ISSN 1812-9498. ВЕСТНИК АГТУ. 2006.

№ 3 (32)

Экологические аспекты микробиологии

УДК 631.46:547.912

А. Н. Пархоменко, О. Б. Сопрунова
Астраханский государственный технический университет

ВЛИЯНИЕ НЕФТИ НА МИКРООРГАНИЗМЫ КРУГОВОРОТА АЗОТА

В ПОЧВАХ АРИДНОЙ ЗОНЫ

Одним из основных биогенных элементов является азот. Поддержа-

ние его уровня в окружающей среде, в том числе и почве, обеспечивается
активной деятельностью различных микроорганизмов, принимающих уча-
стие в его круговороте [1, 2]. Круговорот азота достаточно хорошо изучен
в дерново-подзолистых [3] и серо-бурых почвах [4]. На территории Астра-
ханской области, расположенной в зоне аридного климата, преобладают
почвы с агрономически неблагоприятными характеристиками, обуслов-
ленными почвообразованием в условиях недостаточного и неустойчивого
увлажнения, высоких температур, наличия солей [1]. Крайне неблагопри-
ятное воздействие на свойства почв оказывают нефтяные углеводороды.
При попадании нефти в почву возрастает отношение углерода к азоту, что
сказывается на азотном режиме и приводит к обеднению почвы азотсо-
держащими соединениями [3]. Это оказывает негативное влияние на поч-
венную биоту, в том числе и микроорганизмы.
В связи с этим изучение влияния нефтяных углеводородов на про-
цессы трансформации азота в почвах аридной зоны представляет научный
и практический интерес.
Целью данного исследования являлось изучение динамики числен-
ности микроорганизмов круговорота азота в песчаных почвах, подвержен-
ных антропогенному влиянию.

Объекты и методы исследований

Объектом исследований являлись песчаные почвы, отобранные
в санитарно-защитной зоне Астраханского газохимического комплекса
(АГХК), и модельные почвенные экосистемы на основе отобранных почв.
Пробы почвы отбирали и исследовали по стандартным и общепринятым
методикам [5]. На основе отобранных образцов песчаной почвы были по-
ставлены четыре модельные экосистемы. В качестве загрязнителя вносили
сырую стерильную нефть. Первая экосистема служила контролем, во вто-
рую вносили 0,3 %, в третью – 3 % и четвертую – 10 % нефти. В качестве
фоновой почвы для сравнения отбирали образцы почвы с садового участ-
ка, которая по своим свойствам близка к каштановой почве.

178
 ЭКОЛОГИЯ

Для выделения микроорганизмов круговорота азота из каждой мо-

дельной экосистемы производили посевы почв методом предельных раз-
ведений [5, 6] в следующих временных промежутках: 0, 3, 6 и 52 недели.
Для выделения аммонификаторов использовали пептонную воду
(г/л водопроводной воды): пептон – 10, NaCl – 0,5; нитрификаторов –
элективную минеральную среду Виноградского (г/л водопроводной воды):
(NH4)2SO4 – 2,0, K2HPO4 – 1,0, MgSO4 – 0,5, FeSO4 – 0,4, NaCl – 2,0,
небольшое количество мела; денитрифицирующих микроорганизмов – элек-
тивную среду Гильтая (г/л водопроводной воды): цитрат натрия или калия
трехзамещенный – 5,0, KNO3 – 2,0, аспарагин – 1,0, KH2PO4 – 2,0, MgSO4 – 2,0,
CaCl2 – 0,2, FeCl3 – следы, агар – 18 % [7, 8]. Наиболее вероятную числен-
ность микроорганизмов в 1 г почв рассчитывали по таблице Мак-Креди [9].
Для обнаружения в контрольной почве азотфиксирующих микроор-
ганизмов рода Azotobacter использовали метод почвенных комочков [6].
Комочки (по 50 шт.) раскладывали правильными рядами в каждую чашку
Петри на среду Эшби (г/л): маннит – 20,0; K2HPO4 – 0,2; MgSO4, NaCl – 0,2;
K2SO4 – 0,1; CaCO3 – 5,0; вода дистиллированная.
Для выделения азотфиксирующих микроорганизмов из песчаной
почвы производили высев 0,25 г сухой почвы на среду Эшби. О наличии
азотобактера в исследуемом материале судили по образованию характер-
ных колоний вокруг песчинок. Производили подсчет количества колоний
на чашке в пересчете на 1 г почвы [8].

