Machine Translated by Google

ОБЗОРЫ

УДК 616.24-003.4 (056.7) : 577.21

Генная терапия муковисцидоза:

достижения и перспективы
М. А. Ломунова*, П. М. Гершович
АО «БИОКАД», Санкт-Петербург, 198515 Россия
*Электронная почта: lomunova@biocad.ru.

Поступила в редакцию 22.03.2023

Принята к печати 22.05.2023
DOI: 10.32607/actanaturae.11708.

РЕФЕРАТ Один из современных подходов к терапии наследственных заболеваний, вызванных дефи

цитом того или иного гена в другом случае является заместительной генной терапией, которая завершается
Дело в том, что функциональная брекет-гена вводится в клетку и ткань с помощью различных систем рождения.
С этой целью можно использовать вирусные частицы, несущиеся в себе в закрытом виде.
генные, так и различные невирусные методы доставки генетического материала с помощью липосом, на
ночастиц и др. В представленном обзоре рассматриваются молекулярно-генетические механизмы и генетические
мутации, приводящие к образованию муковисцидоза, а также описываются современные подходы к генной терапии
муковисцидоза, которые могут применяться для уменьшения этих мутаций и восстановления нормальной
структуры белка-переносцида ионов натрия и хлора в клетках эпителия. фоновой системы. Восстановление экспрессии
этой белки приводит к нормализации трансмембранного транспорта этих ионов и воды, а, следовательно, и к снижению
вязкости внешних жидкостных путей – одной из патологических причин этого заболевания. Также обсуждаются
результаты различных доклинических и научных исследований.

генотерапевтических препаратов, что позволяет сделать возможные выводы о перспективах примене

ния генной терапии при муковисцидозе.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА генная терапия, муковисцидоз, CFTR, вирусный вектор, наночастицы. СПИСОК
СОКРАЩЕНИЙ МВТР (CFTR) – трансмембранный регулятор муковисцидоза; НСД – нуклеотиды, связывающие домен;
ТМ – трансмембранный; МСС – мукоцилиарный клиренс; КИ – уважение ис следования; Ad – аденовирус (Adenovirus);
AAV – аденоассоциированный вирус (Adeno-Associated Virus); LV – лентивирус (Lentivirus); ЛНП – липосомные
наночастицы (Liposomal NanoParticles); FDA – Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и
медикаментов.

ВВЕДЕНИЕ [2, 3]. Нарушение функций этого белка приводит к

Муковисцидоз, или кистозный фиброз (МВ, муковисцидоз),
– одно из наиболее известных моногенных заболеваний.
Кистозный фиброз – системное врожденное заболевание,
вызывающее мутации в гене, кодирующем белок-регулятор
трансмембранной проводимости (МВТР) [1]. В основе
молекулярного механизма патогенеза заболевания
функция Лезвия или полное отсутствие кода
дисируемого генома CFTR (регулятор трансмембранной
проводимости муковисцидоза) белка-переносчика ионов
натрия и хлора. Этот ионный канал обеспечивает
нормальное функционирование клеточного эпителия в
легких, кишечнике, поджелудочной железе и не других
органах. МВТР регулирует перенос ионов натрия и хлора
через мембрану, а также во время дневного обмена в
клетках секреторного эпителия в индивидуальном
состоянии организма: наружной, желудочковой, но-
кишечной, гепатобилиарной и репродуктивной.
развитию прогрессивной природы, которая проявляется
поражением легких (дыхательная недостаточность),
поджелудочной железы и печени (свидетельствует о
возможном развитии цирроза), а также повышении
концентрации электролитов в потовом секрете.
Выявляют несколько форм
муковисцидоза: в 75– 80% случаев встречаются
смешанные (ле гочно-кишечная), в 15– 20% случаев
диагностируется ютлегочная форма и в 5% случаев –
кишечная. Наиболее тяжелой считается смешанная
форма му ковисцидоза, поскольку она включает в себя
клинические проявления как легочной, так и
кишечной форм. Помимо этого, сравнительно редко
также можно наблюдать мекониальную кишечную
непроходимость (15– 20% случаев), отечно-анемическую,
цирротическую и другие формы. Тем не менее, не обходимо
заметить, что о таком делении на раз

20 | АКТА НАТУРА | ТОМ 15 № 2 (57) 2023 г.

Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ
О частной форме муковисцидоза можно говорить лишь
условно, поскольку при выраженном порении
респираторного тракта обычно наблюдаются так же и
нарушения органов пищеварения. То же самое происходит
и при кишечной форме муковисцидоза – происходит с
поражением кишечника, развивается бронхолегочная
система. Основные параметры, к которым может приводить
муковис цидоз: легочные и желудочные цистозы,
кишечная непроходимость, гиперактивность бронхов,
отеки, абсцессы, пневмо- и пиопневмоторакс, «легочное
сердце», гайморит, цирроз печени, выпадение прямой
кишки, задержка в развитии, бесплодие, сахарный диабет
и др. [2].
По статистике в России ежегодно рождается при
мерно 650 человек с диагнозом муковисцидоз [4], при
этом в мире соотношение составляет один но
врожденный с муковисцидозом на 2000– 5000 здоровых
детей. В США и Европе на данный момент считывается
около 70 000 больных муковисцидо зом [5]. У мужчин и
женщин встречающиеся заболевания происходят с
одинаковой динамикой. Диагноз муковисцидоз обычно
ставится в первые годы жизни ребенка, по скольку
поражение всех органов (особенно дыхания и кишечника)
становится очевидным уже на начальных стадиях
развития. У больных наблюдаются множественные
нарушения почти всех систем организма: передней,
развитой, опорно-двигательной, нервной, сердечно-
сосудистой и др. У 85–90% пациентов наблюдается
экзокринная недостаточность поджелудочной
железы (дисфункция протоков). Средняя
продолжительность жизни больных может составлять
30–40 лет, при этом качество жизни напрямую зависит
от объема специализированной помощи и
симптоматического лечения. Несмотря на это, до 90%
больных муковисцидозом умирают от легочных
заболеваний и связаны с ними [3].
Поскольку причиной муковисцидоза является
мутация в гене CFTR, полностью вылечить эту болезнь
в арсенале современной медицины со мной сегодня
невозможно. До последнего времени лечение
муковисцидоза было исключительно симптоматическим:
разжижение слизи (муколитики), расширение бронхов,
противовоспалительная терапия, антибактериальная
терапия, а также заместительная терапия с помощью
ферментов (при кишечной форме заболевания). Все эти
меры не увеличивают продолжительность жизни и лишь
на какое-то время улучшают качество жизни
пациентов [6]. Появление препаратов-модуляторов МВТР
(Vertex Pharmaceuticals) для патогенетической терапии
щественно увеличено продолжительность жизни
больной муковисцидозом, однако этот подход также
Не используйте причину заболевания, обрекающую
пациента на длительную пожизненную терапию.
В свою очередь, использование методов генной
терапии, направленных на восстановление функций гена
CFTR в эпителиальных клетках, открывает новые
перспективы в развитии муковисци.
доза возникла с другими тяжелыми наследственными
заболеваниями, где генная терапия уже показала свою
эффективность и безопасность. Быстрое развитие
технологии геномного редактирования дает надежду
на развитиеотропной терапии, позволяющей
корректировать мутацию CFTR, которая вызывает
заболевание, и тем самым улучшает качество и
продолжительность жизни этих больных
муковисцидозом.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ
РАЗВИТИЯ МУКОВИСЦИДОЗА
МВТР – трансмембранный белок, локализованный на
апикальной поверхности эпителиальных клеток.
Связывание этого белка с АТР приводит к изменению
его конформации внутри белкового канала, по
вызывающему ионам Cl- выход из клетки согласно
прогнозу. Окончание гидролиза АТР приводит, в свою
очередь, к закрытию канала (рис. 1).
Известно, что для поддержания нормального
осмотического давления и циркуляции жидкости в
межклеточном пространстве вблизи наружных мембран
клетки необходимо расположение ионов натрия и хлора.
При этом одно из условий необходимо для развития
клеток эпителия легких, ки
Шечника, потовых желез и других органов, происходит
постоянный контролируемый ток ионов хлора через
мембрану. Нарушение переноса ионов хлора через мембрану
клетки приводит к уменьшению ее проницаемости для
молекул воды и, таким образом, к дегидратации, что
вызывает повышение вязкости предлагаемого секрета.
Поэтому при муковисцидозе в первую очередь поражаются
именно эти органы: на поверхности эпителия содержится
густой вязкий секрет, который забивает бронхолегочные
пути и протоки железа, нарушая таким образом
нормальное функционирование органов [2].
Секретация и абсорбция – две противоположности
Процесс транспорта электролитов, которые регулируют
вязкоупругие свойства жидкой смеси секретов
экзокринных органов. Согласно накопленным данным,
нарушение транспорта электролитов при муковисцидозе
происходит на нижних нижних уровнях: как на уровне
абсорбции соли, так и на уровне абсорбции жидкости и
ее секреции, осредпованной анионами [8]. При снижении
содержания ионов
хлора в межклеточном пространстве происходит
активация эпителиального натриевого канала ENaC
ТОМ 15 № 2 (57) 2023 | АКТА НАТУРА | 21
Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ

