосахаридов грудного молока является большое количество
галактозы [13].
Галактоолигосахариды может ферментироваться рядом кишечных бактерий,
включая бифидобактерии, бактериоиды, энтеробактерии и лактобациллы. Они
регулируют кишечную иммунную систему, укрепляют кишечный барьер, подавляют
адгезию патогенных микроорганизмов; и предотвращают инфекции и рак, улучшают
усвоение минералов [14].
Галактоолигосахариды стабильны в широком диапазоне pH и температур и
подходят для нескольких применений в пищевой, кормовой и фармацевтической
промышленности. Детское и гериатрическое питание предлагают наиболее
перспективные возможности для приложений ГOС. Добавки для детского питания
обычно содержат от 6,0 до 7,2 г/л ГOС вместе с 0,6 до 0,8 г/л ФOC.
Галактоолигосахариды – это безопасные и хорошо переносимые ингредиенты при
потреблении не более 20 г в день [15].
Галактоолигосахариды обладают и рядом технологических свойств. Так, из-за
их высокой способности удерживать влагу предотвращается чрезмерная сушка
17

продукта, что может быть использовано, например, для придания хлебу лучшего
вкуса и текстуры. Специализированные продукты питания для пожилых и
госпитализированных людей также являются перспективными областями
применения ГOC [16].
В последние годы, КOС становятся потенциальным новым источником
пребиотиков, которые могут использоваться в качестве функциональных
ингредиентов в пищевых продуктах. Из появляющихся пребиотических
олигосахаридов, КOС привлекает все больший интерес из-за их влияние на
состояние здоровья, физико-химических и технологических свойств.
1.2.3 Ксилоолигосахариды ( КОС )
1.2.3.1 Источники КОС
Ксилоолигосахариды могут быть получены из ксилансодержащих

гемицеллюлозных материалов, состоящих из ксилозных звеньев. Гемицеллюлоза
представляет собой особый растительный класс полисахаридов. Вместо того, чтобы
быть типичным гомополимером, где звенья повторяются снова и снова,
гемицеллюлоза является гетерополимером. У него случайная аморфная структура.
Он состоит из нескольких типов моносахаридов, а не одного, как это имеет место в
случае крахмала или целлюлозы. Вместе с гемицеллюлозой, целлюлоза и лигнин
составляют основной материал, составляющий растения, называемый
лигноцеллюлозой. Компоненты лигноцеллюлозы образуют структуру, называемую
микрофибриллой, которая образует волокна, которые способствуют структурной
стабильности стенок растительных клеток (рисунок 2). 25-30 % органического
вещества однолетних растений представлено гемицеллюлозами [17].
18

Рисунок 2 – Структура лигноцеллюлозной биомассы содержат целлюлозы,

гемицеллюлозы и лигнина
Гемицеллюлоза широко распространена среди растений с различными

полисахаридами на твердой (глюкуроноксилан и глюкоманнан) и мягкой древесине
(галактоглюкоманнан и арабино-глюкуроноксилан). Мономерные звенья включают
звенья ксилозы, маннозы, галактозы, рамнозы и арабинозы. Различные полимеры
гемицеллюлозы включают: ксилан, глюкуроноксилан, арабиноксилан, глюкоманнан
и ксилоглюкан (рисунок 3) [18].
Рисунок 3 – Модель расположения полисахаридных компонентов

гемицеллюлоз в первичной оболочке клеточной стенки растительной клетки
19

Больше всего в составе гемицеллюлоз растений содержатся ксиланы.
Содержание ксиланов в древесине цветковых растений обычно составляет 10-35 %
от общего количества гемицеллюлоз, а в древесине голосеменных растений
10-15 %. Основа ксилана состоит из ксилозы, связанной β-1,4-связями с группами
арабинозильной, уроновой кислотами и ацетильными группами (рисунок 4).
Наличие этих боковых групп приводит к разветвленной КОС с различными
биологическими свойствами. Ксилоза составляет в среднем более 70 % в ксилане, с
указанным диапазоном от 43 до 93 % [19].
а) глюкуроноксилан (в твердой древесине); б) арабино-глюкуроноксилан

(в мягкой древесине)
Рисунок 4 – Структура ксилана
В зависимости от различных источников ксилана, используемых для

производства КOС, структуры КOС различаются по степени полимеризации,
мономерным единицам и типам связей. КОС – это олигомеры, состоящие из
ксилозных звеньев. Количество остатков ксилозы, участвующих в их образовании,
может варьироваться от 2 до 10 (рисунок 5). Для пищевых применений ксилобиоза,
ксилотриоза, ксилотетраоза (степени полимеризации составляет 2-5) считается
ксилоолигосахаридом [20].
20

где n = 0 – Ксилозы ( Х1 ); n = 1 – Ксилобиозы ( Х2 ); n = 2 – Ксилотриозы ( Х3 );

n = 3 – Ксилотетраозы ( Х4 ); n = 4 – Ксилопентаозы ( Х5 )
Рисунок 5 – Структура КOС
Кислоолигосахариды естественным образом присутствуют во фруктах, овощах,

бамбуке, меде и других растениях. КОС могут производиться в промышленных
масштабах из богатых ксиланом сельскохозяйственных отходов материалов, как
початки кукурузы, багассы, кукурузные стебли, подсолнечник, рисовые сомолы и
миндальная скорлупа. Особый интерес представляют источники остаточного
происхождения, такие как лесные или промышленные отходы лигноцеллюлозного
характера. Переработка остаточной растительной биомассы в качестве сырья дает
экономические и экологические преимущества, поскольку она является
биовозобновляемым, широко распространенным и обильным ресурсом [21].
Большая часть сельскохозяйственных отходы как початки кукурузы, багасса из
сахарного тростника, пшеничные и рисовые соломы стали самыми выгодными
материалями для производства КОС. Каждый год примерно 730 миллионов тонн
рисовой соломы, 350 миллионов тонн пшеничной соломы, 200 миллионов тонн
багасса и 180 миллионов тонн багассы из сахарного тростника производятся во всем
мире [22]. Азия является основным производителем солома риса и солома пшеницы,
а солома кукурузы и жмых – в основном производится в Америке (таблица 2). Они
также различаются по химическому составу (таблица 3), причем основным
компонентом являются целлюлоза, гемицеллюлоза и лигнин.
21

Таблица 2 – Количество сельскохозяйственных отходов (млн. тонн) в год,
производимых во всем мире
Континенты
Африка Азия Европа Америка Океания Ссылка
Cырье
Рисовая солома 20,9 667,6 3,9 37,2 1,7
Пшеничная солома 5,34 145,20 132,59 62,64 8,57
Стержни початков [23]
0,00 33,90 28,61 140,86 0,24
кукурузы
Багассы из
сахарного 11,73 74,88 0,01 87,62 6,49
тростника
Таблица 3 – Химический состав сельскохозяйственных отходов

Химический
состав Целлюлоза, % Гемицеллюлоза, % Лигнин, % Ссылка
Сырье
Рисовая солома 32 – 47 19 – 27 5 – 24
Пшеничная
35 – 45 20 – 30 8 – 15
солома
[24]
Стержни
початков 40 25 8,2
кукурузы
Багассы из
сахарного 65 18,4
тростника
Cельскохозяйственные отходы являются возобновляемыми, менее

дорогостоящими и широко доступны в природе. Сельскохозяйственные отходы не
требуют отдельных потребностей в земле, воде и энергии. Для экономически
целесообразного производства КОС необходимо преодолеть несколько препятствий.
Это относится к трем основным аспектам: сырье, технология конверсии и процесс
гидролиза. Что касается сырья, основными препятствиями являются стоимость,
поставки, заготовка и обработка. Что касается технологии конверсии, препятствиями
являются обработка биомассы, правильная и экономически эффективная технология
22

предварительной обработки, позволяющая высвобождать целлюлозу и
гемицеллюлозу из их комплекса с лигнином. В отношении процесса гидролиза
задача состоит в том, чтобы создать эффективный способ деполимеризации
гемицеллюлозы с получением олигосахаридов. В этом аспекте ферментативный
гидролиз может быть наиболее эффективным альтернативным процессом
осахаривания сложного полимера.
1.2.3.2 Разложение КОС пробиотическими микроорганизмами
Контролируемое введение КОС в рацион питания может помочь сдерживать

рост патогенных бактерий, предотвращать нарушения, вызванные путем
несбалансированной ферментации в толстой кишке, и избегать кишечных
расстройств, таких как запор, воспалительные болезни кишечника, диарея и гастрит.
Потребление КOС было признано высокоэффективным для уменьшения острых
запоров у беременных без побочных эффектов. Питательные детские смеси,
содержащие КОС, как утверждается, имеют синергетический эффект по всему
кишечному тракту. КОС можно смешивать с другими пребиотиками для достижения
синергетического эффекта или использовать для изготовления синбиотических
препаратов вместе с пробиотическими микроорганизмами [25].
Ферментативные свойства различных олигосахаридов были изучены, в том
числе КОС, фекальными бактериями здоровых свиней. Изученные субстраты
включали коротко-, средне- и длинноцепочечные ФOС, соевые растворимые
вещества, гранулированные и жидкие формы трансгалактоолигосахаридов,
глюкоолигосахариды, маннанолигосахариды и КОС. Все исследованные
олигосахариды были легко ферментируемыми, но различались по количеству и типу
получаемых короткоцепочечных жирных кислот. Общая продукция их была самой
высокой для КОС и наименьшей для маннанолигосахаридов [26, 27].
23

Основной пребиотический эффект КOС, то есть продвижение роста
пробиотиков, впервые был исследован Oказаки [28]. Показано, что B. adolescentis,
B. bifidum, B. infantis, B. longum, L. casei и L. acidophilus более эффективно растут на
ксилозе, ксилобиозе и ксилотриозе, чем на других источниках углерода. Ли
исследовали in vitro рост 35 штаммов рода бифидобактерии в средах, содержащих
различные количества КOС, и продемонстрировали, что КOС стимулирует
кишечные бифидобактерии [29].
Бифидобактерии могут потреблять КОС и ФОС для производства лактата и
короткоцепочечных жирных кислот, таких как ацетат, бутират и пропионат.
Создание короткоцепочечных жирных кислот снижает рН в кишечнике и считается
механизмом, который считается полезным для бифидобактерий по сравнению с
другими бактериями в кишечнике. При сравнении двух групп мышей,
использующих КОС и ФОС, было обнаружено, что группа КОС имела более
толстую кишечную стенку, большее количество фекалий и большее количество
популяций бифидобактерий. Причина в том, что бифидобактерии использовали КОС
более эффективно. Это открытие также предполагает, что добавки олигосахаридов,
особенно КОС, могут изменять бактериальные популяции и метаболические
свойства кишечных бактерий, тем самым изменяя функции кишечника и
способствуя устойчивости к кишечным заболеваниям [19].
Способность ферментировать КОС варьируется в зависимости от штамма
бактерий. Исследование Kонтула показал, что Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus
plantarum и Lactobacillus lactis имеют одинаковую способность использовать КОС и
олигосахариды из отрубей овса. Все три вида бактерий используют ГОС, в то время
как только L. plantarum может использовать КОС [30].
24

