Вы находитесь на странице: 1из 12

1

ЛЕКЦИИ 9-10. Буферные системы.

Буферные системы – совокупность нескольких веществ в растворе,


сообщающих ему буферные свойства, т.е. способность противостоять
изменению активной реакции среды (pH) при разбавлении,
концентрировании раствора или при добавлении к нему небольших
количеств сильной кислоты или щёлочи.
Буферные системы широко распространены в природе: они находятся в
водах мирового океана, почвенных водах и особенно в живых организмах,
где выступают в качестве регуляторов, поддерживающих активную реакцию
среды на определённых условиях, необходимых для нормального протекания
жизненных процессов. Буферные системы обеспечивают состояние
кислотно-основного равновесия, соответствующего норме –
протолитический гомеостаз. Смещение протолитического равновесия в
кислую область вызывает ацидоз, в щелочную – алкалоз. Постоянство pH
биологических жидкостей, тканей и органов обусловлено наличием
нескольких буферных систем, входящих в состав этих биообъектов.
Буферные системы проявляют свои буферные свойства в некотором
диапазоне значений pH (≈2 единицы) – называемом зона буферного действия.

Состав буферных систем.


Буферные системы подразделяются на два основных типа.
1. Слабая кислота и её анион, т.е. комбинация слабой кислоты и её
соли с катионом сильного основания.
2. Слабое основание и его катион. Например, аммонийная буферная
система NH3/NH4+ в растворе NH3 и NH4Cl.
Особый “подкласс” буферных систем представляют буферные
системы, образованные из ионов и молекул амфолитов – аминокислотные и
белковые буферные системы. Некоторые примеры буферных систем
приведены в таблице 1.
2

Таблица 1.
I. Слабая кислота и её анион HA/A-
Название Состав Протолитическое Зона
равновесие буферного
действия
Ацетатная CH 3 COOH + CH 3 COONa CH 3 COOH CH 3 COO + H
- + pH=3,8-5,8
Гидро- H 2 CO 3 + NaHCO 3 H 2 CO 3
+
H + HCO 3
- pH=5,4-7,4
карбонатная
Фосфатная NaH 2 PO 4 + Na 2 HPO 4 H 2 PO 4
- +
H + H PO 4
2- рН=6,2-8,2
Гемогло- H Hb + K H b HHb
-
Hb + H
+ рН=7,2-9,2
биновая
Оксигемо- HHbO 2 + KHbO 2 HHbO 2 HHbO 2 + H
- + рН=6,0-8,0
глобиновая
II. Слабое основание и его катион B/BH+
Аммонийная .
NH 3 H 2 O + NH 4 Cl NH3 + H
+
NH4
+ pH=8,2-10,2

pH буферных систем.
Рассмотрим в качестве примера систем I типа ацетатную буферную
систему.
В водных растворах компоненты этой системы подвергаются
электролитической диссоциации.
C H 3C O O H C H 3C O O - + H +

C H 3C O O N a C H 3C O O - + N a +

[H + ][C H 3 C O O - ]
K a (C H 3 C O O H ) =
[C H 3 C O O H ]

K a (C H 3 C O O H )[C H 3 C O O H ]
[H + ] =
[C H 3 C O O - ]

Т.к. степень диссоциации слабой уксусной кислоты значительно понижается


в присутствии аниона CH3COO-, а соль как сильный электролит
диссоциирует практически нацело, [CH3COOH] и [CH3COO-] можно заменить
3
практически им равными и легко определяемыми величинами C(CH3COOH)
и C(CH3COONa).

+ K a .C (C H 3 C O O H ) C (ки сл)
Тогда [H ] =
C (C H 3 C O O N a)
, т.е. [H + ] = K a и, следовательно,
C (соль)

C (C H 3 C O O N a)
pH = -lg[H + ] = pK a (C H 3 C O O H ) + lg
C (C H 3 C O O H )
.
А в общем виде для систем первого типа HA/A- величина pH определяется по
уравнениям 1 или 1а.
C (A - )
pH = p K a + lg (1 )
C (H A )

C (сол ь)
pH = p K a + lg (1а )
C (ки сл )

Для буферных систем второго типа B/BH+ гидроксильный и


водородный показатели рассчитываются по уравнениям 2, 2а, 3, 3а.
C (осн )
[O H - ] = K b
C (сол ь)

