Лабораторно-практические занятие №1

Тема: Знакомства микробиологической лабораторией и аппаратурой для

микробиологических исследований.
Цель занятия:
1. Ознакомить студентов с правилами работы и организациями
микробиологических (бактериологических и серологических) лабораторий.
2. Ознакомить студентов аппаратурой для микробиологических
исследований.
Рассматриваемые вопросы:
1. Ознакомление с условиями работы в микробиологической лаборатории.
2. Ознакомление с основными приборами и оборудованиями
микробиологических лабораторий.
3. Устройство и применение основных приборов и оборудования,
используемого в микробиологических лабораториях: термостата, центрифуг,
автоклава, сушильного шкафа и другого инструментария и посуды.
Методические указания
К работе в бактериологической лаборатории допускаются лица не
моложе 18 лет, не имеющиепротивопоказаний по состоянию здоровья и
прошедшие вводный инструктаж.
Каждый сотрудник лаборатории дольжен иметь закрепленное за ним
рабочее место. Каждое рабочее место врача и лаборанта имеет обязательный
комплект оборудования: спиртовую или газовую горелку; контейнер с
дезинфицирующим раствором, закрывфющийся крышкой; банку с
дезраствором для использованных в работе предметных и покровных стекол;
плотно закрывающуюся банку для хранения чистых, обезжиренных стекол в
смеси Никифорова (рецепт1); набор бактериологических петель разного
диаметра; лупу 5-кратного увеличения; микроскоп.
В ящиках стола находится дневной запас стерильных и градуированных
пипеток разного объема. Перед началом работы следует надеть халат, о
который хранится отдельно от верхней одежды.
При работе со спиртовкой необходимо иметь под рукой одеяло, плотную
ткань и т.д. для быстрого тушения огня в случае аварии.
Насасывание в пипетки растворов химических реактивов и жидкостей,
содежащих возбудителей инфекционных заболеваний, производят с
помощью резиновой груши или автоматической пипетки. Насасывание ртом
не допускается.
Материал для исследования доставляют в лабараторию в контейнерах,
биксах или сумках-холодильниках. Емкости с жидкими материалами
закрывают пробками, исключающими выливание содержимого во время
транспортирования. Дно контейнеров, содержащих емкости с патогенными
биологическими агентами (ПБА), покрывают адсорбирующим материалом
(марлевая салфетка, ткань, вата и др). Сопровадтиельную документацию к
направляемому материалу прилагают отдельно, в целлофановом пакете.
При приеме и разборке в лаборатории материала, доставленного на
исследование, персонал используют маски и резиновые перчатки.
 Во время работы двери боксов и предбоксников следует закрывать, а
выход из этих помещениий запрещать. Бокс должен быть оснащен
средствами сигнализации на случай аварии. Для посевов используют
бактериологическую петлю, замкнутую в непрерывное кольцо, с плечом не
более 6 см.
Работа с посевами выделенных возбудителей и чистыми культурами
микробов ведется близ пламени горелки. В процессе работы каждая
процедура с вызятием или внесением в среду культур микробов или
пересеваемого материала сопровождается «горлышка» сосудов (колоб,
пробирок, флаконов), из которых берут или в которые вносят исследуемый
материал. Соответственно перед проведением каждого посева и после него
бактериологические петли или металлические шпатели прокаливают в
пламени горелки.
Оборудование микробиологических лабораторий.
Лаборатории снабжены следующими приборами и аппаратами:
биологическими иммерсионными микроскопами с допольнительными
приспособлениями (осветитель, фазово-контрастное устройство,
темнопольный конденсор и др.) люминесцентным микроскопом,
термостатами, аппаратурой для стерилизации, рН-метрами, аппаратом для
получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифугами,
техническими и аналитическими весами, аппаратурой для фильтрования
(фильтр Зейтца и др.).
1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная температура.
Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов 37
ºС. Термостаты бывают воздушными и водяными.
2. Микроанаэростат. Аппарат, для выращивания микроорганизмов в
анаэробных условиях.
3. Холодильник. Используется в микобиологических лабораториях для
хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин,
