1. Ядерная оболочка, особенности организации и функции.

Ядерная оболочка состоит из двух мембран, между которыми находится околоядерное

пространство. Выросты наружной ядерной мембраны соединяются с каналами ЭПС,
образуя единую систему сообщающихся канало. Функции: 1) отграничивает ядерное
содержимое от цитоплазмы; 2) обеспечивает двустороннее ядерно-цитоплазматическое
взаимодействие; 3) обеспечивает обмен между ядром и цитоплазмой. Через ядерную
оболочку осуществляется транспорт веществ из ядра в цитоплазму и в обратном порядке.
Ядерные оболочки имеют поры через которые в ядро и в обратном направлении
поступают крупные молекулы (белки, нуклеиновые кислоты) и субъединицы рибосом..
Количество пор зависит от функционального состояния клетки. Если в ядре идут активно
синтетические процессы, то количество пор возрастает.
2. Механизмы ядерно-цитоплазматических транспортных потоков.

Поток информации. Благодаря ему клетка способна сохранять

наследственную информацию, эволюционировать и передавать эту
информацию следующим поколениям. В этом потоке участвуют: ядро
(ДНК хромосом), макромолекулы (переносят инфу в цитоплазму, мРНК),
цитоплазматический аппарат трансляции. На завершающем этапе потока
полипептиды, синтезированные на полисомах, приобретают третичную
или четвертичную структуру и используются как катализаторы или
структурные белки. Кроме основного по количеству заключённой инфы
ядерного генома, в эукариотических клетках функционируют геномы
митохондрий и хлоропластов (у зелёных растений).
Внутриклеточный поток энергии. У разных групп организмов обеспечивается
или брожением, или фото/хемосинтезом, или дыханием. У животных клеток
– дыхательный обмен. Он включает реакции расщепления глюкозы, жирных
кислот и аминокислот и использование выделяемой при расщеплении
энергии для создания АТФ (аденозинтрифосфат). Особое место в
дыхательном обмене принадлежит митохондриям – выполняют функцию
окислительного фосфорилирования, а также матриксу цитоплазмы – в нём
протекает бескислородное расщепление глюкозы (анаэробный глюколиз).
По сравнению с аэробным глюколизом, анаэробный менее эффективен. Из-за
неполного окисления, для нужд клетки извлекается не больше 10%
энергии. Недоокисленные продукты поступают в митохондрии, где в
условиях полного окисления, сопряжённого с фосфолированием АДФ до
АТФ, отдают для нужд клетки оставшуюся энергию. У растительных клеток
–фотосинтез – преобразование энергии солнечного света в энергию хим.
связей органических вещ-в. Механизмы энергообеспечения клетки очень
эффективны.
Внутренний поток веществ. Реакции дыхательного обмена снабжают клетку
не только энергией, но и строительными блоками для синтеза
разнообразных молекул. Ими являются многие продукты расщепления
пищевых вещ-в. Особая роль в этом принадлежит одному из этапов
дыхательного обмена – циклу Кребса, осуществляемому в митохондриях.
Через него проходит большая часть углеродных скелетов соединений,
служащих промежуточными продуктами в синтезе хим. компонентов
клетки. Таким образом, дыхательный обмен составляет ведущее звено
внутреннего потока вещ-в, объединяющего метаболические пути
расщепления и образования углеводов, белков, жиров, нуклеиновых
кислот.
3. Компоненты интерфазного ядра: ядерный матрикс, ядерный сок, ядрышки,
хромосомы.

– это сетчатая конструкция, образованная

Ядерный матрикс (ядерный скелет)
плотноупакованными нитями из нерастворимых белков. Ядерный скелет
поддерживает форму ядра.

– это однородная масса,

Ядерный сок (кариоплазма, нуклеоплазма)
заполняющая пространство между структурами ядра. Представляет собой
коллоидный раствор белков, белков-ферментов, нуклеотидов,
аминокислот, АТФ, ионов, различных видов РНК.
В ядре клетки может быть одно или несколько ядрышек. Основным
химическим компонентом ядрышка являются белки. Формируются
ядрышки в определенных участках хромосом, локализованных во
вторичных перетяжках акроцентрических хромосом у человека (13, 14, 15,
21 и 22-я пары), где содержатся многочисленные копии генов рибосомных
РНК. Эти участки называются ядрышковыми организаторами. Количество
ядрышек не постоянно. Максимальное их количество не превышает число
ядрышковых организаторов. Белки, необходимые для сборки рибосом,
поступают из цитоплазмы. После сборки рибосомы разделяются на
большую и малую субъединицы и поступают в цитоплазму. Важнейшим
компонентом ядра являются хромосомы. Были открыты 80-х годах 19 века,
названы В. Вальдейером (1888 г.). Позже было установлено, что главным
химическим компонентом хромосом является ДНК. ДНК, как и РНК, это
линейный полимер, состоящий из нуклеотидов. Каждый отдельный
нуклеотид состоит из углевода, азотистого основания (аденин, гуанин,
тимин, цитозин) и остатка фосфорной кислоты.
4. Молекула ДНК – главный хим. компонент хромосом: хим. состав, первичная,
вторичная и третичная структуры ДНК. Комплиментарность при формировании
молекулы ДНК. Сущность полярности и антипараллельности полинуклеотидных
цепей молекулы ДНК.

