ТИТУЛ

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ................................................................................................................................................5
СОДЕРЖАНИЕ.........................................................................................................................................7
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.......................................................................................................................................23
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.......................................................................................................................24

2
 ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Экологический мониторинг – постоянный контроль за антропогенными

изменениями биосферы и состояния ресурсов.
Биологический мониторинг – наблюдение за видами-индикаторами.
Биоиндикаторы – виды, наблюдая за состоянием которых, осуществляется
биологический мониторинг.
Токсиканты – элементы и соединения, загрязняющие окружающую среду.
Активная биоиндикация – внесение в среду обитания тест-объектов
Пассивная индикация – наблюдение за экосистемой

3
 ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

ПДК – предельно допустимая концентрация

ФХА – физико-химический анализ
ОВ-потенциал – окислительно-восстановительный потенциал
СЭ – следы элементов

4
 ВВЕДЕНИЕ

В современном мире усилия по охране природных ресурсов требуют тщательного

планирования как на национальном, так и международном уровнях. Для такого
планирования требуется не только достаточно полная информация о текущем
состоянии экосистем и уровне загрязнения природной среды, о превышении норм
допустимых антропогенных нагрузок, кризисных и катастрофических ситуациях, но и
сведения о развивающихся в биосфере тенденциях (как отрицательных, так и
положительных), в том числе об эффективности принимаемых мер по охране природы и
снижению загрязнения. Необходимо также своевременное оповещение о вновь возник -
ших опасностях.
В системе «человеческая цивилизация—биосфера» должна присутствовать
стабилизирующая отрицательная обратная связь, которая включала бы органы, которые
должны применять меры по охране природной среды, и систему информационного
обеспечения этих органов, роль которой выполняет мониторинг антропогенных
изменений природной среды и состояния возобновляемых ресурсов, сокращённо
называемый экологическим мониторингом. Замкнутый контур этой обратной связи есть
контур экологического регулирования [1].
В отличие от факторов естественных, факторы антропогенные могут приводить к
очень быстрым изменениям в состоянии биосферы в целом и в состоянии экосистем,
процессам, скорости которых в сотни и тысячи раз больше естественных.
Поэтому крайне важно оперативно откликаться на проводимый мониторинг
окружающей среды, а для этого, в частности, применять самые современные методы
анализа для определения различных токсикантов, загрязняющих биосферу. Для оценки
состояния почв и водоёмов наряду с химическим контролем широко используется
биологический мониторинг. Биоиндикаторы могут применяться и для оценки
химического загрязнения веществами, опасными в ничтожных концентрациях, а
потому трудно обнаружимых.
В частности, одним из наиболее опасных токсикантов является ртуть. Поэтому
контроль за содержанием этого элемента в биосфере - крайне важное направление
экологического мониторинга. Этот контроль осуществляется самыми разными способами
и, в частности, биоиндикацией.
Цель данной работы состоит в том, чтобы:
1. Понять, в чем заключается биоиндикация;
2. Рассмотреть, почему ртуть является опасной для биосферы;

5
 3. Оценить, какими методами анализа можно определять ртуть, и выбрать
оптимальный способ ее обнаружения;
4. Провести эксперимент, который позволит определить содержание ртути в
биологическом объекте;
5. Сделать выводы на основе проделанной работы.

6
 СОДЕРЖАНИЕ

1. Токсическое действие ртути на биосферу

Если мы посмотрим на нормирование содержания ртути в различных средах, то

увидим, что предельно-допустимая концентрация (ПДК) ртути крайне мала. Это
объясняется крайней токсичностью данного элемента, способностью накапливаться в
почвах и водоемах и переходить, увеличиваясь в концентрации, вверх по трофическим
цепям.
Например, ПДК содержания ртути в воздухе населенных мест составляет 300 нг/м 3,
в питьевой воде – 500 нг/л, в почвах – 2 мг/кг [1]. ПДК для рыбохозяйственных водоемов
устанавливается в несколько раз ниже ПДК для питьевой воды, чтобы исключить
накопление токсиканта в пищевых цепях человека.
Опасность, которая исходит от токсиканта, зависит не только от характера его
воздействия, величины выброса в окружающую среду и ПДК, но и от параметров его
распространения.
Ртуть не является необходимым элементом для жизнедеятельности человека и
животных, присутствует в организме в следовых количествах, обладает токсическими
свойствами. Ртуть является единственным металлом, который находится в жидком
состоянии при комнатной температуре. Источником поступления ртути в атмосферу
является процесс ее естественного испарения из земной коры, промышленные
загрязнения (производство хлора, щелочей, электротехническая промышленность,
фармацевтические производства, производство целлюлозы и бумаги и др.), сжигание
каменного угля.
Ртуть используется в медицине и косметологии (мази, кремы, дезинфицирующие
растворы), стоматологии (амальгамные пломбы и др.), препараты ртути применяются в
качестве фунгицидов, использующихся для протравки зерна. Элементарная
металлическая ртуть, в отсутствие химических или биологических систем, которые
могут переводить ее в другое состояние, мало токсична. При переходе в ионизированную
(неорганическую) форму она становится токсичной. Дальнейшие превращения
неорганической ртути некоторыми микроорганизмами в органическую ртуть
(метилртуть) ведет к образованию высокотоксичных соединений ртути, которые
селективно связываются тканями с высоким содержанием липидов, к которым относится
нервная ткань. Метилирование ртути происходит в донных отложениях морей, озер и
водоемов.

