Лекции № 6 «Генетика микроорганизмов»-1

Всякое живое существо по большинству своих признаков сходно со своими предками.

Сохранение специфических свойств, т.е. постоянство признаков в ряду поколений, называют
наследственностью. Изучением передачи признаков и закономерностей их наследования
занимается генетика.
Основными явлениями наследственности являются:
сходство признаков потомков с родителями;
отличие некоторых признаков потомков от родителей;
сходство признаков потомков с отдалёнными предками.
Основным свойством наследственности является способность запоминать информацию
предков для воспроизведения её у потомков:
в структуре тела;
в характере обмена веществ;
в характере взаимодействия с внешней средой.
Указанные выше признаки наследственности характерны для всего живого мира: людей,
животных, растений и, в том числе и для микроорганизмов.
С самых первых научных исследований механизма наследственности ученых не
переставал интересовать главный вопрос: «Что представляет собой наследственный материал?» В
начале XX века гипотеза Саттона-Бовери о том, что гены находятся в хромосомах, стала
общепризнанным мнением. Но какое химическое вещество в хромосомах служит переносчиком и
хранителем генетической информации?
Еще на заре биохимии ученые предполагали, что на роль носителя информации подходят
два основных вида химических веществ клетки – белки и нуклеиновые кислоты. И хотя об их
строении было известно мало, белки, как более сложные, казались наиболее подходящим
кандидатом. Поэтому считалось, что гены состоят из белков. Вместе с тем некоторые опыты
свидетельствовали о том, что не стоит сбрасывать со счетов и нуклеиновые кислоты. Когда
Уилсон публиковал свой классический труд «Клетка и ее роль в наследственности и эволюции», в
одном издании он написал, что наиболее важный материал – белки, а в другом издании назвал
нуклеиновые кислоты. Однако никто ничего не знал наверняка.
Основные законы генетики открыты и сформулированы чешским естествоиспытателем Г.
Менделем, затем они более подробно изучены Морганом, Мюллером, Вавиловым, Кольцовым и
др. В 1944 г. американские микробиологи Эйвери, Маклауд и Маккарти доказали, что ДНК
является веществом, ответственным за передачу наследственных признаков у бактерий.
До 1952 года предполагалось, что молекулы ДНК состоят из четырех видов нуклеотидов,
чередующихся в регулярном порядке, поэтому казалось, что все молекулы более или менее
одинаковы и не могут переносить информацию. Но когда Эрвин Чаргафф тщательно
проанализировал состав ДНК различных организмов, обнаружилось, что нуклеотиды содержатся в
них не в равной пропорции, а наблюдается следующее соотношение:
общее количество пуринов (А + G) почти точно соответствует общему количеству пиримидинов
(С + Т);
количество A почти равно количеству Т (тимина), а количество G (гуанина) – количеству С -
цитозина (А = Т, G = С);
отношение (А + Т) : (G + С) сильно варьируется у разных организмов.
Итак, в начале 50-х годов Чаргафф и его коллеги установили, что в молекуле ДНК
определенно взаимосвязаны два спаренных основания, причём аденин с тимином, а гуанин с
цитозином. Количественные отношения между этими парами в молекуле ДНК одного и того же
биологического вида постоянны, но различаются у разных видов. Чем более родственны виды
между собой, тем более сходны и количественные отношения этих пар в ДНК и наоборот, чем
меньше родства между видами, тем эти отношения менее сходны.
Спустя 30 лет в клетках дрожжей открыли другую нуклеиновую кислоту – РНК. РНК
отличается от ДНК тремя основными особенностями:
вместо дезоксирибозы содержит близкий к ней сахар – рибозу;
вместо тимина – урацил;
в отличие от ДНК, являющейся двойной спиралью, РНК представляет простую длинную цепь, в
которой нуклеотиды расположены последовательно в ряд.
Окончательный ответ на этот ключевой вопрос дали исследования бактерий и
поражающих их вирусов. В небольшой промежуток времени, в 1952–1953 годы стало ясно:
1
наследственное вещество – это ДНК, и ее физическая структура определяет все основные
феномены наследственности. Отождествление ДНК с генетическим материалом и открытие ее
структуры – одно из величайших научных достижений XX века.
В 1928 году Фредерик Гриффитс обнаружил, что вещество погибших клеток одного
штамма бактерий может переносить свои характеристики живым клеткам другого штамма.
Например, было известно, что капсулообразующий штамм IIIS бактерий Diplococcus pneumoniae
может вызывать летальную пневмонию у мышей, тогда как бескапсульный штамм IIIR
относительно безвреден.
Гриффитс нагрел раствор с клетками III S до высокой температуры, тем самым убив их, и
перемешал остатки клеток с живыми клетками III R, после чего ввел мышам полученную смесь.
Мыши погибли. По всей видимости, живые клетки вобрали в себя из мертвых клеток какой-то
материал, который трансформировал их и передал им характеристики штамма III S.
В 1944 году Освальд Т. Эйвери и его коллеги по Центру Рокфеллера в Нью-Йорке на
опытах доказали, что трансформирующим фактором служит ДНК. Они разрушали белки и другие
вещества клеток, но трансформация при этом продолжалась, но когда они разрушили ДНК,
трансформация прекратилась.
Так был сделан важный шаг в исследовании генетического материала – его отождествили с
нуклеиновой кислотой. Генетики пришли к убеждению, что именно ДНК, входящая в состав
хромосом у всех организмов, служит материальным носителем наследственной информации.
Идея ясна: организм состоит из структур, которые производят сами себя. Белки получают
информацию о своем производстве от молекул нуклеиновых кислот, в основном от ДНК.
Исследования в области генетики микроорганизмов имели важнейшее значение не только
для микробиологии но и для дальнейшего развития биологических и медицинских наук. В них
была установлена генетическая роль ДНК, расшифрованы тонкая структура гена и генетический
код, механизмы репликации (редупликации) ДНК и регуляции синтеза белка у прокариотов,
выяснены закономерности мутагенеза и репараций поврежденных участков ДНК. Результаты этих
исследований позволили заложить основы генной инженерии – раздела молекулярной генетики,
разрабатывающего методы манипуляций с генами, их переноса из одной клетки в другую и
изучающего особенности функционирования пересаженных генов.
Успехи молекулярной генетики стали возможны благодаря совместной работе
