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10
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(2008)........................ ..17
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1.
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110
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2.3. ,
............................................................. 110
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2.5. ..................................................................... 116
2.6. .................................................................116
2.7. ................................................................117
2.8. .............................................. 118
2.9. .................................. 122
2.10.
..................................................................... 125
2.11. ........................................126
2.12. ......................................................... 128
2.13. ..................................................................... 129
2.14. ........133
2.14.1.
............................................................ 133
2.14.2.
........................................................................ 134
2.14.3.
134
2.14.4. .................................................. 136
2.15. ......................... 137
2.16. in vitro............................................138
2.16.1. .................................... 139
2.16.2.
( )........................................................... 140
2.16.3.
....................................................157
2.16.4.
....................... 165
2.16.5. .....................171
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3.1. ...................................................................... 182
3.2. ................................................................................. 187
3.3. ( )..........187
3.4. ( )..... 199
3.5. ( )....................203
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9

10





II : 1 PN, 2 .

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(Denuding pipets)


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zona pellucida.
zona
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zona pellucida.
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11

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8
13

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; zona pellucida.

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zonapellucida
Cumulus
,
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Expanded blastocyst
Full (expanded) blastocyst


FISH
in situ
Grade
()
GV
Germinal Vesicul
HEPES-
, HEPES
(N- {2-hydroxyethyl}piperazine-N-{2-ethane- sul
fonic acide}),

HIV

Hoffman Modulation Contrast



HTF
Human Tubal Fluid

HTF HEPES
,
,
ICSI
.
I-e
,
MII,
14

MI
II
PB
PBS
PN
PrOH
PVP
PZD
QC
Sperm Freezing Medium
SpermWash
TDT
uIVF
Zona pellucida


,
I
I-

II-

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Phosphate Buffer Saline

1,2- Pr

Partial zona dissection

Quality control



Universal IVF Medium
MediCult
,

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3 .
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2 : -
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1 1
. 1945 . ,
,
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16

2001 . (Albert Lasker Award for Clinical Medical Research,


2001) Joseph L. Goldstein ,
,
2010 .

, .

B.C.
29.06.2011


(2008)

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1995 . ,
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1995 . ,
( , 1996 ., 2,
. 46-49).
1995 . (
, 2000 ., 1, . XL1X,
. 23-27).
1996 .
(.. ).
1999 . (
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. 2, . 2930).
1997 .,
2000 .,
2004 . 30%,
40% 50%
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2005 .
,
( , 2005 ., 2,
. 53).
2007 .
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2008 . 10 000- .

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50-
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1971 .

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1980 .
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. 1.6. Bruno Lunenfeld1 () Robert G. Edwards (Changsha, Hunan,


China, 2006). Robert G. Edwards: !
1948 ,
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42

1.2.

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14-
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1.7.

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1.

1.8.
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II)
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(zona pellucida).
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(corona radiata),
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1.8.

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(. 1.8). ,
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,
.

. 1.8.

corona radiata


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.

,
(. 1.9).

. 1.9. , :

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1.

( )

. 1015 ,
4 - 5 .


.
20-24 ,
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, .

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1.8.

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( zona pellucida).
-.

79

1.

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ZP3. :

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1015 .

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,
-
. G -
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. , G -
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1.8.

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zona pellucida,
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81

1.

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1% 6 - 7 .

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1.9.
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(. 1.10).

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. 1 .1 0 .


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,
, .

82

1.9.

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,
,
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.

. 8
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.
, ,

. 24
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.
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1.

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.

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,
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.
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)
,
. ,
84

1.10. .

,

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( ,
, ).

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( )
.
,
.

1.10. .



.
,
(. blastos , meros )
,
.


. ,
. , ,
,
12-18 .
, ,

, 48 .

.

85

1.

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.

,
, ,
.

. , ,
, ..
: 2, 4, 8, 16, 32
.
, ,
: 2, 3, 4, 5 ..

,
. .
,
8 ,
, .
,
.

16- (. morula,
morum ,
), ,
.
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(
,
). ,
, ..
,
, . ,
86

1.10. .

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.
,
,
. ,
, ,
.
16-
:
(. embryon , blastos ,
.. ), (),
(. trophe , , blastos
, .. ), .

, ,
.

(
32- ).
,
, , ,
, .

, .

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),
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,
.
.

1.

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4 - 8 .

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, .
,

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.
(. cavitas ) .
,
.
(. blastos , kystis ).
:
(. m urus ),
, ( ),
,
, (. 1.11).
,

, , -,

( ),
-, .
,
, ,
.

,
88

1.10. .

. 1 .1 1 . (Williams Obstetrics)

1.

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.
.
, ,
,
.

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,

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. 56
:
.
, , ,
, , ,
(. syn , kytos
) .

1.11.
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, .
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,
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1.11.

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, .. 5 .
91

1.

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(. 1.12).
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( )
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,
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. , ,
,
1214- .

. 1 .1 2 . (
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.. )
1 ,2
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3, 4, 5

1.12. .

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,
.
-
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,
;
.
.
, ( ) ,
. ,
,
.

1.12. .

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, 23
, 67-
(. in [im\ , , plantatio
, ).
. ,

,

.
,
,
.
, , , , .
..
(68-
),

1.

