Вы находитесь на странице: 1из 8

MOLECULAR МОЛЕКУЛЯРНЫЕ

TRANSFORMERS
OF ENERGY ПРЕОБРАЗОВАТЕЛИ ЭНЕРГИИ
IN LIVING CELLS В ЖИВОЙ КЛЕТКЕ
A. N. TIKHONOV
Ä. ç. íàïéçéÇ
This work is a brief review åÓÒÍÓ‚ÒÍËÈ „ÓÒÛ‰‡ÒÚ‚ÂÌÌ˚È ÛÌË‚ÂÒËÚÂÚ
of structural and functio- ËÏ. å. Ç. ãÓÏÓÌÓÒÓ‚‡
nal properties of mem-
brane H+ATPsynthase
ÇÇÖÑÖçàÖ
operating as macromolec-
ular energy-transducing Источником энергии для большинства биоло-
гических процессов является Солнце. Фотосинте-
machine of the living cell. зирующие организмы используют энергию света
H+ATPsynthase is a key для синтеза органических соединений, которые, в
enzyme which provides свою очередь, служат строительным материалом и
источником энергии для животных и других орга-
coupling of energy donat- низмов, неспособных самостоятельно усваивать
ing reactions in biomem- энергию солнечного света. Энергия света, погло-
branes to ATP formation. щаемого фотосинтезирующими организмами, не
прямо используется для синтеза органических со-
The process takes place in единений, а сначала в ходе многочисленных свето-
energy-transducing mem- вых и темновых стадий фотосинтеза преобразуется
branes of plant, animal в химическую энергию макроэргических (богатых
энергией) соединений, которые и являются непо-
and bacterial cells. средственным источником энергии для процессов
биосинтеза.
ê‡ÒÒÏÓÚÂÌ˚ ÒÓ‚ÂÏÂÌ- К числу наиболее важных макроэргических со-
Ì˚ Ô‰ÒÚ‡‚ÎÂÌËfl Ó единений, которые служат универсальным источни-
ком химической энергии для всех организмов, отно-
ÒÚÓÂÌËË Ë ÙÛÌ͈ËÓÌË- сится молекула аденозинтрифосфорной кислоты
Ó‚‡ÌËË ÏÂÏ·‡ÌÌ˚ı (ATP). Молекула АТР впервые выделена в 1929 году
ç+ÄíêÒËÌÚ‡Á, ÍÓÚÓ˚ Фиске и Суббароу из кислых экстрактов мышц.
Вскоре после этого было установлено, что АТР яв-
fl‚Îfl˛ÚÒfl ÛÌË͇θÌ˚ÏË ляется участником большинства процессов энерге-
˝ÌÂ„ÓÔÂÓ·‡ÁÛ˛˘ËÏË тического обмена в живой клетке. В 1931 году акаде-
χÍÓÏÓÎÂÍÛÎflÌ˚ÏË мик В.А. Энгельгардт обнаружил связь между
синтезом АТР и клеточным дыханием (явление
χ¯Ë̇ÏË, Ó·ÂÒÔ˜˂‡˛- окислительного фосфорилирования). Позднее он
˘ËÏË ÒÓÔflÊÂÌË ˝ÌÂ- установил, что АТР участвует в мышечном сокра-
„Ó‰ÓÌÓÌ˚ı ‡͈ËÈ ˝ÎÂ- щении. В 1941 году Липман сформулировал основ-
ной закон биоэнергетики, согласно которому энер-
ÍÚÓÌÌÓ„Ó Ú‡ÌÒÔÓÚ‡ ‚ гия внешнего источника сначала запасается в
·ËÓÏÂÏ·‡Ì‡ı Ò ˝ÌÂ„Ó- форме химической энергии молекул АТР и лишь за-
‡ÍˆÂÔÚÓÌ˚ÏË ÔÓˆÂÒÒ‡- тем используется для совершения полезной работы.
Представление об АТР как универсальной “энер-
ÏË ÒËÌÚÂÁ‡ Äíê ‚ ÍÎÂÚ- гетической валюте” нашло многочисленные под-
© íËıÓÌÓ‚ Ä.ç., 1997

͇ı ‡ÒÚÂÌËÈ, ÊË‚ÓÚÌ˚ı тверждения и стало краеугольным камнем всей био-


Ë ·‡ÍÚÂËÈ. энергетики (см. также: Скулачев В.П. Законы
биоэнергетики // Соросовский Образовательный
Журнал. 1997. № 1. С. 9–14). Подавляющее боль-
шинство энергоемких биологических процессов,
таких, как реакции биосинтеза, перенос ионов и
различных веществ внутри клетки, мышечное со-
кращение, сопряжено с энергодонорной реакцией