сывороток и прочих биологических активных препаратов при температуре
около 42 °С. Для хранения препаратов ниже 0 °С используется
низкотемпературные холодильник, в которых поддерживается температура
-202 °С и ниже.
4. Центрифуги. Применяется для осаждения микроорганизмов, эритроцитов
и других клеток, для разделения неоднородных жидкостей (эмульсии,
суспензии). В лабораториях используют центрифуги с различными
режимами работы.
5. Сушильно-стерилизацонный шкаф (печь Пастера). Предназначен для
воздушной стерилизации лабораторной посуды и других материалов.
6. Стерилизатор паровой (автоклава). Предназначен для стерилизации паром
под давлением. В микробиологических лабораториях используется
автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные,
переносные).
Лабораторно-практические занятие №2
Тема: Правила работы с микроорганизмами. Устройство микроскопа и
методы работы с ним.
Цель занятия: Полностью освоить микроскопическую технику и работу
с иммерсионной системой микроскопа.
Рассматриваемые вопросы:
1. Повторение основных данных оптического микроскопа.
2. Ознакомление с иммерсионной системой микроскопа.
3. Применение в микробиологии фазово-контрастного,
люминесцентного и электронного микроскопов.
Методические указания
Особенности бактериоскопии. Правила работы с иммерсионной
системой.
Просмотр препарата из палочковидных форм бактерий. Зарисовать.
Предварительно приготовить микроскоп, поставить объектив 8×,
конденсор поднять до упора и открыть диафрагму конденсора. Поставить
плоское зеркало. Глядя в окуляр, поворачивать зеркало и найти яркое
освещение. Яркость света можно уменьшить с помощью конденсора.
На предметном столике укрепить клеммами препарат, на который
предварительно нанести каплю кедрового масла (в центре препарата).
Поставить иммерсионный объектив (90×) и под контролем глаза погрузить в
каплю кедрового масла до легкого соприкосновения с предметным стеклом.
Затем, глядя в окуляр, медленно, при помощи макрометрического винта,
поднимать до появления окрашенного фона. Микрометрическим винтом
окончательно установить четкость изучаемого объекта. Просмотр несколько
полей зрения, передвигая предметный столик. По окончании микроскопии
поднять тубус, повернуть револьвер и фильтровальной бумагой снять
кедровое масло с фронтальной линзы иммерсионного объектива. Затем
тщательно протереть фланелевой тканью. Микроскоп поставить под колпак
или закрыть футляром из мягкой темной ткани.
Материал для занятия: биологические микроскопы, иммерсионное
масло, готовые окрашенные препараты палочковидных форм бактерий.
 Лабораторно-практические занятие №3
Тема: Искуственные питательные среды и их виды. Приготовление
питательных сред.
Цель занятия:
1. Ознокомить с питательными средами и ингредиентами, используемые для
их приготовления.
2. Приготовление питательных сред.
Рассматриваемые вопросы:
1. Ингредиенты, используемые для приготовления питательнх сред.
2. Питательные среды: основные, дифференциально-диагностические,
элективные, синтетические.
3. Техника приготовления основных питательных сред.
4. Определение рН питательного бульона.
Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие
различные соединения сложного или простого состава, которые применяются
для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или
промышленных условиях.
Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного
пройсхождения.
По консистенции питательные среды могут быть жидкими,
полужидкими, плотными.
По целевому назначению питательные среды делят на основные,
элективные и диференциально-диагностические.
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих
бактерий.
Приготовление питательных сред. Основные среды. Питательный
бульон.
Выпускается в сухом виде содержит, г/л: триптический гидролизат
кильки – 10,05; натрия хлорид – 4,95. Навеску порошка, указанную на
этикетке (например,15г), тщательно размешивают в колбе с 1 л
дистиллированной воды. Кипятят 1 – 2 мин., не допуская пригорания,
фильтруют через бумажный фильтр и разливают в пробирки или колбы.
Стерилизуют при температуре 120 °С в течение 20 мин.
Элективные питательные среды. Пептонная вода 1 % рН 8,0.
