Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Обзор 18F-РФП для онкологии
Обзор 18F-РФП для онкологии
1. 6-[18F]-L-ФДОФА ((S)-3-[3,4-дигидрокси-6-[18F]фторфенил]-2-
аминопропионовая кислота.
2. [18F]NaF ([18F]натрия фторид)
3. [18F]ФЭТ ([18F]фторэтилтирозин)
4. [18F]ФЭХол ([18F]фторэтилхолин)
5. [18F]ФЭС ([18F]фторэстрадиол)
6. [18F]ФЛТ ([18F]фтортимидин)
7. [18F]фторированные аналоги PSMA .
Подготовлен:
Красикова Раиса Николаевна, к.х.н.,
Федорова Ольга Сталлитовна, к.х.н.
2016 г.
1
Содержание
Стр.
3
Список сокращений
5
Введение. Методы получения РФП на основе фтора-18
6-[18F]-L-ФДОФА ((S)-3-[3,4-дигидрокси-6-[18F]фторфенил]-2- 10
аминопропионовая кислота.
26
Список использованных источников для раздела 6-[18F]-L-ФДОФА
30
[18F]NaF ([18F]натрия фторид)
37
Список использованных источников для раздела [18F]NaF
39
[18F]ФЭТ ([18F]фторэтилтирозин)
55
Список использованных источников для раздела [18F]ФЭТ
59
[18F]ФЭХол ([18F]фторэтилхолин)
71
Список использованных источников для раздела [18F]ФЭХол
74
[18F]ФЭС ([18F]фторэстрадиол) [18F]ФЭС
86
Список использованных источников для раздела [18F]ФЭС
89
[18F]ФЛТ ([18F]фтортимидин) [18F]ФЛТ
102
Список использованных источников для раздела [18F]ФЛТ
105
[18F]фторированные аналоги PSMA .
108
Список использованных источников для раздела Аналоги [18F]PSMA
2
Список сокращений
18
((S)-3-[3,4-дигидрокси-6-[18F]фторфенил]-2-аминопропионовая
6-[ F]-L-ФДОФА
кислота
[18F]ФЛТ 3’-дезокси-3’-[18F]фтортимидин
18
Меченные [18F] аналоги PSMA (prostate specific membrane
F-ПСМА
antigen)
Сульфурильный
прекурсор для синтеза 3-О-метоксиметил-16,17-О-сульфурил-16-эпиэстрол
[18F]ФЭС
РЭ Рецепторы к эстрогенам
РП Рецепторы к прогестерону
Ms Мезил. Метилсульфонат ион
Tf Трифлат. Трифторометилсульфонат ион
Ns Нозил. 4-нитробезилсульфонат ион
Ts Тозил. Пара-толуол-сульфонат ион.
Boc Трет-бутокси карбонил
3
Boc-DMTr-Ns 3-N-Boc-5'-O-диметокситритил-3'-O-нозил-тимидин
Boc-Boc-Ns 3-N-Boc-5'-O-Boc-3'-O-нозил-тимидин
МФХК Межфазный хиральный катализатор
EOS End of synthesis - выход на конец синтеза
EOB End of bombardment - выход в пересчете на конец облучения
ТФЭ Твердофазная экстракция
Бк Беккерель, единица измерения радиоактивности, 1 расп/c
Ки Кюри, единица измерения радиоактивности, 3,7×1010 расп/c
4
Введение
9
6-[18F]-L-ФДОФА
Применение 6-[18F]-L-ФДОФА в клинических ПЭТ исследованиях.
10
примененной терапии [Seibyl, 2005]. Возможно проводить и уточняющую диагностику
других заболеваний, связанных с нарушением дофаминергической функции мозга, как
например, болезни Альцгеймера [Braak, 2003].
Кроме того, с недавнего времени 6-[18F]-L-ФДОФА эффективно применяется в ПЭТ
диагностике нейроэндокринных опухолей (НЭО). Исследование [Montravers, 2006]
описывает результаты ПЭТ-6-[18F]-L-ФДОФА у 30 пациентов с карциноидными опухолями,
где верный диагноз по результатам ПЭТ был поставлен в 93% случаев. При диагностике
феохромоцитом исследование с 6-[18F]-L-ФДОФА продемонстрировало 100%
чувствительность и 100% специфичность [Hoegerle, 2002]. Работа той же группы ученых
показала пригодность этого РФП для диагностических исследований медуллярной
карциномы щитовидной железы [Hoegerle, 2001]. В большом обзоре 2013 года [Balogova,
2013] подробно описываются клинические случаи и статистика исследований с [18F]ФДГ и 6-
[18F]-L-ФДОФА при разных типах нейроэнодкринных опухолей. Авторы пришли к
заключению о том, что для диагностики необходим ряд последовательных исследований,
одним из которых является ПЭТ-скан с 6-[18F]-L-ФДОФА. В целом в диагностике НЭО
метод ПЭТ с 6-L-[18F]ФДОФА успешно конкурирует с 68
Ga-DOTATATE - наиболее
распространенным РФП на основе генераторного галлия-68 (T1/2 68 мин). В сравнении с
классическим ОФЭКТ исследованием с меченным йодом-123 мета йодбензил гуанидином
([123I]MIBG), применяемым более 30 лет в диагностике НЭО, ПЭТ исследование с 6-L-
[18F]ФДОФА выигрывает ввиду более высокой разрешающей способности метода ПЭТ и
лучшей контрастности ПЭТ изображений.
6-[18F]-L-ФДОФА является важнейшим РФП для дифференциальной диагностики
опухолей мозга методом ПЭТ. Визуализация таких новообразований с [18F]ФДГ
затруднительна ввиду повышенного фонового накопления глюкозы в сером веществе мозга.
Поэтому применение РФП другой химической природы, в частности аминокислот, позволяет
получить более контрастные ПЭТ изображения в сравнении с [18F]ФДГ. В настоящее время
лучшим диагностическим агентом этого класса признан L-[11C-метил]метионин ([11C]МЕТ),
применяемый во многих ПЭТ центрах России. Ограничением [11C]МЕТ является малый
период полураспада углерода-11 (20.4 мин). Использование меченых фтором-18
аминокислот п в последние годы приобретает все большее значение за счет появлений
большого числа ПЭТ центров, не оборудованных собственным циклотроном и работающих
на поставляемых централизованно РФП. Сравнение 6-[18F]-L-ФДОФА с [11C]МЕТ и
[18F]ФДГ убедительно возможность применения 6-[18F]-L-ФДОФА в диагностике опухолей
мозга наравне с [11C]МЕТ [Becherer, 2003; Chen, 2006]. На основании данных исследования
кинетики накопления 6-[18F]-L-ФДОФА в мозге пациентов с опухолями мозга со степенью
11
злокачественности от II до IV были выстроены двух- и трех-компартментная модели для
расчета накопления-выведения препарата из опухолевой ткани [Schiepers, 2007].
6-L-[18F]ФДОФА вошла в список РФП класса аминокислот (наряду с [ 18F]ФЭТ),
рекомендованных в 2016 г. для диагностики глиом методом ПЭТ Европейской рабочей
группой [Albert, 2016].
R R NH2
N N
H [18F]F2 H HBr
18
Sn(CH3)3 18
F F
CHCl3 130oC, 10 мин
BocO BocO HO
OBoc OBoc OH
R = Boc, CHO
12
В качестве растворителя на первой стадии фторирования долгие годы использовали
фреон (фтортрихлорметан), а после запрещения его применения - обычный или
высокочистый дейтерированный хлороформ [Kao, 2011]. Второй стадией синтеза является
снятие защиты функциональных и гидроксильных групп с использованием сильных кислот
(водных растворов HBr или HI). Преимуществами данного метода является высокая
региоселективность (Табл.1) и простая процедура синтеза, включающая всего две стадии.
Метод дестаннилирования успешно автоматизирован в современных модулях для синтеза
РФП для ПЭТ и применяется в большинстве ПЭТ центров для рутинного производства 6-
[18F]-L-ФДОФА. Следует отметить, что при использовании в качестве фторирующего агента
[18F]F2 в реакции фторирования необходимы большие (40-60 мг) количества прекурсора.
Даже при очистке методом полупрепаративной ВЭЖХ в продукте могут оставаться следы
токсичного металла, содержание которых надо строго контролировать.
Подробное описание процедуры электрофильного синтеза будет представлено в
разделе «Автоматизация».
FDG Synthesizer
45 33 10 De Vries, 1999
(Nuclear Interface)
Tracerlab FX FE (GE
Нет данных 40 39 Kao, 2011
Healthcare)
13
F2 (Raytest)
Однако в сочетании с низкой начальной активностью [18F]F2 даже этот метод не дает
возможностей нарабатывать 6-[18F]-L-ФДОФА в количествах, соответствующих
возрастающей потребности в применении этого РФП в ПЭТ диагностике. Так в типичном
синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА по методу [Kao, 2011] стартовая активность [18F]F2 после
облучения составляет около 9 ГБк (243 мКи). После завершения всех стадий синтеза,
включая очистку методом полупрепаративной радиоВЭЖХ, получают 2,6 ГБк или 70 мКи
(3-5 клинических доз РФП) радиотрейсера с удельной мольной активностью 39 ГБк/µмоль
(1,05 Ки/µмоль).
Методика синтеза электрофильным методом очень близка для разных модулей,
приведем для примера процедуру, которая дает в результате максимальный
радиохимический выход [Kao, 2011]. Газ [18F]F2 с носителем получают по ядерной реакции
20
Ne(d,α)18F путем облучения неоновой мишени дейтонами в течение 150 мин. Мишенный
неон содержит 0,3% фтора-19 (нерадиоактивного), который необходим для лучшего
выделения изотопа фтора-18 из мишени. После облучения мишенный газ доставляется в
сосуд, содержащий 60 мг станнильного прекурсора (ABX, Германия), растворенного в 10 мл
CFCl3. Реакция фторирования проходит при комнатной температуре, затем растворитель
упаривают. Гидролиз проводится путем добавления 48% HBr при температуре 130 °С в
течение 10 минут. Реакционную смесь остужают и частично нейтрализуют, после чего
подвергают очистке методом полупрепаративной ВЭЖХ на колонке VP250/16 Nucleosil 100-
7 C18 (Macherey-Nagel), элюент 6,9 г дигидрофосфата натрия в 1 л воды с добавлением 0,5
мл 0,5 N NaOH и 20 мл этанола. После очистки к раствору 6-[18F]-L-ФДОФА в элюенте
добавляют небольшое количество раствора аскорбиновой кислоты (100 мкл, 75 мг в 600 мкл
0,5 N NaOH) для стабилизации.
14
фторирования применяется для введения фтора-18 как в алифатические, так и в
ароматические субстраты. В случае сложных ароматических соединений, таких как
ароматические аминокислоты, содержащие фтор-18 в бензольном кольце (в том числе 6-
[18F]-L-ФДОФА), прямое введение метки невозможно, поскольку положение «уходящей»
группы сильно дезактивировано. В этом случае синтез радиотрейсера проводится в
несколько этапов. Сначала фтор-18 вводится в относительно простые молекулы (синтоны),
которые обладают высокой реакционной способностью в определенных реакциях.
Классическим методом синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА является предложенный в конце 90-х
годов метод асимметрического синтеза [Lemaire, 1994; Krasikova, 2004], протекающий в пять
стадий, как это схематично показано на Рис.2. Радиоактивными синтонами служат
замещенные бензил бромиды или бензил йодиды, меченные фтором-18. Эти соединения
используются в качестве электрофильных агентов в реакции асимметрического
алкилирования хиральных комплексов, содержащих глициновый или аланиновый фрагмент -
необходимый «кирпичик» для построения молекулы аминокислоты. Следует отметить, что
синтез лишь галогенирующего агента (бромида или йодида) выполняется в три стадии,
начиная с введения метки в молекулу замещенного бензальдегида, стадию восстановления
альдегида в спирт и галогенирования. На каждой стадии необходима промежуточная
очистка, в результате его очень сложно автоматизировать. Критичной стадией синтеза также
является снятие защиты гидрокси групп бензольного кольца с использованием 57% водного
раcтвора йодистоводородной кислоты при высокой температуре; что также ассоциируется со
сложностью автоматизации и риском повреждения компонентов (вентилей, клапанов и др.)
дорогостоящих модулей синтеза.
15
Рис. 2. Общая схема асимметрического метода синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА [Орловская,
2014].
Ph3PBr2
CH2Cl2 , 5 min
Cl Cl
Cl O Cl
Br
18
O F
O O
O CH2Cl2, t-BuOK O
N N
18
H 5 min, 40oC Ni F
Ni
H H
N N H
N H N
O O
Ph Ph
1) 6N HCl O O
5 min,140oC
COOH
18
F 2) 57% HI
Ni-DCBPB-Gly 10 min,170oC
NH2
HO OH
[18F]ФДОФА
19
Рис. 5. Схема синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с использованием нитро-прекурсора фирмы
АВХ [Hoepping, 2014]
20
Рис. 6. Схема нуклеофильного синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с использованием пинакол
замещенных арилбороновых эфиров [Tredwell, 2014]
Некоторые другие методы нуклеофильного синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с
использованием прекурсоров на основе солей йодония, гипервалентного йода,
рассмотренные в обзорах [Орловская, 2014; Edwards, 2015; Prietze, 2014], пока не получили
практического применения и не будут обсуждаться в данном обзоре.
