Лекция № 4 Общая вирусология

(№1 по вирусам)
современные принципы классификации и номенклатуры вирусов,
морфология и структура вириона,
формы и этапы взаимодействия вируса с клеткой человека и животных;
репродукция вирусов;
методы диагностики вирусных инфекций

19 век… Уже почти 100 лет, как получена английским врачом Эдвардом Дженером и применяется вакцина против
натуральной оспы, семь лет как открыта и успешно используется Луи Пастером и его учениками антирабическая вакцина и
укусы бешенных животных перестали быть безысходно смертельными, а природа возбудителей этих инфекций все еще была
не установлена.
В 1882 году наш соотечественник Дмитрий Иосифович Ивановский доказал существование нового типа возбудителя
болезни табачной мозаики и установил его необычные свойства:
способность проходить через бактериальные фильтры,
отсутствие способности расти на искусственных питательных средах.
Ивановский и др. исследователи того времени подчеркивали лишь два свойства вирусов – это фильтруемость и
неспособность размножаться на искусственных питательных средах (внутриклеточный паразитизм). Позже выяснилось,
что эти свойства не абсолютны, т.к. были обнаружены фильтрующиеся (L) формы бактерий и микоплазмы, не растущие на
искусственных питательных средах.
Внутриклеточный паразитизм вирусов также оказался не абсолютным критерием, т.к. некоторые бактерии
(гонококки, менингококки, риккетсии, хламидии) и простейшие (малярийный плазмодий) тоже размножаются только внутри
клеток.
С развитием знаний о вирусах были найдены более надежные критерии отличия вирусов от клеточных форм
микроорганизмов. Вирусы отличаются от про - и эукариотических микроорганизмов как в структурном, так и в
функциональном отношении:
1. У вирусов имеется только одна из двух нуклеиновых кислот, то ли ДНК, то ли РНК, в то время как у всех
микроорганизмов - обе нуклеиновые кислоты. Т.е. вирусы содержат собственную генетическую информацию в виде ДНК
или РНК, которую они передают своему «потомству».
2. Вирусы не имеют клеточного строения.
3. Вирусы не способны реплицироваться вне живой клетки, продукция вирусов происходит в клетке-хозяине
(облигатные внутриклеточные паразиты существуют и среди бактерий – риккетсии, хламидии).
4. Вирусы неспособны к росту и бинарному делению. Уникальное свойство вируса – это его способ репликации,
который резко отличается от способов размножения всех других клеток и организмов (бинарное деление). Вирусы не растут,
а происходит внутриклеточный синтез вирусных компонентов с последующей сборкой и формированием вирионов –
дизъюнктивная, т.е. разобщенная репродукция.
5. Вирусы воспроизводятся только за счет одной нуклеиновой кислоты, а не за счет своих составных частей;
6. Уникальное свойство – отсутствие у вирусов собственных систем, синтезирующих белки. Вирусы используют
рибосомы клетки хозяина для синтеза собственных белков.
Вирусы вводят в клетку лишь свою генетическую информацию, которая успешно конкурирует с клеточной
информацией, несмотря на ничтожно малые размеры клеточных геномов (на 5-6 порядков меньше, чем геном
эукариотической клетки). Поэтому и уровень паразитизма у вируса определяется как генетический паразитизм, а вирусы
рассматриваются как генетические паразиты. Ярким примером генетического паразитизма является способность ряда
вирусов интегрировать с клеточным геномом. В этом случае вирусные гены встраиваются в группу клеточных генов и
обозначаются как провирус. Эта стадия обязательна для большой группы РНК-содержащих вирусов – ретровирусов
(онкогенные), СПИДа, гепатитов В и С.
Все перечисленные особенности ставят вирусы между живой и неживой материей. В связи с этим не раз возникали
дискуссии по поводу того, что же такое вирусы – живые или не живые организмы. Безусловно, вирусы обладают основными
свойствами всех других форм жизни – способностью размножаться, наследственностью, изменчивостью,
приспособляемостью к условиям внешней среды. Однако с развитием исследований по молекулярной биологии вирусов
стали накапливаться факты, противоречащие представлению о вирусах, как об организмах.
Существуют другие неклеточные инфекционные агенты, примыкающие к вирусам.
Плазмиды – внехромосомный генетический аппарат. В виде плазмид могут существовать вирусы полиномы коров,
обезьяний вирус 40.
Вироиды. Необычными инфекционными агентами, близкими к вирусам, являются вироиды – возбудители
некоторых опухолей растений. Это маленькие «голые», т.е. лишенные белковой оболочки, свободные одноцепочечные
молекулы РНК, замкнутые в кольцо, длина цепи в 360 нуклеотидов, в 10 раз меньше инфекционных РНК самых мелких
вирусов. Вироиды вызывают болезни растений. Механизм репликации вироидов не вполне ясен.
Прионы. Кроме обычных (канонических) вирусов известны инфекционные молекулы, которые не являются
вирусами и называются прионами. В организме всех млекопитающих имеется так называемый прионовый протеин (PrPC),
который выполняет ряд регуляторных функций. У людей его кодирует ген, расположенный в 20-й хромосоме человека. При
прионных болезнях этот прионный протеин приобретает другую форму – инфекционную, обозначаемую как PrPSc (скрепи –
1
прионная инфекция овец и коз). Этот инфекционный прионовый протеин имеет вид фибрилл и отличается от нормального
прионного протеина третичной или четвертичной структурой.
При генетических нарушениях (врожденные, часто семейные патологии) или в результате заражения скрепи-
прионовым протеином развиваются медленные прионные инфекции – болезнь Крейцфельда-Якоба, куру, фатальная
семейная инсомния и др. Все они в 100 % случаев заканчиваются смертью больного.