микробиологов, генетиков, химиков и физиков, которые в своих исследованиях использовали
микроорганизмы. Именно прокариоты, главным образом бактерии, а также вирусы оказались
наиболее простой и удобной моделью для решения кардинальных проблем молекулярной
генетики.
Преимущество прокариотов перед эукариотами состоит прежде всего в высокой скорости
размножения, гаплоидности и большой разрешающей способности методов генетического анализа
этих микроорганизмов. Формирование на питательных средах многомиллиардных популяций
бактерий в течение 15-20 ч позволяет проводить быстрый и точный анализ происходящих в них
количественных и качественных изменений. Сравнительная простота постановки эксперимента
обусловливает эффективность селективного анализа микробной популяции и выделение
единичных особей, обладающих способностью мутировать с очень высокой частотой. Наконец,
гаплоидность бактерий, имеющих в отличие от эукариотов одну хромосому, т. е. одну группу
сцепления генов, обусловливает отсутствие у них явления доминантности, что способствует
быстрому выявлению мутировавших генов.
Молекулярно-генетические исследования, проводимые в медицинской микробиологии,
преследуют определенные цели. Они заключаются в познании молекулярных основ
наследственности и изменчивости патогенных микроорганизмов, разработке методов и принципов
управления их жизнедеятельностью и в получении мутантов, полезных для человека.
Изучение наследственности и изменчивости микроорганизмов началось по существу с
первых дней формирования микробиологии как самостоятельной науки. Еще Пастер на примере
возбудителей куриной холеры, сибирской язвы и бешенства разработал методы ослабления
(аттенуации) патогенного действия микроорганизмов и получил полезные для человека вакцинные
штаммы бактерий и вирусов.
Большое практическое значение имеют работы по получению вакцинных штаммов
патогенных бактерий с резко ослабленными вирулентными свойствами. Так в 1920г. Кальметт и
Герен получили штамм бактерий туберкулеза бычьего типа со сниженной вирулентностью путем
длительного культивирования (в течение 13 лет) на картофельно-глицериновой среде с жёлчью. В
2
30-40-х годах были получены вакцинные штаммы чумных бактерий, бруцелл, возбудителя
сибирской язвы, туляремии и др. Большой вклад в разработку проблемы получения вакцинных
штаммов внесли советские исследователи Гинсбург, Гайский, Эльберт, Вершилова, Салтыков и
др.
В начале 50-х годов генетические исследования микроорганизмов приобрели необычайно
широкий размах. Были получены новые доказательства роли ДНК как материальной основы
наследственности. В опытах А. Херши и М. Чейс (1952) было показано, что при инфицировании
фагом клеток кишечной палочки в них проникает только его ДНК, содержащая генетическую
информацию для воспроизведения потомства фага.
Позднее ряд исследователей установили возможность получения полноценных вирионов
для заражения чувствительных клеток одной вирусной РНК. В дальнейшем были изучены
инфекционные свойства нуклеиновых кислот некоторых РНК и ДНК-содержащих вирусов.
Оказалось, что изолированная вирусная ДНК или РНК, проникая внутрь клетки хозяина,
осуществляет те же функции, что и нуклеиновая кислота, поступившая в клетку при ее заражении
полноценным вирусом. Эти данные свидетельствуют о том, что вся генетическая информация у
вирусов содержится в нуклеиновых кислотах – ДНК или РНК.
После того как Д. Уотсон и Ф. Крик (1953) доказали двунитевую структуру ДНК, начался
новый этап в развитии молекулярной генетики, который привел к расшифровке генетического
кода, установлению особенностей синтеза и репликации ДНК. Особую роль в развитии
бактериальной генетики сыграли работы Ледерберга, Хейса, Жакоба, Вольмана по изучению
половой дифференцировки бактерий и закономерности генетического обмена у прокариотов,
которые происходят при трансформации, трансдукции и конъюгации. Дальнейшие исследования
привели к открытию разнообразных плазмид, представляющих собой внехромосомные факторы
наследственности, контролирующие важные свойства бактерий, в том числе резистентность к
химиопрепаратам и патогенность.
Трансмиссивность плазмид позволила использовать некоторые из них в качестве
переносчиков генов от одних бактерий к другим, а также для переноса генов из клеток
млекопитающих в бактериальные клетки. Таким образом, были заложены основы генной
инженерии.
Особое значение для медицинской микробиологии имеют изучение генетики патогенных
микроорганизмов, выявление возможных путей образования и селекции новых видов и
разновидностей, а также направленное изменение возбудителей для получения вакцин. Успехи в
развитии генетики микроорганизмов показали, что основные законы наследственности и
изменчивости одинаковы по своей сути для всех живых организмов и имеют единую
материальную основу.
Строение генома бактерий
Бактериальный геном состоит из генетических элементов, способных к самостоятельной
репликации (син. воспроизведение), т. е. репликонов. Репликонами являются бактериальная
хромосома и плазмиды.
Наследственная информация хранится у бактерий в форме последовательности
нуклеотидов ДНК, которые определяют последовательность аминокислот в белке. Каждому белку
соответствует свой ген, т. е. дискретный участок на ДНК, отличающийся числом и
специфичностью последовательности нуклеотидов. ДНК является материальной основой
наследственности, которая определяет генетические свойства всех организмов, за исключением
РНК-содержащих вирусов, у которых вся генетическая информация записана в РНК.
Кроме того, молекулы ДНК не только переносят информацию, но и воспроизводят себя.
Таким образом, копии молекул ДНК передаются каждой новой клетке и последующим
поколениям организмов. Это положение и составляет основу современного учения о
наследственности.
Наследственный аппарат бактерий представлен одной хромосомой, которая представляет
собой молекулу ДНК, она спирализована и свернута в кольцо. Это кольцо в одной точке
прикреплено к цитоплазматической мембране. На бактериальной хромосоме располагаются
отдельные гены.
Ген – фрагмент молекулы ДНК, контролирующий синтез одного белка или пептида.
Генетическая информация относительно всех признаков, присущих клетке или вириону, записана
в генах. Гены, несущие информацию о синтезируемых микроорганизмами ферментах или