Контролируемый
Критерий допустимости Метод определения
параметр
Визуальное Чистый, бесцветный
Визуальный осмотр
соответствие раствор
Подлинность
Соответствие стандарту РадиоВЭЖХ, условия*
(идентичность)
Радионуклидная
>99% Оценка гамма-спектра
чистота, %
РадиоВЭЖХ, условия *) Время
Радиохимическая удерживания Rt [18F]ФДОФА должно
>95%
чистота, % быть в пределах ±5% от Rt
нерадиоактивного стандарта
Энантиомерная
>95% РадиоВЭЖХ, условия **
чистота, %
Объемная Достаточная для проведения Измерение объема шприцом,
активность, Ки/мл ПЭТ-исследования на измерение активности в изотопном
или МБк/мл человеке калибраторе
21
Химическая чистота >99%,
Электр. способ
производства:
Триметил хлорид олова 0,5
Химическая
мг/V и 6-гидрокси-ДОФА ВЭЖХ, #
чистота (%) и
0,025 мг/V, V -
химические
максимально вводимая доза,
примеси:
мл#
Нуклеоф.способ
производства: наличие и
количество примесей ВЭЖХ
зависят от типа
нуклеоф.синтеза
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии со статьей
растворители,
не более 0,30 «Остаточные растворители»
мг/мл
рН 4,0 – 5,5# Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен быть
Осмометрия
мОсм изотоничным
Раствор должен быть Отсутствие роста микроорганизмов в
Стерильность
стерильным питательных средах; ОФС 42-0066-07
Уровень Менее 175/V, где V -
бактериальных максимально вводимая доза,
ЛАЛ-тест согласно ОФС 42-0062-07
эндотоксинов, мл#
EU/ml
22
**)
хиральная колонка Crownpak (+) (Daicel), 150 x 3 мм; подвижная фаза - раствор хлорной
кислоты, рН 2, 0,8 мл/мин; времена удерживания (Rt) L- и D изомеров [18F] ФДОФА
составляли 5,3 и 6,5 мин, соответственно. [Красикова, 2007]
***)
ТСХ пластинка c тонким слоем силикагеля ("Kieselgel 60 F254") размером 15 х 100 мм,
элюент МеОН/NH4OH 30% (90/10 v/v);. Интенсивность цветового пятна испытуемого
раствора не должна превышать интенсивности окрашивания стандарта, нанесенного на ту же
пластинку.
Время
Радиохим Удельная
Метод Метод Метод синтеза Литер.
. выход, активность,
синтеза автоматизации очистки (включая источник
% (EOS) ГБк/мкмоль
очистку)
GE FastLab*, Lemaire,
1 + ВЭЖХ 62 мин 36 >740
кассета 2015
ВЭЖХ Pelerin,
1 AllInOne, Trasis 73 мин 38 -
(встроенная) 2016
GE PET
GE FastLab, Нет
2 ТФЭ 12,4 - users forum
кассета данных
2014
IBA SYNTHERA
Sauvage,
2 (на двух ТФЭ 90 >10 -
2015
кассетах)
Preshlock,
3 Synthra ВЭЖХ 120 9 -
2016
24
Выводы о производстве 6-[18F]-L-ФДОФА
25
качества РФП возможно выполнять из отобранного образца уже после отгрузки РФП для
доставки, т.е. время на контроль качества не тратится.
Albert N.L., Weller M., Suchorska B., Galldiks N., Soffietti R., Kim M.M., la Fougere C.,
Pope W., Law I., Arbizu J., Chamberlain M.C., Vogelbaum M., Ellingson B.M., Tonn J.C.
Response Assessment in Neuro- Oncology working group and European Association for Neuro-
Oncology recommendations for the clinical use of PET imaging in gliomas. Neuro-Oncology. 2016;
18: 1199-1208.
Becherer A, Karanikas G, Szabo M, et al: Brain tumour imaging with PET: a comparison
between [18F]fluorodopa and [11C]methionine. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2003. 30:1561-1567.
Braak H, Del K, Tredici U, et al: Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson’s
disease. Neurobiol Aging 2003. 24:197-211.
26
Brooks D.J. Morphological and functional imaging studies on the diagnosis and progression of
Parkinson’s disease. J Neurol. 2000; 247: II/11–II/18.
Chen W, Silverman DHS, Delaloye S, et al: 18F-FDOPA PET imaging of brain tumors:
comparison study with 18F-FDG PET and evaluation of diagnostic accuracy. J Nucl Med. 2006; 47:
904-911.
Hoepping A., Muller M., Smits R., Mollitor J., Clausnitzer A., Baumgart D. EP 2 746 250 A1,
2014.
Kao C.-H. K., Hsu W.-L., Xie H.-L., Lin M.-C., Lan W.-C., Chao H.-Y. GMP production of
[18F]FDOPA and issues concerning its quality analyses as in USP ‘‘Fluorodopa F 18 Injection’’Ann
Nucl Med. 2011; 25:309-316.
Krasikova R. PET radiochemistry automation: State of the art and future trends in 18F-
nucleophilic fluorination. Curr Org Chem. 2013; 17; 2097-2107.
Krasikova R.N., Zaitsev V.V., Ametamey S.M., Kuznetsova O.F., Fedorova O.S., Mosevich
I.K., Belokon Y.N., Vyskočild Š., Shatik S.V., Nader M., Schubiger P.A. Catalytic enantioselective
synthesis of 18F-fluorinated α-amino acids under phase transfer conditions using (S)-NOBIN. Nucl
Med Biol. 2004; 31:597-603.
Lemaire C., Damhaut P., Plenevaux A., Comar D. Enantioselective synthesis of 6-[fluorine-
18]-fluoro-L-dopa from no-carrier-added fluorine-18-fluoride. J Nucl Med. 1994; 35: 1996-2002.
Lemaire C., Libert L., Franci X., Genon J.-L., Kuci S., Giacomelli F., Luxen A. Automated
production at the curie level of no-carrier-added 6-[18F]fluoro-L-dopa and 2-[18F]fluoro-L-tyrosine
on a FASTlab synthesizer. J Label Compds Radiopharm. 2015; 58 281–290.
Libert L.C., Franci X., Plenevaux A.R., Ooi T., Maruoka K., Luxen A.J., Lemaire C.F.
Production at the Curie Level of No-Carrier-Added 6-18F-Fluoro-L-Dopa. J Nucl Med. 2013; 54: 1-
8.
27
Luurtsema G., Boersma H.H., Schepers M., de Vries A.M.T., Maas B., Zijlma R., de Vries
E.F.J., Elsinga F. Improved GMP-compliant multi-dose production and quality control of 6-
[18F]fluror-L-DOPA. EJNMMI Radiopharmacy and Chemistry 2016, 1:7. DOI 10.1186/s41181-
016-0009-1.
Pelerin E. High yield 18F-FDOPA using nucleophilic synthesis in a PET clinical study. J Nucl
Med. 2016; 57, Suppl. 2: 2695.
Preshlock S., Calderwood S., Verhoog S., Tredwell M., Huiban M., Hienzsch A., Gruber
S., Wilson T.C., Taylor N.J., Cailly T., Schedler M., Collier T.L., Passchier J., Smits R., Mollitor
.J., Hoepping A., Mueller M., Genicot C., Mercier J., Gouverneur V. Enhanced copper-mediated
(18)F-fluorination of aryl boronic esters provides eight radiotracers for PET applications. Chem
Commun (Camb). 2016; 28; 52(54):8361-4.
18
Sauvage C., Lazarova N., Goblet D., Mueller M. Synthesis of F-LDOPA via nucleophilic
pathway on IBA Synthera. ISRS congress 2015 (poster).
Schiepers C., Chen W., Cloughesy T., Dahlbom M., Huang S.-C. 18F-FDOPA Kinetics in
Brain Tumors. J Nucl Med 2007, 48:1651-1661.
Seibyl J, Jennings D, Tabamo R, Marek K: The role of neuroimaging in the early diagnosis
and evaluation of Parkinson’s disease. Minerva Med. 2005; 96:353-364.
Trasis. F-DOPA as easy as FDG - Newsletter June 2014. [Online] Available from:
http://www.trasis.com/pages/downloads_press.html [Accessed: 4th December 2014].
Tredwell M., Preshlock S.M., Taylor N.J., Gruber S., Huiban M., Passchier J., Mercier J.,
Genicot Ch., Gouverneur V. A General Copper-Mediated Nucleophilic 18F Fluorination of Arenes.
Angew Chem Int Ed. 2014; 53: 7751-7755.
28
de Vries E.F.J., Luurstema G., Brussermann M., Elsinga P.H., Vaalburg W. Fully automated
synthesis module fort he high yield one-pot preparation of 6-[18F]fluoro-L-DOPA. Appl Radiat Isot.
1999; 51:389-394.
Wagner F.M., Ermert J., Coenen H.H. Three-Step, ‘‘One-Pot’’ Radiosynthesis of 6-Fluoro-3,4-
Dihydroxy-L-Phenylalanine by Isotopic Exchange. J Nucl Med. 2009; 50: 1724-1729.
Голубев В.Л., Левин Я.И., Вейн A.M. Болезнь Паркинсона и синдром паркинсонизма. М.:
МЕДпресс, 1999. 416 с
Красикова Р.Н., Кузнецова О.Ф., Федорова О.С., Мосевич И.К., Малеев В.И., Белоконь
Ю.Н., Савельева Т.Ф., Сагиян А.С., Дадаян С.А., Петросян А.А. Асимметрический синтез 6-
18
F-L-FDOPA с использованием хиральных комплексов никеля (II). Радиохимия. 2007; 49:
449-454.
Орловская В.В., Федорова О.С., Красикова Р.Н. Методы синтеза меченных фтором-18
ароматических аминокислот, радиотрейсеров для позитронной эмиссионной томографии
(ПЭТ). Изв. Ак. наук. Сер. Хим. 2015; 7: 1518-1535.
29
[18F] натрия фторид
30
в 1962 г. Получение изотопа фтора-18 осуществлялась по абсолютно иным, непривычным в
настоящее время ядерным реакциям, поскольку в 60-70 годы просто не существовало
медицинских специализированных циклотронов. Ученые получали фтор-18 по нескольким
реакциям. Облучение воды α-частицами с энергией 30 МэВ позволяло проводить реакции
16
O(4He, np)18F; 16
O(4He,d)18F; 16
O(4He, 2n)18Ne. Согласно третьей реакции получается 18
Ne,
который быстро распадается до 18
F. Облучение воды частицами 3He с энергией 22 МэВ
давало в результате реакцию 16
O(3He, p)18F, и наконец облучение неона дейтронами c
энергией 8 МэВ запускало реакцию 20Ne(d,α)18F. Все эти реакции позволяли получать фтор-
18 с высоким выходом и не приводили к загрязнению конечного продукта тритием [Blau,
1972].
Подробностей синтеза Na[18F]F в работе не приводится, публикация посвящена в
основном медицинским аспектам. В процессе облучения водной мишени циклотрона
радионуклид фтор-18 стабилизируется в форме 18
F-фторид-аниона, и его перевод в
необходимую инъекционную форму натрия фторида-18F не требует сложных химических
операций. Необходимо просто перевести 18
F-фторид-анион в химическую форму натриевой
соли. Мы можем предположить, что клиницисты просто разбавляли полученный в
циклотроне изотоп фтора-18 в воде раствором 0,9% NaCl для инъекций и подвергали
дальнейшей стерилизации в автоклаве. Упоминаний о контроле качества готового препарата
в данной публикации нет.
Синтез данного РФП крайне прост и не включает никаких химических реакций, кроме
перевода аниона фтора [18F-] в форму натриевой соли. [18F]Фторид-анион производится на
циклотроне при облучении водной мишени протонами с энергией 16 МэВ по реакции
16
O(p,α)18F. Мишень заполнена водой, обогащенной кислородом-18 – 97% H2O18. По
окончании облучении вода, содержащая фтор-18, переводится по трубке током инертного
газа в горячую камеру и on-line пропускается через одноразовый картридж, содержащий
анионообменную смолу. Анион фтора [18F-] сорбируется на смоле, т.е. активность
конденсируется на картридже. Затем картридж промывают 0,9% раствором NaCl в
отдельный сосуд, при этом активность десорбируется и в форме Na[18F]F переходит в
раствор. Раствор подвергается стерилизации путем автоклавирования или пропускания через
стерилизующий фильтр. На Рис.1 представлена схема синтеза. В синтезе применяют разные
анионообменные картриджи или их комбинацию, а также меняют режимы их
кондиционирования (предварительной промывки). Возможности использования разных
картриджей будут подробно описаны в разделе «Автоматизация синтеза».
Как описано в работе [Kao 2010] Na[18F]F можно производить на очень простом модуле,
состоящем из двух трехходовых вентилей, сосуда для слива и стерильного флакона со
стерилизующим фильтром для приема конечного продукта. Несмотря на простоту, модуль
соответствует стандартам GMP-производства. Схема модуля показаны на Рис.2.
32
Рис.2. Схема модуля для получения Na[18F]F по работе [Kao 2010].
Радиохимический
96.2 ± 0.9 97.6 ± 1.2 96.7 ± 0.6 94.1 ± 2.1
выход, %
Время синтеза во всех случаях не превышало 2 мин с момента доставки облученной воды
из мишени. Было показано, что разные способы выделения дают в результате близкие
33
радиохимические выходы (94-97%), но разные значения рН конечного продукта. Картриджи
в ионной форме OH-, CO32- или HCO3- позволяли получить раствор Na[18F]F с рН>9, что
превышает разрешенные границы рН для инъекционных растворов. Авторы признали
наилучшим способ производства с QMA-Cl (pH конечного продукта 6,7) как
удовлетворяющий всем критериям качества РФП.
Был разработан синтез Na[18F]F на модифицированном модуле GE Tracerlab FXFN
[Hockley, 2010; Shao, 2010]. В этих публикациях описано использование двух других
картриджей, соединенных последовательно, а именно: SepPak Accell Plus CM Light
(катионообменный) и SepPak light QMA (анионообменный). Катионообменный картридж
был добавлен для удаления возможных примесей катионной природы, образующихся в
мишени циклотрона. Оба картриджа предварительно кондиционировались 10 мл этанола и
после этого 10 мл воды. При выполнении синтеза в таких условиях радиохимический выход
продукта был более 90% (без поправки на распад), время синтеза не более 10 мин,
радиохимическая чистота конечного продукта более 95%. Все параметры контроля качества
соответствовали нормам.
