МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МИРЭА – РОССИЙСКИЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

Н.А. БРАГИНА, К.А. ЖДАНОВА

ОСНОВЫ БИОХИМИИ

УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ

Москва — 2019

1
УДК 571
ББК 28.072

Брагина Н.А. Основы биохимии [Электронный ресурс]: Учебное пособие / Брагина Н.А.,
Жданова К.А. — М.: МИРЭА – Российский технологический университет, 2019. — 1
электрон. опт. диск (CD-ROM)

Учебное пособие содержит материалы для освоения теоретической части курса «Основы
биохимии» и организации самостоятельной работы студентов, оно непосредственно предназначено
для студентов бакалавриата по направлению 18.03.01 «Химическая технология» (профиль
«Химическая технология синтетических биологически активных веществ и химико-
фармацевтических препаратов»). Пособие может быть использовано студентами бакалавриата
по направлению 04.03.01 Медицинская химия, а также магистратуры по программам 18.04.01
«Химия и технология биологически активных веществ», 04.04.01 «Медицинская и
фармацевтическая химия», 19.04.01 «Молекулярная и клеточная биотехнология», а также
слушателями программ дополнительного образования и студентами смежных направлений
подготовки для расширения кругозора в области молекулярных основ функционирования
живых систем.

Учебное пособие издается в авторской редакции.

Авторский коллектив: Брагина Наталья Александровна, Жданова Ксения Александровна

Рецензенты:
Лобанов Антон Валерьевич, д.х.н., профессор кафедры общей химии, ГБОУ ВО «Московский
педагогический государственный университет», Институт биологии и химии
Константинова Ирина Дмитриевна, к.х.н, старший научный сотрудник лаборатории
Биотехнологии, ФГБУН Институт биоорганической химии РАН

Минимальные системные требования:

Наличие операционной системы Windows, поддерживаемой производителем.
Наличие свободного места в оперативной памяти не менее 128 Мб.
Наличие свободного места в памяти хранения (на жестком диске) не менее 30 Мб.
Наличие интерфейса ввода информации.
Дополнительные программные средства: программа для чтения pdf-файлов (Adobe Reader).
Подписано к использованию по решению Редакционно-издательского совета
МИРЭА – Российского технологического университета от ___ __________ 2019 г.
Объем ___ Мб
Тираж 10

© Брагина Н.А., Жданова К.А., 2019

© МИРЭА – Российский технологический университет, 2019

2
 Оглавление
1. Введение в биохимию ............................................................................................................................. 2
1.1. Особенности живой материи ............................................................................................................... 2
1.2. Химические основы живой материи................................................................................................... 3
1.3. Химическая эволюция .......................................................................................................................... 5
1.4. Биологическая эволюция (эволюция жизни на Земле) ..................................................................... 7
2. Строение клетки .................................................................................................................................... 11
2.1. Строение прокариотической клетки ................................................................................................. 12
2.2. Строение эукариотической клетки ................................................................................................... 13
2.3. Особенности строения и функционирования вирусов .................................................................... 21
3. Пептиды и белки ................................................................................................................................ 23
3.1. Структура, классификация и физико-химические свойства аминокислот ................................... 23
3.2. Пептидная связь и ее особенности.................................................................................................... 33
3.3. Биологически активные пептиды................................................................................................. 36
3.4. Структурная организация белков................................................................................................. 37
3.5. Биологические функции белков ................................................................................................... 45
4. Нуклеиновые кислоты....................................................................................................................... 51
4.1. Химическое строение и номенклатура нуклеиновых кислот ......................................................... 51
4.2. Пространственная структура и свойства ДНК ................................................................................ 56
4.3. Структура и функции РНК ................................................................................................................ 60
4.4. Клеточные процессы, связанные с обработкой генетической информации ................................. 62
5. Липиды и биологические мембраны ................................................................................................... 73
5.1. Определение и основные компоненты липидов ......................................................................... 73
5.2. Химическая классификация и функции липидов ............................................................................ 76
5.3. Состав и структура биологических мембран .............................................................................. 81
5.4. Биологические функции клеточных мембран............................................................................. 85
6. Углеводы ................................................................................................................................................ 88
6.1. Химическая структура, классификация и стереохимия углеводов........................................... 88
6.2. Полисахариды растений, млекопитающих и членистоногих и их биологические функции . 93
6.3. Гликоконъюгаты – структура и биологические функции ......................................................... 99
7. Метаболизм клетки ......................................................................................................................... 102
7.1. Общие определения. Метаболитические пути: катаболизм и анаболизм ................................... 102
7.2. Центральные метаболитические пути в клетке ............................................................................. 104
7.3. Синтез АТФ в клетке........................................................................................................................ 107
7.4. Основы метаболизма отдельных классов БАС .............................................................................. 113
 Список использованной литературы ..................................................................................................... 122

1. Введение в биохимию
1.1. Особенности живой материи
Биохимия – это область наук о живых системах, которая на молекулярном
уровне описывает структуру, механизмы и химические процессы, свойственные
всем живым организмам, и формулирует принципы организации, лежащие в
основе любых форм жизни, называемые принципами молекулярной логики
жизни. Биохимические исследования позволяют понять, каким образом
молекулы в составе живых организмов взаимодействуют между собой,
способствуя сохранению и непрерывному поддержанию живого состояния.
Живые организмы обладают особыми признаками, отличающими их от других
материальных объектов:
1. Сложность и высокая степень организации живых организмов.
Живые организмы состоят из множества сложных молекул и представлены
миллионами различных видов, в то время как неживая материя состоит из
неупорядоченных смесей ограниченного числа простых химических
соединений.
2. Живые организмы обладают способностью извлекать, преобразовывать и
использовать энергию окружающей среды либо в форме органических
питательных веществ, либо в виде энергии солнечного излучения, необходимой
для обеспечения фотосинтеза.
3. Способность живых организмов к точному самовоспроизведению.
Так, из одной бактериальной клетки за 24 часа может возникнуть миллиард
идентичных дочерних клеток: каждая бактерия является точной копией
оригинала, ее строение полностью определяется информацией, содержащейся в
генетическом материале исходной клетки.
4. Имеют механизмы восприятия изменений в окружающей среде, которые
непрерывно приводят организм в соответствие с условиями среды за счет
адаптации организма.
5. Специфические функции всех компонентов живого организма и регуляция их
взаимоотношений. Любая составная часть живого организма имеет специальное
назначение и выполняет строго определенную функцию:
макроструктуры (органы и ткани)
микроструктуры (клеточные органеллы)
индивидуальные биомолекулы (белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды и
др.)
2
6. Способность изменяться со временем путем последовательной эволюции.
Результатом эволюции является огромное многообразие форм жизни, связанных
общим происхождением. Общность всех живых организмов на молекулярном
уровне выражается в сходстве последовательностей генов и структуры белков.

1.2. Химические основы живой материи

Для живых организмов важными являются не более 30-ти стабильных
химических элементов, большинство из них имеют небольшой атомный номер.
Макроэлементы: водород, кислород, углерод, азот, натрий, калий, кальций,
хлор, фосфор, сера. Четыре основных макроэлемента – это водород, кислород,
азот, углерод; они составляют около 99% массы клеток. К микроэлементам
относятся железо, селен, хром, марганец, молибден, ванадий, кобальт, никель,
цинк, медь, магний, йод. Микроэлементы необходимы для функционирования
специфических белков, в т.ч. некоторых ферментов.
Для молекулярной организации живой материи важное значение имеет
способность атома углерода образовывать стабильную одинарную связь с 4-мя
другими атомами углерода. Углерод, по-видимому, был отобран в ходе
биологической эволюции из-за наличия у него целого ряда «полезных» свойств:
благодаря многообразию одинарных и кратных связей углерода возможно
существование широкого набора органических структур с различными
функциональными группами, придающими биомолекулам биологическую и
химическую специфичность. Многие биомолекулы являются
полифункциональными соединениями – они содержат две и более разных
функциональных групп. Биомолекулы имеют характерные трехмерные формы
(или конформации) и определенные размеры. Многие биомолекулы в клетках
существуют в асимметрических (хиральных) формах, называемых
энантиомерами.
Основными компонентами клеток являются макромолекулы –
биополимеры с высокой молекулярной массой, построенные из ковалентно
связанных между собой «строительных блоков» - мономеров; число типов таких
малых молекул относительно невелико, и они универсальны для всех типов
клеток. Взаимодействия между макромолекулами в большинстве случаев
являются стереоспецифическими: они требуют точной комплементарности
(взаимного соответствия) реагирующих молекул. Макромолекулы могут
собираться в нековалентные надмолекулярные комплексы (например,
плазматическая мембрана, хроматин, клеточная стенка).
Основные классы биополимеров:
3
1) Белки – длинные биополимеры, построенные из аминокислотных остатков (до
нескольких тысяч а.к.). Белки выполняют все основные функции в клетке
(катализ, транспорт, движение, молекулярное узнавание, передача сигнала,
поддержание структуры клетки и др.) Все белки, функционирующие в данной
клетке, образуют ее протеом.
2) Нуклеиновые кислоты (РНК и ДНК) – высокомолекулярные биополимеры,
построенные из нуклеотидов и отвечающие за процессы обработки генетической
информации в клетке. Некоторые типы РНК выполняют структурные или
каталитические функции в надмолекулярных комплексах.
3) Полисахариды построены из остатков простых сахаров – моносахаридов и
выполняют резервную, структурную и некоторые другие биологические
функции.
4) Липиды – производные высших жирных кислот, спиртов и альдегидов,
являются запасными питательными веществами и основными структурными
компонентами мембран.

Роль нековалентных взаимодействий в функционировании биомолекул

Первичная структура биополимеров (белков, НК и полисахаридов) образуется за
счет ковалентных связей между мономерными звеньями, а в поддержании их
пространственной структуры основной вклад вносят слабые нековалентные
взаимодействия. В надмолекулярных комплексах молекулы также
удерживаются вместе с помощью нековалентных сил нескольких типов:
1. Электростатическое притяжение разноименно заряженных групп
2. Водородные связи между полярными группами (Х-Н) и донорами электронной
пары (:Y) Х-Н……Y, где Х и Y – это атомы O, N и другие электроотрицательные
элементы.
3. Ван-дер-Ваальсовы силы, обусловленные притяжением постоянных,
наведенных или виртуальных диполей.
4. Гидрофобные взаимодействия (между неполярными группами в водной
среде).
Таким образом, биохимическая роль нековалентных взаимодействий в клетке
сводится к следующему:
- в пределах каждой биомакромолекулы поддерживается ее сложная
пространственная структура;
- стабилизируется надмолекулярная организация биополимеров;
- обеспечивается образование нековалентных комплексов биомолекул с
различными лигандами (например, в процессах молекулярного узнавания).
4
1.3. Химическая эволюция
Под термином химическая эволюция понимают возникновение
органических веществ из неорганических предшественников под воздействием
энергии и их дальнейшее развитие. Поскольку у всех видов организмов
макромолекулы образуются одним и тем же способом всего лишь из нескольких
десятков молекул, играющих роль строительных блоков, была выдвинута
гипотеза о том, что все живые организмы произошли от одной первичной линии
клеток. Согласно этому предположению, первые возникшие на Земле и
выжившие клетки были построены из ограниченного числа органических
молекул, обладающих такими необходимыми физико-химическими свойствами,
которые позволили им функционировать в качестве мономеров для построения
биополимеров. Такой набор первичных биомолекул, по-видимому, сохранялся в
ходе биологической эволюции в течение миллиардов лет. Однако, органические
вещества, в том числе биомолекулы, в земной коре, океанах и атмосфере
найдены в следовых количествах.
Каким образом возникли органические соединения, используемые в
качестве строительных блоков в биополимерах? Хотя эта проблема издавна
волнует многих исследователей, их мнения на этот счёт сильно различаются. Об
условиях на Земле того времени известно немногое: 4 миллиарда лет назад
атмосфера не содержала свободного кислорода, он находился только в составе
окислов. О существующих тогда химических условиях могли бы
свидетельствовать горные породы, но они давно разрушились в результате
геологических процессов и перемещений земной коры.
По одной из гипотез, простые органические вещества возникли в результате
мощных атмосферных воздействий (электрических разрядов, α- и β-частиц,
вулканических извержений, видимого и УФ-света, рентгеновских лучей,
ультразвука). Как считал известный специалист в области проблемы
возникновения жизни С. Миллер, о возникновении жизни и начале её эволюции
можно говорить с того момента, как органические молекулы
самоорганизовывались в структуры, которые смогли воспроизводить самих себя.
Но это порождает другие вопросы: как возникли молекулы; почему они могли
самовоспроизводиться и собираться в те структуры, которые дали начало живым
организмам; какие нужны для этого условия?
В 1924 году русским биохимиком, академиком А.И. Опариным, а позднее, в
1929 году, Дж. Холдейном была высказана гипотеза о возникновении жизни как
результате длительной эволюции углеродных соединений, которая легла в
5
основу современных представлений. А.И. Опарин исходил из того, что
возникновение живых существ из неживой природы невозможно в современных
условиях. Абиогенное возникновение живой материи, возможно, было только в
условиях древней атмосферы. Большинство исследователей сходятся на том, что
в процессе образования атмосферы участвовали реакции, сформировавшие
многочисленные газообразные соединения. Основными из них являются
гидриды (метан, аммиак, вода газообразная), а также водород и некоторые
другие газы, но при полном отсутствии газообразного кислорода.

Образование первичных органических соединений

Впервые получить органические молекулы – аминокислоты и другие в
лабораторных условиях, моделирующих те, что были на первобытной Земле,
удалось С. Миллеру в 1953 году (рис. 1). В то время эти эксперименты стали
сенсацией, а их автор получил всемирную известность. Классический опыт
Стенли Миллера заключался в следующем: на протяжении недели или более он
пропускал электрические разряды при напряжении 100 тыс. В между двумя
электродами (имитация грозовых разрядов) через смесь газов, подобную
существовавшей в первобытной атмосфере Земли (СН4, NH3, H2, H2O).
Электрический разряд по своей силе приближался к молнии, и Миллер ожидал,
что под его действием образуются химические соединения, которые, попав затем
в воду, прореагируют друг с другом и образуют более сложные молекулы.
Результат опыта С. Миллера
превзошёл все ожидания: при
анализе полученной из
реакционного сосуда газовой
смеси были обнаружены CO,
CO2 и исходные газы. Водная
фаза содержала целый ряд
органических соединений, в
том числе аминокислоты,
гидроксикислоты, альдегиды и
циановодород.

Рисунок 1. Опыт С. Миллера (1953 г.)

6
Эксперименты, подтверждающие абиогенное возникновение органических
соединений были продожены другими исследователями, в результате чего было
убедительно показано, что:
- образование простых органических молекул активируется под действием
самых разных форм энергии и излучения (тепла, видимого и УФ-света,
рентгеновских лучей, ультразвука, электрических разрядов, α- и β-частиц);
- среди образующихся продуктов присутствуют 4 основных класса молекул-
строительных блоков биомолекул (аминокислоты, нуклеотиды, сахара, жирные
кислоты).
Таким образом было доказано абиотическое происхождение органических
веществ, получившее впоследствии название химическая эволюция.

1.4. Биологическая эволюция (эволюция жизни на Земле)

Переход от химической к биологической эволюции
В настоящее время существует несколько научных определений жизни, но
все они неточны. Одно из наиболее удачных определяет жизнь как
самоподдерживающуюся химическую систему, способную вести себя в
соответствии с законами дарвиновской эволюции. Какие же элементы системы
были необходимы, чтобы у неё появились характеристики живого организма?
Большое число биохимиков и молекулярных биологов считают, что
необходимыми свойствами обладали молекулы РНК, которые могут
реплицироваться, мутировать, таким образом, передавая информацию, и,
следовательно, могли участвовать в естественном отборе. Они не способны сами
катализировать процесс репликации, хотя возможно, будет найден фрагмент
РНК с такой функцией. м-РНК задействованы в "считывании" генетической
информации и передаче её на рибосомы, где происходит синтез белковых
молекул, в котором принимают участие молекулы т-РНК.
Вероятно, самая примитивная живая система могла быть представлена
молекулами РНК. В ходе эволюции на основе РНК могли возникнуть
специализированные молекулы ДНК - хранители генетической информации и не
менее специализированные молекулы белка, взявшие на себя функции
катализаторов синтеза всех известных в настоящее время биологических
молекул. В некий момент времени примитивная «живая система» из ДНК, РНК
и белка могла самоорганизоваться внутри везикулы, образованной липидной
мембраной, и эта более защищённая от внешних воздействий структура
послужила прототипом самых первых клеток, давших начало трём основным
ветвям жизни, которые представлены в современном мире бактериями, археями
7
и эукариотами. Что касается времени и последовательности данных событий –
до настоящего времени это остаётся спекулятивной гипотезой и нерешенной
научной проблемой. Кроме того, по простым вероятностным оценкам для
эволюционного перехода от органических молекул к первым организмам не
хватает времени – первые простейшие организмы появились слишком внезапно.
Полагают также, что жизнь вряд ли могла возникнуть и развиваться в тот период,
когда Земля постоянно подвергалась столкновениям с большими кометами и
метеоритами, а завершился этот период более миллиарда лет тому назад.

Биологическая эволюция (эволюция жизни на Земле)

В настоящее время, да, наверное, и в будущем, наука не сможет дать ответ
на вопрос, как выглядел самый первый живой организм, появившийся на Земле
– предок, от которого берут начало три основные ветви древа жизни.
Существуют три царства живых организмов (рис. 2). Одна из ветвей
филогенетического древа – эукариоты, их клетки имеют оформленное ядро,
содержащее генетический материал, и специализированные органеллы. К
эукариотам относятся водоросли, грибы, растения, животные и человек.

Рисунок 2. Филогенетическое древо живых организмов

Вторая ветвь – это бактерии, прокариоты (доядерные) – одноклеточные

организмы, не имеющие выраженного ядра и органелл. Третья ветвь -
одноклеточные организмы, именуемые археями (архебактериями), клетки
которых имеют такое же строение, как и у прокариот, а также некоторые
признаки сходства с эукариотами.
8
Рассмотрим основные этапы биологической эволюции на Земле (рис. 3):
4 млрд. лет назад неким недоказанным до сих пор образом возникла молекула
РНК. Возможно, что она образовалась из появившихся на первобытной Земле
более простых органических молекул. Полагают, что древние молекулы РНК
имели функции носителей генетической информации и белков-катализаторов,
они были способны к репликации (самоудвоению), мутировали и подвергались
естественному отбору. В современных клетках молекулы РНК не имеют или не
проявляют этих свойств.
3.5 млрд. лет назад появились одноклеточные прокариотические организмы,
которые, вероятно, были устроены как современные бактерии и археи.

Рисунок 3. Хронология биологической эволюции на Земле

1.5 млрд. лет назад появились первые сложноорганизованные клетки

эукариотов, когда одноклеточные организмы усложнили своё строение за счёт
поглощения отдельных прокариотических клеток путем симбиоза. Так, аэробные
бактерии трансформировались в митохондрии, фотосинтетические бактерии
начали осуществлять фотосинтез внутри клетки-хозяина и стали хлоропластами
в клетках водорослей и растений. Исследования ископаемых останков
организмов в породах разного геологического возраста показали, что на
протяжении сотен миллионов лет после возникновения эукариотные формы
жизни были представлены микроскопическими шаровидными одноклеточными

9
организмами, такими как дрожжи, а их эволюционное развитие протекало очень
медленными темпами.
1.2 млрд. лет назад произошёл новый всплеск эволюции, обусловленный
появлением полового размножения и ознаменовавшийся появлением огромного
множества новых видов эукариот, в т.ч., высокоорганизованных форм жизни –
растений и животных. Эукариотические клетки, имеющие эти органеллы и чётко
обособленное ядро, включающее генетический материал, составляют основу
всех современных сложных форм жизни – от плесневых грибов до человека.
Таким образом, три четверти всего времени существования жизни на Земле она
была представлена исключительно микроорганизмами, пока не произошёл
качественный скачок эволюции, приведший к появлению
высокоорганизованных организмов, включая человека.
Краткие выводы из раздела:
- Живая материя обладает рядом характерных особенностей.
- Основные классы биомолекул в клетке представлены очень крупными
молекулами-биополимерами (белки, НК, липиды, полисахариды).
- Нековалентные взаимодействия играют важную роль в функционировании
биомолекул в клетке (поддержание структуры биомолекул и надмолекулярных
комплексов, молекулярное узнавание и др.).
- Органические молекулы возникли благодаря химической эволюции, феномен
которой был доказан в лабораторных условиях.
- Существует целый ряд теорий возникновения живых организмов (жизни) на
Земле, однако все эти гипотезы являются спекулятивными (экспериментально не
доказан переход от органических молекул к живым клеткам!)
- В результате биологической эволюции на Земле сформировалось огромное
многообразие форм жизни (прокариоты, эукариоты, археи).

Вопросы для текущего контроля знаний студентов по разделу 1:

1) Какие особенности присущи живой материи?
2) Что такое биомакромолекулы?
3) Какую роль играют нековалентные взаимодействия в клетках?
3) Дайте определение химической эволюции
4) Продолжается ли химическая эволюция в настоящее время?
5) Как произошел переход от органических молекул к возникновению живых
организмов?
6) Гипотезы и доказательства возникновения жизни на Земле?
7) Классификация живых организмов.
10
2. Строение клетки
Клетки являются структурными и функциональными единицами всех
живых организмов. Самые маленькие одноклеточные организмы содержат всего
одну клетку. Более крупные, многоклеточные организмы состоят из множества
различных типов клеток, отличающихся по размеру, форме и специфическим
функциям. Несмотря на все разнообразие живых организмов нашей планеты, все
клетки как простейших, так и наиболее сложных организмов имеют общие
фундаментальные свойства, которые можно исследовать на биохимическом
уровне.
Клетки разделяют на две большие группы: прокариоты и эукариоты.
Прокариоты (лат. Procaryota, от др.-греч. πρо «перед» и καρυον «ядро»), или
доядерные – это одноклеточные живые организмы, не обладающие (в отличие от
эукариот) оформленным клеточным ядром и другими внутренними
мембранными органеллами (за исключением плоских цистерн у
фотосинтезирующих видов, например, у цианобактерий). К прокариотам относят
археи и бактерии.
Эукариоты (лат. Eukaryota от др.-греч. εὖ- «хорошо» + καρυον «ядро») или
ядерные – это домен (надцарство) живых организмов, клетки которых содержат
оформленное ядро.
Вирусы и вироиды представляют отдельную группу, их не относят ни к
прокариотам, ни к эукариотам; более того, сам вопрос, считать ли их живыми
организмами, остается дискуссионным.
Размеры клеток лимитированы диффузией кислорода. Диаметр клеток
животных и растений составляет от 5 до 100 мкм, а размеры большинства
одноклеточных микроорганизмов не превышают 1 - 2 мкм. Нижний предел
размеров клетки, по-видимому, задается минимальным количеством
необходимых клетке биомолекул разных типов. Верхний предел размера клетки,
вероятно, определяется скоростью диффузии растворенных веществ в водной
среде. По мере увеличения размеров клетки снижается отношение площади
поверхности клетки к ее объему, и потребление кислорода в реакциях
метаболизма увеличивается быстрее, чем количество О2, поступающее в клетку
в результате диффузии. В результате, начиная с определенного размера клеток,
метаболизм с участием О2 становится невозможным, что и определяет значение
верхнего предела размера клетки.

11
2.1. Строение прокариотической клетки
Прокариоты являются наиболее просто устроенными мельчайшими
клетками и имеют самое древнее происхождение. К ним относятся более 3000
видов бактерий и сине-зеленые водоросли (цианобактерии). По биохимическим
свойствам различают 2 большие группы одноклеточных микроорганизмов –
бактерии и археи (рис. 2). Бактерии населяют почву, водоемы, ткани живых или
разлагающихся организмов. Археи, выделенные в отдельный домен в 1980-х
годах, обитают в экстремальных природных условиях: соленых озерах, горячих
источниках, болотах, глубинах океанов. Полагают, что археи и бактерии
выделились в отдельные ветви на ранних этапах эволюции.
Бактерии классифицируют по их внешнему виду (например, бациллы –
палочкообразные, кокки – шарообразные, спирохеты – спиралевидные
микроорганизмы), по способности к передвижению, окрашиванию
(грамположительные и грамотрицательные), по потреблению веществ и синтезу
продуктов. Всего существуют 20 различных семейств прокариот. Некоторые
бактерии обладают патогенными свойствами.

Рисунок 4. Строение прокариотической клетки

Отдельных органелл у бактерий нет (рис. 4), в цитоплазме расположено

ядерное тельце – нуклеоид, содержащее одну молекулу двухцепочечной
кольцевой молекулы ДНК, помимо которой у большинства бактерий в клетках
еще присутствуют мелкие кольцевые фрагменты ДНК – плазмиды. В цитоплазме
находятся рибосомы, а также гранулы, содержащие запасенные питательные
вещества (крахмал или жиры). Цитозоль – водная фаза цитоплазмы содержит
ферменты и различные метаболиты, здесь протекают все биохимические
12
реакции. Клетки некоторых видов прокариот имеют тенденцию объединяться в
группы или располагаться в виде нитей.
В целом прокариоты играют важную роль в биологических превращениях
материи и энергии на Земле: бактерии играют роль отправной точки для многих
пищевых цепей в биосфере (например, фотосинтезирующие и
нитрифицирующие бактерии), а также выполняют функцию конечных
потребителей путем расщепления органических веществ в мертвых растениях и
животных, возвращая тем самым конечные продукты распада в атмосферу,
почву и моря, где они вновь вовлекаются в биогеохимические циклы углерода,
азота, кислорода, серы и других элементов. Клетки микроорганизмов также
представляют большую ценность для исследований в области биохимии и
молекулярной биологии, а также использования в биотехнологиях в качестве
продуцентов органических продуктов. Строение прокариот является несложным
по своей структуре, их можно легко и быстро выращивать в больших
количествах, а механизмы репродукции и передачи генетической информации у
них относительно просты.