1.2.3.3 Основные биологические свойства КОС
Антимикробная активность КОС. L. plantarum 0407 и Lactobacillus pentosus 905

в сочетании с ФОС, инулином, КОС были эффективными в ингибировании роста E.
coli и Salmonella enteritidis. Оказалось, что антимикробный потенциал каждого из
используемых пробиотиков зависит от источника углеводов. ФОС, инулин, КОС и
их смеси вызывали большее ингибирование, чем лактулоза, лактит, крахмал и
декстран [31]. В дополнение, кислые КОС были получены из ксилана березы и
протестированы на воздействие на грамположительные и грамотрицательные
аэробные бактерии, а также на Helicobacter pylori [32]. Установлено, что
сульфатированные ксилогалактаны, полученные из Nothogenia fastigiata, и
ксиломаннан из водорослей обладают противовирусной активностью в отношении
вирусов простого герпеса типов 1 и 2 [33].
Противораковая активность КОС. In vitro фракция ксилозы, КОС и
водорастворимого лигнина обладает цитотоксическим действием и снижает
жизнеспособность клеточных линий лейкемии, полученных при остром
лимфобластном лейкозе [34].
Другие эффекты для КОС включают антиоксидантную активность
(присуждаемую фенольными заместителями) [35], связанные с кровью и кожей
эффекты, противоаллергические, противоинфекционные и противовоспалительные
свойства, иммуномодулирующее действие, антигиперлипидемические эффекты [36]
и косметические и целый ряд других свойств. Эти свойства в основном связаны с
кислыми олигосахаридами, содержащими уроновые заместители, которые могут
быть получены из древесины лиственных пород путем сочетания ферментативной и
/ или химической обработки.
25

1.2.3.4 Основные принципы получения КОС
Процесс предварительной обработки. Предварительная обработка необходима

для удаления/ модификации лигнина в лигноцеллюлозе и для получения сахаров из
целлюлозы или гемицеллюлозы. Предварительная обработка может действовать
путем изменения структурных факторов или химического состава биомассы, помимо
увеличения площади поверхности, облегчая доступность лигноцеллюлозного
компонента [37].
Способ извлечения гемицеллюлозы зависит от цели и области применения.
Выбор метода экстракции должен основываться на желательных конечных
характеристиках гемицеллюлозы. Учитывая восстановление гемицеллюлозы на
основе полисахаридной или моносахаридной формы, можно успешно применять
концепции щелочных или кислотных процессов. Экстракция гемицеллюлозы в
кислой среде приводит к конечному продукту на основе моносахаридов и
олигосахаридов. Кислая среда приводит к низкому выходу КOС и высокому выходу
ксилозы. С другой стороны, экстракция гемицеллюлозы щелочными растворами
ведет к получению конечного продукта на основе полисахаридов с высокой
степенью полимеризации. Щелочные экстрагированные гемицеллюлозы требуют
второй стадии производства КOС, которая может представлять собой кислотный или
ферментативный гидролиз [38].
Щелочная экстракция разрушает клеточную стенку, разрушая компоненты
макромолекулы, в результате чего ксилан и лигнин растворяются. В реакции обычно
используют достаточно концентрированные раствора NaOH, KOH, Ca(OH)2, NH3, а
также окислители, например H2O2 в щелочной среде. Эффективность
солюбилизации ксилана зависит от содержания лигнина в биомассе. Щелочное
действие связано с омылением сложноэфирной связи, отделяющей гемицеллюлозу
от лигнина и высвобождающей уроновую и уксусную кислоту. Кроме того,
предварительная обработка биомассы раствором NaOH вызывает набухание
26

структуры целлюлозы и, соответственно, увеличивает площадь поверхности [39].
Эта увеличенная структура облегчает диффузию воды, которая нарушает
взаимодействие между лигнином и углеводами. Результатом является снижение
кристалличности и разрыв лигнина, который растворим в этих условиях. По
сравнению с кислотной предварительной обработкой щелочные методы имеют то
преимущество, что удаляют лигнин без разрушения других компонентов, как
правило, из-за более мягких условий процесса, которые могут проводиться даже при
комнатной температуре [40].
Ферментный гидролиз. Ксилан является желательным веществом,
используемым для процессов ферментативного гидролиза для восстановления КОС с
различной степенью полимеризации. Но комплекс «ксилан-лигнин» естественно
устойчив к действию ферментов, поэтому современные коммерческие процессы
обычно проводят в две стадии: (1) щелочная экстракция; (2) последующий
ферментативный гидролиз. Процесс кислотного гидролиза требует контролируемой
среды для работы, а также ведет к образованию некоторых нежелательных веществ,
таких как моносахариды и фурфурол. В целом, ферментативный гидролиз является
широко изученным процессом, так как этот тип гидролиза характеризуется
специфичностью реакции и отсутствием побочных продуктов, поскольку реакции
протекают мягко и нет необходимости в высоких давлениях или температурах.
Однако ферментативные методы обычно требуют гораздо более длительного
времени реакции, чем кислотный гидролиз. Кроме того, ксиланаза с различной
специфичностью к субстрату дает различные конечные продукты гидролиза, и
контроль производства КOС с желаемым диапазоном степени полимеризации может
быть более сложным.
Эндо-β-1,4-ксиланазы (ЕС 3.2.1.8) являются ключевыми ферментами в
деградации ксилана [41]. На основании сходства последовательностей и анализа
гидрофобных кластеров ксиланазы были классифицированы на семейства 10 (или F)
и 11 (или G) гликозилгидролаз [42]. Ферменты, принадлежащие к семейству 10,
27

проявляют большую каталитическую гибкость и расщепляют гликозидные связи в
основной цепи ксилана ближе к заместителям боковой цепи, чем эндоксиланазы
семейства 11 [43].
Бактериальные эндо-β-1,4-ксиланазы часто продуцируются рекомбинантно, и
гены в основном были получены из грамположительных бактерий,
классифицированных под типом Firmicutes и Actinobacteria. Ферменты, полученные
из Firmicutes, обычно включают кандидатов из классов Bacilli (Bacillus aerophilus,
B. halodurans, B. mojavensis, B. licheniformis, B. subtilis, Geobacillus
thermodenitrificans и G. thermoleovorans) и Clostridia (Clostridium thermocellum).
Кандидаты от Actinobacteria в основном происходят от рода Streptomyces
(Streptomyces rameus, S. halstedii, S. matensis, S. olivaceovirides) [44].
Важные факторы влияли на выход продукции КОС, такие как pH, температура,
время, доза фермента. В частности, факторы pH и температуры гидролиза зависят
главным образом от свойств используемых ферментов. Каждый фермент действует
оптимально при определенной температуре и pH. Bо время осахаривания регулирует
трехмерную структуру активных центров фермента и образование комплекса
фермент-субстрат. Большинство исследований ферментативного гидролиза
проводилось при 45-55 оС, и рН находится в диапазоне от 4,0 до 8,0.
Время гидролиза и доза фермента являются важными факторами,
непосредственно влияющими на выход продукции КОС. Повышение концентрации
фермента от 2 до 200 единиц активности значительно увеличивает содержание
редуцирующих сахаров после гидролиза [45], что означает, что концентрация
фермента увеличилась, что привело к увеличению выхода КОС. Время гидролиза
будет определять полученный продукт КОС с желаемым диапазоном степени
полимеризации. Сущность этого процесса: ксилан расщепляется до олигомеров
сначала с более высокой степенью полимеризации и затем образует олигомеры с
более низкой степенью полимеризации. Это ясно указывает на то, что по мере
увеличения времени реакции образующийся КОС гидролизуется на ксилозу и
28

олигосахариды более низкой степени полимеризации. Поэтому необходимо
сбалансировать эти две величины, отслеживать и анализировать результаты для
получения желаемой КОС.
Исследования с различными методами экстракции и последующим гидролизом
показали максимальную концентрацию КОС 7,5 г/л с использованием
2 %-ного раствора гемицеллюлозы, полученной из жома, 120-500 ед/г ксиланазы в
течение 48-72 ч [46]; 5,7 г/л КОС через 96 ч, 60 ед/г с использованием
2,6 % гемицеллюлозы [47] и 1,7 г/л через 8 ч [48]. Производство КОС с другими
субстратами достигло максимальной производительности с кукурузным початком,
5,8 г/л через 24 часа [49] и 6,7 г/л через 8 часов [50].
1.2.3.5 Применение КОС
Растущий спрос на функциональные продукты питания и потенциал для

разработки продуктов открывают многообещающие рынки для КОС во многих
областях, включая продукты питания и корма, сельскохозяйственные и
фармацевтические применения.
Кислоолигосахариды используются в сочетании с соевым молоком,
безалкогольными напитками, чаем или напитками какао, питательными препаратами,
молочными продуктами, конфетами, пирожными, печеньем, выпечкой, пудингами,
желе, джемом и медовыми продуктами, а также специальные препараты для
здорового питания для пожилых людей и детей. Содержание влаги, pH, кислотность
и общее содержание твердых веществ были изучены, и на эти характеристики
существенное влияние оказало использование стабилизатора и скорости введения
КОС. Результаты также показали, что добавление КОС до 3,5 % не влияло на вкус и
общую приемлемость [51].
Комбинация пробиотиков и пребиотиков в одном и том же синбиотическом
продукте повышает жизнеспособность пробиотических бактерий, поскольку
29