МВТР снаружи Рис. 1. Схематическое

МВТР кл.
закрыто открыто клетка представление структуры
белка МВТР в закрытых и
открытых положениях. ТМ
Клеточная – трансмембранные до мены,
мембрана образующие канал для
транспорта ионов Cl- . НСД1
и НСД2 – нуклеотиды,
связывающие внутриклеточные
кл. кл.
кл- Внутри домены 1 и 2. Р – регулятивный
ТМ клетка
АТР домен с сайтами
НСД1 фосфорилирования (Ф). Для
АТР
кл.
кл.
активации канала необходимы
НСД2 остатки фосфорной кислоты в
Р регуляторном домене.
Р Открытие канала происходит
Ф
посредством взаимодействия
с трансмембранными
доменами при соединении и
гидролизе АТР внутриклеточными
менами НСД1 и НСД2 [7]

(эпителиальный натриевый канал), что приводит к увеличению МСС 60

головы Na в камере (рис. 2). Это, в свою очередь, приводит к
усилению поглощения ио нов Cl– и воды и нарушению
трансэпителиальной электрической разности потенциалов. В
МСС 0
результате происходит приток жидкости на поверхность
ЛСА

дыхательных путей, увеличивается ее вязкость и резко

снижается уровень клиренса на верхности реснитчатого
эпителия (рис. 2). В легких такие процессы приводят к
обезвоживанию дыхательных путей и, соответственно, к
снижению очищающей активности ресничек и работают в целом. МВТР ENaC МВТР ENaC
Помимо этого, застой слизи также способствует быстрому
развитию инфекции [9].

Рис. 2. Толщина слизистого слоя (ASL, поверхностная

Выделяемый секрет представляет собой полимерную сетку,
состоящую из О-гликозилированных гликопротеинов (муцинов),
секретируемых в виде нитей и образующих пористую структуру
[11, 12]. Вязкоупругие свойства секрета и его структура в
нормальном состоянии изменены таким образом, чтобы
улавливать и удалять вдыхаемые частицы и бактерии. При
ковисцидозе повышенная вязкость приводит к образованию
бляшек муцина и уменьшению размера пор. В нормальном
диаметре секрет составляет 0,2–
1 мкм, а при включении не
превышает 0,1 мкм. Это приводит к тому, что нейтрофилы,
обеспечивающие первую линию защиты иммунной системы, не
могут мигрировать через слой слизи. При этом на уплотненной
слизи бактерии состоят макроколонии, которые особенно
устойчивы к воздействию иммунной системы и антибиотиков,
что еще больше усложняет терапию [13].
жидкость дыхательных путей) во внешних путях в
последовательном состоянии (слева) зависит от нормального
изменения каналов МВТР и ENaC. МСС – мукоцилиарный
клиренс или, другими словами, скорость очистки верхних
путей путем движения слизи по поверхности эпителия (в
мкм/с). В случае нарушения работы МВТР при муковисцидозе
(справа) из-за дефектного МВТР снижение количества ионов
хлора приводит к быточному транспорту ионов натрия,
что приводит к осушению поверхности эпителия верхних
путей, повышению вязкости секрета и слипанию ресничек. При
этом секретность также вызывает воспалительные
реакции, вызывающие размножение в непатогенных
исследованиях [9, 10]
Хронические инфекции, вызванные беспрепятственным
размножением поражений на поверхности передних путей,
являются основной причиной смертности при муковисцидозе
[14].

22 | АКТА НАТУРА | ТОМ 15 № 2 (57) 2023 г.

Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ

кл. HCO3 -
Cl- Cl- Cl- Cl
ОЗС -3- кл кл.
кл- кл- HCO3 - кл- кл- HCO3 - кл.-
HCO3 - HCO3 -

Класс
я II III IV В VI
мутации

Нарушен Снижена Снижено

Нарушено Белок
Нарушен количество
Дефект белка синтез белка открытие проводимость нестабилен
канала канала белка
транспортный белок на мембрану

Надо
3489+10кб
частная G542X F508del G551D Р117Х 4326delTC
С>Т
мутация

% больных с
хотя бы одной 22 88 6 6 5 5
мутацией

– ВХ-809, – – –
Терапия ВХ-770
ВХ-661

Рис. 3. Типы мутаций МВТР и терапевтические препараты, одобренные FDA, для изменения изменения, обусловившего мутации
мутаций. Больные муковисцидозом могут иметь более одной мутации. Адаптировано из [23]

МУТАЦИИ ГЕНА CFTR
Муковисцидоз – это аутосомное рецессивное заболевание,
вызванное мутациями в гене SFTR, идентифицированное в
1989 году по результатам исследования лей под
руководством Лап-Чи Цуй [15, 16]. Ген
CFTR расположен на хромосоме 7, он состоит из 27 экзонов и
кодирует белок из 1480 аминокислотных элементов. На
данный момент более 2000 мутаций в гене CFTR, и список
мутаций постоянен, но выполняется, но только 250–
300
из них приводят к развитию закономерностей, причем
только 20 из этих мутаций встречаются достаточно
часто (более чем у 0,1% больных) [17] . Выделяют пять
классов мутаций (некоторые из наиболее удачных семи) в
соотношении с типом дефекта, который они вызывают (рис. 3).
Мутации I–
III классов (так называемые тя желые)
ассоциированы с более глубокими нарушениями функций
МВТР, IV–
V классов (мягкие) ассоции
рованы с сохранением остаточной функции белка МВТР [18].
Разные мутации гена CFTR могут приводить к нарушению
синтеза, процесса, стабильности и изменения белка МВТР,
а также его внутриклеточного транспорта из
эндоплазматической ретикулума в комплекс Гольджи и
деградации, что приводит к разнообразным фенотипическим
проявлениям [19].
Мутации I класса
Мутации I класса (G542X, W1282X, R553X, 2143delT, 1677delTA)
обнаруживаются примерно у 10% пациентов с муковисцидозом.
Если ген содержит мутацию этого класса, то белок МВТР не
синтезируется или синтезируется его укороченный вариант,
который вызывает деградацию. К мутациям этого
класс относится к нонсенс-мутациям, мутациям сдвига
рамки считывания и мутациям участка сплайсинга,

