МИКРОБИОЛОГИЯ

Кафедра «Технология бродильных производств и виноделие»

Аспирант: Серых Иван Николаевич
ORCID iD: 0000-0002-2690-4783
 ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение
Раздел 1
Раздел 2
Раздел 3
Раздел 4
Бонус
 ЧТО ТАКОЕ МИКРОБИОЛОГИЯ
Наука, изучающая микроскопические существа (видимые под микроскопом),
называемые микроорганизмами (микробами), их биологические признаки и
взаимоотношения с другими организмами.
Объекты изучения:
Систематика, морфология, физиология, биохимия, эволюция, роль в экосистемах,
практическое использование.
Разделы:
Общая микробиология, медицинская, промышленная (техническая), космическая,
геологическая, сельскохозяйственная, ветеринарная микробиология.
 ПРИКЛАДНЫЕ АСПЕКТЫ
МИКРОБИОЛОГИИ

1. Медицинская (санитарная, ветеринарная)

2. Экологическая
3. Сельскохозяйственная
4. Техническая, том числе биотехнологическая
ПРИМЕР ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Глобальный цикл азота

 ТЕХНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
• Очистка сточных вод
• Дезинфекция помещений
• Получение синтетический материалов: графен и т.п.
• Получение пищевых продуктов, этанола, глицерина, ацетона, органических кислот и др.
Частью технической микробиологии является пищевая микробиология, изучающая способы получения пищевых
продуктов с использованием микроорганизмов. Например:
1. дрожжи применяют в виноделии, пивоварении, хлебопечении, спиртовом производстве;
2. молочнокислые бактерии — в производстве кисломолочных продуктов, сыров, при квашении овощей;
3. уксуснокислые бактерии — в производстве уксуса;
4. мицелиальные грибы используют для получения лимонной и других пищевых органических кислот
К настоящему времени выделились специальные разделы пищевой микробиологии: микробиология дрожжевого и
хлебопекарного производства, пивоваренного производства, консервного производства, молока и молочных
продуктов, уксуса, мясных и рыбных продуктов, маргарина и т. д.
 РАЗДЕЛ 1

1. Систематика
1. Классификация
1. Таксономия
2. Нумерическая (численная) таксономия
1. Гено- и фенотипические характеристики
2. Идентификация
3. Номенклатура
2. Ряд других терминов для характеристики микроорганизмов
 СИСТЕМАТИКА
Распределение микроорганизмов в соответствии с их происхождением и биологическим сходством.
Систематика занимается всесторонним описанием видов организмов, выяснением степени родственных
отношений между ними и объединением их в различные по уровню родства классификационные единицы-
таксоны.
Основные вопросы, решаемые при систематике (три аспекта, три кита систематики)- классификация,
идентификация и номенклатура.
 КЛАССИФИКАЦИЯ
Распределение (объединение) организмов в соответствии с
их общими свойствами (сходными генотипическими и
фентипическими признаками) по различным таксонам.
Классификация живых организмов называют
таксономией и направлена она на классификацию
живых организмов путем их дифференциации и
установления отношений между группами организмов.
Организмы сгруппированы в три системы доменов
(эукариоты, археи и бактерии) в первую очередь на
основе типа клеток.
Различают два вида классификаций: филогенетические,
или «естественные», и искусственные
 ТАКСОНОМИЯ
Наука о методах и принципах распределения
(классификации) организмов в соответствии с их
иерархией. Наиболее часто используют следующие
таксономические единицы (таксоны)- штамм, вид, род.
Последующие более крупные таксоны- семейство,
порядок, класс.

В современном представлении вид в микробиологии-

совокупность микроорганизмов, имеющих общее
эволюционное происхождение, близкий генотип
(высокую степень генетической гомологии, как правило Классификация на примере кишечной палочки
более 60%) и максимально близкие фенотипические
характеристики.
 ТАКСОНОМИЯ
НЕКОТОРЫХ
ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
ПАТОГЕННЫХ И
УСЛОВНО-
ПАТОГЕННЫХ
БАКТЕРИЙ
ТАКСОНОМИЯ БАКТЕРИЙ
 НУМЕРИЧЕСКАЯ (ЧИСЛЕННАЯ)
ТАКСОНОМИЯ
Основывается на использовании
максимального количества
сопоставляемых признаков и
математическом учете степени
соответствия. Больщое число
сравниваемых фенотипических
признаков и принцип их равной
значимости затрудняло
классификацию.
 КЛЕТОЧНЫЕ ФОРМЫ ЖИЗНИ
Клеточные формы жизни в зависимости от организации генома, организации
белоксинтезирующих систем и наличию и составу клеточной стенки подразделяются на
Домены.

Живые организмы

Домен «Bacteria» Домен «Eucaria»

(эубактерии) (эукариоты)

Домен «Archae»
(архебактерии)
Бактерии (Bacteria)
– характеризуются отсутствием ядра и других
внутренних мембранных структур, простым
цитоскелетом, не позволяющим осуществлять
эндоцитоз и экзоцитоз, размножением путём
бинарного деления.
– только в пределах домена Bacteria
встречается пептидогликан в составе
клеточной стенки.
Археи (Archaea)
– схожи с бактериями по типу организации
клетки, однако устройство большинства
молекулярных систем роднит их с
эукариотами.
– Важным отличием архей от других доменов
является альтернативный химический состав
мембран: они построены на основе простых
эфиров фосфоглицерола и терпеновых
спиртов.

•Эукариоты (Eukaryota) – отличаются наличием ядра, множества

внутренних мембранных структур, сложным цитоскелетом,
наличием процессов митоза и мейоза.
•По современным представлениям эукариоты имеют химерное
происхождение – большая часть молекулярных систем
происходит от древних архейных предков, в то время как
митохондрии являются потомками симбиотических бактерий.
 СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
СТРОЕНИЯ ПРОКАРИОТ И ЭУКАРИОТ
Признак Эукариоты Бактерии Археи
Ядро, окруженное мембраной Одна кольцевая хромосома, находящаяся в цитоплазме. Широко
Типичное устройство
и содержащее множество распространены дополнительные внехромосомные
генетического аппарата
линейных хромосом генетические элементы – плазмиды.
Наличие митохондрий,
Органеллы, окруженные эндоплазматического
Как правило, отсутствуют
мембранами ретикулума, комплекса
Гольджи
Бислой из сложноэфирных
фосфолипидов, отсутствуют
Бислой из сложноэфирных
стеролы. У Грам- бактерий Бислой или монослой из
Типичный состав мембран фосфолипидов,
во внешней мембране простоэфирных липидов
сфинголипидов, стеролов
присутствует
липополисахарид,
80S*, архейный тип набора 70S, бактериальный тип 70S, архейный тип набора
Тип рибосом
рибосомальных белков набора рибосомальных белков рибосомальных белков
Пептидогликан в клеточной
Отсутствует Как правило, присутствует Отсутствует
стенке
 ГЕНО- И ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ
При изучении, идентификации и классификации микроорганизмов чаще всего изучают
следующие (гено- и фенотипические) характеристики:

1.Морфологические- форма, величина, особенности взаиморасположения, структура.

2.Тинкториальные- отношение к различным красителям (характер окрашивания), прежде всего к
окраске по Граму. По этому признаку все микроорганизмы делят на грамположительные и
грамотрицательные.
Морфологические свойства и отношение к окраску по Граму позволяют как правило отнести
изучаемый микроорганизм к крупным таксонам- семейству, роду.
3.Культуральные- характер роста микроорганизма на питательных средах.
 ГЕНО- И ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.Биохимические- способность ферментировать различные субстраты (углеводы, белки и
аминокислоты и др.), образовывать в процессе жизнедеятельности различные биохимические
продукты за счет активности различных ферментных систем и особенностей обмена веществ.
5.Антигенные- зависят преимущественно от химического состава и строения клеточной
стенки, наличия жгутиков, капсулы, распознаются по способности макроорганизма (хозяина)
вырабатывать антитела и другие формы иммунного ответа, выявляются в иммунологических
реакциях.
6.Физиологические- способы углеводного (аутотрофы, гетеротрофы), азотного
(аминоавтотрофы, аминогетеротрофы) и других видов питания, тип дыхания (аэробы,
микроаэрофилы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы).
 ГЕНО- И ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ
7.Подвижность и типы движения.
8.Способность к спорообразованию, характер спор.
9.Чувствительность к бактериофагам, фаготипирование.
10.Химический состав клеточных стенок- основные сахара и аминокислоты, липидный и
жинокислотный состав.
11.Белковый спектр (полипептидный профиль).
12.Чувствительность к антибиотикам и другим лекарственным препаратам.
13.Генотипические (использование методов геносистематики).
 СОВРЕМЕННЫЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ БИОГЕОХИМИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙ

1. Анализ функциональных генов, транскриптов и белков

2. Методы «омика»
3. Амплификация геномов единичных клеток
4. Методы с добавками питательных веществ
5. Мечение стабильными изотопами
6. Применение бромдеоксиуридина и йоднитротетразолия фиолетового для определения
биогеохимических функций микроорганизма
7. Методы, основанные на флуоресцентной гибридизации in situ
8. Изотопные чипы
9. Метод фингерпринтов («отпечатков пальцев»)
 АНАЛИЗ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ
ГЕНОВ, ТРАНСКРИПТОВ И
БЕЛКОВ
Данная группа методов изучает состав функциональных генов и продуктов экспрессии
генов микробиологического сообщества, т.е. направлена на выявление потенциальной
способности исследуемого микроорганизма выполнять те или иные биогеохимические
функции.
 МЕТОДЫ «ОМИКА»
Ряд методов – анализ метагенома, метатранскриптома, метапротеома и метаболома –
объединяется в англоязычной литературе неологизмом «омика» на основании общей
части названий. Важное отличие методов «омика» от всех остальных методов
определения биогеохимических функций микрорганизма состоит в том, что они дают
представление одновременно обо всех метаболических процессах, которые
потенциально могут происходить в сообществе
• Метагеномика - изучает генетический материал всех членов целого сообщества
• Метатранскриптомика – исследует транскрипты сообщества – матричную РНК
• Метапротеомика – изучение всех белков природного сообщества микроорганизмов
• Метаболомика - изучение полного набора метаболитов продуцируемых в организме
 АМПЛИФИКАЦИЯ ГЕНОМОВ
ЕДИНИЧНЫХ КЛЕТОК

Амплификация геномов единичных клеток - позволяет обнаружить функциональные

гены конкретных видов некультивируемых бактерий и может использоваться как
дополнение к методам определения биогеохимической функций
 МЕТОДЫ С ДОБАВКАМИ
ПИТАТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

Позволяет получить важную информацию о видоспецифичной биогеохимической

функции микроорганизмов в том случае, если данные методы используются в сочетании
с методом экспериментальных микроэкосистем
 МЕЧЕНИЕ СТАБИЛЬНЫМИ
ИЗОТОПАМИ
Действенный способ изучения потребления различных субстратов. Обычно определяется включение
метки в ДНК, РНК или мембранные липиды клеток, такие как жирные кислоты полярных липидов,
реже бифитаниловые тетраэфиры, гопаноиды.
Включает в себя виды:
• Анализ липидов - этим методом выявляются даже небольшие различия в содержании 13С в молекулах.
• Анализ ДНК - определение меток в ДНК предпочтительней в большинстве случаев, когда
продолжительность эксперимента не является ограничением. Существенным преимуществом
мечения ДНК стабильными изотопами считают то, что обогащённая тяжёлыми изотопами ДНК
заключает в себе весь геном каждого функционально активного члена сообщества
• Анализ РНК - Анализ РНК, меченной стабильными изотопами, совмещает в себе возможности
идентификации микроорганизма, потребившего меченый субстрат, и преимущества
непродолжительного времени инкубации. РНК организма включает в свой состав изотопные метки
быстрее, чем ДНК
 ПРИМЕНЕНИЕ БРОМДЕОКСИУРИДИНА И
ЙОДНИТРОТЕТРАЗОЛИЯ ФИОЛЕТОВОГО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
БИОГЕОХИМИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙ МИКРООРГАНИЗМА

Используется в качестве более простой методической альтернативы изотопным меткам.

Применяют вещества бромдеоксиуридин и йоднитротетразолий фиолетовый,
являющиеся индикаторами метаболической активности бактериальных клеток
 МЕТОДЫ, ОСНОВАННЫЕ НА
ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ IN SITU
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) позволяет идентифицировать, установить
местонахождение и подсчитать единичные микробные клетки и кластеры. Включает в
себя методики:
• Комбинация микроавторадиографии с флуоресцентной гибридизацией in situ
• Комбинация спектроскопии комбинационного рассеяния света, изотопных меток и
флуоресцентной гибридизации in situ
• Мультиизотопная визуализирующая масс-спектрометрия
• Комбинация бета-микроимиджинга с флуоресцентной гибридизацией in situ
 КОМБИНАЦИЯ МИКРОАВТОРАДИОГРАФИИ С
ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ГИБРИДИЗАЦИЕЙ IN SITU

Микроавторадиография позволяет проследить потребление отдельными клетками

веществ, меченных радиоактивными изотопами Совместное применение с
флуоресцентной гибридизацией in situ позволяет также идентифицировать
некультивируемые бактерии, потребившие меченый субстрат. Важное преимущество
микроавторадиографии – это возможность проследить включение одной клеткой
меченных радионуклидом компонентов. К недостаткам метода микроавторадиографии в
комбинации с FISH относится его трудоёмкость, что ограничивает количество
проводимых параллельно экспериментов
 КОМБИНАЦИЯ СПЕКТРОСКОПИИ КОМБИНАЦИОННОГО
РАССЕЯНИЯ СВЕТА, ИЗОТОПНЫХ МЕТОК И
ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ IN SITU

Спектроскопия комбинационного рассеяния света позволяет определить структуру

химических связей в биологических молекулах отдельной микробной клетки
 МУЛЬТИИЗОТОПНАЯ ВИЗУАЛИЗИРУЮЩАЯ
МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ (MIMS)
Самый чувствительный метод регистрации включения изотопных меток в клетку. Это
новое поколение вторичной ионной масс-спектрометрии (SIMS), объединённой с FISH,
со сложной ионной оптикой и программным обеспечением, количественно
анализирующим изображения.
Технология MIMS позволяет анализировать состав стабильных и радиоактивных
изотопов одиночных клеток с боковым разрешением 50 нм, превосходящим
Раманспектроскопию. MIMS в 1000 раз превосходит по чувствительности
микроавторадиографию и имеет точность учёта стабильных изотопов ±1 %. Как и
Raman-FISH, комбинация MIMS с FISH позволяет проводить филогенетический и
изотопный анализ природного образца в одно сканирование.
 КОМБИНАЦИЯ БЕТА-МИКРОИМИДЖИНГА С
ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ГИБРИДИЗАЦИЕЙ IN SITU

Бета-микроимиджинг позволяет с высокой чувствительностью измерить распределение

радиоактивных изотопов на плоскости. C помощью бета-микроимиджинга можно
определить число изотопов, поглощённых бактериальными клетками.
 ИЗОТОПНЫЕ ЧИПЫ
Использование микрочипов для изучения биогеохимических функций бактерий – один
из самых высокопроизводительных методов, протестированных на различных
бактериальных сообществах
В отличие от методов мечения нуклеиновых кислот стабильными изотопами изотопные
чипы позволяют напрямую измерить включение субстрата в нуклеиновые
кислотымишени, благодаря чему практически исключены ложноположительные
результаты. По сравнению с MAR-FISH изотопные чипы дают возможность применить
много зондов параллельно, что помогает быстрее, чем при других методах, изучить
биогеохимические функции микробных сообществ
 МЕТОД ФИНГЕРПРИНТОВ
(«ОТПЕЧАТКОВ ПАЛЬЦЕВ»)
Фингерпринтинг сообществ – быстрый способ увидеть изменения в составе
бактериальных сообществ – широко применяется для изучения разнообразных
местообитаний, в том числе водных. Метод не позволяет проследить за потреблением
питательных веществ отдельными клетками.
Фингерпринты представляют собой профиль сообщества, на котором отдельная полоса
ДНК соответствует одной популяции бактерий. Если после добавления питательного
вещества популяция увеличила свою долю и заняла доминирующее положение в
сообществе, предполагается, что она питается добавленным веществом
 ИДЕНТИФИКАЦИЯ
Основные фено- и генотипические характеристики,
используемые для классификации микроорганизмов,
используются и для идентификации, т.е. установления их
таксономического положения и прежде всего видовой
принадлежности- наиболее важного аспекта
микробиологической диагностики инфекционных
заболеваний. Идентификация осуществляется на основе
изучения фено- и генотипических характеристик изучаемого
инфекционного агента и сравнения их с характеристиками
известных видов. При этой работе часто применяют
эталонные штаммы микроорганизмов, стандартные
антигены и иммунные сыворотки к известным прототипным
микроорганизмам. У патогенных микроорганизмов чаще
изучают морфологические, тинкториальные, культуральные,
биохимические и антигенные свойства.
 НОМЕНКЛАТУРА

Название микроорганизмов в соответствии с

международными правилами. Для обозначения
видов бактерий используют бинарную латинскую
номенклатуру род/вид, состоящую из названия
рода (пишется с заглавной буквы) и вида (со
строчной буквы). Примеры- Shigella flexneri,
Rickettsia sibirica.
 БИНОМИАЛЬНАЯ (НАУЧНАЯ)
НОМЕНКЛАТУРА
• Биномиальная (научная) номенклатура присваивает каждому микробу 2 имени - Род -
существительное, всегда с большой буквы, и вид - прилагательное, в нижнем регистре. Оба написаны
курсивом или подчеркнуты. Бывший. Золотистый стафилококк (S. aureus), кишечная палочка (E. coli)

• Основная таксономическая группа в микробной систематике - это виды. Таксономисты, работающие с

высшими организмами, определяют свои виды иначе, чем микробиологи. Для прокариотических
видов характерны различия в фенотипе и генотипе. Фенотип - это совокупность видимых
характеристик и поведения микроорганизма. Генотип - это генетический состав микроорганизма.
 РЯД ДРУГИХ ТЕРМИНОВ ДЛЯ
ХАРАКТЕРИСТИКИ МИКРООРГАНИЗМОВ

Штамм- любой конкретный образец (изолят) данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по
антигенным характеристикам, называют серотипами (серовариантами- сокращенно сероварами), по
чувствительности к специфическим фагам- фаготипами, биохимическим свойствам- хемоварами, по
биологическим свойствам- биоварами и т.д.
Колония- видимая изолированная структура при размножении бактерий на плотных питательных
средах, может развиваться из одной или нескольких родительских клеток. Если колония развилась из
одной родительской клетки, то потомство называется клон.
Культура- вся совокупность микроорганизмов одного вида, выросших на плотной или жидкой
питательной среде.
Чистая культура - совокупность однородных микроорганизмов, выделенных на питательной среде,
сходных по основным свойствам
 МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

• Форма клетки (кокковидная, палочковидная, извитые)

• Размеры
• Взаимное расположение клеток
• Наличие особых структур (капсула, спора)
• Тинкториальные свойства – отношение к окраске

По форме бактериальной клетке выделяют:

• Кокковидные
• Палочковидные
• Извитые
• нитевидные
 МИКРООРГАНИЗМЫ

Микроорганизмы

Бактерии Дрожжи

Грибы
 БАКТЕРИИ

Бактерии(от греческого «bakterion» - палочка) - группа мельчайших

микроорганизмов, чаще всего одноклеточных. Впервые бактерии разглядел в
свой микроскоп голландский натуралист Антони ван Левенгук в 1676 году.
Однако название «бактерии» появилось лишь в 1828 году. В 50-х годах XIXвека
Л.Пастер открыл болезнетворные свойства бактерий и положил начало их
отдельному изучению. Изобретение мощных электронных микроскопов в 30-е
годы прошлого столетия позволило учёным узнать больше о бактериях. В 1977
их даже разделили на два царства: архебактерий и эубактерий. Так как эти два
вида достаточно схожи, то часто их объединяют в одно царство.
ПРОКАРИОТЫ
И ЭУКАРИОТЫ
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ФОРМЫ
БАКТЕРИЙ
 МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

Форма клетки (кокковидная, палочковидная, извитые)

• Размеры
• Взаимное расположение клеток
• Наличие особых структур (капсула, спора)
• Тинкториальные свойства – отношение к окраске

По форме бактериальной клетке выделяют:

• Кокковидные
• Палочковидные
• Извитые
• нитевидные
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ФОРМЫ БАКТЕРИЙ
 Кокки

Классифицируются по взаимном расположению в чистой культуре

Могут иметь как правильную шаровидную форму, так и вытянутую или вогнутую с
одной стороны

Стрептококки -это кокки, Стафилококки-это кокки,

(a) стрептококки, расположенные цепочками , т.к. расположенные неправильными
(b) диплококки, деление клеток идет в одной скоплениями , т.к. деление
плоскости и клетки после клеток идет в нескольких
(c) тетракокки, плоскостях
(d) сарцины, деления не расходятся
(e) стафилококки

Диплококки: пневмококки
 Палочковидные бактерии
Характеризуются по взаимному расположению в чистой культуре, характеру концов,
способности образовывать споры.