специфический субстрат поставляется с ними для ферментации и роста и имеет
высокую полезную ценность, что гораздо удобнее для потребителей. В настоящее
время тенденции использования синбиотиков начинают развиваться благодаря
подтверждению эффективности и безопасности этого продукта. Комбинация КОС и
производных пробиотиков на сегодняшний день является одним из перспективных
направлений исследований. Исследование и создание этого нового синбиотического
продукта для внутреннего рынка пищевых добавок с целью повышения
эффективности и потребительской ценности за счет использования дешевого,
безопасного и обильного источника сырья с разумной ценой, подходящего для
потребителей и применимого как в сфере здравоохранения, так и в пищевой
промышленности, является весьма актуальной задачей.
Сообщалось, что КОС обладают иммуномодулирующей, противораковой,
антимикробной и другими видами биологической активности, такими как
антиоксидантная, антиаллергическая, противовоспалительная,
антигиперлипидемическая, а также множеством других свойств. КОС используются
при приготовлении микро- или наночастиц и гидрогелей для доставки лекарств и
лечения, особенно при профилактике желудочно-кишечных расстройств [52].
Помимо пищевых и фармацевтических применений эфиры и сложные эфиры были
получены из ксилана и КОС с высокой молярной массой и находят применение в
качестве термопластичных соединений для биоразлагаемых пластиков,
водорастворимых пленок, покрытий, капсул и таблеток и для приготовления также
хитозан – ксилановые гидрогели [53,54,55].
Помимо биологического воздействия на здоровье человека, КОС
использовались для кормления. Имеются сообщения о применении КОС в сельском
хозяйстве в качестве дозирующего агента, стимулятора роста или ускорителя и
усилителя урожайности в ограниченном количестве. КОС используется в качестве
корма для домашних животных и рыб, что также было заявлено ФАО [56].
30

Выводы по главе 1
Ксилоолигосахариды имеют большой потенциал в качестве агентов для

поддержания и улучшения сбалансированной кишечной микрофлоры для улучшения
здоровья и благополучия. КОС может быть включен во многие продукты питания.
Наблюдения, сделанные в этом обзоре, и опубликованная информация о пищевых,
физиологических и микробных преимуществах КОС дают четкое направление для
будущих исследований.
Имеющиеся экспериментальные данные подтверждают гипотезу о том, что
КОС и другие пребиотики могут дать возможность предотвратить или смягчить
желудочно-кишечные расстройства. Хотя обнадеживающие результаты были
получены для других пребиотиков в предварительных клинических испытаниях,
данные по КОС ограничены. Необходимы дополнительные исследования для
дальнейшего выяснения механизмов, участвующих в снижении риска развития рака,
а также в отношении эффектов КОС, потенцирующих химиотерапию и/или
радиотерапию рака.
В настоящем исследовании четко отражается потенциал
сельскохозяйственных отходов для производства КОС. Переработка остаточной
растительной биомассы в качестве сырья дает экономические и экологические
преимущества, поскольку она является биовозобновляемым, широко
распространенным и обильным ресурсом. Однако пребиотический эффект КОС
может зависеть от источника выделения и технологии получения.
Для удовлетворения потребности приложения и экономически
целесообразного производства КОС необходимо преодолеть несколько препятствий,
особенно в технологии производства. Предположительно, механизм гидролиза и
состав продуктов зависит от конкретного ферментного препарата.
31

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Объекты и материалы исследований
В качестве объектов исследования в работе были использованы:

– стержни кукурузных початков;
– фермент ксиланаза Панзэа ВG (производитель Novozymes (Дания)).
Гидролизирует (1,4)-бета-D-гликозидные связи в ксиланах. Заявленная активность:
235 NXU/r. Цвет: желтоватый. Физическая форма: гранулят. Штамм-продуцент:
Bacillus licheniformis;
– фермент ксиланаза (производитель Микробиопром (Россия)).
Гидролизирует (1,4)-бета-D-гликозидные связи в ксиланах. Заявленная активность:
10000 единиц/г. Цвет: желтый. Физическая форма: гранулят;
– ксилоза (производитель – Диаэм). Квалификация: extra Pure. Вид: белый
кристаллический порошок;
– бифидубактерин (производитель Экополис). Групповое или
международное непатентованное название: бифидобактерии бифидум. Состав: одна
доза препарата содержит живых бифидобактерий не менее 107. Описание:
кристаллическая или пористая масса с возможным расслоением биомассы в верхней
части, бежевого или беловато-серого цвета, со специфическим запахом;
– лактобактерин (производитель Микроген). Групповое или
международное непатентованное название: Lactobacillus plantarum 8P-A3 или
Lactobaccillus fermentum 90T-C4. Состав: одна доза препарата содержит живых
лактобактерий не менее 2∙109. Описание: кристаллическая или пористая масса
желтовато-бежевого или беловато-серого цвета со специфическим запахом.
32

Исследования в данной работе проводили согласно схеме, представленной на
рисунке 6.

Аналитический обзор литературы

Выбор источники ксилана Выбор технологии получения КОС

Изучение процесса выделения

ксилана Изучение свойств

ферментативных препаратов

Определение содержания
гемицеллюлозы и ксилана
Изучение скорости
гидролиза
Влияние рH на осаждение
ксилана

Изучение состава
Определение выхода
гидролизата
ксилана

Выбор оптимальных условий для получения КОС

Изучение пребиотической активности КОС

Влияние на
Влияние на лактобактерии
бифидобактерии

Определение Определение
концентрации клеток в концентрации Определение pH
среде молочной кислоты

Рисунок 6 – Схема экспериментальных исследований

33

2.2 Методы исследований
2.2.1 Определение массовой доли влаги в стержнях кукурузных початков
В соответствии с рекомендациями ГОСТ 7698-93 [57], процесс анализа

включал следующие этапы:
– в предварительно высушенную до постоянной массы и взвешенную
бюксу вносили навеску измельченных стержней кукурузных початков массой около
4 г, взятую с точностью до 0,001 г;
– при достижении в сушильном шкафу температуры 105 оС открытую
бюксу с навеской помещали в шкаф и сушили в течение 3 ч. Началом сушки
считали момент достижения вновь температуры 105 оС после внесения бюксы в
шкаф;
– по истечении 3 ч бюксу закрывали крышкой и помещали в эксикатор на
30 мин для охлаждения, а затем взвешивали;
– зафиксировав первое взвешивание, бюксу с навеской помещали в
сушильный шкаф на 30 мин, охлаждали в эксикаторе и снова взвешивали.
Высушивание навески повторяли до тех пор, пока результат последнего
взвешивания практически не будет отличаться от предыдущего.
Массовую долю влаги (W, %) вычисляли по формуле (1):
где – масса бюксы, г;

– масса бюксы с крахмалом до высушивания, г;
– масса бюксы с крахмалом после высушивания, г.
34

2.2.2 Определение содержания гемицеллюлозы и ксилана
в стержнях кукурузных початков
Метод основывается на объединении известной схемы разделения углеводов

по Бэйли, заключающейся в последовательной экстракции растительного сырья
растворителями разной природы, позволяющей более или менее избирательно
выделять необходимые классы углеводного комплекса, и спектрофотометрического
метода Дрейвуда [58].
Объединение спектрофотометрии и гравиметрии в данном случае выгодно
отличает данную методику от остальных, так как позволяет определять только
содержание углеводов в исследуемых образцах.
Процесс анализа включал следующие этапы:
– около 2,0 г измельченных стержней кукурузных початков помещали в
колбу со шлифом, приливали 70 мл 80 %-ного спирта этилового, закрывали
обратным холодильником и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч.
Экстрагирование повторяли в тех же условиях еще два раза;
– остаток сырья после спиртовой экстракции извлекали водой очищенной
(2×100 мл, 100 оС, 1 ч);
– остаток сырья после водной экстракции обрабатывали смесью 0,5 %-ных
растворов кислоты щавелевой и аммония оксалата (1:1; 3×80 мл, 100 оС, 1,5 ч);
– остаток сырья обрабатывали 5 %-ным раствором калия гидроксида
(3×80 мл, 18-21 оС, 4 ч);
– извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 200 мл и доводят
до метки тем же экстрагентом (раствор А);
– 2 мл раствора А переносили в центрифужную пробирку, приливали 8 мл
95 %-ного спирта этилового, перемешивали и нагревали на кипящей водяной бане в
течение 10 мин. После охлаждения содержимое пробирки центрифугировали в
течение 10 мин со скоростью вращения 3000 об/мин. Надосадочную жидкость
35

сливали, а осадок продували в пробирке горячим воздухом до удаления следов
этанола. К осадку приливали 4 мл 0,2 %-ного раствора антрона в кислоте серной
концентрированной, нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 мин.
Содержимое пробирки после охлаждения переносили в мерную колбу вместимостью
25 мл 95 %-ным спиртом этиловым и доводят до метки тем же растворителем
(раствор Б). Раствор Б – раствор гемицеллюлоз;
– 1 мл раствора А переносили в центрифужную пробирку, приливали 2 мл
5 %-ной кислоты серной, перемешивали и нагревали на кипящей водяной бане в
течение 5 мин. После охлаждения содержимое пробирки центрифугировали в
течение 10 мин со скоростью вращения 3000 об/мин. Надосадочную жидкость
сливали, а осадок продували в пробирке горячим воздухом до удаления следов
этанола. К осадку приливали 4 мл 0,2 %-ного раствора антрона в кислоте серной
концентрированной, нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 мин.
Содержимое пробирки после охлаждения переносили в мерную колбу вместимостью
25 мл 95 %-ным спиртом этиловым и доводят до метки тем же растворителем
(раствор В). Раствор В – раствор ксилана.
Оптическую плотность растворов Б и В измеряли на спектрофотометре при
длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения
использовали 4 мл 0,2 %-ного раствора антрона в кислоте серной
концентрированной, выдержанного в тех же условиях, что и опытная смесь.
Содержание групп углеводов (Х) в пересчете на гемицеллюлозу, ксилан и
абсолютно сухое сырье рассчитывали по формуле (2):
. . 0,91 100
% 100
. 10 100

где – содержание ксилозы в растворе, найденное по градуировочному графику,
мкг/мл;
36