.
.

(. receptivity ).


(. adhaesio ) . ,

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,

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,
,
, ..

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(
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.
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.
,
.
,
,
,
.
( )
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,
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,
94

1.12. .

.
,
. ,
1820 .

. ,
, .
,
,
.
, () .
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. , 10
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,
.
( ,
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-
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. ,
, .


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1.

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,
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.
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),

1.12. .

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. 9- ,
,
,
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5 , 2-
,
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- , .

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- ( ),
- .
, 2-

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. ,
,
- , .
.
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,
.
,

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,
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, .
(
) , , ,
.

1.

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(. gaster, . gastros
),

,
. ,
1718 ,
,
,
,
(, .).
,
, -
,

.

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(, ;
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( )
(
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- ,

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1.12. .


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, , .

, , .


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- , -,
.

2.1.
2.1.1.
.
,
.

- ,
, .

. ,

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, .
,
,
(
).
,
.

2.1.

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FISH- - (
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( .).
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, - ,
(
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,
,
,
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,
.

, , .
, ,
,
,
( )
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,
.

1. .
2. .
3. .
4. FISH -.
101

2.

5. (
, ).
6. (,
).
7. .
8. .
9. ,
.

2.1.2.


,
.


.

,
,
.
()
.

.

(. 1).
1

1
2

2 37 ', 5% O2

O2

2.1.

6
7

ICSI
()
-

9
10

1
2

200
900-1000


1000-2000 .

Makler Counting Chamber


( )


,
10, 20.

Narishige, Eppendorf


,
,
,


(
)


pH



(/)

2.

.1
/

1
2



FISH


FISH-
(. 40)

3
4
5
6

2.1.3.

2.1.3.2630-10
- ,
.



.

.

2.1.4.
1.
375
18.12.1997.
2.

104

2.1.

, ,
,
.
3.

(, , .)
4.
, , ,
, .
5. , ,
,

12
2.1.3.2630-10.
6.
,
.
.

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,

.
.
7.
,
,
.
8.
,
.
,
.
,
..,
,

2.

( ), .
, ,
. .
9.
, (
,
).
10.
, .
11.
,
,
.
.
12.
, , .
13.

.

.
,
.
14.

,
. ,
,
.

.

.
15.

.

2.1.

2.1.5.
, , ,
,
1. ,
,
,
.
,
:
;
,
, , ;
, .
2.
,

, , ,

.
3. , , ,
, , , ,
, , , ,

.
4. ,
,
510
,
.,
.
5.


;
1 .

2.

6.
,


.
7.


,
.
8. ,
,
,
,
, ,
.
9.

.
10. ,

,
.
.
2 .

2.1.6.

- 2.1.3.2630-10.

2.1.7.

1.
, ,

.

2.1.

2.
,
.
3. , ,

.
4.

.
5.

,
.
6. (
..) , ,

.
7. ,

, .. , 30-40 .

.

, :
1) 0,05% ;
2) 1% ;
3) 1% ;
4) (70 , , ..);
5) 5% ;
6) ;
7) (26 .)
1,0 (2 .);
8) , ;
9) , ;
10) -
6 . .
109

2.



.

.

2.1.8. ,
,

(
2.1.7.728-99 ,
- ).


: -, ,
, ( ) .

.

2.2.
.
Jacques
Cohen.
, .

2.3. ,

. ,
,
110

2.4.

, .
.
O2-.

.
O2 pH
;
.
.


.
,
(. 2.1.3.
),

2.4 .


.

.
-
.

. , ,
.

, ,
.

.

.

2.

.

. ,
, :
,
, ,
,
, .

,
.
.
ex consillio ,
, ,
.
ex consillio .

. :
, , , ,
, ,
/ ( ), ,
, (
), .
: .


(-) .

. , ,
,
pH
.
1,5 .
:

5 ;

2.4.

,
,
(
2 );
,

( 1,0
);

( 20 );
Hepes-
(Flushing Medium, SynVitro Flush, ),
pH
; ,
,

;
,
, (SynVitro
Flush, );
Nunc,
(),
( 810 );
0,7 (
, ulVF ) 0,3
(Liquid Paraffin, ),
( ) 1,2
(
);
;
Nunc (
), 0,7
,
7080 Un/, - 0,7
;
113

2.

0,3 (Liquid Paraffin, );


20 -
(1 );
(35 10 ), 1,72,0
( ulV F, ),
1,5 ( 1
).
(60 15 )
,
in vitro.

(SupraSperm , Isolate ).

( 0).
,
.
,
.

, ,
.
, ,

, ,
.
,
,
,
.
:

(
);

;
;
114

2.4.


,
, ,
;
;

;
, ,
;

;

.
.
2.8. 2.9.
.
1015 (. 2.1 , , ).

. 2.1 .) ; )

2.

2.5.

( )
.
40 .


.

2.6.
: . 2.16.
in vitro, 2.16.1.
. . 2.16.2.
( ).
.
, :
O2
, 37
5,56,0% (
); ,
,
;
,
, ;
,
70%
;
,
;
:
, , ;
.
116

2.7.

2.7.

,
.
,
,
1998 .
:
.

(Quality control QC) .
,
.
in vitro
(
, ).