7
 Действие ртути приводит к медленному отравлению почв и пресноводных
водоемов. Особо опасно образование метилртутных соединений в пресной воде от сбросов
и атмосферных выпадений. Ртуть может сохраняться в атмосфере до сотен лет, переходя из
среды в среду. Возможно накопление ртути в воде.
Содержание ртути в воде в концентрации, равной 0,018 мг/л тормозит процессы
самоочищения водоема; в концентрации 0,02-1,0 мг/л снижает биологическое потребление
кислорода (БПК) в сточных водах на 20-80 %; в концентрации 2,0 мг/л – биохимические
процессы очищения воды прекращаются [2].
Ртуть это единственный металл, который при оптимальной для биоты
температуре находится в жидком и парообразном состоянии, что наряду с
особенностями химических свойств (высокое сродство к серосодержащим соединениям,
образование стойких метилированных соединений) определяет его высокую
миграционную способность в биосфере. Ртуть широко применяется во многих отраслях
производства и обладает способностью восстанавливаться до металла из различных
соединений. Это обуславливает ее летучесть и высокую токсичность для всех живых
организмов. В биосфере естественные соединения ртути находятся в рассеянном
состоянии. Антропогенное воздействие приводит к усилению миграции и
перераспределению естественных соединений ртути и привносу в биогеохимический
цикл этого элемента техногенной ртути. Проблемы, связанные с загрязнением
окружающей среды ртутью, появились в 50-70-е годы ХХ века, после того как
произошли массовые отравления людей в результате употребления в пищу рыбы из
сильно загрязненных металлом водоемов. В результате проведенных исследований
появилось представление о двух основных типах круговорота ртути в окружающей
среде: глобальном, в который вовлечены преимущественно пары атомарной ртути, и
локальном, который связан с ртутью, поступающей в атмосферу в результате
антропогенной деятельности. Ранее считалось, что глобальный естественный круговорот
слабо влияет на организмы, и не может привести к загрязнению отдельных компонентов
экосистем. В настоящее время накоплен обширный фактический материал о
закономерности миграции ртути в водных экосистемах. Основное внимание водным
экосистемам связано с тем, что в водной среде присутствуют условия для
бактериального образования токсичных ртутьорганических соединений, например –
метилртуть. В то же время исследования закономерностей миграции и накопления ртути
в биотических и абиотических компонентах наземных экосистем немногочисленны и
носят фрагментарный характер. До настоящего времени все еще недостаточно данных о

8
распределении ртути в почвах и пространственно-географических различиях ее
содержания в почвенном покрове.
Естественные источники ртути отмечены в районах месторождений и присутствия
руд. Ртуть является рассеянным элементом с низким глобальным геохимическим фоном,
на который накладываются локальные аномалии месторождений и антропогенные
источники. Вещественный анализ химических форм металлов разделяет экзогенные и
эндогенные формы.
К экзогенным формам относят неорганические формы металлов и
металлоорганические соединения, образовавшиеся ещё до поступления в живые
организмы и не претерпевшие в них существенных изменений. Типичной экзогенной
формой считают алкилированную ртуть.
Эндогенные химические формы – это соединения, присутствующие в организме и
образующиеся в результате деятельности живых клеток в результате изменения
экзогенных форм при взаимодействии с макромолекулами (белками, аминокислотами и
другими биологическими структурами) и низкомолекулярными органическими
лигандами.
Жизненно важных функций ртути в организме человека и животных не
обнаружено. Летучесть форм ртути способствует перераспределению в компоненты
экосистем от природных и техногенных источников, сорбируются на мелкодисперсных
частицах и участвуют в биохимических превращениях.
Образованию органических соединений ртути, в том числе метилированной
ртути, способствуют микроорганизмы. Метилирование может происходить в почве и
донных отложениях, но активнее всего метилирование протекает в гидробионтах водных
экосистем. Внутренними факторами метилирования ртути: общая концентрация
неорганической ртути, низкие рН, высокая температура, отрицательный ОВ-потенциал,
видовой состав микроорганизмов, содержание сульфидов и органического вещества
донных осадках, трансформируется под действием природных и антропогенных внешних
факторов, гидролизуется даже в слабокислой среде, обладает биологической
аккумуляцией и мигрирует по трофическим цепям.
С токсикологической точки зрения важны следующие формы ртути: элементная
ртуть Hg(0), неорганические соединения Hg(II) и органические формы
(метилртутьMeHg+, этилртутьEtHg+, фенилртутьPhHg+) как фрагменты эндогенных форм
ртути в биологических объектах. Токсичные формы ртути поступают к человеку с
морепродуктами и гидробионтами. Рыба в целях аналитического контроля используется
как биологический индикатор в оценке опасности загрязнения экосистем. Высокие

