Вы находитесь на странице: 1из 120

№1 (67)

2015
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
ВИТЕБСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

Научно-практический ежеквартальный рецензируемый журнал

ВЕСТНИК ФАРМАЦИИ
основан в 1997 году

Учредитель – Учреждение образования "Витебский государственный ордена


Дружбы народов медицинский университет"

Редакционная коллегия

Бузук Г.Н. (зам. главного редактора), Генералов И.И., Глембоцкая Г.Т.


(Москва), Гурина Н.С. (Минск), Дейкало В.П., Дорофеева Т.А., Жебентяев
А.И., Жерносек А.К., Игнатьева Е.В., Кевра М.К. (Минск), Козловский
В.И., Конорев М.Р. (зам. главного редактора), Криштопов Л.Е., Кугач
В.В. (главный редактор), Кунцевич З.С., Куркин В.А. (Самара), Пиманов
С.И., Покачайло Л.И., Сачек М.М., Сушков С.А. (зам. главного
редактора), Трухачева Т.В., Фадеев В.И., Хейдоров В.П., Хуткина Г.А.,
Царенков В.М. (Минск), Чуешов В.И. (Харьков), Эльяшевич Е.Г. (Минск).

Редакционный совет

Боковикова Т.Н. (Москва), Бурак И.И., Войтехович Ю.Б., Гапанович В.Н.


(Минск), Глушанко В.С., Глушнев А.Н. (Гомель), Гнитий В.А. (Брест),
Годовальников Г.В. (Минск), Гореньков В.Ф. (Минск), Дубовик Б.В.
(Минск), Жарков Л.В. (Минск), Залесский В.Е. (Минск), Игнатенко В.С.
(Могилев), Ковальчук И.Е. (Минск), Коневалова Н.Ю., Косинец А.Н.,
Краснюк И.И. (Москва), Масленкина О.В. (Минск), Ламан Н.А. (Минск),
Наркевич И.А. (Санкт-Петербург), Рахманько Е.М. (Минск), Реутская Л.А.
(Минск), Сосонкина В.Ф. (Минск), Фурса Н.С. (Ярославль), Шеряков А.А.
(Минск), Яремчук А.А. (Минск).

Журнал зарегистрирован в Министерстве информации Республики Беларусь,


свидетельство №112 от 12.03.2009г.
ISSN 2074-9457
Вестник фармации №1 (67) 2015
ОГЛАВЛЕНИЕ

СТР.

ЮБИЛЕИ

ОРГАНИЗАЦИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ДЕЛА

Е. Г. Эльяшевич
ЭТИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ РЕАЛИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
ИЗ АПТЕК ………………………………………………………………………………………………5

З. А. Убайдуллаева, Х. С. Зайнутдинов
МАРКЕТИНГОВЫЙ АНАЛИЗ ЗАКУПА ЦЕФАЛОСПОРИНОВЫХ
АНТИБИОТИКОВ ……………………………………………………………………………………9

Е. Г. Эльяшевич
РЕАЛИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ВНЕ АПТЕК:
ПРЕИМУЩЕСТВА И НЕДОСТАТКИ ……………………………………………………………12

ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА

Н. В. Корожан, Г. Н. Бузук
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА ЭФИРНОГО МАСЛА
ТРАВЫ ВИДОВ ЧЕРЕДЫ …………………………………………………………………………18

Н. А. Кузьмичева, Г. Н. Бузук, Е. В. Ломако


ЛИНЕЙНЫЕ И НЕЛИНЕЙНЫЕ СВЯЗИ УРОЖАЙНОСТИ И ПРОЕКТИВНОГО
ПОКРЫТИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ …………………………………………………24

О. А. Ёршик, Г. Н. Бузук
ПРОАНТОЦИАНИДИНЫ КОРНЕВИЩ С КОРНЯМИ САБЕЛЬНИКА БОЛОТНОГО
В УСЛОВИЯХ ТЕРМИЧЕСКОЙ И МЕХАНОХИМИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ ………………28

Г. Н. Бузук
ВЛИЯНИЕ РАЗМЕРА, КОЛИЧЕСТВА И ФОРМЫ УЧЕТНЫХ ПЛОЩАДОК
НА ТОЧНОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЕКТИВНОГО ПОКРЫТИЯ …………………………33

ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВ

С. В. Спиридонов
РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАНУЛ НА ОСНОВЕ
ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ДЛЯ ТЕРАПИИ ЗАПОРОВ ……………38

О. М. Хишова
СЫПУЧЕСТЬ И КОГЕЗИОННЫЕ СВОЙСТВА ТОНКО ИЗМЕЛЬЧЕННЫХ
РАСТИТЕЛЬНЫХ СУБСТАНЦИЙ ………………………………………………………………43

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

О. Г. Смалюх, С. В. Сур
РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ИДЕНТИФИКАЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ
АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В РАСТИТЕЛЬНОМ ЛЕКАРСТВЕННОМ СРЕДСТВЕ
СЕДАВИТ, ТАБЛЕТКАХ ……………………………………………………………………………52

Н. Е. Блажеевский, О. И. Коретник
ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ D(+)-БИОТИНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ
СРЕДСТВАХ В ВИДЕ СООТВЕТСТВУЮЩЕГО СУЛЬФОКСИДА ……………………………57

3
Вестник фармации №1 (67) 2015

Н. Н. Бойко
КИНЕТИКА ЭКСТРАГИРОВАНИЯ НЕКОТОРЫХ НЕОРГАНИЧЕСКИХ
И ОРГАНИЧЕСКИХ КОМПОНЕНТОВ ИЗ ТРАВЫ ХВОЩА ПОЛЕВОГО …………………63

Ю. А. Шерякова, О. М. Хишова
ИДЕНТИФИКАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИТЕРПЕНОВЫХ
САПОНИНОВ В ПЕРЕСЧЕТЕ НА β-ЭСЦИН В КОРНЕВИЩАХ С КОРНЯМИ
СИНЮХИ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ МЕТОДОМ ВЭЖХ …………………………69

ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

Е. В. Бондарев, С. Ю. Штрыголь
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РОЛИ АДРЕНО- И ХОЛИНОРЕЦЕПТОРОВ
ВО ФРИГОПРОТЕКТОРНОМ ДЕЙСТВИИ ГЛЮКОЗАМИНА ГИДРОХЛОРИДА …………78

И. А. Зупанец, Т. С. Сахарова, Е. В. Ветрова, Е. А. Зупанец


ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛЮКОЗАМИНА НА
ДОКСОРУБИЦИН-ИНДУЦИРОВАННУЮ ГИБЕЛЬ КЛЕТОК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ ………83

Е. А. Калько, С. М. Дроговоз, А. В. Кононенко, И. А. Кулиш, Э. Л. Торяник


ВЛИЯНИЕ СУТОЧНОГО И СЕЗОННЫХ БИОРИТМОВ НА
БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ПЕЧЕНИ …89

В. М. Ёршик
ПРОТИВОВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ЛИМОННИКА КИТАЙСКОГО …96

Я. А. Бутко, С. М. Дроговоз, Г. И. Губина-Вакулик,, Т. В. Горбач


ДИНАМИКА УРОВНЯ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ ПРИ ОЖОГОВОЙ
ТРАВМЕ У КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ КЕРАМИДОВ И ИХ КОМБИНАЦИИ
С ДЕКСПАНТЕНОЛОМ …………………………………………………………………………101

ОБЗОРЫ

Н. И. Михайлова, Г. А. Хуткина
МАРКЕТИНГ ПЕРСОНАЛА: ИСТОРИЧЕСКОЕ РАЗВИТИЕ
И СОДЕРЖАНИЕ ПОНЯТИЯ ……………………………………………………………………107

4
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ОРГАНИЗАЦИЯ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ДЕЛА
Е. Г. Эльяшевич

ЭТИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ РЕАЛИЗАЦИИ


ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ИЗ АПТЕК

В статье обсуждаются этические проблемы реализации лекарственных


средств (ЛС) из аптек. Показано, что нерациональное применение лекарствен-
ных средств затрагивает права пациента. Фармацевтический работник является
главным источником информации о рациональном использовании ЛС при самосто-
ятельном лечении населения. С целью преодоления этических проблем при реали-
зации ЛС используются профессиональное партнерство, концепция фармацевти-
ческой помощи, включая фармацевтическое консультирование, этические кодексы.
Единство фармацевтической помощи и фармацевтической этики является осно-
вой для улучшения и сохранения качества жизни пациентов, поддержания здоровья
каждого индивида и общества в целом.
Ключевые слова: аптека, фармацевтическая этика, реализация, лекарствен-
ное средство, рациональное применение.

ВВЕДЕНИЕ В случае рецептурного отпуска ЛС врач


определяет необходимость применения
Посетитель аптеки заинтересован в по- того или иного ЛС, а фармацевтический
лучении качественной фармацевтической работник реализует его с предоставле-
консультации и приобретении необходи- нием информации, указанной в рецепте.
мого количества ЛС с минимальными фи- При безрецептурном отпуске ЛС фар-
нансовыми затратами. Провизор, наряду с мацевтический работник является главным
выполнением социальной функции, заин- источником информации о рациональном
тересован в получении прибыли, увеличе- его использовании [1, 2].
нии объема продаж ЛС, изделий медицин- Рациональное использование ЛС тре-
ского назначения, медицинской техники, бует того, чтобы пациенты получали лече-
товаров аптечного ассортимента [1, 2]. ние, соответствующее их клиническим по-
В связи с этим конфликт коммерческих требностям, в дозах, которые отвечают их
и социальных интересов аптеки представ- индивидуальным особенностям, в течение
ляет собой важную этическую проблему. адекватного периода времени и по самой
Цель настоящей работы – изучить эти- низкой цене для них и для общества. Толь-
ческие проблемы реализации ЛС из аптек ко в случае следования этим принципам,
и пути их преодоления. сформулированным на конференции экс-
пертов Всемирной организации здравоох-
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ранения (ВОЗ) по рациональному исполь-
зованию ЛС (Найроби, 1985 г.), возможно
Проведен анализ литературных ис- увеличение продолжительности жизни
точников по этическим проблемам реа- пациентов, снижение уровня осложнений
лизации ЛС посетителям аптек. В работе болезни и инвалидизации, повышение ка-
использованы исторический, логический, чества жизни [3].
аналитический, описательный методы, ме- Неправильное самостоятельное при-
тод сравнения. менение ЛС, по мнению экспертов ВОЗ,
является одним из видов нерационально-
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ го их использования. Неоправданное или
чрезмерное применение ЛС оказывает
Приобретение ЛС в аптеке совершает- значительное влияние на уровень заболе-
ся на основе выписанного врачом рецеп- ваемости и смертности, вызывает необо-
та или свободного выбора покупателей. снованные дополнительные затраты самих
5
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

пациентов, наносит существенный ущерб ЛС не только как фармацевтический про-


их здоровью. Нерациональное использо- дукт, а как «лекарственный продукт плюс
вание ЛС нередко повышает спрос среди информация». Поэтому специфическим
пациентов на определенные ЛС, приво- условием профессиональной подготовки
дит к исчерпанию материальных ресурсов фармацевтических работников является
и утрате пациентами доверия к системе формирование не только операционных
здравоохранения [4]. видов деятельности (изготовление ЛС,
Одними из ключевых положений о ра- проведение их контроля качества и др.),
циональном использовании ЛС являются но и социокультурных (анализ психоло-
независимая информация о ЛС, обучение гического состояния посетителя аптеки,
населения и предоставление достоверной организация форм общения с ним, кон-
информации о ЛС, предотвращение реали- сультирование пациентов). Именно ра-
зации корыстных финансовых интересов, ботник первого стола олицетворяет перед
четкое регулирование применения ЛС. покупателем всю сложную цепь, включаю-
Разграничение отпуска ЛС по рецепту и щую в себя технологический процесс про-
без рецепта является регуляторной мерой, изводства, контроль качества, поставку,
способствующей рациональному приме- ценообразование и организацию продажи
нению ЛС [4]. товара. Это единственный представитель,
Прием любого ЛС всегда сопряжен с имеющий непосредственный контакт с по-
риском развития его побочных эффектов. купателем [6].
Одной из причин высокой частоты аллер- Во многих странах разработаны эти-
гических реакций на ЛС является игно- ческие кодексы фармацевтов. В 1997 году
рирование мер профилактики. Пациенты Международной фармацевтической феде-
должны представлять себе небезопасность рацией (FIP) был принят «Кодекс этики
ЛС и соблюдать комплекс необходимых фармацевтов» [7], который послужил осно-
мер предосторожности [5]. вой для написания кодексов фармацевти-
Безопасность применения ЛС пациен- ческих работников отдельных государств.
тами – большая и важная проблема. По- В соответствии с ключевыми принципами
бочные реакции на ЛС затрагивают права Кодекса FIP фармацевт обязан быть объек-
пациентов, так как вследствие нежелатель- тивным, ставить здоровье пациента выше
ных эффектов применения ЛС наносится коммерческих и личных интересов, спо-
вред здоровью человека. Если данный эф- собствовать эффективному и безопасно-
фект возникает в результате самолечения, му лечению людей. Исходя из принципов
то ответственность возлагается на самого декларативности и добровольности, кото-
пациента или организацию-производите- рые лежат в основе кодексов, они могут
ля, изготовившую данное ЛС [5]. В мае быть приняты самыми разными неправи-
1993 г. Европейская ассоциация произво- тельственными организациями. Кодекс не
дителей безрецептурных лекарственных является нормативным актом и, как след-
средств (AESGP) и Фармацевтическая ор- ствие, несоблюдение его положений не
ганизация ЕС (PGEC) подписали в Брюс- может привести к санкциям со стороны
селе соглашение о сотрудничестве, в ко- закона. Но, например, в Великобритании
тором указывается, что в каждодневной и Канаде национальные общества фарма-
заботе человека о своем здоровье фарма- цевтов обладают такими полномочиями,
цевтический работник, с одной стороны, как аннулирование регистрации фарма-
выступает в качестве советчика, а с другой цевта. В Молдове случаи отступления от
– становится главной фигурой в процессе этических норм и непрофессионально ока-
реализации ЛС потребителю. Он является занной помощи или консультации имеет
партнером производителей безрецептур- право рассматривать комитет по этике. В
ных ЛС, с которыми разделяет общие за- зависимости от характера нарушений чле-
дачи по обеспечению высококачественно- ны комитета могут обратиться с предложе-
го обслуживания пациентов, способствует нием о наказании в Министерство здраво-
рациональному применению ЛС. охранения республики [8].
Применительно к ЛС качество инфор- В соответствии с этическими кодек-
мации столь же важно, как и качество са- сами фармацевтических работников Рос-
мого ЛС. Международная фармацевтиче- сийской Федерации [9] и Украины [10]
ская федерация предлагает рассматривать пациент имеет право получить, а фарма-
6
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

цевтический работник обязан сообщить Основой для надлежащей фармацев-


всю необходимую информацию о ЛС. тической помощи являются профессио-
Провизор (фармацевт) должен оказывать нальные знания и опыт провизора, нормы
фармацевтическую помощь любому чело- медицинской этики и деонтологии, добро-
веку независимо от его национальности, желательное отношение фармацевтиче-
политических и религиозных убеждений, ского работника к пациенту и ответствен-
материального положения, пола, возраста, ное – к своим обязанностям. Оказанию
социального статуса. Фармацевтический фармацевтической помощи на высоком
работник также отвечает за рациональное уровне способствует соблюдение следую-
использование ЛС. щих принципов: индивидуальный подход
В 1993 г. в Японии на совещании к пациенту; постоянное взаимодействие
«Качественные фармацевтические служ- провизора с пациентом и его врачом в
бы – польза для государства и общества» ходе фармакотерапии конкретного забо-
была сформулирована концепция фарма- левания рецептурными и безрецептур-
цевтической социальной помощи, в со- ными ЛС; систематическое повышение
ответствии с которой интересы пациента уровня знаний провизора в области фар-
должны быть главными в работе фарма- макотерапии заболеваний, информации о
цевтического работника. В практике рос- ЛС, психологии общения, развития рынка
сийского здравоохранения концепция фар- ЛС; соблюдение профессиональной этики
мацевтической помощи сформулирована и конфиденциальности; стандартизация и
в начале 90-х годов XX века профессором контроль [15].
Лопатиным П.В. Целью работы аптек яв- По мере усложнения задач у специ-
ляется обеспечение пациентов квалифи- алиста вырабатывается все большее чис-
цированной, своевременной и доступной ло автоматизированных более сложных
лекарственной помощью и получение раз- навыков и одновременно растет удовлет-
умной прибыли, реинвестируемой в раз- воренность результатами своей деятель-
витие системы фармацевтической помощи ности вместе с сознанием общественного
как одной из важнейших подсистем обще- значения своего труда. В этом и заключа-
ственного здравоохранения [11]. ется сущность такого профессионализма,
В соответствии с Надлежащей аптеч- который не только становится надежным
ной практикой Республики Беларусь [12] фундаментом для передовых этических
гражданин имеет право получить от фар- норм, но и представляет нерасторжимое
мацевтического работника аптеки инфор- единство с ним [16].
мацию о медицинском применении ЛС Этические правила должны соблю-
и использовании изделий медицинского даться при создании ЛС, клинических ис-
назначения, товаров аптечного ассорти- пытаниях, выполнении контрольно-раз-
мента. Реализация ЛС, в том числе без решительных и надзорных процедур, при
рецепта врача, и консультирование населе- производстве ЛС, контроле качества и до-
ния по вопросам применения ЛС, изделий ведении их до потребителей [11].
медицинского назначения и медицинской Единство фармацевтической помощи
техники, товаров аптечного ассортимен- и фармацевтической этики обеспечивает
та осуществляются фармацевтическими защиту человека, его физического и пси-
работниками аптеки при соблюдении ими хического здоровья, достоинства, непри-
требований фармацевтической этики и де- косновенности личности [11].
онтологии.
Повышение удовлетворенности потре- ЗАКЛЮЧЕНИЕ
бителей фармацевтической помощью явля-
ется основной целью любой современной Важными этическими проблемами
аптечной организации, так как пациенты, при реализации ЛС из аптек являются не-
обретя однажды положительный опыт вза- рациональное их применение и связанное
имодействия с аптекой, будут вновь к ней с этим развитие аллергических и других
обращаться [13]. побочных реакций, отсутствие достовер-
Фармацевтическая помощь является ной информации, ненадлежащее консуль-
комплексным понятием, которое имеет фар- тирование со стороны фармацевтических
мацевтическое, рыночно-экономическое и работников. С целью их преодоления ВОЗ
социально-этическое содержание [14]. сформулировала принципы рационально-
7
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

го использования ЛС, налажено партнер- N22/rosp_229. – Дата доступа: 16.10.2014.


ство производителей ЛС и фармацевтиче- 3. Рациональное использование лекар-
ских работников, разработаны этические ственных средств: ключевые моменты //
кодексы, сформулирована концепция фар- Рациональная фармакотерапия [Электрон-
мацевтической помощи. Требования по ный ресурс]. – Режим доступа: http://www.
безопасному фармацевтическому консуль- health-ua.org/. – Дата доступа: 10.10.2014.
тированию закреплены в нормативных 4. Гавриленко, Л. Н. Рецептурные и
правовых актах. безрецептурные лекарственные средства.
Оказание фармацевтической помощи Концепция ответственного самолечения
с соблюдением фармацевтической этики (проблемная лекция) / Л. Н. Гавриленко //
является основой для достижения резуль- Рецепт. – 2012. – № 2 (82). – С. 23 – 29.
татов по улучшению или сохранению ка- 5. Пухлик, Б. М. Лекарственная аллер-
чества жизни пациентов, поддержанию гия и побочные эффекты лекарственных
здоровья каждого индивида и общества в средств в аллергологии / Б. М. Пухлик, А.
целом. П. Викторов, С. В. Зайков. – Львiв: Меди-
цина свiту, 2008. – 106 с.
SUMMARY 6. Роль фармацевтического работника
в системе здравоохранения // Биоэтика:
E.G. Elyashevich учебник для вузов / Под ред. В. П. Лопати-
ETHICAL PROBLEMS OF REALIZATION на. – 4-е изд., – 2009. – 272 с.
OF DRUGS FROM DRUGSTORES 7. Эльяшевич, Е. Г. История фармацев-
In the article the ethical problems of reali- тической этики / Е. Г. Эльяшевич // Вест-
zation of drugs from drugstores are discussed. ник фармации. – 2013. – № 1 (59). – С. 77
It is shown that the irrational use of drugs af- – 80.
fects the patient rights. Pharmacist is the main 8. Клятва фармацевта // Экономическое
source of information on the rational use of обозрение [Электронный ресурс]. – 2007. –
drugs for self-treatment population. To over- № 35 (723). – Режим доступа: http://www.
come the ethical problems at the realization of health-ua.org/. – Дата доступа: 10.10.2014.
drugs professional partnership, the concept of 9. Этический кодекс фармацевта и про-
pharmaceutical care, including pharmaceuti- визора [Электронный ресурс]. – Режим до-
cal counseling, ethical codes are used. Unity ступа: http://www.fkdz.ru/sites/default/files.
of pharmaceutical care and pharmaceutical pdf. – Дата доступа: 15.10.2014.
ethics is the basis for improving and main- 10. Етичний Кодекс фармацевтичних
taining the quality of life of patients, main- працівників України [Электронный ре-
taining health of each individual and society сурс]. – Режим доступа: http://nuph.edu.
as a whole. ua/nash-universy-tet/ety-chny-j-kodeks-
Keywords: drugstore, pharmaceutical farmatsevty-chny-h-prats/. – Дата доступа:
ethics, realization, drug, rational use. 15.10.2014.
11. Лопатин, П. В. Фармацевтическая
ЛИТЕРАТУРА биоэтика – морально-нравственная основа
философии фармацевтической деятель-
1. Егорова, С. Н. Проблемы фармацев- ности XXI века / П. В. Лопатин // Москов-
тического консультирования: фармацевти- ские аптеки [Электронный ресурс]. – 2004.
ческая этика и фармацевтический бизнес / – № 6. – Режим доступа: http://rudoctor.net/
С. Н. Егорова, Г. С. Яровиков // Медицин- medicine2009/bz-nw/med-hmiyj.htm. – Дата
ская практика [Электронный ресурс]. – доступа: 15.10.2014.
Режим доступа: http://mfvt.ru/problemy- 12. Об утверждении Надлежащей ап-
farmacevticheskogo-konsultirovaniya-far- течной практики: Постановление Мини-
macevticheskaya-etika-i-farmacevticheskij- стерства здравоохранения Республики
biznes/. – Дата доступа: 10.10.2014. Беларусь от 27 декабря 2006 г., № 120 в
2. Зорина, О. Возможности професси- редакции постановления Министерства
онального роста провизора: классические здравоохранения Республики Беларусь от
и новые решения / О. Зорина, Т. Шитова, 9 сентября 2014 г. № 66 // Национальный
Г. Харченко // Провизор [Электронный ре- реестр правовых актов Республики Бела-
сурс]. – 2009. – № 22. – Режим доступа: русь, 15.10.2014, № 8/29188.
http://www.provisor.com.ua/archive/2009/ 13. Райсян, М. Г. Исследование потре-
8
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

бительской лояльности на фармацевтиче- ный ресурс]. – Режим доступа: http://


ском рынке / М. Г. Райсян, Е. А. Максимки- college-novye-znaniya.ru/. – Дата доступа:
на // Медицинская наука Армении. – НАН 16.10.2014.
РА. – 2008. – № 2. – С. 104 – 113. 16. Внутренние мотивы личности
14. Немченко, А. С. Теория и практика [Электронный ресурс]. – Режим доступа:
организации фармацевтической помощи http://truport.ru/foo_page/merchvaptor_30.
населению в условиях медицинского стра- html. – Дата доступа: 15.10.2014.
хования / А. С. Немченко, А. Л. Панфилова
Контакты:
// Международный медицинский журнал. –
2010. – № 2. – С. 101 – 106. тел . 8 (017) 274-54-65,
15. Безрецептурный отпуск лекар- Эльяшевич Е.Г.
ственных средств и техника продаж:
учебно-методическое пособие [Электрон- Поступила 24.11.2014 г.