Использование модуля для синтеза [18F]ФДГ GE Tracerlab MX также описано в
применении к Na[18F]F [Martinez, 2011]. В данной работе был задействован только картридж
SepPak light QMA, но авторы апробировали три способа кондиционирования:
А) Промывка 10 мл 0,5 М K2CO3 и затем 10 мл этанола;
Б) Промывка 10 мл 0,5 М K2CO3 и затем 10 мл воды;
В) Промывка 10 мл этанола и затем 10 мл воды.
Результаты синтезов представлены в Табл.2, число опытов равно пяти для каждого
способа кондиционирования.
34
раствора >9. Выходы синтеза во всех случаях больше 95%, общее время синтеза 6 мин, но к
производству может быть принят только метод кондиционирования В (рН 6,5-7,5).
Кассетные модули также используются для синтеза Na[18F]F. Публикация 2015 г [Collet,
2015] посвящена разработке производства на двух кассетных модулях фирмы TRASIS –
AllInOne и miniAllInOne. Этот тип модулей представляет собой очень гибкую платформу, на
которой можно выполнять синтезы различных РФП, меченных фтором-18, углеродом-11 и
галлием-68 с применением различных кассет. В настоящее время разработана кассета и для
производства Na[18F]F. Для улавливания фтора-18 в кассете используется картридж SepPak
light QMA, способ кондиционирования не описывается. Судя по результатам контроля
качества конечного продукта, где рН раствора был в рамках 6-7,5, исследователи применяли
способ подготовки картриджа без карбоната калия. Для обоих модулей время производства
равнялось 4 мин, радиохимический выход был около 97% с поправкой на распад, параметры
контроля качества были в соответствии с установленными нормами.
В настоящее время существуют GMP-методы производства Na[18F]F на других модулях,
таких как Modular-Lab PharmTracer (Eckert&Ziegler), FASTlab Multi-Tracer-Plattform (GE) и
Synthera synthesis unit (IBA), но посвященных этому публикаций в открытой печати найти не
удалось.
Методы контроля качества. Требования к параметрам контроля качества
Na[18F]F.
Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Чистый,
Визуальное
бесцветный Визуальный осмотр
соответствие
раствор
радиоВЭЖХ, условия *или условия **
Подлинность Соответствие
Время удерживания Rt Na[18F]F должен быть в
(идентичность) стандарту
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фторида калия
Радионуклидная Оценка гамма-спектра или измерение периода
≥99%
чистота, % полураспада
радиоВЭЖХ, условия * или условия **
Радиохимическая
≥95% Время удерживания Rt Na[18F]F должен быть в
чистота, %
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фторида калия
Объемная Достаточная для Измерение объема шприцом или по весу,
35
активность, Ки/мл проведения ПЭТ- измерение активности в изотопном калибраторе
исследования
4,5 – 8,0
(US Pharmacopeia)
рН Потенциометрия
5,0 - 8,5
(Pharm Europa)
Изотоничность, Раствор должен
Осмометрия
мОсм быть изотоничным
Раствор должен Отсутствие роста микроорганизмов в
Стерильность
быть стерильным питательных средах
Уровень
<175 на общий
бактериальных LAL-тест
объем препарата
эндотоксинов, EU
ГЖХ
Остаточное
≤ 5000 Данный параметр контроля качества задан
содержание
[Martinez 2011] только в работе [Martinez 2011], в других
этанола, ppm
публикациях не упоминается
http://mshealthy.com.ua
Alexanderson-Rosas E., Monroy-Gonzalez A.G., Juarez-Orozco L.E., Martinez-Aguilar M.M.,
Estrada E., Soldivilla I., Garcia-Perez O., Soto-Lopez M.E. [18F]-Sodium fluoride uptake in
Takayasu arteritis. J Nucl Cardiology, 2016, doi:10.1007/s12350-016-0627-8
De Arcocha M., Portilla-Quattrociocchhi H., Medina-Quiroz P., Carril J.M. Current Status of the
Use of 18F-Sodium Fluoride in Bone Disease. Rev Esp Med Nucl 2012, 31(1):51-57.
Blau M., Ganatra R., Bender M.A. 18F-Fluoride for Bone Imaging. Sem in Nucl Med, 1972, 2(1),
P. 31-37.
37
Collet C., Otabashi M., Giacomelli F., Veran N., Karcher G., Chapleur Y., Lamande-Langle S.
Fully automated production of sodium [18F]fluoride on AllInOne and miniAllInOne synthesizers.
Appl Rad Isot, 2015, 102, P. 87-92.
Grant F.D., Fahey F.H., Packard A.B., Davis R.T., Alavi A., Treves S.T. Skeletal PET with 18F-
fluoride: applying new technology to an old tracer. J. Nucl. Med. 2008, 49:68-78.
Hockley B.G., Scott P.J.H. An automated method for preparation of [18F]sodium fluoride for
injection, USP to address the technetium-99m isotope shortage. Appl Rad Isot, 2010, 68, P.117-
119.
Hoh C.K., Hawkins R.A., Dahlbom M., Glaspy J.A., Seeger L.L., Choi Y., Schiepers C.W.,
Huang S.C., Satyamurthy N., Barrio J.R. Whole body skeletal imaging with [18F]fluoride ion and
PET. J. Comput Assist Tomogr 1993; 17: 34-41.
18
Jadvar H., Desai B., Conti P.S. Sodium F-Fluoride PET/CT of Bone, Joint, and Other
Disorders. Semin Nucl Med, 2015, 45:58-65.
18
Johnson L.L. Novel application of F-sodium fluoride an old tracer to a clinically neglected
condition. J Nucl Cardiol, 2013, 20:506-509.
Kao C.-H.K., Hsu W.-L., Kao P.-F., Lan W.-C., Xie H.-L., Lin M.-C., Chao H.-Y. An efficient
and aseptic preparation of “sodium fluoride (18F) injection”in a GMP compliant facility. Ann Nucl
Med, 2010, 24, P. 149-155.
Martinez T., Cordero B., Medin S., Sanchez Salmon A. Adaptation of the 18FDG Module for the
Preparation of a Sodium Fluoride [18F] Injection Solution in Agreement with the United States
(USP 32) and European Pharmacopeia (PhEur 6). Rev Esp Med Nucl, 2011, 30(6), P. 351-353.
Raynor W., Houshmand S., Gholami S., Emamzadehfard S., Rajapakse C.S., Blomberg B.A.,
Werner T.J., Hoilund-Carlsen P.F., Baker J.F., Alavi A. Evolving Role of Molecular Imaging with
18F-Sodium Fluoride PET as a Biomarker for Calcium Metabolism. Curr Osteoporos Rep, 2016,
14:115-125.
Scott, Peter J. H., and Hockley, Brian G., eds. Wiley Series on Radiochemical Syntheses :
Radiochemical Syntheses, Volume 1 : Radiopharmaceuticals for Positron Emission Tomography
(1). Hoboken, US: Wiley, 2011
Shao X., Hoareau R., Hockley B.G., Tluczek L.J.M., Henderson B.D., Padgett H.C., Scott P.J.H.
Highlighting the versatility of the tracerlab synthesis modules. Part 1: fully automated production of
[18F]labelled radiopharmaceuticals using a Tracerlab FXFN. Label Comp and Radiopharm, 2011, 54,
P. 292-307.
Tateishi U., Morita S., Inoue T. Diagnostic accuracy of 18F-fluoride PET and PET/CT in patients
with bone metastases: a systematic review and meta-analysis update. Clin Transl Imaging, 2013,
1:123-134.
38
O-(2’-[18F]фторэтил)-L-тирозин ([18F]ФЭТ)
Введение, история создания РФП
40
его получения в больших количествах для централизованной поставки в ПЭТ центры, не
имеющие собственного циклотрона (подобно [18F]ФДГ, хотя и в меньшем масштабе).
41
метилтирозином - широко используемым агентом для ОФЭКТ диагностики опухолей мозга -
выявлена высокая корреляция [18F]ФЭТ с накоплением как при первичных опухолях, так и
при их продолженном росте [Pauleit, 2004]. Авторы установили, что ПЭТ с [18F]ФЭТ дает
лучшую дискриминацию анатомических структур и контрастность изображений по
сравнению с ОФЭКТ с [123I]-α-метилтирозином - благодаря значительно более высокому
пространственному разрешению ПЭТ [Pauleit, 2004].
42
[Walter, 2012], оценку эффективности радиотерапии и прогноз, дифференциацию
послеоперационного некроза и метастаз [Galldiks, 2012] и др. (Рис. 1).
Принципиально важным с точки зрения синтеза и его автоматизации является тот факт,
что молекула [18F]ФЭТ содержит алифатический фрагмент, в который введение фтора-18
возможно методами нуклеофильного фторирования, эффективно применяемого в синтезе
большинства клинически значимых РФП для онкодиагностики. В идеальном варианте для
использования в рутинном производстве метод синтеза должен включать минимальное
количество стадий, при проведении их в одном и том же реакционном сосуде, а очистка
должна проводиться методом твердофазной экстракции на одноразовых картриджах. Именно
43
такая стратегия синтеза обеспечила в свое время доступность [18F]ФДГ и ее широкое
применение. Однако традиционным методом введения фтора-18 в алкильную группу
молекул, в том числе и производных аминокислот, является реакция фторалкилирования.
Реакция 18
F-фторэтилирования молекулы тирозина или его ди-натриевой соли была
использована в первых работах по синтезу [18F]ФЭТ в 1999 г. [Wester, 1999]. Алкилирующим
агентом служил [18F]фторэтилтозилат ([18F]ФЭТОЗ), который получается с высоким выходом
на первой стадии синтеза – реакции нуклеофильного радиофторирования диэтилтозилата
(Рис.2).
44
отделения предшественника была применена методика частичного осаждения, а именно:
после проведения реакции [18F]фторирования в ацетонитриле в реакционный сосуд
добавляли раствор 0,007 М уксусной кислоты, чем вызывали осаждение
непрореагировавшего диэтилтозилата. После этого реакционную смесь, содержащую осадок,
пропускали через маленький фильтр для механической очистки (размер пор 0,45 μм) и далее
через два последовательно соединенных картриджа Sep-Pak C18 Plus (Waters), на которых и
происходила сорбция [18F]ФЭТОЗ. Картриджи промывали водой, продували инертным газом
и смывали очищенный продукт 35% раствором метанола в воде [Schoultz, 2012]. Такая
методика позволяет исключить промежуточную процедуру хроматографирования. Вместе с
тем для реализации процесса необходимо два реакционных сосуда, как, например, в модуле
TracerLab FX N Pro.
45
В целом методы ТФЭ-очистки [18F]ФЭТ, полученного реакцией фторалкилирования
с использованием различных фторалкилирующих агентов, позволяют получить продукт
высокой радиохимической и химической чистоты, однако реализация этого процесса,
включающего перенос реагентов через несколько видов картриджей и промежуточные
промывки, является технически сложной, требует установки дополнительных вентилей и
тщательного контроля за переносом жидкости или газа.
47
В целом, метод прямого нуклеофильного фторирования с использованием в качестве
предшественника коммерчески доступного трет-бутилового эфира О-(2-тозилоксиэтил)-N-
тритил-L-тирозина, предложенного в работе [Hamacher, 2002], является наиболее
распространенным для производства [18F]ФЭТ для рутинных ПЭТ исследований и
оптимальным для поставки РФП в отдаленные ПЭТ центры. Описанный выше метод
получения и очистки [18F]ФЭТ на автоматизированном модуле Tracer Lab FX FN фирмы GE
Healthcare может быть адаптирован и к другим аналогичным модулям стационарного типа,
таким как RayTest, Synthra, к модульной платформе EckertZigler [Krasikova., 2013].
Тем не менее, наиболее удобными для наработки больших количеств РФП для
обеспечения работы нескольких ПЭТ камер или поставки в сателлитные ПЭТ центры
являются так называемые кассетные модули синтеза, широко применяемые при
автоматизации процессов работы с фтором-18. В этом случае необходимые реагенты,
картриджи для твердофазной экстракции и другие компоненты установлены в стерильную
одноразовую кассету, а проведение синтеза в полной мере соответствует требованиям GMP
(Good Manufacturing Practice) и не требует высококвалифицированного персонала
(радиохимика). Применительно к [18F]ФЭТ кассетный вариант синтеза разработан недавно
для модуля GE FastLab; разработка была представлена еще в 2014 г. на митинге
пользователей оборудования GE HealthCare в Гетеборге. Однако до настоящего времени
кассеты для синтеза [18F]ФЭТ на этом модуле в продажу не заявлены. Есть кассеты для
получения [18F]ФЭТ на кассетном модуле фирмы Scintomics типа GRP (Good
Radiopharmaceuticals Practice), но в России модули этой фирмы пока не представлены.
48
Отдельного внимания заслуживает российская разработка - совместный проект
ИМЧ РАН, Санкт-Петербург, и ИНЭОС РАН, Москва, в результате которой был предложен
принципиально другой метод асимметрического синтеза [18F]ФЭТ. В этом методе в качестве
предшественника в реакции прямого нуклеофильного фторирования был использован
комплекс никеляII основания Шиффа (S)-[N-2-(N’-бензилпролил)амино]бензофенона (BPB) и
алкилированного (S)-тирозина (Ni-BPB-TyrO-CH2CH2OTs) (Рис. 4) [Krasikova, 2008].
