Слайд 1. Добрый день!

Тема моей работы – «Магнитная твердофазная

экстракция с диспергированием магнитного сверхсшитого полистирола
углекислым газом для концентрирования амфениколов»
Слайд 2. Амфениколы – класс высокоэффективных антибактериальных
средств, которые используют в медицине и животноводстве, вследствие чего они
попадают в продукты питания и объекты окружающей сред. В большинстве стран,
включая Россию, утверждены максимально допустимые уровни (МДУ) для
флорфеникола и тиамфеникола в продуктах питания, они приведены на слайде
(показать), а наличие остатков хлорамфеникола не допускается (показать).
Слайд 3. Проблемы, возникающие при определении амфениколов в
продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды связаны не только с их
низким содержанием в этих объектах, и сложным составом анализируемых матриц,
но и с постоянным ужесточением государственных требований к максимально
допустимым уровням этих веществ в продуктах питания.
Поэтому актуален поиск новых способов пробоподготовки, позволяющих
количественно выделять и концентрировать амфениколы.
Слайд 4. Среди новых способов пробоподготовки большой интерес
представляет магнитная твердофазная экстракция с диспергированием сорбента
углекислым газом, схема которой приведена на слайде. В этом методе
перемешивание раствора осуществляется не механически, а за счет углекислого
газа, который выделяется в результате кислотно-основной реакции (показать). При
этом чаще всего магнитный сорбент, гидрокарбонат натрия и кислоту прессуют в
таблетку (показать). Таким образом упрощается процедура концентрирования, а в
растворе создается буферная смесь, обеспечивающая требуемые рН и ионную силу,
для повышения эффективности извлечения аналитов.
В настоящей работе для выделения и концентрирования амфениколов
предложено использовать метод магнитной твердофазной экстракции с
диспергированием сорбента углекислым газом, который ранее для этой цели не
использовался. В качестве сорбента в этом методе предложено использовать
магнитный ССПС.
Слайд 5. Цель работы заключалась в оценке возможности применения
магнитного сверхсшитого полистирола в методе магнитной твердофазной
экстракции с диспергированием сорбента углекислым газом для выделения и
концентрирования амфениколов из водных растворов и разработке методик их
сорбционного выделения из продуктов питания и последующего определения
методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Слайд 6. Выбор условий концентрирования амфениколов методом МТФЭ с
диспергированием сорбента начинали с подбора соотношений компонентов,
входящих в состав таблеток (показать). Синтез магнитного сверхсшитого
полистирола проводили по методике, предложенной в лаборатории
концентрирования ранее (показать). Помимо магнитного сверхсшитого
полистирола в состав таблеток входили гидрокарбонат натрия и кислота.
Важно было установить, как влияют природа кислоты, соотношение кислоты
и основания в таблетке, масса таблетки, масса сорбента в составе таблетки на
степени извлечения амфениколов. Рассмотрим влияние этих факторов подробнее.
Слайд 7. Согласно литературным данным, в этом методе в качестве кислот
используют твердые при комнатной температуре кислоты Бренстеда. Нами в
качестве таких кислот были выбраны лимонная, винная и фталевая кислоты
(показать). На слайде (показать), приведен состав таблеток массой 1.5 г,
содержащих различные кислоты при одинаковом мольном соотношении кислоты и
гидрокарбоната натрия равном 1:1. Степени извлечения амфениколов при
использовании лимонной кислоты оказались значительно выше (показать),
поэтому именно ее использовали во всех дальнейших экспериментах.
На следующей диаграмме показано, как влияет на степень извлечения
амфениколов соотношение кислоты и основания в таблетке. Как видно из данных,
представленных на слайде (показать), наивысшие степени извлечения аналитов
были получены при мольном соотношении гидрокарбонат: лимонная кислота
равном 3:1 (показать). При таком соотношении время сорбции составляло около
3х минут.
Слайд 8. На следующем слайде приведены экспериментальные данные,
иллюстрирующие влияние массы магнитного сорбента (показать) в составе
таблетки и массы самой таблетки (показать) на степень извлечения. Установлено,
что степени извлечения увеличиваются с увеличением массы магнитного сорбента
в таблетке вплоть до 20 мг (показать). В последующих опытах использовали
таблетки, содержащие 20 мг МССПС.
При выборе массы таблетки изменяли количества гидрокарбоната натрия и
лимонной кислоты при сохранении их мольного соотношения относительно друг
друга, равного 3:1, масса магнитного сверхсшитого полистирола оставалась
постоянной и составляла 20 мг. Как видно из данных диаграммы (показать), масса
таблетки практически не влияет на степень извлечения амфениколов. В
последующих опытах было решено использовать таблетки массой 1.5 г.
Слайд 9. Далее варьировали объем анализируемого раствора. Сорбцию
проводили из 5, 10, 25, 50 и 100 мл водных растворов амфениколов. Степени
извлечения амфениколов не изменяются при увеличении объема раствора вплоть
до 25 мл, затем наблюдается их уменьшение (показать). Однако, количественного
извлечения при бóльших объемах, здесь приведены данные для 100 мл (показать),
можно добиться путем увеличения массы таблетки и магнитного сорбента в
составе таблетки в полтора раза (показать).
