Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Дипломная работа
студента IV курса
Б.Д. Абубакирова
Научный руководитель
к.б.н., доцент
С.Е. Лескова
Владивосток
2023
Решение кафедры
Допустить к защите
ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................................5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...........................................................................................6
1.1. Биологическая характеристика объекта.............................................................6
1.2. Физико-географическая характеристика пролива Старка, о. Попова...........10
1.3. Физико-географическая характеристика б. Воевода Амурского залива.......13
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ...................................................15
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.......................18
3.1. Развитие личинок...............................................................................................18
3.2. Размерный состав личинок................................................................................25
3.3. Выживаемость дальневосточного трепанга в контролируемых условиях в
хозяйствах в пр. Старка и б. Воевода......................................................................29
4. БИОТЕХНОЛОГИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ДАЛЬНЕВОСТОЧНОГО
ТРЕПАНГА................................................................................................................34
4.1. Нормативно-правовая база, регламентирующая деятельность, связанную с
разведением и (или) содержанием, выращиванием, акклиматизацией
дальневосточного трепанга......................................................................................34
4.2. Технология культивирования дальневосточного трепанга на предприятии 36
ВЫВОДЫ...................................................................................................................42
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ................................................43
ПРИЛОЖЕНИЕ А.....................................................................................................46
ПРИЛОЖЕНИЕ Б......................................................................................................49
ВВЕДЕНИЕ
5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
6
КНДР и по всему заливу Петра Великого, включая расположенные на его
акватории острова и к северо-востоку за мыс Поворотный [1].
Тело дальневосточного трепанга вытянутое, вальковатое, в сечении почти
трапециевидное, брюшная сторона представлена ползательной подошвой – три
полосы амбулакральных ножек с присосками. На спинной стороне имеются
четыре ряда крупных конусообразных мягких выростов, несущих папиллы. У
некоторых представителей вида небольшое количество очень крупных
«шипов», у других многочисленные мелкие выросты. Передний конец тела
снабжен ртом, сдвинутым на брюшную сторону, и окруженным кольцом из 18–
20 щупалец; задний – терминально размещенным анальным отверстием [8].
Стенка тела очень толстая, эластичная, состоит из наружного эпидермиса,
толстого слоя соединительной ткани, слоя кольцевых мышц и внутреннего
целомического эпителия, образует хорошо развитый кожно-мышечный мешок
[22].
Скелет представлен микроскопическими известковыми телами –
спикулами, располагающимися в коже и стенках ряда внутренних органов, и
массивным окологлоточным кольцом [9].
На распределение вида оказывает влияние комплекс условий: глубина,
гидрологические характеристики, свойства грунта, наличие убежищ и др.
Минимальная глубина, на которой встречаются особи дальневосточного
трепанга – 0,5 м; молодь обнаружена и на меньших глубинах вплоть до
литорали. Для нижней границы массового поселения трепанга обычно
указываются глубины 30–40 м, поэтому его ареал имеет вид полосы,
ограниченной береговой линией. Находки его на глубинах, превышающих 100
м, носят единичный характер. Предпочитает защищенные от штормов бухты с
илисто-песчаными отмелями и каменистыми россыпями. Встречается трепанг в
зарослях морских трав и водорослей, поселениях мидий. Скопления обычно
наблюдаются на смешанных грунтах, вдоль границы каменистого склона с
песчаным грунтом, на каменистых россыпях [23].
7
Трепанг способен выдерживать значительное понижение содержания
кислорода в воде и остается жив при 25,94 % насыщения. Соленость воды на
значительной части ареала обычно лежит в пределах 32–34 ‰ (исключение
составляют приустьевые участки рек, но таких сильно опресненных мест
трепанг избегает). Несколько ниже соленость в Желтом море - в открытых
частях 33–31 ‰, а в заливах - меньше. Нижняя граница значений солености вод,
пригодных для обитания дальневосточного трепанга - около 20 ‰ [8].
По типу питания дальневосточный трепанг является – собирающий
детритофаг (грунтоед), трепанг захватывает околоротовыми щупальцами
верхний слой рыхлого осадка или частицы осажденной взвеси на поверхности
твердых грунтов.