49
который удалялся пропусканием полученной смеси через специальный гидрофильный фильтр
SLGV013NK, Millipore. Фильтрат пропускали через картридж tC18 plus SepPak, который
удерживал большую часть продукта. Картридж промывали 5 мл воды, затем продукт смывали
8 мл буфера (5 мМ ацетат натрия, pH 4/этанол 95/5 по объему) и пропускали через
катионообменную смолу LC-SCX (0.5 г, помещенные в стандартную пластиковую колонку
Supelco объемом 3 мл). Для этой цели могут быть использованы и катионообменные
картриджи, например, CM Light SepPak, Waters. Полученный раствор после стандартной on-
line стерилизации фильтрованием и разбавления при необходимости физ. раствором может
быть использован для инъекций. Радиохимический выход конечного продукта составлял 35%
(с поправкой на радиоактивный распад), время синтеза 45 мин. Радиохимическая чистота
[18F]ФЭТ была более 99%, энантиомерная чистота - более 95%.
50
радиоактивный распад, при времени синтеза 33 мин. Проведенные доклинические испытания
подтвердили безопасность и диагностические свойства полученного [ 18F]ФЭТ; РФП в
настоящее вреям производится для ПЭТ исследований пациентов в рамках клинических
испытаний.
Преимуществом предложенного метода является, наряду с его простотой в
автоматизации, невысокая стоимость предшественника отечественного производства,
отличающегося высокой устойчивостью при хранении при комнатной температуре (лаб.
проф. Малеева В.И., ИНЭОС РАН, Москва) и других реагентов, а также высокий
радиохимический выход. Метод может быть рекомендован к использованию в ПЭТ центрах
России.
Контролируемый
Критерий допустимости Метод определения
параметр
Визуальное Чистый, бесцветный
Визуальный осмотр
соответствие раствор
Подлинность РадиоТСХ, условия*
Соответствие стандарту
(идентичность) РадиоВЭЖХ, условия**
Радионуклидная
>99% Оценка гамма-спектра
чистота, %
РадиоВЭЖХ, условия *) Время
Радиохимическая удерживания Rt [18F]ФЭТ должно
>95%
чистота, % быть в пределах ±5% от Rt
нерадиоактивного стандарта
Энантиомерная
>95% РадиоВЭЖХ, условия ***
чистота, %
Объемная Достаточная для Измерение объема шприцом,
активность, Ки/мл проведения ПЭТ- измерение активности в изотопном
или МБк/мл исследования на человеке калибраторе
Химическая
чистота (%) и
>99% ВЭЖХ, условия **
химические
примеси
51
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия****
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии со статьей
растворители,
не более 0,30 «Остаточные растворители»
мг/мл
рН 4,5 - 5,5# Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен быть
Осмометрия
мОсм изотоничным
Отсутствие роста микроорганизмов в
Раствор должен быть
Стерильность питательных средах; ОФС 42-0066-
стерильным
07
Уровень Менее 175/V, где V -
бактериальных максимально вводимая
ЛАЛ-тест согласно ОФС 42-0062-07
эндотоксинов, доза, мл#
EU/ml
52
Как уже отмечалось, для производства [18F]ФЭТ в большинстве ПЭТ центров
используется метод прямого нуклеофильного фторирования с использованием в качестве
предшественника коммерчески доступного трет-бутилового эфира О-(2-тозилоксиэтил)-N-
тритил-L-тирозина, предложенного в работе [Hamacher, 2002] и оптимизированного другими
авторами. Основным параметром, определяющим возможность получения большой
активности РФП, является радиохимический выход на момент окончания синтеза (EOS).
Многие авторы приводят РХВ на момент окончания облучения (EOB), но эта величина не
имеет практического значения, и зная время синтеза, РХВ надо пересчитывать на момент
окончания синтеза. Результаты получения [18F]ФЭТ на некоторых автоматизированных
модулях в таблице 2.
53
TRACERlab FX N Нет РНЦРХТ,
2 ТФЭ Нет данных 32 EOS
Pro данных СПб
54
Трудности в синтезе и контроле качества [18F]ФЭТ. Анализ возможных рисков
Adam M.J., Ruth T.J., Grierson J.R., Abeysekera B., Pate B.D. Routine synthesis of L-[18F]6-
fluorodopa with fluorine-18 acetyl hypofluorite. J. Nucl. Med, 1986; 7:1462-1468.
Albert N.L., Weller M., Suchorska B., Galldiks N, Soffietti R, Kim M.M, la Fouge`re C., Pope,
Law I., Arbizu J., Chamberlain M.C., Vogelbaum M., Ellingson B.M and Tonn J.C. Response
Assessment in Neuro- Oncology working group and European Association for Neuro-Oncology
recommendations for the clinical use of PET imaging in gliomas. Neuro-Oncology. 2016; 18:
1199-1208, 2016; doi:10.1093/neuonc/now058.
Bourdier T., Greguric I., Roselt P., Jackson T, Faragalla J., Katsifis A. Fully automated one-pot
radiosynthesis of O-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine on the TracerLab FXFN module. Nucl Med
Biol. 2011; 38: 645-651.
Coenen H.H., Kling P., Stocklin G. Cerebral metabolism of L-[2-18F] fluorotyrosine. J Nucl
Med. 1989; 30:1367-1372.
55
18 18
Dunet V, Pomoni A, Hottinger A, et al. Performance of F-FET versus F-FDG-PET for the
diagnosis and grading of brain tumors: systematic review and meta-analysis. Neuro Oncol.
2016;18:426 - 434.
Ermert J., Coenen H.H. Methods for 11C- and 18F-labelling of amino acids and derivatives for
positron emission tomography imaging. J Label Comp Radiopharm. 2013; 56: 225-236.
18
Floeth F.W., Pauleit D., Sabel M., Reifenberger G., Stoffels G., Stummer W. F-FET PET
differentiation of ring-enhancing brain lesions. J Nucl Med. 2006; 47: 776-782.
Galldiks N, Stoffels G, Filss CP, Piroth MD, Sabel M, Ruge MI, Herzog H, Shah NJ, Fink GR,
Coenen HH, Langen KJ. Role of O-(2-18F-fluoroethyl)-L-tyrosine PET for differentiation of local
recurrent brain metastasis from radiation necrosis. J Nucl Med. 2012; 53: 1367-1374
18
Hamacher K., Coenen H. H. Efficient routine production of the F-labelled amino acid O-(2-
[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine. Appl Radiat Isot. 2002; 57: 853-856.
Heinzel A., Stock S., Langen K.-J., Müller D.Cost-effectiveness analysis of FET PET-guided
target selection for the diagnosis of gliomas. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2012; 39: 1089-1096.
Kaim A.H., Weber B., Kurrer M.O., Westera G., Schweitzer A., Gottschalk J., von Schulthess
G.K., Buck A. Eur J Nucl Med. 2002; 29: 648-654.
18
Krakauer M., Kjaer A., Bennedbuk F.N. F-FET-PET in Primary Hyperparathyroidism:A
Pilot Study. Diagnostics 2016; 6:30.
Krasikova R., Orlovskaya V., Stepanova M., Fedorova O. The effect of reaction media and
phase transfer catalyst on the fluorination yield and enantiomeric purity in asymmetric synthesis of
O-(2’-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine. Curr Org Chem. 2013; 17: 2159-2163. DOI:
10.2174/13852728113179990108
56
Lakshminarayanan N., Kumar A., Pawar Y., Chaudhari P.R., Rajan M.G.R. Fully automated
synthesis of O-(2′-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine ([18F]FET) using solid phase extraction (SPE)
purification with neutral alumina. Radioanal Nucl Chem Articles (2016) doi:10.1007/s10967-016-
4900-8.
Langen K.-J., Hamacher K., Weckesser M., Floeth F., Stoffels G., Bauer D., et al. O-(2-
[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine: uptake mechanisms and clinical applications. Nucl Med Biol. 2006;
33:287-94.
Langen K.-J., Watts C. Amino acid PET for brain tumours - ready for the clinic? Nature
Reviews/Neurooncology, 2016, doi:10.1038/nrneurol.2016.80
Laverman P., Boerman O.C., Corstens F.H.M, Oyen J.G.W. Fluorinated amino acids for
tumour imaging with positron emission tomography. Eur J Nucl Med. 2002; 29: 681-690.
Lemaire C. Production of L-[18F]fluoroamino acids for protein synthesis: overview and recent
developments. In PET studies on Amino Acid Metabolism and Protein Synthesis. Developments in
Nuclear Medicine. 1993; 23:89-108.
Mueller D., Klette I., Kalb F., Baum R.P. Synthesis of O-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine based
on a cartridge purification method. Nucl Med Biol. 2011; 38: 653-658.
Pauleit D., Floeth F., Tellmann L. Comparison of O-(2-[18F] fluoroethyl)-L-tyrosine PET and
3-123I- iodo- - methyl-L-tyrosine SPECT in brain tumors. J Nucl Med. 2004; 45:374-381.
Popperl G., Kreth F.W., Mehrkens J.H., Herms J., Seelos K., Koch W., Gildehaus F.J.,
Kretzschmar H.A., Tonn J.C., Tatsch K. FET PET for the evaluation of untreated gliomas:
correlation of FET uptake and uptake kinetics with tumour grading. Eur J Nucl Med Mol Imaging.
2007; 34: 1933-1942.
Rau F.C., Weber W.A., Wester W.J., Herz M., Bescker I., Kruger A., Schwaiger M.,
Senekovitsch-Schmidtke R. O-(2-[18F] fluoroethyl)-L-tyrosine (FET): a tracer for differentiation of
tumour from inflammation in murine lymph nodes. Eur J Nucl Med. 2002; 29:1039-1046.
Schoultz B.W., Reed B.J., Marton J., Willoch F., Henriksen G. A Fully Automated
Radiosynthesis of [18F]Fluoroethyl-Diprenorphine on a Single Module by Use of SPE Cartridges
for Preparation of High Quality 2-[18F]Fluoroethyl Tosylate. Molecules. 2013; 18:7271-7278.
Swiss Agency for Therapeutic Products. New registrations, products for use in humans. J.
Swissmed. 2014, 13:651.
57
18
Vaneycken I., Anneleen B., Xavier C., Caveliers V. Fully automated synthesis of F-FET
using the Synthera® Platform. Presentation (#1476) in the SNM 59th Annual Meeting 2012.
Walter F., la Fougère C., Belka C., Niyazi M. Technical issues of [18F]FET-PET imaging for
radiation therapy planning in malignant glioma patients - a review. Frontiers in oncology. 2012, 2:
1-4.
Weber W.A., Wester H.J., Grosu A.L. Herz M., Dzewas B., Feldmann H.-J., Molls M.,
Stocklin G., Schwaiger M. O-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine and L-[methyl-11C]methionine uptake
in brain tumours: initial results of comparative study. Eur J Nucl Med. 2000; 27: 542-549.
Wester H., Herz M., Weber W., Heiss P., Senekovitsch-Schmidtke R., Schwaiger M., Stocklin
G. Synthesis and radiofarmacology of O-(2-[18F] fluoroethyl)-L-tyrosine for tumor imaging. J Nucl
Med. 1999; 40: 205-212.
Zhang M.-R., Furutsuka K., Yoshida Y., Suzuki K. How to increase the reactivity of
[18F]fluoroethylbromide: [18F]fluoroethylation of amine, phenol and amide functional groups with
[18F]FEtBr, [18F]FEtBr/NaI and [18F]FEtOTf. J Label Comp Radiopharm. 2003; 46: 587-598.
Zuhayra M., Alfteimi A., Von Forstner C., Lutzen U., Meller B., Henze E. New approach for
the synthesis of [18F]fluoroethyltyrosine for cancer imaging: Simple, fast, and high yielding
automated synthesis. Bioorg Med Chem. 2009; 17: 7441-7448.
О.С. Федорова, О.Ф. Кузнецова, С.В. Шатик, М.А. Степанова, Ю.Н. Белоконь, В.И.
Малеев, Р.Н. Красикова. Производные тирозина, меченные фтором-18: синтез и
экспериментальное исследование накопления в опухоли и абсцессе. Биоорганическая химия.
2009; 35:334-343.
58
[18F]фторэтилхолин ([18F]ФЭХол)
Введение, история создания [18F]фторэтилхолина ([18F]ФЭХол)
59
Рис. 1. Меченные аналоги холина.
1. [18F]KF/K2.2.2, 18
N F
AcN, 80oC OH +
CH2Br2 18FCH OTf
2 N
2. AgOTf OH
Сравнительное исследование 68
Ga-PSMA-HBED-CC и [18F]ФЭХол двух групп
пациентов с РПЖ и метастазами в лимфатические узлы подтвердило более высокую
точность при выявлении метастаз, а также более высокую прогностическую ценность
отрицательного результата (NPV – negative predictive value) в случае 68
Ga-PSMA-HBED-СС
[Pfister, 2016]. Следует отметить, что в целом результаты этих авторов с [18F]ФЭХол были
намного лучше, чем в рассмотренной выше работе [Tilka, 2012].
ПЭТ центры, оснащенные собственными циклотронами, несомненно, заинтересованы в
использовании ПСМА-агентов, меченных фтором-18 с большим периодом полураспада и
лучшим качеством ПЭТ изображений, обеспечиваемым фтором-18 по сравнению с галлием-
68. Разработки в данной области только начинаются и будут рассмотрены ниже.
63
Так же, как и в случае [18F]ФМетХол, в основе синтеза [18F]ФЭХол лежит реакция
фторакилирования ДМАЭ, однако с использованием меченного фтором-18 фторэтильного
алкилирующего агента. В зависимости от природы этого агента различают два
принципиально разных с точки зрения автоматизации метода получения [18F]ФЭХол.
В первой работе по синтезу [18F]ФЭХол в качестве алкилирующего агента
использовался [18F]фторэтилтозилат ([18F]ФТОЗ), который получали известной реакцией
нуклеофильного радиофторирования предшественника, диэтилтозилата (Схема 2) [Hara,
2002] в присутствии тетрабутил аммония в качестве межфазного катализатора (МФК).