З. А. Убайдуллаева, Х. С. Зайнутдинов

МАРКЕТИНГОВЫЙ АНАЛИЗ ЗАКУПА ЦЕФАЛОСПОРИНОВЫХ


АНТИБИОТИКОВ

Ташкентский фармацевтический институт, г. Ташкент, Республика Узбекистан

В статье представлены данные маркетинговых исследований закупа антибио-


тиков цефалоспоринового ряда за 2008–2012 гг., которые являются востребованны-
ми при лечении инфекционных заболеваний, в особенности пневмоний. Результаты
исследования показали, что в течение пяти лет закуп цефалоспориновых антибио-
тиков вырос в количестве и в ассортименте. Цефалоспориновые антибиотики в
списке закупа представлены 12 международными непатентованными наименова-
ниями (МНН), наиболее закупаемыми являются цефазолин, цефтриаксон и цефо-
таксим.
Ключевые слова: цефалоспориновые антибиотики, маркетинговый анализ, закуп.

ВВЕДЕНИЕ разработанных за последние годы мер по


сдерживанию затрат, расходы на лекар-
В последние десятилетия общество при- ственные средства остаются высокими и,
дает большое значение улучшению состоя- как правило, продолжают расти [2].
ния здравоохранения, что подтверждается Система здравоохранения должна обе-
быстро растущим спросом на медицинские спечивать определенный минимальный
услуги и лекарственные средства (ЛС). В уровень медицинских услуг, позволяющий
результате в большинстве стран, если не во проводить эффективное лечение инфек-
всех, возникла проблема покрытия расходов ционных заболеваний и связанных с ними
на здравоохранение. Рост и старение насе- состояний с помощью основных лекар-
ления, возрастающее разнообразие и слож- ственных средств, а в случае надобности, и
ность заболеваемости оказывают давление наиболее важных лекарственных средств,
на финансирование данной структуры [1]. в особенности цефалоспориновых анти-
Резкий рост расходов на ЛС вызывает биотиков, так как антибактериальная те-
особую озабоченность и привлекает не- рапия является первостепенной терапией
малое политическое внимание, в частно- при лечении инфекционных заболеваний,
сти, потому, что это конкретный вопрос, в том числе пневмонии. Это было выявле-
который на первый взгляд легко поддаётся но нами ранее проведенным фармакоэко-
экономическому контролю. Но такое впе- номическим анализом в Республиканском
чатление часто оказывается обманчивым; специализированном научно-медицинском
несмотря на впечатляющее разнообразие центре педиатрии Узбекистана [3].
9
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Целью исследования явилось изучение «Drugaudit» и данные Института здоро-


закупа цефалоспориновых антибиотиков, вья и медицинской статистики при Ми-
представленных на фармацевтическом нистерстве здравоохранении Республики
рынке Узбекистана. Узбекистан.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Нами проведен ретроспективный ана- Проанализировав данные по закупу


лиз данных по закупу цефалоспориновых за 2008–2012 гг., выявили, что количество
антибиотиков по Республике Узбекистан закупаемых цефалоспориновых антибио-
в течение 2008–2012 гг. Источником для тиков росло из года в год, скачок наблю-
анализа были данные информационно- дался в 2011 году – 56222527 упаковок
аналитической фармацевтической базы (рисунок 1).

Рисунок 1 – Динамика расходов по закупу


цефалоспориновых антибиотиков за 2008–2012 гг.

Годовые приросты в процентах за биотики по международному непатентован-


2008–2012 гг. представлены в таблице 1, из ному наименованию, вычислили количество
которой видно, что высокий прирост был и сумму закупа каждого МНН за каждый год
в 2009 году (56,3%) и в 2011 году (42,5%), в промежутке с 2008 по 2012 гг. (таблица 2).
а в 2012 году наблюдалось снижение на Как видно из таблицы 2, цефалоспори-
15,4%. Исходя из того, что увеличивалось новые антибиотики в списке закупа пред-
количество закупаемых антибиотиков, ставлены 12 МНН, наибольшая доля заку-
суммы закупа также росли. па приходится на цефазолин, цефтриаксон
Сгруппировав цефалоспориновые анти- и цефотаксим. Необходимо отметить, что
Таблица 1 – Динамика закупа цефалоспориновых антибиотиков
Год Количество закупленных упаковок Прирост
цефалоспориновых антибиотиков абсолютный %
2008 13934219
2009 31878807 17944588 56,3%
2010 32307781 428974 1,3%
2011 56222527 23914746 42,5%
2012 47520734 -8701793 -15,47%
10
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таблица 2 – Количество закупленных упаковок цефалоспориновых антибиотиков по МНН


МНН 2008 г. 2009 г. 2010 г. 2011 г. 2012 г.
Cefazolin 8 625 820 24 158 529 16 811 961 31 414 287 24 105 056
Ceftriaxone 3 347 099 4 729 666 10 706 996 18 278 758 17 666 228
Cefotaxime 1 318 654 2 098 722 3 631 407 4 808 496 4 095 831
Cefuroxime 402 236 441 394 318 294 426 766 522 256
Ceftazidime 149 195 212 651 444 631 305 570 377 935
Cefoperazone 58 102 110 810 113 170 201 392 260 658
Cefepim 16 747 70 650 147 920 234 066 221 018
Ceftibuten 1 700 4 250 2 520 5 200 5 760
Cefixime 1 224 9 195 49 080 471 608 227 433
Cefalexin 13 442 42 940 65 002 18 940 3 280
Cefradine – – 16 800 – –
Cefpodoxime – – – 57 444 35 280
из проведенного нами ранее анализа исто- Изучена сумма закупа цефазолина,
рий болезней в Республиканском специ- цефтриаксона и цефотаксима за каждый
ализированном научно-медицинском цен- год в течение пяти лет (таблица 3).
тре педиатрии Узбекистана установлено, Из результатов исследования видно,
что в назначениях врачей также превали- что наиболее затратным в течение послед-
руют данные ЛС [3]. них трех лет является цефтриаксон.

Таблица 3 – Закуп цефазолина, цефтриаксона и цефотаксима в 2008 – 2012 гг.


МНН Сумма USD
2008 г. 2009 г. 2010 г. 2011 г. 2012 г.
Cefazolin 8092241,97 20656380,6 12631101,8 29606763,95 20456680,44
Ceftriaxone 5764529,83 5610560,12 19884581,76 28354710,43 27245889,98
Cefotaxime 2539087,23 2686242,55 4746560,47 7084755,19 6371592,85

Из анализа по фирмам-производите- что в течение 2008–2012 гг. закуп цефа-


лям за пять лет отмечено, что количество лоспориновых антибиотиков вырос в ко-
производителей в списке закупа росло в личестве упаковок и ассортименте. По
соответствии с ростом объема закупа. Так, закупу цефалоспориновых антибиотиков
цефазолин в 2008 году закупался у 17 про- за пять лет самым затратным был 2011
изводителей, а уже к 2012 году этот пока- год.
затель вырос до 22 фирм-производителей. Анализ показал, что цефалоспориновые
Цефтриаксон в 2008 году закупался у 24 антибиотики в списке закупа представлены
производителей, в 2012 году – уже у 33 12 МНН и наиболее закупаемыми являются
фирм-производителей. Цефотаксим в цефазолин, цефтриаксон и цефотаксим.
2008 и 2012 годах закупался у 18 произ- Отмечено, что в период с 2008 по 2012 г.
водителей. увеличилось количество производителей
Необходимо отметить, что оборо- цефалоспориновых антибиотиков. Осо-
ты производства отечественных произ- бенно это хорошо заметно по отечествен-
водителей заметно выросли за пять лет. ным производителям. Если в 2008 году
Если в 2008 году данные цефалоспори- цефазолин, цефтриаксон и цефотаксим
новые антибиотики закупались у ООО выпускали два отечественных производи-
«JurabekLaboratories» и ООО «Remedy», то теля, то к 2012 году в список добавились
к 2012 году список пополнили такие про- еще 4 производителя.
изводители, как ООО «Novopharmaplus», Результаты анализа подтвердили ре-
ДХО «NikaPharm», НПП «Radiks» и ООО зультаты ранее проведенных нами фармако-
«MerrymedFarm». экономических и анкетных исследований.
Самыми широко используемыми, востре-
ЗАКЛЮЧЕНИЕ бованными и закупаемыми представителя-
ми цефалоспориновых антибиотиков явля-
Результаты исследования показали, ются цефазолин и цефтриаксон [3, 4].
11
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

SUMMARY 2. Моссиалос, Э. Регулирование фар-


мацевтического сектора в Европе: ради
Z. A. Ubaydullaeva, Kh. S. Zaynutdinov эффективности, качества и равенства/ Э.
THE MARKETING ANALYSIS OF Моссиалос, М. Мразек, Т. Уолли // Копен-
PURCHASING OF CEPHALOSPORIN гаген: Европейская обсерватория по систе-
ANTIBIOTICS мам и политики здравоохранения, 2006. –
At the article we presented the data of С. 132–136.
marketing researches of purchasing of cepha- 3. Убайдуллаева, З. А. Анализ стоимо-
losporin group antibiotics during 2008–2012, сти лечения заболеваний пневмонией у де-
which are in demand at treatment of infec- тей в Республике Узбекистан / З. А. Убай-
tious diseases, in particular, pneumonias. Re- дуллаева // Вестник ЮКГФА.– Шымкент,
sults of the research showed that during five 2013. – № 4. – С. 12–14.
years purchasing of cepha-losporin antibiot- 4. Убайдуллаева, З. А. Анкетный опрос
ics increased in quantity and assortment. 12 врачей по применению антибиотиков це-
international non-patent names (INN) present фалоспоринового ряда у детей / З. А. Убай-
cephalosporin antibiotics in the list of pur- дуллаева // Педиатрия. – Ташкент, 2013. –
chasing and the most purchased are cephazo- №1–2. – С. 58–61.
lin, ceftriaxone and cephotaxim.
Keywords: cephalosporin antibiotics, Адрес для корреспонденции:
marketing analysis, purchasing.
100015, Узбекистан,
ЛИТЕРАТУРА г. Ташкент, ул. Ойбек, д.45,
Ташкентский фармацевтический институт,
тел: (+99890) 351 36 35,
1. Дьюкс. М. Н. Г. Лекарственные сред- e-mail: zenda.bella@mail.ru,
ства и деньги / М. Н. Г. Дьюкс // Москва: Убайдуллаева З. А.
ВЕСЬ МИР, 2006. – С. 7–9. Поступила 08.11.2014 г.

Е. Г. Эльяшевич

РЕАЛИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ВНЕ АПТЕК:


ПРЕИМУЩЕСТВА И НЕДОСТАТКИ

Целью работы являлось изучение реализации лекарственных средств (ЛС) вне


аптек, ее преимуществ и недостатков.
В разных государствах мира есть различные модели организации розничной
торговли в фармации. В некоторых из них существует система реализации ЛС только
из аптек, в других разрешена торговля в продовольственных магазинах, бакалейных
лавках, на автозаправочных станциях, в отделениях связи, газетных киосках, по
почте, через интернет. Преимуществами реализации ЛС вне аптек являются
повышение доступности ЛС; развитие конкуренции; появление дополнительного
канала сбыта для производителей. Недостатками и рисками являются
снижение качества оказания профессиональных услуг населению и безопасности
самостоятельного применения ЛС, сложность проведения приемочного контроля,
контроля за сроками годности ЛС, регламентации условий хранения, уничтожения
ЛС. Повышается вероятность распространения фальсифицированных ЛС.
Ключевые слова: лекарственное средство, реализация, торговые организации.

ВВЕДЕНИЕ ских изделий и товаров аптечного ассор-


тимента, развития конкуренции на фарма-
В настоящее время с целью повышения цевтическом рынке, поддержания здорово-
физической доступности ЛС, медицин- го образа жизни населения используются
12
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

внеаптечные каналы их распределения. В В Великобритании ЛС общего списка


некоторых странах организуются сети ап- (general sale list (GSL) medicines) могут от-
течных супермаркетов, ЛС реализуются в пускаться из супермаркетов, бакалейных
продовольственных магазинах, бакалей- лавок, заправочных станций и газетных
ных лавках, на автозаправочных станциях, киосков. Разрешена их реализация через
в отделениях связи, газетных киосках, по Интернет [5]. К указанным ЛС относятся
почте, через Интернет [1–5]. обезболивающие ЛС, содержащие ацетил-
Цель настоящего исследования – из- салициловую кислоту, парацетамол; анта-
учить реализацию ЛС вне аптек, ее пре- циды; антисептики; некоторые микстуры
имущества и недостатки. от кашля и др.
В Великобритании также существуют
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ «drugstores», однако они не являются апте-
ками. Через «drugstores» реализуются без-
Объектами исследования являлись рецептурные ЛС, предметы гигиены, па-
публикации, связанные с реализацией ЛС рафармацевтические продукты, предметы
вне аптек за рубежом. Методы – логиче- ухода за пациентами, детское питание [6].
ский анализ и синтез, описательный, ме- В Швейцарии вне аптек реализуются
тод сравнения. ЛС списка Е. К ним относятся ЛС с низ-
кой степенью риска для здоровья пациента
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ (пастилки и леденцы для лечения заболе-
ваний горла, диетические пищевые добав-
В разных государствах мира есть раз- ки в низкой дозировке, средства для гигие-
личные модели организации розничной ны полости рта) [6].
торговли в фармации. В некоторых стра- В Польше большое количество средств
нах (Франция, Норвегия, Бразилия, Мол- растительного происхождения, некоторые
дова, Румыния, Российская Федерация) безрецептурные ЛС и изделия медицинско-
существует система реализации ЛС только го назначения реализуется вне аптечных ор-
из аптек [6]. В других (Австралия, Вели- ганизаций: через сеть продовольственных
кобритания, Венгрия, Германия, Грузия, супермаркетов, продуктовых магазинов, в
Израиль, Индия, Италия, Канада, Польша, отделениях связи, на автозаправочных стан-
США, Швеция, Швейцария, Япония) раз- циях [3]. Безрецептурные ЛС также можно
решена торговля ЛС вне аптек [6]. приобрести в магазинах лекарственных
Все аптечные супермаркеты объеди- трав, медицинской техники, парафармацев-
няет принадлежность к сетям, принцип тических товаров. Руководителями данных
самооб­служивания и богатый ассорти- подразделений могут быть только лица с
мент, включая ЛС, косметику, парфюме- фармацевтическим образованием [3].
рию, закуски и другие потребительские В Японии приобрести безрецептурные
товары [1]. ЛС можно в магазинах и гипермаркетах с
Основная часть аптек США (70%) пред- 1998 года [6].
ставлена традиционными аптеками, 30% яв- Реализация ЛС в Италии осуществля-
ляются аптечными магазинами (drugstores) лась до недавнего времени только через
и супермаркетами. В аптеках США широко аптеки. С 2006 г. продажа безрецептурных
распространено самообслуживание, кото- ЛС в Италии разрешена в специальных
рое стало активно развиваться в 50-е годы отделах супермаркетов и в парааптеках.
XX века в сети Wallgreen [7, 8]. Парааптеки (parafarmacia) – это магазины
Через drugstores продается только 65% аптечного ассортимента. Они начали от-
всего объема рецептурных и около 45% крываться в 2007 г. Открыть такую аптеку
безрецептурных ЛС. Остальная часть ЛС легче, чем традиционную, но сделать это
реализуется через супермаркеты, продо- может только дипломированный и зареги-
вольственные и другие магазины. Серьез- стрированный фармацевт. Парааптеки ре-
ную конкуренцию аптекам и аптечным ализуют безрецептурные ЛС, гигиениче-
сетям составляет канал доставки ЛС по ские средства, косметику, фитопрепараты,
почте (19% от всех продаж рецептурных гомеопатические средства, мыло, шампу-
ЛС), значение которого из года в год воз- ни и некоторые другие средства [9].
растает [1, 7, 8]. С 1999 г. открыта интер- С января 2012 г. правительство Италии
нет-аптека [8]. приняло законопроект, который направлен
13
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

на дальнейшее совершенствование аптеч- Сторонники реализации ЛС вне аптек


ного сегмента фармацевтического рынка. к преимуществам относят повышение до-
Законопроект предусматривает увеличе- ступности ЛС за счет увеличения точек
ние количества лицензий, выдаваемых на продаж и снижения цены на ЛС; развитие
открытие аптечных организаций, и раз- конкуренции на фармацевтическом рынке;
решает парааптекам продавать некоторые появление дополнительного канала cбыта
рецептурные ЛС. Данные меры призваны для производителей.
способствовать повышению конкуренции Противники отпуска ЛС вне аптек ут-
на розничном рынке ЛС [9]. верждают, что доступность ЛС в Россий-
Однако для парааптек оптовые цены ской Федерации обеспечивает достаточное
на ЛС выше, чем для обычных аптек, и количество аптек. На сегодняшний день
им запрещено рекламировать свои ЛС. Ре- аптека есть практически в каждом супер-
клама разрешена только для ЛС, которые маркете [12]. Снижения цен при продаже
реализуются в обычных аптеках. Новую ЛС через торговые сети может не произой-
парааптеку можно открыть не ближе, чем ти, т.к. они в этом не заинтересованы. В
за 200 м от существующих [10]. аптеках доля безрецептурных ЛС и БАД
В Швеции осуществляется почтовая в объеме продаж составила более 50%. Их
доставка ЛС по рецептам врача на дом, реализация через магазины может приве-
за исключением наркотических средств и сти к снижению товарооборота и средних
термолабильных ЛС. Данная услуга вве- показателей рентабельности аптек [12].
дена с целью лекарственного обеспечения Это может быть причиной закрытия аптек,
населения с хроническими заболеваниями, что, в свою очередь, снизит доступность
жителей отдаленных районов в сельской ЛС [14, 15].
местности и лиц, имеющих напряженный Оппоненты также аргументируют свое
рабочий график [11]. мнение нарушением потребительской без-
Для заказа ЛС по телефону покупате- опасности и снижением качества профес-
лю необходимо иметь собственный цифро- сиональных услуг населению. При приоб-
вой код, для заказа через Интернет – номер ретении ЛС пациент должен получить ква-
«электронной идентификации». Все рецеп- лифицированную консультацию от фарма-
ты должны быть занесены в регистр аптеки. цевтического работника. Реализация ЛС
ЛС для отправки по почте помещают вне аптек в Российской Федерации может
в прочную пластиковую упаковку, которая привести к более масштабному и бескон-
защищает ЛС от вскрытия детьми, и в по- трольному самолечению [16–18]. В торго-
чтовый конверт [11]. вых точках необходимо регламентировать
В Дании и Финляндии только в сель- условия хранения и уничтожения ЛС. Не-
ской местности с низкой плотностью на- обходимо обеспечить качество проведения
селения разрешены аптечные прилавки в приемочного контроля, контроля за срока-
магазинах [12]. ми годности ЛС.
Очень активно обсуждался вопрос о Реализация ЛС вне аптек осуществля-
возможности реализации ЛС вне аптек ется по определенному перечню. В Россий-
в Российской Федерации. Поручение по ской Федерации такой перечень был состав-
расширению ассортимента продукции, лен. В него вошли антисептические ЛС для
реализуемой в аптеках, и по продаже ЛС лечения заболеваний горла, ЛС местного
в организациях розничной торговли было применения для лечения заболеваний носа,
дано в марте 2009 года на совещании, по- уголь активированный, железосодержащие
священном антикризисной поддержке от- ЛС, противовирусные ЛС местного приме-
раслей [13]. нения, антигистаминные ЛС. Однако спи-
Предусматривалось предоставление сок вызвал много вопросов [13].
права на закупку и розничную торговлю В соответствии с Законом Республики
ЛС всем магазинам, имеющим в своем со- Беларусь «О лекарственных средствах» в
ставе аптечные секции и аптечные пункты. Республике Беларусь розничная реализа-
Чтобы получить разрешение на торговлю ция ЛС осуществляется в аптеках. В целях
безрецептурными ЛС, магазин должен обеспечения ЛС населения сельских на-
располагать площадью соответствующего селенных пунктов, в которых отсутству-
размера и квалифицированными продав- ют аптеки, розничная реализация лекар-
цами-консультантами. ственных средств может осуществляться
14
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