Пищей для трепанга служат органические вещества, находящиеся в
грунте (песке). Одним из наиболее важных компонентов пищи
дальневосточного трепанга являются бактерии и иные микроорганизмы, на
долю которых в грунте приходится от 30 до 100 % органического углерода,
питание трепанга происходит непрерывно, днем и ночью. Анализ содержимого
кишечника дальневосточного трепанга показал, что трепанг потребляет
частицы песка, детрит, мелкие фракции морских растений, обломки раковин
моллюсков, частицы мелких ракообразных и других организмов, а также
частицы, встречающиеся на морском дне [21].
Усвояемость дальневосточным трепангом органического вещества из
грунта порядка 15 % от общего потребляемого объема пищи. Питание трепанга
происходит непрерывно, днем и ночью, а наполнение кишечника в течение
суток остается неизменным [1].
Трепанг – раздельнополое животное, но внешними морфологическими
признаками полового диморфизма не обладает. Пол определяется только при
вскрытии по цвету гонад: у самок – ярко-оранжевые, у самцов – светло-
бежевые. Оплодотворение у трепанга наружное. Половые продукты
выметываются в воду. Плодовитость трепанга довольно высокая и у отдельных
особей может достигать 77 млн икринок. Средняя плодовитость составляет 8–9
8
млн икринок. Нерест трепанга в заливе Петра Великого происходит с конца
июня по 20-е числа августа, сначала в полузакрытых бухтах, а затем в
открытых местах при температуре воды 18–19 °С. В этот период животные
собираются отдельными группами по 4–8 экз. в каждой. Нерест животных
единовременный и в целом у популяции в заливе Петра Великого продолжается
в течение 1,0–1,5 мес.
Начальная стадия развития трепанга проходит в верхних слоях воды.
Личинки развиваются при температуре 21–23 °С в течение 11–16 дней. В ходе
личиночного развития наблюдается 6 стадий: предаурикулярия (или
диплеврула), ранняя аурикулярия, поздняя аурикулярия, преддолиолярия,
долиолярия и пентактула [4].
9
1.2. Физико-географическая характеристика пролива Старка, о.
Попова
10
восточный вход в пролив находится между южной оконечностью полуострова
Кондратенко и расположенным в 8,8 кбт к SSW от нее скалистым и
обрывистым мысом Проходной, который является восточной оконечностью
острова Попова.
11
Назван пролив в честь адмирала Оскара Викторовича Старка,
исследователя Залива Петра Великого и морей Дальнего Востока, командира
Порт-Артура и участника русско-японской войны.
В проливе Старка много морских водорослей, в которых прячутся
креветки и небольшие крабы. На дне много морских звёзд, ежей, мидий,
гребешка и трепанга. Из рыб попадается пеленгас, морские бычки, камбала
[11].
12
1.3. Физико-географическая характеристика бухты Воевода
Амурского залива
14
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
о. Попова
15
В б. Воевода нерест произошел 23 июня 2022 г., при температуре воды 21
°С, как и в первом случае, естественным способом без стимуляции.
Нерест проходил в утреннее время, первыми приступили к вымету
половых продуктов самцы, их половые продукты послужили дополнительным
стимулятором для самок. После начала массового нереста, самцов отсаживали в
другую ёмкость, с целью удаления избытка сперматозоидов.
После нереста трепанга, воду с женскими и мужскими половыми
продуктами тщательно перемешивали и оставляли на 10–15 минут для
оплодотворения. Яйцеклетки опускались на дно, поэтому каждые два часа
производили механическое перемешивание воды в емкости с яйцеклетками.
Для определения плотности посадки из бассейнов ежедневно в одно и то
же время трубкой от поверхности до дна в 5 точках емкости отбирали пробы.
Для точности из каждой пробы в камере Богорова под бинокуляром
просматривали три выборки объемом 1 мл и определяли среднее значение
плотности, отмечали наличие или отсутствие уродливых форм и их
численность, параллельно контролируется ход оплодотворения половых
клеток.