10 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹7, 1997


гидролиза АТР, в ходе которой происходит выделе- ции, является свободная энергия. Если химическая
ние энергии: реакция проводится при постоянной температуре T
ATP + Н2О ADP (аденозиндифосфорная и давлении p, то для ее описания обычно используют
кислота) + Pi (неорганический фосфат)+ энергия. свободную энергию Гиббса: G = U + pV − TS, где U –
внутренняя энергия, V – объем и S – энтропия сис-
Наряду с этими процессами в клетке происходят темы. Энтропия S является количественной мерой
энергоакцепторные реакции синтеза АТР, которые неупорядоченности (хаотичности) системы. Со-
компенсируют убыль АТР: гласно второму началу термодинамики, каждая
ADP + Pi + энергия АТР + H2O. изолированная система стремится самопроизволь-
но перейти из упорядоченного в разупорядоченное
ATP
состояние, характеризующееся максимальной энт-
ропией. В состоянии термодинамического равно-
весия свободная энергия системы минимальна.
Энергия ATPсинтаза ATPаза Работа Это означает, что если система находится в нерав-
новесном состоянии, то по мере движения к равно-
весию свободная энергия системы G будет умень-
ADP + Pi шаться (∆G < 0).
Допустим, что в системе могут происходить две
Рис. 1. Цикл энергозависимых превращений АТР химические реакции. Если в ходе одной из них сво-
в клетке
бодная энергия уменьшается (∆G1 < 0), то такую ре-
акцию мы будем называть энергодонорной (такие
Цикл энергозависимых превращений АТР схе- процессы также называют экзоэргоническими).
матически показан на рис. 1. Эта реакция может протекать самопроизвольно, без
Непосредственным источником энергии для притока энергии от внешнего источника. Измене-
синтеза ATP в энергопреобразующих мембранах ние свободной энергии системы ∆G1 в ходе энерго-
растений, животных и бактерий служит энергия, донорного процесса показывает, какую максималь-
выделяемая в ходе окислительно-восстановитель- ную полезную работу ∆W можно совершить при
ных процессов [1–6]. У растений образование АТР реализации такого процесса, ∆W # | G1 |. Если другая
связано с работой фотосинтетической цепи перено- химическая реакция сопровождается повышением
са электронов в хлоропластах – энергопреобразую- свободной энергии (∆G2 > 0), то она не может про-
щих органеллах растительной клетки. В клетках жи- текать самопроизвольно, такую реакцию мы будем
вотных подавляющее число молекул АТР образуется называть энергоакцепторной (другое название –
в митохондриях. Значительная часть энергии, выде- эндоэргоническая реакция). Энергоакцепторная ре-
ляемой в ходе окислительно-восстановительных акция не может протекать самопроизвольно. Однако
реакций электронного транспорта в мембранах этих выделение свободной энергии ∆G1 в ходе энергодо-
энергопреобразующих органелл, не пропадает, а за- норного процесса можно использовать для проведе-
пасается в форме макроэргических связей молеку- ния сопряженного с ним энергоакцепторного про-
лы АТР. Принято говорить, что энергодонорные цесса, если выполняется условие ∆G1 + ∆G2 < 0.
процессы электронного транспорта сопряжены с Можно привести множество примеров таких энер-
энергоакцепторными реакциями синтеза АТР. гетически сопряженных процессов в биологических
Ключевую роль в процессах энергетического со- системах. Так, например, энергия, выделяющаяся
пряжения в биологических мембранах играет спе- при гидролизе АТР мышечным белком миозином,
циальный макромолекулярный комплекс, называе- обеспечивает конформационные перестройки это-
мый Н+АТРсинтазой. го белка, в результате которых в конечном итоге
происходит сокращение мышцы. Другой пример –
ùçÖêÉÖíàäÄ èêéñÖëëéÇ ÉàÑêéãàáÄ работа ионного насоса, поддерживающего нерав-
à ëàçíÖáÄ ATP новесное распределение ионов Na+ и K+ в клетке
(Na+,K+ATPаза). Этот фермент, используя энергию
Прежде чем приступить к обсуждению того, ка- гидролиза АТР, производит концентрирование ио-
ким образом Н+АТРсинтаза катализирует энергети- нов K+ в цитоплазме и удаление ионов Na+ из клетки.
чески невыгодную реакцию образования ATP из В водных растворах равновесие в реакции ATP +
ADP и Pi , определим критерии, по которым химиче- + H2O ADP + Pi практически всегда сдвинуто
ские процессы можно разделить на энергодонорные в сторону расщепления ATP. Это означает, что гид-
и энергоакцепторные. Попробуем также ответить на ролиз ATP является энергетически выгодным про-
вопрос, почему нужна энергия для синтеза АТР. цессом. В так называемых стандартных условиях,
Одной из важнейших характеристик системы, когда концентрации всех реагентов равны 1 моль/л,
которая позволяет определить направление химиче- изменение свободной энергии в ходе гидролиза
ской реакции и ответить на вопрос о том, какую по- АТР составляет величину ∆G0 ≅ − 7,3 ккал/моль.
лезную работу можно совершить за счет этой реак- Знание ∆G0 позволяет легко вычислить константу

