1

Аналитическая газовая и жидкостная хроматография

1. Основные этапы развития хроматографии и хроматографического при-

боростроения. Вклад отечественных ученых в развитие хроматографии

Хроматография – это научная дисциплина, находящаяся на стыке хими-

ческих, физических и биологических наук, которая изучает различные явления,
происходящие в хроматографических процессах, связанных со структурой и
свойствами участвующих в этих процессах веществ.
Как известно, открытие хроматографии принадлежит выдающемуся рус-
скому ученому М.С.Цвету (1903), который значительно углубил и расширил
известные до него методы адсорбции и научно обосновал процессы хромато-
графирования во всех основных аспектах, включая и бумажную плоскостную
хроматографию. Работы М.С.Цвета были связаны с разделением компонентов
хлорофилла в колонке с адсорбентом в потоке жидкого растворителя. Это, в со-
ответствие с номенклатурой, вариант элюентной или проявительной жидкост-
ной хроматографии. До 1914 г. М.С. Цвет опубликовал несколько фундамен-
тальных работ по хроматографии. Дальнейшее развитие хроматографии было
продолжено в 30-е голы. При этом обеспечивается переход от окрашенных мо-
лекул биологической природы к любым органическим молекулам, далее метод
распространяется на неорганические газы, ионы неорганического и органиче-
ского происхождения, затем – на высокомолекулярные органические соедине-
ния, металлы и, наконец, на неорганические и органические структуры, вклю-
чая коллоидные частицы и микроорганизмы.
Аппаратурное оформление расширилось от наполненной сорбентом ко-
лонки круглого сечения, на сечения разнообразной конфигурации и на прове-
дение процессов на плоскости. Совокупность подвижных фаз охватывает не
только жидкости, но и газы, пары и сверхкритические флюиды. Неподвижные
фазы стали не только твердые адсорбенты, но также и жидкости, включая жид-
кие кристаллы и коллоидные системы. Причем элементарными актами могут
быть различные сорбционные явления, включая не только адсорбцию, но и аб-
сорбцию, хемосорбцию и биосорбцию, а в последнее время хроматография во-
обще выходит за рамки использования сорбционных процессов. В связи с этим,
по мере развития хроматографических процессов было предложено большое
число частных определений хроматографии. Наиболее общее и полное опреде-
ление хроматографии дано М.С. Вигдергаузом (1984): «Хроматографическими
называются процессы, основанные на перемещении вещества (газа, жидкости
или совокупности надмолекулярных структур) вдоль пористого слоя или внут-
ри ограниченного пространства в потоке, вызванном действием движущих FД и
тормозящих FТ сил, из которых по крайней мере одна имеет величину, завися-
щую от молекулярной структуры и физико-химических свойств вещества».
М. С. Вигдергауз является основателем кафедры общей химии и хромато-
графии в Самарском государственном университете (1981). Это единственная в
России кафедра, в названии которой заложена наука – хроматография. Ежегод-
но кафедра выпускает более 30 специалистов. Основные направления исследо-
 2
вания сотрудников кафедры и студентов: развитие теоретических и информа-
ционно-методических аспектов хроматографии, включая изучение влияния не-
идеальности хроматографической системы на термодинамические характери-
стики сорбции, разработка и развитие новых вариантов хроматографии, в том
числе барохроматографии, многомерной хроматографии, хромато-
корреляционных методов, разработка компьютерно-хроматографических мето-
дов индивидуальной и групповой идентификации, изучение взаимосвязи
«структура молекулы сорбата – хроматографическое удерживание», разработка
новых методов качественной и количественной интерпретации хроматограмм,
разработка и исследование новых неподвижных фаз и сорбентов, разработка
различных методик анализа с использованием газовой хроматографии (ГХ),
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), тонкослойной хро-
матографии (ТСХ) и сверхкритической флюидной хроматографии (СКФХ).
Что может хроматография?
1. Экологические аспекты и прежде всего охрана окружающей среды:
анализ воды, воздуха, почвы. Определение вредных для здоровья ве-
ществ. Полный анализ компонентов атмосферы городов, рабочей зоны
предприятий и жилых помещений.
2. Медицина: содержание кислорода и спирта в крови, анализ выдыхае-
мых человеком газов, а также продуктов гормональной деятельности,
анализ различных лекарственных препаратов в фармакологии, анализы
в судебной экспертизе и криминалистике, анализ ядов и наркотиков,
допинговый контроль на спортивных соревнованиях.
3. Анализ пищевых продуктов и компонентов их запаха – овощи, фрук-
ты, молоко, чай, кофе, мясо, рыба, икра, вино, водка, коньяк и т.д.
4. Анализ содержимого одной клетки, выделение белков и вирусов, рас-
шифровка компонентов ДНК.
5. Нефтяная и химическая промышленность (углеводородные и неугле-
водородные компоненты нефти, нефтепродуктов, нефтяных и природ-
ных газов. Органические соединения, содержащие N, O, S, галогены и
другие элементы);
6. Анализы в энергетике и геологоразведке;
7. Анализ атмосферы планет (Венера, Марс, лунный грунт);
8. Хроматографическое изучение адсорбции, растворения, диффузии и
др. явлений, лежащих в основе хроматографических процессов;
9. Изучение миграции нефти и газа в недрах Земли, обусловленной про-
цессами хроматографии (FД – перепад давления в пластах, FТ – ад-
сорбция углеводородов глиной);
10. Распределение металлов в рудах, связанное с процессами ионной хро-
матографии, когда FД – диффузия ионов металла, а FТ – ионный обмен
в гелях кремнезема и окиси алюминия, и множество других задач.
По образному выражению Российского ученого Александра Абрамовича
Жуховицкого: «открытие хроматографии можно сравнить с созданием микро-
скопа, благодаря этому методу открывается неведомый мир компонентов слож-
ных природных и синтетических смесей».
 3
Важными этапами развития хроматографии стали: открытие ТСХ (1938) –
русские ученые: Измайлов, Шрайбер; жидкостно-жидкостная (распределитель-
ная) хроматография (1941) – Мартин и Синж; газовая распределительная хро-
матография (1952) Мартин и Джеймс. Они также создали теорию и аппаратуру
ГЖХ и с этого времени методы ГХ получили наиболее интенсивное развитие.
Изучаются сорбционные процессы, развивается теория адсорбции, создаются
высокоэффективные адсорбенты. Развивается теория ГХ, создаются приборы и
методики разделения. Стали регулярными хроматографические конференции и
симпозиумы, первый из которых состоялся в 1956 г. в Лондоне; исключитель-
ное значение имело создание Голеем (1957) капиллярного варианта ГХ. Этому
способствовала разработка малоинерционных и высокочувствительных детек-
торов: Мс Вильям – ПИД (1957) и серия ионизационных детекторов – Ловелок
(конец 50-х начало 60-х). Порат и Флодин (1962) создали вариант эксклюзион-
ной ситовой хроматографии для разделения высокомолекулярных соединений;
С середины 70-х начинает интенсивно развиваться жидкостная хромато-
графия, а с середины 80-х использование флюидной хроматографии и полная
компьютеризация всего хроматографического процесса.
Становление хроматографии в России связано с именами Чмутова, Кисе-
лева, Жуховицкого, Туркельтауба, Гольберта, Вяхирева, Рачинского и др. В это
время выполняются фундаментальные работы в области теории хроматогра-
фии, включая теорию межмолекулярных взаимодействий в хроматографиче-
ской системе, работы А.В. Киселева в области ГАХ и ЖАХ, организуется про-
изводство отечественных полимерных сорбентов под руководством К.Н. Сако-
дынского, создаются новые варианты хроматографии – работы Жуховицкого и
Туркельтауба (вакантная, ступенчатая, хроматография без газа-носителя, хро-
матермография, хромадистилляция и др.). Развитие отечественной хроматогра-
фии связано с работой Научного Совета по хроматографии АН СССР, первым
председателем которого был член-корреспондент АН СССР К.В. Чмутов.
Определенный вклад в развитие хроматографии внесли ученые Поволжья:
1. Вяхирев Д.А. - заведовал кафедрой физической химии Горьковского
госуниверситета. Одновременно с чешским ученым Янаком (1953)
впервые использовал интегральный объемный детектор – азотометр,
который лег в основу создания волюмометрического ГХ типа ХЛ-2;
создал и развил теорию вакуумной хроматографии; разработал препа-
ративное выделение индивидуальных легких углеводородов для мет-
рологического обеспечения хроматографических приборов; с 1963г в
ГГУ открыта специализация по ГХ.
2. Айвазов Б.В. Башгосуниверситет г. Уфа – организовал чтение спец-
курсов и выполнение дипломных работ по хроматографии.
3. С конца 50-х начались конструкторские и методические разработки в
Дзержинском НПО «Химавтоматика» (Яшин Я.И., Калмановский
В.И.). Разработан ПИД и газовые хроматографы серии «Цвет», а также
жидкостные и ионные хроматографы.
4. В 1976 г. в составе Научного Совета АН СССР по хроматографии
было организовано Поволжское отделение, под председательством
 4
М.С. Вигдергауза, в которое вошли ведущие специалисты Н-
Новгорода, Дзержинска, Ярославля, Казани, Самары, Новокуйбышев-
ска, Саратова и др. городов Поволжья.

Основные этапы развития хроматографического приборостроения

Первое сообщение о хроматографическом адсорбционным фракционато-

ре появилось в 1943 г. (США), а серийное производство лабораторных хрома-
тографов в США началось в 1955 г. с детектором по теплопроводности ДТП
(катарометр), который является одним из распространенных дифференциаль-
ных детекторов и широко применяется в настоящее время.
Начало газохроматографического приборостроения в СССР относится к
концу 40-х – началу 50-х годов и связано с аппаратурным оформлением мето-
дов, описанных в оригинальных работах Российских ученых Жуховицкого и
Туркельтауба. Так, в 1949 г. разработан титриметрический хроматографический
газоанализатор для определения углеводородов и СО в воздухе. Позже был вы-
пущен хроматограф ХТХГ-1 с термохимическим детектором (ДТХ) по теплоте
сгорания для анализа Н2, СО и углеводородов С1-С4.
В 1958 г. ВНИИКАНефтегаз Минприбор совместно с ВНИИГНИ выпус-
кают крупную серию хроматографов ХТ-2 и ХТ-2М для анализа нефтяных и
природных газов нефтепереработки с детектором ДТХ. Затем разрабатывается
серия специализированных хроматографов с детекторами ДТХ и ДТП для ана-
лиза конкретных смесей в технологических потоках или в лабораториях нефте-
химических предприятий (ХТП-2, ХТП-2А, ХТП-2Б, ХТП-2В и т.д.). Серия ХТ
была продолжена в 60-х годах.
ХТП-63 – промышленный, целевой хроматограф, аналитический блок ко-
торого с колонками и детектором выполнен во взрывозащищенном исполнении
и снабжен пневматическим преобразователем для системы регулирования по
хроматографическим сигналам.
ХТ-63 – универсальный лабораторный хроматограф с детекторами ДТП,
пламенно-ионизационным детектором ПИД, детектором по плотности ДПЛ и
аргоновым ионизационным детектором ArИД для веществ с температурой ки-
пения до 300°С.
ХТ-6 – целевой, лабораторный хроматограф для анализа углеводородных
неуглеводородных газов с ультразвуковым детектором УЗД.
ХТ-4 – целевой, портативный для анализа продуктов сгорания с детекто-
ром ДТХ (Н2, СО, СН4 и С2-С4).
ХП-5 – целевой, промышленный во взрывозащищенном исполнении с
УЗД и ДТХ для анализа углеводородных и неуглеводородных газов в нефтяной
и нефтехимической промышленности.
ХТ-7 – универсальный, лабораторный со ступенчатым программировани-
ем температуры колонок до 500ºС со скоростью до 50ºС/мин с четырьмя детек-
торами (ДТП, ПИД, детектор электронного захвата ДЭЗ, ДПЛ).
ХТ-8 – переносной хроматограф с ДТП и ДТХ с тремя аналитическими
насадочными колонками.
 5
Следующая серия – ХЛ – конец 50-х, выпускает СКБАНН Миннефтехим-
прома одновременно с серией ХТ.
ХЛ-2 – лабораторный хроматограф с волюмометрическим детектором
(азотометр) для анализа газов.
ХЛ-3 – с детектором ДТП изотермический режим для веществ с
Ткип=180ºС.
ХЛ–4 – с детектором ДТП изотермический режим для веществ с Ткип=200-
250ºС.
ХЛ-6 - с детектором ДТП изотермический режим для веществ с Ткип до
300ºС.
Серия была завершена прибором ХЛ-69 с тремя детекторами (ДТП, ДПЛ,
ПИД) для анализа веществ с Ткип ≤ 350ºС.
Серия УХ – СКБ аналитического приборостроения Эстонской АН. Сере-
дина 60-х УХ-1 и УХ-2 (универсальный газовый хроматограф) блочного испол-
нения для веществ с Ткип=300ºС и Ткип=350ºС. Колонки выполнены в виде пло-
ских спиралей, прижатых с двух сторон к алюминиевым нагревателям.
Вырухром (1970) - Ткип ≤ 450ºС, блочная конструкция, универсальный,
лабораторный газовый хроматограф с воздушным термостатом. Детекторы
ДТП и ПИД.
Серия ЛХМ (ЛХМ-7, ЛХМ-72, ЛХМ-8, ЛХМ-80). Детекторы ДТП и ПИД
для веществ с Ткип ≤ 350ºС. Разработка СКБ газовой хроматографии и СКБ ИОХ
АН СССР. Завод изготовитель «Хроматограф». Серия завершилась выпуском
многофункционального прибора ЛХМ-8 МД.
Серия Цвет – выпускается Дзержинским НПО «Химавтоматика». Начало
60-х годов – Цвет 1÷6 (универсальный лабораторный газовый хроматограф) для
анализа веществ с Ткип=350-400ºС. Комплектность детекторами ДТП, ПИД,
ТИД (термоионный детектор), ДЭЗ, ДПЛ.
Цвет 100 (20 моделей) – различные по назначению и режиму анализа с
различной комплектацией детекторами: ДТП, ПИД, ПФД (пламенно-
фотометрический детектор), ТИД, ДПР (постоянной скорости рекомбинации
ионов). Дополнительное оборудование: пиролитическая приставка, устройство
для концентрирования (обогатительное устройство) и др. Модели Цвет 122-130
обеспечивают программирование температуры от -50 до +400ºС. Остальные
модели без криогенного оборудования.
Цвет 500 – аналитические цифровые хроматографы с микропроцессорной
системой обработки – 5 детекторов, как в Цвет 100. Дополнительное оборудо-
вание: устройство АРП (анализ равновесного пара); дифференцированный уси-
литель типа УД-1 и УД-2; автоматические дозаторы газа и жидкости, обогати-
тельное устройство, микропроцессорная система автоматизации анализа САА-
06. Температура колонки от -99 до +399ºС. Программирование температуры во
всем диапазоне с максимальной скоростью 25ºС/мин.
Цвет 800 – универсальный лабораторный хроматограф с более совершен-
ной по сравнению с Цвет-500 системой ввода пробы в капиллярные колонки.
Переносные хроматографы для геологических экспедиций и поисковых
партий, для определения утечек газа из газопроводов, контроля воздуха произ-
 6
водственных помещений, а также загрязнений окружающей среды. Это газовые
хроматографы ХПМ-2, ХПМ-4 с автономным питанием от батарей и встроен-
ного газового баллончика. Детекторы ДТП и ПИД. Микропроцессорная обра-
ботка сигналов. В модели ХПМ-5 дополнительно ДПР и АРП.
Жидкостный хроматограф серии Цвет 3000: микроколоночный жидкост-
ный хроматограф со спектрометрическим УФД; Цвет 3001: с лазерным флюо-
рометрическим детектором; Цвет 3110 и портитивный жидкостный хромато-
граф с электрометрическим детектором ХПЖ-1.
Ионные жидкостные хроматографы. Цвет 3006 – для анализа неорганиче-
ских и органических анионов, а также катионов щелочных и щелочно-
земельных металлов, солей аммония и др. Детектор кондуктометрический. Цвет
3007 для анализа минеральных удобрений. Переносной хроматограф ХПИ-1 с
автономным питанием и микропроцессорной обработкой сигналов имеет те же
возможности, что и Цвет 3006. ХПИ-2 имеет систему отбора газовых смесей и
может быть использован для анализа кислых газов в промышленных выбросах.
Промышленные хроматографы серии Цвет во взрывозащищенном испол-
нении с ПИД типа РХ-1 и РХ-5.
Из других современных хроматографов следует отметить газовые хрома-
тографы типа «Кристалл», выпускаемые ЗАО «СКБ Хроматэк» г. Йошкар-Ола,
а также жидкостные хроматографы серии «Миллихром» Орловского ПО «На-
учприбор». Из зарубежных приборов наибольшим спросом пользуются газовые
и жидкостные хроматографы фирм: Hewlett Packard, Perkin-Elmer, Varian и др.
Серийные отечественные хроматографы по функциональным возможно-
стям в основном соответствуют среднему мировому уровню, но несколько ус-
тупают по уровню автоматизации и потреблению энергии, а также по массе и
габаритам изделия.
В настоящее время наметились следующие тенденции развития хромато-
графии:
1. В области теории:
• исследование связи структуры исследуемых молекул и их удержи-
вания на различных сорбентах;
• многомерные варианты хроматографии (МС, ИКС, ГХ-ЖХ, не-
сколько колонок и др.);
• теоретическое моделирование и создание единой теории удержива-
ния для методов газовой, жидкостной и сверхкритической флюид-
ной хроматографии.
2. В области аппаратуры:
• повышение чувствительности и селективности хроматографических
детекторов;
• повышение точности и воспроизводимости анализа, совершенство-
вание метрологического обеспечения хроматографических измере-
ний;
• уменьшение времени разделения и получение экспрессных анали-
зов за счет повышения эффективности и селективности хромато-
 7
графических колонок (кварцевые капиллярные колонки с привиты-
ми фазами, новые методы полимеризации и модификации поверх-
ности колонок и т.д.);
• миниатюризация хроматографической аппаратуры, вплоть до соз-
дания приборов на основе кремниевой технологии на ЧИП-ах.
Развитие хроматографии с 1903 г. по настоящее время по публикациям в
отечественной и зарубежной литературе в % показывает, что:
1. Жидкостная хроматография – 37,93%;
2. Газовая хроматография – 22,41%;
3. Плоскостная хроматография (бумажная и ТСХ) – 22,39%;
4. Электрохроматография и электрофорез – 17,27%.
Следует обратить внимание, что 14 крупных работ, выполненных с при-
менением хроматографии в области биологии и биохимии удостоены Нобелев-
скими премиями, а доля хроматографических методов среди известных анали-
тических методов составляет около 40%. Кроме того, сотни фирм во всем мире
выпускают хроматографическую аппаратуру на несколько миллиардов долла-
ров США, т.е. это еще и мощная отрасль промышленного производства.

2. Аппаратурное оформление хроматографического процесса

Рис. 1. Блок-схема хроматографа:

1 – источник подвижной фазы;
2 – узел ввода пробы (дозатор а/в);
3 – хроматографическая система разделения (колонка, термостат);
4 – система детектирования;
5 – система обработки результатов измерения.

Рис. 2. Хроматограмма:
1 – ввод пробы; tM – время выхода несорбирующегося вещества; tR – время
удерживания сорбата.
 8
В результате хроматографирования получают хроматограмму, которая яв-
ляется записанной во времени функцией концентрации сорбата в подвижной
фазе на выходе колонки.
FD = f (u )
UC ≅ – линейная скорость движения хроматографической зоны ана-
FT
лизируемого вещества;
dP K p
U =− ⋅
dx η – линейная скорость подвижной фазы по закону Дарси для на-
полненных сорбентом колонок и закону Пуазейля для полых длинных капилля-
ров при ламинарном потоке;
dP = F – движущая сила (локальное падение давления вдоль колонки);
dx D

K P – коэффициент проницаемости колонки;

η – вязкость подвижной фазы;
FT = f ( K O , K C , K 1,C ) – тормозящие силы, связанные с характером взаимодейст-
вия сорбатов с неподвижной фазой.
Рассмотрим два варианта процесса.
1. Жидкостная хроматография.
Подвижная фаза не сжимаема. Тогда измеренная на выходе колонки объ-
емная скорость подвижной фазы FC связана с линейной скоростью подвижной
фазы U соотношением
FC FC
U = =
AM ε ⋅ AC ,
где AM=εAC – часть площади сечения колонки, доступная для перемещения
подвижной фазы;
2
 dc 
AC = π   – площадь сечения колонки;
 2
dC – диаметр колонки;
ε = VO
VC – доля колонки, занятая подвижной фазой, равная отношению сво-
бодного объема колонки, доступного для подвижной фазы, к объему всей ко-
лонки.
1. Газовая хроматография.

Рис. 3. Газовая схема хроматографа:

 9
L – длина колонки; ΔL1 – соединение узла ввода пробы с колонкой; ΔL2 –
соединение колонки с детектором; Pi, P0 – давление газа-носителя на входе и
выходе колонки соответственно.

Подвижная фаза сжимаема. При этом в каждой точке системы будут на

выходе устанавливаются свои определенные значения F и U, зависящие от P, V
и T согласно уравнению состояния идеального сжимаемого газа при стационар-
ном режиме течения.
FPaTa
UO = – линейная скорость газа-носителя на выходе колонки
AC ε

T P
 – средняя объемная скорость газа-носителя в колонке при
FP ,T = FPaTa  C a


 Ta P
C

усредненном по длине колонки давлении P = PO j32 и при температуре колонки

3  (Pi Po ) − 1
2

ТС ; j = 
2
 – коэффициент Джеймса и Мартина или фактор коррек-
2  (Pi Po )3 − 1 
3

ции на сжимаемость подвижной фазы. При использовании j32 сжимаемый элю-

ент как бы заменяется несжимаемым , имеющим постоянную объемную ско-
рость в колонке FP ,T и постоянное давление P . В случае, если расходомер газа-
C

T P 
носителя установлен на входе в колонку FP ,TC = FPP ,TP  C P  , где ТР и РР – тем-
 TP P 
пература и давление газа в расходомере. Если Ра=РР, то
T
FP ,T = FPa ,Ta C j32 = FC j32 ,
C
Ta
T
где FC = FPa ,Ta C – объемная скорость газа-носителя на выходе колонки при ТС
Ta
и Ра.
U = U O j32 – средняя по времени пребывания несорбирующегося вещества ли-
нейная скорость газа-носителя в колонке. На практике ее можно определить по
L + ΣΔL
уравнению U = , а в методичке по номенклатуре и в хроматографиче-
tM
L
ской литературе сделано допущение, что U = , которое справедливо для
tM
очень длинных колонок, поэтому рассчитываемые с использованием tM и tR
хроматографические величины, например, VM = t M FC , VR = t R FC , k i = t R/ i t M и
другие имеют повышенную погрешность, т.к. в расчетах не учитывается влия-
ние внеколоночных соединений и объемов Σ∆L . Это относится также и к жид-
костной хроматографии.

