Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Бишкек 2014
Рекомендовано к изданию Ученым Советом МЗ КР…
Авторский коллектив:
Кучук Т.Э., к.м.н. руководитель Республиканского научно-практического центра контроля
качества лабораторной диагностики инфекционных болезней НПО
«Профилактическая медицина» МЗ КР
Сборник предназначен для специалистов Центров по борьбе со СПИД, лабораторий диагностики ВИЧ/
СПИД, специалистов клинико-диагностических лабораторий, руководителей лечебных учреждений
различного уровня, врачей эпидемиологов, врачей и среднего медицинского персонала общей практи-
ки, преподавателей КГМИиПК.
Сборник СОП издан при финансовой и технической поддержке совместного проекта Объединённой
программы ООН по ВИЧ/СПИДу (ЮНЭЙДС) и Программы технической помощи странам Восточной
Европы и Центральной Азии в области противодействия ВИЧ/СПИДу, ИППП и вирусным гепатитам,
при финансовой поддержке Правительства Российской Федерации.
Ответственность за содержание сборника СОП лежит на представителях рабочей группы. Сборник не
обязательно отражает точку зрения Объединённой программы ООН по ВИЧ/СПИДу (ЮНЭЙДС), её
программ и проектов.
Все права защищены. При воспроизведении и переводе ссылка на сборник СОП обязательна.
СОДЕРЖАНИЕ Стр.
Введение.............................................................................................................................................................................
Раздел 01 Общий...............................................................................................................................................................
Раздел 02 Преаналитика.................................................................................................................................................
Правила взятия крови из вены с помощью вакуумной системы для проведения исследований
СОП № 02-01 на ВИЧ методом иммуноферментного ...........................................................................................
Правила взятия крови у новорождённых и детей из вены для проведения исследований на
СОП № 02-02 ВИЧ методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Кучук Т.Э.).................................................
Правила взятия крови из вены с помощью шприца для проведения исследований на ВИЧ
СОП № 02-03 методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Кучук Т.Э.)..........................................................
СОП № 02-04 Правила транспортировки и передачи образцов крови в лабораторию (Кучук Т.Э.).................
СОП № 02-06 Правила центрифугирования для выделения сыворотки из крови (Кучук Т.Э.).........................
СОП № 02-07 Правила взятия образцов венозной крови на маркеры СД4/СД8 (Момушева К.Т.)....................
СОП № 03-05 СОП: Правила эксплуатации вортекса «Vortex Mixers модель M37600».....................................
СОП № 04-06 Экспресс-тестирование с применением тестов «ДETERMIN HIV½ Ag» по сыворотке крови
СОП № 07-06 Экстракция ДНК из СККК при использовании комплекта реагентов «РИБО-преп».................
СОП № 08-06 Разработка внутрилабораторного стандарта для ПЦР исследований (Касымбекова К.Т.)........
СОП № 09-07 Правила биобезопасности при работе в лаборатории диагностики ВИЧ (Касымбекова К.Т.)..
ВВЕДЕНИЕ
В соответствии с требованиями международных стандартов и принципов1 все процессы в
лаборатории должны быть стандартизированы. Стандартизация условий выполнения процедур на
всех этапах лабораторного процесса повышает надёжность проводимых исследований, обеспечивает
достоверность получаемых результатов и способствует управлению качеством в лаборатории.
Стандартные операционные процедуры (СОП) являются неотъемлемой частью стандартизации и
позволяют пошагово, в логическом порядке и хронологической последовательности выполнять все
необходимые действия, а также гарантировать их воспроизведение повторно.
Данный сборник включает типовые СОП по всем применяемым в лабораториях республики методам
диагностики ВИЧ/СПИД: иммуноферментному анализу, экспресс-тестированию, иммунному блотингу,
проточной цитометрии, полимеразной цепной реакции. Сборник включает разделы, посвящённые
вопросам управления основными процессами для обеспечения их качества (персоналом, оборудованием,
документами и записями, контролю качества), обеспечения стандартных условий проведения
долабораторного (преаналитического) и лабораторного (аналитического) этапов в зависимости от
используемого метода исследования, правилам проведения внутрилабораторного контроля качества и
безопасной лабораторной практики.
Следует отметить, что сборник стандартных операционных процедур разработан для референс-
лаборатории Республиканского центра СПИД Кыргызстана и может быть принят за основу другими
лабораториями при создании собственных СОП. При создании и внедрении СОП лабораториям следует
учитывать два основных условия: 1) необходимо соблюдать единый принцип оформления разделов СОП
в соответствии с требованиями, сформулированными в ISO 15189 и представленными в СОП № 01-01
данного документа; и 2) необходимо обучить сотрудников лаборатории работать с СОП.
1 ISO 9000 «Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь»; 9001 «Системы менеджмента качества.
Требования»; ISO 15189 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности».
АИВ - ИНФЕКЦИЯСЫН ЛАБОРАТОРИЯЛЫК АНЫКТОО БОЮНЧА СТАНДАРТТЫК
8
ОПЕРАЦИЯЛАР ПРОЦЕДУРАСЫНЫН ЖЫЙНАГЫ
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 9
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
–– На каждой странице СОП слева нижнего формата укажите название СОП, а справа укажите
номер текущей страницы из числа общих страниц документа.
23. В разделе «РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ» укажите документы, являющиеся источником для
написания СОП.
24. Во избежание пользования устаревшими СОП строго контролируйте их выдачу и изъятие и ведите
соответствующие записи в главе «ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ».
25. Заполните таблицу с указанием фамилий сотрудников, кому будет выдана СОП.
26. Сделайте необходимое число копий СОП и прономеруйте каждую копию индивидуальным номером.
На оригинале номер не ставится.
27. Контроль устанавливается только над официальными копиями. Копии без номера считаются
неофициальными и не контролируются.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
12
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
28. Сотрудник, получивший копию СОП, должен расписаться и поставить дату в таблице ВЫДАЧА И
ИЗЬЯТИЕ в соответствующей графе оригинала СОП.
29. В случае внесения в СОП изменений устаревшие СОП должны быть изъяты у сотрудников в момент
выдачи обновлённых СОП.
30. Сотрудник, вернувший устаревший СОП, должен расписаться и поставить дату на оригинале СОП
в соответствующей графе таблицы.
31. На каждой странице оригинала устаревшего СОП напишите ручкой «Архив» и вложите в папку
«Архив СОП».
32. Уничтожьте все изъятые устаревшие копии СОП.
33. Все вносимые изменения регистрируются в главе «ИЗМЕНЕНИЯ» с указанием даты и причины
изменения СОП.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Порядок идентификации разделов СОП в референс-лаборатории диагностики ВИЧ/СПД:
№ раздела СОП Наименование раздела СОП
01 Общий
02 Преаналитика
03 Иммуноферментный анализ
04 Экспресс-тестирование
04/1 Инструкции
05 Иммунный блотинг
06 Проточная цитометрия
07 Полимеразная цепная реакция
08 Контроль качества
09 Безопасность в лаборатории
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 13
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
5. Организуйте для различных видов исследования отдельные помещения или рабочие зоны (например:
для приема и первичной обработки проб, для пробоподготовки, для проведения ИФА-исследований
и т.д.).
6. Разделите помещения на «заразную» и «чистую» зоны, которые обеспечивают поточность
продвижения ПБА.
В «чистой» зоне лабораторий расположите:
–– гардероб для верхней одежды;
–– помещение с холодильной камерой или холодильниками для хранения диагностических
препаратов;
–– комнаты для работы с документами и литературой;
–– комната отдыха;
–– кабинет заведующего;
–– кабинет персонала;
–– подсобные помещения;
–– туалет.
В «заразной» зоне:
–– комнаты приёма, сортировки и регистрации поступивших проб;
–– комнаты для проведения лабораторных исследований (в том числе серологических, молекулярно-
генетических, иммунологических, биохимических, общеклинических и т.п);
–– моечная;
–– автоклавная для обеззараживания материала;
7. Стены и потолки покрасьте моющейся глянцевой краской или материалом, который легко чистится
и дезинфицируется. Пол должен легко поддаваться чистке и дезинфекции, места соединения стен и
пола должны быть закругленными.
8. Проследите, чтобы поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях «заразной» зоны
была гладкой, без щелей, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств, полы не
скользкие. В помещениях «заразной» зоны выступающие и проходящие трубы (батареи отопления)
расположите на расстоянии от стен с целью возможности проведения их дезинфекции, места ввода
инженерных коммуникаций герметизируют.
9. Установите лабораторную мебель и рабочие столы, поверхность которых должна быть из прочного
материала, устойчивого к многократному воздействию моющих и дезинфицирующих средств.
10. Окна и двери помещений «заразной» зоны лаборатории должны быть плотно закрывающимися,
герметичными.
11. Боксы, предбоксники, рабочие комнаты должны обеззараживаться ультрафиолетовыми
облучателями, которые размещаются на высоте 1,8-2 м от пола.
12. Не должно быть физических препятствий для доступа в лабораторию, дверной проем комнаты
и лифта должен быть достаточным, чтобы не было проблем при доставке и обслуживании
новых аппаратов и оборудования. Ширина проходов к рабочим местам или между двумя рядами
выступающего оборудования должна быть не менее 1,5 метров.
13. Для защиты рабочих столов от попадания прямого солнечного света должны использоваться
светозащитные пленки.
14. Обеспечьте бесперебойное питание для чувствительного оборудования на случай отключения
подачи электричества в лабораторию аварийным генератором.
15. Из помещений «заразной» зоны не допускайте слив (сток) необеззараженных жидкостей в
канализационную сеть.
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 15
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях (третье
издание, Женева, 2004 г).
2. Приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
16
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
5.9 Ответственность за проведение обучения на рабочем месте несёт заведующий РЛ или лицо,
ответственное за качество.
5.10 После проведения обучения составьте по теме проводимого обучения лист-опросник и
протестируйте стажера.
5.11 Периодически (один раз в 6 месяцев) проводите оценку навыков персонала, чтобы
гарантировать, что персонал имеет и поддерживает необходимую профессиональную
квалификацию и навыки в РЛ по результатам правильности и воспроизводимости
проводимых исследований с помощью контрольных образцов.
5.12 Ведите журнал проведения внутреннего обучения персонала РЛ (Приложение 4).
5.13 Требуйте от сотрудника, прошедшего процедуру повышения квалификации в сторонних
организациях, отчитаться перед руководством и предоставить копии документов о
повышении квалификации в отдел кадров для внесения этой информации в личное дело и в
личную карточку.
5.14 Следите за полноту и точностью информации по повышению квалификации сотрудников.
5.15 Регулярно пополняйте карточки сотрудников информацией, которая служат основанием
для допуска персонала к работе с использованием конкретного оборудования или допуска к
выполнению конкретных исследований.
5.16 Общую ответственность за проведение повышения квалификации сотрудников в сторонних
организациях несёт Генеральный директор РЦ СПИД
5.17 Данные о сотрудниках внесите в информационный лист в Паспорте лаборатории.
6. Оценка компетентности
6.1 Регулярно 1 раз в 2 года проводите оценку компетенции сотрудников в соответствии с
задачами, обозначенными в его должностных инструкциях.
6.2 Ответственность за проведение оценки возложите на того сотрудника, кто уже
продемонстрировал компетенцию в оцениваемой области заведующим РЛ.
6.3 Проведите оценку компетенции прямым наблюдением, проверьте протоколы, журналы,
проанализируйте контрольные карты, результаты внешней оценки качества:
–– Прямое наблюдение помогает выявить и предупредить разные проблемы в работе.
–– Наблюдают за техникой работы сотрудника во время процесса исследования, что
позволяет наблюдающему определить, насколько сотрудник следует СОП.
–– Во избежание субъективности при оценке компетенции наблюдающий использует
специально разработанный контрольный список (Приложение 3).
–– Контрольный список используют для оценки конкретных, поддающихся наблюдению
пунктов, действий или признаков.
–– Проверка записей, например, просмотр протоколов и журналов, заполненных
сотрудником.
–– Просмотр и анализ записей контролей качества и результатов проверки компетентности,
выполненной оцениваемым сотрудником.
–– Результаты повторных исследований или перепроверки сравниваются с результатами,
полученными сотрудниками; несоответствия должны быть разрешены.
6.4 Анализируйте и оформите результаты оценки.
6.5 Заранее свяжитесь с сотрудником и согласуйте время, когда будет проводиться оценка.
6.6 Проводите оценку в то время, когда сотрудник выполняет свои рабочие задачи, используя
обычные пробы.
6.7 Результаты занесите в формуляр и сообщите сотруднику.
6.8 При необходимости разработайте рекомендации в письменном виде, и заведующий должен
убедиться, что эти рекомендации сотруднику понятны.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
20
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Таблица 1.
Ответственность сотрудников РЦ СПИД за компетентность персонала РЛ
№
Проводимые работы Ответственность
п/п
Повышение квалификации сотрудников в сторонних
Генеральный директор РЦ СПИД
организациях
Заведующий РЛ
План по проведению обучению
Ответственный по качеству
Заведующий РЛ
Подготовка вновь принятых сотрудников.
Ответственный по качеству
Контроль за работой исполнителей, проводящих Ответственный по качеству или уполномоченный
исследования сотрудник
Заведующий РЛ
Оценка компетенции
Ответственный по качеству
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 21
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. ГОСТ ИСО/МЭК 15 189 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и
компетентности».
2. ИСО 9001:2001 Системы менеджмента качества.
3. Требования ИСО 9004-2001 «Системы менеджмента качества. Рекомендации по улучшению
деятельности».
4. ИСО 9000:2001 Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь.
Приложение 1.
ФОРМА ЛИЧНОЙ КАРТОЧКИ СОТРУДНИКА РЕФЕРЕНС-ЛАБОРАТОРИИ
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
1. Фамилия, имя, отчество
2. Дата рождения
3. Место рождения (день, месяц, год)
5. Знание иностранного языка
6. Образование (полное среднее, начальное
профессиональное, среднее профессиональное, высшее
профессиональное)
–– Наименование образовательного учреждения, год
окончания
–– Квалификация по документу об образовании
7. Учёная степень
–– Документ об образовании, о квалификации или
наличии специальных знаний (наименование, серия,
номер)
8. Стаж работы (общий)
9. Паспорт (№, дата выдачи, название органа, выдавшего
паспорт)
АТТЕСТАЦИЯ
Дата аттеста Документ (протокол)
Решение комиссии Основание
ции номер дата
1 2 3 4 5
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
22
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ЗАПИСИ ПО ОБУЧЕНИЮ
Наименование видов работ, методов и Дата проведе- Ф.И.О. обучаю-
Аттестация Примечание
др. ния обучения щего
1 2 3 4 5
ОЦЕНКА КОМПЕТЕНТНОСТИ
Результаты оценки ком-
Виды работ, задачи, про- Дата проведе- Ф.И.О. петентности
Комментарии
цессы. ния оценивающего (удовлетворительно, оце-
нить повторно)
1 2 3 4 5
Приложение 2
ПЛАН ОБУЧЕНИЯ СОТРУДНИКОВ РЕФЕРЕНС-ЛАБОРАТОРИИ РЦ СПИД
На _______________________
(указать период действия плана)
№
Наименование темы Исполнитель Дата проведения
п/п
1 2 3 4
Приложение 3.
КОНТРОЛЬНЫЙ СПИСОК ОЦЕНКИ КОМПЕТЕНТНОСТИ
Ф.И.О. СОТРУДНИКА ДОЛЖНОСТЬ
Дата оценки Ф.И.О. Оценивающего
Вид работы (Метод/процедура, часть процедуры)
Приложение 4.
Журнал проведения внутреннего обучения персонала РЛ
1 2 3 4
Оценка знаний Роспись
5 6 7 8 9
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
24
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
Общие положения
1. Эта процедура управления оборудованием направлена на поддержание в рабочем состоянии
измерительного и вспомогательного оборудования. Данная процедура осуществляется в
соответствии с правилами и требованиями НД Государственной системы обеспечения единства
измерений, с эксплуатационными документами на средства измерений, НД на методы испытаний.
2. Оборудование, используемое в лабораториях диагностики ВИЧ/СПИД для проведения испытаний,
включает в себя измерительное, вспомогательное оборудование, контроля условий окружающей
среды, обращения и хранения образцов.
Под управлением оборудованием понимается:
–– планирование закупок;
–– приобретение;
–– введение в действие;
–– идентификация;
–– регистрация;
–– калибровка/поверка/аттестация;
–– техническое обслуживание;
–– ремонт
–– списание, утилизация.
Входной контроль и учет оборудования
1. При поступлении в лабораторию нового оборудования СИ и ВО проводите входной контроль.
2. Входной контроль проводится инженером фирмы-производителя или поставщика в присутствии
уполномоченных сотрудников лаборатории и материально ответственного лица.
3. Проверьте наличие комплекта технической документации, внешний вид оборудования, его
целостность, наличие всех прилагаемых к нему комплектующих изделий и материалов,
предусмотренных условиями договора (контракта).
4. Проведите запуск оборудования.
5. В случае осуществления входного контроля с участием представителя поставщика оформите акт
приема-передачи и ввода в эксплуатацию оборудования по форме, предусмотренной поставщиком.
6. Если результаты входного контроля удовлетворительны, сделайте соответствующие записи в
карточке. Оборудование не принимается, если результаты входного контроля неудовлетворительны,
– сделайте соответствующие записи обо всех выявленных несоответствиях в акте приема-передачи
и в карточке.
7. Акт оформите в трех экземплярах с подписями представителей обеих сторон. Один экземпляр
храните у ответственного лица, второй экземпляр - в бухгалтерии и третий экземпляр передайте
поставщику.
8. Результаты данного контроля зафиксируйте в карточке учета оборудования
9. После приемки единицы оборудования проведите первоначальное обучение сотрудников
лаборатории основам работы на приобретенном оборудовании.
Идентификация
1. Руководитель назначает ответственного за управление оборудованием (идентификацию,
регистрацию, поверку\калибровку, аттестацию, списание и утилизацию).
2. Идентификации подлежит каждая единица оборудования.
3. Каждую единицу оборудования промаркируйте соответствующей этикеткой-наклейкой с указанием
следующих сведений:
–– идентификационный номер;
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
26
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
–– наименование оборудования;
–– изготовитель (фирма), страна,
–– тип (марка),
–– заводской номер;
–– год изготовления;
–– № свидетельства о последней поверке/калибровке/аттестации.
4. Сразу же после прохождения поверки/калибровки/аттестации этикетку замените на новую,
содержащую актуализированные сведения.
5. В случае выхода из строя оборудования этикетку, содержащую сведения по поверке/калибровке/
аттестации, аннулируйте. Оборудование промаркируйте соответствующей этикеткой «не
используется», исключающей его использование в работе.
6. Оборудование, находящееся в нерабочем состоянии, по возможности удалите с рабочего места.
7. Оборудование малых размеров (термометры, таймеры) храните в отдельных коробках, и наклейку
прикрепите непосредственно к ним.
Регистрация данных
1. На каждую единицу оборудования заводите карточку учета оборудования
2. Карточку учета оборудования передайте в бухгалтерию ответственному за управление
оборудованием.
3. Инструкции и паспорта, относящиеся к оборудованию, храните в специально предназначенных
папках у ответственного лица.
Поверка/Калибровка
1. Периодически проводите калибровку и проверку технического состояния всего измерительного
оборудования в соответствии с указаниями, содержащимися в инструкциях по эксплуатации этого
оборудования или в паспортах на оборудование.
2. Если в протоколах результатов поверки/калибровки измерительного оборудования рекомендуется
использовать поправочный коэффициент, то информируйте персонал, работающий с этим
оборудованием, и рядом с этим оборудованием разместите табличку с указанием поправочного
коэффициента, который необходимо использовать при работе с ним.
Аттестация вспомогательного оборудования
1. Вспомогательное оборудование подвергается периодической проверке технического состояния в
соответствии с указаниями, содержащимися в инструкциях по эксплуатации этого оборудования
или в паспортах на оборудование.
2. При получении неудовлетворительных результатов аттестации ВО составьте акт о списании
или передаче его на ремонт. Акт подпишите у членов комиссии по списанию. Состав комиссии:
руководитель, зам. по АХЧ, бухгалтер учреждения, материально ответственное лицо.
Техническое обслуживания оборудования и эксплуатация оборудования
1. Руководитель назначает ответственного за эксплуатацию данного оборудования.
2. Назначенный сотрудник несет ответственность за то, что единица оборудования используется по
назначению и содержится в условиях, обеспечивающих рабочее состояние, аккуратное обращение.
3. Ответственный за эксплуатацию осуществляет контроль за работой оборудования согласно
программе по контролю за работой оборудования и плану обслуживания в соответствии с
инструкцией по применению к оборудованию.
4. В случае замены ответственного по обслуживанию единицы оборудования в карточке учета
оборудования ручкой синего цвета зачеркивается фамилия и заносится фамилия назначенного
руководителем ответственного.
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 27
ОТВЕТСТВЕННОСТЬ
№ п/п Действие Ответственный
Приобретение необходимого оборудования Руководитель
Управляющий по качеству.
Контроль работы оборудования.
Уполномоченные сотрудники
Промежуточные проверки метрологических
Уполномоченные сотрудники
характеристик.
Составление и соблюдение Графика поверки Управляющий по качеству.
Ремонт, консервация, списание оборудования. Заявки
на приобретение нового оборудования. Управляющий по качеству/уполномоченный сотрудник
Регистрация
Соблюдение условий эксплуатации. Планирование
Сотрудники учреждений
обслуживания
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
28
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Закон Кыргызской Республики «Об обеспечении единства измерений»;
2. ГОСТ ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных
лабораторий»;
3. КМС 8.014-98 «Порядок аттестации испытательного оборудования. Общие положения».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 29
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУКЦИИ
1. Заведующий лабораторией с ответственным по качеству или другим уполномоченным лицом
разрабатывают номенклатуру документов, необходимых в лаборатории.
2. Разработанная номенклатура утверждается у руководителя учреждения
3. Составьте и постоянно обновляйте перечень нормативной документации лаборатории.
4. Промаркируйте папки с документами согласно номенклатуре дел: поставьте код учреждения,
название учреждения, отдел, номер документа, название документа, дату начала ведения документа,
срок хранения данного документа.
5. Храните документы и записи в специально отведённых шкафах.
6. Обеспечьте получение необходимых документов и записей, их быстрый поиск и доведение до
персонала в установленные сроки.
7. Храните документы в течение срока, указанного в Номенклатуре дел.
8. При издании внутреннего документа назначьте лицо, ответственное за разработку данного
документа.
9. Проверьте подготовленный документ и подпишите у руководителя учреждения в соответствующей
графе документа.
10. Проинформируйте персонал лаборатории об ответственности и полномочиях персонала по
управлению документами.
11. При внесении изменений и издании документа доведите эту информацию до сведения персонала
лаборатории и обучите.
12. Отметьте изменения во внутренних документах в листе изменений.
13. Все входящие документы зарегистрируйте в специальном журнале «Регистрация входящей
документации», сами документы или копии храните в папке входящей документации.
14. Все исходящие документы регистрируйте в специальном журнале «Регистрация исходящей
документации», сами документы или копии храните в папке исходящей документации.
15. Устаревший первоначальный вариант обновленного внутреннего документа храните в папке
«Отмененные документы».
16. Проводите 1 раз в год актуализацию – пересмотр нормативной документации.
17. Промаркируйте по названию и идентификационному номеру Рабочие журналы и специальные
журналы.
18. Все журналы прошнуруйте и пронумеруйте.
19. На первом листе разместите инструкцию по ведению журнала, на последнем - подпись руководителя
с печатью организации и роспись уполномоченного лица.
20. Вносите в рабочие журналы и протоколы информацию по проведенным испытаниям, исследованиям,
нарушения, корректирующие действия.
21. Проверяйте периодически (1 раз в неделю) записи в журналах.
22. Вносите в протокол исследований информацию согласно установленной форме.
23. Экземпляры протоколов на каждый вид исследования на бумажных носителях прикрепите отдельно
в соответствующие папки по каждому исследуемому инфекционному агенту отдельно.
24. Результаты проводимого внутреннего контроля качества фиксируйте в контрольных картах на
электронных носителях и специальных журналах.
25. При внесении изменений в оригинал документа датируйте и визируйте руководитель учреждения и/
или ответственного специалиста по качеству.
26. Изымите устаревшие документы (СОП, протоколы, инструкции и т.п.) из применения сразу по
окончанию срока их годности и предотвратите их непреднамеренное использование.
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 31
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 33
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУКЦИИ.
В РЛ осуществляется 2 вида контроля: Внешняя оценка качества (ВОК) и внутрилабораторный
контроль качества (ВКК).
К внешнему контролю относятся:
1. Национальная программа ВОК по выявлению антител к ВИЧ, осуществляемая РЦККЛДИБ на
ежегодной основе.
2. Метод повторного тестирования при проведении ДЭН.
3. Международная программа ВОК по определению вирусной нагрузки РНК ВИЧ (ПЦР) и ранней
диагностики ВИЧ у новорождённых (определение провирусной ДНК).
4. При осуществлении ВОК даётся оценка качества испытаний, которая в виде отчёта ВОК доводится
до сведения сотрудников лаборатории и руководства организации.
Внутрилабораторный контроль
1. Внутрилабораторный контроль качества обязателен в отношении всех видов исследований,
выполняемых в РЛ, проводится регулярно, данные по контролю хранятся в специально
предназначенных папках и электронных носителях (контрольные карты ИФА, контрольные карты
ПЦР, контрольные карты ЦФП).
2. Внутрилабораторный контроль качества включает стандартное выполнение и контроль на всех
стадиях лабораторного процесса:
–– преаналитической стадии;
–– аналитической стадии;
–– постаналитической стадии.
3. На преаналитической стадии применяются меры, направленные на предупреждение лабораторных
погрешностей до начала проведения исследований. Предупредительные меры включают следующие
действия:
4. Контроль уровня подготовленности (оценка компетентности) персонала РЛ (СОП № 01-03
«Управление персоналом лаборатории»)
5. Контроль работы лабораторных приборов и оборудования (СОП №-01-04 «Управление
оборудованием»);
6. Контроль поступающих в РЛ наборов диагностических тест-систем, сывороток и плазмы крови,
условий их содержания (СОП № 02-05; СОП №03-01);
7. Контроль работы холодильного оборудования, обеспечивающего необходимый температурный
режим хранения (СОП № 03-02 «Правила термометрии помещений, холодильников, морозильных
камер»).
8. На аналитической стадии применяются меры, направленные на выявление погрешностей измерений
при проведении лабораторных испытаний. Контроль на аналитической стадии включает:
–– Оценку валидности теста (соответствие значений контрольных образцов требованиям
инструкции);
–– Контроль качества каждой аналитической серии с помощью внутрилабораторного стандарта
(ВЛС);
–– Применение методов вариационной статистики для построения контрольной карты (СОП №
08-01 или СОП № 08-02 «Правила проведения внутрилабораторного контроля качества при
тестировании на ВИЧ и вирусные гепатиты»);
–– Применение контрольных правил Westgard для определения вида лабораторной ошибки (СОП
№ 08-03 «Применение контрольных правил WESTGARD и порядок выявления лабораторных
ошибок»);
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 35
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Ответственность сотрудников РЛ по обеспечению качества исследований на ВИЧ
№
Выполняемые действия Ответственный
п/п
Внутренний лабораторный контроль. ответственный по качеству
Подготовка отчета заведующему РЛ ответственный по каждому методу исследований
Построение контрольных карт
исполнитель
Статистическая обработка результатов контроля качества
ответственный по качеству
Анализ полученных данных
ответственный по каждому методу исследований
ответственный по качеству
Выяснение причин несоответствия
ответственный по каждому методу исследований
Внутренний лабораторный контроль в отсутствие ответственный по каждому методу исследований
ответственного по качеству Исполнитель
Добросовестное выполнение требований инструкций Исполнитель
Анализ деятельности. Предупреждающие действия Заведующий РЛ Ответственный по качеству
РАЗДЕЛ 01 ОБЩИЙ 37
№
Выполняемые действия Ответственный
п/п
Руководитель РЦ СПИД
Предоставление необходимых ресурсов для обеспечения
Заведующий РЛ
требуемого качества выполняемых исследований.
Ответственный по качеству
Руководитель РЦ СПИД
Проведение обучения персонала. Заведующий РЛ
Ответственный по качеству
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
38
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 39
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУКЦИИ
Вымойте и высушите руки согласно стандарту «Обработка рук»
1. Наденьте защитную одежду.
2. Пригласите пациента, убедитесь, что взятие крови будет проведено у пациента, указанного в
направлении. Спросите у пациента его имя и фамилию, возраст, и/или домашний адрес.
3. Сравните полученную информацию с указанной в направлении.
4. Если возникли трудности с идентификацией пациента, позовите сопровождающего или постовую
медсестру и уточните у них паспортные данные пациента.
5. Для неизвестных пациентов (пациентов без сознания или с сумеречным сознанием) должно быть
присвоено временное, но чёткое обозначение, пока его личность не будет выяснена.
6. Зарегистрируйте направление в регистрационном журнале и впишите информацию о пациенте в
общий список. Если направление отсутствует, оформите направление.
7. Подберите и проверьте все приспособления, используемые для взятия крови, удобно расположите
их на рабочем месте.
8. Возьмите вакуумную пробирку для получения сыворотки и промаркируйте её номером и фамилией,
соответствующим номеру и фамилии в направлении.
9. Объясните пациенту цель и ход предстоящей процедуры. Важно! Никогда не говорите пациенту
“Это не будет больно”.
10. Удобно разместите пациента
–– Процедура для сидящего пациента. Попросите пациента сесть удобно на стул, расположите
руку пациента на подлокотник или стол и вытяните руку так, чтобы получилась прямая линия от
плеча до запястья. Рука должна твёрдо опираться и не должна быть согнута в локте.
–– Процедура для лежачего пациента. Если необходимо, чтобы пациент лежал, попросите его
лечь на кушетку. Подложите подушку (если нужна дополнительная опора) под руку, из которой
будет браться кровь. Руку пациента выпрямите, чтобы от плеча до запястья получилась прямая
линия.
Важно! Никогда не берите кровь у стоящего пациента.
11. Наденьте защитные очки, маску, перчатки.
12. Выберите и осмотрите место венепункции. Важно! Избегать участков со следами ожогов и
обширными рубцами, внутривенной терапии и гематом.