Энтеробактерии – Грам- палочки с закругленными концами

Е.coli Klebsiella (расположены

парами под общей капсулой)
Клостридии- грам+ палочки
с закругленными концами,
внутри эндоспоры(не
окрашиваются) Холерный вибрион- изогнутые грам- палочки
с закругленными концами
 Палочковидные бактерии (1)

Бифидобактерии- грам+ палочки с Bacillus Anthracis (возбудитель сибирской язвы)

бифуркацией на конце - грам+ палочки с обрубленными концами,
расположены цепочками

Возбудитель дифтерии- грам+ палочки с

утолщениями на полюсах
 Палочковидные бактерии (2)

Лактобактерии- грам+ палочки с

закругленными концами

• Клостридии.- Грам+ палочки с Fusobacterium- грам- палочки с

закругленными концами заостренными концами
 ИЗВИТЫЕ БАКТЕРИИ

Campylobacter

Helicobacter
СПИРОХЕТА
 СТРОЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ
(ПРОКАРИОТИЧЕСКОЙ) КЛЕТКИ
• Внутреннее строение бактериальной (прокариотической) клетки.
• 1 - гранулы поли-В-оксимасляной кислоты,
• 2 - жировые капли,
• 3 - включения серы,
• 4 - трубчатые тилакоиды,
• 5 - пластинчатые тилакоиды,
• 6 - выросты цитоплазматической мембраны,
• 7 - хроматофоры (участки протопласта, несущие пигмент),
• 8 - нуклеоид,
• 9 - рибосомы прокариотической клетки,
• 10 - цитоплазма,
• 11 - слизистая капсула,
• 12 - жгутики,
• 13 - клеточная оболочка,
• 14 - мезосома,
• 15,16 - газовые вакуоли,
• 17 - гранулы полисахаридов,
• 18 - гранулы полифосфатов,
• 19 - цитоплазматическая мембрана,
• 20 - базальное тельце.
 КЛЕТОЧНЫЕ СТЕНКИ
ГРАММ+ И ГРАММ-
С помощью способа окраски, впервые предложенного в 1884 г.
Кристианом Грамом, бактерии могут быть разделены на две
группы: грамположительные и грамотрицательные.
Грамположительные организмы способны связывать некоторые
анилиновые красители, такие, как кристаллический фиолетовый,
и после обработки иодом, а затем спиртом (или ацетоном)
сохранять комплекс иод-краситель. Те же бактерии, у которых
под влиянием этилового спирта этот комплекс разрушается
(клетки обесцвечиваются), относятся к грамотрицательным.
 СТРОЕНИЕ БАКТЕРИИ
В бактериальной клетке различают основные структуры(то есть те, которые встречаются
у всех бактерий) и дополнительные (только у некоторых).
ОСНОВНЫЕ

 Нуклеоид

 Плазмида

 Цитоплазма

 Цитоплазматическая мембрана Нуклеоид

 Рибосомы

 Клеточная стенка

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ

 Споры

 Капсула (толщина более 0,2 мкм)/микрокапсула

(менее 0,2 мкм)

 Слизь

 Ворсинки (фимбрии, пили)

 Жгутики

 Включения
 Основные части бактерии

• Нуклеоид – ядерное вещество, содержащее двухцепочную ДНК, закрученную в спираль (без белков гистонов), не образует ядрышек и не имеет ядерной оболочки. Эта ДНК
кодирует основную генетическую информацию.
• Плазмида - еще одна структура, представляющая собой двухцепочную ДНК. Она может быть связана с нуклеоидом или быть автономной, поэтому ее сложно
классифицировать как основную или дополнительную структуру. Главная ее функция - хранение и передача дополнительной, приспособительной информации, такой как
токсинообразование, устойчивость к антибиотикам и т.п.
• Цитоплазма - это сложная коллоидная система, состоящая из воды (75 %), минеральных соединений, белков, РНК и ДНК, которые входят в состав органелл нуклеоида,
рибосом, мезосом, включений.
• Цитоплазматическая мембрана располагается непосредственно под клеточной стенкой и ограничивает цитоплазму. Она участвует в регуляции осмотического давления,
транспорте веществ, энергетическом метаболизме. ЦПМ способна образовывать инвагинации внутрь клетки - мезосомы. Их функция до конца не ясна. На сегодняшний день
мнения ученых разделились: одни считают их артефактами, возникшими при приготовлении препарата, другие предполагают, что это дополнительный источник энергии,
необходимый при быстром росте бактерии, третьи утверждают, что мезосомы связаны с нуклеоидом и участвуют в делении и спорообразовании.
• Рибосомы - рибонуклеопротеиновые частицы, состоящие из двух субъединиц, отвечающие за синтез белка. Перед началом синтеза белка происходит объединение этих
субъединиц в одну – 70 S (это скорость оседания этой структуры в ультрацентрифуге).
• Клеточная стенка - плотный биогетерополимер, обеспечивающий защитную, рецепторную, антигенную функции, поддерживающий постоянную форму и размер бактерии,
участвующий в делении и спорообразовании, а также в транспорте веществ и регуляции осмотического давления. В зависимости от строения клеточной стенки бактерии
делят на толстостенные (Грам+) и тонкостенные (Грам-).
 СПОРЫ
Споры - округлые или овальные образования, формирующиеся при неблагоприятных условиях.
Процесс происходит в несколько этапов. Сначала образуется проспора - структура в которой
концентрируется вся ДНК клетки. Она окружена несколькими оболочками - два слоя
цитоплазматической мембраны, между которыми находится измененный пептидогликан, который
теперь называется кортекс. Эта проспора находится внутри бактериальной клетки. Постепенно
протоспора поглощает дипиколиновую кислоту и кальций, теряет воду и превращается в полноценную
спору. Такое строение обеспечивает высокую устойчивость к воздействию неблагоприятных факторов,
в том числе термо- и кислотоустойчивость. Спорообразование присуще грамположительным
бактериям, чаще всего родов Bacillus и Clostridium. В благоприятных условиях споры прорастают,
снова образуя вегетативные формы. Споры бактерий НЕ участвуют в размножении
 КАПСУЛА, МИКРОКАПСУЛА, СЛИЗЬ
• Капсула (толщина более 0,2
мкм)/микрокапсула (менее 0,2 мкм) - слизистая
структура, образованная полисахаридами (реже
полипептидами), обеспечивающая дополнительную
защиту, а также играющая роль антигена. Поскольку
она обладает гидрофильностью, то препятствует
фагоцитозу бактерии. Выделяют
истиннокапсульные бактерии (род Klebsiella) –
сохраняют капсулообразование и при росте на
питательных средах, а не только в макроорганизме;
ложнокапсульные – образуют капсулу только при
попадании в макроорганизм.

• Слизь - структура похожая на капсула,

отличающаяся тем, что не имеет четких границ. Она
представляет собой мукоидные экзополисахариды,
которые участвуют в адгезии.
Совместными усилиями капсула и слизь играют
защитную роль.
 ВОРСИНКИ (ФИМБРИИ, ПИЛИ) 
• Существует огромное количество типов ворсинок, но наиболее изучены на сегодняшний день
Ворсинки (фимбрии, пили) - многочисленные тонкие следующие:
короткие образования нитевидной формы, состоящие • 1 типа (комон-пили):
из белка пилина, основной функцией которых - покрывают всю поверхность бактерии, которая с их помощью способна прикрепляться к клеткам
является адгезия (питательных веществ, контакт с макроорганизмов.
другой бактерией, рецепция бактериофагов и т.д.). • Характерные особенности:
- способность образовывать пленки и придавать бактериям гидрофобные свойства;
- способность вызывать агглютинацию эритроцитов.

• 2 типа:
- выглядят как пили 1 типа, но не вызывают гемагглютинацию и не способны образовывать пленки;
- считаются мутантной формой пилей 1 типа.

• 3 типа (половые ворсинки, или секс-пили, F-пили):

- обеспечивают контакт между бактериальными клетками в процессе конъюгации;
- на бактериальной клетке таких пилей всего по 1-3.

• 4 типа:
- обеспечивают контакт внутри колонии бактерий, необходимый для скользящего движения друг
относительно друга.

Это похоже на перемещение косяка рыб, только на микроскопическом уровне.

Пили НЕ являются структурой, обеспечивающей передвижение!
 ЖГУТИКИ, ВКЛЮЧЕНИЯ
• Жгутики - тонкие длинные структуры, состоящие из белка флагеллина, обеспечивающие движение бактерий, а также
являющиеся антигенами (Н-антигенами). Их количество может варьировать от 1 до нескольких десятков и даже сотен. Жгутик
состоит из базального тельца, которое крепится к цитоплазматической мембране бактерии при помощи системы дисков (у Гр-
бактерий две пары дисков, у Гр+ - одна), крюка и спиральной нити, которая совершает вращательное движение, за счет которого
и будет осуществляться перемещение в пространстве. По количеству и расположению жгутиков бактерии разделяют на
монотрихи, лофотрихи, амфитрихи и перитрихи.

• Включения - это запасные питательные вещества, находящиеся в клетке в виде гранул. По химической
структуре это может быть гликоген, крахмал, сера, полифосфаты (волютин), бета-оксимасляная кислота
и др.
 РАЗМНОЖЕНИЕ
Для бактерий характерны следующие виды размножения:
• бинарное деление на две части- деление происходит симметрично относительно
поперечной и продольной оси, образуются одинаковые дочерние клетки
почкование- вариант бинарного деления, образующаяся на одном из полюсов
почка растет до размеров материнской клетки и отделяется;
• симметрия присутствует только относительно продольной оси множественное
деление - клетка претерпевает ряд последовательных быстрых бинарных
делений внутри фибриллярного слоя материнской клетки, что приводит к
образованию баеоцитов – мелких клеток, количество которых колеблется от 4 до
1000, в результате разрыва клеточной стенки материнского организма баеоциты
выходят наружу;
• размножение спорами;
• путем фрагментации клеток, имеющих нитевидную форму;
• конъюгация (половой процесс, обмен клетками генетическим материалом);
• трансформация (перенос «голой» ДНК);
• трансдукция (перенос генетической информации при помощи бактериофагов).
 РОСТ И СПОСОБЫ РАЗМНОЖЕНИЯ БАКТЕРИЙ
• Клетки большинства грамотрицательных бактерий делятся путем
перетяжки

• У большинства грамположительных бактерий деление присходит

путем синтеза поперечной перегородки, идущей от периферии к
центру.
 ПРОЦЕСС РЕПЛИКАЦИИ
Репликация начинается с одной избранной области, называемой origin
(англ. начало), имеющей определенную последовательность
 нуклеотидов. на origin может возникать одна или две репликативные
вилки. Размножения бинарным делением бактерий приводит к росту
числа бактериальных клеток в геометрической прогрессии. 
 ГРИБЫ
1. Строение клетки 12. ОГЛАВЛЕНИЕ
Типы полового размножения у грибов
2.
Признаки характерные для растений, жи 13. Органы полового размножения грибов
вотных и грибов
14. Грибы
3. Строение грибной клетки
15. Myxomycota
4. Органы спороношения грибов
16. Род Cladosporium
5. Видоизменения мицелия грибов
17. Род Geotrichum
6. Типы конидиогенеза у грибов
18. Гриб Alternaria
7. Плодовые тела грибов разных форм
19. Род Trihoderma
8. Зигоспоры мукоровых грибов
20. Род Fusarium
9. Хламидоспоры
21. Гриб Botrytis
10. Инфекционные структуры
22. Разнообразие конидий грибов
11. Типы конидиальных спороношений
 СТРОЕНИЕ КЛЕТКИ
Вегетативное тело большинства грибов
представляет собой грибницу, или мицелий,
состоящий из ветвящихся нитей – гиф
Мицелий клеточный – гифы разделены
перегородками (септами) на клетки, часто
многоядерные
Мицелий неклеточный – гифы не имеют
перегородок и весь мицелий представляет собой
как бы одну гигантскую клетку с большим числом
ядер
Толщина гиф разнообразна, размер их
поперечника колеблется от 5 до 15 мкм и более
 ПРИЗНАКИ ХАРАКТЕРНЫЕ ДЛЯ
РАСТЕНИЙ, ЖИВОТНЫХ И ГРИБОВ

Признаки Растения Животные Грибы Признаки Растения Животные Грибы

Геном Метаболизм

Размер (х109 D) 1000-2000 100-2000 10-30 через α-амино-

Синтез лизина через диаминопимелиновую кислоту оба пути
адипиновую кислоту
Процент повторов ~ 30 ~ 40 ~ 10 Конечный продукт метаболизма азота аспарагин, глютамин мочевина
Цитология и Запасные углеводы крахмал гликоген гликоген, трегалоза, сахароспирты
ультраструктура
Структурные углеводы целлюлоза, гемицеллюлоза, пектин хитин хитин, глюкан (маннан), целлюлоза
Число ядер в клетке одно одно одно или много

Цитокинез сопряжён с митозом не сопряжён Синтез меланина в мертвых клетках в живых клетках

Рост клеток изодиаметрический апикальный

Физиология и образ жизни
Образ жизни прикреплённый свободный прикреплённый
Клеточная стенка есть нет есть
Тип питания фототрофный зоотрофный осмотрофный
в фазе метаболической
Центральная вакуоль при старении
активности Способ получения энергии автотрофный гетеротрофный

за счёт роста клеток, за счет локального автолиза внутреннего

Формирование вакуоли
растяжением содержимого
 СТРОЕНИЕ ГРИБНОЙ КЛЕТКИ
Грибы имеют эукариотный тип клетки,
строение ее сходно с клетками других
растительных организмов, но у грибов
отсутствуют пластиды. Клетки
большинства грибов имеют многослойную
клеточную стенку, состоящую на 80–90 %
из полисахаридов, в небольшом количестве
имеются белки, липиды, полифосфаты.
Основным полисахаридом у клеточной
стенки большинства грибов является
хитин, у некоторых – целлюлоза. Под
клеточной стенкой расположена
трехслойная цитоплазматическая
мембрана.
 ОРГАНЫ СПОРОНОШЕНИЯ
ГРИБОВ
По своему происхождению спороношения могут быть двух типов половое (телеоморфа) и бесполое
(анаморфа). В жизненном цикле большинства грибов они возникают не одновременно, а чередуются
друг с другом. У фитонатогенных грибов бесполое спороношение обычно сопровождает
паразитическую стадию цикла, а половое — переход в стадию покоя. Так, на листьях и плодах
яблони часто встречается заболевание, названное паршой,, при котором возникают темно-оливковые
пятна, покрытые бархатистым налетом бесполых спор — конидий. Эти споры, разлетаясь, заражают
новые листья и плоды, обеспечивая распространение болезни. А осенью на опавших зараженных
листьях происходит половой процесс и формируется зимующая стадия — телеоморфа. Ранней
весной половые споры (аскоспоры) осуществляют первичное заражение молодых листьев.

1 — плодовое тело шампиньона,

2 — спорангиеносцы гриба Mucor mucedo с шаровидными спорангиями;
3 — древовидные зооспорангиеносцы возбудителя мильдью винограда оомицета Plasmopara
riticola, высовывающиеся из устьиц листа, с лимоновидными зооспорангиями на концах
 ВИДОИЗМЕНЕНИЯ МИЦЕЛИЯ
В процессе эволюции и адаптации к условиям
окружающей среды клеточное строение ГРИБОВ
мицелия грибов видоизменялось образовывая.
1. Анастомозы ;
2. Ризоиды и столоны;
3. Гаустории;
4. Аппрессории;
5. Оидии ;
6. Хламидоспоры ; 6
7. Склероции.
3
5

1 2 7
4
 ТИПЫ КОНИДИОГЕНЕЗА У
ГРИБОВ
1. Таллический тип
2. Холобластический тип
3. Энтеробластический тип
a) Общий вид
b) Детали формирования цепочки
конидий
 ПЛОДОВЫЕ ТЕЛА ГРИБОВ
РАЗНЫХ ФОРМ
На питательном субстрате мицелиальные грибы образуют колонии различного вида:
пушистые, нитевидные, паутинообразные, ватоподобные или мучнистоподобные.
Вегетативный мицелий большинства грибов не окрашен. Плодоносящий мицелий
молодых колоний грибов белого или сероватого цвета
ЗИГОСПОРЫ МУКОРОВЫХ
ГРИБОВ

• Phycomyces;
• Mortierella;
• Zygorrhynchus;
• Piptocephalis;
• Absidia.
 ХЛАМИДОСПОРЫ

Хламидоспоры и склероции грибов.

a) Хламидоспоры
b) Склероции спорыньи
ИНФЕКЦИОННЫЕ СТРУКТУРЫ
 ТИПЫ КОНИДИАЛЬНЫХ
СПОРОНОШЕНИЙ

1 – коремия; 2 – пикнида; 3 – ложе; 4 – одиночный конидиеносец

ТИПЫ ПОЛОВОГО РАЗМНОЖЕНИЯ
У ГРИБОВ
 ОРГАНЫ ПОЛОВОГО
РАЗМНОЖЕНИЯ ГРИБОВ

a) базидии с
базидиоспорами:
1. одноклеточная
базидия;
2. многоклеточная
базидия;
b) сумка (аскус) с
аскоспора-ми;
c) зигоспора
ГАПЛОИДИЗАЦИЯ
 ГРИБЫ
В группу организмов, обозначаемых как грибы, входит боль­шое число независимо
возникших или очень давно разошедшихся эволюци­онных линий. Среди них имеются
как амёбоподобные животные, так и поте­рявшие хлорофилл водоросли. Три главные
эволюционные линии, которыми занимаются микологи, показаны на схеме.
 MYXOMYCOTA
Группа миксомицетов, или слизевиков, объединяет организмы, вегетативная
фаза которых представлена плазмодием - голой ци­топлазматической массой,
окруженной перипластом и способной к амебооб­разным перемещениям, или
псевдоплазмодием - агрегацией амебообразных клеток (миксамеб), также
способных к синхронному движению. При споро­ношении плазмодий
преобразуется в один или группу спорангиев, в которых формируются
покоящиеся споры, покрытые целлюлозными (реже хитиновы­ми) оболочками.
Следовательно, в вегетативной фазе миксомицеты сходны с животными, а в
генеративной - с грибами. Первый серьезный исследователь миксомицетов -
знаменитый немецкий ботаник Антон Де Бари - назвал их поэтому Mycetozoa,
т.е. грибы-животные. Деление миксомицетов на классы основано на строении
плазмодия, прорастании спор и других признаках.
 HETEROCONTAE
Отдел объединяет около 600 видов преимущественно микро-, реже макроскопических
эукариотических водорослей желто-зеленого, светло- или темно-желто-зеленого, реже зеленого
цвета, иногда бесцветных. Размеры их колеблются от 0,5-1,5 мкм (Chloridella glaciales Kol) до
нескольких миллиметров в диаметре (Botrydium Wallr.) или до десятков сантиметров в длину (нити
Tribonema Derb. et Sol., Vaucheria D. С.). Индивиды одноклеточные, многоклеточные и
неклеточные, либо колонии индивидов (в том числе ценобиальные), активно подвижные и
неподвижные, прикрепленные и свободноживущие.
Наблюдаются почти все типы структуры вегетативного тела от монадного до сифонального,
исключая сифонокладальный. Преобладающее большинство желтозеленых водорослей имеет
коккоидный тип структуры (Mischococcales), реже наблюдаются монадный (Chloramoebales) и
гемимонадный (Heterogloeales), ризоподиалъный (Rhizochloridales), сарциноидный (Chlorellidium
Visch. et Pasch., Chlorellidiopsis Pasch.), нитчатый (Neonemataceae, Tribonemataceae), разнонитчатый
(Heterococcus Chod.), псевдопаренхиматозный (Chaetopedia Pasch.), паренхиматозный (Chloropedia
Pasch.) и сифональный (Botrydiales).
ТИПЫ СТРУКТУРЫ ВЕГЕТАТИВНОГО
ТЕЛА ЖЕЛТОЗЕЛЕНЫХ ВОДОРОСЛЕЙ

1 - монадный (Pedinomonadopsis minor Massjuk et Guk);

2 - ризоподиальный (Stipitococcus calix Ettl);
3 - гемимонадный (Helminthogloea ramosa Pasch.,
апикальная часть слизистого шнура);
4-8 - коккоидный (4 - Pseudcpolyedriopsis skujae Gollerb., 5 -
Ducelliera chodatii (Ducel.) Teil., 6 - Mischococcus
confervicola Näg., 7 - Ophiocytium mucronatum (A. Br.)
Rabenh., 8 - Diplochloris decussata Korsch.);
9 - сарциноидный (Chlorellidium tetrabotrys Visch. et Pasch.);
10 - нитчатый (Heterodendron squarrosurn Pasch.);
11 - разнонитчатый (Heteroccoccus sp.);
12 - сифональной (Botrydium granulatum (L.) Grev.)
 EUMYCOTA
Члены подразделения Eumycota называют настоящими грибами. Это очень большая
группа, состоящая примерно из 75 000 известных видов, но это число должно быть
намного больше, поскольку в список регулярно добавляются новые виды в связи с
открытием новых видов из разных уголков мира.

В слоевище Eumycota обычно отсутствуют плазмодии или псевдоплазмодии. Члены

одноклеточные или нитчатые с определенной клеточной стенкой. Споры многих грибов
часто загрязняют нашу пищу. Они вызывают болезни как растений, так и животных, в
том числе человека.
 OOMYCETES
Класс Оомицеты (Oomycetes) – группа организмов (псевдогрибов), обладающих
особенностями, присущими грибам, но и значительно от них отличающихся. Oomycetes
является единственным классом типа (отдела) Оомикота (Oomycota) и включает 10
порядков, выделяемых по уровню организации вегетативного тела и особенностям
бесполового и полового спороношения. В пределах класса Оомицеты прослеживают
эволюцию, связанную с выходом представителей группы на сушу. Важнейшие порядки:
Сапролегниевые (Saprolegniales), Пероноспоровые (Peronosporales), Лептомитовые
(Leptomitales), Лагенидиевые (Lagenidiales). Есть мнение, что семейство Питиевые
(Pythiaceae), так же должно быть выделено в самостоятельный порядок – Питиальные
(Pythiales)
 СХЕМА БЕСПОЛОГО
РАЗМНОЖЕНИЯ ООМИЦЕТОВ
 CHYTRIDIOMYCETES
Отдел царства грибов объединяет более 120 родов и около 1000 видов. Мицелий слабо
развит, основная масса таллома представляет собой т. н. плазмодий, из которого вырастают
ризоидные гифы. Самые примитивные представители совершенно не имеют мицелия, и тело
их в вегетативном состоянии представлено одиночной клеткой, иногда лишённой жёсткой
клеточной стенки. Основа клеточной стенки хитиново-глюкановая, как и у высших грибов.