ТОМ 15 № 2 (57) 2023 | АКТА НАТУРА | 23

Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ
движущие силы к образованию стоп-кодона, перед
временной терминацией синтеза белка и образования
фрагмента, который не может выполнять функцию
изначально синтезируемого белка [19].
Мучения II класса
Миссенс-мутации класса II наиболее распространенными у
пациентов с муковисцидозом (del F508, del I 507, N1303
K, S541 I, S549 R). Среди мутаций II класса самой частой
является F508del – делеция остатка фенилаланина
в положение 508. Примерно 70% пациентов вызывают
мутации в их копиях гена CFTR (гомозиготы), у 90%
пациентов наблюдается хотя бы один мутантный
аллель [20]. Наиболее тяжелое течение заболевания
наблюдается
У гомозиготных пациентов, при этом у гетерози есть
CFTR-F508del с одной нормальной копией гена, имеются
признаки заболевания. Мутация
F508del вызывает неправильное сворачивание
(фолдинг) белка и последующий его процесс цессинга, в
результате чего большинство мутантных молекул не
достигает клеточной мембраны и уничтожается.
Необходимо отметить, что около 1% таких молекул
имеют один и тот же способ создания клеточной
поверхности, но из-за образования повреждений под
видимостью доменов, необходимых для открытия и
закрытия канала, эффективность функционирования
белка остается очень низкой [21]. Кроме того, за
несколько минут белок удаляется с поверхности и
уничтожается [22].
Мутации III класса
Примерно у 4–5% больных с муковисцидозом встречаются
также миссенс-мутации III класса са (G551 D, G1224 E,
S1255 P), которые приводят к нарушению регуляции
открытия ионного канала. Белок с такой мутацией
достигает апикальной мембраны, но проводимость и
проницаемость канала нарушаются. Среди мутаций
этого класса наиболее распространена замена остатка
глицина в положе нии 551 домена NBD1 на аспарагиновую
кислоту (G551D). Это изменение приводит к тому, что
канал остается строго закрытым [19, 21].
Мутации IV класса
Мутации IV класса встречаются наиболее редко (около
1,7%). Эти мутации (R117H, R334W, R347P) снижают
транспорт ионов хлора через открытый канал МВТР [9].
Эти изменения приводят к замене положительно
заряженных элементов аргинина в ка нале МВТР на
незаряженные остатки (предполагается, что для
транспортировки через канал ионов Cl не обходится
наличие в нем группы зарядов). У пациентов с
изменениями этого класса наблюдается
24 | АКТА НАТУРА | ТОМ 15 № 2 (57) 2023 г.
ся, как правило, легкое для болезни, чаще всего без
легочных и панкреатических заболеваний.
Мутации классов V– VI.
В некоторых случаях клиницисты также обнаруживают
мутации классов V–VI, при функциональном белке МВТР
вырабатывается, однако наблюдается замедление
синтеза этого белка и его быстрое удаление с поверхности
клетки, в результате чего клетка содержит
недостаточное количество белка. Мутации этого
класса приводят к сравнительному лечению
заболевания [17].
ПАТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ МУКОВИСЦИДОЗА На
сегодняшний день FDA (Управление по контролю за
продуктами и лекарствами) одобрило схему терапии
муковисцидоза с использованием мелких молекул,
которые обеспечивают сохранение нормального уровня
хлорных веществ (модулято ры МВТР). Препараты под
торговыми марками Kalydeco (VX-770), Orkambi (VX-809),
Symdeco (VX-661) разработаны американской компанией
Vertex Pharmaceuticals (рис. 3). Прием Калидеко/Калидеко
(ивакафтор/ивакафтор) одобрен в США, Великобритании и
ЕС для лечения муковисцидоза у пациентов старше 6–
12 месяцев, содержащих одну из 10 мутаций в гене SFTR
(G551D, S1255P, G178R, S549N, G1244E, S1251N, G1349D ) . ,
S549R, G551S или R117H). Препарат Оркамби/ Оркамби
(лумака фтор + ивакафтор / люмакафтор + ивакафтор)
применяется для лечения пациентов старше 12 лет с
двумя копиями мутации F508del в гене SFTR. Симдеко/
Symdeco (тезакафтор+ивакафтор/тезакафтор+ивакафтор)
предназначен для лечения пациентов старше 6 лет. В
ходе скрининга клеточного эпитата бронхов у
пациентов, гомозиготных по мутациям SFTR-F508del,
установлено, что Симдеко в сочетании с ивакафтором
повышает транспорт хлорида до уровня 15,7% от нормы.
Это очень дорогие препараты (от 1 млн рублей за 1
упаковку), которые не приводят к полному излечению,
т.е. обеспечивают только поддерживающий эффект. Тем
не менее, благодаря этой терапии за последнее время
удалось достичь прогресса: средняя
продолжительность жизни больных муковисцидозом
увеличилась более чем в 2 раза.
ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ МУКОВИСЦИДОЗА
Открытие модуляторов МВТР, корректирующих ра боту
дефектного белка, гарантия качества и про
продолжительность жизни, а также дало надежду
большое количество больных муковисцидозом. Однако
примерно 10% пациентов к модуляторам МВТР не
чувствительны, поскольку у них МВТР
Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ

Таблица 1. Некоторые КИ генной терапии муковисцидоза*

Клинические
Способ доставки гена CFTR Метод Ссылка
исследование
Назальное введение, эндобронхиальное NCT00004779
Аденовирус (Реклама) NCT00004287 [26–
29]
введение
Введение в гайморовы пазухи, назальное NCT00073463
Аденоассоциированный вирус (ААВ) NCT00004533 [30–
32]
введение, эндобронхиальное введение
Лентивирус (LV) Интраназальное введение (перфузия) Подготовка КИ [33]
NCT01621867
Наночастицы (липосомы), Аэрозольное, путем небулайзера, NCT00789867
NCT00004471 [34–
38]
синтетические полимеры интраназальное.
NCT00004806
Одноцепочечный антисмысловой NCT02564354
Интраназально NCT02532764 [39]
РНК-олигонуклеотид (QR-010)

*Все КИ завершены.

либо вообще не синтезируется, либо синтезируется на
слишком низком уровне. Кроме того, по данным
клинических исследований (КИ), 10– 20% больных
муковисцидозом обладают индивидуальной
непереносимостью препаратов-модуляторов [24].
Поэтому в настоящее время разрабатываются новые
подходы к индивидуальному муковисцидозу, в
частности, основанные на методах генной терапии, с
помощью которых нуклеиновые кислоты доставляют в
клетки больного с целью воздействие на первичную
(генетическую) причину болезни и, таким образом, на
протяжении болезни. . Несмотря на то, что дозировка
муковисци нарушается во всех органах, основным
объектом генной терапии этого заболевания являются
легкие, поскольку летальный исход в 90– 95% случаев возникает.
ев связано именно с тяжелым поражением легких.
Основная стратегия генной терапии муковисцидоза
обеспечивает доставку гена CFTR в передние
эпителиальные пути клеток больных. При этом при выборе
способа доставки гена в клетку необхо димо учитывать, эффективных методов генной терапии муковисцидоза [5].
что наличие густого секрета в бронхиолах значительно
снижает эффективность введения гена с помощью
аэрозоля. Этот секрет закладывает дополнительные
ограничения по проведению генной терапии, поскольку
этот вектор должен не только приводить к эффективной Первые КИ генной терапии муковисцидоза были направлены
экспрессии функционального белка CFTR, но и дать
возможность проникнуть в клетку подлизи стых желез
и в поверхностный эпителий с управляемой, покрытой
плотным слоем секрета [2] .
Начиная с 1993 года, лечение КИ-генотера
певтическими препаратами, в целевых генах находится
в эпителии носовых и бронхиальных передних путей
больных муковисцидозом с ис.
пользованием как вирусными, так и невирусными си
стебель. На сегодняшний день всего проведено более 27
КИ генной терапии муковисцидоза, в которой
были обработаны более 600 пациентов, однако все они по
той или иной причине пока не имели значительных
значений (табл. 1).
Необходимо отметить, что постоянное обновление
эпителия верхних путей обеспечивает повторную
доставку целевого трансгена в клетку. Это
ограничивает использование систем на основе вирусных
векторов, так как их повторное внедрение часто
вызывает иммунный ответ и элиминацию вирусов. Кроме
того, недостаток подкисления in vivo
моделей для тестирования эффективности новых
векторов, а также контролирует проведение исследований
в данном направлении. Таким образом, несмотря на
первоначальный настрой, до сих пор нет ни одного
одобренного FDA метода генной терапии муко висцидоза
[25]. Тем не менее, усовершенствованные технологии
создания новых векторов, понимание различных
серотипов векторов и создание новых in vivo моделей
муковисцидоза дают надежду на разработку более
Доставка трансгена с помощью векторов на
основе аденовируса (Реклама)
на использование для доставки нормальной копии гена
клетки в эпителии дыхательных путей (табл. 1). В первом
поколении рекламы было проведено два КИ [26– 28, 40, 41],
и теперь, несмотря на эффективность данного
интервала на клеточных моделях и in vivo, результаты
КИ поставили под вопрос безопасности применения этих
векторов у человека. Врожденный и клеточный им
Мунитет препятствовали долгосрочному
го эффект при использовании векторов на основе
аденовируса: наблюдалось увеличение альвеоляра
ного подъема с повышением содержания