3
структурных белках, называются структурными генами, их транскрипции регулируются
регуляторными генами.
Полный набор ДНК образует геном клетки. В то же время геном – это физическая
структура, содержащая все гены. Наследственная, или генетическая, информация определяет,
как производить структуры жизни, да и сам геном. Как только клетка накапливает достаточно
новых веществ и структур, она делится, после чего процесс начинаются заново.
Поэтому можно сказать, что клетка, эта фундаментальная единица жизни, представляет
собой не что иное, как механизм, запрограммированный на самовоспроизводство.
Функциональными единицами генома бактерий, кроме хромосомных генов, являются:
IS-последовательности (инсерционные);
транспозоны (Tn);
плазмиды (pla).

IS-последовательности – это короткие фрагменты ДНК. Они не несут структурных

(кодирующих белок) генов, а содержат только гены, ответственные за транспозицию (способность
перемещаться по хромосоме и встраиваться в различные ее участки).
Транспозоны – это более крупные молекулы ДНК. Помимо генов, ответственных за
транспозицию, они содержат и структурный ген. Транспозоны способны перемещаться по
хромосоме. Их положение сказывается на экспрессии генов. Транспозоны могут существовать и
вне хромосомы (автономно), но неспособны к автономной репликации.
Плазмиды – дополнительный внехромосомный генетический материал. Представляет
собой кольцевую, двунитевую молекулу ДНК, гены которой кодируют дополнительные свойства,
придавая селективные преимущества клеткам.
Плазмиды способны к автономной репликации, т. е. независимо от хромосомы или под
слабым ее контролем. За счет автономной репликации плазмиды могут давать явление
амплификации: одна и та же плазмида может находиться в нескольких копиях, тем самым
усиливая проявление данного признака.
Среди фенотипических признаков, сообщаемых бактериальной клетке плазмидами, можно
выделить следующие:
1) устойчивость к антибиотикам;
2) образование колицинов;
3) продукция факторов патогенности;
4) способность к синтезу антибиотических веществ;
5) расщепление сложных органических веществ;
6) образование ферментов рестрикции и модификации.
Теперь охарактеризуем более подробно функциональные единицы генома бактерий.
Бактериальная хромосома
Бактериальная хромосома представлена одной двухцепочечной молекулой ДНК кольцевой
формы. Размеры бактериальной хромосомы у различных представителей царства Procaryotae
варьируют от 3 × 108 до 2,5 × 109 Da, что соответствует 3,2 × 106 нуклеотидных пар (н.п.).
Например, у Е. coli бактериальная хромосома содержит 5 × 106 н.п. Для сравнения: размеры ДНК
вирусов составляют порядка 103 н.п., дрожжей – 107 н.п., а суммарная длина хромосомных ДНК
человека составляет 3 × 109 н.п. Бактериальная хромосома формирует компактный нуклеоид
бактериальной клетки. Бактериальная хромосома имеет гаплоидный набор генов. Она кодирует
жизненно важные для бактериальной клетки функции.
Плазмиды бактерий
Плазмиды представляют собой двухцепочечные молекулы ДНК размером от 10 3 до 106 н.п.
Они кодируют не основные для жизнедеятельности бактериальной клетки функции, но
придающие бактерии преимущества при попадании в неблагоприятные условия.
В зависимости от свойств признаков, которые кодируют плазмиды, различают:
R-плазмиды. Обеспечивают лекарственную устойчивость; могут содержать гены, ответственные
за синтез ферментов, разрушающих лекарственные вещества, могут менять проницаемость
мембран;
F-плазмиды. Кодируют пол бактерий. Мужские клетки (F+) содержат F-плазмиду, женские (F-) –
не содержат. Мужские клетки выступают в роли донора генетического материала при
конъюгации, а женские – реципиента. Они отличаются поверхностным электрическим зарядом и