9
уровни содержания ртути часто обнаруживаются в рыбах, обитающих в недавно
созданных водохранилищах.
Биоаккумуляции подвергаются любые формы металла и основной путь
потребления метилртути рыбой алиментарный. Уровень аккумулированной ртути
зависит от возраста и размера рыб. Растительные корма и питьевая вода, используемые
при откорме, являются основными источниками поступления ртути в организм
сельскохозяйственных животных.
В результате природных биохимических процессов в окружающую среду
поступило около 1.6∙1010 т ртути. Около 0,1 % этого количества осталось в океанах в
растворенном виде. Ртуть до настоящего времени накапливается в атмосфере в
результате выветривания земной коры. Количество ртути, поступившее в окружающую
среду в XX столетии в результате человеческой деятельности, почти в 10 раз превышает
расчетное природное поступление
По современной классификации ртуть относится к чрезвычайно токсичным
веществам I класса опасности. При поступлении в организм в повышенных
концентрациях ртуть обладает способностью накапливаться во внутренних органах:
почках, сердце, мозге. Даже кратковременный контакт с этим опасным металлом
приводит к серьезным проблемам со здоровьем. У человека может пропасть аппетит,
начаться бессонница, насморк, диарея, слезотечение, раздражения кожи, в ряде случаев
возникают провалы памяти и мускульный тремор. В случае, если человек долгое время
контактировал с ртутью, это может привести к более серьезным проблемам: резкой
потере веса, повреждениям головного мозга, почек, легких, иммунной системы и т. п.
Химический мониторинг неорганических форм и оценка содержания
органических форм ртути в биологических объектах актуален как теоретически, так и
практически.

10
 2. Биоиндикация

Под биоиндикацией понимают прикладное направление экологии, связанное с по-

иском и использованием так называемых биоиндикаторов – организмов, наличие, числен-
ность и особенности развития которых служат показателями естественно протекающих
процессов или изменений среды обитания под влиянием антропогенных воздействий.
Отдельные виды организмов весьма чувствительны и избирательны по отношению к
различным факторам среды обитания, характеризующим их экологическую нишу: к кон-
центрации пищевых ресурсов, к химическому и механическому составу почв, вод, атмо-
сферы, к климатическим и погодным условиям и т. д.; эти виды могут существовать толь-
ко в определённых, часто узких границах изменения этих факторов.
Различают пассивную и активную биоиндикацию.  Пассивная биоиндикация связа-
на с оценкой состояния среды обитания, исходя из присутствия в ней тех или иных видов
или групп организмов. Ряд растений, например, могут быть показателями плодородия зе-
мель.
Специфические организмы планктона указывают на происхождение водных масс и
течений, характеризуют определённые параметры среды обитания (в т. ч. солёность,
температуру). О подходе косяков рыбы свидетельствуют скопления морских рыбоядных
птиц. Лишайники и некоторые хвойные растения служат биоиндикаторами чистоты воз-
духа. Почвенные микроорганизмы и индикаторные растения могут служить биоиндикато-
рами при поиске полезных ископаемых. По комплексам почвенных животных судят о ти-
пах почв. Важный аспект применения биоиндикаторов – оценка с их помощью степени за-
грязнения окружающей природной среды, постоянный контроль (мониторинг) её качества
и изменений. Состав флоры и фауны, численность и биомасса организмов свидетельству-
ют о чистоте вод и их пригодности для пищевых или иных целей, о состоянии и эффек-
тивности работы очистных сооружений, об изменениях, происходящих в почвах в резуль-
тате загрязнения или при восстановлении почвенного покрова.
При активной биоиндикации в среду обитания вносят тест-объекты – организмы,
чувствительные к тому или иному виду загрязнения. С их помощью определяют степень
влияния различных химических (рН, содержание солей, пестицидов и других веществ) и
физических (например, радиоактивность) факторов среды. Так, очень часто в качестве
тест-объектов загрязнения водоёмов выступают бакте-

