МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ

УКРАИНСКАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ

И.Л. ДИКИЙ
И.Ю.ХОЛУПЯК
Н.Е.ШЕВЕЛЕВА
М.Ю.СТЕГНИЙ

МИКРО
БИОЛОГИЯ
Для студентов фармацевтических вузов и
фармацевтических факультетов
медицинских институтов

Под редакцией д-ра мед. наук, проф.,

акад. АНТК Украины, И. Л.
ДИКОГО
Харьков «Прапор»
Издательство УкрфА 1999
ББК 52.64
Д45

Рекомендовано Науково-методичнию KOMICHW аз фармацию

Mimіcmepcmea oceimu Украни
як піручник для студентів фармацевтичних вузів
та фармацевтичних факультетів медичних інcmumymiв

Рецензенти:
А. Я. Циганенко, професор,
зав. кафедрою мжробюлоги, вірусології та імунології
Харківського державного медичного університету,
академік вищої школи Украни
А. А. Воробйов, професор, зав. кафедрою
мікробіології з вipyсoлогією та імунологіею
Московської медичної академії ім. І. М. Сеченова,
академік РАМН, академік міжнародної академії наук
ВИЩ0ї ШКОЛИ

В учебнике обобщены современные достижения в области медицинской,

фармацевтической, санитарной и химической микробиологии. Представлены
фундаментально-прикладные положения по морфологии, физиологии прокариотов,
эукариотов и вирусов; рассмотрены методы культивирования бактерий и вирусов,
механизмы взаимодействия вирусов с клеткой. Освещены вопросы инфекции,
химиотерапии, иммунитета, иммунопатологических состояний,
иммунобиотехнологии. Обобщены материалы по микроэкологии, основам асептики
и антисептики, микробной контаминации лекарственного сырья и препаратов.
Изложены сведения о возбудителях инфекционных болезней.
Рассчитан на студентов и преподавателей фармацевтических и медицинских
высших учебных заведений.
 4107020000-023
Без оголош.
218-99

Д
 © І. Л. Дикий, І. Ю. Холупяк, Н, Ю. Шевельова,
М. Ю. Стегній, 1999 ©
ISBN 5-7766-0755-8 Видавництво «Прапор», 1999 ©
ISBN 966-615-005-0 Видавництво У крФА, 1999
 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

АІDS (от англ. acquired immunodeficiency syndrome) — синдром

приобретенного иммунодефицита человека (СПИД).

DDC — хивид, противовирусный препарат.

DDI — видекс, противовирусный препарат.

DLМ (от лат. dosis letalis minima) — наименьшее количество

микробов, которое вызывает гибель 95 % зараженных восприимчивых
лабораторных животных определенного вида и стандартной массы.
FAB-фрагмент молекулы Ат (иммуноглобулина) (от англ. fragment
antigen binding) — фрагмент, связывающий антиген.
Fc-фрагмент молекулы Ат (иммуноглобулина) (от англ. fragment
crystalline) — кристаллический фрагмент.
GMP (от англ. good manufacturing practice) — надлежащая
производственная практика (НПП), свод обязательных принципов, норм
и правил в химико-фармацевтическом производстве.
НА — гемагглютинин, поверхностный антиген вириона гриппа.
HIV (от англ. human immunodeficiency virus) — вирус иммунодефицита
человека (ВИЧ).
HLA (от англ. human leucocyte antigens system A) — генетический
комплекс главной системы гистосовместимости человека.
HTLV (от англ. human T-lymphotropic virus) — вирус человека,
обладающий тропизмом к Т-лимфоцитам. IHBcAg
— сердцевинный антиген вируса гепатита В.
HBsAg — поверхностный антиген вируса гепатита В.
Ig (от англ. limphadenopaty associated virus) — вирус, вы-
LAV зывающий лимфаденопатию.
минимальная доза микроорганизмов, вызывающая гибель 50
% экспериментальных животных.
LD 50
 NA — нейраминидаза.
NNN-среда — среда Нови — Николь — Ниль.
Аг — антиген.
Аг — Ат — иммунный комплекс антиген — антитело, образующийся в
результате их специфического взаимодействия.
АДС-анатоксин — дифтерийно-столбнячный анатоксин.
АЗТ — азидотимидин, противовирусный препарат.
АКДС — ассоциированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина.
АЛС — антилимфоцитарная сыворотка.
Ат — антитело (син. иммуноглобулина — Ig).
БКЯ — болезнь Крейцфельдта — Якоба.
БЦЖ (от фр. Bacille de Calmette et de Guerin — BCG) — живая
противотуберкулезная вакцина, полученная французскими
учеными А. Кальметтом и Ш. Гереном.
ВГА — вирус гепатита А.
ВИЧ — вирус иммунодефицита человека.
ВОЗ — Всемирная организация здравоохранения.
ГА — гепатит А.
ГГСИ — госпитальные гнойно-септические инфекции.
ГЗТ — гиперчувствительность замедленного типа.
ГЛС — готовые лекарственные средства.
ГНТ — гиперчувствительность немедленного типа.
ГСИ — гнойно-септические инфекции.
ГЦ-пары — гуанин-цитозин-пары.
ИД — иммунодиффузия.
ИФА — иммуноферментный анализ.
ИЭМ — иммунная электронная микроскопия.
ИЭФ — иммуноэлектрофорез.
КОКАВ — концентрированная культуральная антирабическая вакцина.
КУА — казеиново-угольный агар.
МКМ — микрометр (10-6 м).
МНС (от англ. major histocompatibility complex) — главный комплекс
гистосовместимости, группа сцепленных генов, играющих
главную роль в совместимости тканей при трансплантации.
МПА — мясо-пептонный агар.
МПБ — мясо-пептонный бульон.
МРВ-А— медленно реагирующие вещества при анафилаксии, жирные
кислоты — медиаторы аллергии.
МФФ — Международная федерация фармацевтов.
НАГ-вибрионы — вибрионы, неагглютинирующиеся типовыми
холерными сыворотками.
НМ - нанометр (10-9 м).
ОКЗ — острые кишечные заболевания.
ОРЗ — острые респираторные заболевания.
ПАВ — поверхностно-активные вещества.
ПАСК — парааминосалициловая кислота.
PA — реакция агглютинации.
РБН — реакция биологической нейтрализации.
РИА (от англ. radioimmunoassay — RIA) — радиоиммунный
анализ.
РИАГА — реакция иммуноадгезивной гемагглютинации.
РИТ — реакция иммобилизации трепонем.
ЗШФ — реакция иммунофлюоресценции.
РМА — реакция микроагглютинации.
РН — реакция нейтрализации.
РНГА (РПГА) — реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации.
РНП — рибонуклеопротеин.
РОЭ — реакция оседания эритроцитов.
РП — реакция преципитации.
РСК — реакция связывания комплемента.
РТ — ретикулярные тельца, вегетативные формы хламидий.
РТГА — реакция торможения гемагглютинации.
РТПХ — реакция «трансплантат против хозяина».
РХПТ — реакция «хозяин против трансплантата».
РЭМА — реакция энзимомеченых антител.
РЭС — ретикулоэндотелиальная система.
СИБ — система индикаторных бумажек, используемая для видовой
дифференциации бактерий по ферментативным свойствам.
СКВ — системная красная волчанка.
СМЖ — спинномозговая жидкость.
СМФ — система мононуклеарных фагоцитов.
СОЭ — скорость оседания эритроцитов.
СПИД — синдром приобретенного иммунодефицита человека.
Т50- период времени, за который концентрация препарата в
крови уменьшается на 50 %.
ТМС - туберкулопротеидная маточная субстанция, белковая
фракция микобактерий туберкулеза.
ТЦД50/МЛ— тканевая цитопатическая доза вируса, вызывающая
поражение 50 % монослоя клеток.
УФ-лучи — ультрафиолетовые лучи.
ФГА - фитогемагглютинин, митоген растительного
происхождения.
ФПР - фрагмент К-плазмиды, ответственный за перенос ре-
зистентности.
ЦМ - цитоплазматическая мембрана.
ЦНС - центральная нервная система.
ЦПД - цитопатическое действие (вирусов, токсинов и прочее)
в культуре клеток.
ЭИКП - энтероинвазивная кишечная палочка.
ЭПКП - энтеропатогенная кишечная палочка. элементарные
ЭТ - тельца, спороподобные формы хламидий.
ЭТКП - энтеротоксигенная кишечная палочка.
 ПРЕДМЕТ, ЦЕЛИ ЗАДАЧИ
МИКРОБИОЛОГИИ

Микробиология (от греч. micros — малый,

bios — жизнь, iogos — учение) — наука о мельчайших,
невидимых невооруженным глазом микроорганизмах
растительного или животного происхождения.
Микробиология является одной из отраслей общей
биологии и изучает закономерности жизни и развития
Микроорганизмов в единстве с условиями среды их
обитания, а также тех изменений, которые они
вызывают в организмах животных и растений. Эта
наука разрабатывает методы использования микробов
для нужд человека, пути и способы обезвреживания
тех из них, которые являются опасными для жизни и
здоровья людей.
Знание основ микробиологии крайне необходимо
фармацевту в его профессиональной деятельности,
поскольку без знаний в этой области немыслимо
рациональное производство многих лечебно-
профилактических средств: вакцин, сывороток,
антибиотиков, гормонов и других препаратов, а также
невозможно оценить порчу лекарственного сырья и
разработать эффективные меры его предупреждения.
Особо следует отметить, что возникновение и
быстрое развитие биотехнологии, приобретающей все
большее значение в народном хозяйстве, базируется
прежде всего на использовании микроорганизмов как
продуцентов множества полезных веществ:
кормового белка, многих ферментов, антибиотиков,
стероидных препаратов, аминокислот, витаминов и т.
д. На использовании микроорганизмов основаны
методы генной инженерии, позволяющие создавать
новые штаммы с заданными биологическими свой-
ствами.
Технология получения многих лекарственных
средств требует асептических условий. Асептика и
антисептика — это неотъемлемые компоненты знаний
в области микробиологии, поэтому в каждой
контрольно-аналитической лаборатории предусмотрен
микробиологический контроль.
Провизору необходимы совершенно точные и
конкретные знания о возбудителях заразных
заболеваний человека и живот-
ных, лекарственных растений, способах передачи, патогенезе за-
болеваний, их лечении и профилактике.
Медицинская микробиология изучает морфологию, физиологию,
отношение к внешним воздействиям среды, изменчивость
микроорганизмов, основы инфекционного процесса, иммунитета,
особенности возбудителей, патогенез инфекционных заболеваний,
методы их лабораторной диагностики, специфического лечения и
профилактики.
Кроме медицинской, микробиология имеет и ряд других са-
мостоятельных научных разделов:
общая микробиология изучает общие закономерности развития и
жизнедеятельности микроорганизмов, их роль в круговороте веществ в
природе, общие признаки наследственности и изменчивости;
ветеринарная микробиология изучает болезнетворные микро-
организмы, вызывающие инфекционные заболевания у животных,
разрабатывает методы их специфической диагностики, профилактики и
лечения;
сельскохозяйственная микробиология изучает роль микроорганизмов
в почвообразовательных процессах, разрабатывает методы повышения
плодородия почвы с помощью микроорганизмов, получения удобрений и
кормов для животных;
пищевая микробиология разрабатывает методы получения пищевых
продуктов с помощью микроорганизмов, а также способы защиты
пищевых продуктов от микробной порчи;
санитарная микробиология изучает микрофлору воздуха, воды,
почвы для гигиенической характеристики и оценки их как возможного
источника и путей передачи инфекции; разрабатывает методы очистки
воды, почвы, воздуха от микробов, прежде всего, патогенных;
техническая, или промышленная микробиология разрабатывает
научные основы получения антибиотиков, витаминов, ферментов, пути и
методы предохранения сырья от микробной порчи.
Фармацевтическая микробиология — это профессионально
ориентированная дисциплина, интегрирующая основы медицинской,
санитарной и промышленной микробиологии. Фармацевтическая
микробиология изучает: возбудителей инфекционных заболеваний
человека и растений; условия микробной порчи лекарственного сырья и
контаминации препаратов в процессе изготовления и хранения; правила
асептики, антисептики и дезинфекции при промышленном и
экстемпоральном изготовлении фармацевтических препаратов;
технологии получения антимикробных и иммунобиологических
препаратов лечебно-профилактического и диагностического назначения.
 ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ
НАУЧНОГО СТАНОВЛЕНИЯ
МИКРОБИОЛОГИИ

Медицинская микробиология является одной из фун-

даментальных дисциплин современного естествознания. «Медицина,
которая служит человеку, слагается из науки и искусства, и над ними
простирается чудесный покров героизма, без которого не может быть
медицины». Это слова Гуго Глязера, автора широко известной книги
«Драматическая медицина». Они по праву адресованы прежде всего
микробиологам, гигиенистам и инфекционистам, доказавшим риском
собственной жизни, всем историческим опытом борьбы с пандемиями и
эпидемиями, что их главный жизненный девиз: «Светя другим, сгораю
сам!».
На знамени драматической медицины героический поступок Макса
Петтенкофера, выпившего в доказательство эпидемической природы
холеры культуру возбудителя, и повторивших этот опыт И. И.
Мечникова, Н. Ф. Гамалея, Д. К. Заболотного, И. Г. Савченко.
Первым привил себе чуму и погиб от нее английский врач
А. Уайт. Несмотря на трагический исход, последовали новые опыты по
заражению себя чумой, их провели Р. Дженнет, А. Ф. Бюллар, А. Клот, А.
Розенфельд, Э. Валли.
Высокую жертвенность во имя познания инфекционной сути
желтой лихорадки проявили Н. Поттер, И. Л. Гюйон, К. Финлей, В. Рид,
Д. Кэррол, Д. Ласеар.
История борьбы с малярией также чрезвычайно богата на-
пряженными драматическими ситуациями, главными действующими
лицами которой по праву признаны Р. Росс, Д. Грасси и А. Биньями.
Последний сумел осуществить первое умышленное заражение малярией
посредством укуса комара.
Еще до той поры, когда ученые приступили к изучению
инфекционных болезней точными научными методами, в Одессе в 70-х
годах XIX века русский врач О. О. Мочутковский провел на себе
эксперимент с сыпным тифом. Пять раз он безрезультатно заражал себя
и лишь на шестой — заболел сыпным тифом. Французский бактериолог
Ш. Николь также благодаря опытам на себе установил, что
промежуточным хозяином возбудителя сыпного
9
тифа является платяная вошь. За это открытие он в 1928 году был
удостоен Нобелевской премии.
Русские ученые Г. Н. Минх и И. И. Мечников заражали себя
возвратным тифом, Е. И. Марциновский (впоследствии директор
Московского института тропических болезней) — лейшманиозом,
итальянский врач Д. Профета — проказой. Эти опыты не были
напрасными. Они помогли в борьбе против болезней, вызываемых
бактериями и другими микроорганизмами. В конечном итоге эта борьба
закончилась величайшими победами, вписавшими славные страницы в
книгу прогресса медицины, в становление микробиологии как
фундаментальной научной дисциплины.
Возникновение и развитие медицинской микробиологии как науки
теснейшим образом связано с развитием знаний в изучении
инфекционных болезней. Эпидемические болезни существовали на всех
ступенях развития человеческого общества. Известно, что
ликвидированная на планете в 1977 году натуральная оспа уносила
миллионы жизней еще за 1120 лет до н. э. За 500 лет до н. э. было
известно о бешенстве. Наблюдая за развитием эпидемий, люди пытались
объяснить их происхождение. Гиппократ (460—370 гг. до н. э.) считал,
что причиной эпидемии является вдыхаемый людьми воздух, который во
время эпидемий содержит особые болезнетворные испарения — миазмы.
В 1546 году Д. Фракастро опубликовал трактат «О контагии, о
контагиозных болезнях и лечении», в котором отмечается, что контагии
представляют собой невидимые активные существа и заражение людей
происходит в результате соприкосновения и даже на расстоянии. Это
была гениальная догадка о существовании микробов.
Заслуга открытия микроорганизмов принадлежит А. ван Левенгуку
(1632-1723), голландскому шлифовальщику стекол, сконструировавшему
первый в мире микроскоп. При помощи этого инструмента, снабженного
двояковыпуклой линзой с 300-кратным увеличением, Левенгук наблюдал
клеточную структуру растений, зародышей, открыл существование
сперматозоидов, а также различных микроорганизмов. В зубном налете,
отварах и настоях он обнаружил невидимых невооруженным глазом
«живых зверьков» — аnimalcula и зарисовал различные их формы —
шаровидные, палочковидные, извитые. Левенгук — основоположник
первого, морфологического периода в развитии микробиологии, давший
последователям важнейшее инструментальное обеспечение — микроскоп.
Однако сам Левенгук не мог указать, какую роль в природе и жизни
человека играют открытые им микроорганизмы или, как назвал их в
дальнейшем французский исследователь Седилло, микробы.
С открытия Левенгука начинается описательный период в развитии
микробиологии. Спустя 100 лет О. Мюллер (1786) в Дании,
10
пользуясь более совершенным микроскопом, описал большое количество
микроорганизмов, разделив их на два рода — Vibrio и Mоnas. В 1838 году
X. Эренберг на основании их признаков установил два семейства
микроорганизмов Моnadina и Vibrionia с родами Васterium, Spirillum,
Sрirochaetа.
В 1775 году русский исследователь М. М. Тереховский впервые
описывает экспериментальный метод исследования движения
микроорганизмов, изучает влияние ряда физико-химических факторов
(электрические заряды, вариации температуры, Кислотность и т. п.) на
жизнеспособность микроорганизмов. Он описывает результаты своих
весьма важных наблюдений относительно потребностей
микроорганизмов в кислороде, впервые отмечает, что перед делением
микроорганизмы растут и увеличиваются в размерах.
Однако в начале XIX века большинство исследований в области
микробиологии носили описательный характер. Вторая половина XIX
века ознаменовалась поистине революционными успехами в развитии
медицинской микробиологии, чему в немалой степени способствовали
достижения естествознания, такие как открытие клетки, закона
превращения энергии, создание эволюционного учения Ч. Дарвина.
Именно в это время жил и работал гениальный французский
исследователь — химик и биолог по образованию — Луи Пастер. Роль
этого выдающегося естествоиспытателя в бурном развитии
микробиологии непереоценима. Вот как ее охарактеризовал В. Л.
Омелянский: «С Пастера начинается второй, физиологический период в
истории микробиологии... И если Левенгуку с полным основанием
приписывается название «отца микрографии», то Пастер был истинным
творцом и вдохновителем современной микробиологии, со сказочной
быстротой разросшейся в огромную науку» (Избранные труды. Т. 2.—
М., 1953.—С. 6).
Являясь основоположником изучения физиологии и биохимии
микробов, Л. Пастер раскрывает сущность молочнокислого и
маслянокислого брожения, показывает, что оно вызывается ни чем
иным, как бактериями. Л. Пастер открывает анаэробный тип дыхания у
бактерий, доказывает, что любое заразное заболевание имеет своего
микроба-возбудителя.
Исследования в области брожения и самопроизвольного заражения
послужили основой решения вопроса о «болезнях» вина и пива. В
качестве меры борьбы Пастер предложил прогревать вино при 50—60º
С. Эти исследования утвердили принципы стерилизации и метод
пастеризации.
Основываясь на исследованиях Л. Пастера, Д. Листер в 1867 году
ввел в хирургическую практику метод антисептики. В течение короткого
времени Пастером были открыты возбудители гнойно-воспалительных
заболеваний, куриной холеры и т. д. На примере
11
 культуры возбудителя куриной холеры он впервые установил факт
утраты ею вирулентности и способность этой ослабленной культуры
создавать невосприимчивость к последующему заражению кур
вирулентной культурой. Сделанный Пастером на основании этих опытов
вывод о возможности применения ослабленных культур для
формирования невосприимчивости к инфекционным заболеваниям создал
предпосылки для развития нового научного направления —
вакцинопрофилактики.
Доказывая правомерность своих выводов, Пастер получает
сибиреязвенную, а затем антирабическую вакцины. Это было одно из
величайших достижений в области медицины: открытие эффективного
средства профилактического лечения болезни, которая в течение столетий
считалась неизлечимой.
Второе, не менее славное имя в развитии микробиологии — Роберт
Кох, который окончательно установил этиологию сибирской язвы (1876);
разработал и применил плотные питательные среды, выделил чистые
культуры; ввел в микробиологическую практику анилиновые красители,
разработал метод иммерсии и микрофотографирования; обосновал и
сформулировал триаду Генле — Коха, по которой признается роль
микроба как возбудителя заболевания; заложил научные основы
дезинфекции; открыл возбудителя туберкулеза и доказал инфекционную
природу этого заболевания, получил туберкулин; открыл возбудителя
холеры и изучил эпидемиологию этого заболевания.
Исключительно большое значение в развитии нового, оригинального
направления микробиологии имеют исследования И. И. Мечникова —
основателя учения об иммунитете — невосприимчивости организма к
инфекционным заболеваниям. По определению Э. Ру, И. И. Мечников —
это поэт микробиологии. Ему принадлежит приоритет творца
фагоцитарной теории иммунитета, основоположника физиологического
направления в иммунологии.
И. И. Мечников заложил основы учения об антагонизме бактерий,
явившегося плодотворным источником для создания учения об
антибиотиках, указал на огромное значение внешней среды для изменения
свойств микробов, которые передаются по наследству, исследовал
проблемы долголетия в связи с направленным изменением микрофлоры
кишечника молочнокислыми бактериями. Совместно с Э. Ру он разработал
модель экспериментального сифилиса, исследовал патогенез холеры. И. И.
Мечников создал блестящую школу русских микробиологов, среди
которых А. М. Безредка и Н. Ф. Гамалея, В. Л. Омелянский и И. Г.
Савченко, Л. А. Тарасович и Д. К. Заболотный и многие другие.
В 1888 году французские ученые Э. Ру и А. Йерсен открыли
дифтерийный токсин, а Ш. Китазато — столбнячный токсин.
12
 В 1889—1892 годах Э. Беринг в Германии, Э. Ру во Франции, Я. Ю.
Бартах в России независимо друг от друга получили антитоксическую
дифтерийную сыворотку. В 1923 году Г. Рамон получил дифтерийный
анатоксин. Эти два препарата позволили эффективно бороться с грозными,
нередко смертельными инфекциями.
В конце XIX века, который по праву считается эрой бактериологии,
было открыто огромное количество возбудителей инфекционных
заболеваний:
1880 — возбудитель брюшного тифа (К. Эберт);
1883 — возбудитель дифтерии (Э. Клебс);
1891 — возбудители дизентерии (К. Шига);
1892 — вирус табачной мозаики (Д. И. Ивановский);
1894 — возбудитель чумы (А. Йерсен, Ш. Китазато).
В этот же период С. Н. Виноградский устанавливает роль микробов в
круговороте азота в природе, вводит метод элективных питательных сред.
В 1909 году Г. Риккетс открывает возбудителя сыпнотифозной лихорадки,
а в 1913 — С. Провачек открывает возбудителя сыпного тифа.
В истории микробиологии начало XX века отмечено интенсивной
разработкой проблемы специфической профилактики инфекционных
заболеваний: вакцина против туберкулеза (А. Кальметт и Ш. Герен),
противочумная вакцина (Г. Жирар и К. Робик), противотуляремийная
вакцина (Б. Я. Эльберт, Н. А. Гайский), вакцина против полиомиелита (А.
Сейбин, М. П. Чумаков, А. А. Смородинцев), дифтерийный и
столбнячный анатоксины (Г. Рамон). В 1917 году д'Эррель открывает
бактериофаги.
Этот период является основополагающим в развитии эффективных
средств лечения инфекционных заболеваний — создается учение о
химиотерапевтических препаратах и антибиотиках. Основатели
химиотерапии — П. Эрлих, Д. Л. Романовский, Г. Домагк. Им
принадлежит не только заслуга в обосновании основных требований к
химическим препаратам, применяемым для лечения инфекционных
заболеваний, но и обоснование условий их синтеза (метод химических
вариаций П. Эрлиха), разработка химиотерапевтического индекса —
основного показателя в характеристике этой группы препаратов, создание
наиболее широко используемых в настоящее время сульфаниламидов.
С 1929 года благодаря исследованиям А. Флеминга по разработке
пенициллина открывается новая эра в лечении инфекционных
заболеваний — эра антибиотикотерапии. В развитии этого направления
приняли участие Э. Б. Чейн и X. У. Флори, 3. В. Ермольева и С. Ваксман.
В 30-е годы нашего столетия в микробиологическую практику был
введен электронный микроскоп, позволяющий детально
13
исследовать ультраструктуру вирусов и бактерий, разработаны основы
микроскопической техники (ультратонкие срезы, гистохимические
методы окраски).

ЭТАПЫ РАЗВИТИЯ ВИРУСОЛОГИИ

Честь открытия вирусов принадлежит Д. И. Ивановскому,

который впервые в 1892 году на примере мозаичной болезни табака
доказал существование новой формы возбудителя.
Слово «вирус» в древнеримском языке означало «яд», «отрава», оно
применялось еще Л. Пастером для обозначения заразного начала.
В 1949 году происходит открытие, сыгравшее важную роль в
истории вирусологии,— возможность культивирования клеток в
искусственных условиях. В 1952 году Д. Эндерс, Т. Уэллер и Ф. Роббинс
за разработку метода культивирования культуры клеток получили
Нобелевскую премию. Появилась возможность выделения
многочисленных новых вирусов, получения культу-ральных вакцин. Так,
М. П. Чумаков и А. А. Смородинцев в содружестве с американскими
вирусологами Дж. Солком и А. Сейбином разработали убитую и живую
вакцины против полиомиелита. В 1959 году в нашей стране была
проведена массовая иммунизация детей живой полиомиелитной
вакциной, что позволило снизить заболеваемость и привело к
практическому исчезновению паралитической формы болезни.
В современной вирусологии широко используют методы мо-
лекулярной биологии. Вирусы благодаря простоте их строения являются
распространенной моделью для молекулярной биологии. Ни одно
открытие молекулярной биологии не обходится без вирусной модели,
включая генетический код, весь механизм внутриклеточной экспрессии
генома. Развитие молекулярной биологии способствовало изучению
первичной структуры нуклеиновых кислот и белков, появлению методов
определения последовательностей аминокислот в структуре белка.
В 1972 году возникает новый раздел молекулярной биологии —
генная инженерия. Появляется возможность получения большого
количества нуклеиновых кислот и белков путем введения
рекомбинантных ДНК в состав генома прокариотов и простейших.

РОЛЬ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ УЧЕНЫХ В

РАЗВИТИИ МИКРОБИОЛОГИИ

Отечественные исследователи обогатили мировую мик-

робиологию своими выдающимися открытиями. Так, Д. С. Самойлович
(1744—1805), испытав на себе, первым применил при-
14
вивки против чумы и разработал методы борьбы с этой грозной
инфекцией.
Огромный вклад в развитие отечественной медицины и
микробиологии внес современник Л. Пастера и И. И. Мечникова —
Л. С. Ценковский. В 1883 году по аналогии с методом аттенуации
Пастера он разработал и получил вакцину против сибирской язвы,
которая в течение 60 лет применялась в нашей стране для про-
филактики заболевания у животных. Л. С. Ценковский по праву
считается основателем медицинской микробиологии в России.
В конце XIX века возникла сельскохозяйственная микро-
биология, основоположником которой был С. Н. Виноградский. В
1890 году он открыл нитрифицирующие бактерии и вместе с В. Л.
Омелянским доказал их роль в круговороте азота в природе.
Основоположником учения о заразных болезнях является
отечественный ученый Г. Н. Минх (1836—1896). Он первым
обнаружил в крови больных бациллы сибирской язвы и, в
противоположность существующему в то время мнению о ее
наследственом происхождении, показал инфекционную природу
сибирской
Выдающийся ученик И. И. Мечникова Н. Ф. Гамалея первым
освоил методику приготовления вакцины против бешенства и
применил ее в России, организовал первую пастеровскую станцию в
Одессе для прививок населения от бешенства, провел крупные
исследования по изучению туберкулеза, бешенства, холеры.
В 1898 году Н. Ф. Гамалея впервые наблюдал явление бакте-
риофагии, провел фундаментальные исследования по изучению
невосприимчивости организма и создал одну из теорий иммунитета,
обосновал применение так называемых химических вакцин —
профилактических препаратов, признанных в настоящее время
наиболее перспективными. Значителен вклад Н. Ф. Гамалеи в
производство и применение вакцин для профилактики оспы, сыпного
тифа, чумы и т. д.
Л. А. Тарасович разработал методы борьбы с сыпным тифом,
доказал эффективность прививок против туберкулеза, внес огромный
вклад в изучение механизмов действия ферментов фагоцитов.
Российский государственный научно-контрольный институт
медицинских биологических препаратов носит имя Л. А. Тарасовича.
Особо отягощенным по эпидемиологическим и
инфекционным показателям стал период революции 1917 года,
гражданской войны и последующего восстановления народного
хозяйства. Активное участие в организации противоэпидемической
борьбы принимали Д. К. Заболотный, Л. В. Громашевский, М. Н.
Соловьев.
После окончания гражданской войны отечественными микро-
биологами выполнены фундаментальные исследования, ставшие
этапными в истории отечественной и мировой микробиологии.
15
 Д. К. Заболотным, Н. Н. Жуковым-Вережниковым, М. П Пок-
ровской, С. И. Коробковой, В. М. Туманским были получены
эффективные вакцины против чумы, разработана схема лечения
чумы. В 30-х годах 3. В. Ермольева и Г. Ф. Гаузс возглавили рабо-
ты по изысканию и получению антибиотиков. 3. В. Ермольевой
принадлежит приоритет получения первого кристаллического пе-
нициллина
В стране сформировались крупные научные школы с мировым
именем. Это, прежде всего, школы вирусологов — Л. А. Зильбера,
который разработал вирусогенетическую теорию происхождения
опухолей, В. М. Жданова, М. П. Чумакова, А. А. Смородинцева,
П. Ф. Здродовского.
Отечественные микробиологи, находясь на передовых рубе-
жах борьбы с инфекционными заболеваниями, сформировали
профилактическое направление медицины, которое получило все-
мирное признание и легло в основу международных программ
Всемирной организации здравоохранения.
 ОБЩАЯ
МИКРОБИОЛОГИЯ
 МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Мир микробов весьма разнообразен и не образует единую

систематическую группу. Все микроорганизмы объединены тремя
общими признаками:
имеют чрезвычайно малые размеры, колеблющиеся от десятых
долей до десятков, иногда сотен микрометров;
большинство микроорганизмов — одноклеточные существа.
Встречаются и многоклеточные, но дифференциация клеток у них
отсутствует или выражена слабо;
малые размеры микробов определяют специфические, сходные для
всех микроорганизмов методы исследования и технику культивирования.
Как известно, основной структурной единицей живого, за
исключением вирусов, является клетка; при этом на основании глубоких
различий в ультраструктуре различают прокариотический и
эукариотический типы организации клеток. Таким образом, все
организмы по принципу строения подразделяются на три царства:
прокариоты (Рrocariota), эукариоты (Eucariota) и вирусы (Vira).
К прокариотам относят фотобактерии и скотобактерии, к эу-
кариотам — животные, растения, грибы, простейшие. В третье царство
выделены неклеточные формы жизни — вирусы и вироиды.
Все микроорганизмы с прокариотическим типом строения
объединены в царство Рrocariota, состоящее из двух отделов: фо-
тобактерии (цианобактерии, или сине-зеленые водоросли) и ското-
бактерии. К первому отделу относят только сапрофитные формы;
они не являются предметом нашего изучения. Среди скотобактерии,
обитающих в организме человека и животных, существуют патогенные
виды, составляющие предмет медицинской микробиологии.
Скотобактерии подразделяются на три класса. К классу Васteria
относятся основные виды бактерий: кокки, палочки, извитые формы и
актиномицеты. Класс Rickettsiае объединяет облигатных
внутриклеточных паразитов — риккетсий и хламидий. Класс
18
Моlliсutes составляют скотобактерии, не имеющие клеточной стенки —
микоплазмы.
В соответствии с Международным кодексом номенклатуры
бактерий приняты следующие таксономические категории царства
прокариот:
ОТДЕЛ - КЛАСС - ПОРЯДОК — СЕМЕЙСТВО - РОД - ВИД.
Для обозначения вида бактерий используется двойная (бинарная)
номенклатура, то есть название бактерий состоит из родового и видового
обозначений. Вид может подразделяться на подвиды или варианты:
биовары (по биологическим свойствам), серовары (по антигенной
структуре), фаговары (по чувствительности к фагам).
В практической микробиологии используют более узкие, чем вид,
понятия: «штамм» и «клон». Штаммы — это различные микробные
популяции одного и того же вида, выделенные из разных источников
(организмов людей, животных, объектов окружающей среды) или из
одного источника в разное время. Клоном называют популяцию
микроорганизмов одного вида, полученную из одной клетки.

ЦАРСТВО ПРОКАРИОТЫ (РКОСАКЮТА)

Ультраструктура прокариотической клетки

Для всех микроорганизмов, входящих в царство, характерен
прокариотический тип организации клетки, что определяется
особенностями их ультраструктуры, а также строения и функций ряда
макромолекул. Из всех известных клеток прокариотическая самая
простая и, вероятно, первая клетка, возникшая около 3,6 млрд. лет назад.
В настоящее время предполагают, что в какой-то момент времени
эволюция клеток пошла по двум самостоятельным направлениям.
Появились две группы организмов —прокариоты, у которых ядерный
материал не был ограничен оболочкой, и эукариоты, имеющие
оформленное ядро с ядерной оболочкой.
Основные отличия прокариотов от эукариотов состоят в сле-
дующем:
в клетках прокариотов отсутствуют компартменты, или органеллы,
ограниченные от цитоплазмы специализированными внутриклеточными
липопротеидными мембранами: эндоплазматическая сеть (ретикулюм),
митохондрии, аппарат Гольджи, лизосомы, хлоропласты;
ядерная структура прокариотов, называемая нуклеоидом, не имеет
ядерной оболочки с поровым комплексом и представлена
макромолекулой ДНК с белками (без гистонов);
19
 геном прокариотической клетки организован в одну кольцевую
хромосому, которая представляет собой единый репликон и не делится
митозом;
дополнительные репликоны могут быть представлены кольцевыми
молекулами плазмидных ДНК;
прокариотическая клетка содержит только один тип рибосом с
константой седиментации 708, причем часть рибосом ассоциирована с
цитоплазматической мембраной, что никогда не наблюдается у
эукариотов;
клеточная стенка прокариотов содержит характерный только для
бактерий биогетерополимер — пептидогликан.
Некоторые прокариоты обладают структурами, отсутствующими у
эукариотов:
подвижные бактерии имеют особые бактериальные жгутики из
белков-флагеллинов;
спорообразующие формы бактерий в неблагоприятных условиях
превращаются в уникальные по степени устойчивости типы покоящихся
клеток — бактериальные споры;
клетки прокариотов очень малы; диаметр большинства клеток
бактерий не превышает 1 мкм, однако длина может быть значительной,
например, у некоторых спирохет — до 500 мкм. Малые размеры
прокариотов связаны, как полагают, с отсутствием в их ультраструктуре
специализированных мембранных систем, что затрудняет координацию
внутриклеточных процессов пропорционально увеличению размеров
клетки.
Клеточное строение четко отделяет прокариотов от вирусов.
Подчеркивая примитивность организации бактериальных клеток,
необходимо однако отметить, что они эволюционировали в своем
направлении в течение гораздо большего времени, чем эукарио-тические,
и, хотя эволюционные возможности прокариотической клетки, по всей
видимости, ограничены, в процессе эволюции происходили изменения их
клеточной организации, что привело постепенно к ее усложнению.
По целому ряду признаков бактерии имеют принципиальные
различия с эукариотами, и знание особенностей их устройства и
функционирования позволяет понять возможность избирательного
антимикробного действия химиотерапевтических препаратов.
Применение электронной микроскопии и тонких цитохимических
исследований позволило изучить их ультраструктуру (рис. 1).
Обязательными компонентами бактериальной клетки являются
цитоплазматическая мембрана, окружающая цитоплазму, в которой
содержатся рибосомы и нуклеоид. Клетки всех бактерий, за исключением
L-форм и микоплазм, имеют клеточную стенку. Другие структуры
являются дополнительными и определяют морфологические и
функциональные особенности различных видов: капсулы, жгутики, пили,
споры, включения.
20
 Рис. 1. Схема строения прокариотической клетки:
/ — капсула; 2 — клеточная стенка; 3 — цитоплазматическая мембрана; 4 —
мезосомы; 5 — цитоплазма; 6 — нуклеоид; 7 — плазмида;
8 — рибосомы и полисомы; 9 — жгутики; 10 — пили; 11 — гранулы
гликогена; 12 — липидные капельки; 13 — гранулы волютина; 14 —
включения серы

Поверхностные структуры. Капсула — это наружный, самый

верхний слизистый слой клетки различной толщины фибриллярной или
глобулярной структуры. Она имеет полисахаридную, му-
кополисахаридную или полипептидную природу и содержит до 98 %
воды. В зависимости от толщины различают микрокапсулу (толщиной
менее 0,2 мкм) и макрокапсулу. Капсула не является обязательным
структурным элементом клетки. Биологический смысл
капсулообразования определяется целым рядом функций, среди которых:
защита от фагоцитов и вирусов, токсинов и радиации; иммунологическая
мимикрия у патогенных бактерий; сохранение влаги в условиях
пониженной влажности; прикрепление клетки к плотной поверхности.
Пили (фимбрии, ворсинки, реснички) — это прямые цилиндрические
образования белковой природы длиной 0,3—10 мкм, диаметром до 10 нм,
равномерно покрывающие поверхность клетки (до нескольких сотен на
клетку), не выполняющие локомоторную функцию.
Различают пили общего типа, способствующие прикреплению
бактериальной клетки к субстрату, клеткам человека (явление адгезии
микроорганизмов) и пили половые, участвующие в передаче
генетического материала от клетки-донора к клетке-реципиенту в
процессе конъюгации, а также обуславливающие адсорбцию
специфических бактериофагов на клетках.
Жгутики — органы движения бактерий в виде спирально изогнутых
цилиндрических образований белковой природы (белки-флагеллины) на
поверхности клетки длиной 3—12 мкм и толщиной 10—30 нм,
прикрепленные базальным телом (системой дисков) к
цитоплазматической мембране (см. вкл. I). Число и располо-
21
жение жгутиков может быть различным и является видовым признаком
(рис. 2). Различают монотрихи (бактерии с одним жгутиком на конце),
амфитрихи (бактерии с жгутиками, расположенными по полюсам),
лофотрихи (клетки с пучком жгутиков на одном конце) и перитрихи (с 2
—30 жгутиками по всему телу клетки).
Пили и жгутики не являются обязательными органоидами
бактериальной клетки.
Клеточная стенка — один из основных структурных элементов
бактерии, выполняющий механическую защиту клетки. Кроме
микоплазм и L-форм, клетки всех бактерий покрыты клеточной стенкой,
толщина которой у разных видов колеблется в пределах 0,01—14 мкм.
Она представляет собой плотную эластичную структу -

Рис. 2. Основные формы бактерий (по А. А. Воробьеву и соавт., 1994):

/ — стафилококки; 2 — стрептококки; 3 — сарцины; 4 — гонококки;
5— пневмококки; 6— капсулы пневмококков; 7— коринебактерии дифтерии;
8 — клостридии; 9 — бациллы; 10 — вибрионы; 11 — спириллы; 12 —
трепонсмы; — боррелии; 14 — лептоспиры; 15— актиномицеты; 16 —
расположение жгутиков: а — монотрихи; б — лофотрихи; в — амфитрихи; г
— перитрихи

22
ру, которая окружает протопласт клетки и придает ей постоянную
форму и жесткость. Клеточная стенка препятствует
осмотическому набуханию и разрыву клеток, когда они попадают
в гипотоническую среду. Вода, другие малые молекулы и разные
ионы легко проникают через крошечные поры в клеточной стенке,
но через них не проходят крупные молекулы белков и
нуклеиновых кислот.
Основным химическим компонентом клеточной стенки
является специфический гетерополимер — пептидогликан
(муреин, мукопептид, глюкозаминопептид, гликопептид),
состоящий из цепочек, в которых чередуются остатки N-
ацетилглюкозамина и М-ацетилмурамовой кислоты, соединенные
между собой β-1,4-гликозидными связями. Это резко отличает
оболочечные структуры бактерий от эукариотических и создает
«ахиллесову пяту» бактерий, используемую для антимикробной
химиотерапии.
Организация цитоплазмы. Цитоплазматическая
мембрана (ЦМ) Носится к числу обязательных клеточных
структур, имеет толщину 7—13 нм и располагается
непосредственно под клеточной стенкой, ограничивая протопласт
клетки. По своему строению мембраны бактериальных, животных
и растительных клеток очень сходны. В настоящее время
большинством ученых принята жидкостно-мозаичная модель
строения ЦМ. Согласно этой модели ЦМ состоит из двойного слоя
(15—30 % молекул фосфолипидов и триглицеридов с
направленными внутрь гидрофобными концами и гидрофильными
«головками» наружу. В него мозаично погружены молекулы белка
(50—70%). В мембране имеются также углеводы (2—5 %) и РНК.
ЦМ представляет собой пластическое «текучее» образование,
которое играет важнейшую роль обмене веществ, является
полупроницаемой структурой, поддерживает осмотическое
давление, контролирует как поступление веществ в клетку, так и
выведение конечных метаболитов по системе субстрат
специфичных пермеаз (ферментов-переносчиков, локализованных
на мембране). С ЦМ связаны процессы дыхания, доставляющие
клетке энергию, то есть те функции, за которые в эукариотической
клетке ответственны мембраны митохондрий и хлоропластов.
Выделяют так называемые мезосомы — впячивания ЦМ
— смешанные мембранные системы, образованные трубочками,
пузырьками и ламеллами. Предполагается выполнение ими функ-
ций центра дыхательной активности бактерий, участие в делении
клетки и расхождении дочерних хромосом после репликации.
Цитоплазма заполняет собой объем бактерии,
ограниченный ЦМ. Это сложная коллоидная система, которая
состоит из бельков, нуклеиновых кислот, углеводов, липидов,
минеральных веществ и 70—80 % воды. Цитоплазма является
местонахождением внутриклеточных органелл (нуклеоида,
рибосом, различных включений) и участвует во внутриклеточном
метаболизме. Характер-
23
ными чертами организации цитоплазмы прокариотов по сравнению с
животными и растительными клетками являются отсутствие
эндоплазматического ретикулюма и высокая электронная плотность.
Нуклеоид — ядерный материал бактериальной клетки. Он пред-
ставлен двойной нитью макромолекулы ДНК с молекулярной массой 2—
310 в соединении с белками, среди которых отсутствуют характерные для
эукариотов ядерные (гистоны и гистоноподобные) белки. В отличие от
настоящего ядра эукариотических клеток нуклеоид не имеет ядерной
перфорированной мембраны, не делится митозом и представляет собой в
период деления одну кольцевую хромосому, кодирующую всю
генетическую информацию.
Плазмиды — необязательные внутриклеточные структуры в виде
внехромосомных кольцевых участков ДНК, способных к само-
репликации. Обуславливают наследование дополнительных признаков:
лекарственной устойчивости, токсигенности, бактериоциногенности и др.
Рибосомы — органеллы, в которых осуществляется синтез белка.
Каждая рибосома имеет размеры 20х30х30 нм и константу седиментации
70S (так как при ультрацентрифугировании рибосомы оседают со
скоростью около 70 единиц Сведенберга (S), в отличие от более крупных
цитоплазматических рибосом эукариотов с константой седиментации
808). В свободном состоянии бактериальная рибосома находится в виде
двух субъединиц — 30S и 50S, обе субъединицы содержат примерно по
40 % рибосомальной РНК и 60 % белка. Во время синтеза белка
рибосомы с помощью информационной РНК образуют полисомы,
обычно связанные с ЦМ. Бактерии могут содержать от 5000 до 50 000
рибосом, что зависит от возраста клетки и условий культивирования.
Знание различий между рибосомами бактерий и эукариотических
клеток имеет важное значение для понимания механизмов
антимикробного действия тех антибиотиков, которые подавляют синтез
белка на бактериальных рибосомах и не затрагивают функции 80S
рибосом.
Споры (эндоспоры) бактерий — покоящиеся формы некоторых
видов грамположительных бактерий в неблагоприятных условиях
внешней среды.
Спорообразование происходит в несколько стадий, при полном
созревании споры вегетативная часть клетки лизируется и отмирает (см.
вкл. I, II).
В процессе спорообразования (споруляции) можно выделить
несколько основных этапов. Переходящая к спорообразованию клетка
перестает расти; как правило, она содержит два и более нуклеоидов. На
первом этапе часть клеточной ДНК локализуется в одном из полюсов
клетки. Затем часть цитоплазмы с заключен-
24
Иной в ней хромосомой обособляется цитоплазматической мембраной,
как бы врастающей в глубь клетки, при этом образуется проспорь,
окруженная двойной мембранной оболочкой.
Затем между двумя мембранами идет формирование
многослойной стенки и коры (кортекса) споры пептидогликановой при-
роды. Снаружи мембран образуется также полипептидная оболочка и
экзоспорий, окружающий спору в виде свободного чехла. Полностью
сформировавшаяся бактериальная спора — это уплотненный участок
клетки с нуклеоидом и рибосомами, ограниченный плотной
многослойной оболочкой, пропитанной кальциевыми Солями
дипиколиновой кислоты.
Спорообразование характерно для палочковидных бактерий — бацилл и
клостридий (см. рис. 2). Различают центральное, терминальное и
субтерминальное расположение спор в вегетативной части клетки, что
является дифференциально-диагностическим признаком возбудителя.
В одной бактерии образуется одна спора, находящаяся в стадии покоя,
при этом все процессы обмена веществ практически сведены к нулю, но
сохраняется потенциальная жизнеспособность клетки. Поскольку
увеличение числа микроорганизмов в этом процессе не происходит,
спорообразование у бактерий не является способом размножения, а лишь
приспособлением для выживания. Уникальные по степени своей
устойчивости к физическим и химическим факторам бактериальные
споры могут сохраняться до внешней среде без потери жизнеспособности
длительное время (десятки лет), затрудняя борьбу со спороносными
патогенными бактериями.
Внутриплазматические включения. Термином «включения»
обозначают такие внутриклеточные структуры бактерий, которые,
очевидно, не являются абсолютно необходимыми для их
жизнедеятельности. Однако их природа и функции могут быть различны.
В одних случаях включения являются продуктами обмена бактериальной
клетки, в других — запасом питательных веществ.
Из резервных полисахаридов особенно распространены глюканы —
гликоген, крахмал, гранулеза. Они выявляются в клетках бацилл,
клостридий, энтеробактерий и др.
Запасные липиды представлены полиэфиром β-оксимасляной
кислоты и восками. Воски, эфиры высокомолекулярных жирных кислот
и спиртов характерны для микобактерий.
У коринебактерий резерв фосфора создается в виде зерен по-
лифосфатов (волютина), имеющих диагностическое значение.
 Основные формы бактерий
Основная масса бактерий представлена одноклеточными
организмами. Но нередко клетки после деления не расходятся и образуют
сочетания различной формы. Эти сочетания неравноценны
многоклеточным организмам, поскольку каждая клетка в них автономна и
может существовать самостоятельно.
Все бактерии, за исключением микоплазм, имеют определенную
форму клетки, поддерживаемую ригидной клеточной стенкой. Для
некоторых видов характерен полиморфизм, возникающий под влиянием
условий культивирования и факторов внешней среды.
Морфологические типы бактерий немногочисленны. Значительная
часть скотобактерий имеют цилиндрическую, сферическую или извитую
формы. Основные формы микроорганизмов, относящихся к классу
Васteria, приведены на рис. 2.
Кокки, или сферические формы бактерий имеют диаметр 0,5—1 мкм
и строго шаровидную, эллипсоидную, иногда коническую формы. В
зависимости от взаимного расположения клеток, обусловленного
плоскостями деления и сохранением связи между ними, различают
несколько морфологических форм.
Одиночно расположенные шаровидные клетки называются
микрококками. Кокки, делящиеся в одной плоскости и одном
направлении, образуют пары (диплококки) или цепочки (стрептококки).
При делении в двух взаимно перпендикулярных плоскостях возникают
группы из четырех клеток (тетракокки), а в трех взаимно
перпендикулярных плоскостях — пакеты правильной формы из 8—16
клеток (сарцины). При неравномерном делении в нескольких плоскостях
наблюдаются скопления неправильной формы, напоминающие гроздь
винограда (стафилококки). Патогенные для человека кокки относятся к
диплококкам (гонококки, менингококки, пневмококки), стрептококкам и
стафилококкам.
Палочки, или палочковидные бактерии имеют цилиндрическую
форму, длина их составляет 1—8, а толщина — 0,5—2 мкм; это самая
многочисленная группа бактерий, отличающаяся большим
морфологическим разнообразием. Их различают по форме конца клетки,
который может быть закругленным, утолщенным, обрубленным;
взаимному расположению в мазке — беспорядочному, попарному
(диплобактерии, диплобациллы), в виде цепочки (стрептобактерии,
стрептобациллы); спорообразованию — неспорообразующие
палочковидные формы (бактерии) и спорообразующие (бациллы,
клостридии).
Извитые бактерии бывают трех типов: вибрионы, спириллы и
спирохеты.
Вибрионы — слегка изогнутые палочки, похожие на запятую
(например, холерный вибрион).
26
 Спириллы имеют форму нити с несколькими правильными
завитками, среди них известен один патогенный вид, вызывающий
болезнь содоку.
Спирохеты — очень подвижные тонкие и длинные клетки,
имеющие вид спирали. При отсутствии жгутикового аппарата
характерными для них являются различные типы движения: вол-
нообразные, поступательные, винтообразные, маятникообразные.
Особенностями ультраструктуры клетки спирохеты является
наличие трех структурных элементов: наружной оболочки,
соответствующей клеточной стенке, осевой нити (аксостиля), со-
стоящей из микрофибрилл, и цитоплазматического цилиндра,
винтообразно закрученного вокруг осевой нити. Фибриллы
равномерно располагаются по краям клетки, прикрепляясь одним
концом к цитоплазматическому цилиндру; в середине клетки они
перекрывают друг друга свободными концами. Очевидно, их
сокрашение или вращение обусловливает движение спирохет.
Спирохеты, играющие роль в инфекционной патологии человека,
относятся к трем родам — Тгероnema, Leptospira, Воггеliа.

L-формы микроорганизмов и их роль в

патологии человека
Способность к L-трансформации — свойство, присущее
многим видам бактерий. L-формы образуются независимо от их
видовой принадлежности при воздействиях, блокирующих синтез
основных компонентов клеточной стенки, либо при ее разрушении
соответствующими ферментами в условиях повышенной
осмотической концентрации среды.
Известен L-трансформирующий эффект пенициллина.
Механизм действия этого антибиотика связан с нарушением
перекрестного соединения пептидных цепей муреина,
обеспечивающего ригидность клеточной стенки бактерий. Муреин
состоит из повторяющихся мукопептидных единиц и единиц
пептидогликана.
L-варианты могут индуцироваться пенициллином у
грамположительных и грамотрицательных бактерий.
В результате изучения способности некоторых антибиотиков
индуцировать образование L-форм бактерий антибиотики услов-
но разделяют на три группы:
универсальные индукторы L-форм, вызывающие их
образование независимо от видовой принадлежности
микроорганизмов (пенициллин);
антибиотики, оказывающие избирательное L-
трансформирующее действие в зависимости от видовой
принадлежности микроорганизма. Например, бацитрацин
вызывает индукцию L-форм стрептококков; бацитрацин,
ванкомицин и ристомицин индуцируют образование L-форм N.
meningitidis. Стрептомицин являет-
27
ся активным фактором индукции L-форм молодых культур холерного
вибриона и Mycobacterium tuberculosis;
к антибиотикам, действие которых не вызывает L-
трансформирующего эффекта, относятся тетрациклин, канамицин,
хлорамфеникол и др. L-формы некоторых грамположительных бактерий
нередко образуются при комбинированном воздействии лизоцима,
пенициллина и глицина.
При изучении действия разнообразных химических препаратов
установлено, что соли ртути, кадмия, хрома, лития, а также фенол и
формальдегид практически не вызывают индукции L-форм. Из
физических факторов, вызывающих L-трансформацию, можно отметить
действие ультрафиолетовых лучей.
Непременным условием индукции L-вариантов бактерий является
включение в состав среды нормальной сыворотки млекопитающих,
которая обладает инактивирующим действием на те вещества
питательных сред, которые ингибируют рост L-форм.
Морфология L-вариантов бактерий изучается с помощью световой
микроскопии, окрашенных препаратов, фазово-контрастной микроскопии
с серийной и цейтрафферной киносъемкой, люминесцентной
микроскопии с негативным контрастированием и ультратонкими срезами.
Нестабильные L-формы бактерий имеют две периферические
мембраны, из них наружная, очевидно, представляет деградированную
клеточную стенку, а внутренняя — цитоплазматическую мембрану.
Стабильные L-формы имеют только цитоплазматическую мембрану.
Цитоплазма L-форм структурно сходна с цитоплазмой интактных
бактерий, но у L-форм в ней имеются большие вакуоли и гранулы внутри
вакуолей. У L-форм мезосомы утрачиваются и происходит
непосредственное прикрепление нуклеоида к мембране. Вследствие этого
L-формы теряют клеточную стенку, иногда сохраняя измененные ее
фрагменты; отмечается причудливость конфигурации мембран и наличие
множества телец и волокон, содержащихся в пузырьках, ограниченных
мембраной. Структурные элементы L-форм подразделяют на простые и
комплексные. Их размеры варьируют от крупных (10 мк) до
субмикроскопических гранул, фильтрующихся форм (250 ммк).
Способность L-форм прорастать через мелкие поры бактериальных
фильтров связана не только с их размерами, но и с пластичностью —
крупные структуры, легко деформируясь, проходят через поры более
мелких фильтров.
Микроструктуры L-форм представлены РНК- и ДНК-содержащими
элементами, преобладают последние.
L-формы иногда сохраняют некоторые виды ферментативной
активности. Например, некоторые штаммы L-форм стрептококка
продуцируют 0-стрептомицин, стрептокиназу, ДНК-азу,
28
М-белок; L-формы холерных вибрионов продуцируют
нейраминидазу, L-формы Сl. tetani — столбнячный экзотоксин.
В связи с отсутствием клеточной стенки L-формы имеют ан-
тигенные особенности. У L-форм преобладают антигенные детер-
минанты цитоплазматической мембраны и цитоплазмы.
Способность бактерий культивироваться в L-форме
независимо от наличия в среде L-трансформирующих агентов
называется стабилизацией. При этом происходит необратимая
утрата определенных звеньев биосинтеза клеточной стенки и
способности восстановления. Нестабильные L-формы отличаются
тем, что при их культивировании на средах, не содержащих
индуцирующего фактора, происходит реверсия бактерий
исходного вида.
Вопрос о природе наследственных механизмов,
обусловливавших индукцию, стабилизацию и реверсию L-форм
бактерий, мало изучен. Вероятно, превращение в L-формы и их
реверсия могут происходить в результате мутаций. Кроме
мутационного механизма существует массовая конверсия L-форм
в результате непосредственного воздействия разных агентов на
клеточную стенку.
В 1944 году Dienes и Smith выделили L-формы бактерий
из организма больного перитонитом. С 1953 года появились
сведения о выделении L-форм стрептококка из крови больных
септическим эндокардитом, гнойным менингитом и
менингоэнцефалитом, а также в периоды ремиссии при
пиелонефрите.
Образование L-форм и близких вариантов бактерий под
влиянием антибиотиков и других факторов в организме,
длительная их персистенция и возможность реверсии исходных
видов бактерий доказывает, что L-формы далеко не безразличны
для организма хозяина. Имеются данные о L-формах,
сохранивших исходную степень патогенности, например,
вирулентные штаммы L-форм холерного вибриона, Сlostridium
tetani, С1. perfringens. Способность L-форм продуцировать
ферменты агрессии, экзо- и эндотоксины cвидетельствует о
сохранении многих факторов вирулентности.
Видовая идентификация L-форм посредством
определения вида бактерий, реверсировавших из L-форм,
затруднена в связи с неполным восстановлением при этом
признаков исходного вида. Все это усложняет
микробиологическую диагностику, течение инфекционного
процесса, ведет к рецидивам инфекции, бактерионосительству,
снижает эффективность лечения и создает очаги инфекции, не
поддающиеся эпидемиологическому контролю.