C (B H + )
pO H = pK b + lg (2)
C (B )
C (сол ь)
pO H = pK b + lg (2a)
C (осн )
C (B )
pH = 14 - pK b + lg (3)
C (B H + )
C (осн )
pH = 14 - pK b + lg (3a)
C (соль)

Уравнения 1-3 объединены именем авторов – уравнением Гендерсона –


Гассельбаха. (Henderson, Lawrence Joseph, 1848-1942, биохимик, США.
Hasselbalch, Karl Albert, 1874-1962, биохимик, Дания).
Из уравнений 1-3 следует вывод – величина pH буферных растворов
определяется природой кислоты или основания, входящих в состав буферной
системы (pKa, pKb) и соотношением концентраций или количеств
компонентов. Это позволяет готовить буферные растворы с заданным
4
значением pH смешиванием растворов кислоты и соли (основания и соли).
pH этих растворов вычисляют по уравнениям 4 и 5.

C (cол ь) .V (соль)
pH = pK a + lg (4)
C (ки сл) .V (ки сл )

C (осн ) .V (осн )
pH = 14 - pK b + lg (5)
C (соль) .V (сол ь)

где C(соль), С(кисл), C(осн), V(соль), V(кисл), V(осн) – соответствующие


характеристики исходных растворов.
Если концентрации компонентов буферных систем больше 0.1, то в
уравнениях Гендерсона-Гассельбаха необходимо учитывать коэффициенты
активности.

Механизм действия буферных систем.


Системы первого типа можно рассмотреть на примере ацетатной
буферной системы
C H 3C O O H C H 3C O O - + H +

C H 3C O O N a C H 3C O O - + N a +

При добавлении сильной кислоты происходит связывание иона Н+ в


слабую кислоту
CH 3 COO - + H + CH 3 COOH,

а при добавлении щелочи происходит связывание иона ОН- в слабый


электролит Н2О
CH 3 COOH + OH - CH 3 COO - + H 2 O

Таким образом, в указанных процессах донором протона является


кислота, акцептором – ацетат-ион. И в том, и в другом случаях
первоначальное значение рН меняется незначительно, хотя сдвиг в область
более низких значений рН – при добавлении кислоты или в область более
5
высоких значений – при добавлении щелочи имеет место, т.к. нарушается
C (соль) C (соль)
первоначальное соотношение и (см. уравнения 1-3).
C (осн ) C (ки сл)

Механизм буферного действия систем второго типа можно проследить на


примере аммонийной буферной системы

N H 3 .H 2 O N H 4+ + O H -

N H 4C l N H 4+ + C l-

При действии кислоты:


NH 3 .H 2 O + H + NH 4 + + H 2 O;

при действии щёлочи:


NH 4 + + OH - NH 3 .H 2 O

Донор протонов – ион NH4+ (соль NH4Cl), акцептор протонов – основание


NH3.H2O.
Анализируя вышеописанные процессы, делаем вывод: буферное
действие систем первого и второго типов осуществляется за счет связывания
вводимых ионов Н+ и ОН- в малодиссоциированные соединения в результате
реакций этих ионов с соответствующими компонентами буферных систем.
Особый интерес представляет механизм действия белковых буферных
систем. Белки в изоэлектрическом состоянии практически не проявляют
буферных свойств. Но если к белкам добавить некоторое количество кислоты
или щёлочи, они начинают проявлять буферное действие. Часть белка
переходит в форму «белок – кислота» или в форму «белок – основание». Эти
процессы можно представить схемой:
6

RCHCOO-
N H 3+

+OH- +H+

RCHCOO- RCHCOOH
+ H 2O
NH2 N H 3+

"Б елок - о сн ован и е" "Б елок - ки слота"

При действии кислоты реагирует «белок – основание»

RCHCOO- RCHCOO-
+
+ H
NH2 N H 3+
"бе лок - основан ие" соль "белка - о сн овани я"

При действии щелочи – «белок – кислота»


RCHCOOH RCHCOO-
- + H 2O
+ OH
N H 3+ N H 3+
"бе лок - ки слота" соль "бе лка - ки слоты "

Акцептор протонов – «белок – основание», донор – «белок – кислота».

