Biotechnology & Bioindustry

ISSN: 0205-2067 (Print) (Online) Journal homepage: https://www.tandfonline.com/loi/tbeq19

Клонирование и амплификация ДНК

актиномицетов: возможное использование для
конструирования организмов, продуцирующих
антибиотики

В. Н. Даниленко, С. М. Навашин, В. Данилснко, С. Навашин, V. Danilenko

& S. Navashin

To cite this article: В. Н. Даниленко, С. М. Навашин, В. Данилснко, С. Навашин, V. Danilenko

& S. Navashin (1986) Клонирование и амплификация ДНК актиномицетов: возможное
использование для конструирования организмов, продуцирующих антибиотики,
Biotechnology & Bioindustry, 1:1, 5-9, DOI: 10.1080/02052067.1986.10819247

To link to this article: https://doi.org/10.1080/02052067.1986.10819247

Published online: 15 Apr 2014.

Submit your article to this journal

Article views: 257

View related articles

Full Terms & Conditions of access and use can be found at

https://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=tbeq20
Клонированне и амплификация
ДИК актиномицетов:
возможное использование

для конструирования организмов,

продуцирующих антибиотики

В. Н. Даниленко, С. М. Навашин
Всесоюзный
научно-исследовательский институт антибиотиков,
Министерство медицинской промышлености,
Москва, СССР

Актиномицеты рода Streptomyces продуцируют '

плазмидных и фаговых векторов (3-7), с открытием
около 70 процентов антибиотиков, применяемых в того, что плазмидная и фаговая ДНК эффективно
медицине и сельском хозяйстве(О. До недавнего вре­ трансформируют протопласты, обработанные по­
мени продукция антибиотиков, в том числе оптими­ лиэтиленгликолем (8,9). Первая плазмида из Strep-
зация питательной среды и параметров ферментации tomyces SCP2 была выделена и описана в 1975 году
и подбор мутаций, повышающих способность Н. Schrempf et а\. из лаборатории D. Hopwood. До
культуры к синтезу антибиотиков, интенсифицирова­ сих пор показано, что 15-25 процентов штаммов
лись эмпирически. За последние 30-50 лет уровень Streptomuces содержат плазмидные ДНК (6,10-14).
продуцирования многих антибиотиков увеличился в Из большого числа идентифицированных плазмид
сотни и тысячи раз. Однако дальнейшее его повыше­ Streptomyces векторные системы были скоструирова­
ние обычными методами зачастуJQ невозможно. ны на основе плазмид с малым числом копий из
Прогресс в молекулярной генетике и генной инжене­ S. coelicolor A3(2):SCP2 и семейства SLPI(3) и на ос­
рии, который наблюдается в последнее время, об­ нове плазмид с большим числом копий piJ 1О 1 ( 15),
ещает быстрое увеличение уровня продуцирования pSB24 (5,6) u pUC (16) и некоторых других (13).
известных антибиотиков и конструирования штам­ Конструирование векторных систем в различных

мов, продуцирующих новые антибиотики. Рекомби­ лабораториях на основе независимо выделенных

плазмид можно рекомендовать, так как даже плаз­
нантная ДНК технология позволяет выделить гены,
включенные в биосинтез антибиотиков, и перенести миды с широким спектром "хозяев" не могут су-.
их в нужный штамм. Комбинация генов, контроли­ ществовать во всех штаммах Streptomyces. Исполь­
рующих биосинтез родственных антибиотиков в од­ зование методов молекулярной r:енетики и генной
ном организме, может привести к созданию штамма,
инженерии в исследовании организации и функцио­
продуцирующего новый антибиотик, не встречаю­
нирования генома Streptomyces уже позволило уста­
новить такие факторы, как интенсивная амплифи­
щийся в естественных условиях. Клонированне и
кация фрагментов хромосомной ДНК и наличие ре­
амплифика..ция генов, которые контролируют лИ'м:и­
гуляторных элементов (2), открывающие новые воз­
тирующие стадии биосинтеза антибиотиков, дают
можности для конструирования штаммов, проду­
возможность сконструировать штамм с повышенным
цирующих антибиотики.
уровнем продуцирования антибиотика.
Раньше усилия в селекции специфических высо­ В данной статье представлены результаты ис­
коактивных штаммов были недостаточщ>I для на­ следования направленной амплификации фрагмен­
учного обоснования нового этапа в улучшении штам­ тов хромосомной ДНК из Streptomyces с целью по­
мов или конструировании новых организмов. С ис­ вышения уровня продуцирования антибиотиков и
пользованием методов генной инженерии и моле­ конструирования новых векторных систем на основе

кулярной генетики для повышения уровня проду­ этого явления.