ТОМ 15 № 2 (57) 2023 | АКТА НАТУРА | 25

Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ
серотип-специфических нейтрализующих антител, что
делало неэффективным повторное введение в русские
частицы [23].
Правила для доставки трансгенов использовали
улучшенную рекламную платформу – хелперзависимость
нашего аденовируса (HD-Ad) от удаленных вирусных генов,
что снижает эффективность Т-клеточного ответа от
вирусного белка, который наблюдался у рекламных
векторов первого поколения. Тем не менее, оста
необходимо наличие адаптивного иммунного ответа
CD8+ Т-клеток через презентацию HD-Ad-эпитопов
дендритными клетками [42].
В воздухе HD-Ad применяется с применением
лизофосфатидилхолина (LPC) для разрушения секрета
толстого слоя и улучшения доступа к базолатеральной трансдуцированных CFTR-/- клетках показало
поверхности клеток, устойчивой к инфекции.
Посредством этой стратегии стигнута более
длительная экспрессия трансгена в
vivo по сравнению с первым поколением Ad, также
продемонстрирован эффективный перенос гена в внешние
пути мышей, свиней и хорьков [43, 44].
Один из вариантов модификации Ad-платформы –
использование транспозонов piggyBac, которые обещают
осуществить перенос гена методом «вырезать и
вставить» («вырезание и вставка»). Опосредованная
транспозой piggyBac-вставка в рекомбинантный Ad
привела к созданию гибридного вектора piggy Bac/Ad,
использование которого эффективно экспрессирует
трансген в легких свиней [45].
Еще один подход к терапии муковисцидоза, который
еще предстоит обсудить, –
использование таких инструментов геномного редактирования патологических бактериальных муковисцидоза.
тирования, как TALEN (эффекторные нуклеазы, подобные
активаторам транскрипции) и CRISPR (кластерные
регуляторные интервалы между короткими палиндромными трансгена (что может быть связано с невозможностью
повторами)/Cas9. Эти появившиеся относительно
недавно молекулярные методы редактирования генома
уже имеют свою эффективность и надежность [46].
Относительная безопасность и длительность заряда
капсида век торов HD-Ad (36 т.п.н.) позволяют
создавать одно временно несколько конструкций,
что дает возможность использования сайт-
специфических нуклеаз для прицельного встраивания
доставляемого гена строго в соответствии с локусом.
Такая специфическая вставка правильной копии гена
в конкретный локус вместо коррекции мутированного
белка дает возможность с точки зрения терапии
муковисцидоза независимо от типа мутаций гена CFTR.
Один из примеров использования этого обстоятельства проведение более эффективных исследований.
приведен в работе Эмили Ся и соавт. [47], в котором
экспрессионную кассету с геном CFTR
Встроили в локус AAVS1 in vitro с помощью век тора HD-
Ad, незначительного также нуклеазу TALEN.
26 | АКТА НАТУРА | ТОМ 15 № 2 (57) 2023 г.
В клетках, трансдуцированных вектором с этой
кассетой, обнаруживалась экспрессия мРНК белка МВТР
и восстановление функций этого белка [47]. Похожий
подход применяется in vitro и in vivo с использованием
HD-Ad-вектора для точной доставки CRISPR/Cas9 и
копии ДНК в локусе GGTA1 генома эпителиальных
клеток верхних путей свиньи. Показано, что
трансдуцированные экспрессируют функциональный
МВТР на уровне мРНК клетки и на уровне белка как in
vitro, так и в моделях.
в естественных условиях. Также для оценки экспрессии
белка МВТР после трансдукции с помощью CRISPR/Cas9,
создателя генно-инженерной клеточной линии CFTR-/-
эпителия свиней. Измерение активности канала МВТР в
восстановление функции анионного транспорта [48, 49].
Эти данные предполагают появление нового подхода к
генной терапии муковисцидоза с использованием
нуклеаза уже в ближайшем будущем.
Доставка с помощью аденоассоциированных (AAV)
векторов.
Замена мутировавшего гена белка МВТР его
функциональной копией оказалась довольно сложной
задачей, поэтому после неудач с векторами первого
поколения начался поиск альтернативных вариантов
системы доставки трансгена в целевые клетки. Отчеты
о проведенных КИ с вектором AAV2 (табл. 1) показывают,
что введение вектора в легкие дозы муковисцидов не
вызывает значимых факторов, однако эффективность
вызывала разочарование: ни один из КИ не показал
инновационной экспрессии МВТР или коррекции
Причинами возникновения положительного результата
могли стать недостаточная эфективность встройки
проникновения вирусных частиц через плотный слой
секрета в верхних путях), недостаточная сила
промотора в составе экспрессионной кассеты или иммунный
ответ хозяина на введение вирусного вектора [50] .
Поэтому в последние годы все работы были направлены на
улучшение тропизма AAV-векторов, поиск но вых
серотипов, новых промоторов, путей усиления экспрессии
целевого белка и персистенции в легких, а также
подходов к снижению иммуногенности. Одновременно с
этим ходом развития релевантных моделей in vivo ,
включающих свиней [51], овец [52], хорьков [53] и мышей
[54], которые, согласно традиционным тестам in vitro на
эпителиальных клетках человека, обеспечивают
доклинические исследования генной
терапия муковисцидоза.
Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ

Например, с помощью in vivo с е л е к ц и был обнаружен достигла 80%, при этом данный серотип имеет меньшую
AAV-вирус с высоким тропизмом мом к эпителию верхних иммуногенность по сравнению с AAV2-.
путей свиней [51]. Усовершенствование капсида AAV2H22 векторами, что делает AAV6 одним из наиболее
на основном ве AAV2 с пятью точечными изменениями эффективных векторов для генной терапии
привело к 240-кратному повышению эффективности муковисцидоза и других легочных заболеваний [61].
специального инфекционного эпителия дыхающих Кроме того, с целью продолжить повышение
путей свиней. Одним из основных параметров оценки эффективности трансдукции эпителиальных клеток
фенотипической эффективности терапии является вектором AAV6 с большой точечной мутацией в гене,
транспортный Cl- . Введение AAV2H22-МВТР во внешние кодирующий один из атипичных аминокислот
пути CFTR-нулевых свиней, у которых отсутствовал ных фрагментов F129, которые обычно присутствуют в
функциональный ген CFTR, обеспечивающий высокую составе капсида белка. Результирующий вектор
экспрессию МВТР в клеточных эпителиях, AAV6.2 продемонстрировал более высокую эффективность
возникновение новления анионного транспорта, трансдукции как в клетках передних путей мыши, так
нормализацию pH секрета на верхних путях и его и в культурах клеток HAEC (эпителиальные клетки
бактерицидных свойств [51]. дыхательных путей человека). Выявлена стабильная
экспрессия интраназально введенного макакам
Эффективность экспрессии трансгена повышается трансгена (2 × 1011 вирусных частиц) в течение 72
также с использованием AAV-вектора, содержащего дней [59]. Преимущество проникновения AAV6-вектора
ген укороченного белка CFTRDR под ротким через слизь, полученное от пациентов с
цитомегаловирусным промотором CMV173. Трансдукция муковисцидозом, показано также в новой мышиной
клеточных органоидов препаратом модели, которая наиболее точно имитирует легочную
AAV-CFTRDR привела к восстановлению функции МВТР. патофизию при обструктивных легочных заболеваниях.
При этом также регистрировались изменения разности Точечная мутация капсида белка обеспечивает
потенциалов в мембраноклеточном эпителии носовых потенциальный механизм, посредством которого AAV6
передних путей, что свидетельствовало о избегает адгезии к полимерной сетке, которая
восстановлении нормального фенотипа у мышей, представляет собой слизь при муковисцидозе и
несущей самую распространенную при муковисцидозе которая приводит к агрегации AAV-векторов других
мутацию ΔF508 [54]. Другой вариант решения проблемы серотипов [62].
ограниченного размера генетических конструкций, Следует отметить, что на данный момент
который может быть встроен в AAV2, – создание разработка генной терапии муковисцидоза на основе
короткого синтетического промотора [55] или AAV проводится несколько фармацевтических
получение гена CFTR . компаний. По данным компании Abeona Therapeutics [63],
с частичной делегацией регулятора домена [56]. продукт доклинических исследований ABO401,
Помимо этого, протестирован новый Химерный вектор представляющий собой разработанный в компании
AAV2/HBoV1, полученный путем псевдотипирования: капсид нового поколения AAV204, несущий
перенос генома AAV2 в капсид HBoV1 – респираторного функционирующий циональный формирующий мини-
бокавируса человека, который инфицирует передние МВТР гена человека, помогает эффективно
пути человека и об ладает высокий тропизм к восстанавливать основной фенотипический признак
апикальной поверхностной поверхности клеток муковисцидоза – работу хлорных компонентов – in
эпителия исходных путей человека [57] . Также это vitro . и модели in vivo . При этом AAV204 более
привело к повышению потенциала капсида, что специфично направлен на легкую клетку, он
позволило использовать более сильный промотор и трансдуцирует также бронхиальный и клеточный
полноценный ген CFTR [58]. Способность rAAV2/HBoV1 назальный эпителий больных му ковисцидозом
трансдуцировать клетки легочного эпителия (уровень экспрессии МВТР в 3– 5 раз выше в направлении с AAV6-век
хорьков (Mustela putorius furo) позволяет создавать Кроме того, в 2020 году препарат Spiro-2101 компании
модели in vivo для проведения доклинических Sprovant Sciences, предназначенный для терапии
исследований [53]. муковисцидоза, получил от FDA статус «Орфанного
Тестирование девяти охарактеризованных се лекарственного препарата», что по зволит компании
ротипов AAV-векторов на эпителиальных клетках и ускорить проведение клинических исследований и
на легких мышей привело к идентификации вектора вывести препарат на рынок. В препарате Spiro-2101 также
AAV6 с наибольшим тропизмом к клеточно-каменной используется новый AAV-капсид с улучшенным
ножке эпителия мыши и человека [59, 60]. Показано, тропизмом к клеточному эпителию передних путей
что эффективность трансдукции эпителиальных для доставки функциональной копии гена CFTR.
клеток боковых путей мыши AAV6