3. Основные теоретические аспекты газовой хроматографии

 10

Задачей теории газовой хроматографии является установление законов

движения и размытия хроматографических зон, связанных с диффузионными
процессами, зависимостью скорости движения зон от концентрации и медлен-
ностью процессов сорбции и десорбции в потоке подвижной фазы.
Известно, что в жидкостной хроматографии Vо=VM; в газовой хромато-
графии Vо=VG, причем VG = VM j32 , где VM – мертвый объем или объем несжи-
маемой подвижной фазы внутри хроматографической колонки; VG – объем газа-
носителя (сжимаемой подвижной фазы) внутри хроматографической колонки.
Известно также, что часть площади сечения колонки, доступная для пе-
ремещения подвижной фазы AM = ε ⋅ AC , причем для полой капиллярной колон-
ки величину свободного сечения можно рассчитать из ее геометрических раз-
 dc − d f 
2

меров с учетом толщины пленки неподвижной фазы (df). AM = π   , а

 2 
FC ⋅ t M ⋅ j32
для наполненной колонки в газовой хроматографии AG = VG L = .
L
Важной характеристикой при изучении течения является его режим, ко-
торый может быть ламинарным или турбулентным. Для полых капиллярных
колонок турбулентный режим наступает при критерии Рейнольдса Re ≥ 2000. В
слое зернистого материала турбулизация наступает значительно раньше, при Re
≥ 20 ÷100 . В реальных условиях хроматографирования при малых давлениях в
колонке и малых скоростях подвижной фазы, разделение осуществляется, как
правило, в ламинарном потоке.
d ⋅U ⋅ ρ
Re = M , где d M = d C ε – гидравлический диаметр колонки; U –
η
средняя по времени пребывания несорбирующегося вещества линейная ско-
рость газа-носителя; ρ, η - плотность и вязкость газа-носителя при TC и P .

3.1. Статика сорбции

Известно, что в ГАХ элементарный акт сорбции сводится к адсорбции

компонентов газовой смеси на поверхности адсорбента с последующей их де-
сорбцией, а в ГЖХ к абсорбции (растворению) компонентов газа неподвижной
жидкой фазой, нанесенной на твердый носитель. В общем случае величина
сорбции а зависит от температуры, давления газа, концентрации газа CG, при-
роды и структуры сорбата и сорбента и увеличивается с ростом поверхности
сорбента. Зависимость сорбции от концентрации при Т=const описывается изо-
термой сорбции и при малых концентрациях aS=Kо CM – это линейная изотерма
n + nM
Генри, где K o = ε + ε1K C = VR ⋅ j32 L ⋅ AC = S – общий коэффициент распре-
nM
деления, равный отношению количества сорбата в единице объема колонки к
 11
VS
количеству сорбата в единице объема подвижной фазы; ε1 = – доля ко-
VC
лонки, занятая неподвижной фазой. Для ГЖХ VS = VSS + VL – суммарный объем
подвижной фазы; VSS – объем твердого носителя; VL – объем неподвижной жид-
кой фазы. Для ГАХ ε1 = 1 − ε ; для ГЖХ ε1 = VL VC и ( ε1 + ε ) < 1.
n ⋅V C
K C = S M = S – константа распределения, равная отношению кон-
VS ⋅ n M C M
центрации сорбата в неподвижной фазе к концентрации сорбата в подвижной
фазе, где nS и nM – количество сорбата в неподвижной фазе и подвижной фазах
соответственно.
В ГЖХ с учетом законов Рауля и Дальтона используют константу Генри
K Н =  i 
P
- отношение парциального давления i-го компонента в идеаль-
 xi  xi →0
ной газовой фазе к его мольной доле xi в жидкой фазе. Если Pi – в единицах
давления, то KН – также в единицах давления. KН может быть безразмерной ве-
личиной в случае, когда Pi берется относительно PSt, т.е. Pr ,i =  i  . Вели-
P

 PSt 
чина KН – обратно пропорциональна удельному объему удерживания
R ⋅T
K H = T C , где МL – молярная масса неподвижной фазы.
Vg ⋅ M L
Для ГАХ используют константу Генри адсорбционного равновесия при
малых заполнениях поверхности K1,C = lim  GS 
Г , где ГGS – гиббсовская

 C G  CG → 0

адсорбция вещества на поверхности адсорбента, моль/см2; CG – концентрация,

моль/см3. Размерность K1,C [cм]. Известно, что в ГАХ постулируется, что
K1,C = lim (VST )CG →0 , где VST - удельный объем удерживания при ТС и P .

3.2. Кинетика и динамика сорбции

Разнообразные хроматографические процессы подчиняются ряду общих

законов динамики сорбции. Уравнения, описывающие процессы динамики
сорбции, являются дифференциальными уравнениями в частных производных
первого и второго порядков, которые очень сложно поддаются решению в за-
конченной аналитической форме. Как правило, получают асимптотические ре-
шения при определенных граничных условиях. Уравнение динамики сорбции
имеет вид:
 ∂ 2CM   ∂C   ∂a 
Deff   = u M  +   ,
2 
(1)
 ∂ x t  ∂x  t  ∂t  x

где х – длина слоя сорбента; СМ – концентрация сорбата в подвижной фазе;

u – линейная скорость подвижной фазы; Deff = Dпрод+Dвихр+Dвнутр+Dвнеш+Dстен –
коэффициент эффективной диффузии сорбата в системе подвижной и непод-
 12
вижной фаз; a = C S ε1 + C M ε – количество сорбата в единице объема сорбцион-
ного слоя.
Рассмотрим некоторые варианты решения уравнения (1) для условия рав-
новесной хроматографии, когда имеет место равновесное распределение сорба-
та между подвижной и неподвижной фазами.

3.2.1. Линейная идеальная хроматография

∂CS
= const ; Deff = 0 .
∂C M

а б
Рис. 4. Линейная идеальная хроматография:
а – хроматограмма; б – изотерма сорбции.

KC(A)>KC(B) uC=f(u)

Решение (1) при таких граничных условиях позволяет получить

u/ u/ ε u u
uC = = = = (2)
K O (K C ε1 + ε ) ε K ε1 + 1 k + 1
C ε
где u = u ε – истинная линейная скорость газа-носителя; u / = FC AC – фиктив-
/

t R − tM ε n
ная скорость газа-носителя; k = = K C 1 = S – фактор удерживания,
ε n
tM M
равный отношению времени пребывания молекул сорбата в неподвижной фазе
ко времени пребывания сорбата в подвижной фазе.

3.2.2. Нелинейная идеальная хроматография

∂CS
≠ const ; Deff = 0 .
∂C M
При этом возможны два случая:
1. Выпуклая изотерма (1);
2. Вогнутая изотерма (2).
 13

Рис. 5. Изотермы сорбции.

При выпуклой изотерме (1) области с малыми СG перемещаются медлен-

нее, чем с большими. Размытие фронта на слое и тыла в элюенте.

а б
Рис. 6. Хроматограммы при выпуклой изотерме:
а – хроматограмма на слое сорбента; б – хроматограмма элюата.

При вогнутой изотерме (2) происходит преимущественное размытие тыла

на слое и фронта в элюенте, т.к. области с малыми CG перемещаются быстрее
областей с большими СG.

а б
Рис. 7. Хроматограммы при вогнутой изотерме:
а – хроматограмма на слое сорбента; б – хроматограмма элюата.

Скорость движения uC(A) и uC(B) описывается уравнением (2) в точке мак-

симума пиков. Все остальные точки двигаются с отличными от (2) линейными
 14
скоростями, т.к. пики имеют асимметрию. Очевидно, что качество разделения
хроматографических зон в условиях асимметрии ухудшается.

3.2.3. Линейная неидеальная хроматография

∂CS
= const ; Deff ≠ 0 .
∂C M
Рассмотрим два случая.
1. Процесс проявления начальной узкой полосы.

а б
Рис. 8. Хроматограммы линейной неидеальной хроматографии:
а – хроматограмма на слое сорбента; б – хроматограмма элюата.

Величина пробы → 0. При этом скорость движения центра хроматогра-

фической зоны (максимальная концентрация в пике) определяется по уравне-
u u
нию (2) u = и u = , а распределение концентраций в мо-
C ( A) k + 1 C ( B) k + 1
A B
мент времени t в хроматографической зоне описывается уравнением, получае-
мом после приближенного решения общего уравнения динамики сорбции (1).
 ( x − x 0 )2 ⋅ (k +1) 
− 
 4 Deff t 
c = c макс ⋅ e (3)
Уравнение (3) аналогично гауссовой зависимости вероятности распреде-
ления ошибок в математической статистике.

Рис. 9. Хроматограмма сорбата в элюате.

Вследствие действия различных диффузионных факторов (Deff) хромато-

графическая полоса при движении вдоль колонки постепенно расширяется. С
 15
одной стороны дисперсия полосы пропорциональна пройденному расстоянию
хо , с другой – времени t, за которое полоса прошла некоторую часть колонки,
2 Deff ⋅ t 2 Deff
т.е. σ 2 = H ⋅ xo = 2 Deff ⋅ t . Коэффициент пропорциональности H = =
xo u
– называется высотой, эквивалентной теоретической тарелке (ВЭТТ) и связыва-
ет квадрат ширины хроматографической зоны (σ2) с пройденным ею расстояни-
ем хо по слою сорбента.
2. Процесс проявления широкой начальной полосы.

Рис. 10. Хроматограмма проявления широкой начальной полосы.

Величина пробы велика. При проявлении процесс деформации хромато-

графической зоны будет состоять из двух стадий. На первой стадии происходит
размывание краев (фронта и тыла) зоны.
При этом Смакс=Со – исходная концентрация сорбата в пробе, и скорость
перемещения согласно (2) соответствует области с концентрацией Co / 2 . Все
другие точки хроматографической зоны будут перемещаться с отличной от (2)
скоростью. Вторая стадия начнется после того, как исчезнет в полосе область
«плато», где Смакс=Со. Для этой стадии распределение концентраций описыва-
ется уравнением (3).

3.2.4. Нелинейная неидеальная хроматография

∂CS
≠ const ; Deff ≠ 0 .
∂C M
Рассуждения о процессе проявления хроматографической полосы анало-
гичные п. 3.2.3. Только добавляется еще асимметричное размытие полосы при
выпуклой или вогнутой изотерме сорбции, как было показано в п. 3.2.2.

а б
Изотерма 1 (выпуклая)
 16

а б
Изотерма 2 (вогнутая)

Рис. 11. Хроматограммы нелинейной, неидеальной хроматографии: а – на

слое сорбента; б – а элюате.

При этом скорость движения центра зоны с максимальной концентрацией

сорбата с определенной погрешностью может быть определена по уравнению
(2). Оценка распределения концентраций в хроматографической зоне осложня-
ется и для ее описания применяют метод моментов и другие математические
приемы.
Природа процессов размывания зоны сорбата при ее перемещении явля-
ется случайной, поэтому элюционную кривую можно рассматривать как плот-
ность распределения вероятности случайной величины – времени появления
молекул сорбата на выходе из колонки. Тогда статистические моменты случай-
ной функции, полученные после математических преобразований, описывают
следующие характеристики хроматографической системы.
mо – площадь под элюционной кривой; m1 – абсцисса центра тяжести
элюционной кривой (m1≠tR); m2 – характеризует разброс точек элюционной
кривой относительно ее центра тяжести; m3 – характеризует асимметрию элю-
ционной кривой; m4 – характеризует степень заостренности (эксцесса) элюци-
онной кривой.
Задача существенно осложняется, если в хроматографической системе
нарушается равновесное распределение сорбата между подвижной и непод-
вижной фазами, т.е. имеет место неравновесная хроматография, когда значи-
тельно увеличивается скорость подвижной фазы (u) и среднее давление в ко-
лонке ( P ). Значительный интерес к режиму неравновесной хроматографии
проявляется при использовании экспрессных приемов разделения сложных
смесей, особенно в экологии.

4. Уравнение высоты, эквивалентной теоретической тарелке ВЭТТ

Коэффициент эффективной диффузии сорбата в подвижной фазе в соот-

ветствии с классическими работами Ван-Димтера (1956), Гиддингса (1965),
Джонса (1961), Жуховицкого (1959), связан с факторами, определяющими раз-
мытие в заполненной сорбентом колонке соотношением:
= H = (A + Fu 2 ) + B + C1u + C 2 u1 / 2 + Eu ,
2 Deff
(4)
u u
 17

2 Deff
где H = – высота, эквивалентная теоретической тарелке, характеризую-
u
щая интенсивность размывания хроматографических зон;
A ~ 2 λd p – вклад вихревой диффузии (Dвихр); dp – диаметр зерна; λ – коэффици-
ент неоднородности размеров зерна;
d2
Fu 2 ~ p – вклад диффузии в непродуваемые газовые полости внутрь зерна
DM
или поры (поперечная диффузия);
B ~ γDM – вклад молекулярной или продольной диффузии (Dпрод); γ – коэф-
u
фициент извилистости насадки; DM – коэффициент диффузии сорбата в под-
вижной фазе;
d
С1u ~ k ⋅ f – вклад скорости установления сорбционного равновесия
k +1 DS
(кинетический фактор) или внутридиффузионная массопередача; DS – коэффи-
циент диффузии сорбата в неподвижной фазе; df – толщина пленки неподвиж-
ной жидкой фазы; k - доля молекул сорбата в неподвижной фазе;
k +1
d
С 2 u1 / 2 ~ 1 ⋅ p – вклад внешнедиффузионной массопередачи (Dвнеш) или
k +1 DM
кинетика доставки молекул сорбата к поверхности сорбента; 1 – доля мо-
k +1
лекул сорбата в подвижной фазе;
d2
Eu ~ p – вклад стеночного эффекта в диффузионное размытие (Dстен) –
DM
увеличение скорости газа вблизи стенок заполненных колонок или уменьшение
для полых капиллярных колонок.
Сумма первых трех слагаемых уравнения (4) без учета Fu2 использована
Ван-Димтером для описания процесса размытия полос в ГЖХ. Слагаемое Eu
большее значение имеет для капиллярной хроматографии.
ВЭТТ (Н) вошла в хроматографический обиход из теории теоретических
тарелок, предложенной Кейлемансом (1959) и Ван-Димтером. Эта теория осно-
вана на аналогии хроматографической системы с последовательностью дис-
кретных ступеней (тарелок), на которых устанавливается равновесие сорбата
между подвижной и неподвижной фазами, используемой при расчете ректифи-
кационных колонн в нефтяной и нефтехимической промышленности.
Уравнение материального баланса теории теоретических тарелок:
(KCVL + VG ) dnGi dV = nG (i −1) − nGi
G
Н – это длина участка колонки (слоя сорбента), отвечающая одной (еди-
ничной) ступени равновесия. Число теоретических тарелок N = L H . Чем
больше N и меньше Н, тем более эффективна колонка. Теория теоретических
тарелок формальна. Очевидно, что две колонки с одинаковыми N могут обеспе-
 18
чить различное качество разделения в зависимости от селективности выбранно-
го сорбента.

5. Хроматограмма. Элюционные характеристики

Рис. 12. Хроматограмма: 1 – нулевая линия; 2 – пик несорбирующегося

вещества; 3 – пик исследуемого вещества (сорбата).

Хроматограмма – это зависимость, характеризующая расположение зон

на слое сорбента (хроматограмма на слое) или в потоке подвижной фазы элю-
ента (хроматограмма элюата). Хроматограмма состоит из:
1. Нулевая линия (концентрация сорбата в подвижной фазе равна нулю);
2. Пик несорбирующегося вещества;
3. Пик исследуемого вещества (сорбата).
Пик ограничивается фронтом, соответствующим возрастанию концентра-
ции до максимальной и тылом, отвечающим убыванию концентрации сорбата в
подвижной фазе. Расширение (размытие) полосы по мере элюирования харак-
теризуется шириной пика: wh – расстояние между точками пика на середине
высоты; wb – отрезок основания пика, отсекаемый двумя касательными в точках
перегиба пика.
Размытие может быть симметричным или асимметричным.
w
v = Т – коэффициент асимметрии. При wТ=wФ v=1 – линейная изотерма;
wФ
при wТ<wФ v<1 – выпуклая изотерма; при wТ>wФ v>1 – вогнутая изотерма.
h – высота пика, перпендикуляр, опущенный из максимума пика на про-
должение нулевой линии; tM, lM и tR, lR – время или расстояние удерживания не-
сорбирующегося вещества (мертвое время) и сорбата.
При условии, что величина пробы σ пр > H ( σ пр - ширина полосы пробы на
слое сорбента), уравнение (3) с учетом (4) может быть записано при замене Deff
и t через L и H в виде:
 19
 (
−  ( L − x0 )
)
σ пр − H  2

 2 
e
C = C макс ⋅ (5)
2 LH
Откуда ширина полосы на слое
+ (σ пр − Н )
C макс
σ = 2 x = 2 2 LH ln
С мин
C макс
при σ пр ≅ H u , = 2 , σ 0,5 = 2 2 LH ln 2 .
С
Ширина полосы на хроматограмме элюата wh (см); τh (c); ωh (см3)
wh = K 0 AC σ 0, 5 B FC ,
где В – скорость диаграммной ленты самописца;
w
τ h = wh B ; ωh = h ⋅ FC = K 0 AC σ 0.5 . (6)
B

6. Величины удерживания

В хроматографии применяют абсолютные (без стандартов), относитель-

ные (с одним стандартным веществом) и интерполяционные (с двумя и более
стандартами) величины удерживания.
6.1. Абсолютные величины удерживания делят на первичные (непо-
средственно измеренные по хроматограмме) tR, lR; tM, lM и рассчитанные на их
основе VR = t R FC ; VM = t M FC , где FC = FPa ,TC .
Приведенные величины удерживания: t R/ = tR − t M ; VR/ = VR − VM .
Исправленный (скорректированный) удерживаемый объем: VRo = VR ⋅ j32 .
VRo = LAC K o j32 связан с общим коэффициентом распределения Kо.
VN = VR/ ⋅ j32 = LAC K C ε1 j32 – чистый объем удерживания связан с константой
распределения KC.
VRo и VN зависят от количества сорбента, что затрудняет сравнение ре-
зультатов исследования, поэтому используют удельный объем удерживания,
который является характеристикой хроматографической системы подвижная
фаза – сорбат – неподвижная фаза при TC=const и P .
VgT – это чистый объем удерживания, отнесенный к единице массы не-
подвижной фазы или единице поверхности адсорбента AS при TC и P .
V V
VgT = N для ГЖХ и VST = N для ГАХ
wL AS
6.2. Относительные величины удерживания.
t R/ ( i ) VR/ ( i ) K k
ri = / = / = C ( i ) = i
t R ( st ) VR ( st ) K C ( st ) k st
Точность определения относительных величин удерживания выше, чем
абсолютных и не зависит от погрешности измерения скорости ПФ и количества
 20
НФ. Однако имеет место потеря информации об абсолютной величине удержи-
вания.
6.3. Интерполяционные величины удерживания получают с использо-
ванием двух или более стандартных веществ сравнения.
 lg t / − lg t Rz /

I = 100 / Rx + z  – логарифмический индекс удерживания Ко-
 lg t 
 R ( z +1) − lg t Rz
/

вача (1958) – это безразмерный параметр, характеризующий удерживание сор-
бата в масштабе шкалы удерживания н-алканов, хроматографируемых в иден-
тичных изотермических условиях, где z и (z+1) – число атомов углерода в мо-
лекулах н- алканов, элюирующихся до и после исследуемого вещества х, т.е.
t/R(z+1) > t/Rx > t/Rz Или I равен помноженному на сто числу атомов углерода в мо-
лекуле такого гипотетического н-алкана, который имел бы одинаковое с иссле-
дуемым веществом приведенное время удерживания.
Ковач исходил из известной корреляционной зависимости, справедливой
для любого гомологического ряда, в том числе и для н-алканов: lg tR/ = a + bz ;
замена z=I/100 делает возможным применение этой зависимости для любых
веществ, принадлежащих к различным классам соединений.
t −t
J = Rx Rz + z – линейный индекс удерживания, предложенный М.С.
t R ( z +1) − t Rz
Вигдергаузом (1968). Он предложил более простое выражение, чем I, т.к. отсут-
ствует необходимость определения tМ и логарифма приведенного времени
удерживания tR/ . J – безразмерная величина, равная числу атомов углерода та-
кого гипотетического н-алкана, который имел бы одинаковое с веществом х
время удерживания. tR(z+1)> tRx> tRz. (линейная зависимость между соседними
гомологами, кусочно-линейная апроксимация).
 lg VgT ( x ) − lg VgT ( N ) 
I u = 100 + N  – универсальный логарифмический
 lg VgT − lg Vg ( N )
T

 ( N +1 ) 
индекс удерживания. Предложен М.С. Вигдергаузом (1986). Он содержит ин-
формацию о сорбционной емкости неподвижной фазы и в отличие от I и J ха-
рактеризует положение максимума пика сорбата в промежутке между пиками
гипотетических стандартов с фиксированными значениями сорбционных ха-
рактеристик, когда VgT для первого гипотетического стандарта (N=1) всегда не-
зависимо от НФ принимают равным 1 см3/г, а отношение приведенных времен
t R/ ( N =2 ) t R/ ( N =3)
удерживания соседних гомологов равным двум ( / = = ... = 2 ). При
t R ( N =1) t R/ ( N = 2 )
этом естественно сорбционные характеристики не изменяются при переходе от
одной НФ к другой, т.е. имеет место уравнение для гипотетических стандартов:
VgT( N ) = 2 ( N −1) – удельный объем удерживания N-го гипотетического стандарта.
 21

Построив зависимость lg VgT = f ( N ) , можно определить Nx и Iux по значению

lg VgT( x ) из хроматограммы сорбата на любой НФ.

Рис. 13. Зависимость lg VgT от универсального логарифмического индекса

удерживания I u (N – номер гипотетического стандарта при N=1, VgT =1 см3/г).

7. Эффективность разделения. Число теоретических тарелок

Эффективность разделения учитывают величиной отношения: lR/wh(см);

tR/τh(c) или VR/wh(см3). Используя уравнение (6) для ширины пика с учетом что:
( LAc K o )
2
VR LAc K o  VR  2
L
= ;   = = или
ωh K o Acσ 0, 5  ωh  ( K A
o c )2
⋅ 4 ⋅ 2 ⋅ LHL ln 2 H ⋅ 5,545
2
L V 
N = = 5,545  R  ,
H  wh 
lR L
При lR=L, можно определить число теоретических тарелок N. = ,
wh 2 2 LH ln 2
2 2
l  t 
откуда N = 5,545 R  ; или N = 5,545 R  ;
 wh   τh 
2 2 2
 l R/   t R/ 
  VR/
N eff= 5,545  = 5,45  = 5,545
 – число эффективных теоре-
 wh   τh 
  wh
 k + 1
2

тических тарелок. Нетрудно показать, что N = N eff   , где k – фактор

 k 
2
 k  k
удерживания; N eff = N ⋅  , где – доля молекул в неподвижной фазе.
 k + 1 k +1
 22
2
 tR 
2 2  
 tR   tR 
2
 t  1
N (tR →∞ ) = 5,545  = 5,545  = 5,545 R
= 5,545  при
τ
 h  a + bt R 
 a + bt R   b 
 t 
 R 
t R → ∞ c использованием известной корелляционной зависимости τ h = a + bt R
для близких по физико-химическим свойствам веществ.
2
 l R/ 
N real = 5,545  – число реальных теоретических тарелок, где
 (wh − w h ( m ) )
wh(m) – полуширина пика несорбирующегося вещества. Определяется из коррел-
ляционной зависимости для близких по физико-химическим свойствам ве-
ществ: wh = a + bl R .