Буферная ёмкость.
Способность буферных растворов противостоять изменению рН при
добавлении сильных кислот или щелочей определяется понятием буферная
ёмкость.
По предложению Ван – Слейка (Van Slyke D. 1883—1971 –
американский биохимик) буферная ёмкость измеряется количеством
эквивалентов кислоты или щёлочи (моль, ммоль), которое нужно добавить к
1 литру буферного раствора, чтобы изменить рН на единицу:
1 1
n( êèñë) n(
ùåë)
z z ìîëü
B  ; B  ,
êèñë ΔpH  V(ÁÐ) ùåë ΔpH  V(ÁÐ) ë
7
1 1
где n( кисл) и n( щел) – количества эквивалентов кислоты или щёлочи,
z z

добавленные к буферному раствору объёмом V(БР), а ∆рН – наблюдаемое


при этом изменение рН, т.е. | рН0 – рНк |.
Практически буферную ёмкость определяют титрованием точно
отмеренного объёма буферного раствора сильной кислотой (HCl) или
щелочью (KOH, NaOH) в присутствии кислотно – основных индикаторов.
Величина буферной ёмкости рассчитывается по формулам
1 1
С ( ки сл) . V (ки сл) С ( щ ел) . V (щ ел)
В кисл = z ; В щел = z
. .
V (Б Р) рН V (Б Р) рН

Буферная ёмкость определяется двумя факторами:


1. Концентрацией кислотно-основной пары – чем выше концентрация
кислотно-основной пары, тем выше буферная ёмкость.
2. Соотношением концентраций компонентов.

Вк
1.2

1 .0

0 .8

0 .6

0 .4

0 .2

1 3 4 5 6 7 pH
2

4 .7 6

На рис. 1 показан график зависимости буферной ёмкости от рН для


системы CH3COOH/CH3COO-. Наибольшей буферной ёмкостью обладает
раствор с рН=4.76, что соответствует отношению
С(CH3COO-)/С(CH3COOH) = 1 : 1. Наблюдаемое явление представляет собой
частный случай общей закономерности – наибольшей буферной ёмкостью
8
обладают растворы с соотношением концентраций или количеств
компонентов 1 : 1. При отклонении от этого соотношения буферная ёмкость
заметно снижается и практически падает до 0, если соотношение
С(соль)/С(кисл) или С(соль)/С(осн) станет меньше 0.1 или больше 10.
Таким образом, интервал значений рН, в котором буферная система
активно проявляет свои свойства, составляет приблизительно 2 единицы рН,
т.е. pH = рКа ± 1 – зона буферного действия, о чем говорилось ранее.

Буферные системы крови.


Плазма крови.
Нормальное значение рН крови 7.40 ± 0.05, т.е. а(Н+) ≈ 3.7 . 10-8 – 4 . 10-
8
моль/л. Постоянство этих величин обеспечивается одновременным
действием гидрокарбонатной, фосфатной, белковой и аминокислотной
буферных систем.
1. Гидрокарбонатная.
Особенность этой системы состоит в том, что один из компонентов
системы – H2CO3 образуется при взаимодействии CO2 с H2O.
CO 2 (р-р) + H 2 O H 2 CO 3

В свою очередь концентрация СО2 определяется равновесием


CO 2 (газ) CO 2 (р-р),

которое описывается законом Генри


C O 2 (р-р) = s . P (C O 2 )
м оль
s - кон стан та Г ен ри [ ]
л . кП а

Т. о. в крови устанавливается равновесие


CO 2 (р-р) + H 2 O H 2 CO 3 H + + HCO 3 -

В соответствии с уравнением 1 значение рН гидрокарбонатного буфера


в конечном счёте определяется концентрацией НСО3- и парциальным
давлением СО2:
9

C (H C O 3 - )
pH = pK a 1 + lg
s . P (C O 2 )

C (H C O 3 - )
pK a 1 = 6.1 = 10 1.3 = 20
C (H 2 C O 3 )

Очевидно, что ёмкость гидрокарбонатной системы по кислоте


значительно превышает этот показатель по щёлочи (таблица 2).
Между СО2 в альвеолах и гидрокарбонатным буфером в плазме крови
устанавливается равновесие:
2
1 + H 2O 3
А тм осф ера C O 2 (газ) C O 2 (р-р) H 2C O 3 H + + H C O 3-
- H 2O

При поступлении в кровь доноров протонов равновесие 3 смещается в


сторону Н2СО3. При этом концентрация Н2СО3 возрастает, а концентрация
НСО3- снижается. Это приводит к смещению равновесия 2 влево, в
результате чего равновесие 1 смещается в сторону образования
газообразного СО2 , что приводит к повышению давления СО2 в лёгких и
выведению его за счёт увеличения лёгочной вентиляции.
При поступлении акцепторов протонов равновесие смещается в
обратном направлении, что приводит к растворению в плазме крови
дополнительного количества СО2, содержащегося в лёгких.
В результате описанных процессов гидрокарбонатная буферная
система эффективно обеспечивает постоянство рН плазмы крови. Эта
система содержится также в эритроцитах и почечной ткани.
2. Фосфатная буферная система.
C (H P O 4 2- )
pH = pK a (H 2 P O 4 - ) + lg
C (H 2 P O 4 - )