цирования антибиотиков и конструирования Конструирование штаммов с пов.ышенным про­

организмов, продуцирующих новые антибиотики, дуцированнем антибиотиков предполагает на опре­
можно буде:_ применять рпыт и результаты прежних деленном этапе амплификацию структурного гена,
исследовании по улучшению штаммов или конструи­ определяющего их биосинтез. Как правило, для ам­
рованию новь •. :. штаммов. плификации генов испольЗуются векторные молеку­
Клонированне генов, определяющих продукцию лы с большим числом копий. Некоторые характер­
антибиотиков при культивировании Streptomyces, ные особенности генома Streptomyces предоставляют
представляется возможным с конструированием дополниrслньные возможности для амплификации

1 /BIOTECHI'IOLOGY AND BIOINDUSTRY 5

генов, контролирующих биосинтез антибиотиков. Данные указывают на амплификацию (многок­
Исследование различных штаммов Streptomyces ратное увеличение числа копий) фрагмента ДНК с
молекулярной массой 10.3 Md в штамме Р • Этот
3
(6,23-29) показало способность определенных фраг­
ментов ДНК к интенсивной амплификации в их ге­ элемент был обозначен aSRI т. е. амплифицирован­
номах. Было установлено, что амплификация воз­ ный S. rimosus. Способность генетическог) элемента
можна во фрагментах ДНК с молекулярным весом aSRI, содержащего детерминант Каnг, к направлен­
от 5 до 58 Md. Амплификация может привести к ной амплификации наводит на мысль, что и другие
увеличению числа копий фрагментов до 500 на ге­ фрагменты ДНК различных штаммов Streptomyces,
ном. Механизм такой интенсивной амплификации содержащие детерминанты устойчивости к антибио­
исследуется и его выяснение может иметь существен­ тикам, могут быть амплифицированы таким же об­
ное значение для направленной амплификации неко­ разом.

торых сайтов ДНК в геноме Streptomyces. Используя способность генетического элемента

Для амплификации нужных генов, к примеру aSRI к амплификации, мы попытались сконструи­
тех, которые контролируют продуцирование анти­ ровать векторные системы, которые могут сущес­

биотиков, необходимо разработать методы направ­ твовать автономно и в интеграции с хромосомой.

ленной селекции вариантов, содержащих амплифи­ В последнем случае мы надеялись получить направ­
цированные последовательности. Детерминанты ленную амплификацию в хромосоме.
устойчивости к антибиотикам являются самыми под­
ходящими маркерами для селекции. Раньше было
показано (31,32), что для большей части актиноми­ К онструироnание
цетных штаммов присуща естественная множествен­
пtбридных плазi\Шд
ная лекарственная устойчивость, детерминанты ко­
торой локализованы в различных сайтах хромосомы pStJJ - pStJ 13 S. rimosнs,
(2). Явление амплификации генетического элемента содержащих Kanr
eSAI было открыто нами у S. antibioticus - орга­
.Iстсрмин.ант
низма, продуцирующего олеандомицин (23,33), и мы
попытались осуществить направленную амплифи­
В качестве вектора была использована плазмида SLP
кацию детерминанта устойчивости к антибиотикам.
1.2(34), способная с большой частотой интегриро­
В качестве модельной системы был использован
ваться с хромосомой, а в качестве раципиента -
штамм S. rimosus, устойчивый к большинству ами­
штамм S. lividans 66, чувствительный к 0.1 mg/ml
ног ликозидных антибиотиков.
канамицина. В одном из экспериментов вся ДНК
S. rimosus Р3 была полностью гидролизована ре­
стрикционной эндонуклеазой Pstl. Полученный пре­
Н а правленная амплификация парат был связан с фрагментом ;Psti-A плазмиДы­
Каnrдетерминанта SLР1.2. После трансформации протопластов

