Лекция 6.
ненасыщенными двойными связями и обычно имеют 14-22 углеродных
Биофизика клеточных процессов.
Мембраны, их состав, структура. Мембранный транспорт.
Биологическими мембранами называют функциональные структуры
клеток, ограничивающих цитоплазму и большинство внутриклеточных
структур. Мембраны также образуют внутри клетки единую систему
канальцев и полостей. Толщина биологических мембран составляет 7-10
нм, однако вследствие большой общей площади мембран и их высокой
плотности, их масса составляет более 50 % сухой массы клетки.
Биологические мембраны являются высокоизбирательными барьерами про-
ницаемости. Поток молекул в клетку и из клетки, в органоид и из нее,
контролируется находящимися в мембранах специфическими системами
транспорта. Транспортные процессы в мембране регулируют объем клетки
и поддерживают ионный состав, необходимый для работы ферментативных
систем, т.е. гомеостаз клетки. Транспортные процессы также создают
ионные градиенты, необходимые для создания мембранного потенциала,
поддержания возбудимости, а также транспорта некоторых молекул и
ионов. Системы транспорта в мембране переносят из внешней среды и
концентрируют в компартментах клетки вещества, необходимые для
функционирования клетки. Так как клетки и внутриклеточные структуры,
с точки зрения термодинамики, открытые системы, они постоянно
обмениваются с окружающей средой и веществом и энергией. Поэтому
транспорт вещества и энергии через мембраны - необходимое условие
существования живых систем.
Состав и структура биомембран.
Состав мембран зависит от их типа и функций, однако во всех типах
биологических мембран основными структурными компонентами
являются молекулы липидов и белков. Некоторые мембраны содержат
также и углеводы, которые связаны или с белками (гликопротеины) или с
липидами (гликолипиды). Важным структурным компонентом мембран
является вода. Взаимодействие молекул липидов, белков с водой
определяет специфические структурно-функциональные свойства
мембраны и определяет стабильность мембранных структур.
В состав биологических мембран входят молекулы, относящиеся к
различным классам липидов, а также стероиды. Мембранные липиды
имеют сравнительно небольшую полярную (заряженную) головку и
длинные неполярные (незаряженные) углеводородные цепи. Жирные
кислоты, входящие в состав липидов мембран, могут быть насыщенными и
атома.
У фосфолипидов (фосфоглицеридов) неполярная часть представлена
двумя остатками жирных кислот, этерефицирующих две гидроксильные
группы глицерола. Третья гидроксильная группа образует полярную
головку – остаток фосфорной кислоты. К остатку фосфорной кислоты
может быть присоединен остаток аминоспирта (например,
фосфатидилхолин) , сахара (фосфатидилинозитол), аминокислоты
(фосфатидилсерин).
Сфинголипиды построены из одного остатка жирной кислоты, из
одного остатка длинноцепочечного аминоспирта сфингозина (или его
производного). Полярная головка этих молекул представлена остатком
спирта.
Из стероидов наиболее распространенным компонентом мембран
является холестерин (холестерол) и его производные. Содержание
холестерина характерно для мембран эукариотических клеток, у
большинства прокариот он не обнаружен.
Белковый состав мембран также исключительно многообразен.
Мембраны многих клеток содержат большое число белков, с молекулярной
массой 10 до 250 кДа. Молекулы белков могут быть либо частично, либо
целиком, погружены в липидный бислой или могут пронизывать его
насквозь. Это так называемые интегральные белки. Белки, которые слабо
удерживаются на мембране за счет слабых, в основном
электростатических, взаимодействий, называются периферическими.
Молекулы белков в составе мембран выполняют ферментативные,
транспортные, регуляторные и опорно-строительную функции.
Воду, входящую в состав мембран, подразделяют на связанную,
захваченную и свободную. Связанная вода - это вода гидратных оболочек
ионов и полярных участков липидов и белков. Гидратные оболочки
основных структурообразующих липидов состоят из 10-12 молекул воды.
Эта вода осмотически и химически неактивна и не способна растворять
какие - либо вещества. Захваченная вода находится в основном между
двумя слоями в липидов мембраны. По подвижности, химической
активности она занимает промежуточное положение между связанной и
свободной водой. Свободная вода входит в состав мембраны в виде
самостоятельной фазы и обладает всеми свойствами жидкой воды.