C ( H P O 42- )
 4 :1
C ( H 2 P O 4 -)
10
Ёмкость данной системы по кислоте выше ёмкости по щелочи (таблица
2). Фосфатная буферная система менее мощная, чем гидрокарбонатная, что
обусловлено малым содержанием фосфатов в плазме крови.
Фосфатная система содержится также в тканях, почках, эритроцитах.
3. Белковая буферная система – представляет собой совокупность
альбуминов и глобулинов.
При физиологическом значении рН = 7.40 белки находятся
преимущественно в форме «белок – основание» и соль «белка – основания» и
ёмкость по кислоте буферной системы выше ёмкости по щелочи (таблица 2).
4. Аминокислотные буферные системы.
Почти все аминокислоты имеют значения рН заметно отличающиеся от
7.4 и мощность их невелика.
Таким образом, мощность буферных систем плазмы крови убывает в
ряду Н2СО3/НСО3- >белки > Н2РО4-/НРО42- > аминокислоты.

Эритроциты.
рН эритроцитов в норме 7.25 ± 0.05. Действуют гидрокарбонатная и
фосфатная буферные системы. Их мощность невелика по сравнению с
мощностью в плазме крови. Большую роль играет система гемоглобин –
оксигемоглобин, на долю которой приходится около 80% всей буферной
ёмкости цельной крови.
Гемоглобин – слабая кислота (рКа = 8.2), диссоциирует по схеме:
HHb H + + Hb -

C (H b -)
Недиссоциированной части больше, т.е.
C (H H b)
 1
9
, следовательно

буферная ёмкость системы HHb/Hb- выше по щёлочи, чем по кислоте


(таблица 2).
В легких HHb реагирует с О2,
HHb + O2 H H bO 2
11
образуя оксигемоглобин, который переносится кровью в капиллярные
сосуды, откуда О2 попадает в ткани. HHbO2 – слабая кислота –рКа (HHbO2) =
6.95. Поэтому при действии доноров протонов их в первую очередь будет
нейтрализовать анион Hb-
H + + H b- H H b,

т.к. имеет большее сродство к Н+. Но при действии оснований – акцепторов


протонов – в первую очередь будет реагировать оксигемоглобин
- -
H H bO 2 + O H H b O 2 + H 2O

Система HHbO2/HbO2- осуществляет также протонирование HCO3-


ионов с последующим выделением СО2 через легкие:
- -
H C O 3 + H H bO 2 H b O 2 + C O 2 + H 2O

Необходимо также отметить участие эфиров фосфорных кислот в


поддержании постоянства рН. Фосфолипиды являются слабыми кислотами.
рКа диссоциации полярных фосфатных групп находятся в интервале 6.8-7.2.
Поэтому при физиологическом значении рН=7.25 фосфолипиды мембран
эритроцитов находятся как в виде ионизированной, так и неионизированной
формы. При этом соотношение ионизированной и неионизированной форм
составляет примерно 3:1.
Вывод – сама мембрана эритроцитов обладает буферным действием,
поддерживая постоянство рН внутренней среды эритроцитов.
Резюме – совокупное действие нескольких буферных систем
обеспечивает кислотно-основной гомеостаз в организме.
12
Таблица 2.
Основные буферные системы организма
Буферная система Буферная ёмкость, Функционирование
ммоль/л
Гидрокарбонатная Вк = 40 Плазма, эритроциты,
Н2СО3/НСО3- Вщ = 2 межклеточная жидкость,
почечная ткань, слюна
Гемоглобиновая Основная буферная система
HHb/Hb- Вщ > Вк эритроцитов
Оксигемоглобиновая
HHbO2/HbO2 Вк > Вщ
Фосфатная Вк = 2 Плазма, эритроциты,
Н2РО4-/НРО42- Вщ = 0.5 почечная ткань, слюна
Белковая Вк = 10 (альбумины) Плазма крови, слюна
HProt/Prot- Вк = 3 (глобулины)
Вк < 1 (фибрины)
Вк > Вщ