4
поэтому притягиваются. От донора переходит сама F-плазмида, если она находится в автономном
состоянии в клетке. F-плазмиды способны интегрировать в хромосому клетки и выходить из
интегрированного состояния в автономное. При этом захватываются хромосомные гены, которые
клетка может отдавать при конъюгации;
Col-плазмиды. Кодируют синтез бактериоцинов. Это бактерицидные вещества, действующие на
близкородственные бактерии;
Тох-плазмиды. Кодируют выработку экзотоксинов;
Плазмиды биодеградации. Кодируют ферменты, с помощью которых бактерии могут
утилизировать ксенобиотики.
Потеря клеткой плазмиды не приводит к ее гибели. В одной и той же клетке могут находиться
разные плазмиды.
Плазмиды физически либо не связаны с хромосомой (автономное состояние), либо входят в её
состав (интегрированное состояние). В автономном состоянии они самостоятельно
реплицируются. (В отличие от плазмид транспозоны и Is-последовательности во всех случаях
связаны только с хромосомой и не способны к самопроизвольной репликации).
Репликацию плазмидной ДНК осуществляет тот же набор ферментов, что и репликацию
бактериальной хромосомы, однако репликация плазмиды ходит независимо от хромосомы.
Некоторые плазмиды находятся под строгим контролем. Это означает, что их
репликация сопряжена с репликацией хромосомы так, что в каждой бактериальной клетке
присутствует одна или, по крайней мере, несколько копий плазмид.
Число копий плазмид, находящихся под слабым контролем, может достигать 200 на
бактериальную клетку.
Некоторые плазмиды могут обратимо встраиваться в бактериальную хромосому и
функционировать в виде единого репликона. Такие плазмиды называются интегративными или
эписомами.
Некоторые бактериальные плазмиды способны передаваться из одной клетки в другую,
иногда даже принадлежащую иной таксономической единице. Такие плазмиды называются
трансмиссивными (конъюгативными, син.) Трансмиссивность присуща лишь крупным
плазмидам, имеющим tra-оперон, в который объединены гены, ответственные за перенос
плазмиды. Эти гены кодируют половые пили, которые образуют мостик с клеткой, не содержащей
трансмиссивную плазмиду, по которой плазмидная ДНК передается в новую клетку. Этот процесс
называется конъюгацией; подробно он будет рассмотрен далее.
Мелкие плазмиды, не несущие tra-гены, не могут передаваться сами по себе, но способны
к передаче в присутствии трансмиссивных плазмид, используя их аппарат конъюгации. Такие
плазмиды называются мобилизуемыми, а сам процесс – мобилизацией нетрансмиссивной
плазмиды.
Особое значение в медицинской микробиологии имеют плазмиды, обеспечивающие
устойчивость бактерий к антибиотикам, которые получили название R-плазмид, и плазмиды,
обеспечивающие продукцию факторов патогенности, способствующих развитию инфекционного
процесса в макроорганизме.
R-плазмиды (resistance – противодействие, англ.) содержат гены, детерминирующие син-
тез ферментов, разрушающих антибактериальные препараты (например, антибиотики).
В результате наличия такой плазмиды бактериальная клетка становится устойчивой (резис-
тентной) к действию целой группы лекарственных веществ, а иногда и нескольким препаратам.
Многие R-плазмиды являются трансмиссивными, распространяясь в популяции бактерий, делая ее
недоступной к воздействию антибактериальных препаратов. Бактериальные штаммы, несущие R-
плазмиды, очень часто являются этиологическими агентами внутрибольничных инфекций.
Плазмиды, детерминирующие синтез факторов патогенности, в настоящее время об-
наружены у многих бактерий, являющихся возбудителями инфекционных заболеваний человека.
Патогенность возбудителей шигел-лезов, иерсиниозов, чумы, сибирской язвы, иксодового
бореллиоза, кишечных эшерихиозов связана с наличием у них и функционированием плазмид
патогенности. Первыми, из этой группы плазмид были определены Ent-плазмида, определяющая
синтез энтеротоксина, и Нlу-плазмида, детерминирующая синтез гемолизина у Е. coli.
Некоторые бактериальные клетки содержат плазмиды, детерминирующие синтез бакте-
рицидных по отношению к другим бактериям веществ. Например, некоторые Е. coli владеют Col-
плазмидой, определяющей синтез колицинов, обладающих микробоцидной активностью по

5
отношению к колиформным бактериям. Бактериальные клетки, несущие такие плазмиды,
обладают преимуществами при заселении экологических ниш.
Плазмиды используются в практической деятельности человека, в частности в генной
инженерии, при конструировании специальных рекомбинантных бактериальных штаммов,
вырабатывающих в больших количествах биологически активные вещества.
Подвижные генетические элементы
В состав бактериального генома, как в бактериальную хромосому, так и в плазмиды,
входят подвижные генетические элементы. К подвижным генетическим элементам относятся
вставочные последовательности и транспозоны.
Вставочные (инсерционные) последовательности, IS-элементы (insertion sequences,
англ.) – это участки ДНК, способные как целое перемещаться из одного участка репликона в
другой, а также между репликонами. IS-элементы имеют размеры ÷1000 н.п. и содержат лишь те
гены, которые необходимы для их собственного перемещения – транспозиции: ген, кодирующий
фермент транспозазу, обеспечивающую процесс исключения IS-элемента из ДНК и его
интеграцию в новый локус, и ген, детерминирующий синтез репрессора, который регулирует весь
процесс перемещения.
Отличительной особенностью IS-элементов является наличие на концах вставочной
последовательности инвертированных повторов. Эти инвертированные повторы узнает фермент
транспозаза. Транспозаза осуществляет одноцепочечные разрывы цепей ДНК, расположенных по
обе стороны от подвижного элемента. Оригинальная копия IS-элемента остается на прежнем
месте, а ее реплицированный дупликат перемещается на новый участок.
Перемещение подвижных генетических элементов принято называть репликативной или
незаконной рекомбинацией. Однако в отличие от бактериальной хромосомы и плазмид
подвижные генетические элементы не являются самостоятельными репликонами, так как их
репликация – составной элемент репликации ДНК репликона, в составе которого они находятся.
Известно несколько разновидностей IS-элементов, которые различаются по размерам и по
типам и количеству инвертированных повторов.
Транспозоны – это сегменты ДНК, обладающие теми же свойствами, что и IS-элементы,
но имеющие структурные гены, т. е. гены, обеспечивающие синтез молекул, обладающих
специфическим биологическим свойством, например токсичностью, или обеспечивающих
устойчивость к антибиотикам.
Перемещаясь по репликону или между репликонами, подвижные генетические элементы
вызывают:
Инактивацию генов тех участков ДНК, куда они, переместившись, встраиваются.
Образование повреждений генетического материала.
Слияние репликонов, т. е. встраивание плазмиды в хромосому.
Распространение генов в популяции бактерий, что может приводить к изменению
биологических свойств популяции, смене возбудителей инфекционных заболеваний, а также
способствует эволюционным процессам среди микробов.
Изменчивость бактерий
Различают два вида изменчивости – фенотипическую и генотипическую.
Фенотипическая изменчивость – модификации
Генотипу противопоставляют фенотип. Фенотип – это конкретное проявление тех или
иных свойств клетки, заложенных в генотипе. При одинаковых генотипах фенотипы зависят от
условий среды. Фенотипические ненаследуемые изменения какого-либо признака или нескольких
признаков микроорганизма – модификации – не затрагивают генотип. Они не передаются по
наследству и с течением времени затухают, т. е. возвращаются к исходному фенотипу.
Фенотипические ненаследуемые изменения какого-либо признака или нескольких
признаков микроорганизма называют модификациями. Они выражаются в изменении формы и
размеров микробной клетки, морфологии колоний, биохимических, патогенных и антигенных
признаков. Модификации определяются условиями окружающей среды, а у облигатных
внутриклеточных паразитов (вирусы и др.) – клеткой хозяина.
Возникающие изменения признаков при модификации носят фенотипический характер,
поскольку они не затрагивают генотипа микроба, хотя и находятся под его контролем, и
утрачиваются в первом или последующих поколениях.