11
рии Photobacterium phosphoreum (т. н. Microtox-тест), дафнии, гуппи. Тест-объектами за-
грязнения почв служат дождевые черви, панцирные клещи, некоторые виды растений.
Тест-объекты применяются также для оценки токсичности, мутагенности, канцерогенно-
сти химических веществ, используемых человеком, и их потенциальной опасности для са-
мых разных компонентов окружающей среды [4]. 
Интересующий нас токсикант – ртуть вполне может быть определен методом
биоиндикации.
Для примера, в работе [3] рассматриваются результаты изучения загрязнения ртутью
Братского водохранилища и его обитателей, в частности, рыбы и планктона. Авторы
работы приводят данные, которые говорят о том, что даже после уменьшения источников
загрязнения проблема превышения содержания ртути в организмах изучаемых видов все
ещё остается актуальной. Обработка проб фито-, зоопланктона и морфо-биологический
анализ рыб проводились по общепринятым методикам. Параллельно с отбором планктона
и рыб производились сборы проб воды и донных осадков для дальнейшего химического
анализа. Ртуть в пробах определялась атомно- абсорбционным методом холодного пара на
ртутном анализаторе РА-915+.
Можно анализировать на содержание ртути и растительные объекты [5-8, 12]. В
работе [5] изучали водоохранные зоны Волги и пришли к выводу, что несмотря на то,
что качество воды реки Волги в данных областях характеризуется как «грязное» (4 класс)
на почвах и растительности данные загрязнения почти незаметны. Результаты были
получены методом биотестирования.
Статья [6] посвящена изучению сложного компоста. Исследователи пришли к
выводу, то несмотря на превышение содержаний в почве тяжелых металлов, высокой
концентрации ртути в растениях, проверенных методом биотестирования, замечено не
было.
Экогеохимии ртути была посвящена работа [7], в которой была прослежена связь
между высокими содержания ртути в веществе деревьев и деятельностью предприятий,
расположенных около той местности, где росли тополя. Все подготовленные пробы
листьев и керна тополя отправлялись на атомно-абсорбционный анализ на анализаторе
«РА-915+» с приставкой «ПИРО-915+».
В [8] и [9] показано, что исследование всхожести семян методом биотестирования
не дало четкой картины действия ртути на растения.
При исследовании реки Амур микробиологическим и спектральным методом [10]
было установлено, что повышенная концентрация ртути в реке подавляет

12
жизнедеятельность бактерий. Такие же сведения были получены и учеными из Ирака
[13]

Можно определять содержание ртути в моллюсках Pomacea canaliculata методом

нейтронно-активационного анализа, как в работе [11]. Изучая данных моллюсков,
исследователям удалось проследить связь между содержанием ртути и моллюсках и ее
концентрацией в воде. Также определялось содержание ртути в организмах стрекоз [14].
Биологическая активность химических веществ зависит от формы их нахождения в
исследуемых объектах. Если формы биологически неактивны, то вреда они не наносят.
Определение биологически активных форм токсикантов не обеспечивается физико-
химическими методами анализа. В этом отношении выгодно отличается биологический
метод. В последнее время он получает всё большее распространение при оценке
загрязнения объектов окружающей среды.
Этому есть несколько причин. Биометод в качественном варианте является
методом входного анализа, обеспечивая исследователя информацией об опасности
загрязняющих веществ и их смесей. Получение подобной первичной информации об
объектах окружающей среды дает возможность избежать применения методов физико-
химического анализа и связанных с этим затрат. Количественные варианты
биологического метода позволяют определять загрязняющие вещества на уровне малых
содержаний. Основы метода заключаются в следующем. Для существования живых
организмов необходима среда строго определенного, постоянного химического состава.
При нарушении этого постоянства, за счет внесения исследуемого токсического вещ
ества, через некоторое время организм подает сигнал. Ответный сигнал организма может
быть разнообразным: изменение характера поведения (фактор избегания), интенсивности
роста, скорости метаморфозы, состава крови, нарушение функций органов кроветворения,
пищеварения, дыхания, размножения.
Обобщенным показателем эффективности действия исследуемого вещества на
индикаторный организм является или его выживание, или летальный исход.
Количественное определение возможно, если установлена связь между интенсивностью
ответного сигнала организма и содержанием исследуемого вещества.

13
 3. Методы анализа биообъектов на содержание ртути

Все возрастающая роль очень небольших количеств элементов в химических,

физических и биологических системах в значительной степени стимулировала
расширение области применения различных аналитических методов для определения
этих элементов. Это привело к развитию специализированной аппаратуры, методологии
и к выделению отдельной области – аналитической химии следовых количеств. Под
термином «следы» понимают очень малые количества элемента, содержащиеся в пробе,
причем верхний предел содержания следов составляет 10 -2 %. Для концентраций ниже
10-4 % используют термин «ультраследы». Для абсолютных содержаний вещества в
пробе (в граммах) используются понятия субмикроколичества (10-9 г), ультрамикро- (10-6
г), микро- (10-3 - 10-2 г), полумикро- (10-2 - 10-1 г) и макроколичества (˃10-1 г).
Определение следов элементов (СЭ) может потребоваться в различных условиях
проведения анализа. Наиболее часто встречаются следующие:
- прямое определение следов элементов в относительно большом объеме пробы;
это наиболее сложный вид анализа, предъявляющий наибольшие требования к
чувствительности и селективности определения следовых количеств вещества или
элемента;
- предварительное концентрирование микропримесей в виде концентрата с
удалением основных количеств макроэлементов матрицы для улучшения предела
обнаружения или устранения влияния основы. Данный вариант традиционно
используется при анализе объектов, не предъявляющих специальных требований к
объему пробы. Пример – анализ поверхностных вод или почв на содержание тяжелых
металлов;
- определение малых локальных концентраций примесей в большом объеме
пробы. По сравнению с другими приведенными вариантами в этом случае приходится
учитывать неравномерность распределения примесей по объему анализируемого
образца;
- определение больших и малых количеств веществ / элементов в малых по
объему пробах. Пример – анализ биологических систем, для которых отбор больших
проб невозможен или неприемлем по этическим соображениям или медицинским