8. Критерии разделения и селективности

t R/ ( A ) k A
• αA/ B = / = – фактор разделения. Безразмерная величина, харак-
tR (B ) k B
теризующая разделительную способность колонки к веществам А и В.
2(K o ( B ) − K o ( A ) ) 2 (t R ( B ) − t R ( A ) )
• K S ,C = = – коэффициент селективности ко-
K o (B ) + K o ( A) tR (B ) + tR ( A )
лонки. Характеризует селективность при разделении компонентов А и В.
tR(B)>tR(A).
2(K C ( B ) − K C ( A ) ) 2(t / R ( B ) − t / R ( A ) )
• KS = = / – коэффициент селективности
KC (B ) + KC ( A) t R ( B ) + t / R ( A)
неподвижной фазы. Зависит от природы сорбента и температуры.
l −l
• RS = R ( B ) R ( A ) – разрешение пиков или степень разделения. RS свя-
wh ( B ) + wh ( A )
зана с KS,C и N соотношением:
RS = 0,212 K S ,C N = 0,212 K S N eff (7)
h2 − hmin
• Ψ= – Критерий разделения для не полностью разделенных
h2
пиков. Ψ изменяется от нуля до 1. Причем когда Ψ =0 пики сливаются.
 23
Рис. 14. Хроматограмма неподеленных пиков.

nk τ b RS
• Δ= – Критерий равномерности, введен М.С. Вигдергаузом
t
(1968), характеризующий разделение многокомпонентных смесей, где nk – чис-
ло пиков на хроматограмме; τ b - основание наиболее узкого пика; RS – разре-
шение для наихудшим образом разделяемых двух пиков; t – время анализа
(время выхода tR последнего компонента).

а б
Рис. 15. Иллюстрация для критерия равномерности: а – идеальная хрома-
тограмма; б – реальная хроматограмма.

В реальной хроматограмме имеются участки нулевой линии незанятые

пиками (неид) 0< Δ <1 (ид.).
При переходе от двухкомпонентной смеси к многокомпонентной выбор
оптимальных условий разделения существенно усложняется. Появляется новая
переменная, которую грубо можно представить в виде изменения сорбционной
емкости как функции порядкового номера пика на хроматограмме. Лучшим
сорбентом считается тот, который обеспечивает равные критерии разделения
между пиками.
λ = nK RS2 / t – коэффициент быстродействия. Это обобщенный критерий,
характеризующий как качество, так и скорость разделения многокомпонентных
смесей. Используя уравнение (7) и (2), получим: λ = 0,045 ⋅ nk K S2,C ⋅U / Ko H . Ве-
личина λ отвечает числу компонентов, разделяемых за единицу времени с
RS2
RS=1. – критерий, характеризующий способность колонки быстро разделять
t
бинарную смесь.

Влияние различных факторов на разделение веществ в газовой хромато-

графии

1. Газ-носитель

В качестве подвижной фазы в газовой хроматографии используются, как

правило, легкие инертные газы (азот, гелий, водород, воздух, аргон и др.), кото-
 24
рые практически нерастворимы в НЖФ (ГЖХ) или практически несорбируются
адсорбентом (ГАХ) и выполняют при обычных давлениях (менее 4,0-5,0
кгс/см2) только транспортные функции, различаясь лишь вязкостью и коэффи-
циентом диффузии сорбатов в газе-носителе.
• Азот: доступен, может использоваться в хроматографах с различными
детекторами. DG в азоте примерно в 4 раза меньше, чем в водороде, что позво-
ляет получать более узкие пики, если лимитирующей стадией процесса являет-
ся продольная диффузия. Азот – безопасен. Недостаток – значительная, по
сравнению с водородом, вязкость и низкая теплопроводность, которая не обес-
печивает высокой чувствительности ДТП.
• Воздух: удобно применять в промышленных хроматографах, рабо-
тающих на технологических установках. Он необходим при работе с ДТХ (тер-
мохимическим детектором). Недостаток – кислород воздуха может окислять
НЖФ и сорбаты.
• Водород: имеет малую вязкость, что позволяет работать с длинными
колонками. Он предпочтителен, когда размытие полосы определяется динами-
ческой диффузией или внешнедиффузионной массопередачей (слагаемые С2u1/2
и Eu уравнения (4) ВЭТТ, DG велико в знаменателе). Чувствительность ДТП
существенно выше, чем на азоте. Недостаток – повышенная взрывоопасность.
• Гелий: безопасен, теплопроводность чуть меньше водорода. Недоста-
ток – высокая стоимость.
• Аргон: применяют при работе с некоторыми ионизационными детек-
торами. Основные требования предъявляют к отсутствию вредных примесей.
Вязкость его несколько выше, чем у гелия и азота.
• Диоксид углерода: широко использовали с объемными интегральны-
ми детекторами (азотометр). В настоящее время применяется в сверхкритиче-
ской флюидной хроматографии (СКФХ).

1.1. Скорость потока газа-носителя

Если в уравнении ВЭТТ (4) ограничиться только первыми тремя слагае-

мыми, как это сделано Ван-Димтером для ГЖХ, то зависимость Н от u будет
B
описываться гиперболой: H = A + + C1u . Из экспериментального графика Н
u
от u можно приближенно определить слагаемые A, B/u, C1u:
 25

Рис. 16. Зависимость высоты, эквивалентной теоретической Н от линей-

ной скорости газа-носителя в колонке U.

B/u=(cd) – продольная диффузия наибольший вклад при малых u. Область

0 – I. Работать в этой области нецелесообразно.
A=(ab) – вихревая диффузия (не зависит от u и имеет место в насадочных
колонках). Область I – II предпочтительная.
С1u=(ef) – внутреннедиффузионная массопередача наибольший вклад в
области II – III. Здесь Н несколько увеличивается пропорционально возраста-
нию u. Процесс размытия определяется кинетикой перехода сорбата из газа
(ПФ) в жидкость (НФ) и Н=А+С1u.
Минимум кривой Н от u отвечает величине H мин = A + 2 BC1 . При этом
uопт = B C1 . В газовой хроматографии часто целесообразно работать с опти-
мальной практической скоростью газа-носителя uопсг ( uопт < uопсг < 9 A C ), когда
до 90% вклада внутреннедиффузионной массопередачи в величину Н. Даль-
нейшее увеличение u уже не имеет смысла.

1.2. Давление газа-носителя

Повышение давления в колонке вызывает повышение плотности ρ и от-

ношения плотности газа к динамической вязкости η. Влияние природы газа-
носителя на фазовое равновесие становится заметным даже при умеренных
давлениях более 10 атм (1МПа). Например, при P =1МПа на капиллярной ко-
лонке со скваланом замена газа-носителя водорода на азот позволило увеличить
коэффициент селективности трудноразделяемых пар компонентов 2,4-
диметилпентан – бензол (1 и 2) и 3,3-диметилпентан – циклогексан (3 и 4).
 26

Рис. 17. Хроматограмма на сквалане с различными подвижными фазами H2

и N2. Давление газа-носителя 1 МПа.

Это связано с зависимостью коэффициента распределения от второго ви-

риального коэффициента в уравнении газового состояния смеси сорбата с га-
зом-носителем:
K C = K C ( P →0 ) ⋅ e − β P ,
где K C ( P →0 ) отвечает KC при Р→0, получаемое экстраполяцией; β – коэффици-
ент, определяемый неидеальностью газовой фазы.
Таким образом, в отличие от традиционной газовой хроматографии, где
природа и условия работы инертного газа влияют на размытие полос, но не на
фазовое равновесие, рассмотренный вариант, а также предложенный
М.С.Вигдергаузом в 1976 г. для составных колонок метод барохроматографии
предусматривают использование инертных газов при таких давлениях, когда их
характеристики могут быть описаны уравнениями состояния со вторыми и
третьими вириальными коэффициентами и подвижные фазы приобретают ак-
тивные функции, а не только функции транспортирующего агента.
Другими вариантами могут быть:
• паровая хроматография (газ-носитель – пары органических и неор-
ганических веществ (например, вода) при температурах ниже критических и
небольших давлениях. Роль подвижной фазы сводится к модифицированию
сорбента. Используют также добавки к обычным газам-носителям с целью по-
лучения более симметричных пиков полярных сорбатов.
• сверхкритическая флюидная хроматография (СКФХ) – примене-
ние в качестве подвижных фаз различных веществ при температурах и давле-
ниях больше критических. Элюент в этом случае обладает высокой растворяю-
щей способностью, что позволяет увеличить летучесть исследуемых веществ на
3–4 порядка по сравнению с обычными условиями.
• плотностная хроматография. Здесь элюентами служат газы при дав-
лениях до 1,0÷2,0 тыс. атм. Это позволяет вызвать движение по колонке ве-
ществ с молекулярными массами до 400 000 (повышение летучести приблизи-
тельно на 6 порядков).
Рассмотренные варианты хроматографии предусматривают повышение
плотности подвижной фазы от газа до жидкости и являются промежуточными
между газовой и жидкостной хроматографией.
 27
2. Неподвижная жидкая фаза

Правильный выбор неподвижной жидкой фазы и условий ее функциони-

рования в колонке есть основное средство достижения селективности разделе-
ния в ГЖХ.
По температурному пределу использования все неподвижные жидкие фа-
зы можно разделить на три группы: низкотемпературные (до 100°С), средне-
температурные (до 200°С) и высокотемпературные (до 350°С и выше).
Относительная или условная полярность неподвижной жидкой фазы ха-
рактеризуется величиной Р, рассчитываемой по формуле Роршнайдера:
 q − qx 
P = 1001 − 1  ,
 q1 − q 2 

V 
где q1 = lg  B  на полярной колонке с β,β/-оксидпирокинитрилом (стандартные
 VA 
V 
вещества В - бутадиен, А - бутан) принимается за Р=100%; и q2 = lg  B  на не-
 VA 
V 
полярной колонке со скваланом, Р=0%; q x = lg  B  на колонке с исследуемой
 VA 
неподвижной жидкой фазой. По этой шкале все неподвижные жидкие фазы де-
лят на четыре группы: неполярные (Р=0÷5%), слабополярные (Р=5÷15%), сред-
неполярные (Р=15÷50%) и сильнополярные (Р=50÷100%).
Неподвижная жидкая фаза должна отвечать следующим требованиям:
1. Селективность;
2. Оптимальная сорбционная емкость;
3. Отсутствие химического взаимодействия с сорбатом, твердым носите-
лем, стенкой колонки и газом-носителем;
4. Низкое давление пара при рабочих температурах;
5. Малая вязкость;
6. Стабильность при эксплуатации.

Удерживание в ГЖХ

В ГЖХ удерживание связано с константой Генри межфазового равнове-

RT
сия жидкость-газ K H = T C . K H обратно пропорциональна VgT и характери-
Vg M L
зует процесс десорбции. Кроме того, K H можно выразить как произведение
K H = γT∞C , P ⋅ P o , где P o – давление насыщенного пара чистого сорбата, а γT∞ , P -
C

коэффициент активности сорбата в нелетучем растворителе для бесконечно

разбавленного раствора при ТС , P и отсутствии адсорбционных эффектов в не-
подвижной фазе.
 28
Коэффициент активности в растворе неподвижной жидкой фазы зависит
от характера межмолекулярных взаимодействий. Если один из компонентов
системы сорбат-растворитель представляет неполярное соединение, то реализу-
ется дисперсионное взаимодействие. Откуда вытекают следующие закономер-
ности удерживания: сорбаты близкой молекулярной структуры элюируются в
порядке роста их температур кипения; ненасыщенные соединения элюируются
раньше насыщенных с таким же числом углеродных атомов в молекулах; уве-
личение степени разветвленности молекулы вызывает уменьшение удержива-
ния. При выборе неподвижной жидкой фазы следует учитывать, что неполяр-
ные вещества обычно лучше разделяются на колонке с неполярными непод-
вижными фазами. При разделении полярных соединений на неполярных непод-
вижных фазах они элюируются раньше парафинов с такими же температурами
кипения. Это связано с малой сорбционной емкостью неполярных неподвиж-
ных жидких фаз по отношению к полярным сорбатам.
При анализе полярных веществ на полярных НЖФ могут реализоваться
как диполь-дипольные, так и донорно-акцепторные взаимодействия, а также
действие индукционных сил и образование водородных связей. Для иллюстра-
ции рассмотрим разделение углеводородов с шестью атомами углерода в моле-
куле на полярной колонке с ПЭГ и неполярной колонке со скваланом.

Рис. 18. Разделение углеводородов с шестью атомами углерода в молеку-

лах:
а – на колонке со скваланом;
б – на колонке с ПЭГ-20.
1 –гексан, Tb=63,5°C; 2 – гексан, Tb=68,7°C; 3 – бензол, Tb=80,1°C; 4 –
циклогексан, Tb=80,8°C.

Некоторые закономерности селективного разделения методом ГЖХ

Селективность НЖФ можно рассматривать как способность к разделе-

нию:
1. двух соединений, например близкокипящих изомеров (пара-мета се-
лективность);
2. компонентов одного гомологического ряда (соседние гомологи);
3. компонентов двух или более гомологических рядов.
 29

t R/ ( A )
Для первого случая используют фактор разделения α A / B ( H ) = в виде
t R/ ( B )
t R/ ( A ) γ B∞ PBo
уравнения Херингтона (1957) α A / B ( H ) = = ∞ o . После логарифмирования
t R/ ( B ) γ A PA
γ Bo PBo
получим: lg α A / B ( H ) = lg + lg , где PAo , PBo – давление насыщенного пара; γ oA ,
γA o
PAo

γBo – коэффициент активности сорбатов в бесконечно разбавленном растворе

НЖФ при ТС и P . Второе слагаемое определяется только природой сорбатов и
температурой колонки. Природа НЖФ влияет на первое слагаемое и определя-
ется различными видами межмолекулярных взаимодействий.
t R/ ( Z +1)
Для второго случая используют фактор разделения α A / B ( Г ) = / . При
tR( Z )
ТС=const для гомологов справедливо:
lg t R/ = a + bnC , (8)
где nC – число углеродных атомов в молекулах.
lg α A / B ( Г ) = lg t R/ ( A ) − lg t R/ ( B ) , поэтому очевидно, что для соседних гомологов
lg α A / B ( Г ) = b . Эта величина увеличивается с уменьшением ТС и с переходом от
неполярной к полярной фазе (реализуется вклад СН2 в удерживание).
В третьем случае используют фактор разделения или критерий Байера
(1959):
t R/ ( A)
αA/ B ( Б ) = / ,
t R ( A)
отношение приведенных удерживаемых объемов двух различных веществ (ре-
альных или гипотетических), принадлежащих к различным гомологическим ря-
дам, но имеющих одинаковые температуры кипения (или точнее одинаковые
давления насыщенного пара при ТС).
Так как b=const для различных гомологических рядов (правило Ковача) и
с учетом уравнения (8) lg α A / B ( Б ) = Δa . Таким образом следует использовать та-
кую НЖФ, которая вызывает больший сдвиг корреляционных зависимостей,
характеризующих один гомологический ряд относительно аналогичных прямых
других гомологических рядов.
 30

Рис. 19. Зависимость логарифма приведенного времени удерживания для

различных гомологических рядом (1-4) от свойства сорбатов.

Выбор НЖФ, удовлетворяющих всем требованиям весьма затруднен,

особенно в случае разделения веществ не двух, а более гомологических рядов.
Поэтому используют колонки с бинарными сорбентами и составные колонки,
позволяющие тонко регулировать селективность и смещать пики на хромато-
грамме относительно друг друга. Известно, что общее удерживание
t R ,i = tR(1,)i + tR( 2,i) , где верхние индексы (1) и (2) относятся к первой и второй секци-
ям составной колонки. Аналогично рассчитывают другие величины удержива-
ния.

Классификация НЖФ

Роршнайдер (1965) и Мак-Рейнольдс (1970) наряду с условной полярно-

стью Р предложили более обобщенную классификацию НЖФ с использовани-
ем разности индексов удерживания для стандартных веществ сравнения:
ΔI = I НФ − I Сквалан . Роршнайдер использовал пять тест стандартов при 100°С
(числитель), а Мак-Рейнольдс десять при 120°С (практически используются
также пять) (знаменатель): бензол – константа x = ΔI x ; этанол/бутанол – кон-
станта y = ΔI y ; бутанон/пентанон – z = ΔI z ; нитрометан/нитропентан – u = ΔI u ;
пиридин – s = ΔI s , где x, y, z, u, s – константы НЖФ (или факторы полярности
НЖФ), которые изменяются от 0 до 10 – для констант Роршнайдера ( ΔI 100 ) и
от 0 до 1000 – для констант Мак-Рейнольдса.
Фактор х характеризует склонность НЖФ к дисперсионному взаимодей-
ствию, связан с удерживанием непредельных и ароматических углеводородов и
является наиболее универсальной характеристикой полярности НЖФ; величина
y определяется склонностью НЖФ к образованию водородной связи и характе-
ризует «карбоксильную селективность»; z относится к диполь-дипольному
взаимодействию и характеризует «карбонильную селективность»; u и s харак-
теризуют НЖФ соответственно как акцептора и донора электронов.
 31
М.С.Вигдергауз (1982) предложил разделить НЖФ на 7 основных групп,
исходя из соотношений между факторами полярности Роршнайдера и Мак-
Рейнольдса.

Порядок следо-
№ Характер химического НФ
вания факторов
группы строения
полярности
I x, y, z, s, u <150 Углеводороды и метилси- Апиезон L; сква-
ликоны лан; SE-30
II y<s<z<u Трифторсиликоны OV-210 (QF-1)
III y<z<s<u Полифениловые эфиры, Пента-, гексафени-
фенилсиликоны ловый эфир
IV z<y<s<u Нитрилы, нитрилсилико- 1,2,3-трис-(2-
ны цианэтокси)пропан;
XF-1150
V z<s<y<u Полиэтиленгликоли, по- ПЭГ-20М
лиэфиры
VI z<s<u<y Полипропиленгликоли UKON LB-1715
VII (s-u)>0 Полиспирты Диглицерин
VIII Жидкокристаллические п,п´-азоксифенетол;
азоксиэфиры 4-метоки-4´-
этокиазоксибензол

Из каждой группы может быть выделена предпочтительная НЖФ, удовле-

творяющая необходимым требованиям.

Количество НЖФ на твердом носителе

Количество НЖФ на твердом носителе проявляется при разделении сле-

дующим образом:
1. ε1 и df – определяют значение ВЭТТ (4);
2. ε1 – влияет также на коэффициент селективности ks;
3. количество НЖФ определяет относительный вклад в удерживание ад-
сорбционных факторов: адсорбция на межфазной границе газ-НЖФ, константа
Г 
адсорбции K GL =  GL  ; адсорбция на межфазной границе НЖФ-твердый
 CG  C →0
G

Г 
носитель, константа адсорбции K LS =  LS  [см]. Гиббсовская адсорбция Г
 L  C L →0
C
– размерность [моль/см ]; С – концентрация [моль/см3].
2

Тогда в ГЖХ: VN = K CVL + K GL AGL + K C K LS ALS , где AGL и ALS – площади

поверхности раздела фаз газ-НЖФ и НЖФ-твердый носитель в колонке. Во
 32
многих случаях имеет место не ГЖХ, а газо-жидко-твердофазная хроматогра-
фия. Особенно значительные вклады адсорбции при малом проценте пропитки
W
твердого носителя, П = L ⋅ 100 , где WL и WSS – массы жидкой фазы и твердого
WSS
носителя. Существенную роль играет также неравномерность покрытия жидкой
фазой.

3. Твердый носитель

Назначение твердого носителя в хроматографической колонке – обеспе-

чить наиболее эффективное использование НЖФ. В связи с этим твердый носи-
тель должен обладать:
1. Определенной удельной поверхностью (1–2 м2/г) и размером пор
(6÷9∙10-3 мм), позволяющими нанести жидкость в виде тонкой пленки
и не допускающими ее перемещения под действием силы тяжести или
по другим причинам;
2. Малой адсорбционной способностью по отношению к сорбатам;
3. Отсутствием каталитической активности и химической инертностью;
4. Механической прочностью и способностью к равномерному заполне-
нию колонки;
5. Стабильностью при ТС и смачиваемостью поверхности НЖФ.
Адсорбционная активность твердого носителя переводит процесс ГЖХ в
режим ГЖТФ и влияет на величину удерживания за счет появления нелинейно-
сти изотермы сорбции.
Методы уменьшения адсорбционной активности:
1. Промывка кислотой или щелочью для удаления катионов металлов с
поверхности твердого носителя (маркировка AW);
2. Обработка небольшим количеством полярной жидкости (модифици-
рование поверхности);
3. Химическая дезактивация – замещение водорода в поверхностном
гидроксиле на алкилсиликоновый радикал (маркировка AW-DMCS
или AW-HMDS);
4. Образование на поверхности твердого носителя защитного слоя, кото-
рый получают путем нанесения на твердый носитель слоя жидкой по-
лиэфирной смолы и последующего ее отверждения.
Размер зерен. Из уравнения ВЭТТ (4) слагаемые А и С2 связаны с dp.
Уменьшение dp уменьшает Н и увеличивает эффективность. Оптимальным для
заполненных сорбентом колонок считают размер зерна 0,12-0,15 мм. При этом
наибольшая эффективность достигается при однородных по размерам частицах
твердого носителя (коэффициент λ в (4)). Обычно 80% ТН составляет основная
фракция, 20% зерен имеют отличный от паспортных данных размер. Выпуска-
ют носители высокой эффективности (марка НР), в котором доля основной
фракции составляет не менее 90%.
 33
Плотность набивки. С увеличением плотности набивки возрастает отно-
шение ε1 ε , уменьшается фазовое отношение ( β = VO VS – отношение объема
подвижной фазы к объему неподвижной фазы в колонке) и повышается эффек-
тивность колонки согласно уравнению (4). Рекомендуется заполнять сорбентом
выпрямленную колонку в вертикальном положении. Наибольшее распростра-
нение получили твердые носители типа Хромосорб, Целит (США), Хроматон
(Чехия), Цветохром (РФ) и др. Основные свойства твердых носителей приведе-
ны в книге М.С.Вигдергауза (табл. 5. приложение).

4. Адсорбент

Если в ГЖХ адсорбционная активность твердого носителя является вред-

ным фактором, то в ГАХ она является основным свойством сорбента, обеспе-
чивающим разделение компонентов смеси. Адсорбент должен обладать сле-
дующими свойствами:
1. Селективность;
2. Отсутствие каталитической или химической активности;
3. Линейность изотермы сорбции;
4. Механическая прочность.
По химической природе адсорбенты делят на три типа (классификация
А.В.Киселева, МГУ, 1979):
1. Неспецифические, на поверхности которых нет каких-либо функцио-
нальных групп и ионов (графитированная сажа ГТС, уголь, неполяр-
ные пористые полимеры);
2. Имеющие на поверхности положительные заряды (гидроксилирован-
ная поверхность силикагеля, катионы молекулярных сит, катионы со-
лей);
3. Имеющие на поверхности связи или группы атомов с сосредоточенной
электронной плотностью (некоторые полярные пористые полимеры,
содержащие, например, нитрильные группы, а также привитые сор-
бенты).
По геометрической структуре поверхности адсорбенты делят на 4 типа:
1. Непористые адсорбенты (удельная поверхность колеблется от сотых
долей до сотен м2/г). Это ГТС, аэросил (мелкозернистый диоксид
кремния), кристаллы солей;
2. Однородно макропористые адсорбенты (удельная поверхность 25-50
м2/г, размер пор порядка сотен нм). Это силохромы;
3. Однородно тонкопористые адсорбенты (удельная поверхность порядка
тысяч м2/г). Это молекулярные сита (цеолиты), углеродные молеку-
лярные сита и др.;
4. Неоднородно пористые адсорбенты. Это различные силикагели, со-
держащие как широкие, так и узкие поры.
Для уменьшения изотермы и снижения каталитической и химической ак-
тивности проводят модифицирование адсорбентов:
1. Обработка водой, кислотой, щелочью;
 34
2. Связывание гидроксильных групп хлорсиланами, как и для твердого
носителя;
3. Нанесение тонких слоев НЖФ на адсорбент;
4. Получение коллоидных систем, например, дисперсная фаза – аэросил,
полимер, а дисперсионная среда – НЖФ (предложено М.С.Вигдергаузом
(1983)). Достоинства: возможность регулирования селективности путем изме-
нения состава, а также ТС за счет фазовых переходов "золь-гель";
5. Нанесение пыли адсорбента на инертный твердый носитель (поверх-
ностно-пористые адсорбенты);
6. Привитые адсорбенты (нанесение на поверхность твердого носителя
или адсорбента длинных алкильных цепей или различных функциональных
групп, обеспечивающих необходимую селективность.
Основные свойства адсорбентов приведены в книге М.С. Вигдергауза.
(Табл.6. Приложение).