– коэффициент разбавления (раствор Б – 3125; раствор В – 6250);
0,91 – коэффициент гидролиза; – масса навески сырья, г;
10 – коэффициент пересчета микрограммов в граммы;
– потеря в массе при высушивании сырья, %.
Построение градуировочного графика проводили в соответствии с
рекомендациями, приведенными в [59], следующим образом.
Около 100 мг глюкозы помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл,
растворяли в дистиллированной воде и доводили до метки тем же растворителем
(раствор С). В пробирки вносили 0,25; 0,5; 0,75; 1; 1,25; 1,375 мл раствора С и
доводили до объема 0,6 мл дистиллированной водой, приливали 4 мл антронового
реактива, нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Содержимое
пробирок после охлаждения переносили в мерные колбы вместимостью 25 мл 95 %-
ным спиртом этиловым и доводили до метки тем же растворителем.
Градуировочный график строили в системе координат концентрация ксилозы
(мкг/мл) – оптическая плотность.
2.2.3 Определение условий выделения ксилана
Проведенные экспериментальные исследования включали следующие стадии:

1) измельчение. 10 г стержней кукурузных початков очищали от
механических примесей и измельчали с помощью лабораторной мельницы;
2) предварительная обработка щелочью. Измельченный материал заливали
160 мл 1,25 M раствора NaOH и перемешивали в течение 3 часов;
3) осаждение ксилана. Полученный щелочной раствор фильтровали через
ватный фильтр. Затем к фильтрату добавляли 3 М раствор НСl до требуемого
значения рН. После этого при необходимости к полученному раствору добавляли
спирт в определенном соотношении с нейтрализованным фильтратом. Смесь
оставляли при температуре 4 оС на ночь;
37

4) отделение ксилана. Осадок отделяли центрифугированием при
температуре 4 оС и скорости вращения ротора 4200 об/мин.
2.2.4 Определение оптимального значения pH для выделения ксилана
После выполнения 2-го шага, как в разделе 2.2.3, полученный раствор

фильтровали для получения фильтрата, к которому добавляли 3М раствор НСl до
pH = 12,0; 11,0; 10,0; 9,0; 8,0; ,7,0; 6,0; 5,0; 4,0; 3,0; 2,0; 1,0. Далее анализировали
состояние полученных суспензий путем приготовления препаратов «раздавленная
капля» с последующим исследованием методом просвечивающей оптической
микроскопии при общем увеличении 400 х.
2.2.5 Определение выхода ксилана при разных условиях выделения
Анализ включал следующие стадии:

- бумажные фильтры в бюксах помещали в сушильный шкаф и
о
выдерживали при температуре 100 С в течение 30 минут. Затем фильтры
переносили в эксикатор для охлаждения на 10-15 мин, после чего взвешивали на
аналитических весах;
- полученные растворы с различными значениями рН в разделе 2.2.4,
фильтровали через бумажные фильтры для сбора осадка;
- фильтры с осадком в бюксах помещали в сушильный шкаф и
выдерживали при температуре 100 оС. Затем фильтры переносили в эксикатор для
охлаждения на 10-15 мин, после чего взвешивали на аналитических весах. Затем
процедуру высушивания и взвешивания повторяли до получения постоянной массы;
- по разности между массой фильтра с осадком и массой пустого фильтра
вычисляли массу сухого осадка.
38

2.2.6. Определение оптимального pH для проведения гидролиза
Гидролиз ксилана проводили с добавлением фермента ксиланаза Панзэа ВG

(производитель Novozymes) (фермент 1) и фермента ксиланаза (производитель
Микробиопром) (фермент 2). Каждый фермент имеет свой диапазон рН, и поэтому
нам нужно определить, какой рН подходит для фермента.
Для проведения эксперимента к одинаковым объемам раствора ксилана в 0,1 н
растворе NaOH добавляли концентрированную фосфорную кислоту до pH = 5; 6; 7; 8;
9; 10; 11. В растворы с различными значениями pH добавляли фермент 1 c
активностью 10 единиц/мл или фермент 2 c активностью 10 единиц/мл. Процесс
гидролиза проводили при температуре 50 оС в течение 4 часов.
После этого, определяли количество накопления редуцирующих сахаров
проводили феррицианидным методом (п. 2.2.7).
2.2.7 Определение накопления редуцирующих сахаров

феррицианидным методом
Использовали метод определения содержания редуцирующих веществ,

рекомендованный ГОСТ Р 50549-93 [60]. Процесс проводили следующим образом:
– готовили щелочной раствор феррицианида калия (8 г феррицианида
калия и 20 г гидроокиси натрия на 1 л раствора);
– в мерную колбу объемом 25 мл вносили анализируемую пробу в объеме
2 мл;
– в колбу приливали 10 мл щелочного раствора феррицианида калия.
После этого объем раствора в колбе доводили дистиллированной водой до метки;
– раствор нагревали на кипящей водяной бане в течении 15 минут;
39

– после охлаждения определяли оптическую плотность раствора на
спектрофотометре UNICO-1200 в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5 мм
против дистиллированной воды при длине волны  = 440 нм.
Для построения градуировочного графика приготовили растворы ксилозы с
концентрациями 3,75; 3,5; 3; 2,5; 2; 1,5; 1; 0,5; 0,25 мг/мл. В мерные колбы объемом
25 мл вносили по 2 мл растворов ксилозы разной концентрации. В колбу приливали
10 мл щелочного раствора феррицианида калия и доводили водой до метки. Раствор
нагревали на кипящей водяной бане в течении 15 минут. Затем раствор охлаждали и
определяли оптическую плотность на спектрофотометре UNICO-1200 в кюветах с
толщиной поглощающего слоя 5 мм против дистиллированной воды при длине
волны  = 440 нм. Градуировочный график строили в системе координат оптическая
плотность – массы ксилозы (мг).
2.2.8 Влияние времени и доза фермента на процессе гидролизa
Для сравнения влияния продолжительности и дози фермента на процесс

гидролиза реализовывали следующие варианты:
1) после корректировки рН до оптимального значения в раствор ксилана
добавляли фермент 1 из расчета 10 единиц/мл. Затем процесс гидролиза проводили
при температуре 50 оС в течение 24 и 48 часов;
40

добавляли фермент 2 из расчета 1000 единиц/мл. Затем процесс гидролиза
проводили при температуре 50 оС в течение 24 и 48 часов;
добавляли фермент 1 из расчета 25 единицы/мл. Процесс гидролиза проводили при
температуре 50 оС в течение 24 часов. Затем изменили pH до оптимального значения
для второго фермента и добавляли фермент 2 из расчета 500 единиц/мл. Процесс
гидролиза проводили при температуре 50 оС в течение 24 часов;
добавляли фермент 1 из расчета 25 единицы/мл. Процесс гидролиза проводили при
температуре 50 оС в течение 24 часов. Затем изменили pH до оптимального значения
для второго фермента и добавляли фермент 2 из расчета 1000 единиц/мл. Процесс
гидролиза проводили при температуре 50 оС в течение 24 часов.
После этого накопление редуцирующих сахаров проводили феррицианидным
методом (п. 2.2.7) и проводили исследование состава смеси ксилоолигосахаридов в
гидролизатах методом тонкослойной хроматографии (п. 2.2.9).
2.2.9 Хроматографическое обнаружение смеси ксилоолигосахаридов
На хроматографическую пластинку Silufol на расстоянии 1,5 см от края при

помощи автоматической пипетки наносили 15 мкл полученного раствора. Пластинку
помещали в хроматографическую камеру, в которую предварительно заливали
систему растворителей (бутанол:уксусная кислота:вода = 2:1:1). После достижения
фронтом растворителя верхней части пластинки, пластинку вынимали из камеры и
оставляли на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку
41

опрыскивали проявляющим раствором (анилин:дифениламин:фосфатная
кислота:ацетон = 1мл:1г:10мл:100мл), после чего выдерживали в сушильном шкафу
при температуре 100 оС в течение 5 минут.
2.2.10 Подготовка среды для культивирования пробиотических

микроорганизмов
Среда LB: готовили путем внесения по 0,3 г пептона, 0,3 г хлорида натрия и 2
мл дрожжевого экстракта с концентрацией 30 г/л в четыре большие пробирки.
В пробирку 1 добавили раствор гидролизата, полученного с помощью фермента 1,
в пробирку 2 добавили раствор гидролизата, полученного с помощью фермента 2,
в пробирку 3 добавили раствор гидролизата, полученного с помощью воздействия
ферментами 1 и 2, а в пробирку 4 не добавляли ничего. (Предварительно в
гидролизатах определяли концентрацию редуирующих сахаров феррицианидным
методам, после чего гидролизаты разбавляли дистиллированной водой до
одинаковой концентрации – 5 г/л). Затем во все четыре пробирки добавляли воду до
объема раствора 30 мл.
Среда MRS: готовили путем внесения по 0,6 г пептона; 0,15 г CH3COONa;
0,006г MgSO4∙7H2O; 0,0015 г MnSO4∙4H2O; 0,06 г K2HPO4; 0,032г C6H8O7∙H2O; 0,032
г Tween 80, 0,055 мл концентрированного раствора NH3 и 2 мл дрожжевого
экстракта с концентрацией 30 г/л в четыре большие пробирки. В пробирку 1
добавили раствор гидролизата, полученного с помощью фермента 1, в пробирку 2
добавили раствор гидролизата, полученного с помощью фермента 2, в пробирку 3
добавили раствор гидролизата, полученного с помощью воздействия ферментами 1 и
2, а в пробирку 4 не добавляли ничего. (Предварительно в гидролизатах определяли
концентрацию редуирующих сахаров феррицианидным методам, после чего
гидролизаты разбавляли дистиллированной водой до одинаковой концентрации – 5
г/л). Затем во все четыре пробирки добавляли воду до объема раствора 30 мл.
42

о
Приготовленные среды стерилизовали автоклавированием при 121 С в
течение 15 мин.
2.2.11 Культивирование пробиотических микроорганизмов
С помощью стерильных шприцов вводили по 5 мл физиологического раствора

во флаконы с бифидобактериями и лактобактериями. Затем флакoны встряхивали.
B каждую пробирку, содержащую среду LB, добавляли по 1 мл суспензии из
флакона с бифидобактериями. А в каждую пробирку, содержащую среду MRS,
добавляли по 1 мл суспензии из флакона с лактобактериями.
Инкубирование проводили при 30 оС при перемешивании в течение 20 и 40
часов в анаэробных условиях.
2.2.12 Определение концентрации клеток в среде, используя

светопоглощающие свойства клеточной культуры
После 20 и 40 часов измеряли оптическую плотность среды с культурой

бактерий по сравнению с оптической плотностью стерильной среды при 600 нм.
2.2.13 Определение концентрация молочной кислоты и pH среды