Относительное содержание представителей того иного класса
липидов, белковых молекул, зависит от структурных особенностей и
функциональных свойств мембраны. Так , мембрана нервных клеток,
содержит небольшое количество белка ( 18 % массы мембраны). В
Современные представления о структуре мембран
плазматической мембране большинства клеток содержание белка достигает
до 50 % массы, так как различные ионные насосы, каналы, рецепторы, Совокупность экспериментальных данных, полученных при
ферменты представлены, в основном, молекулами белков. Наиболее исследовании природных и синтетических мембран
высоким содержанием белков характеризуются мембраны внутренние электронномикроскопическими, физико-химическими методами,
митохондрий и хлоропластов, где располагаются электронно- позволили предложить жидкостно-мозаичную модель строения
транспортные цепи и происходит синтез АТФ. В таблице 1 приведены биологических мембран. Впервые эта модель была предложена в 1966 году
данные о липидном составе различных мембран клеток млекопитающих. С.Сингером и Г. Николсоном. В соответствии с этой моделью,
структурную основу биологической мембраны образует двойной слой
фосфолипидов, инкрустированный белками (рис.2). При физиологических
Содержание липидов в составе плазматической мембраны и мембран условиях липиды находятся в жидком агрегатном состоянии. Это
органоидов животной клетки ( в % к общей массе липидов) позволяет сравнить мембрану с фосфолипидным морем, в которое
погружены интегральные белки - «айсберги». Полярные головки молекул
липидов обладают гидрофильными свойствами, а неполярные хвосты –
Липиды Плаз Мито Лизосо Ядро Эндопла Аппара гидрофобны. В водной среде термодинамически выгодно, чтобы полярные
мале хонд мы зматичес т головки липидов погружены в жидкую воду, а неполярные хвосты были
мма рии кая сеть Гольдж бы расположены подальше от воды.
и
Фосфатидилх 18 38 23 44 48 25
олин
Сфингомиели 12 0 23 3 5 7
н
Фосфатидилэт 11,5 28,5 12,5 16.5 19 9
аноламин
Фосфатидилсе 7 0 6 3,5 4 2,5
рин
Фосфатидили 3 2,5 6 6 7,5 5
нозитол
Лизофосфати 2,5 0 0 0 1,5 3
дилхолин
Дифосфатиди 0 14 5 1 0 0
лглицерин
Холестерин и 22 3 22 11 6 12
ее эфиры
Свободные 6 - - 9 4 18
жирные
кислоты
Другие 15 15 2,5 5,5 5 16
липиды

Рис.1. Жидкостно-мозаичная модель строения элементарной мембраны
(Антонов.с.14)
Экспериментально показано, что из молекул фосфолипидов в водной
среде происходит самосборка бислойной мембраны. Стабилизация такой
структуры происходит за счет гидрофобных взаимодействий между
неполярными хвостами симметрично расположенных липидов каждого
монослоя и электростатических связей между полярными головками
липида и молекулами воды. Очень существенным для образования и
стабилизации бислоя является то обстоятельство, что молекула липида
имеет два хвоста. Пространственная структура такой молекулы имеет
форму цилиндра (рис. 3). Присутствие молекул липидов с одним хостом,
имеющих в пространстве конусообразную форму, нарушает структуру
мембраны.
голова
1 2
Два хвоста
Рис. 2. Схематичное изображение молекулы фосфолипида (1) и
образования липидного бислоя (2). (Антонов с.15).
Динамика биологических мембран. Фазовые переходы
фосфолипидных молекул.
Функционирование биомембран зависит от микровязкости
липидного бислоя, от подвижности липидных молекул, от их
фазового состояния. Липидная фаза мембран в
физиологических условиях находится в жидком агрегатном
состоянии. Молекулы жидкости, как и молекулы твердого
вещества, совершают колебательные (и вращательные)
движения около положения равновесия. Через определенное
время (так называемое "время оседлой жизни") происходит
перескок молекулы в другое положение равновесия. Время
оседлой жизни τ молекул жидкости значительно меньше, чем
молекул твердых веществ. В частности, для молекул
фосфолипидов в составе биомемембран τ = 10-7 - 10-8 с. Как
уже отмечалось выше, молекулы в мембране расположены не
беспорядочно, а в определенном порядке: фосфолипидные
молекулы находятся в двойном слое, их гидрофобные хвосты
приблизительно параллельны друг другу. Есть порядок и в
ориентации гидрофильных головок липидов. Такое
физическое состояние вещества, при котором агрегатное
состояние жидкое, а в расположении молекул наблюдается
определенный порядок, называется жидкокристаллическим
состоянием. Жидкие кристаллы могут образовывать так
называемые «длинные молекулы», поперечные размеры
которых значительно меньше продольных. Бислойная
липидная мембрана соответствует смектическому
жидкокристаллическому состоянию, когда молекулы
располагаются параллельно друг другу и располагаются
слоями.