2.2. Строение эукариотической клетки

Типичные эукариотические клетки имеют большие размеры, чем
прокариотические (20 - 30 мкм против 1 - 2 мкм), поскольку их внутреннее
строение гораздо сложнее, чем у прокариот (рис. 5).

Рисунок 5. Строение эукариотической клетки (животная и растительная клетки)

13
Эукариотические клетки разделяют на две большие группы: 1) животные клетки
и 2) растительные клетки. Все многоклеточные организмы состоят только из
эукариотических клеток.
Органеллы – это основные составляющие эукариотической клетки. С
химической точки зрения разделение клетки на отдельные отсеки (органеллы)
исключительно выгодно для координированного и эффективного осуществления
биохимических реакций.
Самым главным отличием эукариотической клетки от прокариотической
является наличие четко оформленного ядра. Ядро клетки выполняет функции
защиты, хранения и обработки генетической информации, заложенной в цепях
ДНК, находящихся внутри ядра в виде хромосом. Ядро окружено ядерной
оболочкой, которая состоит из двух мембран, наружной и внутренней,
разделенных промежутком, называемым перинуклеарным пространством (рис.
5, 6). В некоторых местах эти мембраны сливаются воедино, образуя ядерные
поры (диаметр около 90 нм), через них происходит обмен веществами с
цитоплазмой клетки. Полагают, что поры позволяют комплексам мРНК-белок
переходить из ядра в цитоплазму, а регуляторным белкам перемещаться в
обратном направлении, из цитоплазмы в ядро. Внутри ядра находится ядрышко
(рис. 6 А), в котором происходит синтез РНК и осуществляются первые этапы
синтеза рибосом, состоящих из рибосомальной РНК.

Рисунок 6. А) Электронная микрофотография ядра клетки.

Б) Поверхность ядерной оболочки с различимыми ядерными порами

В остальной части ядра находится хроматин, включающий в себя ДНК, РНК

и ряд специфических белков. Непосредственно перед делением клетки хроматин
собирается в гранулярные тела – хромосомы, которые удваиваются и в равных
количествах переходят в дочерние клетки (если у организма 46 хромосом в
клетке, то после удвоения и деления в каждой дочерней клетке оказывается
также по 46 хромосом). После завершения деления исходной клетки и
образования двух дочерних хромосомы равномерно распределяются по ядру и
вновь образуют хроматин. Процесс деления соматической клетки называют
митозом. Схематически основные этапы митоза в клетке представлены на рис.7.
14
Соматическими клетками являются все клетки организма, кроме половых.

А. Профаза: период между клеточными Б. Метафаза: начало деления клетки.

делениями. Хроматин равномерно Центриоли образуют полюса, куда
распределен по всему ядру. притягивается хроматин, образуя аппарат
веретена.

В. Анафаза: хромосомы расходятся к Г. Телофаза: образуются два дочерних

противоположным полюсам. Каждая ядра, их ядерные оболочки и ядрышки.
дочерняя клетка получает одинаковый Хроматин распределяется по всему ядру
набор хромосом. и начинается деление материнской
клетки на две дочерние.

Рисунок 7. Основные этапы митоза в клетке

Основной функцией митохондрий является снабжение клетки энергией.

Митохондрии – это своеобразные энергетические станции клетки,
специализированные на образовании АТФ (аденозинтрифосфата). В этих
органеллах осуществляются окислительные превращения субстратов,
завершающиеся образованием ATФ. В одной клетке может содержаться от
нескольких десятков до нескольких тысяч митохондрий. Они сильно отличаются
по размерам и очертанию. Чаще всего митохондрии имеют вид нитей или гранул
(по-гречески митос – нить, а хондрион – гранула).

15
 Митохондрия имеет две мембранные системы (рис. 8). Внешняя мембрана
отделяет эту органеллу от цитоплазмы, а внутренняя мембрана образует складки
в виде перегородок, называемых кристами, и содержит ферменты,
участвующие в транспорте
электронов и синтезе АТФ.
Внутренне пространство
митохондрий называется
матриксом, в нем протекают многие
метаболические процессы.
Межмембранное пространство
также содержит специфические
компоненты, отличающие его по
Рисунок 8. Строение митохондрии составу от цитоплазмы.

В процессах окисления органических субстратов выделяется большое

количество энергии, которую митохондрии запасают в виде АТФ. Молекулы
АТФ диффундируют во все части клетки и используются для совершения
химических превращений (реакций биосинтеза) и механической работы. В
митохондриях также содержится небольшое количество собственной ДНК и
РНК, которые кодируют белки внутренней и внешней мембран этой органеллы.
ЭПР представляет собой непрерывную систему мембран, имеющих
ультрамикроскопическое строение (диаметр трубочек 25 - 75 нм). ЭПР
разделяют на шероховатый (гранулярный) и гладкий (агранулярный) (рис. 9). В
целом, ЭПР – это сложная сеть цистерн и трубочек, которая занимает
значительную часть внутреннего объема клетки. На мембранах шероховатого
ЭПР расположены рибосомы, и он служит местом биосинтеза белков, которые
затем транспортируются в виде мембранных пузырьков к месту их
функционирования. Пространства внутри ЭПР называются цистернами и
используются либо как каналы выведения синтезированных белков, либо в
качестве хранилищ запасенных веществ. В гладком ЭПР осуществляется
биосинтез стеролов, происходит десатурация (образование двойных связей)
жирных кислот. Мембраны ЭПР выполняют и другую важную функцию – они
обезвреживают вещества, присутствие которых нарушает нормальную работу
клетки. Этот процесс называется детоксикацией. Эти процессы входят в
согласованную систему транспорта электронов, осуществляющегося при
участии белков-цитохромов.
К мембранам ЭПР примыкает так называемый аппарат Гольджи,
представляет собой сеть уплощенных мембранных структур (пузырьков и
цистерн), собранных в стопки (рис. 10). Фактически аппарат Гольджи состоит из
16
совокупности отдельных мембран, образующих цистерны. Аппарат Гольджи
выполняет в клетке узкоспециализированные, но весьма существенные задачи:
его функции связаны как с построением клеточных элементов, так и с их
деградацией. Основная его функция заключается в обеспечении процесса
созревания сложных белков – посттрансляционной модификации
гликопротеинов, синтезированных в ЭПР и предназначенных для секреции,
включения в плазматическую мембрану или доставки в лизосомы. Аппарат
Гольджи содержит ферменты гликозидазы и гликозилтрансферазы, которые
вступают в действие последовательно, по мере того как белок, подвергаемый
процессингу, перемещается от начала аппарата Гольджи (цис-область) до его
конца (транс-область). Таким образом, простые белки превращаются в сложные
– гликопротеины.

Рисунок 9. Эндоплазматический Рисунок 10. Аппарат Гольджи

ретикулум (ЭПР)

Лизосомы – это окруженные мембранами органеллы, содержащие набор

протеолитических и других ферментов-гидролаз, которые расщепляют белки,
нуклеиновые кислоты, полисахариды и другие соединения. Расщепление
макромолекул происходит путем их гидролиза до простейших молекул,
диффундирующих обратно в цитоплазму клетки.
Вещества, захваченные клеткой путем эндо- или фагоцитоза, которые
необходимо расщепить, доставляются в лизосомы с помощью везикул - фагосом.
Фагосомы – это короткоживущие внутриклеточные везикулы, образующиеся в
результате фагоцитоза – процесса поглощения, захвата крупных частиц,
комплексов, вплоть до целых клеток, например, клеток бактерий. Этот процесс
характерен только для клеток некоторых типов (амебы, макрофаги). После
транспорта фагосомы внутрь клетки она сливается с лизосомой, содержащей
ферменты деградации. В лизосомах происходит также расщепление
17
компонентов клетки в ходе их клеточного цикла. Содержащиеся в лизосомах
ферменты способны разрушать не только чужие вещества, но и саму клетку.
Если происходит гибель клетки, мембраны лизосом разрываются и запускают
процессы автолиза. В обычных же условиях лизосомальная мембрана надежно
защищает клетку от воздействия собственных активных ферментов.
Пероксисомы – это органеллы, которые содержат окислительные
ферменты, участвующие в деградации малых молекул, таких как аминокислоты,
ксантин, жирные кислоты. Их название связано с присутствием в них фермента
каталазы, которая разлагает перекиси, образующиеся в качестве продуктов
окисления.
Внутри клетки расположен цитоскелет, в состав которого входят
микротрубочки, микрофиламенты и микротрабекулярная сеть (рис. 11).
Функциями цитоскелета является поддержание объема и формы клетки и
внутриклеточный транспорт веществ.

Рисунок 11. Цитоскелет клетки

Кроме вышеперечисленных органелл в клетке присутствуют

надмолекулярные комплексы – рибосомы, на которых осуществляется синтез
первичной структуры ДНК; гранулярные тельца, к которым относят гранулы
гликогена (в клетках печени как вид запаса энергии уже для организма в целом);
различные биополимеры, метаболиты и другие макромолекулы.
Плазматическая мембрана образует границу, на которой осуществляется
контакт клетки с ее окружением. Она построена из фосфолипидного бислоя, в
который включены различные белковые молекулы. Бислой построен таким
образом, что его наружные стороны гидрофильны, а внутренняя область между
2-мя слоями липидов гидрофильна (рис. 12). Основными функциями
плазматической мембраны клетки являются защитная и транспортная - она

18
должна избирательно пропускать в клетку питательные вещества и
секретировать различные метаболиты. Кроме этого, она содержит компоненты,
участвующие в межклеточных контактах и взаимодействиях, в системах
гормонального ответа и транспорта как малых, так и больших молекул из клетки
и внутрь нее. Избирательность мембране обеспечивают включенные в нее белки
– рецепторы, отличающие одну клетку от другой. Плазматическая мембрана
неоднородна по своему составу и чрезвычайно эластична, благодаря чему
животные клетки могут довольно сильно изменять свою форму без разрыва
мембраны. Большинство растительных и бактериальных клеток, в отличие от
животных, не способно менять свою форму, так как они окружены толстой,
прочной и малоупругой оболочкой – клеточной стенкой.

Рисунок 12. Фрагмент плазматической мембраны

Особенности строения растительной клетки

Одной из отличительных особенностей клеток высших растений является
наличие у нее твердой клеточной стенки (рис. 13). Клеточная стенка – это
оболочка клетки, расположенная снаружи от цитоплазматической мембраны и
выполняющая структурные, защитные и транспортные функции.
Обнаруживается у большинства бактерий, архей, грибов и растений. Животные
и многие простейшие не имеют клеточной стенки. Клеточная стенка состоит из
целлюлозных волокон, «склеенных» между собой сложными полимерными
участками. Вода и небольшие молекулы свободно проходят через поры в
клеточной стенке. Она предохраняет клетку от набухания и растяжения. В

19
одеревеневших частях деревьев первичные клеточные стенки окружены
толстыми прочными внешними или вторичными стенками.

Рисунок 13. Схематическое строение клеточной стенки у растений

Хлоропласты – это органеллы, содержащие фотосинтетический аппарат

(рис 14). Они имеют наружную оболочку, образуемую двумя мембранами, и
внутреннюю область – строму. В строме находятся тилакоидные мембраны, где
локализованы компоненты системы фотосинтеза.
Подобно митохондриям они отвечают за снабжение клетки энергией.
Хлоропласты поглощают кванты света и используют эту энергию для
восстановления двуокиси углерода с образованием углеводов. Процесс также
сопровождается высвобождением молекулярного кислорода О2. Хлоропласты
значительно крупнее митохондрий и могут иметь самую разнообразную
структуру. Также как и митохондрии, они содержат собственные молекулы ДНК,
РНК и рибосомы.

Рисунок 14. Строение хлоропласта растительной клетки

Вакуоли. Значительное место в растительной клетке занимают пузырьки,

окруженные одиночной мембраной – вакуоли (рис. 5). Они заполнены
клеточным соком и продуктами метаболизма клетки. По мере старения клетки
вакуоли растут в размере и могут занимать большую часть системы.

20
2.3. Особенности строения и функционирования вирусов
Вирусы не относят к живым организмам, т.к. они не обладают клеточным
строением и не способны к самовоспроизведению вне клетки-хозяина. Их стоит
рассматривать как надмолекулярные комплексы, которые содержат
нуклеиновую кислоту (ДНК или РНК), окруженную капсидом – защитной
белковой оболочкой (рис. 15). Диаметр вирусных частиц (вирионов) равен 20-
300 нм. Вирусы существуют в двух состояниях: вне клетки хозяина они
представляют собой неживые частицы, которые имеют правильную форму,
постоянный химический состав и определенные размеры; после проникновения
в клетку-хозяина вирусы становятся клеточными паразитами. Вирус подчиняет
себе весь биохимический аппарат клетки-хозяина, нарушая ее нормальное
функционирование, и переключает ферменты и рибосомы клетки на создание
дочерних вирусных частиц. Вирусы заражают животные, растительные и
бактериальные клетки (вирусы - бактериофаги).
ДНК-содержащие вирусы несут в качестве генетического материала одно-
или двухцепочечную молекулу ДНК, которая может быть как линейной, так и
кольцевой. В ДНК закодирована информация обо всех белках вируса
Существует множество вариантов строения
ДНК-содержащих вирусов: от просто
покрытой белком (капсидом) ДНК до
сложных макромолекулярных комплексов,
окруженных мембранными структурами
(например, крупные вирусы оспы, гриппа и
другие).

Рисунок 15. Схема строения вируса

Этапы размножения ДНК-вируса в клетке:

1) Адсорбция вируса на поверхности клетки-хозяина – это первый этап
инфицирования, который происходит на специфических рецепторных
участках плазматической мембраны, которые узнаются специальными
белками вируса и к которым вирусная частица прочно прикрепляется
благодаря белок-белковым взаимодействиям.
2) Проникновение вирусной ДНК в клетку-хозяина – это слияние наружного
слоя вириона с клеточной мембраной эукариот или «впрыскивание» ДНК
вируса в клетки бактерий.

21
3) Репликация, транскрипция и трансляция генетического материала вируса
осуществляется с участием ферментов клетки-хозяина. Сначала вирусная
ДНК копируется РНК-полимеразами клетки-хозяина, в результате чего
образуется мРНК, которая затем транслируется на рибосомах клетки-хозяина
для биосинтеза вирусных белков (эти белки используются затем для
построения капсидов, связывания с вирусной ДНК и в качестве ферментов).
Часть молекул вирусной ДНК реплицируется (удваивается), и эти копии ДНК
используются для сборки дочерних вирусных частиц.
4) Сборка вируса из его компонентов может происходить спонтанно
(самосборка) или зависит от участия вспомогательных белков: вирусная ДНК
покрывается слоем белка – капсидом. Капсид у крупных вирусов может
заключаться в мембранную структуру, получаемую от клетки-хозяина.
РНК-содержащие вирусы не содержат ДНК; генетическая информация в
них закодирована в молекулах РНК. РНК может быть одно- или двухцепочечной.
При заражении клетки РНК-содержащим вирусом вновь синтезированная
вирусная ДНК остается внутри клетки-хозяина, подчиняя себе весь спектр
жизнедеятельности клетки. Такие вирусы называют ретровирусами. Примерами
могут служить вирус герпеса и ВИЧ.

Вопросы для текущего контроля знаний студентов по разделу 2:

1. Из клеток какого типа состоят многоклеточные организмы?
2. Какие органеллы отличают растительную клетку от животной? Каковы их
функции?
3. Почему вирусы не относят к живым организмам?
4. Что такое цианобактерии?
5. Какие фазы деления соматических клеток вы знаете? Опишите их.
6. Отличия между прокариотами и эукариотами.
7. Почему растения зеленые?
8. В какую фазу деления клетки можно наблюдать хромосомы?

22
3. Пептиды и белки
Белки или протеины (от греч. «proteos» – первейший, лежащий в основе),
представляют собой биополимеры, состоящие из остатков
α-аминокарбоновых (аминокислот) кислот, соединенных пептидными связями.
Пептиды, полипептиды и белки имеют одинаковое строение, отличаясь лишь
размерами и молекулярной массой. Вещества, содержащие от 3 до 30
аминокислотных остатков, называются пептидами; имеющие более 30
аминокислотных остатков, но массу менее 6 - 12 кД, относятся к полипептидам;
большие по размеру и массе молекулы считаются белками. В количественном
отношении белки занимают первое место среди всех содержащихся в живой
клетке макромолекул, велико также и разнообразие белков – в одной клетке
может содержаться до нескольких сотен различных видов этих макромолекул.
Белки выполняют многообразные биологические функции, т.к. они служат
молекулярными инструментами, с помощью которых генетическая информация
в клетке находит свое реальное воплощение.

3.1. Структура, классификация и физико-химические свойства

аминокислот
3.1.1. Общие структурные свойства аминокислот

В состав природных белков входят 20 разных аминокислот (а.к.) –

органических молекул, имеющих в своем составе одновременно амино- и
карбоксильную функциональные группы (рис. 16). Различаются а.к. только
боковыми цепями (R-группами), которые у разных а.к. неодинаковы по
структуре, заряду и растворимости в воде (табл. 1).

Рисунок 16. Общая структурная формула α-аминокислот

Природные аминокислоты – это 20 а.к., из которых построены белки, они

называются стандартными, основными или нормальными аминокислотами, в
23
отличие от тех а.к., которые присутствуют в клетках, но очень редко или вообще
не встречающихся в белках. Среди «нестандартных» а.к. следует упомянуть 4-
гидроксипролин и 5-гидроксилизин, которые входят в состав фибриллярного
белка коллагена. Первая аминокислота – аспарагин была открыта в 1806 г.,
последняя – треонин в 1938 г. Каждая а.к. имеет тривиальное название, которое
часто связано с природным источником ее выделения. Стандартные а.к. имеют
трехбуквенные и однобуквенные условные обозначения (табл.1), которые
используются для сокращенной записи аминокислотного состава и
последовательностей а.к. в полипептидных цепях.

Таблица 1. Стандартные аминокислоты, входящие в состав белков

Структурная Структурная
Аминокислота Аминокислота
формула формула

Глицин (Gly, G) Валин (Val, V)

Лейцин
Аланин (Ala, A)
(Leu, L)

Изолейцин (Ile, I) Серин (Ser, S)

Треонин
Пролин (Pro, P)
(Thr,T)

Метионин
Цистеин (Cys, C)
(Met, M)

24
Аспарагиновая Аспарагин
кислота (Asp, D) (Asn, N)

Глутаминовая Глутамин
кислота (Glu, E) (Gln, Q)

Аргинин
Лизин (Lys, K)
(Arg, R)

Фенилаланин
Гистидин (His, H)
(Phe, F)

Триптофан
Тирозин (Tyr, Y)
(Trp, W)

3.1.2. Классификация аминокислот

В настоящее время единой классификации аминокислот не существует.

Аминокислоты делят на природные (содержатся в растительных и животных
организмах) и синтетические – получены искусственным путем.
В основу классификации могут быть положены и другие критерии:
а) По способности боковых радикалов к взаимодействию с Н2О:

25
- неполярные (гидрофобные) – плохо растворимые в воде (глицин, аланин, валин,
изолейцин, лейцин, пролин);
- полярные (гидрофильные) незаряженные – хорошо растворимые в воде (серин,
треонин, цистеин, метионин, аспарагин, глутамин);
- полярные отрицательно заряженные при pH=7 (аспартат, глутамат);
- полярные положительно заряженные при pH=7 (лизин, аргинин, гистидин).

б) По функциональной принадлежности заместителей:

- алифатические монокарбоновые кислоты: глицин, аланин, валин, лейцин,
изолейцин;
- алифатические оксиаминокислоты: серин, треонин;
- серосодержащие: цистеин, метионин;
- моноаминодикарбоновые: аспарагиновая и глутаминовая кислоты;
- амиды моноаминодикарбоновых: аспарагин, глутамин.
- диаминомонокарбоновые: лизин, аргинин;
- ароматические: фенилаланин, тирозин;
- гетероциклические: гистидин, триптофан;
- иминокислота: пролин.

в) По биологическому и физиологическому значению:

- незаменимые – не могут синтезироваться организмом из других соединений и
целиком поступают с пищей (валин, лейцин, изолейцин, треонин, метионин,
лизин, фенилаланин, триптофан);
- полузаменимые – образуются в недостаточном количестве в организме,
частично поступают с пищей (аргинин, тирозин, гистидин);
- заменимые – синтезируются в организме (все остальные).

Физико-химические свойства аминокислот

Аминокислоты – это твердые кристаллические вещества с высокой
температурой плавления (примерно 200°С), при плавлении разлагаются. Хорошо
растворимы в воде, водные растворы электропроводны. Эти свойства
объясняются тем, что молекулы аминокислот существуют в виде внутренних
солей, которые образуются за счет переноса протона от карбоксильной к
аминогруппе. Аминокислоты малорастворимы в органических растворителях.

26
Цвиттер-ионная структура. Присутствие в молекулах аминокислот
функциональных групп кислотного (СООН) и основного (NH2) характера
обусловливает амфотерность этих соединений. В водном растворе
алифатические аминокислоты существуют в виде равновесной смеси
биполярного иона (его называют цвиттер-ионом), катионной и анионной
формы. Положение равновесия зависит от рН среды и строения аминокислоты:
главным образом, от наличия в составе молекулы дополнительных кислотных
или основных центров. Значение рН, при котором концентрация биполярных
ионов максимальна, а катионная и анионная формы находятся в равных и
минимальных концентрациях, называется изоэлектрической точкой (рI).
Каждая аминокислота имеет индивидуальное значение рI (табл. 2). В этой
точке суммарный заряд молекулы равен 0 и биполярные ионы не перемещаются
в электрическом поле. При рН ниже pI катион аминокислоты (аммониевая
форма) движется к катоду, а при рН выше pI анион аминокислоты (карбоксилат-
анион) перемещается к аноду. На этом свойстве основано разделение
аминокислот методом электрофореза.

Ароматические аминокислоты не образуют цвиттер-ионов, так как основность

их аминогруппы понижена из-за сопряжения с бензольным кольцом.

Таблица 2. Значения pI некоторых α-аминокислот

Кислота pI Кислота pI
Глицин 6.0 Цистеин 5.0
Аланин 6.0 Лизин 9.8
Валин 6.0 Аргинин 10.8
Фенилаланин 5.5 Аспарагиновая кислота 3.0
Серин 5.7 Глутаминовая кислота 3.2

Оптическая активность. Все природные α-аминокислоты, кроме глицина

(NH2  CH2  COOH), имеют асимметрический атом углерода (α-углеродный
атом), а некоторые из них – два хиральных центра, например, треонин. Таким
образом, все аминокислоты могут существовать в виде пары несовместимых в
пространстве зеркальных антиподов (энантиомеров).
27
За исходное соединение, с которым принято сравнивать строение
α-аминокислот, условно принимают D- и L-молочные кислоты, конфигурации
которых, в свою очередь, установлены по D- и L-глицериновым альдегидам.
H O
C COOH COOH
H OH H OH H NH2
CH2OH CH3 R
D-глицериновый D-молочная аминокислота
альдегид кислота D-ряда
H O
C COOH COOH
HO H HO H H2N H
CH2OH CH3 R
L-глицериновый L-молочная аминокислота
альдегид кислота L-ряда
Все превращения, которые осуществляются в этих рядах при переходе от
глицеринового альдегида к α-аминокислоте, выполняются в соответствии с
главным требованием  они не создают новых и не разрывают старых связей у
асимметрического центра.
Для определения конфигурации α-аминокислоты в качестве эталона часто
используют серин (иногда аланин). Конфигурации их также выведены из D- и L-
глицериновых альдегидов:

COOH COOH COOH COOH

H NH2 H2N H H NH2 H2N H
CH2OH CH2OH CH3 CH3
D-серин L-серин D-аланин L-аланин

Природные аминокислоты, входящие в состав белков, относятся только к L-

ряду. D-формы аминокислот встречаются сравнительно редко, они
синтезируются только микроорганизмами и называются «неприродными»
аминокислотами. Животными организмами D-аминокислоты не усваиваются.
Интересно отметить действие D- и L-аминокислот на вкусовые рецепторы:
большинство аминокислот L-ряда имеют сладкий вкус, а аминокислоты D-ряда
 горькие или безвкусные. Без участия ферментов самопроизвольный переход L-
изомеров в D-изомеры с образованием эквимолярной смеси (рацемическая
смесь) осуществляется в течение достаточно длительного промежутка времени.
28
 Химические свойства аминокислот
1) Амфотерность аминокислот
Аминокислоты проявляют свойства оснований за счет аминогруппы и
свойства кислот за счет карбоксильной группы, т.е. являются амфотерными
соединениями. Подобно любому амфотерному соединению, аминокислоты
образуют соли как при действии кислоты, так и при действии щелочи.
NaOH
R CH COONa R CH COONa
H2O
R CH COO +

NH3 OH NH2
+
NH3 HCl
натриевая
R CH COOH соль глицина
+ 
NH3 Cl
гидрохлорид глицина
Аминокислоты, будучи гетерофункциональными соединениями, должны
проявлять свойства как одной, так и другой функциональной группы.

2) Реакции карбоксильной группы

Образование внутрикомплексных солей: с катионами тяжелых металлов α-
аминокислоты образуют внутрикомплексные соли. Так, со
свежеприготовленным гидроксидом меди(II) α-аминокислоты образуют хорошо
кристаллизующиеся хелатные соли меди (II), окрашенные в синий цвет:
O O
NH2 C O NH2
C OH
CH2 + HO Cu OH + CH2 CH2 Cu CH2
H2O
H2N HO C H2N O C

O O
медная соль глицина

Образование сложных эфиров: так как реакция этерификации протекает в кислой

среде, сложные эфиры аминокислот образуются в виде солей по аминогруппе:
HCl
R CH COOH + R'OH R CH COOR' + H2O
+
NH2 NH3 Cl
Образовавшиеся эфиры не могут существовать в виде биполярных ионов,
поэтому, в отличие от исходных аминокислот, они растворяются в органических
растворителях и имеют более низкие температуры кипения. Это даёт
возможность разделить смесь эфиров аминокислот перегонкой.
29
Образование хлорангидридов: эту реакцию часто называют реакцией
«активации» карбоксильной группы. Хлорангидриды α-аминокислот получают
действием на аминокислоты тионилхлорида (SOCl2) или хлорида фосфора (V)
(PCl5). Полученные хлорангидриды неустойчивы и существуют только в виде
солей:
O
R CH COOH + PCl5 R CH C + POCl3
+ 
Cl
NH2 NH3 Cl
Поэтому реакцию обычно проводят, предварительно защитив аминогруппу
ацилированием.