у S. rimosнs S. lividans 66 были отобраны клоны, устойчивые к

1О mg/ml канамицина. Были выделены 13 независи­
мых Kanr• вариантов, содержащих гибридные плаз­
Штамм S. rimosus 183 устойчив к следующим ами­
миды, обозначенные pSUI-pSUI3. Рестрикционный
ногликозидным антибиотикам: канамицину (Км),
анализ гибридных плазмид показал, что 10 из них
неомицину (Nm) паромомицину (Pm), стрептоми­
включают фрагмент Рsti-Агенетического элемента
цину (Sm), гентамицину (Gm),сизомицину Ss), тоб­
aSRI с молекулярной массой 6,3 Md, определяющий
рамицину (ТЬ) и апромицину (Apr) в дозах 10-50
устойчивость к канамицину в каждой из возможных
mg/ml. S. rimosus 183 продуцирует окситетрациклин
ориентаций. В трех других гибридных плазмядах
и не синтезирует аминогликозидных антибиотиков.
клонираванный фрагмент элемента aSRI содержал
Проведевы эксперименты по ступенчатому повы­
идентичные делеции с Молекулярной массой 0,5 Md.
шению уровня устойчивости к канамицину в клеточ­
Наряду с фрагментом Psti-A елемента aSRI плаз­
ной культуре S. rimosus 183. В результате многократ­
мяды pSU4 и pSU6 включали дополнительные фраг­
ных субкультивирований с возрастающей концентра­
менты неизвестной природы с молекулярной массой
цией антибиотика был отобран вариант S. rimosus, соответственно 5,3 и 2, 7 Md. Была сконструирована
обозначенный РЗ, способный расти в присутствии ка­
рестрикционная карта плазмиды pSU3(6).
намицина в количестве so' 000 mg/ml.
Вся ДНК, выдr~ленная из исходиого штамма ва­
рианта РЗ, т. е. И3 S. rimosus 183, была обработана
рестрикционнымм эндонуклеазами Pstl, Pvuii, Sall .\\ш.тшфикация
и Slal. Получею'iые фрагменты ДНК были разделены r ибридных плазми.t
электрофорезом: в агаризированном геле. Штамм 183
имел обычные. рестрикционные свойства, характер­
pSL 1-pSUJЗ у S.lividans
ные для прокарнотной ДНК. В тоже время ДНК Возможность амплификации 13 сконструированных
штамма РЗ показала необычно интенсивные полосы гибридных плазмид была проележена в ходе экспе­
после обработки Pvuii (5 полос), Sall (7 полос), Slal риментов по повышению устойчивости к канами­
(2 полосы) и Pstl (3 полосы). Сумма молекулярной цину. Во всех случаях отбирались варианты S. livi-
массы фрагментов после обработки каждой из вы­ dans 66, содержащие гибридные плазмиды, устой­
шеуказанных нуклеаз была одинаковой в пределах чивые к антибиотику в концентрации 500 и 1О 000
экспериментальной ошибки и составляла 10.3 Md. mg/ml. Рестрикционный анализ общей ДНК 26 отоб-

6 БИОТЕХНОЛОГИЯ И БИОТЕХНИКА/1
_::Jанных вариантов позволил обнаружить интенсив­ Показ<~НО, что мутация, ведущая к фенотипу Kan', не
ные фрагменты ДНК, достигающие 40 процентов связана со структурным геномом Kan', находящимся
генома и соответствующие гибридным плазмидам, в плазмиде pSU 1О. Она локализована в хромосоме
независимо от ориентации,делеции в клонированном S.livid<1ns. Фенотип Kan' nолучен в результате
фрагменте генетическото элемента aSRI и присутст­ уменьшения числа копий регуляторного элемента,
вия дополнительных фрагментов с молекулярной нюванного RESI, количество которых в исходном
массой 5,3 и 2,6 Md в плазмидах pSU4 и pSU6. Сле­ штамме было \0-15 на геном. Реверсия к фенотиnу
дует отметить, что клонированный фрагмент элемен­ Kan' может быть обусловлена одним из следующих