с культурой бактерий
Метод заключается в спектрофотометрическом определении окрашенного

продукта реакции лактат-ионов с хлоридом железа(III) при 390 нм [61]. Процесс
анализа включал следующие этапы:
– готовили 0,2 %-ный раствор хлорида железа (III). Навеску 0,3 г хлорида
железа(III) помещали в мерную колбу емкость 100 мл, разбавляли водой до метки и
43

перемешивали до полного растворения соли. Раствор должен иметь комнатную
температуру 25 ± 5°C;
– к 2 мл 0,2%-ного раствора хлорида железа (III) добавляли 50 мкл
суспензии культуральной среды, перемешивали и измеряли оптическую плотность
при 390 нм. Раствор контрольного опыта содержал 2 мл 0,2%-ного раствора хлорида
железа(III). Реакцию и измерения проводят при 25±5 оC.
Для построения градуировочного графика приготовили растворы молочной
кислоты с концентрациями 12,5; 6,25; 3,13; 1,56; 0,78 г/л. К 2 мл 0,2 %-ного раствора
хлорида железа (III) добавляли 50 мкл раствора молочной кислоты соответствующей
концентрации и перемешивали. Оптическую плотность полученных окрашенных
растворов измеряли при 390 нм. Раствор контрольного опыта содержал 2 мл
0,2%-ного раствора хлорида железа (III).
Кроме того, измерили pH суспензии, чтобы учесть общее образование кислот в
процессе развития культур микроорганизмов.
44

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ АНАЛИЗ
3.1 Определение содержания гемицеллюлозы и ксилана

в стержнях кукурузных початков
Определение содержания ксилана в пробе проводили методом Дрейвуда.

Калибровочный график строили с использованием стандартного раствора ксилозы.
Экспериментальные и расчетные данные, необходимые для построения
калибровочного графика, приведены в таблице 4.
Таблица 4 – Данные для построения градуировочного графика для определения

содержания ксилана в пробе
Объем раствора
0,25 0,5 0,75 1 1,25 1,375
ксилозы, мл
Концентрация
10 20 30 40 50 55
ксилозы, мкг/мл
Оптическая плотность 0,43 0,744 1,048 1,473 1,806 1,978
Полученный калибровочный график зависимости оптической плотность от

концентрации ксилозы в пробе приведен на рисунке 7.
45

А
2,5
2
y = 0,0349x + 0,0536
1,5
0,5
0
0 10 20 30 40 50 60
c, мкг/мл
Рисунок 7 – Зависимость оптическая плотность от концентрации ксилозы для

определения содержания ксилана в пробе
Методом наименьших квадратов была получена аналитическая зависимости

оптической плотности от концентрации ксилозы в растворе:
А = 0,0349С + 0,0536,
где А – оптическая плотность;

С – концентрация ксилозы, мкг/мл.
Определение влажности проводят в двух параллельных опытах. Результаты

опыта приводят в таблице 5.
Таблица 5 – Определение массовой доли влаги в стержнях кукурузных початков
Сырье , г 1, г 2, г W, % Wср, %
Стержни кукурузных 26,2795 28,2625 26,8853 69,45
68,7
початков 24,3010 26,2836 24,9370 67,92
46

В соответствии с данными, приведенными на калибровочном графике
(рисунок 7) и в таблице 5, рассчитывали содержания гемицеллюлоз и ксилана в
стержнях кукурузных початков. Результаты расчетов приводят в таблице 6.
Таблица 6 – Результаты определение содержания гемицеллюлоз и ксилана в

стержнях кукурузных початков
Оптическая Концентрация
Раствор Х%
плотность ксилана, мкг/мл
Раствор Б –
1,94 54,05 3125 24,55
Гемицеллюлозы
Раствор В –
0,62 16,23 6250 14,75
Ксилан
Из полученных результатов, мы получили, что в составе исследованных

стержней кукурузных початков содержится 24,47% гемицеллюлоз и 14,08% ксилана.
Это хороший материал для получения смеси ксилоолигосахаридов.
3.2 Определение оптимального значения pH для выделения ксилана
Ксилан обладает нерастворимыми свойствами в кислотных растворах, что

можно использовать для осаждения ксилана. В то же время, в большинстве методик
рекомендовано дополнительное добавление этанола для ускорения образования
частиц осадка. Очевидно, что при выделении ксилана в промышленных условиях,
использование этанола может существенно увеличить производственные расходы.
Поэтому было сделано предположение об использовании подкисления соляной
кислотой как единственного фактора осаждения ксилана. Для определения
оптимальных условий, необходимого для получения осаждения ксилана, была
проведена серия экспериментов с различными значениями рН с последующим
анализом состояния суспензии с помощью микроскопа.
47

В данном отчете приводятся микрофотографии полученных суспензий
приразных уровнях pH (при увеличении x400). Все результаты определения
состояния полученных суспензий представлены в таблице 7.
Таблица 7– Влияние рН на образование осадков ксилана

рН Микрофотография суспензии Вывод
В начальных условиях
13,5 – начало растворе отсутствует
осадок.
При добавлении кислоты

до pH=12, в растворе
появляются мелкие
12 – 6 частицы осадка. При
рН=11,0; 10,0; 9,0; 8,0; 7,0
и 6,0 наблюдаются
аналогичные результаты.
При pH=5 система

приобретает белую
5 окраску, но размер
частиц осадка не
изменяется.

48

рН Микрофотография суспензии Вывод
4 При pH=4 осадок

начинает увеличиваться.
При pH=3 осадки можно

наблюдать
невооруженным глазом.
3 Под микроскопом
наблюдается
агрегирование частиц
дисперсной фазы.
При pH=2 осадок

2 достигает максимального
размера.
По данным таблицы 7 видно, что при уменьшении pH размер осадка

увеличивается и достигает максимального значения при pH=2. При рН=4 или 5 нам
нужно время для отделения осадка (оставляем на ночь). При pH=2 или 3
формирование крупных быстро оседающих частиц происходит в течение несколько
минут.
49

3.3 Сравнение количества осадка, полученного при разных уровнях pH
Комбинируя различные условия – рН и количество добавленного этанола –

получали осадки ксилана, массу которого определяли методом высушивания до
постоянной массы. Сочетанием двух методов – микроскопии и высушивания –
возможно определение необходимых условий получения ксилана.
Экспериментальные и расчетные данные заносят в таблице 8.
Таблица 8 – Сравнение количества осадка, полученного при разных уровнях pH

рН Масса пустого Масса бумажного Масса осадка, г
бумажного фильтра с высушенным
фильтра, г осадком, г
рН = 5 17,6197 17,8605 0,2408
рН = 4 12,5382 12,7845 0,2463
рН = 3 15,0925 15,3420 0,2495
рН = 2 16,7182 16,9755 0,2573
Результаты подсчета массы осадка показали, что при уменьшении рН от 5 до 2

мы получаем приблизительно одинаковую массу осадка. Однако при уменьшении
pH осадок имеет более выраженную тенденцию к укрупнению (что мы видим по
результатам исследования осадка под микроскопом). Hо общая масса, полученная
после выдерживания в течение ночи для выпадения осадка, оказалась
приблизительно равной. Для дальнейших экспериментов был выбран режим pH=4,5
с последующим выдерживанием в течение ночи при температуре 4 oC для получения
осадка ксилана.
50

3.4 Построение калибровочный график для определения накопления
редуцирующих сахаров феррицианидным методом
Калибровочный график строили с использованием стандартного раствора

ксилозы. Экспериментальные и расчетные данные, необходимые для построения

ксилозы феррицианидным методом
Масса ксилозы, мг 7 6 5 4 3 2 1 0,5
Концентрация
3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0,25
ксилозы, мг/мл
Оптическая
0,19 0,299 0,546 .A 1,007 1,29 1,528 1,68
плотность
6

концентрации ксилозы в пробе, приведен на рисунке 8.
А 1,8
1,6
1,4
y = ‐0,4722x + 1,7543
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 1 2 3 4
с, мг/мл
Рисунок 8 – Зависимость оптическая плотность от концнтрации ксилозы для

определения ксилозы феррицианидным методом
51

оптической плотности от концентрации ксилозы в растворе:
А = -0,4722 + 1,7543,

С – концентрации ксилозы, мг/мл.
Феррицианидный метод основан на окислении карбонильных групп

редуцирующих сахаров щелочным раствором феррицианида (красной кровяной
соли). Практически измеряется светопоглощение излишка щелочного раствора
феррицианида. Чем меньше в исследуемом растворе присутствует редуцирующих
сахаров, тем больше останется непрореагировавшего феррицианида и тем больше
значение оптической плотности.
3.5 Определение оптимального pH для проведения гидролиза
При разных уровнях рН гидролиз приводит к разным количествам

редуцирующих сахаров. С использованием феррицианидного метода мы узнали, что
чем меньше оптическая плотность, тем больше образуется редуцирующих сахаров,
что означает, что процесс протекает с большей скоростью. В соответствии с
данными, приведенными на калибровочном графике (рисунок 8), результаты
расчетов приводят в таблице 10.
52

Таблица 10 – Влияние рН на концентрацию редуцирующих сахаров в пересчете на
ксилозу, образующихся при использовании разных ферментов
рН Концентрация редуцирующих Концентрация редуцирующих
сахаров, в пересчете на ксилозу, сахаров, в пересчете на ксилозу,
мг/мл (Фермент 1) мг/мл (Фермент 2 )
5 1,8 2,02
6 1,65 1,74
7 2 1,42
8 2,1 1,26
9 0,66 0,91
10 0,4 0,535
11 0,22 0,33
Из полученных результатов видно, что фермент 1 работает наиболее

эффективно при рН=8, a фермент 2 работает наиболее эффективно при рН=5. Это
может быть связано с тем, что продуцентом фермента 2 являются плесневые грибы.
3.6 Влияние продолжительности и дозы фермента на процесс гидролизa
Время гидролиза и доза фермента являются важными факторами,

непосредственно влияющими на выход продукции ксилоолигосахаридов. Поэтому
контроль производства ксилоолигосахаридов с желаемым диапазоном степени
полимеризации очень сложен. В соответствии с данными, приведенными на
калибровочном графике (рисунок 8), результаты расчетов приводят в таблице 11.
Таблица 11 – Влияние продолжительности и дозы фермента на процессе гидролизa