Образование амидов аминокислот: такие амиды получают действием аммиака

или первичных аминов на хлорангидриды с защищённой аминогруппой. В
случае использования реакции с аминами получают замещённые по азоту амиды
аминокислот:
O O
H3C C NH CH C + R'NH2 H3C C NH CH C
O R Cl O R NH R'

Декарбоксилирование аминокислот: в лабораторных условиях эта реакция

протекает при нагревании аминокислоты с Ba(OH)2. В результате получается
первичный амин:
t0C, Ba(OH)2
R CH COOH R CH2 NH2 + BaCO3 + H2O

NH2

3) Реакции аминогруппы
Реакция ацилирования. Образование N-замещённых амидов: N-замещенные
амиды часто рассматривают как N-ацильные производные. Эта реакция была
отмечена ранее как реакция защиты аминогруппы, её можно рассматривать как
процесс ацилирования аминогруппы хлорангидридами или ангидридами кислот:

30
 O
R CH COOH + CH3 C R CH COOH
Cl
NH2 NH C CH3
O
N-ацильное производное
Алкилирование аминокислот: аминокислоты можно алкилировать по
аминогруппе галоидными алкилами (обычно иодистыми алкилами). Например,
алкилированием глицина можно получить метиламиноуксусную кислоту 
саркозин, которая в связанном виде содержится в некоторых белках.
CH3I
CH2 COOH CH2 COOH

NH2 NH
CH3
При избытке иодистого метила образуется четвертичная аммонийная соль:
3CH3I +
H2N CH2 COOH (H3C)3N CH2 COOH 


Действие азотистой кислоты (дезаминирование in vitro): реакция протекает так

же, как и при взаимодействии с азотистой кислотой алифатических первичных
аминов  выделяется азот, а аминогруппа замещается на гидроксильную группу:
CH2 COOH + HNO2 CH2 COOH + N2 + H 2 O
NH2 OH
глицин гликолевая кислота
Таким образом можно установить структурное родство аминокислот с
соответствующими оксикислотами. По объёму выделившегося азота определяют
количество α-аминокислоты, вступившей в реакцию (метод Ван-Слайка).

Взаимодействие с альдегидами: α-аминокислоты, подобно первичным аминам,

реагируют с альдегидами, образуя замещенные имины (основания Шиффа).
O
R CH COOH + CH3 C R CH COOH H2O
R CH COOH
H
NH2 NH CH CH3 N CH CH3
OH основание
карбиноламин Шиффа

31
При взаимодействии α-аминокислот с формальдегидом образуются
относительно устойчивые карбиноламины  N-метилольные производные,
свободная карбоксильная группа которых может быть оттитрована щелочью.
Формальдегид, взятый в избытке, способствует отщеплению протона от NH 3+
группы биполярного иона и легко соединяется со свободной
(непротонированной) аминогруппой, образуя устойчивое метилольное
производное.
H
R CH COOH + C O R CH COOH
H
NH2 NH CH2OH
N-метилольное
производное

Взаимодейстивие с динитрофторбензолом (ДНФБ): важной реакцией α-

аминогруппы является её реакция с
2,4-динитрофторбензолом (ДНФБ) в слабощелочном растворе, которую впервые
использовал Ф. Сенгер для количественного введения метки в аминогруппы
аминокислот и пептидов. Эта реакция протекает по механизму нуклеофильного
замещения.

OH
O2N F + NH2 CH COOH O2N NH CH COOH
HF
R R
O2N O2N
Продукт реакции окрашен в интенсивно желтый цвет. Эта реакция представляет
исключительную ценность для идентификации N-концевых аминокислот
полипептидных цепей.
Реакция Руэманна (нингидриновая реакция): -аминокислоты реагируют с
нингидрином, образуя сине-фиолетовый комплекс (пурпур Руэманна),
интенсивность окраски которого пропорциональна количеству аминокислоты:

32
3.2. Пептидная связь и ее особенности
Молекулы пептидов и белков (греч. «peptos» – питательный) построены из
двух и более остатков аминокислот, соединённых в цепь пептидными
(амидными) связями C(O)NH. Пептидная связь – это вид амидной связи,
возникающей при образовании пептидов и белков в результате взаимодействия
α-аминогруппы (—NH2) одной аминокислоты с α-карбоксильной группой (—
СООН) другой аминокислоты. Полипептиды образуются в результате реакции
конденсации, протекающей между аминогруппой одной кислоты и
карбоксильной группой другой:

Так, из двух аминокислот образуется дипептид и молекула воды (рис. 17).

O O O
H2N CH C OH H NH CH C OH H2N CH C NH CH COOH
H2O
R R' R R'
пептидная связь
Рисунок 17. Схема образования пептидной связи

Пептиды различаются по аминокислотному составу, количеству и порядку

соединения аминокислот. Аминокислотный остаток, находящийся на том конце
пептида, где имеется свободная α-аминогруппа, называется аминоконцевым (N-
концевым) остатком, а остаток на противоположном конце полипептидной цепи,
33
несущем свободную СООН-группу – карбоксиконцевым (С-концевым). При
названии полипептида к названию всех аминокислотных остатков, кроме
последнего, добавляют суффикс -ил, концевая аминокислота имеет окончание -
ин. Например, аланил-серил-триптофан или γ-глутаминил-цистеинил-глицин
(по-другому называемый глутатион). При изображении а.к. последовательности
пептида, полипептида или белка N-конец принято размещать слева, а С-конец
справа. Последовательность молекулы белка читают слева направо, начиная с N-
конца. При частичном гидролизе белков образуется огромное множество
различных пептидов. Эти сложные смеси можно разделять с помощью
ионообменной хроматографии или электрофореза либо сочетанием обоих этих
методов, т.к. при различных значениях рН пептиды обладают разными кислотно-
основными свойствами и неодинаковой полярностью.

Особенности пептидной связи

1) Пептидная связь имеет частично характер двойной связи.
Длина пептидной связи меньше, чем одинарной связи, она является жесткой
структурой, и вращение вокруг нее затруднено. Цепочка аминокислот способна
вращаться вокруг основной оси, что придает белкам различную конформацию
(пространственное расположение атомов).

Рисунок 18. Строение пептидной связи

Пептидная связь примерно на 10% короче обычной одинарной связи С—N

(рис. 18), она имеет характер «частично двойной» связи —C=N— Л. Полинг и Р.
Кори на основании экспериментальных данных рентгеноструктурного анализа
объяснили особую природу связи С—N «резонансом» между двумя формами
пептидной связи. Другими словами, в белках и пептидах связь С—N является
частично кратной из-за взаимодействия неподеленной пары электронов атома
азота с π-электронной системой карбонильной группы, что приводит к
затрудненному вращению вокруг связи С—N (барьер вращения 63 - 84
кДж/моль).

34
2) Копланарность пептидной связи: все атомы, входящие в пептидную группу,
находятся в одной плоскости, при этом атомы Н и О расположены по разные
стороны от пептидной связи (рис. 19).

Рисунок 19. Копланарность пептидной связи

3) Транс-расположение заместителей: в природных белках пептидная связь

имеет транс-конфигурацию, т.е. является транспланарной (рис. 18). В
напряженных циклических системах (циклопептиды, производные пролина), а
также при большом размере заместителей у атома азота в N-алкилированных
производных пептидная связь может существовать и в плоской цис-форме. Цис-
и транс-пептидные связи можно различить с помощью физических методов
(ИК-, ЯМР спектроскопии и др.). В белках пептидная связь практически всегда
имеет транс-конфигурацию.

4) Способность к образованию водородных связей.

Атомы кислорода водорода, входящие в пептидную группу, обладают
способностью образовывать водородные связи с атомами кислорода и водорода
других пептидных групп (рис. 20).

Рисунок 20. Водородные связи между СО- и NН-группами в полипептидной цепи

35
3.3. Биологически активные пептиды
Кроме пептидов, образующихся в результате частичного гидролиза молекул
белка, в живых организмах существует много пептидов в качестве
самостоятельных соединений. Многие свободные пептиды обладают высокой
биологической активностью, например, к пептидам или полипептидам относится
ряд гормонов. Гормоны служат химическими медиаторами, они синтезируются
в специализированных секреторных клетках эндокринных желез поджелудочной
железы, гипофиза и надпочечников; с током крови гормоны переносятся в другие
ткани или органы и регулируют их специфические функции. Гормон инсулин,
вырабатываемый -клетками поджелудочной железы, поступает с кровью в
другие органы, особенно в печень и мышцы, где связывается с находящимися на
поверхности клеток рецепторами и стимулирует способность этих клеток
использовать глюкозу в качестве метаболического топлива. Инсулин состоит из
двух полипептидных цепей, одна из которых содержит 30 а.к. остатков, а другая
21. К полипептидным гормонам относится также другой гормон поджелудочной
железы, глюкагон, действующий как антагонист инсулина; гормоны гипофиза
кортикотропин (39 а.к.), окситоцин (9 а.к.), вазопрессин (9 а.к.).
Особого упоминания заслуживают короткие пептиды – энкефалины (в
переводе – «находящиеся в голове»), синтезируемые в центральной нервной
системе. Связывание энкефалинов со специфическими рецепторами некоторых
клеток мозга приводит к аналгезии, т.е. ослаблению болевых ощущений.
Энкефалины, вырабатываемые самим организмом, связываются с теми же
участками мозга, что и морфин, героин и другие наркотические вещества.

Мет-энкефалин: Tyr—Gly—Gly—Phe—Met

К пептидам относится глутатион – биохимически важный активатор некоторых

ферментов, который защищает липиды от аутоокисления и является составной
частью системы транспорта аминокислот в отдельных тканях животных.
Существуют и вкусовые пептиды – это вещества со сладким или горьким вкусом.
К примеру, подсластитель Аспартам представляет собой метиловый эфир L-α-
аспартил-L-фенилаланина.

36
 Глутатион Аспартам

К пептидам относятся и некоторые высокотоксичные ядовитые вещества,

содержащиеся, к примеру, в грибах (аманитин), а также многие антибиотики,
которые можно рассматривать как некое «химическое оружие», производимое
одними микроорганизмами против других. Следует заметить, что все пептиды с
высокой биологической активностью состоят из аминокислот, которые сами по
себе являются совершенно нетоксичными соединениями. Следовательно,
биологическая активность и специфичность действия пептидов и полипептидов
полностью определяются последовательностью составляющих их
аминокислотных остатков.

3.4. Структурная организация белков

Белки – это высокомолекулярные соединения (биополимеры), состоящие из
мономерных звеньев α-аминокислот, соединенных между собой пептидными
(амидными) связями. Белки состоят из разных комбинаций 20-ти природных α-
аминокислот и выполняют различные функции (ферментативная, структурная,
защитная, регуляторная, транспортная, регуляторная, сигнальная, моторная). В
белках может содержаться до нескольких тысяч а.к. остатков. Термины «белок»
и «полипептид» иногда взаимозаменяемы, однако полипептидами называют
молекулы с молекулярной массой до 10 000 Да, а белками – еще более крупные
молекулы. Например, человеческий белок цитохром с состоит из 104 а.к. (М.м.
12 400), сывороточный альбумин – из 609 а.к. (М.м. 66 400), а гигантский белок
титин, входящий в состав мышц позвоночника, содержит 27 000 а.к. (М.м. 3
000 000).
Белки, состоящие только из аминокислотных остатков, называются
простыми белками. Белки, содержащие дополнительно другие компоненты
небелкового характера, носят название сложных белков. Неаминокислотную
часть сложного белка обычно называют его простетической группой. Сложные
белки классифицируют в зависимости от химической природы их
простетических групп (табл. 3). Так, липопротеины содержат липиды, в состав
гликопротеинов входят сахара, а металлопротеины имеют в своем составе атом
37
металла, например, Fe, Cu или Zn. Простетическая группа белка играет важную
роль при выполнении белком его биологической функции.

Таблица 3. Сложные белки

Класс белков Простетическая группа Пример
белка
Липопротеины Липиды β1-Липопротеин крови
Гликопротеины Углеводы Иммуноглобулин G
Фосфопротеины Фосфатные группы Казеин молока
Гемопротеины Гем (комплекс железа с Гемоглобин
протопорфирином)
Флавопротеины Флавиновые нуклеотиды Сукцинатдегидрогеназа
Железо Ферритин
Металлопротеины Цинк Алкогольдегидрогеназа
Кальций Кальмодулин
Молибден Нитрогеназа
Медь Пластоцианин

Принято выделять четыре уровня структурной организации белковой

молекулы: первичная, вторичная, третичная и четвертичная структура.
Рассмотрим особенности каждого из этих уровней.
Первичная структура белка – это аминокислотная последовательность
белка, т.е., состав и расположение а.к. в полипептидной цепи. Эту структуру
формируют ковалентные связи: пептидные связи между α-амино- и α-
карбоксильными группами аминокислот и дисульфидные мостики между
остатками цистеина. Установлено, что последовательность аминокислотных
остатков полипептидной цепи белка несёт в себе информацию, необходимую для
формирования пространственной структуры белка. Необходимо подчеркнуть,
что даже небольшие изменения первичной структуры белка могут значительно
изменять его свойства. Примером заболеваний, развивающихся в результате
изменения первичной структуры белка, являются гемоглобинопатии (например,
серповидно-клеточная анемия).
Вторичной структурой белка называют некоторые наиболее часто
встречающиеся способы укладки а.к. цепи, формирующие характерные
структурные элементы. При этом образуются водородные связи между СО- и
NH-группами пептидного остова одной цепи или смежных полипептидных
цепей. Укладка полипептидного остова в каждом белке не является случайной,
38
она определяется его первичной структурой и является неизменной и
специфичной для конкретного белка. Наиболее известными типами регулярной
упорядоченной вторичной структуры являются α-спираль и β-складчатый слой,
предсказанные и описанные Л. Полингом и Р. Кори в 1950-х годах. Если
регулярных структур в составе белка не обнаружено, то говорят о случайной
спирали. Таким образом, полипептидная цепь белка содержит определенное
число участков вторичной структуры (α, β), а также участки неупорядоченной
структуры.
α-Спираль – это жёсткая структура, имеет вид стержня. В этой структуре
полипептидный остов образует плотные витки вокруг длинной оси молекулы, а
радикалы аминокислот выступают из спирального остова наружу, при этом СО-
группа каждого аминокислотного остатка взаимодействует с NH-группой
последующего от него четвёртого а.к. остатка. На один виток спирали
приходится 3.6 аминокислотных остатков, шаг спирали составляет 0.54 нм (рис.
21). Во всех белках α-спираль закручена вправо.

Рисунок 21. Изображение α-спирали (слева) и β-складчатой структуры (справа)

Так, в белках α-кератинах преобладающей вторичной структурой является

α-спираль. Однако, не все полипептиды способны образовывать устойчивую α-
спираль - некоторые аминокислоты препятствуют свёртыванию цепи в α-
спираль, и в месте их расположения непрерывность спирали нарушается. К этим
аминокислотам относятся пролин (в нём атом азота входит в состав жёсткой
кольцевой структуры и вращение вокруг связи N – Сα становится невозможным),
а также аминокислоты с заряженными радикалами, которые электростатически
или механически препятствуют формированию α-спирали. Если в пределах
одного витка (примерно 4 а.к.) находятся два или более таких радикалов, они

39
взаимодействуют и деформируют спираль. Существует также понятие
сверхвторичной структуры – это ансамбли взаимодействующих между собой
вторичных структур. Примером может служить суперспирализованная система
– агрегация α-спиралей в белке α-кератине шерсти.
β-Складчатый слой или «складчатый лист» представляет собой ассоциат
вытянутых зигзагообразных пептидных цепей, стабилизированный
межцепочечными водородными СО- - -NH связями (рис 21). β-Структуры
образуются при помощи водородных связей в пределах одной или нескольких
полипептидных цепей. Пептидные цепи могут быть расположены в одном
направлении (параллельно) или в противоположных направлениях
(антипараллельно), напоминая складчатый лист, при этом боковые радикалы
находятся выше и ниже плоскости слоя.
Третичная структура белка – это распределение в пространстве всех
атомов белковой молекулы, или иначе говоря, пространственная упаковка
спирализованной полипептидной цепи. Полипептидная цепь, содержащая
определенное число участков вторичной структуры, обычно свертывается в
относительно компактную систему, в которой элементы вторичной структуры
взаимодействуют между собой и с участками неупорядоченной структуры.
Основную роль в образовании третичной структуры белка играют водородные,
ионные, гидрофобные и дисульфидные связи, которые образуются в результате
взаимодействия между радикалами аминокислот.
 Водородные связи образуются между двумя полярными незаряженными
радикалами или между незаряженным и заряженным радикалами,
например, радикалами серина и глутамина:

 Ионные связи могут возникать между противоположно заряженными

радикалами, например, радикалами глутамата и аргинина:

40
  Гидрофобные взаимодействия характерны для неполярных радикалов,
например, валина и лейцина:

 Дисульфидные связи образуются между SH-группами двух радикалов

цистеина, находящихся в разных участках полипептидной цепи:
.

Установлено, что каждой полипептидной последовательности

соответствует только один стабильный вариант пространственной структуры.
Процесс сворачивания полипептидной цепи в правильную трёхмерную
структуру получил название фолдинг. Ранее считалось, что формирование
пространственной структуры белка происходит самопроизвольно, без участия
каких-либо компонентов. Однако было показано, что это справедливо только для
сравнительно небольших белков (порядка 100 а.к.). В процессе фолдинга более
крупных белков принимают участие специальные белки - шапероны, которые
создают возможность быстрого формирования правильной пространственной
структуры белка. Шапероны взаимодействуют с частично свернутыми или
неправильно свернутыми полипептидными цепями и обеспечивают нормальный
фолдинг. К настоящему времени изучены 2 класса молекулярных шаперонов –
Hsp70 и шаперонины. Нарушение фолдинга белка могут быть причиной целого
ряда генетических заболеваний человека.
Для многих белков третичная структура эквивалентна пространственной
структуре белка. Каждый белок обладают своей уникальной пространственной
структурой. По форме молекулы и особенностям формирования третичной
структуры белки делят на глобулярные и фибриллярные. Глобулярные
41
белки имеют сферическую или эллипсовидную форму молекулы (глобула). В
процессе образования глобулы гидрофобные радикалы аминокислот
погружаются во внутренние области, гидрофильные радикалы располагаются на
поверхности молекулы. При взаимодействии с водной фазой полярные радикалы
образуют многочисленные водородные связи. Белки удерживаются в
растворённом состояния за счёт заряда и гидратной оболочки. В организме
глобулярные белки выполняют динамические функции (транспортную,
ферментативную, регуляторную, защитную). К глобулярным белкам относятся:
 Альбумин – белок плазмы крови; содержит много остатков глутамата и
аспартата; осаждается при 100%-ном насыщении раствора сульфатом
аммония.
 Глобулины – белки плазмы крови; по сравнению с альбумином обладают
большей молекулярной массой и содержат меньше остатков глутамата и
аспартата, осаждаются при 50%-ном насыщении раствора сульфатом
аммония.
 Гистоны – входят в состав ядер клеток, где образуют комплекс с ДНК.
Содержат много остатков аргинина и лизина.
Фибриллярные белки имеют нитевидную форму (фибриллы), образуют волокна
и пучки волокон. Между соседними полипептидными цепями имеется много
поперечных ковалентных сшивок, они нерастворимы в воде. Переходу в раствор
препятствуют неполярные радикалы аминокислот и сшивки между пептидными
цепями. Фибриллярные белки в организме выполняют главным образом
структурную функцию, обеспечивают механическую прочность тканей. К таким
белкам относятся:
 Коллаген – белок соединительной ткани. В его составе преобладают
аминокислоты глицин, пролин, гидроксипролин.
 Эластин – более эластичен, чем коллаген, входит в состав стенок артерий,
лёгочной ткани, в его составе преобладают аминокислоты глицин, аланин,
валин.
 Кератин – белок эпидермиса и производных кожи, в его структуре
преобладает аминокислота цистеин.
Четвертичная структура белка характерна только для белков, состоящих
из нескольких полипептидных цепей, она возникает в результате ассоциации
нескольких субъединиц в компактную глобулу. Другими словами, четвертичная
структура - это взаимное расположение субъединиц белка в пространстве (рис.
22). Это высший уровень организации белковой молекулы, к тому же
необязательный - более половины известных белков её не имеют. Белки,
42
обладающие четвертичной структурой, называют также олигомерными
белками, а полипептидные цепи, входящие в их состав, субъединицами или
протомерами. В некоторых белках такие субъединицы одинаковы или имеют
сходное строение, в ряде случаев белки состоят из субъединиц различных типов.
Каждый из протомеров синтезируется в виде отдельной полипептидной цепи,
которая сворачивается в глобулу и затем объединяется с другими
субъединицами путём самосборки за счет нековалентных сил. Каждая
субъединица содержит участки, способные взаимодействовать с
соответствующими участками других субъединиц посредством водородных,
ионных и гидрофобных связей между радикалами аминокислот. Олигомерные
белки могут существовать в виде нескольких устойчивых конформаций и
обладают аллостерическими свойствами, то есть способны переходить из одной
конформации в другую с изменением функциональной активности.
Примерами олигомерных белков могут служить белок эритроцитов – гемоглобин
(рис. 22), фермент фосфофруктокиназа и многие другие.
Известны белки, молекула которых состоит
из двух и более полипептидных цепей,
соединённых дисульфидными связями
(инсулин, тромбин).

Рисунок 22. Пространственное строение гемоглобина: в состав молекулы входят

4 попарно одинаковые субъединицы α и β; небелковая часть гемоглобина - гем
(показана синим цветом)

Понятие денатурации и ренатурации белков

Денатурацией белков называют структурные изменения (нарушения его
четвертичной, третичной и даже вторичной структуры) без разрыва ковалентных
связей в молекуле белка, которые приводят к потере его биологической
активности. Денатурацию белка могут вызывать:
- температура выше 60 °С;
- изменение рН раствора;

43
- детергенты
- ионизирующая радиация;
- соли тяжёлых металлов (ртути, свинца, кадмия);
- органические соединения (спирты, фенолы, кетоны).
Обычно белки денатурируют при 50-60 °С, а термостабильные белки - при
температуре около 100 °С. Температура, при которой 50% нативного белка
подвергается денатурации, называется температурой перехода. Наглядным
примером такого рода тепловой денатурации является свертывание белка при
варке яиц. В некоторых случаях денатурация вызывается весьма
незначительным изменением рН среды. Одни белки стабильны при кислых
значениях рН (например, пепсин), другие – при щелочных (щелочные
протеиназы), третьи – при нейтральных. Часто на практике для денатурации
белков используют 8М раствор мочевины или 6М раствор гидрохлорида
гуанидина. Нередко денатурация белков проводится с помощью детергентов.
Как известно, белки как высокомолекулярные соединения образуют в
водной среде коллоидные растворы. Стабильность этих растворов определяется
следующими факторами:
• величиной коллоидных частиц: чем они меньше, тем устойчивее раствор;
• величиной заряда частиц: чем больше заряд частицы, тем стабильнее
раствор;
• величиной гидратной (сольватной) оболочки: чем больше
сольватационной воды содержит коллоид, тем он устойчивее.
Под действием различных физических и химических факторов может
происходить осаждение белка из коллоидного раствора. При этом различают:
• обратимые реакции осаждения (высаливание), когда осадок белка можно
вновь растворить в воде с восстановлением его исходных физико-химических и
биологических свойств;
• необратимые реакции осаждения под действием факторов, вызывающих
грубые нарушения структурной организации белковой молекулы
(денатурацию).
Причиной осаждения белка могут быть следующие механизмы:
• нейтрализация электрического заряда: при добавлении электролитов
(кислот, щелочей, солей);
• разрушение гидратной оболочки: при добавлении водоотнимающих
веществ (спирта, ацетона, концентрированных растворов электролитов) и при
нагревании;

44
• увеличение размеров коллоидных частиц: под действием факторов,
вызывающих денатурацию белка.
При определённых условиях возможно восстановление исходной
(нативной) конформации белка после удаления фактора, вызвавшего
денатурацию. Этот процесс получил название ренатурации – восстановление
структуры и биологической активности.
Примеры использования процесса денатурации белков в медицине:
• для осаждения белков плазмы крови при определении содержания
небелковых веществ в крови;
• при проведении дезинфекции и санитарной обработки;
• при лечении и профилактике отравлений солями тяжёлых металлов (в
качестве противоядия применяют молоко или яичный белок);
• для получения лекарственных веществ белковой природы (используется
денатурация в мягких условиях с последующей ренатурацией).

3.5. Биологические функции белков

Белки играют важнейшую роль в любой клетке и организме в целом,
выполняя многообразные биохимические функции. Наиболее важные из них и
примеры соответствующих белков представлены в табл. 4. Совокупность всех
белков клетки, определенной ткани или всего организма называют протеомом.
В основе функционирования любого белка лежит его способность к
избирательному взаимодействию со строго определёнными молекулами или
ионами – лигандами. Например, для ферментов, катализирующих химические
реакции, лигандами служат субстраты – вещества, участвующие в этих реакциях,
для транспортных белков – транспортируемые вещества и т.д. Лиганд способен
взаимодействовать только с определённым участком белковой молекулы,
который представляет собой центр связывания или активный центр. Этот центр
формируется пространственно сближенными радикалами аминокислот на
уровне вторичной или третичной структуры белка. Способность лиганда
взаимодействовать с центром связывания обусловлена их комплементарностью,
то есть взаимным соответствием пространственной структуры (подобно
взаимодействию «ключ - замок»). Между функциональными группами лиганда
и центра связывания образуются нековалентные (водородные, ионные,
гидрофобные), а также ковалентные связи. Комплементарностью лиганда и
центра связывания можно объяснить высокую специфичность (избирательность)
взаимодействия белок - лиганд. Изменение пространственной структуры белка в

45
процессе денатураци приводит к разрушению центров связывания и утрате
биологической функции белка.