Избирательна для холерного вибриона, который размножается быстро,
опережая рост других микроорганизмов. Щелочная реакция среды не
препятствует росту холерных вибрионов, но тормозит рост других
микроорганизмов.
Среды для культивирования анаэробов. Среда Вильсона-Блера
(железосульфитный агар). Готовится из питательного агара, к которому
добавляют глюкозу. Na2SO4 в Na2S, который, соединяясь с хлоридом железа,
дает осадок сульфата железа черного цвета.
Среда Китта-Тароцци. Состоит из питательного бульона, 0,5 % глюкозы
и кусочков печении или мясного фарша для адсорбции кислорода. Перед
посевом среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 10 – 15 мин.
для удаления воздуха. После посева среду заливают небольшим слоем
вазелинового масла.
Дифференциально-диагностические среды. Среды Гисса. К 1 %
пептонной воде добавляют 0,5 % раствор определенного углевода (глюкоза,
лактоза, мальтоза, манит и др.) и индикатор Андреде (кислый фуксин в 1 н.
растворе NаОН), разливают по пробиркам, в которые помещают поплавок
(трубка длиной около 3 см, один конец которой запаян) для удавливания
газообразных продуктов, образующихся при разложении углеводов.
Лабораторно-практические занятие № 4
Тема: Морфология микроскопических грибов.
Цель занятия: Уметь дифференцировать эукариоты. Знать строение
грибов (дрожи, плесни: мукор, аспиргилы и пенициллиум)
Рассматриваемые вопросы:
1. Морфология нитчатых грибов (мукоровых, аспергиловых и
пеницилловых).
2. Морфология дрожжевых грибов.
К аскомицетам относят рода Aspergillus, Penicillium, Chaethomium,
Saccharomyces. Широко распространены в природе, обитают в почве,
органических субстратах, кормах, пищевых продуктах, вызывая их порчу.
Имеются токсические виды, они способны вызывать микотоксикозы.
Аскомицетами являются также съедобные грибы.
К роду Aspergillus относится широко распространенная в природе
черная плесень A.. niger. И хотя названный род относится к сумчатым грибам
никаких эндоспор он не образует и размножается бесполым путем с
помощью экзоспор или конидий. Мицелий аспергилл многоклеточный,
септированный. От него поднимается одноклеточный конидиеносец,
заканчивающийся булавовидным утолщением, на котором в форме струй
воды из лейки располагаются отростки - стеригмы, отшнуровывающие
наружные споры (экзоспоры) или конидии. Описываемая плесень получила
также название леечной. Она широко распространена в природе и может
поражать верхние дыхательные пути, органы зрения, слуха и пр.
Род Penicillium отличается от предыдущего тем, что конидиеносец у
него многоклеточный, а стеригмы расположены в форме кисточки -
кисточковая плесень. Довольно часто встречается в кормах, молочных
продуктах, на влажных поверхностях. Некоторые виды пеницилловой
плесени используются как продуценты пенициллина и кормовых
антибиотиков.
Род дрожжей (Saccharomyces) составляет одноклеточные
микроорганизмы сферической, округлой формы размером 7 – 10 мкм.
Структурно имеют двухконтурную оболочку, цитоплазматическую
мембрану, цитоплазму. В ней четко оформлены цитоплазматическая сеть,
комплекс Гольджи, рибосомы, митохондрии, ядро (отграниченное от
цитоплазмы трехслойными мембранами), лизосомы, вакуоли, а также зерна
волютина, гликогена, липидов
Методические указания:
1. Микроскопия готовых препаратов (неокрашенных) – раздавленная капля
из культуры дрожжей. Микроскопировать при увеличении объектив 90×
окуляр 7×, в слегка затемненном поле зрения. Зарисовать в альбом.
Строение дрожжевой клетки, почкование, спорообразование, деление.
2. Микроскопия готовых неокрашенных препаратов (раздавленная капля) из
культуры плесеней, в слегка затемненном поле зрения. Зарисовать
препараты: аспергилловой пенициллиновой и мукоровой плесени.
3. Микроскопия готовых неокрашенных (раздавленная капля) препаратов из
культуры актиномицетов.
Микроскопировать готовый препарат в световом микроскопе при
увеличении объектив 90× окуляр 7× (иммерсионная система), при слегка
затемненном поле зрения, для чего поднятый до упора конденсор опустить на
половину оборота микровинта, при надобности для лучшего
контрастирования препарата конденсор.
Материал для занятия: Биологические микроскопы, препараты из
культур грибов (живые, под покровным стеклом).