Расход Масса Концентрация
Фермент фермента Время, ч редуцирующих редуцирующих
, eд/мл сахаров, мг сахаров, мг/мл
24 6,17 3,09
10
48 7,38 3,69
Фермент 1
24 12,32 6,16
25
48 39,75 19,9

53


Расход Масса Концентрация
Фермент фермента Время, ч редуцирующих редуцирующих
, eд/мл сахаров, мг сахаров, мг/мл
24 5,9 2,95
10
48 5,9 2,95
24 9,78 4,89
Фермент 2 500
48 19,8 9,9
24 12,9 6,45
1000
48 40,52 20,26
Фермент 1 (25 ед/мл)+
48 84,74 42,37
Фермент 2 (500 ед/мл)
Фермент 1 (25 ед/мл)+
48 105,49 52,75
Фермент 2 (1000 ед/мл)
По данным таблицы 11 видно, что при одинаковом расходе фермента (10

ед/мл), фермент 1 образует большее количество редуцирующих сахаров по
сравнению с ферментом 2 за одинаковый промежуток времени. Это доказывает, что
фермент 1 способен разрушать полимерные цепи ксилана лучше, чем фермент 2.
Кроме того, при сравнении различных уровней активности одного и того же
фермента концентрация с большей вероятностью дает больше редуцирующих
сахаров. Мы также видим, что при увеличении времени реакции, изменение
количества редуцирующих сахаров происходит различно. Например, в случае
фермента 2 с расходом 10 ед/мл концентрация редуцирующих сахаров уже не
изменяется после 24 часов. Возможно, эта такой расход слишком мал для фермента 2
для боле глубокого гидролиза. Гидролиз дает наибольшее количество
редуцирующих сахаров при использовании фермента 1 с расходом 25 ед/мл или
фермента 2 с расходом 1000 ед/мл.
При попытке объединить две фермента вместе, мы получили концентрацию
редуцирующих сахаров выше по сравнению с раздельным использованием двух
54

ферментов. Это доказывает, что их механизмы разрушения полимерной цепи
ксилана отличаются.
3.7 Хроматографическое обнаружение смеси ксилоолигосахаридов
Хроматографический метод использовали для определения состава растворов,

полученных после гидролиза. В частности, это может позволить наблюдать
различный механизм действия двух ферментов.
После процесса гидролиза проводили исследование растворов методов ТСХ
(рисунок 9).
а) стандартная ксилоза; б) фермент 1 (расход 25 ед/мл) – 24 часа; в) фермент 2

(расход 1000 ед/мл)) – 24 часа; г) фермент 1 (расход 25 ед/мл) – 48 часов; д) фермент
2 (расход 1000 ед/мл) – 48 часов; е) после гидролиза в течение 24 часов с ферментом
1 (расход 25 ед/мл) добавляли фермент 2 (расход 1000 ед/мл) и проводили процесс
еще в течение 24 часов.
Рисунок 9 – Хроматографическое исследование смеси ксилоолигосахаридов
55

С ферментом 1 через 24 часа в качестве продуктов гидролиза были
обнаружены предположительно ксилориозы, ксилотетраозы и ксилопентаозы, а
через 48 часов ксилотриоза была получена в гораздо более высоких количествах. С
ферментом 2 через 24 и 48 часов были получены ксилоза и ксилобиоза, но через 48
часов полученное количество было намного выше, чем через 24 часа.
Мы находим, что механизмы действия этих двух ферментов совершенно
различны: фермент 1 имеет тенденцию разрушать полимерной цепи ксилана на
более мелкие цепи, в то время как фермент 2 имеет тенденцию разрезать маленькие
цепи с образованием главным образом ксилозы и ксилобиозы. Следовательно, новый
метод, который заключается в совместном использовании этих двух ферментов,
позволяет получить продукты с широким диапазоном степени полимеризации, что
может обеспечить более широкое применение гидролизатов в качестве пребиотиков.
Далее три варианта гидролизатов, полученные в результате воздействия только
фермента 1, только фермента 2 или их совместного воздействия, проверяли на
способность оказывать влияние на развития двух пробиотических культур –
бифидобактрий и лактобацилл. В качестве оцениваемых параметров развития
культур выступали: концентрация клеток в среде, содержание молочной кислоты и
значение рН.
3.8 Определение концентрации клеток в среде, используя светопоглощающие

свойства клеточной культуры
После 20 и 40 часов измеряли оптическую плотность среды с культурой

бактерий по сравнению с оптической плотностью стерильной среды при 600 нм.
Оптическую плотность бактериальной культуры клеток, измереная при 600 нм,
отражает прямо пропорционально концентрации клеток в среде. Результаты опыта
приводедены в таблице 12.
56

Таблица 12 – Оптические плотности суспензий пробиотических культур в
питательных средах, отличающихся по содержанию и составу смеси КОС
Состав Раствор Раствор Раствор
среды гидролизата, гидролизата, гидролизата,
Среда без
полученного полученного полученного с
добавок
Время с помощью с помощью помощью
фермента 1 фермента 2 фермента 1 и 2
Среда LB + культура бифидобактерий
После 20
0,039 0,280 0,196 0,063
часов
После 40
0,408 0,952 0,785 0,78
часов
Среда MRS + культура лактобактерий
После 20
0,645 1,452 0,992 1,130
часов
После 40
0,687 1,505 0,995 1,165
часов
На основании полученных данных мы обнаружили, что после добавления

растворов гидролизата, полученного с помощью ферментов, изменение
концентрации бифидобактерий и лактобактерий было более активным, чем при
отсутствии добавок. Это доказывает, что полученные смеси ксилоолигосахаридов
действительно использовуются микроорганизмами для роста. При использовании
раствора гидролизата, полученного с помощью фермента 1, концентрация
бифидобактерий и лактобактерий оказалась наибольшей как после 20 часов, так и
после 40 часов культивирования. Это свойство является очень выгодным признаком,
поскольку КОС может способствовать развитию пробиотических бактерий в
желудочно-кишечном тракте.
57

3.9 Определение концентрация молочной кислоты и pH среды
с культурой бактерий
Калибровочный график строили с использованием раствора молочной кислоты.

Экспериментальные и расчетные данные, необходимые для построения

концентрации молочной кислоты
Концентрация молочной
12,5 6,25 3,13 1,56 0,78
кислоты, мг/мл
Оптическая плотность 0,68 0,387 0,224 0,146 0,093

концентрации молочной кислоты в пробе, приведен на рисунке 10.
0,8
А
0,7
y = 0,0496x + 0,0655
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 2 4 6 8 10 12 14
с, мг/мл
Рисунок 10 – Зависимость оптическая плотность от концентрация молочной

кислоты
58

оптической плотности от концентрации молочной кислоты в растворе:
А = 0,0496С + 0,0655,

С – концентрация молочной кислоты, мг/мл.
Таблица 14 – Данные оптической плотности при определении концентрации

молочной кислоты, образующейся в результате развития бактериальных кутур на
средах различного состава
Состав Раствор Раствор Раствор
среды гидролизата, гидролизата, гидролизата,
Среда без
полученного полученного полученного с
добавок
Время с помощью с помощью помощью
фермента 1 фермента 2 фермента 1 и 2
После 20 часов 0,035 0,048 0,181 0,061
После 40 часов 0,122 0,213 0,308 0,269
После 20 часов 0,298 0,678 0,617 0,44
После 40 часов 0,3 0,687 0,642 0,45
В соответствии с данными, приведенными на калибровочном графике

(рисунок 10) и в таблице 14, рассчитывали концентрации молочной кислоты с
культурой бактерий. Результаты расчетов приводят в таблице 15.
59

Таблица 15 – Содержание молочной кислоты (в мг/мл) при развитии бактериальных
культур на средах с различным составом
Раствор
Раствор Раствор
Состав гидролизата,
гидролизата, гидролизата,
среды Среда без полученного с
полученного полученного
добавок помощью
с помощью с помощью
Время фермента 1 и
фермента 1 фермента 2
2
После 20 часов _ _ 2,33 _
После 40 часов 1,14 2,97 4,89 4,1
После 20 часов 4,69 12,35 11,12 7,55
После 40 часов 4,73 12,53 11,62 7,75
Таблица 16 – Значения pH суспензии при развитии бактериальных культур на средах

с различным составом
Раствор
Раствор Раствор
Состав гидролизата,
гидролизата, гидролизата,
среды Среда без полученного с
полученного полученного
добавок помощью
с помощью с помощью
фермента 1 и
фермента 1 фермента 2
Время 2
После 20 часов 6,38 6,628 5,670 5,902
После 40 часов 5,028 4,456 4,582 3,869
После 20 часов 5,452 4,350 5,15 4,736
После 40 часов 5,442 4,349 4,912 4,723
Анализируя корреляцию изменений pH среды с общим количеством бактерий

при культивировании в средах, содержащих различные растворы гидролизата,
можно заметить, что снижение pH сопровождалось увеличением общего количества
бактерий. Было определено более высокое значение рН, и в то же время было
определено более низкое количество бактерий, культивируемых в среде, не
60

дополненной смеси КОС, по сравнению с культурами, выращенными в среде,
дополненной КОС.
Cнижение pH питательных сред в результате производства
короткоцепочечных жирных кислот, таких как, в основном, молочная кислота,
вместе с небольшими количествами уксусной и муравьиной кислот, отражало
способность бактерий расти на субстратах (смесь КОС). Концентрация молочной
кислоты, продуцируемой различными смесями КОС, выявило значительные
различия использования между бифидобактериями и лактобациллами.
Раствор гидролизата, полученного с помощью фермента 1, оказывает
эффективное влияние на рост лактобактерии после 24 часа ферментации с
использованием ксилориозы, ксилотетраозы и ксилорентаозы в качестве источника
углерода, а раствор гидролизата, полученного с помощью фермента 2, оказывает
эффективное влияние на рост бифидобактерии после 48 часов ферментации с
использованием ксилобиозы в качестве источника углерода.
Было показано, что КОС потенциально поддерживает рост пробиотиков. Но их
способность поддерживать различна для разных типов микробов, зависит от состава
смеси КОС. Чтобы повысить эффективность, синбиотические продукты должны
иметь эффективные комбинации, такие как бифидобактерии и ксилобиозы, или
комбинацию лактобактерии и ксилотриозы, ксилотетраозы, ксилопентаозы. Или
просто пребиотические продукты, ингредиент должен представлять собой
комбинацию ксилобиозы и ксилотриозы.
Выводы по главе 3

Стержни кукурузных початков – это дешевые, легко доступные материалы
могут получить смеси ксилоолигосахаридов.
61

Анализ результатов экспериментальных исследований показал, что режим с
pH=4,5 с последующим выдерживанием в течение ночи при температуре 4 oC
является оптимальным для получения осадка ксилана.
Процесс гидролиза зависит от таких факторов, как рН, температура, время и
концентрация фермента. Для проведения этого процесса требуется значение рH в
диапазоне 5-8, температура 50 оC и 48-часовая продолжительность.
Полученный продукт может зависеть от механизма действия используемого
фермента. Один из используемых нами ферментов обеспечивал более активное
расщепление макромолекул ксилана на фрагменты с относительно небольшой
молекулярной массой, а второй характеризовался способностью к образованию
низкомолекулярных продуктов (ксилобиоз, ксилотризо, ксилотетраоз). Это говорит о
необходимости подбора ферментов (или их сочетания) для получения продукта с
требуемыми свойствами.