После чего пересаживали личинок в емкости с чистой водой, температура
и соленость которых, была 21 °С и 32 ‰, соответственно. Температура воды
измерялась термометром, соленость - с помощью электронного солемера. Для
пересадки личинок используют капроновое сито с диаметром ячеи 100 мкм.
Воду с личинками сливали через сито, по мере накопления в сите личинок их
смывали в емкость с чистой водой для дальнейшего выращивания. Смена воды
во время эмбрионального развития не осуществляется, а далее меняют 1 раз в
день на ½ объема. Бассейны необходимо обеспечить аэраторами, но не
допускать пузырьков воздуха больше 2 мм. Поскольку при инкубации смена
воды не проводится, температурный режим должен поддерживаться путем
стабилизации температуры воздуха в помещении с помощью кондиционеров
или нагревательных приборов.
16
Через 3-е суток после оплодотворения личинки достигли стадии ранняя
аурикулярия и перешли на экзогенное питание. В это время их начали кормить
микроводорослями, выращивание которых началось в период сбора
производителей. Личинок кормили 2 раза в сутки в 10:00 и 21:00 часов. В
качестве кормов применяли следующие виды микроводорослей: Dunaliella
Salina, Chaethoceros Muelleri [18].
Для сбора осевшей молоди в б. Воевода использовали гофрированные
ПХВ-пластины, которые, помещали в бассейн с личинками, начиная с момента
массового перехода личинок на стадию долиолярии. На заводе «ВНИРО» в пр.
Старка в качестве субстрата применялась многонитчатая дель, которая
притапливается грузом.
Ежедневно проводили контроль роста и развития и плотности личинок.
Вели журнал учета рыбохозяйственной деятельности по выращиванию
гидробионтов в заводских условиях. В нем указывали дату, время нереста
трепанга, день и стадию развития личинок, их плотность, размеры, а также
состояние в процессе развития.
Перед подачей корм следует тщательно перемешать и затем через сито с
размером ячеи 100 мкм равномерно распределить по всей поверхности
выростного бассейна. Для более равномерного распределения корма при его
подаче необходимо слегка перемешивать верхний слой воды в бассейне.
В целях определения плотности и размеров личинок пробы брали
ежедневно с помощью бюретки, троекратно из разных мест емкости по 50 мл, а
затем пипеткой по 10 мл для просчета личинок в камере Богорова под
бинокуляром, с помощью микрометра определяли размеры.
Статистическую обработку данных, полученных в ходе исследования,
осуществляли на персональном компьютере с помощью пакета программ
Microsoft Office – Word и Excel.
17
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
18
Рисунок 6 – Личинка дальневосточного трепанга:
стадия гаструла
19
В условиях завода б. Воевода стадия диплеврула образовалась также
через двое суток после нереста и продолжалась одни сутки.
Перед тем как перейти на следующую стадию, личинка претерпевает
такие изменения, как сужение околоротовой и анальной части и появление
щитков. Наступает самая продолжительная стадия аурикулярия, которая
подразделяется на раннюю с уже сформированным пищеварением, среднюю и
позднюю стадии. Последняя, с пятью парами эластичных шаров и
редуцированными ротовой и анальной лопастей.
В проливе Старка стадию аурикулярия личинки прошли за 11 суток.
Ранней аурикулярии личинки достигли на четвертый день развития (рис. 8). На
аборальном конце тела образуются две известковые пластинки. Органы
пищеварения полностью сформированы, и личинки переходят на экзогенное
питание. Внешним признаком начала готовности к потреблению пищи является
сокращение глотки-пищевода. Желудок личинки имеет эллипсоидную форму,
стенки его тонкие, отчетливо видимые, в желудке всегда находится пища. Они
были относительно активны, имели нормальное развитие. Несколько личинок
отставали от общего развития.
20
На стадию средней аурикулярии личинки перешли на шестой день
развития (рис.9). Ауркулярии по-прежнему нормально развивались, но были
замечены личинки со слипшимся желудком. Далее личинки стремительно
увеличивалась в размерах, что оправдано появлением зародышевых спикул.