14
показаниям В каждом из этих случаев необходимо применение высокочувствительных
методов анализа, специфика их применения определяется не только видом анализа, но и
природой определяемых компонентов.
Ртуть и ее соединения высокотоксичны. Необходимость определения малых
количеств ртути в биологических материалах – трудная аналитическая задача.
Определению ртути в таких объектах (ткани, лимфа, кровь и т.д.) всегда предшествует
разрушения объектов анализа различными окислителями при выделении ртути методами
восстановления. Применяется также окисление анализируемых материалов в
кислородной бомбе [15].
Как можно предположить из статей, рассмотренных чуть ранее, метод
биотестирования не показывает превышения концентрации ртути в исследуемых
объектах. Это может быть связано с тем, что ртуть оказывает более долговременные
последствия на жизнедеятельность биообъектов, чем другие тяжелые металлы.
В таком случае лучше применять инструментальные методы физико-химического
анализа (ФХА): колориметрические, спектрофотометрические, полярографические,
атомно-абсорбционные методы. Сейчас для решения этой задачи используются масс-
спектрометрические методы анализа и методы нейтронно-активационного анализа.
Одним из классических методов, которые применяются для определения ртути
методом биоиндикации, является спектрофотометрический метод, основанный на
измерении спектров поглощения в оптической области электромагнитного излучения.
Сравнение метрологических характеристик методик биологического и
фотометрического определения катионов ртути(ІІ) показывает, что при определении ртути
чувствительность фотометрической методики выше биологической. Это обусловлено
объективной причиной: гетерогенностью популяции индикаторных организмов. а также,
вероятно, частичным связыванием определяемых катионов питательной средой.
Фотометрическая методика определения ртути позволяет определять ртуть при
концентрации примерно в 100 раз меньше, чем биологическая.
Именно спектрофотометрическим методом мы и определим содержание ртути в
исследуемом образце.

15
 4. Анализ биообъектов на содержание ртути

Для исследования использовались образцы четырех видов промысловых рыб

Балтийского моря: килька, салака, треска и камбала. Для исследования брались
следующие органы: мышцы, кости, печень и жабры.
При анализе использовались два метода минерализации проб; конечное
определение велось на спектрофотометре.

Средства измерений
Фотоколориметр UNICO 1201 с набором кювет, обеспечивающий измерение оптической
плотности при длине волны (670 ± 10) нм.
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 210 г по ГОСТ OIML R 76-1-
2011.
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ OIML R 76-1-
2011.
pH-метр универсальный любого типа, обеспечивающий измерение pH в диапазоне 1 - 14
ед. pH с абсолютная погрешностью не более ±0,05 ед. рН.
Колбы мерные 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770-74.
Пипетки градуированные 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 1-2-2-10 по ГОСТ 29227-91.
Пипетки с одной отметкой 1-2-2, 1-2-5, 1-2-10, 1-2-25 по ГОСТ 29169-91.
Цилиндры мерные 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2 по ГОСТ 1770-74.
ГСО 7343-96 состава раствора ионов ртути (II), с массовой концентрацией ионов ртути
(0,95 - 1,05) мг/см3, относительная погрешность аттестованного значения ±1,0 % при Р =
0,95.

Вспомогательные устройства и оборудование

Сушильный шкаф с терморегулятором и термометром по ТУ 64-1-909-80, позволяющий
поддерживать температуру нагрева (105 ± 2) °С.
Воронки делительные ВД-1-250-ХС, ВД-1-500-ХС по ГОСТ 25336-82.
Воронки стеклянные В-75-110, В-100-150 по ГОСТ 25336-82.

16
Колбы конические Кн-1-250-29/32 ТХС по ГОСТ 25336-82.
Стаканы В-1-100 ТС, В-1-150 ТС, В-1-250 ТС, В-1-500 ТС по ГОСТ 25336-82.
Холодильники ХПТ-1-100-14/23 ХС по ГОСТ 25336-82.
Чашки фарфоровые выпарительные 1, 2, 3 по ГОСТ 9147-80.
Эксикатор 1 - 250 по ГОСТ 25336-82.
Плитка электрическая закрытого типа по ГОСТ 14919-83.
Мешалка магнитная.
Часы или таймер.
Ёмкости стеклянные для отбора и хранения проб, вместимостью не менее 1000 см3.