медицинским работником государствен- ации (http://www.apoteket.dk). При этом


ной организации здравоохранения или ее они предоставляют услугу доставки ЛС
структурного подразделения, расположен- только в пределах страны. Кроме того, в
ных в сельских населенных пунктах [19]. соответствии с приказом Управления по
Допускается также розничная реализация лекарственным средствам Дании (Danish
ЛС в местах проведения международных Medicines Agency) разрешено использовать
тематических выставок, международных услуги интернет-аптек, зарегистрирован-
спортивных, а также культурно-массовых ных в странах ЕС и странах, являющихся
мероприятий [19]. участниками Соглашения о Европейском
Важнейшей проблемой является реа- экономическом пространстве (Agreement
лизации ЛС через Интернет. on the European Economic Area). В Дании
Первые интернет-аптеки (drugstore. установлены одинаковые цены для роз-
com, planetRx.com и yourpharmacy.com) ничной реализации ЛС [20].
появились в США в конце 1990-х годов XX В Германии в соответствии с Законом о
века. Их примеру последовали локальные лекарственных средствах до января 2004 г.
аптечные учреждения, создавая интернет- любая форма дистанционной торговли ЛС
ресурсы как дополнение к своей основ- на ее территории была запрещена. Этот за-
ной деятельности. Развитие этого бизнеса прет был отменен в рамках реформы здра-
в Европе проходило более медленными воохранения. Руководство по правилам
темпами. Относительно небольшое число реализации ЛС при помощи сети Интер-
стран Европейского Союза (ЕС) жестко ре- нет было выпущено в марте 2005 г. Пра-
гулируют деятельность интернет-аптек с вила регламентируют информацию, кото-
помощью обязательной специальной реги- рая может быть опубликована на сайтах,
страции, в результате чего такие компании осуществляющих этот вид деятельности,
вынуждены работать в рамках законода- и вводят некоторые ограничения. Напри-
тельного поля определенной страны. К та- мер, запрещено продавать через Интернет
ким странам относятся Дания, Германия, некоторые противоопухолевые ЛС и ЛС
Нидерланды, Швеция, Швейцария, Вели- для химиотерапии. В правилах прописаны
кобритания [20]. требования к транспортировке и хранению
В США интернет-аптеки имеют ли- ЛС. Если заказываемое ЛС в Германии яв-
цензии на соответствующую деятельность ляется рецептурным, то даже если в стра-
и кроме Интернет-ресурса представлены не-экспортере оно отнесено к безрецеп-
локальными аптечными учреждениями. турным, необходимо предоставить рецепт
интернет-аптеки при приеме заказа от па- от немецкого врача. Кроме того, в руковод-
циентов запрашивают рецепт врача на ре- стве прописаны специальные требования
цептурное ЛС [20]. к пакетам, использующимся для доставки
При этом назначение врача может быть ЛС. На них не указываются данные о со-
получено во время личной либо удаленной держимом. Интернет-аптека несет ответ-
консультации. В ходе удаленной консуль- ственность за качество доставки ЛС [20].
тации врач дает рекомендации на основе В Германии разрешена доставка толь-
собеседования и самооценки пациентом ко тех ЛС, которые одобрены регулятор-
своего состояния и при необходимости вы- ными органами страны или Европейским
писывает рецепт. Не все интернет-аптеки агентством по лекарственным средствам
в США предоставляют сервис удаленной (European Medicines Agency – EMA) [20].
консультации врача и, соответственно, В конце 2013 года в Эстонии нача-
принимают такие рецепты [20]. ла функционировать интернет-аптека. В
Большинство легальных интернет-ап- эстонской аптеке можно приобрести ре-
тек запрашивает оригинал рецепта врача, цептурные ЛС, а также воспользоваться
полученный при личной встрече. Обычно анонимной консультацией. Это стало воз-
стоимость ЛС в таких интернет-аптеках можно благодаря системе электронных ре-
ниже по сравнению с интернет-аптеками, цептов, на которую страна перешла в сере-
предоставляющими услуги (консульта- дине 2009 года [21].
ции) врача в режиме он-лайн. В соответствии с Надлежащей аптеч-
В Дании реализация ЛС с помощью ной практикой в Республике Беларусь ре-
интернет-ресурсов осуществляется через ализация ЛС гражданам через сеть Интер-
сайт Датской фармацевтической ассоци- нет запрещена [22].
15
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Преимуществами торговли ЛС через уничтожения ЛС, проведения приемочно-


Интернет можно считать, как правило, го контроля, контроля за сроками годности
более низкую стоимость ЛС по сравне- ЛС. Повышается вероятность распростра-
нию с обычными аптеками; возможность нения фальсифицированных ЛС.
сохранения приватности и анонимности;
возможность получения консультации с SUMMARY
помощью электронной почты, видеосвязи
или других сервисов, предоставляемых E. G. Elyashevich
интернет-аптеками; удобство приобрете- REALIZATION OF DRUGS OUTSIDE
ния ЛС людьми с ограниченными физиче- OF DRUGSTORES: ADVANTAGES AND
скими возможностями, живущими вдали DISADVANTAGES
от аптечных организаций и лицами, имею- The aim of the work was to study the re-
щими напряженный рабочий график. Не- alization of drugs outside of drugstores, its
которые интернет-аптеки предоставляют advantages and disadvantages. In different
услугу оповещения о необходимости регу- countries of the world there are different mod-
лярного применения ЛС, что способствует els of organization of retail trade in pharmacy.
соблюдению режима лечения. In some of them there is a system of distribu-
К рискам реализации ЛС через Интер- tion of medicinal products only from pharma-
нет можно отнести вероятность приобре- cies. in others it is permitted to trade in food
тения ЛС в интернет-аптеке, которая не stores, groceries, petrol stations, post offices,
имеет лицензии на осуществление соот- news-stalls, by mail, via the Internet. The ad-
ветствующей деятельности. Такие аптеки vantages of the realization of drugs outside of
могут распространять фальсифицирован- drugstores are the increase of access to medi-
ные ЛС. Некоторые аптеки ненадежно за- cines; development of competition; appear-
щищают личную и финансовую информа- ance of an additional sales channel for manu-
цию пользователей, что может привести к facturers. Disadvantages and risks are the
мошенничеству со стороны третьих лиц. decrease of quality of professional services
Некоторые интернет-аптеки не предостав- and safety of self-medication, complexity of
ляют коммуникационные данные (адрес, acceptance inspection, monitoring of storage
телефон), что усложняет процесс решения life of drugs, regulation of storage conditions,
спорных вопросов, направления замеча- destruction of drugs. The likelihood of the
ний и предложений. Нелегальные интер- spread of counterfeit drugs increases.
нет-аптеки могут продавать ЛС без запро- Keywords: drug, realization, trade organ-
са рецепта, что может нанести вред здоро- izations.
вью пациента [20].
ЛИТЕРАТУРА
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Аптека-супермаркет [Электронный
В настоящее время в различных стра- ресурс]. – Режим доступа: http://www.
нах мира ЛС реализуются не только в апте- mednovosti.by/news.aspx?id=283. – Дата
ках, но и в продовольственных магазинах, доступа: 17.12.2014.
на автозаправочных станциях, в отделени- 2. Довбыш, Е. Продажа безрецептур-
ях связи, газетных киосках, по почте, че- ных лекарств непрофильными ритейлера-
рез Интернет и др. Преимуществами такой ми: PRO&CONTRA / Е. Довбыш [Элек-
торговли является повышение доступно- тронный ресурс] – Режим доступа: http://
сти ЛС, особенно для людей с ограничен- www.academia.edu/7207596/. – Дата досту-
ными физическими возможностями, жи- па: 17.12.2014.
вущих вдали от аптечных организаций, и 3. Европейский опыт аптечного дела //
лиц, имеющих напряженный рабочий гра- Аптека.ua [Электронный ресурс]. – 2009.
фик; развитие конкуренции; появление до- – № 674 (3). – Режим доступа: http://www.
полнительного канала сбыта для произво- apteka.ua/article/7702. – Дата доступа:
дителей. Недостатками и рисками являют- 16.12.2014.
ся снижение качества оказания профессио- 4. Фармацевтический ритейл в США
нальных услуг населению и безопасности // Ремедиум [Электронный ресурс]. –
самостоятельного применения ЛС, слож- 2007. – № 1. – Режим доступа: http://www.
ность регламентации условий хранения, remedium.ru/section/detail.php?ID=17499. –
16
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Дата доступа: 16.12.2014. 15. Продажа лекарств в магазинах


5. Аптечное дело в Великобритании – неравные конкурентные условия для
[Электронный ресурс]. – Режим доступа: фармотрасли [Электронный ресурс]. – Ре-
http://medgid.org.ua/farmakologiya-polezno- жим доступа: http://gmpnews.ru/2012/12/
znat/aptechnoe-delo-v-velikobritanii.html. – prodazha-lekarstv-v-magazinax-neravnye-
Дата доступа: 17.12.2014. konkurentnye-usloviya-dlya-farmotrasli/. –
6. Особенности безрецептурного от- Дата доступа: 17.12.2014.
пуска фармацевтических средств в раз- 16. Лекарства в продуктовой тележке
личных странах [Электронный ресурс]. – // Катрен Стиль [Электронный ресурс]. –
Режим доступа: http://www.alavast.ru/ Режим доступа: http://www.katrenstyle.ru/
page/osobennosti-bezrecepturnogo-otpuska- aptechnye-prodazhi/lekarstva-v-produktovoi-
farmacevticheskix-sredstv-v-razlichnyx- telezhke. – Дата доступа: 17.12.2014.
stranax.php. – Дата доступа: 18.12.2014. 17. Врачи и фармакологи Примор-
7. Жукова, О. Аптека в США – больше, ского края против продажи лекарств в
чем аптека / О. Жукова // Аптекарь [Элек- супермаркетах // Деловое интернет-изда-
тронный ресурс]. – 2012. – № 2 (76). – Ре- ние Дальнего Востока [Электронный ре-
жим доступа: http://www.aptekarjournal.ru/ сурс]. – Режим доступа: http://zrpress.ru/
archive.html. – Дата доступа: 14.12.2014. health/primorje_12.02.2013_59277_vrachi-
8. Drugstore в США – уже не аптека, i-farmakologi-primorskogo-kraja-protiv-
еще не супермаркет [Электронный ре- prodazhi-lekarstv-v-supermarketakh.html. –
сурс]. – Режим доступа: http://www.fesmu. Дата доступа: 14.12.2014.
ru/elib/Article.aspx?id=26212. – Дата досту- 18. Реализация лекарственных пре-
па: 17.12.2014. паратов через торговые сети для России
9. Лукьянчук, Е. Аптечные прода- преждевременна // Российская ассоци-
жи: регулированное дерегулирование по- ация аптечных сетей [Электронный ре-
итальянски / Е. Лукьянчук // Еженедель- сурс]. – Режим доступа: http://www.raas.
ник Аптека [Электронный ресурс] – 2012. ru/?module=press&id=506. – Дата доступа:
– №6 (827). – Режим доступа: www.apteka. 17.12.2014.
ua. – Дата доступа: 18.12.2014. 19. О лекарственных средствах: Закон
10. Жукова, О. Аптеки страны спагет- Республики Беларусь от 20 июля 2006 г.,
ти и пиццы / О. Жукова // Аптекарь [Элек- № 161-З в ред. Закона Республики Бела-
тронный ресурс]. – 2012. – № 10/1 (86). – русь от 17.11.2014, № 203-З.
Режим доступа: http://www.aptekarjournal. 20. Место интернет-аптек во всемир-
ru/archive/2012/151/5248.html. – Дата до- ной паутине // Аптека.ua [Электронный
ступа: 17.12.2014. ресурс]. – 2011. – № 811 (40). – Режим до-
11. Аптеки Швеции вводят новую ус- ступа: http://pda.apteka.ua/article/100525. –
лугу – доставка лекарств по рецептам на Дата доступа: 17.12.2014.
дом // Скандинавский информационный 21. Аптеки в Эстонии [Электронный
центр [Электронный ресурс]. – Режим до- ресурс]. – Режим доступа: http://www.
ступа: http://valhalla.ulver.com/f85/t6176. people-pro.ru/diary/note/34. – Дата доступа:
html. – Дата доступа: 16.12.2014. 18.12.2014.
12. Россия: Еще раз о торговле лекар- 22. Об утверждении Надлежащей ап-
ствами в магазинах // Ремедиум [Элек- течной практики: Постановление Мини-
тронный ресурс]. – Режим доступа: http:// стерства здравоохранения Республики
pharmapractice.ru/6374. – Дата доступа: Беларусь от 27 декабря 2006 г., № 120 в
16.12.2014. редакции постановления Министерства
13. Безрецептурный синдром [Элек- здравоохранения Республики Беларусь от
тронный ресурс]. – Режим доступа: 9 сентября 2014 г. № 66 // Национальный
http://saratov.mk.ru/articles/2014/08/05/ реестр правовых актов Республики Бела-
bezrecepturnyy-sindrom.html. – Дата досту- русь, 15.10.2014, № 8/29188.
па: 17.12.2014.
14. Супермаркетам отказали в продаже Контакты:
лекарств [Электронный ресурс]. – Режим тел . 8 (017) 274-54-65,
доступа: http://mnenia.ru/rubric/finance/ Эльяшевич Е.Г.
supermarketam-otkazali-v-prodaje-lekarstv/.
– Дата доступа: 18.12.2014. Поступила 10.01.2015 г.
17
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА
Н. В. Корожан, Г. Н. Бузук

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА ЭФИРНОГО


МАСЛА ТРАВЫ ВИДОВ ЧЕРЕДЫ

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

Проведен сравнительный анализ компонентного состава эфирных масел и


эфирных экстрактов травы нескольких видов череды методом газовой хроматогра-
фии. Установлено, что основными компонентами эфирного масла травы череды
трехраздельной и травы череды олиственной являются производные кариофиллена,
травы череды поникшей – 1- фенил-1,3,5-гептатриин. Установлено сходство компо-
нентного состава эфирных масел и эфирных экстрактов из травы череды трехраз-
дельной и травы череды олиственной кластерным анализом.
Ключевые слова: череды трава, эфирное масло, компонентный состав.

ВВЕДЕНИЕ произрастающих в различных регионах


Европы и Азии [1, 2, 5, 7, 9–12]. При этом
В последнее десятилетие резко увели- компонентный состав эфирных масел зна-
чился интерес к изучению компонентного чительно варьирует в зависимости от ре-
состава и фармакологической активности гиона заготовки. Литературных данных
эфирных масел растений рода череда [1, о компонентном составе эфирного масла
2]. При этом активно исследуется эфир- череды олиственной нами не обнаружено.
ное масло не только применяемой в офи- Изучение компонентного состава эфир-
цинальной медицине надземной части ных масел видов череды, произрастаю-
растений (травы), но и подземных орга- щих на территории Республики Беларусь,
нов [2, 3]. Интерес к последним связан с до сих пор не проводилось.
тем, что в эфирных маслах, полученных Целью данной работы является изуче-
из подземных органов, содержатся в до- ние компонентного состава эфирного мас-
статочно концентрированном виде поли- ла травы видов череды, произрастающих
ацетилены. Известно, что полиацетилены на территории Республики Беларусь.
череды волосистой и череды поникшей
являются в высоких дозах токсичными, в МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
низких дозах обладают противомикроб-
ным, противогрибковым, противовоспа- Объектом исследования являлась тра-
лительным, противомалярийным, про- ва череды трехраздельной, череды поник-
тивоопухолевым эффектом [3–6]. Кроме шей и череды олиственной. Сырье было
того, они могут рассматриваться как хемо- заготовлено в июле-августе 2013 года в
таксономические маркеры рода Bidens [7]. местах ее естественного произрастания в
Необходимо отметить, что полиацетиле- Витебской и Гродненской областях. Заго-
ны и другие компоненты эфирных масел товку, сушку и хранение сырья осущест-
присутствуют в спиртовых извлечениях вляли согласно установленным требова-
из травы видов череды [8], а также, веро- ниям [13].
ятно, могут быть обнаружены и в водных Эфирное масло травы видов череды
извлечениях. Таким образом, компоненты получали методом В Государственной
эфирного масла могут вносить вклад в фармакопеи Республики Беларусь [14].
проявление фармакологической активно- Навеску измельченного сырья (40 г) поме-
сти лекарственных форм на основе травы щали в широкогорлую плоскодонную кол-
видов череды. бу вместимостью 1000 мл, приливали 400
В настоящее время хорошо изучен мл воды очищенной и закрывали резино-
компонентный состав эфирных масел че- вой пробкой с обратным холодильником.
реды трехраздельной и череды поникшей, В пробке снизу укрепляли металлические

18
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

крючки, на которые при помощи тонкой пользовали восходящую хроматографию,


проволоки подвешивали градуированный подвижная фаза – этилацетат: толуол 5:95
приёмник так, чтобы конец холодильника (об/об). После высушивания при комнат-
находился над воронкообразным расши- ной температуре слой сорбента с пятнами
рением приёмника, не касаясь его. Колбу веществ снимали с подложки, вещества
с содержимым нагревали и кипятили в извлекали диэтиловым эфиром и для по-
течение 3 часов. Объём масла в градуи- лученных растворов снимали спектры по-
рованной части приёмника измеряли по- глощения в диапазоне длин волн 220–400
сле окончания перегонки и охлаждения нм на спектрофотометре Specord-250.
прибора до комнатной температуры. Со- Кластерный анализ проводили с
держание эфирного масла рассчитывали в использованием программы Statistica
мл/кг сырья. Advanced 10.0 [15].
Изучение компонентного состава
эфирного масла, а также экстрактов, полу- РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ченных при использовании в качестве экс-
трагента диэтилового эфира, проводили Полученное методом перегонки с во-
методом газовой хроматографии с помо- дяным паром эфирное масло травы видов
щью хромато-масс-спектрометрического череды представляло собой маслянистую
комплекса (HP5890SII5972MS), снабжен- жидкость от коричневого до темно-ко-
ного детектором HP-5972MS, автоматиче- ричневого цвета. Наибольшее содержа-
ским прибором для ввода пробы с исполь- ние эфирного масла отмечено для травы
зованием автосэмплера (ALCHPG1513A), череды поникшей и составляло до 2,5 мл/
лайнером испарителя (Hewlett-Packard кг. В траве череды трехраздельной и траве
Liner 19251-60540). Для измерения расхо- череды олиственной содержание эфирно-
дов газа-носителя использовали пенный го масла составило менее 1 мл/кг, в неко-
измеритель HP 01010113. Запись хрома- торых образцах не обнаруживалось вовсе.
тограмм проводили с помощью системы В эфирном масле травы видов череды
регистрации «ChemStation». методом газовой хроматографии иденти-
Условия хроматографирования: квар- фицированы 14 терпеноидов, 2 произво-
цевая колонка НР-INNOWАХ длиной 60 м дных тиофена, 1 полиацетилен и около
с внутренним диаметром 0,2 мкм и тол- 20 предельных углеводородов. Вид хро-
щиной пленки неподвижной полярной матограмм эфирных масел травы видов
фазы 0,2 мкм. Газ-носитель – гелий, сжа- череды представлен на рисунке 1. Так
тый в баллоне по ТУ 51-940-80. Линейная как предельные углеводороды не влияют
скорость подачи газа-носителя составляла на фармакологические свойства эфирных
от 48,6 мл/мин до 35,4 мл/мин в зависимо- масел, подробное изучение их компонент-
сти от температурного режима; темпера- ного состава и процентного содержания
тура испарителя – 250ºС; температура де- не проводили и на рисунке 1 они не пред-
тектора – 280ºС; время анализа – 120 мин. ставлены.
Содержание компонентов эфирного мас- Процентное содержание отдельных
ла вычисляли исходя из отношения газо- компонентов в эфирном масле травы раз-
хроматографических пиков отдельных личных видов череды представлено в та-
компонентов к сумме веществ на хрома- блице 1.
тограмме без использования корректиру- Из таблицы видно, что в эфирном
ющих коэффициентов. Идентификацию масле травы череды трехраздельной пре-
веществ проводили, сравнивая времена обладают производные кариофиллена
удерживания и полные масс-спектры ве- (кариофиллен оксид и изокариофиллен),
ществ со сведениями библиотеки масс- которые и обусловливают коричневый
спектроскопических данных Wiley08.L. цвет эфирного масла. Также установлено
Дополнительно для изучения эфир- значительное содержание производных
ного масла использовали тонкослойную бета-элемена, акоренона, спатуленола и
хроматографию. Для этого 5 мкл раз- бисобалол оксида.
бавленного диэтиловым эфиром эфирно- Основным компонентом эфирного
го масла наносили на пластинки Sorbfil масла травы череды поникшей является
ПТСХ-АФ-В-УФ (ЗАО «Сорбполимер», 1-фенил-1,3,5-гептатриин, содержание ко-
Российская Федерация) в виде полос. Ис- торого составило более 25% от содержа-
19
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

А – череда трехраздельная; Б – череда поникшая; В – череда олиственная.


1 – сабинен; 2 – терпинен-4-ол; 3 – бета-фарнезен; 4 – бета-селинен; 5 – альфа-селинен;
6 – куркумен; 7 – кариофиллен оксид; 8 – спатуленол; 9 – акоренон; 10 – альфа-бисаболол;
11 – изокариофиллен; 12 – бисаболол оксид; 13 – бета-элемен; 14, 17 – производные тиофена;
15 – 1-фенил-1,3,5-гептатриин; 16 – фитол

Рисунок 1 – Хроматограммы эфирного масла травы видов череды


ния всех компонентов. Данное вещество акоринен, бисаболол оксид. Обнаружены
не обнаружено в эфирном масле травы также компоненты, которые не встреча-
череды трехраздельной и травы череды ются в эфирном масле травы череды трех-
олиственной. Масс-спектр 1-фенил-1,3,5- раздельной и травы череды олиственной,
гептатриина представлен на рисунке 2. такие как сабинен, терпинен-4-ол, бета-
В эфирном масле травы череды по- фарнезен, бета-селинен, куркумен, аль-
никшей обнаружены такие же компонен- фа-бисаболол, производные тиофена. По-
ты, как и у эфирного масла травы чере- лученные нами результаты согласуются с
ды трехраздельной: кариофиллен оксид, литературными данными [2, 5, 9–12].
20
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таблица 1 – Содержание компонентов (%*) в эфирном масле травы видов череды


Время Эфирное масло
удерживания, Компонент травы череды травы череды травы череды
мин трехраздельной поникшей олиственной
11,7 сабинен 0 0,8 0
32,2 терпинен-4-ол 0 1,3 0
35,0 бета-фарнезен 0 0,4 0
35,4 бета-селинен 0 0,8 0
37,9 альфа-селинен 0 1,8 0
40,7 куркумен 0 1,0 0
50,5 кариофиллен оксид 5,2 1,1 6,9
54,7 спатуленол 1,6 0 0
56,9 акоренон 2,6 0,4 2,0
57,6 альфа-бисаболол 0 0,5 0
64,8 бисаболол оксид 1,3 0,6 0
65,2 бета-элемен 3,7 0 0
68,5 изокариофиллен 8,6 0 0
69,4 1-фенил-1,3,5-гептатриин 0 26,1 0
70,2 фитол 11,6 0 9,0
74,4 производное тиофена 0 1,6 0
*Примечание: содержание компонентов (%) рассчитывали, как отношение площадей отдельных
пиков на хроматограмме к суммарной площади всех хроматографических пиков.