íàïéçéÇ Ä.ç. åéãÖäìãüêçõÖ èêÖéÅêÄáéÇÄíÖãà ùçÖêÉàà Ç ÜàÇéâ äãÖíäÖ 11


равновесия К реакции ATP + H2O ADP + Pi , O−
которая, как известно из физической химии, связа-
на с величиной ∆G0 уравнением ∆G0 = − RT ln K, где
O P O−
O−
R – универсальная газовая постоянная, Т – темпе- OH
ратура. Отсюда нетрудно показать (см. подробнее O P O−

OH
гл. 7 книги [2]), что после достижения термодина- O O−
мического равновесия отношение концентраций
[ATP] и [ADP] должно удовлетворять условию O P O− O P O−
[ATP]/[ADP] ! 1. Это, однако, еще не означает, что O O
в растворе всегда устанавливается равновесное со- NH2 NH2

отношение между концентрациями ATP и ADP. Хо- O P O O P O−
N N
тя гидролиз АТР и является энергетически выгод- N N
O O
ным процессом, самопроизвольно акты гидролиза
АТР происходят очень редко. При отсутствии фер- N N CH2 N N CH2
O O
мента, катализирующего гидролиз АТР (такие фер-
менты называются АТРазами), достижение истин-
ного термодинамического равновесия происходит
медленно. Иными словами, при отсутствии фер- OH OH OH OH
мента, катализирующего гидролиз АТР, запасенная
ATP ADP + P i
в ней потенциальная энергия может оставаться не-
востребованной очень долго. Это связано с тем, что Энергия
для разрыва ковалентной химической связи в моле-
куле АТР необходимо совершить работу по преодоле-
нию сравнительно высокого активационного барье- Ea
ра Ea (рис. 2). Находящиеся в клетке АТРазы
ускоряют гидролиз АТР и обеспечивают использо-
вание выделяющейся в ходе гидролиза АТР свобод-
ной энергии ∆G для совершения полезной работы.
∆GATP
Убыль АТР в клетке компенсируется в основном
за счет Н+АТРсинтаз, входящих в состав энергопре-
образующих биологических мембран. Для работы
этого фермента требуется энергия. Одна из причин
того, что синтез ATP из ADP и Pi является энергети- Координата реакции
чески невыгодным процессом, заключается в том,
что в водных растворах фосфатные группы этих мо-
лекул ионизованы и несут отрицательные заряды, Рис. 2. Схематическое изображение изменения
профиля потенциальной системы в ходе реакций
локализованные на атомах кислорода (рис. 2). Для гидролиза и синтеза АТР
образования ковалентной химической связи между
ADP и Pi эти отрицательно заряженные группы не-
обходимо сблизить на достаточно близкое расстоя- хлоропластов и митохондрий показаны на рис. 3 и 4.
ние, для чего требуется совершить сравнительно Этот комплекс по форме напоминает гриб, ножка
большую работу по преодолению силы электроста- которого погружена в мембрану, а круглая шляпка
тического отталкивания. Одна из главных задач био- выступает наружу (рис. 3). Мембранная часть
энергетики заключается в том, чтобы понять, каким Н+АТРсинтазы, называемая фактором сопряжения
образом эту работу выполняют Н+АТРсинтазы. F0 , представляет собой гидрофобный (нераствори-
мый в воде) белковый комплекс. Второй фрагмент
Н+ATPсинтазного комплекса – фактор сопряжения
ëéëíÄÇ à ëíêéÖçàÖ ç+ÄíêëàçíÄáçéÉé F1 – выступает из мембраны в водную фазу в виде
äéåèãÖäëÄ сферы. В хлоропластах (рис. 4, а) фактор сопряже-
Со времени открытия Н+АТРсинтазы Рэкером с ния F1 ориентирован во внешнюю сторону, а в ми-
сотрудниками прошло более 36 лет. Однако вопрос тохондриях (рис. 4, б ) фактор сопряжения F1 обращен
о ее функционировании в качестве энергопреобра- в сторону матрикса (внутренняя часть митохондрии).
зующей молекулярной машины по-прежнему оста- Известно, что работа Н+АТРсинтазы сопряжена
ется в центре внимания биоэнергетики. Важнейшее с переносом через нее протонов. По этой причине
значение для понимания молекулярных механиз- F0F1-комплексы, входящие в состав энергопреобра-
мов работы Н+АТРсинтазы имеет детальное знание зующих мембран, получили название протонных или
пространственной структуры фермента. Схематиче- Н+АТРсинтаз. В хлоропластах протоны (ионы Н+)
ское изображение ATPсинтазного комплекса и его переносятся из внутритилакоидного объема в стро-
расположение в энергопреобразующих мембранах му, в митохондриях – из внешнего межмембранного