–– Пальпируйте и отслеживайте ход вен указательным пальцем несколько раз.
–– Если поверхностные вены трудно обнаружить, можно увеличить приток крови в вену с помощью
массажа руки от запястья к локтю. Резкое лёгкое постукивание несколько раз по выбранному
участку вены указательным и вторым пальцами вызовет расширение вены. Для лучшего
наполнения вены опустить руку ниже уровня подлокотника.
–– Если видимой вены нет, для венепункции можно использовать вены другой руки или вены кисти
руки.
13. Наложить жгут на 7–10 см выше от места прокола вены Важно! Никогда не оставляйте жгут
более чем на одну-полторы минуты.
14. Если вам нужно наложить жгут для предварительного выбора вены, ослабьте его и снова наложите
через две минуты.
15. Обработайте место прокола с помощью стерильной спиртовой салфетки, подождите до полного
высыхания асептика.
16. Зафиксируйте вену, используя большой палец, твёрдо обхватите руку пациента так, чтобы натянуть
кожу, и фиксируйте вену. Ваш большой палец должен находиться в 3-5 сантиметрах ниже места
прокола вены. Важно! Нельзя дотрагиваться до места прокола после дезинфекции.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
42
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
17. Возьмите иглу и снимите с неё защитный колпачок со стороны, закрытой резиновым клапаном
(рис.1). Вставьте иглу в иглодержатель и завинтите до упора (рис. 2)
20. Вставьте заранее приготовленную пробирку в иглодержатель до упора, и удерживайте её, пока кровь
не перестанет поступать в пробирку. При этом игла прокалывает резиновую мембрану и резиновую
заглушку в крышке пробирки.
21. Кровь проходит в пробирку, пока не компенсирует созданный в пробирке вакуум (если кровь
не идёт — это значит, что игла прошла вену насквозь или упёрлась в стенку вены — в этом
случае нужно немного вытянуть иглу, но не вынимать пока кровь не пойдёт в пробирку!) (рис. 5).
Для визуального контроля уровня заполнения на этикетке имеется метка. Вакуумные пробирки
самопроизвольно заполняются до нужной метки.
22. Как только кровь начнёт поступать в пробирку, снимите или ослабьте жгут.
23. После того, как в пробирку прекратит поступать кровь, извлеките её из держателя, упираясь
большим пальцем в ободок держателя.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 43
24. Приложите сухую стерильную салфетку к месту венопункции, медленно извлеките иглу из вены,
сохраняя наклон в направлении вверх, и прижмите место прокола салфеткой до тех пор, пока
кровотечение не остановится.
25. Использованную иглу, иглодержатель немедленно поместите в биологически безопасный контейнер.
26. Сразу после взятия крови аккуратно переверните пробирки 5-10 раза для обеспечения полного
перемешивания реагента и крови. Поверните наполненную пробирку крышкой вниз и верните в
исходное положение. Это однократный переворот.
27. Внимание!: Не встряхивайте пробирки. Энергичное перемешивание может вызвать вспенивание
или гемолиз.
28. Поставьте пробирку в штатив.
29. Убедившись в том, что кровотечение остановилось, наложите бактерицидный пластырь поверх
салфетки. Рекомендуйте пациенту оставить пластырь по крайней мере на 15 минут, но не более 2
часов.
30. Если кровотечение продолжается дольше пяти минут, медсестра должна сообщить об этом
дежурному врачу или заведующему отделением. Продолжайте прижимать место прокола до тех
пор, пока кровотечение не прекратится.
31. Убедитесь в хорошем самочувствии пациента.
32. Контаминированные кровью материалы (салфетка, перчатки и др.) поместите в эмалированное
ведро или пластиковый биологически безопасный контейнер.
33. Проведите дезинфекцию рабочего места
34. Выполните гигиену рук, согласно стандарту мытья рук.
35. Храните пробы крови при комнатной температуре (+18 – +25 градусов по Цельсию) не более 2
часов. При более высокой температуре в помещении и/или необходимости более длительного
хранения необходимо пробы поместить в бытовой холодильник при температуре от +4 до + 8° С не
более 24 часов.
Важно! Не допускается замораживание пробирок с кровью, следует избегать попадания на пробирки
прямого солнечного света, резкого встряхивания и воздействия вибрации на пробирки.
Возможные трудности при взятии крови с помощью системы вакуумного забора крови
1. Игла введена в вену, пробирка присоединена к игле, но кровь в пробирку не поступает:
Причина 1: Вы не попали иглой в вену (рис. 6). Ваши действия: Зафиксируйте вену, слегка вытянуть
иглу и снова ввести иглу в вену. Следите, чтобы конец иглы оставался под кожей.
Причина 2: Кончик иглы прижат к стенке вены (рис.7). В этом случае в пробирку поступает
несколько капель крови, а потом она перестает заполняться.
Ваши действия: Отсоедините пробирку от иглы. Благодаря эластичности резиновой пробки вакуум
в пробирке полностью сохранится. Измените положение иглы в вене и снова присоединить пробирку.
Причина 3: Игла прошла сквозь вену (рис.8). В пробирку поступило небольшое количество крови,
потом ток крови прекратился.
Ваши действия: Постепенно вытягивать иглу до появления тока крови. Если ток крови не
возобновился, то снять пробирку и вынуть иглу из вены. Выбрать другую точку и повторить венепункцию.
Пробирка не заполнилась до указанного на этикетке объема
Причина 1: Коллапс вены (рис. 9). Сначала наблюдается медленный ток крови, а потом ток крови
прекращается.
Ваши действия: Выньте пробирку из держателя, подождите пока вена наполнится и снова вставьте
пробирку в держатель.
Причина 2: В пробирку попал воздух (это возможно, если игла с присоединённой пробиркой
находилась вне вены).
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
44
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Ваши действия: Если кровь забирается в пробирку для исследования сыворотки без наполнителей,
и вас устраивает объем набранной крови, то пробу можно использовать дальше для анализа
Важно!
При обмороке или других нестандартных ситуаций с пациентом примите действия, указанные
в Приложении 4. «Критерии немедленного действия».
1. Для предотвращения гематомы у пациента и гемолиза образцов выполняйте действия, указанные в
Приложении 5.
2. Критерии неприемлемости образцов указаны в Приложении 6.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Осинова В.Л. Руководство по забору проб венозной крови для лабораторных исследований.
Издательство: BD Vacutainer®, 2010 г.
2. Национальное руководство по лабораторной диагностики ВИЧ – инфекции.
3. Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
4. Приказ № 59 от 18.02.2013 «Об усовершенствовании безопасной системы управления медицинскими
отходами в организациях здравоохранения»
5. Аптечка первой медицинской помощи универсальная противошоковая общего назначения. ТУ
9398-014-85535470-2008.
6. Вакуумные пробирки VACUETTE для получения сыворотки. Инструкция по использованию.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма направления в лабораторию диагностики ВИЧ
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Направление на исследование крови на наличие антител/антигенов к ВИЧ/ВГВ (HBsAg)/ВГС/
Сифилис
Регистраци-
Код Дата Результат
п/п онный номер Год Домашний
Ф. И. О. пациента Пол контин- забора исследования
№ пробы в ла- рождения адрес
гента крови ИФА
боратории
Результаты*:
Дата и подпись лабораторного специалиста
_______________________________________________________________________________
*При отрицательном результате ставится штамп лаборатории с отрицательным результатом. При
положительном результате на ВИЧ информация для служебного пользования (ДСП) передается в
эпидемиологический отдел и, далее, в установленном порядке ДСП врачу-инфекционисту ЦСМ/ГСВ по месту
жительств, либо врачу стационара, направившему на тестирование. При положительном результате на ВГВ/ВГС/
Сифилис в направлении ставится печать по наличию выявленного маркера (Например: HBsAg положительный) и
передается в ЛПУ, направившему образец.
Приложение 2
Приложение 3
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете
Дата
Год Кодкон- Время Дата ФИО медработ-
п/п Домашний отправки
Ф. И. О. пациента Пол рожде- тинген- взятия взятия ника, взявшего
№ адрес в лабора-
ния та крови крови кровь
торию
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
46
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 4.
МЕРОПРИЯТИЯ НЕМЕДЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
8. Обморок.
Прекратите процедуру венопунктуры, будьте предельно осторожны, чтобы несмотря на возникшую
ситуацию осторожно извлечь иглу из вены. Держите стерильную сухую салфетку/тампон на месте
прокола или сразу же наложите повязку.
–– Если пациент сидит, опустите его голову и руки.
–– Ослабьте тесную одежду.
–– Примените нашатырный спирт, давая пациенту вдыхать пары аммиака. Пациент должен
отреагировать кашлем.
–– Если пациент не реагирует, сообщите врачу.
–– Если необходимо, приложите холодные компрессы на лоб и заднюю часть шеи.
–– Предложите выпить несколько глотков холодной воды.
–– Если возможно, уложите пациента и подложите подушку под ноги для облегчения притока крови
к голове.
–– Не позволяйте пациенту уходить, пока он не почувствует себя лучше.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
9. Тошнота.
–– Расположите пациента как можно удобнее.
–– Заставьте пациента дышать глубоко и медленно.
–– Прикладывайте холодные компрессы на лоб пациента (если он согласен).
10. Рвота.
–– Дайте пациенту ёмкость для рвотных масс и приготовьте салфетки.
–– Дайте пациенту воды прополоскать рот.
–– Составьте рапорт о случившемся. на имя заведующего отделением в произвольной форме.
11. Судороги.
–– Проследите, чтобы пациент не поранил себя. Не ограничивайте движения пациента полностью,
но пытайтесь предотвратить их повреждение.
–– Вызовите медсестру или врача.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
12. Отказ пациента от сдачи крови на анализ.
–– Не спорьте с пациентом.
–– Сообщите врачу или медсестре о возражениях пациента. Они смогут лучше объяснить пациенту,
почему сдача анализов необходима.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
Приложение 5.
А. Предотвращение появления гематомы
1. Прокалывайте только верхнюю стенку вены.
2. Снимайте жгут перед удалением иглы.
3. Используйте главным образом поверхностные вены.
4. Удостоверьтесь, что игла полностью проколола верхнюю стенку вены. Неполное прокалывание
может привести к просачиванию крови по ходу скоса иглы в мягкие ткани, окружающие вены.
5. Когда накладываете повязку, слегка прижмите марлевую салфетку к месту прокола.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 47
Б. Предотвращение гемолиза
1. Избегайте забора крови из гематомы.
2. При использовании иглы и шприца не вытягивайте поршень слишком резко.
3. Избегайте использования иглы слишком маленького калибра.
4. Чтобы избежать вспенивания, убедитесь, что игла надёжно закреплена на шприце.
5. Не прикасаясь к выбранному участку прокола, убедитесь, что он сухой.
6. Медленные “начало и конец” забора крови могут стать причиной гемолиза.
7. Если игла оказалась слишком маленькой для использованной вены, то по возможности попытайтесь
сделать прокол ещё раз бóльшей иглой.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
48
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
11. Если венепункция выполняется у ребёнка младше двух лет, участок для прокола следует ограничить
поверхностными венами.
12. Максимально допустимое количество однократного забора крови зависит от веса ребёнка:
a. от 2,7 до 3,6 кг. – не более 2,5 мл.
b. от 3,6 до 4,5 кг. – не более 3,5 мл.
c. от 4,5 до 6,8 кг. – не более 5 мл.
d. от 7,3 до 9.1 кг. – не более 10 мл.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий отделением, дежурный врач
2. Старшая медсестра
3. Процедурная медсестра/медбрат
МАТЕРИАЛ
1. Одноразовые латексные перчатки
2. Средства индивидуальной защиты
3. Вакуумные системы для взятия крови, включающие:
4. стерильная одноразовая вакуумная пробирка педиатрического объема на 1.5 – 2.0 мл. с ЭДТА или
с вакуумная пробирка с активатором свёртывания крови, объемом 4 мл.; ВАЖНО! В качестве
активатора использовать вакуумные пробирки с сухим напылением (красная крышка), т.к. они не
требуют центрифугирования в местах взятия крови
–– иглу-бабочку 23 или 25 калибра с трубкой-удлинителем;
–– иглодержатель.
–– Салфетки, пропитанные антисептиком в заводской упаковке
5. Салфетки/тампоны стерильные одноразовые
6. Штатив для вакуумных пробирок
7. Жгут кровоостанавливающий детский
8. Медицинский пластырь
9. Перманентный маркер
10. Бланк-направление посписочный и индивидуальный (Приложение 1)
11. Ручка шариковая
12. Противошоковая аптечка (Приложение 2)
13. Регистрационный журнал (Приложение 3)
14. Стол, стул для пациента
15. Кушетка/пеленальный столик для детей
16. Стол для проб крови
17. Стол и стул для медсестры
18. Шкаф для хранения расходных материалов
19. Моющее средство для рук
20. Одноразовое полотенце
21. Дезинфицирующее средство для обеззараживания рабочих поверхностей и использованного
материала
22. Настольный непрокалываемый и непротекаемый контейнер для игл/игл-бабочек
23. Эмалированное ведро или пластиковый биологически безопасный контейнер для сброса
контаминированных кровью материалов и перчаток
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
50
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
24. ОБОРУДОВАНИЕ
25. Холодильник бытовой.
26. Бактерицидная установка.
РЕАКТИВЫ
1. Нашатырный спирт.
2. Дезинфицирующие средства, разрешённые к использованию на территории Кыргызстана
ИНСТРУКЦИИ
Наденьте защитную одежду.
1. Вымойте и высушите руки согласно стандарту «Обработка рук»
2. Пригласите родителя (сопровождающего) с ребёнком. Убедитесь, что взятие крови будет проведено
у ребёнка, указанного в направлении. Выясните у родителя (сопровождающего) имя и фамилию,
возраст и/или домашний адрес ребёнка.
3. Сравните полученную информацию с указанной в направлении.
4. Зарегистрируйте направление в регистрационном журнале и впишите информацию о ребёнке в
общий список. Если направление отсутствует, оформите направление.
5. Подберите и проверьте все приспособления, используемые для взятия крови, удобно расположите
их на рабочем месте.
6. Возьмите вакуумную пробирку для получения сыворотки и промаркируйте её номером и фамилией,
соответствующими номеру и фамилии ребёнка в направлении.
7. При заборе крови у ребёнка необходима помощь одного их родителей или взрослого лица для
ограничения свободы его движения (рис. 1, 2).
Важно! Будьте особенно внимательны, обезопасьте руку ребёнка, чтобы предотвратить её повреждение в
результате неожиданного движения, когда игла прокалывает кожу.
рис.3
рис.4
11. Прикрепите конец крыловидного набора (иглы-бабочки) к вакуумной пробирке и вставьте трубку
для сбора крови в держатель так, чтобы она достигла иглы (рис.5).
рис.5.
рис.6.
13. Обработайте место прокола с помощью стерильной спиртовой салфетки подождите до полного
высыхания асептика (рис.7). Важно! Нельзя дотрагиваться до места прокола после дезинфекции.
. рис.7.
14. Большими пальцами натяните кожу на два пальца ниже места прокола (рис.8).
(рис.8).
рис.9.
рис.10.
19. Поместите сухой стерильный тампон на место венопункции и медленно вытяните иглу (рис.12).
рис.12.
20. Попросите родителя (сопровождающего) поддержать тампон, прижимая его к месту прокола (рис.
13).
рис.13.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 53
21. Снимите бабочку с держателя вакуумной трубки, не касаясь иглы руками (рис.14).
рис.14.
22. Опустите использованную иглу-бабочку в вырез контейнера для использованных игл (рис.15).
рис.15.
рис.16.
рис.17.
31. Храните пробы крови при комнатной температуре (+18 – +25 градусов по Цельсию) не более 2
часов. При более высокой температуре в помещении и/или необходимости более длительного
хранения необходимо пробы поместить в бытовой холодильник при температуре от +4 до + 8° С не
более 24 часов.
Важно! Не допускается замораживание пробирок с кровью, следует избегать попадания на пробирки
прямого солнечного света, резкого встряхивания и воздействия вибрации на пробирки.
Для успешного проведения процедуры венопункции у детей и новорождённых:
Попросите родителя/взрослого сопровождающего ритмично сжимать и разжимать запястье
руки ребёнка, чтобы обеспечить кровоток.
1. Держите ребёнка в тепле, оставив на нем почти всю одежду, и, если это новорождённый, заверните
его в одеяло;
2. Разогрейте место пункции подогретым полотенцем
Возможные трудности при взятии крови с помощью системы вакуумного забора крови
Игла введена в вену, пробирка присоединена к игле, но кровь в пробирку не поступает:
Причина 1: Вы не попали иглой в вену (рис. 18).
Ваши действия: Зафиксируйте вену, слегка вытяните иглу и снова введите её
в вену. Следите, чтобы конец иглы оставался под кожей.
Причина 2: Кончик иглы прижат к стенке вены (рис.19). В этом случае в
пробирку поступает несколько капель крови, а потом она перестает заполняться.
Ваши действия: Отсоедините пробирку от иглы. Благодаря эластичности
резиновой пробки вакуум в пробирке полностью сохранится. Измените положение
иглы в вене и снова присоединить пробирку.
Причина 3: Игла прошла сквозь вену (рис.20). В пробирку поступило
небольшое количество крови, потом ток крови прекратился.
Ваши действия: Постепенно вытягивать иглу до появления тока крови. Если
ток крови не возобновился, то снять пробирку и вынуть иглу из вены. Выбрать
другую точку и повторить венепункцию.
Пробирка не заполнилась до указанного на этикетке объема
Причина 1: Коллапс вены (рис. 21). Сначала наблюдается медленный ток
крови, а потом ток крови прекращается.
Ваши действия: Выньте пробирку из держателя, подождите, пока вена
наполнится, и снова вставьте пробирку в держатель.
Причина 2: В пробирку попал воздух (это возможно, если игла с
присоединённой пробиркой находилась вне вены).
Ваши действия: Если кровь забирается в пробирку для исследования
сыворотки без наполнителей и вас устраивает объем набранной крови, то пробу
можно использовать дальше для анализа
Важно!
В случае возникновения обморока или других нестандартных ситуаций с пациентом примите
действия, указанные в Приложении 4. «Критерии немедленного действия».
1. Для предотвращения гематомы у пациента и гемолиза образцов выполняйте действия, указанные в
Приложении 5.
2. Критерии неприемлемости образцов указаны в Приложении 6.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 55
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Практическое руководство по процедуре забора крови у детей и новорожденных. Руководящие
принципы ВОЗ по забору крови: Передовая практика в области флеботомии.
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
3. Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР» Приказ № 59 от 18.02.2013 «Об
усовершенствовании безопасной системы управления медицинскими отходами в организациях
здравоохранения»
4. Национальное руководство по лабораторной диагностики ВИЧ – инфекции
5. Аптечка первой медицинской помощи универсальная противошоковая общего назначения. ТУ
9398-014-85535470-2008.
6. Вакуумные пробирки VACUETTE для получения сыворотки. Инструкция по использованию.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
56
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1
Форма направления в лабораторию диагностики ВИЧ
Учреждение-отправитель________________________________________
Направление на исследование крови на наличие ВИЧ/ВГВ (HВsAg)/ВГС/сифилис
Регистраци- Код
Год Дата Результат
п/п онный номер Домашний кон-
Ф. И. О. пациента Пол рожде- забора исследования
№ пробы в лабора- адрес тинген-
ния крови ИФА
тории та
Приложение 2
Приложение 3
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете
ФИО
Год Код Время Дата отправ- медра-
п/п Домашний Дата взятия
Ф. И. О. пациента Пол рожде- контин взятия ки в лабора- ботника,
№ адрес крови
ния гента крови торию взявшего
кровь
Приложение 4.
МЕРОПРИЯТИЯ НЕМЕДЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
1. Обморок.
Прекратите процедуру венепункции, будьте предельно осторожны, чтобы, несмотря на возникшую
ситуацию, осторожно извлечь иглу из вены. Держите стерильную сухую салфетку/тампон на месте
прокола или сразу же наложите повязку.
–– Если пациент сидит, опустите его голову и руки.
–– Ослабьте тесную одежду.
–– Примените нашатырный спирт, давая пациенту вдыхать пары аммиака. Пациент должен
отреагировать кашлем.
–– Если пациент не реагирует, сообщите врачу.
–– Если необходимо, приложите холодные компрессы на лоб и заднюю часть шеи.
–– Предложите выпить несколько глотков холодной воды.
–– Если возможно, уложите пациента и подложите подушку под ноги для облегчения притока крови
к голове.
–– Не позволяйте пациенту уходить, пока он не почувствует себя лучше.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
2. Тошнота.
–– Расположите пациента как можно удобнее.
–– Заставьте пациента дышать глубоко и медленно.
–– Прикладывайте холодные компрессы на лоб пациента (если он согласен).
3. Рвота.
–– Дайте пациенту ёмкость для рвотных масс и приготовьте салфетки.
–– Дайте пациенту воды прополоскать рот.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
4. Судороги.
–– Проследите, чтобы пациент не поранил себя. Не ограничивайте движения пациента полностью,
но пытайтесь предотвратить их повреждение.
–– Вызовите медсестру или врача.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
5. Пациент возражает против сдачи анализов.
–– Не спорьте с пациентом.
–– Сообщите врачу или медсестре о возражениях пациента. Они смогут лучше объяснить пациенту,
почему сдача анализов необходима.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
58
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 5.
А. Предотвращение появления гематомы
1. Прокалывайте только верхнюю стенку вены.
2. Снимайте жгут перед удалением иглы.
3. Используйте главным образом поверхностные вены.
4. Удостоверьтесь, что игла полностью проколола верхнюю стенку вены. Неполное прокалывание
может привести к просачиванию крови по ходу скоса иглы в мягкие ткани, окружающие вены.
5. Когда накладываете повязку, слегка прижмите марлевую салфетку к месту прокола.
Б. Предотвращение гемолиза
1. Избегайте забора крови из гематомы.
2. При использовании иглы и шприца не вытягивайте поршень слишком резко.
3. Избегайте использования иглы слишком маленького калибра.
4. Чтобы избежать вспенивания, убедитесь, что игла надёжно закреплена на шприце.
5. Не прикасаясь к выбранному участку прокола, убедитесь, что он сухой.
6. Медленные “начало и конец” забора крови могут стать причиной гемолиза.
7. Если игла оказалась слишком маленькой для использованной вены, то по возможности попытайтесь
сделать прокол ещё раз большей иглой.
8. Приложение 6.
Критерии неприемлемости образцов
1. Пробирки без соответствующей маркировки.
2. Пробирки, маркировка которых не соответствует данным в направлении.
3. Неполные сведения в направлении об обследуемом (нарушение правил заполнения затребованных
лабораторией сведений).
4. Образцы неудовлетворительного качества, вызванные гемолизом, липемией или бактериальным
проростом. Неприемлемым считается образец, если сквозь него невозможно прочесть напечатанный
текст обычного формата.
5. Недостаточное количество крови для анализа (менее 3 мл. крови).
6. Повреждённая или протекающая пробирка.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 59
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
12. Медицинские изделия, применяемые для взятия венозной крови, относятся к отходам класса Б
(опасные (рискованные) отходы). Их сбор, хранение и утилизацию необходимо проводить, соблюдая
установленные санитарно-эпидемиологические правила и нормы, и инструкции, принятые для
организаций здравоохранения Кыргызской Республики.
13. ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
14. Старшая медсестра
15. Медсестра/медбрат
МАТЕРИАЛ
1. Одноразовые резиновые или латексные перчатки.
2. Маска, защитные очки
3. Защитная одежда: халат, брюки с курткой, шапочка
4. Салфетки, пропитанные антисептиком, в заводской упаковке.
5. Салфетки/тампоны стерильные одноразовые
6. Шприц 5-кубиковый
7. Штатив для пробирок
8. Пробирки центрифужные одноразовые или стеклянные
9. Одноразовые пластиковые крышки для пробирок
10. Кресло для венепункции
11. Подушка для выравнивания локтевого сгиба (при отсутствии кресла для венепункции).
12. Жгуты кровоостанавливающие одноразовые или многоразовый
13. Медицинский бактерицидный пластырь
14. Водостойкий фломастер
15. Бланк-направление (индивидуальное и посписочное). (Приложение 1)
16. Ручка шариковая
17. Аптечка противошоковая (Приложение 2)
18. Регистрационный журнал (Приложение 3)
19. Стол для проб крови
20. Стул для пациента
21. Кушетка
22. Стол, стул для медсестры
23. Шкаф для хранения расходных материалов
24. Моющее средство для рук
25. Одноразовое полотенце
26. Эмалированное ведро со значком «шприца» или пластиковый биологически безопасный контейнер
для сброса контаминированных кровью материалов и перчаток
27. ОБОРУДОВАНИЕ
28. Холодильник бытовой.
29. Бактерицидная лампа.
30. Иглоотсекатель с вставленным в него специальным контейнером
31. РЕАКТИВЫ
32. Нашатырный спирт.
33. Спирт 700
34. Дезинфицирующие средства, разрешённые к использованию на территории Кыргызстана
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 61
ИНСТРУКЦИИ
Вымойте и высушите руки согласно стандарту «Мытье рук»
1. Наденьте защитную одежду.
2. Пригласите пациента, убедитесь, что взятие крови будет проведено у пациента, указанного в
направлении. Для этого спросите у пациента его имя и фамилию, возраст и/или домашний адрес.
3. Сравните полученную информацию с указанной в направлении.
4. Если возникли трудности с идентификацией пациента, позовите сопровождающего или постовую
медсестру и уточните у них паспортные данные пациента.
5. Для неизвестных пациентов (пациентов без сознания или с сумеречным сознанием) должно быть
присвоено временное, но чёткое обозначение, пока его личность не будет выяснена.
6. Зарегистрируйте направление в регистрационном журнале и впишите информацию о пациенте в
общий список. Если направление отсутствует, оформите направление.
7. Подберите и проверьте все приспособления, используемые для взятия крови, удобно расположите
их на рабочем месте.
8. Возьмите пробирку, с помощью водостойкого фломастера промаркируйте её номером и фамилией,
соответствующими номеру и фамилии пациента в направлении, и поставьте в штатив.
9. Разместите пациента
a. Процедура для сидящего пациента. Попросите пациента сесть удобно на стул, расположите
руку пациента на подлокотник или стол и вытяните руку так, чтобы получилась прямая
линия от плеча до запястья. Рука должна твёрдо опираться и не должна быть согнута в локте
(рис 1).
Рис. 1
b. Процедура для лежачего пациента. Если необходимо, чтобы пациент лежал, попросите
его лечь на кушетку в удобную позицию. Подложите подушку (если нужна дополнительная
опора) под руку, из которой будет браться кровь. Руку пациента выпрямите, чтобы от плеча
до запястья получилась прямая линия.
Важно! Никогда не берите кровь у стоящего пациента.
10. Наденьте защитные очки, маску, перчатки.
11. Выберите и осмотрите место венепункции. Важно! Избегать участков со следами ожогов и
обширными рубцами, участков мастэктомии, внутривенной терапии и гематом.
–– Пальпируйте и отслеживайте ход вен указательным пальцем несколько раз.
–– Если поверхностные вены трудно обнаружить, можно увеличить приток крови в вену с помощью
массажа руки от запястья к локтю. Резкое лёгкое постукивание несколько раз по выбранному
участку вены указательным и вторым пальцами вызовет расширение вены. Для лучшего
наполнения вены опустить руку ниже уровня подлокотника.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
62
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
–– Если видимой вены нет, для венепункции можно использовать вены другой руки или вены кисти
руки.
12. Наложить жгут на 7–10 см. выше от места прокола вены (рис. 2). Важно! Никогда не оставляйте
жгут более чем на одну минуту. Если вам нужно наложить жгут для предварительного выбора
вены, ослабьте его и снова наложите через две минуты.
Рис. 2
13. Обработайте место прокола с помощью стерильной спиртовой салфетки подождите до полного
высыхания асептика (рис. 3)
Рис. 3
Рис. 4
–– Расположите шприц с иглой у вены, выбранной для венопунктуры, под углом примерно 15-20
градусов к поверхности кожи и введите иглу в вену плавным, мягким движением (рис. 5).
Рис. 5
–– Для забора нужного количества крови плавно втягивайте поршень, обеспечивая равномерное
давление и удерживая цилиндр шприца рукой.
15. Ослабьте жгут (рис. 6).
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 63
Рис. 6
16. Приложите сухую стерильную салфетку/ тампон к месту венепункции, медленно извлеките иглу из
вены, сохраняя наклон, в направлении вверх и прижмите место прокола салфеткой до тех пор, пока
кровотечение не остановится.
17. В промаркированную пробирку, стоящую в штативе, выпустите кровь из шприца. Для этого
медленно нажимайте поршень шприца, чтобы снизить риск гемолиза.
18. Сразу после этого отделите иглу от пластиковой части шприца при помощи иглоотсекателя.
Исключением является выполнение инъекций у постели лежачего в палате пациента.
19. После отсечения иглы пластиковая часть шприца сбрасывается в эмалированное ведро со значком
«шприца».
20. Оставшуюся часть шприца поместите в эмалированное ведро со знаком «шприца» или биологически
безопасный контейнер (рис 7).
Рис. 7
21. Не вынимая пробирку из штатива, плотно наденьте одноразовую пластиковую крышку на пробирку.
22. Не встряхивайте пробирку: резкое смешивание может вызвать пенообразование и гемолиз.
23. Убедившись в том, что кровотечение остановилось, наложите бактерицидный пластырь поверх
салфетки. Рекомендуйте пациенту оставить пластырь по крайней мере на 15 минут (рис. 8).
Рис. 8
24. Если кровотечение продолжается дольше пяти минут, медсестра должна сообщить об этом
дежурному врачу или заведующему отделением. Продолжайте прижимать место прокола до тех
пор, пока кровотечение не прекратится.
25. Проведите дезинфекцию использованного оборудования. Убедитесь в хорошем самочувствии
пациента.
26. Утилизируйте надлежащим образом все контаминированные материалы, включая перчатки
27. Выполните гигиену рук.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
64
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
28. Храните пробы крови при комнатной температуре (+18 - +25 градусов по Цельсию) не более 2 часов.
При более высокой температуре в помещении и/или необходимости более длительного хранения
необходимо пробы поместить в бытовой холодильник при температуре от +4 до + 8° С не более 24
часов.
Важно! Не допускается замораживание пробирок с кровью, следует избегать попадания на пробирки
прямого солнечного света, резкого встряхивания и воздействия вибрации на пробирки.