62

ВЫВОДЫ ПО РАБОТЕ
Пребиотики на основе ксилоолигосахаридов могут производиться в

промышленных масштабах из богатых ксиланом сельскохозяйственных отходов
материалов. Для оценки пригодности початков кукурузы в качестве сырья для
производства КОС был проведен композиционный анализ. Высушенные
порошкообразные кукурузные початки содержали 24,47 % гемицеллюлоз и 14,08 %
ксилана, что делает их хорошим материалом для получения смеси
ксилоолигосахаридов.
Современные процессы гидролиза для получения КОС с различной степенью
полимеризации обычно проводят в две стадии: (1) щелочная экстракция; (2)
последующий ферментативный гидролиз. Щелочная экстракция разрушает
клеточную стенку, разрушая компоненты макромолекулы, в результате чего ксилан
и лигнин растворяются. В реакции обычно используют достаточно
концентрированные раствора NaOH, KOH, Ca(OH)2, NH3.
Для получения более чистых КОС, после процесса предварительной обработки
следует проводить осаждение ксилана в кислотных растворах. Общий выход ксилана
получаемого по предлагаемому способу осаждения составляет 11,375 г/100 г сырья.
При выделении из стержней початков кукурузы удается извлесь почти 80%
исходного ксилана сырья. Более высокий выход ксилана из лигноцеллюлозной
биомассы ограничивается из-за его физического и / или ковалентного
взаимодействия с другими компонентами клеточной стенки и варьируется в
зависимости от вида растений.
Сущность ферментативного процесса – это расщепление ксиалана до
олигомеров сначала с относительно высокой степенью полимеризации и затем
образование олигомеровы с более низкой степенью полимеризации. Эндо-β-1,4-
ксиланазы (ЕС 3.2.1.8) являются ключевыми ферментами в деградации ксилана.
63

Ксиланаза с различной специфичностью к субстрату дает различные конечные
продукты гидролиза.
Исследованные в работе бифидобактерии и лактобактериия эффективно
используют в качестве источников углерода разные по составу смеси КОС.
Бифидобактерии имеет тенденцию использовать смеси КОС с низкой молекулярной
массой, такие как ксилобиоза, а лактобактерии – с более высокой молекулярной
массой, такие как ксилотриоза и ксилотетраоза.
Было показано, что КОС потенциально поддерживает рост пробиотиков. Но их
способность поддерживать различна для разных типов микробов, зависит от состава
смеси КОС. Чтобы повысить эффективность, синбиотические продукты должны
иметь эффективные комбинации, такие как бифидобактерии и ксилобиозы, или
комбинацию лактобактерии и ксилотриозы, ксилотетраозы.
64

Список использованной литературы
1. Roberfroid, M. Prebiotic effects: metabolic and health benefits. British Journal of

Nutrition / M. Roberfroid // British Journal of Nutrition. – 2010. – 104. – P.1-63
2. ГОСТ Р 52349-2005. Продукты пищевые. Продукты пищевые
функциональные. Термины и определения –Введен впервые; введ. 01.07.2006. – М.:
Издательство стандартов, 2006. – 3 с.
3. Chung, W.S.F. Modulation of the human gut microbiota by dietary fibres occurs
at the species level / W.S.F. Chung // BMC Biol. – 2016. – 14. – P.1-13.
4. Roberfroid, M. Prebiotics / M. Roberfroid // Encyclopedia of Food Sciences and
Nutrition. – 2003. – P. 4719-4723.
5. Van Loo, J. The SYNCAN project: Goals, set-up, first results and settings of the
human intervention study / J. Van Loo // Br. J. Nutr. – 2005. – 93. – P.91-98.
6. Roberfroid, M. Prebiotics: The Concept Revisited / M. Roberfroid // The Journal
of Nutrition. – 2007. – 137 – P.830-837.
7. Ouwehand, A. Prebiotics and other microbial substrates for gut functionality /
A. Ouwehand // Curr. Biol. – 2005. – 16. – P.212-217.
8. Ziemer, C.J. An overview of probiotics, prebiotics and synbiotics in the functional
food concept: perspectives and future strategies/ C.J. Ziemer., G.R. Gibson // Int. Dairy J. –
1998. – 8. – P.473-479.
9. Alander, M. Effect of galacto-oligosaccharide supplementation on human faecal
microfora and on survival and persistence of Bifidobacterium lactis Bb-12 in the
gastrointestinal tract / M. Alander // Int. Dairy J. – 2001. –11. – P.817-825.
10. Vazquez, M.J. Xylooligosaccharides: manufacture and applications /
M.J. Vazquez // Trends Food Sci. Technol. – 2000. – 11. – P.387-393.
11. Murphy, O. Non-polyol low-digestible carbohydrates: Food application and
functional benefits / O. Murphy // British Journal of Nutrition. – 2001. – 85. – P.47-53.
65

12. Sabater-Molina, M. Dietary fructooligosaccharides and potential benefits on
health / M. Sabater-Molina // J Physiol Biochem. – 2009. – 65. – P.315-328.
13. Torres, D.P.M. Galactooligosaccharides: production, properties, applications,
and significance as prebiotics / D.P.M. Torres // Compr. Rev. Food Sci. Food Safety. –
2010. – 9. – P.438-454.
14. Petrova, P. Prebiotic-Probiotic Relationship: The Genetic Fundamentals of
Polysaccharides Conversion by Bifidobacterium and Lactobacillus Genera / P. petrova //
Food Bioconversion. – 2017. – P.237-278.
15. Playne, M.J. Galacto-oligosaccharides and other products derived from lactose /
M.J. Playne, R.G. Crittenden // New York: Springer. –2009. – P.121-201.
16. Sako, T. Recent progress on research and applications of nondigestible galacto-
oligosaccharides / T. Sako, K. Matsumoto, R. Tanaka // Int Dairy J. –1999. – 9. – P.69-80.
17. Rastall R.A. Galacto-oligosaccharides as prebiotic food ingredients. In: Gibson
GR, Rastall RA, editors. Prebiotics: development & application / R.A. Rastall // West
Sussex: John Wiley & Sons Ltd. – 2006. – P.10-19.
18. Fengel, D. Wood: Chemistry, Ultrastructure reactions / D. Fengel, G, Wegener.
// New York: W. De Gruyter. –1984. – P. 613.
19. Sun, J. X. Fractional extraction and structural characterization of sugarcane
bagasse hemicelluloses / J.X. Sun // Carbohydr Polym. –2004. – 56. – P.195-204.
20. Vazquez, M.J. Xylooligosaccharides: manufacture and applications /
M.J.Vazquez // Trend. Food Sci. Technol. – 2000. – 11. – P.387-393.
21. Alonso, J.L. Xylooligosaccharides: properties and production technologies /
J.L. Alonso // Electronic Journal of E nvironmental, Agricultural and Food Chemistry. –
2003. – 2. – P.230-232.
22. Sarkar, N. Bioethanol production from agricultural wastes: an overview /
N. Sarkar // Rnew Energy. – 2012. – 37. – P.19-27.
23. Kim, S. Global potential bioethanol production from wasted crops and crop
residues / S. Kim // Biomass and Bioenergy. – 2004. –26. – P.61-75.
66

24. Lee, J. Biological conversion of lignocellulosic biomass to ethanol/ J. Lee //
Journal of Biotechnology. – 1997. – 56. – P.1-24.
25. Moure, A. Advances in the manufacture, puriﬁcation and applications of
xylooligosaccharides as food additives and nutraceuticals / A. Moure, P. Gullon //
Process Biochemistry. – 2006. – 41. – P.1913-1923.
26. Smiricky‐Tjardes, M.R. In vitro fermentation characteristics of selected
oligosaccharides by swine fecal microflora / M.R. Smiricky‐Tjardes // J Animal Sci. –2003.
– 81. – P.250-514.
27. Smiricky‐Tjardes, M.R. Dietary galactooligosaccharides affect ileal and total‐
tract nutrient digestibility, ileal and fecal bacterial concentrations, and ileal fermentative
characteristics of growing pigs / M.R. Smiricky‐Tjardes // J Animal Sci. –2003. – 81. –
P. 253-545.
28. Okazaki, M. Effects of xylooligosaccharides on growth of Bifidobacteria.
Bifidobac / M. Okazaki // Microfl. – 1990. – 9. – P.77-86.
29. Li, Z. In vitro study of the prebiotic xylooligosaccharide (XOS) on the growth of
Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp / Z. Li // Int. J. Food Sci. Nutr. –2015. – 66. –
P. 919-922.
30. Kontula, P. Oat bran β-gluco-and xylooligosaccharides as Fermentative
Substrates for Lactic Acid Bacteria / P. Kontula, A. Von-Wright // Int J Food Microbiol. –
1998. – 45. – P.163-169.
31. Fooks L.J. In vitro investigations of the effect of probiotics and prebiotics on
selected human intestinal pathogens / L.J Fooks, G.R. Gibson // FEMS Microbiol Ecol. –
2002. – 39. – P.67-75.
32. Christakopoulos, P. Antimicrobial activity of acidic xylooligosaccharides
produced by family 10 and 11 endoxylanases / P. Christakopoulos, P. Katapodis // Int J
Biolog Macromol. – 2003. – 31. – P.7-15.
33. Candurra, N.A. Inhibition of arenavirus multiplication in vitro by
phenotiazines / N.A. Candurra, L. Maskin // Anti. Res. –1996. – 31. – P.149-158.
67