,
24 48 .

. ,
.

Origio () (www.origio.com)
, ,
.
Ferti Pro (www.fertipro.com)

, .
Irvine Scientific, Vitrolife,
LifeGlobal, SAGE,
.
, pH
,
, 117

2.

,
.
, Global
Blastocyst (LifeGlobal) 10% .
,
, .

.

2.8 .

,
( 10 ).
, .
.

.
.
.
: 30 , 17GA.
: Laboratoire CC D , Fr; Gynetics Fertipro N.V. Belgium;
Cook, USA.
,

. ,
,
. 510%
.

.
. ,
.
,
118

2.8.

, ;
37 .

,
(. 2.2, , ).
,
.

1 (. 2.3).

. 2 . 2 , , .

2.

. 2 .3 . --

;
.

.

(60 15 )
( 6 12) .

( 25 50).


,
.

,
Nunc ( ),
45 1 3 (. 2.4, ).
,
- .

, , 2 .
,

2 4 .
120

2.8.

. 2.4 , .

45 . ,

.
,
(37 ) pH .

,
(. 2.4, ).

. 2 .4 , . ,

2.

2.9.


-: ,

(corona radiata).
- ,
.
.
( ,
germinal vesicle GV)
(. 2.5).
, ,
(MI).
MI . in
vitro
.

. 2 .5 . GV

-, , (
),
, ,
. -
, .
.

2.9.


- (. 2.6).

. 2 .6 .


()
, .
.
(. 2.7).

,
8.

. 2 .7 .

,
-
.
,
123

2.

.

,
(. 2.82.11).

. 2 .8 . II,

. 2 .9 . II,

. 2.10. II,

2.10.

. 2 .1 1 . ,

( ,
, -)
. ,
, ,
.

2.10.

in vivo
( )

,
,
.

. ,
in vitro
,
, .
125

2.


.

- ( swim-up)
.


.
, ..
.
, SupraSperm , Isolate .
, swim-up,
(Sperm Preparation Medium
), .
1 (uIVF,
)
37 3060 .

,
, .

2.11.
1)
2 - 4 (
5 ).
2) , ,
2 .

, , ,
.
3)
.
,

2.11.

4)

5)

6)

7)
8)
9)

10)

,
. ,
.

, ..
.

.
,
( 37
20 ) .

,
, ,
, .
, ,

.

/ .

.

, :
) (. );
)
;
) .

,

.

, .
,
, .

2.

11) ,

( .. ,
) , ,
. ,
.

.
12)
,
,
24 .
, ,
,
, ,
.


, ,
.

2.12.
1) (
30 ) (,
, , ,
)
.
2) ,
(5 ) 18-
.
.

.
3)
(~ 1020 l)

2.13.

;
,
.
4) ,
,
10 .
, ,
, .

100
10.
,
.
:
Grade 4 (1 - 2 ) ;
Grade 3 (23 ) ;
Grade 2 (34 )
;
Grade 1 (> 4 ) , .

2.13.
,
, SupraSperm 90% (
), Isolate 90% (Irvine Scientific).
:
1) 1,5 (Supra
Sperm, Isolate)
, .
1015
37 .
2) 1,5 SupraSperm
. ,

(HTF 5%)
(. 2.12-2.14).
129

2.

. 2 .1 2 .

. 2 .1 3 . a SupraSperm

. 2.14.

2.13.

3) 15002000 /
15 (. 2.15).

. 2.15.

4) ,
0,5 ,
.
,


.
,
, ,

, .
5)
SupraSperm ,
2 (Sperm
Preparation Medium, , SpermWash),

5 (. 2.16).

2.

. 2.16.

6)
, ,
1 (H TF 5%
uIVF).
7)
.
,
1 5 106 1 ,
- :
46 1 (SupraSperm,
Isolate .), ,
;
2 ,
,
,
;
, ,
2 ,
; -

2.14.


;
, ,

;
,
, ;

, ,
,
ICSI.

2.14.

2.14.1.


,
: (MESA); (TESE):
(PESA); (TESA); (SPAS); (RETA).
/
, .

23 . /
(
).

,

,
,
. ,
.
133

2.

2.14.2.

1) 1
,
5
2000 /. ,
0,5 .
2)
.

(. . 2.16.5).

2.14.3.

,
3 HTF Hepes,
37 . (
) .

,
( ).
,

+37
.


,
. .


1) 2
60 15 (. 2.17).
2)

(. 2.18).
1 .

2.14.

. 2.17.

. 2.18.

3) 5
.
4) 5
700 /.
5) ,
1
.
6)
35x15

20 (. 2.19).
135

2.

. 2 .1 9 .

7)

,
,
.
8)

(. . 2.16.5).

2.14.4.
, 1 ,

.
,
.
,
(

!)

2.15.


.

.

2.15.

.
.

.
.

.
,
.
.
1. 10 25 .
2. .
3. 15 50 .
4. .
5. .
6. -.
7. .
8. IVF .
.
1.
24 : 4 ( 1 ) 4 .

- ,
.
2. .
, 8
( , ). 8-

2.

.