ТОМ 15 № 2 (57) 2023 | АКТА НАТУРА | 27

Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ
Доставка с помощью лентивирусных векторов
В генной терапии также широко применяются средства на
основе лентивирусов. Привлекательным аспектом их применения
является тот факт, что они обладают низкой иммуногенностью, позволяют использовать этот вектор впервые у больных
инфицируют различные виды клеток и способны стабильно
интегрироваться в геном, что обеспечивает долговременную
экспрессию и сохранение трансгена при делении клетки. Тем не
менее, стоит учитывать, что стабильная интеграция в геноме
может быть приво
дить к инсерционному мутагенезу и, соответствен
но, к риску опухолевой трансформации (онкогенезу) [64]. На
данный момент все разработано подхо
ды к терапии муковисцидоза с использованием лен
тивирусные векторы (ЛВ) наблюдаются на стадии домедицинских
исследований, однако недавние успехи применения
модифицированных лентивирусных векторов в различных КИ-
представлениях и возможности их использования и в терапии
ковисцидоза [65].
Исследования на первичных эпителиях больных
муковисцидозом и животных моделях показали длительную
коррекцию фенотипа и низкую иммуногенность лентивирусных
векторов. В частности, в экспериментах in vivo установлено
возникновение новления функций МВТР-каналов в верхних
путях свиней после трансдукции вирусом имму нодефицита
кошек (FIV, вирус иммунодефицита кошек), псевдотипированным
белком GP64, который обеспечивает апикальный тропизм к
клеткам.
HAE-ALI (эпителий дыхательных путей человека, культивированный
на границе раздела воздух-жидкость). Через 2 недели после
введения FIV-МВТР в виде аэрозоля, при ношении и при легком наблюдении.
лось увеличение увеличения трансэпителиального
транспорт Cl- , а также восстановление pH трахеальной
поверхностной жидкости и ее бактерицидных свойств [66].
В другом варианте эксперимента использовался вирус
иммунодефицита обезьян (SIV, вирус иммунодефицита обезьян),
псевдотипированный белком слияния вируса Сендай (слитый
белок вируса Сендай – F), гемагглютинином и нейроминидазой
(HN). В доклинических исследованиях показано, что перенесение
гена МВТР в легкие с использованием этого вектора
обеспечивает более высокую трансдукцию клеток эпителия
бронхов человека и эпителия легких мышей in vivo, чем
невирусная доставка, и не вызывает какого-либо иммунного
ответа [33].
В 2017 году Альтон и соавт. проанализировали ре зультаты
нескольких доклинических исследований с целью выбора
наиболее перспективного типа
Вектор для инициации и планирования
го КИ с использованием лентивирусной доставки трансгена
МВТР. Лучшим кандидатом признан
28 | АКТА НАТУРА | ТОМ 15 № 2 (57) 2023 г.
rSIV.F/HN обеспечивает экспрессию функционального нального
МВТР с эффективностью 90–
100 % при использовании
соответствующих устройств для введения. Эти данные
муковисцидозом [33]. Тем не менее, КИ так и не было начато,
что наводит на мысль о том, что данный вектор нуждается в
дополнении.
тел доклинических исследований и в доказах
доказательств его эффективности для генной терапии
муковисцидоза.
Невирусная доставка с помощью липосом и полимерных
наночастиц
Преимуществом липосом является простое перемешивание
конечной формы препарата и емкости, подходящей для больших
молекул ДНК. В 2015 году в одном из самых больших КИ, в
котором липосомы pGM169/GL67A использовали для доставки
МВТР, была показана безопасность
применение этого препарата при муковисцидозе [67]. Безопасность
многократного введения препарата подтверждена в следующем
КИ с использованием липосом pGM169/GL67A. Впервые было
показано, что генная терапия смогла замедлить снижение
функций легочного больного муковисцидозом, однако эффект
остается стабильным для признания терапии эффективной [34].
В последние несколько лет исследования были направлены на
повышение эффективности лечения с помощью липосом (рис. 4). В
частности, установить
ЛНП
кл.
кл.
мутантный
МВТР
эндогенная
смМВТР МВТР
мРНК
Ядро
Рис. 4. Доставка ЛНП-смМВТР. Адаптировано на основе [68]
Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ
Лено, что использование релевантных липосомных
наночастиц (ЛНП) для производства и внесения
химической модифицированной мРНК МВТР (смМВТР) в
бронхиальные эпителиальные клетки от пациентов с
муковисцидозом приводит к уве личению количества
локализованного на мембране МВТР и восстановлению
остаточных хлорных соединений [68].
Кроме того, интраназальное введение ЛНП ЦМВТР
привело к восстановлению транспорта та Cl- в эпителиях
начальных путей у мышей МВТР-КО, что продолжалось в
течение 14 дней. Функциональная активность МВТР
достигла пика на 3-й день после трансфекции, что
вновь потерялось в восстановленном потоке Cl- до
55% от уров ня у здоровых мышей. По эффективности
эти результаты ре зультаты сравнимы с эффектом
использования ивакафтора (модулятор МВТР) и
подтверждают возможность использования ЛНП-смМВТР
для коррекции муковисцидоза и других моногенных
заболеваний [68].
Известны также различные варианты использования
полимеров, в частности, покрытие частиц плотным
слоем полиэтиленгликоля (ПЭГ), которое обеспечивает
проникновение частиц в толстый слой слизи in vitro и
таким образом увеличивает эффективность трансфекции
в легких мышей in vivo [69]. Интерес представляет также
использование биоразлагаемых триплексирующих
пептидно-нуклеиновых кислот.
(ПНК, пептид-нуклеиновая кислота), которые
связываются с геномной ДНК и строят триплексы ПНК/
ДНК/PNA, стимулирующие восстановление эндогенной
ДНК. Доставка таких комплексов внутри
корректирующего генома приводит к специфическому
исправлению гена [70]. В этом случае введение донорской
ДНК in vivo в носовые пазухи и легкие гомозиготные
мышцы ΔF508 приводило к значительному уменьшению
мутаций в эпителиях верхних путей и незначительному
течению заболевания [71].
Кроме того, описана первая попытка системного
внедрение модифицированных полимерных наночастиц
PNA LNP, несущих агентов, редактирующих ДНК, и
обеспечивающих более высокую технологию падения в
клетке и более эффективное управление изменениями.
Внутривенное введение таких частиц приводило к их
«правильному» биораспределению: частицы накапливались
в наружных и желудочно-кишечных путях мышей, а
функция МВТР.
в эпителиальных клетках полностью восстание
вали. Это первый случай успеха системного введения
наночастиц для генной терапии муковисцидоза [72].
Антисмысловые олигонуклеотиды
Известно, что олигонуклеотиды и их компоненты
применяются в качестве терапевтических молекул
для восстановления ДНК-модификаций (ДНК-репарации)
[73]. Эти олигомеры, содержащие РНК- и/или ДНК-
нуклеотиды, используются для осуществления сайт-
специфической репарации дефектной ДНК.
Недавно компания ProQR Therapeutics заверила два
КИ возможности коррекции гена CFTR, опосредованной
РНК. В этих КИ используется интраназальное введение
одноцепочечной антисмысловой РНК (eluforsen, QR-010),
разработанной для специфического связывания с
областью F508del в мРНК и функции восстановления