Реактивы и материалы
Азотная кислота, квалификации «х.ч», по ГОСТ 4461-77.
Аммиак водный, квалификации «х.ч», по ГОСТ 3760-79.
Аскорбиновая кислота, квалификации «ч.д.а», по ТУ 42-26-68-89;
Дитизон, квалификации «ч.д.а», массовая доля основного вещества не менее 99,5 % по ТУ
6-09-07-1684-89.
Железо (II) сернокислое 7-водное, квалификации «х.ч», по ГОСТ 4148-78.
Кальций хлористый кальцинированный (в гранулах) по ГОСТ 450-77.
Калий двухромовокислый, квалификации «х.ч» по ГОСТ 4220-75.
Калий углекислый кислый, квалификации «х.ч» по ГОСТ 4143-78.
Натрий углекислый кислый, квалификации «х.ч» по ГОСТ 4201-79.
Натрий уксуснокислый 3-х водный, квалификации «ч.д.а» по ГОСТ 199-78.
Метиловый оранжевый, индикатор, квалификации «ч.д.а» по ТУ 6-09-5171-84.
Ртуть (II) азотнокислая 1-водная, квалификации «х.ч» по ГОСТ 4520-78.
Серная кислота, квалификации «х.ч» по ГОСТ 4204-77.
Соляная кислота, квалификации «х.ч» по ГОСТ 3118-77.
Трилон Б, квалификации «х.ч», по ГОСТ 10652-73.
Трилон Б, стандарт-титр по ТУ 2642-001-07500602-97.
Уксусная кислота ледяная, квалификации «х.ч» по ГОСТ 61-75.
Хлороформ очищенный по ГОСТ 20015-88.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
Фильтры обеззоленные «белая лента» по ТУ 2642-001-68085491-2011.

Методика минерализации № 1.

17
 Сырую ткань образца в количестве 250-300 г помещали в колбу Кьельдаля объёмом
75 см3, содержащую 2 см3 50 %-ной серной кислоты.
Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают до кипения при
постоянном взбалтывании. Через 40 минут нагревание прекращают, раствор охлаждают
до 10-15 °С, и, сняв холодильник, добавляют 1,5 г перманганата калия, после чего раствор
снова доводят до кипения; при отсутствии сильного вспенивания оставляют раствор
кипеть на 2,5 – 3 часа. По истечении этого времени, если раствор сохраняют темно-
коричневую окраску, нагревание прекращают и раствор охлаждают до 10-15 °С. Не
снимая холодильник, в раствор добавляют 1 см 3 гидроксиламина солянокислого и
несколькими миллилитрами бидистиллированной воды смывают его остатки в колбу.
Если раствор в течение 2-3 часов кипения обесцветится или просветлеет, то при
охлаждении добавляют 0,5 г перманганата калия и повторяют нагревание, как указано
выше.
После добавления гидроксиламина минерализат должен быть бесцветным, если
сжигание доведено до конца. К полученному минерализату добавляют 2 см 3 10 %
раствора мочевины, 1,5 см3 2,5 %-ого раствора Трилона Б и 3 см3 10 %-ого раствора
щавелевой кислоты.
Доводят рН раствора до 1,5, прибавляя по каплям 5 %-й раствор ацетата натрия.
Уровень жидкости в колбе доводят до метки, перемешивают и, в случае присутствия
жиров, фильтруют. Аликвотные части раствора помещают в кюветы и определяют
содержание ртути [16]. Минерализация проводилась на дигесторе при 360 градусах в два
этапа: 40 минут с серной кислотой и 2 часа с перманганатом, озоление прошло полностью,
т.к. остаток был белый. Далее остаток был растворен в воде, доведен до метки в 100 см 3,
доведен до рН= 4.4, отфильтрован и аликвота в 50 см 3 подвергалась экстракции дитизоном
в хлороформе 4 раза. Экстракты в виде дитизоната ртути доводились до метки в 50 см 3
раствором дитизона в хлороформе и измерялись на спектрофотометре.

Методика минерализации № 2.
По 20 г средней пробы печени и почек раздельно (исследование смеси органов не
допускается) помещают в две колбы ёмкостью 200 см3. В каждую колбу приливают 5 см3
воды, 1 мл этанола, 10 мл кислоты азотной концентрированной.

C2H5OH + HONO2 → C2H5ONO + 2H2O2 H2O

[O]
C2H5ONO + 3H2O → C2H5OH + HONO2

18
 К смеси добавляют по каплям 20 см3 кислоты серной концентрированной с такой
скоростью, чтобы постоянно поддерживать реакцию разложения кислоты азотной, но
окислы азота не выделялись из колбы. Колбу оставляют при комнатной температуре на 5
– 10 минут до прекращения выделения окислов азота, затем нагревают на кипящей
водяной бане в течение 10 минут. При бурном течении реакции в колбу добавляют 30 – 50
см3 воды. Горячий деструктат смешивают с двойным объёмом горячей воды и, не
охлаждая, фильтруют через двойной предварительно увлажнённый фильтр в колбу,
содержащую 20 см3 насыщенного раствора мочевины (для связывания окислителей).
O = C (NH2)2 + 2 HNO3 ® N2 + 2 NO + CO2 + 3 H2O
O = C (NH2)2 + 2 HNO2 ® 2 N2 + CO2 + 3 H2O
Фильтр и остатки жира промывают 1 – 2 раза горячей водой. Промывные воды
объединяют с деструктатом. После охлаждения жидкость разбавляют водой в мерной
колбе на 200 см3 и определяют ртуть [17].