Слайд 10. В выбранных условиях проведено сравнение степеней извлечения
амфениколов в вариантах МТФЭ и МТФЭ с диспергированием сорбента
углекислым газом. Как видно из данных (показать), метод МТФЭ с
диспергированием сорбента углекислым газом сопоставим по эффективности с
методом МТФЭ и позволяет сократить времени сорбции.
Слайд 11. При выборе условий десорбции амфениколов варьировали объем и
природу элюента (показать). Десорбцию проводили в ультразвуковой ванне в
течение 5 мин. Результаты, представленные в таблице (показать), указывают на то,
что для количественной десорбции аналитов достаточно двух миллилитров
ацетонитрила.
Слайд 12. На основании полученных нами результатов были разработаны
методики определения амфениколов в речной воде, меде и молоке. Рассмотрим эти
методики подробнее.
Слайд 13. В речной воде определение проводили методом ВЭЖХ-УФ.
Разделение проводили на колонке Luna C18, в качестве элюента использовали
смесь ацетонитрила с водой, детекторование тиамфеникола и флорфеникола
проводили при 225 нм, а хлорамфеникола при 275 нм. На слайде приведена
хроматограмма разделения модельной смеси амфениколов (показать).
 Слайд 14. Образцы речной воды были отобраны в Серебрянном бору. В
целях увеличения чувствительности для анализа использовали образцы объемом
100 мл. Условия выделения и концентрирования амфениколов приведены на
слайде (показать).
Правильность и воспроизводимость определения амфениколов в речной воде
после сорбционного концентрирования методом МТФЭ с диспергированием
магнитного сверхсшитого полистирола углекислым газом подтверждены методом
“введено – найдено”. Результаты представлены в таблице (показать). На рисунках
(показать) приведены хроматограммы речной воды без и с добавками
амфениколов.
Слайд 15. Определение амфениколов в меде и молоке проводили методом
ВЭЖХ-МС/МС в Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории.
На слайде перечислены выбранные условия хроматографического разделения и
МС/МС определения: хроматограф (показать), колонка (показать), детектор
(показать) и подвижные фазы. Для идентификации аналитов использовался метод
мониторинга множественных реакций. На слайде приведены хроматограммы
чистых растворов амфениколов по выделенным ионам для двух ММР переходов
Слайд 16. Пробоподготовку образцов меда проводили по схеме,
представленной на слайде. На первом этапе мед растворяли в 25 мл воды, затем к
водному раствору добавляли таблетку, содержащую магнитный ССПС,
гидрокарбонат натрия и лимонную кислоту. После окончания выделения
углекислого газа сорбент отделяли при помощи магнита, раствор образца
отбрасывали, сорбент промывали водой и элюировали аналиты 2 мл ацетонитрила.
Элюат упаривали и перерастворяли в подвижной фазе.
Слайд 17. Степени выделения амфениколов оценивали с использованием
образцов меда, не содержащих определяемых аналитов на трех уровнях
концентраций (показать). Как видно из табл. (показать), предлагаемый метод
обеспечивает не только количественное выделение аналитов (показать), но
отличается хорошей воспроизводимостью (sr ≤ 0.15). Для хлорамфеникола,
флорфеникола и тиамфеникола пределы определения составили 0.3, 0.3 и 1 мкг/кг,
соответственно. Эти значения меньше максимально допустимых уровней этих
соединений в продуктах питания, что позволит применять предложенную методику
при анализе реальных образцов меда. Правильность методики оценивали методом
введено-найдено (показать). На слайде также приведены хроматограммы
экстракта меда с добавлением 100 нг/г амфениколов после очистки по
разработанной нами методике.
Слайд 18. Пробоподготовку молока проводили по схеме, представленной на
слайде (показать). Молоко представляет собой сложную систему, состоящую из
воды, белков, жиров, витаминов, солей, поэтому на первом этапе белки молока
осаждали при помощи соляной кислоты, получившуюся сыворотку отделяли
центрифугированием и к ней добавляли таблетку, содержащая только
гидрокарбонат натрия и магнитный сорбент. В этом случае выделение газа и
диспергирование осуществлялось за счет наличия в образце соляной кислоты.
Слайд 19. Валидация методики определения амфениколов в молоке
проводилась аналогично определению в меде. Как видно из данных (показать),
предлагаемый метод обеспечивает не только количественное выделение аналитов
из анализируемых проб (степени выделения равны 92-105%), но и отличается
хорошей воспроизводимостью (sr ≤ 0.14). Правильность методики оценивали
методом введено-найдено (показать).
Слайд 20. Таким образом, проведенное исследование показало
перспективность применения магнитного сверхсшитого полистирола в методе
магнитной твердофазной экстракции с диспергированием сорбента углекислым
газом при выделении и концентрировании амфениколов. Реализовано сочетание
предложенного способа концентрирования амфениколов с последующим
определением методом ВЭЖХ в речной воде, мёде и молоке.
Выводы представлены на слайде.
Слайд 21. Спасибо за внимание!