Рисунок 2 – Масс-спектр 1-фенил-1,3,5-гептатриина

В эфирном масле травы череды оли- удалось проанализировать только эфирное


ственной преобладает кариофиллен оксид. масло травы череды поникшей. Обнаруже-
Его содержание составляет до 7% от сум- но четыре компонента в виде желтых либо
мы всех компонентов; также обнаружен оранжевых пятен, расположенных во вто-
акоренон. рой трети хроматографической пластинки.
Для эфирного масла травы череды Для 1-фенил-1,3,5-гептатриина снят спектр
трехраздельной и травы череды олиствен- поглощения, представленный на рисунке
ной характерно значительное содержание 3. Полученный нами спектр согласуется с
тритерпенового соединения фитола (9 и литературными данными [6]. Содержание
11,6% соответственно). компонентов эфирного масла травы череды
Методом тонкослойной хроматографии трехраздельной и травы череды олиствен-
21
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

2,5

оптическая плотность 1,5

0,5

0
220 260 300 340 380
длина волны, нм

Рисунок 3 – Спектр поглощения фенил-1,3,5-гептатриина

ной значительно меньше и на хроматограм- нентный состав эфирных экстрактов тра-


ме они не обнаруживаются. вы видов череды, что представлено в та-
Нами дополнительно изучен компо- блице 2.

Таблица 2 – Содержание компонентов (%*) в эфирном экстракте из травы видов череды


Время Эфирный экстракт
удерживания, Компонент травы череды травы череды травы череды
мин трехраздельной поникшей олиственной
35,4 селинен 0 2,8 0
50,5 кариофиллен оксид 0 1,3 0,6
69,4 1-фенил-1,3,5-гептатриин 4,2 15,4 3,1
70,2 фитол 0 0 0,7
*Примечание: содержание компонентов (%) рассчитывали, как отношение площадей отдельных
пиков на хроматограмме к суммарной площади всех хроматографических пиков.

Как видно из приведенных данных, и фитол. Содержание данных компонен-


компонентный состав эфирных экстрактов тов отличается от таковых в эфирном
менее разнообразен по сравнению с эфир- масле.
ным маслом растений. Главным отличием Сходство компонентного состава
эфирных экстрактов травы череды трех- эфирных масел и эфирных экстрактов из
раздельной и травы череды олиственной травы исследуемых видов череды изучали
от соответствующего эфирного масла яв- кластерным анализом, оценивая Евкли-
ляется наличие в экстракте 1-фенил-1,3,5- дово расстояние. Методом кластеризации
гептатриина. Содержание данного полиа- установлено, что наибольшим сходством
цетилена в экстрактах составило 4,2% для компонентного состава эфирных масел и
травы череды трехраздельной и 3,1% для эфирных экстрактов характеризуются тра-
травы череды олиственной. В эфирном ва череды трехраздельной и трава череды
экстракте травы череды поникшей содер- олиственной (Евклидово расстояние равно
жание 1-фенил-1,3,5-гептатриина состав- 10,2); компонентный состав эфирного мас-
ляет 15%, что более чем в 1,5 раза меньше, ла и эфирного экстракта отличается наи-
чем в эфирном масле. более значимо (Евклидово расстояние со-
Кроме данного вещества, в эфирном ставляет 32,8). Это еще раз подчеркивает
экстракте травы череды поникшей об- возможность использования череды оли-
наружены селинен, кариофиллен оксид ственной как дополнительного источника
и фитол, в эфирном экстракте травы че- получения лекарственного растительного
реды олиственной – кариофиллен оксид сырья череды травы.

22
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ЗАКЛЮЧЕНИЕ of Bidens pilosa roots extract correlated with


polyacetylene and flavonoids / F. Q. Oliveira
Проведен сравнительный анализ ком- [et al.] // Journal of Ethnopharmacology. –
понентного состава эфирных масел и эфир- 2004. – № 93. – P. 39–42.
ных экстрактов травы нескольких видов 4. In vitro antifungal activity of phenyl-
череды (череды трехраздельной, череды heptatriyne from Bidens cernua L. against
поникшей и череды олиственной) методом yeasts / N.P. Rybalchenko [et al.] // Fitotera-
газовой хроматографии. Установлено, что pia. – 2010. – №81. – Р. 336–338.
основными компонентами эфирного масла 5. Fragrance, Chemical Composition and
травы череды трехраздельной и травы че- Toxicity of the Essential Oil in Erect Bur-
реды олиственной являются производные marigold (Bidens tripartita L.) / M. S. Yun
кариофиллена, травы череды поникшей – [et al.] // Korean Journal of Weed Science.
1- фенил-1,3,5-гептатриин. Указанный по- – 2012. – №3. – Р. 195–203.
лиацетилен не обнаружен в эфирном масле 6. HPLC method development and vali-
других исследуемых видов череды, но об- dation of cytotoxic agent phenyl-heptatriyne
наружен во всех эфирных экстрактах тра- in Bidens pilosa with ultrasonic-assisted
вы видов череды. Установлено сходство cloud point extraction and preconcentration
компонентного состава эфирных масел и / P. Trivedi [et al.] // Biomed. Chromatogr. –
эфирных экстрактов из травы череды трех- 2011. – № 25. – P. 697–706.
раздельной и травы череды олиственной 7. Коновалов, Д. А. Полиацетилено-
кластерным анализом. вые соединения у видов рода Bidens / Д. А.
Коновалов, А. М. Насухова // Фармация и
SUMMARY фармакология. – 2014. – №2. – С. 34 – 66.
8. Корожан, Н. В. Сравнительный ана-
N. V. Karazhan, G. N. Buzuk лиз компонентного состава спиртовых из-
COMPARATIVE ANALYSIS OF THE влечений из травы видов череды методом
COMPONENTS OF ESSENTIAL OIL жидкостной хроматографии / Н. В. Коро-
FROM BIDENS SPECIES HERB жан, Г. Н. Бузук // Вестник фармации. –
The comparative analysis of the com- 2013. – № 4. – С. 49–56.
ponent composition of essential oils and es- 9. Essential oils of Bidens tripartita L.
sential extracts of several species of Bidens collected during period of 3 years composi-
herb is carried out by gas chromatography. tion variation analysis / V. Kaskoniene [et
The main components of the essential oil of al.] // Acta Physiol Plant. – 2012. – №7. – Р.
Bidens tripartita herb and Bidens frondosa 1056–1064.
herb were caryophyllene derivatives. The 10. Насухова, А. М. Состав эфирного
main component of the essential oil of Bidens масла череды поникшей / А. М. Насухова,
cernua herb was 1-phenyl-1,3,5-heptatriуnе. Д. А. Коновалов // [Электронный ресурс]:
Similarity of component composition of http:russian-film.ru/articles/article-19.doc. –
Bidens tripartira herb and Bidens frondosa Дата доступа: 18.03.2014.
herb is shown by cluster analysis. 11. Chemical composition and chemo-
Keywords: Bur–marigold herb, essential metric analysis of essential oils variation of
oil, component composition. Bidens tripartita L. during vegetation stages /
V. Kaskoniene [et al.] // Acta Physiol Plant. –
ЛИТЕРАТУРА 2011. – №33. – Р. 2377–2385.
12. Composition of essential oil of
1. Antimicrobial and antifungal ac- Bidens cernua L., Asteraceae from Serbia /
tivities of the extracts and essential oils of S. Petrovic [et al.] // J. Essent. Oil Res. –
Bidens tripartitа / M. Tomczykowa [et al.] // 2009. – №1. – P. 41–42.
Folia Histochem Cytobiol. – 2008. – №3. – 13. TKP 450-2012 (02041) Производ-
Р. 389–393. ство лекарственных средств. Надлежащая
2. Composition of the Essential Oil of практика выращивания, сбора, хранения
Bidens tripartita L. Roots and Its Antibac- лекарственного растительного сырья.
terial and Antifungal Activities / M. Tomc- 14. Государственная фармакопея Ре-
zykowa [et al.] // Journal of medicinal food. спублики Беларусь (ГФ РБ II): Разработа-
– 2011. – №4. – Р. 428–433. на на основе Европейской фармакопеи. В
3. New evidences of antimalarial activity 2 т. Т. 1. Общие методы контроля лекар-
23
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ственных средств / М-во здравоохр. Респ. Адрес для корреспонденции:


Беларусь, УП «Центр экспертиз и испы-
таний в здравоохранении»; под общ. ред. 210023, Республика Беларусь,
г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
А. А. Шерякова. – Молодечно: Тип. «По- УО «Витебский государственный
беда», 2012. – 1220 с. ордена Дружбы народов
15. Реброва, О. Ю. Статистический медицинский университет»,
анализ медицинских данных. Приме- кафедра фармакогнозии
нение пакета прикладных программ с курсом ФПК и ПК,
STATISTICA / О. Ю. Реброва. – М.: Медиа тел. раб.: 8 (0212) 37-09-29,
Сфера, 2002. – 312 с. Корожан Н. В.
Поступила 25.11.2014 г.

Н. А. Кузьмичева, Г. Н. Бузук, Е. В. Ломако

ЛИНЕЙНЫЕ И НЕЛИНЕЙНЫЕ СВЯЗИ УРОЖАЙНОСТИ И ПРОЕКТИВНОГО


ПОКРЫТИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет


На модельных объектах установлено, что зависимость между урожайностью
и проективным покрытием является линейной в диапазоне значений проективного
покрытия от 0 до 50-60%. При дальнейшем его увеличении зависимость принимает
нелинейный характер и наилучшим образом аппроксимируется функцией Weibull.
Экстраполяция и расчет максимальной урожайности возможны только при нали-
чии экспериментальных данных об урожайности на площадках с проективным по-
крытием в диапазоне значений до 70-80% и более.
Ключевые слова: проективное покрытие, урожайность, Pyrola rotundifolia,
Ramischia secunda, Fragaria vesca, Tussilago farfara, Vaccinium vitis-idaea, функция Weibull.

ВВЕДЕНИЕ лекарственного растительного сырья необ-


ходимо расширить круг объектов исследо-
Метод проективного покрытия тра- вания. К их числу можно отнести побеги
диционно используется в ресурсоведении представителей семейства грушанковые, а
для определения урожайности невысоких также листья земляники и цветки мать-и-
травянистых растений и кустарничков. мачехи.
Определяется проективное покрытие (ПП) Целью настоящего исследования яв-
и масса сырья в 1% ПП. Перемножив полу- ляется дальнейшее изучение характера за-
ченные значения, получают урожайность, висимости между урожайностью и проек-
подразумевая при этом, что связь между тивным покрытием.
ПП и урожайностью линейная. Однако
проведенные ранее исследования выявили МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
нелинейный характер связей проективного
покрытия с урожайностью побегов брус- Исследования проводили в природ-
ники, используемой в качестве модельного ных популяциях грушанки круглолистной
объекта [1–2]. Лучшими аппроксимирую- (Pyrola rotundifolia L.), рамишии однобо-
щими функциями для зависимостей фи- кой (Ramischia secunda (L.) Garcke), земля-
томассы и ПП были функции Chapman- ники лесной (Fragaria vesca L.) и мать-и-
Richards и Weibull [2]. мачехи (Tussilago farfara L.).
Для дальнейшей оценки возможности Ранее нами с целью объективизации
использования этих и подобных им функ- определения проективного покрытия был
ций для описания зависимостей между предложен способ фото точек. Способ ос-
урожайностью и ПП других лекарствен- нован на использовании регулярной сети
ных растений и морфологических групп точек, наносимой на цифровое изображе-
24
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ние растительного покрова, с последующим Для аппроксимации зависимостей


подсчетом числа меток, локализованных на между проективным покрытием и урожай-
исследуемом объекте [3]. Определение про- ностью использовали 20 асимптотических
ективного покрытия проводили в типичных функций [2]. В качестве критерия опти-
местообитаниях исследуемых видов лекар- мальности функции использовали инфор-
ственных растений в окрестностях г. Ви- мационный критерий Акаике (AIC) [4].
тебска, Республика Беларусь. Закладывали Ошибку определения (RMSE) рассчи-
пробные площади размером 100–400 м2. тывали по формуле (3) [5]:
В пределах пятен исследуемых видов
на каждой пробной площади делали фото ( yi − yhati )2 ,
растительного покрова с высоты 0,4–0,5 м RMSE = ∑ N
(3)
с помощью цифрового фотоаппарата (раз-
мер изображения 2800 х 2000 пикселей,
около 2,8 Мб). Одновременно в том же ме- где RMSE – средняя квадратичная
сте с учетной площадки размером 25 х 20 ошибка определения; yi – фактическое зна-
см срезали все сырьевые части растений чение; yhati – найденное по уравнению ре-
(побеги, листья или цветки) и взвешивали грессии, в %; N – число пар значений (20).
с точностью до 0,01 г. Площадки распола-
гали систематически вдоль линии, прохо- РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
дящей от одного края пятна растений до
другого через область максимальной плот- Как уже нами было показано ранее [2],
ности особей. в зависимости от выбора показателя в ка-
В условиях лаборатории на цифровое честве зависимой или независимой пере-
изображение растительного покрова под- менной результаты аппроксимации при
программой Grid программы Imagej (http:// нелинейной форме зависимости могут су-
rsbweb.nih.gov/ij) накладывали сетку из то- щественно различаться. В связи с этим, в
чек в пределах рамки, ограничивающей качестве зависимой переменной, как и в
площадку для срезки. Работу с подпро- предыдущей работе, нами принято про-
граммой осуществляли следующим об- ективное покрытие, а независимой – уро-
разом. После вызова подпрограммы Grid жайность (проективное покрытие создает-
в появившемся меню устанавливали Grid ся фитомассой растений, а не наоборот).
Type (crosses), Color (blue или black) и Area Графическое представление зависимо-
per Point. Значение последнего рассчиты- стей между урожайностью и проективным
вали по формуле (1): покрытием исследуемых видов растений
выявило как их нелинейный, так и линей-
(L · S) / N , (1) ный характер. Наилучшие результаты из
20 изученных функций, как и в предыду-
где L и S – длина и ширина изображе- щем исследовании [2], показала функция
ния соответственно, в пикселях; N – общее Weibull (таблица, рисунки 1–2).
число меток на матрице изображения, 200. Анализ полученных зависимостей пока-
Тип сетки (Grid Type) и цвет (Color) зывает, что линейный характер связи между
выбирали удобными для локализации мет- урожайностью и проективным покрытием
ки на цветном фоне изображения. наблюдается при низких значениях послед-
Затем с помощью подпрограммы Cell него. При его росте линейная зависимость
Counter программы Imagej подсчитывали постепенно превращается в нелинейную.
число меток, локализованных на поверх- Это также прослеживается и на мате-
ности исследуемых растений. риалах исследования с брусникой (рису-
Проективное покрытие рассчитывали нок 3). В диапазоне значений проектив-
по формуле (2): ного покрытия 16,8–85,6% (рисунок 3, А)
первого местообитания наблюдается ясно
ПП = (n / N) · 100, (2) выраженный нелинейный характер связи,
в то время как в другом местообитании
где ПП – проективное покрытие, в %; брусники в диапазоне 14,1–75,6% (рису-
n – число меток на поверхности исследуе- нок 3, Б) она приближается к линейной.
мых растений; N – общее число меток на Таким образом, при увеличении про-
матрице изображения. ективного покрытия, вплоть до смыкания
25
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

70 80

60 70
Проективное покрытие, %

Проективное покрытие, %
60
50
50
40
40
30
30
20
20

10 10

0 0
0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 5
Фитомасса, г/дм2 Фитомасса, г/дм2
Ramischia secunda Pyrola rotundifolia
Рисунок 1 – Зависимость урожайности лекарственного сырья и проективного покрытия
побегов рамишии однобокой и грушанки круглолистной

60 12

50 10
Проективное покрытие, %

Проективное покрытие, %

40 8

30 6

20 4

10 2

0 0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1 0,5 1 1,5
Фитомасса, г/дм2 Фитомасса, г/дм2
Fragaria vesca Tussilago farfara
Рисунок 2 – Зависимость урожайности лекарственного сырья и проективного покрытия
листьев земляники лесной и цветков мать-и-мачехи
и перекрытия органов исследуемых ви- нако значение коэффициента a (асимпто-
дов растений, линейная зависимость по- та) функции Weibull (таблица), которое из
степенно трансформируется в нелиней- определения не может быть больше 100%,
ную. Хотя линейная зависимость хорошо в случае мать-и-мачехи явно его превыша-
аппроксимируется как функцией Weibull, ет, что не позволяет рассчитать максималь-
так и с помощью линейной регрессии, од- ную урожайность.
26
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

А 90 Б 90

80 80

70 70
Проективное покрытие, %

Проективное покрытие, %
60 60

50 50

40 40

30 30

20 20

10 10

0 0
0 0 4 6 8 10 0 0 4 6
Фитомасса, г/дм2 Фитомасса, г/дм2
Рисунок 3 – Зависимость урожайности лекарственного
сырья и проективного покрытия брусники

Таблица – Параметры функции Weibull для различных видов лекарственных растений


Вид растения b a c R2 RMSE
  y = a· (1-exp(-b·x^c)) = Weibull
Ramisсhia secunda 79,61 0,252021 1,398213 0,82 6,20
Pyrola rotundifolia 79,172 0,531054 1,434574 0,98 3,03
Tussilago farfara 11398 0,000876 1,000433 0,95 0,47
Fragaria vesca 62,52 1,97351 1,327394 0,96 3,07
Vaccinium vitis-idaea А 90,86 0,186398 1,318814 0,97 2,95
Vaccinium vitis-idaea Б 102,63 0,251315 1,093979 0,90 5,17
*
Примечание: a, b и c – коэффициенты уравнений, R2 – коэффициент детерминации, RMSE –
средняя квадратичная ошибка определения.

Выходом из создавшегося положения SUMMARY


является расчет коэффициентов функции
Weibull для большего диапазона значений G. N. Buzuk, N. A. Kuzmichova, A. V. Lamaka
урожайности и проективного покрытия до LINEAR AND NON-LINEAR
70–80% и выше. DEPENDENCY BETWEEN
В противном случае прогностическое PRODUCTIVITY AND PROJECTIVE
значение линейной зависимости ограни- COVERING OF MEDICINAL PLANTS
чивается изученным диапазоном значений It was determined on model objects that
проективного покрытия и урожайности, the dependency between projective covering
использованных для расчета коэффициен- and productivity is linear on projective cov-
тов функции Weibull или линейной регрес- ering values range from 0 to 50-60%. This
сии. Экстраполяция и расчет максималь- dependency takes non-linear format while
ной урожайности (при 100% проективном projective covering is growing and it is best
покрытии) не представляется возможным, approximated by Weibull function. Extrapo-
поскольку в целом предполагается не- lation and calculation of maximal produc-
линейный характер связи урожайности и tivity are possible only if experimental data
проективного покрытия. about productivity on the squares with projec-

27
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

tive covering values range is 70-80% or more лении проективного покрытия и урожайно-
are present. сти лекарственных растений / Г. Н. Бузук //
Keywords: projective covering, produc- Вестник фармации, 2014. – №1. – С. 59 – 67.
tivity, Pyrola rotundifolia, Ramischia secun- 4. Kramer, R. Chemometric techniques
da, Fragaria vesca, Tussilago farfara, Vac- for quantitative analysis. – Marcel Dekker,
cinium vitis-idaea, Weibull function. Inc.: New York, Basel. – 1998. – 110 p.
Akaike, H. A new look at the statisti-
ЛИТЕРАТУРА cal model identification / H. Akaike // IEEE
Transactions on Automatic Control. – 1974. –
1. Бузук, Г. Н. Определение проектив- Vol. 19. – P. 716-723.
ного покрытия и урожайности при исполь- Адрес для корреспонденции:
зовании фото точек (photo point method) / Г.
Н. Бузук // Вестник фармации, 2013. – №3. – 210023, Республика Беларусь,
С. 74–80. г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
2. Бузук, Г. Н. Характер связей между УО «Витебский государственный
проективным покрытием и урожайностью ордена Дружбы народов
побегов брусники в сосняке зеленомош- медицинский университет»,
кафедра фармакогнозии
ном / Г. Н. Бузук // Вестник фармации, c курсом ФПК и ПК,
2013. – №4. – С. 44-49. тел. раб.: 8(0212) 37-09-29,
3. Бузук, Г. Н. Применение функций ро- Кузьмичева Н. А.
ста и асимптотических функций при опреде- Поступила 09.12.2014 г.

О. А. Ёршик, Г. Н. Бузук

ПРОАНТОЦИАНИДИНЫ КОРНЕВИЩ С КОРНЯМИ САБЕЛЬНИКА


БОЛОТНОГО В УСЛОВИЯХ ТЕРМИЧЕСКОЙ И МЕХАНОХИМИЧЕСКОЙ
ОБРАБОТКИ

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

Изучено влияние добавок аскорбиновой кислоты на количественное содержа-


ние проантоцианидинов при механохимической обработке корневищ с корнями са-
бельника болотного. При термической активации настоек, полученных из этих об-
разцов, резкого снижения в содержании проантоцианидинов не происходит. Аскор-
биновая кислота, введенная в корневища с корнями сабельника болотного механохи-
мически, защищает проантоцианидины от деградации.
Добавки растворов аскорбиновой кислоты в настойки из корневищ с корнями
сабельника болотного замедляют деградацию проантоцианидинов при их термо-
статировании. Защитные свойства аскорбиновой кислоты носят прямо пропорци-
ональный концентрации характер.
Ключевые слова: сабельник болотный, Comarum palustre L., проантоцианиди-
ны, механохимическая обработка, аскорбиновая кислота.