Для определения ртути использовался спектрофотометр UNICO

1201, предназначенную для измерения коэффициентов пропускания, оптической
плотности и концентрации растворов.
Однолучевой спектрофотометр (фотометр) специально разработан для широкого
использования в лабораториях всех отраслей промышленности, решения аналитических
задач в таких отраслях, как клиническая химия, биохимия, защита окружающей среды,
энергетика, металлургические, химические, пищевые лаборатории, лаборатории воды и
сточной воды, нефтехимии и в других сферах контроля качества.
По техническим характеристикам и возможностям UNICO 1201 полностью
заменяет широко применяемые в лабораторной практике фотоколориметры и фотометры
фотоэлектрические типа ФЭК и КФК-2,-3,-5 и др. Спектрофотометр (фотометр) UNICO
1201 работает в спектральном интервале 315 – 1000 нм.

Рисунок 1. Принцип работы спектрофотометра.

19
 Прибор специально адаптирован для отечественных условий эксплуатации и
выпускается с учетом российских лабораторных требований.
Метод определения основан на экстракции ртути раствором дитизона в
хлороформе с образованием окрашенного в оранжевый цвет дитизоната ртути и
измерении оптической плотности полученного раствора фотометрическим методом при
длине волны X = (670 ± 10) нм.
В качестве основного реагента используют раствор дитизона с массовой долей
0,002 % в хлороформе.
При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие
условия:
- температура воздуха от 15 °С до 25 °С;
- атмосферное давление от 84 до 106 кПа;
- относительная влажность воздуха, не более 80 %;
- напряжение переменного тока, В (220);
- частота переменного тока, Гц (50 ± 1) [18].
Градуировка фотоколориметра
В мерные колбы вместимостью 100 см 3, предварительно заполненные наполовину
объёма очищенной бидистиллированной водой, вносят градуировочные растворы.
Растворы в колбах доводят до метки бидистиллированной водой.
Количественно переносят растворы из колб в делительные воронки вместимостью 250
см3 (последовательно).
В каждую воронку добавляют 5,0 см3 ацетатно-буферного раствора, 5 см3 раствора
трилона Б с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3, хорошо перемешивают и добавляют
пипеткой 10,0 см3 раствора дитизона в хлороформе с массовой долей 0,002 %.
Экстрагируют содержимое каждой воронки в течение (2 ± 0,1) минуты, дают хорошо
отстояться. После расслоения сливают органический слой в мерную колбу вместимостью
50 см3.
В делительные воронки вносят еще 10 см 3 раствора дитизона и вновь проводят
экстракцию. Повторяют экстракцию по п. 9.15.5 до тех пор, пока дитизоновые экстракты
не перестанут изменять темно-зеленый цвет.
Объем в колбах доводят до метки раствором дитизона с массовой долей 0,002 % и
определяют оптическую плотность по отношению к хлороформу в кюветах с толщиной
поглощающего слоя 10 мм при длине волны λ = (670 ± 10) нм.
Результаты градуировки приведены в таблице 1.

20
 Таблица 1
Результаты градуировки

№ Массовая Оптическая
градуировочного концентрация плотность А
раствора ртути в
градуировочном
растворе, мг/см3
1 0 0
2 0,01 0,019
3 0,02 0,061
4 0,04 0,153
5 0,05 0,187
6 0,06 0,238
7 0,08 0,295
8 0,09 0,344
9 0,1 0,406

Строим градуировочный график (рисунок 2).

21
 0.5

0.45

0.4

0.35

0.3

0.25

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.1

Рисунок 2. Градуировочный график

Проводим измерения оптической плотности в образцах тканей четырех видов рыб

(таблица 2).

Таблица 2
Оптическая плотность образцов тканей

Вид рыбы Оптическая плотность тканей

Мышцы Печень Жабры Кости
Килька 0,045 0,056 0,032 0,030
Салака 0,089 0,077 0,053 0,041
Камбала 0,152 0,147 0,098 0,123
Треска 0,171 0,165 0,140 0,131

По градуировочному графику рассчитываем содержание ртути в образцах тканей

(таблица 3).
Таблица 3
Содержание ртути в образцах тканей

Вид рыбы Массовая концентрация ртути в градуировочном растворе, мг/см3

Мышцы Печень Жабры Кости
Килька 0,013 0,015 0,011 0,010

22
 Салака 0,022 0,020 0,014 0,013
Камбала 0,039 0,037 0,025 0,030
Треска 0,046 0,044 0,036 0,032

Проанализировав полученные результаты можно прийти к заключению, что в

одинаковых условиях в тканях кильки и салаки накапливается меньше ртути, чем в тканях
камбалы и трески. Возможно, это связано с особенностями питания различных видов рыб.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В рамках данной работы было проанализировано токсическое действие ртути на

живые организмы и пути загрязнения биосферы ртутью.
Рассмотрен такой метод мониторинга содержания ртути в различных средах, как
биоиндикация, принципы и подвиды данного метода.
Проведено сравнения различных методов анализа, использующихся при
определении ртути в биологических объектах, и выбран оптимальный из них –
спектрофотометрический.
Данным методом были проанализированы на содержание ртути образцы тканей
четырех видов рыб, обитающих в Балтийском море; проведено сравнение содержания
ртути для различных видов.
Можно заключить, что метод биоиндикации достаточно перспективен для
мониторинга содержания ртути в различных средах.