12 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹7, 1997


3H+ а
ADP + P ATP

α
F1
β β
ADP ATP

Pi α α H2O

F0 3H+ Мембрана

Рис. 3. Пространственное строение Н+АТРсин-


тазного комплекса
Рис. 4. Схема расположения Н+АТРсинтазных
объема в матрикс (рис. 4). Для нормального функ- комплексов в мембранах хлоропластов ( а) и мито-
ционирования F0F1-комплекса необходимо, чтобы хондрий (б ). Затемненные области (песочного
цвета) соответствуют тем областям хлоропласта и
сопрягающая мембрана была замкнутой. Это связа- митохондрии, которые характеризуются высоким
но с тем, что направленный поток протонов через протонным потенциалом
F0F1-комплекс может возникать, лишь когда концен-
трации ионов водорода по обе стороны сопрягающей
рованный белок F1 , который хорошо растворим в
мембраны различаются либо когда на мембране су-
воде, сохраняет АТРазную активность – катализиру-
ществует разность электрических потенциалов ∆ϕ,
ет гидролиз ATP. Однако отделенный от мембраны
под действием которой протоны переносятся через
фактор сопряжения F1 неспособен синтезировать
F0F1-комплекс. Все это возможно только при нали-
ATP. Таким образом, способность синтезировать
чии замкнутых мембран, которые изолируют внут-
ATP – это свойство единого F0F1-комплекса, встро-
реннее пространство органеллы от внешней среды. енного в сопрягающую мембрану.
Лишь в этом случае на сопрягающей мембране за
счет работы цепи электронного транспорта образу- Мембранный фрагмент Н+АТРсинтазного ком-
ется протонный потенциал (разность электрохими- плекса F0 выполняет роль специфического протон-
ческих потенциалов ионов водорода), необходи- ного канала, по которому ионы водорода попадают
мый для работы Н+АТРсинтазы. к F1 . При отсутствии субстратов фосфорилирова-
ния (АDP и Pi) утечка протонов через F0F1-ком-
В нормальных условиях F1 связан с мембранным плекс сравнительно невелика. В этом случае не-
фрагментом F0 . Важную роль в удержании водорас- функционирующий фрагмент F1 закрывает путь
творимого белка F1 на мембране играют электро- протонам, которые при отсутствии F1 могли бы сво-
статические взаимодействия. В хлоропластах свое- бодно проходить через протонпроводящий канал
образным клеем, способствующим прочному F0 . При отделении от мембраны водорастворимого
взаимодействию F1 и F0 , являются ионы Mg2+. Фак- белка F1 сопрягающая мембрана становится как бы
тор сопряжения F1 можно сравнительно легко отде- дырявой для ионов водорода. В этом случае ионы
лить от мембранного фрагмента F0 . Удаление F1 не водорода сравнительно легко проходят через про-
препятствует переносу электронов по цепи элек- тонный канал, образуемый мембранным фрагмен-
тронного транспорта, но мембраны энергопреобра- том F0 , в результате чего выравниваются концентра-
зующих органелл при этом становятся разобщен- ции ионов водорода по обе стороны сопрягающей
ными – электронный транспорт не приводит к мембраны (см. рис. 3).
синтезу АТР. Оставшиеся в мембране фрагменты F0 Строение фактора сопряжения F0 . У большинства
сами по себе не обладают способностью ни синтези- известных Н+ATPсинтаз растительного, животного
ровать, ни гидролизовать ATP. В то же время изоли- и бактериального происхождения мембранный