Далее реакцию 18
F-фторалкилирования ДМАЭ (0.3 мл) c помощью [18F]ФТОЗ
проводили в реакционном сосуде при температуре 100оС в течение 5 мин. Для выделения
продукта из реакционной смеси использовали метод полупрепаративной ВЭЖХ (колонка
ODS силикагель, 250 х 10 мм; элюент - 0.05 М H3PO4 + 1 ммоль 2-нафталенсульфоновой
кислоты, скорость потока 5 мл/мин. Фракцию, содержащую продукт, разбавляли водой и
пропускали через катионообменный картридж Accel Plus CM Light, на котором (будучи
катионной формой) и сорбировался [18F]ФЭХол. После промывки картриджа 20 мл воды
продукт смывали 2 мл физ. раствора, и после стерильного фильтрования разбавляли до
нужного объема физ. раствором или другим буфером. Радиохимический выход составлял 40%
(с поправкой на радиоактивный распад); время синтеза 65 мин.
Метод синтеза [18F]ФЭХол с использованием [18F]ФТОЗ использовался и в других
работах, где в качестве МФК был использован как классический криптофикс К.2.2.2.,
[Steiber, 2010; Pascali, 2011], так и тетрабутил аммоний карбонат [Asti, 2010]. Замена
трудоемкой и длительной стадии полупрепаративной ВЭЖХ очисткой методом твердофазной
экстракции позволила существенно упростить автоматизацию процесса и увеличить
радиохимический выход. Так в работе [Pascali, 2011] для очистки была использована серия
последовательно соединенных картриджей: tC18, Accell CM и два картриджа Silica Plus.
64
Синтез был выполнен на модуле Modular Lab (Eckert and Zigler); радиохимический выход
составил 36% (без поправки на радиоактивный распад) при времени синтеза 35 мин.
Интересный подход был предложен авторами [Piel 2007], которые показали, что
добавление на стадии алкилирования йодидов щелочных металлов приводит к
существенному увеличению выхода реакции алкилирования. Тем не менее, ввиду того, что
для очистки был использован метод полупрепаративной ВЭЖХ, радиохимический выход
составлял 30% (без поправки на радиоактивный распад) при времени синтеза 50 мин.
В качестве альтернативы [18F]фторэтилтозилату было предложено использовать
[18F]фторэтилбромид ([18F]ФЭБ) - высоко летучий алкилирующий агент (темп. кипения
71.5оС), широко применяемый в синтезе многих РФП для ПЭТ. Очистка [18F]ФЭБ обычно
достигается методом дистилляции, что может сопровождаться потерей радиоактивности,
поэтому к герметичности всех соединений автоматизированной системы синтеза
предъявляются особые требования. Для получения [18F]ФЭБ было предложено использовать
2-бромэтил трифлат (Схема 3) [Zuhayra, 2008]; при этом реакция нуклеофильного
радиофторирования проводится в растворителе с очень высокой температурой кипения (о-
дихлорбензол), с тем, чтобы избежать попадания растворителя во второй реакционный
сосуд, где проводится реакция 18F-фторалкилирования.
65
на стадии получения [18F]ФЭБ используются достаточно «экзотические» предшественники,
как, например, бромэтилнозилат (Схема 4) [Schmaljohanna, 2011].
Преимуществом этого метода является то, что очистка [18F]ФЭБ достигается не за счет
классической дистилляции (которая может приводить к потере продукта из-за
негерметичности соединений), а за счет пропускания реакционной смеси, содержащей
[18F]ФЭБ (стадия 1, схема 4) через три последовательно соединенных картриджа. Очистка
конечного продукта, полученного на третьей стадии, также осуществляется методом ТФЭ с
использованием двух соединенных последовательно картриджей Accell Plus CM, Waters.
Радиохимический выход был несколько ниже, чем в методе [Zuhayra, 2008] и составлял
27±5% с использованием модуля Synchrom, RayTest и 23±5 % на модуле HotBox III,
Scintomics.
66
В принципе любой из методов и подходов, описанных выше, может быть реализован на
стандартном автоматизированном модуле синтеза стационарного (не кассетного) типа:
TracerLab FX N Pro (GE HealthCare); Synthra (RayTest); Modular lab (Eckert and Zigler);
Scintomics Hot Box III и аналогичных. Кассетной версии до настоящего времени на рынке не
предлагается.
Наиболее подходящим для рутинного производства представляется метод синтеза с
использованием в качестве фторалкилирующего агента [ 18F]ФТОЗ (Схема 1) в комбинации с
методом очистки на основе твердофазной экстракции, уже используемый в ряде ПЭТ центров
[Steiber, 2010; Pascali, 2011, Asti, 2011]. Интересное решение было предложено в работе [Asti,
2011], где реагенты для первой стадии синтеза (диэтилтозилат) и второй стадии синтеза
(ДМАЭ) а ацетонитриле добавлялись непосредственно в реакционный сосуд, содержащий
активированный комплекс [18F]фторида с тетрабутиаммоний карбонатом (TBA18F). Выход
реакции сильно зависел от объема ацетонитрила. В оптимизированном варианте с
использованием модуля Tracer Lab FX FN (12 мг диэтилтозилата, 0,03 мл ДМАЭ, 0,4 мл
ацетонитрила) радиохимический выход составил 48% (без поправки на радиоактивный
распад) при времени синтеза 43 мин. Об использовании этого эффективного метода другими
авторами не сообщалось. Новых публикаций по автоматизации синтеза [18F]ФЭХол после
2011 г. не появлялось, видимо потому, что существующие методы уже позволяют
нарабатывать РФП в мультидозовых количествах.
Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Визуальное Чистый, бесцветный
Визуальный осмотр
соответствие раствор
Подлинность
Соответствие стандарту РадиоВЭЖХ, условия*
(идентичность)
Радионуклидная
>99% Оценка гамма-спектра
чистота, %
РадиоВЭЖХ, условия * Время
Радиохимическая удерживания Rt [18F]ФЭХол
>95%
чистота, % должно быть в пределах ±5% от
Rt нерадиоактивного стандарта
67
Достаточная для
Объемная Измерение объема шприцом,
проведения ПЭТ-
активность, Ки/мл измерение активности в
исследования на
или МБк/мл изотопном калибраторе
человеке
ДМАЭ < 1 mg/v ГЖХ, условия **
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии с ОФС
растворители,
не более 0,30 «Остаточные растворители»
мг/мл
рН 4,5 - 8,5# Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен быть
Осмометрия
мОсм изотоничным
Отсутствие роста
Раствор должен быть
Стерильность микроорганизмов в питательных
стерильным
средах; ОФС 42-0066-07
Уровень
бактериальных Менее 25 EU/ml ЛАЛ-тест согласно ОФС 42-
эндотоксинов, 0062-07
EU/ml
68
Главные параметры, влияющие на то, сколько именно [18F]ФЭХол реально получить
на конечном этапе.
Время Радиохим.
Фтор-
Метод Метод синтеза выход, % Литер.
№ алкилир.
автоматизации очистки (включая (EOB или источник
агент
очистку) EOS)
Самодельный
рованный модуль
Modular lab,
2 ТФЭ 35 мин 36±3, EOS [18F]ФТОЗ Pascali, 2010
Eckert Zigler
TRACERlab FX
3 ТФЭ 43 мин 48, EOS [18F]ФТОЗ Asti, 2010
FN
11
С-модуль для
4 метилирования ВЭЖХ 50 мин 36±3, EOS [18F]ФТОЗ Piel, 2007
GE Health Care
[18F]ФЭБ
трифлата
69
нозилата
[18F]ФЭБ
Schmaljohann,
2 Synchrom, RayTest ТФЭ - 27±5% EOS из бромэтил
2011
нозилата
70
Технология синтеза [18F]ФЭХол, основанная на реакции фторалкилирования ДМАЭ
летучего [18F]ФЭБ, несет в себе определенные риски ввиду возможных потерь
радиоактивности на стадии дистилляции агента. Это в свою очередь будет приводить к
невоспроизводимости радиохимического выхода РФП и трудностям в планировании числа
пациентов. Во избежание этого необходимо тщательно контролировать герметичность всех
линий и соединений перед синтезом (leak test), а также показания датчиков радиоактивности
на стадии дистилляции. При разработке технологии желательно сразу остановиться на
методе, где используется минимальное количество ДМАЭ. Следует отметить, что ДМАЭ не
относится к высоко токсичным соединениям (LD50 для крыс более 234 мг/кг), и его
контрольный уровень в РФП лимитирован не токсичностью, но способностью ингибировать
процесс внедрения меченого холина в клеточную мембрану. Контроль за содержанием
ДМАЭ в конечном продукте является не тривиальной задачей, поскольку молекула не имеет
ароматических групп и не детектируется УФ-детектором. Использование для этой цели
рефрактометрического детектора затруднительно ввиду его низкой чувствительности. Метод
ГЖХ позволяет контролировать ДМАЭ в низких концентрациях с использованием ГЖХ
колонок определенного типа.
Asti M., Farioli D., Iori M., Guidotti C., Versari A., Salvo D. Efficient automated one-step
synthesis of 2-[18F]fluoroethylcholine for clinical imaging: optimized reaction conditions and
improved quality controls of different synthetic approaches. Nucl Med Biol., 2010; 39:310-315.
18
Evangelista L., Cervino A.R., Guttilla A., Zattoni F., Cuccurullo V., Mansi L. F-
18
fluoromethylcholine or F-fluoroethylcholine pet for prostate cancer imaging: which is better? A
literature revision. Nucl Med Biol., 2015, 42:340-348.
DeGrado T.R., Coleman R.E., Wang S, Baldwin S.W., Orr M.D., Robertson C.N. Synthesis
18
and evaluation of F-labeled choline as an oncologic tracer for positron emission tomography:
initial findings in prostate cancer. Cancer Res. 2001; 61:110-117.
71
Eder M., Schafer M., Bauder-Wust U., Hull W. E., Wangler C., Mier W., Haberkom U. and
Eisenhut M., Bioconjug. Chem., 2012, 23, 688.
Friedland R.P., Mathis C.A., Budlinger T., Moeyr B.R., M. Rosen. Labelled choline and
phosphorylcholine. Body distribution and brain autoradiography: concise communication. J Nucl
Med 1983; 24: 812-815.
Graute V, Jansen N, Ubleis C, Seitz M, Hartenbach M, Scherr MK, et al. Relationship between
PSA kinetics and (18F)fluorocholine PET/CT detection rates of recurrence in patients with prostate
cancer after total prostatectomy. Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2012; 39:271–82.
Kratochwil A., Giesel F. L., Eder M., Afshar-Oromieh A., Benešová M., Mier W., Kopka K.
and Haberkorn U. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2015, 42, 987.
Pascali G., D'Antonio L., Bovone P., Gerundivi P., August T. Optimization of automated large-
scale production of [18F] fluoroethylcholine for PET prostate cancer imaging. Nucl Med Biol.,
2009; 36: 569-574.
Pfister D., Porres D., HeidenreichA., Heidegger I., Knuechel R., Steib F., Behrendt F.F.,
Verburg F.A. Detection of recurrent prostate cancer lesions before salvage lymphadenectomy is
68 18
more accuratewith Ga-PSMA-HBED-CC than with F-Fluoroethylcholine PET/CT. Eur J Nucl
Med Mol Imaging. 2016; 43; 1410-1417.
Piel M., Bauman A., Baum R.P. Improved automated synthesis of [18F]fluoroethylcholine as a
radiotracer for cancer imaging. Bioorg Med Chem 2007; 15:3171-5.
Schmaljohanna J., Schirrmacher E., Wängler B., Wängler C., Schirrmacher R., Guhlke S. Fully
automated SPE-based synthesis and purification of 2-[18F]fluoroethyl-choline for human use. Nucl
Med Biol., 2011, 38:165-170.
Steuber T., Schlomm T., Heinzer H., Zacharias M., Ahyai S., Chun K.F. Haese A., Klutmann
S., Kollermann J., Sauter G., Mester J., Mikecz P., Fisch M., Huland H., Graefen M., Salomon G..
[F18]-fluoroethylcholine combined in-line PET-CT scan for detection of lymph-node metastasis in
72
high risk prostate cancer patients prior to radical prostatectomy: Preliminary results from a
prospective histology based study. Eur J Cancer, 2010; 46: 449-455.
Tilka D., Reich O., Graser A., Hacker M, Silchinger J., Becker A.J., Khoder W., Bartenstein
P., Stief C.G, Loidl W., Seitz M. 18F-Fluoroethylcholine PET/CT Identifies Lymph Node Metastasis
in Patients with Prostate-Specific Antigen Failure After Radical Prostatectomy but Underestimates
Its Extent. Eur J Urol., 2013; 63: 792-796.
Tuncel M., Souvatzoglou M., Herrmann K., Stollfuss J., Schuster T., Weirich G., et al. [(11)C]
Choline positron emission tomography/computed tomography for staging and restaging of patients
with advanced prostate cancer. Nucl Med Biol., 2008; 35:689-95.
Zuhayra M., Alfteimi A., Papp L., Lutzen U., Lutzen A., Von Forstner C., Meller B., Henze E.
Simplified fast and high yielding automated synthesis of [ 18F]fluoroethylcholine for prostate cancer
imaging. Bioorg Med Chem., 2008; 16: 9121-6.
Долгушин М. Б., Оджарова А. А., Михайлов А. И., Ширяев С. В., Тулин П. Е., Невзоров
Д. И., Матвеев В. Б.. ПЭТ/КТ с 18F-фторхолином в режиме двухэтапного сканирования при
биохимических рецидивах рака предстательной железы. Онкоурология. 2015; 2: 46-54.
73
[18F]фторэстрадиол ([18F]ФЭС)
74
Рис. 1. Стероидный женский половой гормон эстрадиол.
77
исследований всего тела с [18F]ФДГ и [18F]ФЭС позволяют отличать разные типы вторичных
новообразований.
Были опубликованы результаты применения [18F]ФЭС в диагностике заболеваний кроме
рака МЖ [Liao, 2016].. Японская группа ученых использовала этот препарат для поиска
различий при гиперплазии эндометрия матки и карциномой матки [Tsujikawa, 2011].