ДНК это линейный полимер, состоящий из нуклеотидов. Каждый

отдельный нуклеотид состоит из углевода, азотистого основания (аденин,
гуанин, тимин, цитозин) и остатка фосфорной кислоты. Нуклеотиды в
полинуклеотидных цепях связаны между собой ковалентными
фосфодиэфирными связями, соединяющими 5′-атом углерода одного
остатка. Молекула ДНК состоит из двух, как правило, правозакрученных
спаренных антипараллельных. Таким образом, молекула ДНК
представляет собой двойную спираль. Полинуклеотидные цепи ДНК
антипараллельны, одна цепь идет от 5′ к 3′, другая от 3′ к 5′, если читать с
какого-то одного конца. Одна полинуклеотидная цепь биспирали ДНК
присоединяется к другой комплементарно. При этом происходит
спаривание соответствующих оснований: аденин-тимин, гуанин-цитозин.
Между ними имеется химическое сродство и формируются водородные
связи (А=Т, Г≡Ц). Первичная структура ДНК – это последовательность
расположения нуклеотидов в полинуклеотидной цепи ДНК. Вторичная
структура ДНК стабилизируется водородными связями между
комплементарными парами оснований и представляет собой двойную
спираль из двух антипараллельных цепочек, закрученных вправо вокруг
одной оси. Третичная структура ДНК – суперсперализация
ДНК. Двойная спираль ДНК на некоторых участках может подвергаться
дальнейшей спирализации с образованием суперспирали или открытой
кольцевой формы, что часто вызвано ковалентным соединением их
открытых концов. Суперспиральная структура ДНК обеспечивает
экономную упаковку очень длинной молекулы ДНК в хромосоме.
5. Геном организма (клетки). Физ. размер генома человека. Ген с точки зрения
молекулярной генетики.

Функциональной единицей наследственной информации

является ген. Ген – это последовательность нуклеотидов ДНК, в которой
содержится информация о последовательности аминокислот
полипептидной цепи белка, либо нуклеотидной последовательности
какого-либо вида РНК, прежде всего рРНК и тРНК. Суммарную ДНК
гаплоидного набора хромосом клеток организма
называют геномом организма (нередко говорят геном клетки). Общая длина
ДНК гаплоидного хромосомного набора человека в неделящейся клетке
составляет около 1 метра. Геном человека имеет размер приблизительно
3,3х109 п.н.
6. Избыточность ДНК у эукариот. Возможные функции избыточной ДНК.

Непомерное увеличение количества ДНК по отношению к количеству

генов в ходе эволюции эукариот определяют как избыточность ДНК.
Функции некодирующих участков ДНК изучены пока недостаточно.
Возможно избыточная ДНК в процессе эволюции использовалась для
создания новых структурных генов. Сейчас становится ясным, что многие
некодирующие участки ДНК вовлечены в процессы транскрипции ДНК
или участвуют в регуляции работы генов.
7. Компоненты генома человека: уникальные (редко повторяющиеся), умеренно
повторяющиеся и высокоповторяющиеся последовательности. Их организация и
функции.

1. Уникальные или редко повторяющиеся последовательности нуклеотидов в

ДНК. Эти последовательности занимают большую часть генома, они
составляют 60-70% ядерной ДНК. Встречаются такие последовательности
один или несколько раз в геноме. Эти последовательности включают
кодирующие участки и внутригенные некодирующие области.
Кодирующие участки получили название экзоны, некодирующие участки
этих последовательностей названы интронами. Экзоны уникальных генов
разделены некодирующими участками – интронами. Экзоны – это
кодирующие участки ДНК, которые будут транслироваться в
аминокислотные последовательности белка. Количество экзонов в
уникальных генах может быть различным. Встречаются гены, имеющие
только один экзон. Максимальное число экзонов - 364, но в среднем в
уникальных генах около 8 экзонов. В геноме эукариот на долю экзонов
приходится 1,2-1,5% ДНК, на долю интронов около 24% ДНК. Однако
лишь сумма последовательностей экзонов составляет последовательность
гена, которая будет транслироваться в последовательность аминокислот в
белке. Многие уникальные последовательности (уникальные гены) уже
хорошо изучены. Они образуют основную массу структурных и
регуляторных генов. Например, белок глобин, который входит в состав
гемоглобина.