Структура вирионов
В вирусологии внутриклеточную форму существования вирусной частицы принято называть вирусом,
внеклеточную – вирионом.
Размеры вирионов различных вирусов варьируют в широких пределах: от 15– 18 до 300– 400 нм. Они могут иметь
разнообразную форму: палочковидную и цилиндрическую (вирус табачной мозаики и другие вирусы растений), нитевидную
(вирусы растений и некоторые бактериальные вирусы), сферическую, напоминающую многогранники (аденовирусы,
пикорнавирусы и др.), кубовидную (поксвирусы), сперматозоидную (большинство вирусов бактерий).
Вирионы в отличие от всех клеточных форм живых существ содержат только один тип нуклеиновой кислоты –
ДНК или РНК. Из нескольких сотен (около 500) известных в настоящее время вирусов человека и животных, РНК – геном
содержит около 80% вирусов. Способность РНК хранить наследственную информацию является уникальной особенностью
вируса.
Генетический материал вирусов крайне разнообразен. Различают ДНК- и РНК-содержащие вирусы. Они обычно
гаплоидны, т.е. имеют один набор генов. Исключением являются ретровирусы, имеющие диплоидный геном (РНК-
двунитевые вирусы). Геном вирусов содержит от шести до нескольких сотен генов и представлен различными видами НК:
двунитевыми, однонитевыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными.
Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом. Плюс-нить РНК
этих вирусов выполняет наследственную (геномную) функцию и функцию информационной РНК (иРНК).
Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицательным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих
вирусов выполняет только наследственную функцию.
Геном вирусов способен включаться в геном клетки в виде провируса, проявляя себя генетическим паразитом
клетки. Нуклеиновые кислоты некоторых вирусов, например, вирусов герпеса, могут находиться в цитоплазме
инфицированных клеток, напоминая плазмиды.
Вирион состоит из центрально расположенной нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), плотно упакованной в одну
или две оболочки.
Первая оболочка, в которую заключена нуклеиновая кислота - белковая. Она получила название – капсид (от греч.
капса - ящик). Капсид состоит из повторяющихся белковых субъединиц - капсомеров, хорошо видных в электронном
микроскопе. Просто устроенные вирусы состоят из НК и капсида. По морфологической структуре капсид представляет
собой нуклеокапсид, а по химическим свойствам может быть охарактеризован как нуклеопротеид. Нуклеиновая кислота
вирусов может находиться внутри капсида как в свободном виде, так и в соединении с внутренним белком.
В отличие от просто устроенных вирусов многие сложноорганизованные вирионы имеют внешнюю оболочку
(суперкапсид). Эта наружная оболочка кроме белков может содержать липиды и углеводы, в том числе "захваченные" и из
клетки хозяина, в которой воспроизводились вирусные частицы. В суперкапсиде могут присутствовать
вирусоспецифические углеводсодержащие белки - гликопротеиды, образующие на оболочке выступы-шипы. Как видите,
вирус очень надёжно защищает свою наследственную информацию от неблагоприятных внешних условий. Т.о., сложно
устроенные вирусы состоят из НК, капсида и липопротеиновой оболочки – супепкапсида.
Вирусные капсиды имеют удивительно упорядоченную организацию, в основе которой лежат принципы
спиральной, кубической или сложной (комбинированной) симметрии. Капсиды состоят из структурных белковых
субъединиц. Структурные асимметричные субъединицы объединены в симметричные группы, названные
морфологическими субъединицами, или капсомерами, которые видны в электронном микроскопе.
Капсид и суперкапсид выполняют следующие функции:
защищают вирионы от воздействия окружающей среды,
обусловливают избирательное взаимодействие (адсорбцию) с определенными клетками хозяина,
обусловливают антигенные и иммуногенные свойства вирионов.
Наряду с белками капсида имеются еще так называемые внутренние белки, представляющие собой основные
гистонодоподобные белки. Внутренние структуры вирусов называют сердцевиной. У аденовирусов сердцевина состоит из
гистоноподобных белков, связанных с ДНК, у реовирусов – из белков внутреннего капсида. Они находятся внутри капсида и
связаны с вирусной нуклеиновой кислотой. По-видимому, внутренние белки могут образовывать рибо- или
дезоксирибонуклеопротеид, покрывающий вирусную нулеиновую кислоту.
Вирусные внутренние белки и нуклеопротеид обладают видовой специфичностью, наделяя вирус антигенными
свойствами.
Одна из особенностей капсидных белков - их необыкновенная устойчивость к протеолитическим ферментам.
Это объясняется определенной укладкой полипептидных цепей, в результате чего пептидные связи оказываются
недоступными для действия ферментов. Другой особенностью белков капсида является их способность к самосборке. Этот
процесс у простых вирусов сходен с кристаллизацией, что имеет большое значение в морфогенезе, т. е. в формировании
вирионов в клетке хозяина.

2
 Классификация вирусов
В основу современных классификаций вирусов положены следующие основные критерии:
Тип нуклеиновой кислоты.
Наличие липопротеидной оболочки, размер и морфология вириона, тип симметрии, число капсомеров.
Круг восприимчивых хозяев.
Патогенность.
Географическое распространение.
Способ передачи.
Антигенные свойства и др.
В вирусологии используют следующие таксономические категории: семейство (название оканчивается на viridae),
подсемейство (оканчивается на virinae), род (оканчивается на virus). Однако названия родов и особенно подсемейств даны не
для всех вирусов. Вид вируса не получил биномиального названия, как у бактерий.
Ведущий признак классификации – тип нуклеиновой кислоты. Вирусы делятся на ДНК- вирусы и РНК-содержащие
вирусы: всего 19 семейств, из них 7 – ДНК-содержащие и 12 – РНК-содержащие вирусы.
Одновременно в классификации учитывается количество нитей ДНК или РНК: они бывают однонитевые и
двунитевые. Существуют классификации по антигенным характеристикам вирусов, путем деления их на антигенные группы.
Каждая группа признаков детализируется в зависимости от уровня знаний и степени изученности конкретного вируса.