Таблица 4. Биологические функции белков

Функция белков Биологическая Примеры белков
сущность
Каталитическая Ускорение химических Пепсин, трипсин,
(ферментативная) реакций в организме каталаза,
цитохромоксидаза
Транспорт (перенос) Гемоглобин, миоглобин,
Транспортная химических соединений альбумин, трансферрин
в организме
Источники заменимых и Глиадин (пшеница),
Пищевые и запасные незаменимых яичный альбумин,
белки аминокислот, железа казеин молока,
ферритин
Обеспечение прочности Коллаген, эластин,
и эластичности тканей, кератин, фиброин,
Структурная
компоненты клеточной протеогликаны
стенки
Укорочение саркомеров Актин, миозин,
Сократительная и мышцы (сокращение), тубулин, динеин
двигательная внутриклеточное
перемещение молекул
Регуляция обмена Инсулин, соматотропин,
веществ в клетках и глюкагон,
Регуляторная
тканях (гормоны) и кортикотрспин,
экспресии генов репрессоры, супрессоры
Защита организма от Антитела, интерфероны,
Защитная повреждающих иммуноглобулины,
факторов фибриноген, тромбин
Токсическое действие Дифтерийный токсин,
Белки-токсины белков прокариот и змеиные яды, рицин
эукариот на клетки

46
 Белки-ферменты
Самый многообразный и наиболее высокоспециализированный класс
белков составляют ферменты – это белки, обладающие каталитической
активностью. Это специфические и стереоспецифические высокоэффективные
катализаторы биохимических реакций, протекающих в живой клетке (ферменты
увеличивают скорость реакций в 105 - 1017 раз). Практически все химические
реакции в клетке катализируются ферментами, к настоящему времени известно
более 2000 различных ферментов, каждый из которых служит катализатором
химической реакции определенного типа. При этом каждый фермент
характеризуется оптимальным значением или диапазоном рН, при котором его
активность максимальна. Единица активности фермента (Е) – это количество
фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата за 1 мин при
стандартных условиях (оптимум рН, избыток субстрата, температура 37 ºС или
20 ºС).
В настоящее время принята классификация ферментов, в которой они
сгруппированы в 6 классов в соответствии с типом катализируемых реакций:
1. Оксидоредуктазы - окислительно-восстановительные реакции (~850
ферментов, обязательно наличие кофермента: НАД+, НАДФ+, ФАД+, гем Fe2+).
2. Трансферазы - реакции переноса функциональных групп (~ 950 ферментов,
иногда требуют кофактора – например, пиридоксальфосфат).
3. Гидролазы - реакции гидролиза (более 1000 ферментов: протеазы, липазы,
эстеразы; кофакторов не требуют).
4. Лиазы - реакции отщепления групп негидролитических путем (более 300
ферментов; кофакторов не требуют).
5. Изомеразы - реакции изомеризации (~140 ферментов; кофакторов не требуют).
6. Лигазы - реакции синтеза за счет энергии АТФ (~117 ферментов; кофакторы:
АТФ, КоА-H).

Ферментативные реакции характеризуются образованием фермент-

субстратного комплекса (ЕS), связывание субстрата происходит в активном
центре фермента (рис. 23). Суть действия ферментов заключается в снижении
энергии активации реакции, в результате чего увеличивается ее скорость, при
этом катализатор не смещает равновесие в реакции.
В числе главных факторов, влияющих на скорость ферментативных
реакций: концентрация фермента, концентрация субстрата, присутствие
ингибиторов или активаторов фермента, рН и температура среды. В

47
подавляющем большинстве случаев скорость ферментативной реакции v0 прямо
пропорциональна концентрации фермента [Е]: v0 = k[E].

Рисунок 23. Схема ферментативной реакции

Один из наиболее важных факторов, определяющих скорость

ферментативной реакции – это концентрация субстрата [S]. При относительно
небольших значениях [S] величина v пропорциональна [S], а при достаточно
больших [S] величина v приближается к предельному постоянному значению,
называемому максимальной скоростью 𝑉𝑚𝑎𝑥.
Л. Михаэлис и М. Ментен в 1913 г. сформулировали общую теорию
кинетики действия ферментов: они постулировали, в частности, что
ферментативная реакция является двухстадийной. На первой стадии фермент
вступает в быстрое обратимое взаимодействие с субстратом, в результате чего
образуется фермент-субстратный комплекс ES:
E +S↔ES
На второй стадии реакции комплекс ES распадается с образованием продукта
реакции Р:
ES → E + Р
Вторая стадия лимитирует скорость процесса, которая определяется
концентрацией комплекса ES и константой скорости его распада. На основании
этих предпосылок было выведено уравнение, связывающее v и [S], известное под
названием уравнение Михаэлиса-Ментен (основное уравнение ферментативной
кинетики). Оно связывает начальную скорость реакции v0 с концентрацией
субстрата [S] и максимальной скоростью Vmax через константу Михаэлиса:
𝑉𝑚𝑎𝑥[S]
v0 =
Км+[𝑆]
Константой Михаэлиса (Км) называется концентрация субстрата, при которой
достигается половина максимальной скорости реакции (1/2 Vmax), эта величина
48
характеризует данный фермент по отношению к данному субстрату.
Графическое описание кинетики ферментативной реакции представлено на рис.
24.

Рисунок 24. Кинетика ферментативной реакции

Действие многих ферментов может быть заторможено определенными

химическими соединениями - ингибиторами. С помощь ингибиторов получают
ценную информацию о специфичности ферментов, природе функциональных
групп активных центров и о механизме действия. По характеру действия
ингибиторы разделяют на необратимые и обратимые. Необратимые
ингибиторы химически модифицируют важные для активности функциональные
группы фермента, поэтому после удаления свободного ингибитора активность
модифицированного фермент не восстанавливается. Обратимые ингибиторы
взаимодействуют с ферментом без образования ковалентной связи – при
удалении такого ингибитора активность фермент восстанавливается. Среди
обратимых ингибиторов различают два вида - конкурентные и неконкурентные
ингибиторы. Неконкурентные ингибиторы, как правило, не имеют сходства с
субстратом. Он могут обратимо связываться как со свободным ферментом, так и
с ES-комплексом и не конкурируют с субстратом, т. е. не вытесняют его из
комплекса с ферментом.

Вопросы для текущего контроля знаний студентов по разделу 3:

1) На чем основывается система классификации аминокислот?
2) Опишите кислотно-основные свойства аминокислот
3) Каковы особенности строения пептидной связи?
4) Назовите функции биологически активных пептидов?
5) Чем определяется функциональная активность пептидов?
49
6) Чем обеспечивается разнообразие белков в природе?
7) Опишите уровни организации белковых молекул.
8) Каковы особенности каждого уровня организации белка?
9) Какие типы взаимодействий лежат в основе поддержания пространственной
структуры белков?
10) Что такое денатурация белка?
11) При каких условиях возможна ренатурация белка?
12) Опишите физико-химические свойства белков.

50
4. Нуклеиновые кислоты
Нуклеиновые кислоты (НК) – это важнейшие высокомолекулярные
биополимеры, осуществляющие хранение и передачу генетической информации
в живой клетке. Существуют два структурно различных типа нуклеиновых
кислот – дезоксирибонуклеиновые кислоты (ДНК) и рибонуклеиновые кислоты
(РНК). Нуклеиновые кислоты могут быть линейными и кольцевыми (ковалентно
замкнутыми), состоять из одной или двух цепей. Биологическая роль молекулы
ДНК в клетке – хранение и передача генетической информации. У РНК более
широкий набор функций, в клетках существует несколько разновидностей этих
молекул.

4.1. Химическое строение и номенклатура нуклеиновых кислот

Нуклеиновые кислоты представляют собой полимеры, построенные из
мономерных звеньев – нуклеотидов, соединенных между собой
фосфодиэфирными связями. Нуклеотид состоит из 3-х составных частей:
азотистого основания, моносахарида пентозы и одной или нескольких
фосфатных групп. Нуклеозид – это нуклеотид без фосфатной группы (рис. 25).

Рисунок 25. Строение нуклеотида и нуклеозида

Моносахарид, входящий в состав нуклеотида, это пентоза, которая может

присутствовать в одной из двух форм: β-D-рибозы и β-D-2-дезоксирибозы:

51
Нуклеотиды, содержащие рибозу, называются рибонуклеотидами и являются
мономерными звеньями РНК, а нуклеотиды, содержащие дезоксирибозу,
являются дезоксирибонуклеотидами, из них строится ДНК.

Состав нуклеиновых кислот

Гетероциклические (азотистые) основания, входящие в состав нуклеотидов,
представляют собой производные одного из двух соединений – пурина или
пиримидина (рис. 26). К пиримидинам относятся урацил (U), тимин (T) и цитозин
(C), к пуринам – аденин (A) и гуанин (G). В соответствии с принятой
номенклатурой основания могут записываться трехбуквенным кодом,
представляющим три первые буквы их латинского названия.

Рисунок 26. Структура пуриновых и пиримидиновых оснований

В состав ДНК входят тимин, цитозин, аденин и гуанин, в состав РНК – те же

основания, но вместо тимина входит урацил.
Строение и номенклатура нуклеозидов:
Нуклеозиды, входящие в состав РНК:

52
 Нуклеозиды, входящие в состав ДНК:

В нуклеозидах азотистое основание присоединяется к остатку сахара с

помощью β-N-гликозидной связи, соединяющей С1'-атом пентозы с N1-атомом
пиримидина или с N9-атомом пурина. Атомы С и N в гетероциклических
основаниях пронумерованы общепринятым способом, при нумерации атомов в
пентозном кольце к номерам атомов углерода добавляется еще знак штриха ('),
чтобы отличить их от атомов азотистых оснований.
Названия нуклеозидов происходят от тривиального названия азотистого
основания с использованием суффиксов -идин у пиримидиновых и -озин у
пуриновых нуклеозидов (Табл. 5).

Таблица 5. Номенклатура нуклеозидов

Строение и номенклатура нуклеотидов

В нуклеотидах ортофосфорная кислота образует сложноэфирные связи со
спиртовыми группами рибозы или дезоксирибозы. В составе ДНК и РНК к
нуклеозидам присоединена только одна фосфатная группа. В современной
номенклатуре названия нуклеотидов строятся от названия нуклеозидов с
указанием положения фосфатной группы или фосфатных групп. При этом

53
остаток фосфорной кислоты может быть связан с 3'- или 5'- атомом углерода
рибозы или дезоксирибозы:

Сокращенно аденозин-5'-монофосфат обозначается как АМФ (АМР). Если

нуклеотид образован дезоксирибозой, аденином и одним остатком фосфорной
кислоты, то он будет носить название дезоксиаденозинмонофосфат или
сокращенно dАМФ (dАМР).
К нуклеозидмонофосфатам и дезоксинуклеозидмонофосфатам могут
присоединиться еще 1 или 2 остатка фосфорной кислоты. При этом образуются
нуклеозиддифосфаты (НДФ), дезоксинуклеозиддифосфаты (dНДФ) или
нуклеозидтрифосфаты (НТФ) и дезоксинуклеозидтрифосфаты (dНТФ). НТФ и
dНТФ служат субстратами для синтеза РНК и ДНК соответственно, а также
выполняют и другие функции в клетке. Наиболее широко распространены
эфиры, образованные присоединением ди- или трифосфатных групп к 5'-ОН-
группам нуклеозидов. Аденозинтрифосфат (АТФ) является главным
поставщиком энергии во всех клетках. Каждая из трёх фосфатных групп может
быть отщеплена путем гидролиза в форме ортофосфата (НРО42-), который
называют неорганическим фосфатом и обозначают Рi. Обычно АТФ, АДФ и
AMФ в клетке находятся в комплексе с ионами магния или марганца (Mg 2+,
Mn2+).

54
В номенклатуре нуклеотидов часто используются однобуквенные сокращения:
для 5'-фосфатов — pN, pdN
для 3'-фосфатов — Np, dNp где N – однобуквенное обозначение нуклеозида
для 2'-фосфатов — N(2')p

Применяют также трехбуквенные обозначение, но только для нуклеотидов с

фосфатной группой, находящейся в 5'- положении.
РНК и ДНК построены, соответственно, из ковалентносвязанных
рибонуклеотидных или дезоксинуклеотидных звеньев, образующих
полинуклеотидные цепи. Звенья соединяются между собой с помощью
фосфодиэфирных мостиков, связывающих 5'-гидроксильную группу одного
нуклеотида и 3'-гидроксильную группу следующего. При этом образуется
регулярная цепь фосфат–сахар–фосфат–сахар и т.д. Порядок следования
оснований вдоль цепи называется первичной структурой нуклеиновой кислоты.
Полинуклеотидная цепь обладает полярностью, и, согласно принятому
соглашению, последовательность оснований читается слева направо, в
направлении от 5'- к 3'-углеродному атому пентозы. О первом и последнем
нуклеотидах говорят, что они находятся на 5'- и 3'-концах цепи соответственно.

Упрощенная форма записи для нуклеиновых кислот

Часто используют упрощенные формы записи химической структуры
полинуклеотида (рис. 27):
1. Указывают последовательность оснований, начиная с 5'-конца молекулы,
например, ACGT… .
2. Кроме последовательности оснований, отмечают с помощью буквы «р»
положение фосфатных групп, например рAрCрGрTр... .
3. Применяют сокращенную схематическую форму записи, в которой
вертикальной чертой обозначают пентозу, к которой приписывают букву,
отвечающую тому или иному основанию. Фосфатную группу, соединяющую
сахара, изображают косой линией с буквой Р.
55
Рисунок 27. Строение и схематическая форма записи структуры НК

4.2. Пространственная структура и свойства ДНК

ДНК – биологическая макромолекула, которая является носителем
генетической информации. Согласно модели Дж. Уотсона и Ф. Крика (1953 г.),
молекула ДНК состоит из двух полинуклеотидных цепей, которые образуют
правозакрученную спираль относительно одной и той же оси. 2 НК-цепи
соединены друг с другом с помощью водородных связей и образуют
правовинтовую спираль вокруг общей оси (рис. 28).
Цепи двойной спирали ДНК антипараллельны и комплементарны, т.е.,
образование поперечных водородных связей всегда происходит между
основаниями C и G (2 связи) и А и Т (3 связи). Сахарофосфатный остов
располагается на периферии двойной спирали, а азотистые основания находятся
внутри нее, причем их плоскости перпендикулярны оси спирали и
взаимодействуют между собой. Под термином комплементарность понимают
взаимное соответствие последовательностей оснований в противоположных
цепях ДНК. Так, если в одной цепи в каком-то месте стоит аденин, то в другой
цепи на этом месте должен находится тимин, и наоборот, так, чтобы между
основаниями могли образовываться специфические водородные связи.
Аналогично, если в одной из цепей стоит гуанин, то напротив него в другой цепи
должен находиться цитозин, и наоборот.
Геометрия двойной спирали ДНК такова, что соседние пары оснований
находятся друг от друга на расстоянии 0.34 нм и повернуты на 36° вокруг оси
спирали. На один виток спирали приходится, следовательно, 10 пар оснований
56
(360°/36°=10), шаг спирали равен 3.4 нм (10 • 0.34 нм). Диаметр двойной спирали
ДНК составляет примерно 2 нм (рис. 28).

Рисунок 28. Модель пространственной структуры ДНК Уотсона и Крика

Стабильность двойной связи обусловлена следующими взаимодействиями:

1. Водородное связывание между комплементарными основаниями А-Т и G-C.
2.«Стэкинг»-взаимодействия между параллельно расположенными
основаниями, перпендикулярно плоскости оснований:
- Ван-дер-ваальсовы контакты между атомами;
- перекрывание π-орбиталей атомов азотистых оснований.
3. Гидрофобный эффект – неполярные основания расположены внутри спирали
и защищены от непосредственного контакта с водой.
4. Гидрофильный сахарофосфатный остов ДНК экспонирован наружу спирали.
Установлено, что пространственная структура ДНК обладает
полиморфизмом. Полиморфизм ДНК – это способность двойной спирали
принимать различные конформации. Рентгеноструктурные исследования
кристаллов полинуклеотидов выявили существование трёх основных типов
структур: А-, В- и Z-формы (рис. 29).
В-ДНК – это стандартная уотсон-криковская структура, в которой плоскости
пар оснований почти перпендикулярны оси двойной спирали (6° от нормали к
оси спирали), на один виток приходятся 10.5 пар оснований.
В А-ДНК плоскости пар оснований повернуты примерно на 20° от нормали
к оси правой двойной спирали. На виток спирали здесь приходятся 11 пар
оснований, расстояние между которыми – 0.26 нм. А-ДНК образуется при
высушивании волокон В-ДНК.
57
 Z-ДНК – это левая спираль с 12 парами оснований на виток. Основания в
данной форме расположены на расстоянии 0.37 нм друг от друга. Буква Z
указывает на зигзагообразную форму сахарофосфатного остова ДНК в этой
форме. Плоскости оснований примерно перпендикулярны оси спирали (7° от
нормали к оси спирали). В клетке ДНК обычно находится в В-форме, но
отдельные ее участки могут находиться в А-, Z- или даже в иной конформации.

Рисунок 29. Полиморфные формы ДНК

Циклические ДНК и суперспирализация.

Многие двухцепочечные ДНК в природе являются циклическими:
плазмиды, ДНК митохондрий и хлоропластов, а также многих вирусов и
бактерий. Такие молекулы ДНК, как правило, существуют в суперспиральном
состоянии. При этом двойная спираль закручивается сама на себя и количество
витков образующейся суперспирали зависит от внешних условий.
Суперспирализация циклических ДНК приводит к сильному изменению
физически свойств молекулы, в особенности гидродинамических и
электрофоретических.

Денатурация и ренатурация двухспиральных структур

Двуспиральные структуры очень стабильны в физиологических условиях
при значениях рН, близких к нейтральным, температуре около 30 – 40 °С и в
присутствии 0.15 моль соли, они обладают высокой вязкостью. Однако
увеличение или уменьшение рН, повышение температуры выше 80 °С и
добавление в среду некоторых веществ, таких, например, как мочевина,
приводит к разрушению двухцепочечной структуры (при этом вязкость резко
58
понижается), предельным случаем которого является денатурация, т.е. полное
разделение отдельных нитей молекулы ДНК. Температура, при которой доля
спирального и неспирального состояния равны, называется температурой
плавления и обозначается Тm. Для каждой ДНК в постоянных условиях Тm
постоянна и характеризует стабильность двуспиральной структуры. Переход
ДНК от двойной спирали к одноцепочечной структуре можно наблюдать по
изменению поглощения УФ-области спектра при 260 нм: при денатурации
двойной спирали увеличивается поглощение раствора ДНК (гиперхромный
эффект). Разрушенная двуспиральная структура в определенных условиях
может быть восстановлена, по крайней мере частично. Это процесс называют
ренатурацией. Ренатурация происходит, если раствор денатурированной ДНК
выдерживать определенное время в условиях, когда двуспиральная структура
стабильна. Скорость ренатурации зависит от многих факторов, и в первую
очередь от так называемой сложности ДНК. Чем выше сложность ДНК, тем
медленнее идет ренатурация. Если ренатурации подвергают не целые, а
фрагментированные молекулы, скорость ренатурации возрастает с увеличением
длины фрагментов.
Определение нуклеотидной последовательности ДНК (секвенирование)
Широко применяются два метода секвенирования последовательности
нуклеотидов в ДНК: метод химического расщепления Максама-Гилберта и
метод обрыва цепи Сэнгера. Каждый из них может использоваться для
секвенирования фрагментов ДНК длиной лишь несколько сотен оснований (не
более 600 пар оснований). Поэтому первый этап состоит в расщеплении длинных
цепей (например, целых хромосом) на фрагменты, с которыми можно вести
дальнейшую работу. Для этой цели применяют ферменты-рестриктазы, которые
выделяют из бактерий.
Метод Максама-Гилберта заключается в химической модификации одного
из четырех оснований ДНК и последующем расщеплении сахарофосфатной цепи
в местах модификации. В результате образуется набор меченых молекул
различной длины, их разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном
геле (ПААГ) и идентифицируют.
Метод Сенгера – в этом методе используется способность ферментов ДНК-
полимераз синтезировать ДНК. Исследуемый фрагмент ДНК встраивают в
вектор, созданный на основе генома фага М13, чтобы получить его в
однонитевой форме. Выделяют одноцепочечный фрагмент ДНК и достраивают
его с помощью ДНК-полимеразы или фрагмента Клёнова. В реакционную смесь
добавляют дезоксинуклеотиды (dATP, dTTP, dGTP и dCTP) и короткий
синтетический нуклеотид - праймер. Пробу делят на 4 части и добавляют один
из четырёх дидезоксинуклеотидов (ddATP, ddTTP, ddGTP и ddCTP) для обрыва
59
цепи. Рост цепи прекращается и все синтезированные цепи оканчиваются на
добавленный в порцию дидезоксинуклеотид. Разделение продуктов проводят
при помощи электрофореза в ПААГ (рис. 30). Для того чтобы результаты
секвенирования можно было зафиксировать на рентгеновской плёнке, один из
дезоксинуклеотидов, вводимых в реакционную смесь, метят радиоактивным
изотопом: 32P или 35S. Использование флуоресцентной метки позволило
автоматизировать данную методику.

Рисунок 30. Принцип метода Сэнгера

4.3. Структура и функции РНК

Рибонуклеиновые кислоты (РНК), присутствующие в клетках как
прокариот, так и эукариот, бывают различных типов и выполняют следующие
функции:
1) Информационная (матричная, мРНК) является копией (транскриптом)
соответствующей ДНК, которая служит матрицей для синтеза белка. Каждые три
последовательно расположенных нуклеотида на мРНК (называемые кодоном)
задают один аминокислотный остаток.
2) Транспортная (тРНК). Молекулы тРНК переносят специфические
аминокислотные остатки к определенному участку мРНК в ходе биосинтеза
белка.
3) Рибосомная (рРНК). Молекулы рРНК встречаются в различных формах и
образуют в комплексе с белками рибосому - сложный надмолекулярный
комплекс, при участии которого происходит биосинтез белка.
4) Гетерогенная ядерная РНК (гяРНК) содержится в ядре клеток эукариот.
5) Рибозимы – молекулы РНК с ферментативной активностью, встречаются в
некоторых клетках.
6) У РНК-содержащих вирусов одноцепочечная молекула РНК служит
носителем генетической информации.
Все типы РНК являются одноцепочечными полинуклеотидами.
Пространственная структура РНК довольно сложная; отдельные цепи могут
60
сворачиваться в шпильки, принимать форму двойной спирали или образовывать
сложные петли.
Структура тРНК
Молекулы тРНК состоит из 73 - 93 нуклеотидов, ковалентно связанных друг
с другом в линейную цепочку с размером около 5 нм молекулярной массой
25кДа. Все тРНК начинаются с фосфорилированного 5'-конца; первым
основанием обычно является гуанин. На 3'-конце всегда присутствуют три
основания — ССА и концевая З'-гидроксильная (-ОН) группа. Составляющими
тРНК являются не только четыре обычных основания А, С, G и U, но также
несколько необычных (минорных) оснований. Например, в дрожжевой тРНКРhе
минорными основаниями являются псевдоуридин (обозначаемый Ψ),
дигидроуридин (D) и основание, обозначаемое Y. Кроме того, в некоторых
обычных основаниях один или два атома водорода могут быть замещены на
метильные СН3-группы (метилированные или деметилированные основания
обозначаются соответственно с помощью символов m или m 2 при букве,
обозначающей то или иное основание).
Клеверный лист – это структурное представление молекулы тРНК,
полученное из условия образования максимального числа уотсон-криковских
пар оснований для данной нуклеотидной последовательности. тРНК содержит
комплементарные последовательности – эти участки называются стеблями
(ветвями), а одноцепочечные участки – петлями (рис. 31). Все известные тРНК
образуют «клеверный лист» с четырьмя стеблями (акцепторным, D,
антикодоновым и Т) и тремя петлями (D, антикодоновой и Т). Некоторые тРНК
имеют дополнительные петли и/или стебли.