ВВЕДЕНИЕ Такие заболевания, как ревматоидный


артрит, обменно-дистрофический остео-
В последнее время все большее внима- артроз, артрит, спондилоартроз, остеохон-
ние уделяется разработке лекарственных дроз позвоночника протекают, как прави-
средств, содержащих биологически актив- ло, в хронической форме, поэтому прием
ные вещества растительного происхожде- назначаемых противовоспалительных
ния, сырьевой базой для получения кото- лекарственных средств является длитель-
рых служат официнальные лекарственные ным, иногда пожизненным. Применяемые
растения. противовоспалительные средства оказыва-

28
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ют влияние не только на опорно-двигатель- Параллельно готовили серии настоек


ную систему, но и на желудочно-кишечный с добавками растворов аскорбиновой кис-
тракт в виде многочисленных побочных лоты. Для этого к полученным настойкам
эффектов. Лекарственные средства из рас- прибавляли растворы аскорбиновой кис-
тительного сырья обладают значительно лоты 0,1% и 1,0%. Конечная концентрация
лучшей переносимостью, возможностью аскорбиновой кислоты в настойках состав-
длительного приема по сравнению с син- ляла 50 и 500 мг/л соответственно.
тетическими лекарственными средствами Настойки разливали в пенициллино-
[1, 2]. вые флаконы, герметично укупоривали
Биологически активные вещества, алюминиевыми колпачками с помощью
выделенные из лекарственных растений, обкаточного механизма и термостатирова-
обладают широким спектром фармако- ли при температуре 40, 70ºС в течение раз-
логических свойств. Особый интерес для личного времени.
современной медицины представляют фе- После проведения термической об-
нольные соединения, в частности, проан- работки в настойках корневищ с корнями
тоцианидины. Биологическая активность сабельника болотного определяли количе-
проантоцианидинов проявляется в анти- ственное содержание проантоцианидинов
микробном [3], противовоспалительном спектрофотометрическим методом. По-
[4], антиканцерогенном и антиоксидант- терю при термостатировании 70% спирта
ном свойствах [5–7]. этилового контролировали взвешиванием
Целью настоящей работы является ис- укупоренных пенициллиновых флаконов
следование влияния термической обработ- до и после выдерживания в термостате.
ки настоек на количественное содержание Относительную плотность настоек
в них биологически активных веществ, определяли согласно действующей норма-
а также влияние механохимической об- тивной документации [8].
работки корневищ с корнями сабельника Количественное определение проан-
болотного на стабильность полученных из тоцианидинов в настойке. 1,0 мл настойки
них настоек. помещали в мерную колбу вместимостью
10,0 мл, доводили 70% спиртом этиловым
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ до метки. Раствор в колбе перемешивали.
Испытуемый раствор: 0,10 мл полу-
В качестве исходного сырья исполь- ченного раствора помещали в круглодон-
зовали корневища с корнями сабельника ную колбу вместимостью 50 мл, прибавля-
болотного, кислоту аскорбиновую «ч.д.а.». ли 0,90 мл 70% спирта этилового, 6,0 мл
Механохимическую обработку сырья 5% раствора кислоты хлороводородной
проводили в мельнице пружинного типа. концентрированной в н-бутаноле, 0,20 мл
Время обработки – 10 минут. Также про- железосодержащего реактива (2% раствор
водили механохимическую обработку кор- сульфата железа (III) аммония в растворе
невищ с корнями сабельника болотного с 2М кислоты хлороводородной), нагревали
добавлением кислоты аскорбиновой (5% с обратным холодильником на кипящей
от массы сырья). водяной бане в течение 60 мин и охлаждали
Из образцов сырья получали суммар- до комнатной температуры.
ные комплексы фенольных соединений в Измеряли оптическую плотность по-
форме спиртовых настоек: исходный обра- лученного раствора на спектрофотометре
зец; образец, механически обработанный при длине волны 550 нм в кювете с толщи-
без добавок; образец, механохимически ной слоя 10 мм, используя в качестве рас-
обработанный с добавкой кислоты аскор- твора сравнения так же приготовленный
биновой. раствор без нагревания.
Настойку корневищ с корнями сабель- Содержание проантоцианидинов
ника болотного получали методом пер- (X,%) в настойке вычисляли по формуле
коляции 70% спиртом этиловым. Соот- (1):
ношение сырья и экстрагента составляло
1:5. Измельченные корневища с корнями (1),
сабельника болотного предварительно в
течение 4 часов выдерживали с равным где A – оптическая плотность испыту-
объемом 70% спирта этилового. емого раствора;
29
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

V1 – объем раствора для спектрофото- V2 – объем раствора для спектрофото-


метрирования, мл (7,2); метрирования, мл (7,20);
– удельный показатель поглоще- V3 – объем экстракта, взятый для опре-
ния продукта реакции суммы проантоци- деления, мл (0,10);
анидинов корневищ с корнями сабельника m – масса сырья, г;
болотного с сульфатом железа (III) аммо- W – потеря в массе при высушивании,
ния и кислотой хлороводородной, равный %;
352; – удельный показатель поглоще-
V2 – объем разбавленной настойки, ния продукта реакции проантоцианидинов
взятый для определения, мл (0,10); корневищ с корнями сабельника болотного
ρ – плотность настойки, г/см3. с сульфатом железа (III) аммония и кисло-
Количественное определение проан- той хлороводородной, равный 352.
тоцианидинов в корневищах с корнями
сабельника болотного. Около 0,5000 г. из- РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
мельченного (250 мкм) сырья помещали
в круглодонную колбу вместимостью 100 Результаты изучения процессов де-
мл, прибавляли 20,0 мл 70% спирта эти- градации проантоцианидинов в настойках
лового, закрыли пробкой, взвешивали с при температуре 40ºС в течение 25 дней
погрешностью ±0,01 г, присоединяли к (n) представлены на рисунке 1.
обратному холодильнику и нагревали на При выдерживании настойки корне-
кипящей водяной бане в течение 20 мин. вищ с корнями сабельника болотного в
После охлаждения до комнатной темпера- термостате при температуре 40ºС в тече-
туры колбу с пробкой взвешивали и дово- ние 21 дня наблюдалось постепенное сни-
дили до первоначальной массы 70% спир- жение содержания проантоцианидинов
том этиловым. Содержимое колбы цен- с резким снижением в последующие дни
трифугировали в течение 10–15 мин со термической обработки. При этом в на-
скоростью 2000–3000 об/мин и собирали стойке, полученной из корневищ с корнями
надосадочную жидкость. сабельника болотного, обработанных ме-
Испытуемый раствор: 0,10 мл полу- ханохимически с добавкой аскорбиновой
ченного извлечения корневищ с корнями кислоты, резкого снижения в содержании
сабельника болотного помещали в кругло- проантоцианидинов не происходило. Та-
донную колбу вместимостью 50 мл, при- ким образом, аскорбиновая кислота, вве-
бавляли 0,90 мл 70% спирта этилового, 6,0 денная в корневища с корнями сабельника
мл 5% раствора кислоты хлороводородной болотного механохимически, защищала
концентрированной в н-бутаноле, 0,20 мл проантоцианидины от деградации.
железосодержащего реактива (2% раствор В настойке, полученной из корневищ
сульфата железа (III) аммония в растворе с корнями, подвергнутых механической
2М кислоты хлороводородной), нагревали обработке без добавок, наблюдалось по-
с обратным холодильником на кипящей степенное снижение суммы проантоциа-
водяной бане в течение 60 мин и охлажда- нидинов в течение 7 дней термической об-
ли до комнатной температуры. работки. При механохимической обработ-
Измеряли оптическую плотность по- ке сырья происходило его повреждение.
лученного раствора на спектрофотометре Разрушение мембранной целостности кле-
при длине волны 550 нм в кювете с толщи- ток увеличивало риск протекания реакций
ной слоя 10 мм, используя в качестве рас- окисления и формирования комплексов с
твора сравнения так же приготовленный молекулами белков, полисахаридов, алка-
раствор без нагревания. лоидов, нуклеиновых кислот. Полярные
Содержание проантоцианидинов составы, такие как проантоцианидины, со-
(X,%) в абсолютно сухом сырье вычисляли держатся в вакуолях клетки. Во время ме-
по формуле (2): ханохимической обработки вакуоли разру-
шаются, позволяя формированию сильных
(2), водородных связей между проантоциани-
динами, с одной стороны, и белками, по-
где A – оптическая плотность испыту- лисахаридами и нуклеиновыми кислотами
емого раствора; с другой стороны. По-видимому, аскор-
V1 – объем экстракта, мл (20,0); биновая кислота вступает в конкурентное
30
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

СБ40 – корневища с корнями необработанные; СБА40 – корневища с корнями,


обработанные механически; СБ+АК40 – корневища с корнями, обработанные
механохимически с аскорбиновой кислотой
Рисунок 1 – Влияние продолжительности термической обработки (40ºС) на содержание
проантоцианидинов (X,%) в образцах настоек

взаимодействие с молекулами белков, по- В условиях термостатирования в кор-


лисахаридов, нуклеиновых кислот, таким невищах с корнями сабельника болотного
образом, защищая проантоцианидины от и настойке из них (СБ40) процессы де-
деградации. градации проантоцианидинов протека-
Результаты изучения процессов дегра- ют сложным образом. В течение первых
дации проантоцианидинов в настойках при 4 дней выдерживания в термостате в кор-
их термостатировании при температуре невищах с корнями сабельника болотного
70ºС в течение 25 дней (n) не представле- происходит незначительное увеличение
ны, так как в первые сутки термостатиро- суммы проантоцианидинов (рисунок 2).
вания при данной температуре происходит В настойке из корневищ с корнями
полное разрушение проантоцианидинов. сабельника болотного деградация проан-

X,%
7 настойка
сырье
6

0
n
0 5 10 15 20 25

Рисунок 2 – Влияние продолжительности термической обработки (40ºС) на


содержание проантоцианидинов (X,%) в корневищах с корнями сабельника болотного и
настойке, полученной из необработанного сырья (СБ40)

31
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

тоцианидинов протекает в течение 21 дня В настойке протекает полное разру-


термической обработки. В лекарственном шение проантоцианидинов. В корневищах
растительном сырье (корневища с корнями с корнями сабельника болотного полного
сабельника болотного) деградация проан- разрушения не происходит.
тоцианидинов протекает в течение 11 дней Настойки из образцов корневищ с кор-
термической обработки. Это объясняется нями сабельника болотного, полученных в
тем, что в условиях термической обработ- условиях их механохимической обработки
ки происходит разрыв и высыхание ваку- с добавкой кислоты аскорбиновой, явля-
олей, что способствует взаимодействию ются стабильными, резкого снижения про-
проантоцианидинов с белками, полисаха- антоцианидинов при хранении не наблю-
ридами и нуклеиновыми кислотами и, сле- дается. Добавки растворов аскорбиновой
довательно, проантоцианидины становят- кислоты замедляют деградацию проанто-
ся не доступными для экстракции (перехо- цианидинов корневищ с корнями сабель-
дят в неэкстрагируемые формы). ника болотного (рисунок 3).

Рисунок 3 – Влияние продолжительности термической обработки (40ºС) на содержание


проантоцианидинов (X,%) в присутствии растворов аскорбиновой кислоты

ЗАКЛЮЧЕНИЕ SUMMARY

Введение аскорбиновой кислоты в O. A. Yorshyk, G. N. Buzuk


настойку на стадии механохимической PROANTHOCYANIDINS OF RHIZOMES
обработки корневищ с корнями сабель- WITH ROOTS OF COMARUM PALUSTRE L.
ника болотного повышает стабильность IN TERMS OF THERMAL AND
настойки при ее термической обработке, MECHANOCHEMICAL TREATMENT
препятствует деградации проантоциани- It was studied the influence of ascorbic
динов. acid supplements upon the mechanochemical
Настойки, полученные из корневищ treatment of rhizomes with roots of Comarum
с корнями сабельника болотного, подвер- palustre L. Upon the thermal treatment of
гнутых механической обработке без доба- tinctures, derived from these samples, the
вок, при термической обработке являются sharp decline of proanthocyanidins is not oc-
нестабильными. При механической обра- curred. Ascorbic acid, injected into rhizomes
ботке корневищ с корнями сабельника бо- with roots of Comarum palustre L. in a mech-
лотного содержание экстрагируемых про- anochemical way, protects proanthocyanidins
антоцианидинов резко снижается. from degradation.
Добавки растворов аскорбиновой кис- The supplements of ascorbic acid tinc-
лоты замедляют деградацию проантоциа- tures delay the degradation of proanthocy-
нидинов корневищ с корнями сабельника anidins of rhizomes with roots of Comarum
болотного при их термостатировании. palustre L. Protective properties of ascorbic

32
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

acid have directly proportional concentration cap / A. Sokół-Lẹtowska [et al.] // Food


character. Chem. – 2006. – Vol. 10. – P. 1-7.
Keywords: Comarum palustre L., proan- 6. Antioxidant flavonols and coro-
thocyanidins, mechanochemical treatment, nary heart disease risk / M.G.L. Hertog [et
ascorbic acid. al.] // Lancet. – 1996. – Vol. 349. – P. 699.
7. Antioxidant properties of proanthocy-
ЛИТЕРАТУРА anidins of Uncaria tomentosa bark decoction:
a mechanism for anti-inflammatory activity /
1. Об исследовании влияния БАД «Са- C. Gonçalves [et al.] // Phytochemistry. –
бельник – Эвалар» в комплексном лечении 2005. – Vol. 66. – P. 89–98.
воспалительных и обменно-дистрофических 8. Государственная фармакопея
заболеваний опорно-двигательного аппарата Республики Беларусь (ГФ РБ II): Раз-
/ Л. Г. Прокопьева [и др.] // Актуальные про- работана на основе Европейской фар-
блемы создания новых лек. препаратов при- макопеи. В 2 т. Т. 1. Общие методы кон-
родного происхождения: мат. 7 Междунар. троля лекарственных средств / М-во
съезда. – Пушкин. – 2003. – С. 454–457. здравоохр. Респ. Беларусь, УП «Центр
2. Оценка влияния экстракта сабель- экспертиз и испытаний в здравоохра-
ника болотного на течение хронического нении»; под общ. ред. А.А. Шерякова. –
экспериментального артрита / Е. В. Феруб- Молодечно: Тип. «Победа», 2012. – 1220 с.
ко [и др.] // Вопросы биолог., мед. и фарм.
Адрес для корреспонденции:
химии. – М., 2008. – № 4. – С. 14–17.
3. Scalbert, A. Antimicrobial properties 210023, Республика Беларусь,
of tannins / А. Scalbert // Phytochemistry. – г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
1991. – Vol. 30. – P. 3875–3883. УО «Витебский государственный
4. Одуладжа, Дж.О. Сабельник болот- ордена Дружбы народов
ный – источник получения медицинских медицинский университет»,
препаратов / Дж.О. Одуладжа, Д.В. Чижи- кафедра фармакогнозии
с курсом ФПК и ПК,
ков // Фармация. – 2007. – № 7. – С. 45–48. тел. раб.: 8 (0212) 37-09-29,
5. Antioxidant activity of the phenolic Ершик О.А.
compounds of hawthorn, pine and skull- Поступила 30.10.2014 г.

Г. Н. Бузук

ВЛИЯНИЕ РАЗМЕРА, КОЛИЧЕСТВА И ФОРМЫ УЧЕТНЫХ ПЛОЩАДОК


НА ТОЧНОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЕКТИВНОГО ПОКРЫТИЯ

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

Проведенная оценка точности определения проективного покрытия при ис-


пользовании учетных площадок (УП) различной формы на фоне вариабельности про-
ективного покрытия, размера и числа УП показала сходные результаты.
Ключевые слова: проективное покрытие растений, учетные площадки, линии
пересечения, лекарственные растения.

ВВЕДЕНИЕ ных площадок (УП) размером 0,5–10 м2


различной формы (квадратной, прямо-
Одним из основных способов опре- угольной или круглой) с последующим
деления продуктивности растений, в том определением на них всей фитомассы или
числе лекарственных, в естественных ме- же массы определенных частей или орга-
стах произрастания является метод учет- нов исследуемых растений (лекарственно-
ных площадок. Его суть заключается в за- го растительного сырья) непосредственно
ложении на пробной площади (ПП) учет- (метод учетных площадок) или косвенно

33
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

через определение на УП проективного и Matlab были созданы черно-белые изо-


покрытия или числа особей (побегов или бражения двух вариантов зарослей расте-
др. счетных единиц), соответственно, ме- ний с размером матрицы 1000х1000 пиксе-
тод проективного покрытия и метод мо- лей и наполненностью объектами (расти-
дельных экземпляров [1–7]. тельностью) на 5–95%.
Важным моментом определения уро- Первый вариант моделей был сгене-
жайности лекарственного растительного рирован в среде Matlab при использова-
сырья (ЛРС) является точность, с которой нии инструмента Microstructure Generation
она определяется. Определение точности в (http://www.mathworks.com/matlabcentral/
полевых условиях весьма проблематично, fileexchange/25389), который позволяет
поскольку исходная урожайность может получить изображение, состоящее из слу-
быть точно установлена лишь при заготовке чайным образом расположенных объек-
всего исследуемого вида в пределах ПП. На тов заданной формы (от круга до линии),
практике обычно ограничиваются статисти- ориентации, распределения по размеру и в
ческой оценкой выборки УП, в большей или пространстве, при этом объекты не сопри-
меньшей мере покрывающих ПП [1–2]. касаются друг с другом.
Целью настоящей работы является Второй вариант моделей был сгенери-
оценка точности определения проектив- рован модифицированным нами макросом
ного покрытия (урожайности) при различ- Imagej DrawRandomDots, который, в отли-
ных размерах, числе, форме УП и проек- чие от Microstructure Generation, допускает
тивного покрытия на ПП. соприкосновение и даже частичное нало-
жение объектов различного размера и фор-
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ мы (рисунок).
На полученные изображения с помо-
Для оценки влияния формы, размера и щью плагина MicroArray Profile програм-
количества учетных площадок на точность мы Imagej наносили сеть из УП различного
определения проективного покрытия рас- размера (5–100 с шагом 5), числа (32–102)
тений использовали компьютерное моде- и формы (квадрат, круг, линия). В пределах
лирование в программах Imagej и Matlab. каждой УП подсчитывали число черных
В среде Imagej (http://rsbweb.nih.gov/ij) (растительных) пикселей.

Рисунок – Пример модели ПП с нанесенной сетью УП


34
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Проективное покрытие рассчитывали (значимости) фактора использовали коэф-


по формуле: фициент детерминации (R2). Полученные
данные представлены в таблице 1.
PP% = (sp/s) · 100, (1)
Sx% = a0 + a1·x + a2·y + a3·z +
где PP% – проективное покрытие, в %; + a4·x2 + a5·y2 + a6·z2, (3)
s – площадь УП, пикселей; sp – число рас-
тительных пикселей. где a0-6 – коэффициенты уравнения, x –
Математико-статистическая обработка сторона квадрата, диаметр или длина УП,
состояла из расчета средней арифметиче- y – проективное покрытие, z – число УП.
ской (Mean), абсолютной (Sx) и относи-
тельной ошибки (Sx%) средней арифме- Анализ данных, приведенных в табли-
тической для проективного покрытия по це 1, показывает, что форма УП (квадрат,
всему диапазону УП и ПП. круг и даже редукция квадрата до линии)
слабо влияет на точность определения
, (2) проективного покрытия. В наибольшей
степени она зависит от исходного проек-
где Sx – ошибка средней арифметиче- тивного покрытия на ПП и, в значительно
ской, Sx% – относительная ошибка сред- меньшей степени, от размера и числа УП.
ней арифметической, Std – стандартное Используя приведенные в таблице 1
отклонение, Mean – средняя арифметиче- коэффициенты, можно оценить ожидае-
ская, n – число УП. мую точность определения проективного
покрытия без предварительного заложе-
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ния УП. Для этого ориентировочно глазо-
мерно определяют среднее проективное
При использовании моделей, гене- покрытие в пределах ПП, а также произво-
рированных Microstructure Generation и дят перерасчет пикселей модели в едини-
DrawRandomDots, при обработке полу- цы измерения (м, см и др.). Например, при
ченных данных были получены близкие размерах ПП 10х10 м и модели 1000х1000
результаты. Однако в дальнейшем мы рас- пикселей 1 пиксель соответствует 1 см.
сматриваем только модель, генерирован- Подставляя в уравнение 1 значения
ную модифицированным нами макросом проективного покрытия, размер и число
DrawRandomDots, допускающую соприкос- планируемых УП, рассчитывают ожидае-
новение и частичное наложение объектов, мую точность определения проективного
что более соответствует ситуации, реально покрытия (Sx%) (таблица 2).
наблюдаемой в растительном покрове. Так, например, для ПП размером 10 х
Выполненные расчеты привели к по- 10 м, проективном покрытии 25, 50 и 75%,
лучению матриц относительных ошибок размере УП – 25, 50 и 100 см и фиксиро-
средней арифметической (Sx%) проектив- ванном числе УП – 25, точность определе-
ного покрытия при варьировании на ПП ния проективного покрытия для квадрат-
проективного покрытия в пределах 5–95%, ной УП колеблется в пределах 1,9–26,1%,
размера УП в пределах 5–100 и количества для круглой УП – 2,2–27,7% и для линии –
УП в пределах 9–100. 2,6–31,3% (таблица 2).
В ходе анализа полученных данных Как уже отмечалось ранее, при неиз-
была обнаружена общая тенденция умень- менном числе УП точность определения
шения Sx% (повышение точности) при проективного покрытия повышается при
увеличении числа и размера УП и, особен- росте самого проективного покрытия и
но, проективного покрытия на ПП. размеров УП. В зависимости от формы УП
Зависимости Sx% от исследованных точность несколько снижается в следую-
параметров (проективное покрытие, число щем убывающем порядке: квадрат < круг
и размер УП) хорошо аппроксимировались < линия, однако эти различия в целом не-
полиномом второй степени, что позволило существенны.
предложить полную квадратичную модель Это позволяет в равной мере использо-
(3) для прогнозирования Sx% при различ- вать в полевых условиях различные фор-
ном исходном проективном покрытии, раз- мы УП, ориентируясь, главным образом,
мере и числе УП. В качестве меры связи на трудоемкость и удобство работы с ними.
35
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Вместе с тем, переход от УП в форме вид (точнее, его проекцию на почву) от-
квадрата или круга к УП в виде линии на носительно общей протяженности линий в
практике означает переход от площадоч- процентах.
ных к бесплощадочным методам опреде- Дальнейшее упрощение состоит в ис-
ления проективного покрытия (метод ли- пользовании точек на линии (метод линий
ний пересечения). Суть данного метода за- точек). Уровни точности в зависимости от
ключается в определении протяженности числа линий и точек на линии нами оцени-
линий, проходящих через исследуемый вались и обсуждались ранее [3].