6
 Модификации – эволюционно закрепленные адаптивные реакции микроорганизма в ответ
на изменение условий окружающей среды. Эти реакции обеспечивают жизнеспособность микроба
и исчезают после устранения действия фактора, вызывающего их образование.
Модификации, сохраняющиеся только в первых поколениях, называют
кратковременными. К ним относится любое кратковременное изменение какого-либо признака,
который исчезает при устранении действия вызвавшего его фактора: например, образование
нестабильной L-формы бактерии под влиянием пенициллина с последующей реверсией к
исходному типу после окончания действия данного антибиотика.
Существуют длительные модификации, которые сохраняются в потомстве в течение
многих поколений. Например, стабильные L-формы бактерий могут сохраняться во многих
генерациях. В конечном итоге они также утрачиваются и бактерии возвращаются к исходному
типу.
Следует, однако, отметить, что стабильные L-формы могут возникать и в результате
генотипических изменений. Длительные модификации иногда очень трудно отличить от мутаций,
поскольку их фенотип идентичен. Это можно сделать только в том случае, если известен фактор,
вызвавший образование данной модификации, или путем генетического анализа.
Кратковременные или длительные модификации могут сопровождаться ослаблением вирулентных
свойств бактерий. Однако достаточно такую культуру провести в нескольких пассажах через
организм чувствительного животного, чтобы полностью восстановить ее вирулентные свойства.
При мутации данные свойства не восстанавливаются.
Под влиянием различных факторов внешней среды микробы могут менять свою
морфологию. Под влиянием химических веществ (соли металлов, фаг, антибиотики, различные
излучения, действие магнитных полей и т.д.) некоторые микробы принимают форму шаров,
утолщенных нитей, разветвлений и т.д. Культивирование в обычных условиях приведёт к возврату
типичной формы. S и R-формы также являются зачастую проявлением фенотипической
изменчивости. Наряду с морфологическими отклонениями у микробов часто наблюдаются
изменения культуральных свойств.
Биохимическую основу модификации составляет индуцированный синтез ферментов,
заключающийся в индукции и репрессии соответствующих структурных генов, контролируемых
регуляторными генами. Так, например, кишечная палочка только в присутствии лактозы
синтезирует ферменты, необходимые для её ферментации. Стафилококки только в присутствии
пенициллина синтезируют фермент пенициллиназу, расщепляющий данный антибиотик.
Модификация позволяет микробным популяциям быстро адаптироваться к окружающей
среде и сохранять на должном уровне свою жизнеспособность.
Генотипическая изменчивость бактерий
Изменения бактериального генома, а следовательно, и свойств бактерий могут
происходить в результате мутаций и рекомбинаций.
Мутации у бактерий
Мутации – это изменения в последовательности отдельных нуклеотидов ДНК, которые
ведут к таким проявлениям, как изменения морфологии бактериальной клетки, возникновение
потребностей в факторах роста, например в аминокислотах, витаминах, т. е. ауксотрофности; к
устойчивости к антибиотикам, изменению чувствительности к температуре, снижению
вирулентности (аттенуация) и т. д.
По протяженности изменений повреждения ДНК различают мутации точечные, когда
повреждения ограничиваются одной парой нуклеотидов, и протяженные или аберрации. В
последнем случае могут наблюдаться выпадения нескольких пар нуклеотидов, которые
называются делецией, добавление нуклеотидных пар, т. е. дупликации, перемещения фрагментов
хромосомы, транслокации и перестановки нуклеотидных пар – инверсии.
Мутации могут быть спонтанными, т. е. возникающими самопроизвольно, без
воздействия извне, и индуцированными.
Точечные спонтанные мутации возникают результате возникновения ошибок при
репликации ДНК, что связано с таутомерным перемещением электронов в азотистых основаниях.
Тимин, например, обычно находится в кетоформе, в которой он способен образовывать
водородные связи с аденином. Но если тимин во время связывания оснований при репликации
ДНК переходит в фенольную форму, то он спаривается с гуанином, в результате в новой молекуле
ДНК на месте, где раньше стояла пара А–Т, появляется пара Г–Ц.
7
 Спонтанные хромосомные аберрации возникают вследствие перемещения подвижных
генетических элементов.
Индуцированные мутации появляются влиянием внешних факторов, которые называются
мутагенами. Мутагены бывают физическими (УФ-лучи, гамма-радиация), химическими (аналоги
пуриновых и пиритовых оснований, азотистая кислота и ее аналоги, и другие соединения) и
биологическими – транспозоны.
На бактериях, подвергнутых УФ-облучению, было показано, что повреждения, вызванные
облучением в бактериальных ДНК, могут частично исправляться благодаря наличию
репарационных систем. У различных бактерий имеется несколько типов репарационных систем.
Один тип репарации протекает на свету, он связан с деятельностью фотореактивирующегося
фермента, который расщепляет тиминовый димер. При темновой репарации дефектные участки
цепи ДНК удаляются, и образовавшаяся брешь достраивается при помощи ДНК-полимеразы на
матрице сохранившейся цепи и соединяется с цепью лигазой.
Мутация, приводящая к потере функции, называется прямой мутацией. У мутантов может
произойти восстановление исходных свойств, т. е. реверсия (reverse – обратный, англ.) Если
происходит восстановление исходного генотипа, то мутация, восстанавливающая генотип и
фенотип, называется обратной или прямой реверсией. Если мутация восстанавливает фенотип, не
восстанавливая генотип, то такая мутация называется супрессорной. Супрессорные мутации могут
возникать как в пределах того самого гена, в котором произошла первичная мутация, так в других
генах или могут быть связаны с мутациями в тРНК.
По фенотипическим последствиям мутации подразделяются на нейтральные, условно-
летальные и летальные.
Нейтральные мутации фенотипически не проявляются какими-либо изменениями
признаков.
Мутации, которые приводят к изменению, но не к утрате функциональной активности
фермента, называют условно-летальными. В зависимости от условий окружающей среды
микроорганизмы могут сохранять свою жизнеспособность или, наоборот, утрачивают её.
Летальные мутации характеризуются полной утратой способности синтезировать
жизненно важный для бактериальной клетки фермент или ферменты. Мутации проявляются в
фенотипе в виде утраты или изменения морфологических и биохимических признаков. Например,
жгутиков, пилей, капсулы клеточной стенки, утраты синтезировать определенные аминокислоты
(ауксоторофы), возникновение устойчивости к лекарственным или дезинфицирующим
препаратам.
R- S – диссоциации
Своеобразной формой изменчивости являются R – S-диссоциации бактерий. Уже в 20-е годы стало известно о явлениях, которые называют диссоциацией.
При выращивании пневмококков, вызывающих воспаление легких, было обнаружено, что их колонии на питательном агаре изменяют свой облик. Поначалу круглые и
блестящие – S-формы (от английского слова smooth – гладкий) они становились через некоторое время шероховатыми и сморщенными по краям – R-формы (от
английского слова rough - шероховатый). Клетки из колоний R отличались от клеток из колоний S ещё и тем, что были значительно менее вирулентны, иначе говоря, их
способность вызывать заболевание стала значительно слабее. Между этими двумя типами существуют переходные, нестойкие, чаще О-М-формы. В процессе диссоциации
изменчивость может затрагивать такие свойства микроба, как ферментативную активность, потребность в определённых аминокислотах, факторах роста и биологических
свойств.
Весьма важным обстоятельством является то, что у болезнетворных микробов под влиянием различных факторов изменяется степень их патогенности. Этой
изменчивостью впервые воспользовался Л. Пастер. В 1881г. он получил впервые вакцину против сибирской язвы путём длительного выращивания микроба при
повышенной температуре 42-43 °С.
Вирусы, как и бактерии, также обладают способностью под действием различных факторов утрачивать полностью или частично свою вирулентность,
сохраняя при этом свои иммуногенные свойства. Мутации, которые приводят к S-R-диссоциациям, относятся к инсерционным, поскольку они возникают после
встраивания плазмид, транспозонов и Is-последовательностей, а также умеренных фагов в бактериальную хромосому.
Так, у дифтерийных бактерий S-R-диссоциация связана с их лизогенизацией соответствующими бактериофагами. При этом R – формы образуют экзотоксин.