Рисунок 31. Фенилаланиновая тРНК дрожжей

61
4.4. Клеточные процессы, связанные с обработкой генетической
информации

4.4.1. Роль ДНК в передаче наследственной информации

Центральная догма молекулярной генетики, сформулированная в 1958 г.,
определяет пути передачи генетической информации. Она гласит, что
генетическая информация в клетке передаётся от нуклеиновых кислот к белку
через ряд последовательных стадий, но не в обратном направлении (рис. 32):

Рисунок 32. Центральная догма молекулярной генетики

Только после того, как классическая генетика в 1950-1960-х годах

объяснила основные законы передачи наследственных признаков, стали понятны
функции нуклеиновых кислот и белков. Оказалось, что гены представляют собой
участки ДНК, содержащие в закодированном виде информацию для синтеза РНК
и белков. Важнейшим условием реализации всех молекулярно-биологических
процессов обработки генетической информации в клетке является способность
гетероциклических оснований в нуклеотидах ДНК и РНК к комплементарному
взаимодействию - спариванию оснований А-Т и G-С за счет возникающих
водородных связей. Генетическая информация во всех клетках хранится в виде
последовательности оснований в форме ДНК (у некоторых вирусов – в форме
РНК). Большинство генов кодируют белки, т.е. содержат информацию о
последовательности аминокислотных остатков в белке. Каждый а.к. остаток
записан в ДНК в виде «кодового слова» - кодона, представляющего собой
последовательность из 3-х нуклеотидов (триплет нуклеотидов). Кодоны
являются фрагментами последовательности одной из 2-х цепей ДНК
(смысловой), прочитанной в направлении 5' → 3'.
Понятие гена и генома. Ген – это участок хромосомы, который несет
информацию о функциональном полипептиде (белке) или молекуле РНК. Это
структурная и функциональная единица наследственности. Наряду с генами
хромосомы содержат разнообразные регуляторные последовательности,
участвующие в репликации, транскрипции и трансляции. Геномом называют

62
совокупность генов, характерных для гаплоидного набора хромосом данного
вида организмов; это основной гаплоидный набор хромосом

4.4.2. Механизм репликации

Репликация – копирование родительской ДНК с образованием дочерних
ДНК, последовательность которых комплементарна родительской и
определяется ею.
Во время деления клеток вся генетическая информация передается в дочерние
клетки. Для этого в S-фазе клеточного цикла вся клеточная ДНК копируется. В
этом процессе каждая нить ДНК служит матрицей для синтеза новой
комплементарной цепи, которые затем образуют дочернюю молекулу ДНК.
Репликация является полуконсервативным процессом, так как две цепи
исходной родительской молекулы ДНК оказываются в разных дочерних
молекулах ДНК.
Репликон – генетическая единица репликации, т.е. сегмент ДНК, который
автономно воспроизводится (т.е. реплицируется) в процессе клеточного роста и
деления. Гигантские молекулы ДНК имеют много участков репликации -
репликонов. Это обеспечивает экономию времени и предотвращает
деспирализацию всей молекулы ДНК. Репликация протекает с огромной
скоростью: у прокариот – 3000 п.н. за 1 секунду, у эукариот – 100-300 п.н./c.
Репликация протекает в несколько стадий:
1) Инициация – начинается в сайте oriC (origion replication inducing), характерном
для каждого конкретного вида живого организма, происходит узнавание и
связывание инициаторного сегмента ДНК с белком хеликазой. Хеликаза
расплетает цепи ДНК за счет энергии АТФ и формируется репликатиная вилка.
2) Элонгация – движение репликативной вилки. Репликативная вилка – это та
часть молекулы ДНК, которая уже разъединилась на 2 цепи и в данной момент
служит матрицей для синтеза дочерней ДНК. В ходе репликации репликативная
вилка перемещается вдоль молекулы (рис. 33), и при этом расплетаются все
новые участки родительской ДНК – до тех пор, пока вилка не дойдет до точки
окончания синтеза (точка терминации).
Поскольку фермент ДНК-полимераза катализирует репликацию только в
направлении от 5'-конца ДНК к 3'-концу, а цепи родительской ДНК
антипараллельны, только одна из новых цепей синтезируется непрерывно и
называется лидирующей. Вторая цепь, называемая отстающей, синтезируется в
виде коротких фрагментов Оказаки, которые затем сшиваются (лигируются), и
образуется непрерывная вторая цепь. Этот процесс называется созреванием. У
прокариот фрагменты Оказаки имеют длину около 1000 нуклеотидов, а у
эукариот 100 - 200 нуклеотидов. Для начала синтеза ДНК необходима РНК-
63
затравка. При созревании ДНК затравка удаляется как с 5'- конца лидирующей
цепи, так и с 5'-концов фрагментов Оказаки. Удаление РНК-затравки
осуществляет ДНК-полимераза I.

Рисунок 33. Репликативная вилка

3) Терминация – завершение биосинтеза ДНК в результате считывания всей

последовательности ДНК. ДНК-гиразы закручивают спираль ДНК и
восстанавливают ее структуру.
При каждом делении клеток происходит укорочение концевых – теломерных
участков хромосом на 50 п.н. Теломеры в среднем имеют размеры 3-20 тыс. п.н.,
и после определенного количества клеточных делений репликация становится
невозможной. Одноклеточные животные, эмбриональные, стволовые, а также
опухолевые клетки содержат специальный фермент – теломеразу, способный
наращивать концевые участки ДНК перед каждым процессом ее удвоения.

4.4.3. Механизм транскрипции

Сама молекула ДНК не принимает непосредственного участия в биосинтезе
белка, поэтому содержащаяся в ней информация должна быть перенесена из ядра
клетки в цитоплазму (в эндоплазматических ретикулум, на рибосомы). Для этого
соответствующий участок кодирующей (смысловой) нити ДНК переводится
(транскрибируется) в последовательность мРНК.
Транскрипция – процесс переноса генетической информации от ДНК к РНК:
мРНК синтезируется по принципу комплементарности в соответствии с
последовательностью оснований в ДНК, которая служит для нее матрицей.
64
 Этапы транскрипции:
1) Инициация – начало синтеза, присоединение фермента ДНК-зависимой РНК-
полимеразы к промотору – участку ДНК размером около 40 пар оснований,
указывающему на начало транскрипции. Это фермент, катализирующий синтез
РНК. Он состоит из несколько субъединиц: двух α, одной β, одной β' и одной σ.
Их комплекс называется холоферментом (α2ββ'σ) и имеет Мr около 500 000.
Фермент, лишенный σ-субъединицы, называется кор-ферментом. Для
инициации транскрипции необходимы холофермент, нуклеозидтрифосфат
(всегда АТР или GTP) и промотор. Когда полимераза связывается с промотором,
происходит локальное расплетание двойной спирали ДНК и образуется
открытый промоторный комплекс.
2) Элонгация – рост олигонуклеотидной цепи мРНК, катализируемый кор-
ферментом. Движущийся вдоль нити ДНК кор-фермент действует подобно
застежке-молнии, «раскрывая» двойную спираль, которая замыкается позади
фермента по мере того, как соответствующие основания РНК образуют
комплементарные пары с основаниями ДНК.
3) Терминация – завершение синтеза мРНК на терминаторном сайте ДНК в
результате считывания всей последовательности гена и разрушения нуклеиново-
белкового комплекса за счет образования терминаторной «шпильки».
4) Посттранскрипционный процессинг мРНК у эукариот – это процесс
созревания мРНК, при котором первичный РНК-транскрипт (называемый,
строго говоря, гетерогенная или гяРНК) модифицируется и превращается в
зрелую матричную РНК. У прокариот молекулы мРНК не подвергаются
процессингу.
Стадии процессинга мРНК у эукариот (рис. 34):
1. Модификация 5'-конца мРНК – присоединение остатка метилгуанозина
(«кэп»). «Кэп» защищает 5'-конец мРНК от деградации, он участвует в
транспорте мРНК из ядра и во взаимодействии с рибосомой при инициации
трансляции.
2. Модификация 3'-конца мРНК – присоединение участка poly(A) -
полиаденозина. Рoly(A) защищает 3'-конец мРНК от деградации, участвует в
сплайсинге и, предположительно, в транспорте мРНК из ядра.
3. Сплайсинг – это удаление интронов (некодирующих участков генов) и
соединение между собой экзонов (кодирующих участков генов).

65
Рисунок 34. Схема процессинга мРНК

Существующий в клетках эукариот механизм альтернативного сплайсинга

приводит к образованию разных мРНК, кодирующих белки с разными
свойствами, т.е., более одного белкового продукта на основе одного гена. Это
происходит потому что некоторые экзоны могут играть роль интронов и
вырезаться (рис. 35).

Рисунок 35. Схема альтернативного сплайсинга

4.4.4. Механизм трансляции (на примере прокариот)

Трансляция – это биосинтез белка. В ходе этого процесса генетическая
информация, записанная в виде 4-х буквенного кода на мРНК, переводится на
рибосомах в 20-ти буквенный код белковой структуры (рис. 36).
Зрелая мРНК транспортируется из клеточного ядра в цитоплазму и
связывается с рибосомами, где происходит перевод записанной в РНК
информации в полипептидную последовательность. Передача информации
66
осуществляется в результате взаимодействия между кодонами мРНК и
транспортной РНК (тРНК). Молекулы тРНК на 3'-конце доставляют к рибосоме
именно те аминокислоты, которые соответствуют закодированной в мРНК
информации.
Рибосома – это надмолекулярный комплекс, состоящий из двух субчастиц,
в котором происходит синтез белка. Каждая субчастица представляет собой
сложный комплекс из сотни белков и нескольких молекул рибосомной РНК
(рРНК). В течение всего процесса синтеза белка растущая полипептидная цепь,
мРНК и очередная аминоацил-тРНК остаются прикрепленными к рибосоме.
Участки связывания на рибосоме - это места, к которым присоединяются
участники трансляции. Между большой и малой субчастицами рибосомы
остается узкая щель, занимаемая молекулой мРНК. Подойдя к рибосоме,
очередная молекула аминоацил-тРНК соединяется с участком, называемым
сайтом А. Другой участок, обозначаемый Р, связывается с молекулой пептидил-
тРНК, несущей синтезируемую цепочку полипептида.

Рисунок 36. Общая схема процесса биосинтеза белка

Стадии трансляции:
1) Активация аминокислот. Каждая из 20 а.к. ковалентно присоединяется к
соответствующей ей тРНК при помощи ферментов аминоацил-тРНК-синтетаз.
Стартовым сигналом к началу синтеза белка служит расположенный на мРНК
кодон AUG, кодирующий модифицированную форму метионина -
формилметионин (fMet), с которой начинается синтез белка. Он присоединяется
к молекулам тРНК определенного типа (тРНКf), отличающимся от тРНКМе,
посредством которых Met включается в срединную часть полипептидной цепи.
2) Инициация синтеза белка начинается с момента образования инициирующего
комплекса, состоящего из мРНК, 30S-субчастицы рибосомы и молекулы
67
аминоацил-тРНКf с присоединенным fMet. Следующим шагом является
присоединение второй 50S-субчастицы рибосомы. Источником энергии для
инициации синтеза белка служит реакция гидролиза ГТФ до ГДФ и P i
(неорганического фосфата).
3) Элонгация – это последовательное присоединение к растущей полипептидной
цепи доставляемых к рибосоме а.к. остатков. Каждый шаг элонгации состоит из
трех этапов:
- узнавание кодона из 3-х нуклеотидов на мРНК заключается в комплементарном
связывании с антикодоном на соответствующей молекуле аминоацил-тРНК;
- образование пептидной связи;
- транслокация – освобождение участка А и экспонирование очередного кодона,
которые позволяют начаться следующему циклу элонгации.
4) Терминация – окончание синтеза, которое происходит по команде одного из
3-х терминирующих (бессмысленных – не кодирующих а.к.) кодонов UAA, UGA
или UAG. Вместо продолжения синтеза цепи происходит терминация,
катализируемая специальными белками. Вслед за этим происходит диссоциация
комплекса мРНК-рибосома и высвобождение полипептидной цепи. Далее
рибосома диссоциирует на 30S- и 50S-субчастицы.
Механизм трансляции у эукариот включает такие же этапы, что и
трансляция у прокариот и осуществляющаяся в цитоплазме клетки. Основным
отличием здесь является то, что первым остатком в растущей полипептидной
цепи является Met, а не fMet. Еще одно существенное отличие состоит в том, что
у эукариот в цитоплазме работают более крупные рибосомы (80S). У эукариот в
биосинтезе белка в целом задействовано почти 300 разных макромолекул: более
70 рибосомных белков, более 20 ферментов для активации а.к., более 10
ферментов и других белковых факторов для всех стадий процесса, около 100
ферментов для заключительного процессинга белков более 40 видов рибосомных
и транспортных РНК.

4.4.5. Генетический код и его особенности

Генетический код – это правила перевода последовательности нуклеотидов
в аминокислотную последовательность белков, это соответствие определенной
последовательности из 3-х нуклеотидов (триплета) определенной аминокислоте
(рис. 37). Генетический код был полностью расшифрован к 1966 г. М.
Ниренбергом, П. Кораной и их сотрудниками. М. Ниренберг получил клеточный
экстракт Е. coli, содержащий все компоненты, необходимые для синтеза белка, и
затем в эту систему в качестве искусственной мРНК добавляли полинуклеотид
poly(U) (UUUUUUU...). Оказалось, что последовательность нуклеотидов poly(U)
детерминирует синтез пептида poly(Phe) – был сделан вывод, что триплет UUU
68
кодирует а.к. Phe. Аналогичные опыты показали, что триплет ССС кодирует а.к.
Pro, а триплет ААА – а.к. Lys. Подобным экспериментальным способом были
установлены кодоны для всех 20-ти аминокислот. Было показано, что три
кодона, UAA, UAG и UGA, не кодируют никаких аминокислот и называются
нонсенс-кодонами. Позднее исследования на мутантных бактериофагах
показали, что эти кодоны определяют терминацию синтеза.

Рисунок 37. Генетический код

Особенности генетического кода

1) Код триплетный: каждая аминокислота задается последовательностью из трёх
нуклеотидов (триплет или кодон).
2) Код вырожденный: большинству аминокислот соответствует несколько
кодонов (триплетный код из 4-х нуклеотидов предлагает 64 варианта кодонов –
43=64 для 20 аминокислот, рис. 37).
3) Код не перекрывается: рамка считывания при биосинтезе белка не изменяетс.
Первый кодон в последовательности мРНК задает рамку считывания в пределах
которой каждый новый кодон начинается через три нуклеотидных остатка.
Поскольку код триплетен, число возможных рамок считывания равно трем.
4) Код универсален: все живые организмы на Земле используют один и тот же
генетический код (имеются отдельные исключения – в ДНК митохондрий и
некоторых бактерий).

69
Определенное направление считывания - от 5'-конца к 3'-концу мРНК. Первый
с 5'-конца кодон отвечает N-концевой аминокислоте полипептидной цепи,
следовательно, белки синтезируются в направлении от N-конца к С-концу.
Следует отметить интересный факт относительно вырожденности кода:
возможные триплеты для каждой а.к. различаются только по третьей позиции.
Для объяснения вырожденности генетического кода по третьему положению
основания в кодоне Ф. Криком была выдвинута гипотеза «качания» (рис. 38),
впоследствии получившая подтверждение: соответствие третьего основания
кодона мРНК первому основанию антикодона на тРНК является нестрогим.
Часто первое положение в антикодоне тРНК бывает занято необычным
основанием инозином (I), которое может образовывать водородные связи с U, С
или А, находящимися в кодоне в третьем положении. Каждая тРНК может
узнавать до трех кодонов.

Рисунок 38. Гипотеза «качания» Ф. Крика

Мутации и репарация ДНК

Мутация – это изменения в нуклеотидной последовательности ДНК. Факторы,
приводящие к таким изменениям, называются мутагенными, к их числу
относятся:
- ионизирующая радиация (рентгеновское, γ-излучение)
- УФ-излучение
- химические мутагены (например, азотистая кислота, гидроксиламин,
алкилирующие агенты ).
Знание генетического кода позволяет объяснить эффект некоторых мутаций:
- молчащая мутация – такое изменение в нуклеотидной последовательности
ДНК, которое приводит к образованию синонимичного кодона, и в результате
аминокислотная последовательность кодируемого белка не изменяется.
Структура генетического кода такова, что молчащие мутации часто бывают
обусловлены изменениями оснований лишь в третьем положении кодона.
- замена (миссенс-мутация) ведет к замене в белке одной аминокислоты на
другую в результате изменения последовательности оснований, которое не
приводит к образованию синонимичного кодона.

70
- мутация со сдвигом рамки считывания обусловлена вставкой или удалением
(делецией) одного или большего числа оснований в последовательности ДНК,
что приводит к изменению аминокислотной последовательности белка.
Многие мутагены влияют на регуляцию роста клеток и обладают
канцерогенным действием. Фактически, изменение генов (мутации) относится к
числу важнейших движущих сил эволюции, с другой стороны, высокая частота
мутаций является угрозой для выживания отдельных организмов и целых видов.
Поэтому в каждой клетке заложен очень эффективный механизм репарации
ДНК, ликвидирующий большую часть возникающих мутаций. Отсутствие
ферментов, участвующих в репарации ДНК, может стать причиной серьезной
заболевания.

4.4.6. Размеры и упаковка ДНК у прокариот и эукариот

Размер и функция ДНК как матрицы для хранения и передачи
наследственного материала объясняют наличие особых структурных элементов
в организации этой молекулы. У высших организмов ДНК распределена между
хромосомами, к примеру, пекарские дрожжи имеют 16, муха-дрозофила – 4, а
человек – 23 хромосомы. За исключением половых клеток, все клетки организма
человека содержат двойной набор хромосом. Длину ДНК обычно измеряют
числом пар комплементарных нуклеотидов (п.н.). Общий размер ДНК всех 23
хромосом человека составляет 3.1.109 п.н. (Mr=1.8.1012), линейный размер –
около 1 м. По последним данным, в геноме человека содержится примерно 29000
генов, распределенных достаточно неравномерно по всем хромосомам.
Хромосомы находятся в клеточном ядре и формируют структуру, называемую
хроматином.
ДНК прокариот устроена более просто: их клетки не имеют ядра, поэтому
ДНК находится непосредственно в цитоплазме в форме нуклеоида. Кольцевая
молекула ДНК кишечной палочки Escherichia coli (Mr=2.4.109) с размером 4.6
млн п.н. в развернутом виде имеет длину 1.5 мм. В геноме Е. coli находится
примерно 4300 генов белков и еще 157 генов стабильных молекул РНК.
Репликация этой молекулы в оптимальных условиях составляет около 20 минут.
Клетки прокариот являются гаплоидными. Упаковка ДНК в клетках прокариот
имеет универсальный характер. Сверхспиральный участок ДНК в комплексе с
гистоноподобными белками (обладающими сродство к ДНК) и полиаминами
образует «бусину» диаметром около 12 нм.
Клетки эукариот устроены сложнее, чем клетки прокариот, и все они, за
исключением половых клеток (гамет), диплоидны. Клеточная ДНК в форме
двойной спирали представляет собой очень протяженную молекулу, поэтому
хромосомы представляют собой сильно конденсированные структуры (рис. 39).
71
Упаковка ДНК в эукариотических клетках включает в себя ассоциацию
сверхспиральной ДНК с белками-гистонами – комплекс ДНК и осно՜вных
белков-гистонов в соотношении 1:1, в результате чего образуется нуклеосома.
Далее образуется соленоидоподобная структура – хроматиновая фибрилла,
которая впоследствии укладывается в петли хроматина, и в конечном счете
образуется комплекс, который называется хромосомой.

Рисунок 39. Уровни упаковки молекулы ДНК в хромосомы у эукариот

Вопросы для текущего контроля знаний студентов по разделу 4:

1. Типы НК: ДНК и РНК, их функции в клетке.
2. Что такое Центральная догма молекулярной генетики?
3. Репликация, ее особенности.
4. Транскрипция – этапы и их особенности.
5. Экзоны, интроны, альтернативный сплайсинг.
6. Трансляция – биосинтез белка. Этапы и участники.
7. Что такое генетический код?
8. Дайте определение гена и генома.
9. Какие типы мутаций известны и чем они обусловлены?
10. Что такое теломеры и какова роль теломераз?

72
5. Липиды и биологические мембраны

5.1. Определение и основные компоненты липидов

Липиды – это производные высших жирных кислот, спиртов и альдегидов.
Этот класс биомолекул представляет собой многочисленную группу соединений
различного строения, общим свойством для которых является нерастворимость
в воде. Липиды выполняют множество функций в организме: являются
метаболическим топливом, структурными компонентами биологических
мембран, участвуют в транспорте холестерина, передаче сигналов и др.
Несмотря на широкое химическое разнообразие, молекулы липидов построены
по единому принципу и состоят из трёх структурных фрагментов: гидрофобного,
гидрофильного компонентов и связующего звена. Липиды представляют собой
нерастворимые в воде маслянистые вещества, из природных источников их
экстрагируют неполярными растворителями (эфир, хлороформ).

Краткий исторический очерк. Некоторые липиды (жиры животные,

растительные масла) использовались с древнейших времен как продукты
питания, а также в качестве сырья для приготовления лекарств, косметических
средств, лакокрасочных материалов и др. С начала 18-го века липиды стали
использовать для мыловарения, а в 20-м веке - для получения моющих средств,
эмульгаторов, детергентов, пластификаторов и технологических смазок.
Первый элементный анализ липидов был выполнен в начале 19 в. А. Лавуазье, а
первые исследования по выяснению химического строения липидов
принадлежат К. Шееле и М. Шеврёлю. Впервые синтезы триглицеридов
осуществили М. Бертло в 1854 г. и Ш. Вюрц в 1859 г. Фосфолипиды были
выделены М. Гобли в 1847, а затем получены в более чистом виде Ф.А. Хоппе-
Зейлером в 1877 г., к этому времени уже было установлено строение ряда
важнейших жирных кислот. Для изучения соединений этого класса
использовали традиционные методы органической химии; а в последнее время
для этих целей широко применяют хроматографические методы, масс-
спектрометрию, оптическая спектроскопию, флуоресцентный анализ и др.

Гидрофобные и гидрофильные компоненты молекул липидов

Гидрофобные компоненты, входящие в состав липидов:
1. Высшие жирные кислоты (RCOOH)
2. Высшие жирные спирты (RCH2OH)
3. Высшие альдегиды (RCOH)
Высшие жирные кислоты (ж.к.) – это длинноцепочечные карбоновые кислоты,
содержащие от 4 до 36 углеродных атомов (C4 - C36); они имеют одну
73
карбоксильную группу и длинный неполярный углеводородный «хвост», из-за
которого липиды нерастворимы в воде. Из природных липидов выделены
разнообразные ж.к., различающиеся длиной цепи, наличием, количеством и
положением двойных связей, возможно также разветвление цепей. Как правило,
ж.к. у эукариот содержат четное число атомов С (чаще всего 16 или 18). В состав
молекулы липида могут входить одновременно насыщенная и ненасыщенная
ж.к.; в ненасыщенных ж.к. двойная связь всегда несопряженная:
-СН=СН-СН2-СН=СН-.

Двойная связь в природных ж.к. всегда имеет цис-конфигурацию, это

приводит в пространстве к сильному изгибу алифатической цепи ж.к. в составе
мембраны. При температуре 37 °С насыщенные ж.к. С12 - С24 находятся в твердом
воскоподобном состоянии, а ненасыщенные ж.к. представляют собой жидкости.
Наиболее распространенные в природе насыщенные высшие ж.к. представлены
в табл. 6.

Таблица 6. Важнейшие жирные кислоты природных липидов

Ненасыщенные ж.к. встречаются в составе липидов чаще, чем насыщенные.

По числу двойных связей они разделяются на моно-, ди-, три-, тетра-, пента-,
гексаеновые, но преобладающими являются кислоты с 18 и 20 атомами углерода
(табл. 7). Ж.к. с одной или несколькими двойными связями являются
74
структурными элементами фосфолипидов мембран и имеются в организме
человека в значительных количествах (незаменимые ж.к. для животных
организмов – линолевая, линоленовая, арахидоновая должны поступать с
пищей). Самой распространенной из ненасыщенных ж.к. является олеиновая: во
многих липидах ее содержание превышает 50%. В фосфолипидах животных
тканей содержится очень мало линолевой кислоты (0.05 - 0.4%), поскольку она
превращается в линоленовую и арахидоновую. Линоленовая ж.к. содержится в
значительных количествах – от 4 до 24%. Содержание арахидоновой кислоты не
превышает 0.2-22%, а ее метаболиты – эйкозаноиды проявляют очень высокую
биологическую активность и служат важными биорегуляторами. В целом же,
биологическое значение свободных ненасыщенных жирных кислот в
метаболизме окончательно еще не выяснено.

Таблица 7. Основные ненасыщенные кислоты природных липидов

Гидрофильные компоненты, входящие в состав липидов:

1. Спирты-полиолы, глицерин, диолы, аминодиолы
2. Углеводы
3. Аминоспирты
4. Аминокислоты
5. Н3РО4, Н2SО4, НРО3.
75
5.2. Химическая классификация и функции липидов

Нейтральные липиды: Полярные липиды:

1) Глицеролипиды 1) Фосфолипиды
2) Диольные липиды 2) Сфинголипиды
3) Воска 3) Гликолипиды
4) Эфиры холестерина 4) Сульфолипиды
5) Фосфонолипиды

5.2.1. Нейтральные липиды: классы и функции

Триацилглицериды (жиры, нейтральные жиры) – это сложные эфиры
глицерина и 3-х молекул высших жирных кислот. Представляют собой
неполярные, гидрофобные вещества, не растворяются в воде; имеют более
н
и
з
к
у
ю
Биологическая функция нейтральных жиров – это эффективное запасание
п
энергии в клетках (окисление жиров по сравнению с углеводами дает энергии
л
более, чем в два раза). Это основные компоненты жировых депо растительных и
о
животных клеток, а также они обеспечивают теплоизоляцию организма у
т
морских животных (тюлени, моржи). В мембранах клеток нейтральные липиды
н
обычно не содержатся.
о
с Диольные липиды (простые эфиры)
т CН2-OR
ь (CH2)n R, R ' - ацил-, алкил-, алкенил-
, CH2-OR' n = 3,4
Содержатся в семенах растений, жире млекопитающих (морские организмы),
ч
дрожжах.
е Воска
м Воска – сложные эфиры длинноцепочечных ж.к. (С14 - С36) и жирных
спиртов (С16 - С22). К примеру, пчелиный воск – это сложный эфир
в
пальмитиновой кислоты и мирицилового спирта (триаконтанола-1, С30Н61ОН,
о
т.пл. 88 °С). Температуры плавления восков (60 - 100 °С) обычно выше, чем у
д
триацилглицеридов.
а
Биологические функции восков:
. 76
Простые триацилглицериды содержат остатки только одной жирной кислоты, но
большинство природных триацилглицеридов – смешанные: они содержат две
1) Защитное покрытие (листья растений)
2) Водоотталкивающая смазка (водоплавающие птицы)
3) Защитная (смягчают кожу)
4) Высококалорийное «клеточное топливо» (планктон – пища для крупных
морских организмов)

Стеролы
Молекулы стеролов состоят из компактного, жесткого гидрофобного ядра
из 4-х конденсированных колец, а полярной головкой является гидроксильная
группа. Эти липиды присутствуют во многих мембранах растений, животных и
микробов, их относят к неомыляемым липидам. Самым важным и
распространенным из стеролов в животных клетках является одноатомный
циклический спирт – холестерин (С27Н46О) и его сложные эфиры с ж.к. как
запасная и транспортная форма холестерина. Это один из главных компонентов
плазматической мембраны клеток млекопитающих (до 30%), в меньшем
количестве может присутствовать также в митохондриях, мембранах комплекса
Гольджи, ядерных мембранах. Холестерин и его эфиры с длинноцепочечными
ж.к. являются компонентами липопротеинов плазмы крови (ЛП). В мембранах
растений, грибов и бактерий содержатся другие стеролы – аналоги холестерина.