Исследователи из Голландии изучали пациенток с раком яичников, применяя [18F]ФЭС-ПЭТ-
диагностику [van Kruchten, 2015]. Они показали, что существует корреляция при накоплении
[18F]ФЭС и иммуногистохимическим анализом во вторичных новообразованиях.
В 2001 году было проведено обширное исследование, посвященное измерению
получаемых радиационных доз на все тело и отдельно на органы и ткани при ПЭТ-
исследовании с [18F]ФЭС [Mankoff, 2001]. Было выяснено, что при введении этого РФП
общая радиационная нагрузка не превышает рекомендованной FDA (Food and drug
administration, USA), и составляет от 30 до 50 мГрей при введении 6 мКи РФП.
Впервые синтез аналога эстрадиола, меченного фтором-18, был выполнен группой Велча-
Катценнеленбогена в 1984 г [Kiesewetter, 1984, две публикации], рис. 3. В качестве
предшественника было взято производное эстрадиола с трифлатной защитой гидрокси-
группы (положение 3) A-кольца, карбоксильной защитой гидрокси-группы (положение 17)
D-кольца и Tf-уходящей группой D-кольца (положение 16, будущий 18
F) (Соединение 1 на
Рис 3).
79
Рис. 5. Оптимизация синтеза [18F]ФЭС по работе [Romer, 1996] из «сульфурильного»
прекурсора. Реакция (I) – стадия нуклеофильного [18F]фторирования, реакция (II) – стадия
гидролиза вместе со снятием защитных групп.
80
Очистка проводилась на полупрепаративной колонке Cosmosil 5C18-AR-2 column (20-mm
ID_250-mm, Nacalai Tesque, Kyoto, Japan) с элюентом ацетонитрил/вода/этанол (30:40:30)
при скорости потока 6 мл/мин. Полученная фракция целевого продукта собиралась в
круглодонную колбу, содержащую 0,1 мл раствора аскорбата натрия (250 мг/мл) с целью
дальнейшей стабилизации продукта. Все органические растворители упаривались в вакууме,
затем добавляли 10 мл 0,9% NaCl и пропускали готовый раствор [18F]ФЭС через
стерилизующий фильтр. Выход готового продукта был равен 42,4±3,2% (с поправкой на
распад), время синтеза, включая очистку и перевод РФП в инъекционную форму, равнялось
88,2±6,4 мин. Радиохимическая и химическая чистота [18F]ФЭС была >95% и >99%,
соответственно. Удельная активность готового [18F]ФЭС была более 111 ГБк/мкмоль (3
Ки/мкмоль).
При выполнении препаративной очистки [18F]ФЭС с элюентом вода/этанол возможно
избежать необходимости упаривания готового продукта в вакууме. Этанол разрешен к
внутривенному введению в малых концентрациях. Очищенный РФП можно просто
разбавить до приемлемой концентрации, после чего пропустить через стерильный фильтр
[Scott, 2011].
Следующее сообщение о синтезе [18F]ФЭС на модуле TRACERlab MXFDG появилось год
спустя, в 2007 г [Oh, 2007]. Исследователи подвергли изменению стадию перевода
конечного продукта в инъекционный раствор, применив вместо упаривания в вакууме метод
твердофазной экстракции на картридже C18 Sep Pak plus или Oasis HLB. Это позволило им
сократить время синтеза до 75,8±3,2 мин и чуть улучшить общий выход РФП – 45,2±3,8%.
Удельная активность была равна 57,7±3,8 ГБк/мкмоль (1,5 Ки/мкмоль) при количестве
предшественника 2 мг.
В 2011 г синтез [18F]ФЭС на TRACERlab MXFDG был оптимизирован путем выполнения
очистки конечного продукта методом твердофазной экстракции (ТФЭ) на комбинации
одноразовых картриджей [Knott, 2011], тем самым избегнув стадии очистки на
препаративной ВЭЖХ. Было внесено несколько изменений в состав реагентов на каждой
стадии, но предшественник остался тем же. Для синтеза применялось 1,5 мг прекурсора,
реакция фторирования (химическое превращение (I) на Рис. 5) выполнялась с [18F]TBAF
вместо криптофикса К2.2.2., а для гидролиза (химическое превращение (II) на Рис. 5)
использовали смесь 2,5% серной кислоты с этиловым спиртом. После гидролиза
реакционная смесь сильно разбавлялась водой и пропускалась через три картриджа,
установленных в линию – Oasis WAX, Sep Pak C18, Oasis HLB. Картриджи промывались
40% этанолом для удаления прекурсора и нежелательных примесей, после чего продукт
смывался раствором 95% этанола. Раствор подвергался нагреванию для удаления части
81
этанола, затем еще одной очистке на картридже SepPak Alumina N. К раствору добавлялось
15 мл воды, что позволяло снизить концентрацию этанола до 10%, и затем фильтровался
через стерилизующий фильтр. Общее время синтеза было 75 мин, выход продукта 20±5%
(без поправки на распад). Радиохимическая и химическая чистота [18F]ФЭС была >95% и
>99%, соответственно.
В 2014 году группа американских исследователей предложила использовать
микроволновой нагрев вместо обычного нагрева как на стадии фторирования, так и при
гидролизе [Shi, 2014]. Синтез выполнялся в неавтоматическом режиме с применением
специализированного микроволнового реактора. Авторы показали преимущество
микроволнового нагрева перед обычным тепловым процессом. Выход выделенного
конечного продукта [18F]ФЭС были очень высокими - 55,0±5,5% при очистке методом
ВЭЖХ и 62,5±6,4 при очистке методом ТФЭ, выходы без поправки на распад. Такое отличие
обусловлено также и существенным сокращением времени синтеза до 38 мин (ВЭЖХ
очистка) и 30 мин (ТФЭ очистка) за счет быстрых реакций при микроволновом нагреве. Все
параметры контроля качества [18F]ФЭС при микроволновом синтезе соответствовали
нормам, принятым для обычного синтеза. Вывод, который был сделан исследователями,
гласит, что для высокопродуктивного синтеза [18F]ФЭС необходимо сделать автоматический
модуль с микроволновым нагревом. В настоящее время такой модуль на мировом рынке
отсутствует.
Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Визуальное Чистый, Визуальный осмотр
82
соответствие бесцветный
раствор
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фторэстрадиола
Подлинность Соответствие
Или радиоВЭЖХ, условия **,
(идентичность) стандарту
Время удерживания Rt [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта
фторэстрадиола
Радионуклидная Оценка гамма-спектра или измерение периода
>99%
чистота, % полураспада
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фторэстрадиола
Радиохимическая
>95% Или радиоВЭЖХ, условия **,
чистота, %
Время удерживания Rt [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта
фторэстрадиола
Достаточная для
проведения ПЭТ-
исследования и
Объемная Измерение объема шприцом или по весу,
соответствия
активность, Ки/мл измерение активности в изотопном калибраторе
необходимой
удельной
активности
Удельная
Как правило, >0,4
активность, радиоВЭЖХ, условия **
Ки/мкмоль
Ки/мкмоль
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии со статьей «Остаточные
растворители,
не более 0,30 растворители»
мг/мл
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Химические Содержание ВЭЖХ, условия **
83
примеси, мкг/дозу эстрадиола <3,6;
Содержание
фторэстрадиола
<3,6 [Scott]
рН 5,0 - 7,5 Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен
Осмометрия
мОсм быть изотоничным
Раствор должен Отсутствие роста микроорганизмов в
Стерильность
быть стерильным питательных средах
Уровень
<175 на общий
бактериальных LAL-тест
объем препарата
эндотоксинов, EU
84
Модуль для
синтеза 50 мин + 20 Romer,
1 ВЭЖХ 10-48% EOB 2,1-4,8
[ F]ФДГ, тип не
18
мин очистка 1999
указан
ВЭЖХ +
TRACERlab
2 упаривание 88 мин 42% EOB >3 Mori, 2006
MXFDG
в вакууме
TRACERlab ВЭЖХ
3 75 мин 45% EOB 1,5 Oh, 2007
MXFDG +ТФЭ
Ahmed N., Langlois R., Rodrigue S., Benard F., van Lier J.E. Automated synthesis of 11β-
methoxy-4,16α-[16α-18F]difluoroestradiol (4F-M[18F]FES) for estrogen receptor imaging by
positron emission tomography. Nucl Med and Biol, 2007, 34:459-464.
Dehdashti F., Flanagan F.L., Mortimer J.E., Katzenellenbogen J.A., Welch M.J., Siegel .BA.
Positron emission tomographic assessment of “metabolic flare” to predict response of metastatic
breast cancer to antiestrogen therapy. Eur J Nucl Med, 1999, 26:51–56.
Gemignani M.L., Patil S., Seshan V.E., et al. Feasibility and predictability of perioperative PET
and estrogen receptor ligand in patients with invasive breast cancer. J Nucl Med. 2013, 54:1697–
1702.
He S.M., Wang M.W., Yang Z.Y., Zhang J.P., Zhang Y.P., Luo J.M., Zhang Y.J. Comparison
of 18F-FES, 18F-FDG and 18F-FMISO PET Imaging Probes for Early Prediction and Monitoring to
Response to Endocrine Therapy in a Mouse Xenograft Model of ER-Positive Breast Cancer. PLOS
ONE | DOI:10.1371/journal.pone.0159916 July 28, 2016
Katzenellenbogen J.A., Mathias C.J., VanBrocklin H.F., Brodack J.W., Welch M.J. Titration of
In Vivo Uptake of 16α-[18F]Fluoroestradiol by Target Tissues in the Rat: Competition by
Tamoxifen, and Implications for Quantitating Estrogen Receptors In Vivo and the Use of Animal
Models in Receptor-binding Radiopharmaceutical Development. Nucl Med Biol, 1993, 20(6):735-
745.
Knott K.E., Gratz D., Hubner S., Juttler S., Zankl C., Muller M. Simplified and automatic one-
pot synthesis of 16α-[18F]fluoroestradiol without high-performance liquid chromatography
purification. J Label Compd Radiopharm, 2011, 54:749-753.
van Kruchten M., de Vries E.F., Arts H.J., et al. Assessment of estrogen receptor expression in
epithelial ovarian cancer patients using 16alpha-18F-fluoro-17betaestradiol PET/CT. J Nucl Med,
2015, 56:50–55.
18
Liao G.J., Clark A.S., Schubert E.K., Mankoff D.A. F-Fluoroestradiol PET: Current status
and Potential Future Clinical Applications. J Nucl Med, 2016, 57:1269-1275.
Mankoff D.A., Peterson L.M., Tewson T.J., Link J.M., Gralow J.R., Graham M.M., Krohn K.A.
[18F]Fluoroestradiol Radiation dosimetry in Human PET Studies. J Nucl Med, 2001, 42:679-684.
Mintun M.A., Welch M.J., Siegel B.A. Breast cancer: PET imaging of estrogen receptors.
Radiology. 1988, 169:45–48.
Mori T., Kasamatsu S., Mosdzianowski C., Welch M.J., Yonekura Y., Fujibayashi Y.
Automatic synthesis of 16α-[18F]fluoro-17β-estradiol using a cassette-type [18F]fluorodeoxyglucose
synthesizer. Nuc Med and Biol, 2006, 33:281-286.
Mortimer J.E, Dehdashti F., Siegel B.A., Trinkaus K., Katzenellenbogen J.A., Welch M.J.
Metabolic flare: indicator of hormone responsiveness in advanced breast cancer. J Clin Oncol,
2001, 19:2797–2803.
Oh S.J., Chi D.Y., Mosdzianowski C., Kil H.S., Ryu J.S., Moon D.H. The automatic production
of 16α-[18F]fluoroestradiol using a conventional [18F]FDG module with a disposable cassette
system. Appl Rad Isot, 2007, 65:676-681.
Peterson L.M., Mankoff D.A., Lawton T., et al. Quantitative imaging of estrogen receptor
expression in breast cancer with PET and 18F-fluoroestradiol. J Nucl Med. 2008;49:367–374.
Romer J., Steinbach J., Kasch H. Studies on the Synthesis of 16α-[18F]fluoroestradiol. Appl Rad
Isot, 1996, 47(4):395-399.
87
Romer J., Fuchtner F., Steinbach J., Johannsen B. Automated Production of 16α-
[18F]fluoroestradiol for Breast Cancer Imaging. Nucl Med Biol, 1999, 26:473-479.
Scott, Peter J. H., and Hockley, Brian G., eds. Wiley Series on Radiochemical Syntheses :
Radiochemical Syntheses, Volume 1 : Radiopharmaceuticals for Positron Emission Tomography
(1). Hoboken, US: Wiley, 2011.
Seimbille Y., Rousseau J., Benard F., et al: 18F-labeled difluoroestradiols: Preparation and
preclinical evaluation as estrogen receptor-binding radiopharmaceuticals. Steroids, 2002, 67:765-
775.
Spataro V., Price K., Goldhirsch A., et al: Sequential estrogen receptor determinations from
primary breast cancer and at relapse: Prognostic and therapeutic relevance. The International Breast
Cancer Study Group (formerly Ludwig Group). Ann Oncol, 1992, 3:733-740.
18
Sundararajan L., Linden H.M., Link J.M., Krohn K.A., Mankoff D.A. F-Fluoroestradiol.
Semin Nucl Med, 2007, 37:470-476.
Tonkin K., Joy A., Basi S., et al. The potential of using discordance of estrogen PET (FES-PET)
and glucose PET (FDG-PET) scans and pathologic characteristics including HER2 and Ki67 to
predict for hormone insensitivity in women with metastatic breast cancer. Cancer Res, 2010,
70:PD05-04.
VanBrocklin H.F., Pomper M.G., Carlson K.E., et al. Preparation and evaluation of 17-ethynyl-
substituted 16 alpha-[18F]fluoroestradiols: Selective receptor-based PET imaging agents. Int J Rad
Appl Instrum B, 1992, 19:363-374.