Представители отдела тесно связаны с водной средой (морской и пресноводной), где

паразитируют на водорослях и беспозвоночных. Могут вызывать массовую гибель водных
организмов вплоть до амфибий. Могут развиваться во влажных почвах и вызывать болезни
высших растений: чёрную ножку капусты (Olpidium brassicae), рак картофеля (Synchytrium
endobioticum) и др., однако не так опасны, как оомицеты. Меньшее количество
представителей — сапротрофы на субстратах, содержащих хитин, целлюлозу и кератин.
 ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ
ОЛЬПИДИУМА КАПУСТНОГО
 СИНХИТРИУМ
ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ
 ZYGOMYCETES
Класс Zygomycetes. Мицелий большей частью неклеточный, хорошо развитый. Бесполое размножение
осуществляется неподвижными эндоген¬ными споран-гиоспорами, реже - экзогенными конидиями. Там, где
гифы со¬прикасаются с суб-стратом, формируются ризоиды, которые проникают в субстрат. Непосредственно
над этим местом появляются один или несколько спорангиеносцев, на которых формируются спорангии (рис.
33).
Половой процесс – зигогамия. Гаметангии мукоровых грибов содержат по нескольку ядер, поэтому
образующаяся зигота многоядерная. У большинства ви-дов ядра длительное время не сливаются. Перед
прорастани¬ем зиготы происходят кариогамия, мейоз и многочисленные митозы, после чего формируется
многоспоро-вый спорангий.

Бесполое спороношение и форми-рование зиготы

ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ
ЗИГОМИЦЕТОВ
 ASCOMYCETES
Класс Ascomycetes - сумчатые грибы. Это один из крупнейших классов грибов. Входящие в этот класс
грибы чрезвычайно разнообразны по строению. Вегетативное тело аскомицетов - разветвленный
септированный мицелий с перегородками, имеющими центральную пору, через которую могут
мигрировать из одной клетки в другую питательные вещества, вирусы и даже ядра. Клетки содержат
нефиксиро-ванное число ядер, редко одно, чаще 2, 3 и даже больше двадцати. У некоторых аскомицетов
мицелий может распадаться на отдельные клетки или почковаться, напри-мер у дрожжей (порядок
Endomycetales).
Основной признак аскомицетов - образование в результате полового процесса сумок, или асков. В сумке
происходит слияние ядер зиготы, а затем мейотическое деление диплоидного ядра и образование
гаплоидных аскоспор. У высших аскомицетов сумка не только представляет место образования
аскоспор, но и актив-но участвует в их распространении.
СТРОЕНИЕ КОНИДИЕНОСЦЕВ
ЭВРОМИЦЕТОВ
 СХЕМА ПОЛОВОГО
ПРОЦЕССА И СМЕНЫ
ЯДЕРНЫХ ФАЗ
ПОЛОВОЙ ПРОЦЕСС
СУМЧАТЫХ ГРИБОВ
КЛЕЙСТОТЕЦИИ
ПЕРИТЕЦИИ И АПОТЕЦИИ
SCLEROTINIA SCLEROTIUM НА
КОРНЕПЛОДЕ МОРКОВИ
ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ
МОЛИНИИ
 ЖИЗНЕННЫЙ
ЦИКЛ СПОРЫНЬИ
 BASIDIOMYCETES

Класс Basidiomycetes. Базидиомицеты считаются наиболее высокоразвитой

группой грибов. Это высшие грибы с хорошо развитым многоклеточным
мицелием. В перегородках большинства базидиальных грибов имеется
отверстие, заканчивающееся с обеих сторон плоскими дисками - долипоровая
септа, но оно затянуто перфорированной мембранной структурой -
парентосомой. К базидиомицетам от-носятся и микроскопические грибы, и
грибы с крупными плодовыми телами. Среди этих грибов есть паразиты
растений (например, широко распространенные и очень опасные для
сельскохозяйственных растений головневые и ржавчинные грибы),
многочисленные почвенные сапротрофы - хорошо всем известные шляпочные
грибы. К базидиомицетам относятся и микоризообразующие грибы, например
белый, подберезовик, подосиновик и многие другие лесные грибы. Есть среди
базидиальных грибов и сапротрофы на древесине - это многочисленные
трутовики, активные разрушители древесины и валежника.
РАЗВИТИЕ БАЗИДИЙ
 ТИПЫ БАЗИДИЙ
А,Б - Холобазидии
В,Г - Фрагмобазидии
 ЦИКЛ РАЗВИТИЯ
БАЗИДИОМИЦЕТОВ
 ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ
СТЕБЛЕВОЙ РЖАВЧИНЫ
ЗЛАКОВ
ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ
TILLETIA CARIES
 НЕСОВЕРШЕННЫЕ ГРИБЫ
Несовершенные грибы широко
распространены в природе, многие
вызывают плесневение и порчу
сельскохозяйственного сырья,
различных пищевых продуктов и
органических материалов.
К несовершенным грибам относятся
анаморфы грибов Aspergillus (леечная
плесень) и Penicillium (кистевидная
плесень), объединяющие более 200
видов и отличающиеся друг от друга
конидиальной стадией. Размножение
осуществляется в основном бесполыми
спорами - конидиями. При половом
процессе сумки образуются в
шаровидных плодовых телах -
клейстотециях.
 РОД CLADOSPORIUM

Род Cladosporium имеет

слабоветвящиеся
конидиеносцы, несущие на
концах цепочки конидий.
Мицелий, конидиеносцы и
конидии окрашены в оливково-
зеленый цвет. Эти грибы
характерны тем, что выделяют в
среду тёмный пигмент.
РОД GEOTRICHUM
ГРИБ ALTERNARIA
РОД TRIHODERMA
РОД FUSARIUM
ГРИБ BOTRYTIS
РАЗНООБРАЗИЕ КОНИДИЙ ГРИБОВ
ДРОЖЖИ
 КОЛОНИИ ДРОЖЖЕВЫХ
ГРИБОВ НА ПИТАТЕЛЬНОЙ
СРЕДЕ
1. пекарские дрожжи (Saccharomyces cerevisiae);
2. мечниковия прекраснейшая (Metschnikowia pulcherrima);
3. кандида земляная (Candida humicola);
4. родоторула клейкая (Rhodotorula glutinis);
5. родоторула красная (R. rubra);
6. родоторула золотистая (R. aurantiaca);
7. дебариомицес Кантарелли (Debaryomyces cantarelli);
8. криптококк Лавра (Cryptococcus laurentii);
9. надсония продолговатая (Nadsonia elongata);
10. спороболомицес розовый (Sporobolomyces roseus);
11. спороболомицес хольсатикус (S. holsaticus);
12. родоспоридиум диобоватум (Rhodosporidium diobovatum)
 Дрожжи

Ascomycetes
спорообразующие ТАКСОНОМЕТРИЯ ДРОЖЖЕЙ Basidiomycetes Deuteromycetes

Saccharomycetaceae
Дрожжи относятся к эукариотам и являются одноклеточными микроскопическими грибами. На основании характера полового процесса или его отсутствия дрожжи относят к трем классам
высших грибов - аскомицетов (сумчатые, подкласс голосумчатые), базидиомицетов (небольшая часть дрожжей) и дейтеромицетов.

Класс аскомицетов (Ascomycetes) включает три семейства дрожжей: Saccharomycetaceae, Schizosaccharomycetaceae и Saccharomycodaceae. Характерными признаками грибов этого класса
Schizosaccharomycetaceae
являются половое спороношение и наличие в асках (сумках) двух, четырех или восьми аскоспор.

В пищевой и микробиологической промышленности широко используются дрожжи рода Saccharomyces из семейства Saccharomycetaceae. Сахаромицеты применяются при производстве
спирта, вина, пива, кваса, хлеба, хлебопекарных дрожжей. В пивоварении используют различные штаммы дрожжей вида Saccharomyces cerevisiae, в хлебопечении - дрожжи видов
Saccharomyces cerevisiae и Candida milleri (ранее Saccharomyces minor). Некоторые представители семейства Saccharomycodaceae (родов Nadsonia, Saenko) участвуют в брожении при
Saccharomycodaceae
производстве хересных и шампанских вин. Все остальные виды дрожжей являются посторонними («дикими»), контаминирующими биотехнологический процесс на разных его стадиях.

Несовершенные дрожжи класса дейтеромицетов (Deuteromycetes) - это либо анаморфы известных аскомицетовых или базидомицетовых грибов, либо виды, для которых половая стадия не
установлена или она отсутствует. В этом классе выделяют семейство Сandidaceae c признаками аскомицетового аффинитета и два семейства - Cryptococcaceae (не образуют баллистоспор) и
Sporobolomycetaceae (образуют баллистоспоры) - с признаками базидиомицетового аффинитета. Дрожжи родов Candida и Trichosporon способны образовывать псевдомицелий.
Saccharomyces
Способность дрожжей вызывать спиртовое брожение привела к широкому использованию этих микроорганизмов в промышленности. Однако самопроизвольное развитие дрожжей в
сахаросодержащих субстратах вызывает их порчу (вспучивание, забраживание, изменение запаха и вкуса).

Техническое значение дрожжей основано на их способности превращать сахар в этиловый спирт и углекислый газ. В связи с этим издавна они получили общее название сахарных грибов,
Candida способны
или сахаромицетов. Trichosporon
образовывать способны
Дрожжи отличаются высоким содержанием белков и витаминов (Bi, Вз, В6, никотиновой кислоты).
псевдомицелий образовывать
псевдомицелий
 СЕМЕЙСТВО САХАРОМИЦЕТАЦЕЭ
(САХАРОМИЦЕТОВЫЕ, ИЛИ САХАРНЫЕ
ГРИБЫ)

Основная особенность - способность сбраживать

сахара. Клетки овальной или эллиптической
формы, довольно крупных размеров, вегетативное
размножение почкованием. Отдельные роды
отличаются формой спор, способом их образования
и прорастания. Сюда относятся важные в
промышленном отношении дрожжи, а также
вредители различных пищевых производств.
 СЕМЕЙСТВО ШИЗОСАХАРОМИЦЕТАЦЕЭ
(ШИЗОСАХАРОМИЦЕТОВЫЕ)
Особенность этих дрожжей состоит в том,
что вегетативное размножение
осуществляется не почкованием, а
поперечным делением материнской клетки
(иногда их называют делящимися
дрожжами). При половом размножении
образуют 4-8 спор в клетке. Отдельные
виды шизосахаромицетов применяются в
бродильной промышленности при
приготовлении особых сортов пива, другие
являются вредителями пищевых
производств.
 СЕМЕЙСТВО САХАРОМИКОДАЦЕЭ
(САХАРОМИКОДОВЫЕ, ИЛИ ЛИМОНОВИДНЫЕ
ДРОЖЖИ)
Крупные дрожжи, имеющие форму
лимона. Вегетативное размножение
необычно: оно начинается
почкованием, которое заканчивается
делением клетки. Образуют 1-4
споры в клетке. Обладают невысокой
бродильной способностью.
Представители этого семейства
являются вредителями ряда
бродильных производств.
ФОРМА АСКОСПОР У ДРОЖЖЕЙ
1 - сахаромицеты;
2 - клюйверомицеты;
3 - дебариомицеты;
4 - шванниомицеты;
5 - надсония;
6-7 - липомицеты;
8 - викерхамия;
9 - мечниковия;
10 - пихия;
11 и 12 - эндомикопсис;
13 - сахаромикоды
 СХЕМА СТРОЕНИЯ
ДРОЖЖЕВОЙ КЛЕТКИ
 СХЕМА ЛОКАЛИЗАЦИИ
ФЕРМЕНТОВ ДРОЖЖЕВОЙ КЛЕТКИ
1. Β-фруктофуранозидаза;
2. Мальтопермеаза
3. Фосфотаза
4. Аминопептидаза
5. Различные гидролазы
6. Мальтаза
7. Дегидрогиназы цикла Кребса
8. Ферменты цикла трикарбоновых кислот
9. Липаза
10. Ферменты пентозофосфатного цикла
 ОБЩАЯ СХЕМА
МЕТАБОЛИЗМА ДРОЖЖЕЙ
 ТИПЫ ВЕГЕТАТИВНОГО
РАЗМНОЖЕНИЯ У ДРОЖЖЕЙ
 РАЗМНОЖЕНИЕ ДРОЖЖЕЙ
В зависимости от вида дрожжи различаются способностью образовывать мицелий, аски
и почки. Самым распространенным способом размножения дрожжей является
почкование, и лишь немногие дрожжи размножаются делением.
Дрожжевая клетка дает потомство через 1,5—2 ч.
 ПОЧКОВАНИЕ
На материнской клетке формируется маленький бугорок
или почка, которая увеличивается в размерах, на каком-
то этапе отделяется от этой клетки или может остаться
на ней. Происходит следующее: ядро делится на две
части, одна из которых вместе с клеточными
элементами переходит в дочернюю клетку. Почка
постепенно увеличивается в размерах, и по мере роста в
месте ее соединения с материнской клеткой образуется
перетяжка, отграничивающая дочернюю клетку. Время
1 — клетка;
почкования в среднем составляет 2 ч, часто образуется
2 — клетка с
несколько почек, причем сразу может начаться почкой и сросток
почкование и молодых клеток. Нередко образуются почкования;
3 — сумка со
множества объединенных между собой клеток, которые
спорами
называют сростками почкования.
 ОБРАЗОВАНИЕ СПОР У ДРОЖЖЕЙ
Происходит и бесполым, и половым путем. При бесполом размножении ядро
дрожжевой клетки делится на несколько частей, в которых образуются S. cerevisiae
аскоспоры. При образовании спор половым путем сначала происходит слияние (электронная
клеток и затем образуются споры. микрофотография)
Чаще всего споры круглые или овальные, но могут быть интересной игловидной
и шляповидной формы, с различными выростами. Споры дрожжей, как и других
грибов, устойчивее вегетативных клеток к неблагоприятным воздействиям
окружающей среды, однако не такие стойкие, как споры бактерий. Попав в
благоприятные условия, споры дрожжей прорастают в вегетативные клетки.
У культурных дрожжей (т.е. специально выведенных и культивируемых)
способность к спорообразованию ослаблена, а иногда они вообще «не умеют»
образовывать споры. В промышленности наиболее широко используют два вида
дрожжей рода Saccharomyces: S. cerevisiae применяют при производстве
пищевого спирта, в пивоварении, хлебопечении и др., S. ellipsoideus используют
преимущественно в виноделии. S. ellipsoideus (электронная
микрофотография)
 АСПОРОГЕННЫЕ (ИЛИ ЛОЖНЫЕ)
ДРОЖЖИ
Помимо спорообразующих существуют дрожжи, не образующие спор. Их называют
аспорогенные (или ложные) дрожжи, или несовершенные дрожжеподобные организмы.
Их относят к дейтеромицетам. Наибольшее значение имеют роды кандида {Candida) и
торулопсис (Torulopsis). Они широко распространены в природе. Большинство дрожжей
этих родов не способно к спиртовому брожению. Отдельные виды Torulopsis используют
в производстве кумыса. Дрожжи из рода Candida, способные к образованию
псевдомицелия и не способные к спиртовому брожению, являются вредителями в
производстве вина и пива. Они опасны при производстве пекарских дрожжей, часто
вызывают порчу продовольственных товаров, например квашеных овощей.
 СПОСОБЫ ВЕГЕТАТИВНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ

Форма дрожжевой клетки в значительной степени зависит от способа вегетативного размножения.

Оно может происходить путем почкования, деления и почкующегося деления. При почковании возникают круглые, яйцевидные
или овальные клетки (1). Почкование - наиболее характерный и широко распространенный у дрожжей способ вегетативного
размножения.
Почки у многих видов и родов дрожжей возникают неупорядоченно, т. е. на любой части поверхности клетки, по одной или по
две и более одновременно. Такой тип почкования принято называть многосторонним, а в последнем случае - множественным
(2).
Иногда почки закладываются по полюсам, или на широком основании, но затем почкование заканчивается обычным образом
(3,4). Среди почкующихся дрожжей есть такие, которые выделяются в самостоятельные роды из-за особой формы их клеток.
Это дрожжи с треугольными (Trigonopsis ), серповидными (Selenotila) или стреловидными (Brettanomyces) клетками (5-7).
В результате почкования без отделения клеток у некоторых дрожжей возникают структуры примитивного или хорошо
развитого ложного мицелия с бластоспорами и бластоконидиями (9). Последнее характерно для рода кандида (Candida).
Почкующееся деление отличается от истинного почкования тем, что почка, закладывающаяся на широком основании и обычно
у одного из полюсов (10). Клетки при этом приобретают грушевидную, веретеновидную или лимоновидную форму.
Деление распространено среди дрожжей значительно реже, чем почкование. Клетки после деления могут оставаться
одиночными, как у шизосахаромицетов (Schizosaccharomyces 11), или образуют мицелий, который иногда распадается на
артроспоры, как у трихоспорона (Trichosporon 12).
Необычный способ вегетативного размножения путем почкования на длинных выростах описан у дрожжей, которые выделены
на этом основании в самостоятельный род стеригматомицес (Sterigmatomyces 8).
Образование с силой отстреливающихся клеток - баллистоспор, сидящих на концах заостренных стеригм, характерно для
спороболомицетов (Sporobolomyces, 13) и буллеры (Bullera).
У некоторых дрожжей описаны вегетативные эндоспоры, которые возникают в отдельных клетках или в клетках мицелия в
количестве от 2 до 10 и более (14).
 РАЗЛИЧНЫЕ ТИПЫ
КЛЕТОК У ДРОЖЖЕЙ
1 – овальные клетки с многосторонним почкованием у
Saccharomyces cerevisiae,
2 – круглые клетки с множественным почкованием у
Debaryomyces hansenii и Lipomyces starkeyi,
3 – энтеробластическое почкование на узком и широком
основании у Cryptococcus,
4 – симподиальные почки у Sympodiomyces
5 – стреловидные клетки у Brettanomyces,
6 – треугольные клетки у Trigonopsis variabilis,
7 – серповидные клетки у Metschnikowia lunata,
8 – почкование на стеригмах у Fellomyces,
9 – ламповидные клетки у Schizoblastosporion starkeyi-
henricii,
10 – лимоновидные (апикулятные) клетки у Nadsonia,
11 – почкование на очень широком основании у
Schizosaccharomyces.
 МИЦЕЛИЙ, РАСПАДАЮЩИЙСЯ
НА АРТРОСПОРЫ

1 – Geotrichum candidum, 2 – Trichosporon asahii.