Коэффициент вязкости  (динамической вязкости)
биологических мембран составляет 30 -100 мПа с. Такой
величиной вязкости обладает подсолнечное масло при
нормальных условиях. Вязкость воды при этих условиях
равняется 1 мПа с. Использованием флуоресцентной, ЭПР,
ЯМР – спектроскопии показана высокая подвижность
фосфолипидных и белковых молекул в мембране.
Подвижность этих молекул обуславливает латеральную
(боковую) диффузию - хаотичное перемещение этих молекул
в плоскости мембраны. При латеральной диффузии соседние
молекулы скачкообразно меняются местами, и вследствие
таких перескоков, молекула перемещается по мембране.
Перемещение среднестатической молекулы можно оценить
по коэффициенту диффузии через среднеквадратичное
смещение:
D = Х2 / 2‫ ־‬Δ t
Показано, что среднеквадратичное смещение
фосфолипидной молекулы по мембране эритроцита составило
5 мкм/с, что сравнимо размером самого эритроцита. Таким
образом, молекула липида за секунду может «обежать» клетку
по периметру. Для белковых молекул среднеквадратичное
смещение составляет около 0,2 мкм/с. Соответственно,
коэффициенты диффузии для этих молекул составляют Dлип ≈
6 ∙10-12 м2/с, Dбел ≈ 1 ∙10-14 м2/с .
Частота перескоков (число перескоков в секунду )
молекулы при латеральной диффузии рассчитывается по
формуле:
v = 2 √ 3 D/ S ,
где S - площадь, занимаемая одной молекулой.
Для молекул фосфолипидов S ≈ 7 ∙10-19 м2, соответственно,
v = 3 ∙107 с-1 . В среднем, каждая молекула липида в составе
мембраны, претерпевает несколько миллионов перескоков в
секунду. Как видно, время одного перескока занимает 10-7 - 10-
8
с, такое же как и время оседлой жизни липидной молекулы.
Мембранные молекулы могут также диффундировать и
поперек мембраны, т.е. с одной поверхности мембраны на
другую. Это тип диффузии называют флип-флоп переходом
(диффузией). Диффузия молекул по этому типу происходит
значительно медленнее, чем латеральная диффузия. Среднее
время флип-флоп перехода одной молекулы фосфолипида
составляет около одного часа, в миллиарды раз больше
среднего времени молекулы при латеральной диффузии.
Жидкокристаллические структуры очень чувствительны
изменению параметров: температуры, давления, химического
состава, электрического поля. Этим свойством объясняется
высокая динамичность липидных бислойных мембран. Даже
небольшие изменения этих параметров сопровождаются
структурными перестройками мембран. Наиболее изученным
является изменения структуры мембран при понижении
температуры, так называемые фазовые переходы. При
охлаждении до определенной температуры , фосфолипидная
часть мембраны переходит из жидкокристаллического в
твердокристаллическое (гелеобразное) состояние. В гель-
состоянии молекулы расположены еще более упорядочено,
чем жидкокристаллическом состоянии. Углеводородные
гидрофобные хвосты липидов располагаются строго
параллельно друг другу. Толщина бислоя при таком
состоянии несколько больше, чем в жидком кристалле(Рис. 4).
Объем занимаемый одной молекулой липида в гель-состоянии
(≈0,5 нм2) несколько ниже, чем в жидкокристаллическом (≈0,6
нм2). Температура фазового перехода мембран различных
клеток может изменяться от -20 ºС до + 60 ºС. Ее значение
зависит от количества ненасыщенных связей в остатках
жирных кислот в молекулах липидов: чем больше число
ненасыщенных связей, тем ниже температура фазового
перехода.