Таблица 1 – Коэффициенты квадратичных моделей для оценки точности определения


проективного покрытия
Форма УП - квадрат
a0 a1 a4 a2 a5 a3 a6 R2
29,87 -0,447 0,00237 0,13
40,20 -1,032 0,00692 0,53
26,15 -0,438 0,00286 0,08
55,17 -0,447 0,00237 -1,032 0,00692 0,66
41,13 -0,447 0,00237 -0,438 0,00286 0,20
51,45 -1,032 0,00692 -0,438 0,00286 0,61
66,43 -0,447 0,00237 -1,032 0,00692 -0,438 0,00286 0,74
Форма УП - круг
a0 a1 a4 a2 a5 a3 a6 R2
30,90 -0,433 0,00217 0,12
42,56 -1,074 0,00713 0,56
26,87 -0,416 0,00263 0,07
57,47 -0,433 0,00217 -1,074 0,00713 0,68
41,78 -0,433 0,00217 -0,416 0,00263 0,19
53,44 -1,074 0,00713 -0,416 0,00263 0,63
68,35 -0,433 0,00217 -1,074 0,00713 -0,416 0,00263 0,75
Форма УП - линия
a0 a1 a4 a2 a5 a3 a6 R2
28,67 -0,293 0,00156 0,04
50,45 -1,285 0,00860 0,60
31,89 -0,404 0,00195 0,09
60,25 -0,293 0,00156 -1,285 0,00860 0,63
41,69 -0,293 0,00156 -0,404 0,00195 0,13
63,47 -1,285 0,00860 -0,404 0,00195 0,69
73,27 -0,293 0,00156 -1,285 0,00860 -0,404 0,00195 0,73
Таблица 2 – Точность определения проективного покрытия в зависимости от исходного
проективного покрытия, формы и размеров УП
Sx% (квадрат) Sx% (круг) Sx% (линия) размер УП покрытие число УП
26,1 27,7 31,3 25 25 25
13,3 14,3 15,3 25 50 25
9,1 9,7 10,0 25 75 25
19,4 21,0 26,9 50 25 25
6,5 7,5 10,9 50 50 25
2,4 2,9 5,6 50 75 25
14,8 15,7 23,9 100 25 25
1,9 2,2 7,9 100 50 25
2,2 2,4 2,6 100 75 25

36
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ЗАКЛЮЧЕНИЕ мии СПбГУ, 2002. – 240 c.


3. Бузук, Г. Н. Уровни точности учета
Таким образом, проведенная оценка проективного покрытия при использовании
точности определения проективного по- линий точек (line point method) и линий пе-
крытия при использовании УП различной ресечения (line intercept method) / Г. Н. Бу-
формы на фоне вариабельности проектив- зук // Вестник фармации. – 2013. – № 4. –
ного покрытия, размера и числа УП пока- С. 12–17.
зала сходные результаты, что позволяет в 4. Бузук, Г. Н. Оптимизация точности
равной мере использовать в полевых усло- учета проективного покрытия при ис-
виях различные формы УП (квадрат, круг, пользовании квадрата-сетки / Г. Н. Бузук,
линия), ориентируясь, главным образом, О. В. Созинов // Научные ведомости Бел-
на трудоемкость и удобство работы с ними. ГУ. Серия Естественные науки. – 2013.
Вып. 22. – № 3 (146). – С. 5–7.
SUMMARY 5. Бузук, Г. Н. Определение проектив-
ного покрытия и урожайности при исполь-
G.N. Buzuk зовании фото точек (Photo point method) /
INFLUENCE OF SIZE, NUMBER Г. Н. Бузук // Вестник фармации. – 2013. – 
AND SHAPES OF CREDENTIAL FIELDS № 3. – С. 74–80.
ON THE ACCURACY 6. Бузук, Г. Н. Применение функций
OF THE PROJECTIVE COVER роста и асимптотических функций при
 The assessment of the accuracy of the определении проективного покрытия и
projective cover when using credential fields урожайности лекарственных растений /
of various shapes on the background of the Г. Н. Бузук // Вестник фармации. – 2014.
projective cover, the size and number of UP – № 1. – С. 59–67.
showed similar results. 7. Бузук, Г. Н. Оптимизация метода
Keywords: projective cover of plants, оценки обилия и площади зарослей лекар-
credential fields, line intercept method, me- ственных растений / Г. Н. Бузук, О. В. Со-
dicinal plants. зинов // Растительные ресурсы. – 2014. – Т.
50, № 2. С. 316–323.
ЛИТЕРАТУРА
Адрес для корреспонденции:
1. Буданцев, А. Л. Ресурсоведение ле-
210023, Республика Беларусь,
карственных растений: Метод. пособие к г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
произв. практике для студентов фармацевт. УО «Витебский государственный
факульт. / А. Л. Буданцев, Н. П. Харитоно- ордена Дружбы народов
ва // М-во здравоохранения Рос. Федера- медицинский университет»,
ции, С.-Петерб. гос. хим.-фармацевт. акад., кафедра фармакогнозии
СПб, 1999. – 56 c. c курсом ФПК и ПК,
2. Методы изучения лесных сообществ тел. раб.: 8(0212) 37-09-29,
Бузук Г. Н.
/ Е. Н. Андреева [и др.]. – СПб. НИИХи- Поступила 26.11.2014 г.

37
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ТЕХНОЛОГИЯ
ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВ
С. В. Спиридонов

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАНУЛ НА ОСНОВЕ


ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ДЛЯ ТЕРАПИИ ЗАПОРОВ

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина

Целью работы явилось создание лекарственного средства на основе лекар-


ственного растительного сырья для терапии запоров. В результате проведенных
исследований предложен состав лекарственного средства под условным названием
«Сорбосенс», куда вошли порошки листьев сенны узколистной, стевии обыкновен-
ной, овса посевного и отрубей пшеничных. В качестве лекарственной формы выбра-
ны гранулы. Разработана технология получения данного лекарственного средства
методом влажной грануляции. Определен оптимальный режим сушки влажного
гранулята с использованием микроволнового излучения. Исследованы технологиче-
ские свойства порошков лекарственного растительного сырья, которые входят в
состав лекарственного средства, их модельной смеси и гранул на ее основе.
Ключевые слова: фитотерапия запоров, технологические свойства порошков,
технология получения гранул, сенна узколистная, стевия обыкновенная, овес посев-
ной, отруби пшеничные, микроволновая сушка, Сорбосенс.

ВВЕДЕНИЕ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Ухудшение режима питания и качества Объектами исследования явились ли-


принимаемой пищи приводит к различным стья сенны узколистной и стевии обыкно-
патологиям со стороны желудочно-кишеч- венной, отруби пшеничные и овес посев-
ного тракта (ЖКТ), одним из проявле- ной. Данное сырьё в виде порошков вошло
ний которых является запор – нарушение в состав ЛС под условным названием «Сор-
функции кишечника, выражающееся в босенс» по следующим соображениям:
увеличении интервалов между актами де- – листья сенны узколистной, содер-
фекации (более чем на 48 ч.) по сравнению жащие сеннозиды, эмодины, флавонолы,
с индивидуальной физиологической нор- смолистые вещества, стимулируют мото-
мой или в систематическом недостаточном рику кишечника и оказывают слабитель-
опорожнении кишечника. Необходимо за- ный эффект;
метить, что запор, как симптом, встреча- – листья стевии обыкновенной, содер-
ется более чем у 20% населения, причем жащие стевиозиды, ребаудиозиды, флаво-
чаще у женщин, чем у мужчин [1, 2]. Раз- ноиды, сапонины, аминокислоты, клетчат-
работка лекарственных средств (ЛС) для ку, пектиновые вещества, липиды, поли-
профилактики и лечения запоров является сахариды, комплекс витаминов и микро-
актуальной. элементов, способствуют нормализации
Целью работы явилось создание ЛС функции желудочно-кишечного тракта и
на основе лекарственного растительного печени, оказывают антимикробное, проти-
сырья (ЛРС), обладающего слабительным вогрибковое, противовоспалительное, де-
действием, которое должно обеспечить токсицирующее действие, способствуют
максимальную эффективность, отсутствие профилактике дисбактериоза;
негативных субъективных ощущений по- – овес посевной содержит набор ами-
сле приема, безвредность, что должно нокислот, витаминов и микроэлементов,
достигаться отсутствием в составе синте- углеводы, токоферолы, флавоноиды, сте-
тических (балластных) веществ и макси- роидные сапонины и стеролы, жирное
мально возможным использованием при- масло, индольный алкалоид авенин, расти-
родных вспомогательных веществ. тельную клетчатку, оказывает слабитель-

38
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ный и ветрогонный эффект, нормализует севного – на мельнице ударно-истираю-


деятельность центральной нервной систе- щего типа ММ 10. Смешивание порошков
мы и ЖКТ; производили в смесителе POM-5 фирмы
– отруби пшеничные, содержащие в «Pharma-test» (Германия) до получения
своем составе растительную клетчатку, а однородной массы.
также богатый аминокислотный, витамин- Гранулирование проводили в грануля-
ный и полисахаридный комплекс, благо- торе горизонтального типа WG-30 фирмы
даря наполнению объема кишечника спо- «Pharma-test» (Германия).
собствуют увеличению его эвакуационной В последнее время широкое распро-
функции, увеличению качественного и ко- странение получают аппараты для сушки
личественного состава микрофлоры, что различных видов сырья, в том числе расти-
также способствует профилактике дисбак- тельного происхождения, использующие
териоза. микроволновое излучение. Они имеют ряд
Доза ЛС «Сорбосенс» составляет 4,0 г существенных положительных моментов,
гранул на прием и содержит листьев сенны среди которых – компактность, малые га-
и стевии по 0,75 г, отрубей пшеничных и бариты, мобильность, ресурсо– и энерго-
овса посевного по 1,25 г. эффективность, отсутствие необходимо-
Содержание листьев сенны узколист- сти в производстве и подведении тепло-
ной и стевии обыкновенной предложено в носителей (горячей воды или пара), что
соответствии с минимальными разовыми дает существенное преимущество перед
терапевтическими дозами основных групп конвективными методами сушки. Немало-
биологически активных веществ, содержа- важным аспектом также является стерили-
щихся в данном ЛРС; овса посевного и от- зующее действие сверхвысоких частот на
рубей пшеничных – в соответствии с необ- микробный контаминат [8–12]. Принимая
ходимой суточной потребностью организма во внимание все достоинства этого спосо-
человека в растительной клетчатке [2–4]. ба высушивания и его перспективность, он
Исследованиями, проведенными в был использован в нашей работе.
Центральной научно-исследовательской Влажность гранул определяли как по-
лаборатории Национального фармацевти- терю в массе при высушивании на экс-
ческого университета (г. Харьков, Украина) пресс-влагомере ВТ-500.
под руководством проф. Яковлевой Л. В., Высушенный гранулят фракциониро-
было установлено слабительное действие вали через решетку с размером отверстий
разрабатываемого ЛС, которое является 2,0 мм.
более выраженным по сравнению с такими
средствами на основе сенны, как таблетки РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
«Сенадексин» (ФФ «Здоровье», г. Харь-
ков), «Чай слабительный №2» (ЧП «На- В качестве лекарственной формы нами
туралис», г. Житомир) и настоем из сбо- были предложены гранулы по следующим
ра растительного «Сенны листья» (ЧАО причинам: количество дозы гранул на при-
«Лектравы», г. Житомир) [5]. ем достаточно велико для создания табле-
Технологические свойства исходных тированной или капсулированной лекар-
субстанций изучали по методикам, пред- ственной формы, благодаря занимаемому
ставленным в Государственной Фармако- объему гранулы способствуют наполнению
пее Украины (ГФУ) 1-го издания и Допол- кишечника и повышению скорости транзи-
нении №3 к ГФУ [6, 7]. та пищевых масс. Гранулы имеют удобство
Технологический процесс получения дозирования и применения. Их можно при-
гранул состоял из следующих стадий: из- нимать как в сухом виде, так и разбавляя
мельчения ЛРС, просеивания и смешива- водой. Для их производства, которое харак-
ния полученных порошков, их увлажнения теризуется энерго- и ресурсоэффективно-
с последующим получением грануляцион- стью, возможно использовать природные
ной массы, гранулирования, сушки влаж- вспомогательные вещества (воду очищен-
ного гранулята, фракционирования высу- ную, сахарный сироп, крахмальный клей-
шенных гранул, фасовки и упаковки. стер, альгинаты и т.д.) [13, 14]. При измель-
Измельчение листьев стевии и листьев чении листьев стевии и сенны были полу-
сенны проводили на молотковой мельнице чены фракции с размером частиц 0,1–0,25
У1-ЕМЛ; отрубей пшеничных и овса по- мм и 0,25–0,5 мм соответственно.
39
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Отруби пшеничные и овес посевной использовали в работе [15].


являются трудноизмельчаемым материа- Полученные после измельчения по-
лом с достаточно высоким выходом сред- рошки имели неудовлетворительные тех-
них и более крупных фракций (0,5–2,0 мм) нологические характеристики, а именно
при использовании молотковой мельницы. низкую сыпучесть с прерывистым харак-
В связи с этим для данных видов ЛРС в тером течения, что подтверждает высокий
порядке эксперимента было проведено угол естественного откоса (таблица 1). Это
низкотемпературное измельчение, что по- объясняется увеличением площади удель-
зволило получить более высокий выход ной поверхности частиц после измельче-
(98%) фракций 0,1–0,25 мм, которые мы и ния [16].

Таблица 1 – Технологические характеристики порошков измельченного ЛРС, входящего


в состав гранул «Сорбосенс» (P=0,95; n=5)
Технологические характеристики
Размер
Лекарственное растительное сырье
Сыпучесть, г⁄с Угол
частиц, мм естественного
откоса, градусы
Порошок листьев сенны узколистной 0,25-0,5 2,93±0,01 42,6±0,7
Порошок листьев стевии 0,1-0,25 3,14±0,05 56,8±1,0
Порошок овса посевного 0,1-0,25 1,15±0,01 47,4±0,7
Порошок отрубей пшеничных 0,1-0,25 1,13±0,02 46±0,9

На основании упомянутых фракций подвижной воронки порошок практически


порошков путем смешивания в лопастном не высыпался, из воронки с виброустрой-
смесителе готовили смесь, технологиче- ством высыпание происходило прерывисто
ские характеристики которой представлены и нестабильно. Это также явилось причи-
в таблице 2. Смесь порошков также имела ной низких показателей сыпучести и высо-
низкие технологические свойства. Из не- ких показателей угла естественного откоса.
Таблица 2 – Технологические характеристики нативной смеси растительных порошков
и гранул «Сорбосенс» (P=0,95; n=5)
Нативная смесь
Единицы растительных Гранулы
Исследуемые характеристики измерения порошков «Сорбосенс»
«Сорбосенс»
Время истечения (неподвижная воронка) с/100 г Отсутствие течения 13,92±0,28
Время истечения (виброворонка) с/100 г 56,8±1,7 13,82±0,23
Сыпучесть г/с 1,79±0,02 7,23±0,12
Угол естественного откоса Градусы 47,6±0,7 32,2±1,0
Насыпная плотность (до усадки) г/см3 0,202±0,004 0,349±0,009
Насыпная плотность (после усадки) г/см3 0,313±0,003 0,398±0,005
Влажность % 7,59±0,09 0,98±0,07

Скорректировать технологические растворе могут проявлять связующие


свойства порошковой смеси возможно ме- свойства [3, 18, 20, 22].
тодом влажной грануляции, что подтверж- Получение грануляционной массы не-
дает целесообразность выбора гранул в обходимой консистенции было достигнуто с
качестве лекарственной формы. применением воды очищенной, нагретой до
Важным этапом в технологии получе- температуры 90°С, что и определило ее ис-
ния гранул является выбор увлажнителя, пользование в качестве увлажнителя. Грану-
от которого зависит как качество гранули- лирование проводилось через перфорирован-
руемой массы, так и гранул, получаемых ную пластину с размером отверстий 2,0 мм.
из нее [17–22]. Полученный влажный гранулят инку-
Известно, что в используемом ЛРС со- бировали при температуре 37°С на про-
держится большое количество веществ по- тяжении 60 мин для набухания споровых
лисахаридной природы, которые в водном форм микроорганизмов, после чего его
40
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

подвергали сушке. Для работы была ис- стве 100 г размещали на термостойком
пользована микроволновая печь с широ- поддоне фирмы «Симакс» слоем толщи-
ким рабочим диапазоном микроволнового ной не более 1,5 см. Данные представлены
излучения. Влажный гранулят в количе- на рисунке.
Влажность, %

Время экспозиции, мин

Рисунок – График изменения влажности гранулята в процессе сушки при разных


режимах мощности микроволнового излучения

Как видно из рисунка, при больших зна- жены однодозовые пакеты из ламинирован-
чениях мощности излучения (в диапазоне ной бумаги или стеклянные баночки с плот-
800–400 Вт) происходило наиболее интен- но навинчивающейся крышкой с дозатором,
сивное испарение влаги. Однако это, в свою что обеспечит не только удобство дозирова-
очередь, приводило к подгоранию и осмоле- ния и применения, но и защиту от повышен-
нию влажного гранулята, что особенно вы- ной влажности окружающей среды.
ражено при мощности 800 и 600 Вт.
Наиболее оптимальным был режим ЗАКЛЮЧЕНИЕ
высушивания при мощности 200 Вт, ко-
торый обеспечивал равномерную сушку 1. Предложен состав лекарственного
гранулята. Во избежание возможного под- средства в виде гранул под условным на-
горания гранулята для достижения мини- званием «Сорбосенс» для терапии запоров.
мальной остаточной влажности нами было 2. Разработана технология получения
предложено производить досушивание данного ЛС. Обоснован оптимальный ре-
при более низкой безопасной мощности жим сушки гранулята с использованием
90 Вт. В итоге данного эксперимента была микроволнового излучения.
показана возможность высушивания гра- 3. Изучены технологические свойства
нулята до остаточной влажности 0,98% порошков ЛРС, входящих в состав ЛС, их
при сохранении надлежащих органолепти- модельной смеси и гранул на ее основе.
ческих свойств конечного продукта. Доказано, что полученные гранулы пре-
Далее гранулят подвергали фракциони- восходят по технологическим показателям
рованию. Полученные гранулы, как видно исходные смеси порошков.
из таблицы 2, имели высокий показатель
сыпучести с плавным характером течения, SUMMARY
о чем свидетельствует более низкое зна-
чение угла естественного откоса. Данное S. V. Spiridonov
обстоятельство подтверждает целесообраз- DEVELOPMENT OF COMPOSITION
ность коррекции технологических свойств AND TECHNOLOGY OF GRANULES
порошков методом влажной грануляции, а BASED ON MEDICINAL PLANT
также правильность выбора увлажнителя и RAW MATERIAL FOR CONSTIPATION
режимов технологического процесса. TREATMENT
В качестве упаковки нами были предло- The creation of the drug on the basis of

41
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

medicinal plants for treatment of constipation менения микроволнового нагрева / Б. А.


is objective of the work. The drug composition Демьянчук. – Одесса: «Черноморье», 2004.
under "Sorbosens" as the conditional name, – 520 с.
which includes powders of senna angustifoliate 9. Кириллов, П. К. СВЧ установка
leaves, stevia ordinary leaves, oat and wheat для сушки пищевых продуктов с высокой
bran as a result of the researches is proposed. влажностью / П. К. Кириллов, Г. А. Мо-
As a form of drug the granules are chosen. The розов, Ю. Е. Седельников // Труды МНПК
technology of obtaining the drug using wet «Пищевая промышленность 2000». Ка-
granulation method has been developed. The зань, 1996. – C. 116.
wet granulation drying optimal mode using 10. Рахманкулов, Д. Л. Применение
microwave radiation is selected. The techno- энергии микроволнового излучения для
logical properties of medicinal plants raw ma- интенсификации химических, физико-
terials powders, which including in the drug химических и химико-технологических
composition, their model mixture and granules процессов /Д. Л. Рахманкулов, С. Ю. Шав-
based on it have been investigated. шукова // Тезисы докладов XX Междуна-
Keywords: phytotherapy of constipation, родной научно-технической конференции
technological properties of powders, granules «Химические реактивы, реагенты и про-
manufacturing technology, senna angustifo- цессы малотоннажной химии». – Минск:
lia, stevia vulgaris, oat, wheat bran, micro- Институт химии новых материалов, 2007.
wave drying, Sorbosens. – С. 110.
11. Тучный, В. П. Технологии завтраш-
ЛИТЕРАТУРА него поля (Будущее микроволновой техно-
логии в АПК) / В. П. Тучный, Н. Н. Гав-
1. Лоранская, И. Д. Запор – новые ре- рилюк, И. Л. Бошкова // Деловой Агроком-
шения старой проблемы / И. Д. Лоранская пас. – 2006. – № 8-9(118). – С. 79–82.
// Русский медицинский журнал. – 2007 – 12. Morozov, G. A. Optimization and
Т. 9, № 1.– С. 1–3. projecting methods for microwave technolo-
2. Фитотерапия в комплексном лечении gies UHF-systems / G. A. Morozov, V. F. Gu-
заболеваний внутренних органов / А. А. sev // Proceedings of the Second Intern. Conf.
Крылов [и др.]. – К.: Здоров`я, 1991. – 240 с. on Antenna Theory and Techniques. Ukraine,
3. Пищевые волокна / М. С. Дудкин [и Kyiv, 1997. – P. 318–321.
др.]. – К.: Урожай, 1988 – 152 с. 13. Промышленная технология ле-
4. Traditional Herbal Medicine Research карств. В 2-х т. Т. 1 / В. И. Чуешов [и др.];
Methods: Identification, Analysis, Bioassay, под ред. В. И. Чуешова. – Х.: Основа; Изд-
and Pharmaceutical and Clinical Studies / Ed. во УкрФА, 1999. – С. 6–24.
by W. J.H. Liu. − Hoboken: John Wiley & 14. Parikh, D. Handbook of Pharmaceu-
Sons Publish, 2011. − 466 p. tical Granulation Technology, 2nd ed. (Drugs
5. Пат. 79241, Україна, А61К 36/00, and the Pharmaceutical Sciences) / D. Parikh.
А61К 9/16 (2006.01), А61Р 1/10 (2006.01) – Boca Raton: Taylor&Francis group, 2005.
Лікувально-профілактичний проносний – 616 p.
засіб рослинного походження / С. В. Спи- 15. Спиридонов, С. В. Вивчення залеж-
ридонов, Л. В. Яковлєва, Л. В. Гладкова, ності фракційного складу порошків вівса
О. В. Геруш, Д. І. Дмитрієвський; заявл. та висівок пшеничних від низьких значень
03.12.2012; опубл. 10.04.2013, Бюл. № 7. температури в процесі їх подрібнення / С.
6. Державна Фармакопея України / В. Спиридонов // Вісник фармації. – 2011.
Державне підприємство «Науково-екс- – №1. – С. 23–25.
пертний фармакопейний центр». – 1-е вид. 16. Штейнгарт, М. В. Твердые лекар-
– Х.: РІРЕГ, 2001. – 556 с. ственные формы. Технология и стандарти-
7. Державна Фармакопея України / зация лекарств / М. В. Штейнгард, Н. А.
Державне підприємство «Український на- Казаринов. – Х.: ООО "РИРЕГ", 1996. –
уковий фармакопейний центр якості лікар- С. 539–602.
ських засобів». – 1-е вид. – Доп. 3. – Х.: 17. Barbosa-Canovas, G. Food powders.
Державне підприємство «Український на- Physical properties, processing and function-
уковий фармакопейний центр якості лікар- ality / E. Ortega-Rivas, P. Juliano. – New
ських засобів», 2009. – 280 с. York.: Kluwer Academic / Plenum Publish-
8. Демьянчук, Б. А. Принципы и при- ers, 2005. – 362 p.
42
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

18. Heldman, D. R. Principles of food Delmar.: Cengage learning, 2010. – 622 p.


processing / D. R. Heldman, R. W. Hartel. 22. Figura, L. Food Physics: Physical
– Gaitherburg.: Aspen Publishers, 1999. – Properties – Measurement and Applications /
288 p. L. Figura, A. Teixeria. – Heidelberg: Spring-
19. Lister, J. The science and engineering er, 2010. – 566 p.
of granulation processes (Practice technology Адрес для корреспонденции:
series) / J. Lister, B. Ennis. – Doldrecht, Neth-
erlands: Kluwer Academic Publishers, 2010. – 61081, Украина,
256 p. г. Харьков, ул. Блюхера, 4,
20. Singh, R. Introduction to Food Engi- Национальный фармацевтический университет,
neering. 4th ed. (Food Science and Technol- кафедра заводской технологии лекарств,
ogy) / R. Singh, D. Heldman. – Amsterdam: тел. раб. 8 (0572) 67-88-52,
е-mail: bravesvs@mail.ru
Academic Press, 2009. – 864 p. Спиридонов С. В.
21. Durgin, J. M. Pharmacy Practice for
Technicians / J. M. Durgin, Z. I. Hanan. – Поступила 26.09.2014 г.