Морфология и биологические свойства

микоплазм
Микоплазмы — наиболее мелкие полиморфные микроорганизмы,
живущие в условиях искусственных питательных сред и не
имеющие клеточной стенки. Из-за отсутствия клеточ-
29
ной стенки микоплазмы полиморфны, их размеры — 50—300 нм, форма
— в виде шаров, колец, нитевидных форм, зерен.
Большинство микоплазм неподвижно, однако у некоторых
(Мусорlasma рneumoniaе) обнаружены структуры, которым приписывают
функцию движения. Микоплазмы не образуют спор и капсул, слабо
окрашиваются анилиновыми красителями, для окраски используется
метод Романовского — Гимза.
Микоплазмы выделены в класс Моllicutes («мягкокожие»).
Единственным критерием объединения этих микроорганизмов в класс
является отсутствие клеточной стенки и ее предшественников.
По вопросу филогенетического происхождения микоплазм
существуют несколько точек зрения. М. А. Пешков (1969) считал, что
именно микоплазмы явились предками прокариотов, в том числе и
бактерий, а способность к синтезу клеточной стенки является следствием
серии мутаций. Другая гипотеза Еdvard и Freundt (1969) предполагает
отсутствие родства между микоплазмами и бактериями на основании
наличия у всех стеринзависимых микоплазм холестерина, включенного в
мембрану, отсутствия генетического родства микоплазм и их возможных
бактериальных предков в опытах по молекулярной гибридизации ДНК-
ДНК и ДНК—РНК, а также различные, по мнению авторов гипотезы,
способы репродукции микоплазм и L-форм бактерий.
В класс Моllicutes входит один порядок Мусорlasmatales, в составе
которого известны два семейства. Стеринзавиcимые микоплазмы
объединены в семейство Мусорlasmataсеае с одним родом Мусорlasma,
куда входят 33 вида микоплазм человека и животных.
Стериннезависимые микоплазмы объединены в семейство Асhо-
leрlasmataсеае, состоящее из одного рода семейство Асhоleрlasma, и в
настоящее время в него входят три вида.
На плотных питательных средах микоплазмы растут в виде
характерных колоний с уплотненным, врастающим в среду центром и
нежным краем, по форме напоминают яичницу-глазунью — «friend egg».
В условиях жидких и полужидких сред рост происходит в виде нежного
диффузного помутнения.
В зависимости от характера питательных сред микоплазмы имеют
такие морфологические особенности: при выращивании на плотных
питательных средах они представлены пластическими сгустками
протоплазмы неопределенной формы, а в жидких средах —
разнообразием форм — кольцами, нитями, гранулами, палочковидными и
спиральными образованиями.
Одним из наиболее значимых факторов стабильности и эластичности
мембраны микоплазм является холестерин — главный липидный
компонент у так называемых паразитических микоплазм. Содержание
значительного количества холестери-
30
на сближает мембраны микоплазм с мембранами животных клеток, хотя
по ферментативной активности мембраны микоплазм ближе к мембранам
бактериальных протопластов.
Патогенные микоплазмы могут вырабатывать экзотоксин.
Например, М. neurolyticum выделяет истинный экзотоксин, который
является термолабильным белком и быстро прикрепляется к рецепторам
астроцитов мозга. По способности продуцировать |вемолизин микоплазмы
подразделяются на виды, вызывающие β-гемолиз, например М. laidlauii,
М. pneumoniae, α-гемолиз, и не вызывающие гемолиза.
Вид М.mycoides var. mycoides отличается от других микоплазм
наличием галактановой капсулы; экстрагированный галактан по твоему
воздействию сходен с эндотоксином грамотрицательных бактерий.
Микоплазмы имеют ряд ферментов, нарушающих нормаль-
метаболизм клеток. Так, аргининдегидролазные ферменты (разрушают
необходимый для жизни клеток аргинин. Нуклеозид-фосфорилаза —
фермент микоплазм, который вызывает расщепление в клетках тимидина,
что нарушает их нормальное размножение.
Ультраструктурные изменения в клетках, индуцированные
микоплазмами, как при латентной, так и при острой микоплазменной
инфекции сходны с соответствующими изменениями, вызываемыми
вирусами. Микоплазмы, как и вирусы, вызывают феномен
бляшкообразования.
При электронной микроскопии микоплазмы, расположенные
внутри клеток, трудно отличить от вирусных частиц. Микоплазмы можно
обнаружить и на мембранах клеток хозяина, причем связь такова, что
невозможно дифференцировать мембрану клетки от мембраны
микоплазм. В цитоплазме клеток при микоплазмоинфекции нередко
обнаруживаются гранулярные включения, явления пикноза и
кариорексиса.
Многие виды микоплазм являются патогенными для человека,
вызывая поражения дыхательных и мочеполовых путей, суставов, сердца,
нервной системы. Среди них наибольшее значение в инфекционной
патологии человека имеют: М. pneumoniae (возбудитель небактериальной
пневмонии, бронхитов» воспаления среднего уха); М. hominis 1
(возбудитель воспалительных процессов верхних дыхательных путей,
фарингитов, ангин, шейной аденопатии); М. hominis 1 и М. hominis 2
(возбудители уретритов небактериального происхождения); микоплазмы
Т-групп|ы (возбудители негонорейных уретритов и других заболеваний
мочеполовой сферы).

31
 Морфология и биологические свойства
риккетсий и хламидий
Риккетсии и хламидий составляют класс Rickettsiaе.
Риккетсии отличаются полиморфизмом, их размеры варьируют от 0,4 до
10—40 мкм. Выделяют кокковидную, палочковидную, нитевидную
формы. Они не имеют жгутиков, не образуют спор и капсул,
окрашиваются по Граму, Романовскому-Гимза, Здродовскому. Эта
группа прокариотов является облигатными внутриклеточными
паразитами различных групп животных и человека. У человека
риккетсий вызывают сыпной тиф, Q-лихорадку, пятнистую лихорадку
скалистых гор и другие риккетсиозы.
Хламидии — облигатные внутриклеточные организмы прока-
риотной природы. Изучение ультраструктуры хламидий с помощью
электронного микроскопа началось с конца 40-х годов XX века.
Цикл развития хламидий представлен двумя основными формами,
сменяющими друг друга — ретикулярные тельца (вегетативные формы)
и элементарные тельца (спороподобные формы).
К виду Сl. trachomatis относят патогенные для человека возбудители
трахомы, урогенитальных хламидиозов, венерической лимфогранулемы,
мышиной пневмонии.
На основании уникальности цикла развития хламидий они были
выделены в особый порядок Сlamydiales, семейство Сlamydiasсеае, род
Сlamydia, объединяющий два вида: Сl. trachomatis, Сl. psittaci.
Хламидии являются возбудителями трахомы, венерического
лимфогранулематоза. К виду Сl. psittaci отнесены возбудители
пситтакоза (орнитоза), пневмонии, полиартритов, энтеритов,
конъюнктивитов, энцефалитов домашних, сельскохозяйственных и диких
животных. Нередко эти микроорганизмы вызывают хламидиозы у людей
с возможным распространением инфекции от человека к человеку.
Основа цикла развития хламидий — закономерная смена ве-
гетативных репродуцирующих неинфекционных клеток (ретикулярных
телец — РТ) спороподобными инфекционными клетками
(элементарными тельцами — ЭТ). Эти две формы различаются по
ультраструктуре, но сходны у разных штаммов хламидий.
Морфологически вегетативные формы хламидий сходны с не-
которыми грамотрицательными бактериями, например, возбудителем
туляремии. Они округлой формы, диаметром до 1—1,5 мкм, окружены
клеточной стенкой и цитоплазматической мембраной, имеющей
трехслойную структуру.
Спороподобные клетки хламидий не имеют морфологических
аналогов среди бактерий и представляют собой мелкие, диаметром 0,25
—0,3 мкм, сферические клетки с плотным эксцентричным нуклеоидом.
32
 Вегетативные ретикулярные клетки обладают выраженной
метаболической активностью. Спороподобные хламидий отличаются
весьма слабым метаболизмом.
Прохождение цикла развития является обязательным условием
внутриклеточного паразитирования хламидий, без него невозможно
образование нового поколения возбудителя.
Зрелой морфологической структурой являются элементарные тельца
- они грамотрицательны и обладают инфекциозностью.
Основные этапы цикла развития микроорганизма: контакт ЭТ с
поверхностью чувствительной клетки; проникновение ЭТ в цитоплазму
путем фагоцитоза; преобразование ЭТ в вегетативную форму с хрупкой
клеточной стенкой; деление РТ, с последовательным уменьшением их
размера, реорганизацией внутреннего содержимого и образованием
«переходных форм»; их преобразование в ЭТ нового поколения
микроорганизма; выход микроорганизма из клетки.
Цикл развития (гальпровий) хламидий происходит в цито-
плазматических включениях, определяемых как тельца Гальберштед-
тера-Провачека, которые представляют собой ограниченную
фагоцитарную вакуоль, содержащую различные морфологические
структуры микроорганизма.
Сходство химического состава клеточной стенки хламидий и
грамотрицательных бактерий позволяет использовать для выявления
телец Гальберштедтера-Провачека световую микроскопию при окраске
препаратов по Романовскому-Гимза, а также фазовый контраст при
просмотре неокрашенных препаратов.
Хламидии содержат два типа нуклеиновой кислоты (ДНК и
РНК). Отличаясь дефицитом ферментных систем, хламидий используют
хозяина как поставщика метаболической энергии. Облигатный характер
внутриклеточного паразитизма характеризуется как энергозависимый
паразитизм. Хламидий не производят собственную АТФ, подавляют
синтез ДНК клетки-хозяина.
Резистентноеть хламидий во внешней среде высокая и для
заживания водных резервуаров общественного пользования,
инфицированных обитающими в урогениталиях человека возбуди-телей
паратрахомы, необходимо гиперхлорирование воды. Многие штаммы
этих микроорганизмов проявляют высокую чувствительность к
сульфаниламидам и антибиотикам широкого спектра действия:
тетрациклинам, макролидам, рифампицину. Культивируются в куриных
эмбрионах и культурах клеток.
Хламидии содержат стабильный (100˚С) липопротеиновый
антиген, расположенный в клеточной стенке. Антигены хламидий
обладают слабой иммуногенной активностью. Уровень гуморального
иммунитета на инфицирование хламидиями обычно низкий.
 33

Морфология и биологические свойства

актиномицетов
Актиномицеты относятся к классу Bacteria. Морфоло-
гической особенностью актиномицетов является образование од-
ноклеточного мицелия — скопления нитевидных выростов (гиф)
одной клетки. Свое название актиномицеты получили от первого
из описанных видов — Actinomyces bovis — «лучистого грибка»,
представляющего собой в пораженных тканях радиально распо-
ложенные сплетения гиф с колбовидными вздутиями на концах
(друзы лучистой формы).
У одних видов актиномицетов (Nocardia, Actinomyces) деле-
ние происходит путем распада мицелия на палочковидные и сфе-
рические формы, другие (Streptomyces, Actinomyces) размножа-
ются, в отличие от бактерий, экзо- и эндоспорами.
Окрашиваются актиномицеты по Граму, являясь грамполо-
жительными, что свидетельствует об общности химического со-
става их клеточной стенки с другими прокариотами.
Большинство видов являются сапрофитными, многие из них —
продуценты антибиотиков. Патогенные виды вызывают у челове-
ка актиномикоз и нокардиоз.

ЦАРСТВО ЭУКАРИОТЫ (EUCARIOTA)

}
Морфология грибов
Грибы — большая группа эукариотических организ-
мов, объединяющая свыше 100 000 видов. В систематике органи-
ческого мира грибы занимают особое положение. С животными
грибы сближает наличие в оболочке их клетки полисахаридной
субстанции — хитина (исключение составляют оомицеты, у кото-
рых обнаружена целлюлоза), участие в обмене азота — мочевины,
а в обмене углеводов — гликогена. Только в клетках животных
и грибов имеются цитохромы, участвующие в окислительно-вос-
становительных процессах. Однако по способу питания (адсорб-
тивное — путем всасывания, а не заглатывания пищи) и неогра-
ниченному росту грибы напоминают растения. Они не содержат
хлорофилла и по типу питания являются гетеротрофами: сапро-
фитические грибы используют остатки растительного или живот-
ного происхождения, а паразиты — ткани растений и животных
Проблемы систематики грибов до сих пор нельзя считать раз-
решенными. Рассматривается вопрос о выделении грибов в са-
мостоятельное царство, но в настоящее время пользуются бота-
нической классификацией. В ее основу положен морфологический
принцип строения тела грибов и органов полового воспроизве-
дения в культуре. Согласно этому грибы разделяются на выс-
34
щие и низшие, совершенные и несовершенные. Различают пять
классов:
архимицеты (Archimycetes);
фикомицеты (Phykomycetes) с тремя группами:
хитридиомицеты (Chitridiomycetes),
оомицеты (Oomycetes),
зигомицеты (Zygomycetes);
аскомицеты (Ascomycetes);
базидиомицеты (Basidiomycetes);
дейтеромицеты (Deuteromycetes).
Архимицеты и фикомицеты относятся к низшим грибам. Пер-
вые из них мицелия не имеют, мицелий вторых несептирован. Эти
грибы обладают наиболее простой формой спороношения в виде
спорангиев, в которых заключены споры.
У аскомицетов и базидиомицетов, являющихся высшими гри-
бами, мицелий септированный (многоклеточный), строение ор-
ганов спороношения более сложное.
Представители первых четырех классов имеют половой и бес-
полый циклы развития и называются совершенными.
Дейтеромицеты являются высшими несовершенными гриба-
ми: они обладают септированным мицелием, но половое споро-
ношение у них отсутствует или не обнаружено. Группа несовер-
шенных грибов непостоянна, поскольку обнаружение у гриба
половых форм размножения позволяет отнести его к одному из
перечисленных классов.
Патогенные для человека грибы — возбудители микозов (от
греч. mykes — гриб) относят к различным систематическим груп-
пам ботанической классификации.
Грибы различают по величине, строению, местам произрас-
тания и физиологическим функциям. Их размеры варьируют от
микрометров (микроскопические грибы) до метров (шляпочные).
Исходя из особенностей питания и мест произрастания сформи-
рованы различные экологические группы: почвенные, фитопато-
генные, энтомофилы, зоофилы, антропофилы и др.
Наряду с различиями грибы имеют общие черты строения.
Грибы — это своеобразные эукариотические организмы, которые
в процессе своего развития претерпевают морфологические изме-
нения. Данные изменения могут быть связаны с жизненными
циклами — половым и бесполым или с влиянием факторов внеш-
ней среды. Основу клеточного строения большинства из них со-
ставляет масса тонких, ветвящихся трубчатых нитей, именуемых
гифами, а вся эта масса гиф называется мицелием (рис. 3). Диа-
метр гиф варьируется от 1 до 10 мкм, а их длина — от 4-6 до
80—100 мкм и более. Каждая гифа окружена тонкой жесткой стен-
кой, основным компонентом которой является хитин — азотсо-
держащий полисахарид, являющийся, как известно, структурным
Рис. 3. Типы мицелия у грибов:
1 — несептированный (одноклеточный)
мицелий; 2— септированный
(многоклеточный) мицелий; 3 —
псевдомицели и
компонентом наружного скелета членистоногих. Гифы не имеют
клеточного строения. Протоплазма гиф либо совсем не разделена (у
одноклеточных), либо разделяется поперечными перегородками,
называемыми септами (у многоклеточных). Такие септы делят
содержимое гиф на отдельные участки, внешне похожие на клетки, при
этом образование септ не связано с делением ядер. В центре септы, как
правило, остается небольшое отверстие (пора), через которое
протоплазма может перетекать из одного компартмента в другой. В
каждом компартменте могут находиться одно, два или несколько ядер.
Гифы, не имеющие перегородок, образуют несептированный мицелий, а
имеющие — септированный.
У дрожжевых и дрожжеподобных грибов образуется псевдо-
мицелий, который в отличие от истинного мицелия, представляющего
собой ветвистую трубку, разделенную у высших грибов поперечными
перегородками, не имеет общей стенки, является цепочкой из клеток,
которая формируется в процессе размножения почкованием.
Основой клеточной стенки грибов в отличие от бактерий являются
полисахариды, состоящие из пяти-шести моносахаров. В связи с их
меньшей, чем у бактериальных оболочечных белков, вариабельностью,
наблюдается антигенное родство между далекими по своим
морфологическим свойствам видами грибов. В состав полисахаридных
фракций входят глюкозамин, манноза, глюкоза, ксилоза.
Непосредственно к внутренней части клеточной стенки прилегает
цитоплазматическая мембрана, с которой в тесном контакте находится
цитоплазматический ретикулюм, часто гранулярный, составляющий
основную часть цитоплазмы. В ней расположены одно или несколько
ядер, имеющих свою оболочку с порами, и ядрышко, содержащее в
составе хромосом ДНК. В цитоплазме есть центральная вакуоль, а также
митохондрии, микросомы, лизосомы, рибосомы, пластиды, комплекс
Голъджи, глико-, липо-, хромопротеиды, секреторные гранулы,
миелоидные образования, различные включения [волютин, гликоген,
пигменты и др.).
Кроме того, в клетках могут накапливаться продукты метаболизма
грибов — антибиотики, ферменты, витамины, токсины, и т. п.
36
 При росте на питательной среде мицелий ветвится боковыми
выростами гиф; переплетаясь, он образует грибницу. Различают мицелий
вегетативный — погруженную в субстрат питающую часть грибницы;
репродуктивный — воздушную, спороносящую часть грибницы;
склероций — покоящийся тип грибов. Последний представляет собой
округлое или продолговатое тело плотной консистенции диаметром от
нескольких миллиметров до десятков сантиметров, образующееся
веществами тесного переплетения гиф. Он богат запасными
питательными веществами и обеспечивает жизнеспособность гриба в
неблагоприятных условиях внешней среды (недостатке влаги, низких
температурах и т. п.).
Различают два типа размножения грибов — половое и бесполое.
По способу осуществления размножение может быть вегетативным, то
есть происходить без образования специальных или или с помощью
малодифференцированных органов размножения; репродуктивньш —
путем образования специальных органов воспроизводства. Во втором
случае возможно как бесполое, так и половое воспроизводство.
Вегетативное размножение грибов может осуществляться ку-
сочками мицелия, склероциями, спорами, возникающими в результате
расчленения гиф мицелия (хламидоспоры, артроспоры, бластоспоры,
оидии, геммы).
Репродуктивное размножение грибов происходит при посредстве
спор, возникающих половым или бесполым путем на специальных
дифференцированных или спороносящих ветвях мицелия или органах.
Бесполое размножение осуществляется при помощи спор,
развивающихся эндогенно (эндоспоры, спорангиеспоры) и экзогенно —
на концах особых выростов мицелия или на мицелии (конидии).
Половое размножение у грибов осуществляется путем слияния
мужских и женских половых гамет, в результате чего образуется зигота.
Способы полового размножения у грибов весьма разнобразны. У низших
грибов происходит слияние одинаковых (изогамия) или разных по
размерам (гетерогамия) гамет. Из зиготы после периода покоя вырастает
спорангиеносец со спорангием, наполненным эндоспорами. У высших
грибов образуются для полового размножения аскоспоры и
базидиоспоры.
У несовершенных грибов половой процесс заменяется гете-
рокариозом (разноядерностью) и парасексуальным процессом |без
слияния ядер в первом случае или со слиянием ядер во втором).
Патогенные для человека микроскопические грибы относятся к
зигомицетам, аскомицетам, дейтеромицетам.
Зигомицеты — группа грибов класса фикомицетов; это назем-
ные, чаще всего почвенные сапрофиты, мицелий в основном не-
37
септированный. Имеют особый тип полового процесса — слияние двух
недифференцированных на гаметы клеток, с образованием покоящейся
зигоспоры, с диплоидным набором хромосом. Бесполое размножение
зигомицетов происходит с помощью эндоспор, образующихся в
специальных крупных шаровидных клетках — спорангиях, которые
формируются на свободных концах плодоносящих гиф —
спорангиеносцах, имеющих разнообразную форму: грушевидную
( Mucor), шаровидную (Rhizopus), булавовидную (Асtinomucor) и др.
Каждая спора дает начало новому мицелию.
Грибы родов Mucor, Rhizopus, Аbsidia, среди которых наиболее
широко известен мукор, могут вызывать микозы у человека и животных,
связанные с поражением кожи и легких.
Класс аскомицетов — одна из самых многочисленных и срав-
нительно высокоорганизованных групп микроскопических грибов,
отличающаяся от зигомицетов сложностью строения, особенно
репродуктивных органов. К ним относятся дрожжи и многие виды
плесневых грибов, последние имеют расчлененный многоклеточный
мицелий.
У аскомицетов в результате полового процесса, которому пред-
шествует плазмогамия (слияние половых клеток), кариогамия (слияние
ядер половых клеток) и мейоз, формируются специализированные клетки
округлой формы — аски (сумки). В сумке образуется определенное число
(чаще всего восемь) аскоспор, с помощью которых и происходит
размножение. У одних аскомицетов сумки возникают непосредственно на
мицелии, у других — внутри или на поверхности плодовых тел,
образуемых в результате сплетения гиф мицелия.
Аспергиллы и пенициллы образуют сумки чаще всего округлой
формы. У большинства аскомицетов плазмогамия и кариогамия при
половом процессе разделены во времени. Бесполое размножение у
дрожжей осуществляется почкованием, а у мицелиальных форм грибов
— с помощью экзоспор (конидий), образующихся на конидиеносцах.
Грибы рода Аspergillus и рода Реnicillium отличаются строением органов
вегетативного спороношения. У аспергиллов на конидиеносцах находятся
удлиненные клетки (стеригмы), которые формируют цепочки экзоспор —
конидий. Плодоносящая гифа пенициллиума имеет три ряда стеригм, на
которых располагаются округлые конидии в виде цепочек.
Среди аспергиллов и пенициллов встречаются антибиотико-
образующие виды и патогенные для человека. Последние являются
возбудителями таких микозов как аспергиллез и пенициллиоз (поражение
кожи, слизистых, легких).
Дейтеромицеты — несовершенные грибы (Fungi imperfecti),
объединяют более 25 000 видов, с септированным мицелием, весь их
жизненный цикл проходит в гаплоидной стадии, без смены ядерных фаз.
Мицелиальные грибы размножаются только с по-
38
мощью конидий. Из патогенных для человека к ним относятся
возбудители дерматомикозов: трихофитии, микроспории, эпидер-
мофитии, фавуса. Поражают кожу и ее придатки (волосы, ногти),
вызывают тяжелые, склонные к хроническому протеканию
заболевания, сопровождающиеся аллергией.
Морфологически дерматофиты очень разнообразны в зави-
симости от условий обитания. В таких тканях как кожа и ногти
дерматофиты представлены нитями мицелия, а в волосах — спорами
с различным типом расположения (снаружи и внутри волоса). На
питательной среде они имеют септированный мицелий с его
различными видоизменениями (спиралями, «канделябрами»,
«оленьими рогами» и т. п.) и разные виды конидий — макро- и
микроконидии.
К несовершенным грибам относятся и дрожжеподобные
грибы рода Саndidа, образующие в результате почкования
псевдомицелия; у патогенных видов Саndidа присутствуют также
покоящиеся формы в виде хламидоспор (толстостенных округлых,
толненных липидами клеток, образовавшихся из вегетативных). Эти
грибы являются условно-патогенными и могут вызывать поражение
кожи, слизистых оболочек и внутренних органов (кандидозы или
кандидомикозы). Поскольку грибы рода Саndidа являются
представителями нормальной микрофлоры человека, поражение
происходит чаще всего эндогенным путем на фоне снижения
иммунной реактивности, дисбактериозов, нарушения обмена
веществ, длительном применении антибактериальных средств
широкого спектра действия.

Морфология простейших
Простейшие (Рrotozoa) представлены одноклеточными
эукариотическими организмами, относящимися к животным. Они
широко распространены в природе (около 2500 видов) и ведут
свободный или паразитический образ жизни.
Простейшие играют значительную роль в инфекционной па-
тологии человека и животных. Некоторые из них являются без-
вредными обитателями кишечника (например, кишечная амеба),
другие реализуют свою патогенность обычно при массивном за-
ражении на фоне иммунодефицитных состояний (лямблии, пнев-
моцисты) и, наконец, часть видов представлена тканевыми и кро-
вяными паразитами, вызывающими острые или хронические
заболевания (лейшмании, трипаносомы, малярийные плазмодии). |
Являясь по ультраструктуре эукариотами, простейшие
имеют микроскопические размеры (3-150 мкм) и сложное строение:
одно или несколько дифференцированных ядер (с ядерной
мембраной и ядрышками) и цитоплазму с эндоплазматическим
ретикулюмом, митохондриями, аппаратом Гольджи, лизосомами,
рибосомами,
39
включениями, пищеварительной и сократительной вакуолями. Ядро
содержит набор хромосом, которые после репликации разделяются путем
митоза.
В цитоплазме выделяют эндоплазму с органеллами и более
уплотненную наружную часть — эктоплазму. У некоторых простейших,
например, у саркодовых, лишенная жесткой оболочки протоплазма,
переливаясь, образует выросты (псевдоподии или ложноножки),
благодаря которым клетки передвигаются и не имеют постоянной
формы. Но у большинства простейших периферический слой цитоплазмы
имеет эластичную плотную мембрану — пелликулу, поддерживающую
определенную форму этих микроорганизмов. Некоторые виды
простейших поверх пелликулы формируют жесткую структуру, нередко
пропитанную солями кальция, стронция и кремнекислыми соединениями
— кутикулу, которая служит дополнительным средством защиты от
механических, химических воздействий и высыхания.
Ряд простейших в определенных условиях может превращаться в
цисты. Они окружены плотной двухконтурной оболочкой, сходной с
кутикулой, и содержат по нескольку ядер. Цисты простейших являются
покоящимися формами.
Кроме этого, некоторые простейшие имеют опорные фибриллы
(осевые нити, или «аксостиль»), выполняющие функции своеобразного
«скелета».
Многие простейшие подвижны. Одни виды передвигаются с
помощью псевдоподий, другие снабжены специальными двигательными
органеллами — жгутиками и ресничками. Строение жгутиков и ресничек
типично для эукариотических структур: на периферии жгутика
располагаются девять двойных белковых нитей, а в центре — две
одиночные нити (структура 9+2). Снаружи эта система покрыта
плазматической мембраной. Основание жгутика закреплено в наружном
слое цитоплазмы при помощи базального тельца (блефаропласта). Для
окраски простейших чаще всего пользуются методом Романовского —
Гимза, при котором цитоплазма клетки окрашивается в голубой, а ядро,
блефаропласт и жгутики — в красный цвет.
Простейшие могут размножаться бесполым и половым путем.
Размножение некоторых видов бывает весьма сложным, со сменой
бесполого и полового циклов.
Бесполое размножение осуществляется по типу простого деления,
когда делится ядро, затем — протоплазма и образуются два дочерних
индивида; множественного деления (дробления) сначала ядра, а потом и
всей клетки на ряд молодых особей (этот вид деления называется
шизогонией).
Половой процесс у простейших происходит в форме копуляции или
конъюгации, а также путем самооплодотворения — аутогамии, при
которой сливаются отдельные ядра.
40
 Деление простейших на классы основывается на способах
передвижения и особенностях размножения. Тип Рrotozoa составляет
четыре класса: жгутиковые (Flagellata); саркодовые (Sarcodina);
споровики (Sроrozoa); реснитчатые (Сiliata).
В эволюционном плане примитивными простейшими являются
жгутиковые формы. Амебовидные и реснитчатые формы образовались,
как считают специалисты, в результате развития предковых жгутиковых.
Остановимся на более подробной характеристике патогенных
простейших перечисленных классов.
Класс жгутиковые — простейшие с одним или несколькими
жгутиками, а в некоторых случаях с ундулирующей (волнообразной, от
лат. undula — волна) мембраной, имеющей общую со жгутиками
природу, размножаются путем простого продольного деления. В. эту
группу входят простейшие, обитающие в кишечнике и мочеполовой
сфере (лямблии, трихомонады), а также жгутиковые, паразитирующие в
крови или тканях (трипаносомы, лейшмании).
Из лямблий специфическим паразитом человека является Lamblia
intestinalis, вызывающая лямблиоз (поражение тонкого кишечника,
желчного пузыря и желчевыводящих путей). Клетка лямблии —
грушевидной формы с двусторонней симметрией и длиной 10—18 мкм. В
более широкой передней части простейшего находится вогнутый
(присасывательный) диск, с помощью которого лямблия плотно
прикрепляется к эпителию кишечника. В клетке имеются два
симметрично расположенные ядра, четыре пары жгутиков и две осевые
фибриллы посередине. В отличие от других простейших у лямблий
отсутствуют типичные митохондрии, аппарат Гольджи и сократительные
вакуоли. В толстом кишечнике вегетативные клетки переходят в стадию
цист, которые представляют собой двух-трехъядерные эллиптические
формы с толстой оболочкой, длиной 8—12 мкм и шириной 3—10 мкм.
Род трихомонады включает три паразитических для человека
вида: Тrichomonas hominis — обитает в кишечном тракте; Т. tenax —
паразиты ротовой полости; Т. vaginalis — поражает урогенитальные
пути.
Из перечисленных безусловно патогенным является последний
вид. Инфекция, вызываемая трихомонадами, носит название трихомоноз.
Эти простейшие имеют грушевидную форму длиной около 15—30 мкм, с
четырьмя расположенными пучком спереди жгутиками, один из которых
ограничивает внешний край короткой ундулирующей мембраны, и
опорной эластичной нитью, проходящей через всю цитоплазму. Стадия
цисты у них отсутствует.
Среди патогенных трипаносом различают возбудителей аф-
риканского трипаносомоза, или сонной болезни (Тгураnosoma brusei),
передаваемого кровососущей мухой цеце; американско-
41
го трипаносомоза, называемого еще болезнью Шагаса (Т. cruzi), который
распространяется кровососущими триатомовыми клопами.
Трипаносомы облигатно связаны с двумя хозяевами: у человека и
млекопитающих они паразитируют в виде трипомастигот, а в организме
беспозвоночных и культуре — в виде эпимастигот.
В крови человека nрипаносомы имеются в виде веретеновидного
тела длиной 25-30 мкм, с одним жгутиком, закрепленным
блефаробластом на заднем конце. Жгутик соединяется с пелликулой
посредством ундулирующей мембраны, расположенной вдоль клетки, и
заканчивается свободным концом на передней части паразита. Кроме
центрально расположенного ядра, клетка содержит кинетопласт (хорошо
окрашиваемое тельце с ДНК).
У эпимастигот отсутствует ундулирующая мембрана, жгутик
короткий, кинетопласт расположен ближе к центру. Инцистирование для
трипаносом нехарактерно.
Лейшмании делят на три патогенных для человека вида (L. tropica, L.
donovani, L. braziliensis), которые являются возбудителями кожного
(«восточная язва», болезнь Боровского), висцерального и кожно-
слизистого («кала-азар») лейшманиоза, передаваемого через укусы
москитов родов Phlebotomus, Lutzomyia. Жизненный цикл лейшманий
характеризуется облигатной сменой хозяев: позвоночного
(лейшманиальная стадия, или амастиготы) и беспозвоночного
(лептомонадная стадия, или промастиготы).
Амастиготы лейшманий (или тканевые формы, поскольку в этой
форме лейшманий внутриклеточно паразитируют в организме человека и
других млекопитающих) — безжгутиковые овальные клетки размером 2
—5 мкм, имеющие ядро, кинетопласт, блефаропласт.
Промастиготы — веретеновидные клетки, с заостренным концом
(длина 20—30 мкм, ширина 5—6 мкм), на котором блефаропластом
закреплен один жгутик; в их протоплазме различают ядро и кинетопласт.
При культивировании на искусственных средах лейшманий растут в
промастиготной форме. Цист лейшманий не образуют.
Класс саркодовые — типичные амебовидные паразиты, пере-
двигаются с помощью псевдоподий, размножаются бесполым путем,
бинарным делением.
У человека паразитирует дизентерийная амеба (Entamoeba
hystolytica), вызывающая амебную дизентерию, или амебиаз. Выделяют
четыре морфологически и функционально различающиеся вегетативные
формы: тканевую, большую вегетативную, просветную, предцистную.
Во внешней среде амебы находятся в виде четырехъядерных цист (9
—12 мкм) с плотной двухконтурной оболочкой. При попа-
42
рыдании в тонкую кишку человека из цист образуется восемь одно-
ядерных вегетативных форм, заселяющих толстую кишку.
Тканевая форма (20—25 мкм) имеет крупное ядро, обладает
амебоидным движением, в цитоплазме различают два слоя — эндо- и
эктоплазма. Инвазивные свойства амеб связаны с тканевыми формами.
Большая вегетативная форма является наиболее крупной, ее
размеры достигают при вытянутых псевдоподиях 60—80 мкм. В эн-
доплазме встречаются фагоцитированные эритроциты.
Просветная форма (15—20 мкм) обитает в просвете толстой
кишки. Передвигается медленно, в цитоплазме выявляются фаго-
цитированные бактерии.
Предцистная форма (12—20 мкм) отличается наиболее мед-
ленными движениями, гомогенной цитоплазмой, отсутствием включений.
Класс споровики — паразиты со сложным жизненным циклом,
включающим половое и бесполое размножение и смену хозяев, не имеют
специальных органов движения, только некоторые формы на
определенных стадиях развития образуют псевдоподии и жгутики. К этой
группе относятся малярийные плазмодии и токсоплазмы.
Плазмодии малярии. Паразитами человека как промежуточного
хозяина являются четыре вида плазмодиев малярии: Plasmodium vivax и
Р. оvа1е — возбудители трехдневной малярии; Р. mаlariae — возбудитель
четырехдневной малярии; Р. falciparum — возбудитель тропической
малярии.
Все возбудители, независимо от вида, проходят в человеческом
организме бесполую фазу развития (шизогония). Вторым, окончательным
хозяином является самка малярийного комара рода Anopheles, в желудке
которой происходит половая фаза развития |лазмодия (спорогония).
Бесполый цикл развития малярийного плазмодия соcтоит из двух
последовательных процессов со сменой среды обитания паразита. При
укусе зараженный комар со слюной вносит кровь человека малярийных
паразитов в виде спорозоитов — одноядерных клеток серповидной
формы, длиной 14 мкм.
Спорозоиты внедряются в клетки печени и проходят преэрит-
юцитарный, или тканевой цикл развития, последовательно претерпевая
стадии тканевого шизонта, в результате деления (меруляции) которого
образуется множество тканевых мерозоитов. Последние проникают в
эритроциты, и с этого момента начинается их развитие в крови —
эритроцитарный цикл.
Мерозоиты в эритроцитах, питаясь гемоглобином, быстро растут,
и через несколько часов превращаются в молодые шизонты, имеющие вид
кольца («перстня с рубином»), поскольку при окраске по методу
Романовского — Гимза центральную часть этой
43
округлой клетки занимает большая вакуоль, оттесняющая к периферии
голубую цитоплазму и рубиново-красное ядро. Процесс роста плазмодия
сопровождается увеличением его массы и уменьшением вакуоли;
взрослый шизонт почти полностью заполняет эритроцит. Через 48—72
часа паразит делится путем множественного дробления, образуя
мерозоиты.
Разрушая эритроцит, мерозоиты выходят в кровяное русло, часть их,
не подвергшаяся фагоцитозу, внедряется в новые эритроциты, и
эритроцитарный цикл шизогонии повторяется.
Процесс эритроцитарной шизогонии строго цикличен, его про-
должительность у разных видов плазмодиев различна: Plasmodium vivax и
Р. оvа1е, Р. falciparum — составляет 48 часов, для Р. mаlariae — 72 часа.
Приступ лихорадки при малярии совпадает с моментом разрушения
эритроцитов и выхода мерозоитов, поскольку в кровь поступают
токсические продукты жизнедеятельности паразита и распада
эритроцитов.
Образование половых клеток (гаметогония). Во время
эритроцитарных циклов некоторые мерозоиты проникают в эритроциты и
дифференцируются на мужские и женские гаметоциты (предшественники
половых клеток). Таким образом, половой цикл развития начинается в
человеческом организме, но для его продолжения гаметоциты должны с
кровью попасть в организм самки комара.
Половое размножение в организме комара (спорогония). При укусе
вместе с кровью больного человека в желудок самки комара попадают
половые (гаметоциты) и бесполые (мерозоиты) клетки малярийного
плазмодия. Бесполые клетки погибают, а половые дозревают,
превращаясь в микро- и макрогаметы, которые, сливаясь, образуют
зиготу, прикрепляющуюся к стенке желудка комара. На одном из концов
зигота заостряется и превращается в оокинету. Оокинеты благодаря
значительной подвижности и заостренной форме проникают в толщу
стенки желудка. Под наружным слоем желудка они превращаются в
ооцис-ты. Внутри ооцисты происходит деление паразита на тысячи
спорозоитов, которые после созревания с гемолимфой поступают в
слюнные железы комара.
Морфологические особенности отдельных видов плазмодиев
малярии. У Р. Vivax юный шизонт имеет форму правильного кольца,
иногда в одном эритроците встречаются две-три особи; зрелые шизонты
приобретают амебоидную форму; в стадии меруляции шизонт делится на
12—24 мерозоита.
Морфология Р. оvа1е сходна с предыдущим видом, но он образует 6
—12 мерозоитов.
44
 Зрелый шизонт Р. malariae имеет лентовидную форму; в процессе
его меруляции образуется 6—12 мерозоитов, располагающихся в виде
розетки. Р. falciparum дробится на 12—24 мерозоита, отличается
морфологическими особенностями гематоцитов, имеющих полулунную
форму.
Токсоплазмы — простейшие, инфицирующие различные виды
животных и птиц. У них наблюдается чередование полового и бесполого
размножения со сменой хозяев. Окончательными хозяевами являются
кошки и другие животные семейства кошачьих. Человек — один из
промежуточных хозяев. У людей эти простейшие вызывают
токсоплазмоз, который в основном протекает бессимптомно.
Морфологически токсоплазмы представляют собой серповидные
клетки длиной 5—7 мкм и шириной 2—4 мкм, с центрально
расположенным ядром. Благодаря своеобразной системе микротрубочек
они совершают медленные вращательные и скользящие движения.
Токсоплазмы могут образовывать в мозге и некоторых других
тканях цисты (30—300 мкм), имеющие плотную оболочку и содержащие
несколько тысяч паразитов.
Класс реснитчатые — простейшие, имеющие наиболее слож-
ную внутреннюю структуру, в частности, несущие на поверхности
клеток реснички, которые располагаются характерными участками, с
двумя видами ядер — макро- и микронуклеусом.
Единственный представитель этой группы, паразитирующий в
организме человека — кишечный балантидий (Ваlantidium coli), который
имеет реснички и обитает в кишечнике человека и свиней. Его
жизненный цикл состоит из двух фаз — бесполой (размножение
поперечным делением) и половой (конъюгация). После конъюгации
балантидий инцистируется. Цисты имеют овальную |форму (45—60
мкм) и покрыты плотной двухслойной оболочкой. Кишечный
балантидий паразитирует в толстом кишечнике, вырывая балантидиаз,
который является довольно редким заболеванием.

ЦАРСТВО ВИРУСЫ (У1КА)

Морфология и ультраструктура вирусов.

Особенности классификации
Вирусы — это формы жизни, которые относят к отдельному
царству Vira. Наука о вирусах — вирусология — одна из самых молодых
медицинских наук.
В настоящее время вирусы определяют как самостоятельные
самопродуцирующиеся неклеточные структуры, способные фун-
45
кционировать в восприимчивых к ним клетках животных, растений,
бактерий.
Целый ряд признаков отличает вирусы от прокариотов и эука-
риотов:
отсутствие клеточной структуры — это неклеточные формы жизни;
наличие у вирусов только одной из двух нуклеиновых кислот, в то
время как у всех остальных микроорганизмов имеются ДНК и РНК;
отсутствие собственных белоксинтезирующих систем. Синтез
вирусных белков осуществляется белоксинтезирующим аппаратом
клетки-хозяина, в которой вирус паразитирует;
уровень паразитизма у вирусов, в отличие от внутриклеточного
паразитизма бактерий и простейших, определяется как генетический
паразитизм;
вирусы не растут, и размножение у них происходит путем
дисъюнктивной репродукции. В клетке отдельно синтезируются белки и
нуклеиновые кислоты вирусов, а затем происходит их сборка в вирусные
частицы.
В то же время вирусы, безусловно, обладают основными свойствами
всех других форм жизни — способностью размножаться,
наследственностью, изменчивостью, приспособляемостью к условиям
внешней среды; они занимают определенную экологическую нишу, на
них распространяются законы эволюции органического мира на земле.
Морфологию и ультраструктуру вирусов изучают с помощью
электронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с
толщиной оболочки у бактерий. Размеры вирусов определяют методом
ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, а также
методом ультрацентрифугирования. Одним из наиболее мелких вирусов
является вирус полиомиелита, имеющий размеры 20—24 нм, а к
наиболее крупным вирусам относятся вирусы оспы — около 350 нм.
Вне клетки-хозяина вирус существует в виде вириона. Форма
вириона может быть различной — палочковидной, сферической,
пулевидной (рис. 4). Центральную часть вириона занимает нуклеиновая
кислота — ДНК или РНК, которая является хранителем наследственной
информации, выполняя таким образом функции генома. У РНК-
содержащих вирусов различают вирусы с «плюс»-нить РНК-геномом,
поскольку РНК этих вирусов выполняет не только наследственную, но и
плюс функцию информационной РНК. К «плюс»-нитевым, или вирусам с
позитивным геномом относятся пикорнавирусы, тогавирусы,
коронавирусы, ретрови-русы.
У РНК-содержащих вирусов с «минус»-нить геномом РНК
выполняет только наследственную функцию. К вирусам с нега-
46
Pox virus Iridovirus
Herpesvirus Adenovirus Papovaviridae Parvorirus

ДНК-содержашие вирусы
Paramyxovirus Qrthomyxavirus Coronavius Arenavirus Leukovirus
 Reovirus Picornaviridae Rhabdovirus Togaviridae Супергруппа
Буниамвера

Arboviruses

РНК-содержащие вирусы
Рис. 4. Форма и относительные размеры вирусов (по Ф. Феннеру
и соавт., 1977)

тивным геномом относятся ортомиксовирусы, парамиксовирусы,

буньявирусы, рабдовирусы. РНК этих вирусов не вызывает ин-
фекционного процесса.
РНК-геном в основном является гаплоидным, но у ретрови-
русов он диплоидный, так как состоит из двух однонитевых моле-
кул РНК.
У ДНК-содержащих вирусов ДНК может быть представлена
как однонитевыми, так и двунитевыми, линейными и кольцевы-
47
ми молекулами. В геномах, представленных двунитевыми ДНК,
информация обычно закодирована на обеих нитях ДНК, что сви-
детельствует о максимальной экономии генетического материала у
вирусов, как генетических паразитов.
Нуклеиновую кислоту вирусов окружает белковый капсид.
Существуют два типа строения капсидов вирионов. В одном случае
структурные единицы капсида — капсомеры ассоциируются с геномом и
образуют спиралевидную винтообразную структуру. Такой тип укладки
называется спиральным типом симметрии, а сама структура —
нуклеокапсидом. В другом случае капсомеры образуют полое
изометрическое тело, в центре которого находится геном. Такая укладка
называется кубическим типом симметрии (см. рис. 4).
Сложно устроенные вирусы имеют липопротеидную оболочку —
суперкапсид (см. вкл. III). Под оболочкой вириона подразумевается
липогликопротеидный слой, который формируется в процессе
почкования вируса на мембране клетки-хозяина.
Капсид и суперкапсид защищают вирионы от физических и
химических воздействий и прежде всего от ферментов нуклеаз, а также
обусловливают адсорбцию определенными клетками, определяют
антигенные и иммуногенные свойства вирионов.
На основании типа и структуры нуклеиновой кислоты (РНК или
ДНК), наличия или отсутствия липопротеидной оболочки вирусы делят
на семейства. Все известные в настоящее время вирусы подразделяются
на 19 семейств, из них 7 — ДНК- и 12 — РНК-содержащие вирусы.
В основу деления вирусов на подсемейства положены следующие
основные критерии: стратегия вирусного генома, размер, морфология
вириона, тип симметрии, число капсомеров; круг восприимчивых хозяев;
патологические изменения в клетках; географическое распространение,
способ передачи и антигенные свойства. Вид вируса биноминального
названия, как у бактерий, не получил. Однако на практике большинство
вирусологов продолжает условно подразделять вирусы в соответствии с
типом хозяина, поскольку вирусы поражают позвоночных и
беспозвоночных животных, растения и бактерии. Являясь основными
возбудителями инфекционных заболеваний человека, вирусы участвуют
также в процессах канцерогенеза, и могут приводить к развитию
миокардитов, панкреатитов, иммунодефицитов и т. д.
Кроме обычных вирусов известны так называемые неканонические
вирусы — прионы, которые представляют собой белковые
инфекционные частицы, имеющие вид фибрилл размером 10—20х100—
200 нм. Прионы, очевидно, являются одновременно индукторами и
продуктами автономного гена человека или животных и в условиях
медленной вирусной инфекции вызывают у них энцефалопатии.
48
Близкими к вирусам агентами являются вирусоподобные структуры —
плазмиды и вироиды. Плазмиды, или эписомы, эпивирусы представляют
собой две нити ДНК, образуемые клеткой, но не связанные с клеточной
хромосомой. Плазмиды обеспечивают некоторые свойства бактерий,
например, устойчивость к антибиотикам. Позднее плазмиды были
обнаружены у эукариотов (грибов). Некоторые вирусы животных могут
существовать в виде плазмид.
Вироиды представляют собой небольшие молекулы кольцевой
суперспирализованной РНК, не содержащие белка, вызывающие
заболевания у растений.

Вирусы бактерий — бактериофаги

Вирусы, способные паразитировать в бактериальных клетках,
репродуцироваться в них и вызывать их растворение (лизис), получили
название бактериофаги, или просто фаги. В настоящее время эти вирусы
выявлены не только у большинства болезнетворных бактерий, но и у
некоторых грибов.
 Большинство фагов под электронным микроскопом имеют
форму головастика или сперматозоида (рис. 5), но могут быть
нитевидной или кубической формы, размером от 20 до 800 нм. Наиболее
хорошо изучены крупные бактериофаги, имеющие форму сперматозоида.
Они состоят из икосаэдрической головки размером
65—100 нм и хвостового отростка длиной 100 нм. В головке содержится
нуклеиновая кислота — ДНК, реже РНК. Она окружена белковым
капсидом.
Структурные белки фага различаются по составу полипептидов и
представлены в виде множества идентичных субъединиц, уложенных по
спиральному или кубическому типу симметрии. Кроме структурных
белков, у некоторых фагов обнаружены внутренние (геномные) белки,
связанные с нуклеиновой кислотой и белки-ферменты (лизоцим, АТФ-
аза, участвующие во взаимодействии фага с клеткой). Внутри хвостового
отростка имеется полый цилиндрический стержень, сообщающийся
отверстием с головкой, снаружи — чехол, который способен
сокращаться. Хвостовой отросток заканчивается шестиугольной
базальной пластиной с короткими шипами, от которых отходят
нитевидные структуры — фибриллы. У некоторых видов фагов чехол не
может сокращаться. Фаги встречаются везде, где есть или были бактерии.
Например, дизентерийные, брюшнотифозные фаги обнаруживаются в
стоячей воде, почве, испражнениях человека.
Практическое применение фагов обусловлено их строгой спе-
цифичностью. Фаги используют для терапии и профилактики
инфекционных заболеваний, а также при лабораторной диагностике для
определения вида или штамма микроорганизмов. Препараты
бактериофага выпускают в жидком виде и в виде таблеток.

ФИЗИОЛОГИЯ ПРОКАРИОТОВ

Предмет физиологии бактерий — исследование функций, то

есть всех физических, химических и биологических процессов,
происходящих в бактериальной клетке, а также физических, химических
и биологических превращений, вызываемых микроорганизмом в
окружающей среде.

ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ
БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ

Основой изучения физиологии бактерий является ис-

следование химического состава этих микроорганизмов. Анатомия и
химический состав бактерий являются рамками, а следовательно, и
материалом, за счет которого развиваются жизненные процессы.
Химический состав прокариотов почти такой же, как и других
живых организмов: состоит из двух компонентов — воды и сухого
остатка, представленного смесью органических и минеральных со-
единений.
Основу микробной клетки составляет вода — 80—90 % общей
массы. Вода находится в свободном и связанном состоянии.
50
 Свободно содержащаяся в клетке вода необходима бакте-
риям как растворитель органических и минеральных соедине-
ний; дисперсионная среда для коллоидов; источник водородных
и гидроксильных ионов; фактор осмотического давления (тургор
клетки).
С водой, как главным химическим компонентом структуры,
связаны основные процессы жизнедеятельности бактериальной
клетки — питание, дыхание, рост и размножение. Подчеркивая
особую роль воды в определении химического состава и жизне-
деятельности бактериальной клетки, необходимо обратить вни-
мание на главную особенность — она должна быть
биологически доступна для бактерий. Биологическая зона воды
находится в температурном диапазоне от 2 °С (или ниже в
растворах с высоким осмотическим давлением) до 100 °С.
Сухой остаток (10—20 % массы бактерий) представляет
собой смесь органических и минеральных соединений, основу
которых составляют четыре элемента (так называемые
органогены) — азот, углерод, водород и кислород,
присутствующие в различных сочетаниях в молекулах и
свободном состоянии.
Минеральный состав бактерий характеризуют фосфор, сера,
натрий, магний, калий, кальций и др.
Органические компоненты химического состава бактерий
представляют белки, нуклеиновые кислоты, углеводы, липиды,
витамины и др.
Более 50 % сухого остатка бактерий составляют белки,
ответственные за жизнеопределяющие функции всех
организмов, в том числе и микроорганизмов.
Различают простые и сложные белки бактерий.
Простые белки (протеины) при гидролизе распадаются до
аминокислот, которые бактериальная клетка использует как
источник углерода.
Сложные белки состоят из протеина (простого белка) и
нуклеиновой кислоты. Сложные белки наиболее важны для
жизнедеятельности бактерий. Они выполняют пластическую и
строительную функции; участвуют в процессе роста и
размножения;
определяют видовые особенности бактерий; характеризуют
антигенные и иммуногенные свойства; ответственны за
наследственную передачу видовых признаков; обладают
токсичностью и вирулентностью; в составе ферментов
характеризуют биохимическую активность бактерий.
Нуклеиновые кислоты (10—30 % сухого остатка)
представлены у бактерий двумя типами — ДНК и РНК. ДНК
содержится в составе бактериальной хромосомы, РНК — в
рибосомах, зернистых включениях. Биологическая роль
молекулы ДНК связана с определением наследственных свойств
бактерий. РНК (информационная, транспортная, рибосомальная)
выполняет соответствую-
51
щие функции в информационной потребности клетки, в синтезе белков.
Углеводы составляют 10—30 % сухого остатка, представлены в
виде моносахаридов, дисахаридов и полисахаридов. Их функции:
пластическая;
энергетическая;
агрессивность, токсичность, аллергенность;
типовая специфичность;
питательная и запасная (гликоген, крахмал).
По содержанию азота бактериальные полисахариды подразделяются
на азотсодержащие полисахариды, например, гексозамины (глюкоза +
глюкозамин); безазотистые полисахариды (полимеры альдобионовой
кислоты).
При полном гидролизе бактериальные полисахариды образуют
глюкозу и глюкуроновую кислоту.
Липиды у большинства бактерий составляют 5—10 %, у дрож-
жеподобных грибов и микобактерий достигают до 40 % сухого остатка.
В составе микроорганизмов липиды встречаются в виде простых
жиров (глицерин и высшие кислоты) и сложных липидов (фосфолипиды).
Значительная часть липидов находится в комплексной связи с
белками и углеводами. Они являются необходимыми компонентами
цитоплазматической мембраны и клеточной стенки и выполняют роль
запасных питательных веществ; энергетического материала; фактора
устойчивости микроорганизмов к действию внешней среды (спора,
клеточная стенка микобактерий).
Минеральный состав микроорганизмов представлен большей
частью элементов таблицы Менделеева. Минеральные вещества входят в
состав различных клеточных структур бактерий. Общее их содержание в
расчете на зольный остаток после сжигания бактерий составляет 2—30 %
и зависит от вида и той питательной среды, в которой выращивались
бактерии.
В составе золы бактерий преимущественно определяются окиси
металлов - Р205, (9-50 %), Nа20 (11-33 %), К2О (7-25 %), Мg0 (0,1-9 %),
СаО (7-12 %), в виде неорганических примесей — также Si, Сl, Аl, Сu, Мn
и др.
Основное назначение минералов
1. Регуляторы осмотического давления, рН, окислительно-
восстановительного потенциала.
2. Катализаторы активности бактериальных ферментов.
3. Обязательная составная часть главных органоидов бактериальной
клетки, ответственных за ее жизнедеятельность и жизнеспособность, так:
P - составная часть нуклеиновых кислот;
Fе — компонент цитохромоксидазы, каталазы, пероксидазы;
52
Сu — составляющая дыхательных ферментов;
S — неорганический компонент белков и аминокислот.
Ростовые вещества — факторы роста, биоактиваторы — важ-
нейшие регуляторы обменных процессов, роста и размножения
микроорганизмов. В зависимости от фактора роста микрооргани-
змы подразделяются на:
прототрофы — способные синтезировать все необходимые для
Сроста и размножения органические соединения;
ауксотрофы — их рост и размножение невозможны при от-
cутствии вещества, которое бактериальная клетка не способна или
утратила способность синтезировать.
Непременным условием роста и размножения ауксотрофов
является обязательное присутствие в среде обитания необходимого
вещества. К факторам роста относятся, прежде всего, витамины (В 1
— тиамин, В2 — рибофлавин, В6 — пиридоксин, Н — биотин, В 12—
цианкобаламин, РР — никотиновая кислота, витамин К 1 —
филлохинон). Ауксотрофы нуждаются также в поступлении извне
определенных аминокислот. Для каждого представителя ауксо-
трофов такая аминокислота строго определенная и незаменимая.
Потребность микроорганизмов в факторах роста не
является постоянной и может изменяться в зависимости от:
условий культивирования. Так, плесневый гриб Мuсоr
rouuuxii нуждается в витаминах В1, В6 лишь при росте в анаэробных
усло-виях, а в аэробных условиях эти витамины он синтезирует
самостоятельно;
химического состава окружающей среды. Большинство вита-
минов входит в состав коферментов, поэтому микроорганизмы
могут обойтись без необходимых витаминов, если продукты соот-
ветствующей ферментативной реакции содержатся в самой среде.
Таким образом, потребность в витаминах выражает иногда
потребность в недостающем ферменте или продуктах его актив-
кности.
Пример. Возбудитель дифтерии нуждается в пантотеновой кислоте.
Одновременно известно, что пантотеновая кислота синтезируется
из пантоевой кислоты и β-аланина. Поэтому потребность
дифтерийной палочки в пантотеновой кислоте можно удов-
летворить, внеся в питательную среду β-аланин.

ПИТАНИЕ БАКТЕРИЙ
Для роста и размножения микроорганизмов необходимы источники
питания. Питание обеспечивает бактериальную клет|ку
пластическим материалом для самовоспроизведения и энергией.
Однако при наличии необходимых источников энергии и питания
скорость размножения микроорганизмов в значительной мере
53
зависит от условий среды. Поэтому механизмы клеточной саморегуляции
можно условно разделить на две основные группы: неспецифические
механизмы регуляции роста и размножения; специфические механизмы
саморегуляции.
К группе неспецифических механизмов относится совокупность
действия различных физико-химических факторов, регулирующих
общую скорость всех основных процессов жизнедеятельности:
температура, рН, концентрация ионов, степень обеспечения среды
кислородом и т. д.
Таким образом, эту форму регуляции можно определить еще как
неконтролируемую со стороны клетки, то есть характеризующую
действие факторов внешней среды.
Специфические механизмы обменных процессов бактериальной
клетки возникли из неспецифических и обязательно включают их в себя,
однако, представляют более сложную форму взаимосвязи.
Основу специфической саморегуляции живых систем составляет
ферментсубстратная реакция.
Бактериальная клетка имеет обширный спектр ферментов.
Например, в геноме Е.соli штамм К-128 содержится информация,
достаточная для кодирования около 4000 индивидуальных белков.
Способы питания микроорганизмов определяются в зависимости от
источника энергии; донора водорода (электронов); источника углерода.
Источник энергии. По этому показателю отмечают два главных
типа метаболизма:
1. Фототрофные бактерии, использующие в качестве источника
энергии для роста электромагнитное излучение (свет). Среди них
различают:
анаэробные фототрофные бактерии, не выделяющие молекулярный
кислород;
аэробные фототрофные бактерии (водоросли), выделяющие на свету
кислород.
2. Хемотрофные (хемосинтезирующие) бактерии, получающие
энергию в результате окислительно-восстановительных реакций с
участием субстратов, которые служат для них источником питания.
Доноры водорода. По этому критерию бактерии подразделяются на:
метатрофные, использующие в качестве доноров электронов
неорганические элементы (H2, NH3, НS, S, СО, Fe2+ и др.);
органотрофные, для которых донорами водорода (электронов)
служат органические соединения.
Источники углерода. По этому показателю бактерии подраз-
деляются на:
54
 аутотрофные, получающие углерод путем фиксации СО2 из воздуха;
гетеротрофные, которые усваивают углерод из органических
соединений.
Гетеротрофы делятся на сапрофитов и паразитов.
Сапрофиты (от лат. saprophyticus) — произрастающие за счет
мертвых субстратов.
Паразиты — живущие за счет органических соединений человека и
животного. Именно к ним относятся возбудители инфекционных
заболеваний человека и животных. Признак паразитизма может быть
абсолютным (облигатным) и относительным (условная патогенность).
Механизмы питания. Первооснову механизма питания бактерий
составляет разница осмотического давления, основанная на различии
концентраций между питательной средой и цитоплазматическим
составом бактериальной клетки. Принципиальное значение для
понимания механизмов питания имеет то, что их внутриклеточное
осмотическое давление, как минимум, в два раза ниже, чем у клетки
животного происхождения.
Согласно законам физической химии, при разнице осмотического
давления жидкость движется в сторону более высокой концентрации, а
растворенное в ней вещество — в сторону меньшей концентрации.
Молекула растворенного вещества может пройти через ци-
топлазматическую мембрану, если на нее действует какая-нибудь сила
или существуют механизмы, которые обеспечивают перенос этой
молекулы через мембрану. Поэтому различают следующие механизмы
питания.
1. Пассивная диффузия — перенос питательных веществ в клетку за
счет разности концентраций по обе стороны цитоплазматической
мембраны. Наблюдается в основном при поступлении в бактериальную
клетку воды. Другие молекулы за счет пассивной диффузии практически
не попадают.
2. Облегченная диффузия (перенос «по течению») — прохождение
большинства растворенных веществ через цитоплазматическую
мембрану осуществляется за счет их захвата на внешней и переноса к
внутренней поверхности мембраны молекулами-переносчиками, которые
называются пермеазами. Они характеризуются разной степенью
специфичности к веществам.
3. Активный перенос — против градиента концентрации, то есть
«против течения», осуществляется со значительным расходованием
энергии АТФ, выделяемой в процессе метаболизма.
Пример. Е.соli активно поглощает О2. Прохождение одной молекулы
кислорода через цитоплазматическую мембрану связано с расходом
одной молекулы АТФ.
55
 4. Транслокация радикалов — перенос химически измененных
молекул, которые в целом виде не способны пройти через ци-
топлазматическую мембрану. Экзоферменты фрагментируют их до
единичных радикалов, каждый из которых по отдельности пермеазы
переносят через цитоплазматическую мембрану внутрь клетки, где
происходит ресинтез этого соединения.

ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ

Ферментные системы бактериальной клетки условно

классифицируются на следующие основные группы:
системы, обеспечивающие активный транспорт питательных
веществ в клетку из окружающей среды,— пермеазы;
системы, регулирующие превращение энергии в клетке;
системы, осуществляющие биосинтез аминокислот и нуклеотидов,
то есть предшественников белков и нуклеиновых кислот;
системы, обеспечивающие собственно синтез белков и нуклеиновых
кислот;
системы, регулирующие репликацию и сегрегацию хромосом, то
есть деление ядерного аппарата;
системы, регулирующие собственно клеточное деление;
системы биосинтеза липидов, полисахаридов и клеточных мембран.
Согласованное взаимодействие этих систем и составляет сущность
процессов клеточной саморегуляции. Решающее значение при этом
имеют:
согласованность скоростей реакций;
строгое соблюдение последовательности их включения;
регулирование количественного и качественного состава ферментов.
Конечным результатом регуляции биосинтетических процессов в
клетке является воспроизведение потомства, а показателем
сбалансированности — скорость роста бактерий.
По характеру контролируемых реакций бактериальные ферменты
подразделяются на такие основные группы:
гидролазы, осуществляющие гидролиз (эстеразы, протеазы,
нуклеазы);
трансферазы, обеспечивающие катализ путем переноса опре-
деленных радикалов от одной молекулы к другой;
окислительные ферменты (оксидоредуктазы), катализирующие
процессы окисления — восстановления (оксидазы, пероксидазы,
каталазы);
изомеразы и рецемазы, играющие роль в углеводном обмене;
лиазы, обеспечивающие ферментацию негидролитическим путем
определенных химических групп;
лигазы, регулирующие биосинтетические реакции клетки.
56
 Наряду с ферментами обмена патогенные бактерии имеют фер-
менты агрессии, определяющие факторы их вирулентности: гиа-
луронидазу, коагулазу, коллагеназу, нейраминидазу, дезоксири-
бонуклеазу.
В зависимости от постоянства присутствия в бактериальной клетке
и обязательности участия в ее клеточном обмене ферменты
подразделяются на:
конститутивные, которые постоянно находятся в клетке не-
зависимо от условий ее существования,— это основные ферменты
клеточного обмена (липазы, протеиназы и др.);
адаптивные (индуцибельные) — синтезируются только при
наличии в среде соответствующего субстрата.
В зависимости от точки приложения действия бактериальные
ферменты подразделяются на экзоферменты и эндоферменты.
Экзоферменты выделяются клеткой во внешнюю среду, где производят
расщепление сложных соединений (белков, жиров, углеводов) до более
простых, доступных усвоению клеткой.
Эндоферменты содержатся внутри клетки, осуществляют плас-
тическую функцию и синтез сложных соединений в клетке.
Поскольку ферменты бактерий обладают высокой специфичностью,
именно это свойство широко используется для идентификации
микроорганизмов.

ДЫХАНИЕ БАКТЕРИЙ

Необходимую для жизнедеятельности энергию бакте-

риальная клетка получает за счет экзотермических химических реакций
окисления различных химических соединений, обладающих запасами
потенциальной энергии.
Сущность процесса дыхания бактерий заключается в протекании
биохимических реакций, в результате которых образуется АТФ,
являющаяся универсальным переносчиком химической энергии между
взаимопротивоположными процессами выделения и потребления
энергии.
Таким образом, под термином «дыхание» подразумевается
окисление органических веществ клетки кислородом, в результате чего
образуется конечный продукт — углекислый газ.
Одни бактерии для биохимических реакций окисления используют
свободный кислород. Такой тип дыхания называется аэробным.
Микроорганизмы, осуществляющие аэробный тип дыхания при наличии
в атмосфере не менее 20 % кислорода, называются облигатными
аэробами. 1
Другие бактерии получают энергию в результате окисленця, при
котором в качестве акцепторов Н2-электронов выступают неорганические
соединения. Такой процесс называется анаэробным
57
дыханием. Различают два основных типа анаэробного дыхания:
нитратный и сульфатный.
При нитратном типе источником энергии является восстановление
нитратов до азота и аммиака.
Бактерии, использующие нитратный тип анаэробного дыхания,
относятся к факультативным анаэробам. Среди них: кишечная,
дизентерийная, брюшнотифозная палочки, стафилококки, стрептококки
и др.
При сульфатном типе в результате окисления соединений
образуется сульфат, который восстанавливается до сероводорода.
Бактерии, использующие сульфатный тип дыхания, относятся к
облигатным анаэробам, не способным расти в присутствии кислорода,
поскольку при аэробном дыхании водородные атомы закономерно
связываются с кислородом, в результате чего образуется чрезвычайно
токсичная для бактериальной клетки перекись водорода (Н^О,), которая
инактивируется двумя основными ферментами — каталазой и
пероксидазой.
Облигатные анаэробы не содержат каталазы. Поэтому при наличии
кислорода образующаяся перекись водорода оказывает губительное
действие на облигатный анаэроб. Среди облигат-ных анаэробов —
возбудители столбняка, газовой гангрены, ботулизма.
Особую группу по типу дыхания составляют микроаэрофилы. При
необходимости использования кислорода микроаэрофилы отличаются
от облигатных аэробов тем, что кислород им необходим в значительно
меньшем количестве. К микроаэрофилам относятся актиномицеты,
бруцеллы, лептоспиры.

РОСТ И РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ

По определению Э. Роуза, «рост — это координированная

репликация (воспроизведение) всех структур, органелл и компонентов
клетки микроорганизма».
Иными словами, под ростом бактериальной клетки следует понимать
увеличение массы ее цитоплазмы, которое происходит в результате
синтеза клеточного материала в процессе питания. На рис. 6
представлена типичная кривая роста популяции бактерий, в которой
различают четыре стадии: лаг-фаза; экспоненциальная, или
логарифмическая фаза; стационарная фаза; фаза отмирания.
Лаг-фаза (4—5 часов) наступает после того, как в среду внесен
посевной материал. Это период адаптации бактерий к питательной среде,
когда происходит дифференциальная активация экзо-и эндоферментов
для последующего осуществления ферментсуб-стратной реакции. При
стабильном содержании ДНК отмечается резкое повышение
бактериального белка и РНК.
58
 Рис. 6. Фазы роста популяции бактерий (по А. А. Воробьеву и соавт., 1994)

время

Длительность лаг-фазы, как правило, непродолжительна, из-

меряется часами и зависит от вида бактерий; кратности посева на данную
среду; состояния культуры; температуры, используемой для
выращивания; состава питательной среды.
При отсутствии видимых проявлений роста в лаг-фазе проис-
ходит увеличение биомассы, в результате чего размер бактериальной
клетки возрастает в несколько раз.
Достигнув определенного размера, «накопив» нужное количество
белка, РНК и ДНК, активировав экзо- и эндоферменты, бактериальная
клетка начинает активно делиться. Размножение бактерий происходит
путем поперечного деления клетки (см. вкл. III).
С началом деления наступает следующая стадия — фаза ло-
гарифмического роста (5—6 часов) — это фаза размножения, осу-
ществляемая посредством бинарного деления материнской клетки на две
дочерние. «Цепная» реакция прогрессивно ускоряющегося бинарного
деления бактериальных клеток приводит к быстрому нарастанию
бактериальной массы в питательной среде, интенсивному расходованию
ее энергетического субстрата и накоплению продуктов бактериального
метаболизма. В результате среда становится все более неблагоприятной
для дальнейшего роста и размножения бактерий.
В этот период наступает третья, стационарная, фаза роста, во
время которой скорость размножения остается постоянной. В за-
висимости от вида культивируемых бактерий может длиться долго, после
чего наступает четвертая стадия — фаза отмирания, характеризующаяся
прогрессивным отмиранием бактериальных клеток по логарифмическому
типу. Продолжительность этой фазы — от 48 часов до нескольких недель.
Характер роста бактерий на жидких питательных средах различен:
диффузное помутнение питательной среды;
образование пленки или осадка («придонный рост»);
рост в виде «комочка ваты».
59
 Характер роста на жидкой питательной среде используется для
дифференциации бактерий.
Для культивирования бактерий в лабораторных условиях при-
меняют искусственные питательные среды различного состава.
Обычные, или простые питательные среды (мясо-пептонный агар,
мясо-пептонный бульон) используются для культивирования многих
видов бактерий и приготовления сложных питательных сред.
К сложным относятся элективные и дифференциально-ди-
агностические питательные среды. Элективные среды обеспечивают
развитие определенного вида микроорганизма, при этом сопутствующая
микрофлора не вырастает или растет очень медленно. Дифференциально-
диагностические среды используются для изучения биохимических
свойств микроорганизмов и дают возможность их дифференцировки по
ферментативной активности.
По консистенции питательные среды могут быть жидкие;
полужидкие (0,3-0,7 % агара); плотные (1,5-2 % агара).
Любая питательная среда должна содержать необходимые для
размножения легкоусвояемые вещества; иметь оптимальную влажность,
вязкость, рН, быть изотоничной, прозрачной, стерильной

БИОЛОГИЯ ВИРУСОВ

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ВИРУСОВ С КЛЕТКАМИ

Вирусные частицы, или вирионы являются инертными,

статическими формами вируса. Когда вирионы находятся вне клетки, они
не репродуцируются. В настоящее время известно три типа
взаимодействия вирусов с клетками хозяина.
Продуктивный тип взаимодействия заканчивается образованием
вирусного потомства.
Абортивный тип не завершается образованием вирусных частиц,
поскольку инфекционный процесс прерывается и не сопровождается
формированием инфекционного потомства.
Интегративный тип взаимодействия вирусов с клеткой харак-
терен для онкогенных вирусов, нуклеиновая кислота которых способна
встраиваться (интегрироваться) в клеточную хромосому, вызывая
трансформацию клеток. Границы между вирусами с автономной
репликацией геномов и интеграционными вирусами довольно условны, и
один и тот же вирус, в зависимости от вида клеток, может вести себя либо
как инфекционный, либо как интеграционный геном. Результатом такого
взаимодействия вируса и клетки является изменение наследственных
свойств клетки. Данный тип взаимодействия вируса и клетки называют
вироге-
60
 нией, подобно лизогении при взаимодействии фагов с бактериями.
Вирусы, способные вызывать вирогению, относят к группе
умеренных.
Продуктивный тип взаимодействия вируса и клетки получил название
репродукции вирусов (от англ. rерroduсе — воспроизводить). Репродукция
вирусов — это образование по принципу комплементарности и путем
репликации копий вирусных нуклеиновых кислот и индуцирование
молекулами последних биосинтеза вирусных белков с последующей
самоорганизацией этих компонентов в вирусные частицы.
Синтез и репликацию нуклеиновых кислот вирусов осуществляют
ферменты. Используя нуклеотиды клетки, ферменты создают из них
полинуклеотидные цепи новых молекул нуклеиновых. кислот вирусов. В
зависимости от типа синтезируемых нуклеиновых кислот они называются
ДНК-полимеразами или РНК-синтетазами. В некоторых случаях
нуклеиновые кислоты вирусов реплицируются клеточными полимеразами
— ферментами, присутствующими в клетке до ее заражения вирусом, хотя
чаще репликацию вирусных нуклеиновых кислот осуществляют
полимеразы, появляющиеся после заражения клетки вирусом. Такие
полимеразы называют вирусспецифическими, так как биосинтез их
закодирован в структуре нуклеиновых кислот самих вирусов. И, наконец,
репликация нуклеиновых кислот некоторых вирусов происходит за счет
предсуществующих в вирионе полимераз. Синтез вирусспецифических
полимераз и вирусных структурных белков осуществляется на рибосомах
клетки. Вирусные полимеразы, например РНК-репликазы, являются
строго специфичными.
При большом разнообразии механизмов репродукции вирусов
общим для них является то, что источником мономеров для синтеза и
репликации нуклеиновых кислот служат нуклеотиды клетки. Источником
мономеров для синтеза и построения белков всех вирусов являются
аминокислоты, и синтез белков всех вирусов независимо от
ультраструктуры их нуклеиновых кислот осуществляется в клеточных
рибосомах. Источником энергии для биосинтетических процессов при
репродукции вирусов является АТФ, которая вырабатывается в
митохондриях клетки-хозяина.
Процесс репродукции вирусов включает шесть этапов: адсорбцию
вируса на клетке; проникновение в клетку; депротеинизацию и
освобождение вирусного генома; синтез вирусных компонентов в клетке-
хозяине; сборку и формирование вирусов; выход зрелых вирусов из
клетки.
Адсорбция, то есть прикрепление ви руса к клетке, осуществляется
специфическими и неспецифическими механизмами. Неспецифический —
определяется силами электростатического
61
 взаимодействия. В этом процессе участвуют положительно заря-
женные аминные группы вирусного белка и кислые фосфатные группы
клеточной поверхности, имеющие отрицательный заряд. Специфический
механизм взаимодействия вируса и клетки обусловлен
комплементарными клеточными и вирусными рецепторами. Вирусные
рецепторы подразделяют на липопротеиновые (у арбовирусов) и
мукопротеиновые (у миксовирусов и аденовирусов). Спектр
чувствительности клеток к вирусам часто определяется наличием
соответствующих рецепторов.
Резистентность клеток можно преодолеть путем разрушения
клеточной мембраны, для чего используют инактивированный вирус
Сендай. Специфические противовирусные антитела и антитела к
нормальным клеткам препятствуют адсорбции вирусов. Процесс
адсорбции состоит из двух периодов — обратимого и необратимого.
Период обратимой адсорбции может закончиться десорбцией вируса. При
длительном контакте клеток и вируса наступает стадия необратимой
адсорбции. Адсорбированные вирионы таким образом могут частично
элюироваться с поверхности клеток, небольшая часть остается интактной,
а основная масса вирусных частиц проникает в клетку.
Проникновение вирусов в клетку осуществляется путем ви-
ропексиса, или пиноцитоза. При этом в месте адсорбции вириона
происходит сначала инвагинация наружной мембраны клетки и
образование внутриклеточной вакуоли с вирусной частицей. Через
некоторое время вирусная и клеточная мембраны вакуоли лизируются и
высвобождается нуклеокапсид вируса. Другие вирусы, например вирус
Неrреs simр1ех, проникают в клетку не путем виропексиса, а
расплавления мембран вируса и клетки. После расплавления вирусный
нуклеопротеид оказывается в цитоплазме. Большинство вирусов
проникают в клетку путем виропексиса, меньшинство видов — путем
сплавления. У фагов этот процесс, то есть освобождение ДНК и ее
последующая инъекция сквозь оболочку бактериальной клетки,
происходит непосредственно на поверхности этой клетки сразу же после
прикрепления к ней фага.
Депротеинизация, или «раздевание» происходит постепенно в
несколько этапов. Процесс освобождения вирусной нуклеиновой кислоты
идет при активном участии самого вируса, индуцирующего образование в
клетке ферментов и активаторов ферментов, необходимых для
депротеинизации вирусной нуклеиновой кислоты. В процессе
депротеинизации вирусов могут участвовать ферменты клеточных
лизосом. Таким образом, депротеинизация завершается освобождением
вирусного генома.
Как только вирусный геном освобождается от белка, вирусная
нуклеиновая кислота дезорганизует работу клеточных систем. Вирус
стимулирует синтез ингибитора клеточных РНК. Ингиби-
62
 тор представляет собой белок — гистон, кроме того блокирующий
процесс синтеза клеточной ДНК. Второй «ранний» вирусный белок
препятствует осуществлению функции клеточной и-РНК. Термин
«ранние» обозначает молекулы, синтезированные до репликации ДНК.
Реализация генетической информации вирусов осуществляется в
соответствии с процессами транскрипции — синтеза информационных
РНК, комплементарных матричным ДНК или РНК; трансляции —
синтеза белков на рибосомах клетки с участием и-РНК; репликации —
синтеза молекул нуклеиновой кислоты, гомологичных геному (рис. 7).
| Синтез вирусных ДНК у ДНК-содержащих вирусов осущес-
твляется с помощью ДНК-полимераз. Благодаря участию этого фермента
из нуклеотидов клетки синтезируется и строится вторая комплементарная
нить ДНК, в результате чего образуются новые двухцепочечные
молекулы ДНК. Процесс репликации молекул ДНК продолжается до тех
пор, пока в клетке не накопится определенное их количество,
необходимое для потомства вирусной частицы, проникшей в клетку.
Поскольку типы и формы нуклеиновых кислот разнообразны — кроме
двухцепочечной ДНК могут быть РНК, одно- и двухцепочечные,
линейные и кольцевые молекулы — то и механизмы их репликации
различны.
У вирусов, содержащих двунитевую РНК, синтез вирусных
компонентов происходит сходным образом. «Ранняя» транскрипция у
них осуществляется благодаря вирионному ферменту — РНК-зависимой
РНК-полимеразе. Вирусы с однонитевой РНК по характеру синтеза
белков разделяются на две группы: вирусы,
 Вирусные белки в т.
ч. ферменты

Новые молекулы
вирусной ДНК

ОАО
 Рис. 7. Схема репликациодвухцепочечных молекул вирусных
ДНК и передачи генетической информации в рибосомы
63
 И-РНК(+)
Вирусные белки в т.
ч. РНК-репликаза
Транскриптаза
———————^ ОАО

Вирусная РНК

Новые молекулы
вирусных(-) РНК

Рис. 8. Схема репликации вирусных минус-РНК и передачи генети-

ческой информации в рибосомы

у которых РНК обладает информационными свойствами и направляет

синтез специфических белков (пикорна- и тогавирусы);
вирусы, у которых РНК не является информационной, а служит
только матрицей для синтеза и-РНК (ортомиксо-, парамиксо-,
рабдовирусы) (рис. 8).
Особым способом репликации отличаются РНК-содержащие
двухцепочечные ретровирусы. Существенное отличие состоит в том, что
у них имеется фермент — РНК-зависимая-ДНК-полимераза, с помощью
которой на матрице вирионной РНК синтезируется ДНК-провирус
кольцевой формы. Этот провирус встраивается в клеточную хромосому и
транскрибируется клеточной РНК-полимеразой точно так же, как и
обычные клеточные гены. Образующаяся РНК направляет синтез
вирусных белков и одновременно является вирионной РНК. Вирусная
нуклеиновая кислота кодирует синтез двух классов белков:
неструктурных белков — ферментов, которые обеспечивают процесс
репродукции вирусов на разных его этапах, и структурных белков, кото-
рые войдут в состав вирионов потомства. Наряду с синтезом белков в
клетке при репродукции вирусов, имеющих суперкапсид, например,
вируса гриппа, происходит синтез углеводных цепей, входящих в состав
гликопротеидов. Присоединение углеводов осуществляется с помощью
клеточных ферментов трансфераз, синтез липидов суперкапсида —
клеткой-хозяином. Вирусный суперкапсид формируется при включении
липидов из плазматической мембраны клетки-хозяина. Синтез вирусных
нуклеиновых кислот и вирусспецифических белков происходит почти
одновре-
64
 менно и не менее чем на час опережает созревание вирусных
частиц.
Сборка и формирование вирионов осуществляется после
достижения критической концентрации нуклеиновой кислоты и белка так
как чисто физико-химическая реакция агрегации белка с вирусными
нуклеиновыми кислотами. Так, у парамиксовирусов формирование
вирионов происходит путем самосборки, которая обусловлена
«узнаванием» РНК белками. Вероятно, «узнающим» белком вляется
белок Р, который наиболее жестко связан с РНК в вирионах.
Нуклеокапсиды накапливаются в цитоплазме зараженных леток, причем
скорость образования внутриклеточных нуклеокапсидов гораздо выше
скорости образования вируса. Зрелые вирусные сложноустроенные
частицы формируются при прохождении их нуклеопротеидов через
цитоплазматическую или ядерную мембрану клетки-хозяина.
Компоненты этих мембран становятся элементами наружной
оболочки вириона — суперкапсида. Заключительная стадия репро-
дукции вирусов — выход вновь сформированных вирионов из клетки. У
различных групп вирусов этот процесс происходит по-разному. При
выходе из клетки вирусов, не имеющих суперкапсидной оболочки, как
правило, клетка погибает из-за взрывного выхода одновременно
большого количества вирусных частиц. Вирусы, имеющие
суперкапсидную оболочку, выходят из клетки путем почкования. На
заключительном этапе сборки нуклеокапсиды сложноустроенных
вирусов фиксируются на клеточной мембране, модифицированной
вирусными белками, и постепенно выпячивают ее, в результате чего
образуется «почка», содержащая нуклеокапсид. Затем «почка» отделяется
от клетки, то есть внешняя суперкапсидная оболочка этих вирусов
формируется в процессе их выхода из клетки.
При таком механизме выхода вирионов из клетки последняя
сохраняет в определенной мере свои функции. Так, например, процесс
выхода вирусов гриппа может продолжаться более 30 часов.
Герпесвирусы могут выходить из клетки через цитоплазматические
трубочки, соединяющие ядерную оболочку с наружной мембраной
клетки. Благодаря такому механизму выделения эти вирусы передаются
от клетки к клетке, не выходя во внешнюю среду. Образовавшиеся в
процессе репродукции вирионы могут инфицировать новые клетки и
проходить в них новый цикл репродукции.
Интегративный тип взаимодействия характеризуется встраиванием
нуклеиновой кислоты вируса в хромосому клетки-хозяина. При этом
вирусный геном функционирует как составная часть клеточного генома.
Интегративный тип взаимодействия присутствует у бактериофагов,
онкогенных вирусов, вируса гепатита В, вирусов герпеса и вируса
иммунодефицита человека. В частности,
5 «Микробиология» 65
 умеренные фаги вступают в симбиоз с частью бактерий, при этом
ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В данном случае геномом
фага называют профаг, ставший частью хромосомы бактерии и не
вызывающий ее лизиса.
Симбиоз микробной клетки с умеренным фагом называют
лизогенией. Самопроизвольно или под действием ультрафиолета, или
химических факторов профаг может из хромосомы переходить в
цитоплазму и вести себя как вирулентный фаг, лизирующий бактерии.
У онкогенных вирусов и вируса иммунодефицита человека
процесс интеграции является обязательным в цикле их репродукции. У
этих вирусов на матрице РНК с помощью фермента РНК-зависимой ДНК-
полимеразы синтезируется ДНК-копия, которая встраивается в
хромосому клетки. ДНК вируса, находящаяся в составе хромосомы
клетки, называется ДНК-провирусом. Клетка сохраняет свои функции и
при делении передает ДНК-провирус дочерним клеткам.
Таким образом, состояние вирогении наследуется. ДНК-про-
вирус несет дополнительную генетическую информацию, поэтому
интеграция является причиной некоторых аутоиммунных и хронических
заболеваний, опухолей. Под действием некоторых физических и
химических факторов ДНК-провирус может вырезаться из клеточной
хромосомы и переходить в автономное состояние, включаясь в цикл
репродукции.

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ
В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Культивирование вирусов осуществляют для лабораторной

диагностики вирусных заболеваний человека и животных, изготовления
живых и инактивированных противовирусных вакцин и сывороток,
изучения вопросов патогенеза и иммунитета.
Культивирование вирусов в организме естественно воспри-
имчивых животных проводят в том случае, если исследователь
заинтересован сохранить у вируса исходную патогенность и антигенные
свойства.
Культивирование вирусов в организме лабораторных животных
ограничено из-за невосприимчивости животных ко многим
вирусам человека.
Одним из наиболее доступных и удобных методов для выделения и
культивирования вирусов является использование куриных эмбрионов. В
куриных эмбрионах способны размножаться вирусы с различным
тропизмом, поскольку они содержат четыре субстрата для вируса —
амнион, алантоис, хорионаллантоисную мембрану и желточный мешок.
66
 Индикацию вирусов в куриных эмбрионах осуществляют по
характеру поражения тела и оболочек эмбриона, а у гемагглюти-
нирующих вирусов — в реакции гемагглютинации (склеивания
эритроцитов).
Вирусы — это абсолютные внутриклеточные паразиты, которые
не способны размножаться ни в одной из бесклеточных питательных
сред. В 1949 году Д. Эндерс, Т. Уэллер и Ф. Роббинс сообщили о
том, что вирус полиомиелита может размножаться и вызывать
характерные изменения в культурах не из нервной ткани. Благодаря
этому открытию стало возможным выращивание вирусов в
клеточных культурах, а также удалось выделить и описать
множество ранее неизвестных вирусов. Открытие аденовирусов, эхо-
и риновирусов, разработка вакцин против полиомиелита, кори и
краснухи непосредственно связаны с использованием культур
клеток.
Для культивирования различных вирусов используют первич-
ные, диплоидные и перевиваемые клеточные линии.
Первичные культуры клеток получают из измельченных жи-
вотных тканей, обрабатывая их протеолитическими ферментами.
После отмывки и подсчета клеток суспензию разбавляют средой и
дают возможность клеткам прикрепиться к плоской поверхности
стеклянной или пластмассовой посуды. Клетки быстро при-
крепляются к поверхности и при оптимальных условиях делятся
примерно один раз в день. Первичные или первичнотрипсинизи-
рованные культуры клеток осуществляют не более пяти—десяти
делений. Для лабораторных исследований и производства вакцин их
получают из эмбриональных тканей человека (почек, амниона),
обезьян, мышей, куриных эмбрионов.
Диплоидные клеточные культуры представляют собой клетки
фибробластов, полученные из эмбрионов человека. Они могут осу-
ществлять до 100 делений, сохраняя при этом свой исходный дип-
лоидный набор хромосом.
Перевиваемые клеточные линии — это клетки одного типа,
способные размножаться in vitrо неопределенно долго, их получают
из трансформированных клеток. Часто они теряют сходство с теми
клетками, от которых произошли, претерпевая в течение длительного
культивирования последовательные мутации. Перевиваемые
клеточные линии Нер-1, Нер-2, Не1а и КВ ведут начало от карцином
человека. Эти линии, а также линии, происходящие от клеток тканей
мышей (L929), хомячков (ВНК-21) широко используются в
экспериментальной вирусологии.
О размножении вирусов в культуре клеток можно судить по
датопатическому эффекту — ЦПЭ (см. вкл. IV); образованию в
клет-:ах вирусных включений; бляшкам в клеточном монослое; явле-
нию гемадсорбции; изменению цвета индикатора питательной среды
для клеток.
67
 СОХРАНЕНИЕ ВИРУСОВ И
ВИРУССОДЕРЖАЩЕГО МАТЕРИАЛА

Вирусы можно сохранять при положительных температурах,

в замороженном и лиофилизированном состоянии.
Стабильность вирусов при положительных температурах не-
велика. Продолжительность хранения отдельных видов вирусов даже при
температурах, близких к нулю (2-4°С), исчисляется несколькими днями.
Инактивация вирусов при положительных температурах происходит за
счет действия различных групп ферментов вирусного и субстратного
происхождения.
Неочищенные взвеси вирусов хранят в холодильнике при тем-
пературе минус 40—70°С. Чем ниже температура хранения, тем лучше
сохраняются вирусы и вируссодержащие материалы.
В настоящее время наиболее совершенным способом хранения
вирусов является замораживание (криоконсервирование) при
температуре от минус 165°С (в парах жидкого азота) до минус 196° С (в
жидком азоте). При такой температуре некоторые вирусы сохраняют
ультраструктуру и биологические свойства в течение трех—пяти лет.
Поэтому метод криоконсервирования широко используется при создании
криобанков вирусов.
Некоторые виды вирусов можно сохранять путем высушива-ния
в вакууме из замороженного состояния способом лиофилизации
(сублимации). Так, например, можно сохранить вирусы бешенства и
полиомиелита.

ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ

Генетика — наука об изменчивости и наследственности

организмов. Основателем учения об изменчивости и наследственности
является Ч. Дарвин, доказавший в 1859 году, что все существующие виды
растений и животных произошли из немногих исходных форм в
результате изменчивости.
В 1906-1907 годах М. Нейссер и Р. Манссини описали появление
«дочерних» колоний кишечной палочки, в отличие от материнской не
ферментировавших лактозу. В настоящее время центральное место в
генетике микроорганизмов по-прежнему занимает интенсивное изучение
кишечной палочки (Еscherihiа соli) и ее многочисленных вирусов-
паразитов. Новым направлением в генетике микроорганизмов является
генная инженерия, с помощью которой можно в определенной степени
управлять наследственностью микроорганизмов.
Явление наследственности связано со спецификой молекул ДНК,
которые программируют процессы индивидуального развития особей
бактерий. У высших растительных и животных организмов
68
 вся генетическая информация заложена в ядре, содержащем полный
набор хромосом. Аналог ядра у бактерий представлен нуклеоидом,
состоящим из одной уложенной или развернутой молекулы ДНК.
Генетический материал бактерий представлен ДНК, в молекулах которой
закодирована информация о структуре клеточных белков. Двунитевая
молекула ДНК-хромосомы бактерии кишечной палочки состоит из
1,7×107 нуклеотидных пар. Ее молекулярная масса составляет примерно 3
% сухой массы клетки бактерий. Единицей наследственности является
ген, представляющий собой участок ДНК, в котором зашифрована
последовательность аминокислот в полипептидной цепи, харак-
теризующий отдельный признак особи. В отличие от растений и
животных бактерии преимущественно являются гаплоидными —
содержат одинарный набор генов и совмещают функции гаметы и особи.
Синтез каждого фермента, или более точно полипептидной цепи
контролируется отдельным геном генома. Если в геноме бактерии
отсутствует ген данного фермента, этот фермент не может быть
синтезирован. ДНК представляет собой длинный полимер-
полинуклеотид. Каждый нуклеотид состоит из азотистого основания —
аденина, гуанина; цитозина или тимина и остатка сахара дезоксирибозы и
фосфатной группы, с помощью которых нуклеотиды соединяются между
собой.
Генетический код составляет особая последовательность нук-
леотидов на определенном участке ДНК. Последовательность ос-
нований в ДНК характеризует собой структурную единицу — кодон,
который кодирует каждую из 20 аминокислот, входящих в состав белков.
Генотип — это комплекс генов, наследственно переданный особи
материнской клеткой. Комплекс внешних и внутренних признаков
бактерий, таких как форма, размеры, окраска, химический состав,
биохимические и микроскопические особенности соответствуют
фенотипу, то есть внешнему проявлению генотипа. Процесс синтеза
белка, закодированный в молекулах ДНК, осуществляется в несколько
этапов и требует участия трех типов РНК:
информационной (матричной) — и-РНК; транспортной — т-РНК;
рибосомальной — р-РНК. Информационная РНК образуется при
помощи специфического фермента РНК-полимеразы на матрице
молекулы ДНК. При этом генетическая информация, определяемая
типом последовательности чередования нуклеотидов, копируется в
молекуле и-РНК. Этот этап передачи информации называется
транскрипцией.
Информационная РНК направляется к рибосомам, находящимся
в цитоплазме. У всех живых организмов рибосомы представляют собой
рибонуклеопротеиды, содержащие 63 % РНК и 37 % белка. Лучше
других рибосомы изучены у кишечной палочки. Метаболически
активные рибосомы Е. соli имеют константу седимента-
69
 ции 70S. В среде, содержащей двухвалентные ионы, они обратимо
диссоциируют на составляющие 50S и 30S субъединиц. Рибосомы
бактерий содержат три типа собственной рибосомальной РНК: 5S; 16S;
26S. Кроме РНК субъединицы рибосом имеют индивидуальные белки.
Предполагают, что белки выполняют функции формирования структуры
рибосом и центров связывания активизированных аминокислот, а также
обеспечивают правильность считывания матрицы.
Перевод четырехбуквенного (А, Т, Г, Ц) языка нуклеиновых кислот
(ДНК и РНК) на язык протеинов называется трансляцией.
Реализация наследственной информации происходит в опре-
деленных условиях внешней среды. Различия в условиях среды
накладывают свой отпечаток на развитие особей бактерий. Поэтому
развитие бактерий необходимо рассматривать как следствие действия
двух важнейших факторов — действия генотипа; влияния на особь
факторов среды. Под влиянием физических, химических и биологических
воздействий некоторые микроорганизмы могут изменять свои
морфологические признаки, принимая форму больших шаров,
утолщенных нитей, колбовидных образований, ветвлений и т. д. Явление
морфологических изменений у микробов Н. Ф. Гамалея назвал
гетероморфизмом. Гетероморфизм легко возникает под влиянием солей
лития, а также фага, кофеина, сульфаниламидов, антибиотиков,
различных излучений, действия магнитных полей и других факторов.
Любое изменение морфологических признаков, как правило,
сопровождается изменением и физических свойств. Например, при
посеве на плотную питательную среду чистой культуры образуются
колонии двух основных типов: гладкие — S-формы (от англ. smoth —
гладкий); шероховатые — R-формы (от англ. rough — шероховатый).
Такого рода изменчивость получила название диссоциации.
Изменчивость бактерий затрагивает и их потребности в мета-
болитах. Под влиянием антибиотиков, химических веществ, ульт-
рафиолетового облучения у некоторых микробов появляется потребность
в витаминах, аминокислотах, факторах роста, в которых не нуждались
исходные штаммы. Таким образом, в отличие от исходных прототрофов
эти микроорганизмы превращаются в ауксотрофов.
Под действием некоторых веществ могут изменяться фер-
ментативные свойства бактерий. Индукцию биосинтеза фермента -
галактозидазы у Е.соП можно воспроизвести культивированием этой
бактерии в присутствии лактозы.
Очень важным моментом является то, что под влиянием различных
факторов изменяется степень патогенности у болезнетворных микробов.
В 1881 году Л. Пастер разработал метод получения живой вакцины
против сибирской язвы. В течение 12—24 дней культи-
70
 вирования сибиреязвенной бациллы при повышенной температуре
(42—43 °С) микробы потеряли способность вызывать заболевание у
животных при подкожном введении, сохранив при этом иммуногенные
свойства. Используя этот пастеровский принцип, в 1883 году Л. С.
Ценковский создал живую противосибиреязвенную вакцину, состоящую
из взвеси спор ослабленных сибиреязвенных бактерий.
В 1885 году Л. Пастер изменил свойства возбудителя бешенства
путем проведения 133 последовательных пассажей через мозг кроликов.
При подкожном введении вирус оказался безвредным и в то же время
способным предупреждать возникновение заболевания у людей,
укушенных бешеными животными.
Ослабленный штамм микобактерий туберкулеза бычьего вида был
получен во Франции в 1919 году А. Кальметтом, Ш. Гереном путем
длительного пассирования на картофельной среде с желчью и
глицерином при температуре 38°С в течение 13 лет через каждые 14
дней. Полученный штамм был назван вакциной БЦЖ (ВСG — от фр.
Васilе Са1mеtte-Guеrin), которую применяют для прививок против
туберкулеза.
Изменчивость микроорганизмов, возникающая под действием
факторов внешней или внутренней среды, которая не сопровождается
изменением структуры генотипа называется ненаследственной
фенотипической изменчивостью. Например, культура кишечной палочки
на среде с рициноолеатом натрия растет в виде длинных нитей, а при
добавлении хлорида кальция клетки становятся очень короткими.
Глицерин и аланин обусловливают полиморфизм у холерных вибрионов.
В процессе снижения степени патогенности микроорганизмов —
аттенуации происходят наследственные генотипические изменения
химического состава бактерий. У микобактерий туберкулеза уменьшается
содержание липидов, у возбудителя чумы — белка, у туляремийных
бактерий и бруцелл — снижение способности липидов к
комплексообразованию.
При воздействии пенициллином, химическими веществами или
иммунными сыворотками на стафилококки, микобактерии туберкулеза и
многие другие бактерии возникают L-формы бактерий, у которых
нарушается синтез клеточной стенки. Микробная клетка превращается в
большой шар с вакуолями, гранулами, зернистостью.

МУТАЦИИ

При необратимой утрате определенных звеньев биосинтеза

клеточной стенки бактерии способны перевиваться в L-форме независимо
от наличия в среде пенициллина и других трансфор-|мирующих агентов.
В данном случае наблюдается наследственная генотипическая
изменчивость, связанная с мутациями — мутаци-
71
 онная изменчивость. Мутации, ведущие к изменению генотипа,
всегда наследственно закреплены. Различают нуклеоидные мутации,
происходящие в нуклеоиде, и цитоплазматические мутации — в ДНК
цитоплазмы. Мутации могут сопровождаться изменением
последовательности нуклеотидов ДНК, выпадением (делеция) или
добавлением (дупликация) одного основания или небольшой группы
оснований.
По происхождению бактериальные мутации подразделяются на
спонтанные, образующиеся под воздействием внешних факторов без
вмешательства экспериментатора, и индуцированные, возникающие
вследствие обработки микробной популяции мутагенными факторами.
По механизму действия на геном микробной клетки мутации
подразделяются на:
точечные или мелкие, при которых в результате замены, вставки
или выпадения одной пары азотистых оснований ДНК внутри самого
гена изменяется, как правило, лишь генетический признак бактериальной
клетки. При точечных мутациях может наблюдаться спонтанная
(самопроизвольная) или индуцированная реверсия, то есть
восстановление утраченного или утрата приобретенного признака;
крупные или множественные, при которых в основном на-
блюдается летальный исход;
супрессорные — это эффекты приобретения или утраты при-
знака, непосредственно не связанного с действием мутагена на
структурный ген, ответственный за этот признак. Закономерным исходом
супрессорных мутаций является восстановление исходного генетического
статуса.

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ РЕКОМБИНАЦИИ

Среди микроорганизмов широко распространен и такой вид

изменчивости как генетическая рекомбинация, которая может
происходить в результате трансформации, трансдукции и конъюгации. В
эволюционном процессе рекомбинации играют второстепенную роль.
Главным поставщиком эволюционного материала являются мутации.
Суть явления генетической рекомбинации состоит в том, что в
реципиентную клетку попадает лишь фрагмент экзогенной ДНК
бактерии-донора, который взаимодействует с цельной хромосомой
реципиента, в результате чего происходит перераспределение —
рекомбинация генетического материала с образованием рекомбинанта,
имеющего признаки обоих родителей. Полученные рекомбинанты — это
клетки, в которых полноценная хромосома состоит из хромосомы
реципиента с включенными в нее фрагментами хромосомы донора.
72
 Для осуществления возможности скрещивания донор должен
обладать свойством фертильности (от англ. fertilitу — плодовитость).
Фертильность определяется по способности бактерий адсорбировать
специфические донорские фаги на поверхностных пилях, синтез которых
детерминируется F-плазмидой, или на специфических участках
поверхности клетки-донора при отсутствии таких пилей у некоторых
видов бактерий. Рекомбинация может произойти при наличии у
реципиента рекомбинационных генов, а также при отсутствии факторов
ограничения экспрессии чужеродной ДНК.

Трансформация
Трансформация — передача генетической информации путем
введения в клетку реципиента изолированной ДНК бактерии-донора.
Поскольку эффективность трансформации зависит от степени гомологии
структуры ДНК донора и реципиента, она более эффективна в пределах
одного вида.
Трансформация возможна, когда у реципиента возникает состояние
компетентности, заключающееся в изменении проницаемости клеточной
стенки, позволяющее проникать в клетку высокомолекулярным
структурам донорской ДНК. На поверхности клетки-реципиента
находятся специфические ферментативно активные рецепторы, на
которых адсорбируются фрагменты ДНК донора и затем проникают в
клетку. Проникшие фрагменты расщепляются на комплементарные нити,
из которых одна включается в хромосому реципиента.
Трансформирующая активность ДНК очень высока. Достаточно 10 — 15
минут ее контакта с исследуемой культурой, чтобы вызвать начало
изменчивости, которая завершается через 2 часа. При трансформации от
донора к реципиенту могут передаваться гены, определяющие
резистентность к антибиотикам, фаголизабельность и другие свойства
микроорганизмов. При существенных различиях в степени гомологии
нуклеотидного состава ДНК-компонентов донора и реципиента частота
получения трансформантов ограничена. Тем не менее, межвидовая
трансформация получена у бактерий родов Neisseria, Bacillus,
Streрtососcus.

Трансдукция
Трансдукция — перенос генетической информации от донора
реципиенту посредством умеренных бактериофагов, которые в отличие от
вирулентных не всегда вызывают лизис бактериальной клетки. В явлении
трансдукции принимают участие бактерия-донор, трансдуцирующий фаг
и бактерия-реципиент. Умеренные бактериофаги могут находиться в
цитоплазме бакте-
73
 рии в автономном состоянии или включаются в структуру ДНК в
виде профага. В интегрированном состоянии геном умеренного фага
передается потомству клетки наравне с другими хромосомными генами.
Переходя в автономное состояние, эти фаги могут присоединять к
собственному геному небольшие фрагменты хромосомы, расположенные
рядом с местом включения в нее профага. При инфицировании новых
бактерий умеренные фаги, несущие хромосомные гены, выполняют
функции переносчика генетического материала. Различают три вида
трансдукции: общую, или неспецифическую, специфическую и
абортивную.
При общей трансдукции может быть передан любой участок
хромосомы бактерий или несколько участков, определяющих целый ряд
наследуемых признаков. Специфическая трансдукция осуществляется
группой фагов, которые способны трансдуцировать гены, расположенные
рядом с местом включения генома фага в нуклеоид бактерий при ее
лизогенизации. Некоторые умеренные фаги сальмонелл и шигелл
осуществляют лизогенную или фаговую конверсию антигенов
одновременно с лизогенизацией клетки-реципиента. При конверсии
вместе с фагом передается фрагмент хромосомы, контролирующей синтез
соматического антигена, что изменяет антигенную структуру реципиента.
Важное значение имеет фаговая конверсия у дифтерийных
бактерий. Один из умеренных фагов Соrуnеbacterium diphteriае
одновременно с лизогенизацией сообщает бактериям свойство
токсигенности. У этих бактерий способность синтезировать токсин
находится под генетическим контролем генома фага и исчезает
одновременно с его утратой.
При абортивной трансдукции внесенный фагом фрагмент нук-
леоида не включается в нуклеоид реципиента; он находится в цитоплазме
и при делении передается только одной клетке, вторая дочерняя клетка
содержит генетический аппарат реципиента.
Широкое распространение лизогенности у стафилококков и
энтеробактерий позволяет предположить значительное влияние
трансдукции на формирование атипичных бактерий, что ведет к
осложнению эпидемиологического анализа. Наглядно это проявляется в
антигенной конверсии, влекущей за собой изменение антигенной
структуры близкородственных бактерий, у которых основу
дифференциальной диагностики составляет серологическая
характеристика.

Конъюгация
Конъюгация — половой путь передачи генетического
материала при непосредственном контакте клеток донора и реципиента.
Необходимое условие — наличие у донора фактора F-фертильности. У
грамотрицательных бактерий обнаружены по-
74
 ловые F-пили — длинные тонкие белковые трубочки, контроли-
руемые F-фактором. Через F-пили при конъюгации происходит перенос
генетического материала от донора к реципиенту. Клетки-доноры
обозначают F+, клетки-реципиенты — F-. Скрещивание F+ и F-,
сопровождается плодовитостью, а F- × F- — бесплодностью. Диаметр
канала пилей у Е. соli достигает 25 А°, это позволяет проходить через
него нити ДНК донора при контакте с клеткой реципиента.
Внехромосомные элементы, с участием которых совершаются
процессы конъюгации, называются конъюгативными плазмидами.
Конъюгативная плазмида — это внехромосомная генетическая структура
бактерий, представляющая собой замкнутое кольцо двунитевой ДНК,
находящейся в цитоплазме в автономном состоянии и ориентирующая на
передачу хромосом, будучи с нею в интегрированном состоянии.
Плазмиды несут необязательные для клетки-хозяина гены и придают
бактериям дополнительные свойства, которые могут им обеспечивать
преимущества по сравнению с бактериями, не имеющими плазмид.
К конъюгативным плазмидам относят фактор фертильности, а
также плазмиды, контролирующие резистентность бактерий од-
новременно к нескольким лекарственным веществам (R-плазмиды);
плазмиду Еnt, регулирующую синтез энтеротоксина у патогенных
эшерихий; плазмиду Н1у — обеспечивающую синтез гемолизинов;
плазмиды, контролирующие синтез поверхностных антигенов кишечной
палочки — К-88, К-99 и др.
Внедряясь в клетку реципиента, конъюгативные плазмиды со-
общают ей свойства донора. Они остаются в цитоплазме, сохраняя
автономное состояние, и реплицируются независимо от хромосомы или
встраиваются в структуру хромосомы — переходят в интегрированное
состояние. Находясь в автономном состоянии, плазмиды могут быть
выведены из клетки путем ее обработки акридиновыми красителями и
некоторыми другими веществами. Особенность конъюгативных плазмид
— наличие в их структуре генетического элемента трансмиссивности —
фактора передачи — trа, обеспечивающего передачу генетической
информации. Плазмиды, не имеющие такой частицы и соответственно
неспособные к самопередаче, называются неконъюгативными. К ним
относятся туберкулоцины, пестицины, вибриоцины — то есть некоторые
факторы синтеза антагонистических субстанций.
В последнее время изучается роль плазмид в формировании
условно-патогенных бактерий, поскольку условно-патогенные и
патогенные микроорганизмы различаются степенью стабильности
генетических факторов, контролирующих инвазивность и продукцию
эндо- и экзотоксинов. Патогенный эффект у лизогенных сальмонелл
может усиливаться по сравнению с нелизогенными бактериями за счет
высвобождения эндотоксина при их
75
лизисе в результате спонтанной или индуцированной активации
профагов. Плазмида Еnt сообщает бактерии-хозяину способность
продуцировать энтеротоксины. Особенности полиплазмидных систем
условно-патогенных бактерий необходимо учитывать при лабораторной
диагностике острых энтеритов, токсикозов, коли-бактериозов при
отсутствии облигатнопатогенных возбудителей заболевания.
Плазмиды являются удобной моделью для генной инженерии,
широко используются для получения рекомбинантных штаммов. Кроме
того, благодаря возможности конъюгационной передачи плазмид не
только внутри вида, но и между видами и родами плазмиды играют
важную роль в эволюции бактерий.

УЧЕНИЕ ОБ ИНФЕКЦИИ

Между микробом и макроорганизмом существует несколько

форм симбиотических отношений (от лат. simbios — сожительство):
мутуализм — взаимовыгодные отношения двух организмов;
комменсализм — оба организма не принося пользы, не причиняют вреда
друг другу; паразитизм — один из партнеров по симбиозу испытывает
вредное воздействие со стороны другого. Паразитизм широко
распространен в природе. Микробы-паразиты возникали по мере
появления растительного, а затем животного мира и в процессе эволюции
проспосабливались к существованию в одном или ограниченном числе
видов высших организмов. Явление паразитизма представляет интерес
для медицинской микробиологии, поскольку на основе этой формы
взаимоотношений между микробом и макроорганизмом появились
инфекционные болезни.
Инфекция

Микроорганизм Макроорганизм Внешняя среда (факторы)

токсины/капсула продукты восприим- резистент- социальные биологи-/ метаболизма
чивость ность \ ческие
инвазивность агрессивность гомеостаз инфекционная болезнь особенности

классификация

по источникам по механизму
передачи
Рис. 9. Схема взаимодействия факторов, участвующих в инфекцион-
ном процессе

76
 Инфекция (от лат. infесtiо — заражать) — процесс
сложногоактивного взаимодействия макроорганизма с микроорганизмом,
внедрившимся в его ткани и органы.
Инфекционный процесс — совокупность физиологических защитных
и патологических процессов, развивающихся в организме в результате
внедрения в него болезнетворного (патогенного) микроба.
Инфекционная болезнь — крайняя степень проявления инфекционного
процесса, сопровождающаяся рядом характерных симптомов.
Клиническая картина бешенства отличается ,от заболева- УЦИЯ
дизентерией, брюшного тифа — от сыпного тифа.
Для возникновения инфекционного процесса, заболевания необходимо
взаимодействие трех факторов (рис. 9): патогенный
микроорганизм; восприимчивый макроорганизм; условия окружающей
среды, в том числе и социальные.

МИКРООРГАНИЗМ И
ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС

Роль микроорганизма в возникновении инфекционного процесса

впервые была определена в 1840 году Я. Генле и позднее уточнена Р.
Кохом в его триаде, согласно которой:
возбудитель заболевания может быть обнаружен только у
больных;
из организма больного его нужно выделить в чистой культуре;
выделенная культура возбудителя должна вызывать заболевание у
восприимчивых лабораторных животных.
В свое время триада Генле — Коха сыграла положительную роль,
поскольку в ней были сформулированы условия, которым должен
отвечать микроб — возбудитель инфекционного заболевания,
В настоящее время триада во многом утратила свое значение. Сейчас
не вызывает сомнения возможность обнаружения возбудителя не только у
больных с клинически выраженной формой заболевания, но и у
практически здоровых лиц — бактерионосителей. Хорошо известно, что
при ряде заболеваний, вызванных риккетсиями, вирусами, выделить
возбудителя в чистой культуре не всегда удается, так как он не растет на
искусственных питательных средах. И, наконец, весьма большое число
патогенных микробов не могут вызвать у экспериментальных животных
типичной клинической картины заболевания в связи с тем, что ко многим
из них у животных имеется видовая устойчивость (сифилис, гонорея,
брюшной тиф).
Патогенность - потенциальная способность микроорганизмов
определенного вида вызывать инфекционный процесс, может быть
реализована только в восприимчивом организме, является видовым,
генетически обусловленным признаком.
77
 Патогенный микроб обладает специфичностью, то есть каждый
отдельный вид возбудителя вызывает только определенную болезнь.
Некоторые микроорганизмы являются условно-патогенными: в обычной
среде они существуют в организме (на коже, слизистых оболочках, в
кишечнике) как сапрофиты, но при ослаблении сопротивляемости
человека или животного могут становиться паразитами. К ним
принадлежат: Е.соli, Strерtососсus fаесаlis, Рsеudomonas aeruginosa,
Cаndida аlbicаns, и др.
Вирулентность — индивидуальный признак патогенного микроба,
определяющий степень или меру патогенности. У различных штаммов
одного вида микроорганизмов вирулентность различна, ее можно
измерить условно принятыми единицами:
DLМ (dosis 1еtаlis minima) — наименьшее количество микробов,
которое вызывает гибель 95 % зараженных восприимчивых лабораторных
животных определенного вида и стандартной массы;
LD50 — минимальная доза микроорганизмов, вызывающая гибель 50
% экспериментальных животных.
Вирулентность не является постоянным признаком и подвержена
изменениям. Повышению вирулентности способствует воздействие на
микроорганизм благоприятных факторов. Попадание микроба в среду,
неблагоприятную для его развития, нередко приводит к снижению
вирулентности. Искусственное снижение вирулентности путем
культивирования микробов на неподходящих средах, пассажей через
невосприимчивый организм, внесения в питательные среды антибиотиков,
различных химических веществ, воздействия повышенной или
пониженной температуры и т. д. применяется для получения
аттенуированных (ослабленных) вакцин. Таким образом, вирулентность
представляет собой довольно пластическое свойство, подверженное
изменчивости как в естественных, так и в экспериментальных условиях.
Материальную основу вирулентности составляют: капсула, токсины,
ферменты вирулентности.
Капсула защищает патогенный микроб от воздействия фагоцитов и
антител при попадании в макроорганизм.
Токсины — микробные яды. Различают экзотоксины и эндотоксины,
отличающиеся целым рядом свойств.
Экзотоксины легко диффундируют в окружающую среду из клетки в
процессе ее жизнедеятельности. По химической природе являются
белками, термолабильны, очень ядовиты, обладают специфичностью
действия, то есть поражают определенные органы и системы
(столбнячный токсин — двигательные нейроны спинного мозга,
дифтерийный — сердечную мышцу и надпочечники), вызывают
образование в организме антител — антитоксинов. При действии
формалина и температуры 39—40°С утрачивают ядовитость.
Экзотоксины, лишенные ядовитых свойств, но сохранив-
78
 шие антигенную структуру и иммуногенность, называются ана-
токсинами и используются в качестве препаратов для профилактических
прививок.
Сильные экзотоксины продуцируют некоторые грамположительные
микроорганизмы: возбудители дифтерии, столбняка, газовой гангрены,
ботулизма.
Эндотоксины прочно связаны с бактериальной клеткой и поступают
во внешнюю среду только после ее гибели и разрушения. Имеют
липополисахаридную природу, термостабильны, менее ядовиты. Попав в
организм, вызывают явления общей интоксикации, а в качестве ответной
реакции — образование антибактериальных антител. Под действием
формалина обезвреживаются частично. Большинство патогенных
бактерий содержит эндотоксин (возбудитель брюшного тифа, паратифов,
дизентерии, коклюша и др.).
Ферменты вирулентности способствуют проникновению (ин-
вазивность) и распространению (инфекционность) микробов в организме.
К ним относятся: гиалуронидаза, расщепляющая гиалуроновую кислоту
(мукополисахарид) соединительной ткани; фибринолизин, лизирующий
фибрин кровяного сгустка; коагулаза, свертывающая плазму крови;
лецитиназа, разрушающая оболочку клеток крови и различных органов;
гемолизины, растворяющие эритроциты и лейкоцидины, разрушающие
лейкоциты. Некоторые патогенные микробы (возбудитель чумы,
сибирской язвы) продуцируют агрессины — вещества, нейтрализующие
антитела; антифагины, препятствующие фагоцитозу.
Вирулентным микробам присущи также адгезия и колонизация.
Адгезия — способность адсорбироваться на определенных,
чувствительных к данному возбудителю заболевания клетках организма
хозяина. Обусловлена, с одной стороны, поверхностными структурами
микробной клетки (пили), с другой — наличием рецепторов клетки
макроорганизма, способных вступать в соединение с микробной клеткой.
Колонизация — способность микробов размножаться либо на
поверхности клетки макроорганизма, к которой они прикрепились
(холерные вибрионы на энтероцитах), либо внутри клеток, куда
проникают микробы (дизентерийная палочка в клетках толстого
кишечника).

МАКРООРГАНИЗМ И
ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС

Возможность возникновения инфекционного процесса

определяется не только количеством и качеством патогенного микроба, но
и состоянием макроорганизма, его сопротивляемостью,
восприимчивостью.
79
 Воспрдимчивость обусловлена наличием в организме опреде
ленных клеток, тканей в которых микроб-паразит находит оптимальные
условия существования. Человек наиболее восприимчив к тем
заболеваниям, которыми болеют только люди (сифилис, дифтерия и др.)
и невосприимчив к заболеваниям, поражающим животных (чумка собак,
чума свиней).
Важным условием возникновения инфекционного процесса является
внедрение патогенного микроба в организм через определенные входные
ворота (место проникновения возбудителя). Дизентерийные,
брюшнотифозные микробы, холерный вибрион вызывают инфекционный
процесс, попав в организм через рот; возбудители газовой гангрены,
стовбняка — через раневую поверхность; вирусы гриппа, кори — через
слизистые оболочки верхних дыхательных путей и т. д. Возникновению и
развитию инфекционного процесса способствуют недоедание,
переохлаждение, переутомление, хроническое отравление алкоголем,
авитаминозы. Все это ведет к ослаблению организма, снижению его
защитных сил. Одним из тяжелых последствий голодания является то, что
при недостатке белков уменьшается выработка организмом защитных
веществ (антител), активность фагоцитов.
Большую роль в восприимчивости организма к инфекции играет
гиповитаминоз. Недостаток витамина А снижает барьерную функцию
кожи, способствует возникновению гнойно-воспалительных процессов
на коже. Гиповитаминоз В и С повышает восприимчивость к
туберкулезу, дифтерии, стрептококковым, стафилококковым
поражениям.
Заболевания нервной и эндокринной систем способствуют
возникновению и более тяжелому течению инфекционных болезней
(гнойно-воспалительные процессы при диабете).
На восприимчивость к инфекции оказывает также известное
влияние возраст, пол. Ко многим заболеваниям дети более вос-
приимчивы, чем взрослые (корь, скарлатина, паротит). У людей
пожилого возраста заболевания протекают тяжелее.
Определенные физиологические состояния женского организма при
неблагоприятных условиях могут понизить сопротивляемость к
инфекции.

ОКРУЖАЮЩАЯ СРЕДА И
ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС

К факторам окружающей среды следует отнести климатические

условия. Охлаждение или перегревание понижает устойчивость
организма к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. В
осенне-зимний сезон повышается заболеваемость гриппом и другими
респираторными заболеваниями. На севере отмечена более высокая
заболеваемость скарлатиной, чем на юге.
80
 В условиях жаркого климата чаще регистрируются кишечные
заболевания, в частности, амебная дизентерия.
Развитию инфекционных болезней способствует ионизирующая
радиация в повышенных дозах, длительное и интенсивное действие
солнечного света.
Немаловажную роль в возникновении и распространении
инфекций играют плохие санитарно-гигиенические условия труда и быта
людей, неблагоустроенность населенных пунктов, недостаточное
водоснабжение и плохое качество питьевой воды, отсутствие
ветеринарного надзора и др.

ТЕЧЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА

Возникший после внедрения в организм патогенного микроба

инфекционный процесс состоит из нескольких последовательно
протекающих периодов:
1. Инкубационный период (время от момента внедрения микроба
до появления первых признаков заболевания). При различных
заболеваниях инкубационный период длится от нескольких часов (грипп,
чума) до нескольких дней (скарлатина, дифтерия), месяцев (туберкулез) и
даже лет (лепра).
2. Продромальный период — появление первых признаков
заболевания (недомогание, слабость, повышение температуры, иногда
тошнота и рвота).
3. Клинический период — разгар болезни с развитием сим-
птоматики, характерной для определенного заболевания.
4. Период выздоровления или летальный исход. Иногда инфекция
переходит в хроническую форму или бактерионосительство.
По ряду признаков инфекционные заболевания отличаются от
других болезней наличием возбудителя; заразностью, инкубационным
периодом; неповторяемостью (в том случае, если после перенесенного
заболевания остается иммунитет).
Попав в восприимчивый организм, патогенные микробы могут
распространяться различными путями. В связи с этим различают:
бактериемию — возбудитель из места локализации поступает в кровь
и разносится по всему организму, но микробы в крови не размножаются
(брюшной тиф);
септицемию — возбудитель из крови поступает во внутренние
органы;
септикопиемию — микробы из крови попадают во внутренние
органы, где образуются гнойные очаги;
токсинемию — попадание в кровь микробных токсинов;
вирусемию — вирус в крови.