Шрамы почкования на дрожжевой клетке.
 МНОГОСТОРОННЕЕ И
МНОЖЕСТВЕННОЕ ПОЧКОВАНИЕ

Saccharomyces cerevisiae Lipiomyces starkeyi

РАЗЛИЧНЫЕ ВИДЫ
ПСЕВДОМИЦЕЛИЯ

1, 2 – примитивный (из клеток одного

типа),
3, 4 – сложный, дифференцированный
на стволовые клетки и бластоспоры.
БАЛЛИСТОСПОРЫ У ДРОЖЖЕЙ

1-3 - Sprobolomyces,
световой микроскоп,
4 – Bulleromyces,
сканирующий
электронный микроскоп.
 ХЛАМИДОСПОРЫ У ДРОЖЖЕЙ

1 – Phaffia rhodozyma,
2 – Metschnikowia pulcherrima,
3 – хламидоспоры на мицелии у
Candida albicans.
 КАПСУЛЫ ДРОЖЖЕЙ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ
СПОСОБАХ МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

1 – световой микроскоп, негативное контрастирование тушью,

2 – сканирующий электронный микроскоп,
3 – просвечивающий электронный микроскоп.
 ЖИЗНЕННЫЕ ЦИКЛЫ ГАПЛО-ДИПЛОИДНЫХ
АСКОМИЦЕТОВЫХ ДРОЖЖЕЙ
Saccharomyces cerevisiae. Эти гомоталличные дрожжи вегетируют преимущественно в диплоидном
состоянии, но у них имеется короткая вегетативная гаплоидная фаза. Диплоидная клетка в условиях
дефицита легкодоступных источников углерода прекращает почковаться, и ядро её делится мейотически. В
результате она превращается в аск с 4 гаплоидными аскоспорами, которые после освобождения из аска
прорастают и образуют гаплоидное поколение. Гаплоидные клетки обычно мельче диплоидных и имеют
более округлую форму. Шрамы почкования у них сближены, почки образуются группами в одном локусе.
После нескольких циклов почкования две клетки конъюгируют и сливаются, восстанавливая диплоидное
состояние.
Metschnikowia pulcherrima. Диплоидные клетки этого вида размножаются вегетативно почкованием, но
отдельные клетки увеличиваются в размерах, образуют утолщенные оболочки и превращаются в
диплоидные хламидоспоры. При прорастании хламидоспоры её ядро мейотически делится, и
непосредственно из хламидоспоры при ее прорастании образуетсяаскс1-2 игловидными аскоспорами.
Зрелые аскоспоры прорастают и дают начало гаплоидным почкующимся клеткам. Гаплоидные клетки после
копуляции восстанавливают диплофазу. Все эти стадии довольно стабильны, поэтому в культурах
Metschnikowia pulcherrima присутствуют одновременно мелкие гаплоидные клетки, более крупные
диплоидные, а также хламидоспоры.
СХЕМА ПОВЕДЕНИЯ ЯДРА ВО ВРЕМЯ МЕЙОЗА
И ОБРАЗОВАНИЕ АСКОСПОР У
SACCHAROMYCES CEREVISIAE

1,2 - первое деление:

- удвоение бляшки,
- образование веретена,
3,4 - второе деление, формирование клеточной
стенки аскосор,
5 - аск с аскоспорами.
 ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИИ
ДРОЖЖЕЙ
Для изучения морфологии дрожжей их выращивают в стерильном солодовом сусле с
концентрацией сухих веществ от 8 до 10 % или в глюкозопептонной среде при
температуре 25-28 °С в течение 2-3 сут
Дрожжи вида Saccharomyces cerevisiae:
а - молодые клетки;
б - зрелые;
в - старые
 МОЛОДЫЕ АКТИВНЫЕ КЛЕТКИ

12-18-часовая культура. При микроскопировании имеют тонкую

прозрачную оболочку и гомогенную, без видимых включений,
цитоплазму, небольшую вакуоль. Иногда в цитоплазме
встречаются одно-два зернышка полифосфатов. Молодые
дрожжи интенсивно размножаются, при этом доля
почкующихся клеток может достигать 70-80 %.
 ЗРЕЛЫЕ ДРОЖЖИ
24-48-часовая культура. Имеют зернистую неоднородную или гетерогенную цитоплазму. Количество клеток с
вакуолями увеличивается, иногда обнаруживаются клетки с двумя и более вакуолями. Процесс размножения
дрожжей замедляется; процент почкующихся клеток составляет в среднем 10-15 %. Внутри клетки появляются
жировые включения, которые хорошо видны без специального окрашивания при полузакрытой диафрагме. В
зрелых дрожжах встречается до 2-4 % мертвых клеток, которые выявляются с помощью прижизненного
окрашивания суспензии дрожжей слабым раствором метиленового голубого. Метиленовый голубой проникает в
цитоплазму только через оболочку мертвых клеток, в результате чего они окрашиваются в голубой цвет, тогда как
живые клетки остаются бесцветными. Доля запасных веществ - липидов, гликогена - возрастает по мере роста
клетки. Для зрелой культуры дрожжей характерно наличие в клетках большого количества гликогена. Он
откладывается в вакуолях как резервное вещество и расходуется по мере старения клетки. При культивировании
дрожжей на богатых углеводами средах без аэрации количество клеток с гликогеном составляет 65-70 %, что
свидетельствует об «упитанности» и зрелости дрожжей. Гликоген выявляют путем окрашивания прижизненных
препаратов дрожжей раствором йода. Наряду с гликогеном в зрелых дрожжах накапливается еще одно резервное
вещество - метахроматин (волютин), который окрашивается в краснофиолетовый цвет при окрашивании
фиксированного препарата дрожжей метиленовым голубым.
 СТАРЫЕ ДРОЖЖИ

48 ч и более. Имеют утолщенную оболочку, которая хорошо видна

при микроскопировании. Цитоплазма зернистая, гетерогенная,
вакуоли крупные, по нескольку в одной клетке. В популяции старой
культуры присутствует большое количество клеток, содержащих
липиды в виде круглых, резко преломляющих свет включений.
Характерным признаком старой культуры является наличие
значительного количества мертвых клеток.
 ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ
Происходят при изменении условий культивирования: переходе от
аэробного процесса к анаэробному, замене состава среды и концентрации
лимитирующих веществ, а также при стрессовых физиологических
воздействиях.
В аэробных условиях дрожжи интенсивно размножаются, клетки более
мелкие и однородные, митохондрии в них активно делятся, число их
заметно возрастает.
В условиях анаэробного брожения митохондрии объединяются, в клетках
накапливается больше гликогена, и он выглядит в виде крупных гранул.
 ДРОЖЖИ, ВЫЗЫВАЮЩИЕ ПОРЧУ
ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

Наряду с культурными дрожжами в биотехнологических процессах могут встречаться

так называемые «дикие» дрожжи, которые конкурируют с культурными за питательные
вещества субстрата и вызывают порчу или ухудшение органолептических показателей
готового продукта. Чаще всего среди «диких» встречаются дрожжи родов
Saccharomyces, Kloecera, Саndida, Torulopsis, Pichia, Hansenula, Brettanomyces,
Rhodotorula и некоторые другие.
 РОД SACCHAROMYCES

Saccharomyces pastorianus - клетки эллипсовидные или колбасовидные,

реже овальной формы. Не оседают с культурными дрожжами при
главном брожении пива, при их размножении пиво мутнеет, плохо
осветляется, приобретает неприятный запах, терпко-горький привкус.
Saccharomyces turbidans - клетки овальной или эллипсовидной формы,
часто соединяются в цепочки по 4-5 клеток. В пиве вызывают сильную
муть, порчу вкуса.
Saccharomyces bayanus - клетки крупные, овальные. Обнаруживаются в
пиве, сидре, виноматериалах. Они придают готовому продукту
неприемлемые вкус и запах в связи с образованием значительных
количеств эфиров, диацетила, уксусной кислоты, серосодержащих
летучих кислот.
Saccharomyces validus - клетки овальные или сильно удлиненные,
располагаются попарно или небольшими скоплениями. Вызывают
помутнение пива и неприятный специфический запах.
 РОД KLOECERA
Kloecera apiculata - клетки мелкие,
лимоновидные, заостренные на одном или двух
полюсах, располагаются одиночно, реже парами.
При старении приобретают вытянутую
веретенообразную форму. Размеры клеток (5-8) х
(2-4) мкм. При развитии в пиве накапливают
летучие кислоты, эфиры и сероводород, придавая
продукту неприятный специфический запах.
 РОД HANSENULA
Hansenula anomalia - клетки круглые,
эллипсовидные, иногда колбасовидные
или булавовидные. Дрожжи рода
Hansenula образуют большое количество
спиртов и эфиров, придавая пиву резкий
запах. Подавляют развитие культурных
дрожжей.
РОД PICHIA
Pichia farinosa - клетки округлые, овальные,
располагаются одиночно или соединены в
пары. Размеры клеток (4,0-7,5) х (3-6) мкм.
Дрожжи этого вида, а также вида P.
membranifaciens образуют на поверхности
пива белую пленку. Накапливают в продукте
альдегиды, эфиры, летучие кислоты,
придающие пиву фруктовый или
лекарственный привкус. При доступе
воздуха во время розлива размножаются и
вызывают помутнение пива.
 РОД BRETTANOMYCES
Brettanomyces bruxellensis - клетки имеют разную форму: овальную, сильно
удлиненную, палочковидную, иногда со стрельчато-заостренными концами. B.
bruxellensis контаминируют сусло и пиво. Развитие этих дрожжей сопровождается
появлением в пиве постороннего фруктового запаха и помутнения. Другие виды (В.
anomalus, В. intermedius) вызывают порчу пастеризованного пива, придавая ему
специфический неприятный запах.

Оптическая микрофотография,
показывающая появление дрожжей
Saccharomyces cerevisiae (A) и Brettanomyces
bruxellensis (B), присутствующих в посевном
материале. Стрелки указывают на стон
клеток. Увеличение в 1000 раз.
 РОД CANDIDA
Основные представители этого рода - C. mycoderma, C. utilis, C.
krusei, C. guillermondii - имеют клетки овальные или удлиненно-
цилиндрические. Размеры клеток (4-16) х (2-5) мкм. Дрожжи этого
рода не образуют спор и являются аспорогенными. Многие
представители этого рода являются вредителями в производстве
вина, пива, пекарских дрожжей. На поверхности сусла и пива часто
образуют плотную белую или сероватую сухую пленку. Вызывают
помутнение пива, придают ему неприятный вкус и запах.
В процессе накопления биомассы при производстве пекарских
дрожжей дрожжи рода Candida конкурируют с культурными
дрожжами за питательные вещества субстрата, снижают
мальтазную активность готовых дрожжей.
 РОД TORULOPSIS
Клетки дрожжей рода торулопсис мелкие, округлые или овальные, размерами (5-8) х (2-
5). Дрожжи этого рода часто выделяют из кефирных грибков (Torulopsis kefiri).Дрожжи
вида Torulopsis colliculosa являются вредителями пивоваренного и дрожжевого
производства.
 РОД RHODOTORULA
Rhodotorula roseum - клетки округлые
или овальные, одиночные, соединенные
в пары, псевдомицелия не образуют.
Размеры клеток (5-8) х (2,5-5,0) мкм. На
питательном агаре R.. roseum образует
круглые блестящие колонии розового
цвета. При размножении на
поверхности пищевых продуктов
вызывают их пигментацию.
 ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА
МЕРТВЫХ КЛЕТОК
Содержание мертвых клеток - важный показатель качества пивных и пекарских дрожжей. В
дрожжах хорошего качества должно содержаться не более 5 % мертвых клеток. Увеличение
количества мертвых клеток указывает на наличие неблагоприятных факторов при выращивании
дрожжей. При значительном количестве мертвых клеток возможны нарушения технологического
процесса: медленное брожение, развитие посторонних видов микроорганизмов.

При определении количества мертвых клеток дрожжей, культивируемых на неокрашенных

питательных средах, удобно окрашивать их метиленовым голубым. Для этого готовят раствор
красителя на дистиллированной воде в разведении 1:10000. Препарат готовят следующим образом:
на предметное стекло наносят каплю исследуемой культуры, добавляют в нее каплю раствора
метиленового голубого и накрывают покровным стеклом. На покровное стекло наносят каплю
иммерсионного масла и микроскопируют с увеличением 90х. Мертвые клетки окрашиваются в
голубой цвет, а живые остаются бесцветными. В 10 полях зрения приготовленного препарата
подсчитывают число мертвых клеток.
 РАЗДЕЛ 2
1. Питательные среды
1. Консистенция
2. Назначение
1. Универсальные
2. Дифференциально-диагностические
3. Селективные
3. Происхождение
1. Естественные
2. Полусинтетические
3. Синтетические
1. Размножение бактерий в жидкой питательной среде
2. Размножение бактерий на плотной питательной среде
 ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Питательные среды в микробиологии — это
субстраты, на которых выращивают микроорганизмы
и тканевые культуры. Они применяются для
диагностических задач, выделения и изучения чистых
культур микроорганизмов, получения вакцин и
лекарств, для других биологических,
фармацевтических и медицинских целей.
В микробиологии питательные среды разделяют на:
— среды определенного и неопределенного состава;
— натуральные, полусинтетические и синтетические;
— основные, диагностические, элективные;
— плотные, полужидкие, жидкие, сухие, сыпучие.
 КОНСИСТЕНЦИЯ
В зависимости от консистенции питатель­ные среды могут быть:
• жидкими,
• полужидки­ми,
• плотными.
Увеличение густоты осуществляется посредством добавления желатина или агар-агара.
Последний ингредиент не является для микробов питательным веществом, его задача состоит в создании оптимальной плотности.
При этом температура плавления агара достигает 80-100 градусов, что позволяет выращивать на средах с его содержанием
микроорганизмы, нуждающиеся в создании парниковых условий.
Агар — полисахарид, получаемый из водо­рослей. Он плавится при температуре 100 °С, но при охлаждении остывает при
температу­ре 45-50 °С. Агар добавляют в концентрации 0,5 % — для полужидких сред и 1,5—2 % — для создания плотных сред.
Желатин же представляет собой животный белок, поэтому субстраты с его содержанием можно применять в условиях комнатной
температуры.
К плотным субстанциям относят свернувшуюся сыворотку крови, яичный белок, картофель. Некоторые производятся в виде
порошков и требуют перед употреблением растворения и доведения до нужной консистенции.
 НАЗНАЧЕНИЕ
По назначению среды разделяют на ряд групп:

- Универсальные (простые), пригодные для различных нетребовательных микроорганизмов

(мясо- пептонный бульон- МПБ, мясо- пептонный агар- МПА);
- Специальные - среды для микроорганизмов, не растущих на универсальных средах (среда
Мак- Коя на туляремию, среда Левенштейна- Иенсена для возбудителя туберкулеза);
- Дифференциально-диагностические- для дифференциации микроорганизмов по
ферментативной активности и культуральным свойствам ( среды Эндо, Плоскирева,
Левина, Гисса);
- Селективные (элективные)- для выделения определенных видов микроорганизмов и
подавления роста сопутствующих- пептонная вода, селенитовая среда, среда Мюллера.
 УНИВЕРСАЛЬНЫЕ
Основные среды служат для выращивания различных микробных культур, а также как
основа для получения элективных и диагностических сред. К основным средам,
например, относится мясной бульон, мясной агар, сусло, бульон Хоттингера. Для разных
культур в основные среды добавляют некоторые компоненты для стимулирования роста
— это могут быть витамины, аминокислоты, природные экстракты. Так, возбудитель
коклюша выращивается на среде с добавлением крови.
 ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ
Диагностические среды служат для идентификации
микроорганизмов. По изменению среды и ее
химического состава (изменению окраски среды,
появлению пузырьков газа и т.п.) определяют вид
бактерий. В такие среды часто добавляют химические
красители-индикаторы, такие как кристаллический
фиолетовый, малахитовый зеленый, метиленовый
синий, фусин и другие. Они помогают разделить
близкие культуры. В розовой среде Эндо, подкрашенной
фусином, кишечная палочка образует колонии красного
цвета, а тифозные и дизентерийные колонии бактерий
— бесцветные.
 СЕЛЕКТИВНЫЕ
Среды для избирательного (селективного)
выращивания биологических культур. Состав среды
подбирается так, чтобы быть оптимальным для
одного вида или группы близкородственных
бактерий и подавлять развитие бактерий других
видов. Например, добавление в среду хлористого
натрия в определенной концентрации подавляет рост
всех бактерий, кроме стафилококков. С помощью
элективных культур получают чистые культуры для
дальнейшего размножения и накопления.
 ПРОИСХОЖДЕНИЕ
По происхождению среды делят на:
1. Естественные,
2. Полусинтетические,
3. Синтетические.
 ЕСТЕСТВЕННЫЕ
Естественными питательными средами называют
те, что получают из природных материалов:
крови, мяса, белков, органов животных,
растительных экстрактов и растительного сырья.
Примером таких сред могут быть мясной бульон,
молочная сыворотка, пивное сусло, настои сена,
агар-агар, кровь, желчь. Натуральные среды
относятся к средам с неопределенным составом,
который в разное время могут иметь разное
количество тех или иных компонентов.
 ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКИЕ
Полусинтетические среды тоже считаются средами с неопределенным составом. Они
готовятся на основе натуральных питательных сред, но в них добавляются вещества,
которые гарантируют культурам активное размножение. На полусинтетических средах
выращивают культуры для получения витаминов, аминокислот, антибиотиков в
промышленной фармацевтике.
 СИНТЕТИЧЕСКИЕ
Синтетические среды готовят из ингредиентов
известного состава, в известной концентрации и
соотношениях, поэтому эти среды относятся к
средам определенного состава. С их помощью
изучают метаболизм микроорганизмов, их
биологические и физиологические свойства,
возможность получения веществ, подавляющих
или, наоборот, стимулирующих их развитие.
 РАЗДЕЛ 3
1. Культивирование микроорганизмов
2. Некультивируемые формы бактерий
1. Размножение бактерий в жидкой питательной среде
2. Размножение бактерий на плотной питательной среде
3. Фазы размножения бактерий
1. Лаг-фаза
2. Фаза логарифмического (экспоненциального) роста
3. Фаза стационарного роста
4. Фаза гибели
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ
МИКРООРГАНИЗМОВ
 ОГЛАВЛЕНИЕ
1. Тема 1
Методы стерилизации. Подержание (хранение
) культур микроорганизмов
2. Тема 2
Способы культивирования микроорганизмов
 МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ. ПОДЕРЖАНИЕ
(ХРАНЕНИЕ) КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ
1. Правила работы в учебной микробиологической лаборатории
2. Определение понятий асептика, антисептика, дезинфекция, стерилизация
3. Методы стерилизации
4. Методы контроля стерильности
5. Методы хранения культур микроорганизмов
 ПРАВИЛА РАБОТЫ В УЧЕБНОЙ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
Основное правило работы в микробиологической лаборатории –
правильная организация работы.
1. Общие правила работы
2. Запреты
3. Обязанности после окончания работы
4. Подготовка к исследованию
 ОБЩИЕ ПРАВИЛА РАБОТЫ

1 К работе в лаборатории допускаются лица после прохождения инструктажа по технике безопасности.

2 Все должны работать в медицинских халатах. Вход без халата воспрещен. Необходимо иметь сменную обувь.
3 Каждый студент имеет в лаборатории постоянное рабочее место и микроскоп для работы.
4 Каждый студент на занятии должен иметь тетрадь протоколов лабораторных работ, простой и цветные карандаши, ластик,
линейку.
5 На каждое занятие назначают дежурных.
6 На рабочем столе не должно быть никаких посторонних предметов. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке,
а личные вещи храниться в специально отведенных местах.
7 Перед началом работы и после ее окончания следует тщательно вымыть руки, а при необходимости – обработать
дезинфицирующим раствором.
8 При попадании биологического материала на стол и т. д., это место необходимо тщательно вытереть дезинфицирующим
раствором.
9 Использованные пипетки, предметные и покровные стекла, шпатели, ватные тампоны помещать в сосуд с дезинфицирующим
раствором либо специальные кюветы. Пинцеты, бактериальные петли, иглы прожигать в пламени горелки.
10 Отработанные культуры, использованный микробный материал подвергать обеззараживанию в автоклаве.
11 В ходе выполнения работы оформляется отчет – протокол соответствующего лабораторного занятия
 ЗАПРЕЩАЕТСЯ
1. Работать без халатов, выпускать из-под спецодежды шарфики и длинные
манжеты, а из прически выпускать волосы.
2. Входить в учебную лабораторию в головных уборах и верхней одежде.
3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу. Не допускать
излишних разговоров и ненужных переходов.
4. Класть на столы сумки и пакеты.
5. Включать мобильные телефоны во время занятий.
6. Принимать во время перерыва посетителей в лаборатории.
 ПОСЛЕ ОКОНЧАНИЯ РАБОТЫ
СТУДЕНТЫ ДОЛЖНЫ
1. Привести в порядок рабочее место.
2. Отработанные материал и инструменты, в том числе
стекла, поместить в специальный кювет.
3. Привести в порядок микроскоп.
4. Тщательно вымыть руки с мылом.
5. Подать протокол работы преподавателю для подписи
 ПОДГОТОВКА К
ИССЛЕДОВАНИЮ

Подготовка к лабораторным работам проводится согласно

тематическому плану по вопросам методического
руководства. В процессе подготовки изучается
прорабатываемая тема по рекомендуемой литературе,
конспекту лекций, руководству к лабораторным занятиям.
 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОНЯТИЙ АСЕПТИКА,
АНТИСЕПТИКА, ДЕЗИНФЕКЦИЯ,
СТЕРИЛИЗАЦИЯ
1. Асептика – комплекс мероприятий, направленных на предупреждение попадания микробов на
(в) какой-либо объект. Создание асептических условий предусматривает дезинфекцию
помещений, стерилизацию инструментов и материалов.
2. Антисептика обозначает использование химических веществ, убивающих или подавляющих
размножение микроорганизмов, находящихся на коже или слизистых оболочках макроорганизма.
3. Дезинфекция – уничтожение на (в) каком-либо объекте или окружающей среде микробов. Для
дезинфекции используют фенол, формалин, спирт, соединения хлора (хлорамин, хлорную
известь), йод, сулему, диацид, перекись водорода и т.д., а также термические, лучевые и другие
воздействия.
4. Стерилизация – процесс, направленный на полное уничтожение в объекте всех
жизнеспособных микроорганизмов и их спор. Знание и умелое применение методов
стерилизации необходимо каждому специалисту микробиологу
 МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ
Стерилизации подвергаются питательные среды, лабораторная посуда, инструменты,
растворы и т. д. Можно условно выделить термическую(стерилизации высокой
температурой) и стерилизацию.