Ферменты. Поскольку вирусы не имеют собственного метаболизма, они не нуждаются в ферментах, необходимых
для многочисленных катаболических и анаболических реакций. Однако у вирусов обнаружено свыше 10 ферментов, разных
по своему происхождению и функциональному назначению.
По происхождению эти ферменты можно подразделить на три группы:
вирионные,
вирусиндуцированные;
клеточные, модифицированные вирусами.
Вирионные входят в состав вирионов многих ДНК и РНК-содержащих вирусов. К ним относятся ДНК-зависимая
РНК-полимераза, протеинкиназа, экзо-и эндонуклеаза и др., обнаруженные у поксвирусов; протеинкиназа, АТФ-аза,
рибонуклеаза у вирусов группы герпеса; РНК-зависимая РНК-полимераза у орто- и парамиксовирусов; РНК-зависимая ДНК-
полимераза (обратная транскриптаза), ДНК-лигаза, экзонуклеаза у ретровирусов и т. д. К вирионным ферментам относятся
также нейраминидаза миксовирусов и лизоцим, обнаруженный в составе некоторых фагов (Т 2 и др.).
Вирусиндуцированными считаются такие ферменты, структура которых закодирована в геноме вируса, а синтез
происходит на рибосомах клетки хозяина. Так, например, поксвирусы и герпесвирусы содержат информацию к синтезу
ДНК-зависимой ДНК-полимеразы и ряда других ферментов; пикорна-, тога-, арбо-, орто-, и парамиксовирусы – к синтезу
РНК-зависимой РНК-полимеразы, необходимой для репликации их нуклеиновой кислоты.
Группа клеточных ферментов, участвующих в репродукции вирусов, включает ферменты клетки хозяина, которые
не являются вирусспецифическими. Однако в процессе взаимодействия с вирусом их активность может модифицироваться.
По функциональному назначению вирусные ферменты можно подразделить на две группы:
ферменты, участвующие в процессе репликации и транскрипции вирусной нуклеиновой кислоты (репликазы,
транскриптазы),
ферменты, способствующие проникновению вирусной нуклеиновой кислоты в клетку хозяина и выходу образовавшихся
вирионов (нейраминидаза, лизоцим и АТФ-аза).
Нейраминидаза ортомикссвирусов, действуя на сиаловые кислоты, содержащиеся в оболочках клеток (например,
эритроцитов), способствует элюции (освобождению) вириона, адсорбированного на клеточной поверхности. Она также
принимает активное участие в выходе вновь синтезированных вирионов из клетки хозяина. Нейраминидаза вируса гриппа
обладает индивидуальными антигенными свойствами. Лизоцим и АТФ-аза фагов участвуют в проникновении фаговой ДНК
в клетку хозяина. Кроме того, лизоцим обусловливает выход фаговых частиц из клетки в окружающую среду.

Репликативный цикл вирусов

Рассматриваемые ниже этапы репродукции происходят при литическом взаимодействии вируса с клеткой. Процесс
репродукции вирусов может быть условно разделен на 2 фазы.
Первая фаза охватывает события, которые ведут к адсорбции и проникновению вируса в клетку, и она включает в
себя три этапа:
Адсорбция вируса на клетках.
Проникновение в клетку и раздевание вируса.
Во второй фазе происходит экспрессия вирусного генома:
Синтез вирусных частиц (транскрипция, трансляция информационной РНК, репликация генома);
Сборка вирусных частиц;
Выход вируса из клетки – заключительная стадия репродукции.

Рассмотрим характеристику закономерностей стадий каждой фазы.

1.Адсорбция на клетке обеспечивается электростатическим взаимодействием строго специфических
прикрепительных белков вируса со специфическими поверхностными (обычно гликопротеиновыми) рецепторами клеточных
мембран. Рецепторы для орто- и парамиксовирусов – ганглиозиды (сиалосодержащие гликолипиды. На процесс адсорбции
3
существенное влияние оказывает тканевая специфичность (например, полиовирус адсорбируется только на клетках
человека и приматов).
Обычно животная клетка содержит около 500 000 рецепторов, её заражение носит множественный характер, т.е. на
клетке могут адсорбироваться множество вирионов. Специфические рецепторы обеспечивают внутриклеточный транспорт и
доставку вируса в определенные участки клетки (цитоплазма, ядро), где произойдет инициация инфекционного процесса.
Адсорбция может быть обратимой в случае образования единичных связей вирусных частиц с рецепторами клетки и
не обратимой, если произойдет стабильное прикрепление.
2.Проникновение в клетку Проникновение в клетку может происходить двумя путями - путем виропексиса или
путем слияния вирусной и клеточной мембран.
Виропексис (пиноцитоз) происходит путем инвагинации участка плазматической мембраны, покрытые рецепторами
снаружи, на которых адсорбируется вирус. Затем происходит образование вакуоли вокруг вируса в цитоплазме клетки.
Вакуоли сливаются с вакуолью цитоплазмы, а затем сливаются с лизосомами, где и происходит их распад на аминокислоты.
Рецепторный эндоцитоз – наиболее частый способ проникновения вируса в клетку. Он характерен для аденовирусов,
вирусов гриппа и др.
Проникшие вирусы в составе вакуоли проходят рад этапов до момента проявления инфекционного процесса.
Большое значение имеет состояние рН.
Слияние вирусных и клеточных мембран. Слияние обусловлено наличием соответствующих вирусных
гликопротеинов (например, у парамиксо- и ретровирусов). В этом случае вирусная оболочка сливается с плазматической
мембраной клетки хозяина, в результате чего внутренние структуры вириона оказываются в цитоплазме зараженной клетки,
а при слиянии с ядерной мембраной – в клеточном ядре, вирусные оболочки оказываются на поверхности клеток. Такой тип
слияния характерен для вирусов герпеса, онковирусов, медленных вирусов (персистирующих инфекций).
3. «Раздевание» вируса – удаление вирусных защитных оболочек для дальнейшей экспрессии генома –
депротеинизация. Конечный продукт раздевания – или нуклеокапсид или нуклеиновая кислота, связанная с внутренним
вирусным белком. Транспорт и раздевание - процессы взаимосвязанные. Если вирус не хочет раздеваться или клетка не
может его раздеть, он транспортируется в лизосому и раздевается лизосомальными ферментами.
Раздевание вириона начинается сразу же после его прикрепления к клеточным рецепторам и продолжается в
эндоцитарной вакуоли и её слиянии с лизосомами при участии протеолитических ферментов.
После депротеинизации вирус невозможно выделить из культуры клеток, этот этап репродукции известен как
теневая фаза, или фаза эклипса.
4. Синтез вирусных частиц включает образование посредством трансляции нуклеиновых кислот
вирусспецифических белков. Последние синтезируются в цитоплазме, а место сборки генома вирусов может быть
различным.
Обычно первыми образуются продукты, регулирующие репродукцию, - ферменты и регуляторные белки
(некоторые из них могу первоначально входить в состав вирионов). Позднее синтезируются белки, обеспечивающие сборку
дочерних популяций; их синтез включает несколько этапов, специфичных для различных групп вирусов.
Транскрипция - это переписывание ДНК на РНК по законам генетического кода с помощью РНК-полимеразы на
спаренные комплементарно основания (аденин - тимин, урацил - аденин; гуанин - цитазин, цитазин - гуанин). Такая связь
возможна в присутствии ДНК матрицы. Продукт транскрипции – образование информационной РНК – РНК-посредника.
Этот этап – основание центральной догмы биологии ДНК: ДНК- транскрипция - иРНК -трансляция - белок.
Различия касаются только происхождения фермента ДНК-зависимой РНК-полимеразы, необходимой для данного
процесса.
ДНК-содержащие вирусы, репродуцирующиеся в ядре, используют для транскрипции клеточную РНК-полимеразу.
Причем герпесвирусы используют РНК-полимеразу II, а аденовирусы – РНК-полимеразу III. Вирус оспы,
репродуцирующийся в цитоплазме, имеет свою РНК-полимеразу, которая является структурным вирусным белком.
У РНК-содержащих вирусов транскрипция их генома осуществляется несколькими путями.
1. У вирусов с положительным геномом (плюс-нитевые), к которым относятся пикарно- (вирус полиомиелита,
Коксаки, гепатит А), тогавирусы (краснуха, омская геморрагическая лихорадка), функцию иРНК выполняет сам геном,
который транслирует содержащую в ней информацию на рибосомы клетки хозяина.
2. Вирусы с негативны геномом (минус-нитевые), к которым относятся орто (вирус гриппа)-, парамиксовирусы
(вирус парагриппа, паратита, кори)-, рабдовирусы (вирус бешенства) имеют в своем составе вирусспецифическую РНК-
полимеразу или транскриптазу. Они синтезируют иРНК на матрице геномной РНК.
3. Особняком стоит группа РНК-содержащих ретровирусов, в составе которых имеется обратная транскриптаза, или
ревертаза. Уникальность этого фермента состоит в его способности переписывать информацию с РНК на ДНК. Этот процесс
называется обратной транскрипцией.
Трансляцией называется процесс перевода генетической информации, содержащейся в иРНК, на специфическую
последовательность аминокислот в белках.