íàïéçéÇ Ä.ç. åéãÖäìãüêçõÖ èêÖéÅêÄáéÇÄíÖãà ùçÖêÉàà Ç ÜàÇéâ äãÖíäÖ 13


фрагмент F0 состоит из полипептидных субъединиц растворимым (F1) фрагментами ATPсинтазы. Субъ-
трех типов, ab2cn . В его состав входят одна-две ко- единица ε выполняет функции регулятора активно-
пии субъединиц типа a и b, имеющих молекулярные сти фермента.
массы 20–30 кДа, а также довольно большое число Взаимодействие фермента с АТР и ADP. Центры
(n = 9–12) одинаковых копий более мелкой субъе- связывания ATP и ADP ферментом находятся на
диницы c (молекулярная масса 6–11 кДа). Ан- субъединицах α и β, каждая из которых может удер-
самбль этих субъединиц формирует в мембране живать по одной молекуле ATP или ADP. Согласно
протонпроводящий канал, по которому ионы водо- данным рентгеноструктурного анализа, участки
рода попадают к фактору сопряжения F1 . связывания молекул ADP и ATP находятся на сты-
Строение фактора сопряжения F1 . Водораствори- ках между α- и β-субъединицами. Известно, что
мый фрагмент Н+АТРсинтазы представляет собой лишь β-субъединицы выполняют каталитические
белковый комплекс, который состоит из девяти функции синтеза и гидролиза ATP. За счет некото-
субъединиц пяти типов, получивших название рого различия в составе и способе укладки поли-
субъединиц α, β, γ, δ и ε. Одна молекула фермента пептидных цепей субъединиц α и β они по-разному
содержит три одинаковые α- и три одинаковые β- взаимодействуют с молекулами ATP, ADP и Pi . Свя-
субъединицы, а также по одной субъединице γ, δ и ε зываемые каталитическими центрами β-субъеди-
(сокращенное обозначение α3β3γδε). У фактора со- ниц молекулы ATP и ADP могут обмениваться с
пряжения F1 , выделенного из митохондрий сердца другими молекулами ADP и ATP. Напротив, моле-
крупного рогатого скота, полипептидные цепи кулы ATP и ADP, связываемые α-субъединицами,
субъединиц α, β, γ, δ и ε образованы из 510, 482, 272, удерживаются настолько прочно, что в ходе функцио-
146 и 50 аминокислот соответственно. Субъедини- нирования фермента они практически не обменива-
цы α и β являются гомологичными – они очень по- ются с молекулами ATP и ADP, находящимися во
хожи друг на друга по составу аминокислот и прост- внешней среде. Эти прочно связанные α-субъеди-
ранственному строению. Приблизительно 20% ницами молекулы ATP и ADP, по-видимому, не
участков полипептидных цепей этих субъединиц, имеют прямого отношения к образованию ATP из
включая участки связывания ADP и ATP, совпадают ADP и Pi , а выполняют лишь определенные регуля-
полностью. торные функции.
Полипептидные цепи субъединиц α и β уложены
в похожие по своему пространственному строению ùçÖêÉÖíàäÄ ëàçíÖáÄ Äíê Ç ÄäíàÇçéå
белковые глобулы, которые вместе образуют еди- ñÖçíêÖ îÖêåÖçíÄ
ный ансамбль. Недавно группе ученых из Кембридж- Работа Н+АТРсинтазы в качестве молекулярной
ского университета, возглавляемой Дж. Уокером, машины по синтезу АТР связана с ее структурными
удалось методом рентгеноструктурного анализа рас- перестройками, в ходе которых изменяются состоя-
шифровать трехмерную картину пространственно- ния каталитических центров фермента. Каждая из
го строения F1 с разрешением 2,8 Å [7]. Данные трех каталитических β-субъединиц может пооче-
рентгеноструктурного анализа и результаты элек- редно находиться в одном из трех конформацион-
тронно-микроскопических исследований показа- ных состояний, различающихся по степени сродст-
ли, что молекула F1 имеет вид приплюснутого шара ва молекул АТР, ADP и Pi к каталитическому
высотой 80 Å и шириной 100 Å. Подобно плотно центру. Эти состояния схематически показаны на
уложенным долькам апельсина, образующим шар, рис. 5: 1 – состояние “открытого” центра, с кото-
все субъединицы α и β расположены попеременно рым могут связаться молекулы ADP и Pi ; 2 – состоя-
вокруг протяженной субъединицы γ, расположен- ние с “закрытым” каталитическим центром, кото-
ной в центре молекулы F1 (рис. 3). Благодаря этому рый прочно удерживает молекулы АТР, ADP и Pi ;
молекула F1 образует структуру, характеризующую- 3 – состояние, в котором ослабляется связь молеку-
ся осью симметрии третьего порядка. Если повер- лы АТР с каталитическим центром и происходит ее
нуть ее на 120° вокруг оси, совпадающей по направ- диссоциация в раствор.
лению с субъединицей γ, то каждая из субъединиц α и
β переместится соответственно на место другой ана- Рассмотрим последовательность событий, при-
логичной субъединицы, в результате поворота на 60° водящих к образованию ATP из ADP и Pi . Схему ре-
субъединицы α и β поменяются местами. акций ферментативного синтеза ATP можно запи-
сать следующим образом:
Субъединица γ имеет вид слегка изогнутого
P 〈P 〉 H O
стержня длиной около 90 Å, образованного двумя ADP + P i + E i
E ADP i
E 〈 ADP 2
E 〈 ATP
〉 〉
протяженными полипептидными цепями. Ее ниж-
H O
няя часть выступает приблизительно на 30 Å из 2
E ATP E + ATP + H 2 O.
шара, образованного субъединицами α и β (рис. 3).
В центре всего ансамбля находятся минорные Здесь символом E обозначена каталитическая β-
субъединицы δ и ε. Субъединицы γ и δ играют роль субъединица фермента, свободная от субстратов
связующего звена между мембранным (F0) и водо- (ADP и Pi) и продуктов (АТР) реакции. Символы