Питательная среда агар кровяной Рост колонии Clostridium chauvoei

с глюкозой
 Лабораторно-практические занятие №5
Тема: Приготовление препаратов из бактериальных культур. Простые
методы окраски.
Цель занятия: Уметь приготовить из культур бактерий, выращенных на
твердых и жидких питательных средах.
Рассматриваемые вопросы:
1. Приготовление мазков из культур на плотных и жидких питательных
средах.
2. Высушивание и фиксация мазков.
3. Окраска мазков.
4. Ознакомление с основными красками и их рабочими растворами,
наиболее часто употребляемые в микробиологической практике.
Методические указания по приготовлению препарата
Приготовления мазка. На обезжиренное предметное стекло наносят
петлей каплю физраствора и переносят в нее петлей пробирки исследуемый
материал. Получившуюся суспензию (взвесь) равномерно размазывают
петлей на площади 1 – 2 (см2) по возможности более тонким слоем.
Если препарат готовят из жидкой питательной среды, берут каплю
культуры петлей и, поместив каплю на середину сухого чистого стекла,
равномерно размазывают.

Петлю после приготовления мазка прожигают над пламенем спиртовки.

 Высушивание. Препарат высушивают при комнатной температуре на
воздухе.
Фиксация. Фиксация препарата имеет целью:
- убить микробов и сделать безопасным дальнейшее обращение с ними;
- прикрепить мазок к стеклу, чтобы он не смывался при дальнейших
манипуляциях;
- сделать клетки исследуемых микроорганизмов более восприимчивыми
к окраске, так как убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем
живые.
Самым распространенным способом фиксации является термическая
обработка. Для этого препарат 5 – 6 раз проводят над пламенем спиртовки,
держа предметное стекло мазком вверх. Нельзя перегревать мазок, так как
при этом могут произойти грубые изменения клеточных структур.
Для исследования тонкого строения клетки прибегают к фиксации
различными химическими веществами (этиловым спиртом, метиловым
спиртом, ацетоном).
Окраска. Окрашивание микробов не является механическим процессом
проникновения краски в микробную клетку. Механизм окраски микробов
следует рассматривать как процесс физико-химический, который зависит от
физико-химического состава цитоплазмы микробных клеток.
Наиболее пригодными для окраски оказались анилиновые краски,
главным образом, основные и нейтральные. Кислые краски менее пригодны.
Анилиновые краски поступают в продажу в виде порошков, из которых
в лабораториях готовят растворы, сохраняющиеся впрок, но сами по себе не
пригодны для окраски бактерий. Из них готовят разведенные растворы,
которые и применяют для окраски мазка.
Способы окрашивания микробов делятся на простые и сложные, или
дифференциальные.
Количество краски должно быть таким, чтобы покрыть всю поверхность
мазка.
Простая окраска позволяет быстро и хорошо ознакомиться с общей
морфологией грибов. При простой окраске обычно употребляется только
одна краска, чаще всего красная - фуксин, или синяя – метиленовая синька.
Фуксином Пфейфера красят мазок в течении 1 – 2 минут.
Метиленовой синькой – в течении 3 – 5 минут.
По истечении срока окрашивания краску сливают с препарата и
промывают его водой. Оставшуюся на стекле воду осторожно удаляют
фильтровальной бумагой. Окрашенный мазок должен быть совершенно
сухим, так как остаток воды образует с кедровым маслом, нанесенным на
мазок, эмульсию, мешающую микроскопированию.
Исследование микробов в живом состоянии. При изучении микробов в
живом виде удается выявить ряд свойств, не обнаруживаемых у убитых
микробов, например, их активную подвижность и др.
 В живом состоянии микробов исследуют в раздавленной капле, которую
микроскопируют с помощью сухих систем.
На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю
исследуемого материала. Культура должна быть выращена на жидкой
питательной среде. Эту каплю осторожно накрывают покровным стеклом,
чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха. Если имеется избыток
жидкости, то его следует удалить фильтровальной бумагой.
Препарат «раздавленная капля» позволяет установить фору клеток
изучаемых микроорганизмов, их размеры, расположение, а также наличие
или отсутствие подвижности.