МВТР в эпителии передними путями. В предварительных
исследованиях in vitro и in vivo на мышах было показано,
что QR-010 научился быстро диффунди РОВИТЬСЯ через
муковисцидоз-подобный секрет, что, по-видимому,
обусловило его небольшой размер и отрицательное
зарядо. При этом QR-010 оставался стабильным в
условиях постоянного применения стандартных
терапевтических препаратов для муковисцидоза и в
условиях бактериальной инфицирования, а также
наблюдались положительные изменения в транспорте
хлоридов [74– 77]. По результатам КИ показано, что
восстание QR-010 навливает функцию МВТР у пациентов,
гомозиготных по мутациям CFTR-F508del: отмечено
клиническое открытие улучшения МВТР после трех
интраназальных введений в течение 4 недель, в
результате которых произошла стабилизация параметров
переноса Cl и Na [ 78].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
К настоящему времени, как показано с использованием
доклинических моделей и в КИ муковисцидо, уже
достигнуты некоторые успехи в применении генно-
терапевтических методов обеспечения функцио-
нальной копии гена CFTR . Тем не менее до сих пор
существует проблема неэффективной доставки гена CFTR
в эпителиальные клетки бронхолегочных путей. До сих
пор не найден подход, обеспечивающий спечивающую
экспрессию белка в эпителиальных клетках в количестве,
необходимом для выраженного терапевтического
эффекта. При этом необходи мы учитываем, что вирусная
доставка генетическая.
го материала при повторном использовании может
привести к сохранению иммунного ответа организма на
вирусный капсид, что приводит к снижению эффективности
терапии, а невирусные носители обладают недостаточно
низкой проникающей способностью, чтобы преодолеть
густой слой плотной слизи. Несмотря на то, что в
настоящее время отсутствует
ТОМ 15 № 2 (57) 2023 | АКТА НАТУРА | 29
Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ
Одобренный FDA метод генной муковисцидальной терапии доза, основные
крайние условия, ограничивающие эффективность этой терапии, уже
представлены и ведутся работы по их рассмотрению. О решении проблемы уже
имеющихся данных необходимо разрабатывать более эффективные способы
доставки, повысить эффективность глубокой подготовки.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Классификация муковисцидоза и связанных с ним заболеваний.
Отчет совместной рабочей группы ВОЗ/ICF (M)A/ECFS/ECFTN.
Всемирная организация здравоохранения. // Ж. Цист. Фиброс. 2002. Т. 1.
С. 5–
8.
2. Орлов А.В., Симонова О.И., Рославцева Е.А., Шадрин Д.И.
Муковисцидоз (клиническая картина, диагностика, лечение,
реабилитация, диспансеризация): Учебное пособие для врачей. СПб.:
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И.
Мечникова, 2014. 160 с.
3. Баранов А.А., Намазова-Баранова Л.С., Симонова О.И., Каширская
Н.Ю., Рославцева Е.А., Горинова Ю.В., Красовский С.А., Селимзянова Л.
Р. // Педиатрическая фармакология. 2015. Т. 12. № 5. С. 589–
604.
4. Клинические рекомендации. Кистозный фиброз (муко висцидоз):
микробиологический признак острой респираторной инфекции.
Минздрав РФ, 2020.
5. Ян З., МакКрэй П.Б., Энгельхардт Дж.Ф. // Хум. Мол. Жене.
2019. Т. 28. № Р1. П. Р88–
Р94.
6. Смирнихина С.А., Лавров А.В. // Гены и клетка. 2018.
Т. 13. № 3. С. 23–
31.
7. Брэдли С.К., Стивен М.Р. // BMJ. 2016. Т. 352. i859.
8. Гембицкая Т.Е., Черменский А.Г. // Пульмонология и
аллергология. 2011. Т. 4. С. 35–
39.
9. Клунес М.Т., Баучер Р.К. // Лекарственные препараты. Сегодня Дис.
Мех. 2007. Т. 4. С. 63–
72.
10. Красовский С.А., Самойленко В.А., Амелина Е.Л. // Практическая
пульмонология. 2013. Т. 1. С. 42–
46.
11. Рубин Б.К. // Детская респираторная медицина. Ред. 2007. Т. 8. № 1.
С. 4– 7.
12. Остедгаард Л.С., Монингер Т.О., МакМенимен Дж.Д., Савин Н.М.,
Паркер К.П., Торнелл И.М., Пауэрс Л.С., Ган Семер Н.Д., Бузек Д.К., Кук
Д.П. и др. // Процесс. Натл.
акад. наук. США. 2017. Т. 114. № 26. С. 6842–
6847.
13. Буше Р.С. // Тенденции мол. Мед. 2007. Т. 13. С. 231–
240.
14. Мацуи Х., Вергезе М.В., Кесимер М., Шваб У.Э., Рэнделл Ш., Шихан
Дж.К., Грабб Б.Р., Баучер Р.К. // J.
Иммунол. 2005. Т. 175. № 2. С. 1090– 1099.
15. Керем Б., Ромменс Дж.М., Бьюкенен Дж.А., Маркевич Д., Кокс Т.К.,
Чакраварти А., Бухвальд М., Цуй Л.С. // Наука. 1989. Т. 245. № 4922.
С. 1073–
1080.
16. Ромменс Дж.М., Яннуцци М.К., Керем Б., Драмм М.Л., Мелмер Г., Дин
М., Розмахель Р., Коул Дж.Л., Кеннеди Д., Хи дака Н. и др. // Наука.
1989. Т. 245. № 4922. С. 1059–
1065.
17. Фажак И., Уэйнрайт С.Э. // Presse Med. 2017. Т. 46. № 6.
Ч. 2. С. e165–e175.
18. Уэлш М.Дж., Смит А.Э. // Клетка. 1993. Т. 73. № 7. С. 1251–
1254.
19. Майури Л., Райя В., Кремер Г. // Cell Death Differ. 2017.
Т. 24. № 11. П. 1825–
1844.
20. Амин Н., Силвис М., Брэдбери Н.А. // J. Cyst. Фиброс. 2007.
Т. 6. № 1. С. 1–
14.
21. Мэн Х., Клюс Дж., Мартин Э.Р., Сиута А.Д., Форд Р.С. // Биохимия.
Соц. Пер. 2018. Т. 46. № 5. С. 1093–1098.
30 | АКТА НАТУРА | ТОМ 15 № 2 (57) 2023 г.
скорость через слой плотного секрета и минимизировать иммунный
ответ организма на его введение. Стремительное развитие технологий
генной инже нерии в последние годы внушает уверенность в том, что
этиотропная терапия муковисцидоза может стать реальностью уже в
ближайшем будущем.
22. Мэн Х., Клюс Дж., Каргас В., Ван Х., Форд Р.С. // Cell Mol. Наука о
жизни. 2017. Т. 74. № 1. С. 23–
38.
23. Куни А.Л., МакКрей П.Б., Синн П.Л. // Гены (Базель). 2018.
Т. 9. № 11. С. 538.
24. Бургенер Э.Б., Мосс Р.Б. // Текущий. Мнение. Педиатр. 2018. Т. 30.
№ 3. С. 372– 377.
25. Берни Т.Дж., Дэвис Дж.К. // Прикл. Клин. Жене. 2012. Т. 5.
С. 29– 36.
26. Забнер Дж., Кутюр Л.А., Грегори Р.Дж., Грэм С.М., Смит А.Е., Уэлш М.Дж. //
Cell. 1993. Т. 75. С. 207–
216.
27. Кристал Р.Г., МакЭлвейни Н.Г., Розенфельд М.А., Чу К.С.,
Мастрангели А., Хэй Дж.Г., Броуди С.Л., Джаффе Х.А., Эйсса Н.Т., Дэнел
К. // Nat. Жене. 1994. Т. 8. С. 42–
51.
28. Баучер Р.К., Ноулз М.Р., Джонсон Л.Г., Олсен Дж.К., Пиклз Р.,
Уилсон Дж.М., Энгельхардт Дж., Ян Ю., Гроссман М.
// Хум. Джин Тер. 1994. Т. 5. С. 615–
639.
29. Цукерман Дж.Б., Робинсон С.Б., Маккой К.С., Шелл Р., Сферра
Т.Дж., Чирмуле Н., Магосин С.А., Проперт К.Дж., Браун Парр ЕС, Хьюз
Дж.В. и др. // Хум. Джин Тер. 1999. Т. 10. № 18. С. 2973–
2985.
30. Вагнер Дж.А., Непомучено И.Б., Месснер А.Х., Моран М.Л., Батсон Е.П.,
Димичели С., Браун Б.В., Деш Дж.К., Норбаш А.М., Конрад К.К. и др. //
Хум. Джин Тер. 2002. Т. 13. № 11. С. 1349–
1359.
31. Мосс Р.Б., Милла С., Коломбо Дж., Аккурсо Ф., Зейтлин П.Л., Клэнси
Дж.П., Спенсер Л.Т., Пилевски Дж., Вальц Д.А., Доркин Х.Л. и др. //
Хум. Джин Тер. 2007. Т. 18. № 8. С. 726–
732.
32. Флотт Т.Р., Зейтлин П.Л., Рейнольдс Т.К., Хилд А.Е., Педерсен П.,
Бек С., Конрад К.К., Брасс-Эрнст Л., Хамфрис М., Салливан К. и др. //
Хум. Джин Тер. 2003. Т. 14. № 11.
С. 1079– 1088.
33. Элтон Э.В., Бикман Дж.М., Бойд А.С., Брэнд Дж., Карлон М.С.,
Коннолли М.М., Чан М., Конлон С., Дэвидсон Х.Э., Дэвис Дж.К. и др. //
Грудная клетка. 2017. Т. 72. № 2. С. 137–
147.