Биологическое значение S-R-диссоциаций состоит в приобретении бактериями определённых селективных преимуществ, обеспечивающих их существование
в организме человека или во внешней среде. S – формы более устойчивы к фагоцитозу макрофагами, бактерицидному действию сыворотки крови. R – формы обладают
большей устойчивостью к факторам внешней среды. Вместе с тем S – R-диссоциация усложняет бактериологическую диагностику ряда инфекционных заболеваний.

Рекомбинации у бактерий
У бактерий известны три способа передачи признаков (рекомбинаций): конъюгация;
трансдукция; трансформация.
В результате этих трех процессор ДНК переносится из бактерии-донора в бактерию-
реципиент. Эти процессы отличаются друг от друга способом транспортировки ДНК. После
8
переноса ДНК в клетке-реципиенте происходит рекомбинация. При этом ДНК донора
встраивается в ДНК бактерии-реципиента. Клетку, в которой произошла рекомбинация, называют
рекомбинантом. Передача плазмидных генов происходит путем трансдукции и конъюгации.
Рекомбинационный процесс у бактерий имеет свои особенности. Это в первую очередь
определяется способом их размножения и закономерностями передачи генетического материала.
Известно, что генетические рекомбинации у клеток эукариотов совершаются в ходе процессов,
сопровождающих половое размножение путем реципрокного (взаимного) обмена фрагментами
хромосом. При таком обмене генетическим материалом из двух рекомбинирующих родительских
хромосом образуются две рекомбинантные хромосомы. Применительно к клеткам это означает,
что в результате рекомбинаций возникают две рекомбинантные особи.
Генетическая рекомбинация – это взаимодействие между двумя геномами, т. е. между
двумя ДНК, обладающими различными генотипами, которое приводит к образованию
рекомбинантной ДНК, формированию дочернего генома, сочетающего гены обоих родителей.
Прокариотам не свойственно половое размножение.
Отсутствие полового размножения и мейоза, в процессе которых у высших организмов
происходит рекомбинация, гаплоидный набор генов и определяют особенности рекомбинации у
бактерий.
Существуют специальные гены (rec-гены), детерминирующие рекомбинационную
способность клеток-реципиентов.
В процессе рекомбинации бактерии условно делятся на клетки-доноры, которые передают
генетический материал, и клетки-реципиенты, которые воспринимают его. В клетку-реципиент
проникает не вся, а только часть хромосомы клетки-донора, что приводит к формированию
неполной зиготы – мерозиготы. В результате рекомбинации в мерозиготе образуется только один
рекомбинант, генотип которого представлен в основном генотипом реципиента, с включенным в
него фрагментом хромосомы донора. Реципроктные рекомбинанты не образуются.
По молекулярному механизму генетическая рекомбинация у бактерий делится на три вида:
гомологичную, сайт-специфическую и незаконную.
Гомологичная рекомбинация
При гомологичной рекомбинации в процессе разрыва и воссоединения ДНК происходит
обмен между участками ДНК, обладающими высокой степенью гомологии. Гомологичная
рекомбинация происходит через образование промежуточного соединения, в котором
осуществляется комплементарное спаривание между одноцепочечными участками,
принадлежащими разным родительским молекулам ДНК. Процесс гомологичной рекомбинации
находится под контролем генов, объединенных в REC-систему, состоящую из генов rec A,B,C,D.
Продукты этих генов производят расплетание нитей ДНК и их переориентацию с образованием
структуры Холидея, а также разрезают структуру Холидея для завершения процесса
рекомбинации.
Сайт-специфическая рекомбинация
Происходит в определенных участках генома и не требует высокой степени гомологии
ДНК. Этот тип рекомбинации не зависит от функционирования генов recA,B,C,D. Примером этого
типа рекомбинации является встраивание плазмиды в хромосому бактерий, которое происходит
между идентичными IS-элементами хромосомы и плазмиды, интеграция ДНК фага в хромосому Е.
coli. Сайт-специфическая рекомбинация, происходящая в пределах одного репликона, участвует
также в переключении активности генов. Например, у сальмонелл следствием этого процесса
являются фазовые вариации жгутикового Н-антигена.
Незаконная или репликативная рекомбинация
Незаконная или репликативная рекомбинация не зависит от функционирования генов
recA,B,C,D. Примером ее является транспозиция подвижных генетических элементов по
репликону или между репликонами, при этом, как уже было отмечено, транспозиция подвижного
генетического элемента сопровождается репликацией ДНК.
Передача генетической информации у бактерий
Рекомбинация у бактерий является конечным этапом передачи генетического материала
между бактериями, которая осуществляется тремя механизмами: конъюгацией (при контакте
бактерий, одна из которых несет конъюгативную плазмиду), трансдукцией (при помощи
бактериофага), трансформацией (при помощи высокополимеризованной ДНК).
Конъюгация
9
 Передача генетического материала от клетки-донора в клетку-реципиент путем
непосредственного контакта клеток называется конъюгацией.
Передача генетического материала от клетки-донора в клетку-реципиент впервые была
обнаружена Дж. Ледербергом и Э. Тейтумом в 1946 г.
Необходимым условием для конъюгации является наличие в клетке-доноре
трансмиссивной плазмиды.
Трансмиссивные плазмиды кодируют половые пили, образующие конъюгационную
трубочку между клеткой-донором и клеткой-реципиентом, по которой плазмидная ДНК
передается в новую клетку.
Фактор плодовитости (F), или половой фактор был открыт у кишечной палочки ещё в
1968 г. Было установлено, что после смешивания двух различных штаммов бактерий F+ и F-
происходит рекомбинация бактериальных признаков. F+ - это «мужской» или донорский
генетический материал, а F- - «женский» или реципиентный. В настоящее время известно, когда
вступают в контакт клетки F+ и F -, при этом могут осуществляться два совершенно разных
процесса: в одних случаях передавать только фактор плодовитости, F-фактор, в других,
переносить часть генетического материала донорской клетки в клетку-реципиент.
Первый процесс, когда сам F-фактор способен переходить из бактерий F+ в бактерию F-,
превращая её в клетку F+ (клетка становится донором), но никакого переноса генов,
локализованных в хромосоме, при этом не происходит.
Второй процесс, это когда из донорской клетки в реципиентную может переходить часть
(редко вся) хромосомы.
Многочисленными исследованиями установлено, что первый процесс осуществляется
тогда, когда F-фактор находится в цитоплазме бактериальной клетки обособленно от хромосомы.
В этом случае F-фактор ведёт себя, как «паразит», который способен переходить от одной
бактерии к другой и не приносит никакой очевидной пользы бактерии-хозяину.