Рис. 3. Схематичное изображение структуры
биологической мембраны при фазовом переходе из
жидкокристаллического состояния в гель-состояние. отдельные бимолекулярные слои отделены друг от друга
(Антонов,26с) слоями воды. Толщина билипидных слоев составляет в
многослйных липосомах составляет 6,5 – 7,5 нм, водных слоев
Нормальное функционирование мембран осуществляется в 1,5 – 2 нм. Диаметр многослойных липосом может достигать
жидкокристаллическом состоянии. Поэтому понижение до 400 -500 нм. Для получения однослойных липосом
температуры фазового перехода за счет изменения суспензию многослойных липосом обрабатывают
химического состава мембран является одной из ультразвуком ( Рис.5). Диаметр таких структур составляет 25-
адаптационных механизмов приспособления клеток к низким 30 нм. Современные методы позволяют получит однослойные
температурам. Например, значение температуры фазового липосомы большего диаметра, до 500 нм. Такие структуры
перехода плазматической мембраны в клетках тканей ноги можно рассматривать как прототипы клеток, а билипидный
полярного оленя (от копыта до туловища) изменяется от 20 ºС слой – как модель мембраны для исследований различных
до +30 ºС. Это достигается тем, что клеточные мембраны свойств клеточных мембран.
нижней части ноги содержат значительно больше
ненасыщенных фосфолипидов, чем мембраны клеток в
верхней части ноги оленя.
Экспериментально показано, что при фазовых
переходах в липидном бислое образуются сквозные поры
радиусом до 3 нм ( табл.1), которые изменяют проницаемость
мембран для молекул и ионов. Увеличение проницаемости
мембраны при низких температурах является одним из
механизмов защиты клетки от криоповреждений. за счет
выхода воды из клетки, и соответственно, снижения ее
кристаллизации в цитоплазме.

Искусственные липидные мембраны.

Липосомы. При набухании сухих фосфолипидов в воде

или при впрыскивании их раствора в воду происходит
происходит самосборка молекул и образование
фосфолипидных везикул – липосом. При этом неполярные
хвосты молекул находятся внутри би- и или Рис.4. Схема строения однослойной липосомы (Антонов,
полимолекулярных слоев и не соприкасаются с водой. Обычно 28 с)
получаются многослойные липосомы, т.е. состоящие из
нескольких бимолекулярных слоев. В таких структурах, Другой тип искусственных мембран, используемых в
качестве модельных систем – плоские бислойные липидные
мембраны (БЛМ). Такие мембраны получают на маленьких
отверстиях диаметром 1 мм, проделанных на фторопластовых
пластинах. На отверстие пластины, погруженного в воду,
наносят каплю раствора липидов, растворенных в неполярном
растворителе (спирты, хлороформ, ацетон). Растворитель
диффундирует в воду и на отверстии образуется липидная
пленка. Она спонтанно утончается до бимолекулярного слоя.
БЛМ (наряду с липосомами) широко используются в качестве
модельных систем для изучения проницаемости ,
электрических свойств мембран, мембранного транспорта и
других свойств и функций мембран. современные методики
позволяют вводить в состав БЛМ молекулы белков и 2. Активный транспорт - перенос неэлектролитов химического и
конструировать модели биологических мембран,
выполняющих разнообразные функции.
Транспорт веществ через биологические мембраны
Транспорт веществ через биологические мембраны - необходимое
условие функционирования клеток. С переносом вещества через мембраны
связаны все процессы метаболизма клетки, биоэнергетические процессы,
образование биопотенциалов, в т.ч. генерация и передача нервного
импульса и другие процессы.
Принято различать следующие типы мембранного транспорта.
1. Пассивный транспорт нейтральных молекул (неэлектролитов)
и ионов через мембрану. Перенос неэлектролитов обусловлен градиентом
химического потенциала, а ионов - градиентом электрохимического
потенциала. Пассивный транспорт через липидный бислой может
осуществляться путем диффузии или по механизму облегченной диффузии.
Для разбавленного раствора вещества концентрации с химический потен-
циал  ( свободная энергия Гиббса на один моль вещества) определяется
как:
 = 0 + RT lnc
где 0- стандартный химический потенциал (химический потенциал
при концентрации вещества 1 моль л-1).
Электрохимический потенциал 0 - величина, численно равная
свободной энергии Гиббса G на один моль вещества, помещенного в
электрическое поле
 = 0 + RT lnc + ZFφ,
где Z – заряд иона, F –число Фарадея, φ - потенциал
электрического поля, Т- температура.
Пассивный транспорт молекул и ионов идет с уменьшением
величин химического и электрохимического потенциалов, т.е. с
понижением энергии Гиббса (dG  0 ). Как известно, такие
процессы происходят самопроизвольно, не требуют затраты
энергии.