5 стадия – полная сборка внутриклеточного вируса

В этой фазе капсиды связываются с НК. У оболочечных вирусов полный нуклеокапсид связывается со
специфическими локусами на ЦПМ, обеспечивающими образование вирусной оболочки.

6 стадия – выход вирусных частиц из клетки. Существует два способа:

Путем «взрыва», лизиса клетки.
4
Путем почкования.
Первый способ выхода из клетки присущ вирусам, не содержащим липопротеидной оболочки (простые, или голые,
вирусы – аденовирусы, пикорнавирусы). Почкование присуще сложным вирусам, содержащим липопротеидную оболочку,
которая является дериватом клеточных мембран. В результате клетка остается живой. Это характерно, например, для вируса
гриппа.
Вирусы, формирующиеся в ядре клетки (например, герпесвирусы), почкуются в перинуклеарное пространство через
модифицированную ядерную мембрану, приобретая таким образом липопротеиновую оболочку. Затем они
транспортируются в составе цитоплазматических везикул на поверхность клетки.

При персистентных вирусных инфекциях происходит не репликация вируса, а встраивание (интеграция) вирусной
НК в клеточный геном - интегративный путь взаимодействия вируса с клеткой. Этот путь взаимодействия не одинаков для
ДНК и РНК-содержащих вирусов. При интеграционных инфекциях нет ни сборки вирусной частицы, ни выхода вируса из
клетки.

Формы взаимодействия вирусов с клеткой и макроорганизмом

Различные вирусы при взаимодействии с клетками хозяина, в которых они паразитируют, обладают цитоцидным
или бласттрансформирующим (онкогенные вирусы) действием, а по результатам этих взаимодействий делятся на:
манифестные вирусные инфекции.
Персистентные вирусные инфекции.
Вирусы, не вызывающие никаких изменений.
Манифестные вирусные инфекции включают все вирусные инфекции, которые протекают с выраженными
клиническими проявлениями и говорят о поражении вирусом тех или иных клеток органов или систем человека и животных.
Они протекают с выраженным цитопатическим эффектом – гибелью пораженных вирусом клеток. Модус данного
взаимодействия – острая инфекция. Примером данных заболеваний могут служить грипп, корь, желтая лихорадка,
эпидемический паротит, бешенство, клещевой энцефалит и др.
Персистентные вирусные инфекции характеризуются поражением клеток интеграционным провирусом, геном
которого редублицируется с клетками хозяина и в комплексе нового качества клетки ведет к ее изменению (механизм близок
к взаимодействию с бактериальной клеткой профага).
Ничего не вызывающие вирусы организма выделяются в достаточном количестве с поверхности слущивающегося
эпидермиса, из испражнений, отделяемого слизистых, а также из объектов окружающей среды.
Под вирусной инфекцией понимают комплекс процессов, происходящих при взаимодействии инфекционного агента
с организмом хозяина.
В связи с тем, что вирусы являются облигатными внутриклеточными паразитами, а точнее генетическими
паразитами, в основе их взаимодействия с организмом всегда лежит инфекционный процесс на уровне клетки. Поэтому
вирусные инфекции классифицируют как на клеточном уровне, так и на уровне организма.

Классификация вирусных инфекций на клеточном уровне

Вирусы – облигатные внутриклеточные паразиты, способные только к внутриклеточному размножению. В
вирусинфицированной клетке возможно пребывание вирусов в различных состояниях:
воспроизводство многочисленных новых вирионов;
пребывание нуклеиновой кислоты вируса в интегрированном состоянии (в виде провируса);
существование в цитоплазме клетки в виде кольцевых нуклеиновых кислот, напоминающих плазмиды бактерий.
Поэтому диапазон нарушений, вызываемых вирусом, весьма широк: от выраженной продуктивной инфекции,
завершающейся гибелью клетки, до продолжительного взаимодействия вируса с клеткой в виде латентной инфекции или
злокачественной трансформации клетки.
Различают три типа взаимодействия вируса с клеткой: продуктивный, абортивный и интегративный.
1. Продуктивный тип — завершается образованием нового поколения вирионов и гибелью (лизисом) зараженных
клеток (цитолитическая форма). Некоторые вирусы выходят из клеток, не разрушая их (нецитолитическая форма).
2. Абортивный тип — не завершается образованием новых вирионов, поскольку инфекционный процесс в
клетке прерывается на одном из этапов.
3. Интегративный тип, или вирогения — характеризуется встраиванием (интеграцией) вирусной ДНК в
виде провируса в хромосому клетки и их совместным сосуществованием (совместная репликация).
Продуктивный тип взаимодействия вируса с клеткой, т. е. репродукция вируса (лат. re — повторение, productio —
производство), проходит в 6 стадий: 1) адсорбция вирионов на клетке; 2) проникновение вируса в клетку; 3) «раздевание» и
высвобождение вирусного генома (депротеинизация вируса); 4) синтез вирусных компонентов; 5) формирование вирионов;
6) выход вирионов из клетки. У различных вирусов эти стадии отличаются.
Абортивный тип взаимодействия вирусов с клеткой не завершается образованием вирусного потомства и может
возникать при следующих обстоятельствах:
1) заражение чувствительных клеток дефектными вирусами или дефектными вирионами;
2) заражение стандартным вирусом генетически резистентных к нему клеток;
3) заражение стандартным вирусом чувствительных клеток в непермиссивных (неразрешающих) условиях.
Различают дефектные вирусы и дефектные вирионы.