.
3.
pH
. pH 6,58,5.
28090 mOsm.
,
, 15
pH .
, .
4. pH
, ,
, .
5.
500 g 20 .
6. ,
, 4
.
500 g 10 .
7. 1 ,
,
.
.
;

.

2.16. IN VITRO

:
( ).
,
.

2.16. in vitro

2.16.1.
.

, .
30

(. 2.4.
).
Nunc, -
- ,
2 4.

.
1 .
, ,
( 0,1
1 )
100 000150 000
1 .
in vitro, ,
100 000
1 ,

: (
1 ),
-
,

.
( 45 )
Nunc.
4 0,8
(Liquid Paraffin, ).
1-
2
( 0,1 ).

2.


(. 2.20).

. 2 .2 0 .

2.16.2.
()
.
,
,
. ,

,
.
ex consillio,
.

:
1) 1 5 -
;
2) (

4 );

2.16. in vitro

3) 5%
(
);
4)
80%;
5)
(
);
6)
;
7) (MAR-
50%);
8) (
20%) ;
9) ().
.
:
.
(ScanLaf, )
.
.

:
1) ,

;
:
(Hoffman modulation
contrast, ),
(differenciation interferented contrast,
DIC), (Nomarsky D IC);
2)
(10 20 ,
);
3)
(.. ),

2.

;

;
4) .
,
,
Nikon, Olympus, Karl Zeiss, Leica.
.
2 (
).
,
.

.

,

.

.

.
-- ,

(. 2.21).

. Narishige, Eppendorf, Research
Instruments (Integra).

(holdingpipette) . 75100 ,
1520 .
3035.
/
(ICSI pipette),
. 78 ,
5-5,5 .

2.16. in vitro

. 2 .2 1 .

(spike)
.
(COOK, HU M AG EN,
Swemed, Research Instrument .)
.
,
.

:
( ),
.
.
:
1)
HTF, Albumine (5%),
uIVF ( ) .;
143

2.

2) polyvinylprolidone (PVP);
3)

;
4) ,
(
1,0 );
5) Nunc
.
.
.


.



.

.
,
. (Origio, LifeGlobal,
VitroLife .)
, , HEPES,
pH
.
, ,
. 1 3
Nunc 0,7 ,
0,7 .
0,3 .
,
HEPESa.
20 -.

HEPES-,

2.16. in vitro

,
.
,
-
( 3 ). -
20 ( - 1 ,
), 1 3
.
10 -.
- ,
2 4, 30
3 ,
(. 2.22). 30

120
130 m (Midatlantic, ).

4.

. 2.22.


,
:


145

2.

(germinal vesicle GV),


;
,

( I MI);



( II II).

, , ,

:
;

- ;
;
, ;
.
MI

, .


24 .

.
.
(35 10 ),
.
4 - 5
, (
10 ).

,
( , -

2.16. in vitro

, ).

PVP. PVP
23 ,
.

, (22,5 ).
, ,
pH
.
1520
pH.
,
,
,
.
PVP
,
(. 2.14.
).
,
.
-
0,1 /
(
), PVP.
PVP
,
,
.
/
,

( ),

.

2.

.


.
,
,
.
.

( 10).
:
;
;

10
( ).

10. ,

35 45;

,
;
- ,
, , ,
.

.

.

.
PVP
.

2.16. in vitro

PVP ,
.

,
.

.
.
PVP 23 ,
.
,
( 200).
,
. ,

,

.
,
.

.
.
-
. ,

, .
.

. .
PVP (
),
.
.
.

2.

,

.
,
PVP/ .

(. 2.232.26)

. 2 . 2 3 .

. 2 .2 4 .

2.16. in vitro

. 2 .2 5 . ICSI

. 2 .2 6 . ICSI

. ,

.
(),
(,
)
, .
151

2.

,
, 6 12
.
, ..

(. . 2.23).
.

.

,
.
34 (
2/ 3 ,
).
, , ,
.

, .

, (. . 2.24).
,
,

. ,
. ,
,
.
, PVP,
, , ..
.
,
.

.
12 .

2.16. in vitro

.

(
3 ).

.
-
/ 0,1 /

( ),
.
,

.
(
)
.
PVP.
, PVP.
(3 -4 )
15 (
pH, HEPES-)

.
/
,

,
.
( s
). ,
,
PVP,
.

.
153

2.

,
.

.


().

.
,
.

.

(
).
.
35% .


.
,

(

).

PVP
.
,
.
1618
(. 2, 3).
. ,

2.16. in vitro
2

( ., 2002)

> 65 %

< 10%

1 PN

< 10%

3 PN

< 6-7%


5-6

(, 2002)


1.

PVP

2.

)
PV
)

3.

)
)
)
)

4.


1 PN

,
PV

5.

3 PN

) DNA
)

6.




7.
)
)

)
155

2.


.
( assisted heatching).
:
(pH 2,22,5) (Acidified Tyrodes Solution, );
;

(PZD
, ).
.

3- (68 ).
,
.
:

,
;

,
;
, ,
,
,
zona pellucida;
,
,
30 ;

,
;
.

,
.

2.16. in vitro

2.16.3.


.

, .
4- Nunc

,
.
(8 1
). 0,9
. 1, 2
3 0,9
2 ( 0,050,1 ) (ISM1,
EmbryoAssist, ). 4
,

.
O2-.