5. Объем пробы и условия ввода ее в колонку

Рис. 20. Зависимость хроматографических характеристик от объема пробы:

Смакс  Vпр 
а – зависимость = f ;
Спр  Wh 
б – зависимость Wh = f 
Vпр 
.
 Wh 

Концентрация в максимуме хроматографической зоны связана с объемом

C макс V 
пробы соотношением = f  пр  . При увеличении объема Vпр ωh сначала
Спр  ωh 
остается постоянным, а затем пропорционально возрастает. Колонка считается
 35
не перегруженной, когда с увеличением Vпр, ωh=const, или как предложено Ван-
Димтером (1956) должно иметь место неравенство: Vпр≤0.2∙ωh. При этом
C макс ≤ 0.2Cпр . В отдельных случаях эти требования могут быть расширены до
Vпр≤0,5∙ωh и C макс ≤ 0.5Cпр .
Жуховицкий (1962) предложил новый вариант хроматографии – ступен-
чатую хроматографию. Он показал, что необходимым условием, при котором
возможно получение ступеньки на хроматограмме, является, когда Vпр≥3,28∙ωh.
При этом C макс = Cпр и хроматограф не требует градуировки.

Рис. 21. Иллюстрация к ступенчатой хроматографии.

При анализе примесей, если Rs>1 можно допустить некоторую перегруз-

ку колонки пробой для повышения Смакс (чувствительность метода повышает-
ся). Тогда общая ширина полосы может быть выражена ω h = ω h ,C + ω h ,пр , где ωh,С
– ширина полосы без перегрузки; ωh,пр – дополнительное увеличение полосы с
1 1 2ω h,пр
увеличением Vпр. Откуда: = + , где Rs,0 – степень разделения при
Rs Rs ,0 ∆VR
отсутствии перегрузки (ωh=ωh,С).
Известны два способа ввода пробы в колонку:
1. Метод поршня, когда смесь подается в колонку без предварительного
перемешивания с газом-носителем в дозаторе;
2. Экспоненциальный метод – смесь полностью перемешивается с газом-
носителем и концентрация компонента экспоненциально уменьшается от Спр до
нуля.
Первый является более эффективным, однако полностью реализовать его
сложно и наибольшее приближение дает впрыскивание пробы шприцом непо-
средственно на сорбент. Значительную роль при вводе пробы играет темпера-
тура дозатора и продолжительность ввода пробы.
 36
Рис. 22. Иллюстрация влияния условий ввода пробы на форму элюционной
кривой: а – влияние метода ввода пробы; б – влияние времени ввода пробы; 1-
ввод пробы поршнем; 2 – экспоненциальный ввод пробы; 3 – время ввода про-
бы 10 сек; 4 – время ввода пробы 20 сек; 5 – время ввода пробы 40 сек.

6. Материал, размеры и форма колонок

1. Материал колонки не должен быть каталитически активным по отно-

шению к сорбенту и сорбатам;
2. Сечение не должно изменяться при изменении ТС.
Обычно колонки изготавливают из стекла, кварца, нержавеющей стали,
меди, алюминия и полимеров. Металлические колонки – прочные, легко термо-
статируются. Однако их внутреннюю поверхность следует тщательно очищать.
Медные и алюминиевые колонки следует использовать при анализе неполяр-
ных соединений, т.к. при анализе полярных сорбатов возможны адсорбционные
и каталитические явления на поверхности этих металлов и их оксидах. Стек-
лянные колонки обладают наибольшими достоинствами несмотря на хруп-
кость. Обычно используют прямые, U и W-образные или спиральные колонки.
В последнее время наиболее широко используют кварцевые колонки.
Анализ литературных данных по частоте использования хроматографиче-
ских колонок показал, что:
1. Аналитические колонки, заполненные сорбентом с dC=2-6 мм состав-
ляют 32,2%.
2. Аналитические полые капиллярные колонки с dC<2 мм – 67,4%.
3. Препаративные колонки с dC>6 мм – 0,4%.
Т.е. большинство работ выполняется на полых капиллярных колонках.

7. Температура

Температура является одним из основных факторов, определяющих се-

лективность сорбента, продолжительность разделения, а также размытие хро-
матографических зон. В газовой хроматографии используется изотермическая
хроматография (ТС=const) и хроматография с программированием температуры
колонки во время анализа.

Изотермическая хроматография

Зависимость удерживания сорбатов от температуры достаточно сложна.

Однако в интервалах температур 20-30°С она может быть аппроксимирована
линейным соотношением вида I = A + BTC , где I – логарифмический индекс
B
удерживания Ковача. Либо уравнением типа Антуана I = A + . Кроме то-
C + TC
го, в работах Ковача (1965) показано, что I связан с дифференциальными стан-
дартными термодинамическими функциями сорбата (х) и н-алканов.
 37
0 0
∆ sp G x − ∆ sp G z
I = 100 0 0
+ 100 ⋅ z
∆ sp G z +1 − ∆ sp G z

Рис. 23. Зависимость индекса удерживания сорбатов различных гомоло-

гических рядов от температуры. 1,2,3 – различные гомологические ряды сорбатов.

Пользуясь справочными данными н-алканов, по результатам хроматогра-

0
фирования, можно определить ∆ sp G x . С повышением ТС селективность НЖФ
уменьшается для одного гомологического ряда. Для разных гомологических
рядов наклон прямых I=f(TC) различен, что учитывают при подборе условий
анализа и при групповой идентификации, когда измеряют ΔI при двух темпера-
турах, отличающихся, например, на 10-20°С. ∆I = I(T ) − I(T ) . ΔI зависит от ха-
C1 C2

рактера межмолекулярного взаимодействия «сорбат-НЖФ». Дисперсионное

взаимодействие практически не зависит от температуры. Для каждой НФ и раз-
личных гомологических рядов веществ можно получить величины ΔI=const и
сравнивать их с результатами хроматографического эксперимента.
М.С. Вигдергауз (1967) предложил регулировать селективность колонок,
используя бинарные и полинарные сорбенты, составляющие которых имеют
разные температуры фазовых переходов. Например, бинарный сорбент сква-
лан+ПЭГ при ТС≤56°С практически неполярен, т.к. ПЭГ находится в твердом
состоянии и его влияние на удерживание мало. По мере увеличения ТС и пере-
хода ПЭГ в жидкое состояние селективность сорбента увеличивается к поляр-
ным сорбатам. Значительный интерес представляет использование в качестве
НФ жидких кристаллов, так называемая газо-мезофазная хроматография, раз-
виваемая на каф. ОХХ под руководством проф. Л.А. Онучак. Здесь имеет место
следующие фазовые переходы: твердый кристалл при малых ТС; жидко-
кристаллический расплав (мезофаза) при больших ТС; изотропная жидкость при
более высоких ТС.
Жидко-кристаллические НЖФ обеспечивают возможность изменять по-
лярность по Мак-Рейнольдсу на 60 и более единиц при изменении ТС.

Программирование температуры
 38
Скорость перемещения хроматографической зоны зависит от K o , а
K o = f (TC ); uC = u K o . Линейное программирование TR = TO + Rt t , где TR – тем-
пература удерживания сорбата; То – начальная температура колонки; t – время
анализа; Rt – скорость нагрева (прямые 1, 2, 3). При этом может быть реализо-
вана любая программа, в том числе ступенчатая с изотермическими участками
(4).

Рис. 24. Иллюстрация различных методов программирования температуры

колонки от времени разделения.
а – линейное программирование температуры;
б – ступенчатое программирование температуры;
1,2,3 – линейное программирование с разными скоростями нагрева;
Т1, Т2 - изотермические участки при ступенчатом программировании;
4 – цикл охлаждения колонки после анализа.

Достоинства:
1. Сокращается продолжительность разделения смесей, кипящих в ши-
роком интервале температур;
2. Получают более симметричные пики даже при нелинейной изотерме
(например, выпуклой к оси ординат, когда тыл полосы элюируется при более
высокой температуре, чем фронт);
3. Увеличивается концентрация компонентов в максимуме зоны (темпе-
K O (TO )
ратурное обогащение), т.к. при TO → K O (T ) >> K O (T ) , тогда C макс = CO ⋅ , что
O R
K O (TR )
позволяет повысить чувствительность при анализе примесей.
При линейном программировании температуры константа распределения
для гомологов пропорциональна числу углеродных атомов в молекулах и они
практически равномерно распределены на хроматограмме.
 39

Рис. 25. Хроматограммы разделения четырех последовательных гомологов

н-алканов в зависимости от температурного режима колонки:
а – изотермический анализ;
б – линейное программирование температуры.

Недостатком программирования ТС является меньшая воспоизводимость

при измерении хроматографических сигналов, чем при изотермическом режи-
ме. К хроматографии с программированием ТС относятся предложенные Жухо-
вицким и Туркельтаубом методы: хроматермография и теплодинамический ме-
тод. Хроматермографический режим использован в хроматографе ХТ-2. Одним
из первых применений газовой хроматографии был анализ природных и попут-
ных газов на содержание углеводородов и неуглеводородов. В СССР широкое
распространение анализ нефтяных газов получил после разработки хроматер-
мографии особенно на приборах ХТ-2М.

Аналитическое применение ГАХ и ГЖХ

1. Легкие газы. Для разделения О2 и N2 применяют молекулярные сита

СаА (5Å). Порядок выхода легких газов на колонках с молекулярными ситами
при обычных температурах (выше комнатной): Ne, He, (O2+Ar), N2, Kr, CH4,
CO, Xe. Аргон и кислород разделяются на молекулярных ситах СаА при
ТС =- 78°С. Недостатком молекулярных сит является необратимая адсорбция
СО2 и более тяжелых углеводородных газов, что приводит к проведению анали-
за на нескольких колонках (многоступенчатые или многоколоночные схемы
анализа).
2. Анализ углеводородных газов. Его можно осуществлять как в режиме
ГЖХ с неполярными или среднеполярными НЖФ, так и в ГАХ с применением
в качестве адсорбентов силикагеля, алюмогеля, полимерных сорбентов на ос-
нове стирола и дивинилбензола, например, полисорб-1.
3. Анализ углеводородных и неуглеводородных газов. Чаще всего при-
меняют полимерные сорбенты и модифицированные силикагели, а также раз-
личные полярные и неполярные НЖФ в режиме ГЖХ. Порядок выхода некото-
рых газов на полисорбе-1: Н2, (N2+O2), CH4, CO2, H2O, C2H4, C2H6, H2S, COS,
C3H6, C3H8, CS2, SO2, C4H8, i-C4H10, C4H10.
 40
4. Ароматические углеводороды (изомеры ксилола и этилбензол). Кол-
лоидная НЖФ, предложенная М.С. Вигдергаузом: бентон-245 – дисперсная фа-
за и дионилфталат (или вазелиновое масло) – дисперсионная среда. Порядок
выхода: этилбензол, п-ксилол, м-ксилол, о-ксилол. Жидкокристаллическая НФ
(азоксиэфиры): этилбензол, м-ксилол, п-ксилол, о-ксилол.
5. Спирты. НЖФ – полярные, в основном V и VI группы (ПЭГ, полипро-
пиленгликоль) с большим значением фактора полярности Роршнайдера-Мак-
Рейнольдса y. В режиме ГАХ применяют полимерные сорбенты и однородно-
макропористые адсорбенты типа силохром.
6. Альдегиды и кетоны. НЖФ – в основном II группы (фторированные
силоксаны) с большим значением z, характеризующим карбонильную селек-
тивность.
7. Кислоты и эфиры. Легколетучие жирные кислоты можно определять
непосредственно, либо в режиме реакционной хроматографии в виде эфиров.
Используют различные полярные и неполярные НЖФ, а также жидкокристал-
лические НЖФ.
8. Другие органические соединения. При анализе азотсодержащих со-
единений, главным образом содержащих аминные группы используют как не-
полярные и слабополярные (апиезон, сквалан, силиконы), так и полярные НЖФ
(ПЭГ и др.). При анализе серосодержащих соединений применяют хроматогра-
фическую аппаратуру, обеспечивающую повышенную стойкость к коррозии, в
качестве сорбентов среднеполярные и полярные НЖФ. В основном анализиру-
ют различные пестициды в окружающей среде, пищевых продуктах, биологи-
ческих объектах и др.

Капиллярная хроматография

Уравнение ВЭТТ для капиллярной хроматографии, предложенное Голлем

(1960) имеет вид:
2 Deff B
H= = + C1u + C3u......,(8)
u u
где B u и C1u - учитывают вклады аналогично уравнению (4);
k d C2
C3 u ~ ⋅ - учитывает вклад динамической диффузии и внешней мас-
k +1 DG
сопередачи (вклад стеночного эффекта).
 41

Рис. 26. а - Зависимость ВЭТТ от линейной скорости газа-носителя U; б –

зависимость ВЭТТ от молекулярной массы при U=const .

Для зависимости H = f (u ) в связи с отсутствием зерна и слагаемого А –

вихревая диффузия, правая ветвь гиперболы апроксимируется к нулю. Для за-
висимости H = f (k ) для малых k = t R/ t M основную роль играет первое слагае-
мое уравнения (8) B u , так как DG ~ 1 M , то Н уменьшается с ростом М, а сле-
довательно и с ростом k. При дальнейшем увеличении k, Н начинает увеличи-
ваться, вследствие увеличения слагаемых с С1 и С3 в уравнении (8) и проходит
через максимум.

Для обеспечения высокой эффективности вязкость НЖФ для ГЖХ долж-

на быть низкой, т.к. DG ~ 1 η , то Н будет уменьшаться с уменьшением вязкости.
В капиллярной хроматографии ε1( кап ) << ε1( нас ) , поэтому для получения
одинаковой селективности длина капиллярной колонки должна быть значи-
тельно больше заполненных сорбентом колонок. Наибольшее распространение
в газовой хроматографии получили следующие капиллярные колонки по пуб-
ликациям в отечественной и зарубежной литературе.

По диаметру капилляра dC, мм По длине колонки L, м

≤0,1 0,1<dC ≤0,2 0,2<dC ≤0,3 0,53 0,75 ≤10 10<L≤20 20<L≤30 30<L≤40 40<L≤50 >50

7% 58% 24% 8% 3% 5% 21% 46% 2% 18% 8%

В зарубежной практике к капиллярным колонкам применяют термин по-

лые трубчатые колонки или открытые трубчатые колонки. Они разделяются на
трубки, внутренние стенки которых покрыты:
1. Жидкостью – WCOT;
2. Пористым слоем адсорбента – PLOT;
3. Слоем пористого ТН с нанесенным слоем НЖФ – SCOT.
Т.к. для капиллярных колонок характерны малые значения отношения
ε ε 1 (в десятки раз меньшие, чем для заполненных сорбентом колонок), то это
приводит к значительному уменьшению сорбционной емкости и увеличению
вклада времени удерживания несорбирующегося вещества tM в суммарное зна-
чение удерживания сорбата tR. Поэтому в капиллярной хроматографии опреде-
 42
ляют не число теоретических тарелок N, а число эффективных теоретических
тарелок Neff или число реальных теоретических тарелок Nreal.
Быстродействие капиллярных колонок существенно выше, чем заполнен-
ных (~ в 10-20 раз), что предъявляет дополнительные требования к снижению
инерционности детектора. Так, если на слое сорбента будут делиться два узких
пика 1 и 2, то в элюате в детекторе из-за большой инерционности может про-
изойти их слияние 1+2.

Рис. 27. Влияние инерционности детектора на разделение веществ в ка-

пиллярной хроматографии:
а – хроматограмма на слое сорбента;
б – хроматограмма в элюате после детектирования.

Величина пробы в капиллярных колонках из-за малой емкости должна

быть в несколько сотен раз меньше пробы для заполненной колонки, поэтому
предъявляются особые требования к узлам и методам ввода пробы в капилляр-
ные колонки.
Основными требованиями, предъявляемыми к системам ввода пробы в
капиллярную колонку, являются:
1. Соответствие состава пробы исходному составу анализируемой смеси;
2. Ширина зоны пробы должна быть такой, чтобы ее вклад в общую дис-
персию хроматографического пика был минимален.
Известно, что σi2 = σ C2 i + σ пр
2
, где σ i2 - общая (измеренная) дисперсия (раз-
мытие) хроматографической зоны i-го компонента пробы; σ C2 i - дисперсия зоны
только в хроматографической колонке; σ пр2
- дисперсия в узле ввода пробы на
входе в колонку.
Первое требование особенно сложно соблюдать при вводе пробы с дели-
телем потока, когда под влиянием кинетики испарения происходит неизбежное
искажение состава пробы, особенно если компоненты пробы присутствуют в
разных концентрациях и имеют различную летучесть и полярность. Дискрими-
нация состава пробы связана также с работой шприца (испарение компонентов
из иглы).
Что касается второго требования, то для введения пробы в виде узкой зо-
ны в колонку используют два подхода:
 43
1. Вводят в колонку очень маленькие пробы (от 1 до 5 нл), используя
устройства деления потока, в которых пары пробы в смеси с газом-носителем
после испарителя разделяются на два потока с различными объемными скоро-
стями, причем в колонку для разделения поступает меньшая (сотая или тысяч-
ная) часть общего потока. Очевидно, что ширина зоны пробы при этом умень-
шается также в 100-1000 раз;
2. Вся проба вводится в колонку без делителя потока при относительно
малой величине FC, но при этом широкая исходная зона пробы сразу превраща-
ется в узкую за счет использования эффекта фокусирования.
Фокусирование узкой зоны пробы на входе капиллярной колонки осуще-
ствляют посредством:
• Эффекта растворителя, заключающегося в том, что парообразный
растворитель конденсируется на входе в колонку (ТС на 25-30ºС ниже темпера-
туры кипения растворителя) и удерживает испаренные компоненты пробы. По-
сле того как вся проба переходит из испарителя в колонку повышают ТС. При
этом растворитель испаряется и происходит хроматографирование узкой зоны
пробы;
• Эффекта НЖФ, когда ТС на 10-20ºС больше температуры кипения рас-
творителя. При этом растворитель не конденсируется и элюируется, а анализи-
руемые вещества пробы концентрируются в НЖФ. После перехода всей пробы
в колонку ТС повышают и начинается хроматографирование узкой зоны пробы;
• Термического фокусирования. ТС – низкая. Конденсируются как сор-
баты, так и растворитель. Через определенное время, когда вся проба перейдет
из испарителя в колонку ТС повышают и проводят хроматографирование узкой
зоны конденсированной пробы.

Рис. 28. Устройство ввода пробы с испарителем:

1 – корпус испарителя с термостатирующим обогревателем;
 44
2 – вкладыш испарителя;
3 – резиновая мембрана для ввода иглы шприца;
4 – капиллярная колонка;
5 – накидная гайка для герметизации;
6 – пневмосопротивление (регулируемый дроссель) делителя потока пе-
ред колонкой;
7 – пневмосопротивление потока для очистки вкладыша и мембраны;
8 – уплотнение;
9 – переключающий кран.

Для иллюстрации ввода пробы в капиллярную колонку с делителем и без

делителя потока. Рассмотрим устройство ввода пробы с испарителем.
Кроме ввода пробы с делителем и без делителя потока в капиллярной
хроматографии применяют:
1. Прямой ввод пробы (ввод предварительно испаренной пробы газовым
дозатором) dC≥0,53;
2. Непосредственный ввод пробы (ввод пробы жидкости непосредствен-
но в колонку) dC от 0,25 до 0,53 мм. Для этого необходимы специальные уст-
ройства и шприцы с направляющими для иглы, которая входит внутрь колонки;
3. Ввод пробы с программированием температуры испарителя. Пробу
вводят в холодный испаритель со стеклянным вкладышем, заполненным стек-
ловатой. Затем вкладыш быстро нагревают и пары пробы переносятся газом-
носителем в колонку. При этом исключается дискриминация состава пробы в
шприце (испарение или частичная конденсация компонентов пробы с кончика
иглы под действием температуры).
Особое значение в капиллярной хроматографии имеет равномерное по-
крытие стенок трубки НЖФ, а также адсорбционная инертность внутренних
стенок и их смачиваемость. Для улучшения смачиваемости требуется создание
чистой поверхности.
Экспериментально показано, что эффективность капиллярных колонок с
полярными НЖФ, как правило, ниже чем колонок с неполярными НЖФ. Суще-
ственным этапом развития капиллярной хроматографии (конец 70-х, начало 80-
х годов) является переход к кварцевым капиллярам, обладающими высокой
чистотой поверхности и адсорбционной инертностью и обеспечивающим хо-
рошую смачиваемость стенок не только неполярными, но и многими полярны-
ми неподвижными фазами. Кварцевые колонки обладают повышенной механи-
ческой прочностью по сравнению со стеклянными колонками. Хорошие ре-
зультаты дает метод химической прививки неподвижной фазы к поверхности,
включая полимерные неподвижные фазы с различными функциональными
группами.
Все ранее сказанное об аналитическом применении ГЖХ и ГАХ относит-
ся и к капиллярной хроматографии. Капиллярная хроматография, как правило,
применяется для разделения сложных смесей, содержащих большое число ком-
понентов, принадлежащих к различным классам органических и неорганиче-
ских соединений, а также компонентов с близкими физико-химическими свой-
 45
ствами. Более 75% публикаций по газовой хроматографии основано на исполь-
зовании капиллярной хроматографии. Некоторые примеры:
• Имитированная дистилляция нефти и нефтепродуктов или определе-
ние потенциального содержания различных фракций в зависимости от интерва-
лов температур кипения (dC≥0,53 мм, кварцевая колонка и сшитая метилсили-
коновая фаза);
• Структурно-групповой анализ углеводородов С3-С11 на одной колонке
типа SCOT с линейно-ступенчатым программированием температуры колонки;
• Определение группового содержания нафтенов i- и н-парафинов в лиг-
роиновых фракциях нефти С4-С10 на колонке типа PLOT с молекулярными си-
тами 5Å при линейном программировании температуры колонки от 50ºС до
450ºС и предколонкой для удаления ароматики;
• Экспресс-анализы в биологии, медицине, охране окружающей среды и
т.д.

Препаративная газовая хроматография

Рис. 29. Блок-схема препаративного газового хроматографа:

а – хроматограмма;
б – газовая схема хроматографа;
0, 1, 2, 3, 4 – сигналы, управляющие работой хроматографа;
5 – узел ввода пробы;
6 – препаративная колонка;
7 – детектор;
а, б, в – переключающий кран;
А, В – ловушки улавливания компонентов.