Результаты и обсуждение
Исследуемая почва имела светлый цвет с рассыпчатой консистенци-
ей, определена как почва песчаная с вкраплениями угля. Данная почва об-
ладает низкой гумифицированностью и высокой степенью минерализации,
что характерно для почв Астраханской области, которые располагаются
в аридной зоне. Общее микробное число составляет 106–107 КОЕ/г. Образ-
цы фоновой почвы имели темный цвет и характеризовались большим со-
держанием гумуса, общее микробное число – более 108 КОЕ/г.
Анализ физиологических групп микроорганизмов в исследуемых
почвах показал, что их численность в песчаной почве на 1–2 порядка ни-
же, чем в фоновой. Это указывает на то, что развитие микроорганизмов
и процесс круговорота азота в песчаной почве происходят менее интен-
сивно вследствие незначительного количества органического вещества,
используемого микроорганизмами круговорота азота в качестве основного
энергетического субстрата.
В ходе наблюдений за модельными экосистемами с внесенной сы-
рой стерильной нефтью установлено, что по истечении 3-х недель экспе-
риментальных исследований численность аммонифицирующих и азотфик-
сирующих микроорганизмов существенно не изменилась в сравнении
с начальными показателями и составила 105–106 и 102–103 КОЕ/г соответствен-
но. Численность нитрифицирующих микроорганизмов уменьшилась на два
порядка – до 103 КОЕ/г, денитрифицирующих – до 104–102 КОЕ/г (рис. 1–3).

179
 ISSN 1812-9498. ВЕСТНИК АГТУ. 2006. № 3 (32)

8
7
6
5

NN
4

lg lg
3
2
1
0
0 3 6 52
Продолжительность
продолжительностьэксперимента,
эксперимента,недели
недели
Аммонифицирующие Нитрифицирующие I фазы
Нитрифицирующие II фазы Денитрифицирующие
Азотфиксирующие

Рис. 1. Динамика численности микроорганизмов круговорота азота

в модельной экосистеме с 0,3 % нефти

8
7
6
5
lg N
N

4
lg

3
2
1
0
0 3 6 52
Продолжительность эксперимента,
прродолжительность недели
эксперимента, недели
Аммонифицирующие Нитрифицирующие I фазы
Нитрифицирующие II фазы Денитрифицирующие
Азотфиксирующие

Рис. 2. Динамика численности микроорганизмов круговорота азота

в модельной экосистеме с 3 % нефти
8
7
6
lglgNN

5
4
3
2
1
0
0 3 6 52
Продолжительность
продолжительность эксперимента,недели
эксперимента, недели
Аммонифицирующие Нитрифицирующие I фазы
Нитрифицирующие II фазы Денитрифицирующие
Азотфиксирующие