Для осуществления второго процесса, однако, необходимо, чтобы F-фактор сначала
включился в бактериальную хромосому хозяина. Бактерии в таком состоянии обозначаются Hfr
(высокая частота рекомбинации). Встроенный в хромосому F-фактор способен вызывать перенос
бактериальной хромосомы в клетку F- , где затем может происходить рекомбинация
бактериальных генов. Обычно процесс прерывается до того, как успевает перейти целая
хромосома донорской клетки. Более того, та часть F-фактора, которая ответственна за перенос,
находится у дистального конца переносимой хромосомы и обычно остается в донорской клетке.
Из-за того, что F-фактор может встраиваться в хромосому клетки, его называют эписомой. Однако
не все плазмиды обладают свойствами эписом, т.к. не все способны встраиваться в бактериальные
хромосомы.
Перенос генетического материала детерминируется tra-опероном F-плазмиды (от англ.
transfer – перенос). Механизм передачи плазмидной ДНК из клетки в клетку заключается в том,
что специальный белок, кодируемый tra-опероном, «узнает» определенную последовательность в
ДНК плазмиды, называемую origin – начало переноса, англ. (О-ген), вносит в эту
последовательность одноцепочечный разрыв и ковалентно связывается с 5'-концом. Затем цепь
ДНК, с которой связан белок, переносится в клетку-реципиент, а неразорванная комплементарная
цепь остается в клетке-доноре.
Таким образом, при конъюгации передается только одна цепь ДНК-донора. Клеточный
аппарат синтеза ДНК достраивает одиночные цепи и в доноре и в реципиенте до двухцепочечной
структуры.
Белок, связанный с 5'-концом перенесенной цепи, способствует замыканию плазмиды в
реципиентной клетке в кольцо. Этот процесс представлен на рисунке на примере переноса в
реципиентную клетку плазмиды F (fertility – плодовитость, англ.), которая является как
трансмиссивной, так и интегративной плазмидой. Клетки-доноры, обладающие F-фактором,
обозначаются как Р+-клетки, а клетки-реципиенты, не имеющие F-фактора, обозначаются как F--
клетки. Если F-фактор находится в клетке-доноре в автономном состоянии, то в результате
скрещивания: F+ × F- клетка-реципиент приобретает донорские свойства (см. рис. 5.4, 1А).
Если F-фактор или другая трансмиссивная плазмида встраиваются в хромосому клетки-
донора, то плазмида и хромосома начинают функционировать в виде единого трансмиссивного
репликона, что делает возможным перенос бактериальных генов в бесплазмидную клетку-
реципиент, т. е. процесс конъюгации. Штаммы, в которых плазмида находится в интегрированном
10
состоянии, переносят свои хромосомные гены бесплазмидным клеткам с высокой частотой и
поэтому называются Hfr (от англ. high frequency of recombination – высокая частота
рекомбинации).
Процесс переноса хромосомных генов в случае скрещивания: Hfr×F- всегда начинается с
расщепления ДНК в одной и той же точке, месте интеграции F-фактора или другой
трансмиссивной плазмиды. Одна нить донорской ДНК передается через конъюгационный мостик
в реципиентную клетку. Процесс сопровождается достраиванием комплементарной нити до
образования двунитевой структуры. Перенос хромосомных генов при конъюгации всегда имеет
одинаковую направленность, противоположную встроенной плазмиде. Сама трансмиссивная
плазмида передается последней.
Переданная в реципиентную клетку и достроенная до двунитевой структуры нить ДНК
донора рекомбинирует с гомологичным участком реципиентной ДНК с образованием стабильной
генетической структуры.
Конъюгационный мостик непрочен, он легко разрывается, не нарушая жизнеспособности
конъюгирующих клеток. Соответственно в процессе передачи может нарушаться целостность
передаваемой хромосомы. Все это объясняет чрезвычайно редкую передачу фактора F от Hfr-
бактерий к F–клеткам, так как для этого необходимо приобретение реципиентом как начального,
так и конечного участка хромосомы донора.
Обычно Hfr-штаммы передают с высокой частотой не всю хромосому, а лишь
близколежащие к О-точке гены. Путем включения F-фактора в различные участки хромосомы
получены разнообразные Hfr-штаммы, различающиеся по локализации О-точек и направлению
передачи хромосомы.
Т.о, вследствие хрупкости конъюгационного мостика половой фактор F редко передается
в клетку-реципиент, Поэтому образовавшийся рекомбинант донорскими функциями, как правило,
не обладает.
Вследствие направленности передачи генов конъюгация используется для картирования
генома бактерий и построения генетической карты.
Трансдукция
Передача генетического материала от одних бактерий другим с помощью фагов называется
трансдукцией. Трансдуцирующий фаг – это в своем роде «трамвай», т.к. внутри своей белковой
оболочки он перевозит «безбилетного пассажира» - часть ДНК из предыдущего фага хозяина и
вводит эту ДНК таким же образом, как и свою собственную ДНК, в чувствительную к фагу
бактериальную клетку.
Главным признаком процессов трансдукции является способность некоторых созревающих
фаговых частиц (созревание происходит спонтанно, либо в результате индукции) захватывать
ограниченный участок генома бактерии-хозяина и переносить его в родственную клетку,
чувствительную к этому фагу. Свойством переносить генетический материал от бактерий доноров
к бактериям реципиентов обладают умеренные фаги и их мутанты.
Трансдукцией называют передачу бактериальной ДНК посредством бактериофага.
Этот процесс был открыт в 1951 г. Н. Циндером и Дж. Ледербергом. В процессе
репликации фага внутри бактерий фрагмент бактериальной ДНК проникает в фаговую частицу и
переносится в реципиентную бактерию во время фаговой инфекции. Существует три типа
трансдукции:
общая трансдукция (или неспецифическая) – перенос бактериофагом фрагмента любой
части бактериальной хромосомы – происходит вследствие того, что бактериальная ДНК
фрагментируется после фаговой инфекции и кусочек бактериальной ДНК того же размера, что и
фаговая ДНК, проникает в вирусную, формируя дефектную фаговую частицу с частотой
приблизительно 1 на 1000 фаговых частиц. При инфицировании клетки-реципиента дефектной
фаговой частицей ДНК клетки-донора «впрыскивается» в нее и рекомбинирует гомологичной
рекомбинацией с гомологичным участком хромосомы-реципиента с образованием стабильного
рекомбинанта. Этим типом трансдукции обладают Р-фаги;
специфическая трансдукция – наблюдается в том случае, когда фаговая ДНК интегрирует
в бактериальную хромосому с образованием профага. В процессе исключения ДНК-фага из
бактериальной хромосомы в результате случайного процесса захватывается прилегающий к месту
включения фаговой ДНК фрагмент бактериальной хромосомы, становясь дефектным фагом. Так
как большинство умеренных бактериофагов интегрирует в бактериальную хромосому в