О. М. Хишова

СЫПУЧЕСТЬ И КОГЕЗИОННЫЕ СВОЙСТВА ТОНКО ИЗМЕЛЬЧЕННЫХ


РАСТИТЕЛЬНЫХ СУБСТАНЦИЙ

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

В статье проанализированы физико-химические характеристики тонко измель-


ченных растительных субстанций, которые используют для оценки потенциальной
сыпучести, однородности потока, когезионных эффектов порошковых материалов
(угол естественного откоса, угол обрушения, угол разности, коэффициент вибраци-
онного уплотнения). Возможности прогноза поведения растительных субстанций
как сыпучих материалов весьма затруднительны без прямой оценки их сыпучести и
других технологических характеристик. Изученные характеристики тонко измель-
ченных растительных субстанций отличаются неоднозначностью зависимостей
от дисперсности, вида лекарственного растительного сырья и выраженной спец-
ификой взаимодействия с параметром сыпучести. Это позволяет классифициро-
вать тонко измельченные растительные субстанции в качестве особой категории
фармацевтических субстанций.
Ключевые слова: тонко измельченные растительные субстанции, сыпучесть,
угол естественного откоса, угол обрушения, угол разности, коэффициент вибраци-
онного уплотнения.

ВВЕДЕНИЕ ют потенциальную сыпучесть и однород-


ность потока сыпучего материала. В число
Поток сыпучего материала в процессе таких характеристик включены следую-
таблетирования – важная технологическая щие классические параметры оценки по-
характеристика эффективного фармацев- рошковых субстанций [1].
тического производства. Эта характери- Угол естественного откоса (УЕО) – по-
стика не исчерпывается прямой оценкой казатель, определяющий потенциальную
сыпучести порошков и требует много- сыпучесть материала и характеризующий
факторного изучения поведения сыпучего также форму, размер, удельную поверх-
материала. В связи с этим необходимо до- ность частиц и когезионные свойства. Для
полнительно изучить такие свойства тонко хорошо сыпучих материалов УЕО состав-
измельченных растительных субстанций ляет 250…350, для связных – 600…700.
(ТИРС), которые в совокупности отража- Коэффициент вибрационного уплотне-

43
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ния (КВУ) – характеризует однородность цветки, корневища с корнями) разных видов,


формы и размера гранул, деформируемость включая корневища с корнями валерианы,
сыпучего материала, удельную поверхность корень алтея, траву пустырника, лист брус-
и когезионные свойства частиц, содержа- ники и подорожника, кору ивы прутьевид-
ние влаги. Чем выше этот коэффициент, ной, цветки ромашки, плоды боярышника.
тем меньшей сыпучестью обладает матери- Избранные объекты лекарственного
ал. Значение коэффициента вибрационного растительного сырья (ЛРС) представляют
уплотнения 0,2–0,21 соответствует гранич- не только медицинский интерес в качестве
ному значению, разделяющему свободный источников для создания фитопрепаратов
и связанный потоки вещества. различного назначения, но и составляют
Угол обрушения (УО) для сыпучих ма- репрезентативную группу растительных
териалов также служит характеристикой объектов для изучения технологических
когезии, размера, формы и удельной по- характеристик ТИРС и разработки алго-
верхности частиц, однородности, пористо- ритмических принципов получения на их
сти и деформируемости сыпучего матери- основе твердых лекарственных форм.
ала. Он превышает угол естественного от- УЕО определяли по методике Государ-
коса, за исключением очень легкосыпучих ственной фармакопеи Республики Бела-
веществ, и дает больше информации о сы- русь (2.9.36) [4].
пучести материала, чем угол естественно- Определение угла падения проводи-
го откоса. Чем выше угол обрушения, тем ли по следующей методике: пластину, на
меньшей сыпучестью обладает вещество. которой получен конус из сыпучего мате-
Хорошо сыпучий материал должен иметь риала и найден УЕО, встряхивали путем
угол обрушения < 400. пятикратного сбрасывания груза с высо-
Коэффициент однородности – косвен- ты стойки. При этом УЕО обрушивается и
но характеризует размеры и форму ча- стабилизируется после пятого встряхива-
стиц, а также коэффициент вибрационного ния до угла падения, который и определя-
уплотнения материала. ли по шкале визирной линейкой.
Угол разности (УР) – чем больше угол УР определяли вычитанием величины
разности, тем больше склонность сыпуче- угла падения из величины УЕО [2].
го материала к аэрированию и псевдоожи- Важным показателем для оценки сы-
жению. Угол разности косвенно характе- пучести является KВУ, который определя-
ризует сыпучесть, удельную поверхность ли по формуле 1:
и когезию.
По четырем показателям: сыпучести,
углу обрушения, углу разности, диспер- (1),
гируемости – оценивается аэрируемость
– склонность к образованию псевдоожи-
женной системы с неустойчивым лавино- где B – насыпная плотность, A – на-
образным потоком. сыпная плотность максимальная.
Перечисленные критерии позволяют Следующим показателем для оценки
при необходимости использовать для них сыпучести является УО, который измеряли
универсальную шкалу оценки сыпучести в при помощи пластины, имеющей лопатку
баллах, применяемую для любых материа- размером 125x20 мм. Пластину погружали
лов [2, 3]. в основание массы ТИРС параллельно до-
Цель исследования: изучение физико- нышку емкости, затем поднимали, выводя
химических характеристик ТИРС – угла ее из слоя вверх. Измельченное ЛРС хоро-
естественного откоса, коэффициента ви- шей сыпучести образует на пластине четко
брационного уплотнения, угла обрушения, выраженную насыпь, а плохой сыпучести
угла разности для оценки их потенциаль- образует насыпь неправильной формы с
ной сыпучести. разрывами и уступами. Далее определяли
среднее значение угла наклона насыпки к
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ горизонтали. Затем пластину осторожно
постукивали и вновь определяли среднее
Объектами исследования служили значение угла наклона к горизонтали.
ТИРС надземных и подземных частей ле- Среднее арифметическое из пяти подоб-
карственных растений (кора, листья, трава, ных измерений и дает УО.
44
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ мере характеризует потенциальную сы-


пучесть порошков (наряду с формой, раз-
Параметры, характеризующие сыпу- мером, удельной поверхностью и когези-
честь и когезионные свойства ТИРС, пред- онными свойствами частиц), проанализи-
ставлены в таблицах 1–3. рована связь между сыпучестью и УЕО
Полученные результаты показывают, ТИРС различной дисперсности.
что УЕО для растительных порошков ко- Как показывает анализ паттернов рас-
леблется в пределах 450–650 (рисунок 1), сеяния сопоставляемых характеристик
что свойственно преимущественно связ- (рисунок 2), существенного взаимодей-
ным материалам. Эффект дисперсности, ствия показателей сыпучести и УЕО для
проиллюстрированный на том же рисунке наиболее тонких порошков (0,1...0,25 мм)
(справа), по параметру УЕО разнонаправ- не обнаруживается, а для порошков более
лен и количественно малозначим (у 7 из 8 крупного фракционного состава отмечает-
объектов не превышает ±7%). ся обратная связь этих параметров, прояв-
Учитывая, что УЕО в определенной ляющаяся в виде тенденции.
Таблица 1 – Значения параметров, характеризующих сыпучесть и когезионные свойства
тонко измельченных растительных субстанций с дисперсностью 0,5 …1,0 мм (n=5)1
Наименование сырья УЕО УП УР УО КВУ
Корневища с корнями валерианы 48 35 13 53 0,20
Кора ивы 48 25 23 52 0,10
Лист брусники 51 29 22 47 0,15
Лист подорожника 51 29 22 46 0,26
Трава пустырника 59 35 24 72 0,25
Корень алтея 64 40 24 71 0,27
Цветки ромашки 54 29 25 68 0,33
Плоды боярышника 52 35 17 54 0,20
1
Обозначения параметров: УЕО – угол естественного откоса (градус), УП – угол падения (гра-
дус), УР – угол разности (градус), УО – угол обрушения (градус), КВУ – коэффициент вибра-
ционного уплотнения (отн. ед.). Коэффициенты вариабельности параметров, представленных в
данной и последующих таблицах 2 – 3, составляют < 5%.

Таблица 2 – Значения параметров, характеризующих сыпучесть и когезионные свойства


тонко измельченных растительных субстанций с дисперсностью 0,25…0,5 мм (n=5)
Наименование сырья УЕО УП УР УО КВУ
Корневища с корнями валерианы 47 34 13 49 0,3
Кора ивы 49 31 18 47 0,2
Лист брусники 50 27 23 54 0,27
Лист подорожника 49 26 23 45 0,27
Трава пустырника 58 37 21 68 0,3
Корень алтея 58 42 16 75 0,3
Цветки ромашки 53 31 22 67 0,3
Плоды боярышника 53 37 16 59 0,2

Таблица 3 – Значения параметров, характеризующих сыпучесть и когезионные свойства


тонко измельченных растительных субстанций с дисперсностью 0,1…0,25 мм (n=5)
Наименование сырья УЕО УП УР УО КВУ
Корневища с корнями валерианы 45 32 13 45 0,6
Кора ивы 50 33 17 46 0,1
Лист брусники 48 26 22 45 0,3
Лист подорожника 48 26 22 45 0,32
Трава пустырника 55 40 15 68 0,4
Корень алтея 55 37 18 73 0,2
Цветки ромашки 53 33 20 65 0,2
Плоды боярышника 56 46 10 71 0,2
45
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Угол естественного откоса, град Эффект дисперсности

70 1,30

65 1,20
1 1
2 2
60 1,10
3 3
4 4
55 1,00
5 jj 5
6 6
50 0,90
7 7
8 8
45 0,80

40 0,70
0 1 2 3 4 0 1 2 3 4
Категории дисперсности Категории дисперсности

Эффект дисперсности нормирован для каждого объекта по наиболее тонкому порошку. Объекты
представлены в порядке, приведенном в таблицах 1 – 3: 1 – корневища с корнями валерианы,
2 – кора ивы, 3 – лист брусники, 4 – лист подорожника, 5 – трава пустырника, 6 – корень алтея,
7 – цветки ромашки, 8 – плоды боярышника
Рисунок 1 – Пределы рассеяния параметра угла естественного откоса (слева) и эффект
дисперсности по данному параметру (справа) для тонко измельченных растительных
субстанций различных видов и разной морфологической структуры.

Дисперсность 0,1-0,25 мм Дисперсность 0,25-0,5 мм Дисперсность 0,5-1,0 мм

4 10 12
1 1 1
2 8 2 2
3 9

Сыпучесть, г/с
Сыпучесть, г/с

Сыпучесть, г/с

3 3 3
6 4
4 4
2 6
5 5 емейств а 5
4
6 6 6
1 3
7 2 7 7
8 8 8
0 0 0
40 50 60 70 40 50 60 70 40 50 60 70

УЕО, град УЕО, град УЕО, град

Обозначение объектов см. на рисунке 1.


Рисунок 2 – Континуумы распределения тонко измельченных растительных субстанций
различных видов по сыпучести и значению угла естественного откоса. Видно
отсутствие существенного взаимодействия указанных параметров для порошков с
дисперсностью 0,1...0,25 мм и слабая обратная связь для более крупных фракций

Таким образом, УЕО как параметр в це- также может характеризовать сыпучесть,
лом не имеет существенной предсказатель- удельную поверхность и когезию порош-
ной силы для оценки сыпучести ТИРС, ко- ковых частиц. Обычно чем больше УР, тем
торые вследствие разнородности морфоло- больше склонность сыпучего материала к
гической структуры и многокомпонентного аэрированию и псевдоожижению.
химического состава проявляют нестандарт- Паттерны распределения УР порошко-
ное поведение в сравнении с однородными вых растительных материалов и его зави-
сыпучими материалами. Эти особенности симость от параметра дисперсности про-
ТИРС, которые трудно прогнозируемы на иллюстрированы на рисунке 3.
основе упрощенных тестов, необходимо Как видно на этом рисунке, УР – варьи-
учитывать при разработке технологий про- рующая величина для ТИРС разных видов
изводства порошковых фитопрепаратов. и разной морфологической структуры, что
УР, определяемый вычитанием вели- указывает на неоднозначное поведение этих
чины угла падения (образуемого конусом материалов при уплотнении встряхиванием.
сыпучего материала после стандартного Характерно, что эффект дисперсности
встряхивания) из величины УЕО, косвенно по данному параметру для ряда раститель-
46
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Угол разности, град Эффект дисперсности

35 1,80

30 1 1
1,60
2 2
25 3 3
1,40
4 4
20
5 j 5
1,20
15 6 6
7 7
10 1,00
8 8

5 0,80
0 1 2 3 4 0 1 2 3 4
Категории дисперсности Категории дисперсности

Обозначения см. на рисунке 1.


Рисунок 3 – Пределы рассеяния параметра угла разности (слева) и эффект дисперсности
по данному параметру (справа) для тонко измельченных растительных субстанций
различных видов и разной морфологической структуры. Эффект дисперсности
нормирован для каждого объекта по наиболее тонкому порошку

ных порошков проявляется более значимо, гих материалов (корневища с корнями вале-
чем по параметру УЕО. УР возрастет на 20- рианы, лист брусники, лист подорожника)
70% при переходе от мелких к более круп- эффект дисперсности в изученном диапазо-
ным фракциям порошков коры ивы, травы не измельчения не выявляется.
пустырника, корня алтея, цветков ромашки, Взаимосвязь между сыпучестью и УР
плодов боярышника (рисунок 3). Для дру- проиллюстрирована на рисунке 4.

а б в
Дисперсность 0,1-0,25 мм Дисперсность 0,25-0,5 мм Дисперсность 0,5-1,0 мм

4 10 10
1 1 1
2 8 2 8 2
Сыпучесть, г/с
Сыпучесть, г/с

Сыпучесть, г/с

3
3 3 3
6 6
4 4 4
2
5 5 5
4 4
6 6 6
1
7 2 7 2 7
8 8 8
0 0 0
5 10 15 20 25 30 35 5 10 15 20 25 30 35 5 10 15 20 25 30 35

Угол разности, град Угол разности, град Угол разности, град

Обозначение объектов см. на рисунке 1.


Рисунок 4 – Континуумы распределения тонко измельченных растительных субстанций
различных видов по сыпучести и значению УР. Видно отсутствие существенного
взаимодействия указанных параметров для порошковых фракций с дисперсностью
0,1...0,25 мм и 0,25...0,5 мм и, напротив, наличие отчетливой обратной связи параметров
для фракции 0,5...1,0 мм

Как видно на рисунке 4 а и б, для ТИРС ятно, чем выше дисперсность, тем большей
мелкой и средней дисперсности не обнаружи- будет значимость этих видоспецифических
вается закономерной связи между фактиче- эффектов растительных материалов.
ской сыпучестью и значением УР, что свиде- С уменьшением дисперсности расти-
тельствует о влиянии на сыпучесть комплекса тельных порошков взаимодействие между
неоднозначно взаимодействующих факторов сыпучестью и УР приобретает закономер-
(помимо когезионных сил), которые разно- ный характер (рисунок 4 в). Сыпучесть и
родно представлены в сыпучих растительных УР для относительно крупных порошко-
субстанциях в силу их структурно-морфоло- вых фракций (0,5...1,0 мм) связаны отчет-
гических и химических особенностей. Веро- ливой обратной зависимостью.
47
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

В связи с этим для ТИРС умеренной другим технологическим или биофарма-


степени измельчения (порядка 0,5...1,0 цевтическим требованиям.
мм) УР может являться критериальной Выше уже отмечалось, что КВУ – важ-
характеристикой для прогноза сыпуче- ная количественная характеристика поведе-
сти этих материалов в технологических ния сыпучих материалов в процессе табле-
операциях таблетирования или капсули- тирования, которая зависит от однородно-
рования. сти формы, размера, удельной поверхности
Учитывая, что с уменьшением дис- и когезионных свойств частиц дисперсного
персности сыпучесть растительных по- материала, а также его деформируемости и
рошков, как правило, возрастает, полу- влажности. Значение КВУ порядка 0,2–0,21
ченные результаты позволяют заключить, соответствует граничному значению, раз-
что более предпочтительным в техноло- деляющему свободный и связанный пото-
гии производства твердых лекарственных ки материала. Чем выше КВУ, тем меньше
форм по критерию сыпучести, вероятно, сыпучесть материала. Паттерны распреде-
является ЛРС со степенью измельчения ления значений параметра КВУ для ТИРС
порядка 0,5...1 мм, если это удовлетворяет представлены на рисунке 5 а.

а б
КВУ Эффект дисперсности

0,7 2,0

0,6 1,8

1 1,6 1
0,5
2 2
1,4
3 3
0,4
4 1,2 4

0,3 5 1,0 5
6 6
0,8
0,2 7 7
8 0,6 8
0,1
0,4

0 0,2
0 1 2 3 4 0 1 2 3 4
Категории дисперсности Категории дисперсности

Обозначения см. на рисунке 1.


Рисунок 5 – Пределы рассеяния коэффициента вибрационного уплотнения (слева) и эффект
дисперсности по данному параметру (справа) для порошковых фракций тонко измельченного
растительного сырья различных видов и разной морфологической структуры. Эффект
дисперсности нормирован для каждого объекта по наиболее тонкому порошку

Анализ показывает, что КВУ для ТИРС ЛРС, которая детерминирована индиви-
в большинстве случаев (за исключением дуальными морфологическими особенно-
3 из 24 порошков разных видов и разной стями и различиями химического состава
дисперсности) попадает в интервал, превы- поверхностных структур растительных
шающий 0,21–0,2. Индивидуальные вели- порошковых материалов.
чины КВУ при этом достигают 0,4 и даже Взаимодействие между сыпучестью и
0,7 (корневища с корнями валерианы с дис- КВУ проиллюстрировано на рисунке 6, из
персностью 0,1...0,25 мм), что соответству- которого видно, что обнаруживаемой связи
ет параметрам малосыпучих материалов. между этими параметрами не отмечается
Эффект дисперсности для КВУ про- для растительных порошков наиболее мел-
иллюстрирован на рисунке 5 б, из которо- кой (0,1...0,25 мм) и промежуточной фрак-
го видно, что степень измельчения может ций (0,25...0,5 мм). Континуумы распреде-
резко влиять на данный параметр, изменяя ления растительных порошков различных
его до 1,5–2 раз в направлении больших видов по параметрам сыпучести и КВУ для
или меньших значений в зависимости от этих категорий дисперсности рассеяны в
вида растительного сырья. координатном пространстве случайно, без
Эта неоднозначность эффекта дис- видимой взаимосвязи. Для крупных фрак-
персности, проявляющаяся и по другим ций порошков (0,5...1 мм) имеется слабая
характеристикам – специфическая черта тенденция к обратной взаимосвязи этих па-
48
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

раметров (если исключить 1-й объект – кор- ем оценки когезии, размера, формы и удель-
невища с корнями валерианы). ной поверхности частиц, однородности,
Таким образом, для характеристики пористости и деформируемости сыпучего
ТИРС как сыпучего материала КВУ не обла- материала.
дает существенной предсказательной силой. Как правило, УО и сыпучесть связа-
Как уже отмечалось, УО для сыпучих ны обратной зависимостью. У материалов
материалов дает больше информации о сы- с хорошей сыпучестью УО должен быть
пучести, чем УЕО, и также служит критери- меньше 400.

а б в
Дисперсность 0,1-0,25 мм Дисперсность 0,25-0,5 мм Дисперсность 0,5-1,0 мм

4 10 12
1 1 1
2 8 2 2
Сыпучесть, г/с

Сыпучесть, г/с

Сыпучесть, г/с
3 9
3 3 3
6
4 4 4
2 6
5 5 5
4
6 6 6
1 3
7 2 7 7
8 8 8
0 0 0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 0 0,2 0,4 0,6 0 0,1 0,2 0,3 0,4
КВУ КВУ КВУ

Обозначение объектов см. на рисунке 1.


Рисунок 6 – Континуумы распределения тонко измельченных растительных субстанций
различных видов по сыпучести и значению коэффициента вибрационного уплотнения.
Видно отсутствие существенного взаимодействия указанных параметров для
порошковых фракций «0,1…0,25 мм» и «0,25…0,5 мм» при наличии слабой обратной
связи (исключая 1-й объект) для фракции «05…1,0 мм»

Паттерны распределения значений па- лосыпучих материалов (45º…75º). При


раметра УО для ТИРС представлены на этом половина объектов группируется в
рисунке 7 а. диапазоне значений УО 45º…55º, осталь-
Как следует из представленных дан- ные в интервале 65º…75º, т.е. в зоне вы-
ных, ТИРС во всех без исключения слу- раженного проявления когезии порошко-
чаях (24 порошковых объекта разных вых материалов.
видов и разной дисперсности) по УО по- Эффект дисперсности по критерию УО
падали в интервал, характерный для ма- для растительных порошков (рисунок 7 б) в

а б
Угол обрушения, град Угол обрушения (град),
эффект дисперсности
80
1,30
75
1 1,20 1
70 2
2
3 1,10
65 3
4
4
60 5 1,00
5
6
55 6
7 0,90
7
50 8
0,80 8
45
0,70
40
0 1 2 3 4
0 1 2 3 4
Категории дисперсности
Категории дисперсности

Обозначения см. на рисунке 1.