Термическая Холодная
Прокаливание и обжигание в пламени спиртовки Использование дезинфектантов и антисептиков
Кипячение Стерилизация фильтрованием
Сухожаровая (горячим паром) стерилизация Глубинные Мембранные

Пастеризация Стерилизация с использованием облучения

Стерилизация насыщенным паром под давлением УФ-облучение
(автоклавирование)
Дробная стерилизация (тиндализация) Рентгеновское и γ-облучение
 ПРОКАЛИВАНИЕ И ОБЖИГАНИЕ В
ПЛАМЕНИ
Наиболее быстрые и доступные методы стерилизации. При прокаливании
необходимо помнить, что наивысшая температура развивается в верхней и
периферической частях пламени (до 1 560 °С), поэтому не следует опускать петлю
непосредственно к горелке При прокаливании происходит сгорание
микроорганизмов и их спор. Такими методами стерилизуют бактериологические
петли, иглы, шпатели, пинцеты, предметные и покровные стекла, фарфоровые
ступки и другие инструменты. При обжигании бактериологической петли (или иглы)
проволоку прокаливают докрасна в пламени горелки и одновременно обжигают
примыкающую к петле часть держателя, которая будет вводиться внутрь сосуда,
содержащего микроорганизмы. При прокаливании петлю держат в пламени почти
вертикально, чтобы вся проволока была равномерна раскалена. Сразу же после
стерилизации петлю (иглу) вводят в сосуд с микроорганизмами.
 КИПЯЧЕНИЕ
Простейший способ стерилизации. Кипячением в дистиллированной воде
стерилизуют мембранные фильтры. Режим стерилизации для мембранных
фильтров – 30–60 мин с момента энергичного закипания воды.
Металлические инструменты, мелкие стеклянные детали лучше всего
кипятить в стерилизаторах. В микробиологической практике таким способом
стерилизации пользуются редко, поскольку продолжительное кипячение
может повредить обрабатываемый материал, а сокращение времени
кипячения может не обеспечить стерильности.
 ДРОБНАЯ СТЕРИЛИЗАЦИЯ (ТИНДАЛИЗАЦИЯ
ИЛИ СТЕРИЛИЗАЦИЯ ТЕКУЧИМ ПАРОМ)

Используется для стерилизации питательных сред и растворов, которые изменяют

свойства при применении температур выше 100 °С. К таким объектам относятся
витамины, некоторые среды, углеводы, молоко и т.д. Метод разработан в 1877 году
Дж. Тиндалем. Согласно этому методу, жидкость доводят до 100 °С и продолжают
выдерживать при этой температуре 10 мин. За это время все вегетативные клетки
погибают, жизнеспособными остаются только споры. Затем жидкость охлаждают до
температуры, оптимальной для прорастания спор (30 °С) и через несколько часов
снова пропускают пар. Двух–трех подобных циклов обычно бывает достаточно для
уничтожения всех имеющихся спор. При тиндализации резервуар с кипящей водой
расположен в нижней части аппарата, над ним расположена сетка с
устанавливаемыми стерилизуемыми растворами
 СУХОЖАРОВАЯ СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИЛИ
СТЕРИЛИЗАЦИЯ СУХИМ ГОРЯЧИМ ВОЗДУХОМ

Проводится в сушильных шкафах. Режим стерилизации: 160–170

°С на протяжении 2 часов. При этом предполагается, что погибают
как клетки, так и споры. Таким способом стерилизуют стеклянную
посуду, инструменты и др., завернутые в бумагу или закрытые
ватно-марлевыми пробками для сохранения стерильности после
стерилизации. Таким способом можно стерилизовать
минеральные и растительные масла, жиры, вазелин, воск.
 ПАСТЕРИЗАЦИЯ

Заключается в однократном прогреве материала при температурах ниже 100

°С и направлена на уничтожение вегетативных клеток. Этот метод широко
используется в пищевой промышленности для обработки продуктов, которые
теряют вкусовую и пищевую ценность при кипячении: молока, ягодных и
фруктовых сиропов, соков, пива и т. д. В микробиологической практике
пастеризацией пользуются для получения накопительных культур
спорообразующих бактерий. В лабораторных условиях пастеризацию
проводят либо на водяной бане либо в ультратермостате при следующих
режимах: 60–70 °С в течение 15–30 мин; 80 °С в течение 10–15 мин.
 СТЕРИЛИЗАЦИЯ НАСЫЩЕННЫМ ПАРОМ
ПОД ДАВЛЕНИЕМ ИЛИ АВТОКЛАВИРОВАНИЕ

Один из наиболее эффективных методов стерилизации, так как стерилизуемый объект

подвергается одновременному воздействию как высокой температуры, так и
повышенному давлению пара. Погибают как вегетативные клетки, так и споры
микроорганизмов. Процесс проводится в специальных приборах – автоклавах,
закрывающихся герметично. Основные используемые режимы стерилизации следующие:
• 15–30 мин при избыточном давлении 0,5 атм (температура достигает 110–112 °С);
• 15–45 мин при избыточном давлении 1,0 атм (температура достигает 121 °С);
• 10–30 мин при избыточном давлении 1,5 атм (температура достигает 126 °С).
Таким способом стерилизуют питательные среды, растворы, посуду, инструменты,
фильтры и т. д.
 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЕЗИНФЕКТАНТОВ
И АНТИСЕПТИКОВ
При холодной стерилизации используют химические вещества или проводят воздействие на объект факторами физической
природы. Химические методы подавления жизнедеятельности микроорганизмов предполагают использование дезинфектантов и
антисептиков, имеющих неспецифический эффект, либо использование антибиотиков и синтетических антимикробных препаратов
с избирательным противомикробным действием.
Дезинфицирующие вещества классифицируются по группам: кислоты, щелочи, галогены, тяжелые металлы, четвертичные
аммониевые основания, фенольные соединения, альдегиды, кетоны, спирты, амины и перекиси.
Устойчивость микроорганизмов к их действию может существенно меняться в зависимости от таких факторов как концентрация
активного компонента, длительность контакта, рН, температура, влажность, присутствие органического вещества. Химические
средства неспецифического действия используются для обработки помещений, оборудования, различных предметов.
Например, спирты используются в концентрации 60–70 % и эффективны в отношении вегетативных клеток. Фенолы и их
производные применяются для дезинфекции помещений.
Среди используемых летучих стерилизующих веществ можно назвать окись этилена, окись пропилена, озон, метилбромид,
формальдегид. Указанные вещества могут быть использованы для стерилизации пластмассовых центрифужных пробирок,
пластмассовых чашек Петри, оптических инструментов, сыворотки крови и др.
 СТЕРИЛИЗАЦИЯ ФИЛЬТРОВАНИЕМ

Стерилизация фильтрованием используется для веществ, которые не выдерживают термической обработки

(растворов белков, аминокислот, углеводов, витаминов, углеводородов, антибиотиков, сыворотки). Способ
заключается в пропускании жидкостей и газов через специальные мелкопористые фильтры, диаметр пор
которых не превышает 0,45–0,20 мкм. Для пропускания раствора через фильтр требуется вакуум или
давление.
Существуют два основных типа фильтров – глубинные и мембранные.
Различают фильтры: мембранные, получаемые на основе нитроцеллюлозы; асбестовые или фильтры Зейтца,
получаемые на основе смеси асбеста и целлюлозы; фарфоровые или свечи Шамберлана, получаемые из
смеси кварцевого песка и коалина, сплавленные между собой; стеклянные, полученные из стекла «Пирекс».
Перед употреблением фильтрующее устройство должно быть простерилизовано. Стерилизуют либо
длительным кипячением либо автоклавированием. Прибор собирают в асептических условиях
непосредственно перед работой. Фильтры Зейтца автоклавируют в собранном виде, предварительно завернув
в бумагу.
 ТИПЫ ФИЛЬТРОВ – ГЛУБИННЫЕ И
МЕМБРАННЫЕ.
Глубинные состоят из волокнистых или гранулированных материалов,
которые спрессованы, свиты или связаны в лабиринт проточных каналов.
Частицы задерживаются в них в результате адсорбции и механического
захвата в матриксе фильтра.
Мембранные фильтры имеют непрерывную структуру и захват ими частиц
определяется размером пор. Фильтры содержат различные природные
(коалин, асбест, целлюлоза) или синтетические (производные целлюлозы)
материалы.
 СТЕРИЛИЗАЦИЯ С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ УФ ОБЛУЧЕНИЯ
Пригодна для термолабильных материалов. Ультрафиолетовые (УФ) лучи (250–270 нм)
используются для стерилизации центрифужных пробирок, наконечников для пипеток и
т.д. Время облучения определяется мощностью лампы, временем воздействия, видовым
составом микроорганизмов загрязненного материала. Вегетативные формы более
чувствительны к облучению, чем споры, которые в 3–10 раз более устойчивы.
От УФ-облучения микроорганизмы могут быть защищены органическими веществами,
пылью или другими защитными оболочками.
Недостатком при использовании данного метода стерилизации является низкая
проникающая способность УФ-лучей.
 РЕНТГЕНОВСКОЕ И ΓАММА-
ОБЛУЧЕНИЕ
Рентгеновское и γ-облучение также эффективно для стерилизации пластмасс,
пищевых продуктов, но требует строгого соблюдения правил безопасности.
Наиболее чувствительны к γ-облучению вегетативные клетки бактерий, затем идут
плесневые грибы, дрожжи, бактериальные споры и вирусы. В большинстве случаев
для надежного уничтожения микроорганизмов достаточно дозы облучения 2,5 Мрад.
γ-облучение используется для стерилизации больничных принадлежностей,
антибиотиков, витаминов, гормонов, стероидов, пластмассового разового
оборудования, шовного и перевязочного материала. Необходим контроль остаточной
радиации изделий. Основные преимущества лучевой стерилизации: возможность
обработки термолабильных материалов, стерилизации объектов в упакованном виде,
включение стерилизации в непрерывный производственный процесс.
 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ
СТЕРИЛЬНОСТИ
На практике проводят контроль стерилизации, при котором о работе стерилизующих агентов и аппаратов судят по:
1) эффективности гибели спор в процессе стерилизации (биотест);
2) прямым измерением температуры;
3) с помощью химических индикаторов.
В качестве биотестов используют ампулы с лиофилизированной культурой Bacillus stearothermophilus. Для
контроля режима стерилизации существуют и разрабатываются новые диагностикумы. Примером такого
диагностикума могут служить суспензии спор термоустойчивого микроорганизма в питательной среде,
содержащей рН-индикатор, который служит для определения метаболической активности культуры. В качестве
физических методов используют вещества, имеющие определенную точку плавления, например, бензонафтол –
температура плавления 110 °С , резорцин и серу – 119 °С, бензойную кислоту – 120 °С. При испытании одно из
названных веществ помещают в трубку, размером 0,5 х 6 см, запаянную с одного конца, прибавляют немного
сухого анилинового красителя (фуксин, сафранин, малахитовый зеленый) и запаивают. Несколько таких трубок
помещают в автоклав между стерилизуемыми предметами. Если температура в автоклаве достаточно высока,
вещество расплавится и в результате окрасится в цвет, соответствующий взятому красителю.
 МЕТОДЫ ПОДДЕРЖАНИЯ (ХРАНЕНИЯ)
КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ
Основная задача хранения культур – поддержание их жизнеспособности, сохранение
стабильности таксономически важных признаков, а также определенных свойств,
представляющих интерес для науки и производства. Проблема длительного хранения
микроорганизмов сводится к торможению процессов обмена веществ. Хранение
микроорганизмов осуществляется в специальных коллекциях типовых культур. В коллекциях
жизнеспособность микроорганизмов поддерживается преимущественно следующими методами:
1) периодическими пересевами (субкультивированием);
2) под минеральным маслом;
3) высушиванием;
4) лиофилизацией;
5) в условиях низких и ультранизких температур.
 СУБКУЛЬТИВИРОВАНИЕ
Традиционный метод хранения культур (чаще всего аспорогенных) и заключается он
в пересевах культур на свежие питательные среды 1-2 раза в месяц. Между
пересевами микроорганизмы хранят в темноте при температурах 5–20 °С. При
использовании этого метода хранения культур должны быть соблюдены три условия:
1) подходящая поддерживающая среда;
2) идеальная температура хранения;
3) необходимая частота пересевов.
Преимуществом метода является простота и удобный визуальный контроль за
чистотой культуры или ее морфологической изменчивостью, а к недостаткам
следует отнести возможность заражения, краткосрочность хранения, трудоемкость
работы и большой расход реактивов
 ХРАНЕНИЕ ПОД МИНЕРАЛЬНЫМ
МАСЛОМ
Культуру микроорганизмов выращивают на благоприятной агаризованной питательной
среде и заливают стерильным вазелиновым маслом. Слой масла (0,5–1,0 см) замедляет
скорость обменных процессов микроорганизмов и предохраняет поверхность среды от
высыхания. Такие культуры хранят в холодильнике. Большинство сапрофитных
бактерий сохраняют жизнеспособность в течение 8–14 лет, дрожжи и мицелиальные
грибы пересевают через 2–3 года. Хранение под маслом имеет следующие
преимущества: относительно длительное сохранение стабильности свойств
микроорганизмов, сокращение затрат на пересевы, метод не требует специального
оборудования.
 ВЫСУШИВАНИЕ
Простейший метод хранения микроорганизмов, в процессе которого происходит
обезвоживание микробных клеток. В высушенных (до остаточной влажности 10–12 %)
клетках 14 биохимические реакции приостанавливаются или протекают очень медленно.
Процесс высушивания лучше переносят спорообразующие виды. Широко применяют
воздушное высушивание микроорганизмов на различных адсорбентах: в стерильной
почве, песке, глине, фильтровальной бумаге, стеклянных бусах, крахмале и т. д.
Адсорбенты защищают микроорганизмы от пересыхания, связывают свободную воду и
поддерживают определенный уровень влажности.
 L-ВЫСУШИВАНИЕ
L-высушивание, или высушивание из жидкого состояния является
разновидностью метода высушивания.
Процесс метода - микроорганизмы в суспензионной среде высушивают под
вакуумом в стеклянных ампулах, погруженных в водяную баню с
контролируемой температурой.
Высушенные культуры микроорганизмов легко хранить и транспортировать,
они широко используются для хранения хлебопекарных и кормовых
дрожжей, бактериальных удобрений, энтомопатогенных препаратов.
 ЛИОФИЛИЗАЦИЯ
Заключается в удалении воды из замороженных суспензий под вакуумом, при этом вода испаряется, минуя
жидкую фазу. Этот метод считается одним из самых экономичных и эффективных методов длительного
хранения микроорганизмов. При его использовании многие разнородные группы бактерий и бактериофагов
сохраняются в жизнеспособном состоянии 30 и более лет.
Выживаемость лиофилизированных клеток зависит от специфических особенностей вида и штамма, стадии
роста и концентрации клеток, состава защитных сред, режима лиофилизации, условий реактивации.
При подготовке клеток к лиофилизации их концентрированную суспензию (109 –1010 кл/мл) переносят в
среду, содержащую протекторы: сыворотку крови, желатин, молоко, полиэтиленгликоль и др. и затем по 0,2 мл
помещают в специальные ампулы.
Для лиофилизации используют различные аппараты, простейшим из которых является эксикатор, который
охлаждают, чтобы клеточная суспензия во время подключения к вакууму оставалась замороженной.
Длительность замораживания – высушивания – 5–6 часов. Ампулы запаивают под вакуумом и хранят при 4 °С
в темноте.
После лиофилизации для выведения клеток из состояния анабиоза создают условия, снижающие
осмотический шок, возникающий при вскрытии ампул. Лучше всего восстановление свойств происходит на
богатых натуральных средах.
 ХРАНЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРИ НИЗКИХ И
УЛЬТРАНИЗКИХ ТЕМПЕРАТУРАХ

Используется в тех случаях, когда культуры не выдерживают лиофилизации (спирохеты, микоплазмы, различные
вирусы). Микроорганизмы замораживают либо в рефрижераторах (от 15 – 12 °С до – 80 °С) либо используют
рефрижераторы с азотом (от – 150 °С до – 196 °С). При хранении бактерий в жидком азоте используют
криопротекторы двух типов:
1) глицерин и диметилсульфоксид, которые легко проходят через клеточную мембрану и обеспечивают как
внутри-, так и внеклеточную защиту;
2) сахароза, глюкоза, полиэтиленгликоль обеспечивают защитное действие на наружной поверхности клеточной
мембраны.
По 0,4 мл суспензии клеток (108 кл/мл) разливают в специальные ампулы, которые запаивают. Далее проводят
двухэтапное охлаждение: с медленной (снижение температуры 1 °С/мин) и быстрой (снижение температуры 15–30
°С/мин) скоростью. Чтобы оживить замороженные культуры, их быстро оттаивают при 37 °С.
К основным преимуществам криогенного сохранения микроорганизмов можно отнести: малую вероятность
заражения культуры, сохранение в стабильном состоянии свойств микроорганизмов, небольшие временные и
материальные затраты, возможность использования замороженных культур в качестве прямого инокулята.
 СПОСОБЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
МИКРООРГАНИЗМОВ

1. Понятие о культивировании микроорганизмов

2. Способы культивирования аэробных и анаэробных микроорг
анизмов
3. Техника посева микроорганизмов в жидкие питательные сре
ды
4. Техника посева микроорганизмов на агаризованную среду
 ПОНЯТИЕ О КУЛЬТИВИРОВАНИИ
МИКРООРГАНИЗМОВ
Культивирование микроорганизмов, помимо состава питательной среды, сильно зависит от физических и
химических факторов (температуры, кислотности, аэрации, света и т. д.). При этом количественные показатели
каждого из них неодинаковы и определяются особенностями метаболизма каждой группы бактерий. Можно
выделить методы культивирования на твердых и в жидких питательных средах; в аэробных, анаэробных и
микроаэрофильных условиях. Характеристики этого процесса устанавливают путем измерения таких показателей
как число клеток или их биомасса.
В лаборатории микроорганизмы выращивают на плотных и жидких питательных средах, которые разливают в
пробирки, колбы, матрасы и чашки Петри. Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют различными
методами.
Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инокуляцией. Посев микроорганизмов
требует соблюдения определенных правил, которые необходимо выполнять, чтобы предохранить исследуемую
культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами. Перед посевом следует сделать надписи на посуде.
Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей или иглой,
если микроорганизмы выращивали на плотной среде. В случае, когда микроорганизмы выращены в жидкой среде,
лучше пользоваться пипеткой. После пересева пробирки или другие сосуды с микроорганизмами помещают в
термостаты с определенной температурой.
По окончании работы посуду с культурами микроорганизмов, подлежащими выбрасыванию, следует
автоклавировать, чтобы убить клетки, и только после этого мыть. Допускается заливать дезинфицирующим
раствором поверхность плотных сред. Через сутки среды можно выбрасывать и посуду мыть. Неаккуратное
обращение с культурами микроорганизмов приводит к возникновению бактериального аэрозоля.
 СПОСОБЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АЭРОБНЫХ
И АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

1. Культивирование аэробных микроорганизмов

2. Облигатные анаэробы
3. Методы создания благоприятных условий для анаэробных микроорганизмов
4. Техника посева микроорганизмов в жидкие питательные среды
5. Техника посева микроорганизмов на агаризованную среду
 КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АЭРОБНЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ
Проводят следующим образом:
1) На поверхности плотных сред или в тонком слое жидких сред, когда
микроорганизмы получают кислород прямо из воздуха.
2) В жидких средах (глубинное культивирование). В этом случае микроорганизмы
используют растворенный в среде кислород.
В связи с низкой растворимостью кислорода, для обеспечения роста аэробных бактерий
в толще среды, требуется постоянное аэрирование.
 ОБЛИГАТНЫЕ АНАЭРОБЫ
Граница между аэробными и анаэробными микроорганизмами является относительно
условной. Хотя облигатными анаэробами обычно считают бактерии, рост которых
невозможен в присутствии растворенного кислорода, на практике к анаэробным относят
те бактерии, которые не растут на поверхности твердой или полужидкой среды на
воздухе при атмосферном давлении. Аэротолерантные бактерии хорошо растут на
поверхности агара и чашках при низком уровне кислорода. Степень анаэробиоза
измеряется по окислительновосстановительному потенциалу среды(редокс, Eh) . При
увеличении Eh выше 100 мВ, обусловленном присутствием растворимого кислорода,
подавляется рост всех анаэробных бактерий.
 МЕТОДЫ СОЗДАНИЯ БЛАГОПРИЯТНЫХ
УСЛОВИЙ ДЛЯ АНАЭРОБНЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ
Для удаления кислорода и создания соответствующих условий среды можно
воспользоваться следующими методами:
1. Культивирование в микроанаэростате
2. Использование химических веществ, поглощающих молекулярный кислород
3. Использование восстанавливающих агентов
4. Выращивание совместно с аэробными или факультативно-анаэробными бактериями
5. Другие методы
 КУЛЬТИВИРОВАНИЕ В
МИКРОАНАЭРОСТАТЕ

Аппарат для выращивания

микроорганизмов, в котором
воздух замещен газовой
смесью. Наиболее часто
используемая смесь имеет
следующий состав: азот с 5
% СО2 и 10 % Н2.
 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ,
ПОГЛОЩАЮЩИХ МОЛЕКУЛЯРНЫЙ КИСЛОРОД

В качестве поглотителей молекулярного кислорода в лабораторной практике используют

щелочной раствор пирогаллола, дитионит натрия (Na2S2O4), металлическое железо,
хлорид одновалентной меди и некоторые другие реактивы. Поглотители помещают на
дно химического эксикатора с притертой крышкой, а также анаэробные бактерии,
засеянные в колбу, пробирку или чашку Петри. При таком способе создания анаэробных
условий необходимо учитывать поглощающую способность реактивов и объем
замкнутого пространства, в котором выращиваются бактерии.
 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
ВОССТАНАВЛИВАЮЩИХ АГЕНТОВ
Использование восстанавливающих агентов, которые добавляют для снижения
окислительно-восстановительного потенциала среды: тиогликолат натрия, цистеин,
дитиотрейтол, аскорбиновая кислота. Удаления кислорода из среды можно добиться и в
результате быстрого нагревания и кипячения среды с последующим быстрым
охлаждением. Если в такую среду засеять анаэробные микроорганизмы и наслоить
смесь (1:1) масла и парафина, то в подобных условиях будет наблюдаться рост
нестрогих анаэробов.
 ВЫРАЩИВАНИЕ СОВМЕСТНО С АЭРОБНЫМИ
ИЛИ ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫМИ
БАКТЕРИЯМИ.