та aSRI всегда обеспечивал стабильную коамплифи­ явлений: амnлификацией до исходного уровня RESI
кацию плазмиды SLP 1.2 и дополнительного фраг­ или амnлифик<~цией до 300 коnий на геном в гибрид­
мента с молекул я рной массой 5,3 Md. ной нлазмиде pSU 1О, содержащей детерминант Kan'.
Амнлиф11кания детерминанта Kan' с сохранением
Изучение кинетики амnлификации гибридных
нсрвоначш1ьно1 о уровня RESI nривела к более чем
нлазми;t вариан гов S. lividans с различными уров­
1000-кратному увеличению уровня устойчивости.
нями устойчивости к антибиотикам nоказало, что
Было nоказано. что RESI контролирует эксnрессию
между уровнем устойчивости к антибиотикам и чис­ ряда функционально не связанных характеристик -
лом коnий интегрирующегося амплификационного наnример. определение устойчивости к хлорамфени­
вектора существует корреляция. Это означает, что колу. Следовательно. что касается детерминанта
их можно исnользовать в качестве векторов с кон­ Кап'. то циклическая реверсирующая генетическая
гролируемым числом коnий на геном. tlсстабильность обусловлена сnособностью регуля­
Наличие уникальных сайтов узнавания для Bam торных и структурных генов к амnлификации.
Н\, CLal и Sacl, расположенных в несущеетвенной Таким образом, изменяя число копий или/и ст­
области nлазмид pSU 1 - pSU 13, и относительная руктурные гены детермин<~нтов устойчивости к кана­
стабильность амплифицированных вариантов (30- мицину и хлорамфениколу, можно менять в широких
1000~) nозволили исnользовать их для конструиро­ 1раницах устойчивость штамма к этим антибиоти­
вания но11ых векторов и амплификации в системе кам.

nрокарнотной и эукариотной ДНК Streptomyces. Мы rюnьп<tлись nоказать наличие корреляции

между образованием вариантов и изменениями неко­
торых характеристик штамма S. rimosus , nродуци­
рующеr о окситетрациклин. Было отмечено, что
часть отобр<1нных вариантов Kan' теряют свою сnо­
собность синтезировать окситетрациклин. Как указа­
но вь~ше, варианты Kan' могут реверсировать к ис­
ходному резистситному фенотипу с частотой \.10-
1
Идентификация .
Анализ реверсирующих к Kan' вариантов nоказал,
и характеристика
что все они nриобретают сnособность nродуциро­
регуляторного элемента вать окситетрациклин. Более того, уровень nродуци­

S. lividans (RESI) рования у четверти реверсирующих вариантов был

в 3 раза выше, чем у исходных Kan' штаммов. По
и его возможное
аналогии со штоммом S. lividans можно предnоло­
использование жить, что изменения, ведущие к фенотипу Kan' обус­
ловлены уменьшением ·числа копий регуляторного
для повышения уровня
элемента, контролирующего также экспрессию про­
продуцирования дуцирования окситетрациклина. Реверсия к фенотипу
о~ситетрациклина Kan' у части вариантов была связана с амплифика­
цией регуляторного элемента до более высокого
штаммом S. rimosus уровня, чем в исходном штамме, что привело к nо­
вышению уровня nродуцирования окситетрациклина
Генетическая нестабильность характерна для боль­
в 3 раз<~.
шинства особенностей вторичного метаболизма у
актиномицетов (2). Часто определенное число функ­
ционально не связанных характеристик теряется од­

новременно. Подобная потеря имеет обратимый и

циклический характер. Показано (36,37), что реверси­ Конструирование
рующая генетическая нестабильность может быть а\1плификационных векторных
обусловлена сnособностью к амплификации регуля­
систем на основе
торных и структурных генов, контролирующих ис­

следуемые нестабильные характеристюси. S. rimosus 1 сметического элемента

183 образует сnонтанные варианты, чувствительные t•SAI S.antibloticus
к канамицину,с частотой О, 1-1%(38).Варианты Kan'
реверсируют к nервоначальному устойчивому типу с Дру1 oii 11111 интегрирующегося амплификационного
частотой 1.1 О- 1. Была исследована возможность ре­ вектора бюируется на плазмиде E.coli pBR325 и на
версирующей генетической нестабильности детерми­ фрагментах ДНК генетического элемента eSAI S.an-
нанта Kan' гибридной плазмиды pSU10 S. lividans. tiЬioticus. Как было показано раньше (23) и отмечено
Установлено, что детерминант Kan' S.lividans так­ выше в настоящей статье, элемент eSAI способен к
же характеризуется переходами Ka.n'Kan' при часто­ амплификации в S.antiЬioticus до 150 копий на геном
те \. ю- 3 · Осуществлено молекулярное клонирование фрагмен-