Материал для занятия: Культуры бактерий, выращенных на твердых и

жидких питательных средах, физиологический раствор, дистиллированная
вода, анилиновые краски: фуксин Пфейфера, синька Лефлера, предметные и
покровные стекла, спиртовки, платиновые петли.
 Лабораторно-практические занятие №8
Тема: Серологические диагностики. Реакция агглютинации (РА) и
реакция преципитации (РП)
Цель занятия: Освоить технику постановки РА и реакции
преципитации.
Рассматриваемые вопросы:
1. Что такое «серологические реакции» их значение?
2. Антигены и антитела.
3. Иммунологические реакции.
Иммунобиологические реакции возникают в живом организме при
внедрении в него живых или мертвых антигенов (большей частью микробов)
продуктов их жизнедеятельности (токсинов), или продуктов распада их.
Основу всех иммунобиологических реакций составляет специфическое
взаимодействие антигена с антителом.
Реакция агглютинации (РА)
На основании постановки иммунобиологических реакций возможно
довольно точно установить или присутствие в организме возбудителя
заболевания по наличию в сыворотке крови больного и переболевшего
специфических антител для данной инфекции, или, если выделена от
больного культура неизвестного возбудителя, определить его характер.
Губер и Видаль установили, что в сыворотке больного организма, под
влиянием инфекции или искусственного введения антигена в виде живых или
убитых бактерийных тел, обнаруживается вещества, которые скучивают тела
микробов и тем лишают подвижных из них подвижности. Эти антитела были
названы авторами агглютининами.
Прибавление агглютинирующей сыворотки к бактерийной эмульсии
через несколько часов вызывает просветление эмульсии и образование
хлопьев, состоящих из кучек (склеенных) микробов, осевших на дно
пробирки.
Техника постановки РА (на бруцеллез)
У подозрительных по бруцеллезу животных берут из яремной вены
кровь в стерильные пробирки, ставят минуту на 15 в теплое место.
Полученный сгусток фибрина и форменных элементов крови обводят
металлической или стеклянной палочкой ставят на ночь в холодильник.
Отстоявшуюся сыворотку сливают в стерильные пробирки. Если же в
лабораторию присланы для исследования кровь, то ее в первую очередь
проверяют на пригодность (отстой, отсутствие, гемолиза и загнивания);
сверяют номера сывороток с номерами ведомости; приготовляют
консервирующее вещество (5 % раствор карболовой кислоты на
физиологическом растворе), консервант добавляют в слитые сыворотки из
расчета 1:10.
РА на бруцеллез КРС ставится на физ. растворе в обычных
бактериологических пробирках. На каждую сыворотку 4 пробирки (в 1
пробирке разведение 1:50; во 2-й 1:100; в 3-й 1:400).
1. Разливают физ.раствор 1 пробирку 1,96см³; во 2,3,4 по 1 см³.
 2. В пробирку (1) добавляют 0,04 см³ исследуемой сыворотки,
тщательно смешиваются, получается разведения 1:50.
3. Переносится 1см³ раствора из 1 пробирки во 2 и тщательно
смешивается, получается разведение 1:100.
4. Переносится 1см³ раствора из 2 пробирки во 3 и тщательно
смешивается, получается разведение 1:200.
5. Переносится 1см³ раствора из 3 пробирки во 4 и тщательно
смешивается, получается разведение 1:400.
6. Из 4 пробирки 1см³ раствора выбрасывается.
7. Во все пробирки добавляется по 0,05см³ антигена.
8. Ставятся контроли на заведомо положительных и отрицательных
сыворотках в тех же разведениях; на антиген с физиологических раствором и
на физ. ра-р.
9. Штативы ставятся в термостат на 24 часа при температуре 37 °С.
Читка РА и запись ее результатов.
Перед читкой проверяют контроль. Читать реакцию нужно на темном
фоне или прикладывая дно пробирки к зеркальцу, что дает обратное
отражение дна пробирки.
За положительные признаны сыворотки имеющие осадок антигена на
дне пробирки в виде пуговки. При встряхивании получается равномерная
эмульсия.
Резко положительная реакция обозначается ++++
Положительная +++
Сомнительная ++
Очень сомнительная +
Отрицательная -

А В
А- отрицательная В- положительная

Рисунок. Результаты РА

Реакция преципитации (РП)