В жидкой среде с восстанавливающими агентами перед инокуляцией анаэроба проводят

культивирование, например, E.coli, что приводит к удалению из среды остаточного
кислорода. Перед инокуляцией анаэробов клетки E.coli убивают нагреванием.
Существует и другая модификация метода. На половине чашки Петри засевают какой-
либо аэробный микроорганизм, на другой – анаэроб. Края чашки заливают парафином.
Рост анаэробного микроорганизма начнется после полного использования кислорода
аэробом
 ДРУГИЕ МЕТОДЫ
Для культивирования анаэробных бактерий также используют следующие методы,
ограничивающие доступ воздуха к растущей культуре:
• выращивание в высоком слое среды;
• выращивание в толще плотной среды;
• культивирование в вязких средах, в которых диффузия молекулярного кислорода в
среду уменьшается с увеличением ее плотности;
• заливка среды с посевом высоким слоем стерильного вазелинового масла или
парафина.
 КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ
НА ПРИМЕРЕ БАКТЕРИЙ
Для культивирования бактерий необходимо соблюдать ряд условий
• 1. Наличие полноценной среды
Должна обладать водной основой, органическим источником углерода и энергии, определенным pH, осмотическим давлением
• 2. Температура
Различают: мезофилы- размножаются в диапазоне температур 20-40 С( большинство болезнетворных бактерий)термофилы- в
диапазоне 40-60 С( актиномицеты, некоторые спороносные бациллы), психофилы- размножаются в диапазоне температур 0-20
С 
• 3.Время культивирования
Большинство бактерий культивируются для получения видимого роста в течении 18-48 ч. 
• 4. Освещение 
Для выращивания фототрофных- необходим свет. Некоторые условно- патогенные микобактерии в зависимости от
освещенности образуют пигмент, что использует при их идентификации.
• 5.Атмосфера культивирования

1.Для роста строгих аэробов необходим кислород.

2.Для культивирования факультативных анаэробов используют кислород.
3.Микроаэрофилы размножаются при пониженном парциальном давлении кислорода. 
4.Облигатные анаэробы требуют исключения доступа кислорода.
 НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫЕ ФОРМЫ
БАКТЕРИЙ
Некоторые неспорообразующие бактерии способны переживать неблагоприятные для
размножения условия окружающей среды, переходя в некультивируемое состояние. В
этом состоянии бактерии сохраняют свою метаболическую активность, но не способны
к непрерывному клеточному делению.
Переход в некультивируемое состояние обеспечивает сохранение патогенных бактерий в
межэпидемические и межэпизоотические периоды.
При переходе в эту форму бактериальные формы уменьшаются в размерах, приобретают
сферическую форму, меняют вязкость ЦПМ(цитоплазматическая мембрана).
 РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ В
ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
• Бактерии, засеянные в определенный, не
изменяющийся объем питательной среды, размножаясь,
потребляют питательные элементы, что приводит в
дальнейшем к истощению питательной среды и
прекращению роста бактерий. Культивирование
бактерий в такой системе называют периодическим
культивированием, а культуру — периодической. 
• Если же условия культивирования поддерживаются
путем непрерывной подачи свежей питательной среды и
оттока такого же объема культуральной жидкости, то
такое культивирование называется непрерывным, а
культура — непрерывной.
 РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ НА
ПЛОТНОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные
колонии округлой формы с ровными или неровными краями (S- и R-формы),
различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.
Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и
окрашивают её. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима
в органических растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не
растворимые ни в воде, ни в органических соединениях. Наиболее
распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины,
ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами
черного, коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных
соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксиддисмутазой и
пероксидазами защищают микроорганизмы от воздействия токсичных
перекисных радикалов кислорода. Многие пигменты обладают
антимикробным, антибиотикоподобным действием.
 ФАЗЫ РАЗМНОЖЕНИЯ У БАКТЕРИЙ
При выращивании бактерий на жидкой питательной среде
наблюдается придонный, диффузный или поверхностный (в виде
пленки) рост культуры. Рост периодической культуры бактерий,
выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на
несколько фаз, или периодов:
1. лаг-фаза;  2. фаза логарифмического роста; 
 3. фаза стационарного роста, или максимальной концентрации
бактерий; 
 4. фаза гибели бактерий.
Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой
размножения бактерий, отражающей зависимость логариф­ма
числа живых клеток от времени их культивирования
 ЛАГ-ФАЗА

Лаг-фаза — период между по­севом бактерий и началом

размножения. Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч.
Бактерии при этом увеличиваются в размерах и готовятся к
делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и
других компонентов.
 ФАЗА ЛОГАРИФМИЧЕСКОГО
(ЭКСПОНЕНЦИАЛЬНОГО) РОСТА

Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является

периодом интенсивного деления бактерий. Продолжительность ее
около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста бактерии могут
делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее
ранимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов
метаболизма интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза
белка, нуклеиновых кислот и др.
 ФАЗА СТАЦИОНАРНОГО РОСТА

Затем наступает фаза стационарного роста, при

которой количество жиз­неспособных клеток остается
без изменений, составляя максимальный уровень (М-
концентрация). Ее продолжительность выражается в
часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их
особенностей и культивирования.
 ФАЗА ГИБЕЛИ
Завершает процесс роста бактерий фаза гибели,
характеризующаяся отмиранием бактерий в условиях
истощения источников питательной среды и накопления в
ней продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее
колеблется от 10 ч до нескольких недель. Интенсивность
роста и размножения бактерий зависит от многих факторов, в
том числе оптимального состава питательной среды,
окислительно-восстановительного потенциала, рН,
температуры и др.
МИКРОСКОПИРОВАНИЕ
 МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ В МИКРОБИОЛОГИИ:
УСТРОЙСТВО МИКРОСКОПА И ОСНОВНЫЕ
ПРИЕМЫ МИКРОСКОПИРОВАНИЯ ЖИВЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ

1 Особенности разных видов микроскопии

2 Устройство светлопольного микроскопа
3 Правила работы с иммерсионным объективом
4 Приемы микроскопирования живых микроорганизмов
 ОСОБЕННОСТИ РАЗНЫХ ВИДОВ
МИКРОСКОПИИ
Основными задачами микроскопии являются следующие:
•Выявление микроорганизмов в различных материалах.
• Ориентировочная идентификация микроорганизмов в образце.
• Изучение некоторых морфологических признаков и структур микроорганизмов (например,
капсул, жгутиков и т. д.).
• Изучение окрашенных мазков из колоний и чистых культур.
На сегодняшний день наиболее используемой является световая микроскопия\
Световая микроскопия обеспечивает увеличение до 2–3 тысяч раз, цветное и подвижное
изображение живого объекта, возможность микрокиносъемки и длительного наблюдения
одного и того же объекта, оценку его динамики и химизма. Изображение в световом
микроскопе формируется вследствие того, что объект и различные его структуры избирательно
поглощают свет с различной длиной волны (абсорбционный контраст) или вследствие
изменения фазы световой волны при прохождении света через объект (фазовый контраст).
 ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
МИКРОСКОПА
Основными характеристиками любого микроскопа являются разрешающая
способность и контраст.
Разрешающая способность – это минимальное расстояние, на котором находятся две
точки, демонстрируемые микроскопом раздельно. Разрешение человеческого глаза в
режиме наилучшего видения равно 0,2 мм.
Контраст изображения – это различие яркостей изображения и фона. Если это различие
составляет менее 3–4 %, то его невозможно уловить ни глазом, ни фотопластинкой;
тогда изображение останется невидимым, даже если микроскоп разрешает его детали.
На контраст влияют как свойства объекта, изменяющие световой поток по сравнению с
26 фоном, так и способности оптики уловить возникающие различия в свойствах луча.
Возможности светового микроскопа ограничены волновой природой света. Физические
свойства света – цвет (длина волны), яркость (амплитуда волны), фаза, плотность и
направление распространения волны изменяются в зависимости от свойств объекта.
Эти различия и используются в современных микроскопах для создания контраста.
 УВЕЛИЧЕНИЕ МИКРОСКОПА
Определяется как произведение увеличения объектива на
увеличение окуляра. У типичных исследовательских
микроскопов увеличение окуляра равно 10, а увеличение
объективов – 10, 40 и 100. Соответственно, увеличение
такого микроскопа составляет от 100 до 1 000. Некоторые
из микроскопов имеют увеличение до 2 000. Еще более
высокое увеличение не имеет смысла, так как при этом
разрешающая способность не улучшается. Напротив,
качество изображения ухудшается.

Дафния при 400, 800 и 2000-кратном

увеличении
 ЧИСЛОВАЯ АПЕРТУРА
Числовая апертура используется для выражения разрешающей способности
оптической системы.
Числовая апертура – это оптический «охват» линзы, она является мерой
количества света, попадающего в линзу. Числовая апертура объектива указана на
его оправе.
Апертура конденсора должна соответствовать числовой апертуре объектива.
Числовая апертура любой линзы, граничащей с воздухом (т.е. «сухой системы»),
не может превысить 1, так как показатель преломления воздуха равен 1.
Числовую апертуру можно повысить, если увеличить показатель преломления
среды между фронтальной линзой объектива и предметным стеклом, приблизив
его к показателю преломления стекла (1,5). Для этого между фронтальной
линзой объектива и исследуемым объектом помещают каплю жидкости с
показателем преломления большим, чем показатель преломления воздуха,
например, каплю воды (n = 1,3), глицерина (n = 1,4) или кедрового
(иммерсионного) масла (n = 1,5).
Для каждой из указанных выше жидкостей выпускаются специальные
объективы, которые называются иммерсионными.
 СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ
Световая микроскопия включает в себя:
1. Обычную просвечивающую микроскопию (светло-, темнопольную),
2. Фазово-контрастную,
3. Люминесцентную,
4. Электронная микроскопия,
5. Лазерная конфокальная микроскопия,
6. Компьютерная интерференционная микроскопия,
7. РКТ и ПЭТ
 СВЕТЛОПОЛЬНАЯ
МИКРОСКОПИЯ
Позволяет исследовать объекты в проходящем свете в светлом поле. Данный вид
микроскопии 27 предназначен для исследования морфологии, размеров клеток, их
взаимного расположения, структурной организации клеток и других особенностей. У
светового микроскопа максимальная разрешающая способность составляет 0,2 мкм, что
обеспечивает высокоточное увеличение микроскопа до 1500х.
 ТЕМНОПОЛЬНАЯ МИКРОСКОПИЯ
Основана на освещении объекта косыми лучами света. При
таком освещении лучи не попадают в объектив, поэтому поле
зрения выглядит темным. Такое освещение препарата
достигается использованием специального темнопольного
конденсора. Темнопольная микроскопия является очень
простым, но эффективным методом и хорошо подходит для
получения изображения живых и неокрашенных
биологических образцов. Учитывая простоту установки,
качество получаемых изображений весьма хорошее. При
микроскопировании в темном поле можно увидеть объекты,
величина которых измеряется сотыми долями микрометра, что
находится за пределами разрешающей способности обычного
светлопольного микроскопа. Однако наблюдение за объектами
в темном поле позволяет исследовать только контуры клеток и
не дает возможности рассмотреть их внутреннюю структуру.
 ФАЗОВО-КОНТРАСТНАЯ
МИКРОСКОПИЯ
Позволяет более четко наблюдать живые прозрачные объекты, которые
имеют коэффициенты преломления, близкие к коэффициентам
преломления среды. Действие фазово-контрастного микроскопа основано
на интерференции света в плоскости изображения, обусловленной сдвигом
по фазе (при использовании фазового кольца в апертурной диафрагме).
При фазово-контрастной микроскопии часто применяют биологические
микроскопы с обратным расположением оптики – инвертированные
микроскопы. У таких микроскопов объективы расположены снизу, а
конденсор – сверху.
С помощью фазово-контрастной микроскопии изучают форму, размеры,
взаимное расположение клеток, их подвижность, размножение,
прорастание спор микроорганизмов и т. д. Благодаря применению этого
способа микроскопии контраст живых неокрашенных микроорганизмов
резко увеличивается и они выглядят темными на светлом фоне
(позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне
(негативный фазовый контраст).
 ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ
(ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ) МИКРОСКОПИЯ
Основана на способности ряда веществ биологического
происхождения или некоторых красителей светиться при их
освещении невидимым 28 ультрафиолетовым или синим
светом. При использовании ультрафиолетового света
разрешающая способность микроскопа может достигать 0,1
мкм.
Клетки микроорганизмов обрабатывают специальными
красителями – флуорохромами (акридиновый оранжевый,
примулин, родамин и др.) в виде сильно разбавленных водных
растворов: 1:500– 1:100 000. Такие растворы слабо токсичны,
что дает возможность изучать неповрежденную клетку. В
зависимости от химического состава, клеточные структуры в
разной степени адсорбируют красители и люминесцируют
различным образом. Кроме того, флуорохромы неодинаково
адсорбируются живыми и мертвыми клетками. Это позволяет
использовать данный вид микроскопии для цитологических и
иммунологических исследований, определения
жизнеспособности клеток и т. д.
 ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ
Позволяет обнаружить объекты, которые не разрешаются при использовании световых или
ультрафиолетовых лучей. Теоретически разрешение просвечивающего электронного микроскопа
составляет 0,002 нм; реальное разрешение современных электронных микроскопов приближается к
0,1 нм. На практике разрешение для биологических объектов достигает 2 нм. Короткая длина волны
электронов позволяет различить объекты размером 0,5–1,0 нм.
В современных электронных микроскопах на экране достигается увеличение 5000– 200 000. Благодаря
столь высокому разрешению становится возможным выявление деталей бактериальных структур.
Например, с помощью напыления солей тяжелых металлов, окружающих бактерию и проникающих в
поверхностные неровности, получают контрастирование за счет дифференциальной задержки
электронов. Этот эффект получил название негативного контрастирования.
Электронный микроскоп, в котором изображение формируется благодаря прохождению
(просвечиванию) электронов через образец, называют просвечивающим (или трансмиссионным).
В сканирующем электронном микроскопе (растровая электронная микроскопия (РЭМ) пучок
электронов быстро сканирует поверхность образца, вызывая излучение, которое формирует
изображение на светящемся экране. Для РЭМ характерны высокая разрешающая способность,
большой диапазон увеличений (до 100 000 и выше), большая глубина фокусировки (~100 мкм), 29
многообразие режимов работы. Сканирующий микроскоп дает картину поверхностей и позволяет
получать трехмерное изображение.
 ЛАЗЕРНАЯ КОНФОКАЛЬНАЯ
МИКРОСКОПИЯ
Лазерная конфокальная микроскопия дает возможность получить отчетливое
изображение и наблюдать объекты в фокусе по всему полю. Данный метод
пригоден лишь для исследования самосветящихся (флуоресцентных)
объектов. При сочетании с компъютерной техникой возможна
пространственная реконструкция изучаемого объекта. В конфокальном
лазерном сканирующем микроскопе изображения внутренних сечений
формируются за счет сканирования сфокусированным лазерным пучком от
разных (405, 488, 532, 635 нм) лазеров и пространственной фильтрации
излучения. При использовании сканирующей микроскопии ближнего поля
(СМБП) достигается высокая разрешающая способность. Наименьший
размер элемента, полученного с помощью СМБП, составляет 20 нм при
длине волны света 0,486 нм. В изображении контролируемого элемента
отсутствуют дифракционные или интерференционные эффекты,
затрудняющие определение его границ. Отличительной особенностью СМБП
по сравнению с атомно-силовым микроскопом является чувствительность к
оптическим характеристикам поверхности контролируемого образца, длине
волны света, люминесценции и др.
 КОМПЬЮТЕРНАЯ
ИНТЕРФЕРЕНЦИОННАЯ МИКРОСКОПИЯ
Компьютерная интерференционная микроскопия
позволяет получить высококонтрастное
изображение при наблюдении субклеточных
структур; во многих случаях применяется для
изучения живых клеток. Принцип действия
автоматизированного интерференционного
микроскопа основан на интерференции световых
пучков лазерного излучения, отраженного от
опорного зеркала и зеркала, на котором помещен
измеряемый фазовый объект. Теоретически
предельно достижимая разрешающая
способность может составить в среднем 0,2 нм,
практически она составляет 0,4 мкм.
 РКТ И ПЭТ
Рентгеновская компьютерная томография (РКТ), позитронная эмиссионная томография
(ПЭТ) позволяют наблюдать объекты в обычных условиях.
 УСТРОЙСТВО СВЕТЛОПОЛЬНОГО
МИКРОСКОПА НА ПРИМЕРЕ МИКРОСКОПА
XSP–136
Успех наблюдения объекта и надежность получаемых
результатов
зависят от хорошего знания оптической системы микроскопа.

Механическая часть биологического микроскопа включает:

штатив (3) с предметным столиком(9); бинокулярную
насадку(2); рукоятку грубой настройки на резкость(4);
рукоятку точной настройки на резкость(5); рукоятки
перемещения предметного столика вправо/влево,
вперед/назад(6); револьверное устройство(11).

Оптическая часть микроскопа включает осветительный

аппарат/коллектор(7), конденсор(8), объективы(10) и
окуляры(1).
 ОПИСАНИЕ И РАБОТА СОСТАВНЫХ
ЧАСТЕЙ МИКРОСКОПА XSP–136
1. Описание
1. Объективы
2. Бинокулярная насадка
3. Окуляры
4. Револьверное устройство
5. Конденсор
6. Осветительное устройство
7. Фокусировочный механизм
8. Предметный столик
2. Работа с микроскопом
3. Правила обращения и ухода за микроскопом
4. Меры безопасности
 ОБЪЕКТИВЫ
Объективы (тип ахроматы), входящие в комплект микроскопа, рассчитаны на
механическую длину тубуса микроскопа 31-160 мм, линейное поле зрения в плоскости
изображения 18 мм и толщину покровного стекла 0,17 мм. На корпусе каждого
объектива нанесено линейное увеличение, например, 4х; 10х; 40х; 100х и,
соответственно, указана числовая апертура 0,10; 0,25; 0,65; 1,25, а также цветовая
маркировка.
 БИНОКУЛЯРНАЯ НАСАДКА
Бинокулярная насадка обеспечивает визуальное наблюдение изображения объекта;
устанавливается в гнездо штатива и закрепляется винтом. Установка расстояния между
осями окуляров в соответствии с глазной базой наблюдателя осуществляется разворотом
корпусов с окулярными тубусами в диапазоне от 55 до 75 мм.
 ОКУЛЯРЫ

В комплект микроскопа входят два широкоугольных

окуляра с увеличением 10х.
 РЕВОЛЬВЕРНОЕ УСТРОЙСТВО
Четырехгнездное револьверное устройство обеспечивает установку объективов в
рабочее положение. Смена объективов производится вращением рифленого кольца
револьверного устройства до фиксированного положения.
 КОНДЕНСОР
В комплект микроскопа входит конденсор светлого поля Аббе с ирисовой диафрагмой и
фильтром, числовая апертура А=1,25. Конденсор устанавливается в кронштейн под
предметным столиком микроскопа и закрепляется винтом. В конденсоре светлого поля
имеется ирисовая апертурная диафрагма и откидная оправа для установки светофильтра
 ОСВЕТИТЕЛЬНОЕ УСТРОЙСТВО
Для получение равномерно освещенного
изображения объектов в микроскопе имеется
осветительное светодиодное устройство.
Включение осветителя осуществляется с
помощью выключателя, расположенного на задней
поверхности основания микроскопа. Вращая диск
регулировки накала лампы, расположенный на
боковой поверхности основания микроскопа слева
от наблюдателя, можно изменять яркость
освещения.
 ФОКУСИРОВОЧНЫЙ МЕХАНИЗМ
Фокусировочный механизм расположен в штативе микроскопа. Фокусирование на
объект производится перемещением по высоте предметного столика вращением
рукояток, расположенных по обеим сторонам штатива. Грубое перемещение
осуществляется рукояткой большего размера, точное перемещение – рукояткой
меньшего размера.
 ПРЕДМЕТНЫЙ СТОЛИК
Предметный столик обеспечивает перемещение объекта в горизонтальной плоскости. Диапазон
перемещения столика равен 70x30 мм. Объект крепится на 32 поверхности столика между держателем
и прижимом препаратоводителя, для чего прижим отводится в сторону.
 РАБОТА С МИКРОСКОПОМ
• Перед началом работы с препаратами необходимо правильно настроить освещение. Это позволяет добиться максимального разрешения и качества изображения
микроскопа. Для работы с микроскопом следует отрегулировать раскрытие окуляров таким образом, чтобы два изображения слились в одно. Кольцо диоптрийной
коррекции на правом окуляре следует установить «на ноль», если острота зрения обоих глаз одинакова. В противном случае необходимо выполнить общую наводку на
резкость, после чего закрыть левый глаз и добиться максимальной резкости для правого, вращая кольцо коррекции.
• Исследование препарата рекомендуется начинать с объектива наименьшего увеличения, который используется в качестве поискового при выборе участка для более
подробного изучения, затем можно переходить к работе с более сильными объективами.
• Убедитесь в том, что объектив 4х готов к работе. Это поможет вам установить предметное стекло на место, а также разместить объект для исследования. Поместите
предметное стекло на предметный столик и осторожно зажмите его при помощи пружинных держателей.
• Подсоедините сетевой шнур и включите микроскоп.
• Всегда начинайте исследование с объективом 4х. Для достижения четкости и резкости изображения исследуемого объекта используйте рукоятки грубой и точной
фокусировки. Если при помощи слабого объектива 4х было получено желаемое изображение, поверните револьверное устройство на следующее большее значение 10х.
Револьвер должен зафиксироваться в нужном положении.
• Наблюдая за объектом в окуляр, поверните рукоятку (большого диаметра) грубой фокусировки. Чтобы получить наиболее четкое изображение используйте рукоятку
(маленького диаметра) четкой фокусировки.
• Чтобы контролировать поток света, проходящего через конденсор, можно открыть или закрыть ирисовую диафрагму, расположенную под предметным столиком.
Изменяя настройки, можно добиться наиболее четкого изображения исследуемого объекта.
• Во время фокусировки не следует допускать соприкосновения объектива с объектом исследования. При увеличении объектива до 100х объектив располагается очень
близко к предметному стеклу.
 ПРАВИЛА ОБРАЩЕНИЯ И УХОДА
ЗА МИКРОСКОПОМ
1 Микроскоп необходимо содержать в чистоте и предохранять от повреждений.
2 Для сохранения внешнего вида микроскопа, его необходимо периодически протирать мягкой салфеткой, слегка
пропитанной бескислотным вазелином, предварительно удалив пыль, а затем вытирать сухой мягкой чистой салфеткой.
3 Металлические детали микроскопа необходимо содержать в чистоте. Для чистки микроскопа следует использовать
специальные смазочные некоррозирующие жидкости.
4 Для предохранения оптических деталей визуальной насадки от пыли необходимо оставлять окуляры в окулярных тубусах.
5 Нельзя касаться пальцами поверхностей оптических деталей. В случае если на линзу объектива попала пыль, ее следует
удалить пыль при помощи вентилятора или кисточки. В случае если пыль проникла внутрь объектива и на внутренних
поверхностях линз образовался мутный налет, необходимо отправить объектив для чистки в оптическую мастерскую.
6 Во избежание нарушения юстировки необходимо предохранять микроскоп от толчков и ударов.
7 Во избежание попадания пыли на внутреннюю поверхность линз микроскоп необходимо хранить под чехлом или в
упаковке.
8 Не следует самостоятельно разбирать микроскоп и его составные для устранения неисправностей.
 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ

При работе с микроскопом источником опасности является электрический ток.