1 /BIOTECHNOLOGY AND BIONDUSTRY 7

товBamHI и Pstl ДНК элемента eSAI на плазмиде та медицина. Засега традиционните методи за подобряване на ща­
pBR325 ( 17,39). Были сконструированы гибридные мовете-продуцентн на антибиотици. в по-голямата си част не да­
ват резултатн. Прогресът в молекулярната генеТИiа и гениото ин­
плазмиды, включающие каждый из девяти фрагмен­ женерство може съществено да допривесе за по-нататьшното по­
тов BamHI генетического элемента eSAI и плазмиды, вишаване на количеството на произвежданите антибиотици и
несущие фрагменты Psti-C, Psti-E и Psti-D элемента конструирането на организми, продуциращи нови антибиотици.
Биосинтезът на антибиотици се контролира от много гени и конст­
eSAI. руирането на щамове-суперпродуценти на антибиотици, с използ­
Было предположено, что гибридные плазмиды ването на рекомбинантиа ДИК технология, не е лесна задача.
могут интегрироваться в гомологичной области хро­ Н стuтиятu се описв<t приложенисто на скоро откритото мвле­
ние - интензивна ст<tбилн<t амплификация (до 500 копия н<t ге­
мосомы S.antiЬioticus и амплифицироваться в генети­
ном) н;~ удължени фр<tгменти н<t ДНК при Streptomyces за повиша­
ческом элементе eSAI во время селекции, направлен­ ванс нивото li<t биосинтез;~ в щамове-продуценти на антибиотици.
ной на повышение устойчивости к хлорамфениколу. Предложени са методи за директна ;~мплифик<tция на фрагменти
IШ гсномi.l. оnределящи биосинтез;~ H<l желаните nродукти. Дават
Известно, что детерминант устойчивости к хлорам­
се nримсри з<t конструир<tне н<t интегрир;~щи амnлификационни
фениколу экспрессируется у Streptomyces (40). Однако вектори с р<tзличен брой копия в генома на основата на фрагменти
S.antiЬioticus чувствителен к этому антибиотику. Н<! хромозомна ДНК. способни з<t ;~мплифик;~ция. Разглеждат се
възможностите за изnолзв;~не на регул;~торните елементи на
Сконструированные гибридные плазмиды можно
Stгeptomyces З<t оnтимизация н<t ексnресията nри nродуцирането
также использовать для картирования мутаций, свя­ на антибиотици.
занных с характеристикой, определенной генетиче­
ским элементом eSAI.
Cloning and amplification
of DNA in actinomycetes:
Факторы, стимулирующие
possiЬle USE
амплификацию в геноме streptomyces
for construction
Стабильность болыпинства характеристик вторич­
ного метаболизма у Streptomyces, включая способ­
of antiblotic-producing
ность продуцировать антибиотики и устойчивость к organisms
ним, в значительной мере зависит от многих хими­
У, Di.!пilenko. S, Ni.!Vi.!shin
ческих и физических факторов (2). К примеру, после
обработки так называемыми "лечащими" агентами (SUMMARY)
частота вариантов с измененной способностью про­
Actiпomycctcs of the geпus Streptomyces produce <tbout 70 per cent
дуцировать антибиотики или измененной устойчи­
of humi.ln <tnd veterin<try <tntiЬiotics, At present the rouriпe <tpproaches
востью к ним (38) может достигнуть десятков про­ to improvement of <tпtiЬiotic-producing strains maiпly f<til, The
центов. Влияние "лечащих" агентов различно для progrcss in molccul<tr gcnctics and gепс engineering may Ье of value
различных штаммов и свойств. Наряду с такими in further iпcreasing of the productioп levels of the known aпtiЬiotics