ионов против градиента химического или электрического потенциала. Этот
вид транспорта требует затраты энергии и происходит с повышением
свободной энергии Гиббса (dG 0 ).
Таким образом, является ли транспорт активным или пассивным
зависит от изменения свободной энергии транспортируемых веществ (dG ).
Если dG - положительная величина, то транспорт активный, если dG -
отрицательная величина, имеет место пассивный транспорт.
При транспорте заряженных веществ (ионов) dG имеет вид
C2
G  RT ln  ZF
C1
Z - заряд ионов, F- число Фарадея,  - трансмембранная разность
потенц иалов.
3. Транспорт, сопряженный с изменением архитектуры мембран -
экзо и эндоцитоз.
Пассивный транспорт
Пассивный транспорт – это перенос вещества в сторону уменьшения
химического и электрохимического потенциалов. Как отмечали выше,
пассивный транспорт веществ может осуществляться в процессе простой
или облегченной диффузии. Движущей силой пассивного транспорта
являются градиенты концентрации и электрического потенциала. В случае
транспорта неэлектролитов ( Z = 0) или в отсутствие электрического поля
dφ/dx = 0 плотность потока вещества (количество вещества в единицу
времени через единицу площади поверхности, перпендикулярной
направлению переноса) описывается уравнением dm/dt = -URTS dc/dx,
где U- подвижность частиц, с- концентрация частиц, S – площадь
переноса.. Согласно соотношению Эйнштейна, коэффициент диффузии D
= URT, тогда
dm/dt = -DS dc/dx (1 закон Фика).
Простая диффузия веществ может осуществляться через липидный
бислой, через поры в билипидном слое и через белковые поры. Скорость
простой диффузии определяется градиентом концентрации вещества в
мембране ( разностью концентрации снаружи и внутри клетки) и
коэффициентом проницаемости мембраны (Р). Коэффициент
проницаемости зависит от свойств мембраны и переносимых веществ и
определяется как P = DK/l, где D- коэффициент диффузии, К –
коэффициент распределения, l -толщина мембраны. Как видно из этой
формулы, коэффициент проницаемости тем больше, чем больше
коэффициент диффузии, чем тоньше мембрана, и чем лучше вещество
растворяется в липидном бислое.
В липидной фазе мембран хорошо растворяются неполярные
соединения, например, органические жирные кислоты, эфиры. Эти
вещества хорошо проникают через липидный бислой.
Вода и полярные водорастворимые соединения (соли, основания,
сахара, аминокислоты, спирты) плохо растворяются в липидной фазе и
поэтому не должны проходить через билипидный слой мембран. Однако,
известно, что все биологические мембраны очень хорошо проницаемы для
молекул воды и малых гидрофильных молекул. Этот факт свидетельствует
о том, что существуют специальные пути транспорта таких молекул через
мембраны. В настоящее время известно три способа транспорта воды и
водорастворимых молекул через мембраны: образование кинков, через
липидные поры, при помощи переносчиков (облегченная диффузия).
Образование кинков.
Проникновение гидрофильных молекул и воды через липидный
бислой связывают с образованием между жирно-кислотными хвостами
липидных молекул свободных полостей вследствие их теплового
движения, так называемых кинков ( от англ. kink – петля). Образование
кинков происходит за счет гош-транс-гош –конфигураций липидных
молекул (рис. ?). Вследствие теплового движения молекул, кинки могут
перемещаться поперек мембраны и переносить попавшие в них
небольшие молекулы, в первую очередь, молекулы воды.
Рис. 5. Схематичное изображение образования кинка липидной фазе
биологических мембран Антонов, 37 стр)
а. Углеводордная цепь липида в транс-конформации;
б. Углеводордная цепь липида в гош- транс- гош -конформации
Второй путь проникновения нерастворимых в липидах молекул –
через липидные и белковые поры в мембранах.