Особенности:
1. Производительность, т.е. количество вещества (сырья, выделяемого
соединения), перерабатываемого в единицу времени при заданной сте-
пени разделения RS;
 46
2. Чистота получаемых продуктов, зависящая от четкости разделения,
примесей в ПФ и летучести НЖФ.
Производительность - Vпр t ~ K S ,C ⋅ FC RS
Если производительность определяется не объемом Vпр, а количеством
выделенного компонента, то Vпр надо умножить на Сi – концентрацию компо-
нента в пробе. Необходимая степень разделения определяется требуемой чис-
тотой компонента, а также целесообразностью его полного выделения из смеси.
Производительность на единицу площади поперечного сечения колонки
называют удельной производительностью: Vпр t ⋅ AC ~ K S ,C u RS - ее использу-
ют для сравнения работы колонн различного диаметра.
Препаративную хроматографию можно разделить на:
• Микропрепаративную хроматографию. Осуществляется на колонках с
dC=8-10 мм с использованием обычного лабораторного хроматографа, осна-
щенного дополнительными блоками (Vпр~миллиграммы);
• Лабораторную препаративную хроматографию (dC до 100 мм,
Vпр~граммы). Используют специальные лабораторные препаративные хромато-
графы;
• Промышленную препаративную хроматографию (колонки dC > 100
мм, Vпр~ десятки и сотни грамм). Это опытные и стационарные технологиче-
ские установки.
Повышение производительности можно добиться различными методами:
1. Увеличение селективности и сорбционной емкости колонки путем вы-
бора НЖФ, увеличения пропитки, понижения температуры;
2. Увеличение dC и использование нескольких параллельно работающих
колонок;
3. Путем использования колонок с сечением сложного профиля, исполь-
зование различных перегородок с отверстиями для гомогенизации потока, что
позволяет уменьшить размытие хроматографических полос, вызываемое нерав-
номерностью потока газа-носителя по сечению колонки (стеночный эффект,
непродуваемые области между зернами сорбента, изгибы колонки и т.д.). При
L
этом N = , где Но – вклад в ВЭТТ, обусловленный факторами обыч-
H o + H пр
ными для аналитических колонок; Нпр – это дополнительное слагаемое, харак-
теризующее препаративную колонку;
4. Некоторые специальные методы, включающие программирование
температуры колонки, скорости газа-носителя, применение обратной продувки
колонок, многоступенчатых и циркуляционных схем, вытеснительного метода
и непрерывного процесса выделения веществ из смеси.
Высокие концентрации сорбата в неподвижной фазе, характерные для
препаративной хроматографии, приводят к получению асимметричных пиков,
вследствие работы в нелинейной области изотермы сорбции. Если условия раз-
деления для первого компонента разделяемой пары связаны с размытием тыла
 47
(выпуклая изотерма), а для второго – размытием фронта (вогнутая изотерма), то
производительность установки может быть значительно повышена.

Рис. 30. Хроматограмма препаративного выделения компонентов 1 и 2:

а – объем пробы V1 = 1,5 см3;
б – объем пробы V2 = 20 см3;
1 – ацетон; 2 – изопропанол; 3 – примеси в компонентах при выделении.

Система улавливания должна обеспечивать наиболее полное выделение

фракций. Используют различные конструкции охлаждаемых ловушек. Про-
стейшими из них являются U-образные полые трубки. Газ при переходе из ко-
лонки в ловушку резко охлаждается, что часто приводит к образованию аэрозо-
ля (тумана) неконденсирующегося и выходящего из ловушки вместе с газом-
носителем. Для осаждения тумана применяют различные методы, в том числе
заполнение ловушки адсорбентом или подходящей жидкостью на твердом но-
сителе. Эффективным является проведение хроматографического разделения в
потоке водяного пара, поскольку для его конденсации не требуется низких тем-
ператур.

Жидкостная хроматография

Жидкостная хроматография используется для исследования и анализа

различных смесей тяжелых органических и биологически активных соедине-
ний, а также полимерных композиций. В отличие от газовой хроматографии, в
жидкостной хроматографии существенно большее значение имеет природа ПФ.
Чаще всего применяют жидкостную хроматографию высокой эффективности
(ВЭЖХ) с высокими давлениями ПФ и сорбентами высокой степени однород-
ности, обусловливающие высокие скорости разделения. Рассмотрим механизм
удерживания в молекулярной жидкостной хроматографии. Особенности:
 48
1. Межмолекулярные взаимодействия между молекулами ПФ и сорбата
препятствуют его сорбции и уменьшают удерживание;
2. Молекулы ПФ всегда сорбируются на поверхности адсорбента и вы-
тесняются с этой поверхности молекулами сорбата или сорбция сорбата проис-
ходит не на чистой поверхности адсорбента;
3. Путем варьирования природы ПФ, применение смешанных раствори-
телей и различных добавок удается в широких пределах менять удерживание, в
связи с чем отпадает необходимость в широком наборе адсорбентов. Можно
ограничиться двумя видами адсорбентов: полярными, в качестве которого час-
то используют силикагель, и неполярными, например, кремнеземная матрица,
покрытая длинными углеводородными радикалами (С8 или С18).
Жидкостную хроматографию на полярных адсорбентах называют нор-
мально-фазовой, а на неполярных – обращено-фазовой.
На полярных адсорбентах и неполярных элюентах (ПФ - гексан) поляр-
ные вещества удерживаются очень сильно за счет специфических взаимодейст-
вий с адсорбентом. Неполярные вещества, наоборот, отличаются сильным дис-
персионным взаимодействием с ПФ и значительно более слабым с адсорбентом
и поэтому удерживаются слабо. При разделении увеличивают полярность ПФ,
добавляя в гексан полярные вещества, например, хлороформ. С увеличением
полярности ПФ удерживание полярных веществ уменьшается, а неполярных
увеличивается.
Разделение на неполярные адсорбентах проводят с полярными ПФ
(спирт, вода и др.). При этом наиболее сильно удерживаются малополярные
вещества, способные к сильному дисперсионному взаимодействию с адсорбен-
том и слабо взаимодействующие с ПФ.
Уменьшение полярности ПФ сокращает время анализа. Полярные веще-
ства, наоборот, слабо удерживаются обращено-фазовой системой и часто могут
не разделяться. В этом случае снижение полярности ПФ увеличивает их удер-
живание и способствует разделению веществ.

Механизм удерживания в эксклюзионной (ситовой) ЖХ

Разделение происходит по размеру молекул, основанном на их различной

способности проникать в поры НФ. Для этого необходимы сорбенты с опреде-
ленными диаметрами пор. Вещества, имеющие размер молекул меньше диа-
метра пор задерживаются, проникая в поры и отстают по скорости движения от
крупных молекул, которые не проходят в поры сорбента.
Для разделения ионов в качестве сорбентов используют силикагели или
полимеры с привитыми ионогенными функциональными группами (катионо-
обменными или анионообменными). ПФ – буферные растворы с различными
рН или растворители с добавками кислот и оснований для регулирования рН.
В последнее время широкое применение в практике ЖХ получил метод
капиллярного электрофореза для разделения заряженных или нейтральных
молекул, который основан на различии в их электрофоретической подвижности
и распределении между раствором и движущимися в электрическом поле заря-
 49
женными частицами (мицеллами, коллоидными частицами, металлокомплекса-
ми, молекулами полиэлектролита).
Гидродинамическая ЖХ, в которой роль НФ играют стенки колонки
(канала) и разделение смеси макромолекул или частиц происходит вследствие
различия скоростей протекания ПФ вдоль оси канала и у его стенок, а также за
счет распределения разделяемых частиц по сечению канала в соответствии с их
размерами.
Особенностями сорбентов для ЖХ являются:
1. Использование частиц с диаметром зерна dР=3÷10 мкм и содержанием
основной фракции более 90%;
2. Повышенная степень однородности внутренней поверхности частиц
(диаметр пор, удельная площадь поверхности, удельный объем пор);
3. Повышенная степень химической однородности поверхности;
4. Повышенная механическая прочность.
Природа активных функциональных групп на поверхности определяет
селективность процесса разделения, а размер частиц их фракционный состав и
характер упаковки определяют эффективность процесса.
В ЖХ применяют следующие колонки (по публикациям в отечественной
и зарубежной литературе):

Длина колонок, см
<10 10-20 20-50 >50
Аналитические ко- 11% 31% 57% 1%
лонки, заполненные,
dC=2÷6 мм
Аналитические ка- 13% 42% 32% 13%
пиллярные колонки,
dC ≤2 мм
Препаративные ко- 8% 32% 46% 14%
лонки, dC>6 мм

Влияние различных факторов на размытие зон

В ЖХ применяют уравнение ВЭТТ (4), где Н относят к диаметру зерна dP,

получая приведенное значение ВЭТТ h = H d P , предложенное Гиддингсом.
Смысл такого приведения в том, что минимальное значение Н равно dP, поэто-
му величина h показывает во сколько раз реальная ВЭТТ отличается от этого
идеального значения. Удовлетворительными можно считать колонки с h=3÷3,5.
Очень хорошими с h=2. Например, при размере частиц dP=5 мкм, h=3 и L=150
мм → N=10000, а при h=2 и → N=15000.
В ЖХ несмотря на большой перепад давления скорость ПФ по сравнению
с ГХ является постоянной величиной по длине колонке, поскольку жидкости
практически не сжимаемы. Объем коммуникаций жидкостного хроматографа
 50
(соединительные капилляры, объемы дозатора, детектора и т.д.) должны быть в
3-10 раз меньше объема пика несорбируемого компонета.
Кроме ВЭЖХ в аналитической практике и особенно в препаративных це-
лях применяют ЖХ среднего и малого давления. При этом значительно упро-
щается конструкция хроматографической аппаратуры и снижается стоимость
приборов.
ЖХ позволяет анализировать различные вещества в широком диапазоне
молекулярных масс (от 50 до 106) и разделять химически и термически нестой-
кие молекулы. Объектами ЖХ являются: белки, нуклеиновые кислоты, амино-
кислоты, красители, полисахариды, взрывчатые вещества, лекарственные пре-
параты, наркотические вещества, метаболиты растений и животных, а также
органические и неорганические ионы.

Тонкослойная хроматография

Тонкослойная хроматография ТСХ является разновидностью ЖХ, реали-

зуемой в плоском слое сорбента (планарная хроматография), в котором процес-
сы разделения смеси веществ осуществляются в тонких слоях сорбента или
пленках пористого полимерного материала. ТСХ была предложена российски-
ми учеными Измайловым и Шрайбер в 1938 г. Однако ее широкое использова-
ние началось с 1956 г. после стандартизации метода и разработки необходимого
оборудования для его реализации. В 1964 г. ТСХ признана в качестве стандарт-
ного метода контроля качества лекарственных препаратов в фармакопеи.
ТСХ подразделяют на аналитическую и препаративную.
Движущий фактор в ТСХ – ПФ, но не за счет перепада давления по длине
слоя, а за счет капиллярных сил в порах сорбента, нанесенного на пластинку. В
качестве сорбента чаще всего используют силикагель. Разделение в ТСХ осно-
вано на различии скоростей миграции хроматографических зон. Особенности
ТСХ в сравнении с другими методами хроматографии:
1. Полный анализ неизвестной смеси, т.к. возможен контроль остатка не-
элюированных компонентов на старте;
2. Производительность ТСХ превосходит ГХ и ВЭЖХ на порядок;
3. Малое время анализа, простота и дешевизна;
4. Возможность одновременного анализа нескольких различных смесей.
Анализ методом ТСХ включает следующие стадии:
1. Подготовка пробы;
2. Подготовка пластины;
3. Нанесение образцов;
4. Подготовка хроматографической камеры;
5. Проявление хроматограммы;
6. Удаление элюента с пластины;
7. Детектирование;
8. Идентификация;
9. Количественная оценка.
 51
Достоинством ТСХ является то, что разделенные компоненты в виде пя-
тен на пластине можно выделять и идентифицировать независимыми аналити-
ческими методами (ГХ, ВЭЖХ, УФ-ИКС-ЯМР-спектрометрия, масс-
спектрометрия и др.). Разновидностью ТСХ является бумажная хроматография.
Рассмотрим ТСХ-хроматограмму.

Рис. 31. Хроматограмма в тонком слое:

а – начало анализа (линия старта);
б – конец анализа;
1 ,2 – разделяемые вещества.

Узкая полоса в начале анализа на старте размывается в процессе хромато-

графирования до величины пятна шириной wb, круглой или эллиптической
формы. Это связано с механизмом размытия зон в ТСХ, т.к. скорость ПФ под
действием капиллярных сил не является постоянной и постепенно уменьшает-
ся. В ТСХ для оценки подвижности хроматографических зон используют вели-
чину Rf, которая характеризует степень уменьшения скорости движения хрома-
тографической зоны uC по отношению к скорости движения элюента u.
u 1
Rf = C = ,
u k +1
n
где k = L .
nG
На практике Rf измеряют из хроматограммы ТСХ, как отношение рас-
стояния х, пройденного веществом от старта до центра зоны (пятна), к расстоя-
нию L, пройденного элюентом:
x
Rf =
L
Rf измеряется от 0 до 1,0. При Rf = 0 вещество не движется по слою и ос-
тается в точке старта; при Rf =1,0 вещество не удерживается сорбентом движет-
ся вместе с фронтом ПФ.
Степень разрешения RS двух хроматографических зон (пятен) определя-
ется расстоянием между их центрами Δх, поделенными на среднеарифметиче-
ское из ширины зон wb1 и wb2.
 52
2Δx
RS =
wb1 + wb 2
Эффективность ТСХ определяется, как и в других хроматографических
процессах числом теоретических тарелок N или ВЭТТ H.
2
 L ⋅ Rf 
2
 x 
N = 16  = 16 
 b
w  b 
w
Разрешение двух зон считается полным при RS ≥ 1,5. Для максимального
разрешения оптимальным является Rf ≅ 0,3÷0,5.
Зависимость H от u описывается уравнением Нокса. В нем используются:
u ⋅ dp
приведенная ВЭТТ h = H dp и приведенная u ν = . Тогда
D⋅L
h = b ν + aν 1/ 3 + cν , где a, b, c – безразмерные эмпирические коэффициенты.
Уравнение Нокса описывает кривую h = f (ν ) с минимумом, аналогичную кри-
вой Ван-Димтера. При уменьшении ν, связанное с увеличением L, h уменьшает-
ся, проходит через минимум при νопт, соответствующим Lопт. Установлено, что
для обычных элюентов и низкомолекулярных веществ Lопт ≅ 10 см и
d p ( опт) ≅ 10 мкм, а для высокомолекулярных веществ Lопт ≅ 5 см и d p ( опт) ≅ 5 мкм.
Современная высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ)
включает комплекс методов и средств для получения максимальной эффектив-
ности ( d p ≅ 3 ÷ 8 мкм, пробег элюента L = 2 − 4 см); специальные устройства на-
несения проб; различные методы сжатия зон (круговая, антикруговая ТСХ,
многократное хроматографирование и др.), что увеличивает разрешение, т.е. на
данном отрезке пластины размещается больше пятен.

Сверхкритическая флюидная хроматография

Флюидом принято называть особое агрегатное состояние вещества, нахо-

дящегося при температуре и давлении, превышающих критические. Привлека-
тельность применения флюидов в качестве ПФ обусловлена тем, что их вяз-
кость примерно равна вязкости газа, а плотность примерно равна плотности
жидкости. При этом DG сорбатов на 2-3 порядка больше, чем у жидкости. Эти
свойства флюидов открывают возможность анализа высококипящих веществ,
низкая летучесть которых не позволяет их разделение методом ГХ. Сверхкри-
тическая флюидная хроматография СКФХ представляет промежуточный вари-
ант хроматографии между ГХ и ЖХ с неидеальными элюентами и реализуется
при TC ≥ (1,2 − 1,3)Tкр и Pi = (3 − 4) Pкр . Активные функции ПФ связаны с высо-
кой растворяющей способностью СКФ по отношению как к летучим, так и не-
летучим сорбатам при сохранении высокой подвижности, близкой к подвижно-
сти газа, что позволяет расширить круг анализируемых веществ (молекулярная
масса до 20000). СКФХ обеспечивает возможность регулирования селективно-
сти разделения путем изменения P , ТС и природы элюента. Первая работа по
 53
СКФХ была опубликована в 1962 г., в которой в качестве ПФ использовался
фреон для разделения термически нестабильных веществ при низких темпера-
турах.

Рис. 32. Зависимость константы распределения от температуры кипения

сорбатов:
1 – газовая хромтаография;
2 – сверхкритическая флюидная хроматография.

KC при сравнении с обычной ГХ уменьшается для СКФХ в 103 и более

раз, что обеспечивает ускорение анализа и разделение веществ при более низ-
ких температурах. В сравнении с ВЭЖХ, капиллярная СКФХ обеспечивает го-
раздо большую селективность разделения за счет использования более длинных
колонок (5-25 м), а при разделении на укороченных колонках позволяет суще-
ственно сократить время анализа.
В СКФХ в качестве элюентов наиболее широко используется сверхкри-
тический диоксид углерода СО2, реже углеводороды С2-С5, оксиды азота и
фторхлорпроизводные углеводородов. В качестве НЖФ – поперечно-сшитые
силоксаны, метилсилоксаны фенил- и циан-силоксаны, обладающие малой ле-
тучестью и малой растворимостью во флюиде. В качестве адсорбентов приме-
няют силикагель, пористые стекла, полимерные сорбенты. Широко используют,
также как в ЖХ, силикагели с привитыми функциональными группами типа
длинных углеводородных цепей (С18), а также с полярными концевыми груп-
пами. В качестве колонок для СКФХ используют как насадочные, так и капил-
лярные колонки. Особо следует отметить вариант анализа, включающий экс-
тракцию СКФ, т.к. из-за малой вязкости ПФ и относительно большой диффузии
сорбатов обеспечивается быстрая и эффективная экстракция широкого круга
веществ в различных объектах (пыль, почва, пищевые продукты, отложения и
т.д.). Селективность экстракции может регулироваться изменением ТС и Pi.

Определение примесей методом ГХ

Если концентрация исследуемых веществ в пробе выше 10-5-10-7% об.

(уровень чувствительности ПИД или порог чувствительности), то их условно
 54
называют просто примеси. А если концентрация в пробе меньше порога чувст-
вительности ПИД – то микропримеси. Для определения микропримесей необ-
ходимо концентрирование пробы и соблюдение требований к чистоте газа-
носителя, материалам колонки, дозатора, детектора, коммуникаций, а также к
чистоте сорбентов.

Рис. 33. Хроматограмма примеси в основном компоненте А:

1 – примесь, элюирующаяся после основного компонента;
2 – примесь, элюирующаяся до основного компонента.

Для определения примесей применяют следующие приемы:

1. Некоторая перегрузка колонки, когда RS>1, т.е. увеличивают Vпр и со-
ответственно Смакс;
2. Понижение температуры в начале и повышение в конце хроматогра-
фической зоны, тогда C макс = Co ⋅ K o ( To ) K o ( TR ) , т.к. K o ( To ) >> K o ( TR ) ;
3. Удаление основного компонента путем конденсации, экстракции,
сорбции или химическими методами;
4. Использование детекторов, нечувствительных к основному компонен-
ту, например, ДИП – для водных растворов или разделение с элюен-
том – водяным паром;
5. Дифференцирование выходного сигнала ДВС для неполностью разде-
ленных пиков. Применяют специальные электронные усилители, на-
пример, УД-1 или УД-2, выпускаемые Дзержинским НПО «Химавто-
матика»;
Сущность метода ДВС заключается в том, что в результате дифференци-
рования хроматографического пика получают два сигнала, пропорциональные
скорости нарастания фронта пика (положительная часть ДВС) и скорости
уменьшения тыла пика (отрицательная часть ДВС):
 55

Рис. 34. Иллюстрация метода ДВС:

а – хроматограмма на выходе хроматографа:
1 – начало выходного пика; 2 – точки перегиба пика; 3 – максимум пика;
4 – конец регистрации пика;
б - хроматограмма ДВС после дифференцирования:
1 – положительная часть – производная фронта пика; 2 – отрицательная
часть – производная тыла пика.
Тогда для примеси, элюирующейся после основного компонента, выби-
рают ДВС (2), а до основного компонента ДВС (1).
Наиболее эффективным адсорбентом для концентрирования примесей
органических соединений считают полимер Тенакс (полидифенилфениленок-
сид). Для определения примесей в жидких или твердых пробах часто применя-
ют метод хроматографического анализа равновесной паровой фазы (РПФ или
АРП), когда K C = C L CG при T=const. Поэтому при увеличении температуры
пробы может быть увеличено содержание летучего компонента в газовой фазе
СG.
На кафедре ОХХ совместно с институтом химии Санкт-Петербургского
университета разработан новый метод для анализа равновесной паровой фазы
при дополнительном концентрировании, который реализуется следующим об-
nV C
разом. Допустим, что VG=VL и K C = L G = L , (см. рис. 35).
nGVL CG
 56

Рис. 35. Устройство для парофазного анализа:

1 – поршень; 2 – игла шприца; 3 – резиновая мембрана.

С помощью поршня (1) увеличивают VG в 10 раз, тогда после восстанов-

n LVG
ления равновесия значение K C = . При этом дополнительное количест-
10 ⋅ nGVL
во примеси переходит из жидкой фазы в газовую фазу. Затем разобщают газо-
вую и жидкую фазы путем удаления иглы шприца (2) из зоны контакта с жид-
кой фазой в резиновую мембрану (3) и поршнем (1) восстанавливают исходное
давление и объем. При этом так как nG ( 2) = 10nG (1) , то в объеме VG CG ( 2) = 10CG (1) .

Хроматографические приборы и оборудование

Рис. 36. Блок-схема хроматографа:

1 – источник подвижной фазы;
2 – блок подготовки подвижной фазы;
3 – побудитель расхода подвижной фазы;
4 – узел ввода пробы (дозатор);
5 – разделительные колонки;
6 – термостат колонок;
7 – переключающие краны;
 57
8 – детектор;
9 – измерительная схема детектора;
10 – регистратор (самописец);
11 – блок терморегуляторов;
12 – система автоматизации анализа;
13 – устройство подготовки пробы;
14 – устройство сбора фракций.

Хроматографические приборы выпускают:

1. Для аналитических целей;
2. Для препаративных целей;
3. Для неаналитических целей (специальные приборы, например, для
изучения физико-химических и термодинамических свойств системы
сорбат-сорбент-элюент и др.).
Хроматографы для аналитических целей разделяют на лабораторные и
промышленные (установка датчиков непосредственно на промышленных объ-
ектах для контроля и регулирования технологических процессов). Аналитиче-
ские хроматографы условно делят на целевые и универсальные. Целевой прибор
предназначен для конкретной аналитической задачи и должен проходить мет-
рологическую аттестацию по конкретной МВХИ. Универсальный хромато-
граф, предназначен для решения различных аналитических задач в исследова-
тельских целях, снабжен набором колонок, детекторов и другими необходимы-
ми узлами.
1. Источник ПФ. В ГХ – это баллоны с сжатым газом или устройства
для получения чистых газов, например, генератор водорода. В ЖХ – это емко-
сти с элюентами.
2. Блок подготовки ПФ. В ГХ – это фильтры для очистки, регуляторы
давления и расхода газа-носителя, дроссели тонкой регулировки подачи газа-
носителя, измерительные манометры. В ЖХ – системы очистки жидкого носи-
теля, фильтры, смесители для смешанных ПФ и др.
3. Побудитель расхода ПФ. Для ГХ специальных побудителей (насосов)
не требуется, т.к. газ-носитель в баллонах под большим давлением. Насосы
подвижной фазы для ЖХ и СКФХ разделяют на насосы среднего и низкого
давления и насосы высокого давления.
 58

Рис. 37. Насосы для жидкостной хроматографии:

а) –Среднего и низкого давления Р = 20-50 кгс/см2;
1 – эластичный сосуд (сильфон) с жидкостью;
2 – жидкость в равновесии с паровой фазой при заданной температуре.
б) – Высокого давления Р до 300-500 кгс/см2 поршневые или шприцевые
большого объема;
1 – электропривод;
2 – пневмопривод.
в) – Высокого давления поршневые или мембранные малого объема с
двумя или более попеременно работающими насосами:
1, 2 – насосы малого объема;
3 – клапан всасывающий;
4 – клапан нагнетательный;
5 – электропривод;
6 – мембрана;
7 – газовая подушка;
8 – поршень.
г) – Диаграмма работы двух насосов. Частота хода 1 ÷ 10 Гц. Верхняя
область нагнетание (впрыск); Нижняя – всасывание.

