Белки

1. Первичная структура белка - это последовательность расположения

аминокислотных остатков в полипептидной цепи.
Аминокислоты соединяются в полипептид с помощью ковалентных
пептидных (амидных) связей
Вторичная структура белка - это упорядоченное строение полипептидных
цепей, обусловленное водородными связями между группами С=О и N-H
разных аминокислот.
Третичная структура белка - это пространственная конформация
полипептида, имеющего вторичную структуру, и обусловленная
взаимодействиями между радикалами. Третичная структура 1.
Ковалентные связи между остатками двух цистеинов (дисульфидные
мостики). 2. Ионные (электростатические) взаимодействия между
противоположно заряженными аминокислотными остатками. 3.
Водородные связи. Участвуют все аминокислоты, имеющие
гидроксильные, амидные или карбоксильные группы. 4. Гидрофобные
взаимодействия. Образуются между неполярными радикалами в водной
среде. Участвуют 8 аминокислот (первый класс). Третичная структура
полностью задается первичной
Четвертичная структура белка - это агрегация двух или большего числа
полипептидных цепей, имеющих третичную структуру, в олигомерную
функционально значимую композицию.
2. Нингидриновая реакция – обусл. Наличием свободных А-аминогруппы
у всех белков, пептидов и А-аминокислот. При нагревании с
нингидрином эти вещ-ва окисляются с образованием CO2, NH3 и
соответствующих альдегидов. Образуется комплекс сине-фиолетового
цвета
Биуретовая реакция- обусловлена наличием в пептидах и белках
пептидных группировок, которые в щелочной среде образуют с
сернокислой медью окрашенные в сине-фиолетовый цвет компоненты
Ксантопротеиновая реакция- обусл. Наличием в большинстве белков
ароматических аминокислот, которые при нагревании с азотной
кислотой подвергаться нитрованию.
Реакция Фоля – цистин, цистеин, метионин при нагревании с
концентрированными растворами щелочей разрушаются с
образованием сульфидо
Реакция Сакагучи – в присутствии щелочи гуанидовая группировка
аргинина окисляется гипобромитом и гипохлоридом. Далее
соединяется с А-нафтолом и дает продукт окрашенный в красный цвет
 Реакция Эрлиха- при смешивании растворов сульфаниловой кислоты в
HClи NaOH в воде друг с другом и с аммиаком обз.
Диазобензолсульфоновая кислота, дающая оранжевое окрашевание
Реакция Адамкевича- триптофан в кислой среде взаимодействует с
альдегидами, давая окрашенные продукты конденсации
3.