21
Рисунок 10 – Личинка дальневосточного трепанга:
стадия поздняя аурикулярия
23
заводе ВНИРО ситуация похожа. В этом случае самыми долгими стадиями
были средняя и поздняя аурикулярии, их продолжительность составила 6 и 3
сут, соответственно.
Однако, в случае развития личинок на заводе ВНИРО, стадия средней
аурикулярии длилась не 4, а 6 суток. А второй по длительности была стадия
поздней аурикулярии, её длительность составила 3 суток (в условиях б.
Воевода эта стадия длилась 2 суток).
24
3.2. Размерный состав личинок
Продолжи-
тельность Минималь- Максималь-
Средний
Место Стадия развития ный размер, ный размер,
размер, мкм
стадии, мкм мкм
сутки
Бластула 0,5 120 239,2 155,6±13,3
Гаструла 1 194,5 274 228±19,5
Диплеврула 1 320,6 406,5 374,5±6,6
Ранняя
2 396,2 553,4 493±7,9
аурикулярия
пр.
Средняя
Старка 6 460,8 752,4 655,4±16,1
аурикулярия
Поздняя
3 785,3 981,6 866±18,7
аурикулярия
Долиолярия 2 346,5 603,5 445±11,2
Пентактула 2 304,7 415,6 346,7±13,8
б. Бластула 0,5 135 270 169,7±17,9
Воево- Гаструла 1 200 275 227,8±21,4
да Диплеврула 1 375 425 395,8±5,2
25
Ранняя
2 450 750 567,9±14,4
аурикулярия
Средняя
4 600 1000 821,6±12,7
аурикулярия
Поздняя
2 775 1125 966,7±22,1
аурикулярия
Долиолярия 3 325 625 428,5±32,4
Пентактула 2 200 550 389,6±23,3
26
составила 374,5 мкм, а минимальная и максимальная 320,6 мкм и 406,5,
соответственно.
В условиях завода б. Воевода, личинка на стадии диплеврула имела длину
от 375 до 425, а среднее значение длины составило 395,8 мкм.
В бухте Старка, личинки на стадии ранняя аурикулярия достигали длины
от 396,2 мкм до 553,4 мкм, а среднее значение длины на данной стадии
составило 493 мкм. Перейдя на стадию средней аурикулярии, личинки
достигали средней длины 655,4 мкм. На этом периоде были зафиксированы
личинки с наименьшей длиной – 460,8 мкм, и с наибольшей – 752,4 мкм.
Личинки на стадии поздней аурикулярии отличались наибольшими
размерами, от 785,3 до 981,6 мкм, а средняя длина личинок числилась в районе
866 мкм.
В условиях б. Воевода минимальная и максимальная длина личинок на
стадии ранней аурикулярии составила 450 мкм и 750 мкм, соответственно, а
средняя – 567,9 мкм. Размеры личинок по мере их развития увеличивались и
уже на стадии средней аурикулярии они варьировали от 600 до 1000 мкм, а
среднее значение длины составило 821,6 мкм. Перейдя на стадию поздней
аурикулярии, личинки имели длину от 775 до 1125 мкм, а средний показатель –
966,7 мкм.
В проливе Старка, на следующей стадии долиолярия, личинки
принимают цилиндрическую форму, уменьшаются в размерах до среднего
показателя 445 мкм. Минимальная и максимальная длина личинок на данном
этапе составила 346,5 и 603,5 мкм, соответственно.
В бухте Воевода на стадии долиолярия личинки уменьшаются в размерах,
от 625 до 325 мкм, а средняя длина личинок на этой стадии составила 428,5
мкм.
Переход на стадию пентактула в проливе Старка началось через двое
суток после перехода на стадию долиолярия. Показатель средней длины
личинок на этой стадии уменьшился до 346,7 мкм, минимальная и
максимальная длина составила 304,7 и 415,6 мкм, соответственно.
27
На 14-й день после нереста в бухте Воевода личинки переходят на
следующую стадию развития - стадию осевшей молоди (пентактула). Размеры
пентактулы составили от 200 до 550 мкм, а среднее значение – 389,6 мкм.