11
специфических участках, для таких бактериофагов характерен перенос в клетку-реципиент
определенного участка бактериальной ДНК клетки-донора. ДНК дефектного фага рекомбинирует
с ДНК клетки-реципиента сайт-специфической рекомбинацией. В частности, бактериофаг
передает специфической трансдукцией gal-ген у Е. coli.
абортивная трансдукция – привнесенный фагом фрагмент ДНК бактерии-донора не
включается в хромосому бактерии-реципиента, а располагается в её цитоплазме и может в таком
виде функционировать. Во время деления бактериальной клетки трансдуцированный фрагмент
ДНК-донора может передаваться только одной из двух дочерних клеток, т.е. наследоваться
однолинейно и в конечном итоге утрачиваться в потомстве.
Трансдукция обнаружена у E.coli, B. subtilis, сальмонелл, холерного вибриона и др.
Передаются самые различные свойства бактерий: устойчивость к антибиотикам, синтез факторов
роста, сбраживание углеводов, синтез пенициллиназы и др.

III . Вопросы для самоподготовки:

а) Что такое «ген», «генотип», «фенотип». Особенности генетики бактерий.

б) Виды генетической изменчивости (фенотипическая, генотипическая).

в) Фенотипическая изменчивость, примеры, значение в микробиологии.

г) Генотипическая изменчивость. Характеристика. Мутации.

д) Генотипическая изменчивость. Характеристика рекомбинаций.

е) Внехромосомная материальная основа генетического аппарата бактерий: плазмиды и

мигрирующие генетические элементы (S- последовательности и транспозоны).

ж) Современное использование генетики для медицинской практики. Генетическая

инженерия, генетическое зондирование (ПЦР), получение гибридом.

IV. Письменное задание:

а) Нарисовать схему классификации изменчивости.

б) Перечислить виды плазмид и свойства микроорганизмов, контролируемые ими.

в) Мутации, диссоциации характеристика «S» и «R» - форм колоний микроорганизмов,

использование для получения живых вакцин.

12