4. Главное различие между цепями белка и полиэтилена или

полиэтилен-терефталата (дакрона) заключается в том, что в молекуле
белка не все боковые группы одинаковы. У фибриллярных
белков определенная повторяющаяся последовательность боковых
групп придает конкретному белку-кератину или коллагену-вполне
конкретные механические свойства. Глобулярные белки( растворимы в
солевых р-рах) имеют еще более сложное строение. Эти молекулы
обычно содержат от 100 до 500 аминокисло г, полимеризованных в
одну длинную цепь, и полная последовательность
аминокислотных остатков в каждой молекуле одного глобулярного
белка одинакова.
5. Изоэлектрическая точка (pI)
— кислотность среды (pH), при которой определённая молекула или по
верхность не несёт электрического заряда. Амфотерные молекулы (цви
ттер-ионы) содержат как положительные, так и отрицательные заряды,
наличием которых определяется pH раствора.
Все существующие методы её определения основаны на измерении
свойств белков, связанных или с конформацией макромолекулы, или с
 их зарядом, при различных значениях рН. Во всех случаях готовится
серия буферных растворов с различными значениями рН, в которые
помещаются одинаковые количества исследуемого белка в виде
раствора или в сухом виде.
6. Белки бывают растворимые и нерастворимые в воде. Растворимость
белков зависит от их структуры, величины рН, солевого состава
раствора, температуры и других факторов и определяется природой тех
групп, которые находятся на поверхности белковой молекулы. К
нерастворимым белкам относятся кератин (волосы, ногти, перья),
коллаген (сухожилия), фиброин (щелк, паутина)
рН среды влияет на заряд белка, а, следовательно, на его рас-
творимость. Растворимость и устойчивость белка минимальны при рН,
соответствующем изоэлектрической точке белка
7. Общие принципы осаждения белка из раствора
Чтобы выделить белки из раствора или разделить белки по физико-
химическим свойствам достаточно удалить один или оба фактора,
обеспечивающих их растворимость - заряд и гидратную оболочку. Так как
растворимость белков зависит только от них, то исчезновение одного или
обоих этих факторов ведет к полному или частичному осаждению белка и,
конечно, к потере его функций. Некоторые способы осаждения позволяют
впоследствии восстановить нативные свойства и работоспособность белков.
Обратимость осаждения белков обусловлена сохранением первичной
структуры белка. Восстановление физико-химических и биологических
свойств белка называется ренативация (ренатурация). Иногда для
ренативации достаточно просто удалить повреждающий агент.
 Минеральными кислотами
 Органическими кислотами
 Алколоидными реактивами
 Солями тяжелых металлов
 Органическими растворителями
 Солями щелочных, щелочноземельных металлов и аммония
8. Денатурация – необратимое осаждение белка из-за разрыва связей,
сопровождаемое изменением растворимости, вязкости, химической
активности, снижением или полной потерей биологической функции.
Аминокислотная последовательность белка не изменяется.
Обычно денатурация вызывается повышением температуры, действием
сильных кислот и щелочей, солей тяжёлых металлов, некоторых
растворителей (спирт), радиации и др.
Вначале разрушается самая слабая структура — четвертичная, затем
третичная, вторичная и при более жестких условиях — первичная.
10. Классический метод разделения альбуминов и глобулинов
сыворотки крови основан на осаждении последних, 2 М сульфатом
аммония (50%-ное насыщение). Альбумины осаждаются лишь 4
М сульфатом аммония (100%-ное насыщение). Вместо сульфата
аммония могут быть использованы и другие нейтральные соли — сульфат
натрия, сульфат магния, смеси одно- и двухзамещенных фосфатов и др.
Однако наибольшее распространение в качестве солевого осадителя - белков
получил именно сульфат аммония. Это обусловлено главным образом тем,
что высокая растворимость в воде сочетается у него с практической
независимостью растворимости от температуры. Так, концентрация
насыщенного раствора сульфата аммония при переходе от 25 к 0° снижается
лишь с 4,1 до 3,9 М. Напротив, такие осадители, как, например, сульфат
натрия, имеют ограниченную область применения из-за низкой
растворимости при температуре, близкой к 0°. Сульфат аммония весьма
удобен также тем, что не оказывает денатурирующего воздействия на самые
лабильные из известных белков.
11. Сложные белки состоят из простого белка и небелковых компонентов —
углеводов, нуклеиновых кислот, липидов или других соединений. Тонкие
методы анализа белков, интенсивно проводящиеся в последние годы,
позволяют обнаружить в составе простых белков незначительные, но
стабильные соединения, не являющиеся аминокислотами.
12. Классификация сложных белков:
Гликопротеины. Состав простетической группы гликопротеинов:
моносахариды (альдозы, кетозы); олигосахариды (дисахариды, трисахариды
и т.д.); полисахариды (гомополисахариды, гетерополисахариды).
Функции гликопротеинов: рецепторы клеточных мембран; интерфероны;
белки плазмы крови (кроме альбуминов); иммуноглобулины; групповые
вещества крови; фибриноген, протромбин; гаптоглобин, трансферин;
церулоплазмин; мембранные ферменты; гормоны (гонадотропин,
кортикотропин).
Липопротеины — содержат липиды нескольких классов в качестве
простетической группы, связаны с липидами и холестерином за счет
различных нековалентнвых сил.
Фосфопротеины. Фосфопротеины — источник энергетического и
пластического материала.
Хромопротеины (ХП). Хромопротеиды участвуют в таких процессах
жизнедеятельности, как фотосинтез, клеточное дыхание и дыхание всего
организма, транспорт кислорода и углекислого газа, окислительно-
восстановительные реакции, свето- и цветовосприятие.
Металлопротеины — содержат ионы одного или нескольких металлов,
соединенных координационными связями с функциональными группами
белка. Часто являются ферментами.
Нуклеопротеины - сложные белки, в которых небелковый компонент —
нуклеиновые кислоты — ДНК или РНК связаны многочисленными ионными
связями с белковыми компонентами положительно заряженных аминокислот
— аргинина и лизина.