Таким образом, можно увидеть, что рост личиинок трепанга на двух
заводах происходил примерно одинаково, без особых различий. Некоторые
личинки, выращенные в условиях б. Воевода незначительно больше тех, что
удалось вырастить в условиях пр. Старка.
28
3.3. Выживаемость дальневосточного трепанга в контролируемых
условиях в хозяйствах в пр. Старка и б. Воевода
29
Таблица 4 – Выживаемость дальневосточного трепанга в заводских условиях в
бухте Воевода
30
С наступлением стадии долиолярии на 14 сутки после нереста, в
бассейны с личинками трепанга были выставлены субстраты для оседания
личинок. В качестве субстрата применялась многонитчатая дель, которая
притапливается грузом. Через сутки начался переход некоторых личинок на
стадию пентактулы и оседание их на субстрат. Массовое оседание наблюдалось
через 16 суток после нереста, а на следующий день осели все личинки.
Доля выживших личинок снижалась на протяжении всего развития, но
наибольший скачок был при переходе личинок от стадии средней аурикулярии
до стадии поздней аурикулярии. Далее изменение численности шло без резких
скачков.
В заводских условиях ООО «Дальстам-Марин» также, как и на заводе
«ВНИРО», на второй день после нереста эмбрионы достигли стадии гаструлы, с
плотностью посадки 12,3 экз./мл (табл. 4) и начали переход на стадию
диплеврулы, выжило при этом 88,3 % личинок. Стадия диплеврулы
продолжалась одни сутки, плотность посадки составляла 4,7 экз./мл.
Когда личинки достигли стадии ранней аурикулярии плотность посадки
личинок составила 3,7 экз./мл, а на стадии средней аурикулярии плотность
сократилась до 2,05 экз./мл. Выживаемость на переходе от стадии средней
аурикулярии на позднюю была не высокой – около 48,5 %. От поздней
аурикулярии до долиолярии процент выживания составил 80 %, а от
долиолярии до пентактулы – 87,5 %. Общий процент выживаемости от
диплеврулы до пентактулы составляет 14,9 %, что больше средней
выживаемости по инструкции (рис. 15).
Доля выживших личинок снижалась на протяжении всего развития, но
наибольший скачок был при переходе личинок от стадии ранней аурикулярии
(рис. 14) до стадии средней аурикулярии. Далее изменение численности шло
без резких скачков.
На 12 сутки после нереста, в бассейны с личинками трепанга были
выставлены субстраты – гофрированные ПВХ пластины, для оседания личинок.
На следующие сутки начался переход некоторых личинок на стадию
31
пентактулы и оседание их на субстрат. Массовое оседание наблюдалось через
14 суток после нереста, а на следующий день осели все личинки.
32
Рисунок 15 – Общая выживаемость личинок дальневосточного трепанга
по инструкции и в заводских условиях пролива Старка и бухты Воевода.
33
4. БИОТЕХНОЛОГИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ДАЛЬНЕВОСТОЧНОГО
ТРЕПАНГА
34
разведения, выращивания, реализации и акклиматизации» (вступ. в силу с
01.03.2021);
Федеральный закон «О животном мире» от 24.04.1995 N 52-ФЗХ;
Федеральный закон «О рыболовстве и сохранении водных
биологических ресурсов» от 20.12.2004 N 166-ФЗ.
35
4.2. Технология культивирования дальневосточного трепанга на
предприятии
36
допускать резких изменений температуры и попадания на емкости с
производителями прямых солнечных лучей.
В случае если время перевозки животных от места отлова превышает 1-2
ч, необходимо обеспечить смену воды в сосудах (на 0,5-1,0 объема в час). Не
следует перевозить производителей при большой плотности. В зависимости от
времени, необходимого на доставку животных, плотность посадки их в
бассейны (емкости) должна составлять от 0,1 до 0,5 экз./л воды [7].