Если проба крови не может быть получена
1. Осторожно измените положение иглы
2. Если игла введена слишком глубоко в вену, слегка потяните иглу назад.
3. Если она введена недостаточно глубоко, продвиньте её дальше в вену
4. Расслабьте жгут, возможно, он затянут слишком туго, что сдерживает поток крови. Наложите жгут
свободнее. Если используется жгут с липучкой, быстро его ослабьте и сразу же закрепите.
5. Зондирование иглой не рекомендуется, это болезненно для пациента.
6. В большинстве случаев, если осторожная смена положения иглы не даёт положительного результата,
целесообразно попробовать ещё один прокол вены.
7. Ограничьте число попыток, если удовлетворяющий требованиям образец крови не был получен
после двух попыток, проконсультируйтесь с другим специалистом и примите решение, сделать ли
ещё одну попытку или отменить процедуру.
Важно!
В случае возникновения обморока или других нестандартных ситуаций с пациентом примите
действия, указанные в Приложении 4 «Критерии немедленного действия».
1. Для предотвращения гематомы у пациента и гемолиза образцов выполняйте действия, указанные в
Приложении 5.
2. Критерии неприемлемости образцов указаны в Приложении 6.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Практическое руководство по процедуре венопункции для проведения лабораторных анализов.
Руководящие принципы ВОЗ по забору крови: Передовая практика в области флеботомии.
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
3. Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
4. Приказ № 59 от 18.02.2013 «Об усовершенствовании безопасной системы управления медицинскими
отходами в организациях здравоохранения»
5. Методическое руководство «Система управления медицинскими отходами в организациях
здравоохранения Кыргызской Республики». 2-ое издание – Б.: 2012.
6. Национальное руководство по лабораторной диагностики ВИЧ – инфекции
7. Аптечка первой медицинской помощи универсальная противошоковая общего назначения. ТУ
9398-014-85535470-2008.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 65
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма направления в лабораторию диагностики ВИЧ
Учреждение отправитель________________________________________
Направление на исследование крови на наличие ВИЧ/ВГВ (HВsAg)/ВГС/сифилис
Регистрацион- Год Код Дата Результат
п/п Домашний
ный номер пробы Ф. И. О. пациента Пол рожде- контин- забора исследования
№ адрес
в лаборатории ния гента крови ИФА
Приложение 2
Приложение 3
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете
Год Код Время Дата Дата отправ- ФИО медра-
п/п Ф. И. О. Домашний
Пол рожде- контин- взятия взятия ки в лабора- ботника, взяв-
№ пациента адрес
ния гента крови крови торию шего кровь
Приложение 4.
МЕРОПРИЯТИЯ НЕМЕДЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
1. Обморок.
Прекратите процедуру венопунктуры, будьте предельно осторожны, чтобы, несмотря на возникшую
ситуацию, осторожно извлечь иглу из вены. Держите стерильную сухую салфетку/тампон на месте
прокола или сразу же наложите повязку.
–– Если пациент сидит, опустите его голову и руки.
–– Ослабьте тесную одежду.
–– Примените нашатырный спирт, давая пациенту вдыхать пары аммиака. Пациент должен
отреагировать кашлем.
–– Если необходимо, приложите холодные компрессы на лоб и заднюю часть шеи.
–– Предложите выпить несколько глотков холодной воды.
–– Если возможно, уложите пациента и подложите подушку под ноги для облегчения притока крови
к голове.
–– Если пациент не реагирует, сообщите врачу.
–– Не позволяйте пациенту уходить, пока он не почувствует себя лучше.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
2. Тошнота.
–– Расположите пациента как можно удобнее.
–– Заставьте пациента дышать глубоко и медленно.
–– Прикладывайте холодные компрессы на лоб пациента (если он согласен).
3. Рвота.
–– Дайте пациенту ёмкость для рвотных масс и приготовьте салфетки.
–– Дайте пациенту воды прополоскать рот.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
4. Судороги.
–– Проследите, чтобы пациент не поранил себя. Не ограничивайте движения пациента полностью,
но пытайтесь предотвратить их повреждение.
–– Вызовите медсестру или врача.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 67
Приложение 5.
А. Предотвращение появления гематомы
1. Прокалывайте только верхнюю стенку вены.
2. Снимайте жгут перед удалением иглы.
3. Используйте главным образом поверхностные вены.
4. Удостоверьтесь, что игла полностью проколола верхнюю стенку вены. Неполное прокалывание
может привести к просачиванию крови по ходу скоса иглы в мягкие ткани, окружающие вены.
5. Когда накладываете повязку, слегка прижмите марлевую салфетку к месту прокола.
Б. Предотвращение гемолиза
1. Избегайте забора крови из гематомы.
2. При использовании иглы и шприца не вытягивайте поршень слишком резко.
3. Избегайте использования иглы слишком маленького калибра.
4. Чтобы избежать вспенивания, убедитесь, что игла надёжно закреплена на шприце.
5. Не прикасаясь к выбранному участку прокола, убедитесь, что он сухой.
6. Медленные “начало и конец” забора крови могут стать причиной гемолиза.
7. Если игла оказалась слишком маленькой для использованной вены, то по возможности попытайтесь
сделать прокол ещё раз большей иглой.
8. Приложение 6.
Критерии неприемлемости образцов
1. Пробирки без соответствующей маркировки.
2. Пробирки, маркировка которых не соответствует данным в направлении.
3. Неполные сведения в направлении об обследуемом (нарушение правил заполнения затребованных
лабораторией сведений).
4. Образцы неудовлетворительного качества, вызванные гемолизом, липемией или бактериальным
проростом. Неприемлемым считается образец, если сквозь него невозможно прочесть напечатанный
текст обычного формата.
5. Недостаточное количество крови для анализа (менее 3 мл. крови).
6. Повреждённая или протекающая пробирка.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
68
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУКЦИИ
1. Перед отправкой проб в лабораторию убедитесь в правильной идентификации образцов:
a. сверьте номер (информацию) на пробирке с информацией, указанной в направлении и
регистрационном журнале.
b. в случае выявленных несоответствий своевременно их устраните.
c. Убедитесь, что все пробы с кровью герметично закрыты. Если кровь взята не в вакуумную
систему, то пробирка должна быть плотно закрыта пластиковой одноразовой крышкой.
2. Поместите штатив с укупоренными пробирками в сумку-холодильник или другой безопасный
контейнер, предназначенный для транспортировки крови.
3. Если пробы транспортируются при внешней температуре выше 25°С и/или на далёкое расстояние,
то на дно и по бокам контейнера поместите хладагенты. Контейнер должен быть непротекаемым и
обеспечивать температуру внутри не ниже + 4 и не выше +25о в течение 24 часов с момента забора
крови.
4. Направления поместите отдельно в полиэтиленовый пакет (файл) и надёжно закрепите снаружи на
крышке сумки-холодильника /контейнера с помощью скотча или передайте в руки курьеру.
5. Передайте сумку-холодильник/контейнер курьеру.
6. Транспортируйте кровь в лабораторию. При транспортировке не оставляйте контейнеры с пробами
без присмотра.
7. В лаборатории передайте штатив с пробами крови и направления сотруднику, ответственному за
приём образцов.
Внимание! Подготовленный и промаркированный образец крови должен быть как можно быстрее
доставлен в лабораторию. Следует иметь в виду, что несоблюдение стандартных условий транспортировки
нарушает сохранность проб, делает невозможным правильное определение концентрации антител и
антигенов к ВИЧ, вирусным гепатитам.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики».
2. Методические рекомендации «Организация преаналитического этапа при централизации
лабораторных исследований», Москва, 2013 г
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
70
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма бракеражного журнала
ФИО и
ФИО, год
Дата и время роспись
Учреждение Порядковый рожд, код
№ Дата забора доставки биома- курьера, ла- Причина
отправитель номер пробы данного
п/п биообразца териала в лабора- бораторного брака
образца отправителя пациента по
торию специа-ли-
направлению
ста
Приложение 2.
Форма журнала регистрации материала, поступающего на выявление антител к ВИЧ
Начат______________
Окончен______________
Регистра- Коды контингента (мужчины/женщины)
ционный
номер Учрежде- Общее ко-
№
ние отпра- личество
101.1
101.2
101.3
101.4
101.5
112.1
112.2
112.3
111.1
п/п лаборато-
101
102
103
104
105
106
108
109
110
112
113
111
Приложение 3.
Критерии неприемлемости образцов
1. Пробирки без соответствующей маркировки.
2. Пробирки, маркировка которых не соответствует данным в направлении.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 73
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 77
Приложение 1
А. Общие рекомендации по центрифугированию для различных типов пробирок:
Вакуумные пробирки
где r – радиус центрифуги (расстояние в сантиметрах между осью ротора и центром пробирки в
гнезде центрифуги); n – число оборотов в 1 минуту (min -1).
Пример: g = 1.118 х 0,00001 х 16 см х (4000 х 4000) = 2862 (можно округлить до 2800 об/мин.)
Для промышленно выпускаемых центрифуг в паспорте дана номограмма, по которой проводится
сопоставление оборотов в минуту и величиной центробежной силы (ВЦС или RCF - от англ. relative
centrifuge force – относительная сила центрифугирования) для каждого ротора (рис. 1).
Для определения ВЦС (RCF) необходимо с помощью линейки совместить значения радиуса и числа
оборотов на соответствующих шкалах номограммы и на шкале центробежного ускорения установить
значение g (рис 1).
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
78
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Рисунок 1.
Номограмма для расчёта величины g по радиусу и скорости (об/мин) вращения ротора
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 79
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
МАТЕРИАЛЫ
Средства индивидуальной защиты:
a. перчатки латексные или резиновые одноразовые соответствующих размеров
b. халат
c. маски
1. Одноразовая вакуумная система:
2. Вакуумная система для забора крови с антикоагулянтами К2 или К3ЭДТА
d. двухсторонняя игла
e. иглодержатель.
3. Штатив для вакутейнеров
4. Жгут
5. Салфетки одноразовые спиртовые
6. Сухая одноразовая стерильная, без спиртовая салфетка
7. Бактерицидный пластырь или клейкая гипоаллергенная лента
8. Журнал для регистрации забранного материала (см. приложение 1)
9. Бланк направления в лабораторию (см. приложение 3)
10. Биологически безопасный контейнер для использованных инфекционно опасных материалов
11. Перманентный маркер для маркировки пробирок с образцами
12. Ручка шариковая
13. Стул
14. Стол для пациента
15. Кушетка
16. Стол для медсестры
17. Шкаф для хранения расходных материалов
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой при температуре +20С +80С
2. Бактерицидная лампа стационарная или переносная
РЕАКТИВЫ
1. Раствор перекиси водорода 6 %
2. Нашатырный спирт (аммиак)
3. Спирт 70о
4. Дезинфицирующие средства
ИНСТРУКЦИИ
Внимание! Лечащий врач оформляет направление, определяет условия подготовки пациента
(см. приложение 3).
1. Забор крови производится в процедурном кабинете учреждения из локтевой вены в соответствии
с установленными нормами и осуществляться в вакуумную пробирку: вакутейнер с ЭДТА для
определения СД4/СД8 клеток - цветовой код сиреневый
2. Наденьте специальную одежду средства индивидуальной защиты (СИЗ).
3. Установите личность пациента – его полное имя и дату рождения. Сравните эту информацию с
информацией в направлении.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 81
4. Пациент должен сдавать кровь натощак и до приема лечебных процедур (см. приложение 1). Если в
момент сдачи биоматериала пациент принимает лекарственные препараты (антибиотики, гормоны),
сделайте в направлении пометки о приеме лекарств.
5. Промаркируйте вакуумную пробирку номером и фамилией пациента в соответствии с направлением.
6. Информируйте пациента о процедуре взятия венозной крови
Процедура для сидящего пациента: усадите пациента на стул, расположите руку пациента на
подлокотник или стол так, чтобы получилась прямая линия от плеча до запястья. Рука должна твёрдо
опираться и не должна быть согнута в локте.
Процедура для лежачего пациента: уложите пациента на кушетку в удобную позу. Подложите
подушку для забора крови под руку. Руку пациента выпрямите, чтобы от плеча до запястья получилась
прямая линия.
Важно! Никогда не берите кровь у стоящего пациента.
7. Обработайте руки согласно стандарту «Обработки рук» и оденьте перчатки.
8. Выберите место венепункции.
Важно! Избегать участков со следами ожогов и обширными рубцами, участков мастэктомии и
внутривенной терапии, гематом.
9. Пальпируйте и отслеживайте ход вен указательным пальцем несколько раз.
10. Если поверхностные вены трудно обнаружить, можно увеличить приток крови в вену с помощью
массажа руки от запястья к локтю. Резкое лёгкое постукивание несколько раз по выбранному участку
вены указательным и вторым пальцами вызовет расширение вены. Для лучшего наполнения вены
опустить руку ниже уровня подлокотника.
11. Если видимой вены нет, для венепункции можно использовать вены другой руки или вены кисти
руки.
12. Наложить жгут на 7–10 см выше от места прокола вены
13. Важно! Никогда не оставляйте жгут на руке более чем на одну минуту. Если вам нужно
наложить жгут для предварительного выбора вены, ослабьте его и снова наложите через две
минуты.
14. Обработайте место венепункции с помощью стерильной спиртовой салфетки и подождите до
полного высыхания асептика
15. Зафиксируйте вену, используя большой палец, твёрдо обхватите руку пациента так, чтобы натянуть
кожу, и фиксируйте вену. Ваш большой палец должен находиться в 2,5-5 сантиметрах ниже места
прокола вены.
16. Выполните венепункцию с помощью вакуумной системы.
17. Снимите жгут.
18. Возьмите иглу и снимите с неё защитный колпачок со стороны, закрытой резиновой мембраной.
19. Вставьте иглу в иглодержатель и завинтите до упора.
А. В.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
82
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
D E
22. Вставьте заранее приготовленную пробирку с ЭДТА в иглодержатель до упора и удерживайте её,
пока кровь не перестанет поступать в пробирку. При этом игла прокалывает резиновую мембрану
и резиновую заглушку в крышке пробирки.
23. Кровь проходит в пробирку, пока не компенсирует созданный в пробирке вакуум (если кровь
не идет — это значит, что игла прошла вену насквозь или уперлась в стенку вены — в этом случае
нужно немного вытянуть иглу (но не вынимать!), пока кровь не пойдёт в пробирку).
G I
24. Для визуального контроля уровня заполнения на этикетке имеется метка. Вакуумные пробирки
при правильном взятии самопроизвольно заполняются до нужной метки.
25. Извлеките пробирку из держателя.
26. При использовании вакутейнера с ЭДТА после взятия крови пробирку следует плавно 8 раз
перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом и
активатором свёртывания. После плавного перемешивания пробирку поместить в штатив.
27. Поместите пробирку в штатив.
28. Пробирки нельзя встряхивать - это может вызвать пенообразование и гемолиз, а так же привести к
механическому лизису эритроцитов.
29. Наложите сухую салфетку, медленно извлеките иглу из вены, сохраняя наклон, в направлении вверх
и прижмите место прокола салфеткой до тех пор, пока кровотечение не остановится.
30. Убедившись в том, что кровотечение остановилось, наложите бактерицидный лейкопластырь.
Рекомендуйте пациенту оставить лейкопластырь, по крайней мере, на 15 минут.
31. Если кровотечение продолжается дольше пяти минут, медсестра должна сообщить об этом
дежурному врачу.
32. Важно! Время доставки биоматериала в лабораторию не должно превышать 24 часа от
момента забора крови.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 83
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Подготовка пациента для сдачи крови на маркеры СД4/СД8
1. Для исследования кровь забирают после 12-часового голодания.
2. Накануне дня сдачи крови пациент должен воздержаться от употребления алкоголя, жирной,
обильной пищи, чрезмерной физической нагрузки,
3. При проведении пациенту внутривенных вливаний взятие крови проводят на другой руке.
4. Если у больного наблюдается простуда или герпетическая инфекция, сдачу крови не проводят.
5. Не проводят забор крови у пациентов в пятницу или накануне праздников, т.к. график работы
лаборатории меняется.
6. Приложение 2
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете медицинского учреждения
ФИО медра-
Дата Код Время Дата отправ-
п/п Домаш- Дата взя- ботника,
Ф. И. О. пациента Пол рожде- контин- взятия кив лабора-
№ ний адрес тия крови взявшего
ния гента крови торию
кровь
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
84
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 3
5.1.4 Направление и результаты определения процентного и абсолютного числа Т лимфоцитов
(хелперов CD4 (+) и киллеров / Цитотоксические Т - клетки CD8 (+)) методом проточной
цитометрии.
Учреждение отправитель_ _____________________________________________________________
Ф.И.О. пациента______________________________________________________________________
Дата рождения__________ пол__________________ Домашний адрес__________________________
Дата и время забора биоматериала_ _____________________________________________________
Дата и время доставки в лаборатории____________________________________________________
Особые пометки______________________________________________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ ____________________________________________
Ф.И.О. лица, принявшего материал______________________________________________________
Регистрационный лабораторный номер образца_ __________________________________________
Дети
Результаты исследованной
Взрослые
№ CD-маркеры лим- крови
1 год - 6 лет 7 -17 лет
п/п фоцитов
клеток в клеток в клеток в
% клеток в мкл % % %
мкл мкл мкл
CD 4(+) 1000-
1 30-40 39-47 830-2110 33-50 600-1700
Т-хелперы 1840
CD 8(+)
2 Цитотоксические Т - 25-32 810-1520 23-29 490-1300 16-39 300-1000
клетки
Абс. число
1300-7200 720-3150
лимфоцитов
Иммунно-регулятор.
4 1000-1600 1400-2000 1500-2000
индекс (Th/Tc)
Приложение 4
Объем Пробирка с
Исследование Хранение и транспортировка
крови ЭДТА
Пробирку с кровью, не Хранение с момента взятия цельной крови:
Количество CD4 вспенивая, аккуратно 2 часа темп. +180С +250С
2-6 мл перемешать
лимфоцитов 24 часа темп. +20С +80С
8 раз. Транспортировка при температуре +20С +80С.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
клейкая лента
биоматериал
Адсорбирую щ ий материал
Крышка
Контейнер/ сумка-холодильник
Адсорбирующий материал
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
88
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1
Адреса лабораторий, проводящих исследования на маркеры СД4/СД8:
1. Референс-лаборатория РЦ «СПИД»:
г. Бишкек, ул. Логвиненко 8, 5 этаж.
Контактные телефоны: раб 996 (312) 300434, 301083
2. Лаборатория диагностики СПИД Жалалабатской ОЦПБС
г. Жалалабад, ул. Курортная 57
Контактные телефоны: раб. (03722) 26588
3. Лаборатория диагностики СПИД Ошской ОЦПБС
г. Ош, пер. Моминова 10
Контактные телефоны: раб (03222) 77149.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 89
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
8. Ручка
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой при температуре +20С +80С
2. Бактерицидная лампа стационарная или переносная
РЕАКТИВЫ
1. Раствор перекиси водорода 6%
2. Спирт 700
ИНСТРУКЦИИ
1. Откройте контейнер /сумку-холодильник, проверьте правильность и целостность упаковки,
соблюдение холодового режима транспортировки образцов крови.
2. Проверьте полноту представленной в направлении информации (см. приложение 1)
3. Номер на пробирке и фамилия пациента должны совпадать с данными в направлении.
4. Проверьте соответствие образца крови требованиям, предъявляемым к данному виду исследований.
При соблюдении всех условий зарегистрируйте образец в регистрационном лабораторном журнале
(см. приложение 4). Присвойте регистрационный лабораторный номер пробирке и направлению
(см. приложение 1).
5. Передайте биоматериал в лабораторию проточной цитометрии (ПЦ) для исследования.
6. О доставке биоматериала сообщите сотруднику, ответственному за проведение исследований.
7. При выявлении несоответствий биоматериала требованиям по приложению № 2 биоматериал
считайте забракованным.
8. Информацию о забракованном биоматериале внесите в бракеражный журнал (см. приложение 3).
9. Забракованные образцы крови обеззаразьте и утилизируйте согласно СОП № 09-11 «Правила
обеззараживания жидких и твёрдых отходов».
10. Информируйте курьера о браке, курьер расписывается в бракеражном журнале.
11. Передайте информацию о браке образца сотруднику диспансерного отдела под роспись в
бракеражном журнале.
12. После приема биоматериала поверхности рабочего стола обработайте 70% спиртом.
13. Проведите сброс отработанных расходных материалов в контейнер и передайте на автоклавирование.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 91
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Направление и результаты определения процентного и абсолютного числа Т-лимфоцитов
(хелперов CD4 (+) и киллеров / Цитотоксические Т - клетки CD8 (+)) методом проточной
цитометрии.
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Ф.И.О. пациента_________________________________________________________________
Дата рождения______ пол____________Домашний адрес_______________________________
_______________________________________________________________________________
Дата и время забора биоматериала_ ________________________________________________
Дата и время доставки в лаборатории_______________________________________________
Особые пометки_________________________________________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ _______________________________________
Ф.И.О. лица, принявшего материал_________________________________________________
Регистрационный лабораторный номер образца_ _____________________________________
Дети
Результаты исследован-
Взрослые
№ CD-маркеры лимфо- ной крови
1 год - 6 лет 7 -17 лет
п/п цитов
клеток в клеток клеток клеток
% % % %
мкл в мкл в мкл в мкл
CD 4(+) 1000-
1 30-40 39-47 830-2110 33-50 600-1700
Т-хелперы 1840
CD 8(+)
2 Цитотоксические Т - 25-32 810-1520 23-29 490-1300 16-39 300-1000
клетки
Абс. число
3 1300-7200 720-3150
лимфоцитов
Имунно-регулятор.
4 1000-1600 1400-2000 1500-2000
индекс (Th/Tc)
Приложение 2
Образцы, не подлежащие тестированию:
1. Образцы, доставленные с нарушением температурного режима транспортировки
2. Доставленные позже 24 часов от момента забора крови.
3. Гемолизированные образцы крови
4. Образцы, содержащие сгустки
5. Не сопровождаемые направлением или имеющие несоответствие информации на пробирке и в
направлении
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
92
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 4
Журнал регистрации поступающего биоматериала на ПЦ и результатов определения маркеров
СД4/СД8
Дата Результаты исследования
Учреждение Регистраци- Ф.И.О. Дата по-
№ доставки
отправитель онный лаб. Дата Пол становки Примечание
п/п биомате-
биоматериала. № образца рождения анализа СД 4 СД 8 ИРИ АЧЛ
риала
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 93
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1 96
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне
зависимости от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Подпись Руководителя______________________
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 97
Приложение 2.
Форма направления в лабораторию для исследования на ВИЧ
Учреждение отправитель_ ________________________________________________________
Направление №___________на исследование крови на наличие антител / антигенов к ВИЧ.
Регистраци-
Год
п/п онный лабо- Код контин- Результат иссле-
Ф. И. О. пациента Пол рожде- Домашний адрес
№ раторный № гента дования
ния
образца
Особые пометки_________________________________________________________________
Дата забора________________________ Время забора_ ________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ _______________________________________
Дата доставки в лабораторию__________________________________________________ 20___г.
Ф.И.О. лица, принявшего материал_________________________________________________
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
98
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
НАЗВАНИЕ: ЗАБОР ОБРАЗЦОВ СУХОЙ КАПЛИ КАПИЛЛЯРНОЙ КРОВИ (СККК) ДЛЯ РАННЕЙ
ДИАГНОСТИКИ ВИЧ У НОВОРОЖДЕННЫХ И ДЕТЕЙ (ПО КП ЗАБОР КРОВИ НАЧИНАЮТ С 48
ЧАСОВ ЖИЗНИ И НЕ ПОЗДНЕЕ 4-6-НЕДЕЛЬНОГО ВОЗРАСТА)
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
3. Определите место забора крови у ребенка. При невозможности забора крови из пятки необходимо
указать в карте место забора и причину изменения места забора.
4. Держите карту за утолщенный край картона и не прикасайтесь к области взятия образцов с
напечатанными кругами.
5. Не используйте йодсодержащие дезинфицирующие средства.
Правила взятия образцов крови
1. Наденьте халат и одноразовые перчатки
2. Подготовьте рабочую поверхность стола к работе (уберите все ненужные предметы).
3. Обработайте рабочую поверхность стола 70° этиловым спиртом
4. Убедитесь, что пациент сидит удобно. Грудного ребенка родители должны держать осторожно, но
надежно ограничить его движение.
5. При заборе крови из пальца/большого пальца или пятки у новорождённых и детей:
1. Выберите место пункции. Прокол для забора образца крови проводится в мягкую часть дистальной
фаланги IV или III пальца левой руки сбоку от подушечки пальца на расстоянии около 3 мм от
ногтевого ложа (рис.2).
8. Аккуратно надавив большим пальцем на подушечку пальца пациента, поместите ланцет сбоку от
подушечки (рис.4)
9. Аккуратно прижмите ланцет к пальцу и надавите на поршень. Поршень активирует иглу, которая
прокалывает кожу на глубину 2,25 мм и возвращается обратно в футляр.
10. После использования сбросьте ланцет в безопасный контейнер (рис.12).
11. Удалите первую каплю крови с помощью чистой сухой марлевой салфетки, что стимулирует
вытекание крови (рис.5).
12. Опустите палец местом прокола вниз. При необходимости слегка надавливайте на палец до
появления следующей капли крови. Избегайте выдавливания крови.
13. Капните по капле крови на каждый кружок, очерченный на фильтровальной бумаге (рис.6.).
14. Заполните кровью все кружки. Убедитесь, что кровь полностью пропитала бумагу по всей
поверхности кружка
15. Не прижимайте фильтровальную бумагу к месту прокола кожи.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
102
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
16. При заборе крови из большого пальца ноги и пятки у детей и новорожденных:
17. У детей от 4-х до 10 месяцев (более 10 кг) взятие крови проводите из большого пальца ножки (рис
7,8,9).
18. У детей до 4-х месяцев жизни проводите забор капиллярной крови из пятки (10,11).
При невозможности забора крови из пятки необходимо указать в направлении и в фильтровальной бумаге
место забора и причину изменения места забора.
19. Согрейте место взятия крови. Обработайте место прокола на пятке спиртовой салфеткой, высушите
кожу стерильной марлей. Придерживайте пятку и проколите кожу
20. Прокол рекомендуется проводить с латерального или медиального края (рис.9,10).
21. Стерильным ланцетом сделайте прокол.
22. Вытрите первую каплю крови стерильной салфеткой. Дождитесь, пока сформируется вторая
большая капля крови.
23. Слегка коснитесь капли крови центром первого круга на фильтровальной бумаге. Дождитесь, пока
кровь пропитает и полностью заполнит круг с первого раза.
24. Наносите кровь только на одну сторону фильтровальной бумаги.
25. Нанесите только одну каплю крови на каждый круг на фильтровальной бумаге. Убедитесь, что кровь
покрывает всю площадь круга и пропитывает обе стороны фильтровальной бумаги. Для каждого
образца выделяется одна карточка.
26. Не помещайте в один круг более одной капли крови.
27. Для выполнения анализа требуется заполнить все кружки на фильтровальной бумаге.
28. Внимание! Взятие образцов СКК может быть выполнено вместе с другими стандартными анализами
крови. При приготовлении СКК можно использовать как капиллярную, так и венозную кровь.
1. Для остановки крови придавите участок прокола стерильной спиртовой салфеткой.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 103
2. Не накладывайте лейкопластырь на место прокола у младенцев и детей, так как он может отклеиться
и ребенок может его проглотить.
3. Все отработанные материалы сбросьте в контейнер для биологически опасных отходов (рис.12,13).
Внимание!
1. Никогда не превышайте глубину пункции в 2.0 мм.
2. Никогда не прокалывайте задний изгиб пятки или свод стопы.
3. Никогда не используйте участки, на которых имеются предыдущие проколы, синяки, воспаление
или краснота.
4. Никогда не прокалывайте место забора крови более двух раз
5. Критерии брака образцов СККК:
В случае, если образец не пропитал кровью фильтровальную бумагу насквозь (рис.14,15)
Рис. 14,15 Несоответствие образца СККК (вид спереди и сзади фильтровальной бумаги)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16. Guidelines for using HIV technologies in Surveillance: Selection,
Evaluation, and Implementation - 2009 update
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 105
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
МАТЕРИАЛЫ
1. Штатив для просушивания образцов СКК
2. Пластиковые пакеты с зип-замками - индивидуальные для каждого тест-бланка.
3. Поглотители влаги.
4. Индикатор влажности.
5. Пергамент или калька для перекладывания образцов СКК
6. Сумка-холодильник
7. Хладогены.
ОБРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой (t +2+8 0С)
Высушивание и упаковка образцов СКК
1. Образцы СКК сложите так, чтобы они находились в горизонтальном положении отдельно друг от
друга или в штатив для сушки.
2. Обе стороны СКК должны быть открыты для циркуляции воздуха.
3. Образцы должны быть высушены при комнатной температуре (+22 +250С) в течение как минимум
4 часов в горизонтальном положении. При необходимости можно оставить сушиться все образцы
на ночь.
4. Держите вдали от прямых солнечных лучей.
Внимание! Во время сушки нельзя подогревать образцы и складывать их в стопки. Нельзя допускать
контакта пятен крови с какими-либо предметами.
5. Каждую карту с высушенными образцами СКК сложите в пакет с зип-замком (один образец СКК –
один пакет) и каждый из них должен быть с обеих сторон закрыт листами кальки.
6. Вложите в каждый пакет 1 поглотитель влаги и 1 индикатор влажности, удалите воздух из пакета и
плотно закройте.
7. Сопроводительную документацию вложите в отдельный пакет.
8. Вложите пакет с образцом и пакет с сопроводительной документацией в прочный конверт и
запечатайте.
Внимание!
Пластиковые пакеты, используемые для хранения СКК, должны иметь низкую проницаемость
для воздуха и пластиковую зип-застежку. Обычные пищевые пакеты не отвечают данным
требованиям.
Хранение СКК до отправки в лабораторию.
1. Хранение при более высокой температуре вызывает деградацию пятен крови. Храните упакованные
образцы СКК в запечатанном пластиковом пакете при температуре +2-+80С до транспортировки в
лабораторию. Рекомендуется хранить СКК не более двух недель при комнатной температуре.