Они составляют 10-15%

2. Умеренно повторяющиеся последовательности генома.
ядерной ДНК. Такие последовательности повторяются сотни и тысячи раз
в геноме. Эти последовательности включают гены рибосомных РНК и
белков гистонов. Повторяющиеся единицы в этих последовательностях
содержат определенный ген (или даже группу генов) и участки
некодирующей ДНК, разделяющие гены - спейсеры.

Они составляет 25-28%

3. Высокоповторяющиеся последовательности генома.
ядерной ДНК. Эти последовательности повторяются сотни тысяч и даже
миллионы раз в геноме, но каждая копия этих последовательностей
относительно короткая (от нескольких пар до нескольких сотен пар
нуклеотидов). Это некодирующие последовательности, которые включают
ДНК структурного гетерохроматина (центромерные и теломерные районы
хромосом).
8. Митохондриальный геном.

В клетках человека также присутствует митохондриальный геном,

который представлен кольцевыми молекулами ДНК и составляет 16568
пар нуклеотидов. Митохондриальный геном содержит 13 генов,
кодирующих полипептиды (белки), 22 гена для «собственных»
транспортных РНК и 2 гена рибосомной РНК (23S и 16S). Особенностью
митохондриальных генов является отсутствие в них интронов. В целом
ДНК митохондрий составляет около 10% всей ДНК животной клетки.
9. Принципиальные отличия генома про и эукариот.

1.У прокариот геном заключён в единственной кольцевой молекуле ДНК.

У эукариот геном сосредоточен в 2-х или большем числе хромосом.

2. Гены у эукариот занимают 30% всей ДНК, кодирующие области в

геноме составляют порядка 3% всей ДНК. На долю кодирующих
нуклеотидных последовательностей для белков в геноме приходится
около 1,5% ДНК.

3. У прокариот кодирующая область гена непрерывна (нет интронов). Ген

в ДНК прокариот следует за геном и нет повторяющихся
последовательностей. Гены у прокариот занимают 90% ДНК.

4. У эукариот 15-50% ДНК – повторяющиеся последовательности.

10. Хим. компоненты хромосом (хроматина): ДНК, белки, белки-гистоны.
Хроматин – сложная многокомпонентная система.

Хроматин – комплекс ДНК и других хим. компонентов, в первую очередь

белков. Большая часть хроматина представлена белками (до 65%), ДНК
составляет около 35%. Кроме белков и ДНК в хроматин входит: РНК,
липиды, углеводы, ионы металлов (Ca, Mg) и некоторые другие
компоненты, но эти вещества находятся в хроматине в малом количестве.
Хроматин – сложная многокомпонентная система. Среди белков
хроматина выделяют негистоновые белки и белки гистоны (до 80% всех
белков хроматина). Гистоны небольшие белки с очень высоким
содержанием положительно заряженных аминокислот (лизина и
аргинина). Суммарный положительный заряд позволяет гистонам прочно
связываться с ДНК. Выделяют 5 типов гистонов: H1; H2A; H2B; H3; H4.
Особенностью генов этих белков является отсутствие в их
последовательностях интронов. Белки гистоны выполняют структурную
функцию в хроматине, участвуют в механизмах функционирования
наследственного материала. Негистоновые белкивыполняют структурную,
регуляторную и ферментативную функции в хроматине.
11. Уровни структурной организации хромосом (уровни компактизации ДНК в
хромосоме): нуклеосомы, соленоидно-подобные фибриллы, хроматиновые петли,
хроматиды, метафазные хромосомы.

Выделяют пять уровней упаковки (компактизации) ДНК в хромосоме или

пять уровней структурной организации хромосом.

Первый уровень – формирование нуклеосом. Формирование нуклеосом

можно представить путём накручивания спирально молекул ДНК на
белковый остов*, состоящий из 8 молекул гистонов четырёх типов: H2A;
H2B; H3; H4 (гистоновый октамер, белковый кор). *Остов - внутренняя
опорная часть предмета, на к-рой укрепляются другие части его; костяк. При
этом молекула ДНК делает около двух витков вокруг белкового остова и
переходит на другой остов. Так формируется повторяющаяся структурная
единица хромосомы – нуклеосома. Участки ДНК, расположенные между
нуклеосомами, называют линкерной (связывающей) ДНК. Расположенные
рядом друг с другом нуклеосомы образуют довольно толстую нить,
напоминающую «бусины на нитке». При этом происходит 7-кратное
укорочение длины молекулы ДНК. Нуклеосома рассматривается как
универсальная структурная единица хроматина (хромосомы).