(. 2.10.
) (. 2.16.
in vitro).
(1- )
1. 1618
. (< 16 )
(> 20 )
- ,
,

.
,
( )

2.

.
,
.

,

.
2.

.

.

(Denuding pipetts). (~ 160m)

.
,
, ,
.
3.
,

.

.
4.
(10).
, ,
.

, /.
.

.

2.16. in vitro


, .
/.

(2PN) ,
, (2)
.

1. :
, PN (3PN, 4PN
) 2 .
2. (Polygynic): 2 PN 1 (
, ..
, , ,
PN).
2-
:
: 1 PN, 2 ;
: 2 PN, 1 .

II,
GV MI (. 2.27, -).
:
, ,
zona pellucida, , ;
,
,
, ;
pH /
;
(

2 ).

,
.
159

2.

. 2 .2 7 . : ) ,
; ) , ;
) , ; ) ,

, 2-
1.

160

48
.
.
) :
,
(, ,
).
(. 2.28, ).
) :
2 22-44 ;
4 3650 .

2 . 16. in vitro

. 2 . 2 8 . : ) ,
20%; ) ; )
(< 10%); ) ();
) , ; ) ,
50%; -) ( )

2 4
.
2.
,
.
161

2.

3. 2-

, 3-, .
4-
2
(BlastAssist, ).

3 .
, 3-
72
Grade
(. 2.29, a - ).
Grade 1 68 ,
,
.
.
Grade 2 6 ,
, 10%.
Grade 3 4 ,
, 30%.
Grade 4 ,
, 50%.

,
.
.
5 , 3
.

.
, 4-
3 .
4
, . -

2.16. in vitro

. 2 .2 9 . : ) ,
10%; ) ( ); )
, ; )
(); )
( 5%); ) , 50%;
- ) ( )

,
.
,
5-
5

163

2.

/ .
,


/ .
, ..
(dr. D.K. Gardner):
( 1 6) (, , ) .
: ,
.

:
1 :
(1).
2 :
(1 2).
3 :
(1 ).
4 :
; zona pellucida (1 4,
1 5).
5 :
zona pellucida (h. 15) (. 2.30)
6 :
- zona pellucida (full h. Bl).

. 2 .3 0 . (h. Bl5AA)

2.16. in vitro

( / I).
A. .
B. .
C. , .
:
A. , ()

B. , .
C. (23) .

,
pH . ,
,
(), .
(
: ,
..). 5- ( 120
)
, 4.

2.16.4.


1993 .
4872 48
3 - 4 . 1994 .
3 ,
4 , ,
. ,
,
5 2 .

(Grade 12),

.

2.

3- 34
/
(Grade 34).

1
.

.
,
,
,
.

.
:
, ,

, (. 4).
.
,

, .
,
,
. ,
,

. ,
,
.
.
:
;
, , 1 ;
.
166

2.16. in vitro
4

Wallace

Portex Limited UK

SetT. D. T (Frydmans) Laboratoire CCD, Fr


Fertipro N.V.Belgium
Gynetics

-01

Biomedical LTD,

Tom Cat Catheter

Kendall company USA

1- , SFM
Hospital Products Gm bH, .
.
(UTM, ),
( ) ,
.
.

. ,
,
(3 5 ).
3
(13 ). 4
, ,
45- .
,
.
8 -1 0
5- ,
.
,
; ex consillio ,
.
48 ( 2- )

.
,
. ,
167

2.

,
, , ..
.

( ). -,
4
0,6 (UTM , )
.
. -,
(
):
35 10 , 1 (
, )
;
60 15 , 2,55,0 H TF
.

.
(.
, 3
). 3-
2- , 5- 12 .


.

,
.
,

.

,

(, .),

2.16. in vitro

.

,
.

, .
,

. , ,
.

.
.

.

.
,
,
, .
.
(-)
.
.

, .
.
,
,
, ,
.
.
.
70% .
. 1015

2.

4
.
:
35 15 ;
1 ;
, ;
.
, :
, ;

.
, ,
-, ,
, .
50 (. ).
.
,
.
,
, .
, ,
. ,
,
.
:
12 ,

(12 ), (1 )
(1 -2 ).
, ,
.
, ,
(-) (-), .
, ,
, (-) (-)
.
170

2.16. in vitro

, . ,
,
.
, .
.
.

.
:

;
;
30 2 ,
,
;
;
.
, ,
. ,

.
( )
. ,
, .
(-) (-),

.

2.16.5.


.
-
.
171

2.


: (
) ().
,
.
, ,

.
,
.
, .

( ),
,
,
.
(/),
(,
.).
,
/ .

/.

,
.
,
,
.

(, ),
.
Sperm Freezing Medium
(FertiPro, )
(CryoSperm, Sperm Freezing Medium, ).
3 :
172

2.16. in vitro


;

;
(
).

.

,
, ,
.
, ,

. ,
2.10.
2.14.1.
.
.
,
(. 2.10.
), :
();
.
:
1)
;
2) 5 10 ;
3) ;
4) 1,0 1,82,0
0,5 ;
5) ;
6) .

I) , ,
2030 ,
173

2.