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 107
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
108
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 109
3. Медицинский халат
4. Маски/очки
5. Микроцентрифужные пробирки с плотно закрывающимися крышками объемом 1,5 мл
6. Штативы для микропробирок объемом 1,5 мл
7. Штативы для наконечников
8. Одноразовые наконечники с маркировкой, свободные от «РНК/ДНК free», объемом от 100 до 1000
мкл с аэрозольным барьером.
9. Емкость для дезинфицирующих средств.
10. Перманентный маркер с тонким стержнем.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Бытовой холодильник с температурой +4+8оС, морозильной камерой
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Автоматические дозаторы с переменным объемом от 100 до 1000 мкл.
РЕАКТИВЫ
1. Дезинфектант, зарегистрированный в КР, разрешенный к использованию
ИНСТРУКЦИЯ
1. Взятие крови проводится утром натощак или не ранее 3 часов после легкого завтрака.
2. Для проведения анализа используется цельная кровь, взятая в одноразовую вакуумную пробирку с
раствором К2ЭДТА или К3ЭДТА. После взятия вакутейнер с кровью перемешайте путем аккуратного
переворачивания не менее 6-8 раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с
антикоагулянтом.
3. Пронумеруйте пробирки в соответствии с направлениями (см. Приложение).
4. Заполняйте направления и делайте надписи на пробирках маркером четко, без исправлений и
помарок.
5. Пробирки с кровью должны находиться только в вертикальном положении, в штативе.
6. Храните пробирку с образцом крови при температуре от 20 С до 80С не более 24 часов.
7. Важно! Кровь нельзя замораживать.
8. При отсутствии холодильника вакуумную пробирку с цельной кровью храните при комнатной
температуре (+18оС-+25оС) не более 2 часов с момента взятия материала.
9. В референс-лаборатории процентрифугируйте кровь при 3000 об/мин в течение 20 минут.
10. По завершении центрифугирования полученную плазму перенесите одноразовым наконечником
с фильтром с маркировкой «ДНК/РНК free» в одноразовую пробирку объемом 1,5 мл с плотно
закрывающейся крышкой.
11. Поделите плазму на аликвоты по 150 мкл.
12. Промаркируйте пробирки.
13. Допускается хранение плазмы не более 3 суток в холодильнике при температуре от +2 до +80С, в
течение 1 года при температуре не выше минус 20 0 С.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Применение вакуумных систем BD Vacutainer для лабораторного анализа. Долгов В.В., Луговская
С.А., Почтарь М.Е. Методические рекомендации,2007 г.
2. Система управления качеством в лабораториях. Пособие ВОЗ.
3. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики».
РАЗДЕЛ 02 ПРЕАНАЛИТИКА 111
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Форма направления биологического материала для качественного определения ДНК ВИЧ и/или
количественного определения РНК ВИЧ методом ПЦР
Учреждение-отправитель
Дата забора_________________________Время забора_________________________________
Особые пометки_________________________________________________________________
Исследование на количественное РНК ВИЧ Исследование на качественное ДНК ВИЧ
(нужное обвести)
№ регистра-
Дата Время
№ об- ции образца Год
Ф.И.О. пол Домашний адрес забора забора
разца в лаборато- рождения
крови. крови.
рии
1
3. Медицинский халат
4. Маски/очки
5. Микроцентрифужные пробирки с плотно закрывающимися крышками объёмом 1,5-2 мл
6. Штативы для микропробирок.
7. Термоконтейнер /сумка холодильник из материала, стойкого к дезинфектантам.
8. Емкость для дез. средств.
9. Перманентный маркер с тонким стержнем.
10. Вата
РЕАКТИВЫ
1. Дезинфектант, разрешённый к применению в КР.
2. ИНСТРУКЦИЯ
3. Заполните направление (см. приложение 1) и промаркируйте пробирки, без исправлений и помарок.
4. Упакуйте пробы в соответствии с требованиями безопасной тройной упаковки.
5. Поместите вакуумные пробирки с образцами в пластиковый пакет с зип-замком подходящего
размера вместе с небольшим количеством любого адсорбирующего материала, например, ваты (рис.
1).
6. Пластиковый пакет необходимо закрыть и поместить в сумку-холодильник или контейнер.
7. Два или более образца от одного пациента могут быть упакованы совместно в один пластиковый
пакет большего размера.
Важно! Не допускается упаковка образцов крови от разных людей в один и тот же пакет
8. Заклеенные пакеты с образцами поместите в сумку-холодильник/контейнер с крышкой.
9. Внутри сумки-холодильника сделайте дополнительные прокладки между вторичными контейнерами
из любого подходящего материала для того, чтобы пробирки прочно стояли и не могли случайно
опрокинуться во время транспортировки (рис.2).
клейкая лента
биоматериал
Адсорбирую щ ий материал
Крышка
Контейнер/ сумка-холодильник
Адсорбирующий материал
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 115
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма рекламации на качество диагностических тест-систем.
РЕКЛАМАЦИЯ
на качество диагностического препарата
1. Полное наименование тест-системы:_ ______________________________________________
2. Страна-изготовитель:_ ___________________________________________________________
3. Фирма-производитель:_ __________________________________________________________
4. Код продукта: Катал. №___________________________________________________________
5. Серия: №_______________________________________________________________________
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 117
Приложение 2
Форма журнала учёта движения диагностических тест-систем
Примечание
Серия срок годно-
Кому, наименова-
Подпись получа-
ние учреждения
Дата получения
Источник полу-
Количество те-
ДАТА выдачи
стов в наборе
Количество
Количество
количество
Цена за ед.
Цена за ед.
сти ДТС
наборов
Сумма
Сумма
Сумма
чения
теля
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Приложение 3
Формуляр движения запасов тест-систем
Модель холодильника: « » Инвентарный № Комната №
Остаток тест-систем
Наименование тест-систе- Срок год- Дата/месяц
Производитель Серия №
мы ности
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
118
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
2. Фельдшер-лаборант
3. Лаборант
МАТЕРИАЛ
1. Формуляр регистрации температуры в холодильнике и морозильной камере.
2. Формуляр регистрации температуры в помещении для ИФА исследований.
3. Формуляр регистрации температуры в помещении.
4. Ручка шариковая.
5. Ёмкость для глицерина.
6. Глицерин (150-200 миллилитров).
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Термометр электронный «testo 720».
2. Термометр ртутный/спиртовой (в отсутствии термометра электронного)
ИНСТРУКЦИИ
I. Замер температуры с помощью ртутного/cпиртового термометра
1. Термометр поставьте в устойчивую ёмкость с глицерином и поместите в холодильник/ морозильную
камеру в вертикальном положении.
2. По истечению 1 часа, не доставая термометр из глицерина, отметьте температуру и занесите данные
в формуляр термометрии (Приложение 2 а, в).
3. Для достижения стабильных показаний температуры ёмкость с термометром в глицерине постоянно
держите в холодильнике.
II. Замер температуры с помощью электронного термометра «testo 720»
1. Для проведения замера в холодильнике или морозильной камере откройте дверцу холодильника и
установите датчик измерения температуры на полке.
2. При этом сам электротермометр должен оставаться снаружи, к примеру, на крыше холодильника
или другой горизонтальной поверхности.
3. Дверцу холодильника закройте.
4. Замер температуры проведите через 30 минут.
5. Для этого включите электротермометр путём нажатия правой верхней кнопки и удерживайте её в
течение 1 секунды. На дисплее (фото 1) отобразится текущая температура.
6. Занесите показания температуры в формуляр (Приложение 2 а, б).
ф. 1. Показание электротермометра.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
120
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Настройка параметров электротермометра «testo 720»
Для программирования термометра осуществите следующие шаги:
a. Нажмите и удержите в течение 1 секунды левую кнопку Hold, Мах/Мin (фото 2). Вы вошли
в режим «Меню»
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 121
b. Путём нажатия кнопок, расположенных ниже кнопки Hold, подключите или выключите
звуковой сигнал (ALARM ON/OFF), срабатывающий при несоответствии температуры
заданным параметрам.
c. Для переход к следующей функции термометра вновь нажмите левую кнопку Hold. На
экране будет мигать Мах/Мin
d. С помощью кнопок ↑ и ↓ выберите минимально и максимально допустимый диапазона
температуры. Например, в холодильнике для хранения тест-систем этот диапазон составляет
от +2 до +8о С.
e. При следующем нажатии Hold, Мах/Мin установите текущий год – на экране появится
«YEAR». С помощью кнопок установите текущий год (ф. 5).
f. Далее после очередного нажатия Hold, Мах/Мin установите «MONTH» – месяц, «DAY» –
день, «TIME» – текущее время.
122
g. С помощью последующего нажатия Hold, Мах/Мin (на экране отобразится «UNITE») выберите единицы измерения в градусах по
Цельсию (оС) или в градусах по Фаренгейту (ºF). (ф.6)
h. При следующем нажатии Hold, Мах/Мin – на экране отобразится «RESET». С помощью кнопок ↑ и ↓ выберите параметры: yes (да)
для подтверждения настроенной программы или no (нет) – для удаления настроенной программы (ф.7).
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
i. Снова нажмите кнопку Hold, Мах/Мin, после чего аппарат сохранит или удалит внесённые настроенные параметры: на 1 секунду
экран погаснет, а затем отобразится текущая температура.
Приложение 2
а. Форма температурного листа для холодильника
Название учреждения______________________________________________________________________________
Название лаборатории______________________________________________________________________________
Месяц_ ____________________________ год___________________________________________________________
+12
+11
+ 10
РАЗДЕЛ 03
+9
+8
+7
+6
+5
+4
+3
+2
+1
-1
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
-2
123
б. Форма температурного листа для морозильной камеры 124
Название учреждения______________________________________________________________________________
Название лаборатории______________________________________________________________________________
Месяц_ ____________________________ год___________________________________________________________
-15
-16
-17
-18
-19
-20
-21
-22
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
-23
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
-24
-25
в. Форма температурного листа для помещений
Название учреждения______________________________________________________________________________
Название лаборатории______________________________________________________________________________
Месяц_ ____________________________ год___________________________________________________________
+24
+23
+22
+21
+20
+19
+18
+17
+16
+15
+14
+13
+12
Приложение 3.
г. Форма журнала несоответствий и корректирующих мер
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Выявленное несоот-
№ п/п Причина Корректирующие меры Срок исполнения Оценка результата Роспись
ветствие
125
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
126
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУКЦИИ
1. Наденьте защитную одежду: медицинский халат или куртку с брюками
2. Подготовьте рабочее место, уберите все лишние предметы со стола.
3. Подготовьте оборудование к работе: включите в сеть вошер, термошейкер, вортекс,
4. В соответствии с инструкцией приготовьте промывочный раствор, заполните им ёмкость для
промывочного раствора.
5. Заполните бланк протокола исследования (Приложение 1), при этом укажите:
–– номер протокола;
–– название, фирму-производителя, серию и срок годности тест-системы,
–– дату исследования и фамилию постановщика анализа;
6. В бланк протокола внесите обозначения контрольных проб и номера исследуемых образцов в
порядке, предусмотренном инструкцией к тест-системе и с учётом постановки ВЛС. Например:
Лунка А1 К+ Анти-ВИЧ 1,2; В1 К+ Аг ВИЧ ; лунки С1, D1, E1 К отр; лунка F1 – ВЛС и так далее.
7. Наденьте перчатки, защитные очки и маску или защитный экран.
8. Образцы сывороток и ВЛС перед внесением в лунки планшета перемешайте на вортексе без
образования пузырьков воздуха (см. СОП № 03-05. «Правила эксплуатации вортекса «Vortex mixers
модель M37600»).
9. В отсутствие вортекса пропипетируйте образец исследуемой сыворотки с помощью дозатора с
одноразовым наконечником 10-12 раз.
10. Все этапы ИФА проведите строго по инструкции, прилагаемой к данной серии тест-системы.
11. Наконечники по мере использования сбрасывайте в термоустойчивый пакет для автоклавирования.
Если пакет отсутствует, то осуществите сброс наконечников в ёмкость с 6% перекисью водорода.
12. Заранее, за 15 минут до учёта результатов подготовьте ридер к работе (СОП № 03-08 Правила
эксплуатации ридера «Multiskan FC»)
13. Регистрацию результатов проведите согласно требованию инструкции, при этом оцените качество
исследования с помощью:
–– оценки соответствия значений Оптической Плотности (ОП) всех Контролей прилагаемых к тест-
системе требованию инструкции (оценка валидности теста);
–– показания значений ВЛС занесите в компьютерную базу «Контрольная карта (СОП 08-02
«Правила проведения внутрилабораторного контроля качества при тестировании на ВИЧ и
вирусные гепатиты с помощью компьютерной программы»)
–– Оценку результатов ВЛС проведите согласно СОП №.08-03 «Применение контрольных правил
WESTGARD и порядок выявления лабораторных ошибок».
14. Только после оценки валидности теста и качества тестирования перейдите к оценке исследуемых
образцов.
15. При выявлении погрешности измерения проведите действия согласно Приложению 2 «Причины
ошибок в ИФА и меры их устранения».
16. Оформите протокол исследования и вместе с листом распечатанных на ридере результатов подшейте
в папку «Протоколы исследований на ВИЧ методом ИФА».
17. По окончании исследования приведите в порядок рабочее место:
–– обработайте рабочие поверхности ватным тампоном, смоченным в 96º спирте.
–– обработайте оборудование в соответствии с правилами их эксплуатации.
–– убедитесь, что все используемое оборудование отключено от сети электропитания.
–– отработанные образцы крови/сывороток и расходные материалы обеззаразьте автоклавированием
и утилизируйте (см. СОП №: 09-11 «Правила обеззараживания жидких и твёрдых отходов»).
–– проведите уборку в боксе для постановки ИФА.
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 129
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества в
иммуноферментном анализе», Бишкек, 2005 г.
2. Масяго А.В., Некоторые ошибки при постановке ИФА, Новосибирск, 2000 г.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
ПРОТОКОЛ №
Исследование на ВИЧ методом ИФА
Тест- система___________________________________________________________________
Производитель__________________________________________________________________
Дата постановки_____________ Серия________________ Срок годности__________________
Постановщик анализа____________________________________________________________
Схема анализа
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B
C
D
E
F
G
H
Комментарии______________________________ _________________________________________
_________________________________________ _________________________________________
_________________________________________ _________________________________________
Приложение 2
Возможные ошибки в ИФА и меры их устранения
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
6. С помощью специального ключа открутите в средней части пипетку путём поворота его против
часовой стрелки (фото.2).
7. При помощи шомпола (спицы) прочистите внутренний канал узкой части пипетки от скопившихся
частиц исследуемого материала.
8. Удалите с поршня старую смазку салфеткой, смоченной в спирте (фото.3).
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 135
Если нет других утверждений в технической инструкции, все части дозатора могут быть почищены
в мыльном растворе или изопропаноле.
16. После этого части дозатора в обязательном порядке следует прополоскать в дистиллированной воде
2-3 раза.
17. Не собирайте дозатор до тех пор, пока все его части полностью не высохнут.
18. После чистки дозаторов необходимо провести процедуру его калибровки (см. СОП №03-06
«Правила внутрилабораторной калибровки дозаторов»)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Инструкция по эксплуатации автоматического дозатора «HOSPITEX DIAGNOSTIK»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 137
b. При опускании включателя вниз смешивающий диск будет крутиться только при небольшом
нажатии на него
3. Выберите необходимую скорость вращения.
4. Слегка опритесь в диск вортекса дном пробирки с сывороткой и, не выпуская её из рук, держите 3-6
секунд до полного перемешивания содержимого.
5. По окончании процедуры отключите прибор от электропитания.
6. Обработайте диск вортекса смоченным в 70º спирте ватным тампоном.
7. Тампон сбросьте в полипропиленовые пакеты для автоклавирования
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. 1. Инструкция по эксплуатации «Maxi Mix II Vortex Mixer Operation Manual and Parts List
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 139
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
10. Внутреннюю поверку проводит обученный процедуре и имеющий навыки работы с дозаторами
специалист.
11. Внутреннюю поверку дозаторов для районных лабораторий ИФА и диагностики ВИЧ проводят
специалисты лабораторий областных центров профилактики и борьбы со СПИД по утверждённому
графику.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Ответственный по качеству
2. Врач-лаборант
3. Фельдшер-лаборант
4. Лаборант
МАТЕРИАЛ
1. Наконечники одноразовые для дозатора – (по 1 для измерения каждого объёма)
2. Сосуд для воды (стакан на 15-20 мл; пенициллиновый флакон и так далее)
3. Бланки протоколов калибровки
4. Ручка шариковая для ведения записей
РЕАКТИВЫ
1. Вода дистиллированная или вода деионизированная
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Весы аналитические или электронные
2. Термометр с диапазоном измерения 15 – 30 º С и градиентом (делением) не более 0.5С.
ИНСТРУКЦИИ
1. Измерьте температуру воды, определите по таблице коэффициент Wt (см. Приложение 2).
2. Занесите данные по температуре и коэффициенту в формуляр (см. Приложение 1).
3. Отметьте в формуляре номинальный объем (Cn) и номер пипетки.
4. Уравновесьте весы (см. СОП № «Эксплуатация весов электронных/ аналитических).
5. Поставьте сосуд для воды на весы. Сбросьте её вес в память весов.
6. Если пипетка с регулируемым объёмом, то установите минимальное значение объёма.
7. Наденьте плотно наконечник на носик дозатора и наберите установленный объем воды, выполняя
следующие действия:
–– держите дозатор вертикально.
–– погружайте наконечник на 2-3 мм в воду.
–– набирайте измеряемый объем медленно и одинаково нажатием поршня до первого упора.
Важно! Для правильного заполнения наконечника необходимо выдерживать период
ожидания. Время ожидания зависит от размера наконечника: для наконечников объёмом до 50 мкл
– 1-2 секунды, для наконечников 50 – 199 мкл. – 2-3 секунды., для наконечников 200 – 499 мкл. – 3-4
секунды, для исследований 500 – 5,000 мл. – 5 сек.
8. Внесите измеряемую воду внутрь взвешиваемого сосуда следующим образом:
–– прикосновение наконечника с измеряемой жидкостью и внутренней стенкой сосуда должно быть
под углом 30° - 45°.
–– вносите исследуемый объем медленно и одинаково до первого упора (измеряемый).
9. Остатки воды в наконечнике сбросьте в отдельно стоящий сосуд нажатием поршня до второго упора.
10. Позвольте поршню вернуться в верхнюю позицию.
11. Определите вес и отметьте его в формуляре, затем сбросьте вес в память весов.
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 141
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
142
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1.
ФОРМУЛЯР ДЛЯ КАЛИБРОВКИ
ПИПЕТОК С РЕГУЛИРУЕМЫМ ОБЪЕМОМ
ДОПУСТИМАЯ ПОГРЕШНОСТЬ: ± 5 % (V < 50 мкл)
± 3 % (V > 50 мкл)
Дата:.......................................................................................................................
Температура воды.................................................................................................°С
соответствующий коэффициент Wt....................................................................
Фирма изготовитель..............................................................................................
№ пипетки:.............................................................................................................
Минимальный объём Средний объём Максимальный объём
пипетки: Cn ………………………мкл пипетки: Cn ……..…………………мкл пипетки Cn……:…………………мкл
ИЗМЕРЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЯ
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
……………… ……………… ……………… ……………… ……………… ………………
ОБЪЁМ (Cm = mср × Wt): ОБЪЁМ (Cm = mср × Wt): ОБЪЁМ (Cm = mср × Wt):
…………………………………… …………………………………… ……………………………………
Погрешность: E = (Cm-Cn) × 100 Погрешность: E = (Cm-Cn) × 100 Погрешность: E = (Cm-Cn) × 100
Cn Cn Cn
…………………………………………….. …………………………………………… ……………………………………………
Фирма изготовитель…………………………………………………………………………………………………………
№ пипетки:……………………………………………………………………………………………………………………
ИЗМЕРЕНИЯ
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
СРЕДНИЙ ВЕС: mср =……………………………………………………………
Подпись: ……………………………
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
144
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 2.
Определение поправочного коэффициента Wt.⃰
Wt
Температура °С
(мкл/мг)
15 1.0019
15.5 1.0020
16 1.0021
16.5 1.0021
17 1.0022
17.5 1.0023
18 1,0024
18,5 1,0025
19 1,0026
19,5 1,0027
20 1,0028
20,5 1,0029
21 1,0030
21,5 1,0031
22 1,0032
22,5 1,0033
23 1,0035
23,5 1,0036
24 1,0037
24.5 1,0038
25 1,0039
25.5 1,0041
26 1,0042
26.5 1,0043
27 1.0045
27.5 1.0046
28 1.0047
28.5 1.0049
29 1.0050
29.5 1.0052
30 1.0053
Приложение 3
Пример расчёта.
Значения, полученные гравиметрическим методом при температуре воды 21,5º С (Wt= 1,00316)
Тестируемый объем (мкл.) 200,00
Измеренные значения веса (мг) 199,3620
1. m1 200,2000
2. m2 199,6000
3. m3 199,4900
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 145
4. m4 199,7000
5. m5 199,7000
6. m6 199,2900
7. m7 199,3500
8. m8 199,4100
9. m9 199,2000
10. m10 199,1900
Расчёт среднего веса:
mср = (m1 + m2 + m3 + m4 + m5 + m6 + m7+ m8 +m9 +m10) / 10
mср = (200,2+ 199,6 + 199,49 +…+199,19/ 10 = 199,513
Расчёт среднего дозируемого объёма с учётом поправочного коэффициента Wt:
Сm = mср × Wt
Сm = 199,513 х 1,0032 = 200,1514
Расчёт ошибки измерения пипетки:
E = (Cm-Cn) × 100 / Cn
E = 200,1514 – 200/200 х 100% = 0,076%
Результаты:
Тестируемый объем (мкл): 200,0000
Средний объем (мкл): 200,1514
Е (%) 0,076
Е (%) установленный* 0, 600
*Предел погрешности, установленные производителем прибора. Обратитесь к спецификации в инструкции
по эксплуатации.
Заключение о пригодности: Данный дозатор соответствует техническим требованиям.
Если расчётное значение погрешности Е (%) меньше или равно значению, установленному в
спецификации заводом-изготовителем, прибор откалиброван для работы в пределах допустимых
спецификацией.
Примечание:
В случае отсутствия спецификаций берутся рассчитанные значения допустимой погрешности
для: пипеток объёмом 1 - 50 мкл: ± 5 %
пипеток объёмом > 50 мкл: ± 3 %
Важно! При проведении расчётов не допустите ошибки пересчёта объёма в вес. Если измерение
объёма идёт в микролитрах (мкл.), то пересчитывается на микрограммы (мг), если в миллилитрах, то
пересчёт на граммы:
Объем Вес
1 мкл 1 мг
10 мкл 10 мг
100 мкл 100 мг
1000 мкл (или 1 мл.) 1000 мг (или 1 гр.)
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
146
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 149
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 151
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Автоматическая пипетка (дозатор) фиксированного или переменного объёма
ИНСТРУКЦИИ
1. Снимите чехол с весов.
2. Убедитесь, что прибор подключён к электропитанию, на дисплее, в левом верхнем углу отображён
знак включения (фото 1)
4. Нажмите кнопку ON/OFF для включения прибора. Подождите 1 минуту чтобы прибор сам себя
откалибровал – на дисплее отображается: 0.00000, после этого можно приступать к взвешиванию.
5. Для взвешивания жидкостей сделайте следующее:
a. Откройте боковую дверцу весов
b. Поставьте на весы ту ёмкость, в которой предполагаете произвести взвешивание, закройте
дверцу. На дисплее будет отображаться вес посуды (ф.4).
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 153
c. Нажмите кнопку TARE на рабочей панели весов. После чего на дисплее будут вновь
отображаться 0.00000.
d. Откройте дверцу, выньте ёмкость из весов. После чего на дисплее будет отображаться вес
посуды со знаком минус (ф.5).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 155
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
4. Нажмите кнопку X/W: начинают мигать контрольные индикаторы на панели управления 15 и 16.
Установите на дисплее с помощью кнопок ▲▼ заданную температуру в градусах (°С).
5. Нажимая кнопку X/W перейдите к фазе установки выключения с выдержкой времени. Установите
на дисплее с помощью кнопок ▲▼ требуемое значение времени в часах и минутах от 1ч. до 99 ч 59;
индикаторы 16, 17 мигают, (символы ---- соответствуют неограниченной во времени экспозиции).
6. Нажимая кнопку X/W перейдите к фазе установки числа циклов с помощью кнопок ▲▼
установите число циклов от 1 до 255 (если это необходимо, эта функция возможна при выключении
с выдержкой времени ≠ 0). В ходе установки горят все индикаторы.
7. Нажимая кнопку X/W перейдите к фазе установки включения с выдержкой времени. Установите
на дисплее с помощью кнопок ▲▼ требуемое значение в часах и минута от 0 до 99 часов 59 минут.
При этом контрольный индикатор 14 будет мигать.
8. Двойным одновременным нажатием кнопки ON/OF запустите программу (при запуске программы
включается звуковой сигнал).
9. После завершения работы выключите прибор кнопкой ON/OF. (После звукового сигнала дисплей
погаснет).
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по эксплуатации температурного шкафа Venticel 111
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 157
Приложение 1.
1. Дисплей
2. Десятичная точка – высвечивается: аппарат подключен к сети.
3. Контрольные индикаторы предварительно выбранных программ: высвечивается – активное
состояние программы; мигает – выбранная программа будет активизирована через 5 секунд.
4. Контрольный индикатор обогрева.
5. Контрольный индикатор включения – высвечивается при включении аппарата нажатием кнопки
ON/OFF
6. Контрольный индикатор системы защиты: мигает – температура превысила выбранный предел,
установленный на защитном термостате – обогрев выключен.
7. Кнопка активизации режима установки
8. Установка величины в сторону «МЕНЬШЕ»
9. Установка величины в сторону «БОЛЬШЕ»
10. Выключатель (ON – включено, OFF – выключено)
11. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
включение с выдержкой времени.
12. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
разогрев до заданной температуры.
13. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
выключение с выдержкой времени.
14. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – падение температуры после
выключение.
15. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
бесконечная выдержка при заданной температуре.
16. Контрольные индикаторы 14 – 18 мигают – режим установки числа циклов.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
158
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
МАТЕРИАЛ
1. Стальные нержавеющие контейнеры для жидких отходов и нержавеющие сеточные контейнеры для
инструментов и твёрдых отходов.
2. Полипропиленовые термоустойчивые мешки для автоклавирования.
3. Термостойкие перчатки.
4. Индикаторы температуры на 121º и/или 132º С.
5. Журнал учёта работы автоклава.
6. Ведро на 7-10 литров.
ИНСТРУКЦИИ
Снимите крышку с резервуара воды.
1. Через отверстие в верхней части автоклава залейте дистиллированную воду до тех пор, пока уровень
не поднимется до основания держателя предохранительного клапана.
2. Закройте крышку резервуара.
3. Вставьте штепсель в розетку электросети.
4. Поместите в контейнер полипропиленовый пакет с отходами.
5. Перед загрузкой материала, подлежащего обеззараживанию, на полипропиленовый пакет наклейте
индикатор для контроля температуры автоклавирования.
6. Закройте дверь, и плотно закрутите дверной винт.
7. Нажмите кнопку SELECT (ВЫБОР) для выбора нужной программы.
8. На дисплее (поочерёдно) появятся номера и название выбранной программы:
–– Программа 1 – Instruments ST.BY – обработка инструментов
–– Программа 2 – Instruments ST.BY– обработка инструментов
–– Программа 3 – WASTE – обработка отходов
–– Программа 4 – Liquids – обработка жидких отходов
–– Программа 5 – Liquids – обработка жидких отходов
–– Программа 6 – Liq+ Cool – обработка жидких отходов+ холод
9. Для установки параметров в программе нажмите PARAMETERS – на экране высветиться время и
заданная температура.
10. Для установки на автоклаве текущей даты и времени нажмите кнопку PROGRAM. На дисплее
появляется текущая дата и курсор, расположенный под параметром «день». Повторное нажатие
этой кнопки переводит курсор под параметр «месяц», а затем – под параметр «год».
11. При следующем нажатии кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется текущее время дня с
курсором, расположенным под параметром «час». Повторное нажатие этой кнопки переводит
курсор под параметр «минуты».
12. Следующее нажатие кнопки PROGRAM вызывает на дисплее сообщение «CODE:000» измените
его на «CODE:001» с помощью кнопок ▲ (вверх) ▼(вниз).
13. Со следующим нажатием кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется «STER.T.» (температура
обеззараживания), с помощью кнопок ▲▼ установите необходимую температуру.
14. Со следующим нажатием кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется «STER. TIME» (время
обеззараживания), с помощью кнопок ▲▼ установите время обеззараживания (максимальное
время 59 минут).
15. Со следующим нажатием кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется «DRY TIME»
(время сушки после обеззараживания) с помощью кнопок ▲▼ установите время сушки после
автоклавирования.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
160
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 03 ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 161
Приложение 1.
ИНСТРУКЦИЯ ПО БЕЗОПАСНОЙ РАБОТЕ НА АВТОКЛАВЕ
1. Все пользователи автоклава должны пройти обучение его надлежащему использованию и получить
разрешение на работу с оборудованием, работающим под давлением, в Кыргызском центре
медицинской техники.
2. Жидкости можно автоклавировать только с использованием программы «жидкости». Контейнер с
жидкостью должен быть закрыт, но не запечатан.
3. Бутылки с жидкостью можно автоклавировать только с помощью специальной программы. Бутылка
должна быть из термостойкого стекла.
4. Отдельные стеклянные бутылки необходимо поместить в соответствующий контейнер, который
будет помещен на лоток. Никогда не ставьте стеклянные бутылки на дно автоклава. Никогда не
наполняйте бутылку более чем на 2/3 объёма
5. При автоклавировании пластиковых материалов убедитесь, что этот предмет может выдержать
температуру автоклавирования. Пластик, расплавленный в камере, может вызвать значительные
повреждения прибора.
6. Никогда не используйте автоклав для стерилизации коррозионных продуктов: кислот, оснований и
фенолов, летучих соединений или растворов, таких как этиловый, метиловый спирт или хлороформ,
а также радиоактивных веществ.
7. Закрывая дверцу автоклава, убедитесь, что она надлежащим образом заперта, прежде чем
активировать оборудование.
8. Во избежание ожогов перед выниманием лотков надевайте термостойкие перчатки.
9. Перед открытием дверцы убедитесь, что в камере нет давления (датчик давления в камере
расположен на передней панели автоклава).