4. Дозатор (узел ввода пробы).

Дозатор хроматографа должен обеспечивать:
 59
1. Ввод пробы методом поршня при минимальном разбавлении газом-
носителем, чтобы проба занимала на начальном участке колонки минимальный
объем;
2. Воспроизводимость размера пробы и условий ее ввода в колонку;
3. Исключение резких изменений условий работы колонки и других уз-
лов во время ввода пробы, т.е. ввод пробы без нарушения динамического рав-
новесия в системе.

Ввод пробы шприцом

Наибольшее применение получили отечественные шприцы МШ-1, МШ-

10 и Газохром-101. Из зарубежных – шприцы всемирно известной фирмы
Hamilton.

Рис. 38. Узел ввода пробы (испаритель):

1 – корпус;
2 – электрообогрев зоны испарения пробы;
3 – вставка испарителя;
4 – резиновая мембрана;
5 – накидные гайки;
6 – уплотнение.

Газ-носитель поступает в нижнюю часть корпуса испарителя и транспор-

тирует испарившуюся пробу в колонку для разделения. Температура испарите-
ля Tисп ≅ TC + 50o C .

4.2. Ввод пробы с помощью калиброванного объема

 60
Для ввода пробы газа с помощью калиброванного объема применяют
краны-дозаторы, выполненные на базе переключателей газовых потоков, на-
пример, шестиходовой газовый кран, содержащий три переключателя потока.

Рис. 39. Схема крана-дозатора:

1 – переключатель газовых потоков;
2 – калиброванный объем дозы;
3 – разделительная колонка;
4 – детектор. Положение крана (а) – набор анализируемого вещества в до-
зу 2; Положение крана (б) – анализ, проба транспортируется в колонку 3 для
разделения.

Дозирование пробы жидкости с помощью калиброванного объема вы-

полняют штоковым переключателем потока с возвратно-поступательным пере-
мещением запорного элемента.

Рис. 40. Дозирование калиброванного объема жидкости штоковым пере-

ключателем потока:
1 – шток (запорный элемент) с возвратно-поступательным перемещени-
ем;
2 – корпус с соединительными каналами;
3 – калиброванный объем;
4 – разделительная колонка;
5 – детектор;
 61
6 – газовый канал.
Шток вверху – операция «набор а/ж в калиброванный объем». Шток вни-
зу – операция «анализ». ПФ вымывает дозу в колонку для анализа.

Переключатели газовых потоков для хроматографии выполняют в виде:

1. Штоковых, рассмотренных выше, когда реализуется схема:

Рис. 41. Газовая схема штокового перелючателя потока:

1 – вход газа; 2, 3 – выход газа.
Шток вверху – соединены каналы 1 и 2. Шток внизу – соединены каналы
1 и 3.

2. Дисковых (поворотные).

Рис. 42. Дисковые (поворотные) переключатели:

1 – вход газа; 2, 3 – выход газа для двух положений переключателя.

Один диск смещается относительно другого поворотом вокруг оси. При

этом прорезь в верхнем диске в одном положении совмещается с каналами 1 и
2, а во втором – с каналами 1 и 3. Вторая реализация дисковых переключателей,
когда верхний диск имеет канал 1, который в одном положении совмещается с
каналом 2 нижнего диска, а при повороте верхнего диска с каналом 3.
3. Мембранные переключатели.

Рис. 43. Мембранные переключатели:

 62
а – верхняя крыша; б – нижняя крышка; 1 – вход газа; 2, 3 – выход газа
для двух положений.

Крышки а и б имеют углубления и герметизированы через мембрану с

центральным корпусом 2, имеющим газовые каналы 1, 2 и 3. В одном положе-
нии переключателя (нижняя мембрана прижата, верхняя отжата) соединены ка-
налы 1 и 2. В другом (верхняя прижата, нижняя отжата) соединены каналы 1 и
3.

Дозирование давлением

Рис. 44. Дозирование пробы давлением:

1 – линия анализируемого газа; 2 – регулятор давления; 3 – объем дозы
Vg; 4 – хроматографическая колонка; 5 – детектор; 6 – линия газа-носителя; 7,
8, 9 - переключатели потока Р1 > Р2; ΔР = Р1 – Р2; Объем дозируемого газа Vг =
Vg·ΔP; 7 и 8 – открыты; 9 – закрыт (операция «набор»); 9 – открыт, 7 и 8 – за-
крыты (операция «анализ»).

5. Термостат колонок
В современных хроматографических приборах применяют воздушные
термостаты с принудительным перемешиванием воздуха. Они имеют малую
тепловую инерцию и время выхода прибора на режим сокращается. Кроме это-
го, они позволяют работать в режиме программирования температуры колонки.

6. Разделительные колонки

См. предыдущие разделы.

7. Переключающие краны

Конструктивно выполняются на основе рассмотренных переключателей

газовых потоков (штоковые, дисковые, мембранные).

8. Детекторы

Детектор – это прибор, позволяющий фиксировать какое-либо физико-

химическое свойство бинарной смеси, определяемое ее составом. В современ-
 63
ной хроматографии используют дифференциальные детекторы, которые услов-
но делят на ионизационные и неионизационные. Кроме того, детекторы под-
разделяют на деструктивные и недеструктивные, а также универсальные и се-
лективные. Большинство ионизационных детекторов являются селективными и
деструктивными, а большинство неионизационных детекторов – универсаль-
ными и недеструктивными. Деструктивным детектором считают тот, в котором
более чем 1% анализируемых компонентов разлагаются или реагируют с обра-
зованием других соединений. Ионизационным называют такой детектор, в ко-
тором анализируемые соединения под действием различных факторов (водо-
родное пламя, β-излучение, УФ-излучение, высокочастотный разряд и др.) пре-
вращаются в отрицательные или положительные ионы, которые собираются на
электродах и регистрируются. Большинство отечественных и зарубежных
фирм, выпускающих газохроматографическую аппаратуру, включают в состав
прибора не менее 5-6 детекторов, причем 2-3 из них постоянно устанавливают-
ся на хроматографе, а остальные прилагаются в качестве сменных или постав-
ляются по специальным заказам.
Детекторы подразделяются на концентрационные и потоковые. Сигнал
концентрационного детектора зависит от мгновенной концентрации компонен-
та в смеси с газом-носителем, а сигнал потокового определяется числом моле-
кул анализируемого компонента, достигших чувствительный элемент в данный
момент времени.
 64

Концентрационный детектор Потоковый детектор

E c = ac C , E j = a j J ; E j = a j FC C ,
где ac – коэффициент чувствитель- где a j – коэффициент чувствитель-
ности; Ec – сигнал; С – концентра- ности; J – поток анализируемого
ция. компонента, мг/с; J = CFC .
t
1 2 F t
W = ∫ Ec FC dt = bc C Q , 1 2 1
W = ∫ E j dt = b j Q ,
a c t1 ac a j t1 aj
где W – количество вещества; Q – где W – количество вещества; Q –
площадь пика; FC – объемная ско- площадь пика; FC – объемная ско-
рость газа-носителя на выходе ко- рость газа-носителя; bj – коэффици-
лонки; bс – коэффициент пропор- ент пропорциональности между
циональности между сигналом де- сигналом детектора и показанием
тектора и показанием регистратора. регистратора.
Q зависит от FC; h не зависит от FC; Q не зависит от FC; h зависит от FC;
h=f(С). Q=f(С).
Чувствительность – сигнал при Чувствительность – сигнал при
концентрации 1 мг/мл. потоке 1 мг/с.
QFC  мВ ⋅ мл  Q  мВ ⋅ c 
Sc = ,   Sj = ,  
B1 B2W  мг  B1 B2W  мг 
 65
2 3
Q – площадь, см ; FC – расход газа-носителя, см /мин; В1 – чувствительность
регистратора, см/мВ; В2 – скорость движения диаграммной ленты, см/мин; W –
масса компонента пробы, мг.
Порог чувствительности
2m 2m 2m
C мин = J мин = или C мин =
Sc Sj S j ⋅ FC
m – уровень шумов

Рис. 45. Определение уровня шума и полезного сигнала.

Линейный динамический диапазон ЛДД ( C макс С мин )

Рис. 46. Линейный динамический диапазон.

ас и ajFC – тангенс угла наклона зависимости Ec от С и Ej от С соответст-

венно; ас и ajFC = const. Смакс определяют при не более 3% отклонении от ли-
нейности.
Инерционность или быстродействие характеризует способность детекто-
ра реагировать на изменение концентрации вещества в детекторе.
 66

Рис. 47. Зависимость сигнала детектора Е от времени.

Если в детекторе в момент времени tо скачкообразно изменить концен-

трацию, его сигнал от начального значения Eo до значения Е1, отвечающего но-
вой концентрации, изменяется не мгновенно, а с некоторым запаздыванием τо
( )
E = E1 1 − e −t τ o ,
где Е – текущий сигнал детектора; t – время с момента изменения концентра-
ции; τо – постоянная времени (инерционность).
За время t=τo сигнал достигает значения
Et = E1 (1 − e −1 ) = 0,632E1
Таким образом, постоянная времени τо соответствует времени достиже-
ния 62,3% установившегося сигнала детектора. Чем меньше τо, тем быстрее
реагирует детектор и тем меньшие искажения появляются при записи хромато-
грамм.
Было показано, что τо/τh не должно превышать величины 0,085. При этом
сигнал в максимуме пика (h) будет меньше действительного не более чем на
1,5%. При использовании в качестве сигнала детектора площади пика (Q) тре-
бования к инерционности снижаются до τо/τh = 0,225. Тогда, погрешность опре-
деления (Q) составит ≈ 1,0%. Инерционность детектора является следствием
как объема камеры, так и ограниченной скорости физико-химических процес-
сов при формировании сигнала детектора.
Большая инерционность ДТП определяется скоростью процессов тепло-
передачи, которая значительно меньше скорости образования и сбора зарядов в
ионизационных детекторах.
Основными детекторами для ГХ являются ДТП и ПИД.

1. Детектор по теплопроводности ДТП

ДТП измеряет различие в теплопроводности чистого ГН и смеси ГН с

сорбатом. ГН – гелий, водород, хуже азот, аргон, т.к. λHe и λH 2 в 6÷7 раз больше
λN 2 и λAr . Чувствительными элементами (ЧЭ) детектора являются нагретые
электрическим током нити, выполненные в виде спиралей из материалов с вы-
 67
соким температурным коэффициентом сопротивления (платина, вольфрам).
ЧЭ могут выполняться из полупроводниковых материалов (терморезисторы), у
которых температурный коэффициент сопротивления ≈ в 10 раз выше, чем у
металлических нитей. ЧЭ помещают в массивный металлический темостати-
руемый корпус. Нагретые ЧЭ отдают тепло стенкам камеры в зависимости от
состава газа за счет теплопроводности Q1 и за счет принудительной конвекции
и теплоемкости Q2. Общий тепловой баланс ДТП:
Qэл = Q1 + Q2 ,
где Qэл – приход тепла за счет электрического тока и сопротивления ЧЭ.
Q2 – нежелательное слагаемое для ДТП, т.к. зависит в большей степени от
скорости газа-носителя FC и теплоемкости газовой смеси. Конструкцию ЧЭ и
камеры детектора выбирают из условий уменьшения влияния Q2 на работу
ДТП. Для этого выбирают систему подачи газа в детектор:

Q2 – велико Q2 – мало Средняя между а) и б)

инерционность мала инерционность велика

Рис. 48. Система подачи газа в детектор:

а) – проточная; б) – диффузионная; в) – полудиффузионная; 1 – вход газа;
2 – выход газа; 3 – чувствительный элемент.

Уменьшить влияние Q2 на показания ДТП можно изменением геометри-

ческих размеров камеры детектора, а также изменением параметров ЧЭ (Т, Тст,
RЧЭ, I). Для повышения чувствительности ДТП применяют часто четырехка-
мерную конструкцию детектора (две камеры с рабочими ЧЭ и две камеры со
сравнительными ЧЭ).

Рис. 49. Электрическая схема четырехкамерного детектора:

 68
R1 и R2 – чувствительные элементы в рабочей камере детектора; R3 и R4
– чувствительные элементы сравнительной камеры детектора; а и б – выходной
сигнал.

Через рабочие камеры (ЧЭ R1 и R2) проходит элюат колонки, а через

сравнительные камеры (ЧЭ R3 и R4) – чистый газ-носитель. ЧЭ включены в из-
мерительный мост постоянного тока. Если через камеры ДТП проходит газ
одинакового состава, то выходной сигнал моста точки а и б равен нулю (уста-
новка нуля схемы резистором R5). При изменении состава в рабочей камере за
счет нарушения теплового равновесия, вызванного изменением теплопроводно-
сти среды, температура ЧЭ R1 и R2 и их омическое сопротивление изменяется,
что вызывает нарушение равновесия моста и между точками а и б возникает
разность потенциалов (сигнал детектора, регистрируемый самопишущим при-
бором).
Условие равновесия моста R1 ⋅ R2 = R3 ⋅ R4 . Температура ЧЭ выбирается
примерно на 100ºС выше температуры стенок детектора. Поскольку теплопро-
водности анализируемых веществ различны, сигналы ДТП для них неодинако-
вы и для количественных расчетов необходимо вводить поправочные коэффи-
циенты.
ДТП – универсальный детектор; концентрационный; Смин = 10-3-10-5 мг/мл
(газ-носитель гелий); ЛДД – 104; τо = 0,1-0,25 с. Из-за относительно большой
инерционности ДТП не применяют для работы с капиллярными колонками. В
последнее время вместо неравновесных измерительных схем применяют изме-
рительные схемы для ДТП с постоянной температурой нитей (равновесные
схемы измерения когда электронное устройство компенсирует изменение со-
противления R1 и R2 (реакция на элюат) изменением тока моста так, чтобы R1 и
R2 оставались всегда постоянными). Сигналом ДТП в этом случае будет изме-
нение тока моста.

2. Термохимический детектор ДТХ

Универсальный (для горючих соединений); промежуточный между кон-

центрационным и потоковым; Смин = 10-4-10-6 мг/мл; ЛДД – 104; τо=0,25-0,5 с.
Как концентрационный он работает при высоких скоростях потока.
Принцип действия ДТХ основан на измерении теплового эффекта каталитиче-
ской реакции окисления элюата (газ-носитель воздух) на поверхности ЧЭ (пла-
тиновая нить или монослой платино-палладиевого катализатора на разветвлен-
ной поверхности, например, окиси алюминия (подложка)). ЧЭ включены в не-
равновесный или равновесный мост постоянного тока (см. ДТП) и нагреваются
до начальной температуры реакции током моста (для платиновой нити
То≈900ºС). Тепловой баланс ДТХ Qэл + Qхим = Q1 + Q2 , где Qэл = 0,86 ⋅ I 2 R ; R –
сопротивление ЧЭ; Qхим = C ⋅ ∆H ⋅ A ; С – концентрация сорбата в элюате; ∆H –
тепловой эффект (теплота сгорания сорбата); А – площадь поверхности катали-
затора.
 69
3. Детектор по плотности ДПЛ

Универсальный, концентрационный; Смин = 10-4-10-5 мг/мл; ЛДД – 104;

τо=0,25-0,5 с.
ЧЭ ДПЛ являются термоанемометры, измеряющие скорость потока чис-
того газа-носителя. ЧЭ включены в мост постоянного тока и нагреваются током
моста. Если в элюате отсутствует сорбат, т.е. проходит чистый газ-носитель, то
скорость в верхнем и нижнем каналах термоанемометров одинакова. Разбаланс
моста равен нулю. Если плотность элюата (в зависимости от анализируемых
компонентов) изменяется, т.е., например, увеличивается в нижнем канале и
уменьшается в верхнем канале, то появляется разбаланс за счет изменения ско-
ростей в каналах с ЧЭ. Относительная мольная чувствительность ДПЛ выража-
ется
Mi − Mo
ОМЧ ≅ ,
M ст − M o
где Mi – молекулярная масса i-го компонента; Mст – молекулярная масса веще-
ства стандарта (обычно используют бензол или бутан); Мо – молекулярная мас-
са газа-носителя.
ДПЛ не требует дополнительной градуировки.

4. Ионизационные детекторы

Ионизационные методы детектирования обеспечивают наибольшую чув-

ствительность. Сигналом ионизационных детекторов является изменение тока
(ионы + электроны), вызванное введением в детектор анализируемых веществ.
Ионный ток возникает в электрическом поле между электродами под действием
какого-либо источника ионизации (температуры пламени, радиоактивного изо-
топа, разряда, фотоионизации и др.).
Рассмотрим зависимость ионного тока I в газовой среде от напряжения на
электродах V (вольтамперная характеристика). Характеристика состоит из трех
участков, каждый из которых может использоваться для различных способов
детектирования.

Рис. 50. Вольтамперная характеристика ионизационных детекторов:

I – участок слабого поля; II – участок насыщения; III – участок вторичной
ионизации.
 70

На участке I (слабое поле) реализуется режим неполного сбора заряжен-

ных частиц, когда значительная часть их успевает рекомбинировать. Началь-
ный фоновый ток детектора формируется электронами, подвижность которых
на 3 порядка выше, чем подвижность ионов (в этой области работает ДЭЗ).
На участке II достигается насыщение (полный сбор заряженных частиц) и
отсутствие рекомбинации ионов, т.е. происходит полный сбор всех образовав-
шихся зарядов. Здесь ионный ток определяется только скорость образования
зарядов. Детекторы (ПИД, ТИД и ПФД), работающие в области насыщения,
наиболее удобны, поскольку их сигнал не зависит от напряжения в широком
диапазоне.
На участке III при высокой напряженности поля насыщение возрастает за
счет размножения зарядов (вторичной ионизации) при введении в детектор
анализируемых веществ. В этой области работают аргоновый и гелиевый иони-
зационные детекторы.

Пламенно-ионизационный детектор ПИД

Универсальный (для горючих органических соединений); потоковый;

Смин = (0,3-1)∙10-8 мг/мл; ЛДД – 106-108; τо=2∙10-3 с.
Принцип работы ПИД основан на ионизации, происходящей за счет энер-
гии окисления углерода при сгорании в пламени водорода органических ве-
ществ.

Рис. 51. Схема пламенно-ионизационного детектора.

ПИД содержит: 1 – электрод коллекторный; 2 – горелка; 3 – диффузор-

распределитель воздуха; 4 – электрометрический усилитель малых токов; 5 –
источник питания.
Пламя водорода (Тпламени≈2000ºС) имеет очень малый ионный ток. Напря-
жение питания ПИД ≈ 100-300 В. Горелка изготавливается из нержавеющей
стали, платины или кварца. Диаметр сопла около 0,3-0,8 мм. Соотношение га-
зовых потоков 1:1:10. Расход газа-носителя примерно равен расходу водорода.
 71
Расход воздуха примерно в 10 раз больше расхода водорода. Механизм ионо-
образования: в нижней части пламени (у среза горелки) происходит:

1. Термическая деструкция органических молекул под действием темпе-

ратуры пламени.

Органическое вещество → СН* (с образованием возбужденных продуктов)

2. Окисление продуктов деструкции, сопровождающееся хемиионизаци-

ей

2 СН* + О2 → 2 СНО+ + 2 е− (с образованием окисленных ионов)

3. Взаимодействие окисленных ионов СНО+ с Н2О.

(с образованием ионов гидроксония,

+ +
СНО + Н2О → Н3О + СО который является основным
носителем зарядов в пламени ПИД)

Поэтому чувствительность ПИД пропорциональна числу атомов углерода

в молекулах углеводородов. Для неуглеводородов, имеющих в молекулах час-
тично окисленные атомы углерода, чувствительность ПИД понижается. На-
пример, ПИД практически не реагирует на муравьиную кислоту. В общем слу-
чае чувствительность ПИД оценивается с помощью величины ЭУЧ (эффектив-
ное углеродное число), которое показывает сколько атомов углерода содержит
алкан, соответствующий по чувствительности анализируемому веществу или
это такое количество углеродных атомов в молекуле вещества, которое ответ-
ственно за формирование сигнала ПИД. Вклад каждого углеродного атома в
ЭУЧ зависит от его связи с атомами углерода, водорода, кислорода, азота, хло-
ра, серы и т.д. ЭУЧ ≤ nC. ЭУЧ = nC только для углеводородов. Для неуглеводо-
родов ЭУЧ < nC.

Термоионизационный детектор ТИД

Селективный для соединений, содержащих фосфор, азот, мышьяк, гало-

гены (кроме фтора), олово, серу; потоковый; Смин = (0,6-2)∙10-10 мг/мл; ЛДД –
103; τо ≅ 10-2 с.
ТИД предложен для газовой хроматографии в 1964 г. ТИД является мо-
дификацией ПИД. Принцип действия основан на повышении ионизации солей
щелочных металлов в пламени при попадании в него элементоорганических со-
единений. Эффект может быть получен при использовании почти всех солей и
гидроксидов калия, натрия, рубидия и цезия.
Процессы ионизации сосредоточены в зоне самого пламени, тогда как в
ПИД – у среза горелки. Таблетка соли щелочного металла вносится в пламя во-
дорода. Чувствительность ПИД изменяется от мышьяка, хлора, серы, азота,
 72
фосфора как: 1, 10, 50, 50, 100. ТИД применяется для анализа пестицидов и
различных биологических объектов.

Пламенно-фотометрический детектор ПФД

Селективный к соединениям фосфора и серы; потоковый; Смин ≅ 1∙10-9%

об.; ЛДД – 104; τо~10-2 с.
ПФД основан на измерении свечения (хемилюминисценции) водородного
пламени при сгорании в нем фосфор- и серосодержащих веществ.
В ПФД, в отличие от ПИД, пламя обогащено водородом, в то время как в
ПИД оно обогащено кислородом.
Конструктивно ПФД сочетает ячейку ПИД с оптической схемой измере-
ния светового потока.

Рис. 52. Схема пламенно-фотометрического детектора:

1 – горелка; 2 – фильтр на 394 нм для серосодержащих веществ или 526
нм для фосфорсодержащих веществ; 3 – фотоумножитель (преобразователь
светового потока в электрический сигнал).

ПФД обеспечивает также хемилюминисценцию углеводородов у основа-

ния пламени. Свечение фосфор- и серосодержащих соединений обеспечивается
в верхней части пламени. Таким образом, путем установки фотоумножителя 3
можно обеспечить необходимую селективность детектирования.