34. Ando, H. Hot compressed water decomposed products from bamboo
manifest a selective cytotoxicity against acute lymphoblastic leukemia cells / H. Ando,
H. Ohba // Toxicol., In Vitro. – 2004. – 18. – P.765-771.
35. Юань, X. Антиоксидантная активность ферулоилированных
олигосахаридов из отрубей пшеницы / X. Юань X, X. Яо // Food Chem. – 2004. – 90.
– P.765-771.
36. Izumi, K. Anti‐hyperlipidemics containing acidic xylooligosaccharides / K.
Izumi, S.Ikemizu, F. Shizuka // Japan Patent JP. – 2004. – P.182-615.
37. Brienzo, M. Relationship between physicochemical properties and enzymatic
hydrolysis of sugarcane bagasse varieties for bioethanol production / M. Brienzo,
L. Tyhoda, Y. Benjamin, J. Görgens // N Biotechnol. – 2015. – 32. – P.253-262.
38. Carvalho, A.F.A. Xylo-oligosaccharides from lignocellulosic materials:
Chemical structure, health benefits and production by chemical and enzymatic hydrolysis /
A. F. A Carvalho, P. Neto-Oliva // Food Res Int. – 2013. – 51. – P.75-85.
39. Weil, J. Cellulose pretreatments of lignocellulosic substrates / J. Weil,
P. Westgate, K. Kohlmann // Enzyme Microb Technol. – 1994. – 16. – P.1002-1004.
40. Balat, M. Process in bioethanol processing / M. Balat, H. Balat, C. Öz // Prog
Energy Combust Sci. – 2008. – 34. – P.551-573.
41. Collin, T. Xylanase, xylanase families and extremophilic xylanases / T. Collin,
C.Gerday, G. Feller. // FEMS Microbiol. Rev. – 2005. – 29. – P.3-23.
42. Henri, B. New families in the classification of glycosyl hydrolases based on
amino acid sequence similarities / B. Henri, A. Bairoch // Biochem. J. – 1993. – 293. –
P.781-788.
43. Brienzo, M. Xylooligosaccharides production from alkali-pretreated sugarcane
bagasse using xylanases from Thermoascus aurantiacus / M. Brienzo, W. Carvalho // Appl
Biochem Biotech. – 2010. – 162. – P.1195-1205.
68

44. Linares-Pasten, J.A. Structual considerations on the use of endo-xylanese for the
production of prebiotic xylooligosaccharides from bimass / J.A, Linares-Pasten // Current
Protein & Peptide Science. – 2017. – P.19.
45. Samanta A.K. Process for enzymatic production of xylooligosaccharides from
the xylan of corn cobs / A.K. Samanta, N. Jayapal, A.P. Kolte // J Food Process Preserv. –
2014. – 39. – P.729-736.
46. Samanta A.K. Value addition of corn husks through enzymatic production of
xylooligosaccharides / A.K. Samanta, A.P. Kolte, A.V. Elangovan // Braz Arch Biol
Technol. – 2016. – P.59.
47. Carvalho, A. F. A. Screening of xylanolytic Aspergillus fumigatus for prebiotic
xylooligosaccharide production using Bagasse / A. F. A. Carvalho // Food Technol
Biotech. – 2015. – 53. – P.428-435.
48. Jayapal, N. Value addition to sugarcane bagasse: Xylan extraction and its
process optimization for xylooligosaccharides production / N. Jayapal, A. Samanta, A. K.
Kolte // Ind Crop Prods. – 2013. – 42. – P.14-24.
49. Aachary, A. A. Value addition to corncob: Production and characterization of
xylo-oligosaccharides from alkali pretreated lignin-saccharide complex using Aspergillus
oryzae MTCC 5154 / A. A. Aachary // Bioresour Technol. – 2009. – 100. – P.991-995.
50. Chapla, D. Production of xylooligosaccharides from corncob xylan by fungal
xylanase and their utilization by probiotics / D. Chapla, P. Pandit, A. Shah // Bioresour
Technol. – 2012. – 115. – P.212-215.
51. Mumtaz, S. Xylooligosaccharide enriched yoghurt: physicochemical and sensory
evaluation / S. Mumtaz, N. Huma, A. Jamil, H. Nawaz // Pak J Nutri. – 2008. – P.566.
52. Shimoda, K. Synthesis of Xylooligosa ccharides of daidzein and their
antioxidant and antiallergic activities / K. Shimoda // Int. J. Mol. Sci. – 2011. – 2. –
P.5616-5625.
53. Glasser, L. Thermoplastic pentosan- rich polysaccharides from biomass/
L. Glasser // Unit. States Patent. – 2016.
69

54. Gabrielii, I. Preparation and properties of hydrogels based on hemicellulose /
I. Gabrielii, P. Gatenholm // J. Appl. Poly. Sci. – 1998. – 69. – P.1661-1667.
55. Gabrielii, I. Seperation, characteriza-tion and hydrogel formation of hemice-
lluloses from aspen wood / I. Gabrielli // Carboh. Poly. – 2000. – 43. – P.367-374.
56. Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO), Technical
Meeting Report on Prebiotics, (2007).
57. ГОСТ 7698-93. Крахмал. Правила приемки и методы. –Введен впервые;
введ. 01.01.1995. – М.: Издательство стандартов, 1995. – 40 с.
58. Оленников, Д.Н., Танхаева, Л.М., Методика количественного определения
группового состава углеводного комплекса растительных объектов / Д.Н. Оленников,
Л.М. Танхаева // Химия растительного сырья. – 2006. – №4. – С. 29-33.
59. Оленников, Д.Н. Методика количественного определения суммарного
содержания полисахаридов в семенах льна (LINUM USITATISSIMUM L.) / Д.Н.
Оленников, Л.М. Танхаева // Химия растительного сырья. – 2007. – №4. – С. 85-90.
60. ГОСТ Р 50549-93. Продукты гидролиза крахмала. Определение
восстанавливающей способности и эквивалента глюкозы. Метод постоянного титра
Лейна и Эйнона. – Введен впервые; введ. 01.01.1994.– М.: Издательство стандартов,
1994. – 8 с.
61. Борщевская, Л.Н. Спектрофотометрическое определение молочной
кислоты / Л. Н. Борщевская, Т. Л. Гордеева, А. Н. Калинина, С. П. Синеокий //
Журнал аналитической химии. – 2016. – № 8. – C. 787–790.

Изучение использования ксилоолигосахаридов в качестве пребиотиков

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Изучение использования ксилоолигосахаридов в качестве пребиотиков

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА

по направлению подготовки 19.03.01 Биотехнология

направленность (профиль) Промышленная биотехнология

Студента Во Тхыонг Зием Фук шифр 151216

Институт естественных наук и биотехнологии

Тема выпускной квалификационной работы

Нормоконтроль Шаяпова Л.В.

Зав. кафедрой /РОП Кузнецова Е.А.

Институт естественных наук и биотехнологии

Студента Во Тхыонг Зием Фук шифр 151216

1. Тема выпускной квалификационной работы: Изучение использования

4. Содержание ВКР (перечень подлежащих разработке вопросов): анализ

Дата выдачи задания «___» ___________20__ г.

Задание принял к исполнению Во Т.З.Ф.______

Выпускная квалификационная работа на тему «Изучение использования

Диета является важным фактором профилактики риска заболеваний для всех

1.1 Понятие «пребиотик»

Микробиота человека представляет собой сложную, динамичную экосистему

Рисунок 1 – Качественный состав популяций микроорганизмов различных

Как по соображениям эффективности, так и безопасности, разработка

Таблица 1 – Природные источники и процесс промышленного производства

1.2 Характеристика важнейших олигосахаридных пребиотиков

1.2.1 Фруктоолигосахариды (ФОС)

Фруктоолигосахариды содержат 2-4 фруктофуранозных звена, связанных

1.2.2 Галактоолигосахариды (ГОС)

Галактоолигосахариды содержат 2-4 галактозильных звена, связанных

1.2.3 Ксилоолигосахариды ( КОС )

1.2.3.1 Источники КОС

Ксилоолигосахариды могут быть получены из ксилансодержащих

Рисунок 2 – Структура лигноцеллюлозной биомассы содержат целлюлозы,

Гемицеллюлоза широко распространена среди растений с различными

Рисунок 3 – Модель расположения полисахаридных компонентов

а) глюкуроноксилан (в твердой древесине); б) арабино-глюкуроноксилан

В зависимости от различных источников ксилана, используемых для

где n = 0 – Ксилозы ( Х1 ); n = 1 – Ксилобиозы ( Х2 ); n = 2 – Ксилотриозы ( Х3 );

Кислоолигосахариды естественным образом присутствуют во фруктах, овощах,

Таблица 3 – Химический состав сельскохозяйственных отходов

Cельскохозяйственные отходы являются возобновляемыми, менее

1.2.3.2 Разложение КОС пробиотическими микроорганизмами

Контролируемое введение КОС в рацион питания может помочь сдерживать

Антимикробная активность КОС. L. plantarum 0407 и Lactobacillus pentosus 905

Процесс предварительной обработки. Предварительная обработка необходима

1.2.3.5 Применение КОС

Растущий спрос на функциональные продукты питания и потенциал для

Ксилоолигосахариды имеют большой потенциал в качестве агентов для

2.1 Объекты и материалы исследований

В качестве объектов исследования в работе были использованы:

Выбор источники ксилана Выбор технологии получения КОС

Изучение процесса выделения

Выбор оптимальных условий для получения КОС

Изучение пребиотической активности КОС

Рисунок 6 – Схема экспериментальных исследований

2.2.1 Определение массовой доли влаги в стержнях кукурузных початков

В соответствии с рекомендациями ГОСТ 7698-93 [57], процесс анализа

где – масса бюксы, г;

Метод основывается на объединении известной схемы разделения углеводов

2.2.3 Определение условий выделения ксилана

Проведенные экспериментальные исследования включали следующие стадии:

2.2.4 Определение оптимального значения pH для выделения ксилана

После выполнения 2-го шага, как в разделе 2.2.3, полученный раствор

2.2.5 Определение выхода ксилана при разных условиях выделения

Анализ включал следующие стадии:

Гидролиз ксилана проводили с добавлением фермента ксиланаза Панзэа ВG

2.2.7 Определение накопления редуцирующих сахаров

Дата выдачи задания «_» _______20 г.