На втором уровне компактизации ДНК нуклеосомная нить закручивается в

спираль с образованием соленоидо-подобной структуры (фибриллы).
Стабильность этого уровня организации хромосомы обеспечивается
гистоном H1, который «сшивает» витки ДНК соленоида. Диаметр
хроматиновой фибриллы составляет 30 нм. При этом длина нити ДНК
сокращается в 50 раз от исходной.

Третий уровень компактизации ДНК – это формирование хроматиновых

 петель. Хроматиновые соленоидо-подобные фибриллы укладываются в
виде петель, диаметр фибриллы увеличивается до 300 нм. Первоначальная
длина молекулы ДНК сокращается в 1000 раз. В результате спирализации
ДНК и взаимодействия с белками образуется три уровня структурной
организации хромосом. Все эти три уровня компактизации ДНК в
хромосомах существуют в интерфазе митотического цикла.

На четвёртом уровне компактизации ДНК фибриллы с хроматиновыми

петлями многократно складываются и превращаются
в хроматиды диаметром 700 нм. Длина молекулы ДНК в хроматиде
сокращается в 2-3 тысячи раз от исходной.

На пятом уровне наблюдается максимальная степень компактизации ДНК с

образованием метафазных хромосом. Благодаря такой суперспирализации
достигается плотная упаковка наследственного материала, что важно при
расхождении хромосом в митозе. При такой упаковке происходит
укорочение метафазных хромосом по сравнению с размерами
заключённой в них молекулы ДНК примерно в 10 тысяч раз.
12. Метафазные хромосомы. Центромеры и плечи хромосом. Функции центромер.
Классификация хромосом в зависимости от положения центромеры. Спутничные
хромосомы.

В метафазу хромосомы
имеют вид цилиндрических телец, которые интенсивно окрашиваются
основными красителями. В метафазной хромосоме можно выделить
центромеру (первичную перетяжку), которая делит хромосому на два плеча.

Центромеры обеспечивают: удержание хромосом; правильность выстраивания

хромосом по экватору в метафазу; прикрепление к веретену деления;
отвечают за контроль наступления анафазы. В центромерах локализованы
повторяющиеся последовательности нуклеотидов генома. В зависимости от
положения центромеры, хромосомы человека делят на четыре типа: 1)
метацентрические, обладающие плечами примерно равной длины
(равноплечные); 2) субметацентрические, с плечами неравной длины
(умеренно неравноплечные); 3) очень субметацентрические (выражено
неравноплечные); 4) акроцентрические, с очень коротким вторым плечом.

Некоторые хромосомы
содержат вторичные перетяжки. Часть хромосомы, которая отделяется
вторичной перетяжкой получила название – спутник. Хромосомы, которые
имеют спутник называют спутничными. Спутничными хромосомами у человека
являются 13-15, 21-22 хромосомы. В коротких плечах спутничных хромосом
локализованы ядрышко-образующие районы хромосом (ЯОР). На препаратах
метафазных хромосом активные ЯО-районы выявляются как вторичны
перетяжки и окрашиваются азотнокислым серебром.
13. Структурная организация теломерных участков хромосом. Функции теломер.

Особое значение имеют концевые участки хромосом - теломеры. Они

расположены на обоих концах линейной хромосомы. В теломерных районах
хромосом локализованы в основном двунитевые некодирующие повторы
(ТТАГГГ)n, заканчивающиеся 3′-однонитевым участком. Основные функции
теломер: сохранение целостности хромосомы; обеспечение её полной
репликации. Кроме того, теломеры: а) участвуют в прикреплении хромосом к
ядерному матриксу; б) способствуют конъюгации хромосом и кроссинговеру в
профазу мейоза I; в) способствуют удержанию сестринских хроматид в
метафазу митоза.
14. Интерфазный хроматин. Эухроматин и гетерохроматин.

Интерфазная хромонема.
Следующий уровень структурной организации
генетического материала обусловлен укладкой хроматиновой фибриллы в
петли. В их образовании, по-видимому, принимают участие негистоновые
белки, которые способны узнавать специфические нуклеотидные
последовательности вненуклеосомной ДНК, отдалённые друг от друга на
растояние в несколько тысяч пар нуклеотидов. Эти белки сближают
указанные участки с образованием петель из расположенных между ними
фрагментов хроматиновой фибриллы. Участок ДНК, соответствующий одной
петле, содержит от 20000 до 80000 п. н. Возможно, каждая петля является
функциональной единицей генома. В результате такой упаковки
хроматиновая фибрилла диаметром 20-30 нм преобразуется в структуру
диаметром 100-200 нм, называемую интерфазной хромонемой.