14 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹7, 1997


Следует особо отметить, что на данной стадии
Pi α
работы АТРсинтазы, когда происходит образование
β β ковалентной связи между фосфатными группами
молекул ADP и Pi , ферменту практически не требу-
ATP ATP ется энергии. Этот факт был впервые установлен
ADP
Бойером с сотрудниками, которые с помощью ра-
диоактивных изотопов O18 и P32 показали, что реак-
ции синтеза и гидролиза ATP в каталитическом
γ
центре фермента активно идут при отсутствии
1 δ ε 3 внешнего источника энергии, поскольку они на-
β блюдаются даже в разобщенных хлоропластах и ми-
тохондриях. Очевидно, что условия, в которых на-
ADP + Pi ходятся молекулы ADP и Pi в каталитическом
α α центре, существенно отличаются от условий про-
ATP текания реакции в водной среде, благодаря чему
образование молекулы ATP в активном центре
2 фермента может происходить энергетически “бес-
платно”. Установлено, что константа равновесия К
〈P 〉 H O
〉 близка к единице, K ≈ 1.
i 2
Рис. 5. Схема, иллюстрирующая энергозависи- реакции E 〈 ADP〉 E 〈 ATP
мые изменения состояний каталитических цент- Это означает, что с приблизительно равной вероят-
ров. ностью в каталитическом центре можно обнару-
Состояние 1 – каталитический центр субъедини- жить молекулу ADP или молекулу ATP. Равновесие
цы β открыт; в этом состоянии молекулы ADP и P i 〈P 〉 H O
i 2
связываются и сравнительно слабо удерживают- E 〈 ADP 〉 E 〈 ATP〉 имеет динамический характер: в
ся активным центром субъединицы β.
каталитическом центре фермента самопроизвольно
Состояние 2 – каталитический центр закрыт; мо-
лекулы ADP и Pi прочно удерживаются каталитиче- идут многочисленные акты образования и разрыва
ским центром. В этом состоянии из связанных мо- ковалентной связи между фосфатными группами
лекул ADP и Pi может образоваться молекула ATP, ADP и Pi .
прочно удерживаемая каталитическим центром
фермента. В результате работы Н+АТРсинтазы в цитоплазме
Состояние 3 – связь молекулы АТР с каталитиче-
ским центром ослаблена, образовавшаяся из ADP клетки появляются новые молекулы АТР. В водных
и Pi молекула АТР диссоциирует в раствор. Ре- растворах синтез АТР является энергетически невы-
зультатом последовательных конформационных годным процессом. К тому же, как мы только что от-
перестроек (состояние 1 состояние 2 метили, непосредственно в активном центре фер-
состояние 3) является образование АТР из ADP и P i
мента образование молекулы ATP происходит
P 〈P 〉
энергетически бесплатно. Возникает вопрос: на ка-
〉 обозначают β-субъединицы, содер-
i i
E ADP и E 〈 ADP ких стадиях работы Н+АТРсинтаза использует энер-
жащие соответственно слабо- и прочносвязанные гию внешнего источника? Исследования Бойера,
2
молекулы ADP и Pi . Символами E 〈 ATP 2 H O H O Слейтера и других ученых показали, что в цикле фер-
〉 и E ATP обо-
ментативного синтеза АТР энергия необходима в
значены β-субъединицы, содержащие прочно- и сла-
первую очередь для освобождения прочно связанной
босвязанные молекулы ATP.
молекулы ATP из каталитического центра. Действи-
Самым первым актом в цепи событий, приводя- тельно, пока молекула ATP, образовавшаяся энерге-
щих к образованию ATP, является связывание моле- тически бесплатно, прочно удерживается фермен-
кул ADP и Pi активным центром свободной β-субъ- том, она никак не может быть использована другими
единицы, находящейся в состоянии 1, ферментами, для работы которых требуется энергия
ADP + P i + E iP
E ADP . гидролиза АТР. Иными словами, прочно связанная
молекула ATP может стать источником свободной
За счет энергии внешнего источника в молекуле энергии только после ее диссоциации в раствор.
F1 происходят конформационные изменения, в ре-
зультате которых ADP и Pi становятся прочно свя- Поэтому следующий этап работы фермента за-
занными с каталитическим центром (состояние 2), ключается в том, что в результате энергозависимого
структурного изменения молекулы F1 каталитичес-
P 〈P 〉
i
E ADP i
E 〈 ADP 〉. кая субъединица β, содержащая прочно связанную
молекулу АТР, переходит в новое состояние, в кото-
В этом состоянии в каталитическом центре фер- ром связь ATP с каталитическим центром ослаблена:
мента становится возможным образование АТР:
〈P 〉
i H O
2 H O
2 Энергия H O
2
E 〈 ADP 〉 E 〈 ATP 〉. E 〈 ATP〉 E ATP .