Липидные поры
Барьерные и механические свойства клеточных и внутриклеточных
мембран обуславливаются непрерывностью липидного бислоя. Однако, в
процессе жизнедеятельности клетки, непрерывность бислоя может
нарушаться и приводить к образованию структурных дефектов типа
сквозных гидрофильных пор. Естественно, при этом изменяется и па-
раметры биомембран, в частности проницаемость, стабильность. Сквозные
поры в липидном бислое появляются в результате действия различных
факторов: тепловых флуктуаций поверхности бислоя, энергетического
пробоя , замораживания, действия ПАВ, осмотического давления,
окисления молекул липидов и т.д. Один из наиболее типичных и хорошо
изученных примеров дестабилизации мембран – гемолиз эритроцитов. Это
явление на0 чинается с набухания клеток в результате осмотического
давления, при помещении их в гипотонический раствор. При набухании
мембрана эритроцита растягивается и при определенном пороговом уровне
натяжения мембраны появляются гидрофильные липидные поры. ( Рис.3
Антонов,с. 49). Через эти поры гемоглобин и низкомолекулярные соедине-
ния выходят из клетки, что приводит к снижению разности осмотического
давления на мембране. Натяжение мембраны снижается, и поры
затягиваются. Белки цитоскелета позволяют эритроциту сохранить форму и
при этом образуется так называемая «тень эритроцита». В отсутствие
цитоскелета и его недостаточного развития прочность клетки определяется
прочностью мембраны, т.е. наличием и размерами липидных пор. Если
размеры поры меньше критического размера, она затягивается и зарастает.
Неограниченный рост поры приводит к разрушению мембраны. По своему
происхождению, структуре и функциям липидные поры принципиально
отличаются от белковых каналов. Белковые каналы характеризуются
определенными размерами, которые не изменяются в течение всей жизни
клетки. Размеры липидных пор не постоянны, они варьируют в широких
пределах в процессе образования и зарастания (табл. 1). Если размер поры
меньше критического, то пора в процессе зарастания проходит все
промежуточные радиусы и достигает минимального размера.
Таблица 2.
Размеры липидных пор в модельных и клеточных мембранах
Тип мембраны Радиус Тип воздействия на мембрану
поры, нм
Эритроцит 3,0 – 4,0 Электрический пробой
Эритроцит 2,0 Осмотический гемолиз
L- клетка 1,2 Электрический пробой
Липосомы 0,2- 2,0 Осмотический гемолиз
Липосомы 0,6 – 0,8 Фазовый переход
Билипидная мембрана 1,2-1,8 Фазовый переход
Предполагается, что липидные поры полностью не затягиваются, так
как этому препятствуют мощные силы гидратации, проявляющиеся при
сближении стенок гидрофильных пор. Липидные поры, в отличие от
белковых каналов, не обладают избирательной проницаемостью по
отношению к тем или иным молекулам и ионам. Однако, по мере затягива-
ния размеры липидных могут стать соизмеримыми с размерами ионных
каналов. Экспериментально показано, что через определенное время после
снятия стрессового воздействия, проводимость мембраны возвращается в
исходное состояние. Это объясняется тем, что образованные при стрессе
липидные поры затягиваются до маленьких размеров и не способны
пропускать гидратированные ионы. На последних этапах затекания
липидные поры пропускают только молекулы и ионы воды. Как видно,
через гидрофильные липидные поры могут проходить и
высокомолекулярные вещества, и низкомолекулярные соединения,
органические и неорганические ионы, молекулы воды. Показано, что
большие поры могут пропускать в клетку такие гигантские молекулы как
молекулы ДНК. Механизм этого явления пока непонятен. Средний
диаметр статистического клубка ДНК достигает до 2000 нм. Критической
размер липидной поры около 9 нм. Предполагается, что липидная пора в
этом случае служит якорем для фиксации свободных концов ДНК, что
удерживает молекулу на определенном участке мембраны. Дальнейший
перенос молекулы ДНК в клетку происходит по механизму пиноцитоза.
Облегченная диффузия
В ряде случаев, посредниками для переноса органических молекул
служат специальные молекулы. Эти молекул по химической природе
являются белками, полипептидами или олигопептидами. Эти молекулы
способны узнавать определенные вещества и транспортировать их через
мембрану. Этот вид транспорта называют облегченной диффузией.