Биологические функции холестерина:

1) Регулирует вязкость биологических мембран клетки (составляет 30% от всех
липидов цитоплазматической мембраны)
2) Предшественник всех стероидных гормонов
3) Предшественник желчных кислот и витамина Д2

5.2.2. Полярные липиды: классы и функции

77
 Полярные липиды представляют собой ярко выраженные амфифильные
молекулы, т.к. в их состав входят одновременно длинные гидрофобные остатки
(«хвосты») и гидрофильная полярная головка. Полярные липиды – это основные
липидные компоненты биологических мембран клеток.
1) Фосфолипиды - наиболее важная группа липидов в составе мембран, они
подразделяются на две группы: глицерофосфолипиды и сфингофосфолипиды.
В состав глицерофосфолипидов входят два остатка высших жирных кислот,
присоединенных к первой и второй гидроксильным группам глицерина с
помощью сложноэфирных связей, а третий ОН-группа глицерина связана с
замещенным остатком фосфорной кислоты (рис. 40). Второй углеродный атом
(С2)-глицерина у природных фосфолипидов асимметричен и имеет L-
конфигурацию.
Номенклатура глицерофосфолипидов
базируется на системе
стереоспецифической нумерации (sn-
система): если глицерин изображен в
проекции Фишера, так что
центральная группа расположена
слева, то атомы углерода будут
нумероваться сверху вниз. В
литературе используется несколько
систем стереоспецифических
обозначений: sn, D/L и R/S.

Рисунок 40. Строение фосфолипида

В природных липидах у второго углеродного атома глицерина обязательно

находится остаток ненасыщенной жирной кислоты. В фосфолипидах некоторых
бактериальных мембран обнаружены разветвленные цепи, а также цепи,
содержащие циклы (например, циклопропан), и гидроксильные группы в -
положении.
Глицерофосфолипиды – это основные структурные компоненты
биологических мембран эукариотических организмов (рис. 41).
Фосфатидилхолин (ФХ) является основным мембранным компонентом клеток
высших животных и растений, его содержание достигает более 50% от суммы
фосфолипидов. В бактериальных клетках ФХ не содержится.
Фосфатидилэтаноламин (ФЭА) содержится в тканях животных и растений в
меньших количествах, чем ФХ (15 - 30% от общего количества фосфолипидов),
но является одним из основных компонентом мембран бактериальных клеток.
78
 При нагревании с кислотами или щелочами глицерофосфолипиды
гидролизуются, распадаясь на структурные компоненты: жирные кислоты,
глицерин, фосфорную кислоту и спирт полярного участка. В организме
фосфолипиды расщепляются специфическими ферментами фосфолипазами.

Структура Название
H Фосфатидовая кислота (ФК)
+
CH2OCOR1 CH2CH2N (CH3)3 Фосфатидилхолин (ФХ)
R 2OCO C H O CH2CH2NH2 Фосфатидилэтаноламин (ФЭА)
CH2 O P O CH2 CH COOH
Фосфатидилсерин (ФС)
- NH2
O
CH2 CH CH2OH
Фосфатидилглицерин (ФГ)
OH

OH OH
OH
OH Фосфатидилинозит (ФИ)

OH

O
CH2OCOR1 CH2 O P O CH2
-
R 2OCO C H O CHOH O H C OCOR2 Дифосфатидилглицерин (ДФГ)
CH2 O P O CH2 CH2OCOR1 (Кардиолипин)
-
O

Рисунок 41. Классы глицерофосфолипидов

2) Сфингофосфолипиды являются производными С18-аминоспирта

сфингозина, имеющего транс-конфигурацию двойной связи (рис. 42). N-
ацилированное производное сфингозина принято называть церамидом. Церамид
(гидрофобная часть) может быть связан с различными полярными головками,
поэтому сфинголипиды разделяют на фосфосфинголипиды и
гликосфинголипиды. Сфинголипиды, также как и глицерофосфолипиды,
являются важными мембранными компонентами.
Фосфосфинголипиды имеют такие же полярные головки, как и
глицерофосфолипиды, а их гидрофобная часть представлена церамидом. В
плазматических мембранах животных клеток широко распространен
сфингомиелин (церамид-1-фосфорилхолин). Основными жирнокислотными
компонентами в миелине являются кислоты 24:1 и 24:0.

79
 Структура Название

H Церамид (Сеr)
Фосфосфинголипиды
O
+
CH3(CH2)12 CH CH CH OH P OCH2CH2N (CH3)3 Сфингомиелин
-
CH3(CH2)n C NH C H O
O
O CH2 O P OCH2CH2NH2 Cer-1-фосфорил-
O
- этаноламин
Гликосфинголипиды
 D Gal Галактозилцерамид
 D Glc Глюкозилцерамид
Ганглиозиды
Glc Gal NeuNAc GM3
Glc Gal GalNAc
GM2
NeuNAc
Glc Gal GalNAc Gal
GM1
NeuNAc

Рисунок 42. Структура фосфо- и гликосфинголипидов

3) Гликолипиды
Гликоглицеролипиды – это нейтральные липиды, у которых в sn-3-
положении глицерина находится углевод, присоединенный с помощью
гликозидной связи, например, галактоза (рис. 43). Гликоглицеролипиды широко
представлены в мембранах хлоропластов растений (моногалактозилдиглицерид
составляет половину от всех липидов тилакоидной мембраны), они обнаружены
также в заметных количествах в сине-зеленых водорослях и бактериях. Для
мембран грамположительных бактерий характерны гликоглицеролипиды с
большим разнообразием сахаров. В мембранах животных клеток
гликоглицеролипиды встречаются редко. Входят в состав внутренних мембран
хлоропластов (тилакоидов и ламелл), состоит из глицерина 2-х ж.к., моно- или
дисахарида. Сульфолипиды - это минорные компоненты липидов включает
глицерин, 2 ж.к., ди- или моносахарид и остаток серной кислоты.
Гликосфинголипиды содержат углеводы, присоединенные с помощью
гликозидной связи к концевой гидроксильной группе церамида (рис. 42). Их
классифицируют в соответствии с размером углеводной части, которая может
быть представлена всего лишь одним моносахаридным остатком или сложным
углеводным полимером. Моногликозилцерамиды обычно называют
цереброзидами. Среди них наиболее распространены галакто- и
глюкоцереброзиды. Цереброзиды, в отличие от фосфолипидов, являются
нейтральными липидами, они найдены в тканях животных, растений и
микроорганизмах. Ганглиозиды представляют собой класс анионных
80
гликосфинголипидов - церамид связан с олигосахаридом, в состав которого
входит один или несколько остатков сиаловой кислоты (N-ацетилнейраминовой
кислоты, NeuNAc), всего обнаружено свыше 60 ганглиозидов. Ганглиозиды
локализуются в плазматических мембранах и отвечают за контактное
торможение, адгезию, а также обладают иммунной активностью.

Структура Название
H2COH
HO O O CH2
Моногалактозилдиглицерид
CHOCOR 2
OH (МГДГ)
CH2OCOR 1

OH

H2COH
HO O

OH
O CH2 Дигалактозилдиглицерид

OH HO O O CH2 (ДГДГ)

CHOCOR 2
OH
CH2OCOR 1

OH
H2C SO3H
O

OH Сульфолипид
OH O CH2
OH CHOCOR 2
CH2OCOR 1

Рисунок 43. Гликоглицеролипиды

5.3. Состав и структура биологических мембран

Биологические мембраны – это полупроницаемые барьеры, которые
отделяет содержимое любой клетки от внешней среды, обеспечивая её
целостность, регулируют обмен между клеткой и внешней средой.
Внутриклеточные мембраны разделяют клетку на специализированные
замкнутые отсеки - органеллы, в которых поддерживаются определённые
условия среды. Возможность существования биологических мембран
обусловлена уникальной способностью фосфолипидов формировать в воде
стабильные бимолекулярные пленки.
Основными компонентами биологических мембран являются липиды и
белки. На долю углеводов может приходиться менее 10% массы мембран, при
этом они всегда входят в состав гликолипидов или гликопротеинов.
Соотношение между белками и липидами в мембранах значительно варьирует –
от 20% белка в миелиновой оболочке нервных клеток до 80% в функционально
активной внутренней мембране митохондрий. Наиболее поражает в мембранных
81
липидах их огромное разнообразие. Причины этого пока не ясны, хотя
становится все более очевидно, что, по-видимому, связано это с тем
разнообразием функций, которые липиды выполняют в мембранах. Но, конечно,
главная функция мембранных липидов состоит в том, что они формируют
бислойный матрикс, с которым взаимодействуют белки.
Кроме липидов биологическая мембрана включает и различные белки: 1)
интегральные – пронизывающие мембрану насквозь и 2) периферические –
расположенные на внешней или прилегающие к внутренней стороне мембраны
(рис. 44). Некоторые белки являются точками контакта клеточной мембраны с
цитоскелетом внутри клетки или клеточной стенкой снаружи. Интегральные
белки выполняют функцию ионных каналов, различных транспортеров,
ферментов и рецепторов.

Рисунок 44. Строение биологической мембраны

Cтруктурообразование липидов в водной среде

Липиды в зависимости от своего строения могут образовывать в водной
среде агрегаты различного строения – монослои, мицеллы, бимолекулярные
ламеллярные (слоистые) и замкнутые структуры (липосомы) (рис. 45).
Основной движущей силой образования липидных агрегатов в водной среде
являются гидрофобные взаимодействия – это специфический эффект,
проявляющийся в водных средах при наличии в молекулах гидрофобных групп.
Контакт с молекулами воды гидрофобных радикалов «невыгоден» молекулам
воды, которые образуют водородные связи между собой и другими
82
гидрофильными группами в растворе. Поэтому в водном растворе
термодинамически более выгодным является объединение гидрофобных
радикалов в агрегаты для сведения к минимуму их контактов с водой.
К другим факторам, стабилизирующим гидратированные липидные
агрегаты, относятся:
- Ван-дер-ваальсовы силы – это слабые короткодействующие силы притяжения
между соседними гидрофобными цепями. Притяжение возникает за счет
взаимодействия между индуцированными диполями.
- Водородные связи между полярными головками некоторых липидов (например,
между молекулами ФЭА). В ряде случаев мостики между отрицательно
заряженными липидами образуются с помощью двухвалентных катионов.
Однако все эти силы по своей стабилизирующей способности значительно
уступают гидрофобным взаимодействиям.

Рисунок 45. Липидные агрегаты в воде (бислои и липосомы)

Если поместить амфифильные соединения в водную среду, их молекулы

образуют агрегаты – мицеллы, в которых полярные головки липидов обращены
наружу, а неполярные углеводородные цепи направлены внутрь. В неполярной
среде мицеллы оказываются вывернутыми наизнанку, такие мицеллы называют
обращенными. К образованию мицелл более склонны не фосфолипиды, а
жирные кислоты, имеющие только один гидрофобный «хвост» – мицеллы
получаются, например, при растворении мыла в воде. Фосфолипиды чаще
образуют другую структуру – липидный бислой. Липидный бислой –
структурная основа биологических мембран клетки. Термин «липосомы»
относится к любым липидным бислойным структурам, имеющим внутреннее
водное содержимое (рис. 45). Многие фосфолипиды при диспергировании в воде
самопроизвольно образуют гетерогенную смесь везикулярных структур,
состоящих из нескольких бислойных концентрических оболочек. Липосомы
используют как модельные системы, в которые можно встраивать различные
белки, а также для создания систем доставки лекарственных препаратов.
83
Большой интерес представляют моноламеллярные везикулы, т.е. липосомы,
образованные одинарным бислоем. Их подразделяют на малые
моноламеллярные везикулы (ММВ) с диаметром от 200 до 500 Ǻ и большие
моноламеллярные везикулы (БМВ) с диаметром от 500 до 5000 Ǻ.

Структура биологических мембран

Основу всех биологических мембран клетки (плазматической и мембран
клеточных органелл) составляет липидный бимолекулярный слой (сокращенно -
бислой). Общая структура мембраны показана на рис. 44. В составе бислоя
молекулы фосфолипидов располагаются в два ряда: полярные «головки» будут
обращены к воде, а гидрофобные «хвосты» упрятаны внутрь. Характерный
признак липидов, которые образуют бислой – исключительно низкая
критическая константа мицеллообразования – около 10-10М. Толщина липидного
бислоя определяется длиной углеводородных цепей и составляет 4-5 нм, но
зависит от плотности упаковки липидных молекул в бислое. Липидный бислой
составляет основу всех клеточных мембран.
В настоящее время общепризнанной моделью строения биомембран
является жидкостно-мозаичная модель Сингера и Николсона (1972 г.), однако,
следует помнить, что она представляет собой упрощенное и схематичное
отражение столь сложной и разносторонней системы, как биологическая
мембрана.
Согласно жидкостно-мозаичной модели:
1) Структурной основой биомембран является липидный бислой, в котором
углеводородные цепи молекул фосфолипидов находятся в жидко-
кристаллическом состоянии.
2) В липидный бислой, имеющий вязкость растительного масла, погружены или
встроены молекулы белков, способные передвигаться по мембране.
В противоположность более ранним моделям, рассматривающим мембраны
как системы из жестко фиксированных компонентов, жидкостно-мозаичная
модель представляет мембрану как "море" жидких липидов, в котором плавают
"айсберги" белков. В зависимости от прочности связи с мембраной белки в
рамках мозаичной модели подразделяются на два типа: периферические и
интегральные. Для выполнения векторных функций клеточные мембраны
должны быть обладать свойством асимметрии, т.е. наружная и внутренняя
стороны мембраны должны отличаться по составу образующих их компонентов.
В создании этой асимметрии участвуют как белковые, так и липидные
компоненты мембраны: асимметрия белков является абсолютной, а липидов –
относительной.

84
 Особенности мембранных белков
1) Периферические белки связаны с мембраной за счет полярных и ионных
взаимодействий (рис. 46), они относительно легко отделяются от нее в мягких
условиях, например, при промывании буферными растворами с различными
значениями рН или ионной силы, либо растворами, содержащими
комплексообразующие вещества типа ЭДТА.
2) Интегральные белки
имеют на своей
поверхности большие
гидрофобные участки и
располагаются внутри
мембраны (рис. 46). Для
выделения таких белков
необходимо сначала
разрушить липидный
бислой.

Рисунок 46. Интегральные и периферические мембранные белки

5.4. Биологические функции клеточных мембран

Основные функции биологических мембран в клетке состоят в следующем:
1. Защитная функция для клеток и внутриклеточных органелл – мембраны
обеспечивают физическую и химическую защиту от внешнего окружения.
Целостность плазматической мембраны важна для поддержания необходимого
баланса веществ между внутренними отделами клетки и внешней средой.
2. Избирательный транспорт различных веществ внутрь клетки и из нее
обеспечивает заданный состав внутриклеточной среды и поддерживает
клеточный гомеостаз (постоянство концентрации веществ и физиологических
параметров клеточной среды).
Процессы избирательного транспорта различных ионов и клеточных
метаболитов осуществляются при помощи трёх основных механизмов:
пассивный транспорт (простая диффузия и облегчённая диффузия) и активный
транспорт. При пассивном транспорте вещества пересекают липидный бислой
без затрат энергии по градиенту концентрации (градиент концентрации
указывает направление увеличения концентрации) путём диффузии. Вариантом
этого механизма является облегчённая диффузия, при которой веществу
помогает пройти через мембрану какая-либо специфическая молекула. У этой
молекулы может быть белковый канал, пропускающий вещества только одного
85
типа. Активный транспорт требует затрат энергии, так как происходит против
градиента концентрации. В мембранах существуют специальные белки-насосы,
в том числе Na+, K+-зависимая АТФ-аза, которая активно накачивает в клетку
ионы калия и выкачивает из неё ионы натрия.
Перенос через мембраны крупных биомолекул (белков) и клеточных частиц
– это везикулярный транспорт: крупные молекулы и частицы переносятся в
составе мембранных пузырьков (везикул) и высвобождаются путем слияния с
клеточной мембраной. Проникновение везикул внутрь клетки называют
эндоцитозом, а их выход из клетки наружу – экзоцитозом. Путем эндоцитоза
(фагоцитоза) клетки могут поглощать большие частицы, такие как вирусы,
бактерии или обломки клеток. Захват больших частиц осуществляется в
основном специализированными клетками - фагоцитами. Поглощение жидкости
и растворённых в ней веществ с помощью небольших пузырьков называют
пиноцитозом.
3. Передача информации посредством гормонов, медиаторов и нервного
импульса – это восприятие внеклеточных сигналов и передача этих сигналов
внутрь клетки с помощью вспомогательных белков (G-белков) и вторичных
посредников (мессенджеров) для получения клеточного ответа (в виде
изменения активности определенных белков или активности генов), а также
формирование сигналов. Первым компонентом системы передачи сигнала в
клетку является рецептор, который обычно представляет собой интегральный
белок (рис. 47). На поверхности мембраны он имеет своеобразное «приемное
устройство», способное распознавать сигнал и взаимодействовать с ним.

Рисунок 47. Типы мембранных белков-рецепторов

86
При этом важно, что сам сигнал, будь это химическое вещество (гормон) или
квант света, обычно не проникает внутрь клетки, а преобразуется в результате
модификации мембранных белков, которая приводит к активации молекул
посредников – вторичных мессенджеров.
В общем виде передача сигнала через мембрану может быть сведена к трем
основным стадиям:
1) взаимодействие рецептора с сигналом;
2) конформационная перестройка и изменение функции специализированных
мембранных белков-посредников;
3) активация вторичных мессенджеров – сравнительно небольших молекул и
ионов, диффузия которых в клетке к определенным субклеточным структурам
обеспечивает стремительное распространение сигнала и формирование
клеточного ответа.
4. Преобразование энергии с участием мембран – в мембранных структурах
происходят такие важнейшие процессы превращения энергии, как фотосинтез и
окислительное фосфорилирование у эукариотов, которое завершается
биосинтезом АТФ на внутренних мембранах митохондрий за счет энергии
трансмембранного градиента концентраций протонов (см. гл. 7).
5. Молекулярное узнавание других клеток и различных лигандов, в котором
участвуют белки-рецепторы, белки иммунной системы и др.
6. Ферментативная деятельность мембран – в мембранах (на границе между
липидной и водной средами) находятся важные ферменты.

Вопросы для текущего контроля знаний студентов по разделу 5:

1. Назовите основные компоненты, входящие в состав природных липидов.
2. В чем особенности жирнокислотного состава липидов?
3. Какие вы знаете самые распространенные жирные кислоты?
4. На чем основана классификация липидов?
5. Опишите функции неполярных липидов.
6. Какие липиды относят к полярным? В чем их основные функции?
7. Назовите общие функции (характеристики) мембранных липидов.
8.Что является движущей силой образования липидных агрегатов в воде?
9. Назовите основные положения жидкостно-мозаичной модели.
10. Сравните асимметрию белков и липидов в мембранах.
11. Что является недостатком жидкостно-мозаичной модели?
12. Назовите функции биологических мембран
13. Опишите известные вам функции биологических мембран
14. Опишите процессы избирательного транспорта в мембранах.
15. Каковы основные принципы передачи сигнала через биомембраны?
87
 6. Углеводы
Углеводами называют природные карбонильные соединения, содержащие
несколько гидроксильных групп. В зависимости от количества мономерных
структурных звеньев различают три основных класса углеводов: моносахариды,
олигосахариды и полисахариды.
Основные биологические функции углеводов:
1) Источники энергии и атомов углерода для клеток (процесс фотосинтеза у
растений как источник углеводов: СО2 + Н2О → (СН2О)n ).
2) Структурные и опорные элементы клеток растений, животных и
микроорганизмов (целлюлоза, хитин, пептидогликаны).
3) Компоненты соединительной ткани (протеогликаны хрящей, сухожилий,
кожи, синовиальной жидкости).
4) Определяют биологическую специфичность поверхности животных клеток
(мембранные гликопротеины).

6.1. Химическая структура, классификация и стереохимия

углеводов
По химическому строению углеводы являются полигидроксиальдегидами
или полигидроксикетонами, либо образуют эти вещества в результате гидролиза.

6.1.1. Моносахариды
Моносахариды (простые сахара) содержат только одну структурную
единицу полигидроксиальдегида или полигидроксикетона. Классификация
моносахаридов основана на количестве атомов углерода в молекуле, а также на
химической природе карбонильной группы. Общая эмпирическая формула
моносахаридов (СН2О)n, n≥3.
Существуют два семейства моносахаридов: альдозы (содержат
альдегидную группу) и кетозы (содержат кето-группу). Они являются
бесцветными, твердыми кристаллическими веществами, сладкими на вкус,
растворимыми в воде и нерастворимыми в неполярных растворителях.
К простым сахарам относятся две треозы: глицеральдегид (альдоза) и
дигидроксиацетон (кетоза):

88
 Глицеральдегид Дигидроксиацетон

Моносахариды, углеродный скелет которых состоит из 4, 5, 6 и 7 атомов

углерода называют, соответственно, тетрозами, пентозами, гексозами и
гептозами. Каждый из таких моносахаридов может существовать в двух формах,
образуя альдотетрозы и кетотетрозы, альдопентозы и кетопентозы и т.д.
Наиболее широко распространены в природе простые сахара - гексозы, а именно,
альдогексоза D-глюкоза и кетогексоза D-фруктоза:

D-глюкоза D-фруктоза

Стереохимия природных моносахаридов

Практически все моносахариды (за исключением дигидроксиацетона)
являются оптически активными соединениями, так как имеют один или более
хиральных центров. Однако из-за того, что большинство альдоз имеют
несколько асимметрических центров, принято, что обозначения D- и L-
указывают на конфигурацию асимметрического атома углерода, максимально
удаленного от атома карбонильной группы. Если гидроксильная группа при
асимметрическом атоме углерода в проекционной формуле находится справа, то
моносахарид относится к D-ряду, если слева – к L-ряду.
Выше приведены открытые формы альдоз и кетоз. В такой форме в
растворах существуют только треозы и тетрозы. Моносахариды, скелет которых
состоит из 5 и больше атомов углерода, в водном растворе существуют в
циклической форме: карбонильная группа находится не в свободном состоянии,
89
а образует ковалентную связь с одной из гидроксильных групп с образованием
полуацеталя. Такие циклические соединения из-за их сходства с шестичленным
соединением пираном назвали пиранозами. Соответственно, циклическая D-
глюкоза будет называться D-глюкопиранозой. В подобных соединениях первый
(полуацетальный) углеродный атом является асимметрическим, поэтому D-
глюкопираноза может существовать в двух формах: α и β. Изомерные формы
моносахаридов, отличающиеся друг от друга только конфигурацией
полуацетального углеродного атома (β-D-глюкопираноза и α-D-глюкопираноза),
называются аномерами, а асимметрический центр – аномерный центр (рис.48).
Для изображения цикличиеских форм моносахаридов обычно используют
формулы Хеуорса:

α-D-глюкопираноза β-D-глюкопираноза

При растворении циклического моносахарида возможны изменения

оптической активности, т.е. переход α-аномера в β-аномер и наоборот – это
явление носит название мутаротация (рис. 48).

Рисунок 48. Явление мутаротации моносахаридов

90
Кетогексозы также присутствуют в виде α- и β-аномеров. D-фруктоза образует
два фуранозных (пятичленных) кольца. Здесь аномерным центром является
второй углеродный атом.

α-D-фруктофураноза β-D-фруктофураноза

Биологическая роль моносахаридов

Природные моносахариды присутствуют в клетках как в свободной форме,
так и служат мономерными звеньями для построения более крупных молекул и
молекул-биополимеров – полисахаридов, нуклеиновых кислот, протеогликанов.
К примеру, D-рибоза входит в состав коферментов нуклеотидной природы и
самой молекулы РНК. Самой важной альдогексозой является D-глюкоза:
полимеры глюкозы - крахмал и целлюлоза составляют значительную часть всей
растительной биомассы на Земле. В свободном виде D-глюкоза содержится во
фруктовых соках, в крови человека и животных, играя важную роль в
метаболизме — это первичный источник энергии для клеток. D-галактоза
является компонентом лактозы (молочного сахара). Кетогексоза D-фруктоза
также часто встречается в свободной форме, а в связанном виде входит в состав
сахарозы и растительных полисахаридов, например, инулина.

6.1.2. Олигосахариды
Олигосахариды состоят из нескольких остатков моносахаридов (более 2-х),
соединенных друг с другом О-гликозидной связью. Самыми распространенными
являются дисахариды, состоящие из двух остатков моносахаридов, ковалентно
связанных между собой при помощи О-гликозидной связи. Эта связь образуется
в результате взаимодействия гидроксильной группы одного моносахарида с
гидроксильной группой при аномерном центре другого остатка сахара. Такие
связи легко гидролизуются в кислой среде, но они устойчивы к основаниям. В
природе широко распространенными дисахаридами являются мальтоза,
лактоза и сахароза. Мальтоза содержит в своей структуре два остатка D-
глюкозы: аномерный центр одного остатка связан с четвертым атомом углерода
другого:

91
 Мальтоза
У мальтозы аномерный атом углерода в гликозидной связи между двумя
остатками D-глюкозы имеет α-конфигурацию. Записывается она,
соответственно, как α(1→4). Как и во всех гликозидах, мутаротация в
дисахаридах невозможна.
Лактоза содержит остатки D-галактозы и D-глюкозы:

Лактоза (молочный сахар)

В молекуле сахарозы присутствуют остатки D-глюкозы и D-фруктозы:

Сахароза

Биологическая роль олигосахаридов

В свободном виде встречаются только дисахариды. Так, сахароза
используется растениями для транспортировки и запасания углеводов в
растворимой форме. Сахароза ценится за сладкий вкус как питательное
вещество. При гидролизе сахарозы из цветочного нектара с помощью фермента
инвертазы пчелы производят мед, представляющий собой смесь глюкозы и
фруктозы. Олигосахариды входят в состав более крупных молекул –
гликопротеинов, определяющих биологическую специфичность поверхности
животных клеток (мембранные гликопротеины) и протеогликанов -

92
компонентов соединительной ткани (протеогликаны хрящей, сухожилий, кожи,
синовиальной жидкости).