5
 □Дефектные вирусы существуют как самостоятельные виды, которые репродуцируются лишь при наличии вируса-
помощника (например, вирус гепатита D репродуцируется только в присутствии вируса гепатита В).
□ Дефектные вирионы обычно лишены части генетического материала и могут накапливаться в популяции многих
вирусов при множественном заражении клеток.
Абортивный тип взаимодействия чаще наблюдается при заражении нечувствительных клеток стандартным вирусом.
Механизм генетически обусловленной резистентности клеток к вирусам широко варьирует. Он может быть связан: с
отсутствием на плазматической мембране специфических рецепторов для вирусов; с неспособностью данного вида клеток
инициировать трансляцию вирусной иРНК; с отсутствием специфических протеаз или нуклеаз, необходимых для синтеза
вирусных макромолекул, и т. д.
Абортивный тип взаимодействия может также возникать при изменении условий, в которых происходит
репродукция вирусов: повышение температуры организма, изменение рН в очаге воспаления, введение в организм
противовирусных препаратов и др. При устранении неразрешающих условий абортивный тип переходит в продуктивный
тип взаимодействия вирусов с клеткой.
Интегративный тип взаимодействия вирусов с клеткой (вирогения)
Это взаимное сосуществование вируса и клетки в результате интеграции (встраивания) нуклеиновой кислоты вируса
в хромосому клетки хозяина. При этом интегрированный геном вируса реплицируется и функционирует как составная часть
генома клетки.
Интегративный тип взаимодействия характерен для умеренных ДНК-содержащих бактериофагов, онкогенных
вирусов и некоторых инфекционных вирусов как ДНК-содержащих (например, вируса гепатита В), так и РНК-содержащих
(например, вируса иммунодефицита человека). Для интеграции с геномом клетки необходимо наличие кольцевой формы
двунитевой ДНК-вируса. Геном ДНК-содержащих вирусов в кольцевой форме прикрепляется к клеточной ДНК в месте
гомологии нуклеотидных последовательностей и встраивается в определенный участок хромосомы при участии ряда
ферментов (рестриктаз, эндонуклеаз, лигаз).
У РНК-содержащих вирусов процесс интеграции более сложный. Он начинается с механизма обратной
транскрипции, который заключается в синтезе комплементарной нити ДНК на матрице вирусной РНК с помощью
вирусоспецифического фермента обратной транскриптазы (ревертазы). После образования двунитевой ДНК и замыкания ее
в кольцо происходит интеграция ДНК-транскрипта в хромосому клетки (рис. 3.4). Встроенная в хромосому клетки ДНК ви-
руса называется провирусом, или провирусной ДНК. Провирус реплицируется в составе хромосомы и переходит в геном
дочерних клеток, т. е. состояние вирогении наследуется. Однако под влиянием некоторых физических или химических
факторов провирус может исключаться из хромосомы клетки и переходить в автономное состояние с разви тием
продуктивного типа взаимодействия с клеткой.
Дополнительная генетическая информация провируса при вирогении сообщает клетке новые свойства, что может
быть причиной онкогенной трансформации клеток и развития опухолей, а также развития аутоиммунных и хронических
заболеваний. Сохранение вирусной информации в виде провируса в составе клеточного генома и передача ее потомству
лежит в основе персистенции (лат. persistentia — упорство, постоянство) вирусов в организме и развития латентных
(скрытых) вирусных инфекций.

Инфекция автономная, когда вирусный геном реплицируется независимо от клеточного генома. Автономная
форма характерна для большинства вирусов человека и животных.
Если вирусный геном интегрирует в состав клеточного генома, т.е. интегрирует с клеточным геномом и
реплицируется вместе с ним, такая инфекция называется интеграционной (вирогения). Интегрировать могут как полный
геном, так и часть генома. При гепатите B возможна интеграция полного генома, при аденовирусных и герпесвирусных
инфекциях может интегрировать как полный геном, так и его часть. При интеграционных инфекциях нет ни сборки
вирусной частицы, ни выхода вируса из клетки. Клетка может сохранить функции и при ее делении вирусные
последовательности могут переходить в геном дочерних клеток. Такая ситуация наблюдается в случае инфекции,
вызываемой ВИЧ, онкогенными вирусами.
Интеграционный тип инфекции возможен для нескольких семейств ДНК-содержащих вирусов: адено-, папиллома-,
герпесвирусами, вирусом гепатита В и обязателен для ретровирусов, имеющих фермент – обратную транскриптазу
(ВИЧ). Возникшая интеграция может явиться причиной ряда хронических и аутоиммунных заболеваний.

После образования вирусного потомства клетка либо погибает, либо выздоравливает и не содержит вирусных
компонентов. Инфекция может быть цитолитической и нецитолитической, в зависимости от судьбы зараженной клетки.
Лизис клетки – инфекция цитолитическая, нет лизиса – нецитолитическая.

Классификация вирусных инфекций на уровне организма

В основу классификации положено четыре фактора:
генерализация вируса;
продолжительность инфекции;
проявление клинических симптомов;
выделение вируса в окружающую среду.
Вирусные инфекции можно разделить на две большие группы:
 очаговые, когда действие вируса проявляется у входных ворот инфекции;

6
 генерализованные, при которых после ограниченного периода репродукции вируса в первичных очагах происходит
генерализация инфекции.
Очаговые инфекции имеют более короткий инкубационный период, защитными факторами организма при этих
инфекциях являются антитела класса IgА, эффективные вакцины – это те, которые стимулируют секреторные антитела.
При генерализованных инфекциях большое значение в защите организма имеют гуморальные антитела.
Примеры очаговых инфекций – респираторные и кишечные вирусные инфекции, генерализованных – оспа, корь,
полиомиелит.

По длительности взаимодействия с макроорганизмом инфекция может быть острой и персистентной.