Детектор электронного захвата ДЭЗ

Селективный к галоген-, кислород- и азотсодержащим веществам, а так-

же к некоторым металлоорганическим соединениям и другим веществам, со-
держащим атомы с явно выраженным сродством к электрону; концентрацион-
ный; недеструктивный; Смин ≅ 10-10 мг/мл; ЛДД – 103; τо~0,01-0,1 с.
Для работы ДЭЗ используют в качестве газа-носителя азот особой чисто-
ты, т.к. наличие примесей нарушает работоспособность системы (уменьшает
рабочий диапазон).
В отличие от ПИД ионизация достигается под действием радиоактивного
излучения.
 73

Рис. 53. Схема детектора электронного захвата:

а) – камера детектора; б) - хроматограмма

1 –анод; 2 – диффузор (сетка); 3 – источник радиоактивного излучения; 4

– катод.
Скорость электронов, движущихся к аноду, обычно составляет 105 см/с и
более. При уменьшении ускоряющего напряжения до 10-100 В скорость элек-
тронов снижается и молекулы некоторых соединений, обладающих достаточ-
ным сродством к электрону (например, галогенсодержащие соединения), захва-
тывают такие медленные электроны, в результате чего образуются отрицатель-
ные молекулярные ионы. При этом ток ионизации снижается и на хромато-
грамме появляется отрицательный пик

Механизм работы ДЭЗ:

1. Ионизация газа-носителя под действием радиоактивного излучения.
−
→ N +2 + e
N 2 Радиоакт.

Напряженность поля недостаточна для сбора всех зарядов и начальный
(фоновый) ток детектора формируется в основном только электронами, под-
вижность которых значительно выше, чем подвижность ионов. Большая часть
ионов рекомбинируется, не доходя до соответствующего электрода.
2. При появлении в камере ДЭЗ молекул анализируемого вещества из
колонки происходит захват ими свободных электронов.
М + e− → M−; М− + N +2 → M + N 2
Сигнал ДЭЗ соответствует уменьшению тока детектора при постоянном
напряжении на электродах.

Детектор постоянной скорости рекомбинации ДПР

ДПР является модификацией ДЭЗ, отличающийся только системой изме-

рения. Сигнал ДПР соответствует увеличению напряжения на электродах при
поддержании постоянным тока детектора. ДПР обладает несколько большей
точностью измерения.

Аргоновый детектор

Универсальный для веществ, энергия ионизации которых ниже энергии

атомов аргона в метастабильном состоянии (11,6 эВ); концентрационный; неде-
структивный; τо=0,01-0,1 с.
 74
Ионизация аргона происходит под действием радиоактивного β-
излучения.
Ar → Ar*; M + Ar* → M− + Ar+; Ar+ + e− → Ar* + e
Сигнал детектора – увеличение тока за счет сбора заряженных частиц при
напряжении на электродах выше 500 В и размножения зарядов при столкнове-
нии с быстрыми электронами. Обязательное требование к чистоте Ar (высокой
чистоты).

Гелиевый детектор

Универсальный для веществ, потенциал ионизации которых ниже энер-

гии атомов гелия в метастабильном состоянии (19,6 эВ); концентрационный;
недеструктивный; τо=0,01-0,1 с.
Ионизация гелия происходит под действием радиоактивного β-излучения.
Не Радиоакт.
 → Не*; M + Не* → M− + Не+; Не+ + e− → Не* + e
Сигнал детектора – увеличение тока за счет полного сбора заряженных
частиц при напряжении на электродах выше 1000 В и размножения зарядов при
столкновении с быстрыми электронами. Обязательное требование к чистоте Не
(высокой чистоты).
Недостатки аргонового и гелиевого детекторов: сравнительно небольшой
ЛДД; неустойчивость работы; повышенные требования к стабильности высоко-
вольтного напряжения. Поэтому они не получили широкого распространения.

Фотоионозационный детектор ФИД

Универсальный для веществ, энергия ионизации которых УФ-излучением

ниже 10-12 эВ; концентрационный; недеструктивный; Смин=10-9-10-11 мг/мл;
ЛДД – 104-107; τо=0,1-0,2 с.
Источником излучения являются УФ-лампы аргонового, криптонового,
ксенонового или водородного наполнения, испускающие фотоны с энергией
9,5; 10,0; 10,2; 10,9 и 11,7 эВ. Лампы взаимозаменяемы. Наибольшее распро-
странение получили водородные лампы, из спектра которой выделяют полосу с
длиной волны 121,6 нм (10,2 эВ). Этот источник УФ-излучения создает наибо-
лее интенсивный пучок фотонов. В качестве газа-носителя чаще всего исполь-
зуют аргон высокой чистоты, но могут также использоваться и другие газы (ге-
лий, азот, водород, воздух, диоксид углерода). Конструктивно ФИД содержит
газоразрядную лампу, соединенную с ионизационной камерой малого объема
(40÷200 мкл) через прозрачные в УФ-области спектра оптические окна из фто-
ридов щелочных или щелочноземельных металлов. В ионизационной камере
устанавливаются два электрода, через которые протекает элюат из колонки.
Напряжение питания на электродах 300-350 В.
Механизм ионизации ФИД:
1. Прямая ионизация молекул анализируемого вещества:
М + hv → M+ + e−
 75
2. Ионизация в результате взаимодействия молекул М с возбужденны-
ми молекулами газа-носителя:
Ar + hv → Ar*; M + Ar* → M* + e− + Ar
3. Ионизация фотонами с промежуточным переходом молекул М в воз-
бужденное состояние:
М + hv → М*; M * → M + + e−

4. Побочные реакции, ответственные за рекомбинацию ионов:

М+ + e− → М; Ar + e− → Ar−; M+ + Ar− → M + Ar
Сумма зарядов, собираемых на электродах, создает ток ФИД, который
усиливается электрометрическим усилителем и регистрируется в виде хромато-
графического сигнала.
ФИД не регистрирует SO2 и СН4 (недостаточна энергия излучения). При
hv = 10,2 эВ ФИД не дает отклика на некоторые растворители (метанол, хлоро-
форм, четыреххлористый углерод, ацетонитрил), что особенно удобно при ана-
лизе примесей в этих растворителях. На ФИД не рекомендуется делать анализ
воды и водных растворов из-за вредного воздействия паров воды на процессы
ионизации в камере детектора и на оптические окна.
Экспериментально показано, что относительный сигнал ФИД обусловли-
вается не столько числом атомов углерода в молекуле углеводорода, сколько
его принадлежностью к тому или иному гомологическому ряду, что обеспечи-
вает возможность использования сигналов ФИД для качественного анализа
сложных смесей.

5. Ультразвуковой детектор

Универсальный; концентрационный; Смин = 10-3-10-4 мг/мл; ЛДД – 105; τо

= 0,1-0,2 с. Может быть использован как в ГХ, так и в ЖХ.

Рис. 54. Схема ультразвукового детектора:

1 – излучатель; 2 – приемник; 3 – камера УЗД; 4 – резонансный усили-
тель.

Принцип работы основан на измерении скорости звука в газовых или

жидких смесях в камере детектора, через которую протекает элюат из колонки
хроматографа. Резонансная частота камеры УЗД зависит от состава смеси.
Относительная мольная чувствительность УЗД:
 76
fi − f o
ОМЧ i = ,
f ст − f o
где fi, fст, fo – скорости звука i-го компонента, стандарта (бензол) и подвижной
фазы (газ или жидкость).
Используя справочные данные можно расчетным методом определить
ОМЧ без дополнительной градуировки прибора.

6. Диэлькометрический детектор

Универсальный; концентрационный; Смин = 10-3 мг/мл; ЛДД – 104; τо =

0,1-0,2 с. Применяется как в ГХ, так и в ЖХ.
Камеры детектора выполнены в виде коаксиального или плоского кон-
денсатора с изоляторами из материала с очень малым значением ε (высокочас-
тотная керамика, фторопласт). Электрическая схема измерения для ГХ, как
правило, с использованием высоких частот (ε малы), для ЖХ – низкочастотные
схемы измерения (ε велики).
Диэлькометрический детектор измеряет изменение диэлектрической по-
стоянной i-го компонента относительно подвижной фазы.

7. Фотометрические детекторы для ЖХ

Универсальные для веществ, поглощающих свет в соответствующей об-

ласти спектра (длины волн 190-600 нм); концентрационные; недеструктивные.
Фотометрические детекторы подразделяют на три вида:
1. Детекторы с фиксированной длиной волны. Это наиболее простые и
дешевые приборы.

Рис. 55. Схема фотометра с фиксированной длиной волны:

1 – фотоприемник (фотоумножитель); 2 – рабочая микрокювета; 3 – опти-
ческий фильтр; 4 – ртутная лампа; 5 – сравнительная микрокювета.

Детектирование проводиться на заданной длине волны, например, 254

нм, которой соответствует 90% энергии излучения ртутной лампы. Объем кю-
веты не более 10 мкл.
2. Детекторы с дискретно изменяемой с помощью оптических фильт-
ров длиной волны (фильтровые фотометры). Фильтровой фотометр, напри-
мер, с четырьмя интерференционными фильтрами 217 нм, 254 нм, 263 нм и 279
нм перекрывает область 200-300 нм. Рабочая длина волны выбирается с учетом
свойств анализируемых соединений и подвижной фазы. В фильтровых фото-
 77
метрах применяют дейтериевую лампу, имеющую сплошной спектр в диапа-
зоне 190-600 нм.
3. Спектрофотометрические детекторы с плавно изменяемой длиной
волны. Они предназначены для регистрации поглощения в области УФ-
спектра. Источник света – дейтериевая лампа. Необходимую спектральную по-
лосу выделяют с помощью дифракционных решеток или интерференционных
фильтров с заданной шириной спектральной полосы. Монохроматический пу-
чок света поочередно проходит через рабочую и сравнительную камеры детек-
тора.
Широко используются также спектрофотометрические детекторы на фо-
тодиодных линейках или на диодных матрицах, когда проба сканируется каж-
дые несколько миллисекунд, т.е. спектральная информация выдается практиче-
ски постоянно. Каждый диод (а их более 2000) в матрице предназначен для из-
мерения узкой полосы (50 мкм) спектра. Детектор позволяет определять спектр
каждого пика и вычислить максимальное поглощение.

8. Рефрактометрический детектор

Универсальный для ЖХ; концентрационный; недеструктивный. Он не-

прерывно регистрирует показатель преломления элюата в проточной камере в
сравнении с чистым элюентом в сравнительной камере. Это детектор средней
чувствительности, т.к. измеряет свойство раствора.
В ЖХ получили применение также флуориметрические детекторы, из-
меряющие флуоресценцию фанализируемых веществ. Чувствительность флуо-
риметров на два порядка выше чувствительности УФ-детекторов. Кроме того
используют различные электрохимические детекторы для ионных жидкост-
ных хроматографов.

9. Детектирование в СКФХ

В СКФХ детектирование проводят с применением детекторов как для га-

зовой, так и для жидкостной хроматографии.

Рис. 56. Схемы детектирования в СКФХ:

а) – с газохроматографическими детекторами;
б) – с жидкостными детекторами;
 78
1 – узел ввода пробы; 2 – разделительная колонка; 3 – устройство для
снижения давления в виде капилляра; 4 – устройство охлаждения; 5 - детектор.

В последнее время широко применяют комбинирование хроматографиче-

ских методов с другими физико-химическими методами анализа и прежде всего
с масс-спектрометрией и ИК-спектрометрией с Фурье-преобразованием. Со-
временная аппаратура обеспечивает получение полной развертки масс-спектров
за время существенно меньшее продолжительности элюирования хроматогра-
фической зоны, что позволяет идентифицировать анализируемые вещества в
случае их неполного разделения. К числу недостатков следует отнести невоз-
можность идентификации изомеров и высокую стоимость.

Блок терморегуляторов

Блок терморегуляторов включает устройства для поддержания темпера-

туры в различных узлах и блоках хроматографа. Эти устройства содержат за-
датчики температуры и работают в режиме пропорционального регулирования
температуры. Когда температура на объекте регулирования меньше температу-
ры задатчика на нагреватель подается большое напряжение, т.е. идет ускорен-
ный нагрев. По мере приближения к температуре задатчика напряжение про-
порционально уменьшается. Степень пропорциональности зависит от тепловых
потерь объекта регулирования, температуры задатчика и температуры окру-
жающей среды.
Точность поддержания температуры в точке где установлен датчик тем-
пературы колеблется для различных приборов и составляет не более 0,5% от
заданного значения.

Системы автоматизации анализа

Предпосылки автоматизации газовых хроматографов возникли в 60-х го-

дах, когда были впервые осуществлены программирование температуры коло-
нок, электронное интегрирование площади пика и перенос на стандартный
компьютер данных хроматографа, записанных с помощью магнитофона, пер-
форатора или АЦП. В 1969 году внедрены первые автоматические дозаторы
жидких проб. С начала 70-х годов наметилось широкое использование ВТ для
хроматографических приборов, в том числе микропроцессоров для обработки
данных измерений и управления работой узлов и отдельных блоков прибора по
заданной программе. ВТ используют не только для промышленных хромато-
графов, но и для лабораторных приборов.
Автоматизация хроматографических приборов включает следующие ос-
новные операции:
1. Ввод пробы в прибор;
2. Установка и поддержание на заданном уровне основных параметров
хроматографического процесса;
3. Обработка хроматограмм и расчеты по результатам анализа;
 79
4. Выбор оптимального режима разделения и анализа веществ.
Полная автоматизация обработки данных осуществляется с помощью
ЭВМ общего назначения или специализированных мини-ЭВМ типа контролле-
ров. Такие системы могут работать в режиме off-line, когда сигналы хромато-
графа записываются на магнитный носитель и передаются на ЭВМ, либо в ре-
жиме реального времени (on-line), когда сигналы хроматографа непрерывно по-
ступают на ЭВМ, которая в том же режиме реального времени выдает обрабо-
танную информацию или же в комбинированном режиме.
Системы автоматизации обработки данных делятся на одноканальные и
многоканальные, предназначенные для обработки данных от нескольких хро-
матографов. В запоминающие устройства ЭВМ заносят различную информа-
цию о физико-химических свойствах анализируемых веществ, а также корреля-
ционные зависимости хроматографических величин удерживания и чувстви-
тельности от структуры и свойств анализируемых веществ для различных НЖФ
и детекторов. Этот информационно-справочный массив при соответствующем
программном обеспечении позволяет проводить качественный и количествен-
ный хроматографический анализ сложных смесей веществ, принадлежащих к
различным классам органических соединений за один цикл хроматографирова-
ния в реальном масштабе времени.

Газовые схемы хроматографов

1. Схемы с одной колонкой

Рис. 57а. Газовая схема хроматографа с одной колонкой:

1 – ввод пробы; 2 – разделительные колонки; 3 – детектор.

2. Схемы с двумя колонками, которые могут соединяться последователь-

но или параллельно

Рис. 57б. Газовая схема хроматографа с двумя колонками:

 80
1 – ввод пробы; 2 – разделительные колонки; 3 – детектор.

3. Схемы с тремя и более колонками, которые могут соединяться, как по-

следовательно или параллельно аналогично п.2, так и комбинирован-
но.

Рис. 57в. Газовая схема хроматографа с тремя колонками:

1 – ввод пробы; 2 – разделительные колонки; 3 – детектор.

1. Схемы с обратной продувкой колонки.

Рис. 58. Обратная продувка колонки:

а) – газовая схема; б) – функциональная схема с двумя вариантами. Пер-
вый с регистрацией суммарного пика детектором , второй – без регистрации; в)
- хроматограмма первого варианта; г) – хроматограмма второго варианта. Ко-
лонка заполнена сорбентом Полисорб – 1.

2. Схемы с полуобратной продувкой колонок.

 81

Рис. 59. Полуобратная продувка колонок:

а) – газовая схема; К1 – колонка с Полисорб – 1; К2 – колонка с молеку-
лярными ситами СаА;
б) – функциональная схема;
в) – хроматограмма.

3. Схемы с полупрямой продувкой колонок (вместо полуобратной).

Рис. 60. Полупрямая продувка колонок:

а) – газовая схема; б) – функциональная схема.
Колонки К1, К2 и вид хроматограммы аналогичны, приведенным на рис.
59.

4. Схемы с отключением колонок.

 82

Рис. 61. Схема с отключением колонки:

а) – газовая схема; К1 – колонка с Полисорб – 1; К2 – колонка с молеку-
лярными ситами СаА;
б) – функциональная схема; в дополнение к п.п.2 и3 обеспечивается воз-
можность регистрации суммы тяжелых фракций с колонки K 1 обратной про-
дувкой (Вкл. 2);
в) – хроматограмма.

5. Циркуляционные схемы разделения.

Рис. 62. Циркуляционная схема:

а) – газовая схема; К1 – разделительная колонка; К2 – вспомогательная
колонка;
б) – функциональная схема;
в) – хроматограммы разделения компонентов А и Б.

По сигналу детектора после выхода хроматографической полосы включа-

ется (2), а через определенное время τ, когда полоса полностью переходит из К2
в К1 снова переключается вкл(1) и цикл повторяется. Происходит многократ-
ное увеличение длины колонки К1 до полного разделения. Метод применяется
для разделения близких по свойствам веществ.

6. Газовые схемы с двумя и более детекторами

 83

Рис. 63. Схемы с двумя и более детекторами:

а) – газовая схема с тремя детекторами;
б) – газовая схема с деструктивным ПИД и недеструктивным ДТП детек-
торами.

Основы качественного анализа

Задачи качественного анализа можно разделить на три группы:

1. Анализ смеси, состав которой известен полностью;
2. Анализ смеси известного происхождения;
3. Анализ смеси неизвестного происхождения.
В первом случае достаточно с помощью справочных данных по удержива-
нию или путем анализа эталонных соединений подобрать сорбент, разделяю-
щий все компоненты смеси.
Во втором случае задача может решаться на уровне индивидуальной
идентификации на основе известных корреляций удерживания от физико-
химических свойств и структуры сорбатов.
В третьем случае необходимо проводить групповую идентификацию, а
затем и индивидуальную.
В последнее время первые два случая качественного анализа объединяют
понятием подтверждающий анализ, а третий случай называют разведочный
анализ.
Для групповой идентификации применяют следующие приемы:
1. Реакционная газовая хроматография – совместное использование хи-
мических и хроматографических методов исследования в единой хроматогра-
фической системе. Типичные химические реакции, используемые в реакцион-
ной газовой хроматографии: гидрирование и дегидрирование, гидрогенолиз, де-
гидротация и дегидрогалогенирование, этерификация и декарбоксилирование,
обмен функциональными группами между сорбатом и реагентом и другие ре-
акции, приводящие к образованию соединений, отличающихся по удержива-
нию. Применяют также характерные реакции на выходе колонки, изменяющие
окраску или поглощающие соединения различных классов.

Сорбаты Реагент Окраска

Бихромат калия + азотная ки-
Спирты Синяя
слота
 84
Бордово-красный
Кетоны Нитропруссид натрия
осадок
Амины ——“–”—— Красная или синяя
н-Алканы Удаление пика из
Молекулярные сита; карбамид
н-Алкены хроматограммы
Серосодержащие Удаление пика из
Хлорид ртути
соединения хроматограммы

2. Селективное детектирование – применение двух и более различных де-

текторов.
3. Фазовое равновесие анализируемой пробы в системе ограниченно
смешивающихся растворителей, например, гексан – ацетонитрил, с последую-
щим хроматографированием каждой из фаз на одной колонке. Тогда
lg K = aI + b , где K – константа распределения сорбата в двух фазах; I – индекс
удерживания; а – постоянный коэффициент для исследуемой системы (тангенс
угла наклона зависимости lgK от I); b – характеризует поведение различных
групп соединений.
4. Информация о зависимости I от ТС (ΔI при изменении ТС на 10-20ºС).
5. Хроматографический анализ на колонках с НФ различной полярности
и получение многоэлементного спектра удерживания вида (∆I i ,1 )N = I i − I1 , где
I1 – индекс удерживания сорбата, принадлежащего к гомологическому ряду или
группе соединений N, неполярной НФ; Ii – индекс удерживания этого сорбата
полярной НФ (i=2, 3, 4, …, i – целые числа по числу используемых НФ); (∆I i ,1 )N
– разность индексов, согласно правилу Ковача величина практически постоян-
ная для гомологического ряда веществ (N) с определенной функциональной
группой.
Для индивидуальной идентификации применяют следующие приемы:
1. Прямой метод, заключающийся в выделении хроматографических зон
сорбатов и последующей их идентификацией независимыми методами, в том
числе с использованием масс-спектрометрии и других методов.
2. Сравнение величин удерживания анализируемых компонентов с удер-
живанием компонентов эталонных смесей или со справочными данными, ЭВМ-
банками и т.д.
3. Использование корреляционных зависимостей, связывающих величины
удерживания сорбатов с их физико-химическими характеристиками, структу-
рой и условиями эксперимента. I=f(nC, М, Ткип и т.д.).
4. Метод добавки индивидуальных веществ сравнения. Увеличение высо-
ты соответствующего пика (без его расширения, т.е. wh=const) по сравнению с
высотой этого пика до введения эталона свидетельствует о присутствии в ана-
лизируемой смеси искомого вещества.
На кафедре предложена методика идентификации с использованием ком-
плексной хроматографической информации, обеспечивающая возможность по-
лучения многоэлементного хроматографического спектра, включающего спек-
тры удерживания и величины чувствительности двух и более детекторов.
 85
Многоэлементный спектр – это совокупность как аналитических сигна-
лов, так и физико-химических свойств, характеризующих поведение отдельных
сорбатов или группы сорбатов одного гомологического ряда в хроматографиче-
ской системе (сорбат – неподвижная фаза – детекторы), связанное с различны-
ми видами межмолекулярных взаимодействий и физико-химическими законо-
мерностями при формировании сигнала детекторов.
Следует заметить, что для удобства пользования все определяемые хро-
матографические характеристики выражают в одних и тех же единицах измере-
ния – в индексах, по аналогии с индексом удерживания.
Так чувствительность детектора и другие свойства анализируемых ве-
ществ в виде индексов определяют по следующим уравнениям:
1 ki − 1 k z Mi − Mz Tb − Tbz
JЧi( j ) = + z ; J Mi = + z ; J Ti = i + z,
1 k z +1 − 1 k z M z +1 − M z Tbz +1 − Tbz
где JЧ, JM, JT – соответственно индекс чувствительности детектора (j), индекс
молекулярной массы, индекс температуры кипения. При этом 1 k z +1 > 1 k i > 1 k z ,
M z +1 > M i > M z , Tbz +1 > Tbi > Tbz .
JЧ, равно как и JM и JT – это число углеродных атомов в молекуле такого гипо-
тетического или реального алкана, который имел бы такую же ОМЧ (1 k ), M
или Tb как и исследуемое i-e вещество.
Идентификацию проводят используя следующие закономерности:
1. Экспериментально определяют относительный коэффициент чувстви-
тельности двух детекторов (№1 – ДТП, №2 – ПИД)
K i(1) Qср ⋅ Qi
(1) (2)
K ср(1)
K отнi = ( 2) = ( 2)
(1 / 2 )
⋅ , (1)
Ki Qср ⋅ Qi(1) K ср( 2 )
где K i , K ср – коэффициент чувствительности соответствующего детектора для
i-го компонента и вещества сравнения относительно стандартного вещества
(бутана- для газов или бензола – для жидких сорбатов).
Если в качестве вещества сравнения используется бензол или бутан, то
(1) ( 2)
K ср K ср в уравнении (1) равен 1 и K отн (1 / 2 )
i
зависит только от физико-
химических свойств и структуры анализируемых веществ (компонент i и веще-
ство сравнения), ответственных за формирование согнала детектора №1 и №2.
2. Экспериментально показано, что для углеводородов K отн (1 / 2 )
i
≥ 0,75 , а для
неуглеводородов K отн (1 / 2 )
i
≤ 0,75 .
3. Известно, что для одного гомологического ряда, например, н-алканов,
имеют место соотношения:
1 k = a1 + b1nC ; M = a2 + b2 nC ; Tb = a3 + b3 nC
Заменяя nC (число углеродных атомов в молекуле н-алкана) на соответствую-
щий индекс JЧ, JM или JT получим зависимости, справедливые для всех веществ,
принадлежащих к различным классам органических соединений:
1 k i = a1(1) + b1(1) J Ч(1i) ; 1 k i = a1( 2) + b1( 2 ) J Ч( 2i ) ; M i = a2 + b2 J M i ; Tbi = a3 + b3 J Ti
(1) (2)
 86
( 2) (1)
4. Поделив 1 k i на 1 k , получим:
i

a1( 2 ) + b1( 2 ) J Ч( 2i )
K (1 / 2 )( расч )
отнi = (2)
a1(1) + b1(1) J Ч(1i)
Из двух хроматограмм определяют K отн (1 / 2 )
i
по уравнению (1) для неиден-
тифицированных компонентов, а по уравнению (2) методом подбора определя-
ют J Ч(1i) и J Ч( 2i ) , используя дополнительную информацию о линейном индексе
удерживания сорбата неполярной НФ и закономерности чувствительности де-
тектора ДТП для различных веществ. Таким образом, задача идентификации
сводится к поиску приемлемых алгоритмов определения JЧ, JM и JT по результа-
там хроматографирования из одного цикла анализа.
Проблемы получения многоэлементных спектров удерживания сопряже-
ны с необходимостью однозначного и достоверного определения соответствия
пиков на хроматограмме для колонок с полярной и неполярной НФ, т.к. поря-
док элюирования компонентов смеси на колонках может меняться.
Эту проблему решают:
1. Путем сравнения результатов хроматографирования на колонках с по-
следовательно изменяющейся полярностью.