,
.
2)
;

.
3) ,
,
90% ( 1
), (: ..
30.01.2007) ;
4) 30 (
), 30 +4 30 ;
5) 1
( );
6) ,
,
, ,
-
, .
.
-
(2030 ) 37
(1015 ).
.
, , ..
(SupraSperm, PureSperm, Isolate, SillSelect
.), 15 (2000 /),
, 2 SpermWash (. 2.10.
).
1 (-196 ).


.
, ,
.
174

2.16. in vitro

.
-
. - .
,
() ().

/.
,
, , (SpermFreeze)
.

.
HTF/Hepes,
.
,
(SpermFreeze), .
.
() ()
, .

1.

,
(SupraSperm, Isolate
.) ,
-
.
2. (
) ,
2 , 2 SpermWash,
5 (2000 /),
, 0,050,1 ,

.
175

2.

.
, ,
.
(
).
:
( CryoLogic
-);
- ;
Nunc;
0,25 133 ;
;
1 , 5 , 10 ;
;
(uIVF,Origio);
;
1 ;
;
.
. ,
,
.
,

.
,
,
(OocyteFreeze MediCult
Vitrification Cooling, ).

+37 .

Kitazato, .
()
( ),
().
176

2.16. in vitro


Origio BlastFreeze
(. 2.31).

. 2 .3 1 .
BlastFreeze (Origio)
17 7

2.

,
, ..
.

( ),

.
.

. 2 .3 2 .
BlastThaw

178

2.16. in vitro

,

.

.
1
2 (BlastThaw, Cat#10542010,
Origio) .

(. 2.32).
, 2 - 5 .

.



( )


- .

(),

,
(),
.


(
, , )

.

.
in vitro
.
()
(, )
.

180

3. ()


.

XX (
, )

,
(19432009).
2005 ,
, - (the Queen
Elizabeth Hall)
(Preimplantation
Genetic Diagnosis International Society).
2-
.
,
,
(. ).

:
, , ,

, 19 2005 .

3. ()


in situ
(FISH) ( /PC R ).

(array comparative genomic
hybridization a-C G H ). a-C G H
,

. :

.
a-C G H , , -,
.

.
,
. 3 .1. ,
,
.

3.1.
6 .

.
,
:
(-, -,
X- Y-), (
). ,

. ,
.
.
, : I82

3.1.

,
, .

.
:
35
;
,

( );

,
, - ;

(
;
).
,
,
(
3 4 ).

,
,
.
(/PG S).
FISH
9 -1 2 .
,
: 8, 9, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 21, 22, X, Y.
,
90%
. 5
(13, 18, 21, X, Y) 2831%
41 %
, .
183

3. ()

3.1.

. 3 .1 .

3. ( )

,

,

, ,
.
,
.

( ),
,
.
, ,
,
. ,
, ,
.
-
(53), (RB1), ().
1 (NF1) II (NF2),
(BRCA1, BRCA2), -
(ATM), . ,
, RB 1,
,
90%.
,
.. .

,

. 10
. ,
. 3
,
.
/
186

3.3. ( )

LA- /,
.

.
,
, ,
.
200 ,
.

.
social sexing.

.
,

, .

3.2.
:
1) ,
, ;
2)
;

; FISH
;
3) - -
.

3.3.
( )
. .

187

3. ( )

35 . 2
.
(
10 ) :
, ,
,
.
.
2

60 (. 3.2).

. 3 .2 . /:
; /;
/; 035 ;
0 6 0 .


, 0,1 .
-
,
.

.

, 2+ Mg2+(, BiopsyMedium,
Origio),
.

3.3. ( )


, ,
.

Nunc,
.
.
, ,
(
).
,

.
.
PZD (partial zona dissection, HUM AGEN,
)
.
,
.
,
/,
.
1516 ,
2530 .


.
()
; ,
.

3035 .

,
,
.
189

3. ( )


( 10 20).
:

,
, ;

,
PZD ;
PZD
1,5 /.
, ,
, (
Pb Cat#K-PBBP-2535, Cat#K -PZD P1035, Cat#K-EBPH-3535)
Humagen ( Pb Cat#M AH-SM -35,
PZD-35,
MBB-FP-M-35).


.
FISH.
FISH I II , ,
1518 .

.
.
,
(. 3.3, ).
,
12 (. 3.3, ),
,
.
, 12
1011
190

3.3. ( )

. 3 .3 , -.

(. 3.3, , ). .
, ,
,
,
. ,
.
.
,
12 .
. ,
,

(. 3.4, , ),
,
(. 3.4, ).
,
P b l, .

- ,
(. 3.4, ). .
191

3. ( )

. 3 .4 , -. , ( )


,
, .
, ,
Nunc
.
FISH .
, , in vitro
( 72 )
.
.
-, V- -
,

.
- . ,

12 , (. 3.5, )
( -

3.3. ( )

. 3 .5 , - .
( )

) (. 3.5, , ).
,
12 (. 3.5, ),
. -
(. 3.5, ).
V- . V-
,
12
( ) ,
.
.
193

3. ( )


1011 .
- . ,
12 .
( ),

12 .
,
1 -2
1011 .
.
3
(. 3.6, ).
,
.
(. 3.6, ). ,
,
(. 3.6, )
,
(. 3.6, ).
,

(. 3.6, ). .
.
,
,
(. 3.6, ).
. -

,
. :
;

;

20 .
194

3.3. ( )

. 3 .6 , - . ( )


45 ,
, 1618
.
,
.
.
(. 2.16.2.
()), 3040
.
,
6 (. 3.7, ), -

3. ()

. 3.7, -. ( )

( ),
(. 3.7, , ).
, 45

7 - 8 (. 3.7, ).