Этап № 2. Адаптация производителей
Отловленные производители перед началом стимуляции нереста должны
пройти температурную адаптацию. Исходная температура воды в бассейнах для
содержания производителей должна соответствовать донной температуре воды
в море в месте их отлова. Продолжительность периода адаптации может
составить от нескольких часов, если температура воды в момент отлова ниже
нерестовых температур на 1 - 2°С, до 2 суток, если температура воды в море
ниже 10-12°С. После периода адаптации температура воды в бассейнах с
производителями повышается до нерестовых значений.
В период адаптации и последующего содержания производителей при
нерестовых температурах следует обеспечивать благоприятные условия среды.
Для содержания трепанга должны использоваться бассейны, изготовленные из
нейтральных материалов: стекла, пищевого полиэтилена, капрона,
поликарбоната, фторопласта или цемента, покрытого эмалью. Конструкция
сосудов, которая используется в настоящее время в отделении нереста, вполне
соответствует требованиям, предъявляемым для нормального обеспечения
условий содержания производителей.
Плотность посадки животных не должна превышать 1 экз./10 л воды,
проток должен составлять до 3 объемов в сутки. Насыщение воды кислородом
должно поддерживаться на уровне 80–100 %. Ежедневно необходимо очищать
емкости от экскрементов и грязи [7].
Этап № 3. Стимуляция нереста трепанга
37
Так как у трепанга отсутствует половой диморфизм, визуально
определить пол животных не представляется возможным. Количество
производителей, подвергаемых стимуляции, определяется в зависимости от
количества имеющихся емкостей для выращивания личинок.
Следует учитывать, что нерест, как правило, происходит не у всех
голотурий одновременно, в некоторых случаях половые продукты выметывают
лишь 10–20 % самок. Для того чтобы гарантированно получить зрелые
яйцеклетки от нескольких самок, стимуляции одновременно должно быть
подвергнуто не менее 30 голотурий. Нерест самцов в результате проведения
стимуляции обычно проходит более массово, нерестятся от 50 до 100%
животных [15].
Плотность посадки животных при проведении стимуляции может
достигать 0,2 экз./л воды при условии увеличения смены воды до 6 объемов в
сутки.
Наиболее эффективным является метод температурной стимуляции
нереста путем постепенного повышения температуры воды.
После окончания периода адаптации температуру воды следует
постепенно, на 1–2 °С в сутки, повышать до 20–22 или 24–25 °С для
производителей, отловленных соответственно в северных или южных районах.
В дальнейшем она должна поддерживаться на этом уровне в течение всего
процесса стимуляции. Колебания температуры воды более чем на 1-2°С в сутки
нежелательны, поэтому необходим ее постоянный контроль [19].
Необходимо постоянно наблюдать за состоянием производителей. На
скорое наступление нереста указывает особое поведение животных, которое
проявляется в неоднократном поднимании и вращательном движении передней
части тела, ее раскачивании, набухании гонопора [7].
Этап № 4. Оплодотворение яйцеклеток и получение эмбрионов
Обычно нерест происходит в вечернее или ночное время. Как правило,
первыми начинают нереститься самцы.
38
Появление в сосудах спермы является дополнительным стимулом для
нереста остальных животных. Поэтому для дополнительной стимуляции
нереста может использоваться сперма из вскрытых самцов, добавляемая в воду.
Нерест самок может произойти в период времени от нескольких часов до
нескольких суток. Если не удалось заметить момент начала вымета яйцеклеток,
нерестящихся самок легко обнаружить по оранжевому пятну осевшей на дно
икры.
После начала нереста самок желательно перенести в отдельный сосуд с
чистой профильтрованной водой емкостью 20–30 л. Быстрый перенос
животных в другой сосуд не прекращает их нереста.
Выделение половых продуктов длится 40–60 мин, а иногда и более, в
зависимости от массы гонады и степени ее наполненности половыми клетками.
Затем зрелые половые продукты самцов (10–15 мл взвеси спермы цвета
разбавленного молока) добавляются в сосуд с самками [24].