VanBrocklin H.F., Rocque P.A., Lee H.V., Carlson K.E., Katzenellenbogen J.A., Welch M.J.
16β-[18F]fluoromoxestrol: a potent, metabolically stable positron emission tomography imaging
agent for estrogen receptor positive human breast tumors. Life Sceinces, 1993, 53:811-819.
88
3’-дезокси-3’-[18F]фтортимидин ([18F]ФЛТ)
89
O O
R3 H
N N
1) [18F]фторирование
R1 O N O HO N O
O O
2) Гидролиз +
OR2 удаление защ.групп
18
F
3’-O – позиция (R2) –мезил (Ms) , тозил (Ts) и или нозил (Ns)
N
O
O N
RO
90
Рис. 3 Химическая структура ряда предшественников для синтеза [ 18F]ФЛТ [Windhorst,
2008], где R – четыре разных уходящих группы (мезил, тозил, нозил и трезил).
91
типами клеток. Это особенно важно в диагностике опухолей мозга, где глюкоза является
основным физиологическим субстратом, и опухоли с низкой скоростью гликолиза не
визуализируются. Высокое накопление [18F]ФДГ в макрофагах и абсцессах, образующихся в
результате радиотерапии или пост хирургического лечения, является основной причиной
ложно-положительных заключений [Strauss, 1996]. С другой стороны, такие опухоли, как
рак простаты, рак печени и нейроэндокринные опухоли, часто не визуализируются при ПЭТ-
исследовании с [18F]ФДГ [Bertagna, 2013]. В связи с этим в ПЭТ-индустрии активно ведутся
работы по созданию и внедрению в клиническую практику других РФП на основе фтора-18,
более специфичных, чем аналог глюкозы.
Поскольку тимидин участвует непосредственно в синтезе ДНК, в первых ПЭТ
исследованиях с [18F]ФЛТ рассматривалась возможность количественной оценки скорости
синтеза ДНК [Shields, 1998]. Однако, как оказалось, лишь небольшой процент меченого
тимидина инкорпорируется в ДНК. Тем не менее [ 18F]ФЛТ является эффективным маркером
для визуализации пролиферации клеток и входит в число наиболее перспективных РФП для
ПЭТ онкологии [Buck, 2009]. Его использование в ПЭТ основано на том, что [18F]ФЛТ
участвует лишь в первой стадии метаболизма - фософорилирования тимидин киназой 1.
Таким образом, [18F]ФЛТ удерживается в пролиферирующих клетках в результате
«блокированного метаболизма». Схема метаболизма тимидина и ФЛТ представлена на Рис.5.
Уменьшение его накопления в тканях после радио- или химиотерапии свидетельствует о
снижении скорости пролиферации клеток, что позволяет оценить эффективность лечения.
Тимидин
Киназа 1 Тимидин Репликация
Тимидин монофосфат и восстановление
5’(3’)-деоксирибо-
ДНК
нуклеотидаза Тимидилат
синтаза
Деоксиуридин
монофосфат
Тимидин
Киназа 1 [18F]ФЛТ Репликация
[18F]ФЛТ монофосфат и восстановление
5’(3’)-деоксирибо- ДНК
нуклеотидаза
92
В ПЭТ исследованиях животных было показано, что [ 18F]ФЛТ является
перспективным агентом для дифференциации опухоли и очага воспаления, поскольку, в
отличие от [18F]ФДГ он практически не накапливается макрофагами [van Waarde, 2004].
Изучение данного вопроса на лабораторных животных было продолжено, следующая
публикация на эту тему посвящена сравнению трех РФП - [18F]ФДГ, [18F]ФЛТ и [18F]ФЭТ
при необходимости различия воспалительного очага от новообразования [Lee, 2009].
Упоминаний об исследованиях воспаления на человеке не было найдено.
В онкодиагностике человека применение [18F]ФЛТ очень обширно и разнообразно.
Этот РФП используется для постановки диагноза, выяснения стадии заболевания или ответа
на терапию в таких видах заболеваний, как рак легкого [Szyszko, 2016], опухоли мозга
[Hatakeyama 2008], новообразований в области головы и шеи [Shaefferkoetter, 2015],
лимфопролиферативных заболеваний [Costantini, 2016], рака груди [Glendenning, 2015], рака
яичников [Reyners, 2016].
O
boc
N
O
Boc-O N O H
O N
O HO N O
+ O
N O 1) [K+/2.2.2.] 18F-, AcN, 1350C
O S O 2) 1M HCl, 1050C
18
O F
93
доставка [18F]фторида из облученной мишени;
выделение фтора-18 из облучаемого сырья - воды, обогащенной кислородом-18;
получение реакционно-способного комплекса [18F]фторида с криптофиксом К2.2.2;
реакция нуклеофильного замещения нозильной группы в молекуле предшественника;
гидролиз/снятие защитных групп;
нейтрализация и подготовка к очистке;
on-line очистка ФЛТ методом полупрепаративной ВЭЖХ
получение стерильной инъекционной формы РФП.
Радионуклид фтор-18 (T1/2=110 мин) в форме [18F]фторида получают по ядерной
реакции 18
O(p,n)18F, реализуемой при облучении воды-18О (H2O18, 95% обогащения по
кислороду-18) протонами энергией 17 МэВ в водной мишени циклотрона. Для выделения
фтора-18 [18F]фторид адсорбируют на анионообменной смоле Macherey-Nagel PS-HCO3
Chromafix. Радионуклид смывают раствором карбоната калия (3 мг в 0,4 мл воды) в
реакционный сосуд из кварцевого стекла. Затем туда добавляют раствор криптофикса К2.2.2.
(20 мг в 1 мл ацетонитрила) и упаривают в токе азота при 100С в течение 4-6 мин
практически досуха, что дает в результате осушенный фторирующий комплекс [К/2.2.2.]+18F-.
В реакционный сосуд вводят предшественник Boc-Ns-Boc (формула представлена
на Рис.4) в количестве 15-18 мг, растворенный в 0,8-1 мл безводного ацетонитрила. В этот
момент реакционная смесь имеет температуру 70оС, и затем она подвергается нагреванию до
135 оС, что занимает примерно 2 мин, после чего проводят реакцию фторирования в течение
3 мин. Затем смесь охлаждают до 55 оС, при этом почти весь ацетонитрил испаряется. После
того, как в реакционном сосуде выравнивается давление, добавляют 0,8-0,9 мл 1 N раствора
HCl, затем вновь нагревают до 105 оС на 4 мин, при этом происходит снятие защитных Boc-
групп. После охлаждения до 40оС реакционную смесь частично нейтрализуют путем
добавления 0,4-0,6 мл водного раствора 2 М ацетата натрия для подготовки раствора к
введению в ВЭЖХ для проведения очистки. Смесь перемешивается, она готова к
дозированию в петлю крана-дозатора.
Для препаративной ВЭЖХ очистки используют колонку Phenomenex Synergi Hydro-
RP (250 x 10 мм), подвижная фаза: 21 мM фосфатный буфер (pH 6)/ EtOH (92/8, v/v),
скорость потока 5,5 мл/мин, детектирование производится с помощью двух детекторов: УФ,
длина волны 254 нм и по радиоактивности. Фракция, содержащая целевой продукт -
[18F]ФЛТ, собирается между 14 и 17 мин, затем пропускается через активированный
картридж Alumina N Sep-Pak Light для удаления возможных примесей [18F]фторида. Для
стерилизации продукта используется стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм,
94
раствор передавливают через фильтр в стерильный пузырек. Перед введением пациенту
препарат разбавляют стерильным раствором салина.
По данным [Shao, 2011], получение [18F]ФЛТ данным методом дает следующие
результаты:
радиохимический выход 23% без поправки на распад;
точное время синтеза не приведено авторами, но можно рассчитать, что оно равно 60-
70 мин
полученная объемная активность продукта 30-45 мКи/мл (1-1,6 ГБк/мл) позволяет
выполнить 3-5 ПЭТ исследований пациентов.
97
Рис. 8. Возможные побочные продукты в синтезе [18F]ФЛТ из предшественника Boc-
DMTr-Ns [Pascali, 2012].
Возникновение этих примесей зависит от количества предшественника, условий
реакций и типа очистки готового продукта. При отработке синтеза надо уделить внимание
проверке возможности появления нерадиоактивных побочных продуктов, и, в случае
необходимости ввести метод определения и предельно допустимое количество данной
химической примеси в нормативную документацию.
Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Чистый,
Визуальное
бесцветный Визуальный осмотр
соответствие
раствор
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЛТ должен быть в
Подлинность Соответствие рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фтортимидина
(идентичность) стандарту Или радиоВЭЖХ, условия **,
Время удерживания Rt [18F]ФЛТ должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фтортимидина
Радионуклидная Оценка гамма-спектра или измерение периода
>99%
чистота, % полураспада
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЛТ должен быть в
Радиохимическая рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фтортимидина
>95%
чистота, % Или радиоВЭЖХ, условия **,
Время удерживания Rt [18F]ФЛТ должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фтортимидина
Достаточная для
проведения ПЭТ-
исследования и
Объемная Измерение объема шприцом или по весу,
соответствия
активность, Ки/мл измерение активности в изотопном калибраторе
необходимой
удельной
активности
98
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии с ОФС «Остаточные
растворители,
не более 0,30 растворители»
мг/мл
Определение
ставудина и
Химические
др.примесей ВЭЖХ с УФ детектором, условия **
примеси, мкг/дозу
(Рис.8), в случае их
возникновения
*)
ТСХ пластинки (Merck slica gel, 7,5 x 2,5 cm), элюент CH3CN / H2O (9/1, v/v), Rf
[18F]фторида = 0,1; Rf [18F]ФЛТ=0,6 [Nandy, 2009].
**)
Колонка LIChroCART C18 (5 мкм, 250 х 4,0 мм), элюент этанол/вода (7,5/92,5),
скорость потока 0,5 мл/мин, детектор УФ-254 нм и детектор по радиоактивности, Rt
[18F]ФЛТ=5,1 мин [Nandy, 2009].
***)
ТСХ пластинка c тонким слоем силикагеля ("Kieselgel 60 F254") размером 15 х 100
мм, элюент МеОН/NH4OH 30% (90/10 v/v); интенсивность цветового пятна испытуемого
раствора не должна превышать интенсивности окрашивания стандарта, нанесенного на ту же
пластинку;
99
Основными определяющими параметрами для возможности получения большой
активности РФП являются время синтеза и радиохимический выход готового РФП. Методы
синтеза [18F]ФЛТ, описанные выше, кратко сформулированы в Табл.1.
Время
Предшествен Выход
синтеза,
ник (номер Способ синтеза, %, Литер.
Модуль включая
структуры на очистки EOB или источник
очистку,
Рис.4) EOS
мин
Niedermoser,
Explora FDG4 ВЭЖХ 60 (EOB) 70
2012
Boc-DMTr-Ns Модуль с
ВЭЖХ 61 (EOB) 63 Javed, 2014
микрореактором
(I)
Modular-Lab
ТФЭ 37 (EOB) 39 Pascali, 2012
(Eckert & Ziegler)
SynChrom R&D Marchand,
ВЭЖХ 54 (EOB) 52
(Raytest) 2016
Boc-Boc-Ns Нет
Tracerlab FXFN ВЭЖХ+ТФЭ 23 (EOS) Shao, 2011
(II) данных
Модуль для
ДМТ-АТ
производства ТФЭ 8,5 (EOS) 75 Nandy, 2009
(IV)
ФДГ
100
Расчетная активность конечного продукта [18F]ФЛТ, исходя из максимальной
производительности [18F]фторной мишени циклотрона.
101
способ синтеза с возможно меньшим количеством предшественника, т.к. это приводит к
уменьшению количества нерадиоактивных побочных продуктов. Особое внимание
необходимо уделить проверке выходов радиохимических реакций на каждой стадии синтеза.
Конечный продукт должен быть проверен на предмет химической и радиохимической
деградации в течение установленного срока годности. При разработке процедуры контроля
качества необходимо отследить, какие именно химические примеси образуются при
выбранном способе производства, и ввести в нормативную документацию способы контроля
их количества. Должна быть разработана процедура разбавления РФП из раствора,
содержащего этанол, до концентрации, разрешенной к внутривенному введению.
Bertagna F., Biasiotto G., Guibbini R. The role of F-18-fluorothymidine PET in oncology. Clin
Trans Imaging 2013, 1:77-97.
Buck AK, Herrmann K, Shen C, Dechow T, Schwaiger M, Wester H-J. Molecular imaging of
proliferation in vivo: Positron emission tomography with [18F]fluorothymidine. Methods. 2009;
48:205-251.
Chen S., Javed R., Kim H.-K., Flores G., van Dam R.M., Keng P.Y., Kim C.-J. Synthesis of
diverse tracers on EWOD microdevice for positron emission tomography (PET). Solid-State
Sensors, Actuators, and Microsystems Workshop Hilton Head Island, South Carolina, June 3-7,
2012, P.189-192.
Costantini D.L., Vali R., McQuatti S., Chan J., Punnett A., Weitzman S., Shammas A.,
Charron M. A Pilot Study of 18F-FLT PET/CT in Pediatric Lymphoma. Int J Mol Imaging, 2016,
http://dx.doi.org/10.1155/2016/6045894.
Glendenning J.L., Barrngton S., Tovey H., Parikh J., Dunn J., Tutt A. Repeatability evaluation
of PET/CT imaging using [18F]fluorothymidine (FLT) and [18F]fluorodeoxyglucose (FDG) in
primary triple negative breast cancer (TNBS). Ann Oncology 2015, 26(3):ii27-ii28.
Hatakeyama T., Kawai N., Nishiyama Y., Yamamoto Y., Sasakawa Y., Ichikawa T., Tamiya
11 18
T. C-methionine (MET) and F-fluorothymidine (FLT) PET in patients with new diagnosed
glioma. Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2008, 35:2009-2017.