6 «Микробиология» 81
 ФОРМЫ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА

Простая, или моноинфекция — в организм проник один вид

возбудителя;
смешанная инфекция — в организме находятся одновременно
два-три возбудителя (например, грипп и корь, газовая гангрена и
стафилококковая инфекция). Исход смешанных инфекций часто бывает
неблагоприятным;
реинфекция — повторное попадание в выздоровевший орга-
низм тех же микробов, которые вызвали первичную инфекцию. Это
свидетельствует об отсутствии иммунитета к таким инфекциям (сифилис,
гонорея);
суперинфекция — на основное заболевание наслаивается новое
заражение этими же микробами (туберкулез);
рецидив — возврат признаков заболевания, новый приступ
болезни в результате активизации оставшихся в организме патогенных
микробов (возвратный тиф, брюшной тиф);
вторичная инфекция — к основному заболеванию (например,
гриппу) присоединяется инфекция, вызванная другим возбудителем
(например, стафилококком или стрептококком).
Существуют типичные формы инфекционного заболевания,
когда клиническая картина характерна для данной болезни и ати-
пичные, или амбулаторные, стертые, при которых ряд признаков
отсутствует или выражен слабо.
Бессимптомная форма инфекции — отсутствуют внешние про-
явления признаков заболевания.
Латентные (дремлющие) инфекции — возбудитель заболевания
длительное время находится в организме, не проявляя себя. При
ослаблении защитных сил организма латентная инфекция может
переходить в типичное заболевание.
Разновидностью латентной инфекции является персистенция —
длительное сохранение в организме некоторый вирусов, бактерий,
простейших, которые могут быть причиной тяжелейших
поствакцинальных осложнений, заболеваний нервной системы.
Бактерионосительство — одна из форм инфекции, протека-
ющей без признаков болезни и возникающее после перенесенной
инфекции или у здорового лица. Носительство бывает острое, когда
возбудитель сохраняется в организме в течение трех месяцев и
хроническое — более трех месяцев и даже всю жизнь (например, после
перенесенного брюшного тифа).
В зависимости от длительности течения инфекции делятся на:
острые — несколько дней (грипп, чума);
затяжные — полтора-два месяца (туляремия);
хронические — годы (туберкулез, СПИД).

82
 ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС

С учением об инфекции тесно связана наука эпидемиология. Она

занимается изучением причин и закономерностей развития и
распространения инфекционных заболеваний. Те инфекции, которые в
течение короткого периода времени поражают значительное количество
людей, охватывая большие территории, называются эпидемиями. Если
инфекционное заболевание охватывает целые страны, материки,
континенты, говорят о пандемии (раньше — оспа, чума, сейчас —
грипп). Существуют также эндемии и природно-очаговые инфекции,
когда инфекционные заболевания возникают и повторяются регулярно в
одной и той же местности. Это связано с природными условиями данной
местности. В отдельную группу выделены особо опасные, карантинные
(конвенционные) инфекции (чума, холера).
Возникновение и распространение инфекционных заболеваний зависят
от совокупности и взаимодействия трех факторов (трех звеньев
эпидемической цепи): источника инфекции, механизмов передачи и
восприимчивого организма.
Все инфекционные заболевания делят на:
антропонозные (инфекция поражает только организм человека) —
брюшной тиф, дизентерия, коклюш, дифтерия, сифилис, скарлатина,
холера;
зоонозные (болезни животных, передающиеся человеку) — чума, :
сап, бруцеллез, бешенство, туляремия, сибирская язва,орнитоз.
Зоонозы также классифицируются с учетом названия их хозяев-
резервуаров:
строгие зоонозы — заболевания, присущие только животным (чума
крупного рогатого скота и свиней, чумка собак);
зооантропонозы — заболевания, передаваемые от больных жи-
вотных человеку (бешенство, чума, туляремия);
антропозоонозы — заболевания, передаваемые от больного че-
ловека животным.
Однако эти термины часто употребляются как равнозначные. Исходя из
вышесказанного, можно отметить, что в природе существует два
источника инфекции:
больной человек или бактерионоситель (человек, переболевший или не
болевший, но выделяющий из организма патогенные микробы);
больные животные или здоровые носители (крупный рогатый скот,
грызуны, дикие и домашние животные, птицы).
От больных к здоровым возбудители могут передаваться различными
путями и способами. Существует несколько механизмов передачи:
фекально-оральный (алиментарный) — пища, вода, мухи, грязные
руки (холера, дизентерия, гепатит А);
83
 воздушно-капельный (коклюш, грипп, корь);
воздушно-пылевой (туберкулез, туляремия);
трансмиссивный — передача через кровососущих насекомых
(блохи, комары, москиты, вши) — чума, малярия, возвратный и сыпной
тифы;
контактный — прямой (рукопожатие, половой контакт, обработка
тушек животных) и косвенный (через предметы обихода);
вертикальный — от матери к плоду при внутриутробном развитии
(СПИД, сифилис).
В последнее время выделен так называемый артифициальный
механізм передачи инфекции (от лат. artifical — искусственный) —
созданный искусственно медициной, связанный с парентеральными
диагностическими и лечебными процедурами.
В борьбе с инфекционными заболеваниями первостепенное значение
имеют общие мероприятия, к которым относятся: санитарное
благоустройство населенных пунктов, охрана водоисточников,
санитарно-пищевой надзор, ранняя диагностика, быстрая изоляция и
госпитализация больных, обследование окружающих лиц на
бациллоносительство.
Большое значение имеет дезинфекция — уничтожение мик-
роорганизмов на объектах внешней среды с помощью химических
средств; дезинсекция — уничтожение насекомых — переносчиков
возбудителей инфекционных болезней; дератизация — уничтожение
грызунов — источников некоторых патогенных микробов.

КЛАССИФИКАЦИЯ
ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

Систематизация накопленных научных данных о природе

инфекционных болезней представлена в виде классификации, то есть
распределении их по отдельным группам, в пределах которых сходные
между собой болезни объединены каким-то общим для них признаком и
в то же время отличающим их от других инфекционных болезней.
В основу одной из классификаций положен этиологический
фактор, на основании которого различают инфекции:
бактериальные;
спирохетозные;
протозойные;
вирусные;
хламидийные;
инфекции, этиология которых неизвестна;
заболевания, вызываемые гельминтами.
Л. В. Громашевский открыл закономерную связь между спе-
цифической локализацией возбудителя в организме зараженного
84
 и механизмом его передачи от источника возбудителя инфекции
к восприимчивому организму. Согласно его классификации, все
наиболее часто встречающиеся инфекции человека разделены на четыре
группы:
1. Кишечные инфекции с фекально-оральным механизмом (передачи
возбудителя.
2. Инфекции дыхательных путей с капельным механизмом I
передачи.
3. Кровяные инфекции с трансмиссивным механизмом передачи.
4. Инфекции наружных покровов, при которых возбудитель; чаще
всего передается посредством контакта.

УЧЕНИЕ ОБ ИММУНИТЕТЕ

Под термином «иммунитет» (от лат. immunitas— освобождение,

избавление от чего-либо) понимают невосприимчивость организма к
действию инфекционных и неинфекционных факторов, обладающих
генетической чужеродностью. Иммунитет предоставляет собой
эволюционно сложившуюся сложную систему ответных реакций
организма, в основе которых заложен универсальный биологический
принцип «запрета реакции на свое». Именно поэтому иммунные реакции
формируются на факторы, обладающие генетической чужеродностью.
Наука, изучающая вопросы иммунитета, называется иммуно-
логией и рассматривает широкий спектр фундаментальных био-
логических явлений, в том числе:
механизмы защиты от возбудителей инфекционных заболеваний;
иммунологию опухолевого роста;
установление генетических связей среди представителей рас-
тительного и животного мира;
иммуногематологию, иммуногенетику, иммуногистохимию,
иммунодиагностику, иммунотерапию, иммунопрофилактику, им-
мунологию эмбриогенеза, иммунопатологию.
Защита организма от агрессивного воздействия генетически
чужеродных факторов достигается тремя основными механизмами,
составляющими самостоятельные виды иммунитета:
- неспецифическая резистентность;
- врожденный (видовой, или наследственный) иммунитет;
- приобретенный иммунитет.

85
 НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ И
ВИДОВОЙ ИММУНИТЕТ

Неспецифическая резистентность — защитный акт ор-

ганизма, обусловленный механическими, физико-химическими,
клеточными, гуморальными, а также физиологическими защитными
реакциями, направленными на сохранение постоянства внутренней среды
и восстановление нарушенных функций организма.
Неспецифическая резистентность — основной механизм защиты
организма от повреждающего действия агрессивных агентов внутренней
и внешней среды, в то время как врожденный и приобретенный
иммунитет — дополнительные факторы, компенсирующие
недостаточность факторов неспецифической резистентности по
отношению к определенным патогенам.
Отличительной особенностью неспецифической резистентности
является то, что она осуществляется без включения специфических
иммунологических механизмов и не сопровождается специальной
перестройкой иммунной системы.

Основные компоненты
неспецифической резистентности
Кожа — механический барьер для проникновения мик-
роорганизмов, продукты секреторной функции расположенных в ней
желез (потовых и сальных), обладающие бактерицидными свойствами —
уксусная и другие жирные кислоты, молочная кислота, некоторые
ферменты.
Слизистые оболочки — механический барьер, бактерицидное
действие секретов, лизоцим, кислая реакция, иммуноглобулин А,
интерферон.
Желудочно-кишечный тракт (пищеварительная система) — же-
лудочный сок, бактерицидная способность которого связана с соляной
кислотой, пристеночное пищеварение, муциновый слой, покрывающий
эпителиальные клетки, и их постоянное обновление в течение
относительно короткого срока, антагонистическое действие нормальной
микрофлоры, короткоцепочечные жирные кислоты, комплемент,
лизоцим, интерферон, лактоферин, лактопероксидаза, секрет энтероцитов
с ацидофильными гранулами.
Гуморальные факторы — бактерицидные компоненты крови
(лизоцим, интерферон, комплемент, нормальные антитела, опсонины,
ферменты, интерлейкины, простагландины, тромбоцито-активирующий
фактор, β-лизины, эритрин, С-реактивный белок).
Немаловажное значение в характеристике проявлений неспе-
цифической резистентности имеет физиологически предопределенная
клеточная, тканевая, органная и системная ареактивность,
86
 связанная с соответствующей устойчивостью к действию агрес-
сивных факторов микроорганизмов и других патогенов.
Врожденный (видовой, наследственный) иммунитет — особый
вид защиты организма, который сложился по селективному принципу в
процессе эволюции. Врожденный иммунитет передается по наследству и
имеет четкую видовую принадлежность. Он также основан на клеточной,
тканевой, органной ареактивности.
Так, например, известно множество заболеваний, которые
встречаются только у человека — сифилис, гонорея, эпидемический
;
гепатит, эпидемический менингит и др.
Ареактивность является основой неспецифической резистентности и
видового иммунитета и направлена на поддержание физиологического
гомеостаза в организме. Однако это не абсолютный показатель. При
определенных условиях неспецифическая резистентность может
проявляться реактивно, то есть определенными клиническими и
морфологическими изменениями.

Фагоцитоз
Основу реактивного проявления неспецифической резистентности
составляет воспаление, которое разыгрывается как в месте внедрения
патогена, так и в прилежащем лимфатическом узле.
Вовлечение в ответную реакцию лимфатического узла обеспечивает
органическую взаимосвязь между неспецифической резистентностью,
врожденным и приобретенным иммунитетом.
Лимфатические узлы сочетают в себе как барьерные эффекты
механической защиты от патогена и реактивного ответа на него
воспалением по механизмам неспецифической резистентности, так и
способность запуска сложных механизмов приобретенного иммунитета.
Неспецифически в лимфоузлах разыгрывается воспаление —
вырабатываются лейкотоксин, лейкопенический фактор, медиаторы
воспаления, в результате чего происходит активация лейкоцитов,
достигается их скопление, в зоне инфекта образуется грануляционный
вал из фагоцитарных элементов, препятствующих дальнейшему
распространению возбудителя.
Значение грануляционного вала физиологически не ограничивается
ролью механического барьера. Составляющие, вал клетки обладают
способностю к фагоцитозу — захвату, перевариванию, элиминированию
из организма микробов и других патогенов.
Клетки, участвующие в воспалении, выполняют различные функции.
Главными из них являются те, которые способны_к_пожиранию
патогена. Фагоциты (пожиратели) были открыты И. И. Мечниковым,
который сформулировал фагоцитарную теорию иммунитета, за что был
удостоен Нобелевской премии. Способность к фагоцито-
87
 зу у клеток различных органов человека сохранилась в процессе
эволюционного развития от одноклеточных организмов.
Фагоциты подразделяются на свободные и фиксированные.
Первые содержатся в крови и тканевых жидкостях, вторые фиксированы
в тканях и органах. По морфологическим характеристикам они делятся
на микрофаги и макрофаги. Микрофаги — это гранулоциты (базофилы,
нейтрофилы и эозинофилы). Макрофаги могут быть подвижными —
моноциты, полибласты, гистиоциты — и неподвижными — тканевые
макрофаги эндотелия кровеносных сосудов, лимфоидной ткани, тимуса,
селезенки, печени (звездчатые клетки Купфера). Все одноядерные
фагоциты вместе с их костно-мозговыми предшественниками
объединены в систему мононуклеарных фагоцитов (СМФ).
Эффект фагоцитоза, который может быть завершенным или
незавершенным, и предопределяет развитие воспаления.
Принципиальные стадии фагоцитоза
Приближение фагоцита к объекту поглощения. Достигается за счет
образования в очаге внедрения инфекта хемотаксических факторов.
Адсорбция микроорганизма на поверхности фагоцита.
Поглощение.
Образование фагосомы и слияние ее с лизосомой, вакуолью, в ко-
торой содержится более 80 ферментов с различной способностью
расщеплять липиды, углеводы, белки.
Внутриклеточная инактивация микроба.
Ферментативное переваривание и удаление оставшихся микробных
элементов.
В зависимости от достаточности ферментативной активности
фагоцитоз может быть завершенным или незавершенным. Для
большинства антропонозных инфекций фагоцитоз является неза-
вершенным, его конечным результатом является гибель фагоцита и
развитие воспаления. Фагоцитоз как фактор неспецифической
резистентности является той системой организма, которая ответственна за
разрушение и выведение патогена из организма. Однако он
осуществляется неизолированно от всех остальных факторов
неспецифической резистентности. Его ускоряют и усиливают соли
кальция, магния, электролиты, комплемент, антитела (опсонины,
бактериотропины, бактериолизины), лимфокины, гистамин, пирогенные
вещества.
Фагоцитоз угнетают защитно-адаптивные «стресс-факторы» (Г.
Селье):
резкая смена холода и тепла;
ультрафиолетовые лучи, радиация;
патогенные микроорганизмы и их токсины;
лейкоцидин;
88
 липополисахариды бактерий и их капсул;
муцины;
стероиды;
аминазин;
десенсибилизирующие вещества и противовоспалительные
препараты.
Кроме выполнения функций неспецифической резистентности,
фагоцитозу принадлежит абсолютная ответственность за развитие и
проявление многообразных эффектов приобретенного иммунитета.
Это связано с тем, что фагоцитоз (завершенный или незавершенный)
переводит попавший в организм патоген в иммуногенную форму, на
которую способны соответствующим образом реагировать системы
приобретенного иммунитета. Без фагоцитоза приобретенный
иммунитет не формируется и не проявляется.

ПРИОБРЕТЕННЫЙ ИММУНИТЕТ

Основу механизмов проявления приобретенного имму-

нитета определяет иммунная реактивность, которая сочетает в себе
действие следующих факторов: антитела, гиперчувствительность
немедленного типа, гиперчувствительность замедленного типа,
иммунологическая память, иммунологическая толерантность, иди-
отипы-антиидиотипы, фагоцитоз, комплемент.
Приобретенный иммунитет — специфическая невосприим-
чивость к чужеродным субстанциям (антигенам), приобретаемая
организмом в результате перенесенного заболевания или другого
взаимодействия с антигеном, с помощью иммунных препаратов.
Таким образом, в отличие от неспецифической резистентности и
видового иммунитета приобретенный иммунитет создается в процессе
жизни человека и представляет собой результат взаимодействия с
патогенными микроорганизмами. Приобретенный иммунитет всегда
высоко специфичен, то есть формируется строго на определенный вид
или штамм микроорганизмов. В основе его развития заложена
специфическая реактивность (иммунореактивность).
В зависимости от происхождения приобретенный иммунитет
подразделяется на естественный и искусственный, а по механизмам
приобретения — на активный и пассивный.
Естественный активный — вид приобретенного иммунитета,
формирующегося в результате инфицирования человека вирулентными
штаммами.
Искусственный активный — создается в результате иммунизации
человека бактерийными или вирусными антигенными препаратами
(вакцинами).
89
 Естественный пассивный — вертикальный, трансплацентарный путь
передачи иммунных антител от матери плоду.
Искусственный пассивный — введение в организм иммунных
сывороток, иммуноглобулинов.
Таким образом, активный приобретенный иммунитет определяется
специфической реакцией иммунной системы на введенный антиген, а
пассивный — введением в организм продуктов иммунной реакции.
Иммунная система — совокупность всех лимфоидных органов и
скоплений лимфоидных клеток в органах и тканях.
Существует два вида иммунного ответа. Один из них разделяется
антителами (гуморальный), а другой — клетками (клеточный). 0сновными
иммунокомпетентными клетками, ответственными как за клеточный, так
и за гуморальный иммунитет, являются лимфоциты.
Начальный этап развития иммунитета связан с миграцией,
пролиферацией и дифференциацией стволовых (исходных) клеток,
сосредоточенных у человека в костном мозге. Отсюда стволовые клетки,
подчиняясь гуморальный регуляции, поступают в первичные лимфоидные
органы, где они получают «инструктаж», определяющий их дальнейшую
дифференцировку и функцию в ответ, на встречу с антигеном. Из
первичного лимфоидного органа клетки расселяются в разные отделы
периферической лимфоидной ткани.
Первичным лимфоидным органом, контролирующим клеточно-
обусловленный иммунный ответ, является вилочковая железа (thymus).
Стволовые клетки получающие «инструктаж» в тимусе, называются Т-
лимфоцитами.
Другой первичный лимфоидный орган — бурса (сумка) Фабрициуса
(у птиц). У млекопитающих, в том числе и у человека,, фабрициева сумка
отсутствует. Предполагают, что эту функцию выполняют костный мозг,
миндалины, червеобразный отросток, групповые лимфатические
фолликулы (пейеровы бляшки), межэпителиальные лимфоциты и др.
Клетки, специализирующиеся в этом первичном лимфоидном органе,
называются В-лимфоцитами. Ими контролируется антительный ответ, то
есть выполняется функция гуморального иммунитета.
По иммунологической функции Т-клетки неоднородны. Некоторые
из них продуциоуют вещества, называемые медиаторами, или
лимфокинами, дающими эффект гиперчувствительности змедленного
типа. Существуют Т-лимфоциты-помощники (хелперы), стимулирующие
В-лимфоциты, Т-лимфоциты-эффекторы, способные разрушать
чужеродный антиген, Т-киллеры (убийцы), разрушающие клетки-мишени,
Т-супрессоры, подавляющие функции В-лимфоцитов, Т-лимфоциты,
обладающие иммунологической памятью.
90
 Антитела
Основная функция В-клеток — продукция антител, которые
являются иммуноглобулинами. Различают пять классов им-
муноглобулинов — IgA, IgG, IgM, IgD, IgE, которые представляют собой
сходные по строению белки плазмы крови, отличающиеся по
молекулярной массе, константе седиментации, содержанию углеводов,
электрофоретической подвижности, устойчивости к протеолизу,
биологическим свойствам (табл. 1).
Таблица 1
Основные физико-химические и биологические характеристики
иммуноглобулииов человека (по О. С. В1ег е1 а1., 1981)
Свойство Ig Ig Ig Ig IgE
M G A D
Обозначение:
Н-цепи μ γ ά δ ε
L-цепи χ χ χ χ χ
или λ или λ или λ или λ или λ
Молекулярна (χ2 Χ2 (χ2 χ2 χ2 ε 2
я формула μ)5 γ2 ά2) n δ2 χ2 ε 2
(χ2 Χ2 (χ2 χ2
μ)5 γ2 ά2) n δ2
Константа 19 7 7 7 8
седиментации (S)
Катаболизм, 14 3 12 - 2,5
% в день
Концентрация 0, 13 1, 0, 0,33
в сыворотке, мг/мл 9 ,1 6 12 х103
Агглютиниру 10 1 - - -
ющая активность 0
Фиксация + + - - -
комплемента
Транспорт - + - - -
через плаценту
Цитофильнос
ть: - + - - -
к макрофагам - + - - +
лимфоцитам + + - - -
К-клеткам - + + - -
Неитрофилам - + - - -
моноцитам - + - - +
тучным
клеткам
Взаимодейств - + - - -
ие с А-белком
стафилококка
Взаимодейств - + - - -
ие с ревма-тоидным
фактором

Современные представления о строении молекулы иммуно-глобулина

базируются на ряде классических работ Р. Р. Портера, Д. М. Эдельмана и
Дж. В. Флайшмана (1959-1962).
В настоящее время принята схема строения иммуноглобули-на,
согласно которой каждая молекула включает одну или несколько
структурных единиц (мономеров), состоящих из двух тяжелых (м.м.
ЗСГбОО-РУОбО) идвухдегких (м.м. 22 000) цепей, трехмерно
соединенных между собой дисульфидными мостиками.
91
 Легкие, или L-цепи (от англ. light — легкий) — идентичны и
являются-общими для всех классов иммуноглобулинрв, а тяжелые, или Н-
цепи (от англ. heavy — тяжелый) по своей антигенной, иммунологической
и химической специфичности у каждого класса иммуноглобулинов
разные. L-цепи по антигенным свойствам делят на два типа,
обозначаемых как χ (каппа)-тип и λ (лямбда)-тип; при этом в каждой
данной молекуле обе легкие цепи всегда принадлежат к одному и тому же
типу.
Антигенные типы Н-цепей обозначаются также греческими буквами,
соответствующими латинскому обозначению того или иного класса
иммуноглобулинов: γ (гамма)-цепи для IgG, ά(альфа)-цепи для IgА, μ
(мю)-цепи для IgМ, δ (дельта)-цепи для IgD, ε (ипсилон)-цепи для IgЕ.
Каждая цепь состоит из постоянного участка с конечной кар-
боксильной группой и вариабельного участка с аминной конечной
частью. При расщеплении иммуноглобулина протеолитическим
ферментом папаином выделяют:
Fаb-фрагменты (от англ. Frаgment antigen binding— фрагмент,
связывающий антиген), способные соединяться с антигенной де-
терминантой молекулы антигена;
Fс-фрагмент (от англ. Frаgment crstalline — кристаллический),
обуславливающий такие функции антител как связывание белка Сlq при
адсорбции комплемента, реакцию с макрофагами и транспорт через
клеточные мембраны.
Антигенсвязывающий центр молекулы иммуноглобулина ло-
кализован в аминном конце молекулы (конец Fаb -фрагмента) и образован
гипервариабельными сегментами участков Н- и L-цепей. Антительная
специфичность обусловлена как последовательностью аминокислот, так и
трехмерной конфигурацией молекулы.
Иммуноглобулицы содержатся в различных биологических
жидкостях человеческого организма. Их подразделяют на внешние
(женское молозиво и молоко, слюна, слизь, отделяемое пищеварительного
тракта и мочеполовых путей) и внутренние (сыворотка крови,
синовиальная жидкость, сперма, спинномозговая жидкость). Во внешних
секретах в наибольшей концентрации содержатся IgА, в димерной форме
(90 %), а во внутренних — IgG (90 %).
Биологические свойства иммуноглобулинов:
IgG — нейтрализуют антиген, опсонизируют и уничтожают его;
IgМ — присоединяют комплемент, блокируют и нейтрализуют
антиген;
IgЕ — (реагины), ответственны за феномен ГЗТ;
IgА — различают сывороточный и секреторный иммуногло-булины,
определяют местную иммунную реакцию;
IgD— возможно, участвуют в индукции иммунологической
толерантности.
92
 Антигены
Характер иммунного ответа зависит от вида антигена, кратности
контакта с ним, пути введения и т. д. Иммунный ответ может быть
первичным и вторичным.
Пусковым фактором всех иммунных процессов является ан-
ЦЪтиген. Антигены — это вещества, которые несут признаки генети-
ческой чужеродности и при введении в организм вызывают развитие
иммунологических реакций.
Свойства антигенов:
генетическая чужеродность;
антигенность — мера антигенного качества, определяемая
уровнем ответной иммунологической реакции;
иммуногенность — способность создавать иммунитет;
специфичность — иммунологические особенности, отличающие
антигены друг от друга;
коллоидное состояние (денатурированные белки теряют ан-
тигенные свойства), кристаллические вещества не обладают антигенными
свойствами;
растворимость в тканевых жидкостях;
крупномолекулярная структура.
От химического строения зависит вид иммунного ответа на
антиген. Идеальной характеристикой антигена являются белки или
крупномолекулярные комплексы липопротеидов. На такие антигены, как
правило, формируется гуморальный иммунитет. На неполные антигены
(гаптены) ответные реакции проявляются по механизмам клеточного
иммунитета.

Антигенное строение бактериальной клетки

Различают группо-, видо-, типоспецифические антигены
бактерий. По расположению и химической структуре выделяют
следующие антигены:
0-антигены (соматические) — липополисахарид-полипептид ные
комплексы, термостабильные, обладающие свойствами эндотоксина;
Н-антигены (жгутиковые) — белки, термостабильные, разру-
шаются при 70-80 "С;
К-антигены (капсульные) полисахаридной или полипептидной
природы (пневмококки, клебсиеллы);
Vi1-антиген — полимер N-ацетилгалактозаминоуроновой кислоты,
обладает выраженными иммунизирующими свойствами, встречается у
вирулентных микроорганизмов (брюшной тиф);
протективные антигены — высокоиммуногенные вещества
белковой природы, термолабильны (сибирская язва, чума, бруцеллез,
туляремия, коклюш);
93
 На каждый из этих антигенов может формироваться иммунный ответ,
проявляющийся по гуморальному или клеточному типу в зависимости от
структуры и биологических свойств антигена.

ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ
ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА

Материальную основу гуморального иммунитета составляют

иммунные антитела — иммуноглобулины, отличающиеся от нормальных
глобулинов сыворотки крови тем, что их видоизмененный синтез
происходит под влиянием антигена, который накладывает на них
отпечаток своего строения. В результате у иммуноглобулинов возникает
определенное сходство в строении полярных (периферических) групп с
детерминантными группами антигена. Детерминантные группы антигена
состоят из аминокислот, полисахаридов и липидов, ответственных за
антигенную специфичность. .
Центральная часть антигена придает молекуле антигенность (это
шлеппер, буксир, проводник, трактор-антиген). Под влиянием
антигенных детерминант синтез иммуноглобулина изменяется так, что
концевые участки его полипептидных цепей приобретают
комплементарное антигену строение
Антиген и антитело имеют противоположные заряды, это обес-
печивает их взаимодействие (рис. 10).
Местом образования антител является РЭС и особенно лимфоидная
ткань, то есть та же ткань, в которой синтезируются нормальные γ-
глобулины сыворотки — костный мозг, лимфатические узлы, селезенка,
печень, пейеровы бляшки, миндалины и т. д. Иммуноглобулины
продуцируются плазматическими клетками, которые в ответ на антиген
проходят следующую морфологическую дифференциацию:
ПЕРЕХОДНЫЕ РЕТИКУЛЯРНЫЕ КЛЕТКИ

БЛАСТЫ
ПЛАЗМОБЛАСТЫ
НЕЗРЕЛЫЕ ПЛАЗМАТИЧЕСКИЕ КЛЕТКИ
ЗРЕЛЫЕ ПЛАЗМАТИЧЕСКИЕ КЛЕТКИ
(Богаты РНК — показатель высокой активности клетки.)
Согласно клонально-селекционной теории Егnе, в организме на
каждый вид антигена существует определенный клон плазматических
клеток, именно эти клетки в ответ на антиген начинают активно
размножаться.
94
 Рис. 10. Схема взаимодействия молекул антигена
и антитела:
/ — молекула Аг; 2 — Fab-фрагмент молекулы Ат
(им-;муноглобулина), способен связываться с антигенной
де-терминантой молекулы антигена; 3 — Fc-фрагмент мо-
лекулы Ат (иммуноглобулина), обуславливает такие
функции антител как связывание комплемента, соединение с
макрофагами и транспорт через клеточные мем-; браны;
4 — комплемент, то есть система иммунологи-
чески активных белков сыворотки крови; 5 — макрофаг
 После введения антигена в организм антитела появляются через
какой-то период времени, который необходим для его иммунологического
распознавания и включения сложных клеточно-функциональных
механизмов иммунологического реагирования. Этот период называется
индуктивной фазой:
антиген — макрофаги — Т-лимфоциты — макрофаги — В-лимфоциты
— антитела.
За ней следует фаза продукции и выделения антител (одни-двое
суток после введения антигена). Молекулы иммуноглобулинов
устойчивы к кратковременному действию кислот и щелочей,
температуре до 60 °С, не инактивируются трипсином, имеют заряд,
противоположный заряду антигена.
Установлено, что одна частица Аг может адсорбировать на своей
поверхности много антител. При этом формируется комплекс «антиген
— антитело». Взаимодействие между Аг и Ат происходит по типу
коллоидных и химических реакций и характеризуется специфичностью.
Молекулы Аг и Ат соединяются своими долярными группами.
Такие комплексы (Аг + Ат) адсорбируют комплемент и через
рецептор С-3 присоединяются к макрофагам. Кроме, С-3, у макрофага,
имеются также рецепторы НLА, к гистамину и Fc. Присоединенные к
макрофагу комплексы фагоцитируются.
Результат биологического взаимодействия Аг и Ат:
склеивание (для корпускулярных антигенов);
осаждение (преципитация для растворимых антигенов);
растворение (лизис).

Реакции взаимодействия антигена и антитела происходят не только в

организме, но и in vitro. Они характеризуются двумя фазами:
специфическая, заключается в соединении Аг + Ат (визуально-невидимо);
неспецифическая, видимая — коллоидная реакция.
В присутствии комплемента наблюдается цитолиз или
бактериолизис.

95
 ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ
КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА

Если материальную основу гуморального иммунитета

составляют антитела, то клеточного — иммунные макрофаги, лимфоциты
с цитотоксической активностью. Гуморальный иммунитет всегда
стерильный, клеточный — как стерильный, так и нестерильный.
Гуморальный иммунитет вырабатывается против полных антигенов,
клеточный — против неполных антигенов;
Основной структурной единицей клеточного типа иммунного
ответа, обеспечивающей его результат, является Т-лимфоцит.
Участие Т-лимфоцитов в клеточном иммунном ответе состоит из
четырех этапов:
связывание антигена;
пролиферация лимфоцитов;
продукция медиаторов;
непосредственное цитотоксическое действие.

ПРОТИВОВИРУСНЫЙ ИММУНИТЕТ

Обязательный внутриклеточный паразитизм во многом

определяет специфичность механизмов противовирусной защиты,
включающей гуморальные и клеточные факторы.

Гуморальные факторы
Включение иммунных механизмов защиты начинается сразу
после проникновения антигена в организм. Распознавание большинства
антигенов в индуктивную фазу развития гуморального иммунитета
осуществляется как Т-, так и В-лимфоцитами. В гуморальном иммунном
ответе на вирусный возбудитель в основном участвуют
иммуноглобулины трех классов: М, G, А. Первичный иммунный ответ
начинается с синтеза низкоаффинных иммуноглобулинов М с
последующим переключением на синтез IgG и IgA.
Вирусы на стадии внеклеточного распространения
инактивируются вируснейтрализующими антителами.
Механизмы этого процесса различны:
реакция вирусной частицы с иммуноглобулином (комплекс Аг —
Ат) может препятствовать присоединению вируса к клеточным
рецепторам;
комплекс Аг — Ат подвергается усиленному фагоцитозу.
Для вирусов, распространяющихся гематогенно (возбудителей
полиомиелита, кори, ветряной оспы), характерна элиминация из
организма механизмами гуморального иммунитета, связанными с
выработкой сывороточных иммуноглобулинов. При
96
 этом сывороточные антитела, защищая организм от системной
инфекции, не влияют на выживаемость вируса в месте его внедрения.
Вирусы, размножающиеся непосредственно в слизистых обо-
лочках (например, аденовирусы, вирус гриппа), как правило, вызывают
заболевания, отличающиеся коротким инкубационным периодом.
Важное значение в этих случаях, из-за запаздывания иммунного ответа,
имеет такой неспецифический фактор защиты как интерферон. Кроме
того, при первичной инфекции в первую очередь включаются механизмы
местного иммунитета, обусловленного активностью секреторного
иммуноглобулина А.
Существуют вирусы, которые, несмотря на иммунный ответ,
пожизненно персистируют в организме хозяина (вирусы герпеса,
гепатита, цитомегаловирус); они могут интегрироваться в геном хозяина
без клинических признаков. Возможно, что пожизненный иммунитет
основан на постоянном высвобождении в кровоток из клеток малых
количеств вирусного антигена и формировании инфекционных
иммунных комплексов.

Клеточные факторы
Большую роль в противовирусной защите играет клеточный
иммунитет, связанный с сенсибилизацией соответствующих клонов Т-
лимфоцитов и их цитотоксичностью (Т-эффекторов); активностью
макрофагальной системы защиты и так называемых «нормальных», или
естественных киллеров (антителонезависимый лизис зараженных клеток-
мишеней).
Вирусы, распространяющиеся по индуцированным ими кле-
точным мостикам, могут быть уничтожены только при помощи реакций
клеточного иммунитета.
Развитие клеточных форм иммунного реагирования, так же как и
гуморальный иммунитет, требует клеточной кооперации.
Начальные события в клеточном взаимодействии включают два
этапа:
прямой физический контакт между макрофагом и Т-клетка-ми
или непосредственное действие антигена на клетку;
синтез и секреция биологически активных соединений, действие
которых на клетку-мишень обеспечивает формирование эффекторных
клеток иммунных реакций.
Сенсибилизированные Т-лимфоциты занимают центральное
место в клеточном иммунитете. Благодаря существованию различных
субпопуляций этих клеток механизмы клеточного иммунитета
многообразны.
Клеточный иммунитет проявляется в двух формах: гиперчув-
ствительность замедленного типа (ГЗТ); образование цитотоксических Т-
лимфоцитов.
7 «Микробиология» 97
 Сенсибилизрованные Т-лимфоциты и активированные макрофаги
разрушают инфицированные клетки, несущие на поверхности вирусные
антигены. Активированные макрофаги могут воздействовать
непосредственно и на вирионы. Активация макрофагов происходит под
действием лимфокинов. Лимфокины образуются сенсибилизированными
Т-лимфоцитами в процессе реакции с Аг.
Лимфокины являются медиаторами клеточного иммунитета. Это
растворимые факторы, выделяемые сенсибилизированными Т-
лимфоцитами. Различают:
лимфокины-ингибиторы (лимфотоксины, иммунные интер-фероны);
лимфокины воспаления (участвуют в ГЗТ);
лимфокины-стимуляторы.
Иммунные интерфероны — видоспецифические белки с действием
на РНК- и ДНК-содержащие вирусы. Полагают, что интерфероны:
воздействуют на синтез особого клеточного белка, ингибиру-ющего
трансляцию; именно эти белки и подавляют репликацию вирусов. Кроме
того, интерфероны:
действуют на т-РНК зараженной вирусом клетки;
тормозят клеточное деление;
повышают активность нормальных киллеров;
усиливают фагоцитоз.
Механизм цитолитического действия лимфоцитов состоит из
следующих этапов:
специфическая адгезия (прикрепление) клеток-киллеров на клетках-
мишенях (происходит в течение первых минут, требует присутствия
ионов Мg++);
повреждение клетки-мишени (не менее 10 минут, наличие ионов Са +
+
). Никаких токсических субстанций, выделяемых лимфоцитами, не
обнаружено. Повреждение, вероятно, связано с возрастанием
электролитной проницаемости мембраны клетки-мишени;
лизис клетки-мишени, уже не зависящий от лимфоцита-киллера,
обусловлен осмотическим набуханием из-за повреждения мембраны, при
этом происходит потеря электролитов.
Механизмы противовирусного клеточного иммунитета могут
утратить свою эффективность в результате маскировки вирусных
антигенов антителами. Вирусные антигены могут заблокировать
рецепторы лимфоцитов и уменьшить тем самым их цитотоксичность.
 Иммунопатологические процессы
при вирусных инфекциях
Кроме вышеупомянутых иммунологических механизмов,
особенности иммунологических реакций, возникающих при вирусных
заболеваниях, определяют следующие иммунопатологические процессы:
аллергические реакции;
иммунокомплексная патология;
разрушение зараженных вирусом клеток;
развитие аутоиммунных реакций;
иммунодефицитные состояния.
К аллергическим реакциям на вирусные антигены относится
реакция гиперчувствительности замедленного типа. При вирусных
инфекциях ГЗТ является формой проявления клеточного иммунитета
(см. раздел «Аллергия»).
К иммунокомплексной патологии относят болезни иммунных
комплексов и сохранение инфекционности возбудителя.
Образование иммунных комплексов (Аг—Ат) при взаимодействии
вирусов с антителами является одним из важных механизмов
противовирусного иммунитета. Однако иммунные комплексы наряду с
защитным могут оказывать и повреждающий эффект. Иммунные
комплексы образуются на поверхности зараженных клеток и в жидкой
среде. Они могут:
циркулировать в кровотоке, межтканевой жидкости;
откладываться в пораженных тканях, обуславливая воспаление;
вторично связываться с различными молекулами — компонентами
комплемента, антителами.
Мелкие иммунные комплексы оседают на стенках сосудов или
мембране почечных клубочков. Укрупнение иммунных комплексов, их
сорбция на стенках сосудов и тканях вызывает повреждение органов и
тканей и обуславливает «болезни иммунных комплексов»
(гломерулонефрит).
Для понимания смысла сохранения инфекционности вируса в
иммунном комплексе и макрофагах надо вспомнить, что нейтрализация
инфекционной активности вирусов антителами осуществляется двумя
путями:
необратимой конформацией структуры вирусных белков (в ос-
новном гликопротеидов) с участием комплемента;
блокадой вирусных прикрепительных белков к поверхности клетки-
мишени.
Во втором случае возможен инфекционный процесс, если не все
прикрепительные белки вируса заблокированы антителами; вирусы,
соединенные с антителами, прикрепляются к клетке и инфицируют ее.
7* 99
 При недостаточных концентрациях антивирусных антител
возникает феномен парадоксального усиления репродукции вирусов,
поскольку вирусы, окруженные молекулами иммуноглобу-линов, легко
проникают в клетку, фиксируясь на ее поверхности, имеющей рецепторы
к Fc-фрагменту иммуноглобулина. Особенно ярко этот феномен
проявляется при заражении вирусами макрофагов: вирусные частицы,
связанные с антителами, поглощаются макрофагами и размножаются в
них, приводя к явлению незавершенного фагоцитоза (например, при
вирусной цитоме-галии).
Сохранение инфекционной активности вируса в составе им-
мунных комплексов является одной из причин возникновения
хронических форм вирусных инфекций.
Еще одним иммунопатологическим явлением, регистрируемым
при вирусных инфекциях, является разрушение зараженных вирусом
клеток в результате их цитолиза. Иммунная деструкция зараженных
клеток происходит под:
действием лимфотоксинов, которые синтезируются лимфо-
цитами (неспецифическое ферментативное действие вблизи сек-
ретирующих клеток);
цитотоксическим действием Т-лимфоцитов (естественных и
вирусспецифических киллеров);
цитотоксическим действием макрофагов.
Развитие аутоиммунных реакций при вирусных инфекциях
может происходить в результате:
модификации собственных Аг организма;
перекрестных реакций между Аг хозяина и вирионом;
интеграции вирусной ДНК в геном хозяина.
Временные иммунодефициты часто наблюдаются при вирусных
инфекциях в связи с процессами, о которых говорилось ранее. Но иногда
направленное поражение иммунбкомпетентных клеток наносит
существенный ущерб иммунореактивнос-ти. Крайним примером может
быть ВИЧ-инфекция, приводящая к СПИДу.
Существует несколько способов «ускользания» вирусов из-под
иммунологического контроля:
подавление фагоцитоза;
угнетение Т- и В-систем (угнетение активности Т-лимфоцитов
— вирусы гриппа, кори, полиомиелита, герпеса, СПИДа; деструкция Т-
хелперов — вирус СПИДа; увеличение Т-супрес-соров — вирусы
герпеса, клещевого энцефалита);
особая локализация возбудителя, защищающая его от действия
иммунокомпетентных клеток:
распространение вирусов из клетки в клетку без выхода во
внеклеточное пространство (например, вирусы герпеса — по ци-
топлазматическим мостикам);
100
 распространение вирусов в дочерние клетки при клеточном
делении;
многие вирусы вызывают слияние соседних клеток и распрос-
траняются путем образования симпласта (синтиция).

ТРАНСПЛАНТАЦИОННЫЙ ИММУНИТЕТ

Методы современной хирургии принципиально пригодны

для пересадки любых органов. Еще в начале XX века была проведена
пересадка головы от одной собаки другой, которая сохраняла
жизнеспособность в течение трех недель.
В настоящее время трансплантология получила развитие как одно из
наиболее перспективных направлений хирургии. Это стало возможным
благодаря успехам в коррекции трансплантационного иммунитета. Еще в
1944 году П. Медовар установил, что повторная пересадка трансплантата
кожи от того же донора приводит к ускоренному его отторжению. В
основе этого лежат феномены трансплантационного иммунитета.
Трансплантационный иммунитет — это реактивность имму-
нокомпетентных клеток против чужеродных антигенов, находящихся на
поверхностных мембранах клеток трансплантата, опухолевых клеток, а
также против нормальных собственных клеток, адсорбировавших
вирусные и бактериальные антигены.
Назначение трансплантационного иммунитета — строгий контроль
«своих» антигенов, элиминация попавших в организм генетически
чужеродных антигенов, а также собственных клеток, синтезирующих
чужеродные вещества или адсорбировавших чужеродные антигены.
При трансплантации организм реципиента распознает чужеродные
структуры и осуществляет против них иммунные реакции, ведущие к
отторжению. Это достигается за счет иммунного распознавания
трансплантационных антигенов или антигенов гис-тосовместимости
(НLА).
Трансплантационные антигены имеются во всех ядросодер-жащих-
клетках. Наибольшее их количество в лимфоидной ткани, а затем по
убывающей — в печени, легких, кишечнике, почках, сердце, желудке,
аорте, мозге. Отсутствуют антигены НLА в жировой ткани и на
эритроцитах. Из клеточных органелл в наибольшем количестве
трансплантационные антигены содержатся в цитоплазматических
мембранах.
Экспериментом доказано, что при условии идентичности донора и
реципиента в антигенном отношении (инбредная линия),
пересаживаемые между ними трансплантаты, являющиеся синген-
ными, не отторгаются.
Если донор и реципиент относятся к разным генетическим линиям,
то аллогенные трансплантаты отторгаются. Аллогенная
101
 ткань различается по одному или нескольким антигенам, а иммунная
система способна различить продукты единственной хромосомы.
Более выраженные различия по антигенам НLА и отторжения
наблюдаются при ксеногенных пересадках между различными видами
животных.
Если донор и реципиент антигенно совместимы (у донора нет
антигенов, отсутствующих у реципиента), трансплантат приживляется. В
присутствии таковых возникает иммунная реакция отторжения
трансплантата (РХПТ) — реакция «хозяин против трансплантата».

Механизмы отторжения трансплантата

При адлогенной и тем более ксеногенной трансплантации
развивается иммунологический конфликт. Его интенсивность зависит от
степени различий антигенов Н1А.
Отмирание и отторжение трансплантата зависят от развития
сосудистых анастомозов между трансплантатом и тканью реципиента —
чем интенсивнее васкуляризируется трансплантат, тем быстрее он
отторгается. Это связано с миграцией лимфоцитов, макрофагов и
плазмоцитов из новообразованных сосудистых анастомозов. Чужеродные
антигены трансплантата вызывают сенсибилизацию лимфоцитов, что
ведет к их миграции в трансплантат и выделению медиаторов.
Распознавание антигенов НLА трансплантата происходит в ре-
гионарных лимфатических узлах, в результате чего формируется
соответствующий клон иммунокомпетентных клеток.
Роль клеточных и гуморальных факторов в РХПТ в значительной
мере определяется природой трансплантата. В случае кожного
трансплантата отторжение обуславливается в основном клеточными
факторами без участия антител. При аллотрансплантации почек эффект
отторжения связан с факторами как клеточного, так и гуморального
иммунитета.

Клеточные факторы
Основное значение принадлежит Т-киллерам. Это под-
тверждается тем, что при механическом удалении лимфоцитов из
грудного протока, воздействии иммунодепрессантов и излучения,
аллотрансплантаты приживляются. С помощью Т-лимфоцитов возможен
адаптивный перенос трансплантационного иммунитета (трансфер-
реакция).
Если у реципиента после пересадки трансплантата взять лим-
фоциты из регионарного лимфатического узла и ввести интакт-ному
животному, то последующая трансплантация будет ускоряться
102
 отторжением. Она проявляется туберкулиновым типом ГЗТ. Суть
реакции такова: лимфоциты, сенсибилизированные антигеном донора,
после васкуляризации мигрируют в трансплантат и оказывают на его
клетки цитотоксическое действие. В результате воздействия Т-киллеров
и лимфоцитов нарушается проницаемость цитомембран клеток-мишеней,
что приводит к их повреждению, затем к разрушению присоединяются
лимфотоксин,, макрофаги.
Взаимодействие сенсибилизированных лимфоцитов с клетка.ми-
мишенями состоит из двух фаз:
распознавание детерминант антигена и прикрепление лим-
фоцитов к клеткам-мишеням с образованием агрегатов (афферентное
звено);
разрушение чужеродных клеток за счет лимфотоксинов (эф-
ферентное звено).

Гуморальные факторы
Экспериментом доказана возможность переноса тран-
сплантационного иммунитета с использованием иммунной сыворотки.
Установлено также, что обработка аллотрансплантатов специфической
сывороткой ускоряет их разрушение лимфоцитами и усиливает
проявление адоптивного иммунитета.
При аллотрансплантации часто образуются гемагглютинины,
гемолизины, цитотоксины и антитромбины. Антитела к антигенам
аллотрансплантатов обнаруживаются в низких титрах, что связано с их
адсорбцией на трансплантате.
В сверхостром отторжении трансплантата, кроме антител, участвует
комплемент. В эксперименте показано, что, например, при разрушении
комплемента ядом кобры отторжение трансплантата не происходит. Роль
комплемента в трансплантационном иммунитете:
хемотаксическое привлечение нейтрофилов за счет активации С3,
С5, С7 при образовании комплексов Аг—Ат;
С3, С6 комплемента вызывает склеивание тромбоцитов, тромбы
ведут к повреждению трансплантата;
активация комплемента образовавшимися комплексами Аг—Ат
ведет к лизису эндотелия и свертыванию крови в трансплантате под
влиянием субэндотелия, обладающего способностью к
тромбообразованию.
Таким образом, в патогенезе сверхострого отторжения
трансплантатов решающее значение принадлежит антителам и
комплементу.
Антитела также усиливают деструкцию сенсибилизированными Т-
лимфоцитами клеток-мишеней, но могут и способствовать приживлению
трансплантата. Это доказано на моделях экспериментальных опухолей и
получило название феномен усиления. По-
103
 лагают, что данный феномен достигается адсорбцией антител на
соответствующих антигенах трансплантата, что препятствует действию
сенсибилизированных лимфоцитов.

Реакция «трансплантат против хозяина»

Еще в 1916 году Дж. Мэрфи установил, что при нанесении на
хорионаллантоисную мембрану куриного эмбриона клеток костного
мозга или селезенки взрослых кур появляются скопления лейкоцитов, и у
эмбрионов развивается спленомегалия, то есть возникает
трансплантационная болезнь, Получившая Название «болезнь рант» (от
англ. гип1 — малорослость).
В эксперименте на мышах установлены основные признаки этой
болезни: отставание в росте и приросте массы тела, стойкие поносы,
дерматиты, спленомегалия, в лимфоидных фолликулах исчезают
лимфоциты, наступает атрофия и фиброз лимфоидной ткани, развивается
иммунная гемолитическая анемия, возникают очаги некроза в печени,
нарушается кроветворение в селезенке, отмечается гиперплазия костного
мозга, истончается и отделяется от дермы эпидермис, возникает кровяной
хймеризм — как результат наличия в организме донорских клеток с
отличным генотипом.
Болезнь рант воспроизводится при трансплантации кроветворной
и лимфоидной тканей, клетки которых способны реагировать на
антигены реципиента.
РТПХ осуществляют аллогенные иммунокомпетентные клетки
при двух условиях:
реципиент не реагирует на клетки донора с несоответствием
НLА;
при наличии в организме реципиента антигенов, отсутствующих
у трансплантата.
Наиболее активны в РТПХ клетки лимфатических узлов:
лимфатический узел — селезенка — кровь — тимус — костный
мозг. .
РТПХ вызывают Т-лимфоциты, при их блокаде РТПХ отме-
няется. Сущность РТПХ составляет взаимодействие Т-клеток донора и
реципиента. Т-клетки донора выступают как клетки-эффекторы, а Т-
клетки реципиента — как клетки-мишени. Клетками-эффекторами
являются Т-киллеры с цитотоксическими свойствами. Объектом их
действия могут быть также стволовые клетки реципиента.
В результате взаимной антигенной стимуляции при РТПХ
лимфоциты трансформируются в бласты, пролиферируют и разрушаются
Т-киллерами как клетки-мишени.
Для патогенеза РТПХ характерны фазовые изменения в лим-
фоидной ткани:
104
 интенсивная пролиферация клеточных элементов в лимфоидной ткани
и тканях РЭС, что приводит к значительному увеличению массы
лимфатических узлов, селезенки и печени. В лимфатических узлах
пролиферируют в основном донорские клетки, а в селезенке — клетки
реципиента;
из-за увеличения общего количества клеток в селезенке, пре-
вращения их в большие бласты и отека органа развивается спле-
номегалия;
в позднюю фазу наблюдается постепенное снижение проли-
феративной активности клеток, что связано с истощением реагирующих
донорских клеток и разрушением клеток реципиента. При этом
происходит атрофия лимфоидной ткани реципиента, угнетается
иммунологическая реактивность, резко снижается сопро-
тивляемость к микробам, в том числе к эндогенной микрофлоре,
возникают тяжелые аутоиммунные процессы, которые зачастую
приводят к смерти.
Длительность РТПХ — от нескольких суток до нескольких месяцев.
Смерть может наступить в острой или хронической фазе.
Выздоровление возможно в случае:
возникновения толерантности;
старения трансплантированных клеток;
аллергической гибели трансплантированных клеток в связи с
избытком антигена;
образования блокирующих антител к трансплантату;
индукции ареактивности реципиента;
реакции клеток-хозяина против клеток-трансплантата;
воздействия растворимых факторов, подавляющих РТПХ.
РТПХ у человека наиболее часто развивается при массивных
переливаниях крови. Проявляется через 10—30 дней и при смертности
20 % (при пересадке костного мозга), характеризуется дерматитом,
желтушной формой гепатита, диареей, развитием тяжелых
иммунодефицитов, атрофией тимуса, некротическими очагами
в коже и кишечнике.
Иногда при РТПХ отмечается повышение иммунного ответа
на некоторые антигены. Это связано с неспецифичеекой актива-
цией В-клеток хозяина, что приводит к развитию аутоиммунных
реакции и аутоантител.
Агрессия иммунокомпетентных клеток трансплантата может
привести к иммунодефициту.
Преодоление трансплантационного иммунитета
При пересадке органов и тканей трансплантационный
иммунитет преодолевают:
селекцией донора;
105
подавлением иммунных реакций реципиента. Селекция донора
направлена на подбор трансплантата, наиболее совместимого с
реципиентом по антигенному набору. Основным методом селекции
донора является типирование антигенов системы НLА, которая имеет
четыре блока генов (А, В, С, О). Отсутствие чужеродных антигенов или
наличие одного-двух является положительным прогнозом на
трансплантацию.
Для подбора донора используют реакцию бласттрансформа-ции в
смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ) и учитывают эффект
лимфотоксичности.
До введения в практику СКЛ для подбора пар донор — реципиент
использовалась проба in vivo на золотистом хомячке, которого облучали
и которому внутрикожно вводили смесь лейкоцитов донора и
реципиента. Степень развития воспаления характеризует
несовместимость трансплантата и реципиента.
Типирование тканевых антигенов производят с использованием
набора антилейкоцитарных сывороток, содержащих до 500 компонентов.
Такие сыворотки получают от многократно рожавших женщин,
иммунизированных доноров или обезьян.
Поскольку допускаются пересадки и при несовместимости по
одному-двум антигенам НLА, это несоответствие коррегируется
воздействием на иммунную систему реципиента.
Угнетение иммунных реакций достигается воздействием на
иммунную систему организма физическими, химическими и биоло-
гическими способами.
Ионизирующая радиация — уже в малых дозах наступает дес-
трукция лимфоидной ткани и ингибиция синтеза. Проявляется в первые
часы и затем восстанавливается. Иммунный ответ на трансплантат
снижен до 50 дней. Передозировка ведет к необратимым изменениям
иммунной системы реципиента и гибели от вторичных инфекций. В
связи с этим в клинике трансплантации общее облучение не
производится, а применяют местное облучение участка пересадки. Кроме
этого, облучают трансплантат — костный мозг для разрушения
иммунокомпетентных клеток.
Иммунодепрессанты — вещества, ингибирующие синтез белка,
имеющие клеточное деление и клеточную дифференцировку. Основной
их недостаток — общетоксическое действие на организм. К ним
относятся:
кортикостероиды;
антиметаболиты — меркаптопурин, азатиоприн, дезоксиури-дин;
антагонисты фолиевой кислоты;
цитотоксические вещества — актиномицин С и О, циклофосфамид.
Требуемый эффект достигается только при условии их применения
до трансплантации или одновременно с ней. Однако следует
106

учитывать побочные действия иммунодепрессантов на организм:

тотальная иммуносупрессия за счет подавления Т- и В-системы
иммунитета, ослабление резистентности к инфекции, индукция сахарного
диабета, воспалительных заболеваний легких, мочеполовой системы,
рост раковых заболеваний.
Одновременно иммунодепрессанты, например азатиоприн,
проявляют тератогенное действие, неспецифически подавляют деление и
дифференцировку не только лимфоидных, но и других клеток.
Кортикостероиды (кортизол, кортикостерон и др.) — регулируют
физиологические реакции иммунитета, влияя на дифференцировку Т-
лимфоцитов, их миграцию и участие в межклеточных кооперациях,
уменьшают выход макрофагов из костного мозга и их бактерицидную
активность, оказывают противовоспалительное действие, снижают
аллергию замедленного типа.
Аитилимфоцитарная сыворотка (АЛС) —подавляет
трансплантационный иммунитет. Является гетерологической сывороткой,
получаемой от животных, иммунизированных антигенами тимуса,
селезенки, лимфатических узлов, содержит агглютинины и лимфо-
токсины. АЛС подавляет реакцию клеточного иммунитета, тормозит ГЗТ,
замедляет отторжение трансплантата. При повторном применении
вызывает аллергическое действие и активацию неоплазм.
Циклоспорин А продуцируется грибом триходерма, обладает
выраженной иммунодепрессантной активностью, обеспечивает
приживление аллогенных и ксеногенных трансплантатов. Основное
действие на Т-хелперы.
Иммунотоксины — антитела против иммунокомпетентных
клеток, конъюгированные с А- и В-цепями рицина.
Применяют также элюаты дифтерийного, псевдомонадного
токсинов в комплексе с соответствующими антителами.