6.2. Полисахариды растений, млекопитающих и членистоногих и их

биологические функции
В природе большинство углеводов представлены в виде полисахаридов,
имеющих большую молекулярную массу. Полисахариды (гликаны) отличаются
друг от друга как природой составляющих их моносахаридных остатков, так и
длиной и степенью разветвленности цепей. Их можно разделить на 2 типа:
гомополисахариды (состоят из остатков одного и того же моносахарида) и
гетерополисахариды (состоят из 2-х и более различных остатков
моносахаридов).
Биологическое значение ряда полисахаридов состоит в том, что они
обеспечивают накопление моносахаридов в живых организмах, другие же
служат структурными элементами клеточных стенок и соединительной ткани.
Структурные полисахариды обеспечивают клеткам, тканям и организмам в
целом механическую прочность. Водорастворимые полисахариды активно
связывают воду и предохраняют клетки и ткани от высыхания. Резервные
полисахариды выполняют функцию хранения углеводов, высвобождая по мере
необходимости нужные организму моносахариды.
Примеры некоторых полисахаридов
1) Крахмал - является резервным полисахаридом растений.
Крахмал откладывается в форме микроскопических гранул в специальных
органеллах - амилопластах. Крахмальные гранулы практически не растворяются
в холодной воде, однако они сильно набухают в воде при нагревании. При
продолжительном кипячении примерно 15-25 % крахмала переходит в раствор
в виде коллоида. Полисахарид крахмал является смесью из двух полимеров: α-
амилозы и амилопектина.
α-Амилоза состоит из неразветвленных цепей D-глюкозы, включающих 200-300
остатков глюкозы, соединенных друг с другом α(1→4)-гликозидными связями.
Молекулярная масса α-амилозы колеблется от нескольких тысяч до 500 000.
Благодаря α-конфигурации при C-1 атоме, цепи образуют спираль, в которой на
один виток приходится 6-8 остатков глюкозы. Синяя окраска растворимого
крахмала при добавлении йода (йод-крахмальная реакция) связана с
присутствием такой спирали. Атомы йода образуют цепочку вдоль оси спирали
и в этом преимущественно неводном окружении приобретают темно-синюю
окраску. Сильно разветвлённые полисахариды, такие, как амилопектин или

93
гликоген, окрашиваются в присутствии йода в коричневый или красно-
коричневый цвет.

Амилопектин также имеет большую молекулярную массу, но состоит из

разветвленных цепей. В неразветвленных участках остатки D-глюкозы
соединены α(1→4)-гликозидными связями, а в местах разветвления – связями
α(1→6). В отличие от амилозы практически нерастворимый в воде амилопектин
имеет разветвлённую структуру. В среднем, один из 20-25 остатков глюкозы
содержит боковую цепь, присоединённую в положении α(1→6). При этом
формируется древовидная структура, в которой, как и в амилозе, имеется лишь
одна свободная аномерная OH-группа. Молекула амилопектина может включать
сотни тысяч остатков глюкозы и иметь молекулярную массу порядка 108 кДа.

В водном растворе при добавлении кислоты в качестве катализатора

(разбавл. H2SO4 и др.), крахмал постепенно гидролизуется с уменьшением
молекулярной массы, с образованием т.н. «растворимого крахмала» -
декстринов, вплоть до глюкозы. В организме крахмал гидролизуется
ферментами: α–амилазой (связи α (1→4) ) и глюкозидазой (связи α (1→6)).
Биосинтез крахмала: часть глюкозы, образующейся в зелёных растениях
при фотосинтезе, превращается в крахмал:
6CO2 + 6H2O → C6H12O6 + 6O2
nC6H12O6 (глюкоза) → (C6H10O5)n + nH2O
В общем виде это можно записать: 6nCO2 + 5nH2O → (C6H10O5)n+ 6nO2.
Крахмал в качестве резервного питания накапливается в клубнях, плодах,
семенах растений. Так, в наиболее часто используемых для производства
94
крахмала растениях содержится: в клубнях картофеля до 24 % крахмала, в зёрнах
пшеницы – до 64 %, риса – 75 %, кукурузы – 70 %.
Применение крахмала: крахмал – самый важный углевод в рационе питания
человека; в пищевой промышленности его используют для получения глюкозы,
патоки, этанола, в текстильной – для обработки тканей, в бумажной – в качестве
наполнителя. Кроме того, крахмал входит в состав большинства колбас,
майонеза, кетчупа и пр. В мире наибольшее применение крахмал нашёл в
целлюлозо-бумажной промышленности, модифицированный крахмал является
основным компонентом клея для обоев.
В медицинской практике крахмал употребляется в смеси с другими веществами
для приготовления присыпок, мазей (гидрофильная основа мазей – гели
крахмала), в хирургии – для наложения неподвижных повязок.

2) Гликоген – основной резервный полисахарид животных; содержится, в

основном, в печени, а также в скелетных мышцах. Гликоген, как и амилопектин,
состоит из разветвленных цепей глюкозы, соединенных α(1→4) и α(1→6)
гликозидными связями, но он является значительно более разветвленным и
компактным биополимером.
Благодаря геометрическим особенностям α(1→4)-гликозидных связей,
молекулы α-амилозы, амилопектина и гликогена стремятся приобрести
скрученную, спиральную конформацию, что способствует образованию
крупных гранул, что и наблюдается в животных и растительных клетках (рис.
49). Также такая связь легко гидролизуется α-амилазой. Образовавшаяся в
результате глюкоза попадает в кровь и далее участвует в энергетическом обмене.

Рисунок 49. Структура гликогена: А) Пространственная упаковка;

Б) Фрагмент химической структуры

95
 3) Целлюлоза – структурный полисахарид, который содержится в стенках
клеток растений (в основном, в стеблях, стволах и других деревянистых частях
растений), это самый распространенный в природе полисахарид.
Целлюлоза – это линейный гомополисахарид, состоящий из 10 000 и более
остатков D-глюкозы, соединенных β(1→4)-гликозидными связями. Благодаря
такой конфигурации связи цепи целлюлозы сильно вытянуты и соединяются
друг с другом бок о бок, образую нерастворимые фибриллы. β(1→4)-
гликозидные связи не гидролизуются ферментом α-амилазой. Из-за отсутствия в
пищеварительной системе животных фермента, расщепляющего целлюлозу (за
исключением некоторых представителей насекомых и млекопитающих), она не
может служить источником глюкозы для организма. Зарегистрирована в
качестве пищевой добавки E460.

Структурное звено целлюлозы

В клеточных стенках растений целлюлоза составляет 40-50%, а в таком

важнейшем сырье, как хлопковое волокно – 98%. Молекулы целлюлозы
содержат не менее 104 остатков глюкозы [мол. масса (1-2)×106 Да] и могут
достигать в длину 6-8 мкм. Целлюлоза – это белое твердое, стойкое вещество, не
разрушается при нагревании (до 200 °C), она является горючим веществом,
температура воспламенения 275 °С, температура самовоспламенения 420 °С
(хлопковая целлюлоза). Растворима в сравнительно ограниченном числе
растворителей.
Целлюлоза представляет собой длинные нити, содержащие 300-10000
остатков глюкозы, без боковых ответвлений. Эти нити соединены между собой
множеством водородных связей, что придает целлюлозе большую
механическую прочность, при сохранении эластичности (рис. 50). Природная
целлюлоза обладает высокой механической прочностью, устойчива к
химическому и ферментативному гидролизу. Эти свойства связаны с
конформацией молекул и особенностями надмолекулярной организации.
Неразветвлённые связи типа β(1→4) приводят к образованию линейных цепей,
которые стабилизированы внутри- и межцепочечными водородными мостиками.
96
Уже в процессе биосинтеза ассоциаты из 10-100 молекул объединяются в
элементарные фибриллы диаметром около 4 нм. Примерно 20 таких
элементарных фибрилл формируют микрофибриллу, которая видна под
электронным микроскопом. Связи β (1→4) в целлюлозе расщепляются
ферментом целлюлазой (микроорганизмы, простейшие, грибы).
Целлюлозные микрофибриллы образуют основной каркас первичной оболочки
растущих растительных клеток. Здесь они образуют сложную сетку в комплексе
с другими полисахаридами.
Связанные сахариды
включают гемицеллюлозу -
смесь преимущественно
нейтральных гетерогликанов
(ксилана, ксилогликана,
галактана и др.).
Гемицеллюлоза ассоциирует
с целлюлозными фибриллами
за счёт нековапентных
связей.

Рисунок 50. Пространственная структура целлюлозы

Эти комплексы связываются с нейтральными и кислыми пектинами,

построенными в основном из галактуроновй кислоты. Наконец, в образовании
первичной оболочки принимает участие коллагеноподобный белок.
Применение целлюлозы: высшие животные не могут усваивать целлюлозу,
однако целлюлоза представляет интерес как инертный наполнитель. Целлюлозу
и её эфиры используют для получения искусственного волокна (вискозного,
ацетатного, медно-аммиачного шёлка, искусственного меха). Хлопок,
состоящий большей частью из целлюлозы (до 99.5 %), идёт на изготовление
тканей. Древесная целлюлоза используется для производства бумаги, пластмасс,
кино- и фотоплёнок, лаков, бездымного пороха и т. д
Микрокристаллическая целлюлоза нашла применение в медицине как средство
для снижения веса – МКЦ.

4) Хитин – структурный полисахарид, из которого построены

панцири, экзоскелеты омаров, крабов и многих насекомых. Является линейным
97
гомополисахаридом, состоящим из остатков N-ацетил-D-глюкозамина,
соединенных β(1→4)-гликозидными связями. Цепи хитина формируют
слоистую структуру, подобную целлюлозе, но межцепочечные связи более
прочные. Полисахаридные цепи перемежаются слоями белка и образуется очень
твердая оболочка.

Структурное звено хитина

5) Гиалуроновая кислота – глюкозаминогликан межклеточного

основного вещества тканей животных. Структурное звено состоит из
соединенных друг с другом остатков D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-
глюкозамина. Гиалуроновая кислота образует очень вязкие, гелеобразные
растворы.

6) Хондроитинсульфат – основной полисахарид протеогликанов

хряща, содержит чередующиеся остатки D-глюкуроновой кислоты и N-
ацетил-D-галактозамина.

98
 6.3. Гликоконъюгаты – структура и биологические функции
Олиго- и полисахариды играют важную роль не только в сохранении
энергии в клетке (крахмал, гликоген) и выполняют структурные функции
(целлюлоза, хитин), но и участвуют в передаче информации в клетках. В
большинстве случае информационные углеводы связаны ковалентной связью с
белками или липидами, образуя биологически активные гликоконъюгаты -
гликопротеины, протеогликаны, гликолипиды. Так, некоторые сахара являются
медиаторами специфических взаимодействий клеток между собой и с
внеклеиточным матриксом, являются метками для внутриклеточного транспорта
белков, служат сайтами узнавания в составе мембранных рецепторов для
внеклеточных сигнальных молекул и др. На поверхности почти каждой
эукариотической клетки располагаются специфические цепочки
олигосахаридов, прикрепленные к плазматической мембране, они образуют
углеводный слой – гликокаликс толщиной в несколько нм, который несет
множество информации о клетке для ее окружения. Такие олигосахариды играют
важную роль в процессах клеточного узнавания, адгезии и перемещения клеток
в период их созревания, в свертывании крови, иммунном ответе, заживлении ран
и многих других. Систематикой и характеризацией всех углеводных
компонентов определенной клетки или ткани, в т.ч. и тех, которые связаны с
белками и липидами, занимается область биохимии, называемая гликомикой.
Современные методы определения углеводного состава клетки в значительной
степени определяются возможностями масс-спектрометрии.
Протеогликаны - это макромолекулы, находящиеся на поверхности клеток
или во внеклеточном матриксе, они представляют собой гигантские
молекулярные комплексы с молекулярной массой 2.106 Да, состоящие из
углеводов (около 95%) и белков (около 5%). Они имеют форму «ершика», ось
которого состоит из полисахарида – гиалуроната с размером до 50 000
повторяющихся дисахаридных звеньев. К этой вытянутой цепочке
присоединены так называемые коровые белки (от англ. core – ядро), от которых
отходят олигосахаридные цепи гликозаминогликанов (гепарансульфат,
хондроитинсульфат, кератансульфат) (рис. 51). Прикрепление
гликозаминогликана к белку происходит у остатка серина через трисахаридный
мостик.
Внеклеточный матрикс состоит в основном из белков и полисахаридов,
секретируемых близлежащими клетками и образующих сложную сеть,
связанную с поверхностью этих клеток; его основным предназначением является
удержание вместе клеток внутри тканей. Матрикс включает в себя
99
стабилизирующие фибриллярные белки, адгезионные белки перекрестных
сшивок, уплотняющие протеогликаны и рецепторы клеточной поверхности.
Внеклеточный матрикс выполняет множество функций: механическую связь
между клетками, обеспечивает структуру (прочность, эластичность, форму)
костей, хрящей, сухожилий и суставов, разделяет ткани и клетки, обеспечивает
пути миграции клеток. Наибольшей прочностью отличается внеклеточный
матрикс таких типов соединительной ткани, как кости, связки и сухожилия.

Рисунок 51. Протеогликаны внеклеточного матрикса

Благодаря наличию множества карбоксильных и сульфатных групп

протеогликаны несут большой отрицательный заряд и способны связывать
многочисленные ионы и воду. Гидратированные молекулы протеогликанов
заполняют свободное пространство внеклеточного матрикса, образуя гидрогели.
Однако протеогликаны выполняют не только механическую (структурную)
функцию, но и оказывают влияние на такие важные процессы в клетке, как
активация факторов роста и клеточная адгезия. Цепи гликозаминогликана могут
связываться с различными внеклеточными лигандами и тем самым
модулировать взаимодействие лиганда со специфическим рецептором на
поверхности клетки.
Гликопротеины – это белки с ковалентно присоединенными к ним одним
или несколькими олигосахаридами разной сложности. Углеводы могут быть
присоединены через свой аномерный атом углерода к ОН-группе аминокислот
серина (Ser) или треонина (Thr) – это О-гликозидная связь, либо связаны с
амидным азотом остатка аспарагина (Asn) – это N-гликозидная связь.
Углеводная часть может достигать до 70% массы гликопротеина.
100
Многие белки, секретируемые клетками эукариот, в т.ч., большинство белков
крови, представляют собой гликопротеины. Белки иммунной системы –
иммуноглобулины (антитела), некоторые гормоны (фолликулостимулирующий,
лютеинизирующий и др.), белки молока (лактальбумин), рибонуклеазы содержат
олигосахаридные цепи. Мембранные гликопротеины определяют
биологическую специфичность поверхности животных клеток, отвечают за
процессы межмолекулярного узнавания. На внешней поверхности
плазматической мембраны сосредоточено множество интегральных
мембранных белков с олигосахаридными цепями различного строения (рис. 44,
46). Олигосахариды несут в себе «сахарный код», определяя специфичность 4-х
групп крови.
При гликозилировании белков достигаются многие «биологические
преимущества»: гидрофильные углеводные кластеры изменяют полярность и
растворимость белков-гликопротеинов; служат для биологического нацеливания
вновь секретируемого в ЭПР белка – указывают место его назначения после
модификации в комплексе Гольджи; большие размеры и отрицательный заряд
олигосахаридных цепей предохраняют некоторые белки от действия
протеолитических ферментов. Важная роль гликозилирования белков
доказывается еще и тем, что 18 различных наследственных (генетических)
нарушений гликозилирования у человека связаны с тяжелыми патологиями или
фатальны.
Гликолипиды – мембранные сфинголипиды, гидрофильная головка
которых образована олигосахаридами, которые, как и в случае гликопротеинов,
служат специфическими участками узнавания белков лектинов. Гликолипиды
задействованы в передаче клеточных сигналов, их много в мозге и нервной
ткани.

Вопросы для текущего контроля знаний студентов по разделу 6:

1. Назовите общие структурные особенности класса углеводов.
2. Изобразите открытые и циклические формулы моносахаридов.
3. Опишите классификацию углеводов.
4. Назовите особенности и функции в клетке олигосахаридов.
5. Назовите основных представителей полисахаридов.
6. Опишите свойства и функции структурных и резервных полисахаридов.

101
7. Метаболизм клетки

7.1. Общие определения. Метаболитические пути: катаболизм и

анаболизм
Во всех клетках организма одновременно протекают сотни химических
реакций, которые называют обменом веществ или метаболизмом. Метаболизм
– это совокупность всех биохимических реакций в организме. Химические
вещества, принимающие участие в этих реакциях, называют метаболитами.
Метаболизм представляет собой высоко координированную и
целенаправленную клеточную активность, которая обеспечивается участием
многих взаимосвязанных мультиферментных систем (от 2 до 20 ферментов в
системе).
Функции клеточного метаболизма:
1. Снабжение клеток химической энергией (источник энергии - расщепление
питательных веществ, фотосинтез).
2. Превращение молекул пищевых веществ в молекулы-строительные блоки для
биосинтеза новых биомакромолекул.
3. Сборка биомакромолекул (белки, НК, углеводы, липиды) и других клеточных
компонентов из молекул-строительных блоков.
4. Синтез и разрушение биомолекул для выполнения каких-либо специфических
функций.

Важным для метаболических процессов является их ступенчатость и

conряженность. Биохимические реакции в клетке протекают, как правило, в
несколько стадий, например, окисление углеводов в процессе дыхания до СО 2 и
Н2О идет ступенчато, более чем в 20 стадий. При этом, эти реакции
взаимозависимы, сопряжены между собой: продукты каждой предыдущей
стадии являются исходными соединениями для последующей.
Метаболизм слагается из сотен различных ферментативных реакций, но его
центральные пути немногочисленны и, в принципе, едины почти у всех живых
форм. Эти метаболические пути, необходимые для синтеза, расщепления и
взаимного превращения важных метаболитов, а также для превращения энергии,
называют промежуточным метаболизмом.
Автотрофные и гетеротрофные организмы
Для нормальной жизнедеятельности клетки нуждаются в органических и
неорганических питательных веществах и в энергии. Все живые организмы по
способу питания и получения энергии разделяют на 2 большие группы:

102
1) Автотрофы (сами себя питающие) – усваивают СО2 из атмосферы
(фотосинтетические бактерии и зеленые растения)
2) Гетеротрофы (питающиеся за счет других) – аэробы и анаэробы
(нефотосинтезирующие бактерии и все высшие животные).

В биосфере автотрофы и
гетеротрофы сосуществуют как
участники единого гигантского
цикла – круговорота С и О2 между
животным и растительным миром,
где источником энергии служит
солнечный свет (рис. 52).

Рисунок 52. Автотрофы и гетеротрофы: круговорот С и О2

Метаболитические пути: катаболизм и анаболизм

Метаболизм слагается из сотен различных ферментативных реакций, но его
центральные пути едины почти у всех живых форм, а образуемые метаболиты
называются ключевыми, так как через них осуществляется взаимосвязь между
различными веществами в организме.
Промежуточный метаболизм складывается из 2-х составляющих:
1) Катаболизм (диссимиляция) – это процессы метаболического распада
сложных органических веществ до более простых.
Катаболические реакции – это реакции расщепления (гидролиза) и окисления.
Крупные органические молекулы расщепляются до простых веществ с
одновременным выделением содержащейся в них химической энергии, которая
в основном запасается клеткой в форме АТФ (аденозинтрифосфата) и затем
используется в процессах жизнедеятельности.
2) Анаболизм (процессы биосинтеза, ассимиляция) – процессы синтеза
сложных органических веществ из простых.
Анаболuческие реакции – это восстановительные процессы реакции и
осуществляются они с затратой энергии.
Благодаря разной локализации ферментов катаболизма и анаболизма
катаболические и анаболические пути протекают в клетке одновременно, но их
скорости регулируются независимо. Катаболические процессы распада
биомолекул связаны с высвобождением свободной энергии, которая запасается
103
в виде АТФ и НАДФ. Анаболизм (биосинтез макромолекул) требует затрат
свободной энергии.
Связь катаболизма и анаболизма осуществляется на 3-х уровнях (рис. 53,
54):
1. На уровне источников углерода (продукты катаболизма могут быть
исходными субстратами в анаболических реакциях).
2. На энергетическом уровне (при катаболизме образуется АТФ
и другие высокоэнергетические соединения, анаболические процессы
потребляют их).
3. На уровне восстановительных эквивалентов (реакции катаболизма –
окислительные, анаболизма – восстановительные).

Все метаболические пути находятся в клетках под строгим контролем.

Все превращения метаболита в том
или ином метаболическом пути
определяются в первую очередь
активностью работающих на этом
участке ферментов. Обычно в
клетке осуществляется регуляция
работы фермента,
катализирующего самую
медленную стадию процесса.

Рисунок 53. Энергетическая взаимосвязь между катаболизмом и анаболизмом

К основным механизмам регуляции метаболизма относятся: регуляция

транскрипции ключевых ферментов на генетическом уровне,
взаимопревращения ферментов, компартментализация фермента (перемещение
фермента в другую органеллу), модуляция фермента лигандом (в т.ч.
ингибирование фермента по принципу обратной связи).

7.2. Центральные метаболитические пути в клетке

Процессы катаболизма и анаболизма в клетке связывают центральные
метаболические пути. Энергетическая взаимосвязь между катаболическими и
анаболическими путями в обобщенном виде представлена на рис. 53 и 54.
Катаболические процессы: ферментативное расщепление питательных

104
веществ совершается постепенно, через ряд последовательных ферментативных
реакций. Катаболические пути служат источником восстановительных
коферментов, которые снабжают электронами («восстановительными
эквивалентами») как реакции окислительного фосфорилирования (в форме
НАДН, ФАДН2), так и анаболические реакции (в форме НАДФН). Самой важной
формой запасания энергии во всех без исключения клетках является АТФ.

Рисунок 54. Центральные метаболитические пути в клетке

В аэробном катаболизме различают 3 главные стадии (рис. 55):

1) Макромолекулы распадаются на основные молекулы-строительные блоки.
2) Продукты расщепления 1 стадии превращаются в более простые соединения,
число которых невелико (промежуточные метаболиты – пируват, ацетогруппа
в форме ацетил-СоА, глицерин и др.).
3) Различные катаболические пути сливаются в один общий путь (цикл
лимонной кислоты), в результате всех превращений образуются только 3
конечные продукта распада – NH3, H2O, CO2.
105
Рисунок 55. Три основные стадии аэробного катаболизма

В зависимости от потребностей организма молекулы - промежуточные

метаболиты расщепляются далее с высвобождением энергии в реакциях
окислительного фосфорилирования, либо соединяются в более крупные
молекулы в реакциях анаболизма. Таким образом, данный пул метаболитов
является связующим звеном между метаболизмом белков, углеводов и липидов.
Например, образующийся при расщеплении глюкозы пируват превращается в
ацетил-СоА, из которого в свою очередь синтезируются жирные кислоты и
изопреноиды. В обоих этих путях в качестве восстановительного эквивалента
используется НАДФН, который тоже появляется в реакциях метаболизма
глюкозы. Пируват также может быть использован для биосинтеза глюкозы в
процессе глюконеогенеза. Еще более важную роль играют молекулы,
образующиеся при расщеплении аминокислот и глицерина, высвобождающегося
при метаболизме жиров.
В пуле метаболитов также содержатся промежуточные соединения цикла
трикарбоновых кислот – этот циклический путь имеет как катаболическую, так
и анаболическую составляющую (т.н. амфиболический путь). Конечные

106
продукта распада – это NH3, H2O, CO2, среди них только аммиак является
токсичным веществом, поэтому он превращается в мочевину в цикле мочевины
и выводится из организма с мочой.
Анаболические процессы: катаболические пути сходятся, а анаболические пути,
наоборот, расходятся: т.е., из небольшого числа предшественников образуется, в
конечном счете, множество продуктов.

7.3. Синтез АТФ в клетке

АТФ – это нуклеозидтрифосфат, в молекуле которого три фосфатных
группы соединены с 5' ОН –группой аденозина.
В стандартных условиях при рН 7
изменение свободной энергии ΔG гидролиза
фосфоангидридной связи составляет от -30 до
-35 кДж/моль. На эту величину влияет значение
рН и присутствие ионов Мg2+. Поэтому в
физиологических условиях ΔG гидролиза АТФ
до АДФ и фосфата составляет примерно -50 кДж/моль. Все процессы
окисления при деградации углеводов, жирных кислот и аминокислот сводятся к
финальной стадии клеточного дыхания, где высвобождающаяся при окислении
энергия расходуется на синтез АТФ (рис. 56).
Фотофосфорилирование – это процесс, в котором фотосинтезирующие
организмы улавливают солнечную энергию и направляют ее на синтез АТФ.
Большинство организмов синтезируют необходимое им количество АТФ в
основном именно в процессах окислительного фосфорилирования и
фотофосфорилирования. В эукариотических клетках окислительное
фосфорилирование протекает в митохондриях, а фотофосфорилирование – в
хлоропластах. Сначала в результате реакций катаболизма образуется ряд
восстановленных коферментов (в основном НАДН и восстановленный
убихинон), затем электроны из этих соединений переносятся на молекулярный
кислород. Эти реакции происходят в дыхательной цепи. Образующаяся
химическая энергия сначала используется для создания электрохимического
градиента протонов, который, в свою очередь, обеспечивает энергией реакцию
синтеза АТФ из АДФ и неорганического фосфата.
В клетках могут протекать процессы так называемого субстратного
фосфорилирования, когда молекула АТФ образуется в химических реакциях
путем переноса фосфатной группы на АДФ. Реакции такого типа имеют место
только в процессе гликолиза и в цикле трикарбоновых кислот. В анаэробных

107
условиях большинство организмов могут получать АТФ за счет гликолиза – этот
менее эффективный путь синтеза АТФ называют брожением. Кофермент НАДН
участвует исключительно в окислительном фосфорилировании, а его аналог
НАДФН выступает в роли восстановителя в реакциях анаболизма.

В процессе окислительного
фосфорилирования как на
свету, так и в темноте
происходит восстановление
О2 до Н2О за счет переноса
электронов от
нуклеотидных коферментов
НАДН и ФАДН2.