Javed M.R., Chen S., Kim H.-K., Wei L., Czernin J., Kim C.-J., van Dam R.M., Keng P.Y.
Efficient Radiosynthesis of 39-Deoxy-39-18F-Fluorothymidine Using Electrowetting-on-Dielectric
Digital Microfluidic Chip. J Nucl Med 2014, 55:321-328.
102
Jensen M.M., Kjaer A. Monitoring of anti-cancer treatment with 18F-FDG and 18F-FLT PET: a
comprehensive review of pre-clinical studies. Am J Nucl Med Mol Imaging 2015, 5(5):431-456.
Kong X.B., Zhu O.Y., Vidal P.M., Watanabe K.A., Polsky B., Armstrong D., Ostrander M,
Lang Jr S.A., Muchmore E., and Chou T.C. Comparisons of anti-human immunodeficiency virus
activities, cellular transport, and plasma and intracellular pharmacokinetics of 3'-fluoro-3'-
deoxythymidine and 3'-azido-3'-deoxythymidine. Antimicrob. Agents Chemother. April 1992
36:808-818.
Lee T.S., Ahn S.H., Moon B.S., Chun K.S., Kang J.H., Cheon G.J., Choi C.W., Lim S.M.
Comparison of 18F-FDG, 18F-FET and 18F-FLT for differentiation between tumor and inflammation
in rats. Nucl Med Biol, 2009, 36:681-686.
Marchand P., Ouadi A., Pellicioli M., Schuler J., Laquerriere P., Boisson F., Brasse D.
Automated and efficient radiosynthesis of [18F]FLT using a low amount of precursor. Nucl Med
Biol 2016, 43:520-527.
Martin S.J., Eisenbarth J.A., Wagner-Utermann U., Mier W., Henze M., Pritzkow H.,
Haberkorn U., Eisenhut M. A new precursor for the radiosynthesis of [18F]FLT. Nucl Med Biol.,
2002; 29:263-273.
Niedermoser S., Pape M., Gildehaus F.J.,Wangler C., Hartenbach M., Schirrmacher R.,
Bartenstein P., Wangler B. Evaluation of an automated double-synthesis module: efficiency and
reliability of subsequent radiosyntheses of FHBG and FLT. Nucl Med Biol. 2012, 39(4):586-592.
Oh S.J., Mosdzianowski C., Chi D.Y., Kim J.Y., Kang S.H., Ryu J.S., Yeo J.S., Moon D.H.
Fully automated synthesis system of 3-deoxy-3-[18F]fluorothymidine. Nucl Med Biol. 2004,
31:803-809.
Pascali, C.; Bogni, A.; Fugazza, L.; Cucchi, C.; Crispu, O.; Laera, L.; Iwata, R.; Maiocchi, G.;
Crippa, F.; Bombardieri, E. Simple preparation and purification of ethanol-free solutions of 3'-
deoxy-3'-[18F]fluorothymidine by means of disposable solid-phase extraction cartridges. Nucl Med
Biol., 2012, 39:540-550.
Reischl G., Blocher A., Rongqing Wei, Ehrlichmann W., Kuntzsch M., Solbach Ch., Dohmen
B. M. and Machulla H.-J. Simplified, automated synthesis of 3-[18F]fluoro-3-deoxy-thymidine
([18F]FLT) and simple method for metabolite analysis in plasma. Radiochim. Acta. 2006; 94:447-
451.
103
Reyners A.K.L., Broekman K.E., Glaudemans A.W.J.M., Brouwers A.H., Arts H.J.G., van der
Zee A.G.J., de Vrie E.G.E., Jalving M. Molecular imaging in ovarian cancer. Ann Oncology 2016,
27(1):i23-i29.
Strauss L.G.. Fluorine-18 deoxyglucose and false-positive results: a major problem in the
diagNstics of oncological patients. Eur. J. Nucl. Med. 1996; 23:1409-1415.
Shao X., Hoareau R., Hockley B.G., Tluczek L.J.M., Henderson B.D., Padgett H.C., Scott
P.J.H. Highlighting the versatility of the tracerlab synthesis modules. Part 1: fully automated
production of [18F]labelled radiopharmaceuticals using a Tracerlab FXFN. J Labelled Comp
Radiopharm. 2011, 54: 292-307.
Shields AF, Grierson JR, Dohmen BM, Machulla HJ, Stayanoff JC, Lawhorn-Crews JM,
Obradovich JE, Muzik O, Mangner TJ. Imaging proliferation in vivo with [F-18]FLT and positron
emission tomography. Nature Med. 1998, 4: 1334-6.
Szyszko T.A., Yip C., Szlosarek P., Goh V., Cook G.J.R. The role of new PET tracers for lung
cancer. Lung Cancer, 2016, 94:7-14.
van Waarde A, Cobben DC, Suurmeijer AJ, Maas B, Vaalburg W, de Vries EF, Jager PL,
18 18
Hoekstra HJ, Elsinga PH. Selectivity of F-FLT and F-FDG for differentiating tumor from
inflammation in a rodent model. J Nucl Med. 2004, 45:695-700
Wilson I.K., Chatterjee S., Wolf W. Synthesis of 3′-fluoro-3′-deoxythymidine and studies of its
18
F-radiolabelling, as a tracer for the noninvasive monitoring of the biodistribution of drugs against
AIDS. J Fluorine Chem 1991; 55:283–9.
Windhorst A.D., Klein P.J., Eisenbarth J., Oeser T, Kruijer P.S., Eisenhut M.. 3′-Sulfonylesters
of 2,5′-anhydro-1-(2-deoxy-β-D-threo-pentofuraNsyl)thymine as precursors for the synthesis of
[18F]FLT: syntheses and radiofluorination trials. Nucl.Med Biol. 2008, 35:413-423.
104
[18F]фторированные аналоги PSMA
105
68
Ga составляет 68 мин). Кроме того, фтор-18, у которого доля эмиссии позитронов
составляет 97%, а пробег в ткани всего 2,4 мм (против 9,6 мм в случае галлия-68)
обеспечивает более высокую контрастность ПЭТ изображений.
Работы по созданию ПСМА агентов, меченных фтором-18, как нового класса РФП
были начаты сравнительно недавно, они кратко рассмотрены в обзоре [Pillai, 2016]. В 2008
группой американских ученых из университета Джона Хопкинса, Балтимор, США [Mease,
2008] был впервые синтезирован аналог аминокислоты цистеина сложной структуры, N-[N-
[(S)-1,3-дикарбоксипропил]карбамоил]-4-[18F]фторбензил-L-цистеин, [18F]DCFBC (Рис. 1, a).
Синтез основан на реакции алкилирования предшественика на основе фармакофора Lys-urea-
Glu (лизин-мочевина-глутаминовая кислота) содержащего ароматическое кольцо для
введеняи метки реакией фторбензилирования с использованием 4-[18F]фторбензилбромида.
Нуклеофильный трех стадийный метод получения лишь этого агента представляется крайне
сложным для автоматизации, что усугубляется и использованием на ключевой стадии
алкилирования в качестве растворителя метанола, насыщенного аммиаком.
Радиохимический выход без поправки на радиоактивный распад (EOS) составлял 3.5% при
времени синтеза 123 мин. Авторами разработаны достаточно сложные методы синтеза
прекурсора и стандарта для идентификации, [19F]DCFBC. В дальнейшем РХВ удалось
увеличить до 9.5% (EOS) за счет использования микроволнового нагрева в самодельном
полуавтоматическом модуле [Holt, 2011; Cho, 2012]. Говорить о перспективности внедрения
этого сложного и низко производительного метода в рутинное производство нового РФП на
данном этапе преждевременно. Предварительные ПЭТ исследования 5 пациентов [Holt,
2011; Cho, 2012] и более поздняя работа [Rowe, 2015] с исследованием 17 пациентов
подтвердили высокую чувствительность ПЭТ в диагностике метастазирующего рака РПЖ.
Однако в следующей работе той же группы [Rowe, 2016] было показано, что [18F]DCFBC
имеет высокую концентрацию в пуле крови, что не позволяет с достаточной точностью
выявлять метастазы в лимфатические узлы.
106
Рис. 1. Перспективные ПСМА-агенты, меченные фтором-18
Afshar-Oromieh A.M., Eder M., Eisenhut M., Linhart H.B., Hadaschik T., Holland-Letz F.,
Giesel C., Kratochwil S., Haufe U., Haberkorn C., Zechmann C. PET imaging with a
[68Ga]gallium-labelled PSMA ligand for the diagnosis of prostate cancer: biodistribution in humans
and first evaluation of tumour lesions. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2013; 40: 486-495.
108
Bouvet V., Wuest M., Jans H-S., Janzen N., Genady A.R., Valliant J.F., Francois Benard F.,
Wuest F. Automated synthesis of [18F]DCFPyL via direct radiofluorination and validation in
preclinical prostate cancer models. Eur J Nucl Med Mol Imaging Res. 2016; 6:40.
http://dx.doi.org/10.1186/s13550-016-0195-6.
Chen Y., Pullambhatla M., Foss C.A., Byun Y., Nimmagadda S., Senthamizhchelvan S.,et al.
2(3-{1-Carboxy-5[{[6-18F]fluoro-pyridine-2-carbonyl}amino]-pentyl}-ureido)-pentanedioic acid,
18
F-DCPyl, a PSMA-based PET imaging agent for prostate cancer. Clin Cancer Res. 2011; 17:
7645-53.
Cho S.Y., Gage K.L., Mease R.C., Senthamizhchelvan S., Holt D.P., Jeffrey-Kwanisai A., et
18
al. Biosdistribution, tumor detection, and radiation dosimetry of F-DCFBC, a low molecular
weight inhibitor of prostate-specific membrane antigen, in patients with metastatic prostate cancer. J
Nucl Med. 2012; 53: 1883-91.
Dietlein M., Kobe C., Kuhnert G., Stockter S., Fischer T., Schomäcker K., Schmidt M.,
Dietlein F., Zlatopolskiy B.D., Krapf P., Richarz R., Stephan Neubauer S., Drzezga A., Neumaier
D. Comparison of [18F]DCFPyL and [68Ga]Ga-PSMA-HBED-CC for PSMA-PET imaging in
patients with relapsed prostate cancer. Mol Imaging Biol. 2015; 17: 575-584.
Fan W., Zhang Z., Zhu Z., Yang D., Chen X., Wang J. Synthesis and positron emission
18
tomography evaluation of F-Glu-urea-Lys, a prostate-specific membrane antigen-based imaging
agent for prostate cancer. Oncol Lett. 2015; 10: 2299-302.
Holt D.P., Ravert H.T., MathewsW.B., Horti A., Mease R., Dannals R.F. A semi-automated
microwave chemistry system for complete radiosynthesis, purification, and formulation of F-18
radiotracers [abstract]. J Labelled Comp Radiopharm. 2011;54: S426.
.Lesche R., Kettschau G., Gromov A.V., Böhnke N., Borkowski S., Mönning U., Hegele-
Hartung C., Döhr O., Dinkelborg L.M., Graham K. Preclinical evaluation of BAY 1075553, a novel
18
F-labelled inhibitor of prostatespecific membrane antigen for PET imaging of prostate cancer. Eur
J Nucl Med Mol Imaging. 2014; 41:89-101.
Ley C.R., Beattie N.R., Dannoon S., Regan M., VanBrocklin H., Berkman C.E. Synthesis and
evaluation of constrained phosphoramidate inhibitors of prostate-specific membrane antigen.
Bioorg Med Chem Lett. 2015;25:2536–9.
Malik N., Baur B., Winter G., Reske S.N., Beer A.J., Solbach C. Radiofluorination of PSMA
HBED via Al18F(2+) chelation and biological evaluations in vitro. Mol Imaging Biol. 2015; 17:
777-85.
109
Malik N., Machulla H.J., Solbach C.,Winter G., Reske S.N., Zlatopolskiy B. Radiosynthesis of
a new PSMA targeting ligand ([18F]FPy-DUPA-pep). Appl Radiat Isot. 2011; 69: 1014–8.
Mease R.C., Dusich C.L., Foss C.A., Ravert H.T., Dannals R.F., Seidel J., et al. N-[N-[(S)-1,3-
Dicarboxypropyl]carbamoyl]-4-[18F]fluorobenzyl-L-cysteine, [18F]DCFBC: a new imaging probe
for prostate cancer. Clin Cancer Res 2008;14: 3036-43.
Pillai M.R., Nanabala R., Joy A., Sasikumar A., Russ Knapp F.F.. Radiolabeled enzyme
inhibitors and binding agents targeting PSMA: Effective theranostic tools for imaging and therapy
of prostate cancer. Nucl Med Biol. 2016; 43: 692-720.
Rowe S.P., Gage K.L., Farai S.F., Macura K.J., Cornish T.C., Gonzalez-Roibon N. 18FDCFBC
PET/CT for PSMA-based detection and characterization of primary prostate cancer. J Nucl Med.
2015; 56:1003–10.
Rowe S.P., Macura K.J., Ciarallo A., Mena E., Blackford A., Nadal R. et al. Comparison of
prostate-specific membrane antigen-based 18F-DCFBC PET/CT to conventional imaging modalities
for detection of hormone-naive and castration-resistant metastatic prostate cancer. J Nucl Med.
2016; 57: 46-53.
Rowe S.P., Mana-Ay. M, Javad M.S, Szabo Z., Leal J.P., Pomper M.G., et al. PSMA-based
detection of prostate cancer bone lesionswith 18F-DCFPyL PET/CT: a sensitive alternative to
99m
Tc-MDP bone scan and 18F PET/CT. Clin Genitourin Cancer. 2016;14: 115-8.
Szabo Z., Mena E., Rowe S.P. Initial evaluation of [18F]DCFPyL for prostate- specific
membrane antigen (PSMA)-targeted PET imaging of prostate cancer. Mol Imaging Biol. 2015; 17:
565-574.
110