Трансплантация в клинике
Трансплантация в клинике началась с пересадки почек.
Сейчас этот метод на «клиническом конвейере». Сделаны десятки тысяч
успешных операций. В центре, трансплантации подбирают донора,
максимально соответствующего реципиенту по антигенам НLА.
Реципиент на срок подбора донора подключается к искусственной почке.
Для Украины, в связи с Чернобыльской катастрофой, особое
значение имеет пересадка костного мозга. Такие операции производят
при лейкемиях, апластических анемиях, врожденных комбинированных
иммунодефицитах.
При соблюдении НLА-совместимости донора и реципиента
больные живут еще до пяти лет. Перед трансплантацией больные
получают большие дозы облучения.
107
 Из непарных органов чаще всего трансплантируют сердце. Первую
пересадку произвел в 1978 году Кристиан Бернард. Трудности пересадки
заключаются в том, что донор должен иметь здоровое сердце, которое
получают от лиц, погибших в катастрофах. Известны случаи, когда
больные по нескольку месяцев ожидают в условиях искусственного
сердца. Лица с пересаженным сердцем живут до девяти лет.
Имеются сообщения о пересадке печени, легких и поджелудочной
железы. Большинство таких больных погибают в течение нескольких
месяцев после пересадки, хотя описан случай, когда больной с
пересаженной печенью прожил семь лет,

ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ИММУНИТЕТ

Онкологическим заболеваниям принадлежит ведущее место

в общей клинической патологии как по распространенности,
многофакторности происхождения, злокачественности течения, так и
проблематичности эффективного лечения.
Характерными особенностями опухолей являются нерегули-
руемое размножение клеток, пониженная цитологическая и антигенная
дифференциация, способность инвазировать окружающие ткани с
формированием метастазов, вызывать их деструкцию.
В основе возникновения опухолей заложен выход отдельных
клеток (уницентрическая теория) из-под иммунологического надзора с
реверсией свойств одноклеточного организма.
Наиболее часто опухоли возникают в раннем детском возрасте,
когда иммунная система не сформировалась, и в пожилом, когда она
существенно ослаблена. Возникновению опухолей способствуют
первичные и вторичные иммунодефициты.
Несмотря на различные теории происхождения опухолей,
бесспорным является мнение о том, что в основе их возникновения
лежат соматические мутации клеток под влиянием экзогенных и
эндогенных канцерогенов (мутагенов), обладающих им-
мунодепрессивным действием.
Первостепенное значение иммунной системы в противоопу-
холевой защите подтверждается следующими фактами:
к раковой ткани формируются антитела и активируется клеточный
иммунитет;
подавление иммунологической реактивности у экспериментальных
животных увеличивает частоту возникновения опухолей и ускоряет их
рост;
применение иммунодепрессантов по поводу аутоиммунных заболеваний
повышает риск возникновения опухолей.

108
 Опухолевые антигены
Опухолевые клетки являются мутантами физиологически
полноценных клеточных структур, и это во многом затрудняет
определение их антигенной специфичности. Сыворотка беременных
реагирует с экстрактами из тканей раковых опухолей, что указывает на
антигенное сходство эмбриональных и раковых тканей. Являясь
антигенно чужеродной для иммунной системы организма, опухолевая
ткань тем не менее содержит антигены, представленные обычными
структурами клеточных мембран, и гетерогенные антигены других
органов и тканей данного организма. Последнее и определяет
антигенную юпухо-леспецифичность, возникающую в результате
соматических мутаций. .
В зависимости от природы мутагенного фактора все опухолевые
антигены подразделяются на четыре группы:
вирусиндуцированные (теория Зильбера);
индуцированные эндо- и экзогенными химическими канцерогенами
(теория Вирхова);
раковоэмбриональные (теория Конгейма);
гетероорганные —«срои» для организма, но «чужие» для данной
ткани. .
Опухолеродное действие каждого из этих факторов имеет кли-
нико-экспериментальное подтверждение. Среди факторов первой
группы онкогенность подтверждена более чем у 200 видов вирусов как
ДНК-содержащих (вирус полиомы, SV-40, аденовирусы, вирус папил
омы Шоупа), так и РНК-содержащих (вирус саркомы Рауса, Гросса,
Роушера, вирус рака молочной железы мышей). Онкогенная способность
этих вирусов состоит в экспрессии ракового гена— онкогена в клетке
хозяина, вследствие чего наступает опухолевая трансформация клетки.
Среди химических факторов выраженной канцерогенностью
отличаются — метилхолантрен, дибензантрацен, дибензпирен.
Опухолеродность некоторых химических веществ связана с обра-
зованием метаболитов в организме. Так, для нитратов — образование
нитритов и нитрозаминов, для бензпирена — образование 5,б-эпоксида
под влиянием фермента арилгидроксилазы. Особое место при этом
принадлежит эндогенным бластомогенным веществам. Например,
холестерин, трансформируясь в холестен-3-ОН, приобретает
выраженную онкогенность. Такими же свойствами обладают некоторые
метаболиты желчных кислот.
Отличительной особенностью опухолей, индуцированных хи-
мическими соединениями, является низкая иммуногенность для
соответствующих систем организма. Это обусловлено тем, что данные
опухолевые антигены состоят из гликолипидного гаптена,
присоединенного к неизмененному белку хозяина. Такие антиге-
109
 ны не могут активировать Т-хелперы и включать в антителогенез В-
клетки.
Для третьей группы факторов показано, что в процессе эмбриогенеза
определенные участки органов и тканей не подпадают под
закономерную морфофизиологическую эволюцию и остаются после
рождения на эмбриональном уровне развития, то есть содержатся в
организме в качестве эмбриональных, раковых «зачатков»
последующего развития опухоли.
Принципиально все антигенные изменения в опухолевой клетке
могут быть сведены к:
антигенному упрощению, которое проявляется в утрате изо-
антигенов и снижении синтеза других антигенов;
антигенной дивергенции — приобретении опухолевой клеткой
антигенов других органов и тканей;
реверсии антигенов — появлении эмбриональных антигенов.

Механизмы противоопухолевой защиты

Противоопухолевая защита достигается механизмами
специфической иммунологической реактивности, системой алло-генной
ингибиции, регуляцией межклеточных контактов и т. д.
Определяющее значение при этом имеет тимус-независимая система
естественной клеточной резистентности, которая обеспечивается
направленным взаимодействием Т-киллеров и макрофагов независимо от
видоспецифичности опухоли.
Макрофаги фагоцитируют клетки опухолей и оказывают на них
цйтотоксическое воздействие. Стимулируют противоопухолевую
активность макрофагов интерферон, зимизан, липополисахариды,
медиаторы лимфоцитов и опсонины. Т-киллеры оказывают цито-
токсическое действие в результате контакта с цитомембранами опу-
холевых клеток.
Специфическая противоопухолевая защита обеспечивается системой
иммунного надзора с участием Т-лимфоцитов и дополняется
антителообразованием.
Т-лимфоциты-эффекторы оказывают цитотоксическое действие на
опухолевые клетки и разрушают их. Действие их строго специфично.
Снижение функции или атрофия тимуса способствуют генерализации
опухолевого процесса.
Цитолитическое действие на опухолевые клетки в присутствии
комплемента оказывают в основном IgМ. Однако это действие
проявляется при высокой плотности фиксирующих комплемент антител.
При низкой плотности антитела, фиксируясь на опухолевой клетке,
скрывают их чужеродность от цитотоксического действия лимфоцитов.
Наиболее демонстративно действие антител проявляется к опухолям,
индуцированным онкогенным вирусом.
110
 При спонтанных и индуцированных химическими канцерогенами
опухолях значение антител в противоопухолевом иммунитете
малозначимо. Антитела могут оказывать не только тормозящее, но и
стимулирующее влияние на развитие опухолей.

РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА И ИХ
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Реакции между антигенами и антителами in vitro с целью

лабораторной диагностики называют серологическими (от лат. serum —
сыворотка), поскольку источником антител служит сыворотка крови.
Серологические реакции применяются для идентификации и
количественной оценки Аг или Ат, если хотя бы один специфический
компонент известен: либо устанавливается наличие специфических
антител и их титр в исследуемой сыворотке крови при использовании
соответствующего антигенного диагностикума, либо идентифицируется
Аг микроорганизмов или другого биологического материала с помощью
диагностических иммунных сывороток.
Тип реакции Аг—Ат, подходящий для данного метода диагностики, в
значительной мере зависит от физического состояния Аг. Наиболее
распространенные типы реакций Аг—Ат рассмотрены ниже.
Интенсивное развитие методов иммунохимического анализа
привело к тому, что серологические реакции стали составной частью
целого набора реакций, происходящих между антигенами И антителами, и
понятие «реакции иммунитета» стало более широким. Для индикации и
количественной оценки того или иного вещества антигенной природы
сейчас разработаны способы получения высокоспецифических
(моноклональных) антител и высо-.кочувствительные методы
количественной оценки компонентов .реакции Аг—Ат. Они связаны с
конъюгированием Аг и Ат с флюоресцентными красителями, ферментами,
введением в молекулы радиоактивных изотопов, фиксацией компонентов
реакции Аг—Ат на различных типах носителей. К таким реакциям
относятся — реакции иммунофлюоресценции, радиоиммунный и
иммунофер-ментный методы, иммуноблотинг и др.
В зависимости от характера антигена и условий взаимодействия с
ним в серологических реакциях антитела обладают коагулирующим
(осаждающим), нейтрализующим, иммобилизующим и лизирующим
(растворяющим) действием.
Первое из них четко проявляется в реакциях агглютинации и
преципитации, второе — в нейтрализации токсина антитоксином, третье
— в иммобилизации некоторых микроорганизмов, четвертое — в
реакциях лизиса и связывания комплемента. Каждая из разновидностей
серологических реакций имеет свои варианты,
111
 а их постановка — различные модификации, поэтому методические
подходы к проведению реакций между антигеном и антителом довольно
разнообразны.

Иммунохимические основы
взаимодействия антител с антигенами
В основе иммунологической специфичности, то есть
избирательности реакции определенного антигена с соответствующим
ему антителом, лежит структурная комплементарность (сте-
реохимическое соответствие) антитела и антигена, специфическое
соединение антигена с соответствующим антителом в комплекс (реакция
Аг—Ат). В результате взаимодействия Аг с Ат происходят
конформационные изменения молекулы антитела, обусловленные
сближением определенных зон его молекул, возникновением новых
областей или маскировкой некоторых из них.
В раскрытии сущности реакций Аг—Ат используются понятия
аффинность и авидность. Аффинность — сумма сил притяжения и
отталкивания между молекулами, которые возникают при
взаимодействии активного центра антитела (его антигенсвязывающей
области) и гомологичной антигенной детерминанты.
Однако в природе антигены и антитела, как правило, полива-
лентны. Антигены имеют на своей поверхности повторяющиеся
антигенные структуры (антигенные детерминанты), а антитела —
несколько антигенсвязывающих участков: от двух в мономерных
молекулах IgG и IgЕ до десяти в пентамерных молекулах IgМ. Поэтому
такие антигены и антитела вступают в более сложные взаимодействия,
чем только первичное связывание. С биологической точки зрения более
объективною учетом разных валентностей антител и антигенов
характеризует энергию их взаимодействия в реакции Аг—Ат понятие
функциональная аффинность, или авидность (от англ. аукЗйу —
жадность, алчность). Авидность характеризует прочность связи между
компонентами реакции Аг—Ат и обусловлена силами взаимодействия
антител с поливалентным антигеном.

Реакции агглютинации
Реакция агглютинации характеризует противомикробный
иммунитет. Состоит в том, что под влиянием иммунной сыворотки,
содержащей антитела, происходит склеивание и выпадение в осадок
микробов.
Реакция между антителами и антигеном проходит в два этапа:
начинается быстрым соединением детерминантной группы антигена
со специфическим активным центром антитела (специфическая стадия);
112
 осложняется образованием длинных цепей из чередующихся
молекул антигена и антител, разветвлением этих цепей и образованием
решетки Аг—Ат (неспецифическая стадия). Во второй стадии реакции
отличающийся плохой растворимостью иммунный комплекс Аг—Ат
выпадает в осадок.
Неспецифическая стадия, как правило, осуществляется в при-
сутствии растворов электролитов и визуально проявляется по-разному, в
зависимости от физического состояния антигена. Если антигены
корпускулярные (взвесь клеток, частицы, на которых адсорбирован Аг),
имеет место феномен агглютинации: формирующиеся конгломераты
образуют визуально различимые хлопья (выпадают в осадок), микробные
клетки морфологически заметно не изменяются, теряя подвижность,
остаются живыми, супернатант полностью просветляется. Антитела,
участвующие в реакции агглютинации, называют агглютининами,
антигены — агглютиногена-ми, а образующийся агрегированный
комплекс — агглютинатом.
Поскольку антигенная структура микробов разнообразна, в их
агглютинации принимают участие антитела разной специфичности.
Тождественность детерминантных участков антигенов микробов разных
видов обеспечивает групповые реакции агглютинации с ге-
терологичными иммунными сыворотками.
Реакция агглютинации применяется для определения:
антител у больного к известному антигену (реакция Видаля, Райта,
Вейгля);
принадлежности выделенной культуры по известной агглю-
тинирующей сыворотке.
Если один из реагентов известен, реакцию можно использовать для
идентификации либо Аг, либо Ат. Данный метод обычно применяется
для определения микроорганизмов, выделенных от больных, при этом
тест-препаратом служит известная антисыворотка. Реакцию
агглютинации можно использовать и для установления титра
антибактериальных агглютининов в сыворотках больных с неизвестными
заболеваниями. Повышение в течение болезни титров Ат, направленных
против какого-либо микроорганизма, свидетельствует о причинной связи
микроорганизма и данного заболевания.
Микроорганизмы обладают целым набором антигенов, и сы-
воротка крови может содержать антитела к одному или нескольким из
них. Например, при иммунном ответе на инфекцию, вызванную
бактериями, обладающими жгутиками, антитела могут быть направлены
против жгутикового поверхностного антигена, соматического антигена
или обоих. Тип макроскопической агглютинации тоже оказывается
различным: жгутиковый комплекс дает крупнохлопчатый агглютинат (Н-
агглютинация), взаимодействие соматического антигена с антителами
ведет к образованию мелкозернистого агглютината (0-агглютинация).
8 «Микробиология» 113
 Различают прямую и непрямую, или пассивную агглютинации. В
прямой агглютинации антигеном выступает микробная клетка или
структурные компоненты ее поверхностной оболочки.
Сущность реакции непрямой, или пассивной агглютинации (РНГА,
РПГА) заключается в том, что растворимые антигены (белки,
полисахариды и их комплексы микробного происхождения) соединяются
с нерастворимым носителем, выполняющим исключительно
индикаторную функцию. Носителем могут быть эритроциты (пассивная
гемагглютинация), частицы латекса, полиак-риламида, бентонита и др.
Связывание антигена с носителем происходит в результате адсорбции
или химического соединения. Микробные полисахариды, например,
можно адсорбировать на нативных эритроцитах без какой-либо
предварительной обработки. При реакции пассивной гемагглютинации
антиген адсорбируется на поверхности эритроцитов барана, к которым
затем добавляют исследуемую сыворотку. При положительной реакции
образуется осадок (гемагглютинация). Применяется при диагностике
брюшного тифа, паратифов, туберкулеза, токсоплазмоза.

Реакции преципитации
В этих реакциях участвуют растворимые (молекулярные)
антигены — белки или их комплексы с углеводами и липи-дами разного
происхождения, бактериальные экстракты, лизаты и фильтраты
бульонных культур, при этом наблюдается феномен преципитации —
осаждения антигена в присутствии электролита. Образующийся осадок
носит название преципитата, антитела — преципитинов, а антигены —
преципитиногеиов.
Существуют различные модификации реакции преципитации.
Различают: кольцепреципитацию, реакцию Оухтерлони (в агаре), в
полиакриламидном геле, иммунодиффузию и иммуноэлектрофорез.
Применяют:
при лабораторной диагностике инфекций (сибирская язва, чума,
менингит и др.);
в судебно-медицинской экспертизе (определение видовой
специфичности белков);
в санитарно-гигиенической практике (исследование пищевых
продуктов).
Самый простой способ постановки — кольцепреципитация, ко-
торую выполняют в пробирках путем наслоения на иммунную сыворотку
различных разведении прозрачного раствора антигена. На границе
раздела двух реагирующих систем через определенное время появляется
опалесцирующее кольцо преципитации.
Реакция преципитации может быть поставлена в агаровом геле
(иммунодиффузия по Оухтерлони): растворимые антигены и антитела
вносят в лунки, вырезанные в геле на определенном рас-
114
 стоянии, компоненты реакции диффундируют в слое агара на-
встречу друг другу, образуя в зоне конфронтации преципитат,
становящийся видимой линией преципитации.

Реакции нейтрализации
В ходе реакции нейтрализации специфические антитела
нейтрализуют вредное действие антигена, которое проявляется при его
попадании в микроорганизм. Если антигеном служит микробный
экзотоксин (дифтерийный, столбнячный, ботулинический и др.), то
специфические антитела нейтрализуют его. Когда реакция протекает в
организме, нейтрализуется только свободный, не связавшийся с
клетками токсин. Обезвреживание токсина в ходе физико-химической
реакции нейтрализации происходит за счет связывания его свободных
аминогрупп, что ведет к потере токсичности.
Реакция нейтрализации токсина антитоксином строго специ-
фична, используемая сыворотка содержит иммунные антитела против
токсинов и называется антитоксической. Если в пробирке соединить
антитоксическую сыворотку и токсин, образуются хлопья (флоккулы), и
поэтому эта реакция называется реакцией флоккуляции. В 1992 году Г.
Рамон показал, что такие хлопья быстрее образуются в той пробирке, где
количество токсина и антитоксина строго эквивалентно. Этот процесс
называется авидентом, а вид флоккуляции — инициальной (начальной).
Реакция применяется для изучения степени активности или силы дейст-
вия антитоксических сывороток.
Для определения антитоксического иммунитета против диф-
терии у человека используется реакция Шика, заключающаяся в том, что
в сгибательную часть предплечья внутрикожно вводят 1/40 ДLМ
дифтерийного токсина для морской свинки. При наличии иммунитета
реакция отрицательна, при его отсутствии образуется инфильтрат до 2см.
Если антигеном служит вирусный материал, нейтрализующие
антитела полностью подавляют специфическую активность вируса,
выявляемую в различных клеточных культурах, куриных эмбрионах и на
подопытных животных. Вирус перестает размножаться, теряет свою
инфекционность и цитопатогенность.

Реакции иммобилизации
Эти реакции основаны на способности антител сыворотки крови
людей, больных сифилисом, холерой, амебиазом, останавливать
движения соответствующих подвижных микробов-возбудителей и
вызывать их гибель. Иммобилизующие антитела оказывают действие в
присутствии комплемента.
8
* 115
 Реакции лизиса и
связывания комплемента
Лизирующее (растворяющее) действие антител наглядно
проявляется в реакциях лизиса и связывания комплемента. В основе
реакций лизиса лежит взаимодействие корпускулярных антигенов со
специфическими антителами, адсорбирующими своими участками,
расположенными в Fc-фрагменте тяжелых цепей, комплемент, в
результате чего происходит растворение клеток. :
Реакция лизиса. В иммунной сыворотке могут быть антитела,
которые растворяют антигены — лизины, в зависимости от действия —
бактериолизины, гемолизины, лейколизины и т. д. Лизины строго
специфичны, их действие проявляется только в присутствии
комплемента. Растворение микробов под влиянием: иммунных сывороток
впервые обнаружили Л. М. Исаев и Р. Пфейффер на примере лизиса
холерных вибрионов. Реакции лизиса применяют для определения
наличия .антител, вида микроорганизмов и др. Когда иммуноглобулины
также при содействии комплемента разрушают оболочку бактериальной
клетки, наблюдается лизис бактерий — бактериолиз.
Реакция связывания комплемента (РСК) по механизму дейст-
вия является более сложной по сравнению с другими серологическими
реакциями. В РСК задействованы две системы Аг—Ат. При
взаимодействии Аг и Ат происходит адсорбция комплемента. Для
визуальной регистрации связывания комплемента основной системой Аг-
Ат в реакцию дополнительно вводят вторую, или индикаторную
(гемолитическую) систему, состоящую из взвеси эритроцитов и
соответствующей антисыворотки (гемолитической).
Если основной комплекс Аг-Ат зафиксировал комплемент (при
соответствии антигена антителу), то гемолиз отсутствует (реакция
положительная). Если в основной системе антиген и антитело не
соответствуют друг другу, то комплемент фиксируется на втором
индикаторном комплексе, вызывая гемолиз эритроцитов (реакция
отрицательная).
Реакцию связывания комплемента применяют в диагностике
сифилиса (реакция Вассермана), сыпного тифа, риккетсиозов и многих
других вирусных заболеваний.

Иммунофлюоресцентный метод
обнаружения антигенов и антител
Иммунофлюоресцентный метод обнаружения антигенов и
антител может быть прямым и непрямым. Прямой метод основан на
непосредственном специфическом соединении
116
 антигена с антителами, меченными флюоресцентными красителями.
Непрямой метод заключается в поэтапном выявлении комплексов
Аг—Ат с помощью флюоресцентных красителей. На первом этапе
происходит образование иммунных комплексов определенного антигена
(например, бактериальной клетки) со специфическими антителами (γ-
глобулинами) иммунной сыворотки. На втором этапе проводят
выявление этого комплекса путем обработки его меченым анти-γ-
глобулином. Для регистрации результатов используется люминесцентная
микроскопия.

Радиоиммунный метод
Радиоиммуноопределение— наиболее чувствительный
разносторонний метод для определения Аг (гаптенов), которые можно
пометить радиоактивным изотопом.
Особенно часто используется для измерения концентрации
гормонов, лекарственных препаратов и другого биологического
материала в сыворотке крови. Метод основан на конкуренции меченого
Аг известной концентрации с немеченым Аг, концентрация которого
неизвестна. Комплексы Аг (гаптен)—Ат могут быть затем разделены и
определена радиоактивность. Концентрацию немеченого (неизвестного)
Аг определяют по стандарту.

Иммуноферментный метод
Метод приобретает все большую популярность благодаря
высокой чувствительности и простоте постановки (проще, чем
иммунофлюоресценция или радиоиммуноопределение). Основан на
конъюгации фермента либо с Аг, либо с Ат и количественном учете
активности фермента. В зависимости от вида использованного фермента
и системы Аг—Ат разработаны различные варианты метода.
Широко распространенным вариантом является ферментсвя-
занное иммуносорбционное определение. Используемое для уста-
новления концентрации Аг и Ат. Для определения Ат известный Аг
фиксируют на твердофазном носителе (полистироловые, поливиниловые
пластины или пробирки), инкубируют с разведенной испытуемой
сывороткой, отмывают и обрабатывают антиим-муноглобулином,
меченным ферментом, например пероксидазой хрена. Активность
фермента Измеряют добавлением специфического субстрата:
регистрируют изменения и измеряют этот сдвиг колориметрически.
Активность фермента пропорциональна количеству связавшихся антител.
Для измерения Аг известное специфическое Ат фиксируют на
твердой фазе, добавляют испытуемую пробу, содержащую Аг,
117
 отмывают, обрабатывают теми же антителами, но меченными фер-
ментом. Для осуществления реакции необходимо, чтобы антиген имел по
меньшей мере две детерминанты. После отмывки добавляют субстрат и
измеряют активность фермента, на основании чего определяют
концентрацию Аг.

Метод иммуноблотинга
(Western blot)
Метод иммунного блотинга позволяет произвести элек-
трофоретическое разделение вирусных белков (Аг) с последующим
перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана
обрабатывается испытуемой сывороткой. Заключительный этап
исследования состоит в выявлении антител к различным белкам
возбудителя, для чего в систему добавляют антивидовые меченые
сыворотки.
Индикацию образовавшихся иммунных комплексов проводят с
использованием иммуноферментного или радиоиммунного анализа. С
помощью метода иммунного блотинга определяют антитела к одному
или нескольким белковым антигенам возбудителя; используется в
лабораторной диагностике вирусных инфекций, например, СПИДа.

АЛЛЕРГИЯ

Проблема измененной реактивности организма привлекает

внимание экспериментальной и клинической медицины более 90 лет, то
есть со времен Ш, Рише и П. Портье, описавших в 1902 году синдром,
который наблюдался при вторичном введении собакам белка анемон
(морских звезд): быстрое падение артериального давления, судорожные
сокращения гладкой мускулатуры, диспное и смерть. Этот феномен
авторы обозначили термином «анафилаксия» (от греч. аnа — против,
phyloxis — защита).
Основоположником учения об аллергии считается К. Пирке,
определивший аллергию как специфически измененную реактивность
организма по отношению к продуктам или живым агентам, которая
возникает под влиянием предыдущего взаимодействия с этим агентом, то
есть при его повторном действии. Что мы сегодня знаем об аллергии?
Аллергия — это:
1) иммунологический механизм, участвующий во всех проявлениях
гуморального и клеточного иммунитета с различным уровнем
выраженности. При напряженной защитной функции иммунитета
аллергические реакции, как правило, носят нормергический
118
 характер и фоново усиливают иммунологический ответ. В случае
недостатка гуморального и клеточного иммунитета аллергические
реакции характеризуются как гиперергические и наряду с защитным
эффектом способны выступать как фактор, определяющий заболевание.
При недостатке функций иммунитета и запредельном антигенном
раздражении проявления аллергии исчезают, наступает состояние
анергии. При этом патологический процесс протекает особенно
злокачественно;
2) результат «иммунологического» контакта организма со слабыми
или неполноценными антигенами;
3) профаза иммунитета, проиммунитетная стадия.
Изучение повышенной чувствительности организма к повторному
воздействию высокомолекулярных соединений позволило разделить
этиологические факторы аллергии на две большие группы: экзоаллергены
и эндоаллергены.
Основную часть экзоаллергенов составляют продукты биоло-
гического (грибкового, бактериального и вирусного) происхождения.
Сюда же отнесены высокомолекулярные лекарственные средства и
относительно простые химические соединения, пыльца трав, цветов,
бытовая пыль, мелкие частицы эпидермиса, волос, перхоти, а также
пищевые продукты растительного и животного происхождения.
Эндоаллергены (аутоантигены) разделяются на естественные
(первичные); приобретенные (вторичные).
Вторичные делятся на неинфекционные (ожоговые, лучевые,
холодовые) и инфекционные. Инфекционные подразделяются на
комплексные (ткань + микроб, ткань + токсин) и промежуточные
(продукты поврежденной ткани микробами или вирусами).
Приведенная общая схема классификации аллергенов свиде-
тельствует о чрезвычайно большом числе веществ, в результате
воздействия которых наступает аллергическая: перестройка организма.
Что же объединяет эти разнообразные аллергены? Уже говорилось,
что аллергические реакции развиваются на слабые или неполноценные
антигены. В аллергической терминологии они называются гаптенами.
Общим свойством для них является способность соединяться с
собственными белками организма и через него реализовывать
аллергическую активность. Такой белок называется «трактор-антигеном»
или «шлеппер-белком».
Таким образом, иммунологическая реакция на гаптен (экзо-и
эндоаллерген) является реакцией против собственных белков. Именно
поэтому аллергические реакции сочетают полезные и вредные свойства.
В отличие от иммунного процесса, протекающего от патологии к норме,
аллергический процесс, по определению Rabka (1939), протекает «от
нормы к патологии».
119
 Аллергический процесс имеет три основные стадии развития (по А.
Адо):
иммунологическая — в организме на основе процесса сенси-
билизации образуются аллергические антитела (реагины), которые
фиксируются на клеточно-тканевых структурах;
патохимическая — происходит соединение образовавшихся
антител с повторно поступающим аллергеном, в результате чего
нарушаются обменные процессы в клетках, содержащих на своей
поверхности антитела, клетки разрушаются и высвобождаются
медиаторы аллергии — гистамин, МРВ-А, серотонин и другие медиаторы
воспаления. Благодаря этому повышается проницаемость капилляров,
формируется воспалительный отек;
патофизиологическая — клинически проявляются расстройства
функций организма, свойственные аллергической реакции.
Итак, в основе аллергических процессов лежит феномен сен-
сибилизации организма, основанный на попадании в него аллергена.
Пути поступления аллергена в организм:
парентеральный;
ингаляционный; ,
накожный;
энтеральный.
Для инфекционных аллергенов пути поступления совпадают с
путями проникновения возбудителя в организм.
Следует отметить, что степень выраженности аллергической
реакции зависит от пути поступления аллергена в организм и мас-
сивности его дозы. ,
Аллергические реакции организма развиваются по трем основным
путям:
гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ);
гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ: базофильный и
туберкулиновый типы);
аллергические реакции позднего типа.
Гиперчувствительность немедленного типа — аллергическая
реакция, развивающаяся не позднее 2 часов после повторного контакта с
аллергеном на фоне предварительной аллергизации (табл. 2).
Обуславливается антителами, относящимися к IgЕ и IgЕ-подобному
субклассу иммуноглобулинов. Эти антитела циркулируют в крови и
диффундируют в ткани, где фиксируются на поверхности клеток.
Разрешающее введение в организм аллергена сопровождается
немедленной анафилаксией с крайним выражением в виде
анафилактического шока с потерей сознания, резким снижением
артериального давления, одышкой и высокой вероятностью смертельного
исхода.
К проявлениям ГНТ следует отнести и сывороточную болезнь —
симптомокомплекс, развивающийся на однократное внут-
120
 Таблица 2
Типы реакций гиперчувствительности

Особенность реакции ГНТ ГЗТ

базофильная туберкул
иновая

Перенос:
лимфоцитами — + +
антителами + + —
Участие :
гистамина + + —
в микробной аллергии — — +
в противопаразитарном
иммунитете + + —
Стимуляция:
адыовантом Фрейнда — — +
коклюшным антигеном : + + —
Состав клеток, участвующих Базофилы, Базофилы, В основном
в реакции эозинофилы эозинофилы, мононукле-
в меньшей ары
степени моно-
нуклеары

римышечное или внутривенное введение в организм чужеродной

сыворотки, других лекарственных препаратов и природных соединений.
Сывороточная болезнь часто протекает по типу анафилаксии. Ее развитие
связано с иммунными комплексами, в которых участвуют IgЕ, IgМ и IgD.
Гиперчувствительность замедленного типа (базофильного типа)
— сочетает проявления ГНТ и ГЗТ, развивается преимущественно с
участием базофилов, нейтрофилов и частично с IgЕ. Характерна для
проявлений трансплантационного иммунитета, паразитарных, клещевых,
вирусных инфекций.
Гиперчувствительность замедленного (туберкулинового) типа
вызывается большинством микробных антигенов. В формировании ГЗТ
принимают участие различные субпопуляции Т- и В-лимфоцитов,
базофилы, тучные клетки, макрофаги.
Аллергические реакции позднего типа установлены сравнительно
недавно. Развиваются с участием тучных клеток, эозинофилов,
нейтрофилов и лимфоцитов, проявляются к моменту исчезновения ГНТ в
виде эритемы и волдыря, характеризуются отеком, краснотой,
уплотнением кожи (не менее 10 мм без четких границ), рассасываются
через 24—48 часов с последующим образованием петехий. ,
Все вышеизложенное можно обобщить в основных законах
аллергии:
повторность аллергического воздействия на организм;
121
 изменение скорости, интенсивности, качества биологических
процессов в сенсибилизированном организме;
организм, сенсибилизированный к одному виду аллергии, может
ответить аллергической реакцией на введение другого, близкого по
природе аллергена — параллергена;
развитие аллергических реакций, как результата несовместимости
антигена и антител;
появление аллергических реакций при передозировках, нару-
шении схем введения препаратов;
аллергический статус может быть снят, если аллерген применен
фракционно, в минимальных количествах, в сроки, соответствующие
десенсибилизации.
Для выявления сенсибилизации и предупреждения .развития
аллергических реакций применяют аллерго-иммунологические тесты,
основанные на введении в организм внутрикожно минимальных
количеств предполагаемого аллергена и исследовании его соответствия
крови (антителам, клеткам).

АУТОИММУННЫЕ ПРОЦЕССЫ

Иммунологическая система осуществляет строгий контроль за

внутренним гомеостазом организма, физиологическим соответствием
отдельных клеток и систем, их взаимодействием в обеспечении общего
процесса жизнедеятельности. Ведущим при этом является
иммунологический эффект супрессии — запрет реакции на «свое».
Однако изменение антигенной структуры тканей, их физио-
логическая или патологическая деградация, в результате которой
образуются секвестрированные антигены, а также нарушения различных
звеньев в системе иммуиитета, например в результате соматических
мутаций иммунокомпетентных .клеток, приводит к развитию
аутоиммунитета — реакции иммунной системы лротив собственных
тканей.
Возникновение аутоиммунных процессов может быть опосре-
дованным (в результате травм, инфекционного или иного заболевания)
или непосредственным— связанным с дисфункцией Т-супрессоров и
развитием цитотоксического контроля иммунной системы антигенов
собственных тканей.
Следует отметить, что аутоиммунный контроль является фи-
зиологическим свойством иммунной системы, и поэтому в крови всегда
присутствуют так называемые «нормальные антитела» в пороговых
титрах, контролирующих клеточное обновление в физиологических
пределах (теория «транспортеров»). Это связано с тем, что иммунные
антитела организма содержат аутореактивные Т- и В-лимфоциты,
функции которых- аутораспознавание,
122
 направленное на сохранение аутотолерантности и поддержание
антигенного гомеостаза.
Поддержание аутотолерантности обеспечивается:
-- инактивацией антигенных клонов;
- ингибицией антителообразующих лимфоцитов;
- регуляцией Т-лимфоцитов.
Согласно L. J Nossel (1975), в процессе дифференциации В-
лимфоцитов от стволовой до зрелой плазматической клетки существует
фаза, когда их контакт с антигеном проявляется только толерантностью,
но не иммунитетом. В этот период В-лимфоциты приобретают
поверхностные IgМ. Эти антитела блокируют рецепторы, а незрелые В-
лимфоциты неспособны их восстанавливать.
Участие Т-лимфоцитов в аутотолерантности достигается либо
активацией Т-супрессоров, либо инактивацией Т-хелперов.
Аутоиммунитет — проявление нормальной реакции иммунной
системы в патологических условиях.
К развитию аутоиммунного заболевания ведут три главных
механизма:
- высвобождение антигена;
-обходной шунт (Т-се11 Bupass);
-нарушение иммунологической регуляции.
Моделирование аутоиммунных реакций в эксперименте:
- введение в кровеносное русло «забарьерных тканевых антигенов;
-введение собственных антигенов с адъювантом Фрейнда;
-мимикрирующие антигены и микробы (микробные «продукты» со
свойствами адъюванта Фрейнда). Вирусы внедряясь в кле-
точные мембраны, придают инфицированным
клеткам чужеродность и вызывают реакцию
иммунокомпетентных клеток.
Аутоиммунное заболевание может бытъ вызвано перекрестно
реагирующими антигенами, когда антитела вырабатываются и к
аутологичным антигенам, и микробным детерминантам. Так,
стрептококки имеют антигенную общность с антигенами миокарда,
базальных мембран почечных клубочков. На этой основе формируется
патогенез ревматизма, хронического нефрита и т. д.
В результате накопления лекарств некоторые собственные ткани
могут приобретать чужеродные антигенные свойства (лекарство — ткань),
попадая под иммунологический контроль организма.
Аутоантигенами могут быть неэлиминированные макромоле-
кулы «эмбриональных зачатков».
В возникновении аутоиммунных болезней значительная роль
принадлежит генетическим факторам. Почти все аутоиммунные
заболевания связаны с изменением главного комплекса гистосов-
123
 местимости ( HLA-аллелями). У многих больных обнаруживается
НLА-В8 гаплотип.
Аутоиммунные заболевания чаще встречаются у женщин. С воз-
растом частота аутоиммунных заболеваний увеличивается.

Аутоантигены
Аутоантигены — вещества собственных нормальных тканей,
у которых в эмбриогенезе отсутствует контакт с иммунокомпетентными
клетками (забарьерные антигены).
К забарьерным антигенам не формируется иммунологическая
толерантность, поскольку содержащие их органы отделены от крови
гистогематическими барьерами. Чаще всего аутоантитела
вырабатываются к собственным тканевым компонентам, измененным под
действием лекарств, токсинов и ферментов бактерий, вирусов.
Классификация аутоаллергёнов поАдо:
-естественные, первичные — антигены забарьерных тканей
(хрусталик, нервная ткань и т. д.);
-приобретенные, вторичные:
неинфекционные, образующиеся при действии термофактора,
ионизирующего излучения;
инфекционные, возникающие в результате воздействия на ткани
микробных токсинов;
Аутоантителообразование возникает как результат:
соединения экзогенного гаптена с белком организма хозяина;
освобождения антигенов, в норме не контактирующих с им-
мунокомпетентными клетками (антитела к хрусталику при травме глаза,
к миокарду — при инфаркте и т. д.);
изменения структуры макромолекул под влиянием биологических
факторов (например, вирус гриппа за счет гемолизина обнажает
внутренние структуры эритроцита и активирует антиэритро-цитарные
антитела);
появления в организме комплексов, антигенно сходных с де-
терминантамихозяина, но конъюгировавших с другим носителем
(стрептолизин-0);
соматических мутаций, при которых могут появляться клоны
клеток, реагирующие против собственных неизмененных антигенов.

Модели аутоиммуниых процессов

Аутоиммунные заболевания развиваются в результате

появления в организме «запрещенных» клонов иммунокомпе-тентных
лимфоидных клеток при генетических аномалиях. Экспериментом это
подтверждается при использовании ксеноген-
124
 ных и аллогенных животных, иммунизированных тканевыми ан-
тигенами. Так, мыши линии NZB спонтанно заболевают сходным с СКВ
заболеванием. В возрасте двух—четырех месяцев у них спонтанно
появляются антиэритроцитарные антитела, повышаются концентрации
Т- и В-клеток, способных реагировать на аутоантигены, теряется
супрессорная активностьв отношении корпускулярных и растворимьх
антигенов, нарушается дифференциация Т-клеток за счет дисфункции
тимуса.
Аутоиммунные реакции индуцируются в эксперименте in vivo
многими простыми химическими соединениями, например хлором и
нитропроизводными бензола, которые легко связываются с белками
морских свинок и становятся аутоантигенами.
Моделью для изучения ЦПД аутоантител in vitro служат культуры
тканей Не1а фибробластов, щитовидной железы и др. Добавление
соответствующих антител прекращает образование монослоя, а в
образованном вызывается ЦПД.

Роль аутоантител
Нормальные аутоантитела обнаруживаются в сыворотке
всех позвоночных, синтезируюших антитела, почти ко всем органам и
тканям. С возрастом у человека повышается сенсибилизация к
основному протеину мозга, коррелирующая с титрами циркулирующих
антител. Окончательно еще не, выяснено — это физиологический
эффект, направленный на иммунологический контроль чисто
биохимических сдвигов, или нарушение толерантности к собственным
антигенам.
В соответствии с концепцией регуляторной роли аутоантител
считается, что аутоантитела нейтрализуют продукты метаболизма
клеток, поступающие в кровь. При повреждении кле-ток их количество
уменьшается поэтому аутоантитела проникают в ткани и фиксируются
на поверхности клеток, что приводит к повышению проницаемости
клеточных мембран и клеточного обмена. При резко выраженных
повреждениях клеток возникают необратимые нарушения
проницаемости мембран клеток и наступает лизис,.
Аутоантитела могут оказывать протективный эффект. Так,
обработка лизосом сывороткой больных гепатитом снижает ин-
тенсивность высвобождения лизосомальных ферментов под действием
ретинола и предупреждает повреждение макрофагов.
При аутоиммунных процессах в сыворотке крови появляются
полные и неполные аутоантитела. Их роль окончательно не установлена.
Избыточное содержание не связанных с антигеном аутоантител ставит
под сомнение их участие в динамике аутоиммунного процесса. Однако
надо принимать во внимание авидность и авидитет сывороток. Кроме
того, измененные секвестрированные
125
 антитела способны не только к индукции антителообразования, но и
к сенсибилизации Т-лимфоцитов.
Под влиянием аутоантител повреждения возникают в результате
реакции антиген—антитело При развитии аутоиммунных за-болеваний
комбинировано участвуют и аутоантитела, и сенсибилизированные
лимфоциты. На формирование аутоантител могут оказывать действие
бактерии за счет антигенов мимикрии и адъювантного действия.
Аутоиммунные повреждения удается воспроизвести путем переноса
аутоантител при экспериментальном гломерулонефрите.
Аутоантитела встречаются практически при всех заболева-
ниях:сердечно-сосудистой системы, органов дыхания, крови и
кроветворных органов, мочеполовой системы, пищеварительного тракта,
печени, кожи, инфекционных болезнях, поражениях соединительной
ткани, опорно-двигательного аппарата, глаз и т. д.
Существуют тепловые (термические) аутоантитела (IgМ и IgD) с
оптимумом реагирования при 37 °С и холодовые аутоантитела
(неполные аутоантитела, способные проникать через плаценту) с
оптимумом реагирования около 4 °С. К последним относятся неполные
гемагглютинины — антиэритроцитарные антитела.
Значительно чаще и в более высоких титрах при аутоиммунных
заболеваниях встречаются холодовые антитела, являющиеся неполными
агглютининами класса IgМ.
Механизм развития аутоиммунных болезней может быть обусловлен
нормальными холодовыми аутрантителами против Т-лим-фоцитов. Они
появляются у здоровых людей в возрасте 60—70 лет, оказывают
депрессивный эффект на неспецифические звенья ре-зистентности и
иммунные механизмы.
Холодовыми являются также аутоантитела против Fc-фрагментов
IgG, антитела против антигенов НLА. При переохлаждении холодовые
аутоантитела адсорбируются на цитомембране клетки и разрушают ее.
Тепловые аутоантитела к Т-лимфоцитам в основном ингйби-руют
функцию Т-супрессоров.

Аутоиммунные заболевания
Аутоиммунные заболевания подразделяются на две группы:
коллагенозы (диффузные заболевания соединительной ткани), при
которых в крови появляются аутоантитела без строгой органной
специфичности, (СКВ, ревматоидныи артрит);
заболевания, при которых в крови содержатся органоспеци -
фические антитела.
126
 Признаки аутоиммунных заболеваний:
— наличие в сыворотке крови и в тканях антител, реагирующих с
антигенами определенного органа или системы тканей;
гипергаммаглобулинемия;
— активация пролиферативных процессов в лимфатических узлах и
селезенке;
— диффузная лимфоидно-плазмоклеточная инфильтрация пораженного
органа или системы тканей;
—гиперплазия эпителия и образование лимфоидных фолликулов с
зародышевыми центрами в мозговом веществе тимуса;
— приостановка развития заболевания иммунодепрессивными
средствами.
При аутоиммунных заболеваниях часто выявляются изменения в
тимусе. Так, у 60—70 % больных миастенией обнаруживаются
зародышевые центры в тимусе, у 15 % — лимфоэпителиальные опухоли
тимуса. Зародышевые центры — потомки мутантных клеток, резистентных
к действию факторов, контролирующих гомеостаз.
Изменения в тимусе показывают, что при аутоиммунных заболеваниях
ведущая роль принадлежит реакциям клеточного, а не гуморального
иммунитета. Повышенная заболеваемость коллагенозом чаще встречается
в отдельных семьях.
Морфологические изменения при аутоиммунных заболеваниях
определяются либо депонированием в тканях иммунных комплексов с
включением комплемента, что сопровождается лизисом клеток крови, либо
воспалением или деструкцией клеток под влиянием цитотоксического
действия киллеров и макрофагов.

Нозология аутоиммунных заболеваний

Аллергический энцефаломиелит — Т-клеточнозависимое
заболевание, возникает после перенесенной кори. Специфическим
антигеном является белок миелиновой оболочки белого вещества.
Аутоиммунный тиреоидит (тиреоидит Хашимота) проявляется
симптомами гипотиреоидизма. Специфический антиген — экстракт
щитовидной железы в адъюванте Фрейнда; в эксперименте возможен
перенос суспензией лимфоцитов, оказывающих цитотоксическое действие
на клетки щитовидной железы. Развитие заболевания сопровождается
ростом титра аутоантител.
Болезнь Аддисона — поражение надпочечников как следствие
аутоиммунной реакции, нарушающей структуры коры надпочечников,
сопровождается накоплением цитотоксических аутоантител.
 Инсулинозависимый сахарный диабет — возможным этиоло-
гическим фактором является вирус энцефаломегалии, ведущий фактор —
аутоантителообразование.
127

Аутоиммунные заболевания крови вызывают холодовые ан-

тиэритроцитарные аутоантитела двух типов: неполные (4—10 °С) с
константой седиментации 7S и полные с константой седиментации 19S.
Аутоиммунные заболевания ЖКТ:
атрофический гастрит;
пернициозная анемия;
язвенный колит;
болезнь Крона;
хронический активный гепатит.
При коллагенозах происходит фибриноидная дегенерация,
проявляющаяся гомогенизацией коллагеновых волокон за счет альтерации
межклеточного вещества соединительной ткани. Фибриноидная
дегенерация — признак сенсибилизации.
Миастения гравис — резкая общая слабость, обусловленная
нарушением передачи нервного импульса в нервно-мышечном синапсе в
результате блокады рецепторов ацетилхолина, снижение Т-супрессоров за
счет действия аутоантител. Этиология, вероятно, вирусная, поражающая
тимус. У 90 %— антитела к рецепторам ацетилхолина. Чаще болеют
женщины в возрасте 10-40 лет.
Системная красная волчанка — поражаются практически все
органы, нервная и эндокринная системы, соединительная ткань. В основе
лежит глубокое нарушение функций иммунной системы: антитела ко всем
органам и тканям, антиядерные и антиклеточные антйтела, иммунные
коммплексы ДНК + антиядерные антитела депонируются в коже,
слизистых оболочках, плевре, брюшине, суставных капсулах, клапанах
сердца, почках.
Ревматоидный артрит — системное аутоиммунное заболевание
соединительной ткани, развивающееся под действием ревматоидного
фактора; участвуют антитела класса М. Формируются иммунные
комплексы.

ИММУНОДЕФИЦИТЫ

По происхождению иммунодефициты подразделяются на:

наследственные (первичные);
приобретенные (вторичные).
Клинические признаки первичных иммунодефицитов:
рецидивирующие инфекции верхних дыхательных путей и пищева-
рительного тракта, пиодермии, артриты, остеомиелиты. Первичные
иммунодефициты могут быть обусловлены недостаточностью Т- или В-
системы иммунитета, вспомогательных клеток, а также их сочетанием.
 При недостаточности гуморального иммунитета преобладают
бактериальные инфекции, а при недостаточности клеточного —
вирусные и грибковые.
128
 Недостаточность
гуморального иммунитета
Недостаточность гуморального иммунитета связана с дисфункцией
В-клеток и сопровождается гнойно-воспалительными заболеваниями и
кандидозами. В основе лежат:
неспособность вырабатывать γ-глобулины;
при синтезе неправильное «моделирование» структуры имму-
ноглобулина к соответствующему антигену;
выработка неполных антител;
продуцирование антител слабой специфичности или форми-
рование аутоантител.
Различают три типа недостаточности: физиологическую, на-
следственную, приооретенную.
Физиологическая недостаточность определяется у детей до трех
месяцев. При рождении в крови в основном содержится материнский
IgG и небольшое количество собственных IgА, IgМ, IgG. Материнский
иммуноглобулин содержит антитела против всех микробов, с которыми
мать имела контакты. В процессе роста пропорция материнских и
собственных иммуноглобулинов закомерно сдвигается в сторону
последних. Однако в первые месяцы жизни количество секреторных
антител крайне недостаточно, поэтому такие дети очень восприимчивы к
респираторным и кишечным инфекциям.
Наследственная недостаточность может проявляться агамма-
глобулинемией и гипогаммаглобулинемией.
Агаммаглобулинемия связана с отсутствием у детей аппендикса,
групповых лимфатических фолликул и нёбной миндалины. Эта патология
характерна для детей раннего возраста.
Судьба детей с гипогаммаглобулинемией зависит от ее характера—
резкий или умеренный, транзиторный или постоянный.
Гипогаммаглобулинемия связана с дефектом μ -, γ- или α -цепей глобулинов.
В сыворотке крови таких больных содержатся моноклональные
тяжелые цепи γ-глобулинов, имеющих от ½ до ¾ нормальных с цепей,
остальные принадлежат к подклассу G-1. При болезни α-цепей чаще
поражается пищеварительный тракт, поскольку IgА как секреторный
иммуноглобулин в значительной степени вырабатывается в кишечнике.
Морфологически в ворсинках тонких кишок отмечается инфильтрация
лимфоцитами, плазмоцитами и ретикулярными клетками.
При нарушении γ-цепей наблюдаются лимфоаденопатия, ге-;
патоспленомегалия, лейкопения, тромбоцитопения, эозинофилия,
плазмоцитарная и лимфоцитарная инфильтрации тканей.
Для недостаточности иммуноглобулинов всех классов характерны
рецидивирующие вирусные и бактериальные инфекции, по-
9 «Микробиология. 129
 являющиеся после истощения титров материнских антител в воз-
расте пяти-шести месяцев.
На исход гипогаммаглобулинемии существенное влияние ока-
зывает эффективность профилактических мероприятий для повышения
устойчивости организма ребенка к инфекции.
Приобретенная недостаточность антител — результат патологи-
ческих изменений в гуморальной системе иммунитета в постнатальном
периоде. Так, потеря сывороточных белков при нефрите или их
недостаточная продукция при миеломатозе; лимфатической лейкемии
сопровождается повышенной восприимчивостью к инфекциям
вследствие вторичной гипогаммаглобулинемии. У больных часто
возникают тимомы.
Все виды приобретенной недостаточности антител разделяют на
такие категории: физиологическая, катаболическая, токсическая,
первичная ретикулоэндотелиальная неоплазмия.
У больных с недостаточностью гуморального иммунитета от-
мечаются аллергические заболевания, однако проявления анафилаксии в
ГЗТ в клиническом выражении ослаблены.
Нарушение содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови
называют дисгаммаглобулинемией. Она сопровождает многие
заболевания: хронические гнойно-воспалительные процессы верхних
дыгхательных путей, рецидивирующие кишечные инфекции, которые
развиваются у дет:ей спустя шестъ месяцев после рождения.
Лица с дефицитом в сыворотке крови иммуноглобулинов одного
класса чаще подвержены инфекционным заболеваниям.

Недостаточность
клеточного иммунитета
Невосприимчивость к вирусным и грибковым заболеваниям
обусловлена в основном напряженностью клеточного иммунитета.
Подтверждается это тем, что у больных с врожденной или приобретенной
гипогаммаглобулинемией некоторые вирусные инфекции протекают так
же, как у здоровых. Например, при врожденной агаммаглобулинемии корь
протекает нормально и дает стойкий иммунитет, хотя иммунные антитела
не образуются.
В то же время при недостаточности, клеточного иммунитета,
сопровождающейся отсутствием или снижением иммунных реакций
замедленного типа, отмечаются повторные заболеваний ви-русными
инфекциями, а у экспериментальных животных длительно не отторгаются
аллогенные кожные лоскуты.
При недостаточности клеточного иммунитета трансплантированные
лоскуты кожи девочек въживают у мальчиков, сохраняя половой
хроматин ядра до пя ти лет. Одновременно переса
130
 женные лимфоузлы теряют способность синтезировать антитела
спустя два месяца после трансплантации.
При вскрытии трупов детей, погибших от недостаточности
клеточного иммунитета, отмечается гипоплазмия или отсутствие
лимфридной ткани и лимфоузлов, в структуре которых преобладают
ретикулярные клетки тимус маленьких размеров, количество лимфоцитов
в нем резко уменьшено.
Дети с дефицитом: системы иммунитета тяжело переносят
краснуху и другие вирусные инфекции. У них возникают-заболевания
даже при вакцинации живыми вирусными вакцинами. Инфекции у детей с
Т-дефицитными состояниями развиваются обычно вскоре после
рождения.
Синдром недостаточности клеточного иммунитета сочетается с
поражениями тимуса, щитовидной и паращитовидной желез, нередко
комбинируется с лимфоцитопенией и гипогаммаглобулинемией.
Развитие иммунодефицита у тимэктомированных мышей пре-
дупреждается трансплантацией тимуса молодых животных сингенной
линии.
Взаимосвязь между Т- и В-иммунодефицитами подтверждается
тем, что врожденная гипогаммаглобулинемия сопровождается
недостаточностью клеточного иммунитета, лимфоцитопенией и
патологическими изменениями в тимусе. При одновременной
недостаточности клеточного и гуморального иммунитета дети погибают
от вирусных, бактериальных или грибковых инфекций в первые недели
жизни.
Комбинированная недостаточность клеточного и гуморального
иммунитета характеризуется высокой восприимчивостью к инфекции,
прогрессирующими мозговыми расстройствами, поражениями
конъюнктивы и сосудов кожи вокруг глаз, нарушением синтеза антител,
отсутствием изогемагглютининов. Такие дети погибают вскоре после
рождения.
Врожденные иммунодефипиты обусловлены генетической
блокадой Т- или В-системы иммунитета или выключением этих систем.
Блокада может происходить на различных уровнях.
Первое звено нарушений — блокада процессов дифференциации
стволовых клеток: в костном мозге отсутствуют полипотентные
стволовые клетки и как следствие — Т-и В-лимфоциты в лимфоидных
органах.
Второе звено генетического блока — отсутствие тимуса, сумки
Фабрициуса или их совокупности, а также нарушения способности
стволовых клеток колонизировать центральные органы иммунитета.
Генетическая блокада возможна на различных этапах диф-
ференцирования Т- и В-клеток. Встречаются нарушения пре-
9* 131
 вращения клеток-предшественников в эффекторные Т-клетки, Т-
хелперы, Т-супрессоры, блокада синтеза маркеров, что ведет к
нарушениям функций соответствующих субпопуляций Т-лимфоцитов.
Аналогичные дефициты наблюдаются со стороны В-клеток и
зависят от процессов их дифференцировки и созревания. В этом случае
может быть блокада дифференцировки пре-В-клеток в В-клетки из-за
отсутствия сумки Фабрициуса или ее аналогов, а также генетические
дефекты в стволовых клетках. Возможны нарушения трансформации
клеток-предшественников в антителообразующие клетки, процессов
синтеза транспорта или секреции антител плазмоцитами.
Иммунологическую реактивность определяют с помощью
тестов, позволяющих оценить уровень как клеточного, так и
гуморального иммунитета: изучение количественного соотношения Т- и
В-лимфоцитов, их функциональной активности; изучение активности
фагоцитоза, содержание иммуноглобулинов, антител различных классов,
аутоантител.
Тест на оценку общей иммунореактивности состоит в том, что
обследуемым вводят внутрикожно 0,01 мл кроличьей антисыворотки к
ткаевым и сывороточным антигенам человека. По проявлению кожной
реакции ГЗТ оценивают уровень общей иммунореактивности.