Рис. 64. Хроматограммы разделения на колонках с последовательно из-

меняющейся полярностью:
а) – неподвижная фаза 100% SE-30;
б) – неподвижная фаза 50% SE-30 + 50% ПЭГ-20 М;
в) – неподвижная фаза 100% ПЭГ-20 М;
1 – гептан; 2 – толуол; 3 –нонан; 4 – гексанол.

2. Путем использования многоколоночных схем с возможностью пере-

ключения колонок.
 87

Рис. 65. Схема с переключением колонок:

К1 – неподвижная фаза SE-30;
К2 – неподвижная фаза ПЭГ-20 М;
Д1, Д2 – детекторы; 1, 2 – переключатель газовых потоков.

3. С помощью метода градиентной барохроматографии на составных ко-

лонках с полярной и неполярной НФ, предложенной М.С. Вигдергаузом (1976)
и развиваемой на кафедре под руководством проф. А.В Булановой.

Рис. 66. Газовая схема метода барохроматографии:

К1 – колонка с полярной фазой; К2 – колонка с неполярной фазой.

С помощью дросселя Др изменяют вклад в общее удерживание каждой

колонки за счет изменения FP ,T . При этом можно проследить изменение вре-
C

мени выхода пика при переходе от неполярной к полярной НФ при нескольких

циклах анализа без смены и переключения колонок.
Возможность получения многоэлементных хроматографических спектров
из одного цикла анализа значительно повышает точность и достоверность
идентификации в подтверждающем и разведочном анализе, так как при хрома-
тографировании неизвестных веществ на колонке с неполярной неподвижной
фазой с использованием информации двух детекторов ДТП и ПИД представля-
ется возможным получить следующий спектр: I, J ч(1) , J ч( 2 ) , K отн
(1 / 2)
, J M , J T , M,
Tв .

Основы количественного анализа

Задачи количественного анализа условно можно разделить на три группы:

1. Определение одного или небольшого числа компонентов смеси.
2. Определение в смеси каждого компонента (допускается суммарное со-
держание неразделенных компонентов).
 88
3. Определение группового состава смеси, например, суммарное со-
держание н-алканов, циклоалканов, ароматических углеводородов и т.д. Сюда
же относится задача определения одного или нескольких индивидуальных ком-
понентов и общего содержания отдельных веществ в пробе.
Первая группа задач обычно решается для промышленных хроматогра-
фов и систем контроля и регулирования технологических процессов, когда оп-
ределяются «ключевые» компоненты пробы, характеризующие технологиче-
ский процесс. Кроме того, первая группа задач широко применяется при анали-
зе примесей. Вторая и третья группы задач возникают при различных лабора-
торных анализах.
Для количественного анализа используют следующие хроматографиче-
ские сигналы: h – высота пика (перпендикуляр, опущенный из максимума пика
на продолжение нулевой линии); Q – площадь пика, ограниченная его контуром
и продолжением нулевой линии (при ручном расчете часто используют метод
треугольника Q = h ⋅ wh ); wh – ширина пика на середине высоты; t R ⋅ h или l R ⋅ h
– произведение расстояния удерживания пика на его высоту; h / 0,5wb – наклон
касательной к контуру пика (фронт или тыл) в точке перегиба, который харак-
теризует собой скорость измерения сигнала (или первую производную сигнала
по времени).

Рис. 67. Хроматограмма

Хроматографические сигналы условно разделяют на коррелируемые и

представительные. Хроматограф можно представить из двух основных узлов:
колонка и детектор.

Рис. 68. Блок-схема хроматографа.

 89
Тогда, входной сигнал Wi равен Wi = K K ⋅ K Д ⋅ y i , где yi – выходной сиг-
сигнал.
Представительный сигнал – это идеализированный сигнал, когда
Wi = K Д ⋅ y i (больше всех этим требованиям удовлетворяет Q), т.е. выходной
сигнал связан только с откликом детектора; KД – коэффициент чувствительно-
сти детектора; Wi – количество вещества. Коррелируемый сигнал
Wi = K K ⋅ K Д ⋅ y i помимо отклика детектора зависит также от условий хромато-
графирования (колоночный фактор K K = f (TC , P , FP ,TC , H , L , d C , природа НФ
и др.); yi = h, h ⋅ t R , Q и h / 0,5wb .
Для получения количественных результатов хроматографические сигна-
лы интерпретируют различными методами.

1. Метод абсолютной градуировки

На вход хроматографа подается не менее 5 смесей с разными концентра-

циями i-го компонента или анализируются не менее пяти доз фиксированного
объема, одной смеси известной концентрации i-го компонента.
Уравнение градуировки, полученное методом наименьших квадратов,
имеет вид:
y i = a i + bi Ci ,
где Сi – концентрация i-го компонента на входе хроматографа; ai и bi – коэффи-
циенты корреляционного уравнения.
a −0
При малых значениях ai, когда i ≤ t ( P = 0,95; f = n − 1) , т.е. ai незна-
Sa
чимо отличается от нуля по t-критерию Стьюдента, уравнение градуировки вы-
рождается в прямолинейную зависимость:
y i = bi C i ,
где bi – угловой коэффициент, равный тангенсу угла наклона.
Получив уравнение градуировочной характеристики хроматографа, опре-
деляют Ci рабочих смесей по уравнению регрессии:
y
Ci = i ,
bi
где 1 bi = K i/ – абсолютный коэффициент чувствительности к исследуемому i-
му компоненту.
В методе внешнего старта используют стандартный образец состава или
градуировочную смесь с нормированным содержанием i-го компонента, кото-
рую анализируют на хроматографе и сравнивают результаты анализа i-го ком-
понента в исследуемой пробе.
y
C i = i ⋅ C i ( st ) ,
y ( st )
 90
где y i и y i ( st ) = (hi , Qi , h ⋅ t R , h 0,5wb ) .
/

Метод абсолютной градуировки широко используется при технологиче-

ском контроле, когда число определяемых компонентов сравнительно невели-
ко, а также при определении примесей и микропримесей.
Точность метода зависит от постоянства параметров режима хроматогра-
фа, тщательности приготовления градуировочной смеси и воспроизводимости
размера пробы. Применяют для решения задач I группы.

2. Метод внутреннего стандарта

Предложен в 1954 г. Основан на введении в исследуемую смесь фиксиро-

ванного количества стандартного вещества сравнения, относительно которого
экспериментально определены коэффициенты чувствительности к исследуе-
мым компонентам анализируемой смеси.
K/
K i = /i
K ( st )
Концентрацию i-го компонента определяют по уравнению при K (/st ) = 1 .
yi
Ci = K i rst ,
y st
Wst
где rst = – количество стандартного вещества, отнесенное к количеству
Wпр
пробы без этого вещества.
В качестве yi и y st чаще всего используют площадь пика, но могут при-
меняться другие сигналы (h; h∙tR; h / 0,5 ⋅ wb ).
Метод внутреннего стандарта позволяет проводить расчет содержания
отдельных компонентов пробы даже при отсутствии на хроматограмме пиков
других компонентов. Метод не требует постоянства размера пробы, так как на
вход хроматографа поступает относительная величина Ci Cst в пробе, а на вы-
ходе измеряется относительный сигнал yi y st и в случае, если yi = Q , то K i
мало зависит от условий разделения.
Трудность реализации метода заключается в выборе и точной дозировке
стандартного вещества, физико-химические свойства которого должны быть
близки к свойствам анализируемых компонентов смеси. Наибольшая точность
будет при ∆t R = (t R (i ) − t R ( st ) ) → 0 , ∆K = ( K i − K st ) → 0 и ∆C = (Ci − C st ) → 0 .
При этом K i K st → 1,0 .

3. Метод внутренней нормализации

Основан на определении соотношений между концентрациями компонен-

тов смеси. Необходимым условием является регистрация всех компонентов на
хроматограмме. Расчет состоит в приведении к 1,0 (или 100%) суммы хромато-
 91
графических сигналов с учетом экспериментально определенных коэффици-
ентов чувствительности детектора к исследуемым компонентам относительно
стандартного вещества (бензола или бутана).
Ky
Ci = N i i ,
∑ K i yi
i
где N – число пиков на хроматограмме; yi – площадь пика.
Преимущества метода в том, что отсутствует необходимость вводить в
пробу стандартное вещество.

4. Метод двойного внутреннего стандарта

Разработан М.С. Вигдергаузом (1986). В отличие от метода внутреннего

стандарта, применяют два и более стандартных веществ, элюирующихся до и
после i-го компонента.

Рис. 69. Иллюстрация к методу двойного внутреннего стандарта.

Концентрация Ci определяется, как среднее геометрическое двух значе-

ний (интерполяция относительно стандартов 1 и 2):
 K y  K i yi 
Ci = Ci ( st1) ⋅ Ci ( st 2 ) =  i i rst1  rst 2  или
 K st 1 y st 1  K st 2 y st 2 
Ci Ki yi
= ⋅ (без локализации пика i на хроматограмме)
rst1rst 2 K st1 K st 2 y st 1 y st 2
Если свойства стандартов близки к свойствам исследуемых компонентов,
Ki
то ≈ 1 . Тогда расчет может быть проведен с использованием как
K st1 K st 2
представительных, так и коррелируемых хроматографических сигналов. При
этом KK ≈ 1 и Ki ≈ KД. Коррелируемые сигналы приобретают свойства предста-
вительного сигнала. Применение метода двойного внутреннего стандарта обес-
печивает повышение точности измерения концентраций за счет взаимной ком-
пенсации случайных и систематических составляющих погрешности измерения
при одновременном хроматографировании исследуемых и стандартных ве-
ществ.
 92
С локализацией пика на хроматограмме по удерживанию:
 r r 
Ci = yi K i  st 2 δJ + (1 − δJ ) st 1  ,
 K st 2 J st 2 K st1 J st1 
J − J st1
где δJ = i – вклад st1 и st2 в количественную оценку i в зависимости от
J st 2 − J st1
его удерживания (локализации) между st1 и st2.

Рис. 70. Локализация пика по удерживанию.

При δJ = 0,5 уравнение становится подобным для двойного внутреннего

стандарта без локализации. Если δJ = 0 , то Ci вычисляют только по st1. Если
δJ = 1 , то Ci вычисляют по st2. Если 0 < δJ < 1 , то учитывается вклад st1 и st2 в
результат измерения Ci.

5. Метод добавки

Используется, если отсутствует возможность выбора подходящего стан-

дартного вещества, который регистрировался бы в виде отдельного пика. При
этом анализ проводится дважды: без добавки и с добавкой стандартных ве-
ществ, которые входят в состав исследуемой смеси. Расчет производят из двух
хроматограмм:
1. Метод добавки к определяемому компоненту.
yi/ rД
Ci = //
y( i + Д ) ⋅ y K/
//
− yi/
yK
2. Метод добавки к неопределяемому компоненту (n).
yi/ K i rД
Ci =
 y(//n + Д ) ⋅ y K/ 
K n  //
− y /
n

 y K 
y – чаще всего Q, но можно использовать и другие сигналы (h, h∙lR); yK – сигнал
«пересчетного» вещества, присутствующего в смеси; один штрих – хромато-
грамма смеси без добавки; два штриха – хроматограмма с добавкой вещества,
присутствующего в смеси.
3. Метод двойной добавки к неопределяемым компонентам (1 и 2).
 93
rД 1 ⋅ rД 2
Ci = Ci (1) ⋅ Ci ( 2 ) = K i yi/ ,
 y1//+ Д 1 ⋅ y k/  y //
⋅ y /

K1 K 2  − y1/  2 + Д 2// m − y 2/ 
 yk//  ym 
  
где y k и y m – сигналы пересчетных веществ, присутствующих в анализируе-
мой смеси (служат для приведения сигналов y / и y // к единому масштабу из-
мерения).
Минимальная погрешность метода добавки будет при
Δt R = (t R ( i ) − t R ( j ) ) → 0 ; Δt R ( j ) = (t R (1) , tR ( 2 ) , t R ( k ) , t R ( m ) ) ; t R ( 2 ) > t R ( i ) > t R (1) ;
ΔK = ( K i − K1 ) → 0 ; ΔK = ( K i − K 2 ) → 0 ; K1 > K i > K 2 .

6. Метод с использованием асинхронного и последовательного ввода

пробы и стандартов, а также системы "метка-стандарт"

Метод включает возможность анализа пробы исследуемых компонентов с

одновременным анализом смеси стандартных веществ сравнения. При этом
рассматриваются два подхода:
- хроматографирование смеси в пределах времени практически одного
анализа при так называемом асинхронным вводе проб при Vпр=const и все пики
разделяются на хроматограмме.

Рис. 71. Хроматограмма асинхронного ввода пробы и стандарта. За стан-

дарт принят компонент №2 пробы.

- последовательное хроматографирование сначала пробы, затем смеси

стандартов из двух циклов анализа. Расчет проводят методом внутреннего или
двойного внутреннего стандарта, используя одну или две хроматограммы. В
случае если Vпр≠const (ввод пробы шприцем) применяют систему «метка-стандарт». То-
гда добавляют фиксированное количество вещества метки как в пробу, так и в
смесь стандарта
K i yi/ y M// rM/ // /
/ y M rM Cst 1Cst 2
Ci = //
C st / // или Ci = K i y i / // ,
K st y st y M rM y M rM K st1 y st// 1 K st 2 y st// 2
где y M/ , rM/ – хроматографический сигнал метки на хроматограмме "проба +
метка" и количество метки, отнесенное к количеству пробы без метки;
y M// , rM// – хроматографический сигнал метки на хроматограмме "смесь сетка
стандартов + метка".
 94
Если смесь стандартов содержит один компонент, то Сst = 1,0. y – чаще
всего Q, может использоваться также h и h∙lR.

7. Количественная интерпретация хроматограмм без предваритель-

ного качественного анализа

1. Метод контролируемой внутренней нормализации.

Cx = 1 −
∑ KiQi r
st
K st Qst
В смесь добавляют стандарт. Условие – все пики регистрируются.
Если Cx=0, то в пробе отсутствуют нерегистрируемые компоненты.
2. Для близких по физико-химическим свойствам веществ допускают,
что Ki для них одинаковы, например, для ПИД при анализе углеводо-
Q
родов от z≥11 KB≈1,0. Тогда Ci = n i .
∑ Qi
3. Если в смесь вводят стандарты, для которых выполняется условие
Ki
≈ 1 (оно выполняется для близких по свойствам веществ), то
K st1 K st 2
rst1rst 2
Ci = y i ; y=Q, h, h∙lR.
y st1 y st 2
4. Для количественного определения концентраций компонентов слож-
ной смеси веществ, принадлежащих к различным классам органиче-
ских соединений, т.е. сильно различающихся по свойствам, использу-
ют комплексную хроматографическую информацию, включающую
характеристики чувствительности двух или более детекторов, напри-
мер, ДТП и ПИД. В результате хроматографирования на ДТП (1) и
ПИД (2) определяют
( 2) (1 )
K i(1)  yi   y st1 y st 2  K st(11) K st(12)
− K отнi = ( 2 ) =    
 ⋅  ⋅ K (2) K (2)
(1 / 2 )

Ki  y st 1 y st 2   y i  st1 st 2

Используя результаты градуировки по н-алканам:

(1 ) (2)
 1   1 
  = a1 + b J и   = a 2 + b2 J Ч( 2i ) , получим
( 1)
1 Чi
 Ki   Ki 
(1 / 2 ) b1 (1 / 2 ) a1 a2
J Ч( 2i ) = K отн J ( 1)
Ч + K отн − .
i
b2 i i
b2 b2
Данное уравнение содержит две неизвестные величины J Ч(1) и J Ч(2) . По-
этому для его решения используют метод подбора, включающий дополнитель-
ную информацию об удерживании сорбатов колонкой с неполярной НФ и из-
вестные закономерности чувствительности ДТП и ПИД.
 95
В зависимости от выбора коэффициента чувствительности детектора
концентрацию можно определять в массовых, мольных или объемных долях
(или процентах). Соотношения между массовым KB, мольным KM и объемным
Kоб коэффициентами чувствительности имеют вид:
KB M K ρ K M ρi M st
= i ; B = i ; = ,
K M M st K об ρst K об ρst M 1
где Мi, Mst и ρi, ρst – молекулярные массы и плотности i-го компонента и стан-
дарта соответственно. Очевидно, что если пары веществ по свойствам прибли-
жаются к свойствам идеальных газов, то KM=Kоб, т.к. ρi ρst = M i M st .

Основные метрологические характеристики хроматографического анализа

Закон РФ об обеспечении единства измерений относит ряд важных облас-

тей химического анализа (здравоохранение, охрана окружающей среды, обес-
печение безопасности труда, обороны государства, испытание и контроль каче-
ства продукции на соответствие ГОСТ, сертификация продукции и др.) к сфере
Государственного контроля и надзора.
Хроматографический анализ с позиций метрологии (наука об измерени-
ях) есть измерение химического состава вещества, причем это измерение явля-
ется косвенным, т.к. определяется не число частиц того или иного вида, а неко-
торые физические параметры, пропорциональные массе.
Хроматографы, выпускаемые промышленностью, не являются средством
измерения. Измерительным прибором хроматограф становится только тогда,
когда используется конкретная методика выполнения хроматографических из-
мерений МВХИ, в которой нормируется погрешность измерения хроматогра-
фических сигналов и анализируемых компонентов пробы. МВХИ в сфере Гос-
надзора подлежат обязательной метрологической аттестации.
В зависимости от происхождения все погрешности хроматографического
анализа можно разделить на случайные, систематические и грубые погрешно-
сти.
В хроматографии имеет место большая номенклатура неисключенных
систематических погрешностей, которые нельзя рассчитать до анализа и учесть
соответствующими поправками. Например, Θ нл – погрешность от нелинейности
сигнала; Θ ан – аналитические погрешности (неполнота разделения, влияние ре-
акционных и сорбционных факторов); Θ нр – погрешности, связанные с наличи-
ем нерегистрируемых на хроматограмме пиков.
При статистической обработке результатов хроматографического анализа
вводят два допущения:
1. Предполагают, что результаты не противоречат гипотезе нормального
распределения и взаимно независимы;
2. Методы обработки прямых измерений распространяются на косвенные
хроматографические измерения.
Суммарная погрешность нормируется пределами отдельных составляю-
щих измерения и при Р=0,95:
 96
k
Θ = 1,1 ∑Θ 2
i ,
i

где Θ i – i-я составляющая систематической погрешности; k – число состав-

ляющих погрешности.
В хроматографическом анализе наиболее значимы неисключенные систе-
матические погрешности градуировки, включающие погрешности измерения
сигнала, взвешивания при пробоподготовке, чистоты реактивов, поддержания
заданных параметров процесса хроматографирования.
Для оценки случайной погрешности используют аппарат математической
статистики и теорию вероятностей:
1. Отклонение i-го единичного измерения от среднего результата изме-
рения xi − xi ;
2. СКО i-го единичного определения xi, характеризующего разброс дан-
ных относительно среднего результата

∑ (x )
n
2
i − xi
Sx = i
,
n −1
где (n-1)=f – число степеней свободы; n – число измерений.
При n → ∞ (генеральная совокупность) Sx стремится к стандартному от-
клонению σ, т.е. σ = lim S x ( n→∞ ) ;
3. СКО среднего арифметического результата измерения

∑ (x )
n
2
i − xi
Sx = i

n (n − 1)
( )
δ = xi − xi , Sx и S x – абсолютные величины оценки случайной погрешности,
имеющие ту же размерность, что и х.
x − xi
δi = i – относительное отклонение от среднего.
xi
Sx
v = i – ОСКО единичного измерения или коэффициент вариации.
xi
Sx
S ri = i – ОСКО среднего арифметического результата измерения.
xi
Если Θ S r < 0,8 , то неисключенными систематическими погрешностями
можно пренебречь. Тогда общая погрешность измерения Δ = S r ⋅ t ( P, f ) при
Р=0,95 и f=n-1.
Если Θ S r > 8,0 , то случайными погрешностями можно пренебречь и
∆ = Θ при Р=0,95.
Если 0,8 < Θ S r < 8,0 , что чаще всего имеет место в хроматографии, об-
щая погрешность находится путем построения композиции распределения слу-
чайных и неисключенных систематических погрешностей по уравнению
 97
k
Δ=m ∑Θ 2
i 3 + S r2 ,
i

t ( P, f ) S r + Θ
где m = k
– коэффициент, зависящий от соотношения случайной и
Sr + ∑Θi
2
i 3

систематической погрешностей.
В пределе при n ≥ 20 m ≈ 2,0 . Результат измерения представляют в виде
xi ± Δ по ГОСТ 8.207-76. Прямые измерения с многократными наблюдениями.
МВХИ учитывают:
1. Хроматограф, тип, детектор, термостат, точность поддержания за-
данной температуры, блок подготовки газов, точность поддержания
Р и FC, регистратор и другие блоки;
2. Газ-носитель;
3. Колонки;
4. Параметры процесса хроматографирования (ТС, Тисп, Тдет, FP ,T , Рi, ток
C

детектора для ДТП и т.д.);

5. Секундомер, линейка, измерительная лупа (при ручной обработке
хроматограмм);
6. Весы, класс точности, барометр для Ра, термометр для То;
7. Поверочные смеси или СО с нормированной погрешностью (паспорт
или аттестат) для градуировки;
8. Методика приготовления сорбента и заполнение колонки;
9. Методика интерпретации хроматограмм (количественная и качест-
венная);
10. Оценка общей погрешности измерения по каждому компоненту
Сi±ΔCi;
11. Оперативный и периодический контроль правильности МВХИ.
Общая погрешность измерения определяется на стадии метрологической
аттестации МВХИ. Метрологическая аттестация – это совокупность условий и
операций выполнения измерений, направленных на определение точности мет-
рологических характеристик хроматографического анализа, выполненного в
соответствии данной МВХИ.