i.lnd construction of orgaпisms, producing new antiЬiotics,
факторами, как воздействие высоких температур Biosynthcsis of i.lntiЬiotics is coпtrolled Ьу many geпes and
(37°) и химических веществ, взаимодействующих с construction of superstr<tins of antiЬiotic-producing organisms with the
ДНК (например, бромистого этидия, акрилфлавина, usc of thc rccomЬiп<tnl DNA techпology is not <tп easy task, The paper
describes the use of а receпtly discovered pheпomenon of iпtensive
акридинового оранжевого, митомицина и др.), ам­
i.lnd sti.IЬ!c <~mplifici.ltion (up to 500 copies per <1 geпome) of elongated
плификацию фрагментов ДНК в геноме Streptomyces fragments of chromosom<tl DNA iп Streptomyces for iпcreasing the
значительно стимулируют мутационные явления: де­ productioп levels of aпtiЬiotic-producing straiпs. Approaches
леция и изменение числа копий регуляторного эле­ providing dircctcd amplification of the geпome fragments deteгmining
Ьiosynthesis of the required products ;~re presented. Examples of
мента (24,29,37). Все перечисленные эффекты можно constructioп of i.lmplific<ttion integrative vectors with varying пumЬers
использовать для направленной амплификации фраг­ of thc copics in i.l gcnome on the b<tsis of the chromosomal DNA
ментом ДНК, кодирующих желаемые свойства в ге­ fragmeпts Ci.lpaЬle of amplific<ttion are given. The possiЫe use of the
Strcptomyccs regul;~tory elements for optimiZi.ltioп of antiЬiotic
номе Streptomyces. Недавно было сообщено (25), что
production exprcssion is discussed.
такой подход использован для практических целей.
После обработки S. tendae сублетальной дозой ак­
ЛИТЕРАТУРА
рилфлавина была достигнута интенсивная ампли­
фикация фрагмента хромосомной ДНК. Уровень 1. Вerdy, J. Proccss.- Biochem., 1980, Oct.-Nov., 28-35
продукции инхибитора а-амилазы такими варианта­ 2. Стародубцева, Л. И, В. Н. Даниленко, С. М. Навашин. - Ан­
ми в 20 раз выше, чем исходным штаммом. тибиот .. 19&4. N! 7. 536-555
3. Chater, К. Р., D. А. Hopwood, Т. Кieser.- Curr. Тор. MicroЬiol,
lmmuпol .. 96. 1982. 69-95
Клониране и амплификация 4, ВiЬЬ, М. J., К. 1•. Chater, D. А. Hopwood. - Exper. Maпipulation
in Biotcch .. 1983, 54--80
на ДИК при актиномицети: 5. Danilenko, V. N., Уа. А. Potekhin, У. А. Orlova.- Iп: Coпference
Mcti.lbolic Pli.l,~mids. T<!llin. 1982, 50-52
възможности за използване 6. Даниленко, В. К., Я. D. Потехин. - Антибиот. 1984. N.! 8.
563-572
при конструиране
7, HershЬerger, С. L., J. L. Larson, S. Е. Fishman.- Iп: Aпnals New
на щамове-продуценти York Ac<tdcmy .of Sciences. 413. 1983, 31--46.
8, ВiЬЬ, М. J., J.l\1. Ward, D. А. Hopwood. - Nature 274, 1978,
на антибиотици 39Н-400
9. Kriigel, Н., G. Fiet11er, D. Noack.- Molec. gеп. Geпet., 177, 1980.
8, Д;~нилснко. С Н<tв<tшин 297-300
10. Hopwood, D. А., Hl. М. Wright, М. Thompson - MicroЬiology,
(РЕЗЮМЕ) 1981. 376-379
11. Danilenko, У. N., \1. А. Orlova, V. G. Вogush. - Iп. FEMS
Актиномицетите от рода Streptomyces продуцират около 70% Symposium on Overproduction of MicroЬiol. Products, Abstracts.
от антибиотнците, които се използват в хуманната и ветеринарна- Hri.ldec Kr<tlove Chec.hoslov;~kia, 1981. 242