Конструкция микроскопа исключает возможность случайного соприкосновения к
токоведущим частям, находящимся под напряжением. Не рекомендуется оставлять
включенный в сеть микроскоп без присмотра. После окончания работы микроскоп
необходимо отключать от сети.
 ПРАВИЛА РАБОТЫ С
ИММЕРСИОННЫМ ОБЪЕКТИВОМ
При работе с масляным иммерсионным объективом следует соблюдать определенные правила.
Для проведения исследования при помощи объектива 100х все образцы следует закрывать
покровными стеклами. На сухой фиксированный окрашенный препарат наносят каплю
иммерсионного масла. Устанавливают объектив 100х и, глядя 34 сбоку, осторожно поднимают
предметный столик микроскопа до погружения линзы объектива в масло. Следят за тем, чтобы
фронтальная линза объектива не коснулась покровного стекла. Затем, наблюдая в окуляр,
макровинтом медленно опускают предметный столик и фокусируют объектив. Тонкую
фокусировку осуществляют с помощью микрометрического винта.
По окончании микроскопирования опускают предметный столик, снимают препарат и
осторожно протирают фронтальную линзу сначала сухой хлопчатобумажной салфеткой или
фильтровальной бумагой, а затем салфеткой, слегка смоченной очищенным бензином. Нельзя
оставлять масло на поверхности линзы, так как на нем фокусируется пыль, что может со
временем привести к повреждению оптики объектива. Эффективен способ удаления масла как
жидкого, так и застывшего, свежеотломленным пенопластом. В отдельных случаях помогает
протирка тканью, смоченной дистиллированной водой. Края линз с выступающей оправой
очищают с помощью палочки, обернутой тканью.
 ПРИЕМЫ МИКРОСКОПИРОВАНИЯ
ЖИВЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
1. Нативные (прижизненные) препараты
2. Препарат «раздавленная капля»
3. Препарат «висячая капля»
4. Препарат «отпечаток»
5. Препарат «микрокультура» (или «агаровая пленка»)
 НАТИВНЫЕ (ПРИЖИЗНЕННЫЕ)
ПРЕПАРАТЫ
Нативные (прижизненные) препараты готовят для исследования живых неокрашенных
бактерий. Наиболее распространенными являются методы «висячей капли»,
«раздавленной капли», «отпечаток», «агаровая пленка», микрокамеры с плотными
средами. Препараты живых клеток обычно рассматривают с «сухими» системами
микроскопа. Для прижизненного изучения бактерий часто используют фазово-
контрастную и темнопольную микроскопию.
Морфологическое разнообразие бактерий можно изучить при приготовлении негативного
тушевого препарата, когда окрашивают суспензию тушью. В поле зрения микроскопа на
общем темном фоне туши отчетливо видны неокрашенные клетки микроорганизмов
различной формы, разных размеров, расположенные в разнообразных сочетаниях.
Препараты, работа с которыми закончена, прежде чем вымыть, выдерживают в
дезинфицирующем растворе.
 ПРЕПАРАТ «РАЗДАВЛЕННАЯ
КАПЛЯ»
На предметное стекло наносят каплю стерильной водопроводной воды, помещают в нее
небольшое количество клеток изучаемых микроорганизмов, размешивают и накрывают
покровным стеклом. Для этого покровное стекло ставят на ребро у края капли и
постепенно опускают на нее. Микроорганизмы, 35 выращенные на плотной или в
жидкой питательной среде, переносят в каплю воды бактериологической петлей;
выращенные в жидкой среде – переносят стерильной пипеткой. В последнем случае
каплю воды на предметное стекло можно не наносить. Капля исследуемого материала
должна быть настолько мала, чтобы из-под покровного стекла не выступал избыток
жидкости. Если он образовался, его необходимо удалить фильтровальной бумагой.
Препарат можно микроскопировать с использованием иммерсионной системы.
 ПРЕПАРАТ «ВИСЯЧАЯ КАПЛЯ»
Каплю суспензии микроорганизмов петлей или обычным пером наносят на покровное
стекло, которое поворачивают каплей вниз и помещают на специальное предметное
стекло с углублением (лункой) в центре. Капля должна свободно висеть, не касаясь
краев и дна лунки. Края лунки предварительно смазывают вазелином. Капля
оказывается герметизированной во влажной камере, что делает возможным
многодневное наблюдение за объектом. При работе с бактериями этот метод
используется редко.
 ПРЕПАРАТ «ОТПЕЧАТОК»
Из агаризованой среды, на которой растут микроорганизмы, вырезают скальпелем
небольшой кубик и переносят на предметное стекло так, чтобы поверхность с
микроорганизмами была обращена вверх. Затем к газону или к колонии прикладывают
чистое покровное стекло, слегка надавливают на него петлей или пинцетом и тотчас же
снимают, стараясь не сдвинуть в сторону. Полученный препарат помещают отпечатком
вниз в каплю воды или метиленового синего (1 : 40) на предметное стекло. Отпечаток
можно получить и на предметном стекле, если касаться поверхности колонии или газона
предметным стеклом. Препарат «отпечаток» используют в основном при исследовании
спороношения стрептомицетов.
 ПРЕПАРАТ «МИКРОКУЛЬТУРА»
(ИЛИ «АГАРОВАЯ ПЛЕНКА»)
На тонкое, простерилизованное и нагретое предметное стекло наносят стерильной нагретой пипеткой 0,2–0,3 мл
горячей агаризованной питательной среды и распределяют ее по всей поверхности стекла. После застывания
среды удаляют петлей лишний агар, оставляя два тонких участка пленки величиной с покровное стекло каждый. В
центр квадратов бактериальной петлей или пипеткой наносят каплю жидкой культуры или суспензии клеток
микроорганизма. Стекло помещают во влажную камеру (чашка Петри со слоем мокрой фильтровальной бумаги),
которую ставят в термостат. Перед микроскопированием на пленку с выросшей микрокультурой наносят 36 каплю
красителя или каплю воды в случае подсыхания пленки, и затем осторожно накрывают покровным стеклом.
Выращивание микроорганизмов непосредственно на предметном стекле позволяет вести микроскопическое
наблюдение за процессами их роста и развития, изучать цикл развития, способ размножения (деление-почкование),
влияние на эти процессы каких-либо агентов. На препаратах не нарушается естественное расположение клеток в
растущей микроколонии. Выращивание микроколонии можно проводить в аэробных или анаэробных (под
покровным стеклом, загерметизированном лаком) условиях.
Агаровую пленку можно нанести на покровное стекло и приготовить препарат «висячая капля». На таком
препарате можно наблюдать движение бактерий по типу скольжения. Движение бактерий за счет жгутиков можно
наблюдать во влажных препаратах, применяя в большинстве случаев светлопольный микроскоп. Наиболее
эффективно наблюдение за подвижностью в темнопольном микроскопе.
 ИЗУЧЕНИЕ
МОРФОЛОГИИ КЛЕТОК
 ПРИГОТОВЛЕНИЕ ФИКСИРОВАННЫХ
ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ И
ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИИ КЛЕТОК

1 Этапы и техника приготовления фиксированных

препаратов микроорганизмов
2 Простые и сложные методы окраски
ЭТАПЫ И ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ФИКСИРОВАННЫХ
ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ

Приготовление фиксированных окрашенных

препаратов включает следующие этапы:
1. Приготовление мазка
2. Высушивание
3. Фиксацию
4. Окраску
 ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКА
• Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки, колбы или чашки
Петри бактериологической петлей или стерильной пипеткой. В некоторых случаях используют
препаровальные или бактериальные иглы;
• Делают мазки на предметных стеклах, как правило, бактериальной петлей (диаметр 2 или 4
мм) из нихромовой проволоки;
• Взятый микробный материал тщательно суспензируют в капле воды или физиологического
раствора на предметном стекле;
• Круговыми движениями материал равномерно распределяют на площади диаметром 1,0–1,5
см. Только при таком распределении материала в мазке можно увидеть изолированные
бактериальные клетки. Если исследуемый материал содержится в жидкой среде, то петлей его
наносят прямо на предметное стекло и готовят мазок;
• После приготовления мазка петлю стерилизуют в пламени спиртовки, сжигая при этом
остатки микробного материала на петле.
Мазок должен быть настолько тонок, чтобы высыхал после приготовления.
 ВЫСУШИВАНИЕ
Проводят при комнатной температуре. Хорошо приготовленные тонкие мазки имеют
округлую форму, быстро высыхают при комнатной температуре. Более толстые мазки
высушивают в термостате или при подогревании над пламенем спиртовки, не допуская
свертывания белка бактерий и нарушения их структуры. Высушивание мазка проводят
для первичного закрепления материала на стекле и для получения более качественного
препарата
 ФИКСАЦИЯ МАЗКА
Чаще всего осуществляется термически (фламбированием), т. е. над пламенем горелки. Хотя данный метод фиксации и является
достаточно грубым, но сохраняет морфологию и отношение бактерий к красителям. Препарат медленно проносят 2–4 раза (в
течение 3–4 с) над пламенем спиртовки мазком вверх (стекло должно нагреться до такой степени, чтобы при прикосновении к
тыльной стороне ладони вызывало легкое жжение).
Более длительное 36 нагревание может вызвать деформацию клеточных структур. Фиксация мазка преследует следующие цели:
а) инактивировать микроорганизмы (они погибают);
б) закрепить их на поверхности стекла и предотвратить их смывание при последующем окрашивании;
в) повысить восприимчивость клеток к красителям.
Для более детального изучения структуры клеток используют фиксирующие растворы, предотвращающие ферментативный
автолиз бактерий и стабилизирующие макромолекулы путем химического их сшивания. Наиболее часто применяют формалин,
спирты, жидкость Карнуа, ацетон и др. Мазки фиксируют, помещая препараты в раствор фиксатора на некоторое время или нанося
фиксатор на мазок.
 ПРОСТЫЕ И СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ
ОКРАСКИ
Протравы – физические и химические факторы, обладающие свойствами повышать окрашиваемость
микробов. Уплотняя цитоплаз­му, они могут делать окраску более прочной, или усиливать красящие
свойства красителя, или разрыхлять оболочки клеток, спор, способствуя проникновению краски в клетку.
Протравами обрабатывают мазок:
а) перед окрашиванием – воздействуя раствором НCl при окраске спор у бактерий в методе Ожешки,
б) в момент окраски – фенол и высокая температура (подогревание препарата) в методе Циля-
Нильсена;
в) после нанесения краски для ее закрепления – раствор Люголя в методе Грама
Дифференцирующие вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры
бактериальных клеток и не обесцвечивают другие. Например: этиловый спирт в окраске по Граму,
серная кислота в методах Циль-Нильсена и Ожешки.
 ОСНОВНЫЕ ВИДЫ КРАСИТЕЛЕЙ, КОТОРЫЕ
ПРИМЕНЯЮТСЯ В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

• В нативном (естественном) состоянии бактерии имеют такой же

коэффициент преломления, как и стекло, поэтому они невидимы при
микроскопическом исследовании.
• Окраска микроорганизмов позволяет изучить морфологические
особенности микробов

красное голубое (синее) фиолетовое желто- зеленое

коричнево
е
фуксин основной, метиленовый и генцианвиолет, хризоидин бриллиантовый
нейтральный толуидиновый метиленовый везувин зеленый,
красный, конго синий фиолетовый малахитовый
красный зеленый
МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ.
МЕТОДЫ ОКРАСКИ.
 Виды красителей

• В нативном (естественном) состоянии бактерии имеют такой же коэффициент

преломления, как и стекло, поэтому они невидимы при микроскопическом
исследовании.
• Окраска микроорганизмов позволяет изучить морфологические особенности
микробов

Основные виды красителей, которые применяются в

микробиологической практике:

 Дают     следующее      окрашивание
красное голубое (синее) фиолетовое желто- зеленое
коричневое

фуксин метиленовый и генцианвиолет, хризоидин бриллиантовый

основной, толуидиновый метиленовый везувин зеленый,
нейтральный синий фиолетовый малахитовый
красный, конго зеленый
красный

Простой метод
• 1 этап
• 1 краситель
• Можно оценить форму, размеры и
взаимное расположение клеток
Стрептококки -это кокки,
расположенные цепочками
МЕТОДЫ ОКРАСКИ
Сложные методы
• Несколько этапов
• 2 красителя
• Протравы
• Дифференцирующие вещества
• Позволяют отличить одну группу
бактерий от другой или выявить
определенные структуры
бактериальной клетки
Грамположительные
(фиолетовые) кокки и
грамотрицательные
(красные) палочки
 МЕТОДЫ ОКРАСКИ

Протравы – физические и химические факторы, обладающие свойствами повышать

окрашиваемость микробов. Уплотняя цитоплаз­му, они могут делать окраску более
прочной, или усиливать красящие свойства красителя, или разрыхлять оболочки
клеток, спор, способствуя проникновению краски в клетку.
Протравами обрабатывают мазок:
а) перед окрашиванием – воздействуя раствором НCl при окраске спор у бактерий в
методе Ожешки,
б) в момент окраски – фенол и высокая температура (подогревание препарата) в методе
Циля-Нильсена;
в) после нанесения краски для ее закрепления – раствор Люголя в методе Грама.
Дифференцирующие вещества избирательно обесцвечивают одни виды или
структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие. Например: этиловый
спирт в окраске по Граму, серная кислота в методах Циль-Нильсена и Ожешки.
 ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ
ФИКСИРОВАННОГО МАЗКА

• Фиксированный мазок – основа большинства методов окраски

• На обезжиренное предметное стекло наносят бактериальной петлей
маленькую каплю исследуемой жидкости; воды или стерильного
физиологического раствора и бактериологической петлей переносят в
нее небольшое количество исследуемого материала.
• Полученную суспензию равномерно распределяют тонким слоем на
площади 1 – 2 см петлей. 
• Препарат высушивают при комнатной температуре на воздухе. Для
ускорения высушивания допускается подогревание мазка в струе
теплого воздуха высоко над пламенем горелки.
• Высушенный мазок фиксируют в пламени горелки.
• Фиксация мазка является обязательной процедурой, в результате
которой микробы погибают, прочно прикреп­ляются к стеклу и
значительно лучше воспринимают окраску.
 ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ФИКСИРОВАННОГО
МАЗКА. ПРОСТОЙ МЕТОД ОКРАСКИ
Способы фиксации:
• обычно применяют фиксацию в пламени го­релки
(фиксация жаром): предметное стекло в положении
мазком вверх 3 раза проводят через пламя горелки.
• применяют также различные жидкие фиксаторы,
оказывающие более щадящее действие, например:
этиловый или метиловый спирт, ацетон, формалин и
др. Существуют также жидкие фиксаторы,
представляющие собой смесь нескольких веществ,
например, по Никифорову (смесь этилового спирта и
эфира 1:1).
• Выбор способа фиксации зависит от окрашиваемого
объекта: в жидких фиксаторах фиксируют мазки из
крови, гноя, мокроты и т.п. и метода окраски.

Дифференциальные
• Метод Грама –
дифференцирует
грамположительные и
грамотрицательные бактерии –
важный таксономический
признак
СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ
Выявляющие структуры бактериальной
клетки
• Метод Ожешко – споры
• Метод Бурри-Гинса – капсула
• Метод Нейссера – включения волютина

• Метод Циля-Нильсена –
дифференцирует • Метод Пешкова – клеточная стенка
кислотоустойчивые и
некислотоустойчивые
бактерии – принципиальное • Метод Романовского-Гимзы – универсальный –
значение в диагностике окраска нуклеоида, риккетсий, хламидий,
туберкулеза спирохет
 МЕТОД ГРАМА

цель метода Выявление грамположительных и

грамотрицательных бактерий
основной карболовый раствор генцианвиолета
краситель
протрава раствор Люголя (после окрашивания)
дифференцирующ этанол
ее вещество
дополнительный разбавленный карболовый раствор фуксина
краситель
способ фиксации в пламени спиртовки до окрашивания
препарата-мазка

этапы окраски Окрасить раствором генцианвиолета 1 мин.

(или с бумажкой – 3 мин.);
Нанести на мазок раствор Люголя – 1 мин.;
Промыть в этаноле 30 сек.;
Промыть водой;
Окрасить раствором фуксина 1 мин. (или с
бумажкой – 5 мин.);
Промыть водой;
Высушить

сущность метода Генцианвиолет образует комплекс с

тейхоевыми кислотами в присутствии
Люголя, который задерживается
многослойным пептидогликаном у
грамположительных бактерий

Грамположительные –Staphylococcus- фиолетовые;

Грамотрицательные–E.coli-красные
 МЕТОД ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА

цель метода Выявление кислотоустойчивых и

некислотоустойчивых бактерий
основной карболовый раствор фуксина
краситель
протрава карболовая кислота (в момент
окрашивания)
дифференциру серная кислота
ющее вещество
дополнительный водный раствор метиленового синего
краситель
способ в пламени спиртовки в процессе окраски
фиксации
препарата-мазка
этапы окраски Окрашивать карболовым раствором
фуксина (фуксин Циля) через
фильтровальную бумажку при осторожном
нагревании над пламенем спиртовки 3
раза до появления паров белого цвета (1);
Промыть в 5% серной кислоте;
Промыть водой;
Окрасить раствором метиленового синего
1 мин.;
Промыть водой;
Высушить
Кислотоустойчивые –
сущность При частичном гидролизе клеточной Mycobacterium-
метода стенки фуксин взаимодействует с красные;
миколовыми кислотами и образует некислотоустойчивые
комплекс в присутствии фенола – Staphylococcus-синие
 МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ СПОР

При простом способе окраски спора не прокрашивается – в этом случае видны только эндоспоры
как бесцветные образования в клетке
Эндоспоры в теле клетки может располагаться:
• 1. центрально — возбудитель сибирской язвы Вacillus anthracis;
• 2. терминально — на конце палочки (возбудитель столбняка Clostridium Tetani);
• 3. субтерминально — ближе к концу (возбудитель ботулизма, Clostridium botulinum).
Способность бактерий образовывать споры, различающиеся по форме размерам и локализации в
клетке, является таксономическим признаком, который используется для их дифференцировки

1. Вacillus anthracis 2. Clostridium Tetani

3. Clostridium Вotulinum
 Методы выявления спор. Метод
Ожешко

цель метода Выявление спор у бактерий

основной фуксин Циля

краситель
протрава соляная кислота (до окрашивания),
карболовая кислота (в момент окрашивания)
дифференцирующ серная кислота
ее вещество
дополнительный водный раствор метиленового синего
краситель
способ фиксации в пламени спиртовки в процессе окраски
препарата-мазка

этапы окраски На высушенный мазок наложить

фильтровальную бумажку, налить 0,5%
раствор соляной кислоты и нагревать над
пламенем спиртовки до появления пара 3
раза;
Далее окрашивать по Цилю-Нильсену. Споры малиновые, видны как
эндоспоры внутри
сущность метода Внутренние оболочки споры содержат Вегетативные клетки синие
большое количество липидов, которые
вегетативных клеток , так и
придают ей свойство кислотоустойчивости отдельные споры
 Методы выявления капсул

  метод Бурри-Гинса
(цитохимический)
• Капсулы имеют консистенцию цель метода Выявление капсулы у бактерий в чистой
геля, плохо удерживают краситель, культуре
и для их выявления чаще всего основной краситель не окрашивается, применяется оттеняющее
вещество - тушь
применяют методы негативного протрава -
контрастирования дифференцирующее - Str.pneumoniae
вещество Простой метод (фуксин)
• Капсула выявляется при любом дополнительный карболовый раствор фуксина
методе окраски в виде краситель
неокрашенной зоны между способ фиксации в пламени спиртовки (в этаноле) до
окрашенными телом бактерий и препарата-мазка окрашивания
этапы окраски В каплю туши добавить каплю жидкости с
субстратом.  микроорганизмами и растереть тонким слоем
как мазок крови;
• При простом методе и методе Высушить и зафиксировать;
Грама достаточно не промывать Окрасить фуксином Циля 1 мин.;
мазок на последнем этапе окраски Высушить
сущность метода Капсула не окрашивается, задерживает тушь на
поверхности, а фуксин окрашивает
бактериальную клетку