Иммунитет и старение

Современными иммунологическими исследованиями доказано,

что причины старения и развитие связанных с возрастом заболеваний
могут находиться под контролем иммунологических факторов.
Важную роль в этиологии и патогенезе старения отводят
различным иммунологическим механизмам: тимусной инволюции и
нарушению функций клеточного иммунитета; генетически
запрограммированной системе иммунологического надзора; вирусной
инфекции.
В возрастом дисбалансе иммунитета наибольшее значение имеет
инволюция тимуса и снижение уровня тимусных гормонов. Это ведет к
изменению функции Т-клеток и нарушению их иммунорегуляторных
свойств. Сниженная реактивность Т-лимфоцитов проявляется:
в уменьшении способности пролиферации и
бласттрансформации под влиянием ФГА;
в повышении выживаемости аллогенных кожных
трансплантантов и приживлении индуцированных опухолей.
В 50-65 лет количество Т-лимфоцитов уменьшается, а В-
лимфоцитов – увеличивается, Т-киллеры не формируются, резко сни-
132
 жается ответ на Т-зависимые антигены и сохраняется на Т-
независимые.
Количественная и функциональная дефектность Т-клеток ведет к
снижению реакции ГЗТ на экзогенные антигены и усиливает их в
отношении эндогенных. Смертность таких лиц высокая и обусловена
бронхопневмонией, заболеваниями сосудов и сердца.
Закономерным следствием старения организма являются
нарушения иммунных процессов, связанных с ослаблением
аутотолерантности и увеличением содержания аутоантител.
Аутоантитела проявляются в изких титрах у 50% здоровых пожилых
людей, особенно у женщин. С возрастом в сыворотке крови количество
IgG и IgA повышается на фоне снижения IgМ.
Смертность людей с высокими титрами аутоантител в сыворотке
крови выше, чем лиц, не имеющих аутоантител. У таких лиц чаще
встречаются сердечно-сосудистые заболевания и рак.
Парадоксален факт – повышенное образование аутоантител в
старости пропорционально снижению иммунореактивности. Полагают,
что это связано с потерей функции Т-супрессоров и Т-хелперов.
Появление аутоантител в тканях возможно в результате
изменения химической структуры макромолекул, генетических ошибок и
мутаций, обусловленных образованием запрещенных клонов.
Существует точка зрения (G.A.Gatti, R.A.Good,1970), что
затухание иммунологической активности организма с возрастом прежде
всего отражает генетически запрограммированные биологические часы, в
соответствии с которыми через ЦНС и эндокринную систему происходит
ограничение размножения Т-лимфоцитов. Все остальные
иммунологические аспекты старения можно рассматривать как
вторичные по отношению к наследственно обусловленной
недостаточности тимуса: проявление аутоиммунных и
иммунодефицитных процессов, развитие злокачественных опухолей и
тяжелых инфекций, вызванных слабовирулентными патогенами.
Рядом исследователей (J.E.Hotchin, J.A.Levy, R.C.Mellors и др.,
1971-1974) высказано предположение о возможной роли вирусов в
патогенезе старения и таких заболеваний как аутоиммунные и раковые.
Показано существование связи между персистирующей медленной
вирусной инфекцией и множеством аутоиммунных нарушений.
Существуют различные теоретические подходы к оценке
иммунологических основ процесса старения. Р.В.Петров полагает, что
возрастные снижения иммунореактивности есть результат старения всей
иммунной системы.
По теории Ф.М.Бернета, старение – это потеря толерантности к
собственным структурам и появление клонов иммуно-
 компетентных клеток, способных реагировать против
собствен-'ных антигенов. В развитии этих взаимодополняющих теорий
допускается, что в процессе старения снижается способность рас-
познавания «своего» и возникают аутоиммунные реакции. Это
сопровождается уменьшением лимфоидной ткани и количества
плазмоцитов, гипоплазмией лимфоидных органов, фиброзом, ги-
алинизацией и атрофией почек, потерей массы тела и т. д.
Важное значение имеет увеличение литических ферментов, что
приводит к освобождению аутоантигенов, в том числе измененных
трансплантационных антигенов гистосовместимости. Они представляют
собой мембранные гликопротеины, специфичные для вида, и
содержатся в соединительной ткани в составе растворимого и
полимерного коллагена и эластина. Свободные (растворимые)
гликопротеины поступают в кровь и индуцируют иммунные реакции
против растворимых, полимерных антигенов соединительной ткани и
эластина.
Установлено, что филогенетически гликопротеины характерны
для всех видов — от бактерий до высших животных. У человека они в
значительном количестве содержатся в эмбриональных тканях, в
тимусе, селезенке — органах, богатых ретикулярной тканью и
гликопротеинами, участвуют в селекции и супрессии клонов
иммунокомпетентных клеток. В пожилом возрасте возникают
иммунокомпетентные клетки — мутанты, которые реагируют со
структурными гликопротеинами и тем самым вовлекают
соединительную ткань в возрастную патологию. С возрастом
уменьшается тканевая регенерация и повышается частота ошибок
распознавания клетки клеткой. При этом гликопротеины являются
предшественниками распознающих структур.
Окончательно не установлено, какую (этиологическую или
патогенетическую) роль играют нарушения иммунной системы в
процессе старения. Многие болезни пожилого возраста имеют
иммунологическую природу, поэтому направленным воздействии ем на
иммунную систему можно затормозить процессы старения.
 ЭКОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Экология (от греч. оiкоs — дом, место обитания) мик-

роорганизмов изучает взаимоотношения микроорганизмов или их
сообществ между собой и окружающей средой. Микроорганизмы в
природе распространены повсеместно. Они населяют почву, воду,
воздух, растения, организмы животных и человека.
Взаимоотношения между микроорганизмами различных групп
весьма разнообразны. Совместное существование двух различных
организмов называется симбиозом (от греч. sуmbiosis — совместная
жизнь). Симбиотические взаимоотношения можно подразделить на
ассоциативные и конкурентные. К ассоциативным взаимоотношениям
относятся мутуализм, метабиоз, комменсализм, сателлизм.
Мутуализм — это взаимовыгодные отношения. Микроорганизмы,
обмениваясь продуктами жизнедеятельности, оказывают благоприятное
влияние друг на друга и совместно развиваются значительно лучше, чем
каждый из них в отдельности. Так, жизнедеятельность анаэробных
бактерий в поверхностных слоях почвы возможна только в результате
снижения окислительно-восстановительного потенциала,
осуществляемого аэробными микробами, которые, в свою очередь,
используют органические кислоты, образуемые анаэробными
микроорганизмами.
Метабиоз характеризуется последовательной сменой одних групп
микроорганизмов другими на основе использования продуктов
жизнедеятельности предшествующих групп. Например,
аммонифицирующие бактерии образуют аммиак, который затем
окисляют до нитратов нитрифицирующие бактерии.
Комменсализм характеризуется такими взаимоотношениями особей
разных видов, при которых выгоду из симбиоза извлекает один вид, не
причиняя вреда другому. Бактерии, составляющие нормальную
микрофлору тела человека, являются комменсалами.
Сателлизм — взаимоотношения стимуляции одного вида мик-
роорганизмов другим. Например, колонии дрожжей или сарцин, выделяя
в питательную среду продукты жизнедеятельности, сти-
136
 мулируют рост колоний микроорганизмов, более требовательных
к питательным средам вокруг.
К конкурентным взаимоотношениям относят антагонизм, при
котором один вид микроорганизмов угнетает жизнедеятельность другого
за счет образования вредных продуктов, приводящих к повреждению или
гибели другого. Открытие явления антагонизма принадлежит Л. Пастеру.
Он описал гибель возбудителя сибирской язвы при совместном его
культивировании с синегнойной палочкой. Известны антагонистические
взаимоотношения нормальной микрофлоры толстого кишечника
человека — лактобактерий, кишечной палочки, бифидобактерий в
отношении гнилостных микробов, возбудителей дизентерии и т. д.
Антагонистические взаимоотношения возникают в борьбе за
вещества питательного субстрата, использование молекулярного
кислорода и др. Такого рода воздействия, препятствующие жизненным
проявлениям микробов, называются антибиозом. Отсюда и произошло
название «антибиотики».
Бактериоцины являются исходной субстанцией для получения
антибиотиков природного происхождения. Наиболее активные
продуценты антибиотиков — плесневые грибы и актиномицеты.
Пенициллин продуцируют плесневые грибы Реnicilium сhrуzogenum и
др. Из актиномицетов получено большинство антибиотиков:
стрептомицин, тетрациклин, хлоромицетин, биомицин, неомицин,
нистатин, канамицин и др.
Крайним проявлением конкурентных взаимоотношений
микроорганизмов является паразитизм, когда один микроорганизм
использует другой как источник питательного субстрата. Так, в 1963 году
была описана бактерия-паразит — Вdеlоribrio bасtеriororum, которая
паразитирует на многих грамположительных и грамотрицательных
бактериях. Настигнув бактерию, Вdеlоribrio пробуравливает клеточную
стенку и внедряется в клетку. Через 3—5 часов в клетке бактерии-жертвы
образуется от 20 до 50 клеток-паразитов. Типичным примером
паразитизма являются взаимоотношения вирусов бактерий —
бактериофагов с микробными клетками.
Антагонизм может проявляться при конкуренции за источники питания
в том, что те микроорганизмы, которые размножаются более интенсивно,
быстро используют питательный субстрат, подавляя рост других
микробов. Существуют взаимоотношения хищничества между
микроорганизмами. Например, амеба в кишечнике может захватывать и
переваривать бактерии.
Несомненно, что характер взаимоотношений микроорганизмов между
собой и окружающей средой определяет ту или иную экологическую
нишу, которую занимает каждый вид микробов. Поэтому немаловажное
значение имеют взаимоотношения микробов с физическими и
химическими факторами внешней среды.
137
 ФИЗИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Температура — наиболее мощный фактор воздействия.
Прокариоты не имеют физиологического механизма, регулирующего
температуру клетки, и, следовательно, их жизнедеятельность зависит от
температуры окружающей среды. Микробы обладают сравнительно
высокой приспособляемостью к температурным условиям. У сапрофитов
она выражена широкими диапазонами, у патогенных микроорганизмов
ограничена температурой тела хозяина. Например, сенная палочка
способна размножаться при температуре от 5 до 57 °С, тогда как
гонококк только при 35—37 °С. В то же время для каждого вида
микробов как сапрофитов, так и патогенных существуют температурные
границы — оптимум, минимум, максимум.
Оптимальной температурой является та, при которой микробы
лучше всего растут и развиваются. Минимальной температурой
считается та, ниже которой микроб не способен к развитию.
Максимальная температура является предельной, выше которой рост
микроба не происходит.
Все микроорганизмы объединены в три физиологические группы,
приспособившиеся в процессе эволюции к жизни при определенных
температурах: психрофилы, мезофилы, термофилы. Для психрофилов
температурный оптимум 15—20°С, для мезофилов — 30 °С, термофилов
— 50—60°С. Группа мезофильных микроорганизмов является наиболее
обширной, куда относится большинство сапрофитов и все патогенные
микробы.
Микробы чрезвычайно устойчивы к низким температурам (до минус 190
—253 °С). Механизм действия низких температур на микробную клетку
заключается в затормаживании в ней процессов метаболизма,
прекращении роста и размножения и переходе микроба в состояние
анабиоза, в котором он может существовать многие месяцы. В
анабиотическом состоянии микробы не вызывают гниения, что широко
используется в промышленности, быту (хранение продуктов в
холодильнике).
В микробиологической практике широко применяется длительное
хранение микробов, например, вакцины в высушенном виде из
замороженного состояния (так называемая лиофильная сушка).
Повторное замораживание и оттаивание вызывают гибель микробов.
В отличие от низких высокие температуры оказывают губительное
действие на микроорганизмы. Чем больше выходит температура за
пределы максимума, тем быстрее гибнут вегетативные клетки. Споры
бактерий значительно устойчивее к действию высокой температуры из-за
малого содержания в них свободной воды, высокой концентрации
кальция и прочной оболочки. При повышении температуры выше
максимального предела наблюдается
138
 выделение РНК из клетки, нарушается активность ферментных
систем, происходит денатурация белков, что в конечном счете вызывает
необратимую деградацию клеточных структур.
Применение высокой температуры является самым
распространенным, удобным и надежным способом стерилизации. Сте-
рилизация — это освобождение от микробов различных объектов.
Влияние высушивания. Развитие прокариот, как и любых дру-
гих организмов, в первую очередь зависит от степени влажности. Именно
наличие влаги определяет уровень процессов метаболизма в клетке,
поступление в нее веществ питательного субстрата, энергию роста и
размножения бактерий. Отдельные группы прокариот характеризуются
разнообразной потребностью к условиям влажности и по-разному
реагируют на высушивание. Большинство бактерий нормально
развиваются при влажности среды свыше 20 %.
Высушивание бактерий приводит к обезвоживанию цитоплазмы
клетки, почти полному прекращению процессов метаболизма и в
конечном итоге переходу клетки микробов в состояние анабиоза. На
отношении микроорганизмов к высущиванию издавна основано хранение
пищевых продуктов в сухом состоянии, в аптеке — лекарственного
растительного сырья. .
Однако и в условиях иссушения бактерии сохраняют жизне-
способность. Так, микобактерии туберкулеза сохраняют
жизнеспособность в высохшей мокроте больного более десяти месяцев,
споры бацилл сибирской язвы в сухом состоянии выживают до десяти
лет.
Различные виды излучения оказывают бактерицидное
(убивающее) действие на микробы. Действие излучений на прока-риоты
зависит от их энергии и дозы облучения. Инфракрасное излучение не
способно вызывать какие-либо существенные изменения в живых
клетках. Рентгеновские лучи заключают в себе огромную энергию,
которая приводит к развитию мутаций или гибели клетки.
Сильным мутагенным эффектом обладают ультрафиолетовые
лучи. Их используют при обеззараживании продуктов питания,
лабораторной посуды, воздуха помещений, обработке биологических
препаратов — вакцин и сывороток.
Ультразвук (высокочастотные колебания звуковых волн)
оказывает мощное бактерицидное действие на прокариотов. Механизм
действия заключается в необратимых физико-химических изменениях
компонентов клетки и повреждениях всех клеточных структур. В
настоящее время УЗ-датчики применяются для стерилизации вакцин,
лабораторного оборудования.

Микробы устойчивы к повышенному атмосферному давлению

(200—900 атм. на дне морей, океанов). Споры выдерживают давление до
20 000 атм.
139
 ВЛИЯНИЕ ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ
Бактерицидное действие химических веществ имеет огромное
практическое значение, поскольку их используют для дезинфекции —
уничтожения патогенных микробов во внешней среде и обеззараживания
патологического материала, полученного от больных.
В качестве дезинфицирующих средств применяют галоиды,
окислители, фенолы и их производные, тяжелые металлы, кислоты,
щелочи, спирты, газообразные вещества. Губительное действие ряда
соединений обусловлено производимыми ими окислительными
реакциями в цитоплазме клетки, нарушениями деятельности ферментов.
Основой бактерицидного действия солей тяжелых металлов является
их коагулирующее воздействие на белки цитоплазмы. В дезинфекционной
практике используются такие хлорсодержащие вещества:
хлорная известь — 10—20 %;
осветленные растворы хлорной извести — 0,2—0,5 %;
сухая хлорная известь;
хлорамины (Б и ХБ);
дезам (50 % хлорамин Б + щавелевая кислота);
пантоцид (таблетки, содержащие 4 мг активного хлора);
формалин (35—40 %-ный водный р-р формальдегида);
фенол (кристаллическая карболовая кислота);
лизол А и Б;
моющие средства — это детергенты, обладающие высокой
поверхностной активностью и в связи с этим моющим, некоторым
дезинфицирующим и растворяющим действием;
соли тяжелых металлов, ртути (сулема и др.) — применяют редко,
поскольку они токсичны и малоэффективны.
Кислоты применяются в смеси с другими дезинфицирующими
средствами. Бактерицидное действие кислот на микробную клетку
основано на обезвоживании цитоплазмы, растворении и расщеплении
белков. Использование кислот в дезинфицирующей практике значительно
сужается, так как они вызывают порчу обрабатываемых поверхностей.
Щелочи обладают бактерицидными, вирулицидными и спо-
роцидными свойствами. Они разрушают микроорганизмы, вызывают
гидролиз белков, омыляют жиры, расщепляют углеводы, вызывают
набухание и изменяют осмос микробной клетки. В практике
обеззараживания щелочи не нашли широкого применения, так как
разъедают кожные покровы, раздражают слизистые оболочки глаз,
повреждают обрабатываемые ткани.
Спирты обладают слабыми бактерицидными свойствами.
Бактерицидная эффективность спиртов зависит от коагулирующего
140
 действия их на микроорганизмы и изменения поверхностного
натяжения. Спирты проникают в клетку, отнимают от нее воду и
свертывают белки. Максимально выражены бактерицидные свойства у 70
%-ного спирта. Он медленнее свертывает белки и поэтому лучше
проникает в глубь микробной клетки.
Наряду с дезинфицирующими в медицинской практике широко
применяются антисептические средства, или антисептики. Антисептика
(от анти... и греч. septicos — гнойный) — метод предупреждения
заражения и лечения инфицированных ран воздействием на патогенные
микробы химическими соединениями.
До появления антисептиков хирургическое лечение резко
ограничивалось из-за послеоперационных осложнений. В 1867 году
английский хирург Д. Листер впервые разработал теоретически
обоснованный метод борьбы с микроорганизмами, попавшими в рану.
С появлением антибиотиков внимание к антисептикам
уменьшилось и круг их применения сузился. Вместе с тем многолетний
опыт использования антибиотиков показал, что они не сдерживают в
полной мере рост инфекционных и гнойно-воспалительных заболеваний.
Этот факт и ряд негативных сторон применения антибиотиков
возобновили интерес к антисептикам. В настоящее время
антисептические средства определяют как химические препараты в
основном длительного микробостатического действия, хорошо
переносимые кожей, слизистыми оболочками и раневыми
поверхностями, растворимые в липидах и плохо или умеренно
растворимые в воде, используемые в различных лекарственных формах
для обработки кожи, слизистых оболочек, ран, полостей с целью лечения
инфекционных поражений или их предупреждения.
Классификация антисептических средств учитывает следующие
их характеристики:
происхождение — неорганические вещества; биоорганические
вещества и их синтетические аналоги; органические соединения
абиогенной (синтетической) природы;
химическое строение — галогены и их органические и неор-
ганические производные (хлорамин, пантоцид, спиртовый раствор йода,
раствор Люголя, йодоформ); окислители — перекись водорода и
перманганат калия; альдегиды; спирты (этиловый спирт); тяжелые
металлы и их органические и неорганические соли (сулема, ртутные мази,
протаргол, нитрат серебра и ДР.); красители (этакридин, метиленовый
синий, бриллиантовый зеленый);
фенол и его производные; 8-оксихинолины; 4-хинолины;
хиноксолины; нафтилидины; нитрофураны; четвертичные аммониевые
соединения и их аналоги; производные высших жирных кислот,
антисептики растительного и животного происхождения; антибиотики
антисептического назначения (грамицидин); иммобилизованные
антисептики;
141
 направленное действие — антибактериальные, антивирусные,
противогрибковые, антипаразитарные;
механизм действия — деструктивные, окислительные, мем-
браноатакующие, антиметаболические, антиферментные;
спектр антимикробного действия — универсальные, широкого,
умеренного и узкого спектра;
конечный эффект — микробоцидные; микробостатические;
микробостатичноцидные; снижающие численность микробной
популяции;
состав — монопрепараты; комплексные, многокомпонентные
лекарственные средства;
цель — профилактические; терапевтические; лечебно-профи-
лактические; бинарные (антисептического и химиотерапевтического,
антисептического и дезинфицирующего назначения); многоцелевые
(фармакоантисептические);
место аппликации — раневые (хирургические); кожные;
пероральные; офтальмологические; отоларингологические; урологи-
ческие; генитальные; стоматологические, ингаляционные; доставляемые
к месту действия кровеносной или лимфатической системой.
Наиболее широко применяются такие антисептические средства как
ПАВ (поверхностно-активные вещества) анионного и катионного типов.
К группе анионных ПАВ относятся щелочные мыла, производные
алкилсульфатов и алкил-(арил)-сульфонов, натрия холеат.
К катионным ПАВ принадлежит вся группа четвертичных
аммониевых соединений: цетовлон, цетримид, бензалконийхлорид,
бензетхонийхлорид, этоний, декаметоксин, дегмин, церигель,
хлоргексидин, деквалин и др. Йодоформ как антисептическое средство
может относиться к анионным, катионным, амфолитным и неионным
ПАВ.
В последнее время большое внимание уделяется созданию
иммобилизованных антисептиков. Они слагаются из носителя (матрицы)
и активнодействующего вещества. По сравнению с другими
антисептическими средствами оказывают менее выраженный побочный
эффект на организм больного, потому что длительно и равномерно
освобождают активные вещества в среду, замедляют всасывание
действующих веществ в кровь и лимфу, блокируют биотрансформацию и
противодействуют выделению антимикробных веществ с места
аппликации.
К иммобилизованным антисептикам, которые нашли применение в
различных областях медицины, особенно в хирургии, относятся
антимикробные нити и марля, тканые и нетканые материалы, гранулы,
пленки, бактерицидные повязки, гидрогелевые перевязочные материалы
и пр. .

142
 МИКРОФЛОРА ПОЧВЫ
Почва является благоприятной средой для микроорганизмов, так как
здесь имеются питательные вещества и влага, необходимые для их
размножения и развития. Распределение микроорганизмов в почве
неравномерно и зависит от количества органических веществ,
климатических воздействий и от многих других факторов.
Поверхностный слой почвы беден микроорганизмами вследствие
прямого влияния таких факторов внешней среды как ультрафиолетовые
лучи, высокие температуры, высушиваиие и т. д. Большинство
микроорганизмов почвы развиваются при нейтральном рН, высокой
относительной влажности и температуре 25—45°С.
Наибольшее количество микроорганизмов содержится в верхнем
слое почвы на глубине 5—15 см. Здесь находят благоприятные условия
амебы, инфузории, грибы, водоросли, актиномицеты, бактерии. По мере
углубления в почву содержание микроорганизмов уменьшается и на
глубине 3—4 м встречаются лишь единичные экземпляры. Если сравнить
количество микробной массы на различных почвах, то на
малоплодородные почвы приходится до 3 т, на высокоплодородные — до
16т микробной массы на 1 га.
На количество микроорганизмов в почве влияет и растительный
покров: у корневой зоны растений их значительно больше, я чем вне
корневой зоны. Это объясняется тем, что в ризосфере (прикорневая зона
растений) микробы развиваются за счет корневых выделений и
продуктов, образующихся при разложении отмирающего эпителия
корневых волосков.
В почве живут азотфиксирующие бактерии — это клубеньковые
бактерии; специфичные для каждого вида бобовых растений,— клевера,
сои, гороха, фасоли, люцерны. При благоприятных условиях
клубеньковые бактерии могут зафиксировать на 1 га за год до 200 кг
атмосферного азота, при этом значительно повышается плодородие почв.
Свободноживущие азотфиксаторы развиваются и фиксируют азот в почве
независимо от растений — это азотобактер, цианобактерии или сине-
зеленые водоросли.
К почвенным бактериям относят аммонифицирующие бактерии,
осуществляющие минерализацию белков при гниении органических
остатков: Ваcillus subtilis, Ваcillus mусоides, Ваcillus megaterium и др.
Бактерии рода Рsеudоmопаs: Рs. fluorescens и Рs. аеruginosа участвуют в
процессе восстановления нитратов до молекулярного азота.
Обычно почва является неблагоприятной средой для большинства
патогенных видов бактерий, вирусов, грибов и простейших, поскольку в
ней отсутствуют необходимые питательные вещества и другие условия
для их размножения. Тем не менее
143
 некоторые из них могут сохраняться в почве от нескольких дней до
нескольких месяцев, например, возбудители дизентерии, брюшного тифа,
энтеровирусных инфекций, бруцеллеза, туберкулеза, туляремии,
лептоспироза. Наиболее длительное время в почве сохраняются
спорообразующие бактерии: клостридии столбняка, ботулизма, газовой
анаэробной инфекции, бациллы сибирской язвы (десятки лет).
Патогенные микроорганизмы могут попадать в почву с фекалиями,
трупами, хозяйственно-бытовыми отходами и в дальнейшем
распространяться через воду, траву, овощи или с помощью грызунов и
насекомых.
В почве обитают патогенные грибы, которые, проникая в ор-
ганизм, вызывают такие заболевания как аспергиллез, гистоплазмоз и
микотоксикозы.
Учитывая роль почвы как фактора передачи некоторых ин-
фекционных заболеваний животных и человека, в санитарно-эпи-
демиологической практике проводится обеззараживание почвы,
принимаются меры, предотвращающие ее загрязнение патогенными
микроорганизмами. Наличие в почве микроорганизмов, попадающих
туда с испражнениями, является показателем ее санитарно-
эпидемиологического неблагополучия.
Для характеристики обсеменения почвы микрофлорой человека и
животных выбраны такие санитарно-показательные микроорганизмы:
Еsherichiа соli, Streptococcus faecalis, С1оstridium реrfringens. Если С1.
рerfringens присутствует в почве без Е. соli, это показатель старой
фекальной загрязненности среды. Наличие в почве Streptococcus faecalis
свидетельствует о свежем фекальном загрязнении. Для количественной
характеристики микробного загрязнения почвы используют микробное
число — общее количество микроорганизмов в 1 г почвы; коли-титр —
наименьшее количество исследуемого материала, в котором
обнаруживается жизнеспособная клетка Е. соli; перфрингенс-титр почвы
— наименьшее количество почвы, в котором содержится одна клетка С1.
реrfringens; коли-индекс почвы — количество Е. соli в 1 г исследуемой
почвы.

МИКРОФЛОРА ВОДЫ
Микрофлора воды во многом отражает микробный пейзаж
почвы. С точки зрения экологии микрофлору воды подразделяют на
собственно водную — автохтонную и поступающую в воду из почвы,
воздуха, со сточными водами.

Постоянную микрофлору естественных водоемов составляют

Рseudomonas fluorescens, Васterium аquatilis, Мiсrосocсus rоseus и другие
аэробные бактерии. В иле болот, нефтяных скважинах, илистых
отложениях морей и океанов встречаются анаэробные метанообразующие
бактерии.
144
 Наибольшее количество микроорганизмов содержится в от-
крытых водоемах и реках, особенно в поверхностных и прибрежных
водах. Здесь обитают железобактерии, псевдомонады, аэромонады, сине-
зеленые и пурпурные бактерии. Водоемы, располагающиеся возле
крупных городов, как правило, богаты микроорганизмами в результате
их загрязнения. Особенно сильно загрязняют поверхностные воды
целлюлозно-бумажные и текстильные фабрики, химические,
металлургические и нефтеперерабатывающие предприятия, горные
установки, а также сельское хозяйство. Большие количества
органических соединений азота и фосфора попадают в водоемы со
стоками животноводческих ферм и канализационными стоками.
Для характеристики степени загрязнения природных водоемов в
экологии применяют понятие cапробности (от греч. sарrоs — гнилой).
Полисапробная зона — богатая органическими остатками сильно
загрязненная вода. Количество микробов в 1 мл достигает 1×10 6 и более.
Здесь преобладают бактерии, вызывающие процессы гниения и
брожения, с выделением метана, например. Вас. се11ulosае, mеtаnicum.
Мезосапробная зона — зона умеренного загрязнения, где происходят
процессы нитрификации — окисления аммиака, образующегося при
разложении органических азотсодержащих веществ. Количество
микробов в 1 мл воды колеблется в пределах сотен тысяч.
Олигосапробная зона — зона чистой воды, в ней мало органических
веществ, количество микроорганизмов в 1 мл составляет от нескольких
десятков до сотен.
Таким образом, микроорганизмы могут принимать участие в
процессах самоочищения природных водоемов, расщепляя органические
отходы, загрязняющие их среду обитания. Этот процесс может быть
широко использован человеком для переработки домашних отходов и
отходов пищевой промышленности.
Некоторые ученые считают, что микроорганизмы, аккумулирующие в
своих клетках тяжелые металлы и химические вещества, ядовитые для
человека и животных, можно использовать для очистки промышленных
отходов на предприятиях, прежде чем эти отходы будут спущены со
сточными водами.
При попадании в водоемы плохо обработанных или совсем
необработанных канализационных стоков населенных пунктов и
животноводческих ферм вода становится фактором передачи кишечных
инфекций. Патогенные микроорганизмы могут длительное время
сохранять в воде свою жизнеспособность. Так, возбудители брюшного
тифа, дизентерии, лептоспироза, гепатита А, полиомиелита сохраняются
от нескольких дней до не-
145
 дель. Холерный вибрион и легионеллы могут даже размножаться в
воде.
Вода артезианских скважин практически не содержит мик-
роорганизмов, поскольку они задерживаются верхними слоями почвы.
Степень биологического загрязнения воды оценивают по коли-
титру и коли-индексу. Коли-индекс показывает количество клеток Е. соli
в 1 л воды. Коли-титр — это наименьшее количество исследуемого
материала, в данном случае воды, в котором обнаружена жизнеспособная
Е. соli.

МИКРОФЛОРА ВОЗДУХА
Микрофлора воздуха очень разнообразна и ее количес-
твенный и качественный состав определяется степенью загрязнения
воздуха пылью, копотью, сажей, другими продуктами жизнедеятельности
человека, сезоном года, климатом и влажностью. Поскольку частицы
пыли и дыма обладают способностью адсорбировать множество
микроорганизмов, большее количество микробов находится в воздухе
крупных городов, меньшее — в сельской местности, над лесами, морями
и горами.
Микроорганизмы поступают в воздух с частицами пыли из
почвы, растений, от человека и животных. Воздух не является средой,
благоприятной для роста и размножения микробов, в нем нет
питательных веществ, влаги и оптимальной температуры, губительно
действуют ультрафиолетовые лучи, высушивание. Поэтому микрофлора
воздуха представлена пигментообразующими сапрофитными
бактериями. Наличие пигмента предохраняет их от неблагоприятного
влияния ультрафиолета. Кроме того, в воздухе обнаруживаются
спорообразующие бациллы, дрожжевые и плесневые грибы, вирусы.
Количество микроорганизмов в закрытых помещениях опре-
деляется санитарно-гигиеническим режимом этих помещений.
Скопление людей, плохая вентиляция, слабое естественное освещение,
редкое мытье полов создают условия для накопления в воздухе
микробов. При этом патогенные микроорганизмы, попадая в воздух от
больных людей или носителей, образовывают в воздухе капельную,
капельно-ядерную и пылевую фазы аэрозоля. Таким образом, через
воздух могут передаваться возбудители гриппа, коклюша, кори,
туберкулеза, стафилококковой и менингококковой инфекций и т. д.
Косвенно о наличии патогенных микроорганизмов в воздухе помещений
можно судить по присутствию таких санитарно-показательных бактерий
как золотистый стафилококк, зеленящий стрептококк, показателем
прямой эпидемиологической опасности является наличие
гемолитических стрепто- и стафилококков.
146
 Проветривание помещений, влажная уборка в сочетании с вен-
тиляцией и обработка помещений лампами ультрафиолетового об-
лучения ведет к снижению микробной обсемененности воздуха.

РОЛЬ МИКРООРГАНИЗМОВ В
КРУГОВОРОТЕ ВЕЩЕСТВ В ПРИРОДЕ
В природе постоянно осуществляются два противоположных
процесса — синтез сложных органических веществ из минеральных и
разложение органических соединений до минеральных. В процессах
превращения веществ в природе микроорганизмы принимают самое
активное участие. Рассмотрим наиболее важные из них для жизни
человека, животных и растений — круговорот азота, углерода, фосфора,
серы, железа.
В круговороте азота различают такие этапы: усвоение
атмосферного азота, аммонификацию, нитрификацию и
денитрификацию.
К основным видам азотфиксирующих бактерий, которые не-
зависимо от растений свободно обитают в почве, относят Аzоtоbасtег
сhrоососсum и С1оstridium раstеuranum. В молодых культурах
Аzоtоbасtег сhrоососсum представляет собой крупные (4—6 мкм)
грамположительные палочки, которые в последующем приобретают
округлую форму, соединяясь в виде диплококков или сарацин,
окруженных общей капсулой.
С1оstridium раstеuranum фиксирует атмосферный азот в анаэробных
условиях, кроме того, может вызывать и маслянокислое брожение. Это
полиморфный микроорганизм, споры его имеют треугольную форму,
окружены студенистой капсулой. Способностью фиксировать
атмосферный азот обладают клубеньковые бактерии, живущие на корнях
таких бобовых растений, как горох, люпин, вика, клевер и т. д.
Для повышения плодородия почвы в растениеводстве исполь-
зуют препарат азотобактерин, состоящий из живой культуры азо-
тобактера, и нитрагин — из живых клубеньковых бактерий, которые
вносят под бобовые культуры.
Сложные органические азотсодержащие соединения попадают в
почву с разлагающимися отмершими растениями, выделениями и
трупами животных. Гнилостные микробы выполняют роль санитаров,
очищая почву и воду от разлагающихся органических веществ. Процесс
образования аммиака при разложении азотсодержащих органических
соединений, происходящий с участием аммонифицирующих микробов,
выделяющих протеолитические ферменты, называется аммонификацией,
или минерализацией. Аммонификацию вызывают микроорганизмы,
разлагающие мочевину, спорообразующие аэробные и анаэробные
бактерии, неспорообразующие аэробы, актиномицеты, плесневые грибы
рода Рenicillium, живущие в почве.
147
 Аммонификация в кислородных условиях называется тлением. Ее
осуществляют картофельная палочка — Ваcillus mesentericus; капустная
палочка — Ваcillus megaterium; сенная палочка — Ваcillus subtilis;
грибовидная палочка — Ваcillus mусоides; не образующие спор:
кишечная палочка —Е. соli; Рroteus vulgaris. В анаэробных условиях
происходит гниение органических остатков, которое осуществляют
С1оstridium sporogenes; С1оstridium putrificum и т. д.
Разложение мочевины, выделяющейся с мочой человека и жи-
вотных, вызывают уробактерии. При этом образуется аммиак, вода и
углекислый газ. Продукты жизнедеятельности аммонифицирующих
микроорганизмов могут усваиваться высшими растениями в виде солей
аммония, хотя более пригодными являются азотнокислые соли —
селитры.
Образование азотнокислых солей (нитратов) связано с ми-
нерализацией азотсодержащих соединений сначала в азотистую, а затем
в азотную кислоты.
Первую стадию нитрификации осуществляют бактерии рода
Nitrosomonas; вторую — Nitrobacter. В почве образовавшаяся азотная
кислота вступает в соединение со щелочами, в результате чего
образуются селитры:
HNO3 + KOH = KNO3 + H2O;
2HNO3 + Са(ОН)2 = Са(NO3)2 + 2Н20.
Таким образом, образующиеся нитраты повышают плодородие почв.
В то же время существует и обратный процесс — денитрифи-кации —
восстановления нитратов с образованием в качестве конечного продукта
молекулярного азота, что приводит к снижению плодородия почв.
Наиболее распространенными бактериями, вызывающими процесс
денитрификации, являются: Рseudomonas fuorescens, Рs. аеruginosa, Рs.
Stutzeri.
Процесс круговорота углерода имеет важное значение в жиз-
недеятельности организмов, так как 50 % живой материи состоит из
углерода. При этом аутотрофные микроорганизмы, используя солнечную
(сине-зеленые, пурпурные бактерии) и химическую энергию (тионовые
бактерии), наряду с зелеными растениями принимают участие в
превращении углекислого газа в органические вещества. Обратный
процесс разложения органических безазотистых соединений с
выделением углекислого газа происходит, как правило, при окислении
или брожении, вызываемом различными микроорганизмами. Так,
целлюлозные бактерии разлагают клетчатку растений с высвобождением
углекислого газа, поступающего в атмосферу и гидросферу. Клетчатку в
аэробных условиях могут разлагать также актиномицеты и грибы родов
Аsреrgillus, Реnicillium и др.
148
 Спиртовое брожение вызывают дрожжевые грибы, имеющие ,
фермент зимазу. Дрожжи широко распространены в окружающей среде
на плодах, листьях и стеблях растений.
Пекарские, или хлебные дрожжи Sассharоmусеs сегеvisiае —
овальные клетки размером 8—10 мкм, вызывающие верховое бро- жение
при температуре до 24°С с обильным выделением газа; используют в
хлебопечении и виноделии. При температуре до 10°С дрожжи
размножаются медленно в нижних слоях и используются в пивоварении.
Тоru1а керhir — кефирные дрожжи овальной или округлой формы,
располагаются в кефире колониями.
Спиртовое брожение можно представить как ферментацию cахаров
до спирта и углекислого газа таким уравнением:
С6Н12 O6 = 2СН3СН2ОН + 2СО2 + 27 ккал.
Молочнокислое брожение происходит с образованием молочной
кислоты и вызывается такими микроорганизмами как: Strерtососсus
1асtis — располагаются обычно цепочками; Васt. bulgaricum — впервые
выделены И. И. Мечниковым из болгарской простокваши; Васt.
асidofillum, Васt. саsеi, Васt. Delbrucki — неспоровые палочки,
используются в промышленности как продуцент молочной кислоты;
Васt. brassicum — основные возбудители брожения при сквашивании
капусты. Перечисленные молочнокислые бактерии являются
антагонистами гнилостных микробов, поэтому молочнокислые
продукты используют для лечения и профилактики кишечных
заболеваний, вызванных гнилостными микробами.
Маслянокислое брожение вызывается маслянокислыми микробами
С1оstridium pasteurianum, С1. ресtоnоvоrum, С1. felsineum —
спорообразующими анаэробами. Споры устойчивы к высоким
температурам, могут переносить стерилизацию при температуре 120°С,
сохраняя жизнеспособность в мясных и рыбных консервах. Суммарно
маслянокислое брожение можно представить следующим уравнением:
С6Н12 O6 = СН3СН2 СН2ОOН + 2СО2 + H2+20 ккал.
Размножаясь в консервах, возбудители маслянокислого брожения
вызывают вздутие (бомбаж) банок. При этом накапливаются ядовитые
продукты, так как одновременно с углеводами микробы разлагают жиры
и белки, образуя ацетон, бутиловый спирт. Основной продукт
маслянокислого брожения — масляная кислота.
Круговорот фосфора, серы и железа происходит также при
участии микроорганизмов. Фосфор — элемент, входящий в состав
нуклеиновых кислот и других органических соединений,
149
 сера — в состав аминокислот, необходимых для синтеза белка,
железо — в состав белка гемоглобина. С помощью железобактерий,
серобактерий, гнилостных бактерий органические вещества
растительного и животного происхождения минерализуются до углерода,
азота, серы, фосфора, железа.

МИКРОБИОЦЕНОЗЫ ЧЕЛОВЕКА
С современных экологических позиций нормальную
микрофлору человека следует рассматривать как совокупность
множества микробиоценозов, характеризующихся определенным
качественным и количественным составом и занимающих конкретные
биотопы в организме.
На коже и слизистых оболочках, в открытых полостях чело-
веческого организма присутствуют смешанные микробные популяции,
составляющие нормальную (индигенную) микрофлору, или аутофлору.
Она включает в себя сотни видов микроорганизмов, а их общая
численность превышает 1013 клеток.
Макроорганизм и его микрофлора — взаимосвязанные и вза-
иморегулируемые биологические системы. Для каждой области тела
характерна своя микрофлора. Различают автохтонную — постоянно
присутствующую микрофлору, стабильную по составу и
обнаруживаемую в определенной локализации у людей одной
возрастной категории, и аллохтонную — транзиторную, рас-
сматриваемую как добавочная, случайная флора.
Критериями автохтонности вида микроорганизма считаются:
колонизация им определенного биотопа и постоянное присутствие у
всех взрослых особей; высокий популяционный уровень;
способность размножаться в анаэробиозе; тесная связь с эпителием
слизистых оболочек или кожи. Такие микроорганизмы являются
сапрофитами. Их развитие в тех или иных биотопах обусловлено рядом
соответствующих физиологических факторов — температурой,
влажностью, рН, наличием питательных субстратов.
Представители аутофлоры фиксируются в определенных местах
кожи и слизистых путем взаимодействия поверхностных бактериальных
структур — мембран и пилей, содержащих вещества гликолипидной
природы с рецепторами (гликопротеинами) мембран эпителиальных
клеток. Прикрепившись, микроорганизмы продуцируют вещества,
образующие биопленку толщиной от долей до десятков мкм. Она
состоит из экзополисахаридов микробного происхождения, муцина,
продуцируемого клетками хозяина, и миллиардов микроколоний. В
составе такой биопленки микроорганизмы гораздо более устойчивы к
внешним, в том числе инфекционным, факторам. Этот факт является
базисным для
150
понимания роли нормальной микрофлоры в противоинфекционной
защите организма.
При формировании индивидуального микробного пейзажа
человеческого организма некоторую роль играет генотип, определяя
белковую структуру рецепторного аппарата клеток, белковую
специфичность муцина и т. п. Образование микробных экосистем тела
человека — это эволюционно сложившееся биологическое явление,
предполагающее динамическое равновесие между микрофлорой и
иммунитетом. Иммунная система, осуществляющая контроль за
антигенным постоянством организма, во многом определяет характер
аутофлоры и способствует поддержанию ее стабильности. Некоторые
представители нормальной микрофлоры не индуцируют
антителообразование; другие — имеют одинаковые антигенные
компоненты с клетками тканей человека (явление иммунологической
мимикрии).
Транзиторные микроорганизмы являются непатогенными или
условно-патогенными микробами, попадающими в организм человека из
окружающей среды; при этом, не являясь его постоянными обитателями
и не вызывая заболеваний, они могут находиться в течение различного
времени на коже и слизистых оболочках.
Кровь и внутренние органы, не сообщающиеся с внешней
средой, стерильны. Из кишечника и других полостей в них могут
попадать микроорганизмы, но они уничтожаются факторами не-
специфической резистентности. Естественные механизмы защиты
препятствуют проникновению микробов в такие полости как матка и
мочевой пузырь. Крайне мало микроорганизмов в легких, поскольку
большинство из них не проходит секреторных барьеров.
Кожа, слизистые оболочки глаз, верхних дыхательных путей,
желудочно-кишечного тракта, наружных половых органов имеют
нормальную микрофлору.
Рассматривая вопросы количественного и качественного состава
микрофлоры человека, необходимо отметить, что современные
технические методы не позволяют культивировать до 50 %
составляющих ее анаэробных бактерий, это затрудняет создание
объективной микроэкологической карты человеческого организма. Такие
микроэкологические исследования представляются одной из
интереснейших перспектив в развитии микробиологии будущего.

Нормальная микрофлора кожи

Кожа относится к открытым экосистемам, подверженным
регулярному разрежению, приводящему к утрате микроорганизмов.
Вследствие постоянного контакта с внешней средой она
151
 чаще всего становится местом обитания аллохтонных микроор-
ганизмов. Кроме них, существует автохтонная микрофлора, состав
которой различен в соответствии с особенностями секреции, а также
близостью к слизистым оболочкам (рот, нос, перианальная область).
Кожа представляет собой естественный биотоп, населенный
большим количеством аэробных и анаэробных микроорганизмов.
Доминирующее положение в кожном микробиоценозе занимают кокки
— представители родов: Мicrососсus (М. luteus, М. sеdentаrius),
Stарhу1осoccus (S. ерidermidis, S. hаеmо1уticus, S. intermedius),
Рерtососсus; Strерtососcus (S. viridens, S. faecаlis); дифтероиды —
пропионибактерии, коринебактерии (С. lipophilicum, С.
рsеudodiphteriticum, С. хеrоsis), бревибакгерии.
В составе постоянной микрофлоры кожи и слизистых встре-
чаются грамположительные аэробные спорообразующие палочки,
которые повсеместно распространены в воздухе, воде и почве,
Асinetobасtеr. В области кожных складок часто обитают плесневые
грибы, дрожжеподобные грибы рода Саndidа, дрожжи. Кис-
лотоустойчивые непатогенные микобактерии встречаются в зонах
скопления сальных желез (гениталии, наружное ухо).
Представители микрофлоры кожи растут микроколониями,
образуя на поверхности биопленку различной толщины. Сообщества
автохтонных микроорганизмов разных видов, создающие это
своеобразное покрытие, составляют поверхностный слой мик-
робиоценоза, очень устойчивый к внешним воздействиям. Факторами,
оказывающими влияние на удаление транзиторной микрофлоры с
поверхности кожи, являются кислая реакция среды, наличие жирных
кислот в секретах сальных желез и присутствие лизоцима.

Нормальная микрофлора полости рта и

верхних дыхательных путей
Слизистые оболочки ротовой полости и глотки ребенка при
рождении стерильны, однако при прохождении плода через родовой
канал и контакте с окружающей средой происходит их контаминация.
Доказано, что сразу после родов у новорожденных появляется множество
микробов материнского Происхождения. Через 4—12 часов после родов в
составе постоянной флоры обнаруживают зеленящие стрептококки. К
ним в раннем детстве добавляются аэробные и анаэробные стафилококки,
грам-отрицательные диплококки (нейссерии, бранхамеллы), дифтероиды
и иногда — молочнокислые бактерии (лактобациллы). Во время
прорезывания зубов на слизистых оболочках поселяются анаэробные
спирохеты, бактероиды, фузобактерии, некоторые анаэробные вибрионы.
У взрослых людей в тканях миндалин и на слизис-
152
 тых оболочках десен обычно присутствуют актиномицеты. В ро-
товой полости могут обнаруживаться дрожжеподобные грибы рода
Саndidа.
Качественный состав постоянной микрофлоры полости рта
взрослого здорового человека стабилен и изменяется в ограниченных
пределах под влиянием характера питания, климато-гео-графических
условий. К автохтонной микрофлоре полости рта относят аэробные и
анаэробные микроорганизмы: стрептококки, лактобациллы,
стафилококки, коринебактерии, грибы рода Саndidа, вейлонеллы,
фузобактерии, актиномицеты, а также вирус простого герпеса.
По данным ряда авторов, у здоровых людей из полости рта
высеваются стрептококки и лактобациллы в 100 % случаев, энтерококки -
в 20—35 %, дрожжеподобные грибы рода Саndidа — в 30-50
%,стафилококки — в 30-60 %.
Случайная микрофлора полости рта включает эшерихии, протей,
клостридии. Нормальная микрофлора рта представляет собой важный
фактор естественной антибактериальной защиты. В смешанных
микробных популяциях ротовой полости облигатные представители
аутофлоры (негемолитические стрептококки, лактобациллы,
непатогенные стафилококки) действуют антагонистически против
спектра транзиторных микроорганизмов (пиогенного стрептококка,
сарцин, энтеробактерий). Такой бактериальный антагонизм обеспечивает
равновесие микробной флоры данного биотопа. Состав нормальной
микрофлоры полости рта может оказывать влияние на процессы развития
кариеса, так как начальную деминерализацию и появление бляшек на
зубной эмали связывают с действием кислот, образующихся в результате
ферментативной активности бактерий, прежде всего стрептококков (S.
mutans), возможно, в ассоциации с актиномицетами.
Микрофлору носа составляют преимущественно коринебак-
терии, стафилококки (Stарhу1ососсus aureus, S. ерidermidis) и стреп-
тококки. В верхних дыхательных путях, в частности в гортани,
преобладают негемолитические и α -гемолитические стрептококки,
нейссерии. Кроме того, встречаются стафилококки, дифтероиды,
гемофильные бактерии, пневмококки, микоплазмы и бактероиды. Мелкие
бронхи и альвеолы обычно стерильны.

Нормальная
микрофлора
пищеварительного тракта
Нормальная микрофлора пищеварительного тракта взрослого
здорового человека представляет собой сложную поликомпонентную,
строго сбалансированную экологическую систему. Количественно
преобладающим компонентом его микроэкологии являются
бифидобактерии, которые составляют до 90 %
153
 общего числа микробов, обнаруживаемых в фекалиях здоровых
людей. Среди остальных молочнокислые бактерии, энтерококки,
кишечные палочки и др. Молочнокислые бактерии относятся к основным
компонентам нормальной микрофлоры человека, принимая участие в
биологических превращениях пищи, иммунитете и других
физиологических функциях человека.
В момент рождения ребенка его кишечник стерилен, первые
микроорганизмы попадают в него с пищей. У грудных младенцев в
кишечнике содержатся молочнокислые бактерии и молочнокислые
стрептококки. Они представляют собой грамположительные аэробные и
анаэробные кислотообразующие микроорганизмы, устойчивые к кислой
среде с рН 5,0. При искусственном вскармливании у детей формируется
более разнообразная кишечная микрофлора, включающая кокки и
клостридии. По мере взросления и изменения характера питания
изменяется состав аутофлоры.
Качественный и количественный состав нормальной микрофлоры
отделов желудочно-кишечного тракта различен. В желудке находятся
обычно сарцины, энтерококки, молочнокислые стрептококки, споровые;
палочки, иногда — кишечные палочки, актиномицеты, плесневые грибы.
Нормальная кислая реакция желудочного сока способствует невысокой
концентрации микроорганизмов 103 — 105 в 1 г содержимого) и
обеспечивает защиту от некоторых возбудителей кишечных инфекций,
например, холеры.
По мере того как реакция содержимого кишечника становится более
щелочной, увеличивается количество постоянной микрофлоры. По
данным специальной литературы, в кишечнике обитает более 400 видов
микроорганизмов, причем количество анаэробов в 100—1000 раз
превышает количество аэробных бактерий. Основу автохтонной
микрофлоры составляют облигатные анаэробы (бифидумбактерии,
эубактерии, бактероиды и др.). К транзиторным микроорганизмам
относятся энтеробактерии, включая кишечные палочки, стафилококки,
грибы, образующие около 1—4 % общей микробной биомассы
кишечника.
На слизистой начальной части тонкой кишки микробы, пре-
имущественно строгие анаэробы, обитают в слое муцина, над и между
микроворсинками, глубоко в криптах Либеркюна. На слизистой тонкой
кишки обнаружены анаэробные стрептококки, вейлонеллы, бактероиды и
фузобактерии.
В двенадцатиперстной кишке имеется 10 3-106 бактерий в 1 г
содержимого, в тонкой и тощей кишках — 105 -108, в слепой и ободочной
кишках — 108-1010 бактерий. Если в начальных отделах кишечника
преобладают молочнокислые бактерии и энтерококки, то в дистальных
отделах тонкой кишки и в слепой кишке присутствует фекальная
микрофлора.
154
 На слизистой толстой кишки, на поверхности ее эпителиальных
клеток, найдены спирохеты, кишечные палочки, различные анаэробы.
Доминируют бактероиды, эубактерии и пептострептококки, а в
единичных случаях — бифидобактерии и лактобациллы. Микробы
локализуются или непосредственно на эпителиальных клетках слизистой,
или в виде толстого пласта в слизи. В сигмовидной и прямой кишках
находятся около 1011 бактерий в 1 г содержимого, причем бактерии
составляют до 10—20 % фекальных масс.
Постоянная микрофлора ободочной кишки на 96—99 % состоит
из анаэробных бактерий (бактериоды, особенно В. fragilis;
бифидумбактерии, клостридии, анаэробные стрептококки). Только 1—4
% микрофлоры составляют аэробные микроорганизмы
(грамотрицательные колиформные бактерии, энтерококки и в небольшом
количестве протеи, псевдомонады, лактобациллы, грибы рода Саndidа и
другие микроорганизмы).
Нормальная микрофлора кишечника выполняет ряд функций,
касающихся поддержания на определенном уровне гомеостаза в
организме, участвуя в регуляции работы многих важных систем
(иммунной, сердечно-сосудистой, эндокринной, нервной и др.) путем
выработки биологически активных соединений, образующихся в
процессе метаболической трансформации различных веществ: Кишечные
бактерии играют важную роль в синтезе витаминов К и группы В, обмене
желчных пигментов, утилизации пищевых субстратов, образовании
незаменимых аминокислот (триптофана и др.), а также в антагонизме с
патогенными микроорганизмами, формировании иммунобиологической
реактивности организма.
Прием антимикробных препаратов может вызывать временное
или длительное угнетение развития чувствительных к этим препаратам
представителей фекальной микрофлоры, вызывающее патологические
сдвиги различной тяжести, развитие кишечных дисбактериозов. Важную
роль в этом играет исчезновение бифи-дофлоры, приводящее к
увеличению кишечных палочек с измененными ферментативными
свойствами, стафилококков, грибов рода Саndidа, клебсиелл, протеев.
Предполагается, что дисбакте-риозы кишечника играют роль в патогенезе
ревматических заболеваний.
Состояние микробной экологии толстой кишки является важной
точкой приложения микроэкологических исследований, поскольку, по
многочисленным данным, практически все антимикробные препараты,
даже при парентеральном введении, способны оказывать
модифицирующий эффект на кишечные микробиоценозы.

155
 Нормальная микрофлора
конъюнктивы глаза
Значительное влияние на качественный и количественный
состав микробиоценозов слизистых оболочек глаза оказывает слезный
секрет, содержащий лизоцим. Там обитают дифтероиды (Соrуnеbасtеrium
хеrоsis), нейссерии и грамотрицательиые бактерии рода Моrахеlla,
сходные с Наеmofilius, обнаруживаются стафилококки и
негемолитические стрептококки.

Нормальная микрофлора
мочевыводящих путей
Микробный пейзаж передних участков мочеиспускательного
канала и мужчин, и женщин сходен с микрофлорой пограничных участков
кожи и промежности. Эти микроорганизмы содержатся в моче здорового
человека в количестве 102—104 в 1 мл.

Нормальная микрофлора влагалища

Вскоре после рождения ребенка в его влагалищном со-
держимом появляются аэробные лактобациллы (палочка Дедерлейна),
которые обитают здесь до тех пор, пока реакция среды остается кислой
(несколько недель). Затем она становится нейтральной (до полового
созревания), что способствует развитию смешанной микрофлоры (кокки и
бактерии). После наступления полового созревания вновь в больших
количествах появляются лактобациллы, которые обеспечивают
поддержание кислой среды путем образования кислоты из углеводов. Это
важный механизм в предупреждении колонизации влагалища другими,
условно-патогенными микроорганизмами. После наступления менопаузы
количество лактобацилл вновь уменьшается, появляется смешанная
микрофлора. В состав нормальной влагалищной микрофлоры, кроме
палочки Дедерлейна, называемой еще влагалищной палочкой, обычно
входят клостридии, анаэробные стрептококки (пепто-стрептококки),
аэробные гемолитические стрептококки группы В, колиформные
бактерии, иногда листерии. Влагалищные палочки представляют собой
грамположительные неподвижные неспорообразующие бактерии двух
форм: тонкие, заостренные на концах, и толстые с обрубленными
концами; являются факультативными анаэробами, растут на сахарных и
кровяных средах; проявляют сахаролитические и протеолитические
свойства.
Цервикальная слизь обладает антибактериальной активностью и
содержит лизоцим. У некоторых женщин во влагалищном содержимом
присутствует патологическая флора, сходная по составу с микрофлорой
промежности и перианальной области. Это
156
 может способствовать возникновению рецидивирующих инфекций
мочевыводящих путей. Бактерии, присутствующие во влагалищном
содержимом в момент родов, могут инфицировать ребенка.
В состав микрофлоры влагалища здоровых беременных женщин
входят до 20 видов аэробных и анаэробных микроорганизмов, среди
которых по частоте распространения первое место занимают
лактобациллы и стрептококки (54 %), бифидобактерии и
пептострептококки (40 %), кандида и эубактерии (26 %), бактероиды и
стафилококки (20 %) и далее по убывающей: пропиони-бактерии,
актиномицеты, фузобактерии, дрожжи, коринебактерии, кишечные
палочки, β-гемолитические стрептококки и др. Доказано, что по мере
увеличения срока беременности повышается частота колонизации
лактобациллами и бифидобактериями с одновременным уменьшением
количества энтеробактерий.

Роль аутофлоры в жизнедеятельности

организма человека
Аутофлора играет важную роль в поддержании здоровья и
обеспечении нормальных функций различных систем человеческого
организма прямо и косвенно за счет продукции разнообразных
биологически активных веществ в процессе микробного метаболизма.
,
Одной из важнейших функций нормальной микрофлоры является
ее участие в обеспечении колонизационной резистентиости —
совокупности механизмов, обеспечивающих предотвращение заселения
хозяина патогенными и условно-патогенными микроорганизмами. К ним
относятся: блокирование клеточных рецепторов тканей от посторонних
микроорганизмов и конкурирование с ними за пищевые субстраты;
стимуляция подвижности эпителия слизистых оболочек; продукция
биологически активных субстанций:
перекисей, бактериоцинов, лизоцима, аитибиотикоподобных ве-
ществ; детоксикация ксенобиотиков, активация неспецифической
резистентности и иммунного ответа макроорганизма.
Обмен веществ в организме человека происходит с непременным
участием нормальной микрофлоры, и нарушение сложившихся
нормальных микробиоценозов может сопровождаться развитием
различных физиологических расстройств организма, вплоть до изменения
поведенческих реакций и злокачественных новообразований. Развитие
аутоиммунных процессов, диабета, подагры и других патологических
состояний ряд ученых связывает именно с микроэкологическими
изменениями в организме человека.
Процессы детоксикации различных веществ в кишечнике происходят
под действием микробных ферментов в анаэробных условиях в реакциях
декарбоксилирования, восстановления и гидролиза.
157
 Основные функции нормальной микрофлоры:
-регуляция газового состава кишечника;
выработка ферментов, участвующих в метаболизме белков,
углеводов, липидов и нуклеиновых кислот;
-продукция биологически активных веществ (витамины, гормоны,
антибиотики, токсины, медиаторы);
-участие в водно-солевом обмене, обеспечении колонизационной
резистентности, рециркуляции желчных кислот и холестерина;
-иммуногенная (образуют мурамилдипептид — неспецифический
стимулятор иммуногенеза) и мутагенная (антимутагенная) роль;
-источник эндогенной инфекции, плазмидных и хромосомных генов
множественной резистентности.
Рассматривая взаимодействие организма человека с собственной
микрофлорой, необходимо отметить негативные стороны этого процесса.
Одним из его эволюционных результатов является тот факт, что
аутофлора представляет собой природный резервуар плазмидных
и .хромосомных генов, кодирующих устойчивость к различным
химическим веществам. Это способствует тому, что при нерациональной
химиотерапии инфекций клинические штаммы возбудителей, попавшие в
организм, приобретают множественную лекарственную устойчивость
путем генетических обменов (рекомбинаций) с представителями
аутофлоры.
Нарушения иммунореактивности макроорганизма, барьерных
функций слизистых оболочек и кожи, возникающие в результате
нерациональной лекарственной терапии и действия других факторов,
вызывают изменения состава, свойств и ассоциативных отношений
нормальной микрофлоры — дисбактериозы.
При соответствующих условиях (необычной локализации, снижении
защитных барьеров организма) нормальная микрофлора может быть
источником эндогенной инфекции. Такие микроорганизмы называют
«оппортунистами» (от лат. орроrtunists — соглашатели, условно-
патогенные микроорганизмы). Какие же факторы способствуют развитию
таких инфекций? Как считают ученые-микроэкологи, нормальная
микрофлора представляет собой своего рода мишень приложения
действия любого биологически активного соединения. С этих позиций
рациональное применение любых фармакологических средств, и
особенно антимикробных, требует оценки микроэкологических
последствий их воздействия. В литературе накоплены сведения о
действии различных химиопрепаратов, прежде всего антибиотиков,
нарушающих микроэкологию макроорганизма. В отношении других
групп фармакологических препаратов, используемых в клинической
практике, таких сообщений мало. По данным Б. А. Шендерова, ряд
лекарственных средств, таких как наркологические, местно-
158
анестезирующие, рвотные, обволакивающие, Если аутофлора подвергается
воздействию антимикробного препарата, превышающего
компенсаторные возможности микробной экосистемы, то развиваются
микроэкологические нарушения, характер и степень выраженности
которых определяются особенностями и условиями введения
препарата, Количественные и качественные сдвиги в составе
нормальной микрофлоры приводят к снижению колонизационной
резистентности, увеличению числа и спектра условно-патогенных
микроорганизмов, вызывающих развитие инфекционных процессов.
Так, стрептококки, обитающие на слизистых оболочках верхних
дыхательных путей, при травматическом проникновении в кровяное
русло поражают поврежденные сердечные клапаны, обуславливая
инфекционный эндокардит. Спирохеты, фузобактерии и Васtеrоidеs
mе1аninogenicus, обитающие в ротовой полости здорового человека,
при травмах размножаются в некротизированных тканях, вызывая
фузоспирохетоз. При проникновении в брюшную полость или ткани
органов малого таза бактероиды, обычно живущие в толстом кишечнике,
вызывают гнойные процессы. Интересен такой факт, что даже
минимальные травмы толстого кишечника при некоторых медицинских
манипуляциях в 10 % случаев вызывают транзиторную бактериемию.
Удельная масса оппортунистических инфекций в общей
этиологической структуре болезней бактериальной природы в настоящее
время растет. Это обусловлено как особенностями их возбудителей
(природной антибиотикорезистентностью, антигенной мимикрией и др.),
так и условиями их возникновения, среди которых снижение уровня
неспецифической резистентности, нарушение функций гуморального и
клеточного иммунитета.

ФИТОПАТОГЕННЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ.
МИКРОБНАЯ ПОРЧА РАСТИТЕЛЬНОГО
ЛЕКАРСТВЕННОГО СЫРЬЯ. МИКРОБНОЕ
ЗАГРЯЗНЕНИЕ ГОТОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ
ФОРМ

ФИТОПАТОГЕННЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ
Микроорганизмы, вызывающие заболевания растений,
называются фитопатогенными. Представлены бактериями, грибами,
актиномицетами, микоплазмами, вирусами и вироидами (мо-
лекулярными патогенами, подобными вирусам). Первое место сре-
159
 ди фитопатогенных микробов по количеству заболеваний при-
надлежит грибам, второе занимают бактерии и вирусы и лишь небольшой
процент болезней вызван актиномицетами, микоплазмами, вироидами.
Основное местообитание фитопатогенов в природе — почва, но
присутствуют они также в воде и воздухе, откуда и попадают на все
растущие части растений. Внутрь растительного организма
фитопатогенные микробы проникают через раневую поверхность,
возникшую под действием физических (колебания температуры),
механических, биологических (животные, насекомые) факторов, через
структурные отверстия (чечевички, устьица, нектарники). Большинство
возбудителей болезней растений активно синтезируют гидролитические
ферменты (пектиназы, целлюлазы, протеазы и др.), вызывающие
мацерацию растительных тканей и разрушение клеточных оболочек, что
позволяет микробу проникнуть в растительную клетку. Находясь внутри
клетки, микроорганизмы нарушают нормальный ход физиологических
процессов, прежде всего фотосинтеза и дыхания. Токсины, выделяемые
возбудителями болезней, подавляют жизнеопределяющие ферментные
системы растительной клетки, вызывая тем самым ее гибель.
Если возбудитель сосредоточен в сосудистой системе, пора-
жается все растение. Нередко наблюдаются очаговые, или ограниченные
поражения на листьях, стволах, ветвях, корнях и корневищах.
Растения, в свою очередь, обладают различными защитными
приспособлениями, направленными на предупреждение проникновения
микробов внутрь организма: особенность строения покровных тканей,
реакция клеточного сока, наличие фитонцидов (антибиотические
вещества), фитоалексинов (ингибируют рост микроорганизмов в тканях
растений) и др.
Многие болезни растений, приносящие большой экономический
урон, вызываются бактериями рода Рsеudоmоnаs, Хаnthоmоnаs,
Аgrоbасtеrium, Асеtоbасtеr, Еrvinia. Представлены грамотрицательными
палочковыми формами длиной 1—3 мкм, реже кокками. Большинство
видов подвижны, благодаря полярно расположенному жгутику. Многие
фитопатогенные бактерии образуют капсулу, которая обеспечивает их
устойчивость к некоторым вредным факторам внешней среды.
Спорообразующие виды встречаются редко.
Фитопатогенные бактерии обладают в основном аэробным типом
дыхания, ферментативно активны (не все виды), гидролизуют крахмал,
разлагают сахар и спирты, свертывают молоко, разжижают желатин,
образуют индол, сероводород, аммиак.
Заболевания, вызываемые фитопатогенными бактериями, на-
зываются бактериозами. Почти все растения подвержены бакте-
риальному заражению. Признаки (симптомы) бактериозов: пятна
160
 на листьях, стеблях, цветках и плодах; ожог, мягкая гниль и вилт
(увядание). Ожог характеризуется быстро развивающимися некрозами
(мертвые бесцветные пятна) стеблей, листьев и цветков. Бактериальная
мягкая гниль обычно поражает мясистые запасающие части растений
(клубни, луковицы, сочные плоды).
Бактериальные вилты проводящих тканей поражают только тра-
вянистые растения. При этом микроорганизмы внедряются в сосуды
ксилемы и размножаются в них, распространяясь с током воды и
питательных элементов по всему растению, приводя его к гибели.
Фитопатогенные грибы — представители класса Плазмодиофоромицеты,
Хитридиомицеты, Оомицеты, Зигомицеты, Аскоми-
цеты и другие вызывают многочисленные болезни растений —
микозы. Отмечается поражение корневой системы в целом или
загнивание отдельных корней, развитие на них опухолей. У древесных
растений на стволах и ветвях появляются наросты. Поражение листьев
сопровождается пятнистостью, курчавостью, скручиванием, увяданием.
На плодах и клубнях наблюдается пятнистость, гниль, бородавки и
налеты разного оттенка. У семян изменяется консистенция (уплотняются
или размягчаются).
Более тысячи известных заболеваний растений вызывается
вирусами. Открытие вирусов, поражающих растения (мозаичная болезнь
табака), связано с именем выдающегося ученого Д. И. Ивановского.
Вирусные болезни растений распространяются, как правило,
беспозвоночными (насекомыми, нематодами). Сосущие насекомые (тли,
цикадки) переносят вирус вместе с соком, который извлекают из флоэмы
или клеток эпидермиса.
Признаком вирусных заболеваний является появление некрозов —
участков мертвой ткани. При мозаичной болезни на листьях иди других
зеленых частях растений отмечаются светло-зеленые и желтые
маленькие крапинки или большие полосы. Иногда все инфицированное
растение может быть более светлым, чем здоровое. Желтые пятна или
окаймление листьев, пестрая окраска цветов тоже результат вирусной
инфекции. Вирусы мозаики преимущественно поражают ткани
паренхимы, уменьшая или сводя к нулю количество хлоропластов:
Другие вирусы накапливаются в богатой сахарным соком флоэме и
могут приводить к гибели ее клеток.
Относительно большую группу составляют заболевания
растений, вызываемые микоплазмами. Ими поражаются более 200 видов
растений. Эти заболевания распространены в зонах с умеренным и
теплым климатом, благоприятствующим существованию некоторых
видов насекомых (например, цикадок) — основных переносчиков
микоплазм. Признаки микоплазменной инфекции: карликовость,
пожелтение, прекращение плодоношения, увядание или разрастание
боковых побегов («ведьмины метлы») и др.

11 «Микробиология»

1161
 Меры борьбы с болезнями растений:
агротехнические мероприятия (качество семян, оптимальные
сроки посева, борьба с сорняками и др.);
химические мероприятия (протравливание семян, внесение
химикатов в почву);
борьба с насекомыми-переносчиками;
селекция устойчивых сортов растений;
получение посевного и посадочного материала, свободного от
патогенов (например, вирусов);
повышение устойчивости растений к заболеваниям путем
проращивания семян в экстрактах фитопатогенных грибов;
внесение в почву микробов — антагонистов фитопатогенным;
создание иммунитета у растений;
введение карантина;
механическое удаление больных растений;
лечение растений.

МИКРОБНАЯ ПОРЧА
РАСТИТЕЛЬНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО
СЫРЬЯ
Лекарственное сырье, используемое в технологическом
процессе получения лекарств, может быть природного (животного,
растительного) и синтетического происхождения. Синтетическое сырье
менее подвержено микробному воздействию, поскольку только для
небольшого числа видов микроорганизмов оно может служить
питательным субстратом.
В большей степени микробной контаминации и порче подвер-
жено сырье растительное. Это связано с тем, что микробы в громадном
количестве попадают на различные части растения из почвы, воздуха и
используют растительный организм в качестве питательной среды,
богатой углеводами, белками, жирами.
Процесс заготовки растительного сырья (сушка,
консервирование) оказывает существенное влияние на количество
микробов в сырье и их активность. Даже при соблюдении норм и правил
заготовки лекарственных растений на корнях остается минимальное
количество почвы, содержащей микробы, на листьях и цветках
присутствуют микроорганизмы воздуха.
Микрофлора растительного сырья в основном представлена
споровыми и неспорообразующими бактериями, плесневыми и
дрожжевыми грибами, актиномицетами, кокками, пигментными и
флюоресцирующими микробами. На консервированных плодах и ягодах
можно встретить споровые и осмофильные бактерии.
В аптечных условиях растительное сырье хранится, как правило,
в измельченном виде. Это значительно увеличивает поверхность
материала и способствует дополнительной микробной контаминации, а
следовательно, и опасности его порчи. Чаще портятся
162
 плоды, ягоды, корневища, богатые сахаристыми веществами. Более
устойчивы к порче сухие листья, кора, корни.
При нарушении правил хранения (сырое, непроветриваемое
помещение, наличие насекомых) микробы не только длительно
сохраняются, но и развиваются, вызывая существенные изменения в
лекарственном сырье. Признаки микробной порчи сырья:
изменение цвета и консистенции, появление несвойственного
запаха, плесневение, загнивание. Пораженное сырье непригодно к
употреблению, поскольку в нем снижается содержание действующих
веществ и оно утрачивает фармакологические свойства.

МИКРОБНОЕ ЗАГРЯЗНЕНИЕ
ГОТОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ
ФОРМ
Не свободны от микроорганизмов и многие лекарственные
препараты. Инъекционные растворы и глазные капли должны быть
стерильными, то есть в них недопустимо присутствие микроорганизмов.
На долю лекарственных средств, предназначенных для
неинъекционного введения и не имеющих фармакопейных требований
по стерильности, приходится в среднем 82 % выпускаемых препаратов,
из них около 14 % — средства для местного применения и 68 % — для
приема внутрь.
Со времени случая лекарственной инфекции,
зарегистрированной в Швеции (1963), когда более 200 больных,
принимавших таблетки из экстракта щитовидной железы, заразились
сальмонеллезом, проблема микробной загрязненности нестерильных
препаратов стала привлекать пристальное внимание. Многочисленные
лекарственные инфекции были отмечены также в Англии, Дании, США,
Австралии и других странах. Систематизация и анализ полученных
сведений позволили сделать вывод о наиболее частых случаях
обнаружения в препаратах, вызвавших заболевания, бактерий семейства
Еtеrоbасtеriасеаe, Рsеudоmоnаs аеruginosa, Stарhу1ососсus аurеus,
Еntеrососсus, а также некоторых видов споровых палочек, дрожжевых и
плесневых грибов. Число микроорганизмов в 1 г (мл) препарата иногда
достигало нескольких десятков миллионов.
Микроорганизмы в лекарственных средах могут вызвать
заболевания человека, а также угрожают стабильности самого лекарства.
Как бактерии, так и грибы, обнаруживаемые в готовых лекарственных
средах (ГЛС), содержат ряд ферментов, которые могут привести к
изменению химического состава препарата и образованию токсических
продуктов.
В твердых лекарственных формах существует небольшой риск
порчи препарата, поскольку остаточная влажность ниже минимального
уровня, необходимого для размножения микроорганиз-
1Г 163
мов. В жидких и мягких лекарственных средствах имеются более
подходящие условия для роста и размножения микроорганизмов.
Большее количество микробов содержится в водных настоях, а в
настойках и концентрированных растворах — значительно меньше или
вообще отсутствуют.
Источники загрязнения лекарственных препаратов:
сырье природного происхождения;
вода дистиллированная;
посуда;
пробки (особенно корковые);
аптечное и заводское оборудование;
руки, одежда персонала и пр.;
бактерионосители патогенных микробов среди работников аптек
и фармацевтических предприятий.
Признаки микробной порчи жидких лекарственных форм
(инфузов, отваров) — изменение цвета, помутнение, пленка,
несвойственный запах; мягких лекарственных форм — расслоение,
 плесневение; твердых — изменение консистенции.
В связи с вышесказанным очень своевременными явились
рекомендации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) и
Международной федерации фармацевтов (МФФ) о введении
фармакопейных норм, ограничивающих микробную загрязненность
нестерильных готовых лекарственных средств.
В соответствии с требованиями ВОЗ и фармакопеи в 1 г (мл)
лекарственного препарата для приема внутрь должно быть не более 1000
бактерий и 100 плесневых и дрожжевых грибов; для детей в возрасте до
одного года — не более 50 бактерий и грибов суммарно; для детей
старше одного года — не более 500 бактерий и 50 грибов (дрожжевых и
плесневых).
Для лекарственных средств, используемых местно,
трансдермально, интравагинальнр, для введения в полости уха, носа
количество микроорганизмов в 1 г (мл) препарата не должно превышать
100 микробных клеток (бактерии и грибов).
В лекарственных препаратах, не требующих стерильности, не
должны присутствовать бактерии семейства энтеробактерий,
синегнойная палочка, золотистый стафилококк.
При изготовлении лекарственной продукции ее
микробиологическая чистота обеспечивается соблюдением правил
асептики — комплексом мер, направленных на предупреждение
попадания микроорганизмов в операционное поле, в данном случае — в
лекарство.
Асептические условия достигаются путем использования
дистиллированной воды, стерильной посуды, инструментария,
обеззараживания воздуха помещений с помощью бактерицидных ламп,
влажной уборки с дезинфицирующим раствором, соблюдением личной
гигиены сотрудниками аптек.
164
 Министерство здравоохранения издает специальные инструкции
по бактериологическому контролю за соблюдением санитарного режима
в аптеках. Объекты бактериологических исследований:
вода дистиллированная;
инъекционные растворы до стерилизации;
инъекционные растворы после стерилизации;
глазные капли после стерилизации;
глазные капли, приготовленные в асептических условиях на
стерильных основах;
сухие лекарственные вещества, используемые для приготов-
ления инъекционных растворов;
аптечная'посуда, пробки, прокладки, другие
вспомогательные материалы; ,-
инвентарь, оборудование, руки и санитарная одежда персонала;
воздушная среда.
В условиях химико-фармацевтических производств качество
лекарственных средств, включая микробную чистоту, гарантировано
соблюдением свода обязательных принципов, норм и правил, именуемых
«Gооd mаnufacturing рrасtiсе» (GМР) — «Надлежащая производственная
практика» (НПП). Основная идея GМР связана с обеспечением
соответствующей системы производства и контроля, гарантирующей
получение качественных лекарственных средств.
В Украине создана и развивается национальная система
гарантирования качества лекарственных средств. Специальным органом
государственного контроля качества лекарственных средств является
Государственная инспекция по контролю качества лекарственных
средств Министерства здравоохранения Украины.

ОСНОВЫ УЧЕНИЯ О ХИМИОТЕРАПИИ.

ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ

Химиотерапия — медико-биологический термин

фундаментальной дисциплины, объединяющей использование
природных и синтезированных химических соединений для лечения
инфекционных и неинфекционных заболеваний.
Несмотря на то, что в последнее время появилась новая область
химиотерапии — химиотерапия злокачественных опухолей,— в целом
под химиотерапией понимается специфическое антимикробное,
антипаразитарное лечение при помощи химических веществ.
Основу химиотерапии составляет антибактериальная
химиотерапия. Именно этот раздел определил становление
химиотерапии как теоретической и клинической науки, ее развитие и
прогресс.
165
 Что принципиально выделяет антибактериальную химиотерапию?
Химиотерапевтические препараты проявляют специфическое действие
против болезнетворных возбудителей в условиях человеческого
организма (принципиально важное положение — именно в условиях
организма, а не в пробирке). Известен целый ряд высокоактивных
препаратов, оказывающих антимикробный эффект вне организма -
дезинфектанты. Однако они применяются исключительно для
воздействия на инфекционный агент во внешней среде, поскольку,
обладая универсальным свойством про-топлазматического,
цитоплазматического яда, при введении в организм оказывают
равноценный токсический эффект и на возбудителя, и на организм
больного. Антибактериальным препаратам присуще свойство
этиотропности, то есть они оказывают выраженный ингибирующий
эффект на возбудителя, минимально влияя при этом на организм
человека.
В исторических истоках развития химиотерапии как медико-
фармацевтической дисциплины заложена необходимость борьбы
человека с инфекционными заболеваниями. В прошлых веках именно они
являлись основной причиной смертности, а приобретая характер
эпидемий и пандемий; одновременно уносили десятки и сотни миллионов
жизней. Являясь органической составной частью народной медицины,
химиотерапия вначале развивалась сугубо эмпирически, на клиническом
опыте проб и ошибок. Именно этим путем, например, было установлено,
что корень ипекакуаны эффективен для лечения амебной дизентерии, а
кора хинного дерева — для лечения малярии
Первые попытки целенаправленного применения химических
веществ для лечения инфекционных болезней связаны с именем
Парацельса (1493—1541). Именно он впервые применил ртуть, а затем
мышьяк для лечения сифилиса.
Со второй половины XIX века благодаря исследованиям П. Эрли-
ха, Д. Л. Романовского, Ж. Фурье химиотерапия формируется как научно-
теоретическая и экспериментально-клиническая дисциплина.
Д. Л. Романовский первым сформулировал требования, которым
должны отвечать химиопрепараты:
минимальная органотропность — минимальное токсическое
действие на органы, ткани, организм больного в целом;
максимальная этиотропность — высокое токсическое действие
на возбудителя инфекционной болезни;
этиоспеиифичность — способность определенных
химиопрепаратов действовать избирательно на определенный вид
возбудителя инфекционного заболевания.
П. Эрлих развил положения Д. Л. Романовского и на основе
учета соотношения пользы и вреда от использования химиопрепаратов
сформулировал так называемый химиотерапевтический
166
 индекс. Он представляет собой отношение двух доз препарата —
максимально переносимой и минимальной лечебной и должен быть не
менее трех. Это означает, что специфическое антимикробное действие
препарата в организме должно проявляться в дозах, как минимум, в три
раза меньших от доз возможного побочного влияния на организм.
П. Эрлих вошел в историю как основоположник химиотерапии.
Он создал первый химиотерапевтический препарат сальварсан,
предложил принцип химических вариаций, являющийся основой синтеза
новых химиотерапевтических средств. Изучая группу мышьяка, П. Эрлих
синтезировал на основе разработанного принципа химических вариаций
атоксил, эффективный против спирохет и трипаносом, но отличающийся
высокой токсичностью, затем — арсентезол и его двойную соль в виде
препарата 606-сальварсан. Применение 606-сальварсана способствовало
снижению заболеваемости и распространения сифилиса.
Продолжая развитие принципа химических вариаций, вводя в
процессе синтеза новые радикалы (йода, хлора, брома), П. Эрлих получил
новые производные — 914-неосальварсан, миарсенол, осарсол.
В настоящее время арсенал химиопрепаратов довольно широк. Они
сгруппированы по происхождению и антиинфекционному действию.
Препараты мышьяка — новарсенол, миарсенол, осарсол —
применяют для лечения возвратного тифа, амебной дизентерии, сифилиса
и других заболеваний, вызываемых патогенными простейшими и
спирохетами.
Препараты висмута — бийохинол, бисмоверол, пентабисмол —
используют для лечения различных форм сифилиса, преимущественно в
комбинации с пенициллином.
Препараты ртути — антисептики:
ртуть двухлористая (сулема)'— дезинфектант;
ртути оксицианид — для промываний, при бленнорее,
гонорее, циститах;
ртутная серая мазь — педикулез;
ртутная белая мазь (ртути амидохлорид) — при пиодермии;
ртутная желтая мазь — при блефаритах, кератитах, конъюн-
ктивитах, заболеваниях кожи;
ртути монохлорид (каломель) — чрезвычайно токсичный пре-
парат, применяется в виде мази при заболеваниях роговицы глаза,
бленнорее.
Препараты сурьмы — солюсурмин — применяется для лечения
лейшманиоза.
Препараты акридина — этакридина лактат (риванол) — для
лечения заболеваний, вызываемых гноеродными кокками.
167
 Противолепрозные препараты — диафенилсульфон, солюсульфон,
диуцифон.
Противомалярийные препараты делятся на группы по
этиоспецифическому действию на виды и стадии возбудителя в организме
(табл. 3).
Таблица 3 Противомалярийные препараты

Гематошизотропны 1 Гамотропные
е (эритроцитарные истошизотропные (половые
формы, бесполые (тканевые и формы)
шизонты) предэрит-
роцитарные
шизонты)

Хингамин Примахин, Примахин, хиноцид —

хиноцид действуют
камонтоцидно, то есть
Гидроксихлорохи вызывают гибель
н Акрихин Бигумаль гамонтов Бигумаль
Сульфаниламид
ы Сульфоны
Хинин -
Хлоридин Хлоридин

Все перечисленные выше группы препаратов, имея в настоящее время

ограниченное клиническое применение, составляют своеобразную
предысторию химиотерапии.

СУЛЬФАНИЛАМИДНЫЕ ПРЕПАРАТЫ
Научно-практическое становление химиотерапии как одного из
наиболее эффективных направлений лечения инфекционных заболеваний
связано с синтезом первого сульфаниламидного производного —
азокрасителя — красный стрептоцид (пронтозил). Впервые
противококковое действие стрептоцида доказал в 1934 году в опытах in
vivo немецкий бактериолог Г. Домагк. Однако уже в следующем году было
установлено, что в организме красный стрептоцид распадается на
высокоактивный в антибактериальном отношении амид сульфаниловой
кислоты и чрезвычайно токсичный для организма и не обладающий
специфическим действием триаминобензол. С этого момента начинается
бурное развитие исследований по синтезу сульфаниламидных препаратов,
обладающих высокой антибактериальной активностью при отсутствии или
минимальном проявлении органотропности — токсического действия на
организм.
В 1937 году в СССР был синтезирован сульфидин, а затем еще более
эффективные сульфаниламидные препараты — норсульфазол, этазол,
фталазол и др.
Именно с этими препаратами связаны успехи советской медицины в
борьбе с такими грозными инфекционными заболе-
168
 ваниями как сепсис, менингит, пневмония, гонорея и др. Благодаря
им в период Великой Отечественной войны в строй возвращались более
70 % раненых, а в войсках почти за четырехлетний период боевых
действий не было зарегистрировано ни одной эпидемии.
В настоящее время сульфаниламиды составляют основную группу
химиопрепаратов из разряда синтезированных химических соединений,
используемых для лечения и профилактики инфекционных заболеваний.
Отличительная особенность сульфаниламидов и представленных
выше химиотерапевтических препаратов состоит в том, что они не
пригодны для парентерального применения. Основные способы их
использования — наружный и внутренний, исключением является
сульфален-меглюмин.
Все сульфаниламиды в зависимости от способности всасываться из
желудочно-кишечного тракта и скорости выведения из организма
делятся на пять основных групп. Первая группа, в свою очередь,
подразделяется на четыре подгруппы, дифференциальным отличием
которых является скорость выведения препарата из организма. Ее
оценочным критерием является показатель Т50 — время в часах, в
течение которого концентрация Препарата в крови уменьшается в два
раза (табл. 4).
Таблица 4 Классификация сульфаниламидных

препаратов

Срок Т50 Выдел Сут Интер Наименов

действи ение с очная вал между ание препарата
я мочой доза приемами

^ ./ | Мене 16 4-6 4—6 Стрептоц

Короткое е часов г часов ид,

(2—3 8-10 (4 этазол,

часа) часов раза в норсульфазол,
сутки) сульфа

димезин,
уросульфан

| До 16 16-24 2-3 8—12 Сульфази

Средней часов часа г часов (2 н,
продолжите раза сульфаметокса
льности(бол в зол
ее сутки)
10
часов)
Длитель 24-48 часов 24-56 1- 24-56 Сульфади
ное (до 36 часов 1,5 г часов (1 мезин,
часов раз в сульфадимето
сутки) ксин,
сульфамо-
нометокс
ин

Сверхдл 7 65 1,5- 7 дней Сульфале

ительное дней часов, 60 % 2 г (1 раз в н (келфизин)
цир

кулир недел сульфален

ует в крови ю) -меглюмин
в тече-
 ние 9
дней

169
 1. Сульфаниламиды общего действия. Быстро всасываются,
применяются для лечения различных инфекционных заболеваний.
Подгруппа 1 — Т50 менее 10 часов (стрептоцид, норсульфазол,
этазол, сульфадимезин, уросульфан).
Подгруппа 2 (средней продолжительности действия) — Т 50 10—24
часа (сульфазин, сульфаметоксазол).
Подгруппа 3 (длительного действия) — Т 50 свыше 24 часов, достигая
56 часов (сульфадимезин, сульфадиметоксин, сульфапиридозин).
Подгруппа 4 (сверхдлительного действия) — Т50 около 56 часов (60
% циркулирует в крови в течение девяти суток) — сульфален, или
келфизин, соль сульфалена — сульфален-меглюмин, применяется
парентерально.
2. Сульфаниламиды, медленно и плохо всасывающиеся из
желудочно-кишечного тракта — фталазол, фтазин, сульгин, приме-
няются для лечения кишечных инфекций.
3. Сульфаниламиды, выделяющиеся в основном почками — уро-
сульфан — используются для лечения гнойно-воспалительных поражений
мочевыделительной системы (циститов, пиелитов, пиелонефритов).
4. Салазосульфаниламиды—салазосульфапиридин,
салазопиридазин (салазодин), салазодиметоксин — группа препаратов, со-
четающая салициловую кислоту и сульфаниламиды, оказывают
одновременно антибактериальное и противовоспалительное действие.
Наиболее эффективны при лечении неспецифических язвенных колитов.
5. Группа сульфаниламидов, используемых наружно в виде
эмульсий, мазей, растворов, порошков, присыпок, линиментов.
Предшественником этой группы препаратов является стрептоцид белый,
все другие препараты рассматриваются как производные стрептоцида.
Общие свойства сульфаниламидных препаратов:
высокая антибактериальная активность против гноеродных кокков
(стрепто-, менинго-, пневмо-, гонококков), сочетающаяся с действием на
грамотрицательные бактерии (E.сoli);
способность быстро всасываться и определяться в терапевтических
концентрациях в крови уже через 2—3 часа;
преодоление гематоэнцефального барьера — через 4 часа те-
рапевтическая концентрация определяется в спинномозговой жидкости.
Учитывая данные свойства, препараты этой группы применяются для
лечения менингитов, ангин, хронического тонзиллита. Они также
эффективны для лечения рожистого воспаления, пиелонефрита, цистита,
энтероколита.
Сульфаниламиды проявляют бактериостатическое действие за счет
нарушения образования микробами необходимых для их развития
ростовых факторов — фолиевой и дигидрофолиевой кислот
170
 и других веществ, в молекулу которых входит парааминобензойная
кислота. По химическому строению сульфаниламиды близки к
парааминобензойной кислоте, поэтому вместо нее захватываются
микробной клеткой и тем самым нарушают течение в ней обменных
процессов. Все это тормозит жизнеспособность микробной клетки, ее
рост, размножение и способствует более эффективному действию
специфических и неспецифических факторов защиты организма.
Побочный аффект сульфаниламидов. Сульфаниламидные пре-
параты вызывают аллергические и другие побочные явления —
тошноту, рвоту, дерматиты, невриты, иногда наблюдается нарушение
ЦНС и часто — нарушение функции почек. Из-за плохой растворимости
еульфаниламиды и продукты их ацетилирования могут выпадать в
почках в виде кристаллов.
К отрицательным свойствам стрептоцида и его производных
относится токсическое влияние на кроветворную систему — лей-
копения, агранулоцитоз. Поэтому с 1986 года медицинская про-
мышленность прекратила производственный выпуск белого стрептоцида
и его производных, а клиническая практика — медицинское
использование. Взамен рекомендованы менее токсичные препараты, —
этазол, сульфадимезин и др.
В ряду химиотерапевтических препаратов одной из перспективных
групп являются производные нитрофурана. Нитрофураны |эффективны
в отношении грамположительных и грамотрицатель- ных микробов,
некоторых вирусов, трихомонад, лямблий. Ценное качество
нитрофуранов — способность задерживать рост микроорганизмов,
устойчивых к сульфаниламидам и антибиотикам. В зависимости от
химического строения отдельные соединения этого ряда имеют
некоторые различия в спектре действия: фурацилин действует на
грамположительные и грамотрицательные бактерии; фуразолидон
эффективен в отношении грамотрицательных бактерий, трихомонад и
лямблий; фуразолин — в отношении грамположительных бактерий;
фурадонии и фурагин — особенно эффективны при инфекциях мочевых
путей.
Противотуберкулезные препараты — особая группа препаратов»
с применением которых развилось самостоятельное направление —
химиотерапия и химиопрофилактика туберкулеза. Весь арсенал
противотуберкулезных средств представлен двумя группами.
Препараты первого ряда — основные противотуберкулезные
препараты, характеризующиеся высоким уровнем этиоспецифического
действия на возбудителя туберкулеза: изониазид (гидразид
изоникотиновой кислоть),фтивазид, салюзид, который комбинируется со
стрептомицином и выпускается в виде стрептосалюзида;
метазид; стрептомицин; ПАСК — парааминосалициловая кислота;
рифампицин; рифампицин SV.
171
 Однако к препаратам первого ряда быстро формируются
лекарственноустойчивые варианты возбудителя туберкулеза, вследствие
чего противотуберкулезная терапия с использованием этих препаратов
становится неэффективной или малоэффективной.
В таких случаях применяют противотуберкулезные препараты
второго ряда (или резервные). По сравнению с препаратами первого ряда
резервные противотуберкулезные препараты менее активны в отношении
возбудителя туберкулеза, но, и это чрезвычайно важно, они способны
подавлять жизнеспособность штаммов туберкулезных бактерий,
устойчивых к противотуберкулезным препаратам первого ряда: этионамид,
протионамид, этамбутол, циклосерин, пиразинамид, тиоацитазон,
канамицин, флоримицин.
Такое принципиальное подразделение противотуберкулезных
препаратов на основные и резервные в настоящее время в какой-то мере
утрачивает свою первоначальную значимость в связи с глобальной
микробиологической проблемой устойчивости патогенных
микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Поэтому с учетом
особенностей этиологической структуры современного туберкулеза и
антибактериальной резистентности возбудителя противотуберкулезные
препараты распределяют по степени эффективности: изониазид и
рифампицин — наиболее эффективные; по степени снижения
эффективности: стрептомицин — канамицин — пиразинамид — этионамид
— протионамид — этамбутол — циклосерин — флоримицин — ПАСК.
Противовирусные препараты:
ремантадин — эффективен при гриппозной инфекции, вызванной
вирусом типа А;
оксалин — эффективен при аденовирусных инфекциях кожи, глаз,
вирусном рините;
теброфен — оказывает вируцидное действие, применяется для лечения
вирусных заболеваний глаз, кожи, плоских бородавок у детей;
ридоксол — в виде мази при Простом герпесе;
бонафтон — при вирусных заболеваниях кожи, глаз, слизистой
оболочки рта;
метисазон — подавляет репродукцию вирусов оспенной группы,
задерживает распространение вируса в коже;
йодоксиуридин — против вируса Herpes simplex, вызывающего
кератит;
госсипол — продукт, получаемый из семян хлопка, обладает
химиотерапевтической активностью против различных штаммов вирусов.
Выпускается в виде порошка, линимента;
интерферон — эффективный противовирусный препарат, полученный в
1957 году из лейкоцитов донорской крови человека, назначается для
профилактики и лечения гриппа и других вирусных инфекций. Применяется
интраназально.
172
 Сейчас на основе элементов генной инженерии получены мик-
робиологические продуценты интерферона — кишечной палочке сообщен
ген продуцента интерферона. Этот интерферон используется не только
интраназально, но и парентерально. Основные правила использования
химиопрепаратов:
\. Определение возбудителя и его чувствительности к используемому
препарату. При установлении возбудителя подбирают препарат с
соответствующим спектром действия; если возбудитель неизвестен,
выбирают препарат широкого спектра действия или комбинацию
препаратов, суммарный эффект которых включает вероятных возбудителей
(до определения этиологии).
2. Начинать лечение необходимо возможно раньше. В начале
заболевания микробов меньше, они находятся в стадии размножения и
роста, и, таким образом, наиболее чувствительны к действию
химиопрепаратов.
3. Дозы препаратов должны быть достаточно высокими, чтобы
обеспечить в крови и тканях бактериостатические и бактерицидные
концентрации. В начале лечения часто дают ударную дозу, превышающую
последующие.
4. Продолжительность лечения должна быть оптимальной. При
необходимости проводятся повторные курсы лечения.
5. Следует выбирать наиболее рациональный путь введения, учитывая
свойства препарата.
6. При комбинировании препаратов необходимо знать синергизм их
действия и особенности фармакокинетики с учетом топонимики
пораженных органов.

АНТИБИОТИКИ. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ.

ПОБОЧНЫЕ ЯВЛЕНИЯ
ПРИ АНТИБИОТИКОТЕРАПИИ
Открытие антибиотиков — одно из важнейших достижений
естествознания XX века. В медицине использование антибиотиков
положило начало эре эффективной химиотерапии, получившей
официальное название «антибиотикотерапия».
С применением антибиотиков связаны крупные успехи в борьбе с
инфекционной заболеваемостью, снижении смертности, ликвидации
многих эпидемических процессов, улучшении демографических
показателей.
Впервые термин «антибиотик» (от греч. «анти» — против, «bios» —
жизнь) ввел в 1942 году 3. Ваксман, в переводе дословно означает —
против жизни. Первичное толкование противоположно его
биологическому и медицинскому назначению. Однако эта терминология
настолько прочно вошла в нашу жизнь, что, несмотря на несовершенство,
термин «антибиотик» невозможно оспаривать и заменить другим.
173
 Наиболее полную, научно обоснованную формулировку понятию
«антибиотик» дал Н. С. Егоров в работе «Основы учения об
антибиотиках» (1986): «Антибиотики — специфические продукты
жизнедеятельности организмов или их модификации, обладающие
высокой физиологической активностью по отношению к определенным
группам микроорганизмов (вирусам, бактериям, актиномицетам,
грибам, водорослям, простейшим) или к злокачественным опухолям,
избирательно задерживая их рост или подавляя развитие». В этой
сложной формулировке отсутствует указание на то, жизнедеятельность
какого организма имеется в виду. И это не случайно. Сейчас твердо
установлено, что антибйотики или антибиотические вещества способны
вырабатывать любые живые организмы — растения и микробы,
холоднокровные, пресмыкающиеся, беспозвоночные и млекопитающие;
Несмотря на то, что наука об антибиотиках — молодая отрасль
медицины, летоисчисление которой начинается с 1940 года, ее ста-
новлению способствовали поиски ученых конца XVIII и XIX века.
Краткая хроника наиболее значимых исследований.
В 1877 году Л. Пастер доказал способность аэробных бактерий
подавлять рост возбудителя сибирской язвы.
Во второй половине XIX века (1845—1901) русские ученые В. А.
Манассеин и А. Г. Полотебнов впервые показали, что грибы из рода
Penicillium могут задерживать развитие некоторых кожных
заболеваний.
В 1896 году Р. Гозио выделил из культуральной жидкости одного из
видов Penicillium кристаллическое соединение — микофеноловую
кислоту, которая подавляет рост возбудителя сибирской язвы.
В 1899 году Эммерих и Л. Лоу получили из Ps. pyocyanea активное
антибиотическое вещество — пиоцианазу, обладающую свойствами
антисептика.
В 1951—1953 годах В. С. Деркач выделил из культуральной
жидкости синегнойной палочки вещество, обладающее выраженным
противоопухолевым действием, И создал достаточно активный
противоопухолевый препарат неоцид, который в течение многих лет
использовался для лечения онкологических заболеваний.
В 1910—1913 годах О. Блэк и У. Алсберг выделили из культу-
ральной жидкости грибов рода Penicillium пеницилловую кислоту. В
1929 году А. Флеминг открыл первый антибиотик — пенициллин, а в
1940 году 3. В. Ермольева получила пенициллин в кристаллическом
виде.
С получения и клинического использования пенициллина и
начинается эра антибиотикотерапии. В Отличие от других продуктов
жизнедеятельности (органических кислот, спиртов и им подобных
соединений) антибиотики характеризуются четырьмя основными
признаками:
174
 антибиотики — конечные продукты обмена, по биологическим
свойствам являющиеся антиметабодитами;
антибиотики обладают высокой биологической активностью по
oтношeнию к чувствительным к ним организмам (например, пенициллин
в концентрации 0,000001 г/мл оказывает четко выраженное
бактерицидное действие на чувствительные к нему бактерии);
антибиотикам присуща избирательность действия. Каждый из
них проявляет свое действие лишь в отношении определенных видов, не
оказывая заметного влияния на другие формы живых существ. Так,
бензилпенициллин задерживает развитие грамположительных кокков и
не оказывает действия на грамотрицательные бактерии, трибы или другие
виды организмов;
безвредность для человека и животных отличает антибиотики от
общебйологических ядов — сулемы, фенола, мышьяка, подавляющих
жизнедеятельность любого организма, вступающего с ним в контакт.
За единицу антибиотической активности принимают мини-
мальное количество антибиотика, способное подавить развитие или
задержать рост определенного числа клеток стандартного тест-штамма
микроорганизма в единице объема питательной среды.
В настоящее время известно более 6000 антибиотических ве-
ществ. И это требует их классификации; Сейчас используют четыре вида
классификаций антибиотиков— по биологическому происхождению;
механизму биологического действия; спектру биологического действия;
химическому строению.
Классификация антибиотиков по биологическому происхож-
дению:
Антибиотики, образуемые эубактериями:
представителями рода Pseudomonas — пиоцианин (Ps.
aeruginosa), вискозин (Ps.viskosa);
представителями рода Micrococcus, Streptococcus, Diplococcus,
Chromobacterium, Escherichia, Proteus — диплоцин, продигиозан,
колиформин, протаптины;
бактериями рода Bacillus — грамицидины, субтилин,
полимиксины, колистатин.
Антибиотики, образуемые микроорганизмами рода Streptomyces,
— стрептомицин, тетрациклины, новобиоцин, актиномицины.
Антибиотики, образуемые несовершенными грибами,— пеницил-
лин, гризеофульвин.
Антибиотики, образуемые грибами, относящимися к классам
базидомицетов и аскомицетов,— термофиллин, лензитин, хетомин.
Антибиотики, образуемые лишайниками, водорослями, низшими
растениями,— усниновая кислота (бинан), хлореллин.
Антибиотики, образуемые высшими растениями,— аллицин,
рафанин, фитоалексины: пизатин (горох), фазеолин (фасоль).
175
 Антибиотики животного происхождения — лизоцим, экмолин,
круцин, интерферон.
Классификация антибиотиков по механизму биологического
действия:
Антибиотики, ингибирующие синтез клеточной стенки,—
пенициллины, бацитрацин, ванкомицин, цефалоспорин, Д-циклоспорин.
Антибиотики, нарушающие функции мембран,— альбомицин,
аскозин, грамицидины, кандицидины, нистатин, трихомицин, эндомицин.
' ,
Антибиотики, избирательно подавляющие синтез (обмен) нук-
леиновых кислот:
РНК-актиномицин, гризеофульвин, канамицин, неомицин,
новобиоцин, оливомицин;
ДНК-актидион, брунеомицин, митомицины, новобиоцин,
саркомицин, эдеин.
Антибиотики —ингибиторы синтеза пуринов и пиримидинов —
азасерин, деконин, саркомицин.
Антибиотики, подавляющие синтез белка,— бацитрацин, виомицин,
канамицин, метимицин, неомицин, тетрациклины, хлорамфеникол,
эритромицин.
Антибіотики — ингибиторы дыхания — антимицины, олигомицин,
патулин, пиоцианин, усниновая кислота (бинан).
Антибиотики — ингибиторы окислительного фосфорилирования —
грамицидины, колицины, олигомицин, тироцидин, валиномицин.
Антибиотики, обладающие антиметаболитными свойствами,—
фураномицин.
Антибиотики-иммунодепрессанты — актиномицины С и Д,
оливомицин, брунеомицин, рубомицин.
Классификация антибиотиков по спектру биологического дей-
ствия:
Противобактериальные антибиотики узкого спектра действия,
активные в отношении грамположительных бактерий.
Группа пенициллина - бензилпенициллин, бициллин,
феноксиметилпенициллин. / Полусинтетические
пенициллины:
кислотоустойчивые, неактивные в отношении
пенициллиназоустойчивых стафилококков — пропициллин,
фенетициллин; ,
кислотоустойчивые, активные в отношении
пенициллиназоустойчивых стафилококков,— оксациллин,
клоксацил-лин, диклоксациллин.
Полусинтетические цефалоспорины — цефалоридин, цефалотин,
цефалоглицин, цефалексин, бацитрацин, ванкомицин, ристомицин,
линкомицин, новобиоцин.
176
 Макролиды — эритромицин, олеандомицин, карбомицин,
спирамицин, лейкомицин, Тилозин, фузидин. Противобактериальные
антибиотики широкого спектра действия.
Биосинтетические тетрациклины — хлортетрациклин,
окситетрациклин, диметилхлортетрациклин, диметилтетрациклин;
полусинтетическйе тетрациклины — метациклин, доксициклин,
моноциклин, хлорамфеникол;
полимиксины, колистин;
аминогликозиды — стрептомицин, неомицин, канамицин,
гентамицин, гигромицин;
грамицидин С; и полусинтетические пенициллины—
ампициллин, карбени-
циллин.
Противотуберкулезные антибиотики — стрептомицин, канамицин,
виомицин, циклосерин.
Противогрибковые антибиотики — нистатин, гризеофудьвин,
леворин, амфотерицин В, кандицин, трихотецин.
Противоопухолевые антибиотики — актиномицин С, митомицин С,
оливомицин, брунеомицин, рубомицины. ^
Противоамебные антибиотики—фумагиллин,
Классификация антибиотиков по химическому строению:
антибиотики ациклического строения;
антибиотики алициклического строения;
антибиотики ароматические;
тетрациклины;
антибиотики-хиноны;
антибиотики, содержащие кислород-гетероциклические соединения;
антибиотики-олигомицини;
антибіотики - макролиды;
аминогликозидные антибиотики;
антибиотики, содержащие азот- гетероциклические соединения;
антибиотики-полипептиды; антибиотики-дипсипептиды;
актиномицины;
стрептомицины;
металлсодержащие соединения.
Более чем полувековое применение антибиотиков не осталось без
отрицательных последствий. Они сфокусировались на двух главных
направлениях — побочное действие антибиотиков нa микробы и на
человеческий организм.
Подходя к вопросам понимания механизмов
антибиотикорезистентности, следует особо подчеркнуть, что учение об
антибиотиках сформировалось на фундаментальной основе изучения мик-

12 «Микробиология» 177
 робиологического эффекта антагонизма и реализовалось блестящим
использованием этих результатов — созданием А. Флемингом первого
антибиотика — пенициллина.
Взаимодействие микроорганизмов в условиях естественного
обитания и паразитирования происходит разнообразно, в том числе путем
антагонизма, паразитизма, хищничества, метабиоза и симбиоза.
Все известные классы антибиотиков либо представляют собой
биологические производные эффекта микробного антагонизма, либо
имитируют этот эффект синтезированными химическими препаратами,
аналогичными или родственными по химическому составу
соответствующим микробиологическим продуктам.
Антагонизм между различными микроорганизмами проявляется:
истощением питательной среды более активным, участником
микробной ассоциации, что приводит к задержке развития двух
микроорганизмов;
изменением рН окислительно-восстановительного потенциала,
осмотических свойствсреды, ее поверхностного натяжения и других
факторов, обуславливающих задержку развития и гибель тех или иных
микробов в ассоциации;
образованием микробом-антагонистом токсических продуктов —
антибиотиков.
Антагонизм между различными микроорганизмами в своем
биологическом эффекте принципиально характеризуется четырьмя
типами реакций:
антагонизм in vitro и in vivo;
антагонизм угнетающий (бактериостатический), бактерицидный,
бактериолитический антагонизм функций;
антагонизм роста;
односторонний и двусторонний, внутри- и межвидовой, гете-ро- и
изоантагонизм.
К Созданию антибиотиков прямое, избирательное отношение
имеет вид антагонизма, проявляющийся продукцией токсических
метаболитов, обладающих способностью угнетать жизнедеятельность или
убивать бактериальную клетку. ;
Следует особо отметить, что подразделение на бактерицидные и
бактериостатические является весьма условным для всех известных
антибиотиков, поскольку этот биологический эффект пропорционален
концентрации действующего препарата. Универсальная способность
антибиотиков проявлять бактериостатический эффект и определяет
проблему антибиотикорезистентности.
Любой из известных антибиотиков способен оказывать
бактериостатическое или бактерицидное действие лишь в отношении тех
микроорганизмов, которые являются его природними ан- -
178
 |тагонистами. Этим и определяется спектр активности современных
антибиотиков. Чем глубже антагонистические взаимосвязи продуцента
антибиотика, тем шире спектр антимикробного дей-ствия получаемого
препарата. Чувствительность микробов-мишеней также зависит от этого
биологического взаимодействия. Микробы, которые в природных
условиях паразитирования выступают |как метабионты или симбионты,
никогда не будут чувствительны |к антибиотикам, полученным от
соответствующих продуцентов. Это первое, ведущее положение в учении
об антибиотиках, с которым связаны как положительные, так и
отрицательные эффекты применения этих препаратов.
Второе базовое положение, характеризующее положительные и
отрицательные качества антибиотиков, заключается в том, что, не обладая
способностью прямой дезорганизации химической структуры
бактериальной клетки-мишени, как это свойственно антисептикам, они
проявляют свое действие через избирательное блокирование одной из
составных пластической и биохимической функции микробной клетки.
Именно это и составляет основу классификационного подразделения
антибиотиков по механизмам биологического действия (на клеточную
оболочку, клеточную мембрану, процессы дыхания, ингибиция ДНК и
РНК, синтез белков и т. д.). -
В чем отрицательный смысл такой биологической активности
антибиотиков и какое отношение это имеет к проблеме анти-
биотикорезистентности? Микробная клетка, представляя собой
одноклеточный организм с исключительно развитыми адаптационными
возможностями, способна эффективно перестраивать свои биохимические
и биологические функции под влиянием факторов, ингибирующих один
из основных процессов жизнедеятельности. Так, известно, что под
влиянием антибиотиков, действующих на клеточную оболочку, бактерии
способны, сохраняя жизнеспособность и основные биологические и
патогенные свойства, лишаться клеточной оболочки, формируя
сферопласты, не- стабильные, условно-стабильные и стабильные L-
формы. Под влиянием препаратов, подавляющих процессы аэробного
дыхания, то есть основные компоненты цикла Кребса, микроорганизмы
эффективно переходят на факультативный или облигатный тип
анаэробного дыхания. Примером этому могут служить
антибиотикорезистентные штаммы стрептококка, характеризующиеся об-
лигатным анаэробизмом. Именно антибиотикорезистентные анаэробные
стрептококки являются основными возбудителями обструктивных
бронхитов детей раннего возраста, смертность от которых очень велика.
Таким образом, формирующаяся антибиотикорезистентность
сопровождается существенным изменением структуры и основных
функций бактериальной клетки. С антибиотикорезистентны-
12* 179
 ми штаммами связано изменение основной структуры инфекцион-
ных заболеваний, их типичной клинической характеристики, что
исключительно затрудняет процесс диагностики, лечения и про-
филактики современных инфекционных заболеваний. При этом
атипичность основных свойств микробных штаммов пропорциональна
уровню их антибиотикорезистентности. Поэтому специалистам крайне
важно знать объективные критерии классификации микроорганизмов по
степени чувствительности к антибиотикам. А. Б. Черномордик
подразделяет микроорганизмы на пять основных групп:
чувствительные — развитие подавляется терапевтическими
дозами антибиотиков;
среднечувствительные — терапевтический эффект достигается
при использовании максимальных терапевтических доз антибиотика;
умеренно устойчивые.— лечебное действие наблюдается при
локализации инфекционного агента только в том органе, в котором
накапливается антибиотик; ,
устойчивые — препараты не оказывают лечебного действия;
зависимые — слабо или совсем не развиваются, если отсутствует
антибиотик, ставший для них фактором роста.
Из приведенной классификации следует, что микробы в процессе
взаимодействия с антибиотиками способны не только по
повышающемуся уровню формировать устойчивость, но включать эти
препараты в основной цикл своего роста, то есть определять
жизнедеятельность в зависимости от антибиотика.
Первоосновой формирования антибиотикорезистентности
микроорганизмов является наличие у антибиотиков бактериоста-
тического действия. Регистрируемая в микробиологических опытах
задержка роста при проявлении антибиотиком бактериостатического
действия в биологическом плане характеризует собой акт
приспособления микробной клетки к действию препарата, в процессе
которого перестраивается соответствующая пластическая или
биохимическая функция, достигается селективный эффект отбора
наиболее устойчивых особей, дающих генерации
антибиотикорезистентных штаммов.
Сформировавшись как фундаментальное направление медико-
биологической науки, проблема антибиотикорезистентности
теоретически основывается на двух взаимодополняющих концепциях —
хромосомной и внехромоеомной.
Основу хромосомной концепции антибиотикорезистентности
разработал Demereek (1959) в виде гипотезы полигенной системы, при
которой каждая последующая ступень формирования ан-
тибиотикорезистентности контролируется отдельным участком (локусом)
хромосомы — это мутационная теория антибиотикорезистентности. Она
основывается на известной способности анти-
180
 биотиков оказывать мутагенное действие на бактериальную клетку
посредством таких генетических механизмов как трансдукция,
трансформация и конъюгация. Сейчас доказаны два основных типа
формирования антибиотикорезистентности по хромосомному типу:
пенициллиновый — «малые мутации» — многофазные,
медленные, многоступенчатые нарастания резистентности;
стрептомициновый — быстрое возникновение высоких уровней
резистентности.
Но мутационная (хромосомная) теория не может объяснить
многообразие формирования лекарственной устойчивости у мик-
роорганизмов. Проведенный в 60-х годах в Лондоне специальный
симпозиум по Вопросам адаптации микроорганизмов в качестве
альтернативы мутационной теории выдвинул положение о том, что
лекарственная устойчивость у микробов может формироваться как
результат:
разрушения антибиотиков неспецифичными ингибиторами, в том
числе микробными ферментами;
эффекта непроницаемости клеточной стенки бактерий для
проникновения лекарственного препарата;
устранения из биохимического обмена бактериальной клетки
энзиматического процесса, который может быть блокирован
лекарственным препаратом.
Определяя элементы общности и различий хромосомной и
внехромосомной устойчивости у бактерій, Д. Г. Кудлай показала
следующее: внехромосомная устойчивость, как правило,
множественная, а хромосомная — моноспецифическая;
гены внехромоеомной устойчивости укорачиваются одновременно,
либо спонтанно, либо под действием определенного соединения.
Хромосомная устойчивость более стабильна;
характерной особенностью эписом является независимость их
поведения от хромосомы бактерий (при репликации, элиминации и т. д.).
В настоящее время установлено, что генетическую основу вне-
хромоеомной устойчивости определяют R-плазмиды, содержащие гены,
сообщающие клетке-хозяину резистентность к различным
лекарственным препаратам, прежде всего к антибиотикам.
R-плазмиды состоят из компонентов, выполняющих различные
функции. В их составе содержатся фрагмент — фактор переноса
резистентности (ФПР), ответственный за перенос резистентности, R-
детерминанты и гены резистентноети.
Если хромосомная устойчивость формируется по законам мутации
от материнской клетки, испытавшей действие антибиотика, и,
следовательно, ограничена одним определенным штаммом, то
эпидемиологические аспекты внехромоеомной устойчивости выражены
гораздо сильнее. Плазмиды отличаются высоковыражен-
181
 ной инфекциозностью, способны передаваться устойчивым донором
чувствительному реципиенту, обеспечивая его плазмиднонаведенную
устойчивость к антибиотику, с которым не было прямого контакта. Этим
и определяется вся сложность преодоления внехромосомной
лекарственной устойчивости.
Клинические штаммы в проявлении своей
антибиотикорезистентности генетически сочетают как хромосомный, так
и внехромосомный механизмы устойчивости — это крайне осложняет ре-
шение проблемы антибиотикорезистентности.
Перспективные направления решения проблемы инфекционной
передачи R-плазмидной устойчивости:
предупреждение образования пилусов на клеточной стенке бактерии
путем применения мембранотропных и поверхностно-активных веществ;
воздействие на белоксинтезирующую систему бактерий с целью
повышения ее чувствительности к антибиотикам;
подавление ферментов, инактивирующих антибиотики;
рациональное использование антибиотиков в клинике.
Рассматривая спектр побочного действия антибиотиков на че-
ловеческий организм, следует отметить, что частота осложнений от
антибиотикотерапии неуклонно возрастает. И осложнения носят, прежде
всего, аллергический характер. Так, до 1951 года в литературе был описан
единственный случай анафилактического шока со смертельным исходом
на введение антибиотика. В 1957 году, по данным ВОЗ, анафилактический
шок встречался в среднем на каждые 70 тысяч больных; в 1959 году
побочные реакции на введение антибиотиков составили 1 %, причем на
каждые 1070 случаев 800 представляли собой анафилактический шок. В
настоящее время побочные явления от антибиотикотерапии
пенициллином регистрируются в 37—63 % случаев, причем 89,4 % из них
составляют аллергические реакции.
Рассмотрим основные принципы профилактики лекарственной
аллергии. Они включают две группы мероприятий: ограничение
возникновения сенсибилизации и предупреждение аллергических реакций
у сенсибилизированных лиц.
Одна из причин высокой частоты аллергических реакций на
лекарства — игнорирование мер профилактики.
Всех больных, которым необходимо ввести антибиотик, можно
разделить на две группы. К первой группе относятся лица, не имевшие в
прошлом каких-либо аллергических заболеваний и хорошо переносящие
все лекарственные средства, пищевые продукты, контакты с бытовыми
химическими веществами, а также никогда ранее не принимавшие
лекарств. Эта группа больных может получать антибиотики без
ограничений, и у них нецелесообразно проводить какие-либо меры по
выявлению скрытой аллергии.
182
 Вторая группа — больные с отягощенным аллергоанамнезом могут быть разделены по степени риска на
три категории:
первая степень риска — лица, у которых сведения о непереносимости лекарственных веществ отсутствуют, но
они страдают различными аллергическими или инфекционно-аллергическими заболеваниями. Для
профилактики лекарственной аллергии и анафилактического шока им сначала делают накожные
(скарификационные) или подъязычные (сублингвальные) пробы. При отрицательном результате ставят
внутрикожную пробу и через 30 минут при отрицательном результате вводят основную терапевтическую
дозу;
вторая степень риска — больные, имеющие в анамнезе непереносимость какого-либо препарата или
страдающие пищевой или химической аллергией. Лекарственные пробы им делают в следующей обязательной
последовательности: первоначально наиболее безопасные (компрессную или капельную), затем накожную и
подъязычную и лишь после этого внутрикожную. После этого вводят антибиотик;
третья степень риска — у лиц этой группы в прошлом наблюдались тяжелые лекарственные
аллергические реакции. Они не переносят многих лекарств, сходных по химическому строению, а также
препаратов других химических групп. Таким больным любые контактные пробы противопоказаны на первом
этапе, их кровь исследуют лабораторно. При отрицательных результатах последовательно ставят компрессную
или капельную, потом накожную или подъязычную и лишь затем — внутрикожную пробы. При отрицательных
результатах вводят терапевтическую дозу антибиотика.

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
ВАКЦИНЫ
Изобретение и применение первых вакцин положило начало развитию иммунологии, которая ныне
превратилась в фундаментальную биологическую науку. Одновременно с развитием иммунологии
совершенствовалась вакцинопрофилактика, которая продолжает существовать как самостоятельная дисциплина
— вакцинология.
Термин «вакцина» происходит от англ. «wacca» — корова и восходит к выдающемуся результату
многолетних исследований английского врача Э. Дженнера по созданию противооспенного профилактического
препарата, способствовавшего переводу этой грозной инфекции в управляемую, который завершился полной
ликвидацией оспы на планете.
В классификации видов приобретенного иммунитета вакцины и обеспечиваемая ими
вакцинопрофилактика относятся к искусственному активному иммунитету, основывающемуся на фор-
мировании специфической невосприимчивости организма за счет введения иммуногенных препаратов.

Термин «вакцина» в настоящее время объединяет различные препараты из бактерий, токсинов, вирусов и т. д.,
способных при введении в организм инициировать развитие адекватной иммунологической реакции,
завершающейся формированием специфической невосприимчивости.
Основу активной иммунопрофилактики составляют традиционные вакцины:
 живые ослабленные (аттенуированные);
 убитые микроорганизмы;
 анатоксины (обезвреженные токсины).
Из этой классификации следует, что вакцина представляет собой бактерийный препарат, сохранивший
антигенность и иммуногенность, но не способный вызвать в организме соответствующее заболевание.
Однако большинство природных антигенов (микроорганизмы, анатоксины), а также выделяемые из них
химические вещества и комплексы (белки, полисахариды и т. д.) являются сложными структурами, а,
следовательно, при иммунизации вызывают нецелесообразный иммунный ответ, направленный не только про-
тив протективного, но и сопутствующего антигена. Поэтому убитые вакцины в настоящее время из раздела
вакцинологии выделились в самостоятельные направления:
 химические вакцины — антигенные составные химической структуры микробной клетки;
 искусственные антигены и вакцины.
Аксиомой любого направления вакцинологии является сохранение в получаемом бактерийном препарате
максимальной антигенности и иммуногенности. Рассмотрим в этом аспекте основные способы получения
вакцин, они не являются альтернативными и зависят от вида сообщаемого иммунитета
нестерильный (регламентирует получение аттенуированных живых вакцин);
стерильный (убитые, химические вакцины, искусственные антигены и вакцины);
напряженности иммунитета
стойкий (убитые, химические вакцины, искусственные антигены и вакцины);
ослабленный, проходящий, кратковременный (живые вакцины);
наличия структурно оформленного протективного антигена и возможности его изоляции из
 микроорганизма
при наличии (химические вакцины, искусственные антигены и вакцины);
при отсутствии (живые или убитые вакцины).

Живые вакцины
Основополагающим принципом получения живых (аттенуированных) вакцин является снижение
вирулентности микроорганизмов при сохранении исходной антигенности и иммуногенности. Критерием
профилактической эффективности для живых вакцин является остаточная вирулентность — способность
приживляться в организме, вызывать локальные изменения специфического характера со стороны клеток и
тканей, аллергизировать и иммунизировать организм.
Таким образом, в основу способа получения живых вакцин заложено направленное культивирование
микроорганизмов на питательных средах и пассирование на лабораторных животных или в культуре ткани (для
вирусов), в результате которого микроорганизм должен ослабить и генетически закрепить (обязательное
условие) сниженную вирулентность.
Однако и культивирование, и пассирование имеют свои особенности — они направлены на лишение
микроорганизма оптимальных условий для физиологической воспроизводимости.
При культивировании это может достигаться следующими способами:
добавлением в питательную среду ингибирующих веществ. Так, известная вакцина БЦЖ была получена А.
Кальметтом и Ш. Гереном в результате 236 последовательных пересевов вирулентного штамма Valle на
картофеле-глицериновой среде в присутствии 10 % желчи, к которой возбудитель туберкулеза чувствителен;
введением в питательную среду антибиотиков и антисептиков в суббактериостатических концентрациях;
использованием «голодных» сред, не соответствующих по качественному составу культивируемому
микроорганизму;
изменением оптимального температурного режима;
использованием для пересевов «старых» культур;
- длительным культивированием микроорганизма на питательных средах.
При пассировании на лабораторных животных непременным условием получения живой вакцины
является использование слабовосприимчивого или невосприимчивого животного, когда микроорганизмы не
способны в полной мере проявить свою вирулентность, а, следовательно, болезнетворность.
Классическим примером является живая вакцина против бешенства, полученная Л. Пастером при
многократном пассировании вируса уличного бешенства через мозг кролика.
Живые вакцины, модулируя иммунный ответ, адекватный перенесенному заболеванию, имеют
существенные преимущества перед остальными вакцинами по этому показателю. Однако им свойственны
недостатки, которые ограничивают применение данного способа получения вакцин:
возможность реверсии вакцинного штамма в патогенную форму;
гетерогенность микробной популяции, среди которой могут встретиться вирулентные особи;
сложности стандартизации вакцины по антигенному и иммуногенному потенциалам из-за присутствия
особей, находящихся на различных стадиях размножения: от клеток в стадии логарифмического размножения
(ускорения) до погибших клеток, не обладающих заданной иммуногенностью;
зависимость от иммунного статуса, наличия сопутствующих заболеваний, ограничения или
противопоказания для применения живой вакцины.