8 БИОТЕХНОЛОГИЯ И БИОТЕХНИКА/1
12. Murakami, Т., С. Nojiri ... ~ J. Antibiot., 35. 1982, 369~373 2Х. Roblnson, М., Е. Lewis, Е. Napier. ~· Molec. gеп. Genet., 182.
13. Murakami, Т., С. Nojiri. -· J. AntiЬiot .. 36, 1983, 429---434 1981 ..'136-- 340
14. Кieser, Т., О. А. Hopwood. ~ Molec. gen. Cenet 155, 1982. 223~ 29. Schrempf, Н. ~ Molec, gen. Genet .• 189, 1983, 501~505.
23Х 30. ~·ishman, S. Е., Р. R. Rosteck, С. L. HershЬerger. ~ J. Bacteriol.,
15. Toyama. Н., Е. Hayashi. ~ J. AntiЬiot .. 35. 1982. 369~373 16. llJIO. 199~206
16. Manis .. J. J., S. К. Highlander. ~. ln: Trend in Biotech .. 1. 1983. 31. ДанилеiiКО, в. н., г. г. nузжИИ/13, н. Д. Ломовская. ~ Генети­
р 42 ка. 13. 1977. 1831-~1842
32. nyзжiiHHa, г. г.. Б. н. Даниленко. Антибиотики. 1977.
17. Орлова, В. А. ИсtСНJИф. и характеристики экстрахромосомной
N~ 10. lJOlJ~lJI5
ДНК. Дис. канд. Л .. 19Х2
33. Daпilenko, \'. N., У. А. Orlova. ln: Genetics of lndust.
1Х. Bibb. 1\1. J., R. ~·reeman. D. А. Hopwood. ~ Molec. gen. Genet.,
Мiсгоог~;. Abstracts. Eds. У. lkcda. Т. Beppu. Tokyo, 1982, 110
1:'\4. 1977. 155 166
34. Bibb, 1\1. J., J. 1\1. Ward, Т. Кieser. ~ Molec. gen. Genet .. 184.
llJ Birnboin, Н. С., J. Doly. ~- Nucl .. Acids Rcs .. 7. 1979. 1513~1523
llJXI. 23!~- 240
20. \larmur, J. ~- J. nюlcc. Biol .. 3. 1961. 208·~218
35. Thompsoп, G. J., Т. Кieser, J. М. Ward. ~ Gene. 120. 1982. 51~
21. Southern, Е. 1\1. J. molec. Biol .. 1975. 503~517 (>2
' ' llop~·ood~ В. А., Н. М. Wright. ~ Molec. gen. Genet .. 162. 1978,
3(). l>anilenko, \'. N .. Уа, А. Potekhin. -··· ln: lnternational Geпetics.
307 -317
Coпgrcss. Abstracts. Ncw Delly. 19Ю. р.214
23. Ор,юва. В. А .. В. Н. Дани.1еко. ~- Антибиотики. 1983. N2 3. 3- · 37. noтeXHII, я. А. в. н. Дани.~енко. ~ Mo.l. Био.lОГИЯ, 19. 1984.
7 ()3l) 648
24. Altenbuchner, S .• J. Cullum. ~ Molcc. gcn. Genet .. 195. 1'184, 3Х. Федоренко. В. А., В. Н. Даниленко. Антибиотики, 1980.
IЧ 13Х N~ 3.174170~
Koller, К.-Р.. J. Egels, Е. l!hlman. ln: Third European 39. Danileпko, У. :'11., В. А. Orlova. ~ In: Symp. Genetics and
Coпgгcss оп Biotcchпolo~;y. Мuпсhсп. 3. 1984, 219~224 DiiTcгcпt of Лctiпomycctcs. Weimar. GDR. 1983. р. 3
26. ~·ishman. S. ~·., С. 1.. HershЬerger. ~ J. Bacteriol .. 155. 1983. 40. Schottel, М. J. Bibb, S. N. Cohen.- J. Bacteriol. 146. 1981. 36().-
-15LJ 4()6 3hX
27. Опо, Н.,(;. Hintermann. Molcc. gcn. Geпetic .. 186. 1982. 106-- 41. Chater, К.~·., С. J. Bruton. Genc. 26. 1983. б7~ 78
110 67-·7Х

К сведению авторов
нашего журнала

щей машинке с черной лентой. на белой размером больше или равным размеру кли­
непрозрачной бумаге. предоставляются в ше.