Широко известна облегченная диффузия ионов калия при помощи
антибиотика валиномицина. Молекула валиномицина состоит из 6
остатков аминкислот и 6 остатков кетокислот, имеет цилиндрическую
форму. Внутри цилиндра располагаются полярные группировки, снаружи –
неполярные. Поэтому эта молекула хорошо растворяется в липидной фазе и
может свободно диффундировать через липидный бислой мембран. Каж-
дая молекула валиномицина способна связывать один ион калия. При
взаимодействии валиномицина с К+ происходит разрушение гидратной
оболочки иона и образование комплекса. Комплекс валиномицин – К+ по
градиенту концентрации диффундирует через мембрану. При низкой
концентрации ионов калия в среде комплекс разрушается и свободный
валиномицин диффундирует обратно. Облегченная диффузия имеет свои
характерные особенности. Как видно, перенос ионов калия валиномицином
может происходить в ту или иную сторону в сторону меньшей
концентрации ионов. Облегченная диффузия имеет ряд характерных
отличий от простой диффузии.
При облегченной диффузии скорость переноса значительно
выше.
Процесс облегченной диффузии характеризуется свойством
насыщения. При повышении концентрации переносимого вещества
скорость переноса возрастает лишь до определенного предела, когда все
молекулы переносчика связаны с переносимым веществом. Затем скорость
транспорта не повышается ( Рис. 1).
J слой невозможен. Однако, известно, что многие ионы свободно
2 транспортируются через биологические мембраны. Эти факты позволяют
0 C
Рис. 6. Зависимость скорости переноса в клетку через мембрану от
концентрации вещества во внеклеточном пространстве
1 – простая диффузия; 2 – облегченная диффузия
Облегченная диффузия характеризуется высокой специфичностью и
избирательностью. Так, показано, что через плазматическую мембрану
таким путем транспортируется только L – аминокислоты, но
аминокислоту. Переносчики сахаров, наоборот, транспортируют через
мембрану, только D-изомеры. Если переносчик способен транспортировать
разные типы молекул, то наблюдается конкуренция между ними. При этом
одни типы молекул переносятся лучше, чем другие. Например, через
мембрану эритроцитов, глюкоза переносится лучше, чем фруктоза,
фруктоза лучше, чем ксилоза, ксилоза лучше, чем арабиноза и.т.д.
Работа переносчика может блокироваться веществом, имеющим
сходную структуру с транспортируемым соединением. Например,
флоридзин подавляет транспорт сахаров через мембрану.
Как видно, работа белковых переносчиков на мембранах имеют много
общего с работой ферментов.
Пассивный транспорт ионов через ионные каналы
Расчеты показывают, что транспорт ионов непосредственно через
липидный слой маловероятный процесс. Так, для перехода ионов калия
или натрия из водного раствора в липидный бислой мембраны
необходимо преодолеть потенциальный энергетический барьер W = 350 –
400 кДж/моль. В то же время энергия теплового движения этих ионов при
температуре 25 ˚С составляет всего 2,5 кДж/моль. Как видно,
самопроизвольное попадание иона и его транспорт через билипидный
предположить, что в биологических мембранах функционируют
специальные структуры, транспортирующие ионы. К настоящему времени
известны три способа проникновения ионов через мембраны: 1) в виде
водных растворов через липидные поры, 2) при помощи специальных бел-
ковых переносчиков (ионофоров), 3) через специальные образования в
мембране. Первые два способа были рассмотрены выше. Структурные
образования, избирательно пропускающие те или ионы через мембрану,
были обнаружены в 60- ые годы 20 века и названы ионными каналами.
Наличие ионных каналов показано для многих типов мембран:
плазматических мембран различных клеток, постсинаптических мембран
мышечных клеток, мембран митохондрий, саркоплазматического
ретикулюма и т.д.
Ионный канал представляет собой комплекс интегральных белков с
липидными молекулами, и является структурным элементом мембраны
(рис. 7). В полости канала содержатся заряженные группировки белковых
молекул (противоионная группировка). Канал имеет так называемые
входные и выходные ворота, которые могут находиться в открытом или
закрытом положении. Управление воротами может осуществляться
несколькими способами, например, изменением напряжения
электрического поля на мембране.
Рис.7. Ионный канал на плазматической мембране
Избирательность переноса ионов обеспечивается набором в мембране
каналов определенного радиуса, соответствующих размеру проникающей
частицы. Проницаемость пор также зависит от мембранного потенциала:
чем выше значение потенциала, тем выше проницаемость ионов
(катионов). Так, ионные каналы для калия в мембране эритроцитов имеют
коэффициент проницаемости равный 4 пм/с при мембранном потенциале Е
= 80 мВ. При уменьшении Е до 40 мВ, коэффициент проницаемости
снижается до 1 пм/с. Проницаемость мембраны аксона кальмара для К +
определяется ионными калиевыми каналами, радиус которых оценивается
как сумма кристаллического радиуса иона и толщины одной гидратной
оболочки ( 0.133 нм + 0,272 нм = 0,405 нм). Необходимо отметить, что
селективность ионных каналов не абсолютна, каналы могут пропускать и
другие ионы, но коэффициент проницаемости для них значительно ниже.