Если нерест трепанга полностью прошел в бассейнах, в которых
осуществлялась стимуляция производителей, половые продукты можно собрать
путем фильтрации воды из сосуда через капроновое сито с диаметром ячеи не
более 100 мкм, сложенное в два слоя. Поток воды при этом должен быть
небольшим, по мере накопления на сите яйцеклеток она смывается
профильтрованной водой в 20-30-литровую емкость. Собранные половые
продукты перед помещением в сосуды для их инкубации и выращивания
личинок двукратно промываются на сите профильтрованной морской водой с
целью удаления избытка спермы и других нежелательных включений.
Для подсчета половых клеток самок содержимое емкости хорошо
перемешивается, после чего отбирается проба объемом 300–500 мл. Так как
концентрация клеток в такой пробе, как правило, слишком велика для прямого
подсчета, из этой пробы после повторного перемешивания отбирается вторая
проба объемом 1–10 мл, которая разводится чистой морской водой в 10–100 раз
(в зависимости от плотности). Под бинокуляром в камере Богорова
подсчитывается количество клеток в 10 мл разведенной пробы. Подсчет
39
повторяется 3–5 раз, затем рассчитывается среднее количество клеток в пробе.
Для удобства подсчета количество клеток в камере не должно превышать 100
шт. На основании полученных данных рассчитывается общее количество
полученных яйцеклеток.
Параллельно контролируется ход оплодотворения половых клеток.
Оплодотворение яйцеклеток трепанга наружное, синхронное, моноспермное и
происходит сразу же после их вымета. После образования оболочки
оплодотворенная яйцеклетка не меняет формы и сохраняет свои размеры. Как
правило, за время проведения подсчета (30–40 мин) количество
оплодотворенных яйцеклеток (образовавших перивителлиновую оболочку)
достигает 100 % [7].
Этап № 5. Эмбриональное развитие и условия инкубирования эмбрионов.
Оплодотворенные яйцеклетки помещаются в сосуды, в которых
осуществляется инкубация эмбрионов и в дальнейшем — выращивание
личинок. Для инкубации икры и выращивания личинок необходимо
использовать сосуды и оборудование, изготовленные из нейтральных
материалов. Не допускается использование материалов, содержащих медь,
свинец, кадмий, мышьяк.
Плотность посадки икры составляет 1,1–1,2 экз./мл воды. Икра трепанга
тяжелее воды, поэтому она оседает на дно сосуда. Для предотвращения
кислородного голодания икры в процессе инкубации необходимо осуществлять
механическое перемешивание и аэрирование воды. При аэрировании следует
избегать образования мощного потока мелких (диаметром 1–2 мм) пузырьков
воздуха, который повреждает оболочки клеток. Смена воды в период
эмбрионального развития не осуществляется [16].
Развивающиеся яйцеклетки очень чувствительны к колебаниям
температуры, особенно в течение суток. Поскольку при инкубации смена воды
не проводится, температурный режим должен поддерживаться путем
стабилизации температуры воздуха в помещении с помощью кондиционеров
40
или нагревательных приборов. Следует избегать воздействия на сосуды
прямого солнечного света.
Развитие эмбрионов должно контролироваться не менее 2–3 раз в сутки.
Дробление равномерное, полное начинается через 60-70 мин после
оплодотворения. Эмбрион стадии 8 бластомеров образуется через 135–150 мин
с момента оплодотворения, а стадии 32 бластомера — спустя 210 мин. Через 10
ч после оплодотворения образуется бластула, имеющая округлую форму.
Первоначально она находится внутри желточной оболочки. Через 1–2 ч у нее
образуются реснички, она начинает вращаться внутри оболочки и вскоре (через
1–2 ч) выходит из нее. Реснички позволяют эмбриону этой стадии
самостоятельно двигаться. Спустя 18–22 ч после оплодотворения у эмбриона
формируется архентерон, средняя длина зародыша при этом равна 290 мкм. В
процессе развития у эмбриона происходит образование мерцательных шнуров,
конфигурация которых придает ему определенную форму — форму
предличинки. На этом эмбриональный период развития заканчивается.
Гибель икры в процессе эмбрионального развития незначительна.