íàïéçéÇ Ä.ç. åéãÖäìãüêçõÖ èêÖéÅêÄáéÇÄíÖãà ùçÖêÉàà Ç ÜàÇéâ äãÖíäÖ 15


В результате этого молекула ATP покидает фермент, фермента (гидролиз АТР молекулой F1). Чтобы сде-
уступая место в каталитическом центре другим мо- лать видимым это движение, они воспользовались
лекулам ADP и Pi из раствора: хитроумными приемами молекулярной биологии.
H O
2 К выступающему вниз основанию подвижной субъ-
E ATP E + ATP + H 2 O.
единицы γ (со стороны F0) им удалось химически
Оказавшись свободной, субъединица β возвращает- “пришить” молекулу специального маркера – флуо-
ся в исходное конформационное состояние 1, бла- ресцирующий фрагмент нити актина (белок, входя-
годаря чему и обеспечивается цикличность работы щий в состав мышц) длиной около одного микрона,
фермента. за движением которого можно наблюдать с помо-
Описанные выше переходы между состояниями щью микроскопа. Остальную часть молекулы F1
1 2 3 (рис. 5) происходят в результате энер- они обездвижили, прочно “пришив” все три субъе-
гозависимых структурных перестроек Н+АТРсин- диницы β к неподвижной подложке. В ходе работы
тазы, которые осуществляются за счет энергии фермента (гидролиз АТР) наблюдалось направлен-
внешнего источника. Эти перестройки имеют коо- ное против часовой стрелки вращение молекулы
перативный характер – они одновременно затраги- нити актина, химически связанной с субъединицей
вают состояния всех трех каталитических субъеди- γ. При отсутствии источника энергии (когда систе-
ниц β, входящих в состав Н+АТРсинтазы. В ма не содержала молекул АТР) регулярного враще-
результате трех последовательных структурных пе- ния субъединицы γ не происходило, а наблюдались
реходов одной β-субъединицы в растворе появится лишь случайные флуктуации, обусловленные теп-
одна новая молекула ATP и станет меньше на одну ловыми движениями. Таким образом впервые была
молекулу ADP и одну молекулу Pi . Однако, учиты- наглядно продемонстрирована работа самого ма-
вая, что молекула F1 содержит три β-субъединицы, ленького из всех известных моторов! Размеры этой
то после каждого энергозависимого структурного молекулярной машины (субъединица γ – ротор, а
перехода Н+АТРсинтазы в растворе будет появлять- ансамбль субъединиц α3β3 – статор), как мы отмеча-
ся одна новая молекула ATP. ли выше, составляют всего лишь 80 × 100 Å. Макси-
Структурные особенности строения молекулы мальная скорость вращения такого макромолеку-
F1 давно делали весьма привлекательной гипотезу о лярного мотора достигала четырех оборотов в
том, работа Н+АТРсинтазы связана с механически- секунду. Это, конечно, ниже скорости вращения ро-
ми движениями ее отдельных частей. Можно было тора (17 оборотов в секунду), которую можно было
предположить, что за счет энергии внешнего источ- бы ожидать исходя из того, что в нормальных усло-
ника происходит вращение ансамбля субъединиц виях (без нагрузки) одна молекула фермента гидро-
α3β3 вокруг расположенной в его центре субъедини- лизует 52 молекулы АТР в секунду. Однако не следует
цы γ (либо поворот субъединицы γ внутри всего забывать, что вращение длинного хвоста, пришито-
комплекса F0F1). Такому вращению может способ- го к субъединице γ для того, чтобы можно было на-
ствовать наличие своеобразной смазки в местах блюдать ее вращение, представляет собой большую
контакта субъединицы γ с остальными субъеди- гидродинамическую нагрузку для мотора макро-
ницами молекулы F1 . Согласно данным рентге- молекулярных размеров. Вращательный момент,
ноструктурного анализа, центральная часть субъ- развиваемый этим мотором, превышает величину
единицы γ гидрофобна, то есть не содержит 4,5 ⋅ 10−20 Н ⋅ м.
заряженных групп, которые могли бы создавать Обычно считается, что производство АТР моле-
трение, препятствующее вращению ансамбля субъ- кулой H+ATPсинтазы представляет собой реакцию,
единиц α3β3 относительно субъединицы γ. Учиты- обратную реакции ферментативного гидролиза
вая некоторую асимметрию в строении субъедини- АТР. Поэтому можно предположить, что направле-
цы γ (субъединица γ имеет форму слегка изогнутого ние работы H+ATPсинтазы – синтез или гидролиз
стержня), нетрудно представить, что после поворо- АТР – непосредственно связано с направлением
та всего ансамбля α3β3 одновременно изменятся механического вращения этого макромолекулярно-
структурные состояния всех трех каталитических го мотора.
субъединиц β (переходы 1 2, 2 3, 3 1). Под действием каких сил происходят структур-
Таким образом, в результате поворота ансамбля α3β3 ные перестройки фермента, вызывающие измене-
вокруг субъединицы γ на 120° в растворе станет ние сродства молекул ATP, ADP и Pi к каталитичес-
меньше на одну молекулу ADP и одну молекулу Pi , ким субъединицам в ходе функционирования
но вместо них появится одна новая молекула АТР. H+ATPсинтазы? Имеются все основания думать,
В самое последнее время появились прямые до- что это может происходить в результате электроста-
казательства того, что субъединица γ действительно тических взаимодействий, инициированных про-
может вращаться относительно фактора сопряже- цессами протонирования и ионизации кислотных
ния F1 . Это удалось сделать группе группе японских групп A аминокислотных остатков, входящих в со-
исследователей [8], которые с помощью флуорес- став фактора сопряжения F1 ,
центного микроскопа впервые непосредственно
− −
наблюдали за движением субъединицы γ при работе
+ +
H in + A AH A + H out .