23
 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гальперин, М.В. Экологические основы природопользования: Учебник /

М.В. Гальперин — М.: ФОРУМ: ИНФРА-М, 2003. - 256 с: ил. - (Серия «Профессио-
нальное образование»).
2. Карякин, А.В. Методы оптической спектроскопии и люминесценции в
анализе природных и сточных вод / А.В. Карякин, И.Ф. Грабовская. – М.: Химия, 1987. –
304 с.
3. Пастухов, М.В. Биоиндикация ртутного загрязнения Братского
водохранилища / М.В. Пастухов, В.И. Гребенщикова // Известия Иркутского
государственного университета. Серия №Биология и экология». – 2008. – Т.1. - № 2. – С.
132-135.
4. Покаржевский, А.Д. Биоиндикация [Электронный ресурс] / А.Д.
Покаржевский. – Режим лоступа: https://bigenc.ru/biology/text/1866799 (дата обращения
03.12.2022).
5. Оценка состояния водоохранных зон р. Волги в районе п. Ильинка
(Астраханская область) / Е. Г. Васильева, И. В. Мельник // Вестник Астраханского
государственного технического университета. Серия: Рыбное хозяйство. – 2021. – № 4. –
С. 91–97.

24
 6. Бойцова, Л.В. Исследование и экологическая оценка сложного компоста /
Л.В. Бойцова, К.Г. Моисеев, В.Н. Пищик [и др.] // Теорeтическая и прикладная экология. –
2020. – № 3. – С. 133 – 139.
7. Турсуналиева, Е.М. Экогеохимия ртути в древесных растениях рода тополь
(листьях и годовых кольцах) урбанизированных территорий Сибири и Дальнего Востока:
дис. …. канд. геолого-минералог.наук 01.06.21 / Турсуналиева Елена Муратовна. – Томск,
2022. – 140 с.
8. Новоселова, Е.А. Влияние переменного потенциала на количественное
определение ртути методом биоиндикации в условиях аварийных ситуаций / Е.А.
Новоселова // XXI век: итоги прошлого и проблемы настоящего плюс. – 2022. – Т. 11. –
№1 (57). – С. 114-118.
9. Новоселова, Е.А. Применения метода биоиндикации при определении
влияния температуры на концентрацию ртути в чрезычайных ситуациях / Е.А.
Новоселова, И.Л. Скрипник, Д.В. Савельев, Т.Т. Каверзнева // XXI век: итоги прошлого и
проблемы настоящего плюс. – 2022. – Т. 11. – №2 (58). – С. 164-168.
10. Andreeva, D.V. Bioindication of mercury pollution of the Amur River during the
ice-covered period / D.V. Andreeva // IOP Conf. Series: Earth and Environmental Science/ - 895
(2021). - 012003. – P. 2-8.
11. Campoy-Diaz Alejandra D. Bioindication of mercury, arsenic and uranium in the
apple snail Pomacea canaliculata (Caenogastropoda, Ampullariidae): Bioconcentration and
depuration in tissues and symbiotic corpuscles / Alejandra D.Campoy-Diaz, María A.Arribére,
Sergio RibeiroGuevara, Israel A.Vega // Chemosphere. – V. 196. -  April 2018. - P. 196-205.
12. Zheng, Belle. Lichen as a bioindicator of mercury emissions and deposition from
former mercury mines in Central California. June 2021. - [Электронный ресурс] / Belle Zheng
– Режим доступа: https://escholarship.org/uc/item/7vs7t53w (дата обращения 03.12.2022).
13. Ati Estabraq Mohammed. Bioindicator Mercury of Aquatic Ecosystems in Iraqi
Marshland by Using GIS. - [Электронный ресурс] / Estabraq Mohammed Ati, Reyam Naji
Ajmi– Режим доступа:
file:///D:/%D0%A1%D0%B2%D0%B5%D1%82%D0%B0/%D0%A0%D0%B0%D0%B1%D0
%BE%D1%82%D0%B0/Bioindicator_Mercury_of_Aquatic_Ecosyste.pdf. (дата обращения
03.12.2022).
14. ENVIRONMENTAL HEALTH PROGRAM. Dragonfly Larvae are Effective
Bioindicators of Mercury Exposure in Fish and Amphibians—Results of Citizen Science in 100
National Parks and Protected Places- [Электронный ресурс] – Режим доступа:

25
https://www.usgs.gov/programs/environmental-health-program/science/dragonfly-larvae-are-
effective-bioindicators-mercury. (дата обращения 03.12.2022).
15. Гладышев, В.П. Аналитическая химия ртути / В.П. Гладышев, С.А.
Левицкая, Л.М. Филиппова – М.: «Наука», 1974. – 228 с.
16. [Электронный ресурс] / Режим доступа:
https://cyberleninka.ru/article/n/modifitsirovannyy-metod-opredeleniya-rtuti-v-biologicheskom-
materiale-i-vozduhe/viewer (дата обращения 03.12.2022).
17. [Электронный ресурс] / Режим доступа:
https://studfile.net/preview/2548341/page:18/ (дата обращения 03.12.2022).
18. [Электронный ресурс] // Режим доступа:
https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4293758/4293758228.htm#i444878 (дата обращения 03.12.2022).

26