 Преципитины или осаждающие белок вещества, подобно агглютининам,
образуется под влиянием инъекций растворов белка или бактерийных
культур. Преципитины также специфичны. Если сыворотку иммунного
животного смешать с раствором белка, которым велась иммунизация или с
фильтратом бульонной культуры то в растворе белка или бактерийном
фильтрате, появляется белковый осадок,
Реакция преципитации весьма чувствительна и точна для определения
белков различного происхождения; поэтому она получила широкое
применение в судебной медицине и гигиене пищевых продуктов. В судебной
медицине она применяется для выяснения природы кровяных пятен, для
решения вопроса о том принадлежит ли данная кровь человеку или
животному. В судебной медицинской практике в этом применении реакция
преципитации носит название реакции Уленгута.
Приготовление преципитирующей сыворотки
Кролику внутривенно или внутрибрюшинно вводят слегка подогретую
человеческую кровь 4 – 5 раз с промежутками в 2 – 3 дня. После этого
стерильно берут у кролика кровь, получают сыворотку и разливают по
ампулам. Таким же образом можно приготовить сыворотки, обладающие
преципитирующими свойствами по отношению к крови любого животного.
Приготовление экстрактов из кровяных пятен.
Подозрительного пятно с твердого предмета соскабливают и растворяют
в физиологическом растворе. Или испачканные ткани нарезают мелкими
кусочками и вымачивают в физ. растворе, свежие пятна в течнии нескольких
часов, а старые в течение суток.
Огромное значение реакция преципитаций имеет когда ни один из
методов диагностики не приводит к цели (например, при сильном
разложений трупа).
Асколи и Валенти установили, что экстракты из сибиреязвенных
культур, тканей и органов (кровь, мышцы, селезенки, кожи и пр.) дают
реакцию преципитаций с высоко активными преципитирующими
(антисибереязвенными) сыворотками. При переслойке последней экстентом
через несколько минут или моментально появляется на границе
соприкосновения двух жидкостей преципитационное кольцо в виде серо-
белого белкового выпада. Появление кольца диска более чем через 15мин. Не
считается характерным. Они установили также, что экстракты очень
устойчивы к кипячению и так их можно получать из органов павших
животных. Этот метод называется термопреципитационным. При пересылки
материала для исследования его консервируют глицерином, спиртом и это не
препятствует постановке реакции преципитации.
Способ кипячения по Асколи и Валенти
Берут от подозрительного по сибирской язве трупа кусочек селезенки,
величиной с горошину и растирают с 70 мл физ. раствора и держат пробирку
несколько минут в кипящей воде; 2 раза фильтруют. Экстракт должен быть
совершенно прозрачным.
Шутц и Пфейлер
 (Хлороформенный метод) кусочки сомнительного материала с орех
растирают в ступке с 10 г белого песка в равномерную эмульсию. Помещают
в цилиндр с притертой пробкой, куда налит хлороформ и выдерживают часов
пять – хлороформ разрушает гемоглобин. Хлороформ сливают,
затвердевшую смесь разбивают и наливают 0,5 л карболовый раствор.
Вытяжка должна быть бесцветна и прозрачна. Фильтруют.
Определение сибиреязвенных кож
Экстрагируют кожи на холоду в 0,5 % карболовом физиологическом
растворе. Проба из кож весом 1 г, тщательно измельчаются, заливаются
названным раствором и ставятся в холодное место на 2-24 часа. Антиген
должно быть совершенно прозрачным. В СССР материал перед
исследованием реакции АСКОЛИ иногда препятствует предшествующая
обработка кож теми или иными веществами; в частности мокросоленые
кожи, кожи, посыпанные известью, нафталином и пр. Это, по-видимому,
делает реакцию не спецефической.
Техника постановки реакции преципитации
Приготовляются антиген для реакции преципитации кусочек кожи
мелко нарезаются и вымачиваются в карболовом физ. растворе, полученный
фильтрат фильтруется через асбестовый фильтр в уленгутовские пробирки. В
пробирку наливается сначала активная препиптирующая сыворотка (0,3 – 0,5
мл), а затем осторожно наслаивается капиллярной пипеткой экстракт или
наоборот к первоначально налитому экстракту подслаивают сыворотку,
опустив капиллярную пипетку на дно пробирки: поступающая более тяжелая
сыворотка, вытесняет экстракт наверх. В положительных случаях кольцо
преципитации должно появляться тотчас же или в первые минуты
соединения антигена с сывороткой. Для реакции требуются контроли:
- Испытуемого экстракта с физ. раствором.
- Испытуемого экстракта с сывороткой (нормальной).
- Экстрактов нормального и из органов павшего от сибирской язвы
животного с преципитирующей сывороткой.
- Тех же экстрактов с нормальной сывороткой.