(. 3.7, , ).
,
,
5 (. 3.7, , ).
, 196

3.3. ( )

. 3 .7 , -. ( )

,
(. 3.7, , ).

,
(. 3.7, ).
.
,
,
(. 3.7, ).
, ,
.
197

3. ( )

,
.
.

:
,
3 (. 3.8, , ).
(. 3.8, , ).

.
.


(. 3.9, -).
.
FISH.

, ,
.

. 3 .8 , -.
( )

3.4. ( )

. 3 .9 , - . : - )
; -)
, ;
)

3.4.
( )
FISH.
.

,
100.
3 : 1 ,
2 - 20 .
-

3. ()

SuperFrost ,
, ,
( / ),
.
.

4050 .

, .

.
.
.
2 , ,
1 ,
.


,
.
, .
, ,
.

.
,
( 5 ).

.
.
12 ,
.
.
- 2 0 ,
,
.
200

3.4. ( )

.

- : 60
100 ,
4050 .
1% ,
0,6% BSA (bovine serum albumin
).
0,2 +2
+8 .
35 ,
23 .


.
5 .


, .
(
), .
, .
,
,
. ,
,

.
.

.
12 , .
, .

.

201

3. ( )

5
, .
50 ,
100 .
.
- .
, ,
, 2 .

/. ,
(P b1, Pb2, 1).


.
,
.
.
,
,
.

( , ).

. /

-
.

.
/
(, 1b2 1;
,
).
, ,
12 ,
202

3.5. ( )

,
.
, -20
.

3.5.
( )
3.5.1. FISH
FISH


.

, ,
.
FISH
, ,
()
.
FISH

.

.
FISH
,

,
(),
.
FISH :
;
;
in situ;
203

3. ( )

;
DAPI (
Blue DAPI )
,
.
,
FIS H :
1. 0,1 200
(Sartorius, Ohaus).
2.
(Olympus, Nikon, CarlZeiss, Leica),

. (. 5):
Blue ( Spectrum
Blue)
Aqua ( Spectrum
Aqua)
Green ( Spectrum
Green)
Yellow ( Spectrum
Gold)
Red ( Spectrum
Red)
DAPI ( DAP1)
3. (MRc, MRm CarlZeiss).
4.
(CarlZeiss AxioVision Software + AxioVision 4 Module
Multichannel Fluorescence).
5. /
(HYBrite) (ABBOTT).
6. - (MEMM ERT).
7. - FV-2400 (BioSan).
8. ST-3 (ELM1).
9. .
10. - 20 .

3.5. ( )
5
A B B O TT Mollecular
,

Spectrum Red
Spectrum Gold
Spectrum Green
Spectrum Aqua
Spectrum Blue

nm

592
530
497
433
400

nm

FWHM
35
37
30
53
61

612
555
524
480
450

FWHM
39
45
56
55
50

11. MELAdest65 Aquadist Euronda


(MELAG).
12. -1/20
( ).
13. GM H 3230 (G REISIGER
electronic GmbH).
14. .
15. , .
16. (Eppendorf, Biohit, MicroOne).
17.
(- 50 100 ),
.
18. ( 1015 ).
19. .
20. .
21. (Menzel-Glaser).
22. , pH 6,510 (MERCK).
18. , pH 4,511 (MERCK).
19. .
20. ( ).
21. Millipore 45m.
22. .
23. (. 6)

3. ( )

6
FISH


(Abbott Molecular, Kreatech Diagnostics)
,
: antifade II solution, DAPI II
counterstainig (Abbott Molecular)
Vectashield Mounting Medium (Vector Laboratories)
(SIGMA)
(SIGMA)

-20 (SIGMA)
(MERCK)
() (SIGMA)
NaOH 10N (SIGMA)
96


-2 0 ,

-2 0 ',

-2 0
,

,


,



F IS H

1.
20xSSC (3 NaCl, 0,3 Na, pH 7,0).
175,3 NaCl 88,2 800
, pH 7,0 0,5 NaOH.
1000 .
.
. 6
, .
2xSSC. 100 20xSSC 900
, pH,
pH 7,0 0,5 NaOH.
. .
1xSSC. 50 20xSSC 950
, pH,
206

3.5. ( )

pH 7,0 0,5 NaOH.


. .
1xSSC / 0,1% -20. 100
1xSSC 100 -20. .
.
. 1
100 2xSSC, 10 10N NaOH
+60 .
, pH 7,0 1
Millipore-45m. .
6 ,
.
. 10%
( 30004000 .) ,
Millipore-45pm
500800 .
20 .

FISH (.
),
(95% 70% ). 70%
74 95%- 26
. 95 70%
23-
FISH.
.
2. :
12
FISH

-
.


46,XY.

3. ( )


(-) .

FISH.