Количество аномально развивающихся эмбрионов не должно превышать 5 %. В
противном случае, партию следует выбраковывать, так как в ходе дальнейшего
развития большинство личинок, как правило, погибают [17].
Выращивание личинок трепанга осуществляется в тех же емкостях, в
которых инкубируется икра. Плотность посадки личинок на ранних стадиях
развития не должна превышать 1 экз./мл [7].
41
ВЫВОДЫ
42
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
43
11. Пролив Старка, восточная часть острова Попова. [Электронный
ресурс] URL: https://otdih-na-more.ad-a.ru/ob-ostrove/buhtyi/proliv-starka/ (Дата
обращения: 06.06.2023)
12. Шатковская О.В., Захарова Е.А. Получение молоди трепанга
Apostichopus japonicus в искусственных условиях в бухте Северная СТО
00471515-029-2011. ФГОУ ВПО «Дальрыбвтуз».: Владивосток, 2011. 136 с.
13. Гостюхина О.Б., Захарова Е.А. Особенности получения и
выращивания личинок и молоди дальневосточного трепанга (Apostichopus
japonicus) в заводских условиях. Владивосток: Тихоокеанский научный
исследовательский центр (ТИНРО-центр), 2002. 279 с.
14. Животные и растения залива Петра Великого / Карта-схема залива
Петра Великого // Жирмунский А.В. Ленинград: Наука, 1976. с.362
15. Сергеенко В.А., Куликова В.А. Размножение дальневосточного
трепанга Apostichopus japonicus Selenka в лагуне Буссе (о. Сахалин) // Труды
СахНИРО. 2003. 215 с.
16. Мокрецова Н.Д., Удалов А.Н. Некоторые аспекты выращивания
молоди трепанга в заводских условиях// Мат. Всерос. науч. конф. к 80-летнему
юбилею КамчатНИРО. 2012. 615 с.
17. Мокрецова Н.Д., Викторовская Г.И., Сухин И.Ю. и др. Инструкция по
технологии получения жизнестойкой молоди трепанга в заводских условиях.
Владивосток, ТИНРО-Центр. 2012. 81 с.
18. Кадникова И.А., Аминина Н.М., Мокрецова Н.Д., Рогов А.М.
Применение разных видов водорослей в составе кормов для молоди трепанга //
Вестник АГТУ. Сер.: Рыбное хозяйство. 2015. 68 с.
19. Гаврилова Г.С. Товарное выращивание дальневосточного трепанга.
Владивосток, ТИНРО-Центр. 2013. 99 с.
20. Мокрецова Н.Д., Викторовская Г.И., Сухин И.Ю. Современное
состояние культивирования дальневосточного трепанга в Приморье. Рыбное
хозяйство. 2012. 63 с.
44
21. Левин В.С. Дальневосточный трепанг. Владивосток, Дальневост. кн.
изд-во. 1982. 192 с.
22. Максимова С.Н., Ким А.Г., Федосеева Е.В., Полещук Д.В.
Характеристика трепанга как ценного объекта аквакультуры для получения
физиологически полезных продуктов //Изв. ВУЗов. Прикладная химия и
биотехнология. 2017. 98 с.
23. Масленников С.И., Подкорытов А.Г. Особенности распределения
дальневосточного трепанга на открытой акватории Амурского залива //
Научные труды Дальрыбвтуза. 2009. 54 с.
24. Матросова И.В., Евдокимов В.В. Сезонная характеристика
гонадогенеза трепанга дальневосточного Apostichopus japonicus Selenka // Изв.
ТИНРО. 2016. 122 с.
45
ПРИЛОЖЕНИЕ А
46
28.06.22 Средняя 2 750
6 аурикулярия 5 850
1 700
2,6 – среднее 650
значение
47
Долиолярия 0 625 Единичная
(большинство) 1 375 долиолярия
06.07.22 , пентактула 1 450
14 0,6 – среднее 325
значение
Пентактула 1 200
1 550
07.07.22 0 400
15 0,7 – среднее 325
значение
48
ПРИЛОЖЕНИЕ Б
49