10. Медленно приоткройте дверцу, чтобы выпустить пар, и подождите 5 минут, прежде чем вынимать
загруженные предметы. При автоклавировании жидкостей подождите 10 минут.
11. Необходимо проводить техническое обслуживание автоклава в соответствии с инструкцией по
эксплуатации прибора.
12. Один раз в месяц проверяйте функционирование предохранительных клапанов, а один раз в год
сертифицированный инженер должен проводить проверку безопасности компрессионной камеры.
13. Регулярно проверяйте состояние узлов. Убедитесь в отсутствии протечек, трещин, засоров, свиста
или странных звуков.
14. Немедленно уведомляйте ответственное лицо о любых отклонениях или рисках для надлежащего
функционирования устройства.
15. Осуществлять ремонт или обслуживание автоклава имеет право только сертифицированный
инженер, обладающий соответствующей квалификацией, имеющий техническую документацию и
необходимые инструменты для тестирования.
16. Перед выполнением любых операций по профилактическому техническому обслуживанию
убедитесь, что электрический кабель отключён, а в автоклаве нет давления.
17. Во избежание серьёзных травм от горячего пара при открывании дверцы строго запрещено
облокачиваться на автоклав. Строго запрещено класть руку или прислонять любую часть тела к
дверце.
Приложение 2.
ИНСТРУКЦИИ ПО УХОДУ И ТЕХНИЧЕСКОМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ АВТОКЛАВА
Чтобы поддерживать хорошее состояние прибора, оператору необходимо периодически выполнять
операции по обслуживанию:
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
162
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 3.
Журнал учета работы электронного настольного автоклава
№ Время и t экспози- Роспись испол-
Дата Наименование материала Результаты контроля
п/п ции нителя
1 2 3 4 5 6
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
164
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
6. Для того, чтобы набрать очищенную воду подставьте чистую ёмкость под кран и нажмите рычаг
вниз до щелчка. Вода будет в ёмкость будет поступать из После того, как ёмкость заполнится,
поднимите рычаг в исходное положение.
7. После окончания работы нажмите кнопку START/STOP.
8. После появления на дисплее надписи – IdL выключить прибор с помощью двухпозиционного
выключателя, расположенного на задней панели прибора в позицию (0).
Важно! Допускается очистка водопроводной воды только в случае очень низких показателей
жёсткости поступающей водопроводной воды (dH° = 0 – 5). Замер жёсткости водопроводной воды
проводит лаборатория территориальной санитарно-эпидемиологической службы.
II. Дополнительная очистка дистиллированной воды
1. Выполните пункты 1,2,3 согласно I. Очистка водопроводной воды.
2. Открутите крышку на верхней поверхности прибора с резервуара и получите доступ к резервуару
для воды.
3. Залейте дистиллированную воду в резервуар в количестве не более 4 литров.
4. Шланг, соединяющий прибор с водопроводом, перекройте с помощью зажима.
5. Нажмите кнопку START/STOP, после чего прибор начнёт работать.
6. Далее выполните все действия, описанные в пп. 5 – 8 I. Очистка водопроводной воды.
Важно! Работу прибора необходимо контролировать по индикаторам (см. Приложение 1 «Контроль
за работой системы очистки воды»)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по эксплуатации «Barnstead EASYpure RoDi. Operation manual and parts list. Series 1332»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Контроль за работой системы очистки воды:
На дисплее прибора, с правой стороны располагается 3 сигнальных индикатора, которые отображают
реальную информацию о качестве воды и других характеристиках. В зависимости от работы прибора и
качества воды сигнальные индикаторы могут быть зелёного, жёлтого и красного цвета:
Зелёной цвет указывает на нормальную работу системы
Жёлтый – рекомендуется планово-предупредительный ремонт
Красный – отклонение в системе, требующее срочного ремонта или замены фильтров.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
166
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
18. Дайте на подпись руководителю лаборатории полностью заполненную страницу.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
3. Руководство по экспресс-тестированию.
4. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования
Наи- Наи- Наи-
мен-ие мен-ие мен-ие Поло- Под-
Год Дата По- Результат Отриц-й
Код кон- теста 1 теста 2 теста 3 жит-й пись
№ ФИО рожде- Пол становки (обвести ВЛК Примечание
тингента ВЛК опера-
ния теста Срок год- Срок год- Срок год- кружком) (обвести)
(обвести) тора
ности. ности ности
МЖ // + - Нед + - Нед + - Нед
МЖ // + - Нед + - Нед + - Нед
МЖ // + - Нед + -Нед + - Нед
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
169
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
170
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1 172
а. Форма температурного листа для холодильника
Название учреждения_______________________________________________________________
Название лаборатории_______________________________________________________________
Месяц_ ____________________________________год_____________________________________
Температура Дни месяца
°С 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 25 25 26 27 28 29 30 31
+12
+11
+ 10
+9
+8
+7
+6
+5
+4
+3
+2
+1
0
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
-1
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
-2
б. Форма температурного листа для помещений
Название учреждения_______________________________________________________________
Название лаборатории_______________________________________________________________
Месяц_ ____________________________________год_____________________________________
Температура Дни месяца
°С 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 25 25 26 27 28 29 30 31
+30
+29
+28
+27
+26
+25
+24
+23
+22
РАЗДЕЛ 04
+21
+20
+19
+18
+17
+16
+15
+14
+13
+12
+11
+10
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
173
174
1
Дата получения
Количество
2
наборов
Серия срок
3
годности ДТС
Количество те-
4
стов в наборе
ПРИХОД
5
Цена за ед.
6
Сумма
Источник полу-
7
чения
Подпись материально
8
ответственного лица
9
ДАТА выдачи
Форма
Кому, наимено-
10
вание учрежде-
ния
11
количество
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАСХОД
12
Цена за ед.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
13
Сумма
учета движения диагностических тест-систем
Подпись полу-
14
чателя
15
Количество
остаток
16
Сумма
17
Примечание
Приложение 2
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 175
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
7. Направление в лабораторию
8. Емкости для дезинфицирующих средств.
9. Емкости для твердых и жидких отходов.
10. Маркер перманентный с тонким стержнем.
11. Марля.
12. Стол, стул.
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов.
2. 70° спирт.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Таймер.
ИНСТРУКЦИИ
1. До начала процедуры теста наденьте перчатки.
2. Освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
3. Продезинфицируйте рабочую поверхность стола.
4. Подготовить необходимое количество экспресс-тестов, скарификаторов, спиртовых салфеток.
5. Проверьте срок годности экспресс-тестов.
6. Занесите данные пациента в журнале регистрации экспресс-тестирования (СОП № 04-01).
Постановка
1. Выньте экспресс-тесты из упаковки.
2. Промаркируйте тесты, поставьте идентификационный номер пациента.
3. Расположите тесты по порядку.
4. Поставьте два теста, предназначенных для контрольных образцов
5. На корпусе предпоследнего теста пометьте маркером К-
6. На последнем тесте пометьте маркером К+
7. Заполните Журнал регистрации экспресс-тестирования (см. Приложение1).
8. Поместите руку пациента ладонью кверху.
9. Протрите спиртовой салфеткой безымянный палец левой руки (для левши – правой руки).
10. Установите скарификатор на подушечке пальца сбоку.
11. Нажатием проколите подушечку пальца.
12. Сбросьте скарификатор в контейнер для отходов.
ВЫПОЛНЯТЬ БЕЗ ПРОМЕДЛЕНИЯ
1. Снимите первую каплю крови сухой салфеткой или стерильным ватным шариком.
2. Нажмите на основание пальца для получения капли крови.
3. Наберите пипеткой до метки.
4. Опустите каплю крови в лунку.
5. Сбросьте пипетку в контейнер для отходов.
6. Капните одну каплю реагента в ту же лунку.
7. Включите таймер на время, указанное в инструкции.
8. Инкубируйте при комнатной температуре.
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 177
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
3. противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
4. Руководство по экспресс-тестированию.
5. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Год Дата Наименование Результат ВЛК поло- ВЛК отри-
Код кон- Подпись
№ ФИО рожде- Пол Постановки теста/срок годно- (обвести жительный цательный Примечание
тингента оператора
ния теста сти. кружком) (обвести) (обвести)
МЖ // + - Нед + - Нед + - Нед
МЖ // + - Нед + - Нед + - Нед
МЖ // + - Нед + -Нед + - Нед
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне зависимости
от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
РАЗДЕЛ 04
Подпись Руководителя______________________
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
179
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
180
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
МАТЕРИАЛЫ
1. Медицинский халат, маска, очки.
2. Одноразовые перчатки,
3. Одноразовые наконечники до 200 мкл
4. Пробирки одноразовые крышкой 1,5-2,5 мл.
5. Штативы для пробирок
6. Журнал для регистрации забранного материала
7. Направление в лабораторию
8. Емкости для дезинфицирующих средств.
9. Емкости для сброса отходов.
10. Маркер перманентный с тонким стержнем.
11. Марля.
12. Стол, стул.
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов
2. 70° спирт
3. Отрицательные и положительные контрольные образцы.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Дозатор полуавтоматический с переменным объемом.
2. Таймер.
ИНСТРУКЦИИ
1. Убедитесь в том, что пробирки с исследуемыми образцами сывороток промаркированы в
соответствии с данными в направлении (приложение 1).
2. Наденьте перчатки.
3. Освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
4. Продезинфицируйте рабочую поверхность стола.
5. Подготовьте штатив с образцами и все необходимые расходные материалы (наконечники,
контрольные материалы, набор экспресс-тестов).
6. Занесите данные пациента в журнале регистрации экспресс-тестирования (см. Приложение 2).
7. Выньте тесты FIRSTRESPONSE из упаковки.
8. Расположите тесты бок о бок, как показано на Рис. 1
9. В соответствии с Журналом регистрации на пластиковом корпусе каждого теста маркером напишите
его порядковый номер (первая колонка в Журнале регистрации)
10. Последние два теста предназначены для контрольных образцов
11. На корпусе предпоследнего теста пометьте маркером К-
12. На последнем тесте пометьте маркером К+
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
182
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
3. противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
4. Руководство по экспресс-тестированию.
5. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма направления
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Направление №_ ________________________________________________________________
на исследование крови на наличие антител к ВИЧ.
Регистра
Год Дата
п/п ционный Кодкон- Результат ис-
Ф. И. О. пациента Пол рожде- Домашний адрес забора
№ номер лабо- тингента следования
ния крови
ратории
Особые пометки_________________________________________________________________
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 185
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне зависимости
от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
Подпись Руководителя______________________
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 187
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
7. Направление в лабораторию
8. Емкости для дезинфицирующих средств
9. Емкости для твердых и жидких отходов
10. Маркер перманентный с тонким стержнем.
11. Марля.
12. Стол, стул.
13. Дезинфектант для рук
14. Мыло
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов
2. 70° спирт
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Таймер.
ИНСТРУКЦИЯ
1. Подготовить необходимые для проведения исследования расходные материалы: одну тест-полоску,
одну большую и одну маленькую спиртовую салфетку, контейнер с капиллярами, один скарификатор,
флакон с раствором для анализа (Буфер).
2. Вымойте руки с мылом и протрите руки большой спиртовой салфеткой или жидкостью для
дезинфекции рук.
3. Снимите защитную фольгу с тест-полоски, потянув за свободный конец.
4. Найдите на тест-полоске зону внесения крови.
5. Откройте крышку флакона с раствором для анализа.
6. Сбросьте первую каплю раствора из флакона в контейнер для сброса отходов.
7. Извлеките из контейнера с капиллярами новый капилляр и положите его на чистую сухую
поверхность.
8. Возьмите скарификатор.
Внимание! Если руки холодные, то Вам может быть трудно получить необходимую для анализа
каплю крови. Рекомендуется согреть руки в горячей воде или любым другим способом, например
физической разминкой или массажем.
9. Поместите руку ладонью кверху.
10. Обработайте спиртовой салфеткой подушечку безымянного пальца левой руки (для левши – правой
руки).
11. Установите ланцет на подушечке пальца сбоку.
12. Сильным нажатием проколите подушечку пальца.
ВЫПОЛНЯТЬ БЕЗ ПРОМЕДЛЕНИЙ!
1. Нажмите несколько раз пальцами на основание пальца для получения капли крови.
2. Дотроньтесь до капли крови кончиком капилляра. Кровь начнет заполнять капилляр. Старайтесь
держать капилляр горизонтальнее.
3. Заполните трубочку кровью между двумя метками, продолжая нажимать на кончик пальца.
4. Незамедлительно прикоснитесь концом капилляра, заполненного кровью, к зоне внесения крови на
тес- полоске.
5. Держите капилляр вертикально, дождитесь, пока кровь из капилляра не перетечет на тест-полоску.
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 189
6. После того, как кровь впитается в тест-полоску (но не позже 1 минуты), добавьте на зону внесения
крови 1 каплю раствора для анализа.
7. Включите таймер.
8. Инкубация проводится при комнатной температуре согласно времени, указанному в инструкции
9. Определите результат анализа после завершения инкубации по приведенной ниже расшифровке.
10. Зарегистрируйте результат в журнале регистрации (Приложение 1).
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Недействительный
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенном “C”) или она
очень бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”, результат анализа
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ, необходимо провести повторный анализ.
Отрицательный
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“Control”), а в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”,полосы отсутствуют
Результат анализа ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ – признаки ВИЧ инфекции не выявлены.
Положительный или позитивный
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“C”) и видна красная или серовато-красная полоса в любом из окон, обозначенных “Ag” или “Ab”, или
видна в обоих окнах сразу
Результат анализа ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ.
ВНИМАНИЕ результат считается положительным при появлении в окне, обозначенном “Ag” или
“Ab”, полосы любой степени окраски при наличии контрольной полосы “C”.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Национальное руководство по экспресс-тестированию на ВИЧ в Кыргызской Республике. Бишкек,
2012. 63 С.
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
190
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Дата Тест 1 Результат
Наимен-ие теста/ Тест 2 (обве- Подпись
№ ФИО Год рождения Пол Код контингента (обвести круж- Примечание
Постановки теста срок годности. сти) оператора
ком)
МЖ // + - Нед + - Нед
МЖ // + - Нед + - Нед
МЖ // + - Нед + -Нед
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне
зависимости от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
РАЗДЕЛ 04
Подпись Руководителя______________________
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
191
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
192
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
Рис. 2.
17. Положите тест-полоску на стол перед собой - слева должен находиться красный конец тест-полоски,
справа – синий конец.
18. Инкубируйте при комнатной температуре согласно времени, указанному в инструкции (20 минут).
19. Определите результат анализа по окончанию времени инкубации по приведённой ниже расшифровке.
20. Зарегистрируйте полученные результаты в журнале регистрации экспресс-тестирования.
21. Выпишите отрицательный результат ЭТ на бланке направления.
22. Проведите послетестовое консультирование и выдайте результат.
Внимание!: При получении первично положительного результата дальнейшее исследование
проводят согласно утверждённому в стране алгоритму.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результат анализа ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“Control”), а в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”, полосы отсутствуют
Результат анализа ПОЗИТИВНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“C”) и видна красная или серовато-красная полоса в любом из окон, обозначенных “Ag” или “Ab”, или
видна в обоих окнах сразу.
ВНИМАНИЕ результат считается позитивным при появлении в окне, обозначенном “Ag” или “Ab”,
полосы любой степени окраски при наличии контрольной полосы “C”.
Результат анализа НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенном “C”) или она
очень бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”, результат анализа
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ, необходимо провести повторный анализ.
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 195
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
3. противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
4. Руководство по экспресс-тестированию.
5. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1 196
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне зависимости
от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
Подпись Руководителя______________________
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 197
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
4. Направление в лабораторию
5. Емкости для дезинфицирующих средств
6. Емкости для сброса твердых и жидких отходов
7. Маркер перманентный с тонким стержнем.
8. Марля.
9. Стол, стул.
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов
2. 70° спирт
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Таймер.
ИНСТРУКЦИИ
1. До начала процедуры теста наденьте перчатки.
2. Продезинфицируйте и освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
3. Подготовьте необходимое количество экспресс тестов.
4. Проверьте срок годности экспресс-тестов.
5. Занесите данные пациента в журнал регистрации экспресс-тестирования (см. Приложение 1)
6. Установите штатив для многократного использования на ровную поверхность.
7. Раскройте упаковку из фольги, содержащую тестовое устройство и пробирку.
8. Проверьте наличие в упаковке влагопоглотителя. В случае его отсутствия утилизируйте данное
тестовое устройство и возьмите новое.
9. Выньте пробирку c реагентом.
10. Выньте тестовое устройство из упаковки, не касаясь пластинки теста.
11. Промаркируйте пробирку с растворителем и тестовое устройство порядковым номером клиента.
12. Осторожно откройте промаркированную пробирку с растворителем и поместите в штатив.
13. Попросите пациента взять промаркированное тестовое устройство за боковые стороны и пластинкой
теста провести по наружной поверхности дёсен верхней и нижней челюсти.
14. Тестовое устройство с забранным материалом поместите в пробирку с буфером так, чтобы оно
касалось дна.
15. Проверьте, чтобы окно учёта результатов смотрело на Вас.
16. Включите таймер.
17. После завершения инкубации (20 минут) определите результат анализа и занесите полученные
данные в журнал регистрации экспресс-тестирования.
18. Поместите использованное тестовое устройство в емкость для отходов.
19. Обработайте рабочую поверхность стола дезинфицирующим раствором.
20. Перенесите ёмкость с медицинскими отходами в комнату автоклавирования для дальнейшей
утилизации.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результат анализа НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенного “Cl”) или
она очень бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Т ” результат анализа
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ необходимо провести повторный анализ.
РАЗДЕЛ 04 ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ 199
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Национальное руководство по экспресс-тестированию на ВИЧ в Кыргызской Республике. Бишкек,
2012. 63 С.
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1 200
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Наимен-ие Наимен-ие Наимен-ие
Год Код Дата Результат Положит-й Отриц-й
теста 1 теста 2 теста 3 Подпись
№ ФИО рожде- Пол контин- Постановки (обвести ВЛК ВЛК Примечание
Срок год- Срок год- Срок год- оператора
ния гента теста кружком) (обвести) (обвести)
ности. ности ности
ИНСТРУКЦИЯ
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕСТОВ ДETERMINHIV ½ AG/AB
1. Оторвите полоску теста с правой стороны и снимите защитную фольгу с тест-полоски, потянув за
свободный конец (р. 1).
Рис.1
2. Внесите образец на полоску как показано на рисунке 2. Подождите 1 минуту и внесите каплю
буфера “Chasebuffer”
Рис.2
Рис 3.
Контрольная
Антиген
Антитела
Рис 4.
ПОДРАЗДЕЛ 04-1 ИНСТРУКЦИИ ПО ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЮ 203
ИНСТРУКЦИЯ
НАЗВАНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ ПО СЛЮНЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЭКСПРЕСС-ТЕСТОВ
ОRA QUICK HIV RAPID TEST.
1. Установите штатив
2. Раскройте упаковку из фольги, содержащую
тестовое устройство и пробирку.
8. Установите таймер
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
210
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
14. Далее в новом окне выбора программы кнопками плюс (+) или (-) выберите необходимую программу
Формата Westernblot- №1.
15. Нажмите кнопку “RUN” выберите “YES”
16. В окне появится сообщение: Insert TRAY- Press key Нажмите “YES”
17. В окне появится сообщение: Prime All auto - нажмите “YES”
18. В окне выбора программы кнопками плюс (+) или (-) нажмите с первого (1) стрипа “YES”
19. Выберите количество обрабатываемых стрипов кнопками плюс (+) или (-) Уменьшить или увеличить
в зависимости от стрипов и далее подтвердить “YES”
20. В окне Last аspiration подтвердите финальную аспирацию в конце работы -нажмите “YES”
21. В окне Proc. 1 Disp. - подтвердите начало методики с шага № 1-нажмите “YES”
22. Аппарат автоматически заполнит требуемые каналы, и происходит автоматическое смачивание
стрипов.
23. Подождите звукового сигнала.
24. После остановки процесса откройте крышку прибора.
25. Внесите контрольные и исследуемые сыворотки по 20 мкл в дальнее углубление кювета со стрипами
согласно маркировке образцов.
26. Закройте крышку прибора.
27. Нажмите кнопку “Cont”.
Внимание: Дальнейшее продолжение автоматического процесса будет происходить до сигнала
окончания исследования в приборе и не требует вмешательства оператора (3-3,5 часа)
28. После окончания процесса и остановки прибора откройте крышку и осторожно извлеките стрипы
на сухой чистый лист бумаги и расположите по очередности.
29. Высушите стрипы фильтровальной бумагой. Внимание: избегайте прямого попадания солнечных
лучей на стрипы.
30. Высушенные стрипы закрепите прозрачным скотчем на листе бумаге А4 и промаркируйте
соответственно номеру образца.
31. Определите результат анализа согласно вложенной инструкции в наборе и занесите полученные
результаты исследования в журнал.
32. Интерпретируйте результат иммунного блота:
–– Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2
env+gag+pol
–– Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживается антител
ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ или полосы на стрипе, не соответствующие белкам
ВИЧ.
–– Сомнительными (неопределёнными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к
одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ. При получении неопределённого
результата с белковым профилем, включающим белки сердцевины (1 env +gag+ pol)
При получении положительного результата иммунного блота выдайте заключениео наличии в
исследуемом материале антител к ВИЧ.
При получении отрицательного результата анализа в ИБ выдайте заключение об отсутствии антител
к ВИЧ.
При получении сомнительного результата с антителами к белкам сердцевины (gag) в иммунном
блоте с антигенами ВИЧ-1 проведите исследование образца на наличие антигенов ВИЧ-2.
33. Выпишите результат и выдайте полученные результаты в эпидемиологический отдел (см.
Приложение 2). ПРИМЕЧАНИЕ: при получении неопределенного результата исследования
необходимо отправить в эпидемиологический отдел 2 образца, через 3-4 недели и после поступления
РАЗДЕЛ 05 ИММУННЫЙ БЛОТИНГ 213
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1. 214
Форма журнала регистрации и результаты исследования сывороток положительных на ВИЧ, присланных на подтверждение методом
иммунного блотинга.
Начат______________________________________Окончен_____________________________
Наименование лаборатории_ ______________________________________________________
Белки ВИЧ
Фамилия
№ Имя
п/п Отчество, адрес, пол, год
образца
исход. №
Гражданство
Примечание
отправителя
Ферменты
срок годности
ные вин-ные ВИЧ 1/2
Код контингента
POL
Дата проведения ИБ
ENV GAG
Сооб. в эпид отд. ДСП
Регистрационный номер
Регистрационный номер
образца реф лаборатории
Наименование ДТС Серия,
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
РАЗДЕЛ 05 ИММУННЫЙ БЛОТИНГ 215
Приложение 2.
Результаты исследования на ВИЧ методом иммуноблотинга
Учреждение отправитель
Регистрационный номер лаборатории отправителя:
1 забор _____________ от ________20 г. 2 забор _____________ от ________20 г.
Регистрационный номер образца в референс-лаборатории:
1 забор _____________ от ________20 г. 2 забор _____________ от ________20 г.
Ф.И.О._________________________________________________________________________
Пол ______ Год рождения: ___________________
Код контингента_________________________________________________________________
Гражданство____________________________________________________________________
Домашний адрес:________________________________________________________________
№ Название тест-системы,
Дата исследо-
био-про- Выявленные белки Результат
вания № серии, срок годности
бы
Результаты ИФА
Результаты ИБ
Заключение_____________________________________________________________________
Подпись врача-лаборанта_________________________________________________________
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
216
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
1
Дата получения
2
Количество наборов
Серия срок годности
3
ДТС
Количество тестов в
4
наборе
ПРИХОД
Цена за ед.
6
Сумма
7
Источник получения
Подпись материально ответ-
8
ственного лица
9
ДАТА выдачи
Кому, наименование
10
учреждения
11
Количество
РАСХОД
12
Цена за ед.
13
Сумма
14
Подпись получателя
15
Количество
Форма журнала учёта движения диагностических тест-систем
16
Сумма
ОСТАТОК
17
ПРИМЕЧАНИЕ
Приложение 1.
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
218
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 219
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
• Мышь
• Компьютер с программным обеспечением
• Источник питания
• Блок USB
ИНСТРУКЦИИ
Включение прибора:
1. Наденьте средства индивидуальной защиты (СИЗ).
2. Убедитесь, что контейнер для отходов пуст, и проверьте правильность подсоединения трубок к его
крышке (контейнер находится на боковой стороне источника питания)
3. Перед включением прибора проверьте состояние фильтров и ловушек в блоке питания (см. рисунок
1)
4. Откройте крышку корпуса цитометра, потянув ее на себя, затем вверх.
5. Вытяните на себя подставку с контейнером для обжимающей жидкости, проверьте уровень «Isoton»
(обжимающая жидкость) в контейнере, если требуется, долейте в контейнер обжимающей жидкости
до уровня 2,5 см от верха контейнера. (см. рисунок 1)
6. Проверьте уровень «Cleans» (чистящий раствор – синего цвета) в контейнере, если требуется,
долейте контейнер раствором «Cleans» (см. рисунок 1).
Внимание! Если вы пролили какой-либо реагент, немедленно осушите место пролития
ветошью, во избежание выпадения кристаллов солей.
7. Включите блок питания
8. Включите источник питания, проверьте заряженность источника бесперебойного питания, проверьте
светодиод (на задней панели должна гореть лампочка зеленым цветом).
9. Нажмите кнопку ON (включить) на системном блоке компьютера.
10. После загрузки компьютера вы увидите на экране окно входа в программу «Windows». Убедитесь,
что в поле «User Name» (имя пользователя) написано «Administration» (администратор), а поле
«Password» (пароль) остается чистым. Затем нажмите «START» для запуска программного
обеспечения.
11. После того как на экране появится рабочий стол «Windows», найдите иконку «CXP Cytomics» и
двойным щелчком левой мыши активируйте его.
12. После этого включается цитометр и начинается инициализация.
13. Перед выполнением исследований прогрейте систему в течение 40 минут.
14. На экране появится «RXP Cytometer Startup Wizard» (программа запуска программного обеспечения).
15. Подсветите Вашу папку, в которой написано Ваше имя, нажмите «Next» (следующий).
16. Появится список протоколов из вашей папки.
17. Затем нажмите «Finish» (завершение).
18. Откройте дверцу блока питания и проверьте «WATER TRAP» (состояние водоотделителя), «AIR
FILTER» (воздушный фильтр) и «Vacuum FILTER» (вакуумный фильтр) (см. рисунок 2).
19. Удостоверитесь, что в «WATER TRAP» (водоотделителе), и в «Vacuum FILTER» (вакуумном фильтре)
нет жидкости. Если водоотделитель заполнен жидкостью более чем на треть или если фильтры
содержат жидкости, свяжитесь с представителем фирмы «Beckman Coulter» (см. рисунок 2).
20. Проверьте величину «SYStem VACuum» (системный вакуум). Если его значение меньше 17 дюймов
ртутного столба, свяжитесь с представителем фирмы Beckman Coulter (см. рисунок 2).
21. Проверьте в «SYStem PRESSure» (давление в системе). Если оно не попадает в диапазон 30 + 2 PSI-
фунт на квадратный дюйм, выполните следующий действие:
–– потяните ручку «PRESSure ADJuser» (регулятор давления) на себя;
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 221
Рисунок 1.
1. Ящик с контейнерами обжимающей жидкости (3) и промывочного раствора (2). Шланги (1) и
штекеры (на задней стенке ящика) должны быть подсоединены.
2. Включить переключатель питания ON/OFF на блоке питания цитометра.
3. Включить компьютер.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
222
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
4
6
7
3
Рисунок 2.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 223
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
14. Через несколько секунд нажимайте на иконку промывка) , «Prime». Прибор начнет промывку
линии тока образца и проточную ячейку обжимающей жидкостью, для удаления засорения и
пузырьков.
15. Дождитесь сообщения в панели статуса ожидание образца - «Awaiting Sample»..
16. Когда в панель статуса цитометра появится (в нижней части экрана) ожидание образца - «Awaiting
Sample», нажимайте на иконку новый рабочий список -«Newworclist», чтобы очистит панель
17. Если очистка проведена не полная (много событий), то промывку повторите несколько раз, для этого
заново выберите протокол «cleans water pro» (протокол для промывки), дальше повторите действия
по пунктам 9-16.
18. Дождитесь сообщения в панели статуса ожидание образца- «Awaiting Sample».
19. После завершения промывки уберите пробирки из карусели.
20. Прибор готов к проведению анализа.
Промывка прибора после проведения анализа.
21. Проведение автоматической промывки аппарата проводится перед выключением прибора.
22. Возьмите 4 шт. пластмассовых пробирки.
23. Добавьте в одну пробирку 1/3 объема чистящего раствора – раствор синего цвета - «Cleans»
24. Во 2, 3, 4 пробирки добавьте 1/3 объема дистиллированной воды.
25. Выберите панель промывка панели- «Cleans pnl» и перетащите значок вниз на панель диспетчера
37. Нажмите на иконку – «Idle mode» -режим бездействия. В этом режиме происходит сброс
давления в жидкостной системе. В режиме бездействия невозможны измерения, но только в нем
можно провести промывку вакуумных линий прибора (Нажмите только 1 раз).
38. Нажмите иконку с изображением адаптера, для запуска процесса промывки «Auto Cleanse»
39. Когда процесс закончится, снова 1 раз нажмите иконку – «Idle mode»-режим бездействия.
40. Надпись Cleanse cycle in progress в строке состояния цитометра показывает проведение цикла
очистки.
41. Как только появилась надпись ожидание образца - «Awaiting Sample») процесс завершен.
42. После завершения процесса промывки уберите адаптеры из карусели.
ВНИМАНИЕ: Если на аппарате не проводятся исследования долгое время, цикл промывки
необходимо выполнять ежедневно.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
226
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
43. Выключить прибор (см. СОП № 06-01 Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics FC 500»
Beckman Coulter)
44. В конце рабочего дня обработайте рабочие поверхности стола и цитометра 700 спиртом.
45. Слив отходов в контейнере обеззараживается 3% лизоформином. (Контейнер находится на боковой
стороне источника питания).
Помните о необходимости:
1. Один раз в неделю:
• Чистить «AIR FILTER» (воздушные фильтры).
• Промывать пробоотборник и головку пробоотборника MCL 50% р-ром этилового спирта.