Острая инфекция соответствует продуктивной инфекции на уровне клетки. Она может протекать как в клинически
выраженной, так и инаппарантной форме. Острая инфекция длится недолго и протекает с выделением вирусов в
окружающую среду. В конце наступает элиминация вирусов благодаря иммунным механизмам. Острая инфекция может
завершаться выздоровлением или гибелью организма.
Персистентные инфекции (от лат. – persistenta – упорство, постоянство). Персистентная инфекция в зависимости
от выделения вируса в окружающую среду и появления симптомов заболевания проявляется в виде:
вирусоносительства;
латентной инфекции;
хронической инфекции;
медленной вирусной инфекции.
Один и тот же вирус может вызвать острую и персистентную инфекцию в зависимости от состояния организма и в
первую очередь его иммунной системы. Например, вирус кори вызывает как острую инфекцию, так и длительно текущую –
подострый склерозирующий панэнцефалит. Точно также вирусы герпеса, гепатита В и аденовирусы.
Латентная инфекция – скрытая инфекция, не сопровождается выделением вирусов в окружающую среду. Однако
при неблагоприятных факторах он может активизироваться и перейти в острую или хроническую форму. При латентной
инфекции вирус не удается обнаружить с помощью диагностических приемов в связи с тем, что он находится в дефектной
форме или интегрирован в геном клетки. Этот процесс плохо изучен. Значительно большая ясность имеется в вопросе
реактивации вируса. Считается, что для этого необходимо действие одного или нескольких активирующих факторов
(травма, стресс, иммуносупрессия, суперинфицирование и др.). В результате латентная инфекция переходит манифестную
форму — развиваются симптомы, свойственные острой инфекции. Примерами латентных инфекций служат герпесвирусные,
цитомегаловирусные инфекции, и ряд других .
Хронические инфекции – длительный патологический процесс, сопровождающийся периодами обострения и
ремиссий. Сопровождаются выделением вируса в окружающую среду. Пример – хроническая форма вирусных гепатитов.
Медленные инфекции – характеризуются длительным инкубационным периодом, прогрессирующим течением и
неизбежной смертью. Пример – ВИЧ- инфекция, Т-клеточная лимфома, подострый герпетический энцефалит, подострый
склерозирующий панэнцефалит, рассеянный склероз и др. В настоящее время все вирусные сывороточные гепатиты также
относят к разряду медленных вирусных инфекций. Кроме вирусов, медленные инфекции вызывают прионы —
инфекционные безнуклеиновые структуры, состоящие из низкомолекулярного белка (относятся к разряду конформационных
болезней). Как правило, при медленных инфекциях поражается ЦНС.
Персистентные инфекции являются серьезной проблемой современной вирусологии и медицины. Персистенция
вирусов обусловливает их сохранение как биологического вида и является причиной изменчивости свойств вирусов в их
эволюции.
Способность к персистенции выработалась у многих вирусов как механизм длительного сохранения в организме
теплокровного хозяина или членистоногого переносчика.
Однако способность вызывать персистирующую или латентную инфекцию не является общим свойством для всех
вирусов. Например, ВНО и отдельные возбудители геморрагических лихорадок либо вызывают смерть инфицированного,
либо разрешаются с развитием стерильного иммунитета. Сколь бы многочисленной не осталась пережившая эпидемию
популяция, они в ней не сохраняются, а для их поддержания в природе используются другие механизмы (членистоногие
переносчики, другие виды хозяев).
Один и тот же вирус может вызывать латентную и острую инфекцию в зависимости от вида хозяина (переносчика).
Например, резервуаром вирусных инфекций энцефалита, геморрагических и других видов лихорадок являются лани, олени,
мыши, у которых вирусная инфекция протекает в латентной форме. Переносчиками этих вирусных инфекций чаще всего
являются клещи, получившие вирус от носителя, причем некоторые виды вирусных инфекций передаются трансовариально
потомству клещей. Человек, попавший в это звено и укушенный клещом, заболевает одним из видов уже манифестной
вирусной инфекции (клещевой энцефалит, геморрагическая лихорадка и др.). Так же выглядит и сохранение в природе
вируса бешенства. «Дикование животных» как симптом многолетнего заболевания персистирующей вирусной инфекцией
бешенства у песцов крайнего Севера, бессимптомное носительство вируса бешенства у многососковых крыс, населяющих
Саванну в Африке при нападении хищников, вызывает у них острую вирусную инфекцию, а при попадании в эту цепочку
человека – вызывает заболевание бешенства у человека – манифестную вирусную инфекцию.
Один и тот же вирус может вызывать латентную или острую инфекцию в зависимости от иммунокомпетентности
хозяина. Поэтому, можно считать, что способность вызывать латентные инфекции является проявлением более глубокой
специализации к хозяину вируса, утратившего связь с первичным резервуаром. Латентность этих вирусов необходимо
рассматривать только как их свойство, проявляющееся в иммунокомпетентном хозяине, т.е. вирусы такого типа способны

7
использовать обе стратегии паразитизма, но в разной степени. Основную для них вторую стратегию они используют в
иммунокомпетентных хозяевах, а в иммунодефицитных вынужденно проявляют первую – острая инфекция.

Методы диагностики вирусных инфекций

Для микробиологической диагностики вирусных инфекций в настоящее время применяют три основных
методических подхода.
Вирусологическая диагностика – основана на выделении вируса из исследуемого материала и его последующей
индикации и идентификации.
Серологическая диагностика – определение специфических иммунологических изменений в организме под
действием вирусов (чаще всего с помощью диагностикумов выявляют в сыворотке крови противовирусные антитела).
Молекулярно-биологическая диагностика – обнаружение в клиническом материале фрагментов нуклеиновых кислот
вирусов-возбудителей с помощью зондов (гибридизация НК) или ПЦР.

Культивирование и индикация вирусов

Культивирование вирусов человека и животных проводят:
с целью лабораторной диагностики вирусных инфекций,
для изучения патогенеза и иммунитета при вирусных инфекциях,
для получения диагностических и вакцинных препаратов.
Вирусы культивируют трех биологических моделях: в организме лабораторных животных, в развивающихся
эмбрионах птиц (чаще на куриных эмбрионах) и в культурах клеток (тканей).
Выращенные вирусы определяют с помощью методов индикации и идентификации. Индикация, т.е. обнаружение
факта их репродукции, основана на выявлении различных биологических свойств вирусов и особенностей их
взаимодействия с чувствительными клетками. Идентификация (определение вида, типа) вирусов осуществляется, в
основном, с помощью иммунологических реакций, основанных на взаимодействии антигенов вирусов и соответствующих
им АТ.