34. Элтон Э.В., Армстронг Д.К., Эшби Д., Бэйфилд К.Дж., Билтон Д.,
Блумфилд Е.В., Бойд А.С., Брэнд Дж., Бьюкен Р., Кальседо Р. и др. //
Ланцет Респир. Мед. 2015. Т. 3. № 9. С. 684–
691.
35. Элтон Э.В., Стерн М., Фарли Р., Джаффе А., Чедвик С.Л., Филлипс Дж.,
Дэвис Дж., Смит С.Н., Браунинг Дж., Дэвис М.Г. и др. // Ланцет. 1999. Т.
353. № 9157. С. 947–
954.
36. Каплен Н.Дж., Элтон Э.В., Миддлтон П.Г., Дорин Дж.Р., Стивенсон
Б.Дж., Гао X., Дарем С.Р., Джеффри П.К., Ходсон М.Е., Кутель К. и
др. // Нат. Мед. 1995. Т. 1. № 1. С. 39–
46.
37. Йошимура К., Розенфельд М.А., Накамура Х., Шерер Э.М., Павирани А.,
Лекок Дж.П., Crystal RG // Nucl. Кислоты Рез.
1992. Т. 20. С. 3233–
3240.
38. Руис Ф.Е., Клэнси Дж.П., Перриконе М.А., Бебок З., Хонг Дж.С., Ченг Ш.,
Микер Д.П., Янг КР, Шумахер Р.А., Уэзерли М.Р. и др. // Хум. Джин Тер.
2001. Т. 12. № 7.
С. 751–761.
39. Сермет-Годелус И., Клэнси Дж. П., Николс Д. П., Ник Дж. А., Де Боек К.,
Соломон Г. М., Молл М. А., Болоньезе Дж., Буиссе Ф., ден Холландер В.
и др. // Ж. Цист. Фиброс. 2019. Т. 18. № 4.
С. 536– 542.
Machine Translated by Google
ОБЗОРЫ
40. Ноулз М.Р., Хонекер К.В., Чжоу З., Олсен Дж.К., Ной Т.Л., Ху ПК,
Ли М.В., Энгельхардт Дж.Ф., Эдвардс Л.Дж., Джонс К.Р. и др. //
Н. англ. Дж. Мед. 1995. Т. 333. С. 823–831.
41. Кристал Р.Г., Джаффе А., Броуди С., Мастрангели А., МакЭлвани Н.Г.,
Розенфельд М., Чу К.С., Дэнел К., Хэй Дж., Эйсса Т. // Hum.
Джин Тер. 1995. Т. 6. С. 643–666.
42. Кушва Р., Цао Х., Ху Дж. // Дж. Иммунол. 2008. Т. 180. № 6. С.
4098– 4108.
43. Ян З., Стюарт З.А., Синн П.Л., Олсен Дж.К., Ху Дж., МакКрэй П.Б.,
Энгельхардт Дж.Ф. // Хум. Джин Тер. Клин. Дев. 2015.
Т. 26. С. 38–49.
44. Цао Х., Оуян Х., Граземанн Х., Бартлетт К., Ду К., Дуань Р.,
Ши Ф., Эстрада М., Сейгел К.Э., Коутс А.Л. и др. // Хум. Джин Тер.
2018. Т. 29. С. 643–
652.
45. Куни А.Л., Сингх Б.К., Лоза Л.М., Торнелл И.М., Хиппи К.Э., Пауэрс
Л.С., Остедгаард Л.С., Мейерхольц Д.К., Воль Форд-Ленейн К.,
Штольц Д.А. и др. // Нукл. Кислоты Рез. 2018.
Т. 46. С. 9591–9600.
46. Немудрый А.А., Валетдинова К.Р., Медведев С.П., Заки ян С.М. //
Акта природы. 2014. Т. 6. № 3. С. 20–
42.
47. Ся Э., Чжан Ю., Цао Х., Ли Дж., Дуань Р., Ху Дж. // Гены
(Базель). 2019. Т. 10. № 1. С. 39.
48. Чжоу З.П., Ян Л.Л., Цао Х., Чэнь З.Р., Чжан Ю., Вэнь С.-
Ю., Ху Дж. // Хум. Джин Тер. 2019. Т. 30. № 9. С. 1101–1116.
49. Чжоу З.П., Ян Л.Л., Цао Х., Вэнь С.-Ю., Ху Дж. // Совещание ASGCT
2019. Мол. Терапия. Т. 27. № 4С1.
50. Гуджино В.Б., Чеботару Л. // Экспертное мнение. Биол. Там. 2017.
Т. 17. № 10. С. 1265–1273.
51. Стайнс Б., Дики Д.Д., Берген Дж., Экскоффон К.Дж., Вайнштейн
Дж.Р., Ли Х., Ян З., Абу Алайва М.Х., Шах В.С., Бузек Д.С. и др. //
JCI Инсайт. 2016. Т. 1. № 14. С. е88728.
52. Макклейн Л.Е., Дэйви М.Г., Золтик П.В., Лимберис М.П., Флейк
А.В., Перанто У.Х. // J. Pediatr. Хирург. 2016. Т. 51.
С. 879– 884.
53. Ян З., Фэн З., Сунь С., Чжан Ю., Цзоу В., Ван З., Джен Сен-Коди
К., Лян Б., Пак С.Ю., Цю Дж. и др. // Хум. Джин Тер. 2017. Т. 28. С.
612– 625.
54. Видович Д., Карлон М.С., да Кунья М.Ф., Деккерс Дж.Ф.,
Холленхорст М.И., Бийвелдс М.Дж., Рамальо А.С., ван ден Оте К.,
Ферранте М., Бакеландт В. и др. // Являюсь. Дж. Респир. Крит. Уход
Мед. 2016. Т. 193. С. 288–
298.
55. Ян З., Сунь Х., Фэн З., Ли Г., Фишер Дж.Т., Стюарт З.А.,
Энгельхардт Дж.Ф. // Хум. Джин Тер. 2015. Т. 26. С. 334– 346.
56. Остедгаард Л.С., Рохлина Т., Карп П.Х., Лашмит П., Афионе С., Шмидт
М., Забнер Дж., Стински М.Ф., Чиорини Дж.А., Уэлш М.Дж. // Тез.
Натл. акад. наук. США. 2005. Т. 102. С. 2952– 2957.
57. Ян З., Кейзер Н.В., Сун Ю., Дэн К., Ченг Ф., Цю Дж., Энгельхардт
Ю.Ф. // Мол. Там. 2013. Т. 21. С. 2181–2194.
58. Ян З., Цзоу В., Фэн З., Шен В., Парк С.Ю., Дэн С., Цю Дж.,
Энгельхардт Ю.Ф. // Хум. Джин Тер. 2019. Т. 30. С. 556– 570.
59. Лимберис М.П., Ванденберге Л.Х., Чжан Л., Пиклз Р.Дж.,
Уилсон Дж.М. // Мол. Там. 2007. Т. 15. № 1. П. С160. doi: 10.1016/
S1525-0016(16)44621-6
60. Куросаки Ф., Утибори Р., Мато Н., Сехара Ю., Сага Ю., Урабе М.,
Мизуками Х., Сугияма Ю., Куме А. // Gene Ther.
2017. Т. 24. С. 290–297.
61. Халберт К.Л., Аллен Дж.М., Миллер А.Д. // Дж. Вирол. 2001. Т. 75.
№ 14. С. 6615–6624.
62. Дункан Г.А., Ким Н., Колон-Кортес Ю., Родригес Дж., Мазур М.,
Биркет С.Э., Роу С.М., Вест Н.Э., Ливраги-Бутрико А., Баучер Р.К. и
др. // Мол. Там. Мет. Клин. Дев. 2018.
Т. 9. С. 296–304.
63. Уилле П.Т., Розенджек Дж., Коттон С., Келли Т., Падегимас Л.,
Миллер Т.Дж. // J. Cyst. Фиброс. 2019. Т. 18. П. С39. дои: 10.1016/
С1569-1993(19)30241-3
64. Черенкова Е.Е., Исламов Р.Р., Ризванов А.А. // Междуна родный
журн. прикладных и фундаментальных исследований. 2013. Т. 11.
№ 2. С. 57–58.
65. Маркес Лоза Л.И., Юэнь Э.К., МакКрей П.Б. младший // Гены
(Базель). 2019. Т. 10. № 3. С. 218.
66. Куни А.Л., Абу Алайва М.Х., Шах В.С., Бузек Д.С., Стройк М.Р.,
Пауэрс Л.С., Гансемер Н.Д., Мейерхольц Д.К., Уэлш М.Дж., Штольц
Д.А. и др. // JCI Инсайт. 2016. Т. 1. № 14.
П. е88730.
67. Элтон Э.В., Бойд А.С., Портеус Д.Д., Дэвис Г., Дэвис Дж.К.,
Гризенбах У., Хиггинс Т.Э., Гилл Д.Р., Хайд С.С., Иннес Дж.А. и др. //
Являюсь. Дж. Респир. Крит. Уход Мед. 2015. Т. 192.
П. 1389–1392.
68. Робинсон Э., Макдональд К.Д., Слотер К., МакКинни М.,
Патель С., Сан С., Сахай Г. // Мол. Там. 2018. Т. 26. № 8.
П. 2034– 2046.
69. Масторакос П., да Силва А.Л., Чисхолм Дж., Сонг Э., Чой В.К.,
Бойл М.П., Моралес М.М., Ханес Дж., Сук Дж.С. // Proc.
Натл. акад. наук. США. 2015. Т. 112. С. 8720–
8725.
70. Кихано Э., Бахал Р., Риккарди А., Зальцман В.М., Глейзер П.М. //
J. Biol. Мед. 2017. Т. 90. № 4. С. 583–
598.
71. Макнир Н.А., Анандалингам К., Филдс Р.Дж., Капуто К., Копич
С., Гупта А., Кихано Э., Поликофф Л., Конг Ю., Бахал Р. и др. // Нат.
Коммун. 2015. Т. 6. С. 6952.
72. Пиотровски-Даспит А.С., Бароне С., Кауфман А.С., Лин С.Ю.,
Нгуен Р., Гупта А., Глейзер П.М., Зальцман В.М., Иган М.Э. // J. Cyst.
Фиброс. 2021. Т. 20. П. С277. дои: 10.1016/S1569-
1993(21)02005-1
73. Папайоанну И., Саймонс Дж.П., Оуэн Дж.С. // Экспертное мнение. Биол.
Там. 2012. Т. 12. № 3. С. 329–342.
74. Боймер В., Свилденс Дж., Хениг Н., Антонийс Х., Биасутто П.,
Тересинья Л., Ритсема Т. // J. Cyst. Фиброс. 2015. Т. 14.
П. С1. doi: 10.1016/S1569-1993(15)30002-3
75. Бринкс В., Липинска К., Коппелаар М., Мэти Б., Баттон Б.М.,
Ливраги-Бутрико А., Хениг Н. // J. Cyst. Фиброс. 2016.
Т. 15. № 1. П. С31. дои: 10.1016/S1569-1993(16)30168-0
76. Боймер В., Свилденс Дж., Лил Т., Ноэль С., Антонийс Х., ван
дер Хорст Г., Куиперий-Боерсма Х., Потман М., ван Путтен К.,
Биасутто П. и др. // ПЛоС Один. 2019. Т. 14. № 6. П. е0219182.
77. Бринкс В., Липинска К., Джагер М., Боймер В., Баттон Б., Ливраги
А., Хениг Н., Матти Б. // J. Aerosol Med. Пульмональная доставка
лекарств. 2019. Т. 32. № 5. С. 303– 316.
78. Сермет-Годелус И., Клэнси Дж. П., Николс Д. П., Ник Дж. А., Де Бек
К., Соломон Г. М., Молл М. А., Болоньезе Дж., Буиссе Ф., ден
Холландер В. и др. // Ж. Цист. Фиброс. 2019. Т. 18. № 4.
С. 536–542.
ТОМ 15 № 2 (57) 2023 | АКТА НАТУРА | 31