2. Один раз в месяц:
• Промывать контейнер для обжимающей жидкости «Isoton» дезинфицирующим средством.
• Промывать контейнер для «чистящего раствора Cleans» дезинфицирующим средством.
3. Ежедневно после исследования:
• Сливать отходы из контейнера, а контейнер обеззараживать 3% раствором лизоформина.
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Руководство оператора Cytomics FC 500 «Beckman Coulter»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 227
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД- синдром приобретенного иммунного дефицита
СД – кластер дифференцировки
СИЗ – средства индивидуальной защиты
мкл - микролитр
НАЗНАЧЕНИЕ
Определение иммунного статуса ВИЧ инфицированных лиц для назначения и оценки эффективности
антиретровирусной терапии методом проточной цитофлюориметрии. Проточная цитометрия позволяет
измерять интенсивность флуоресценции и рассеяния света от частиц, проходящих по одной в потоке
жидкости через измерительную ячейку. Поскольку частицы (чаще всего клетки) анализируются по
одной, в результате измерения имеется не только среднее значение параметра, но и его распределение в
популяции.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Должны соблюдаться меры по технике безопасности при работе с электроприборами. Внимание!
Оборудование должно быть заземлено.
2. Цитофлюориметр должен быть подключен к отдельной линии электросети, запрещается
подключение прибора к электросети через переходники и удлинители;
3. В помещении, где установлен цитофлюориметр, не допускается подключение бытового оборудования
с большой мощностью, создающего помехи в электросети;
4. В помещении должен быть установлен кондиционер для избежания перегрева прибора.
5. Соблюдайте правила личной и коллективной безопасности на рабочем месте при работе с
инфицированным биоматериалом.
6. Все медицинские работники, работающие с кровью, обязаны знать, что нужно делать в аварийной
ситуации (см. «Постконтактная профилактика ВИЧ-инфекции (ПКП)» последней редакции).
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторий
2. Врач-лаборант
3. Фельдшер-лаборант
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
228
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
МАТЕРИАЛЫ
1. СИЗ
2. Биоматериал пациентов
3. Штативы для пробирки.
4. Одноразовые пластиковые пробирки «Cytomics FC 500».
5. Одноразовые наконечники
6. Перманентный маркер
7. Рабочий стол
8. Емкость для обеззараживания расходных материалов
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Система проточной цитометрии «Cytomics FC 500» (карусельный загрузчик образцов, карусель,
рабочая станция, клавиатура, мышь, компьютер, источник питания, блок USB)
2. Одноканальный дозатор
3. Прибор «Q PREP» - для подготовки проб на исследование.
4. Холодильник бытовой.
5. Бактерицидная лампа.
ИНСТРУМЕНТЫ
Таймер или настольные часы.
ПОСУДА
Мерный стакан на 1 литр для приготовления «Cleans» -чистящий раствор – синего цвета.
РЕАКТИВЫ
1. Набор моноклональных антител СД3/СД4, СД3/СД8
2. «Isoton» -обжимающая жидкость – белого цвета
3. «Cleans» -чистящий раствор - синего цвета
4. «ImmunoPrep Reagents System» - лизирующий раствор - 3 флакона
5. Дистиллированная вода
ИНСТРУКЦИИ
1. Включите прибор на панели (см. СОП № 06-01 Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics
FC 500» Beckman Coulter)
2. Убедитесь в том, что процедура включения прибора выполнена
3. Удостоверитесь в том, что перед проведением исследований промывка аппарата выполнена
4. Убедитесь в том, что процедура контроль качества выполнена
5. Достаньте из холодильника реагенты и образцы крови, оставьте при комнатной температуре +180С,
+250С на 30 минут.
6. Проверьте кровь на гемолиз, однородность и отсутствие сгустков, инородных частиц.
7. Перемешайте кровь, осторожно переворачивая каждую пробирку 6-8 раз.
8. Выставьте чистые пробирки от прибора в карусель в 2 ряда для СД4 и СД8.
9. Промаркируйте пробирки с указанием номера образца и вида исследуемого маркера Например: 1
пробирка -1/СД4, вторая пробирка -1/СД8 дальше 2/СД4, 2/СД8 и т.д.
10. В первую пробирку внесите 100 мкл исследуемой крови, и другим наконечником добавьте 20 мкл
моноклональных антител (краситель) СД3/CD4;
11. Быстро перемешайте пробирку с окрашенной кровью 3-5 секунд в аппарате «Q PREP».
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 229
12. Во вторую пробирку внесите 100 мкл исследуемой крови и другим наконечником добавьте 20 мкл
моноклональных антител (краситель) СД3/CD8;
13. Поставьте пробирки в темное место на 20 минут при комнатной температуре для окрашивания
клеток СД4/СД8 флюорохромными красителями.
14. Проведите лизис окрашенных образцов крови в режиме 35 сек. на аппарате «Q PREP».
15. Затем через 30 минут добавьте 100 мкл. реагента «Flow Count» - флюоросферы определенной
концентрации для подсчета клеток в каждую пробирку.
16. В комплект проточного цитометра «Cytomics FC 500» входят две карусели, каждая с 32 позициями
для пробирок (карусель – идентификационный № 1 для промывки аппарата, карусель –
идентификационный № 2 для исследуемого образца).
17. Откройте крышку MCL (многопробирочный карусельный загрузчик)
18. Поставьте пробирки с готовыми образцами в карусель (карусель для образца).
19. Вставьте карусель в MCL (многопробирочный карусельный загрузчик образцов)
20. Выровняйте ее в соответствии с поворотной платформой и установите на MCL (многопробирочный
карусельный загрузчик). Карусель находится в исходной позиции, когда ручка указывает назад.
Внимание! Нельзя поворачивать карусель вручную по часовой или против часовой стрелке.
21. Закройте крышку «MCL» (многопробирочный карусельный загрузчик).
22. Выберите панель диспетчера сбора данных или функцию «DRAG AND DROP» (перетащить и
оставить - это ускоренный метод открывания) и перетащите вниз, чтобы выбрать требующийся
«Worklist» (рабочий список), «Panel» (панель), «Protocol» (протокол).
23. В окне диспетчера сбора данных введите в поле «Carousel №» (№ карусели), например:
идентификационный номер карусель 2.
24. В окне сбора диспетчера данных введите в поле «Location» (положение пробирки в карусели)
25. В окне диспетчера сбора данных в поле «Sample ID» (идентификаторы образцов) введите
идентификационный номер образца. Карусель может вместить максимум 32 образца.
26. Выберите панель «Report generator» (доносить в генератор), заполните данные пациента: ID образца
должен совпадать с ID образца в панели задач, дату и время забора, ФИО.
27. Затем нажимайте на кнопку «Save» (сохранить), чтобы сохранить данные пациента.
28. В панели управления (вверху экрана) нажмите на иконку «Start» (начать) .
29. Происходит регистрация оптических характеристик клеток в проточной кювете (см. рисунок 1)
30. Поставьте галочку в поле «Setup Mode» (режим настройки) на вкладке Acg. Setup (настройка
считывания данных) окна Cytometer control (средства управления цитометром).
31. Для слежения за процессом считывания данных обратите внимание на счетчик в панели состояния,
показывающий количество событий в секунду (внизу экрана).
32. Просмотрите все гистограммы, в проточной кювете с помощью обжимающей жидкости построятся
клетки и происходит выделение зон (гейты), проверьте правильность сбора лимфоцитов на
гистограмме, анализ распределения маркеров (см. рисунки 1,2)
33. Убрать галочку из поля «Setup Mode» (режим настройки).
34. Автоматически происходит счет и выдача результатов (через принтер).
35. По окончания процесса дождитесь сообщения «Awaiting Sample» (ожидание образца).
Внимание! Риск получения травмы. Не отрывайте крышку MCL (многопробирочного
карусельного загрузчика) во время движения карусели. Дождитесь, пока карусель остановится.
36. Уберите все пробирки из карусели.
37. Очистить рабочий лист в окне «Acquisition Manager» (диспетчера сбора данных).
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
230
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
38. После тестирования производите полную промывку аппарата и выключите аппарат. (см. СОП №
06-01 Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics FC 500» Beckman Coulter, СОП № 06-02
Промывка цитофлюориметра «Cytomics FC 500»).
SSC CD4
CD3
FSC
Рисунок 2. Анализ и отображение данных
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 231
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 233
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
7. Потом еще раз в пробирку налейте 1600 мкл (по 800 мкл 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.)
«Sheath Fluid for Flow» (промывочный раствор) и поставьте в порт аппарата до щелчка.
8. Нажмите кнопку «Start».
9. Через 10 секунд нажимаем «Cancel» (приостановка) и оставляем пробирку с промывочным
раствором в порте аппарата до следующего дня работы.
10. Во избежание высыхания электродов в пробирке должен быть промывочный раствор.
Еженедельная промывка аппарата:
1. Наливайте в пробирку 1600 мкл. (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Decontamination
Solution» (обеззараживающее средство - синего цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
2. Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
3. Наливайте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Cleaning
Solution» (моющий раствор - зеленого цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
4. Нажмите на кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки;
5. Наливайте в пробирку 1600 мкл. (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath Fluid for
Flow» (промывочный раствор) и ставим в порт аппарата до щелчка
6. Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
7. Еще раз в пробирку наливаем 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath
Fluid for Flow» (промывочный раствор) и ставим в порт аппарата до щелчка.
8. Нажмите кнопку «Start» (начать) и считаем до 10.
9. Через 10 секунд нажимаем «Cancel» (приостановка) и оставляем пробирку с промывочным
раствором в прикреплённом виде к порту аппарата до следующего дня работы.
10. Проследите, чтобы в пробирке осталась жидкость - во избежание высыхания электродов.
Ежемесячная промывка аппарата:
1. В пробирку наливаем 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Hypochlonte
Solution» (дезинфицирующее средство) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
2. Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
3. Наливайте в пробирку 1600 мкл. (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Decontamination
Solution» (обеззараживающее средство - синего цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
4. Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
5. Наливайте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Cleaning
Solution» (моющий раствор - зеленого цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
6. Нажмите на кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки;
7. Затем наливайте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath
Fluid for Flow» (промывочный раствор) и ставьте в порт аппарата до щелчка, для того что бы удалить
остатков моющего раствора.
8. Нажмите кнопку «Start» (начать), подождите пока процедуры измерения и последующей чистки
закончатся автоматически.
9. Еще раз в пробирку наливаем 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath
Fluid for Flow» (промывочный раствор) и ставим в порт аппарата до щелчка.
10. Нажмите кнопку «Start» и считаем до 10 секунд.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
236
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 237
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
МАТЕРИАЛЫ
1. СИЗ
2. Биоматериал (цельная кровь) пациента с ЭДТА
3. Штатив для пробирок
4. Одноразовые пластмассовые, нестерильные пробирки от прибора «CyFlow® Counter» Partec
5. Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов объемом на 20-200 мкл, 1000 мкл.
6. Перманентный маркер
7. Лабораторный рабочий стол
8. Емкость для обеззараживания расходных материалов
9. Спирт 700.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Проточный цитофлюрометр «Cytlow Counter», Partec.
2. Автоматические одноканальные дозаторы на 200 мкл и 1000 мкл.
3. Холодильник бытовой.
4. Бактерицидная лампа.
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Одноканальные дозаторы 20-200 мкл, 1000 мкл.
2. Настольные часы или таймер
ПОСУДА
Мерный цилиндр на 1 л для приготовления «Sheath Fluid for Flow» (промывочный раствор)
обволакивающей жидкости
РЕАКТИВЫ
Набор реактивов «PARTEC».
ИНСТРУКЦИИ
1. Каждый раз перед работой наполните бутыль SHEATH с «Sheath Fluid for Flow» (промывочный/
обволакивающей жидкостью) до 900 мл.
2. Трубку с жёлтым фильтром встряхните, чтобы высвободить пузырьки воздуха под фильтром и
плотно закрывайте крышку.
3. Бутыль WASTE (для слива) должна быть пустой и крышка плотно закрыта, слив не должен
превышать объем больше половины бутыли. Включите аппарата «Cytlow Counter» (cм. СОП № 06-
04 Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
4. Перед проведением анализа промойте аппарата (cм. СОП № 06-05 Правила промывки проточного
цитометра «CyFlow® Counter» Partec).
5. Убедитесь в том, что процедура включения прибора выполнена.
6. Убедитесь в том, что процедура промывка перед исследованием прибора выполнена.
7. Удостоверьтесь в том, что процедура ежедневного контроля качества выполнена
Определение абсолютного подсчета СД4 клеток (кл/мкл) у взрослых.
Подготовка проб и проведение исследования:
1. В пробирку от прибора внесите 20 мкл. цельной крови и 20 мкл моноклональных антител-. СД4
mAb PE, аккуратно перемешайте.
2. Инкубируйте образцы 15 минут при комнатной температуре в отсутствие солнечного света.
3. Через каждые 5 мин. в течение 15 мин. встряхиваем пробирку.
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 239
4. Через 15 минут добавьте 800 мкл. «Lyses buffer» (лизирующего буфера), встряхните или аккуратно
перемешайте на вортексе.
5. Вставьте пробирку с образцом в порт аппарата.
6. Выберите программу для проведения исследования: нажмите последовательно Setting (настройки)
→ Load Script (загрузить программу) → CD4 → Select (выбрать) и нажимаем на “START” (начать)
измерение образца крови.
7. Аппарат выполняет процесс измерения, ход которого отображается в нижней части экрана.
8. Для сохранения данных образца нажимайте на желтую папку, которая находится в левом углу
экрана;
9. На экране появляется клавиатура, где можно написать фамилию пациента или регистрационный
лабораторный номер образца.
10. После введения данных образца пациента нажимаем на Еnter (ввести) → Save (сохранить), данные
сохраняются.
11. Для получения результата в распечатанном виде нажимайте на черную папку, которая находится в
левом углу экрана.
12. Извлекаем пробирку с образцом и вставляем следующий подготовленный образец.
Определение процентного соотношения СД4, абсолютного подсчета СД4 клеток (кл/мкл) и
количества лимфоцитов у детей.
Подготовка проб и проведение исследования:
1. В пробирку (от прибора) внесите 20 мкл. цельной крови, 20 мкл. моноклинальных антител СД4
mAb PE, и 20 мкл. моноклональных антител СД45 mAb PE.
2. Затем пробирку слегка перемешайте;
3. Инкубируйте образцы 15 минут при комнатной температуре в отсутствие солнечного света
4. В течение 15 мин. встряхивайте пробирку с интервалом в 5 мин.
5. Через 15 минут добавьте 400 мкл. «Lyses buffer» Buffer № 1 (лизирующий буфера № 1) и 400
мкл. Lyses buffer» Buffer № 2 (лизирующий буфера № 2) и встряхните пробирку или аккуратно
перемешайте на вортексе.
6. Вставьте пробирку с образцом в порт аппарата.
7. Выберите программу для проведения исследования, для чего нажимаем последовательно Setting
(настройки) →Load Script (загрузка программы) →CD4 percent (%) → Select (выбрать) и нажимаем
на “START” (начать) для измерения образца.
8. Аппарат выполняет процесс измерения, ход которого отображается в нижней части экрана;
9. Для сохранения данных образца нажимаем на желтую папку, которая находится в левом углу экрана;
10. На экране появляется клавиатура, где можно написать фамилию пациента или регистрационный
лабораторный номер образца;
11. После введения данных образца нажимаем на Еnter (ввести) → Save (сохранить), данные
сохраняются;
12. Для получения результата в распечатанном виде нажимаем на черную папку, которая находится в
левом углу экрана.
13. Извлеките пробирку с отработанным образцом и вставьте следующий подготовленный к
исследованию образец;
14. После завершения исследований проводите промывку прибора (см. СОП № 06-05 Правила промывки
проточного цитометра «CyFlow® Counter» Partec).
15. Выключите аппарат (см. СОП № 06-04 Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка
цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
240
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Руководство оператора «CyFlow® Counter» Partec
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 06 ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ 241
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
Таблица 1.
Журнал регистрации поступающего биоматериала на ПЦ и результатов определения маркеров
СД4/СД8
Учреждение Регистраци- Дата достав- Дата По- Результаты исследования
№ Ф.И.О.Дата Приме-
отправитель онный лаб. Пол ки биомате- становки
п/п рождения. СД 4 СД 8 ИРИ АЧЛ чание
биоматериала № образца риала анализа
Таблица 2
Направление и результаты определения процентного и абсолютного числа Т лимфоцитов
(хелперов CD4 (+) и киллеров / Цитотоксические Т - клетки CD8 (+)) методом проточной
цитометрии.
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Ф.И.О. пациента_________________________________________________________________
Дата рождения_________ пол_______________ Домашний адрес_________________________
_______________________________________________________________________________
Дата и время забора биоматериала_ ________________________________________________
Дата и время доставки в лаборатории_______________________________________________
Особые пометки_________________________________________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ _______________________________________
Ф.И.О. лица, принявшего материал_________________________________________________
Регистрационный лабораторный номер образца_ _____________________________________
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
244
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 245
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПЦР - полимеразная цепная реакция
НК - нуклеиновая кислота
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
СОП – стандартная операционная процедура
НАЗНАЧЕНИЕ
Определяет требования к лабораторному оборудованию ПЦР лаборатории
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лаборатории
2. Врач-лаборант
3. Метролог (в случае отсутствия метролога назначается ответственное лицо)
ИНСТРУКЦИИ
1. Комплект лабораторного оборудования определяется с учетом используемых наборов реагентов
для выделения НК, амплификации и детекции результатов исследований.
2. Помещение для каждого этапа проведения ПЦР обеспечивается набором лабораторного
оборудования (см. Приложение 1).
3. Обеспечьте техническую исправность приборов, оборудования и средств измерения, используемых
в работе лаборатории, а также наличие технических паспортов и рабочих инструкций по
эксплуатации.
4. Проводится регулярный метрологический контроль средств измерения согласно утвержденному
графику.
5. Используемые приборы должны соответствовать нормам безопасности и электромагнитной
совместимости.
6. Для проведения исследования установите приборы в рабочих помещениях в соответствии с
поточностью движения материала, исключающей возможность перекрестной контаминации
исходного материала, выделенных НК и продуктов ПЦР.
7. Дозаторы, рабочая поверхность и наружная поверхность корпуса приборов должны быть
устойчивы к действию дезинфицирующих средств и ультрафиолетового излучения.
8. Для каждого этапа проведения ПЦР-исследований предусмотрите наличие холодильников:
–– в комнате приема материала от +4°С до +8°С и -20°С для хранения исследуемых проб;
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
246
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
–– в комнате выделения НК холодильник от +4 до +8°С и -20°С для хранения набора выделения НК;
–– в комнате ПЦР-амплификации от +4 до +8°С и -20 °С – для хранения наборов обратной
транскрипции и амплификации НК;
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. Методические рекомендации по организации работы
лабораторий, использующих метод ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Перечень оборудования ПЦР-лаборатории по этапам исследования
Для обработки материала и выделения ДНК
2. Бокс биологической безопасности 2 класса
3. Центрифуга
4. Центрифуга-вортекс
5. Микроцентрифуга
6. Твердотельный термостат с диапазоном рабочих температур от +25°С до +100°С;
7. Холодильник с камерами, поддерживающими температуру
8. от +2°С до +8° С и морозильник - 20°С
9. Вакуумный отсасыватель
Перечень расходного материала ПЦР-лаборатории по этапам исследования
Для обработки материала и выделения ДНК
1. Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл;
2. Отдельный набор дозаторов переменного объема (объёмом 10-200 мкл, 20-50 мкл, 100-200 мкл,100-
1000 мкл).
3. Одноразовые полипропиленовые микроцентрифужные пробирки с завинчивающимися или плотно
закрывающимися крышками объемом 1,5 мл;
4. Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с аэрозольным барьером до 200 и до
1 000 мкл.
5. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл;
6. Штативы для наконечников, микропробирок объемом 1,5 мл;
7. Емкость с дезинфицирующим раствором.
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 247
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СОП - стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека типа 1
СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФИО – фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Определение правил приема и хранения ПЦР тест-систем для обеспечения их качества.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Реагенты, которые хранятся от -200С до -700С, должны транспортироваться в сухом льду.
2. При получении тестов их необходимо разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.
3. Прием тест-систем должен проводиться в отдельном помещении.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врачи-лаборанты
МАТЕРИАЛ
1. Халат и одноразовые резиновые перчатки без талька
2. Перманентный маркер.
ИНСТРУКЦИЯ
1. Оденьте халат и перчатки.
2. Проверьте внешний вид наборов и целостность упаковки.
3. Проверьте соответствие всех документов, прилагаемых к тест-системе. Тест-система должна быть
зарегистрирована в стране. Какие документы должны прилагаться к тест-системе:
–– Паспорт качества
–– Инструкция по применению
–– Срок годности набора и/или каждого из реагентов
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 249
Важно! Обязательно сравните каталожный номер с тем, который заказывали, т.к. у производителя
по другому каталожному номеру даже при таком же названии теста прибор может быть другой, с
каналами детекции, которых нет в Вашем приборе.
4. Что необходимо предпринимать в случае выявленных нарушений:
–– Информируйте руководство лаборатории о выявленных нарушениях поставки
–– Тест-система в работе не используется до выяснения причин нарушения стандартных условий
поставок и/или ее замены
5. Тест-система не принимается в случае:
–– Расхождения паспортных данных с содержанием этикеток на коробке
–– Неполной комплектации, отличной от указанной в паспорте
–– Нарушения целостности реагентов или их внешнего вида (видимый бактериальный пророст)
–– Нарушения условий транспортировки (в некоторых тест-системах есть индикаторы, которые при
нарушении температуры меняют цвет).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
250
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
7. Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после
завершения работ необходимо облучать ультрафиолетовым светом.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборанты
ЭТАП ЭКСТРАКЦИИ РНК (ПЦР ЗОНА 1)
1. Халат и одноразовые резиновые перчатки, предназначенные только для комнаты «ПЦР
пробоподготовки»
2. Емкость для сброса наконечников с пакетом для автоклавирования
3. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объемом
на 1,5 мл (Эппендорф)
4. Штатив для пробирок 1,5 мл
5. Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с фильтром от 10 до 1000 мкл.
6. Перманентный маркер.
ЭТАП ПЦР АМПЛИФИКАЦИИ (ПЦР ЗОНА 2)
1. Халат и одноразовые резиновые перчатки, предназначенные только для комнаты «ПЦР Мастер-
Микс»
2. Емкость для сброса наконечников с пакетом для автоклавирования
3. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки на 0,2 мл
и 1,5 мл (типа Эппендорф).
4. Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с аэрозольным барьером от 10 до 1000
мкл.
5. Штатив для пробирок от 0,2 до 1,5 мл.
6. Маркер перманентный.
ОБОРУДОВАНИЕ
Этап экстракции ДНК (ПЦР 1 ЗОНА):
1. Ламинарный шкаф
2. Микроцентрифуга до 16 тыс. оборотов в минуту
3. Вортекс
4. Набор автоматических пипеток переменного объема на 10 мкл, 50 мкл, 200 мкл, 1000 мкл
5. Холодильник +2 ОС +8ОС
6. Морозильник на -20 ОС или -70ОС
7. Термоблок
8. Отсасыватель медицинский или хирургический
Этап ПЦР амплификации (ПЦР 2 ЗОНА)
1. ПЦР настольный бокс с бактерицидной лампой
2. «Микроцентрифуга» до 16 тыс. оборотов в минуту
3. Вортекс
4. Набор автоматических дозаторов переменным объемом на 10 мкл, 50 мкл, 200 мкл
5. Морозильник на -70ОС
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
252
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
10. Если для проведения анализа используется цельная кровь, то подготовьте клинический материал
при экстракции ДНК из крови.
11. Возьмите пробирки на 1,5 мл. с завинчивающейся крышкой для обработки необходимого количества
проб и контролей, промаркируйте. В пробирки, предназначенные для клинических проб, внесите
отдельными наконечниками по 1,0 мл (1000 мкл.) гемолитика и по 0,25 мл. (250 мкл.) исследуемой
цельной крови соответственно маркировке.
12. Закройте пробирки и аккуратно перемешайте содержимое пробирки на вортексе. Если исследуется
кровь новорожденных детей, то к 1,0 мл. гемолитика добавьте 0,1 мл. (100 мкл.) крови.
13. Оставьте пробирки при комнатной температуре на 3 мин, затем еще раз аккуратно перемешайте
содержимое пробирок на вортексе и оставьте на 3 мин.
14. Отцентрифугируйте пробирки на микроцентрифуге при 8 тыс. об/мин в течение 2 мин. Надосадочную
жидкость уберите с помощью вакуумного отсасывателя, не задевая осадка.
15. К осадку добавьте 0,5 мл. гемолитика, перемешайте на вортексе и оставьте на 3 мин.
Отцентрифугируйте пробирки на микроцентрифуге при 8 тыс. об/мин в течение 2 мин. Надосадочную
жидкость уберите с помощью вакуумного отсасывателя, не задевая осадка.
16. Повторите отмывку лейкоцитов гемолитиком. После последней отмывки осадок клеток должен
быть белым, допускается наличие только небольшого налета розового цвета над осадком (остатки
разрушенных эритроцитов).
Полученный осадок лейкоцитов немедленно лизируйте или замораживайте при температуре
не выше -16 0С на две недели, а при температуре не выше -70 0 С на длительное время.
Лизис клинического материала
1. В каждую пробирку к осадку лейкоцитов добавьте по 300 мкл лизирующего раствора, перемешайте
на вортексе до полного суспендирования клеток.
2. В отдельную пробирку, предназначенную для положительного контроля, добавьте 300 мкл
лизирующего раствора, 95 мкл ОКО и 5 мкл ПКО ДНК ВИЧ-1 и ДНК человека.
3. В отдельную пробирку, предназначенную для отрицательного контроля, добавьте 300 мкл
лизирующего раствора и 5 мкл ТЕ буфера для элюции ДНК.
4. Ресуспендируйте сорбент на вортексе и добавьте в каждую пробирку отдельным наконечником по
25 мкл. сорбента.
5. Перемешайте на вортексе и оставьте пробирки на 10 мин. при комнатной температуре, тщательно
перемешивая содержимое пробирок на вортексе каждые 2 мин.
6. Осадите сорбент в пробирках центрифугированием при 5 тыс. об/мин на микроцентрифуге в течение
30 сек.
7. Удалите над осадочную жидкость используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для
каждой пробы.
8. Добавьте в пробирки по 300 мкл раствора для отмывки 1. Перемешайте на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента. Повторите пункты 6 и 7.
9. Добавьте в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 2. Перемешайте на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента. Повторите пункты 6 и 7.
10. Повторите пункт 9.
11. Поместите пробирки в термостат на 10 мин при температуре 65° С с открытыми крышками для
подсушивания сорбента.
12. Добавьте 50 мкл ТЕ – буфера для элюции ДНК. Перемешайте на вортексе.
13. Прогрейте в термостате при температуре +65°С 5 мин.
14. Перемешайте на вортексе и осадите сорбент на центрифуге при максимальных оборотах в течение
1 мин.
15. Обработайте ламинарный шкаф
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
254
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
3. В меню «Устранение выбросов «Устранение выбросов» установите значение порог/фона – 10% для
канала FAM/Green и 5% для канала JOE/Yellow.
Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой
флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет наличие
(или отсутствие) для данной пробы ДНК.
Интерпретация результатов
ДНК ВИЧ-1 обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов (см.табл.1) по каналу
для флуорофора JOE/Yellow (ДНК ВИЧ-1) определено значение порового цикла СТ, не превышающее
указанное значение, и в таблице результатов по каналу для флуорофора FAM/Green (ВКО) определено
значение порового цикла СТ, не превышающее указанное граничное значение (граничное значение
указывается во вкладыше к набору реагентов).
ДНК ВИЧ-1 не обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов по каналу для
флуорофора JOE/Yellow (ДНК ВИЧ-1) значение порового цикла СТ не определено или превышает
указанное граничное значение, а в таблице результатов по каналу для флуорофора FAM/Green (ВКО)
определено значение порового цикла СТ, не превышающее указанное граничное значение.
Результат анализа невалидный, если для данной пробы в таблице результатов по каналу для
флуорофора FAM/Green (ВКО) значение порового цикла СТ не определено или превышает указанное
граничное значение.
Результаты не подлежат учету:
1. Если в пробе с положительным контролем экстракции ДНК (ПК) отсутствует положительный
сигнал по какому-либо из каналов детекции. Возможная причина: ошибка при экстракции ДНК.
Необходимо провести экстракцию еще раз.
2. Если в пробе с положительным контролем ПЦР (К+) отсутствует положительный сигнал по какому-
либо из каналов детекции. Необходимо провести ПЦР еще раз для всех образцов. Значение Сt в
таблице по каналу ВКО более 28, требуется перестановка данной пробы, начиная с первого этапа
анализа.
3. Если для данного образца не определено значение порового цикла СТ по каналу для канала ВКО
или получено значение СТ, превышающее указанное значение. Требуется повторное проведение
анализа для данного образца, начиная с этапа экстракции.
4. Появление любого значения Сt в таблице результатов для отрицательного контроля выделения и
ПЦР свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты
анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех проб.
После интерпретации выписываем результаты.
Таблица1.
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Значение порового цикла, Сt
Контролируемый этап
Контроль По каналу для флуорофора JOE/ По каналу для флуорофора FAM/
ПЦР- исследования
Yellow Green
Значение отсутствует или определено
ОК Экстракция ДНК Значение отсутствует
значение меньше граничного
Определено значение меньше Определено значение меньше
ПК Экстракция ДНК
граничного граничного
К- ПЦР Значение отсутствует Значение отсутствует
Определено значение меньше Определено значение меньше
К+ ПЦР
граничного граничного
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
256
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Инструкция по применению набора реагентов для выявления провирусной ДНК вируса
иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в клиническом материале методом ПЦР в режиме
реального времени «Амплисенс ДНК-ВИЧ -FRT»
2. “ПЦР в реальном времени” под редакцией Ребрикова Д.В., Москва. 2009 г.
3. Приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 257
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
8. Ламинарные шкафы, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после
завершения работ необходимо облучать ультрафиолетовым светом.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
МАТЕРИАЛ
Экстракция РНК (ПЦР 1)
1. Халат и одноразовые перчатки, предназначенные только для комнаты «ПЦР проб подготовки»
2. Емкость для сброса наконечников с пакетом для автоклавирования
3. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объемом
на 1,5 мл (типа Эппендорф)
4. Штатив для пробирок 1,5 мл
5. Пробирки конические, центрифужные объемом 1,5 мл, стерильные
6. Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с фильтром от 10 до 1000 мкл.