Рисунок 56. Связь метаболических процессов с синтезом АТФ

При фотофосфорилировании окисление Н2О до О2 осуществляется с

участием конечного акцептора электронов НАДФ+ только под действием
энергии света. Несмотря на различия, эти два высокоэффективных процесса
преобразования энергии протекают по весьма сходным молекулярным
механизмам.
Современные представления о механизме синтеза АТФ в митохондриях и
хлоропластах основаны на гипотезах (хемиосмотическая теория), выдвинутых
П. Митчеллом (1961 г.). Он предположил, что роль источника энергии для этого
процесса играет разница концентраций протонов по обе стороны мембраны,
создаваемая реакциями окисления. Процессы окислительного
фосфорилирования в эукариотических клетках происходят в митохондриях,
которые имеют 2 мембраны: внешнюю и внутреннюю. Внешняя мембрана
хорошо проницаема для низкомолекулярных соединений и ионов за счет
наличия мембранных каналов, образуемых белками. Внутренняя мембрана
непроницаема для большинства небольших молекул и ионов, включая протоны,
она содержит компоненты дыхательной цепи – мультиферментные комплексы и
фермент АФТ-синтазу, осуществляющий синтез АТФ и АДФ и неорганического
фосфата (фосфорилирование). Митохондриальный матрикс (внутренняя часть

108
митохондрии) содержит ферменты-участники цикла лимонной кислоты,
процессов β-окисления жирных кислот и окисления аминокислот.
Дыхательная цепь
Дыхательная цепь – это один из важных метаболических путей
окислительного фосфорилирования, в этой цепочке реакций электроны
переносятся с НАДН или восстановленного убихинона на молекулярный
кислород. Из-за большой разницы в окислительно-восстановительных
потенциалах доноров (НАДН) и акцептора (О2) носит выраженный
экзергонический характер. Большая часть выделяющейся энергии используется
для поддержания протонного градиента на внутренней мембране митохондрий,
который в конечном счете служит для синтеза АТФ с помощью АТФ-синтазы.
Окислительное фосфорилирование начинается с поступления электронов в
дыхательную цепь, которую можно представить в виде последовательно
связанных компонентов, каждый из которых содержит кофактор, способный̆
принимать и отдавать электроны (рис. 57). Большинство этих электронов
возникает в результате действия дегидрогеназ, «собирающих» электроны на
различных катаболических путях (распада макромолекул) и доставляющих их к
универсальным акцепторам электронов – никотинамиднуклеотидам (НАД+ или
НАДФ+) или флавиннуклеотидам (ФМН или ФАД).
Ферменты дыхательной̆ цепи участвуют в переносе электронов от НАДН
(NADH) к кислороду. Переносчики электронов организованы в 4
полиферментных комплекса – структурно обособленные надмолекулярные
ансамбли белковых молекул, встроенные во внутреннюю митохондриальную
мембрану, каждый из которых катализирует перенос электронов на
определенной стадии процесса (рис. 57). Комплексы I и II катализируют перенос
электронов на убихинон от НАДН и сукцината, соответственно. Комплекс III
переносит электроны от восстановленной формы убихинона на фермент
цитохром с, а комплекс IV завершает передачу электронов по дыхательной
цепи, передавая их от цитохрома с непосредственно на кислород. Цитохромы –
это белки, имеющие железосодержащую простетическую группу (гем). В ходе
окислительного фосфорилирования перенос электрона может осуществляться
тремя способами: 1) путем прямого переноса – при восстановлении Fe3+ до Fe2+ ;
2) путем переноса атома водорода (Н+ + е-); 3) путем переноса гидрид-иона (:Н-),
несущего пару электронов. В окислительно-восстановительных реакциях
принято называть заряд, эквивалентный одному электрону, восстановительным
эквивалентом.

109
Рисунок 57. Схематическое представление дыхательной цепи митохондрий

Синтез АТФ в дыхательной цепи

Энергия, высвобождаемая при переносе электронов в дыхательной цепи,
запасается в виде протонного градиента (электрохимического потенциала).
Стадии синтеза АТФ:
1. Образующиеся в реакциях катаболизма НАДН и ФАДН2 передают протоны и
электроны на ферменты дыхательной цепи.
2. Электроны передаются по ферментам дыхательной цепи и теряют энергию.
3. Эта энергия используется на выкачивание протонов (Н+) из матрикса в
межмембранное пространство.
4. В конце дыхательной цепи электроны попадают на кислород и
восстанавливают его до молекулы воды Н2О.
5. Протоны стремятся обратно в матрикс и проходят через комплекс АТФ-
синтазы.
6. Когда протоны проходят АТФ-синтазный комплекс, они отдают энергию
концентрационного градиента, которая используется ферментом АТФ-синтазой
для синтеза АТФ.
Структура АТФ-синтазы
Фермент АТФ-синтаза состоит из двух крупных фрагментов F1 и FO (рис.
58). Фактор сопряжения F1 находится в матриксе митохондрий и состоит из
девяти субъединиц. Три α- и три β-субъединицы вместе образуют гексамер (αβ)3,
в центре которого находится субъединица γ, которая образована двумя
протяжёнными полипептидными цепями и напоминает изогнутый стержень.
Также внутри гексамера находится минорная субъединица ε, связанная с γ.

110
Последняя (девятая) субъединица обозначается символом δ и расположена на
внешней стороне F1.

Мембранная часть АТФ-синтазы

(фактор сопряжения FO) – это
гидрофобный белковый комплекс,
пронизывающий мембрану
насквозь и имеющий внутри себя
два полуканала для прохождения
протонов. Всего в состав комплекса
FO входит одна субъединица а, две
копии субъединицы b, а также от 9
до 12 копий небольшой
субъединицы c.

Рисунок 58. Строение фермента АТФ-синтазы

Фермент АТФ-синтаза является молекулярным «мотором», он действует по

механизму вращательного катализа. Компонент F1 АТФ-синтазы имеет три
неэквивалентных центра связывания, которые находятся в различных
конформациях:
- АТФ-β-конформация, т.е. центр способен образовывать прочные связи с АТФ.
- АДФ-β-конформация, т.е. происходит образование слабых связей с лигандом.
- Пустая-β-конформация, т.е. центр склонен к разрыву связей и высвобождению
АТФ. В ходе синтеза АТФ эти конформации переходят одна в другую, при этом
молекула АТФ высвобождается, из АДФ-β-конформации образуется АТФ-β-
конформация, а из пустой - АДФ-β-конформация.

Цикл трикарбоновых кислот

Цикл трикарбоновых кислот, иначе известный как цикл лимонной кислоты
или цикл Кребса, это циклический метаболический путь, протекающий в
матриксе митохондрий. В этом цикле за 8 стадий происходит окисление
ацетильных групп до углекислого газа (рис. 59). Образующиеся в цикле
восстановительные эквиваленты переносятся на НАД+ или убихинон, а оттуда
поступают в дыхательную цепь. Итогом всего цикла является превращение
одного ацетильного остатка и двух молекул воды в 2 молекулы СО 2.
Одновременно с этим образуется одна молекула АТФ или ГТФ, три молекулы
111
НАДН и одна молекула восстановленного убихинона. Путем окислительного
фосфорилирования из этих восстановленных кофакторов клетка получает девять
молекул АТФ.

Рисунок 59. Цикл трикарбоновых кислот (цикл лимонной кислоты или цикл
Кребса)

Функции цикла трикарбоновых кислот: является амфиболическим циклом.

В качестве катаболического пути он начинает «терминальное окисление»
энергетических субстратов – образующиеся в цикле восстановительные
коферменты используются в синтезе АТФ. Кроме этого, он является источником
важных предшественников для анаболических путей. Промежуточные продукты
этого цикла далее превращаются в глюкозу, порфирины, аминокислоты, жирные
кислоты и изопреноиды.
112
7.4. Основы метаболизма отдельных классов БАС

7.4.1. Углеводы
Катаболизм углеводов – гликолиз
В метаболизме животных и растений глюкоза занимает центральное место.
Молекула глюкозы богата энергией, и используется клетками в качестве
топлива. Гликолиз – это универсальный путь катаболизма глюкозы, в процессе
которого происходит высвобождение энергии, часть этой энергии запасается в
виде АТФ и НАДН. Гликолиз протекает в цитозоле клетки. В анаэробных
условиях гликолиз – это единственный метаболический путь, который позволяет
клеткам животных синтезировать АТФ.
Расщепление глюкозы (гликолиз) представляет собой процесс, состоящий
из двух стадий (рис. 60). Первая называется подготовительной, так как на этой
стадии энергия, заключенная в АТФ, увеличивает потенциальную энергию
интермедиатов, т.е. расходуется для прохождения реакции (1-5 реакции). Вторая
(возвратная) стадия сопровождается высвобождением энергии, поэтому
получила название стадия "выплаты процентов" (6-10 реакции).

Рисунок 60. Схема гликолиза

113
 Пируват, образовавшийся в ходе 10 реакций гликолиза, претерпевает
дальнейшие превращения по одному из трёх основных путей катаболизма.
В аэробных условиях пируват окисляется с образованием ацетогруппы
ацетилСоА, а карбоксильная группа превращается в СО2. Если ткани не
получают достаточно кислорода, чтобы поддерживать аэробное окисление
пирувата и НАДН, то превращение пирувата происходит по второму пути
катаболизма. Под действием лактат-дегидрогеназы идёт восстановление
пирувата до лактата в процессе молочнокислого брожения. В третьем пути
разложения пируват превращается в этиловый спирт в ходе спиртового
брожения.
Анаболизм углеводов
Некоторым тканям и клеткам, таким как головной мозг и эритроциты,
глюкоза требуется постоянно. Запасание глюкозы в клетках в свободном виде
невозможно по причине того, что ее большая концентрация создавала бы в
клетке очень высокое осмотическое давление и, следовательно, вызывала бы
сильный приток воды. В отличие от глюкозы, нерастворимый биополимер
гликоген (разветвленный гомополимер глюкозы) не вызывает изменения
осмотического давления в клетке и служит ее энергетическим резервом. В
организме человека может содержаться до 450 г гликогена (до 150 г в печени,
остальное – в мышечной ткани).

Рисунок 61. Пути превращения углеводов

Гликоген печени используется для поддержания необходимого уровня

глюкозы в крови, при этом он не участвует в регуляции этого уровня. Если с
пищей в организм поступает недостаточное количество углеводов, какое-то
114
время уровень глюкозы в крови может поддерживаться за счет расщепления
гликогена в печени (рис. 61). В случае исчерпания и этого источника запускается
процесс глюконеогенеза – биосинтеза глюкозы de novo, за счет которого в
организме человека за сутки может образоваться несколько сотен граммов
глюкозы. Основными предшественниками для биосинтеза глюкозы служат
глюкогенные аминокислоты, образующиеся в процессе гликолиза в мышцах.
Другие возможные предшественники в биосинтезе глюкозы – лактат,
образующийся в эритроцитах и в мышцах при недостатке кислорода, а также
глицерин, появляющийся в результате расщепления жиров.
Контроль метаболизма углеводов, который протекает в основном в печени,
– это сложный процесс, в котором участвуют гормоны, метаболиты и ферменты.
К гормонам, влияющим на процессы гликолиза и глюконеогенеза, относятся
пептиды инсулин и глюкагон, глюкокортикоид кортизол и катехоламин
адреналин. Существует целая группа врожденных заболеваний (гликогенозов),
которые связаны с нарушением метаболизма углеводов (часто – гликогена), в т.ч.
в силу ферментной недостаточности (непереносимость фруктозы, лактозы,
галактозы), а также более тяжелые наследственные заболевания.

7.4.2. Белки и аминокислоты

В количественном отношении белки представляют собой наиболее
важную группу биомолекул, так, у человека массой 70 кг содержится примерно
10 кг белка. Метаболизм белков можно подразделить на 2 основные
составляющие: 1) биосинтез и расщепление самих белков и 2) синтез и
расщепление составляющих их протеиногенных аминокислот. Биосинтез белков
происходит в ходе трансляции мРНК на рибосомах (гл. 3).
Расщепление белков
В организме человека за сутки 300-400 г белка расщепляется на отдельные
аминокислоты, и приблизительно такое же количество аминокислот включается
в состав новых белков. Такая высокая скорость белкового обмена связана с тем,
что многие белки существуют очень недолго (среднее время полужизни этих
молекул – от двух до восьми суток). Наиболее короткоживущие белки – это
ферменты промежуточного метаболизма, многие из которых расщепляются
через несколько часов после синтеза и сразу же заменяются новыми молекулами.
Другие типы белков, например, структурные белки, а также гемоглобин, гистоны
отличаются большей продолжительностью жизни.
Функциональные клеточные белки должны быть защищены от
преждевременного внутриклеточного протеолиза (расщепление белков),
115
поэтому этот процесс отчасти происходит в лизосомах, отчасти в протеасомах в
цитоплазме, где расщепляются частично свернутые белки (рис. 62).

Протеасома – это крупный белковый

комплекс, центральная часть которого
имеет форму бочонка и состоит из 28
субъединиц. Протеолиз белков
происходит внутри бочонка, куда
направляются неправильно свернутые или
отжившие белки, предварительно
помеченные небольшим белком -
убиквитином (связанные с ним
ковалентной связью) Сам убиквитин не
расщепляется, а вновь используется для
мечения следующих белков.
Рисунок 62. Принцип работы протеасомы

В зависимости от способа расщепления полипептидной цепи все

протеолитические ферменты (протеиназы) подразделяют на эндопептидазы –
расщепляют белки внутри цепи между определенными аминокислотными
остатками (например, сериновые и цистеиновые протеиназы) и экзопептидазы
– расщепляют пептидные связи, начиная с конца (аминопептидазы и
карбоксипептидазы).
Попадание белков в желудок стимулирует выработку гастрина, который
вызывает выработку соляной кислоты париэнтальными клетками и пепсиногена
главными клетками желез желудка. Кислый желудочный сок действует и как
антисептик, и как денатурирующий агент, разворачивая глобулярные белки,
делая их пептидные связи доступными для гидролиза. При пониженном рН
запускается превращение неактивного пепсиногена (зимогена) в активный
пепсин, который расщепляет белки по пептидным связям перед остатками
ароматических аминокислот. Низкий рН вызывает синтез гормона секретина,
который запускает выработку гидрокарбоната в тонкий кишечник для
нейтрализации кислоты, и рН повышается. Далее продолжается разрушение
белков при помощи: энтеро-, карбокси-, амино-, ди- пептидаз и трипсина.
Всасывание аминокислот происходит в прямом кишечнике. Большая часть
аминокислот транспортируется симпортом с ионами Na+.

116
 Метаболизм аминокислот
При всем разнообразии протеиногенных аминокислот вариантов конечных
продуктов их разложения очень немного. К ним относятся 4 промежуточных
продукта цикла трикарбоновых кислот (2-оксоглутарат, сукцинил-КоА,
фумарат, оксалоацетат), а также пируват, ацетоацетат и ацетил-КоА. Поскольку
оксалоацетат является исходным соединением для глюконеогенеза, те
аминокислоты, расщепление которых приводит к образованию метаболитов
цикла трикарбоновых кислот или пирувата, называют глюкогенными
аминокислотами. За исключением лизина и лейцина, все остальные 18
стандартных протеиногенных аминокислот являются глюкогенными. Они
важны для биосинтеза глюкозы и как участники анаболического этапа цикла
трикарбоновых кислот.
Аминокислоты, расщепление которых сопровождается образованием
ацетил-КоА, или ацетоацетата называют кетогенными аминокислотами. Они
используются для биосинтеза кетоновых тел, жирных кислот и изопреноидов.
Исключительно кетогенными аминокислотвми являются только лизин и лейцин.
Заменимыми (неэссенциальными) называют аминокислоты, которые
синтезируются в организме человека. Продукты расщепления этих аминокислот
направляются в цикл трикарбоновых кислот (рис. 59) не более чем за три
реакционных стадии дезаминирования и/или трансаминирования и
превращаются в промежуточные продукты этого цикла (оксалоацетат, 2-
оксоглутарат, пируват). Незаменимые (эссенциальные) аминокислоты не
синтезируются организмом и должны поступать вместе с пищей. Пути их
расщепления являются гораздо более сложными, чем в случае заменимых
аминокислот.
Важные для организма аминокислоты очень разнообразны по строению (гл.
3), но реакции их катаболизма и анаболизма протекают по схожим схемам.
Катаболизм аминокислот начинается с удаления аминогруппы (рис. 63). Чтобы
вывести аммиак из внепеченочных тканей и транспортировать в печень и почки
по крови, его переводят в нетоксичное состояние (в L-глутамин) под действием
фермента глутаминсинтазы. В печени аминогруппа аминокислоты
высвобождается в виде аммиака, который транспортируется в митохондрии, где
подвергается окислительному дезаминированию, катализируемому
глутаминазой. При дезаминировании высвобождается катион аммония, который
поступает в цикл мочевины через подготовительную стадию. Большинство
нарушений аминокислотного метаболизма связано с дефектами ферментов,

117
участвующих в расщеплении незаменимых аминокислот или с дефектами
переносчиков аминокислот.

Рисунок 63. Расщепление аминокислот

7.4.3. Метаболические пути липидов

Все важные для метаболизма человека липиды в качестве основного
элемента структуры содержат спирт (глицерин или сфингозин), связанный с
остатками длинноцепочечных жирных кислот и других компонентов. Поэтому
метаболические превращения жирных кислот играют центральную роль в
обмене липидов. Биосинтез и расщепление жирных кислот осуществляется с
помощью растворимых ферментов, а в превращениях сложных липидов
участвуют ферменты, встроенные в мембраны гладкого ЭПР.
Стадия 1: Для всасывания триацилглицеринов в кишечнике организму
необходимо перевести их из нерастворимых макроскопических капель в
мелкодисперсные мицеллы. Данную солюбилизацию осуществляют соли
желчных кислот, например, таурохолевой кислоты, которые образуются в
печени из холестерина. Такие липидные мицеллы доступны для действия
водорастворимых липаз в тонком кишечнике, которые триацилглицерины
превращают в моно-, диацилглицерины, свободные жирные кислоты и глицерин.
Гидролиз жира осуществляется при участии панкреатической липазы, которая,
сорбируясь на поверхности капель жира, расщепляет эфирные связи в
триацилглицеринах (ТАГ). Жирные кислоты отщепляются прежде всего из α-
положения, в результате образуется диацилглицерин, моноацилглицерин:

118
Стадия 2: Продукты распада диффундируют в эпителиальные клетки
кишечника, где снова превращаются в триацилглицерины под действием ацил-
CoA.
Стадия 3: Триацилглицерины соединяются с холестерином пищи и
специальными белками (аполипопротеины - белки крови, связывающие липиды;
они отвечают за транспорт триацилглицеринов, фосфолипидов, холестерина и
его эфиров между органами), образуя липопротеиновые комплексы –
хиломикроны (рис. 64).

Рисунок 64. Строение хиломикрона

Стадия 4: Хиломикроны разносятся по крови к тканям.

Стадия 5: В капиллярах тканей есть фермент липопротеинлипаза, который
гидролизует триацилглицерины до жирных кислот и глицерина.
Стадия 6: Жирные кислоты и глицерин поглощаются клетками тканей
Стадия 7: Для получения энергии жирные кислоты окисляются в мышцах; в
жировых тканях они вновь превращаются в сложные эфиры и хранятся в виде
триацилглицеринов.
β-Окисление жирных кислот
В митохондриях происходит β-окисление жирных кислот, которое
проходит в три стадии. На первой стадии протекает β-окисление, в котором

119
жирные кислоты под действием различных ферментов подвергаются
последовательному окислительному отщеплению ацетил-СоА. На второй стадии
окисления ацетильные группы ацетил-СоА окисляются до СО2 в цикле лимонной
кислоты. Таким образом, ацетил-СоА, полученный из жирных кислот при β-
оксилении, из глюкозы в процессе гликолиза и окисления пирувата попадает на
последний этап окисления. На первых двух стадиях образуются
восстановленные переносчики электронов, отдающие свои электроны на третьей
стадии в дыхательную цепь митохондрий.
Катаболизм ненасыщенных жирных кислот
Ненасыщенные жирные кислоты, также как и насыщенные, подвергаются
β-окислению. Положение и число двойных связей в молекулах ненасыщенных
жирных кислот определяют особенности их окисления. НЖК окисляются как
насыщенные до места двойной связи. Если двойная связь имеет транс-
конфигурацию и расположение, как в еноил-КоА, образующемся при окислении
насыщенных жирных кислот, то дальше окисление идет обычным путем. При
отсутствии этого условия вступает в действие дополнительный фермент,
перемещающий двойную связь и меняющий цис- на транс-конфигурацию.
Двойная связь может восстанавливаться НАДФ•Н2.
Скорость окисления ненасыщенных жирных кислот очень высока:
олеиновой кислоты в 11 раз, линолевой – в 114, линоленовой – в 170,
арахидоновой – в 200 раз выше, чем стеариновой. В исследованиях с олеиновой
кислотой, меченной дейтерием, было установлено, что она может
редуцироваться, превращаясь в стеариновую, а последняя подвергается β-
окислению.
Омега-3 жирные кислоты – эйкозапентаеновая и докозагексаеновая
оказывают выраженное антиатеросклеротическое, вазодилататорное,
антитромботическое действие, улучшают реологию крови. Арахидоновая
кислота (эйкозатетраеновая), входящая в состав фосфолипидов плазматических
мембран, является предшественником эйкозаноидов – медиаторов (локальных
гормонов), сигнальных веществ, которые образуются почти во всех клетках
организма и имеют небольшую дальность действия.
Арахидоновая кислота (5,8,11,14-эйкозатетpаеновая кислота) –
полиненасыщенная жирная кислота, входит в состав мембранных фосфолипидов
тромбоцитов и эндотелиальных клеток. Высвобождается из фосфолипидов под
действием фосфолипазы А2 и фосфолипазы С, активируемых коллагеном,
тромбином, АДФ и другими биологически активными веществами.
Арахидоновая кислота является предшественником в синтезе оксилипинов.
120
Свободная арахидоновая кислота быстро метаболизируется, превращаясь в
высокоактивные соединения – простагландины и тромбоксаны.
Перекисное окисление жирных кислот
Мембраны клетки являются неполярной средой, в которой кислород
растворяется в 7 - 8 раз лучше, чем в полярной. Поэтому, именно в мембранах
чаще наблюдается окислительное превращение полиненасыщенных жирных
кислот. Реакции окисления протекают в тех местах, где имеются ненасыщенные
липиды (фосфолипиды): в мембранах митохондрий, эндоплазматического
ретикулума, лизосом, плазматических мембранах. Окисление ненасыщенных
жирных кислот протекает по схеме: RH + O2 → ROOH. К продуктам перекисного
окисления ненасыщенных жирных кислот относят гидроперекиси липидов,
альдегиды, малоновый диальдегид, другие диальдегиды, кетоны, спирты,
эпоксиды. Физиологической функцией перекисного окисления является
регуляция обновления, распада ненасыщенных структурных липидов,
проницаемости липидов биологических мембран. Кислородные радикалы
(супероксидный, гидроксильный, пероксидный), обладая высокой реакционной
способностью, ускоряют процесс перекисного окисления ненасыщенных
жирных кислот. Активные атомы водорода ненасыщенных жирных кислот для
вступления в реакцию, по мнению А. Хорста, нуждаются лишь в минимальных
количествах энергии. Это окисление активирует радикальные формы кислорода,
ионы металлов и, наоборот, тормозит витамин Е (токоферол), связывая пероксид
и ОН-радикал. В присутствии оксидантов (даже небольшого количества)
водород переходит к окислителю, что вызывает цепочку реакций, изменяющих
структуру и функцию мембран.

Вопросы для текущего контроля знаний студентов по разделу 7:

1. Что такое метаболизм?
2. Функции катаболизма и анаболизма
3. Что такое автотрофы и гетеротрофы?
4. Поясните общую схему метаболических путей в клетке
5. Опишите 3 стадии аэробного катаболизма
6. Как синтезируется АТФ в клетке?
7. Что такое окислительное фосфорилирование?
8. Опишите кратко пути метаболизма белков, липидов и углеводов.
9. Что такое гликолиз? Какова его роль в клетке?

121
Список использованной литературы

1. Нельсон Д., Кокс М. Основы биохимии Ленинджера (в 3-х томах). Т.1:

Строение и катализ – М.: Лаборатория знаний, 2017. – 694 с.
2. Нельсон Д., Кокс М. Основы биохимии Ленинджера (в 3-х томах). Т.2:
Биоэнергетика и метаболизм – М.: Бином, 2014. – 636 с.
3. Нельсон Д., Кокс М. Основы биохимии Ленинджера (в 3-х томах). Т.3: Пути
передачи информации – М.: Бином. Лаборатория знаний, 2015. – 448 с.
4. Ленинджер А. Основы биохимии. 1-3 т. - М.: Мир, 1988.
5. Рис Э., Стернберг М. Введение в молекулярную биологию. – М.: Мир, 2002.
6. Наглядная биохимия [Электронный ресурс] / Кольман Я., Рём К.-Г. – 2000. –
469 с. – Электрон. публикация https://library.mirea.ru/ebooks/9330
6. Биохимия человека [Электронный ресурс] / Марри Р., Греннер Д., Мейес П. –
1993. – 384 с. – Электрон. публикация https://library.mirea.ru/ebooks/9339.
7. Биохимия человека [Электронный ресурс] / Марри Р., Греннер Д., Мейес П. –
1993. – 415 с. – Электрон. публикация https://library.mirea.ru/ebooks/9340.

122
Сведения об авторах
Брагина Наталья Александровна, доктор химических наук, доцент, профессор
кафедры Химии и технологии биологически активных соединений, медицинской
и органической химии имени Н.А. Преображенского Института тонких
химических технологий имени М.В. Ломоносова МИРЭА – Российского
технологического университета

Жданова Ксения Александровна, кандидат химических наук, доцент кафедры

Химии и технологии биологически активных соединений, медицинской и
органической химии имени Н.А. Преображенского Института тонких
химических технологий имени М.В. Ломоносова МИРЭА – Российского
технологического университета

123