Метод Бурри-Гинса: на
фоне туши видны
красные палочки,
окруженные бесцветной Грамположительные палоч
капсулой рода Bacillus
Окраска по Граму
 ВКЛЮЧЕНИЯ ВОЛЮТИНА
  метод Нейссера
Метод Леффлера (простой метод) (цитохимический)
• Для окраски используют щелочной цель метода Выявление включений - зёрен волютина
основной краситель раствор уксуснокислой синьки
р-р метиленового синего, который протрава раствор Люголя
наносят на 3 - 5 мин на Включения волютина постоянно дифференцирующее -
вещество
фиксированный мазок, после чего имеют возбудитель дифтерии- дополнительный раствор везувина
Corynebacterium diphtheriae, краситель
смывают водой, мазок дрожжеподобные грибы рода
способ фиксации в пламени спиртовки до окрашивания
препарата-мазка
высушивают и микроскопируют. Candida, что является этапы окраски Окрасть уксуснокислой синькой 1 мин.;
• Протоплазма бактерий таксономическим признаком
Промыть водой;
Обработать раствором Люголя 30 сек.;
окрашивается в голубой цвет, Окрасить везувином 30 сек.;
Промыть водой
волютиновые зерна -в темно- Высушить
сущность метода Включения волютина содержат
синий. полифосфаты и имеют слабощелочной рН и
окрашиваются синькой, которая
закрепляется Люголем, цитоплазма имеет
кислый рН и окрашивается везувином

Сandida albicans окраска по Леффлеру: в C.diphtheriae окраска по Леффлеру: на

голубой цитоплазме видны глыбки полюсах палочек утолщения – зерна
C.diphtheriae окраска по Нейссеру волютина волютина
 ОКРАСКА КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ПО
ПЕШКОВУ
  метод Пешкова
(цитохимический)
цель метода Выявление клеточной стенки бактерий
основной краситель водный раствор фуксина
протрава раствор танина
дифференцирующее вещество -
дополнительный краситель -
способ фиксации препарата-мазка в жидкости Карнуа 15 мин. перед окрашиванием и промывают водой

этапы окраски Мазок протравливать в 10% водном растворе танина 6-8 мин.;
Промыть водой;
Окрашивать водным раствором фуксина 30-60 сек.;
Высушить
 
сущность метода Танин уплотняет клеточную стенку бактерий, и большая часть фуксина задерживается
в ней
микроскопическая картина (рисунок с пояснением) КС –красная; цитоплазма -розовая

Bacillus cereus окраска по Пешкову:

клеточная стенка окрашивается более
интенсивно
 ОКРАСКА НУКЛЕОИДА ПО
РОМАНОВСКОМУ-ГИМЗЕ

  метод Романовского-Гимзы
(универсальный)
цель метода Дифференциальное окрашивание
отдельных групп м/о и выявление
нуклеоида
основной краситель краситель Романовского-Гимзы
(азур, эозин, метиленовый синий)
протрава соляная кислота
дифференцирующе -
е вещество
дополнительный -
краситель
способ фиксации в жидкости Карнуа 15 мин. перед
препарата-мазка окрашиванием
этапы окраски Провести кислотный гидролиз в
растворе соляной кислоты при • Bacillus cereus окраска по Романовскому-Гимзе:
нагревании; цитоплазма розовая, нуклеоиды – фиолетовые
Промыть водой;
Окрашивают краской • Поскольку деление цитоплазмы происходит
Романовского-Гимзы 40-60 мин.;
Промыть водой;
несинхронно с репликацией, в растущей
Высушить культуре в одной клетке видны несколько
сущность метода Азур и метиленовый синий нуклеоидов.
окрашивают участки клетки со
слабощелочным рН, эозин с
кислым
 РАЗДЕЛ 4
1. Виды вирусов
2. Виды вирионов
1. Бактериофаги
1. Преимущества
2. Строение бактериофага
3. Механизм действия бактериофагов
2. Вирусы
1. Структура вируса
2. Репродукция вируса
3. Реассортация вируса
4. Коронавирус
5. Коронавирус – схема строения вириона
6. Жизненный цикл коронавирусов
 ВИДЫ ВИРУСОВ
(А. Примеры)
Из множества известных вирусов на схеме представлены лишь отдельные
представители. Все изображения даны при одинаковом увеличении. Вирусы,
размножающиеся только в бактериях, носят название бактериофаги (коротко: фаги).
Наиболее простое строение имеет фаг М13 (1). Он состоит из одной однонитевой
молекулы ДНК [онДНК (ssDNA)], содержащей примерно 7000 н.о. (н.о. — нуклеиновое
основание), окруженной белковой оболочкой из 2700 субъединиц, упакованных по
спирали. Оболочка вируса носит название капсид, а структура в целом —
нуклеокапсид. M13 используется в генной инженерии в качестве вектора (см. с. 256).
Фаг Т4 (1), один из наиболее крупных вирусов, имеет более сложное строение. В
«головке» вируса содержится двунитевая ДНК [днДНК (dsDNA)], насчитывающая
170000 н.о.
Патогенный для растений вирус табачной мозаики (2) построен аналогично M13, но
вместо ДНК содержит онРНК (ssRNA). K РНК-содержащим вирусам относится также
вирус полиомиелита (полиовирус), вызывающий детский паралич. Нуклеокапсид
вируса гриппа имеет дополнительную оболочку, заимствованную у плазматической
мембраны клетки-хозяина (B). На липидной оболочке фиксированы вирусные белки,
принимающие участие и инфицировании клетки-хозяина.
(Б. Капсид риновируса)
Риновирусы являются возбудителями так называемых «простудных заболеваний».
Капсид этого вируса имеет форму икосаэдра, геометрической фигуры, построенной из
20 равносторонних треугольников. Оболочка сформирована из трех различных белков,
расположенных в форме пентамеров и гексамеров.
 ВИДЫ ВИРИОНОВ
Подсемейство Coronavirinae имеет
сфероидную форму с характерным
диаметром 120 –160 нм
Вирусы, входящие в род Torovirus, по
форме напоминают крендельки 100 –140
× 35 –50 нм
Вирусы рода Bafinivirus имеют
палочковидную (бациллоподобную)
форму 170–200 нм в длину и 75 –88 нм в
диаметре
 БАКТЕРИОФАГИ
Бактериофаги — современные антимикробные препараты природного происхождения.
Это микроорганизмы, способные точечно уничтожать только болезнетворные бактерии.
Бактериофаги используются в профилактике и антибактериальной терапии заболеваний,
возбудителями которых являются патогенные бактерии.
 ПРЕИМУЩЕСТВА
Преимущества бактериофагов перед антибиотиками заключаются в следующем:
они способны уничтожать бактерии, устойчивые к антибиотикам
свободно проникают в ткани организма человека и животного, не нарушая баланса
микрофлоры хозяина;
не вызывают побочных эффектов;
сочетаются со многими лекарственными препаратами;
оказывают иммуностимулирующее действие и не обладают иммуносупрессивным влиянием

Однако при использовании фагов в этих целях необходимо учитывать иммунные ответы
макроорганизма на их введение.
СТРОЕНИЕ БАКТЕРИОФАГА

Бактериофаги имеют кубическую, нитевидную

или форму головастика. Головка бактериофага (1)
содержит нуклеиновую кислоту (ДНК или РНК)
(2), заключённую в белковую оболочку(3).
Ниже расположен хвостовой отросток (4),
состоящий из внутреннего стержня (5) и
сократительного чехла (6). Передвигается
бактериофаг с помощью ножек-фибрилл (8),
скреплённых в центре базальной пластиной (7).
Размер бактериофага в сотни и тысячи раз
меньше микробных клеток.
МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ
БАКТЕРИОФАГОВ
 ВИРУСЫ
Вирусы — это паразитические нуклеопротеидные комплексы. Наиболее простые вирусы
имеют в своем составе только одну молекулу нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК,
никогда вместе) и оболочку из молекул белка. В вирусах не идут процессы обмена
веществ, они размножаются только в клетке-хозяине. Поэтому их не относят к живым
организмам. Вирусы, которые при своем размножении повреждают клетку-хозяина,
являются возбудителями заболеваний и считаются патогенными. К заболеваниям вирусной
этиологии относятся синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), бешенство,
полиомиелит, корь, краснуха, оспа, гепатит, грипп и другие инфекции верхних
дыхательных путей (простуды).
СТРУКТУРА ВИРУСА
РЕПРОДУКЦИЯ ВИРУСА
 РЕАССОРТАЦИЯ ВИРУСА
Реассортация - смешение генетического материала
вида, приводящее к появлению совершенно новых
комбинаций у дочерних особей. Несколько процессов
способствуют реассортации, в их числе хромосомная
сортировка и кроссинговер.
Отчасти этот процесс имеет место тогда, когда два
похожих вируса поражают одну и ту же клетку и
обмениваются генетическим материалом. В частности,
реассортация происходит у вируса гриппа, чей геном
состоит из 8 отдельных сегментов РНК. Эти сегменты
выступают как мини-хромосомы, и всякий раз, когда
происходит сборка частицы вируса гриппа, в состав
частицы включается одна копия каждого сегмента.
 КОРОНАВИРУС
Коронавирус
• РНК-содержащий вирус
• Зоонозная инфекция
• Включает на сегодняшнее время года 43 вида РНК-содержащих вирусов, объединённых в
два подсемейства
• Активно мутирует
Название обусловлено строением вируса
наличием шиповидных отростков, Различие вируса и коронавируса
напоминающих «солнечную корону»
лат. Coronaviridae)
 КОРОНАВИРУС – СХЕМА
СТРОЕНИЯ ВИРИОНА
• сферические частицы диаметром 120
нм
• оболочка вириона содержит
булавовидные отростки (S, spike)
• белки оболочки E
• мембранный белок M
• нуклеокапсидный белок N
• РНК
 ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ
КОРОНАВИРУСОВ
• проникновение вируса в клетку с помощью S
белка (рецептор ангиотензинсвязывающий
белок)
• трансляция полипротеинов и процессинг
репликативного комплекса
• репликация и транскрипция вируса
• синтез структурных белков
• сборка и отпочковывание вирионов от ЭПР и
комплекса Гольджи
• выход - экзоцитоз
 БОНУС
1. Актуальность проблемы
2. SARS-CoV
3. MERS-CoV
4. Распространение
5. Тяжесть течения
6. Лечение
7. Жизненный цикл SARS-CoV-2
8. Точки зрения о мутациях коронавируса SARS-CoV-2
 АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
Коронавирус SARS-Cov-2 является новым вирусом, обладающим способностью
осуществлять трансмиссию воздушно-капельным путем, вызывая тяжелое течение
атипичной пневмонии. Роль его структурных белков в патогенезе неизвестна.
Основная проблема этого вида вируса SARS-CoV-2 заключается в его
предшественниках.
Данный коронавирус относится к той же группе вирусов, что и возбудитель атипичной
пневмонии SARS-CoV, а также штамм ближневосточного респираторного синдрома
MERS-CoV
 SARS-COV
Описание
Тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС) был впервые зарегистрирован в Китае в 2002 году. Возбудителем являлся
коронавирус SARS-CoV. Надо сказать, что вирусы могут иметь большие различия в контексте судьбы клетки-хозяина. Часть вирусов
при размножении минимально травмирует клетку-хозяина и оставляет ее в живых. Часть — выходит в среду только после разрушения
цитоплазмы эукариотической клетки. SARS-CoV относился как раз к разновидности, уничтожающей носитель в процессе размножения,
что приводило к разрушению клеток легочных альвеол в течение острого периода болезни.
После инкубации в течение 2-10 суток, заболевание начиналось как легкий насморк и типичная ОРВИ. Дальше развитие шло по
следующему сценарию:
1. стадия первичной гриппоподобной инфекции (длится 2-3 дня), состояние больного средней тяжести
2. стадия иммунодефицита (резкое снижение иммунитета, критическое падение числа лимфоцитов, ухудшение состояния больных,
длится 3-4 дня)
3. стадия атипичной пневмонии, развивающейся на фоне снижения иммунитета и сопровождающейся дистресс-синдромом.
Дыхательная недостаточность, отек легких
4. терминальная стадия, сопровождающаяся токсическим шоком с выраженной недостаточностью функции органовЛетальность и
эпидемиология
Летальность и эпидемиология
Течение в целом благоприятное. 90% пациентов выздоравливало без особых последствий на 6-7 сутки. Это приблизительный срок,
необходимый для выработки антител к любому незнакомому антигену.
У оставшейся группы вирус вызывал тяжелый острый респираторный синдром, летальность которого составила 6-15%, при этом
распределение было неравномерным. У пациентов старше 50 лет смертность доходила до 50%. Пациенты нуждались в искусственной
вентиляции легких, подаче дополнительного кислорода для компенсации острой легочной недостаточности.
Всего было зарегистрировано 8437 случаев заболевания, из которых 813 закончились летальным исходом.
 MERS-COV

Описание
Еще более неприятный вирус MERS-CoV, вызывавший ближневосточный респираторный
синдром является зоонозом, то есть резервуаром заболевания являются животные.
Первичными носителями, судя по всему, являются летучие мыши и, возможно, верблюды. От
человека к человеку он передавался с большим трудом, только при тесном контакте. Клиника
очень похожа на SARS, но отличается более агрессивным течением и большей летальностью.
Эпидемиология и летальность
Относительно благоприятным эпидемиологическим фактором была низкая контагиозность
этого коронавируса. Некоторые исследователи полагают, что основная часть заболевших
заразилась не от других людей, а от больных животных.
Уровень смертности среди инфицированных составляет, по разным данным, от 27% до 40%.
Всего было зарегистрировано 1154 подтвержденных случая и не менее, чем 431 погибший.
 РАСПРОСТРАНЕНИЕ
Вспышка SARS-CoV-2, начавшаяся в Ухане, потенциально является одной из самых значительных
опасностей, с которыми сталкивалось человечество. Исходным резервуаром предположительно являются
коронавирусы летучих мышей, в частности азиатских подковоносов. В этом регионе Китая летучих
мышей употребляют в пищу, что сильно увеличивает риски межвидового переноса в случае мутации.
Инкубационный период зависит от источника вируса. При заражении от животного он составляет 6-12
дней. При заражении от человека — не более 5 дней.
Вирус может передаваться от человека к человеку и отличается высокой контагиозностью, что
радикально отличает его от предыдущих SARS-CoV и MERS-CoV. Есть такой показатель как basic
reproduction number — R0. Он показывает, сколько людей успевает заразить больной за период болезни.
Если число меньше 1, то эпидемия гаснет сама собой. Если больше, то оно определяет скорость
нарастания эпидемии и возможность пандемии. Например, у кори это число 12-18. Практически
достаточно посмотреть на больного издали, чтобы заразиться. Что-то аналогичное у краснухи. Обычный
грипп имеет R0 в районе 2-3.
Последние данные по SARS-CoV-2 говорят о диапазоне 3.3 — 5.47.
 ТЯЖЕСТЬ ТЕЧЕНИЯ
Клиника очень похожа на SARS/MERS. Вначале гриппоподобное состояние, кашель, температура.
Затем резкое ухудшение состояния и появление проблем с дыханием на 8-9 сутки с развитием острого
респираторного синдрома. Вирус вызывает очень тяжелую пневмонию, разрушая клетки легочных
альвеол. Есть риски присоединения бактериальной инфекции.
Хуже всего в данной ситуации — большой процент пациентов, которые нуждаются в интенсивной
терапии. На данный момент это 976 человек из 4515 подтверждённых заражений. Такие пациенты не
могут лежать дома и пить чай с малиной. Им требуется госпитализация, ИВЛ, кислород и, возможно,
реанимация. Если соотношение будет сохраняться, то мы имеем потенциальные 200 000 пациентов
реанимации на каждый миллион населения. Обеспечить такое количество койко-мест и аппаратуры
всем нуждающимся практически невозможно.
Летальность пока очень сложно определить. При 4515 зараженных имеем 60 выздоровевших и 106
умерших. Пропорции 60/106 жуткие, но есть шанс, что через неделю начнут массово выздоравливать
заболевшие первой волны, которых начнут выписывать из больницы. Тем не менее проблема ресурсов
здравоохранения в мире остается самой большой проблемой для тяжелых больных.
 ЛЕЧЕНИЕ
Пока отсутствует. Не ведитесь на фуфломицины, арбидолы и прочие *фероны. Бессмысленно
стимулировать иммунитет, если пациент не успеет синтезировать антитела до отказа дыхательной
системы. Препараты прямого действия на вирус пока не изучены, но, возможно, скоро будут
какие-то данные. По данным Lancet, пациенты получали антибиотики широкого спектра действия,
кортикостероиды как противовоспалительное и различные комбинации противовирусных.
Есть подозрение, что может оказаться эффективным довольно токсичный рибавирин, который сам
по себе обладает тератогенным воздействием (может вызывать уродства плода) и может приводить
к смерти из-за подавления кроветворения. Поэтому беременным его нельзя и применение строго
под присмотром врача. Он демонстрировал положительные эффекты на SARS.
«А вакцина?»
Не в ближайшее время. В лучшем случае к 2022-2023 году. 2020 год — испытания на животных.
При успешности, 2021 год — на людях, 2022 — тиражирование и производство, 2023 — начало
вакцинации. Если судить по проблемам с прошлыми коронавирусами, все будет дольше, .
 ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ SARS-COV-2
Геном представлен одноцепочечной (+)РНК. Нуклеокапсид окружён белковой мембраной и липосодержащей внешней оболочкой, от которой отходят булавовидные
шиповидные отростки, напоминающие корону, за что семейство и получило своё название. Культивируют на культуре тканей эмбриона человека.

SARS-CoV-2 использует S-белок на короне для прикрепления к своему рецептору — ангиотензинпревращающему ферменту 2 (ACE2), а также к сериновой протеазе
TMPRSS2, как и вирус SARS-CoV (атипичной пневмонии). Клетка окутывает вирус своей мембраной, и образовавшийся мембранный пузырёк оказывается в
цитоплазме клетки. Два упомянутых белка-рецептора клетки трансформируют S-белок вируса таким образом, что мембраны вируса и клетки сливаются.

После проникновения в клетку вирус с помощью внутриклеточных мембран создаёт мембранные пузырьки, к которым прикрепляются специальные белковые
комплексы. В этих комплексах синтезируется копия геномной РНК вируса и короткие мРНК для синтеза белков вируса.

РНК вируса имеет 5'-метилированное начало и 3'-полиаденилированное окончание. Это позволяет вирусу инициировать на своих РНК сборки своих белков рибосомами
клетки, которая не в состоянии определить, это РНК вируса или РНК для белков самой клетки.

Коронавирусы имеют РНК около 26—30 тысяч пар оснований, это означает, что коронавирусы обладают крупнейшей несегментированной РНК среди всех известных
вирусов, то есть являются сложнейшими по структуре среди известных вирусов. Геном вируса состоит из более чем 20 000 нуклеотидов и кодирует два репликативных
полипротеина pp1a и pp1ab, из которых в следующий проход репликации/трансляции формируется копия РНК вируса, а также 8 отдельных мРНК-шаблонов для белков
вирусов, которые бесконечно их генерируют. Генерация белков M, S, HE и E, попадающих в мембранную липидную оболочку вируса, происходит на соответствующих
мРНК в эндоплазматическом ретикулуме клетки; белок же N, который будет окружать геномную РНК вируса, синтезируется на мРНК, плавающих в цитоплазме клетки.

После получения геномной РНК вируса и необходимых его белков эта РНК, окутанная белком N, приближается к сидящим на эндоплазматическом ретикулуме белкам и
взаимодействует с ними. В результате мембрана эндоплазматического ретикулума с находящимися в ней вирусными белками охватывает эту РНК, формируя вирион.
Вирионы затем высвобождаются из инфицированной клетки через экзоцитоз. После выхода вирионов из клетки она погибает.
 ТОЧКИ ЗРЕНИЯ О МУТАЦИЯХ КОРОНАВИРУСА
НА ПРИМЕРЕ COVID-19 (SARS-COV-2)

Существует несколько точек зрения относительно того, как быстро мутирует коронавирус и к чему
это приводит.
По некоторым данным, новый коронавирус мутирует медленнее, чем другие РНК-содержащие вирусы
или вирус гриппа, для которого характерна частота мутаций 1 раз в 10 дней.
Исследования геномов SARS-CoV-2 в разных регионах мира показали, что все его разновидности
имеют общего предка, время появления вируса, и определили те его участки, где чаще всего
встречаются изменения.
Эти мутации сравнивались с вирусами SARS-CoV-1 и MERS-CoV, которые являются
предшественниками SARS-CoV-2. Выяснилось, что в то время, как у SARS-CoV-1 известны около 6
штаммов, а у MERS-CoV – 350 штаммов, у нового коронавируса на сегодняшний день изучены около
200 штаммов. Это подтверждает, что SARS-CoV-2 продолжает адаптацию в организме человека.
Есть также точка зрения, что чем больше вирус мутирует, тем быстрее он ослабевает и будет меньше
передаваться от одного человека к другому.
 Спасибо за внимание!

P.S. - Не, правда спасибо если

досмотрели до конца, я месяц
потратил на создание презентации.