Лабораторных животных (взрослых или новорожденных белых мышей, хомяков, морских свинок, обезьян и др.)
заражают исследуемым вируссодержащим материалом различными способами (подкожно, внутримышечно, интраназально,
интрацеребрально) и в зависимости от тропизма вирусов. Использование животных для культивирования вирусов в
диагностических целях весьма затруднено из-за видовой невосприимчивости животных ко многим вирусам человека,
контаминации животных посторонними вирусами, а также по экономическим и этическим соображениям.
В некоторых случаях биологический метод может явиться единственным в диагностике вирусных инфекций
(большая часть медленных вирусных инфекций), а также для получения чистых культур вируса (вирусы Коксаки, ECHO,
лимфоцитарный хориоменингит и др.); или как дополнительный метод исследования при диагностике (заражение в роговицу
для определения наличия герпесвируса и исследуемом материале).
При использовании биологического метода с целью диагностики заболевания необходимо знать, что определенные
вирусы культивируются на определенных экспериментальных животных и при определенном способе заражения и сроке
введения материала. Например, при диагностике некоторых медленных вирусных инфекций заражение проводят у постели
больного интрацеребрально мышатам-сосункам (1-2 суточным), т.е. здесь имеет значение вид животного, возраст
животного, время от забора до введения материала и способ введения материала (заражения).
Экспериментальные животные в вирусологии применяются для следующих целей:
диагностики вирусных инфекций (выделение, накопление, типирование и титрование вирусов);
получения иммунных противовирусных сывороток и ингредиентов крови (эритроцитов, лейкоцитов, плазмы и т.д.);
моделирования вирусных инфекций для изучения патогенеза, иммунитета, патоморфологии и т.д.;
разработки способов специфической и неспецифической профилактики и лечения.

О продукции вирусов в организме животных судят по развитию у них видимых клинических проявлений
заболевания, патологическим изменениям органов, и а также на основании реакции гемагглютинации (РГА) с суспензией
из органов, содержащих вирусы.

Куриные эмбрионы (5—12-дневные) заражают путем введения исследуемого материала в различные полости и
ткани зародыша. Таким образом можно культивировать вирусы гриппа, герпеса, натуральной оспы и др. Достоинствами
модели являются: возможность накопления вирусов в больших количествах; отсутствие скрытых вирусных инфекций;
доступность для любой лаборатории. О репродукции вирусов в куриных эмбрионах свидетельствуют: специфические
поражения оболочек и тела эмбриона (оспины, кровоизлияния); гибель эмбриона; положительная РГА с вируссодержащей
жидкостью, полученной из полостей зараженного зародыша.
Методику культивирования вирусов в развивающихся эмбрионах птиц используют при промышленном
выращивании вирусов. Однако многие вирусы не размножаются в эмбрионах птиц; почти неограниченные возможности для
культивирования вирусов появились после открытия метода культур клеток.
Культуру клеток (тканей) наиболее часто применяют для культивирования вирусов. Метод культур клеток
разработан в 50-х годах XX века Дж. Эндерсом и соавт., получившими за это открытие Нобелевскую премию. Клетки,
полученные из различных органов и тканей человека, животных, птиц и других биологических объектов, размножают вне
организма на искусственных питательных средах в специальной лабораторной посуде. Большое распространение получили
8
культуры клеток из эмбриональных и опухолевых (злокачественно перерожденных) тканей, обладающих, по сравнению с
нормальными клетками взрослого организма, более активной способностью к росту и размножению.
При выращивании культур клеток необходимо выполнение ряда условий:
1) соблюдение правил асептики;
2) использование лабораторной посуды из нейтрального стекла (пробирки, флаконы, матрасы) или специальных
реакторов для получения биотехнологической продукции;
3) использование сложных по составу питательных сред (среда 199, Игла), содержащих минеральные соли,
аминокислоты, витамины, глюкозу, сыворотку крови животных или человека, буферные растворы для поддержания
стабильного рН;
4) добавление антибиотиков к питательной среде для подавления роста посторонних микробов;
5) соблюдение оптимальной температуры (36— 38,5 °С) роста клеток.

В зависимости от техники приготовления различают однослойные, суспензионные и органные культуры клеток:

Однослойные культуры клеток — клетки способны прикрепляться и размножаться на поверхности химически
нейтрального стекла лабораторной посуды в виде монослоя. Они получили наибольшее применение в вирусологии.
Суспензионные культуры клеток — клетки размножаются во всем объеме питательной среды при постоянном ее
перемешивании с помощью магнитной мешалки или во вращающемся барабане. Их используют для получения большого
количества клеток, например, при промышленном получении вирусных вакцин.
Органные культуры — цельные кусочки органов и тканей, сохраняющие исходную структуру вне организма
(применяются ограниченно).
Культуры клеток в процессе их культивирования способны проходить десятки генераций. По числу жизнеспособных
генераций культуры клеток подразделяют на: 1) первичные, или первично-трипсинизированные; 2) перевиваемые, или
стабильные; 3) полуперевиваемые.
Первичные культуры способны размножаться только в первых генерациях, т. е. выдерживают не более 5—10
пассажей после выделения из тканей. В основе получения первичных культур лежит обработка кусочков тканей (эм-
бриональных, опухолевых или нормальных) протеолитическими ферментами, например трипсином, который разрушает
межклеточные связи в тканях и органах с образованием изолированных клеток.
Перевиваемые, или стабильные, культуры клеток способны размножаться в лабораторных условиях неопределенно
длительный срок (десятки лет), т. е. выдерживают многочисленные пассажи. Их получают преимущественно из опухолевых
или эмбриональных тканей, обладающих большой потенцией роста. Перевиваемые культуры клеток имеют преимущества
перед первичными культурами. К ним относятся: продолжительность их культивирования, высокая скорость размножения
опухолевых и эмбриональных клеток, меньшая трудоемкость, способность культур сохранять свои свойства в замороженном
состоянии в течение многих лет, возможность использования международных линий культур во многих лабораториях мира.
Однако злокачественный характер клеток и соматические мутации, претерпеваемые нормальными клетками в процессе
многочисленных генераций, ограничивают использование этого вида культур, в частности невозможно их применение в
производстве вирусных вакцин.
Полуперевиваемые культуры клеток имеют ограниченную продолжительность жизни и выдерживают 40—50
пассажей. Их обычно получают из диплоидных клеток эмбриона человека. В процессе пассажей эти культуры сохраняют
диплоидный набор хромосом, характерный для соматических клеток исходной ткани, и не претерпевают злокачественной
трансформации. Поэтому полуперевиваемые культуры клеток могут быть использованы как в диагностике, так и в
производстве вакцин.
Штаммом диплоидных клеток называется морфологически однородная культура клеток, стабилизированная в
процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни, характеризующаяся тремя фазами роста
(стабилизации, активного роста и старения), сохраняющая в процессе пассирования кариотип, свойственный исходной
ткани, свободная от контаминантов и не обладающая онкогенной активностью при трансплантации хомячкам.