Убитые вакцины
Способ рассчитан на обезвреживающий эффект физических и химических факторов, при котором
гибель микробной клетки не влечет за собой утраты иммуногенных и антигенных свойств. Отсюда следует
дозированность действия обезвреживающего фактора и его направленность на химические компоненты
структуры микробной клетки, не обладающие свойством протективного антигена.
К. убитым вакцинам относятся также аутовакцины, отличающиеся индивидуальным назначением, и
анатоксины.
Наиболее распространенный физический метод создания убитых вакцин — воздействие на микробную
клетку температурного фактора, в результате чего получаются гретые вакцины.
Как было отмечено выше, полный антиген, обладающий свойством иммуногена, относится к белкам или
термолабильным комплексам. Это ограничивает обезвреживающее действие температурного фактора
значениями не выше 56 °С.
Однако следует иметь в виду, что протективный антиген находится в клеточной оболочке или цитоплазме
микробной клетки, то есть «прикрыт» от термического эффекта химическими компонентами иной природы.
Именно поэтому абсолютная температура, используемая при получении гретых клеток, как правило, составляет
80 °С. Гретые вакцины можно получить не из всех микроорганизмов. Данный способ распространяется лишь на
те из них, полный антиген которых имеет белковую структуру. Другим, также распространенным, методом
получения убитых вакцин является их обезвреживание ультрафиолетовым излучением. УФ-вакцины
образуются только при строгом соблюдении и дозированности облучения, поскольку деструктивный потенциал
УФ-лучей в отношении основных химических компонентов структуры довольно значителен.
В литературе описан способ получения озвученных вакцин — обезвреживающее действие на
микроорганизм ультразвука определенной волновой длины.
Наряду с физическими для получения убитых вакцин используются и химические факторы, например,
способ получения формолвакцин, основанный на подборе минимально действующей концентрации и
температурного режима, обеспечивающих гибель микроорганизма при сохранении протективного антигена.
Данный способ получил широкое применение для обезвреживания экзотоксинов и является основополагающим
для изготовления анатоксинов. К токсину (но не экзо- или эндотоксической субстанции) добавляют 0,3—0,4 %
формалина и выдерживают при 39-40 °С; течение трех-четырех недель.
Убитые вакцины можно также получить обезвреживанием их антибиотиками, антисептиками,
дезинфектантами. Данные способы практически только обозначены в методологии вакцинного дела, поскольку
большинство современных возбудителей инфекционных заболеваний характеризуется высокой устойчивостью
к этим препаратам.
Обязательное условие контроля убитых вакцин — проверка стерильности, направленная на выявление
хотя бы одной микробной клетки, сохранившей жизнеспособность. В отличие от живых убитые вакцины
поддаются стандартизации по количественному содержанию микробных тел в определенном объеме,
антигенности и иммуногенности. Они создают стерильный иммунитет, что также является положительным от-
личием.

Химические вакцины
Химические вакцины — иммуногенные препараты, представляющие собой химические компоненты,
выделенные из структуры микробной клетки. Материально химические вакцины, в зависимости от заряда
иммуногенности, могут быть представлены изолированными из структуры микробной клетки нуклеиновыми
кислотами (ДНК или РНК), рибосомами, белками, липополисахаридами, глюцидолипопротеидными
комплексами, цитоплазматической субстанцией и обрывками оболочки микробной клетки.
Химические вакцины также получают, используя физико-химические факторы воздействия. Однако если
живые и убитые вакцины основаны на сохранении структуры микробной клетки, то химические вакцины
получают из дезинтегрированной (разрушенной) микробной клетки.
При использовании физико-химического способа получения химических вакцин наиболее часто
применяют деструктивное озвучивание микроорганизма с последующей седиментацией необходимого
компонента ультрацентрифугированием с заданной скоростью, разделением методами электрофореза или
колоночной хроматографии.
В основу химического метода заложена экстракция из структуры микробной клетки необходимого
компонента с использованием органических растворителей, эффекта гидролиза и т. п. Классическим примером
является метод Буавена, основанный на применении трихлоруксусной кислоты и позволяющий выделить
протективный антиген грамотрицательных бактерий.
Химические вакцины имеют несомненные преимущества перед живыми и убитыми: менее реактогенны,
характеризуются иммуногенной направленностью, относятся к очищенным бактерийным препаратам и, как
правило, не вызывают при иммунизации побочных иммунологических эффектов.
Перспективным направлением развития и совершенствования современной вакцинологии признана
разработка искусственных антигенов и вакцин. В основу получения искусственных антигенов положено как
субстратное использование антигенных детерминант микроорганизма, так и их синтез. В настоящее время со-
зданы искусственные конъюгированные и пептидные антигены. Также получены синтетические антигены для
искусственных вакцин на основе:
полипептидов вирусов;
полипептидов бактерий и их токсинов;
полипептидов простейших;
полисахаридов бактерий;
поливалентных комплексов;
антигенов репродуктивной системы.
Выделенные или синтезированные антигенные детерминанты комплексируются с природными
иммунопотенциаторами, к которым относят:
адъюванты;
полиэлектролиты;
полиионы.
Модельные искусственные антигены на основе синтетических полиионных представлены следующим
образом:
гаптен-полиион;
белок-полиион;
полисахарид-полиион;
полисахарид-полиион-белок;
гаптен-полиэтиленгликоль.
 Таким образом, в основу получения искусственных вакцин положено использование антигенной
детерминанты или гаптена; (неполного антигена) микроорганизма с придачей им иммуногенной полноценности
за счет комплексации с иммунопотенциатором.
В настоящее время разработаны и экспериментально испытаны искусственные противосальмонеллезные
вакцины, искусственные вакцины против гриппа.
Определены перспективы создания аллерговакцин и противораковых вакцин. Реактогенность вакцин
и их классификация по массовости и обязательности применения
Главным критерием качества вакцины, вне зависимости от способа её получения, является регламентированная
реактогенность. К выпуску допускаются ареактогенные и мало реактогенные вакцины:
Малореактогенность — общая реакция на введение вакцины,
заключается в повышении температуры тела до 37,5º С на один-два дня.
Средняя реактогенность — повышение температуры до 38,5 "С
в течение одного-двух дней.
Высокая реактогенность — повышение температуры свыше 38,5 °С и сохранение ее более двух дней.
В некоторых случаях показателем реактогенности считается максимальный процент вакцинируемых,
отвечающих реакцией определенной интенсивности на введение препарата.

Классификация вакцин по массовости и обязательности применения

Классификация вакцин включает характер возбудителя (антибактериальные и
противовирусные), его состояние (живые и убитые), обязательность применения (вакцины против мас-
совых детских инфекций обязательны для применения), остальные используются по эпидемическим
показаниям; для вакцинации угрожаемого контингента.
Вакцинопрофилактика может проводиться моновакцинами,
вызывающими искусственный активный иммунитет к одной инфекции, или ассоциированными —
сообщающими невосприимчивость к нескольким инфекционным заболеваниям.
Вакцины обязательного применения. Вакцина БЦЖ (живая, ослабленная) вводится здоровым детям на
пятый — седьмой день после рождения с ревакцинациями в 7, 11—12, 16—17, 22—23, 27—30 лет. Вариантом
является вакцина БЦЖ-М, содержащая вдвое меньше микобактерий в 0,1 мл (не используется для
ревакцинации).
Вакцину против полиомиелита дают внутрь короткими курсами с ревакцинациями — сначала трехкратно с
интервалом полтора месяца с трехмесячного возраста. Затем первая ревакцинация в полтора-два и в два-три
года — двукратное введение с интервалом полтора месяца. Вторая ревакцинация в семь-восемь лет (од-
нократное введение), третья ревакцинация в 15—16 лет (однократное введение).
Коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС-вакцина) вводится внутримышечно. Первый курс —
три инъекции с интервалом полтора месяца, начиная с трех-, шестимесячного возраста. Ревакцинация
однократная в полтора-два года. Из-за ее реактогенности для ревакцинации используют в шесть-семь лет АДС,
АДС-М, с 16 лет — столбнячный анатоксин.
Живая противокоревая вакцина вводится подкожно детям в возрасте 12 месяцев, при отсутствии у
беременных противокоревых антител — в шесть месяцев.
Живая паротитная вакцина вводится подкожно детям в возрасте 15-18 месяцев.
Вакциной по эпидпоказаниям является вакцина против клещевого энцефалита (с четырех лет), четыре
инъекции.
Вакцина угрожающего контингента. Антирабическая мозговая очищенная инактивированная сухая.
Антирабическая культуральная очищенная концентрированная инактивированная.

Противопоказания для вакцинации

1. Острая инфекция или острые инфекционные заболевания, обострение хронической инфекции, в
том числе туберкулезная интоксикация. Нельзя применять вакцины ранее, чем через 30 дней после
выздоровления от гриппа, ангины, ОРВИ.
2. Аллергические заболевания.
3. Заболевания ЦНС — энцефалиты, энцефалопатии, судорожный синдром.
4. Хронические заболевания паренхиматозных органов — почек, печени.
5. Тяжелые заболевания сердечно-сосудистой системы, в том числе гипертоническая болезнь II, III степени
(холерная вакцина).
6. Иммунодефицитные состояния.
7. Злокачественные новообразования и СПИД — абсолютное противопоказание.
Перспективы в разработке новых вакцин
В настоящее время сохраняется проблема улучшения вакцин против многих вирусных заболеваний.
В связи с этим определены основные направления и задачи, которые требуют:
безотлагательного решения
 разработка новых систем экспрессии для взрослого населения, детей, лиц, подверженных
наибольшему риску,— вирусы ВИЧ, гриппа;
разработка живого аттенуированного вируса — опоясывающий лишай, ветряная оспа, РСВ;
скорого решения
разработка аттенуированного вируса, экспрессия рекомбинантной ДНК — для всего населения и
групп повышенного риска — цитомегаловирус, ВГА, вирус простого герпеса, парагриппа, ротавирус.
В долгосрочной перспективе основное внимание уделено созданию генно-инженерных вакцин. Понятию
«идеальная вакцина» соответствует:
o высокая эффективность (защита индивидуума и всего населения);
o безопасность (отсутствие или незначительная частота побочных реакций);
o стабильные результаты;
o минимальное число иммунизирующих доз (лучше всего одна);
o простейший метод введения (пероральный);
o низкая цена;
o стабильность во время транспортировки и хранения;
o создание длительного иммунитета (желательно пожизненного);
o эффективный контроль эпидемической ситуации (в месте применения);
o возможность передавать технологию для организации широкомасштабного производства.
Рассматривая будущее вакцинологии, необходимо отметить, что наиболее важным является получение
более эффективных иммуногенов. Так, основную надежду по ускорению производства новой вакцины против
гриппа возлагают на рекомбинантные вирусы, образцы которых используются для производства обычных
ротавирусных вакцин. Метод основан на рекомбинации генов ротавирусов животных, которые обеспечивают
жизнеспособность, и генов ротавирусов человека, обеспечивающих необходимую иммуногенность.
Многообещающим в отношении создания стабильной живой аттенуированной вакцины является способ
конструирования новых геномов, дефектных или дополненных некоторыми генами, при помощи
клонированной ДНК — вирусной или копий вирусных ДНК, РНК.
Использование вирусных и бактериальных векторов также позволяет сформулировать новые
экспериментальные подходы к созданию вакцин, поскольку такие вакцины имеют высокий потенциал,
особенно против кишечных инфекций.
Огромные возможности дает метод экспрессии рекомбинантной ДНК в клетках млекопитающих, в
культуре клеток насекомых или их тканях, так как способствует большому выходу основного продукта, его
низкой цене, минимальной очистке без риска аллергических реакций у реципиентов на белки (для культуры
клеток насекомых).

СЫВОРОТКИ. ИММУНОГЛОБУЛИНЫ
Серотерапия и серопрофилактика — это лечебный или профилактический эффект, достигаемый
при введении в организм сыворотки или сывороточных препаратов, содержащих в необходимом количестве
иммунные антитела против возбудителя инфекционного заболевания или для предупреждения его возникно-
вения.
Иммунные сыворотки — материальная часть гуморального иммунитета, защитный эффект которого
принципиально характеризуется специфическим связыванием соответствующего антигена и антитела.
Основу биологической активности иммунных сывороток составляют антитела (иммуноглобулины
G)вырабатываемые В-клетками (плазмоцитами) в ответ на стимулирование соответствующим антигеном.
При формировании первичного иммунного ответа под влиянием раздражающего действия антигена В-
лимфоциты начинают активно пролиферировать, то есть выполнять иммуноморфологическую функцию
бласттрансформации. В процессе деления из материнской клетки образуются дочерние клетки, называемые
бластами. По мере деления они приобретают разную форму, поэтому различают большие и средние бласты.
Процесс антигено-стимулированного размножения В-лимфоцита завершается образованием иммунных малых
лимфоцитов, которые активно вырабатывают антитела против антигена и поставляют их в кровь, где они
накапливаются в количествах, достаточных для ликвидации раздражающего действия антигена. После этого
иммуностимулированные лимфоциты прекращают функцию антителообразования и становятся «клетками
памяти», способными к повторному ответу при встрече с антигеном.
Вторичный иммунный ответ проявляется выработкой антител «клетками памяти» без
иммуноморфологического процесса бластообразования.
Каким образом иммунные антитела воздействуют на специфичный им антиген? Принцип блокирования
антигена иммунными антителами определяется специфическим связыванием. При этом в зависимости от
физико-химических свойств антигена связывание с антителами может происходить двояко. Корпускулярные
антигены, представляющие собой, например, микробные клетки, связываются с иммунными сыворотками за
счет агглютинации, поэтому все антимикробные сыворотки называются агглютинирующими.
Растворимые антигены, к которым относятся токсины, связываются с иммунными сыворотками посредством
преципитации и называются преципитирующими.
По основному биологическому назначению сыворотки подразделяются на два вида — лечебно-
профилактические; диагностические.
К лечебно-профилактическим относятся сыворотки, содержащие антитела к полному антигену
микроорганизма или его токсину. Такие антигены еще называются защитными, или «протективными». Они,
соответственно, отвечают либо за жизнеспособность возбудителя, либо за его токсинообразование. Поэтому
при взаимодействии с такими сыворотками микроорганизм погибает или теряет способность вырабатывать
токсины.
Диагностические сыворотки содержат антитела к антигенам микроба, характеризующим процессы его
жизнедеятельности, но не влияющие на его жизнеспособность. Поэтому их взаимодействие с антигеном
(микробной клеткой или токсином) имеет диагностический смысл.
Каким образом получают лечебно-профилактические и диагностические сыворотки? В современном вакцино-
сывороточном производстве существует два метода получения иммунных сывороток - гетерологичный и
гомологичный. Гетерологичные сыворотки получают от иммунизированных животных, гомологичные — от
людей-доноров.

Получение гетерологичных сывороток

Принцип подбора животного-продуцента. В производственных условиях такие сыворотки получают от
лошадей. Для иммунизации подбирают те виды животных, у которых отсутствует видовой иммунитет к
данному антигену. Только в таком случае возможен антигензависимый иммунный ответ и получение сыво -
роток. Поэтому для каждого антигена подбирают чувствительный вид животных. Лошадь по своей видовой
антигенреакционной резистентности во многом сходна с человеком. Это с учетом производственных
потребностей (возможности длительной эксплуатации, ежегодного получения более 200 литров сыворотки от
каждого животного) и является обоснованием их выбора в качестве продуцента для получения, сывороточного
препарата.
Первые этапы работы: карантин — наблюдение — отбор. Затем проводится грундиммунизация —
введение малых доз антигена с учетом появления в сыворотке иммунных антител. Иммунизацию и
гипериммунизацию проводят по циклам с использованием определенных схем, учитывающих кратность
введения антигена, интервал между ними, нарастание доз.
В начальном периоде эксплуатации для иммунизации используют обезвреженные антигены (анатоксины
и вакцины). При выраженной антителопродукции переходят на введение необезвреженных антигенов.
Принципиальная схема иммунизации лошади
Через 4-5 дней вводят п/к 5-10-20-40-80-100-120-150 мл антигена. На 7-е сутки — пробное
кровопускание На 10-е сутки — 5 л крови (у лощади всего 25 л крови) Отдых 2-3 недели Иммунизация по
схеме 4—5 циклов иммунизации Отдых 2-3 месяца 10—12 циклов иммунизации Тотальное кровопускание (10-
15 л).
Полученную кровь собирают в цилиндры. После свертывания и отделения сгустка образуется
прозрачная часть —нативная сыворотка. К ней добавляют консервант (чаще хлороформ), прогревают при 60º С,
охлаждают до 6-8 °С, и отстаивают. При этом в осадок выпадают нестойкие белки и титр антител в сыворотке
стабилизируется. Затем сыворотку титруют, то есть определяют в ней расчетное содержание иммунных
антител. Силу сыворотки определяют в ME. За 1 ME принимается то минимальное количество сыворотки,
которое нейтрализует установленную дозу токсина.
Титрование сывороток проводится тремя методами: по Рамону in vitro; по Эрлиху in yivo; по Ремеру in
vitro.
После определения количества антител в сыворотке ее очищают от балластных белков-альбуминов, с
которыми не связаны их защитные свойства. Затем сыворотку подвергают очистке и концентрируют.
Концентрация сыворотки основана на выделении и растворении выделенных активных фракций в меньшем
объеме по сравнению с исходным — нативной сывороткой. Это позволяет вводить в организм препараты с
меньшим содержанием чужеродных для организма человека белков.
Методы очистки и концентрации:
пропускание через сыворотки на холоде углекислого газа, при этом глобулины выпадают в осадок;
высаливание сывороток на холоде сернокислым аммонием с последующим диализом и т. д.
В настоящее время для чистки и концентрации сывороток используется метод «Диаферм-3». Метод
основан на фракционировании сывороток сернокислым аммонием; обработке их пепсином с последующим
диализом в течение 40—42 часов.
Для диализа у сывороток устанавливают рН == 7,3. Для удаления оставшихся балластных белков
сыворотку эмульгируют хлороформом (30% по объему), при этом в осадок выпадает последняя порция
балластных белков. Хлороформ затем удаляют центрифугированием. Около 70 % сывороточных белков (имму-
нологически неактивных) удаляется, а остается глобулиновая фракция — антитела.
Оставшуюся прозрачную жидкость стерилизуют фильтрацией; титруют; испытывают на пирогенность,
безвредность и стерильность; разливают в ампулы, запаивают, этикетируют.

Получение иммуноглобулинов
Иммуноглобулины направленного действия готовят из сыворотки крови добровольцев, которые
подвергаются специальной иммунизации против определенного вида инфекции. Такие Препараты содержат
большое количество антител —γ-глобулины против гриппа, бешенства, оспы, клещевого энцефалита,
столбняка, стафилококка, иммуноглобулин Е, анафилактическая фракция IgD.
Иммунные сыворотки или иммуноглобулины следует вводить очень осторожно, так как могут
наблюдаться реакции в виде анафилактического шока, сывороточной болезни и т. д. Во избежание этого
препарат вводят по методу Безредка:
перед введением сывороток определяется индивидуальная чувствительность к чужеродному белку. Для
этого сыворотку разводят 1:100, в объеме 0,1 мл вводят подкожно;
через 20 минут, если реакция отрицательная, вводят 0,1 мл неразведенной сыворотки;
через 30—60 минут вводят всю назначенную дозу.
Если при введении десенсибилизирующей дозы 0,1 мл реакция положительная (папула 1 см, краснота),
сыворотку разводят всю и вводят очень осторожно с интервалами 20—30 минут в дозах 0,5; 2; 5 мл и т. д. При
этом наготове должен быть раствор адреналина (1:1000).

ЭУБИОТИКИ
Интенсивная химизация окружающей среды, насыщение ее ксенобиотиками актуализирует
проблему дисбактериозов. Ксенобиотиками (от греч. xenos — чужой) называют химические вещества
неприродного, синтетического происхождения (в том числе лекарственные препараты, средства бытовой
химии, ядохимикаты, продукты промышленного загрязнения и др.), обладающие биологической активностью и
способные нарушать микробиоценозы организма человека и животных, обусловливая дисбактериозы.
Дисбактериозы представляют собой количественные и качественные изменения состава, свойств и
ассоциативных отношений аутофлоры в экосистемах человеческого организма.
Эффективным способом коррекции микробной экологии различных экосистем организма, прежде всего
кишечника, является его заселение эубиотиками — бактериальными препаратами из живых представителей
нормальной микрофлоры. Применение биопрепаратов является традиционным лечебно-профилактическим
направлением отечественной медицины. Его существенное преимущество перед химиотерапией состоит в
полной физиологичности для организма человека и отсутствии какого-либо побочного действия, характерного
для синтетических антимикробных препаратов и антибиотиков.
Вопрос о положительной роли кишечной микрофлоры возник еще во времена Л. Пастера, который в 1885
году высказал мысль о ее возможном позитивном значении для организма. Начало работ по исследованию
микробного антагонизма связано с именем И. И. Мечникова, с его идеей борьбы с гнилостными кишечными
бактериями с помощью молочнокислых культур. Мечниковская простокваша (лактобациллин) представляла
собой молоко, заквашенное культурами болгарской палочки (Lactobacillus bulgaricum), выделенной из йогурта,
и молочнокислого стрептококка. Дальнейшим шагом в этих исследованиях явилось предложение А. Гартье,
который в 1910 году в Петербурге предложил применять ацидофильное молоко, заквашенное ацидофильной
палочкой, выделенной из кишечника. В 1900 году Тиссье впервые описал обнаруженные им в кишечнике
новорожденных детей грамположительные бесспоровые палочки и назвал их бифидобактериями.
Теория и практика современной бактериотерапии связана с такими именами отечественных ученых как Л.
Г. Перетц, Б. И. Бланков, О. В. Чахава, Б. А. Шендеров, А. А. Ленцнер, И. А. Сытник, С. И. Климнюк.
Широкое распространение разных форм дисбиотических состояний, обусловленных нарушением
эволюционно сложившихся биологических связей между макроорганизмом и нормальной микрофлорой,
требует создания арсенала соответствующих лекарственных средств для восстановительной терапии. Она обес-
печивается бактериальными препаратами, состав которых отражает многозвеньевую структуру нормального
микробиоценоза человека. Для этих целей используют выпускаемые отечественной промышленностью
биопрепараты в сухой форме — бификол, бифидумбактерин, колибактерин, лактобактерин, а также культуры
антагонистически активных штаммов в нативной форме (на молоке) — кисломолочные продукты культур
лактобактерий (L. acidopriilum, L. fermentun, L. plantarum, L. bulgaricum). Лактобактерии в монокультуре или
различных сочетаниях с бифидумбактериями составляют основы многих зарубежных биопрепаратов —
антибиофилюс, ацидофилюс, «Zyma», синерлак, ортобактер, омнифлора и др. На основании многочисленных
исследований в этой области сформулированы основные принципы создания современных эубиотиков.
 Основные принципы создания микробных биопрепаратов
Доказано, что нормальная микрофлора человека представляет собой сложную поликомпонентную
экологическую систему, каждый из сочленов которой составляет важное звено в обеспечении состояния
эубиоза. Это определяет целесообразность создания поликомпонентных биопрепаратов, включающих в свой
состав микроорганизмы облигатного биоценоза с разным механизмом биологической активности.
Перспективность использования того или иного вида микроорганизмов в производстве биопрепаратов
определяется, прежде всего, высокой частотой их распространения среди здоровых людей, начиная с трех лет.
В отношении кишечной микрофлоры этим критериям соответствуют, в первую очередь, бифидобактерии,
составляющие на 99 % микрофлору кишечника здорового грудного ребенка и на 60—90 % — взрослого
человека. Механизм антагонистического действия бифидобактерий связан с тем, что они образуют уксусную и
молочную кислоты, антибиотические вещества, препятствуя размножению патогенной и условно-патогенной
флоры, а также способствуют всасыванию в кислой среде витамина D, железа, ионов кальция. Остальные 10 %
составляют лактобактерии, эшерихии и др. Именно по этой причине уже используемые в медицинской
практике биопрепараты содержат перечисленные виды бактерий. Однако этим далеко не исчерпываются
перспективы создания новых препаратов эубиотиков, достаточно вспомнить, что, по данным Б. А. Шендерова,
основу аутофлоры составляют облигатно анаэробные бактерии, среди которых число изученных видов в
человеческих микробиоценозах составляет лишь 7—50 % от их истинного количества.
Важным этапом создания бактериального препарата является отбор производственных штаммов
микроорганизмов по ряду признаков: антагонистической активности в условиях смешанных популяций,
приближенных к естественным экологическим, и умеренности кислотообразования в расчете на проявление
истинной антибиотической активности. Хотя в механизме антагонистической активности бифидо- и
лактобактерий принято придавать большое значение кислотообразованию, с чем и связывают их защитную
функцию, современные исследования не выявили прямой корреляции между этими свойствами. Еще
И.И.Мечников при изучении штамма болгарской палочки, выделенной из йогурта, указывал на участие в
антагонистической активности этого микроба некоего вещества, которое не идентично молочной кислоте.
Видимо, более существенное значение в механизме антагонистической активности кислотообразующих
микроорганизмов имеет продуцирование ими антибиотических веществ.
При отборе необходимого производственного штамма учитывается его полнаягенетическая
характеристика, Важными являются исследования внехромосомных факторов наследственности — плазмид,
умеренных фагов, которые могут определять антибиотические свойства микроорганизмов, а также изучаются
адгезивные свойства микроорганизмов на субстрате естественных биотопов. При разработке новых эубиотиков
для восстановления кишечной микрофлоры нужно использовать штаммы, способные прикрепляться к
слизистой кишечника и обитать в муцине, поскольку для заселения кишечника микроорганизмы, должны, в
первую очередь, колонизировать муцин толстой и тонкой кишок.
Формирование поликомпонентных микробных составов должно осуществляться на основе природного
синергизма видов, путем одновременного накопления биомассы при совместном культивировании.
Актуальным направлением в проблеме создания новых биопрепаратов является комплексирование
бифидобактерий с кишечными палочками, основанное на их природном синергизме, а также с
кислотообразующими бактериями рода Lactobacillus.
Важным моментом в создании препаратов эубиотиков является оптимальный выбор лекарственной формы
и применение современных фармацевтических технологий, разработка новых биопрепаратов, создание
лекарственных форм — таблеток, микрокапсул, свеч и других базируется на использовании принципов
биофармации, потенцирующего и протективного действия вспомогательных веществ. Например, биологическая
активность вспомогательного вещества из группы производных инозина связана с замещением молекул воды в
структуре клеточного белка в процессе дегидратации, а также со способностью стимулировать рост
микроорганизмов при энтеральном введении. Применение вспомогательных компонентов с многофакторным
механизмом действия, выполняющих роль протекторов на стадиях накопления биомассы, ее обезвоживания,
хранения и регидратации, существенно повышает эффективность биопрепаратов. Кроме того, выбранные
микробные композиции при производстве и хранении должны обладать стабильностью.
Актуальны исследования, направленные на дальнейшее снижение эффективных доз биопрепаратов из
живых бактерий. Известен феномен «физиологической бактериемии», возникающей вслед за энтеральным
введением бактерийных препаратов с высокой концентрацией микробных тел. Поэтому важное значение имеют
всестороннее изучение высокоактивных производственных штаммов и создание новых препаратов,
защищенных от регидратации в тонкой кишке.

Современные эубиотики
Для восстановления нормальной микрофлоры и биологической санации бактерионосителей патогенных
энтеробактерий практика современного здравоохранения располагает отечественными биопрепаратами в
монокультурах (сухие колибактерин, , бифидумбактерин и лактобактерий) и одним двухкомпонентным
составом (бификол). Данные препараты выпускают в виде биомассы производственных штаммов,
лифилизированной во флаконах; или ампулах. Бифидумбактерин — лиофильно высушенная живая
культура бифидумбактерий. Используется для лечения хронических форм дизентерии и санации
шигеллоносителей, а также для лечения дисбактериозов, вызванных антибиотикотерапией.
Основой является производственный штамм № 1 Bifidobacterium bifidum. Это анаэробные
неспорообразующие грамположительные палочки, отличительной морфологической чертой которых является
раздвоение на концах клетки. Не разжижают желатин, не образуют газа и каталазу. Сахаролитически активны
с образованием уксусной и молочной кислот. Проявляют антагонистические свойства по отношению к
шигеллам и другим патогенным энтеробактериям.
Колибактерин состоит из кишечных палочек, антагонистически активных в отношении шигелл и других
энтеробактерий. Рекомендуется при хронических колитах, кишечных дисбактериозах, санации носителей
энтеропатогенных бактерий.
Бификол — комплексный препарат из культур бифидумбактерий и кишечной палочки. Широко
применяется в восстановительной терапии при кишечных инфекциях.
Лактобактерин — лиофильно высушенная живая культура молочнокислых бактерий. Используется для
лечения кишечных дисбактериозов, может назначаться параллельно с антибиотиками.
Для биологической санации полости рта и верхних дыхательных путей применяется штамм 1Б,
выделенный из ротовой полости.
Основой являются производственные штаммы Lactobacillus fermentum и L. plantarum. Неспорообразующие
короткие грамположительные палочки, соединенные в цепочки, неподвижны. L. fermentum ферментирует
глюкозу с образованием газа, разлагает лактозу, мальтозу и галактозу, слабо — маннозу, сахарозу, не
расщепляет — сорбит, целлюлозу, рамнозу, салицин. L. plantarum ферментирует глюкозу с образованием
кислоты без газа, разлагает рамнозу, сахарозу и галактозу, слабо — сорбит, мальтозу, лактозу, салицин и
маннит. Проявляет антагонистическую активность против шигелл, энтеропатогенных кишечных палочек,
золотистого стафилококка, протея.
Препараты из живых культур лактобацилл видов плантарум и ацидофилюс (в таблетированной форме),
помогающие скорректировать и нормализовать нарушенный микробный ценоз, могут найти широкое
применение в стоматологии, в комплексном лечении воспалительных заболеваний слизистой оболочки рта.
В России разработан новый лечебно-профилактический препарат — антрацидный бифилакт, содержащий
бифидобактерии, лактобактерии и лизоцим. Этот продукт наряду со способностью нормализовывать
микроэкологию кишечника и повышать местные защитные механизмы пищеварительного тракта, обладает
антрацидными свойствами и применяется при гастроэнтерологических заболеваниях.
В институте микробиологии и вирусологии АН Украины (Киев) разработаны селекционированные
штаммы молочнокислых бактерий с высокими антагонистическими и адгезивными свойствами. На их основе
созданы лечебно-профилактические препараты, предлагаемые при дисбактериозах, сосудистых патологиях,
диабете — геролакт и «Свекольный напиток». Основой геролакта является стрептосан — молочный
стрептококк. «Свекольный напиток» — продукт ферментации свекольного сока специальными штаммами
молочнокислых бактерий, содержит молочную кислоту, витамины группы В, аминокислоты, естественные
антиоксиданты.
Использование молочнокислых лактобактерина, биолакта, «Наринэ», «Мацони» также показало их
эффективность как лечебно-профилактических препаратов в комплексной терапии дисбактериозов различной
локализации.
Из зарубежных эубиотиков для регулирования равновесия кишечной микрофлоры в отечественной
медицине используется ряд капсульных препаратов. Среди них: бифиформ (Дания), содержащий
Bifidobacterium longum и Enterococcus faecium; бактосубтил (США), состоящий из чистой культуры Bacillus
subtilis; флонивин БС (ICN Pharmaceuticals Inc.), представляющий собой культуры В. subtilis и В. cereus; линекс
(Словения), содержащий молочнокислые бактерии, устойчивые к антибиотикам и другим
химиотерапевтическим средствам — Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium infantis, Streptococcus faecium.
| Перспективным представляется препарат в виде оральных капель Хилак форте (Австрия) — концентрат
продуктов биосинтеза грамположительных и грамотрицательных симбионтов кишечной флоры, предлагаемый
для восстановления аутофлоры, нормализации рН, водно-солевого баланса кишечника и стимуляции синтеза
эпителиальных клеток кишечной стенки. :;,

ОСНОВЫ ИММУЙОБИОТЕХНОЛОГИИ
Биотехнология — наука об использовании биологических процессов, свойственных микроорганизмам,
культурам тканей растений и животных, в технике и промышленном производстве.
Основные разделы биотехнологии:
клеточная инженерия;
гибридомные технологии;
генная инженерия;
инженерная энзимология;
инженерная иммунология.
Иммуиобиотехнология (инженерная иммунология) — раздел биотехнологии, разрабатывающей
аспекты получения иммунобиологических препаратов (антител и их фрагментов, вакцин, адъювантов,
иммунодепрессантов и т. д.) на основе промышленного освоения достижений современной молекулярной
 иммунологии.
Современную биотехнологию характеризуют как биотехнологию на основе генной инженерии.
Действительно, это основной путь, используемый для направленной модификации биообъектов в результате
введения искусственно созданных генетических
программ.
Различают три уровня генной инженерии:
генная — прямое манипулирование рекомбинантными ДНК, включающими отдельные гены;
хромосомная — манипуляция с большими группами генов или целыми хромосомами;
геномная — перенос всего или большей части генетического материала от одной клетки к другой.
В современном понимании генная инженерия включает в основном технологию рекомбинантных ДНК.
Что касается двух других уровней, то хромосомная инженерия как метод модификации биообъектов играет
второстепенную роль, а геномная — соответствует тому, что ныне принято обозначать как клеточная инжене-
рия. Работы в области генной инженерии включают четыре основных этапа:
1. Получение нужного гена.
2. Встраивание гена в генетический элемент (вектор), способный к репликации.
3. Введение гена, входящего в состав вектора, в организм-реципиент.
4. Идентификация (скрининг и селекция) клеток, которые приобрели желаемый ген (гены).
1. Получение нужного гена:
выделение его из ДНК;
химико-ферментативный синтез;
воссоздание на основе изолированной матричной РНК с помощью РНК-зависимой ДНК-полимеразы
(ревертазы).
Выделение генов из ДНК. Изолированную ДНК подвергают фрагментации, используя рестрикционные
эндонуклеаэы (рестриктазы), катализирующие расщепление ДНК на участках, имеющих определенные
последовательности нуклеотидов. В настоящее время известно более 400 рестриктаз, которые узнают 85
различных нуклеотидных последовательностей.
Образующиеся фрагменты нуклеотидной последовательности могут быть:
присоединены к вектору, предварительно обработанному той же рестриктазой;
превращены из линейной молекулы в кольцевую путем сшивания взаимно комплементарных концов с
помощью рестриктаз.
Метод выделения генов из ДНК имеет ряд существенных недостатков:
трудно подобрать рестриктазы, позволяющие вырезать из ДНК именно тот участок, который
соответствует нужному гену;
наряду с интересующим геном фрагменты ДНК, как правило, включают лишние нуклеотидные
последовательности, создающие помехи для использования гена;
рестриктаза может отрезать часть нуклеотидной цепочки гена, в результате чего ген теряет
функциональную полноценность.
Химико-ферментативный синтез является важной альтернативой «вырезанию» генов из нативной ДНК с
помощью рестриктаз. Он включает химический синтез коротких (8—16-звенных) одноцепочечных фрагментов
ДНК (олигонуклеотидов) за счет поэтапного образования эфирных связей между нуклеотидами и сшивку
олигонуклеотидов между собой посредством ДНК-лигазы с образованием двухцепочечных полинуклеотидов.
Данный метод позволяет точно воссоздать минимально необходимую последовательность нуклеотидов и
избежать проблем, связанных с элиминированием лишних нуклеотидных последовательностей в фрагментах
ДНК. Кроме того, имеется возможность введения в гены участков узнавания различных рестриктаз, регу-
ляторных последовательностей и т. п.
Для химико-ферментативного синтеза генов необходимо наличие полной информации о его нуклеотидной
последовательности, поэтому использование метода ограничено возможностями получения такой информации.
С помощью этого метода созданы гены А- и В-цепей инсулина, проинсулина и др.
Ферментативный синтез генов на основе выделенной из клетки матричной РНК — наиболее популярный
метод синтеза генов. Обратная транскриптаза (ревертаза) катализирует синтез нити ДНК, комплементарной м-
РНК. Полученную одноцепочечную ДНК, называемую комплементарной ДНК, используют в качестве матрицы
для синтеза второй нити ДНК с применением ДНК-полимеразы.
Преимущество рассматриваемого метода заключается в том, что, ген получается без интронов (незначащих
нуклеотидных последовательностей). Кроме того, легче создать условия, когда клетка аккумулирует нужный
вид м-РНК, чем отбирать ген из смеси фрагментов ДНК. Большим успехом в применении этого метода
является получение в 1979 году гена гормона роста человека — соматотропина.
2. Введение гена в вектор. Ген, полученный тем или, иным способом, содержит информацию о структуре
белка, но сам не может реализовать эту информацию. Нужны дополнительные механизмы, управляющие
действием гена, поэтому перенос генетической информации в клетку осуществляется в составе векторов.
Векторы — это, как правило, кольцевые молекулы, способные к самостоятельной репликации. Ген вместе с
вектором образует рекомбинантную ДНК.
Конструирование рекрмбинантных ДНК осуществляется in vitro. Кольцевая молекула вектора размыкается
рестриктазой. Необходимо, чтобы полученная линейная молекула ДНК содержала концы, комплементарные
концам вводимой ДНК. Комплементарные концы вектора и вводимого гена сшивают ДНК-лигазой и
полученную рекомбинантную ДНК с помощью той же ДНК-лигазы вновь замыкают с образованием единой
кольцевой молекулы.
Различают два основных класса векторов — вирусы и плазмиды. Важной проблемой, возникающей при
использовании вирусов в качестве генетических векторов, является аттенуация — ослабление их патогенности
для хозяина, чтобы зараженные вирусом клетки выживали и могли передать потомству измененную
генетическую программу. Большое значение для биотехнологии
имеет способность вирусов быстро транспортироваться из клетки в клетку. Данное свойство открывает
возможность генетической модификации соматических клеток взрослого организма. В этом отношении
открываются перспективы лечения наследственных заболеваний человека путем введения вирусов, разносящих
недостающие гены по всем клеткам человеческого организма.
Плазмиды — автономные самореплицирующиеся генетические единицы. Наибольшее применение в
генной инженерии нашли бактериальные плазмиды (особено плазмиды Eseherichia coli). Бактериальные
плазмиды подразделяются на:
конъюгативиые (переносят генетическую информацию от клетки к клетке путем конъюгации бактерий);
неконъюгативные (передаются от одной клетки к другой посредством механизма бактериальной
трансформации).
Перенос неконъюгативных плазмид путем конъюгации возможен только в том случае, если существует
плазмида-помощник, способная к самостоятельному транспорту. Некоторые плазмиды способны к
амплификации, то есть образуют в клетке большое количество копий, что резко повышает уровень
фенотипического выражения генов.
При конструировании векторов исследователь вводит в него участки узнавания рестриктаз, а также гены-
маркеры, кодирующие легко распознаваемые признаки.
Большой интерес представляют космиды — плазмиды, в состав которых, введен участок ДНК фага А, Е.
coli, отвечающий за упаковку ДНК в фаговую частицу. Такие плазмиды способны передавать очень большой
объем генетической информации.
3. Перенос генов в клетки организма-реципиента. Передача генов, встроенных в плазмиду,
осуществляется путем трансформации, конъюгации и трансфекции.
Генетический материал, проникающий в клетку, может быть атакован внутриклеточными нуклеазами. В
этой связи успешной трансформации способствует:
подавление активности или синтеза нуклеаз;
включение трансформирующей ДНК в липосомы — искусственные мембранные липидные везикулы.
Трансформация представляет собой наиболее универсальный путь передачи генетической информации.
Конъюгацию и трансфекцию можно рассматривать как варианты трансформации, осложненной наличием
специальных приспособлений для эффективного переноса генов.
4. Идентификация клеток-реципиентов, которые приобрели желаемый ген. После трансформации,
конъюгации или трансфекции необходимо идентифицировать клетки, несущие ген-мишень. Успех генно-
инженерного проекта часто зависит от эффективности использованного метода отбора. Значение этого этапа
становится очевидным, если учесть тот факт, что после трансплантации генов, как правило, лишь небольшая
часть клеток содержит необходимый ген. Отбор клеток проводят в две стадии.
Первая стадия — отбор клеток, несущих соответствующий вектор. Чаще всего такой отбор проводится по
генетическим маркерам, которыми помечен вектор.
Вторая стадия — поиск клеток, несущих не только вектор, но и ген-мишень. Для этого используются две
группы методов.
1. Методы, основанные на непосредственном анализе ДНК
клеток-реципиентов:
определение нуклеотидной последовательности ДНК;
гибридизация выделенной из клетки ДНК с зондом, который может быть или интересующим нас геном,
или соответствующей м-РНК.
2. Методы, основанные на идентификации признака, кодируемого геном:
непосредственный отбор клеток, синтезирующих белок,—продукт транскрипции и трансляции гена-
мишени;
использование селективных бред, поддерживающих рост только тех клеток, которые получили ген-
мишень;
иммунологическая детекция.

Генная инженерия и конструирование новых организмов-продуцентов

С помощью методов генной инженерии можно конструировать по определенному плану новые
формы микроорганизмов, способных синтезировать самые различные вещества, в том числе продукты
животного и растительного происхождения. При этом следует учитывать высокую скорость роста и
 продуктивность микроорганизмов, их способность к утилизации различных видов сырья. Широкие
перспективы перед биотехнологией открывает возможность микробиологического синтеза белков человека.
Таким способом были получены соматотропин, интерфероны, инсулин, гормоны роста.
Основные проблемы конструирования новых микроорганизмов-продуцентов сводятся к
следующему:продукты генов растительного, животного и человеческого происхождения попадают в чуждую
для них внутриклеточную среду, где они подвергаются разрушению микробными протеазами; в большинстве
случаев продукт трансплантированного гена не высвобождается в культуральную жидкость и накапливается
внутри клетки, что существенно затрудняет его выделение; большинство наследственных признаков
кодируется несколькими генами, и генно-инженерная разработка должна включать стадии последовательной
трансплантации каждого из генов.
Моноклональные антитела
Иммунные сыворотки являются базовыми препаратами серотерапии и экстренной профилактики,
широко используются в диагностических целях. Вместе с тем, для всех иммунных сывороток характерен
существенный недостаток — гетерогенность. Он предопределен тем, что независимо от объекта-донора и спо-
соба получения иммунные сыворотки даже при максимальной очистке содержат антитела к различным
детерминантам комплексного антигена, использованного для иммунизации, антитела различных классов,
разные типы L-цепей, неспецифические иммуноглобулины.
Кроме того, гетерогенность сывороток связана с тем, что в иммунном ответе на комплексный антиген
участвует множество клонов иммунокомпетентных клеток, синтезирующих антитела различной степени
аффинности.
Снятие эффекта гетерогенности иммунных сывороток реально только при получении моноклональных
антител, в основу которого положена клональио-селекционная теория Ерне, постулирующая положение о
том, что на каждый компонент комплексного антигена антительно реагирует один клон или отдельная линия
лимфоидных клеток. Таким образом, иммунные сыворотки представляют собой совокупность моноклональных
антител.
Сложность получения моноклональных антител состоит в том, что в условиях организма-донора это
Недостижимо, а в условиях in vitro В-лимфоциты не размножаются. Решение проблемы было найдено при
создании гибридомных технологий (С. Kohler, С, Mil-stein, 1975), в основу которых положен эффект
гибридизации, нормальных лимфоцитов белых мышей и лимфоцитов этих мышей, больных миеломой.
Полученные таким образом гибридомы сочетают основные свойства обеих клеток:
способность нормальных лимфоцитов к синтезу моноклональных антител против одной антигенной
детерминанты, принадлежащих к одному классу, подклассу, с одним видом легких цепей и однозначной
аффинностью;
способность клетки злокачественной опухоли (плазмоцитомы) безудержно расти и размножаться in vitro.
Следует обратить внимание на следующие закономерности получения гибридом:
гомологичность клеток, подвергаемых гибридизации (мышь — мышь, человек—человек);
однотипность функции гибридизируемых клеток (В-лимфоциты—продукция антител);
сочетаемость нормальных и злокачественных клеток.
Процесс получения гибридом
1. Иммунизация животного соответствующим антигеном, который, как правило, имеет многофакторные
антигенные, |.иммуногенные и гаптенные свойства.
2. Через три-четыре дня после иммунизации у мышей из селезенки выделяют субпопуляции В-
лимфоцитов, соответственно {реагирующие антителообразованием на каждый компонент комплексного
антигена.
3. Выделяют В-лимфоциты, ответственные за продукцию протективно активной части антигена, и
суспендируют их с клетками плазмоцитомы миеломных мышей BALB/c при наличии полиэтиленгликоля
(ПЭГ), 1000—4000 в концентрации 35—50 % или в присутствии вируса Сендай. ПЭГ растворяет мембраны
клеток, что приводит к появлению гибридов опухолевых клеток и лимфоцитов иммунизированных мышей.
Смесь клеток отмывают и инкубируют на среде, содержащей гипоксантин и тимидин. При этом выживают
только гибридные клетки.
4. Спустя пять—семь дней среду меняют, а затем через такой же период супернатант растущей культуры
проверяют на способность гибридом синтезировать специфические антитела и на активность синтеза. Антиген
иммобилизуют на пленках или пластинках и обрабатывают культуральной жидкостью. Эффект соединения
антигена и антитела учитывают внесением меченой радиоактивной, ферментной или флюоресцентной метки в
составе антиглобулиновой сыворотки.
5. Клонирование. Гибридные клетки переносят на питательную среду, где они размножаются и образуют
клон клеток-потомков одной гибридомы.
6. Клонированные гибридомы проверяют на способность синтезировать антитела и на продуктивность.
Отобранные гибридомы хранят при минус 70 ºС.
7. Для получения моноклональных антител гибридные клетки размножают путем выращивания на
питательных средах или вводя в брюшную полость гистосовместимых мышей, предварительно
стимулированных на активизацию роста гибридомных клеток.
 Достоинства данного метода:
1. Возможность получения индивидуальных и двойных гибридом. Последние представляют большую
ценность для иммунохимических и диагностических исследований.
2. Выраженная масштабность получения. Моноклональные антитела могут быть синтезированы в
неограниченном количестве против любых антигенных субстанций в титрах 1:108 (10 мг антител/мл).
3. Гибридизация позволяет получать Моноклональные антитела при иммунизации неочищенным
антигеном.
4. Возможность получения моноклональных антител к опухолевым антигенам с реальной перспективой
их использования для лечения злокачественных новообразований.
5. Применение в клинике моноклональных антител для ингибиции субпопуляции Т-лимфоцитов,
отторгающих трансплантат.
6. Созданы гибриды миелом мышей и лимфоцитов человека, имеются сообщения о получении
человеческих гибридом, в частности, к интерлейкину, что позволяет выделять его в очищенном виде.
7. Применение для таксономических целей, изучения бактериофагов и борьбы с бактериофагией в
условиях микробиологической промышленности.
8. Возможность получения большого количества функционально иммунокомпетентных клеток и их
продуктов.
9. Использование антиидиотипических моноклональных антител в качестве вакцинных препаратов.

Интерфероны
Интерфероны — низкомолекулярные гликопротеины, продуцируемые под влиянием вирусов
лейкоцитами, фибробластами и лимфоцитами со свойствами противовирусной, антибластомной и
иммуномодулирующей активности.
В зависимости от происхождения различают три типа интерферонов:
алыра-интерферон (лейкоцитарный) получают в культуре лейкоцитов в присутствии вируса Сендай;
бета-интерферон (фибробластный) получают в культуре фибробластов человека;
гамма-интерферон (иммунный) синтезируется стимулированными лимфоцитами при повторной встрече с
гомологичным антигеном или под влиянием митогенов.
Иммунорегуляторное действие интерферона проявляется в повышении фагоцитарной активности
макрофагов, усилении спонтанной активности Т-киллеров и кооперативного иммунного ответа в отношении
вирусиндуцированных опухолевых клеток.
На протяжении более 20 лет интерфероны природного происхождения широко используются в клинике
для лечения острых и хронических вирусных инфекционных заболеваний, бактериальных инфекций и
некоторых видов злокачественных опухолей.
Однако природным интерферонам, получаемым из клеток млекопитающих, свойственна
видоспецифичность. Поэтому основная задача — получение интерферонов из соответствующих клеток
человеческого организма — была решена путем использования генной инженерии в условиях
микробиологических технологий и применения методов молекулярной гибридизации ДНК и РНК и
рестриктазной техники.
С помощью рестриктаз из клеток-продуцентов интерферона выделены соответствующие участки и-РНК,
обработкой РНК-зависимой ДНК-полимеразой созданы комплементарные ДНК; полученные гены введены в
векторную (плазмидную) ДНК кишечной палочки, к ним присоединены регуляторные элементы,
программирующие транскрипцию и трансляцию.
Таким образом, были созданы рекомбинантиые производственные штаммы кишечной палочки,
продуцирующие 5 мг интерферона на 1 л бактериальной суспензии. Затем рекомбинантные производственные
штаммы-продуценты интерферона были получены из клеток дрожжей и высших эукариотов. К преимуществам
последних относится то, что в отличие от прокариотов они продуцируют интерферон экзоцеллюлярно, тогда
как из прокариотов их выделяют при разрушении микробной клетки.

Иммунотоксины
Иммунотоксины — белковые токсины, ковалентно соединенные со специфическими
антителами, заменяющими роль векторов в молекуле токсина.
|| Иммунотоксины изучаются как препараты с противораковыми свойствами и открывают новую главу в
борьбе с онкологическими заболеваниями. Наиболее полно экспериментально доказано использование в
качестве противоракового токсина препарата рицина — белка, выделенного из клещевины. Рицин состоит
из двух .субъединиц — А и В, соединенных ковалентно. Противораковый эффект достигается следующим
образом. Цепь В соединяется с поверхностными гликопротеинами клеток и обеспечивает их проницаемость,
где в цитоплазме частица А освобождается, ингибирует синтез белка в рибосомах и приводит клетку к
гибели. Однако этот эффект не несет противораковой направленности. Последняя достигается тем; что к
субъединице А присоединяются в качестве вектора моноклональные противораковые антитела, которые
направленно транспортируют этот комплекс к раковой клетке.
 Кроме того, иммунотоксины широко используют в трансплан-тологии для предупреждения эффекта
отторжения. При трансплантации костного мозга моноклональные антитела против Т-лимфоцитов-киллеров
донорского костного мозга раздельно конъюгируют с А- и В-цепями рицина, после чего они поглощаются
Т-лимфоцитами-киллерами, где спонтанно объединяются в эндосомах и вызывают гибель Т-лимфоцитов.
 Искусственные антигены и вакцины
Данный раздел иммунобиотехнологии посвящен разработке принципиально новых подходов к
созданию вакцин. Суть состоит в том, что из бактериальной клетки выделяют протективные антигенные
детерминанты, изучают их структуру, а затем получают синтетическим или генно-инженерным способом. ^
Такие вакцины могут быть моно- и поливалентными, они лишены побочных эффектов, реализуют
иммуногенность через продукцию антител, оказывающих нейтрализующее действие на бактерии и вирусы.
Существенным преимуществом этих вакцин является их иммуногенная «чистота» и высокая активность за счет
соединения с адъювантом.
Предшественником биотехнологических вакцин являются химические вакцины, состоящие из антигенных
субстанций микробных клеток, выделенных из культуральной жидкости или экстрагированных из массы
дезинтегрированных микробных клеток.
В 1980 году во Франции получили генетически сконструированные клетки бактерий и мышей, способные
синтезировать белок вируса гепатита В, который вызывал иммунитет к вирусу. При этом отпадает
необходимость в использовании убитых или ослабленных вирусов, отсутствует токсичный или инфекционный
материал, который часто загрязняет антиген, полученный из клеточных структур, а также сокращаются
чрезвычайно длительные и дорогостоящие испытания на токсичность.
Рассматривая вопросы профилактики гепатита В, ряд исследователей продемонстрировали оригинальные
пути биотехнологии вакцин: интеграция геномов вирусов гепатитов в геном вируса оспенной вакцины;
клонирование вирусной ДНК в клетках Е. coli и ее последующее введение в линии клеток млекопитающих;
получение клеток дрожжей, образующих гликолизированный поверхностный антиген.
В 1981—1982 годах, исследователи из французской компании «Трансжен» предприняли попытку заставить
генетически сконструированные клетки Е. coli синтезировать поверхностный белок вируса бешенства. Был
выделен клон Е. coli, образующий вирусный белок с молекулярной массой 58 000 дальтон, ДНК которого
ввели в бактерии. Затем синтезировали эту ДНК путем использования в качестве матрицы м-РНК,
кодирующую вирусный белок и выделенную из клеток, инфицированных вирусом бешенства.
Проведены попытки синтеза вирусного белка в культурах клеток млекопитающих с тем, чтобы улучшить
его качества и установить, обладает ли он нужными иммуногенными свойствами.
Возбудителя сифилиса не удается культивировать в искусственной среде. Невозможно также получить
вакцину против него с помощью общепринятых методов, основанных на экстракции и очистке антигенов. ДНК
этой спирохеты была выделена из яичек специально зараженных кроликов, после чего ее клониро вали в
клетках Е. coli с использованием бактериофага в качестве вектора. Отмечено, что один из штаммов
генетически конструированных бактерий содержит не менее семи специфических антигенов трепонемы.
Использование техники рекомбинантных ДНК при получении вакцин — еще один шаг на пути разработки
их синтетических аналогов. Синтетические вакцины могут заменить имеющиеся, часто содержащие
посторонние антигенные детерминанты белки и другие вещества, которые загрязняют основной иммуноген и
вызывают побочные эффекты.
Впервые об активной иммунизации против дифтерии с использованием синтетических антигенов было
заявлено в 1981 году. Синтетический антиген вызывал у морских свинок образование антител, блокирующих
дермонекротическое и летальное действие токсина. Это удалось посредством синтеза тетрадекаптида,
ковалентно связанного с двумя различными носителями.
С помощью того же принципа —введением синтетического пептида, соответствующего части белка
Streptococcus pyogenes — удалось определить подход к разработке безопасных вакцин против стрептококковой
инфекции.;
При получении вирусных вакцин, в том числе против гепатита В, СПИДа и других, одним из ведущих
направлений принято введение в геном вируса оспенной вакцины генов, кодирующих белки, нескольких
вирусов, что позволяет получать рекомбинантные вирусы и изготавливать живые противовирусные вакцины.
Рибосомальные вакцины представляют собой участки рибосомальной РНК, кодирующей информацию о
синтезе иммуногенных веществ. Они обладают относительно низкой токсичностью, в очень малых дозах
высокой активностью, способностью защищать от заражения родственными микробами и вирусами, усиливают
взаимодействие с рецепторами иммунокомпетентных клеток. Существуют рибосомальные вакцины из
туберкулезной палочки, холерного вибриона, сальмонелл, стрептококка, шигелл.
Получены искусственные антигены путем сополимеризации искусственных антигенных детерминант 0-
полисахаридов сальмонелл с акриламидом, разработаны подходы к созданию противоаллергических вакцин.

Диагностические и лечебные иммунобиологические препараты

К диагностическим препаратам относятся: флюоресцирующие и радиоактивно меченные антитела и
антигены; белок А-стафилококка; конъюгаты антител и белка А с ферментами.
 В тяжелых цепях IgG обнаружены и выделены участки,
гомологичные с тимопоэтином, что позволяет использовать их при
создании иммунорегуляторных препаратов.
Определена перспектива введения в состав антигенных структур Т-
и В-клеток митогенов, интерферона, интерлейкина, специфических
антител.
Использование липосомальных лекарственных средств исключает
развитие сывороточной болезни, гранулем в месте введения, позволяет
существенно повысить специфическую активность включенных
препаратов, снизить терапевтические дозы препаратов и предотвратить
развитие побочных эффектов.
Липосомы — это ограниченные объемы, возникающие путем
самосборки амфифильных дипидных комплексов. Их получают
впрыскиванием эфирных растворов фосфолипидов в водный раствор
или путем смешивания фосфолипидов с детергентами. При образовании
липосом водорастворимые вещества включаются во внутренний объем, а
жирорастворимые — в фосфолипидные структуры. Как лекарственную
форму липосомы характеризуют:
возможность включения малорастворимых и токсичных веществ;
совокупность биологических свойств, характерных для функций
клеточных мембран;
определенная фармакодинамика в организме (векторные свойства) с
последовательным распределением и накоплением в органах;
совместимость с иммунологическими системами организма;
адгезивность и свойство эндоцитоза или прямого слияния с
мембранами клеток.
Векторная терапия признана наиболее перспективным направлением
современной клинической медицины. Усиление исходных векторных
свойств липосом достигается:
включением в состав их оболочечных структур иммунных в от-
ношении возбудителя сывороток и иммуноглобулинов (для направ-
ленного воздействия на возбудитель);
введением в липосомы тканевых антигенов (для направленного
транспорта липосом в патологический очаг).
Сконструированы иммунолипосомальные комплексы для
целенаправленного транспорта лекарственных веществ,
иммунотоксинов, разработаны принципы получения антифертильной
вакцины.