7. Маркер пергаментный.
ОБОРУДОВАНИЕ
Экстракция РНК (ПЦР 1):
1. Ламинарный шкаф
2. Микроцентрифуга до 16 тыс. оборотов в минуту
3. Вортекс
4. Набор дозаторов переменного объема на 10 мкл, 50 мкл, 200 мкл, 1000 мкл
5. Холодильник +2 ОС +8ОС
6. Морозильник на - 20ОС или -70ОС
7. Термоблок
РЕАКТИВЫ
1. Комплект реагентов «РИБО-преп» вариант-50 для выделения РНК/ДНК из клинического материала
из 50 проб, включая контроли.
2. Комплект реагентов «РИБО-сорб-12» для выделения РНК/ДНК из клинического материала.
3. Спирт 70% (для обработки, сброски материала при работе)
4. 0,2% раствор ДП-2Т или аналог
ТРЕБОВАНИЕ К ПРОЦЕДУРЕ
Безопасность
1. При работе в лаборатории всегда носите специальную одежду или халаты.
Важно! Носить защитную одежду вне лабораторных ПЦР-помещений запрещается.
Вы должны одевать перчатки:
–– при контакте с любым биоматериалом
–– при работе в серологических боксах
–– при контакте с любым потенциально контаминированным предметом или материалом.
2. Вы должны снимать перчатки:
–– вне пределов комнат боксовых помещений
–– при контакте с дверными ручками
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 259
19. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1-2 мин. при 12 000 g (например, 13400
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
20. Осторожно отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
21. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть крышки, осторожно
промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
22. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1-2 мин. при 12 000 g (например, 13400
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
23. Осторожно отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник для каждой пробы.
24. Поместить пробирки в термостат при температуре 65°С на 5 мин с открытыми крышками для
подсушивания сорбента.
25. Добавить в пробирки по 50 мкл буфера. Перемешать на вортексе.
26. Поместить в термостат при температуре 65°С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе.
27. Центрифугировать пробирки в течение 1 мин. при 12 000 g (например, 13400 об/мин центрифуги
MiniSpin, Eppendorf).
28. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК.
29. Обработать внутри ламинарного шкафа
30. Включить УФ-лампу в шкафу
ДНК-пробы не рекомендуется хранить дольше 30 мин при температуре от +2°С до +8°С. Для
длительного хранения препарат необходимо хранить при температуре не выше - 16°С в течение
1 месяца или выше -70°С в течение года.
Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-сорб-12»
1. Отобрать необходимые количество одноразовых пробирок на 1,5 мл. (Включая отрицательный и
положительный контроли экстракции).
2. На дно каждой пробирки внести по 10 мкл. ВКО ВИЧ-М- FRT.
3. В каждую пробирку добавить по 450 мкл. раствора для лизиса, перемешать на вортексе.
4. (В большом объеме образцов для облегчения процедуры экстракции допускается смешивание в
отдельном одноразовом пробирке лизирующего и ВКО, из расчетов на один образец по 450 мкл.
лизирующего раствора и 10 мкл. ВКО).
5. В пробирки внести по 100 мкл. исследуемых образцов, используя наконечники с фильтром. Закрыть
крышки и перемешать на вортексе. Осадить на центрифуге для сбора капель жидкости с крышки.
6. В отдельную пробирку, предназначенную для положительного контроля (ПКО1, ПКО2), добавить
450 мкл. лизирующего раствора, 90 мкл. ОКО и 10 мкл. ПКО ДНК ВИЧ-1, 95 мкл. ОКО и 10 мкл.
ПКО ДНК ВИЧ-2, перемешать содержимое пробирок на вортексе.
7. В отдельную пробирку, предназначенную для отрицательного контроля, добавить 450 мкл.
лизирующего раствора и 100 мкл. ОКО. Перемещать на вортексе.
8. Ресуспендировать сорбент, интенсивно перемешивая на вортексе. Добавить в каждую пробирку
отдельным наконечником по 25 мкл. ресуспендированного сорбента.
9. Перемешать на вортексе и оставить на 10 мин. при комнатной температуре, тщательно перемешивать
каждые 2 минуты.
10. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
11. Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 261
12. Добавить в пробирки по 500 мкл. раствор для отмывки ВИЧ. Перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента.
13. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
14. Отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель и
отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
15. Добавить в пробирки по 500 мкл. раствора для отмывки 3. Перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента.
16. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
17. Отобрать раствор не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник
(без барьера) для каждой пробы.
18. Повторить отмывку 3.
19. Добавить в пробирки по 700 мкл. раствора для отмывки 7. Перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента.
20. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
21. Отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель и
отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
22. Поместить пробирки в термостат при температуре 60°С на 10 мин с открытыми крышками для
подсушивания сорбента.
23. Добавить в каждую пробирку по 50 мкл. буфера для элюции и ресуспендировать сорбент на вортексе.
24. Поместить в термостат при температуре 60°С на 5 мин, перемешать на вортексе и оодить (?) сорбент
на центрифуге в течение 1 мин. при 12 000 g (например, 13 400 об/мин центрифуги MiniSpin,
Eppendorf).
25. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК.
26. Обработать внутри ламинарного шкафа
27. Включить УФ-лампу в шкафу
РНК-пробы готовы к постановке реакции ОТ-ПЦР. РНК-пробы не рекомендуется хранить
дольше 30 мин при температуре от +2°С до +8°С. Для длительного хранения препарат
необходимо хранить при температуре не выше - 16°С в течение 1 месяца или выше -70°С в
течение года.
ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ, ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ И
ДЕТЕКЦИИ ПРОДУКТОВ ПЦР АМПЛИФИКАЦИИ
(Проводится в зоне 2- помещении для проведения ПЦР амплификации).
1. Наденьте халат и перчатки, предназначенные для этой зоны
2. Подготовьте ПЦР бокс к работе
3. До начала работы разморозьте реагенты, тщательно перемешайте на вортексе все и осадите капли с
крышек пробирок путем центрифугирования на микроцентрифуге в течение 5-10 сек.
4. Приготовьте реакционную смесь: для этого в пробирку с лиофилизированным DТТ последовательно
добавьте 300 мкл ОТ-ПЦР-смеси-1FRT/ ВИЧ, 200 мкл ОТ-ПЦР- смеси-2 FEP/FRT ВИЧ, 20 мкл
полимеразы (TagF) и 10 мкл ТМ-Ревертазы (MMlv);
5. Тщательно перемешайте на вортексе содержимое пробирки с реакционной смесью и осадите капли
с крышки пробирки путем центрифугирования на микроцентрифуге.
Внимание! Приготовленная смесь не хранится.
6. Отберите необходимое количество микропробирок объемом 0,2 мл.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
262
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
7. Подпишите пробирки согласно составленному протоколу. Общий объем реакционной смеси будет
составлять 50 мкл, объем пробы РНК – 25 мкл. смесей 25 мкл.
8. Внесите в пробирки по 25 мкл готовой реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной
смеси выбросьте в емкость для сброса.
9. Добавьте с помощью наконечника с аэрозольным барьером в пробирку с реакционной смесью 25 мкл
РНК-пробы, полученной в результате экстракции из клинических образцов. Избегайте попадания
сорбента в реакционную смесь для ОТ-ПЦР!
10. Для каждой постановки используйте 6 контрольных образцов - калибраторов. Для этого в 3 пробирки
с реакционной смесью внесите 3 ДНК-калибратора ПКО ВИЧ (К1, К2, К3) по 25 мкл каждого, в
3 пробирки с реакционной смесью внесите 3 ДНК-калибратора ВКО ВИЧ (В1,В2,В3) по 25 мкл
каждого.
11. Поставьте отрицательный контроль ПЦР - для этого в одну пробирку с реакционной смесью внесите
25 мкл РНК-элюента.
12. Поместить пробирки в амплификатор
13. Запрограммировать прибор для выполнения соответствующей программы амплификации и
детекции флуоресцентного сигнала согласно описанию для данного прибора
14. По окончании выполнения программы приступить к учету результатов
15. Обработайте ПЦР бокс
16. Включите УФ-лампу в ПЦР боксе.
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора для
проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени». Анализируют кривые накопления
флуоресцентного сигнала по двум каналам:
–– по каналу для флуорофора FAM регистрируется сигнал, свидетельствующий о накоплении
продукта амплификации кДНК ВКО.
–– по каналу для флуорофора JOE регистрируется сигнал, свидетельствующий о накоплении
продукта амплификации фрагмента к ДНК ВИЧ.
–– Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой
флуоресценции с пороговой линией (устанавливается в середине линейного участка прироста
флуоресценции положительного контроля в логарифмической шкале), что соответствует
наличию (или отсутствию) значения порогового цикла Ct в соответствующей графе в таблице
результатов.
2. На основании значений порогового цикла Ct (пересечение кривой флуоресценции с установленной
на соответствующем уровне пороговой линией) и исходя из заданных значений калибраторов КВ1 и
КВ2 происходит автоматическое построение калибровочного графика и расчет значений копий кДНК
ПКО (по каналу JOE/HEX) и ВКО (по каналу FAM) в пробе ПЦР. Полученные значения используют
для расчета концентрации РНК ВИЧ в исследуемых и контрольных образцах по формуле:
Число копий кДНК ВИЧ в пробе ПЦР x коэффициент = копий РНК ВИЧ/мл
плазмы крови
Число копий кДНК ВКО в пробе ПЦР
3. Число копий ВКО/мл плазмы указывается во вкладыше к данной серии набора реагентов и не может
быть использован для расчета результатов, полученных при анализе с использованием реагентов
других серий.
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 263
ВНИМАНИЕ! Если результат больше, чем 10.000.000 копий/мл, то он выдается как результат более
10.000.000 копий РНК ВИЧ/мл. При получении значения выше линейного диапазона, образец может
быть повторно протестирован после 10-кратного разведения; полученный результат умножают на
10. Если результат меньше, чем 500 копий/мл при экстракции из 100 мкл образца, 250 копий/мл при
экстракции из 200 мкл образца и 50 копий/мл при экстракции из 1 мл образца, то он выдается как
результат менее 500/250/50 копий РНК ВИЧ/мл, соответственно.
Примечание – В случае необходимости получения результатов измерения в Международных
Единицах (МЕ/мл) результаты, измеренные в единицах копий/мл, необходимо умножить на 1,75
(т.е. 1 копия=1,75 МЕ, 1 МЕ=0,57 копий).
ВНИМАНИЕ! Граничные значения концентрации ВКО указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов. См. также инструкции к соответствующим приборам для ПЦР в реальном времени и
методические рекомендации по применению набора реагентов «АмплиСенс®ВИЧ-Монитор-FRT».
Интерпретация результатов в контрольных образцах. Результат ПЦР-исследования считается
достоверным, если получены правильные результаты для контрольных образцов в соответствии с
таблицей оценки результатов контрольных реакций (см. табл. 1).
1. Если для отрицательного контроля экстракции РНК (ОК) по каналу JOE/Yellow/HEX и/или
отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам FAM/Green и JOE/Yellow/HEX получено значение
порогового цикла Ct, необходимо повторить исследование для всех образцов, в которых обнаружена
РНК ВИЧ, начиная с этапа экстракции РНК.
2. Если концентрация ВКО в таблице результатов по соответствующему каналу ниже граничного
значения, указанного во вкладыше, требуется перестановка данной пробы, начиная с первого этапа
анализа.
3. Если коэффициент корреляции R2 при построении калибровочной прямой менее 0,98, требуется
перестановка ПЦР для всех проб.
4. Результат анализа невалидный, если для данной пробы в таблице результатов по каналу для
флуорофора FAM/Green (ВКО) значение порового цикла СТ не определено или превышает указанное
граничное значение.
После интерпретации выписываем результаты и передаем в диспансерный отдел.
Таблица1.
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследолвания
Значение порового цикла, Сt
Контролируемый этап
Контроль По каналу для флуорофора
ПЦР- исследования По каналу для флуорофора JOE/Yellow
FAM/Green
Положительный (концентрация
ОК Экстракция РНК, ПЦР Значение отсутствует Отрицательный
ВКО больше граничного)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения РНК вируса
иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в клиническом материале методом ПЦР в режиме
реального времени «Амплисенс ВИЧ Монитор-FRT»
2. ПЦР в реальном времени под редакцией Ребрикова Д.В., Москва, 2009 г.
3. № 104 приказ МЗ КР от 15.03.2011 г. «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 265
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
Yellow.
12. В окне «New Run Wizard» нажать кнопку «Calibrate» («Gain Optimisation ….»для «Rotor-Gene»
600). В открывшемся окне в строке «Channel Setting» выбрать каналы YOE/Yellow и FAM/Green.
Установить «Tube Position» 1, «Min Reading» 5. «Max Reading» 10.
13. Нажмите кнопку «ОК/ДА».
14. В нижней части окна отметить галочкой «Perform Calibration (Optimisation) Before 1st Acquisition/
Выполнить оптимизации при 1-м шаге детекции». Нажать кнопку «Cloose».
15. Нажмите кнопку «Далее» запустите амплификацию кнопкой «Старт»
Используйте данное средство управления, чтобы скрыть или показать различные образцы на экране.
Высветленные образцы выключены (не выбраны). Панель Развёртки (Прокручивания) используется
для вывода на экран следующих групп образцов. Вы можете просматривать образцы по отдельности,
щёлкая по ним курсором мыши, или Вы можете скрыть/показать все образцы, входящие в часть
таблицы образцов, которая видна на экране (их количество зависит от пространства экрана),
щёлкнув по кнопке Bank on / Bank off (включить/выключить группу). Чтобы выбрать ряд образцов,
щёлкните курсором мыши на первом образце и протащите мышь до последнего выбираемого.
Когда Вы отпустите кнопку мыши, то выбранные образцы будут либо выделены, либо выключены.
Щёлкнув по кнопке Named On (Включить именованные), Вы сможете увидеть только те образцы,
которым Вы присвоили имя; это быстрый способ показать только отдельные необходимые образцы.
Щёлкая по кнопке All On / All Off (Все включены/Все выключены), Вы можете увидеть / выключить
все 36 или 72 образца. Нажатие на кнопку Edit Samples (Редактировать образцы) открывает окно
редактирования таблицы образцов.
ВНИМАНИЕ: при установке типа «None/Пусто» данные образца анализироваться не будут!
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция пользователя по применению оборудования «Rotor-Gene» 3000/6000
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 07 ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ 271
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
274
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 275
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Калькулятор.
МАТЕРИАЛЫ
1. Ручка.
2. Линейка.
3. Миллиметровая бумага.
4. Разноцветные фломастеры
ИНСТРУКЦИИ
1. Проведите измерение двадцати первых постановок ВЛС (установочная серия ВКО).
2. Заносите результаты измерений в форму регистрации 20-ти измерений ВЛС установочных серии
(Приложение 2).
3. Для унификации расчётов используйте коэффициент позитивности (КП), полученный от каждого
значения оптической плотности ВЛС (ОПвлс), делёного на значение оптической плотности
критического уровня (ОПкрит) данной постановки: КП = ОПвлс/ОПкрит.
4. Вычислите среднее значение 20 измерений ВЛС по формуле:
Внимание! Значение контрольных пределов – 2S и/или -3S не должно быть меньше 1.0, то есть
ниже ОП крит. Поскольку в этом случае позитивный ВЛС будет интерпретирован как негативный,
что уже является ошибкой. Как правило, подобные значения получают при неудовлетворительной
воспроизводимости результатов измерения ВЛС, когда коэффициент вариации (CV) превышает 20%.
Если контрольные пределы – 2S и/или -3S были ниже 1,0, то все 20 измерений установочной серии
аннулируются и после выяснения и устранения причин ошибок заново проводят 20 измерений ВЛС.
16. Пример расчёта и построения контрольной карты представлен в Приложении 1.
17. Начиная с 21 постановки, результат каждого значения ВЛС (ОПВЛС//ОПКРИТ) внесите в график (в
виде точек) в соответствии с его местом по отношению к контрольным пределам. Точки соедините
между собой линией.
18. Для оценки показаний ВЛС используйте контрольные правила Westgard (СОП № 08-03 «Применение
контрольных правил Westgard и порядок выявления лабораторных ошибок»).
19. Результаты постановки считать удовлетворительными, если значение отношения ОПВЛС к ОПкрит.
находится в интервале ±2S.
20. Если при этом другие правила не нарушены, то серия анализов пригодна.
21. Отчёты о выполнении ВКК оформляются в виде контрольной карты Леви-Дженингса, листы
подшиваются в папку «Контрольные карты», а также хранятся в компьютерной версии и
архивируются сроком не менее 3-х лет.
Порядок смены контрольного материала:
Для непрерывного проведения ВКК в период, когда используемого ВЛС остаётся только на 20
аналитических серий, необходим переход на новый контрольный материал путём «перекрывания». Для
этого:
1. В течение 20 постановок лаборатория параллельно с ВЛС, по которому проводится текущий
контроль, исследует новую серию ВЛС.
2. После накопления 20 измерений в новой серии ВЛС проводится расчёт контрольных пределов,
строится новая контрольная карта и проводится последующий оперативный контроль.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества в
иммуноферментном анализе», Бишкек, 2005 г.
2. Приказ МЗ РФ № 220 от 26 05 2003 г. «Об утверждении отраслевого стандарта «Правила проведения
внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных
исследований с использованием контрольных материалов»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
278
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1.
Примеры расчётов и построения контрольной карты Леви-Дженингса
III. Отношение 20 измерений ОП ВЛС к ОП крит. каждого измерения
№ постановки ВЛС ОП крит. ОП ВКО КП
1 0,570 0,273 2,088
2 0,511 0,259 1,973
3 0,565 0,295 1,915
4 0,618 0,340 1,818
5 0,540 0,300 1,8
6 0,489 0,355 1,377
7 0,590 0,360 1,639
8 0,563 0,287 1,962
9 0,622 0,346 1,797
10 0,578 0,248 2,331
11 0,550 0,295 1,864
12 0,514 0,308 1,668
13 0,487 0,300 1,623
14 0,570 0,274 2,080
15 0,599 0,293 2,044
16 0,536 0,336 1,595
17 0,608 0,260 2,338
18 0,551 0,360 1,530
19 0,577 0,346 1,667
20 0,618 0,334 1,850
+2,338+ +1,530+1,667+1,850
Х ср. = 1,848
V. Вычисление среднеквадратического отклонения S:
Приложение 2
Форма регистрации 20 измерений ВКО установочной серии
Дата, месяц, год проведения измерений:
Лаборатория: Показатель:
с…………………..по……………………….
Наименование Срок годно-
Изготовитель № серии Исполнители:…………………………………
ВКО сти
Тест-система: ……………………………..
Серия…………….срок годности…………
Серия исследо- Результат измерения
(Хi – Xср) (Хi – Xср)2
ваний ОП вко ОП крит. КП (Хi)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
280
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Заведующий лабораторией:…………………………………………………………(подпись)
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 281
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
2. Ответственный по качеству
3. Врач-лаборант
4. Лаборант
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Компьютер
2. Программное обеспечение
МАТЕРИАЛЫ
1. Распечатка результатов измерений
ИНСТРУКЦИИ
1. Проведите измерение двадцати первых постановок ВЛС (установочная серия ВЛС).
2. Включите компьютер.
3. Зайдите в папку «Контрольные карты», откройте файл, соответствующий проведённому виду
исследования. Например: «Контрольная карта анти-ВИЧ».
4. Откройте вкладку «Ввод данных и их анализ».
5. Внесите в соответствующие столбцы с левой стороны экрана монитора 20 измерений ОПВЛС и
ОПкрит. Компьютерная программа проведёт вычисление коэффициента позитивности (КП) путём
деления ОПвлс на ОПкрит. для унификации результатов измерений (таблица 1):
ОП ОПкрит ОП/ОП крит
0,57 0,273 2,087912088
0,511 0,259 1,972972973
0,565 0,295 1,915254237
0,618 0,34 1,817647059
0,54 0,3 1,8
0,489 0,355 1,377464789
0,59 0,36 1,638888889
0,563 0,287 1,961672474
0,622 0,346 1,797687861
0,578 0,248 2,330645161
0,55 0,295 1,86440678
0,514 0,308 1,668831169
0,487 0,3 1,623333333
0,57 0,274 2,080291971
0,599 0,293 2,044368601
0,536 0,336 1,595238095
0,608 0,26 2,338461538
0,551 0,36 1,530555556
0,577 0,346 1,667630058
0,618 0,334 1,850299401
Таблица 1. Результаты 20 измерений установочной серии ОПвлс (ОП) и ОПкрит для расчёта КП
(ОП/ОПкрит).
6. В правой части экрана будут отображены рассчитанные показатели среднего значения 20 измерений
ВЛС – Х ср. (средняя); среднеквадратичного отклонения – S (SD); и значений контрольных пределов:
-1S; +1S; -2S; +2S; -3SD; +3SD (табл. 2).
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 283
Таблица 2. Результаты вычислений установочной серии ВКО для построения контрольной карты
Леви-Дженнингс.
7. Если в ряду результатов установочной серии оказалось значение ВЛС, выходящие за пределы ±
2S, то его следует исключить из расчёта Хср. и среднеквадратичного отклонения S и выполнить
недостающее измерение ВЛС, после чего внести его в соответствующие столбцы программы.
Общее число таких отклонений не должно превышать двух показаний ВЛС.
Внимание! Поскольку компьютерная программа «Контрольная карта» обеспечена защитой, то
можно вносить изменения только в графы «ОП» - для показаний ВЛС и «ОПкрит» - для показаний ОП
критического уровня. Чтобы удалить несоответствующие показания ВЛС в установочной серии, следует
в нужной строке выделить левой кнопкой мышки 2 клетки («ОП» и «ОПкрит») и нажать «delete». Затем
на пустые клетки переместить нижестоящие показания ВЛС и ОП крит.
л
+3S=2,6
+2S=2,35
+1S=2,1
Х ср.
-1S=1,59
ОП/Опкрит
-2S=1,34
-3S=1,09
1 11 21 31 41 51 61 71 81 91 101 111 121 131 141 151 161 171 181 191 201
1-сүрөт. Леви-Дженнингс контролдук картасын
Постановка ИФА түзүү
Рисунок 1. Построение контрольной карты Леви-Дженнингс
Внимание! Значение контрольных пределов –2S и/или -3S не должно быть меньше 1.0, то есть
ниже ОП крит. Поскольку в этом случае позитивный ВЛС будет интерпретирован как отрицательная,
что уже является ошибкой. Как правило, подобные значения получают при неудовлетворительной
воспроизводимости результатов измерения ВЛС, когда коэффициент вариации (CV) превышает 20%.
Если контрольные пределы –2S и/или -3S оказались ниже 1.0, то все 20 измерений установочной серии
аннулируются и после выяснения и устранения причин ошибок заново проводят 20 измерений ВЛС,
рассчитывают контрольные пределы и строят контрольную карту.
8. Начиная с 21 постановки, учитывайте результат каждого значения ВЛС (ОП ВКО/ ОПКРИТ) по графику
в соответствии с его местом по отношению к контрольным пределам.
9. Результаты постановки считаются удовлетворительными, если значение отношения ВЛС к ОПкрит.
находится в интервале ±2S.
10. Если при этом другие правила не нарушены, то серия анализов пригодна.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
284
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
11. Интерпретация приемлемости результатов ВЛС и поиск причин ошибок, представлены в СОП №
08-03 «Правила применения контрольных правил WESTGARD и порядок выявления лабораторных
ошибок».
12. Отчёты о выполнении ВКК оформляются в виде контрольной карты Леви-Дженнингса, выполненной
в компьютерной версии (рис.1), распечатки законченных контрольных карт подшиваются в папку
«Контрольные карты» и архивируются сроком не менее 3-х лет.
Порядок смены контрольного материала:
Для непрерывного проведения ВКК в период, когда используемого ВЛС остаётся только на 20
аналитических серий, необходим переход на новый контрольный материал путём «перекрывания». Для
этого:
1. В течение 20-ти постановок лаборатория параллельно с ВЛС, по которому проводится текущий
контроль, исследует новую серию ВЛС.
2. После накопления 20 измерений в новой серии ВКО проводится расчёт контрольных пределов,
строится новая контрольная карта и проводится последующий оперативный контроль.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ МЗ РФ № 220 от 26 05 2003 г. «Об утверждении отраслевого стандарта «Правила проведения
внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных
исследований с использованием контрольных материалов»
2. Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества в
иммуноферментном анализе», Бишкек, 2005 г.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 285
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУКЦИИ
1. После внесения показаний ВЛС в контрольную карту проверьте соответствие полученного
результата правильности измерения ВЛС.
2. Для этого проведите оценку правильности измерения ВЛС согласно контрольным правилам в
последовательности, как это представлено на рисунке 1.
Результат
измерения ВКО
Не нарушено
12S Серия анализов пригодна.
Дальнейшую проверку не проводят
нарушено
не нарушено не нарушено не нарушено не нарушено
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Контрольные правила WESTGARD
Правило 12S. Показатель случайной ошибки. Используется как предупреждение, если один
показатель стандарта превышает контрольные пределы ±2S. Не требует подтверждения результатов
теста или исключения серии, но необходимо искать ошибки в предыдущей постановке.
Правило 12S
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
288
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Правило 13S: показатель случайной ошибки, если один показатель стандарта превышает
контрольные пределы ±3S; результаты не учитываются, требуется перестановка анализа.
Правило 13S
Правило 22S: показатель систематической ошибки, если два последовательных результата стандарта
превышают контрольные пределы Х±2S на одной стороне от средней; результаты не учитываются,
требуется перестановка теста.
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 289
Правило 22S
Правило R4S: показатель случайной ошибки, если два контрольных измерения расположены по
разные стороны от коридора Х±2S (разница между минимальным и максимальным значением стандарта
превышает 4S), является основанием для повторения теста.
Правило R4S
Правило 41S: показатель систематической ошибки, если четыре результата стандарта располагаются
на одной стороне от средней и превышают Х±1S; не всегда требуется перестановка теста, так как
смещение чаще не является клинически значимым, однако, необходимо искать ошибки в текущей или
предыдущей постановках.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
290
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Правило 41S
Приложение 2.
Форма «Журнала регистрации несоответствующих результатов ВКК»
Учреждение_ ___________________________________________________________________
Лаборатория____________________________________________________________________
Тест-система (наиме-
Нарушенное Серия Запись о причине ошибки и кор-
Дата нование, серия, срок Подпись
правило: ВКО ректирующих действиях
годности
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 291
Тест-система (наиме-
Нарушенное Серия Запись о причине ошибки и кор-
Дата нование, серия, срок Подпись
правило: ВКО ректирующих действиях
годности
Приложение 3.
Ошибки в иммуноферментном анализе
Результат ошибки Причины Способ устранения ошибки
1. Уменьшенное время инкубации с конъюгатом 1. Точно выдерживать время, инкубации,
и/или субстратной смесью указанное в инструкции к набору.
2. Компоненты набора и/или исследуемые образ- 2. Перед использованием набор необходимо
цы перед использованием не прогреты до ком- выдержать при комнатной температуре в
натной температуры течение 30 минут
3. Несоблюдение температурного режима при 3. Хранить наборы в холодильнике при 2-8oС
хранении набора 4. Регулярно проверять температуру в термо-
4. Заниженный температурный режим при инку- стате и шейкере
бациях в термостате/шейкере 5. Следить за работой промывочного устрой-
5. Недостаточно полная аспирация после отмыв- ства
Занижение сигнала ки: на дне лунок имеются остатки промываю- 6. Заранее готовить компоненты для следую-
ОП исследуемых щего раствора щего этапа реакции.
образцов или
6. Длительное нахождение планшета на воздухе 7. Внесение растворов производить быстро.
калибровочных проб
между этапами реакции, излишнее высыхание
8. Не использовать для анализа реагенты из
лунок
других наборов или другой серии, а также
7. Использование реагентов из других наборов с истекшим сроком годности
или другой серии;
9. Отрегулировать температуру в помещении
8. Истечение срока годности компонентов; для постановки ИФА
9. Низкая температура в лаборатории (ниже 18 С) 10. Контролировать работу спекторофотоме-
10. Ошибки в работе спектрофотометра тра (ридера)
11. Низкая чувствительность тест-системы 11. Провести оценку чувствительности
тест-системы с помощью аттестованных
контрольных образцов
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
292
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
Схема №1
Рисунок № 1.
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Руководство оператора «Cytomics FC 500» Beckman Coulter
2. Приказ № 111 от 07.03.2012 г. «О мерах по совершенствованию качества лабораторных исследований
социально значимых инфекционных заболеваний»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 297
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Дата Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
6. Контрольный раствор «Count Check Beads green», который содержит гистограмму СД4 или точечную
диаграмму СД4 %.
7. Холодильник бытовой для хранения стандартных контрольных образцов «Count Check»
8. Емкость для обеззараживания.
9. Спиртовые салфетки
10. Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов объемом на 1000 мкл.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Проточный цитофлюрометр «CyFlow® Counter» Partec
2. Бактерицидная лампа.
ИНСТРУКЦИИ
Включите аппарат (см. СОП № 06-04 «Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка
цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
Проверка стабильности состояния аппарата:
1. Стабильность состояния аппарата проверяется раз в день или перед каждым проведением анализа
(если исследования проводятся не каждый день).
2. Проверка проводится со стандартным контрольным образцом «Count Check»
3. Достаньте флакон с реагентом из холодильника, выдержите его 30 минут при комнатной температуре.
4. Тщательно перемешивайте флакон со стандартным контрольным образцом в течение 2-3 минут
(чтобы разбить частицы, которые сгруппировались), избегайте пенообразования;
5. В чистую прозрачную пробирку (из набора) набирайте 850 мкл стандартного контрольного образца
из середины флакона.
6. Извлеките пробирку из порта аппарата с «Sheath Fluid for Flow» (промывочный раствор)
7. Пробирку со стандартным контрольным образцом вставьте в порт аппарата
8. Выберите программу для проведения контроля: нажимайте последовательно
9. Setting (настройки) → Load Script (загрузить программу) → Count Check Beads Green. scr (подсчитать
калибровочные частицы) → Select (выбрать)
10. Нажимайте кнопку «Start» (начать), ожидайте завершения измерения и остановки последующей
процедуры самоочистки;
11. Результат измерения контроля отображается на экране в области «Result» (результат).