В новом журнале .. Биотехнология и Ьио­ 2-х экземплярах. б) Чергежи выполняются черной тушью
техника·· будут публиковаться научные 5. Страницы стандартные: бумага плотными "1иниями на кальке или белой
статьи и обзоры. рекламные материалы. 21/29,5 см, 30 машинописных строк на гладкой бумаге размером больше или рав­

новости. сообщаться о событиях и фактах. странице (включительно примечания под ным размеру к:шше.

связанных с развитием и применением био­ чертой) с б6 ударами в строке. Интервал 10. Обзор литературы должен отражать

I ехнологии и биомашиностроения в сле­ между строками двойной, б мм. современный уровень рассматриваемого

дующих основных нанравлениях: генная и б. Заt·оловки до:tжны быть краткими, вопроса, ври этом авторы используют

клеточная инженерия. биопродукты и био­ точными, без сокращений. Имя и фамилия только оригинальные работы и в порядке
нроцессы. ашшратурное оснащение биотех­ автора пишутся под заголовком, а под име­ исключения реферативные журналы и учеб­
нолоi ических процессов. включающее и со­ IJем указывается научное учреждение. в ко­ ники.

здание автоматизированных систем управ­ гором работает автор (если это ВУЗ, то 11. Библиография составляется стан­

:Iения. На страницах журнала будут пуб­ указывается институт или факультет). дартно на пишущей машинке. имена авто­

:шковаться также статьи видных зарубеж­ Таким же образом оформляются и ре­ ров и название работ указываются точно

ных авторов (на русском и английском зюме. В тексте и ре1юме единицы измере­ в алфавитном порядке ~ сначала публи­
языках) с соответствующими резюме на ния должны соответствовать требованиям кации на кириллице, а затем ~ на латин­

болгарском языке. Международной системы единиц (СИ). ском. Указывается только та литература.

Журнал ~ орган Национального совета 7. Тексты резюме предоставляются в 2- которая цитируется в тексте под соответ­

по биотехнологии. Он будет выходить в х экземплярах на отдельной странице. Раз­ ствующим номером.

объеме 48 страниц (6 печ.л.), 6 раз в год .. мер каждого резюме составляет 5~8 про­
I 2. Все тексты на иностранных языках,
тиражом I 500 экземпляров. центов основного текста рукописи.
а также цитируемая литература должны
Для то1о чтобы обеспечить ~воевремен­ 8. Все таблицы. разграфленные и про­
быть написаны на пишущей машинке или
ный выпуск очередных номеров журнала. нумерованные. прилагаются на отдельных
от руки печатными буквами, чернилами или
редакция сдает материалы в типографию лиLлtх в конце работы. а их место в тексте
черной шариковой ручкой.
за два месяца внеред. отмечается цветным карандашом на левом
13. Страницы рукописи, в том числе таб­
Рукописи. предназначенные для публи­ поле соответствующей страницы.
лицы, резюме, приложения и непалвые лис­
кации в журнале, должны отвечать следую­ 9. Иллюстративные материалы ·- сним­
ты. нумеруются последовательно, без по­
щи~ требованиям: ки. схемы, карты, диаграммы и др. (ори­
в горения нумерации страниц.
1. Объем научных статей до I2 ма- гинальные, а не копии) нумеруются и при­
JJiинописных страниц и не более б рисунков лагаются в конце рукописи в конверте вмес­ 14. За все опубликованные работы (за
и 1 аблип. а обзорных до I8 машинопис­ те с описью текста под иллюстрациями. исключением диссертаций или частей дис­
ных страниц и 8 р· сунков и таблиц. Номера рисунков должны отвечать номе­ сертаций) выплачивается гонорар в со­
2. Рукописи принимаются к печати при рам. указанным в тексте (цветным каран­ ответствии с Тарифами авторских и других
на;шчии опенок двух анонимных рецензен­ дашом на левом поле), по относится и к вознаграждений за издания.
тов. одобренных редакцией. обозначениям на оборотной стороне каж­ В конце рукописи на отдельном листе
3. Не принятые к печати рукоПиси авто­ дой иллюстрации. указываются имя, отчество и фамилия ав­
ра~ не возвращаются. а) Снимки должны быть ясными, кон­ тора, его адрес (домашний и служебный),
4. Рукописи, написанные ясно на пишу- грастными, на хорошей глянцевой бумаге, телефон и семейное положение.

1 /BIOTECHNOLOGY AND BIOINDUSTRY 9