, +60
(G M H 3230)
.
- 100
, 100 1xSSC /0,1%
-20 100 1xSSC.
30
-
.
- +37 0,5 .

30

.
+37 0,5 .
,
.
FISH. FISH.
FISH, ,
, , ,
.
,

, .
-

.
, Abbott Molecular,
( http://www.abbottmolccular.com/) Kreatech Diagnostics,
(http://www.kreatech.com/).
.

3.5. ( )


, 22ql 1.2
( ), 15q11-q 13 (
) .

.
-
. ,
,
( 13, 16, 18, 21, 22 ),
24 .

,
( 2 9 ).
. ( 0,5 )
,
.
1. LSI - , ,
(TelVysion) .
()
,

. :
(
0,5 ) 7 L Hybridization Buffer, 1 L ,
2 L ;

13 ;

45 1
10 ;

.
2. , MultiVysion M ulti
Vysion PGT (Abbott Molecular) ,
: LSI, , TelVysion,
209

3. ( )

MultiVysion MultiVysion PG T
70% .
.

,
(),
-.

(
) ,
+60 1 , 1 .
: 70 25 ,
96 1 .
+60 1 .
: 100
, +37 1
-, 85
60100
, .
1xSSC,
+37 1 -, 5
.

,
12 ,
5 (

); 5 .
1xSSC,
+37 1 -, 5
.
1%
1015 ( )
.
1xSSC,
+37 1 -, 5
.
210

3.5. ( )


( ).
: 70 25 ,
96 1 .
+60 1 .


,
.


,
, (
56 ) .


+371 .

1,5
, ,
(
12 ),
,
.
, ,

.

( ).
+74 5 ,
510 . ,
(
).


211

3. ( )

(+37 )
+37 1
.
/
.
+37 1 .

1 ( )
,
, .



.
2xSSC
.

1xSSC / 0,1% -20 1xSSC
+47 0,5 2
-.

.
: 70 25 ,
96 1 .

42 .
3 L ,
- ,
24 24 ,
( ,
40 + 2 ).

()
.
5
.
212

3.5. ( )

: 70 510 ,
96 510 .
. F ISH

,
, ,
(
).
( )
, .

- .
-,
( ), ,
LSI .

.

,
, (
).
FISH
(
). (
)
.

.
, .

, .

2 ,
-
(. 3.10, 1a).
,

3. ( )

. 3 .1 0 . FISH : ) ; ) 2

(. 3.10, 2).
,
.
1
. ,
1
(. 3.10, 1, 2).

2
(. 3.11). (
) ,..
, ,
.


:
1) ,
( );
2) ,
, (
); ()
- ;
3) ,
,
().
21 4

3.5. ( )

. 3 . 1 1 . FISH ( Abbott Molecular):


16;
22. 1, 2, 3 in situ

215

3. ( )

- /
, ,

,
,
, ,
(. 7).
7


,

, /
/
/




( )

*
*

()

*
() .

3.5.2.
,

in vitro,
,

(
) .

.

3.5. ( )

,
, :
-, - ,
.
, ,
.
, ,
, .
,
, .
,
( ),
.
, , ,
. ,
, ,
.
,
, , .
,
.

.

,
, , ,
, .

:
;
, -
-,
;


;
217

3. ( )

, ,
,
;

DNA Contaminant Removal
Solution (DNA-OFF);

,
.
,
,
.

( , ..).
,
. ,
,
, ,
,
.
,
.

,

.

,

1.
2.
3.
4.
5.

218

(Applied biosystems).
(Applied biosystems, Bio-Rad).
.
- FV-2400 (BioSan).
- (BioRad).

3.5. ( )

6. (BioRad).
7. (Eppendorf).
8. 0,5
10 , 220 , 20-100 , 100-1000 (Eppendorf).
9. 8- (Finnpipette).
10. (Biometra).
11. (Bio-Rad, UVItec).
12. .
13. .
14. .
15. .
16. .
17. - 2 0 .
18. 0,6 ,
- - .
19. 0,6 , .
20. 1,5 .
21. 2 .
22. 0,2 , 96 .
23. .
24. , 20 , ,
- -
.
25. , 200 , ,
- -
.
26. , 1000 , ,
- -
.
27. 20 .
28. 200 .
29. 1000 .
30. .
31. .
219

3. ( )

FISH
1. ,
- - .
2 . 20 /.
3. Taq -.
4. MgCl250 mM.
5. 10 N H 4 .
6 . dNTPs 2,5 .
7. .
8. .
9. .
10. .
1 1 . N ,N ---.
12. TEM ED.
13. 0,625 /.
14. (N H 4)2S2O8
15. , .
16. FF.
17. .
18. (DMSO).
19. Tween 20.
20 . Triton X -100.
2 1 . DN A-OFF .

1. ( Nested ),

-.
2.
5 , .
3. 12 .
4. .

.
5. 15 45
.
220

3.5. ( )

6.

20
96 ,
( ),
7. 72 45 ,
, MgCl, dNTPs,
,
, -
.
,
, .
8. 30 , 10
72 ".
9. 25 , ,

, .
10. 2
-.
11. 1 .
12. 30 (

;
).
13. 5
.
14.
(
).


.
ADO
(Allele Drop Out).

.