12. Сравните полученный результат с указанной на этикетке флакона концентрацией Если результат
отличается меньше чем на 10% от указанного на этикетке флакона, то аппарат готов к следующему
измерению (см. рисунок 1);
13. Если результат измерения отличается больше, чем на 10% от указанной на этикетке флакона
концентрации, то осторожно и тщательно перемешайте флакон со стандартным контрольным
образцом и повторите измерение (повторить с пунктов 3-8).
14. Если полученный результат еще раз не соответствует с указанной на этикетке, то аппарат промойте
несколько раз и повторите процедуры.
15. При необходимости вызвать технического специалиста.
16. При необходимости данные могут быть сохранены и распечатаны;
17. Извлекаем пробирку со стандартным контрольным образцом из порта аппарата «CyFlow® Counter»
Partec
18. Аппарат готов к проведению измерений.
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 299
Рисунок 1.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Руководство оператора «CyFlow® Counter» Partec
2. Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Приказ № 111 от 07.03.2012 г. «О мерах по совершенствованию качества лабораторных исследований
социально значимых инфекционных заболеваний»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
300
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
2. Ответственный по качеству
3. Врач-лаборант
4. Лаборант
МАТЕРИАЛ
1. Плазма человеческой крови, не содержащая РНК ВИЧ-1 – 27 мл.
2. Плазма человеческой крови, содержащая РНК ВИЧ-1 – 1,5 мл.
3. Одноразовые аэрозольные наконечники объемом (20,100,200,1000мкл) с маркировкой « DNase-
RNase free»
4. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся микропробирки объемом 1,5 мл.
5. Стерильный флакон объемом 30 мл
6. Штативы для микропробирок на 1,5 мл
7. Вспомогательный штатив для пробирок
8. Контейнер для сброса отходов
9. Емкость с 70% спиртовым раствором
10. Перманентный маркер
11. Одноразовые халат, чепчик, перчатки без талька
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Ламинарный бокс
2. Термостат
3. Вортекс
4. Вакуумный отсасыватель
5. Микроцентрифуга
6. Морозильная камера на -70оС
7. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме
«реального времени»
8. Персональный компьютер для амплификатора.
ИНСТРУМЕНТЫ
Дозаторы с переменным объемом на 20 мкл, 200 мкл, 1000 мкл
РЕАКТИВЫ
1. ПЦР тест-система для количественного определения РНК ВИЧ-1.
2. Раствор дезинфектанта 0,1% ДП-2Т (или аналог).
3. 70% спирт.
ИНСТРУКЦИИ
1. После постановки ПЦР выберите среди проставленных образцов положительные пробы на ВИЧ с
высокой концентрацией вируса для приготовления ВЛС.
2. Так как объем одной положительной/отрицательной пробы недостаточен для приготовления ВЛС,
то пробы следует пулировать.
3. До накопления достаточного количества материал следует заморозить при -70оС, пока не наберёте
необходимый объем.
4. Для определения нужного количества аликвот ВЛС проведите расчёт, исходя из количества
постановок анализа за 12 месяцев. Например: если ПЦР ставится ежедневно, то на год требуется
252 аликвоты готового ВЛС (поскольку в году 252 рабочих дня).
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
302
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
5. Для определения необходимого объёма ВЛС следует умножить расчётное количество аликвот на
объем аликвоты + 15% + объем доз, необходимый для построения контрольной карты, т.е. не менее
20 доз ВЛС.
Например, нам требуется 252 аликвоты, для анализа берётся 100 мкл. плазмы. Следовательно,
общий объем ВЛС = 252 х 100 мкл. х 1,15 (15% дополнительного объёма) + (20 доз для расчёта CV
и построения карты по 115 мкл) = 28 980 мкл. + 2300 мкл = 31 280 мкл. = 31 мл. 280 мкл.
6. Отбираемые для пула положительные пробы должны содержать РНК ВИЧ-1 в концентрации: от 100
000 до 10 000 000 копий/мл.
7. Пулированную положительную сыворотку тщательно перемешайте на вортексе.
8. После накопления необходимого количества положительной плазмы разведите её отрицательной
плазмой в соотношении 1 часть положительной плазмы к 9 частям отрицательной плазмы, т.е. в 10
раз.
9. После разведения готовый ВЛС тщательно перемешайте на вортексе.
10. Промаркируйте микропробирки ВЛС.
11. Разаликвотируйте готовый ВЛС по дозам в микропробирки (в нашем примере по 115 мкл.).
12. Заложите микропробирки с ВЛС на хранение при -70°С в криоштативах.
13. После приготовления ВЛС определите интервал допустимых значений для построения контрольной
карты. Для этого извлеките из морозильника 10 образцов ВЛС, разморозьте и поставьте в опыте
вместе с клиническими образцами.
14. Определите внутрисерийную воспроизводимость результатов ВЛС, используя следующие действия:
a. Вычислите среднее значение 10 измерений ВЛС по формуле:
S
CV = × 100%
Xc
где CV – коэффициент вариации
S – среднеквадратическое отклонение
Х с – среднее значение Х
15. В последующие 10 постановок включайте по 1 образцу ВЛС для определения контрольных пределов
(cм. СОП № 08-01) и оценки межсерийной воспроизводимости (CV) по выше представленной
формуле.
РАЗДЕЛ 08 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 303
16. При получении значений CV менее 5% (п. 14 и 15) можете переходить к использованию ВЛС в
каждой постановке реакции ПЦР для количественного определения РНК ВИЧ-1.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. ПЦР в реальном времени под редакцией Ребрикова Д.В., Москва, 2009 г.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
304
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
306
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 307
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
МАТЕРИАЛЫ
1. Промаркированный уборочный инвентарь (ведро, швабра, тряпка)
2. Моющие средства
3. Дезинфицирующее средство: 700 спирт, ДП-2Т или аналог.
4. Одноразовая или многоразовая спецодежда (халат, шапочка, бахилы, перчатки)
ИНСТРУКЦИИ
1. Разбейте каждую ПЦР зону на участки. Например:
–– участок 1 – бокс биологической безопасности и оборудование внутри него;
–– участок 2 – внешние поверхности бокса биологической безопасности;
–– участок 3 – шкафы для расходного материала;
–– участок 4 – холодильники для хранения реактивов, образцов проб;
–– участок 5 – оборудование, которое используют в работе, но стоит вне бокса биологической
безопасности;
–– участок 6 – поверхности помещения (стены, окна, батареи, потолок, двери и т.д.);
–– участок 7 – пол.
2. Перед обработкой ПЦР зоны наденьте СИЗ (халаты, бахилы, шапочки, перчатки) и приготовьте
моющие и дезинфицирующие растворы.
3. Проводите обработку от участка к участку последовательно. Внимание! Каждый участок
обрабатывайте отдельной безволоконной салфеткой.
4. Поверхности каждого участка (кроме внутренней поверхности бокса биологической защиты и
оборудования) вначале моются моющим раствором.
5. Внутренняя поверхность бокса биологической защиты и оборудование протираются влажной
ветошью с моющим раствором для удаления жировых загрязнений, после чего остатки моющего
средства удаляются ветошью, смоченной водой.
6. Затем на поверхность наносят на 30 минут 0,1% раствор ДП-2Т или его аналог. Остатки
дезинфицирующего средства тщательно удаляют ветошью, смоченной водой.
7. Участки № 1,2,5 протирают 70° спиртом.
8. После завершения указанной обработки проводят обеззараживание ультрафиолетовым излучением
в течение 45 минут.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ МЗ КР. № 104 от 15.03.2011 г «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
2. приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. «Организация лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
патогенности».
3. МУ по применению дезинфицирующего средства «ДП-2Т».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 309
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
310
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
4. Кожу рук и других участков тела под загрязнённой одеждой промойте под проточной водой с мылом.
5. При попадании заразного материала на кожу рук, отдельные участки тела следует немедленно
промыть поврежденную область мылом и водой.
6. При попадании заразного материала на лицо тщательно промойте зону контакта с материалом водой
и с мылом.
7. При попадании инфицированного материала в глаза промойте глаза осторожно, но тщательно
водопроводной или соленой водой не менее 15 минут. При этом глаза должны быть открытыми,
веки должны быть слегка вывернуты.
8. При попадании заразного материала в нос или в рот сразу выплюньте кровь или жидкость
прополощите рот водой несколько раз. Сделайте выдох через нос и промойте нос водой или соленой
водой.
НЕЛЬЗЯ использовать дезинфицирующий раствор.
При получении травмы от укола иглой или другим острым предметом сразу промойте поврежденное
место мылом и водой.
НЕЛЬЗЯ наносить на кожу дезинфицирующий раствор
НЕЛЬЗЯ тереть или трогать место травмы.
9. При попадании инфицированного материала на пол, стены, мебель, оборудование загрязненное
место следует накрыть тканевыми или бумажными
полотенцами, затем через них пролить дезинфицирующее средство и оставить на определенное
время.
10. Затем поврежденный материал вместе с полотенцами следует удалить; стеклянные осколки следует
брать пинцетом. После этого контаминированную зону следует протереть дезинфицирующим
средством. Если для сбора разбившихся предметов использовались совки, их также следует
автоклавировать или поместить в эффективное дезинфицирующее средство. Одежду, бумажные
полотенца и швабры, которые использовались для чистки, следует поместить в контейнер,
предназначенный для контаминированных отходов. Все эти процедуры следует выполнять в
перчатках.
11. Поверхность протрите ещё раз дезинфицирующим раствором. Доложите о случившемся
заведующему лабораторией и зарегистрируйте случай аварии в журнале.
12. Заведующий лабораторией докладывает о факте аварии учреждения администрации учреждения.
13. Персонал, подвергшийся угрозе заражения ВИЧ-инфекцией должен находиться под наблюдением
врача-инфекциониста с обязательным обследованием на маркеры ВИЧ-инфекции в следующие
сроки: сразу после аварии, через 1, 3, 6 и 12 месяцев.
14. Врач-инфекционист принимает решение о целесообразности назначения профилактической
антиретровирусной терапии (АРВТ).
15. При потенциальном риске заражения гепатитом В у невакцинированных против ГВ вводится
вакцина по схеме 0-1-2 месяцев, с последующим контролем за маркерами вирусного гепатита В
(HBsAg, анти-HBs).
16. У ранее вакцинированного персонала определяется уровень анти-HBs. При концентрации антител
менее 10 МЕ/Л вводится бустерная доза вакцины.
17. После аварии обследуйте в самые короткие сроки пациента, от которого получен инфицированный
материал на маркеры ВИЧ, ГВ и гепатита С (ГС).
18. Перед работой все повреждения кожи на руках закройте лейкопластырем или напальчниками.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
312
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Форма журнала регистрации аварий - (Наименование организации, фамилия, имя, отчество
заведующего- физического лица, его регистрационные данные)
Вид проис- Описание
ФИО пострадав- Профессия Принятые Ответ-
Дата и шествия, обстоятельств,
№ шего, год рожде- (должность) меры по устра- ственное
время приведшего при которых
п/н ния, общий стаж пострадав- нению причин лицо и
аварии к аварийной произошла
работы шего аварии роспись
ситуации авария
1 2 3 4 5 6 7 8
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 313
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ИНСТРУКЦИИ
1. Обеспечьте достаточное количество комплектов одноразовой защитной одежды в лаборатории для
персонала и посетителей лаборатории.
2. Проверьте, чтобы защитная одежда была удобной, по размеру и отвечала предъявляемым
требованиям.
3. Надевайте СИЗ в соответствии с требованиями инструкций по применению СИЗ.
4. После использования поместите загрязненные СИЗ в емкость или пакет для удаления твердых
отходов.
5. По окончании рабочего дня пакет плотно перевяжите в зоне проведения исследования и отправьте
на автоклавирование.
6. В случае загрязнения одежды опасными материалами немедленно поменяйте защитную одежду на
чистую.
7. Носите только неопудренные перчатки при ПЦР исследования.
8. Перед применением перчаток убедитесь в их соответствии следующим требованиям :
a. непромокаемость
b. полное закрытие рук и запястья при надевании, охвата рукава куртки или халата
c. легкость удаления при порезе, повреждении и внутреннем загрязнении
d. соответствие выполняемым процедурам, снятие и удаление согласно правилам безопасности
после выполнения исследования
9. Одевайте перчатки при:
–– работе, когда возможен прямой контакт с любым потенциально контаминированным предметом
или материалом, кровью, инфекционными материалами
–– работе с особо чистыми химическими реактивами, а также с кислотами, щелочами и прочими
агрессивными веществами
–– при уборке «заразной» зоны, ламинарных шкафов, обработке оборудования
10. Снимайте и сбрасывайте в пакет или емкость перчатки:
–– вне пределов комнат боксовых помещений
–– при контакте с дверными ручками
–– при контакте с любыми не контаминированными предметами, которыми сотрудники пользуются
без перчаток.
11. Снимайте использованные перчатки, вывернув их наизнанку, до выхода из рабочей зоны, поместите
их в специальный контейнер (Приложение 1)
12. Удаляйте использованные перчатки вместе с инфицированными отходами.
13. Загрязненные инфицированным материалом перчатки немедленно меняйте!
14. Выберете удобную сменную обувь, с нескользящей подошвой и закрытым носом, желательно чтобы
это была кожаная или синтетическая непромокаемая обувь.
15. При работе в ПЦР боксе на сменную обувь оденьте одноразовые непромокаемые бахилы.
16. Снимайте халаты при выходе из ПЦР зоны
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 315
Приложение 1.
Техника снятия перчаток
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ:
1. WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16. Guidelines for using HIV technologies in Surveillance: Selection,
Evaluation, and Implementation - 2009 update
2. Практическое руководство по биологический безопасности в лабораторных условиях ВОЗ-2004.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
316
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
320
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 323
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
Приложение 1
Пожарная Безопасность
Персонал лаборатории должен быть внимателен к условиям, при которых есть опасность
возникновения пожара. Следует помнить, что жидкости с низкими точками возгорания могут
воспламениться, находясь рядом с источниками тепла, такими как нагревательные плиты, трубы с
паром, или рядом с оборудованием, которое может дать искру или нагреться.
Небольшим пожаром в лаборатории считается пожар, который можно погасить за 1-2 мин.
Адекватным действием в таких случаях будет – накрыть пламя перевернутым лабораторным стаканом
или влажными бумажными полотенцами. Если это не поможет, используйте огнетушитель. При
значительном пожаре звоните соответствующим местным службам, как правило, в пожарное отделение
и полицию.
В лабораториях должны находиться огнетушители соответствующего класса, подходящего для
пожаров в условиях лаборатории. Как правило, подходящими являются огнетушители класса BC или
ABC. Огнетушители подлежат ежегодной проверке и замене по необходимости. Персонал лаборатории
должен проходить обучение методам тушения пожаров разных видов и использованию огнетушителей
посредством ежегодной проводимой тренировки «Техника безопасности и сбор и удаление опасных
отходов в лабораториях».
Все сотрудники лаборатории должны уметь пользоваться переносными огнетушителями,
должны быть маркировки пожарной опасности в местах хранения пожароопасных материалов
(фото 1).
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 325
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях (третье
издание, Женева, 2004 г).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
326
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
7. Снимайте перчатки:
–– вне пределов комнат боксовых помещений
–– при контакте с дверными ручками
–– при контакте с любыми не контаминированными предметами, которыми сотрудники пользуются
без перчаток.
8. В лаборатории нельзя носить обувь с открытыми носками.
9. Упаковку и транспортировку образцов проводите согласно существующим национальным и/или
международным нормам и правилам.
10. Перед работой все повреждения кожи на руках закройте лейкопластырем или напальчниками.
11. Руки мойте в процессе работы (в промежутках между отдельными ее этапами) и перед уходом из
лаборатории
12. Не допускайте:
–– Пипетирование ртом
–– Контакт инфекционных материалов с кожей и глазами
–– Проглатывание инфекционных материалов
13. Для защиты от возможного попадания вируссодержащего материала во время работы используйте
защитные очки, экраны или другие защитные средства, подвергающиеся дезинфекции.
14. Защитная лабораторная одежда не должна храниться в тех же шкафчиках или ящиках, что и личная
одежда.
15. Используйте помещения только по их прямому назначению, проведение в них каких-либо других
работ не разрешается.
16. В лаборатории запрещается прием пищи, питье напитков и курение
17. Не допускайте пребывание детей и посторонних людей в рабочих зонах лаборатории
18. Двери лаборатории держите закрытыми, на дверях лаборатории необходимо повесить международный
знак биологической безопасности, где указана Ф.И.О. ответственного за биобезопасность и его
контактные данные (приложение 1).
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях (третье
издание, Женева, 2004 г).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
328
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 329
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Многоразовый Одноразовые расходные мате-
Места образова- Вид отхо- ед. инвентарь, исполь- риалы для сбора отходов Ответственный
ния отходов дов измер зуемый для сбора (должность)
отходов пакеты (кг) контейнер (л)
Бокс ПЦР
комната для
проведения ИФА
и др.
производственные
помещения
В день
В неделю
В месяц
В год
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
332
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
2. Защитные очки
3. Четырёхслойная марлевая маска
4. Мерный стакан или цилиндр объёмом до 200 мл
5. Мерный стакан или цилиндр объёмом до 1 литра
6. Ёмкость, устойчивая к коррозии (стеклянная, эмалированная, пластиковая) на 3-5 литров.
РЕАКТИВЫ
1. Лизоформин 3000
2. 33% раствор перекиси водорода
3. Дистиллированная вода
ИНСТРУКЦИЯ
А. Инструкция по приготовлению 6% раствора перекиси водорода
1. Наденьте халат, защитные очки, резиновые перчатки и марлевую маску.
2. Подготовьте все необходимые материалы и реактивы.
3. Откройте последнюю страницу СОП, Приложение А, «Приготовление 6% раствора перекиси
водорода».
4. Определите для себя, какой объем 6% перекиси водорода вам потребуется для работы на сегодня и
найдите его в колонке «Объем 6% H2O2».
5. По таблице определите, какой объем 33% перекиси водорода Вам будет необходимо для
приготовления 6% перекиси водорода.
6. Отмерьте необходимое количество 33% перекиси водорода с помощью мерного стакана или
цилиндра объёмом до 200 мл.
7. Аккуратно перелейте отмеренное количество 33% перекиси водорода в 1 литровый мерный стакан
или цилиндр.
8. Аккуратно долейте в мерный стакан или цилиндр дистиллированной воды до нужного объёма
Б. Инструкция по приготовлению растворов Лизоформина 3000
1. Наденьте халат и резиновые перчатки.
2. Подготовьте все необходимые материалы и реактивы.
3. Для приготовления рабочего разведения раствора Лизоформина 3000 откройте последнюю страницу
СОП, Приложение Б. «Приготовление рабочего раствора средства Лизоформин 3000»
4. Определите для себя, какой объем раствора Лизоформина 3000 потребуется для проведения
дезинфекции.
5. По таблице определите, какой объем Лизоформина 3000 Вам потребуется для приготовления
нужного рабочего раствора.
6. Отмерьте необходимое количество концентрата Лизоформина-3000 с помощью мерного стакана
или цилиндра объёмом до 200 мл
7. В рабочую ёмкость налейте необходимый объем воды, а после добавьте необходимый объем
дезинфицирующего средства Лизоформин 3000.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР, утверждена
постановлением Правительства КР № 32 от 112.01.2012г.
2. Инструкция по применению средства «Лизоформин 3000» Разработано НИИД МЗ РФ (Москва),
ИЛЦ РНИИТО им. Р.Р. Вредена МЗ РФ (Санкт-Петербург).
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
334
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение А.
Приготовление 6% раствора перекиси водорода.
Объем 6% H2O2 Объем 33% H2O2
100 мл 18 мл
200 мл 36 мл
300 мл 55 мл
400 мл 73 мл
500 мл 91 мл
600 мл 109 мл
700 мл 127 мл
800 мл 145 мл
900 мл 164 мл
1 литр 180 мл
Приложение Б.
Приготовление рабочего раствора средства «Лизоформин 3000»
Концентрация рабочего раствора количество концентрата лизоформи-
вода дистиллированная в мл
лизоформина -3000 на в мл
0,25 % 2,5 997,5
0,5 % 5 995
0,75 % 7,5 992,5
1% 10 990
1,5 % 15 985
2% 20 980
2,5 % 25 975
3% 30 970
4% 40 960
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 335
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
4. Щетки
5. Тряпки для поверхностей и пола в «заразной», «чистой» зонах и рабочих кабинетах
6. Швабры
РЕАКТИВЫ
1. Лизоформин - 3000
2. Нашатырный спирт
3. Моющие и чистящие средства
ИНСТРУКЦИИ
Текущая уборка кабинетов
1. Уборка кабинетов проводится ежедневно, до начала рабочего дня.
2. Наденьте халат, перчатки.
3. Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
в кабинетах (Приложение 1).
4. Горизонтальные поверхности – столы, стулья - протрите ветошью без ворса, смоченной в чистой
воде.
5. Мытье полов проводите водой с добавлением моющего средства (5 г на 1 литр воды), одно ведро на
1 кабинет.
6. По окончании уборки помещение проветрите в течение 10-15 минут.
7. По окончании уборки уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
моющего средства и прополощите в чистой воде, высушите перед их повторным использованием.
8. По окончании уборки снимите аккуратно перчатки и вымойте руки с мылом.
9. Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирание полов и пыли
всухую.
10. Уборку следует проводить с менее загрязненных мест, постепенно переходя к наиболее загрязненным
местам, а также сверху вниз.
11. Мусор в кабинетах собирают в полиэтиленовые мешки и утилизируют как бытовые отходы по мере
накопления.
Текущая уборка лабораторных помещений «чистой зоны»
1. Уборка рабочих комнат лаборатории, расположенных в «чистой зоне» проводится ежедневно до
начала рабочего дня.
2. Наденьте халат, перчатки, закрытую обувь.
3. Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
лабораторных комнат «чистой зоны».
4. Протрите поверхности ветошью без ворса, смоченной в чистой воде, начиная от подоконника,
горизонтальные поверхности столов, стулья, оборудование, аппараты, как менее загрязнённые
места.
5. Стены мойте сверху вниз теплой водой с добавлением моющего средства (5 г на 1 литр воды) по
принципу одно ведро на 1 лабораторную комнату.
6. Полы вымойте теплой водой с добавлением моющего средства (5 г на 1 литр воды), одно ведро на 1
лабораторную комнату.
7. В конце рабочего дня проведите влажную уборку пола с использованием 0,3% лизоформина -3000
(Приложение 2 А, В).
8. По окончании уборки помещение проветрите в течение 10-15 минут.
9. После окончания уборки помещения включается бактерицидный облучатель.
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 337
10. Сделать соответствующие отметки в листах учета работы бактерицидной лампы и проведенной
уборке (Приложение 3 В).
11. По окончании уборки уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
дезинфицирующего средства, прополоскайте в чистой воде, высушите перед их повторным
использованием.
12. По окончании уборки снимите аккуратно перчатки и вымойте руки с мылом.
13. Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирать полы и пыль
всухую.
14. Мусор и чистые отходы собираются в полиэтиленовые мешки и утилизируются как бытовые отходы.
Текущая уборка лабораторных помещений «грязной зоны»
1. Уборка лабораторных комнат и боксов «грязной зоны» проводится ежедневно до начала рабочего
дня и в конце рабочего дня
2. Наденьте халат, чепчик, перчатки, закрытую обувь
3. Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
лабораторных комнат и боксов «грязной зоны»
4. Протрите подоконники, горизонтальные поверхности рабочих столов, стулья, оборудование и
аппараты ветошью без ворса, смоченной в дезинфицирующем средстве, разрешенном для этой цели
5. Стены мойте сверху вниз теплой водой с добавлением дезинфицирующего средства 0,3%
Лизоформина-3000 по принципу одно ведро на 1 лабораторную комнату.
6. Полы вымойте водой с добавлением дезинфицирующего средства 0,3% Лизоформина-3000, 1 ведро
на лабораторную комнату, начиная с менее загрязненных мест, и постепенно переходят к наиболее
загрязненным местам.
7. После завершения работы, персонал проводит уборку и дезинфекцию своего рабочего стола, бокса
в конце рабочего дня
8. В конце рабочего дня проведите влажную уборку пола с использованием дезинфицирующего
средства – 0,3% лизоформина-3000.
9. Отходы, образовавшиеся после работы, обеззаразьте и утилизируйте в соответствие с СОП № 09-11
«Правила обеззараживания жидких и твёрдых отходов»
10. После окончания уборки помещения включите бактерицидный облучатель на 30 минут и по
окончании сделайте соответствующие отметки в листах учета проведённой уборки и работы
бактерицидной лампы (Приложение 3. А, В).
11. По окончанию уборки, уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
дезинфицирующего средства, прополощите в чистой воде, высушите перед их повторным
использованием
12. Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирать полы и пыль
всухую
13. Уборку проводите с менее загрязненных мест, начиная от подоконника, горизонтальные поверхности
столов, стулья, оборудование, аппараты.
Генеральная уборка
1. Проводиться в конце месяца
2. Наденьте халат, чепчик, перчатки закрытую обувь.
3. Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
лабораторных комнат и боксов соответствующих зон.
4. Протирайте поверхности тряпкой (ветошью без ворсинок) смоченной в дезинфицирующем средстве
или моющим средством, разрешенном для этой цели.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
338
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
5. Окна мойте водой с добавлением нашатырного спирта (1 ст. ложка на 1 л воды) или разрешенного
специального моющего средства.
6. Раковины вымойте с использованием щетки и дезинфицирующего средства или дезинфицирующего
чистящего средства.
7. Для обеспечения свободного доступа к обрабатываемым поверхностям помещения максимально
освободите от мебели или отодвиньте в центр помещения.
8. На потолках и стенах влажной ветошью снимите пыль и паутину.
9. Протрите влажной тряпкой, смоченной в 0,3 % растворе лизоформина стены, двери, дверные ручки,
стулья, стойки, раковины.
10. Вымойте пространство за отопительными батареями и между звеньями водой с добавлением
моющего средства (5г на 1 литр воды), одно ведро на 1 лабораторную комнату и промойте чистой
водой.
11. Полы вымойте с добавлением 0,3% лизоформина.
12. По окончанию уборки, уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
дезинфицирующего средства, прополоскайте в чистой воде, высушите перед их повторным
использованием
13. По окончанию уборки снимите перчатки и вымойте руки с мылом.
14. Внести запись в формуляр контроля работы бактерицидной лампы.
15. Данные о проведенной уборке занести в формуляр уборки помещений.
16. Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирать полы и пыль
всухую.
17. Уборку проводите с менее загрязненных мест, начиная от подоконника, горизонтальные поверхности
столов, стулья, оборудование, аппараты.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР, утверждена
постановлением Правительства КР № 32 от 112.01.2012г.
2. Методические рекомендации по обеспечению безопасной работы с микроорганизмами III-
IV патогенности (опасности) и возбудителей паразитарных болезней, приказ МЗ КР № 104 от
15.03.2011г.
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 339
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Маркировка уборочного инвентаря
1. Уборочный материал маркируется не смываемой краской на видном месте следующим образом:
–– «Бокс № …., грязная зона»
–– «Бокс № ….., для пола, грязная зона»
–– «Бокс № ….., для стен и поверхностей»
–– «Комната, чистая зона»
–– «Коридор, грязная зона»
–– «Коридор, чистая зона»
Приложение 2.
А. Приготовление рабочего раствора средства «Лизоформин – 3000»
Концентрация рабочего раствора
Кол-во концентрата, в мл Кол-во воды в мл
лизоформина -3000
0,3 % 3.0 997
0,5 % 5 995
0,75 % 7,5 992,5
1% 10 990
1,5 % 15 985
2% 20 980
2,5 % 25 975
3% 30 970
4% 40 960
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
340
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 3
А. Форма учета проведения уборки помещений
Проведение уборки помещения
Комната № Формуляр № _______
Текущая уборка В рабочие дни
Генеральная уборка 1 раз в месяц
Ответственность
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО Должность Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому) ИЗЪЯТО (у кого)
Фамилия Подпись Дата Подпись Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Расположение контрольных точек в паровых стерилизаторах (автоклавах)
Емкость камеры стери-
лизатора Число кон-
Расположение контрольных точек (Т)
трольных точек
(дм 3)
Для паровых стерилизаторов прямоугольных:
До 100 5 Т.1 – у загрузочной двери;
Т.2 – у противоположной стенки (разгрузочной двери)
Для паровых стерилизаторов круглых вертикальных:
Свыше 100 до 750
11 Т.1 – в верхней части камеры;
включительно
Т.2 – в нижней части камеры
Для паровых стерилизаторов круглых горизонтальных:
Т.1 – у загрузочной двери;
Свыше 750 13 Т.2 - у противоположной стенки (разгрузочной двери);
Т.3-Т.13 – в центре стерилизационных коробок или внутри стерилизуемых
упаковок, размещенных на разных уровнях, против часовой стрелки.
Приложение 2.
Журнал учета работы автоклава
Время и t экспози- Результаты кон- Роспись исполни-
№ п/п Дата Наименование материала
ции троля теля
1 2 3 4 5 6
РАЗДЕЛ 09 БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ 345
Приложение 3.
Режимы обеззараживания различных объектов, потенциально инфицированных вирусами и
неспорообразующими бактериями (кроме микобактерий)
Концен Экспози
Объекты дезин- Дезинфицирующее сред-
№ Способ дезинфекции трация ция, Норма расхода
фекции ство*
% мин.
Полное
Лизоформин 3000 2,5 % 60
Медицинские погружение
изделия
однократного Замачивание в одном из Полное
1 Хлорапин 0,1 % 60
применения дезрастворов погружение
из пластика и
перчатки Полное
Раствор перекиси водорода 6% 360
погружение
Полное
Кипячение Раствор пищевой соды 2% 30
погружение
Посуда
1,5 % 30
лабораторная
Полное
2 (пипетки, Лизоформин -3000
погружение
пробирки, колбы, Замачивание в одном из
2% 15
шприцы и др.) дезрастворов
Полное
Раствор перекиси водорода 6% 360
погружение
Хлорная известь 60
200 г/л(кг)
Гипохлорита кальция (ДТС
60
ГК или ДСГК)
200 г/л(кг)
Гипохлорид кальция марки А
120
технический (ГКТ) 250 г/л(кг)
марки Б
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
346
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