Так, если для калиевых каналов в аксоне кальмара максимальное значение
Р = 1 соответствует для К+. Ионы больших размеров ( Rb+, Cs+) имеют
меньшие значения Р, как предполагают, вследствие того, что их размеры с
одной гидратной оболочкой превышают размер поры (табл. 1). Менее
очевидна причина низких значений коэффициентов проницаемости для
ионов натрия и лития, имеющих маленькие размеры ( по сравнению с
ионом калия). Исходя из представлений о мембране, как о молекулярном
сите, можно предполагать, что эти ионы должны свободно проходить через
калиевые каналы. Для объяснения этого противоречия предложено
несколько гипотез. По одной из них (Л.Муллинз), предполагается, что в
растворе каждый ион имеет трехслойную гидратную оболочку (три слоя
молекул воды). Для попадания иона в пору, необходимо снять гидратные
оболочки. Как правило, в канале ион остается лишь с одним слоем
гидратной оболочки. Поэтому гидратированные ионы натрия и калия ( с
одной оболочкой) будут испытывать затруднения при вхождении в канал.
Таблица 1
Относительная проницаемость одновалентных катионов в калиевом
канале аксона кальмара
Рион/Ркалий Ион Кристаллический радиус
иона, нм
0.018 литий 0.060
0.010 натрий 0.095
1.000 калий 0.133
0.910 рубидий 0.148
0.077 цезий 0.169
Свойства ионных каналов.
Ионных каналы биологических мембран обладают определенными
свойствами, которые характеризуют их работу.
Селективность (избирательность)– способность канала избирательно
пропускать ионы одного типа. Эксперименты показали, что ионные
каналы обладают абсолютной селективностью по отношению ионам с
различными зарядами, т.е. существуют катион-селективные каналы и
анион-селективные каналы. Любой ионный канал способен пропускать
ионы одного знака , но с различной скоростью. Так, через натриевый
канал на мембране могут проходить и ионы калия, но коэффициент
проницаемости для них в 20 раз ниже, чем для ионов натрия. В то же
время, натриевый канал абсолютно непроницаем для анионов, например,
для ионов хлора. Способность ионного канала пропускать с неодинаковой
скоростью различные ионы одного знака называется относительной
селективностью канала.
Независимость работы отдельных каналов. Прохождение ионов через
канал не зависит от того, идет ли ток ионов через другие каналы на этой
мембране. Например, включение или выключение калиевого канала не
влияет на работу натриевого канала, и наоборот. Влияние канала на
функционирование других каналов может происходит опосредованно, за
изменения значения электрического потенциала на мембране.
Дискретный характер проводимости. Как уже отмечалось, ионный
канал может находиться в двух состояниях: открытом или закрытом.
Переходы между этими состояниями происходят в случайные моменты
времени и подчиняются статистическим закономерностям. Нельзя
утверждать, что данный ионный канал откроется точно в какой-то момент
времени, можно говорить лишь о вероятности открывания канала в
определенный интервал времени. Интервал времени, в течение которого
канал находится в открытом состоянии, называют временем открытого
состояния канала. Среднее значение этой величины для Na + - каналов
составляет около 0,7 мс ( 0,3 – 1,5 мс для Na + -каналов различных
мембран ). Промежуток времени, в течение которого вероятность
открывания отдельного канала велика, называют временем жизни канала.
Для натриевых каналов она составляет около 2 мс.
Управляемость канала. Ионные каналы чувствительны к
изменению мембранного потенциала. Чувствительный к изменению
электрического поля участок молекулы белка называют сенсором
напряжения. Изменение напряжения на мембране приводит к конформа-
ционной перестройке белковой молекулы, что меняет вероятность
открывания или закрывания ворот канала. Экспериментально показано, что
деполяризация мембраны нервных клеток приводит к открыванию
натриевых каналов. Ионные каналы могут быть чувствительны и к другим
воздействиям: механическим, химическим, термическим и т.д. Такие
свойства характерны для ионных каналов мембран рецепторных клеток,
соответственно, механорецепторов, хеморецепторов, терморецепторов.