Внедрение в вирусологию метода культур клеток позволило выделить и идентифицировать многочисленные ранее
неизвестные вирусы, так как почти к каждому вирусу можно подобрать соответствующие чувствительные клетки, в которых
он способен репродуцироваться. Метод дал возможность изучать взаимодействие вирусов с клеткой на молекулярном
уровне, получать высококачественные вакцинные и диагностические препараты, проводить вирусологические исследования
в стандартных условиях.

Индикация вирусов

О продукции вирусов в организме животных судят по развитию у них видимых клинических проявлений
заболевания, патологическим изменениям органов, и а также на основании реакции гемагглютинации (РГА) с суспензией
из органов, содержащих вирусы.
Реакция гемагглютинации (РГА) основана на способности многих вирусов вызывать склеивание (агглютинацию)
эритроцитов человека, птиц и млекопитающих в результате взаимодействия вирусных белков (гемагглютининов) с
рецепторами эритроцитов. В результате РГА в пробирке образуется так называемый зонтик, который хорошо виден невоо-
руженным глазом. При отсутствии вируса, эритроциты оседают на дно пробирок или лунок полистироловых пластинок, в
которых ставят реакцию, в виде компактной "пуговицы". РГА используется для ориентировочного определения в
исследуемом материале вируса. Чаще всего РГА используется в работе с вирусом гриппа.
9
 О репродукции вирусов в культуре клеток, зараженных вируссодержащим материалом, можно судить на
основании следующих феноменов:
цитопатогенного действия (ЦПД) вирусов, или цитопатического эффекта,
образования внутриклеточных включений;
образования «бляшек»;
реакций гемадсорбции и гемагглютинации;
«цветной» реакции,
реакции нейтрализации.
ЦПД — патологические изменения морфологии клеток, вплоть до их гибели, возникающие в результате
репродукции вирусов, и наблюдаемые под микроскопом (рис. 3.11). В зависимости от особенностей репродуцирующихся
вирусов ЦПД может отличаться. В одних случаях быстро вакуолизируется цитоплазма, разрушаются митохондрии,
округляются и гибнут клетки, а в других — формируются гигантские многоядерные клетки, называемые симпласты или
наблюдается явление клеточной пролиферации, которое в итоге заканчивается деструкцией клеток. Таким образом, характер
ЦПД позволяет использовать этот феномен не только для индикации присутствия вирусов, но и для их ориентировочной
идентификации в культуре клеток.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по внутриклеточным включениям, которые
образуются в ядре или цитоплазме зараженных клеток. Часто включения представляют собой скопления вирусных частиц
или отдельных компонентов вирусов, иногда могут содержать клеточный материал. Выявляют включения с помощью
светового или люминесцентного микроскопа после окрашивания зараженных клеток соответственно анилиновыми
красителями или флюорохромами. Включения могут отличаться по величине (от 0,2 до 25 мкм), форме (округлые или
неправильные) и численности (одиночные и множественные). Характерные цитоплазматические включения формируются в
клетках, инфицированных вирусом натуральной оспы (тельца Гварниери), бешенства (тельца Бабеша—Негри), а
внутриядерные включения — при заражении аденовирусами или вирусами герпеса.
«Бляшки», или «негативные колонии», — представляют собой ограниченные участки разрушенных вирусами
клеток в сплошном монослое культур клеток. Они видны невооруженным глазом в виде светлых пятен на фоне окрашенного
монослоя живых клеток. Добавление агара в питательную среду ограничивает распространение вирусов по всему монослою
после выхода их из разрушенной клетки и обеспечивает взаимодействие вирусов только с соседними клетками. Каждая
«бляшка» образуется потомством одного вириона. Подсчитав количество «бляшек», можно определить концентрацию
вирусов в исследуемом материале. Кроме того, «бляшки» разных групп вирусов отличаются по размеру, форме, срокам
появления. Поэтому метод «бляшек» используют для дифференциации вирусов, а также для селекции штаммов и полу чения
чистых линий вирусов.
В основе реакции гемадсорбции (РГадс) лежит способность культур клеток, инфицированных вирусами,
адсорбировать на своей поверхности эритроциты, т.к. вирусы после репродукции выходят на поверхность клеток. Целый ряд
вирусов (гриппа, парагриппа и др.) обладают гемадсорбирующими свойствами, что позволяет использовать реакцию
гемадсорбции для индикации этих вирусов даже при отсутствии выраженного ЦПД в культуре клеток. Механизмы реакции
гемадсорбции и гемагглютинации сходны. Поэтому для обнаружения репродукции некоторых вирусов в культуре клеток
можно использовать реакцию гемагглютинации с культуральной жидкостью, т. е. с питательной средой, содержащей
размножившиеся вирусы.
Следует заметить, что обе эти реакции (РГА и РГадс) не являются иммунологическими, поскольку они протекают без
участия антител.
«Цветная» реакция. О репродукции вирусов в культуре клеток можно также судить по так называемой «цветной»
реакции. Она регистрируется по изменению цвета индикатора, находящегося в питательной среде для культур клеток. Если
вирусы не размножаются в культуре клеток, то живые клетки в процессе своего метаболизма выделяют кислые продукты,
изменяющие рН среды и, соответственно, цвета индикатора. При репродукции вирусов нормальный метаболизм клеток
нарушается (клетки гибнут), и среда сохраняет первоначальный цвет индикатора.
Реакция нейтрализации (РН). Основана на подавлении цитопатогенного эффекта (ЦПД) после смешивания со
специфичными АТ. Для этого неизвестный вирус смешивают с известными коммерческими антисыворотками и после
соответствующей инкубации вносят в монослой клеток. Отсутствие гибели клеток монослоя указывает на соответствие
инфекционного агента и известных АТ. Это иммунологическая реакция.

В заключение этого раздела хочу подчеркнуть, что с помощью перечисленных способов можно только обнаружить
вирусы в материале (индикация - обнаружение), но нельзя установить их видовую принадлежность. Для определения же
вида вируса (идентификация) применяются серологические реакции, в которых используются специфические, заведомо
известные антитела.

Идентификация выделенных вирусов

Идентификацию вирусов проводят по следующим признакам:
вирусиндуцированным патологическим изменениям в чувствительных живых системах;
антигенным свойствам вирусов в серологических реакциях с противовирусными видовыми и типовыми сыворотками
(является основной и достаточно точной идентификацией);
выявлению вирусной НК, например, методом ПЦР;
результатам электронно-микроскопического изучения морфологии вирусов.
10
11