Неодинаковая степень компактизации разных участков интерфазных

хромосом имеет большое функциональное значение. В зависимости от
состояния хроматина выделяют эухроматиновыеучастки хромосом,
отличающиеся меньшей плотностью упаковки в неделящихся клетках и
потенциально транскрибируемые, и гетерохроматиновыеучастки,
характеризующиеся компактной организацией и генетической инертностью.
В их пределах транскрипции биологической информации не проходит.
15. Структурный (конститутивный) и факультативный гетерохроматин.

Конститутивныйгетерохроматин содержится в околоцентромерных и

теломерных участках всех хромосом, а также на протяжении нескольких
внутренних фрагментов отдельных хромосом. Он образован только
нетранскрибируемой ДНК. Вероятно его роль заключается в поддержании
общей структуры ядра, прикреплении хроматина к ядерной оболочке,
взаимном узнавании гомологичных хромосом в мейозе, разделении соседних
структурных генов, участии в процессах регуляции их активности.

Примером факультативного гетерохроматина служит тельце полового

хроматина, образуемое в норме в клетках организмов гомогаметного пола (у
человека гомогаметным является женский пол) одной из двух X-хромосом.
Гены этой хромосомы не транскрибируются. Образование факультативного
гетерохроматина за счёт генетического материала других хромосом
сопровождает процесс клеточной дифференцировки и служит механизмом
выключения из активной функции групп генов, транскрипция которых не
требуется в клетках данной специализации. В связи с этим рисунок
хроматина ядер клеток из разных тканей и органов на гистологических
препаратах различается.
16. Кариотип. Кариотип человека и его характеристика в норме.

Хромосомный набор клеток данного вида организмов с характерным числом,

морфологическими особенностями отдельных хромосом
называется кариотипом.

В ядре клеток человека 46 хромосом, из них 22 пары аутосом и пара половых

хромосом. Хромосомы, которые относятся к одной паре называют
гомологичными. Гомологичные хромосомы абсолютно аналогичны.
17. Дифференциальное окрашивание хромосом, его сущность и возможности.
Хромосомные бенды.

Внутри семи этих групп хромосом при обычной окраске на основании лишь
внешних различий, видимых в простой микроскоп, провести идентификацию
хромосом человека очень трудно. Для более точной идентификации
хромосом используют дифференциальную окраску хромосом, основанную на
избирательном поглощении разными участками хромосом специальных
красителей. В результате дифференциального окрашивания по всей длине
хромосомы выявляются темные и светлые полосы (бэнды). Бэнд – это
участок хромосомы, отличающийся от соседних по интенсивности окраски
при использовании метода дифференциальной окраски.

Бэнды определенных участков хромосом объединяются в районы. Нумерация

районов и бэндов идет от центромеры в обоих плечах хромосомы. При
обозначении места локализации бэнда в хромосоме используется
соответствующая символика: первая цифра – номер хромосомы, в которой
локализован данный бэнд; второй символ (p или q) – плечо хромосомы;
третий символ – номер района, в состав которого входит бэнд; четвертый
символ – номер бэнда в составе района. Например, 1p31 – первый бэнд,
локализованный в третьем районе короткого плеча хромосомы 1 (читается
справа налево).
18. Международная классификация хромосом человека, характеристика групп хромосом.

Хромосомы человека не очень легко отличить одну от другой. С целью

унификации методов идентификации хромосом человека в 1960 г на
конференции цитогенетиков в г. Денвере (США) была принята
классификация, учитывающая величину хромосом и расположение
центромер. В том же году К. Патау дополнил эту классификацию и
предложил разделить 23 пары хромосом человека на 7 групп от А до G

1. A (I) (1-3 хромосомы) Большие, метацентрические.

2. B (II) (4,5 хромосомы) Большие, очень субметацентрические.

3. C (III) (6-12 X хромосомы) Среднего размера, субметацентрические.

4. D (IV) (13-15 хромосомы) Среднего размера, акроцентрические со

спутниками

5. E (V) (16-18 хромосомы) Маленькие, 16 хромосома – метацентрическая

17 и 18 – субметацентрические

6. F (VI) (19, 20 хромосомы) Маленькие, метацентрические

7. G (VII) (21,22 Y хромосомы) Маленькие, акроцентрические со спутниками

Маленькая, акроцентрическая без спутников.