16 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹7, 1997


Протонирование этих групп может происходить за плекса. Поэтому до тех пор, пока через Н+АТРсин-
счет достаточно высокой концентрации ионов во- тазу течет электрический ток (в отличие от обычного
дорода со стороны сопрягающей мембраны, где на- электродвигателя его носителями являются про-
ходится протонпроводящий канал F0 , подводящий тоны), это уникальное макромолекулярное энер-
ионы водорода к F1 . Если с противоположной сто- гопреобразующее устройство будет способно со-
роны мембраны, куда обращена молекула F1 , кон- вершать химическую работу – синтезировать
центрация ионов водорода ниже, чем со стороны молекулы АТР.
F0 , то в эту область может диссоциировать протон
группы AH. В результате этого ионы водорода из ãàíÖêÄíìêÄ
области с высоким протонным потенциалом (со 1. Ленинжер А. Биохимия. М.: Мир, 1976.
стороны F0) будут проходить через F0F1-комплекс 2. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная
на другую сторону сопрягающей мембраны, обеспе- биология клетки. 2-е изд. М.: Мир, 1994. Т. 1.
чивая тем самым попеременное протонирование и 3. Рэкер Э. Биоэнергетические механизмы. М.: Мир,
депротонирование функционально важных групп 1967.
фермента. Перенос ионов протонов через F0F1-ком- 4. Николс Д.Д. Биоэнергетика: Введение в хемиосмо-
плекс может происходить также под действием тическую теорию. М.: Мир, 1985.
электрического поля при наличии разности потен- 5. Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран.
циалов на сопрягающей мембране. До тех пор, пока М.: Наука, 1989.
за счет работы цепи электронного транспорта на 6. Тихонов А.Н. Трансформации энергии в хлороплас-
мембране будет поддерживаться поток протонов че- тах – энергопреобразующих органеллах растительной
рез Н+АТРсинтазу, циклический процесс протониро- клетки // Соросовский Образовательный Журнал.
1996. № 4. С. 24–32.
вания и депротонирования функциональных кислот-
7. Abrahams J.P., Leslie A.G.W., Luter R., Walker J.E.
ных групп фермента будет повторяться многократно, Structure at 2,8 A Resolution of F1-ATPase from Bovine
обеспечивая тем самым синтез новых молекул ATP. Heart Mitochondria // Nature. 1994. Vol. 370. P. 621–628.
8. Noji H., Yasuda R., Yoshida M., Kinoshita K., jr. Direct
Observation of the Rotation of F1-ATPase // Ibid. 1997.
áÄäãûóÖçàÖ Vol. 386. P. 299–302.
На примере работы Н+АТРсинтазы мы попыта-
лись проиллюстрировать некоторые основные * * *
принципы работы молекулярных преобразователей Александр Николаевич Тихонов, доктор физи-
энергии в клетке. Функционирование этого самого ко-математических наук, профессор, главный на-
главного фермента мембранной биоэнергетики учный сотрудник кафедры биофизики физического
можно уподобить работе электромеханической факультета Московского государственного уни-
машины, содержащей вращающиеся “детали”. верситета им. М.В. Ломоносова. Область научных
Подобно тому как электрический ток в обмотке интересов: биофизика фотосинтеза, биоэнергети-
электродвигателя приводит во вращение ротор от- ка, магнитная радиоспектроскопия. Автор трех
носительно статора, направленный перенос прото- книг (совместно с Л.А. Блюменфельдом, А.К. Ку-
нов через Н+АТРсинтазу может вызывать вращение кушкиным, В.А. Твердисловым и Л.В. Яковенко) и
отдельных субъединиц фактора сопряжения F1 от- более 130 статей в отечественных и зарубежных
носительно других субъединиц ферментного ком- научных журналах.

íàïéçéÇ Ä.ç. åéãÖäìãüêçõÖ èêÖéÅêÄáéÇÄíÖãà ùçÖêÉàà Ç ÜàÇéâ äãÖíäÖ 17