Рис. 3. Динамика численности микроорганизмов круговорота азота

в модельной экосистеме с 10 % нефти

180
 ЭКОЛОГИЯ

По сравнению с почвой контрольной экосистемы численность всех

групп микроорганизмов круговорота азота в почве с 0,3 % нефти не изме-
нялась (см. рис. 1). В почве модельных экосистем с 3 и 10 % нефти отме-
чено снижение численности нитрифицирующих (до единичных клеток),
денитрифицирующих и азотфиксирующих бактерий (до 102 КОЕ/г) в срав-
нении с контрольной почвой.
По истечении 6-ти недель экспозиции модельных экосистем числен-
ность нитрифицирующих и денитрифицирующих микроорганизмов за-
метно снизилась еще на 1–2 порядка и составила 104–102 КОЕ/г для нит-
рифицирующих бактерий I фазы и 103–102 КОЕ/г для денитрифицирую-
щих бактерий. Численность микроорганизмов II фазы нитрификации сни-
зилась до единичных клеток. В этом же временном промежутке было от-
мечено увеличение численности аммонифицирующих микроорганизмов
на порядок (107 КОЕ/г) во всех модельных экосистемах (рис. 1–3). Чис-
ленность азотфиксирующих микроорганизмов существенно не менялась.
По истечении 52-х недель экспериментальных наблюдений отмече-
но увеличение численности практически всех групп бактерий на 1–2 по-
рядка не только в контрольной почве, но и во всех модельных экосистемах
с нефтью (рис. 1–3).
Увеличение численности аммонифицирующих микроорганизмов,
вероятно, связано с развитием в загрязненной почве так называемого
«компенсационного» процесса, при котором ингибирование нефтяными
углеводородами определенных почвенных ферментов компенсируется
увеличением численности аммонифицирующих бактерий, которые спо-
собны увеличить выделение данных ферментов в почву [4]. Снижение
численности денитрифицирующих микроорганизмов объясняется ингиби-
рующим влиянием нефти на ферменты нитрат- и нитритредуктазы, кото-
рые катализируют процесс восстановления нитратного азота в почве до
аммиака. Возможно, климатические, химические и агрофизические осо-
бенности почв аридной зоны препятствуют развитию «компенсационного»
механизма для развития денитрификаторов. Увеличение численности
азотфиксирующих бактерий обусловлено тем, что они способны исполь-
зовать в достаточно больших количествах продукты метаболизма углево-
дородокисляющих микроорганизмов [3, 4].
Таким образом, в ходе исследований в песчаных почвах аридной зо-
ны обнаружены такие группы микроорганизмов круговорота азота, как
аммонифицирующие (106 КОЕ/г), нитрифицирующие (105 КОЕ/г), денит-
рифицирующие (105 КОЕ/г) и азотфиксирующие (102 КОЕ/г) бактерии.
Установлено, что концентрации нефти 0,3 и 3 % не оказывают ток-
сического действия на бактерии круговорота азота в песчаных почвах.
Нефть в концентрации 10 % оказывает ингибирующее действие на разви-
тие всех микроорганизмов круговорота азота. Наиболее устойчивыми
к нефтяному загрязнению почв аридной зоны являются аммонифицирую-
щие и азотфиксирующие микроорганизмы, тогда как нитрифицирующие
и денитрифицирующие микроорганизмы наиболее чувствительны к воздей-
ствию нефти и неспособны адаптироваться к подобному роду загрязнения.

181
 ISSN 1812-9498. ВЕСТНИК АГТУ. 2006. № 3 (32)

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаменталь-

ных исследований и администрации Астраханской области (грант РФФИ
№ 05-04-96507 «Перспективные биотехнологии очистки вод и почв от нефтя-
ных углеводородов»).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Тюрин И. В., Соколов А. В. Типы почв и эффективность удобрений // Изв. АН
СССР. Сер. биол. – 1958. – № 6. – С. 651–660.
2. Емцев В. Т., Мишустин Е. Н. Микробиология. – 5-е изд. – М.: Дрофа, 2005. – 445 с.
3. Исмаилов Н. М. Влияние нефтяного загрязнения на круговорот азота в почве //
Микробиология. – 1983. – Т. 52, вып. 6. – С. 1003–1007.
4. Исмаилов Н. М. Микробиологическая и ферментативная активность нефтезаг-
рязненных почв // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. –
М., 1988. – С. 42–56.
5. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для вузов / Е. З. Теппер и др.;
Под ред. В. К. Шильникова. – 5-е изд., перераб. и доп. – М.: Дрофа, 2004. – 256 с.
6. Практикум по биологии почв: Учеб. пособие / Г. М. Зенова, А. Л. Степанов и др. –
М.: Изд-во МГУ, 2002. – 120 с.
7. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под. ред. Д. Г. Звягинцева. –
М.: Изд-во МГУ, 1991. – 304 с.
8. Ежов Г. И. Руководство к практическим занятиям по сельскохозяйственной
микробиологии. – М.: Высш. шк., 1981. – 271 с.
9. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие / Под. ред. Н. С. Егорова. – М.:
Изд-во МГУ, 1976. – 307 с.

Статья поступила в редакцию 24.03.06,

в окончательном варианте – 18.04.06

THE INFLUENCE OF PETROLEUM

ON MICROORGANISMS OF NITROGEN CYCLE
IN SOILS OF THE ARID ZONE
A. N. Parkhomenko, O. B. Soprunova
All the groups of microorganisms of nitrogen cycle are found
out in sandy soils of the arid zone. They are ammonifying (106 КОЕ/g),
nitrifying (105 КОЕ/g), denitrifying (105 КОЕ/g), nitrogen-fixing
(102 КОЕ/г) microorganisms. It is established that the 10 % concen-
tration of petroleum has had an inhibitory action on the development
of microorganisms of nitrogen cycle. The most resistant to the petro-
leum pollution of sandy soils of the arid zone are ammonifying and ni-
trogen-fixing microorganisms, and the most sensitive to it are nitrify-
ing and denitrifying microorganisms.

182