Рисунок 7 – Пределы рассеяния значений угла обрушения (а) и эффект дисперсности по
данному параметру (б) для тонко измельченных растительных субстанций различных
видов и разной морфологической структуры. Эффект дисперсности нормирован для
каждого объекта по наиболее тонкому порошку
49
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

целом выражен малозначимо (изменения в сти, оставаясь в типовых пределах для ТИРС.
пределах 10–15%). Исключением являются Связь параметров УО и сыпучести рас-
порошки плодов боярышника, в этом случае тительных порошков проиллюстрирована
УО резко падает с уменьшением дисперсно- на рисунке 8.

а б в
Дисперсность 0,1-0,25 мм Дисперсность 0,25-0,5 мм Дисперсность 0,5-1,0 мм

4 10 12
1 1 1
2 8 2 2
Сыпучесть, г/с

Сыпучесть, г/с

Сыпучесть, г/с
3 9
3 3 3
6
4 4 4
2 6
5 5 5
4
6 6 6
1 3
7 2 7 7
8 8 8
0 0 0
30 40 50 60 70 80 30 40 50 60 70 80 30 40 50 60 70 80
УО, град УО, град УО, град

Обозначение объектов см. на рисунке 1.


Рисунок 8 – Континуумы распределения тонко измельченных растительных субстанций
различных видов по сыпучести и значению угла обрушения. Видно отсутствие существенного
взаимодействия указанных параметров для порошковых фракций «а» и наличие обратной
связи (исключая 1-й объект – корневища с корнями валерианы) для фракций «б» и «в»

Данные, представленные на рисунке 8, рошковые субстанции цветков ромашки и


наглядно показывают, что у порошков наи- корневищ с корнями валерианы);
более тонких фракций параметры УО и сы- 3) сыпучесть уменьшается с увеличе-
пучесть не взаимодействуют, но для расти- нием размера частиц и УЕО (порошковые
тельных порошков меньшей дисперсности субстанции корня алтея, листьев брусники,
в большинстве случаев обнаруживается об- листьев подорожника, травы пустырника).
ратная зависимость этих параметров. Таким образом, возможности прогноза
Полученные результаты позволяют по- поведения растительных порошков как сы-
лагать, что параметр УО, применяемый пучих материалов весьма затруднительны без
для характеристики сыпучих материалов, в прямой оценки сыпучести и других техноло-
первом приближении может быть исполь- гических характеристик этих субстанций.
зован для прогностической оценки сыпуче-
сти растительных порошков. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенный анализ свидетельствует о
том, что ТИРС отличаются от обычных сы- Физико-химические характеристики
пучих материалов выраженными специфи- ТИРС, которые используют для оценки по-
ческими особенностями, которые затрудня- тенциальной сыпучести, однородности по-
ют экстраполяцию известных закономер- тока, когезионных эффектов порошковых
ностей поведения сыпучих материалов, материалов (угол естественного откоса, угол
оцениваемых по косвенным показателям, обрушения, угол разности, коэффициент ви-
на растительные объекты. брационного уплотнения), отличаются не-
Приведенные примеры наглядно пока- однозначностью зависимостей от дисперс-
зывают, что ТИРС только по неоднознач- ности, вида ЛРС и выраженной спецификой
ному взаимодействию показателей сыпуче- взаимодействия с параметром сыпучести,
сти, дисперсности и УЕО подразделяются, что выделяет растительные порошки в осо-
по меньшей мере, на три группы: бую категорию сыпучих материалов.
1) сыпучесть возрастает с увеличением УЕО растительных порошков – пока-
размера частиц и уменьшением дисперсно- затель, отражающий потенциальную сыпу-
сти и УЕО (порошковые субстанции коры честь, удельную поверхность и когезионные
ивы прутьевидной и плодов боярышника); свойства частиц, – колеблется в пределах
2) сыпучесть возрастает с увеличением 450–650, что позволяет относить раститель-
размера частиц и увеличением УЕО (по- ные порошки преимущественно к связным

50
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

материалам. УЕО и сыпучесть раститель- The article analyses the physico-chemical


ных порошков не коррелируют, а эффект characteristics of finely powdered herbal sub-
дисперсности по параметру УЕО малозна- stances, which are used to assess the poten-
чим (±7%). Поэтому параметр УЕО не име- tial flowability, uniformity of flow, cohesion
ет достаточной прогностической силы для effects of powder materials (angle of repose,
предсказания поведения ТИРС в процессе angle of collapse, angle of difference, the vi-
производства твердых лекарственных форм bration compaction coefficient). The predict-
без предварительного гранулирования. ability of behaviour in plant substances as bulk
УР, характеризующий сыпучесть и materials is very difficult without a direct as-
склонность сыпучего материала к аэриро- sessment of their flowability and other tech-
ванию и псевдоожижению, – варьирующая nological characteristics. Studied characteris-
величина для растительных порошковых tics of finely powdered herbal substances are
субстанций разных видов. Установлено, ambiguous dependency of dispersion, types of
что УР и сыпучесть крупных порошковых medicinal plants and expressed specific inter-
фракций (0,5...1,0 мм) связаны обратной action parameter flowability. It allows to clas-
зависимостью. Поэтому данный параметр sify the finely ground plant matter as a special
может являться критериальной характери- category of pharmaceutical substances.
стикой для прогноза сыпучести ТИРС при Keywords: finely powdered herbal sub-
производстве лекарственных форм. stances, flowability, angle of repose, angle of
КВУ для ТИРС в большинстве случаев collapse, angle of difference, the coefficient
(кроме 3 субстанций из 24) попадает в интер- of vibratory compaction.
вал, превышающий граничное значение (0,21-
0,2), разделяющее свободный и связанный ЛИТЕРАТУРА
потоки материала. Устойчивых взаимосвязей
КВУ с дисперсностью и сыпучестью расти- 1. Хишова, О. М. Технологические
тельных порошков не выявляется, поэтому свойства тонко измельченных раститель-
КВУ как параметр не обладает существенной ных субстанций и научные основы их та-
предсказательной силой для характеристики блетирования / О. М. Хишова // Вестник
ТИРС как сыпучего материала. фармации. – 2014. – №3 (65). – С. 68–76.
УО для ТИРС в подавляющем числе слу- 2. Белоусов, В. А. Основы дозирования
чаев (23 из 24) попадает в интервал, характер- и таблетирования лекарственных порошков
ный для малосыпучих материалов (45º…75º), / В. А. Белоусов, М. Б. Вальтер. – М., 1980.
причем половина объектов находится в зоне – 210 с.
выраженной когезии порошковых частиц 3. Хишова, О. М. Таблетирование ле-
(65º…75º). Эффект дисперсности по этому карственного растительного сырья / О. М.
критерию малозначим. УО лишь в первом Хишова – Витебск, 2005. – С. 74–84.
приближении может быть использован для 4. Государственная фармакопея Респу-
прогностической оценки сыпучести ТИРС. блики Беларусь. (ГФ РБ I): В 2 т. Т.1. Общие
Таким образом, стандартные характери- методы контроля лекарственных средств
стики, используемые для косвенной оценки (М-во здравоохр. Респ. Беларусь, УП «Центр
качества сыпучих материалов, недостаточно экспертиз и испытаний в здравоохранении»;
информативны для надежного прогноза тех- под общ. р ед. А. А. Шерякова. – Молодечно:
нологических свойств ТИРС в процессе про- Тип. «Победа», 2012. – С. 497–499.
изводства твердых лекарственных форм. Все
это позволяет классифицировать ТИРС в ка-
Адрес для корреспонденции:
честве особой категории фармацевтических
субстанций, требующих прямого определе- 210023, Республика Беларусь,
ния параметров сыпучести и других техно- г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
логических характеристик этих субстанций. УО «Витебский государственный
ордена Дружбы народов
SUMMARY медицинский университет»,
кафедра промышленной технологии
с курсом ФПК и ПК,
O. M. Khishova тел. раб.: 8 (0212) 37-00-13,
FLOWABILITY AND COHESIVE Хишова О. М.
PROPERTIES OF FINELY POWDERED
HERBAL SUBSTANCES Поступила 19.11.2014 г.

51
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ
О. Г. Смалюх1, С. В. Сур2

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ИДЕНТИФИКАЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
В РАСТИТЕЛЬНОМ ЛЕКАРСТВЕННОМ СРЕДСТВЕ СЕДАВИТ, ТАБЛЕТКАХ

АО «Галичфарм», г. Львов, Украина


1
2
Корпорация «Артериум», г. Киев, Украина

Выбраны группы биологически активных веществ и разработаны методики


для их идентификации и определения в растительном лекарственном средстве
Седавит, таблетках. Разработаны методики высокоэффективной жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ) для идентификации полифенольных соединений и количе-
ственного определения пиридоксина и никотинамида; газовой хроматографии (ГХ)
для идентификации изовалериановой кислоты, спектрофотометрии (СФ) для ко-
личественного определения флавоноидов.
Ключевые слова: растительные лекарственные средства, Седавит, идентифи-
кация, количественное определение, методики контроля.

ВВЕДЕНИЕ держания индивидуальных соединений,


групп БАВ или маркеров в ГЛС;
Растительные лекарственные средства – выбор и обоснование критериев для
содержат сложный комплекс веществ раз- стандартизации с учетом требований фар-
личных химических классов, при этом в макопейных монографий, научных литера-
результате воздействия технологических турных данных и особенностей техноло-
процессов или внутренних ферментатив- гии производства.
ных реакций могут происходить химиче- Рассмотрим каждый из этапов на при-
ские преобразования этих веществ. Задача мере разработки готового лекарственного
стандартизации лекарственного расти- средства на растительной основе Седавит,
тельного сырья и лекарственных средств таблетки.
на их основе часто осложняется отсут-
ствием определенных параметров контро- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ля, а уже существующие не пригодны для
проверки качественных и количественных Объектом наших исследований было
характеристик. Целью нашей работы была лекарственное средство Седавит, таблет-
разработка подхода к стандартизации го- ки, активными фармацевтическими ин-
тового лекарственного средства (ГЛС) на гредиентами которого являются густой
растительной основе, гарантирующего экстракт, состоящий из пяти растительных
эффективность и безопасность для по- компонентов (корневища с корнями вале-
требителей, обеспечивающего разработку рианы, плоды боярышника, трава зверо-
спецификации и методов контроля каче- боя, листья мяты перечной, шишки хме-
ства, пригодных, в том числе, для обнару- ля), витамины – никотинамид (витамин Р)
жения фальсифицированных лекарствен- и пиридоксина гидрохлорид (витамин В6).
ных средств [1, 2]. Стандартизация пред- В работе использовали методы газовой
усматривала следующие взаимосвязанные (ГХ) и высокоэффективной жидкостной
этапы при фармацевтической разработке (ВЭЖХ) хроматографии. Исследования
продукта: методом ГХ проводили на газовом хрома-
– выбор индивидуальных соединений, тографе Agilent 6890 N” с пламенно-иони-
групп биологически активных веществ зационным детектором ("Agilent", США).
(БАВ) или маркеров, по которым прово- Для ВЭЖХ-исследований использовали
дится оценка качества ГЛС; жидкостный хроматограф Agilent 1200 с
– выбор методов и разработка методик детектором диодная матрица ("Agilent",
идентификации и / или определения со- США). Количественное определение сум-
52
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

мы флавоноидов проводили на спектрофо- ет разработку стратегии контроля, в том


тометре Cary 100 («Varian», Австралия). В числе качественного или количественного
работе были использованы стандартные определения биологически активных ве-
образцы хлорогеновой, кофейной, феруло- ществ или веществ-маркеров, присущих
вой и розмариновой кислот (Fluka), рутин, для отдельных видов лекарственного рас-
гиперозид, лютеолин, кверцетин, апигенин тительного сырья (ЛРС), т.к. в экстракте
(Fluka). Для исследований использовали будут присутствовать как общие для раз-
реактивы, соответствующие требованиям ных видов ЛРС, так и характерные для од-
Европейской Фармакопеи (ЕР) и Государ- ного вида ЛРС вещества. В связи с этим
ственной Фармакопеи Украины (ГФУ). нами был проведен литературный обзор
Растворы реактивов готовили согласно БАВ исследуемых видов сырья [5–7], в ре-
требованиям ЕР/ГФУ [3, 4]. зультате которого были выбраны группы
веществ, наличие и содержание которых
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ могло бы использоваться для идентифика-
ции и количественного определения (ре-
Выбор индивидуальных соединений, зультаты обзора представлены в таблице).
групп БАВ или маркеров. Каждый рас- Согласно данным литературы [5–7], в
тительный компонент комплексного экс- составе БАВ четырёх видов ЛРС (плоды
тракта содержит различные классы БАВ, боярышника, трава зверобоя, листья мяты
которые по составу и соотношению могут перечной, шишки хмеля) присутствуют
меняться в зависимости от географиче- фенольные соединения, которые были вы-
ских и климатических условий произрас- браны для качественных и количествен-
тания и культивирования, сбора, сушки ных характеристик. Для доказательства
и т.д. Комплексный экстракт производят, присутствия в ГЛС корневищ с корнями
одновременно экстрагируя смесь пяти ви- валерианы в качестве маркера выбрали
дов растительного сырья. Это затрудня- изовалериановую кислоту.

Таблица – Биологически активные вещества исследуемых видов сырья


Сырье Состав
Листья мяты Эфирное масло (от 2,40 до 3,75%). Эфирное масло в своей основе состоит
перечной из ментола (41-65%), ментона и ментилацетата. Каротин, флавоноиды:
апигенин, гесперидин, рутин, хлорогеновая, розмариновая, урсоловая и
олеаноловая кислоты; микроэлементы: медь, марганец, стронций и др.
Трава зверобоя Флавоноиды: гиперицин, гиперозид, рутин, кверцитрин, кверцетин,
хлорогеновая, кофейная кислоты, дубильные вещества, кумарины,
каротиноиды, витамины С и РР.
Плоды боярышника Флавоноиды: кверцетин, гиперозид, рутин и др.; хлорогеновая, кофейная
кислоты, гликозиды, каротиноиды, дубильные вещества, жирные масла,
сапонины, пектиновые вещества и др.
Корневища с корнями Эфирное масло (от 0,5 до 2 %), главной частью которого является
валерианы валериано-борнеоловый эфир, различные органические кислоты:
валериановая, изовалериановая, муравьиная, уксусная и др.,
валепотриаты, алкалоиды: валерин, хатинин и др.
Шишки хмеля Горькие вещества гумулон, лупулон, гумуленовая кислота, изомеры
гумулинона, эфирное масло, флавоноиды рутин, кверцитрин, дубильные
вещества и др.

Выбор критериев и методов идентифи- средств являются высокоселективные хро-


кации и / или определения содержания инди- матографические методы контроля [8].
видуальных соединений, групп БАВ или мар- Для идентификации и количественного
керов в ГЛС. При выборе методов контроля определения синтетических компонентов
необходимо учитывать селективность и чув- никотинамида (витамин Р) и пиридоксина
ствительность методик, приемлемость для гидрохлорида (витамин В6) было предложе-
контроля качества в цепочке ЛРС – жидкий но использование жидкостной хроматогра-
экстракт – густой экстракт – ГЛС. Наибо- фии. Условия проведения анализа позволя-
лее подходящими этим требованиям и при- ют одновременно проводить идентифика-
годными для стандартизации растительных цию и количественное определение.
53
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Для идентификации фенольных со- представители биологически активных


единений в ГЛС избран метод жидко- веществ растительных компонентов, вхо-
стной хроматографии. Идентификацию дящих в состав лекарственного средства.
веществ проводили путем сравнения вре- Хроматографирование проводили на жид-
мен удерживания пиков на хроматограм- костном хроматографе с УФ-детектором с
ме испытуемого раствора с временами использованием хроматографической ко-
удерживания стандартных веществ. При лонки C18; подвижная фаза А: 0,6 г/л рас-
разработке методики в качестве стандарт- твор натрия дигидрофосфата моногидрат с
ных веществ были использованы образ- рН 2,5 (с помощью кислоты фосфорной),
цы хлорогеновой, кофейной, феруловой и подвижная фаза В: ацетонитрил; скорость
розмариновой кислот, рутина, гиперозида, подвижной фазы – 1,0 мл/мин; детектиро-
лютеолина, кверцетина, апигенина. Для вание при длине волны 330 нм. Типичные
рутинного контроля были избраны хлоро- хроматограммы раствора сравнения и ис-
геновая, розмариновая, кофейная кислоты пытуемого раствора представлены на ри-
и кверцетин как наиболее специфические сунках 1.1 и 1.2.

Рисунок 1.1 – Типичная хроматограмма раствора сравнения, полученная


при идентификации фенольных соединений

Рисунок 1.2 – Типичная хроматограмма испытуемого раствора Седавит, таблеток,


полученная при идентификации фенольных соединений

Для идентификации в ГЛС кислоты изо- пика кислоты изовалериановой, которая яв-
валериановой, содержащейся в корневищах ляется специфическим веществом для кор-
с корнями валерианы, использовали газовую невищ с корнями валерианы Хроматогра-
хроматографию. Идентификацию проводи- фирование проводили на газовом хромато-
ли путем сравнения времени удерживания графе с пламенно-ионизационным детекто-
основного пика на хроматограмме испы- ром, используя капиллярную колонку дли-
туемого раствора с временем удерживания ной 60 м с внутренним диаметром 0,53 мм,
54
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

неподвижной фазой которой является ма- полупродуктах и особенности технологии.


крогол 20000 Р с толщиной слоя 1 мкм; Требования должны отображать реальный
газ-носитель – гелий для хроматографии Р, уровень БАВ, который характеризует эф-
скорость газа-носителя 5 мл/мин, деление фективность ГЛС. При этом, если в ГЛС
потока 1:1. Типичные хроматограммы рас- содержится незначительное количество
твора сравнения кислоты изовалериановой БАВ или маркера, в спецификацию вво-
и испытуемого раствора Седавит, таблеток дятся требования только для идентифи-
представлены на рисунках 2.1 и 2.2. кации, а в количественных испытаниях
При выборе критериев для количе- определяют сумму БАВ, в этом случае ис-
ственного определения нужно учитывать пытания могут быть проведены, например,
содержание БАВ в растительном сырье, в спектрофотометрическим методом.

Рисунок 2.1 – Типичная хроматограмма раствора сравнения кислоты изовалериановой,


полученная при ее идентификации

Рисунок 2.2 – Типичная хроматограмма испытуемого раствора Седавит, таблеток,


полученная при идентификации кислоты изовалериановой

В состав Седавит, таблеток входит чета содержания действующих веществ


комплексный экстракт, состоящий из пяти учитывали его доступность для рутинного
видов ЛРС. Его терапевтическое действие контроля, входит ли избранное вещество в
определяет сложный комплекс БАВ, экс- определяемую группу соединений, необ-
трагированных из растительного сырья. ходимость использования коэффициентов
В связи с этим нерациональным является пересчета [9]. В качестве стандартного об-
определение каждого отдельного компо- разца избран рутин, который в условиях
нента хроматографическим методом с по- анализа дает максимум поглощения при
следующим суммированием площадей пи- 415 нм и по ходу спектра существенно не
ков при количественном анализе действу- отличается от такового для анализируемо-
ющих веществ. Для таких целей достаточ- го раствора. Для рутинного контроля пред-
но использовать спектрофотометрический ложено использовать значение показателя
метод, которым определяют суммарную поглощения рутина с алюминия хлори-
оптическую плотность определяемых дом, что позволило упростить и удешевить
компонентов в условиях анализа [9]. При методику количественного определения
выборе стандартного образца для перерас- суммы флавоноидов, которые являются

55
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

типичной группой для использованных проводили измерения оптической плот-


видов ЛРС. Оптическую плотность испы- ности раствора стандартного образца ру-
туемого раствора определяли после обра- тина с алюминия хлоридом, используя в
зования цветного комплекса извлеченных качестве компенсационного раствора ис-
этилацетатом флавоноидов с алюминия ходный раствор стандартного образца ру-
хлоридом. В качестве компенсационного тина без добавления реактива алюминия
раствора использовали исходный раствор хлорида.
(этилацетатное извлечение) без добавле- Типичные дифференциальные спек-
ния реактива алюминия хлорида, что по- тры поглощения комплекса алюминия хло-
зволило избежать влияния на результаты рида с флавоноидами исследуемого (ком-
анализа сопутствующих веществ, экстра- плексного экстракта) и стандартного об-
гированных этилацетатом. Параллельно разца рутина представлены на рисунке 3.

Рисунок 3 – Дифференциальные электронные спектры поглощения комплекса


алюминия хлорида с флавоноидами исследуемого раствора Седавит, таблеток (1)
и стандартного раствора рутина (2)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ of pyridoxine and nicotinamide; gas chroma-


tography procedures for identification of is-
В результате проведенной работы ovaleric acid, spectrophotometry procedures
предложен алгоритм стандартизации ГЛС for quantitative determination of flavonoids.
растительного происхождения, на примере Keywords: herbal medicinal products,
Седавит, таблеток, который включил усло- Sеdavit, identification, quantitative determi-
вия выбора групп БАВ и маркеров, мето- nation, control methods.
дик их идентификации и количественного
определения, качественных и количествен- ЛИТЕРАТУРА
ных критериев для оценки ГЛС.
1. Сур, С. В. Методология оценки каче-
SUMMARY ства растительных лекарственных средств
на основании результатов, полученных с
O. G. Smalyuh, S. V. Sur помощью современных аналитических
DEVELOPMENT OF IDENTIFICATION методов / С. В. Сур // Фармацевтический
AND QUANTITATIVE DETERMINATION журнал. – 2002. – № 6. – С. 64 – 71.
METHODS OF BIOLOGICALLY ACTIVE 2. Guidelines for the assessment of herb-
SUBSTANCES IN HERBAL MEDICINAL al medicines / WHO Expert Committee on
PRODUCT SEDAVIT, TABLETS Specification for Pharmaceutical Prepara-
The groups of biologically active sub- tion. – Thirty-fourth Report. – Geneva: World
stances were selected and methods for their Health Organization, 1996. – (WHO Techni-
identification and determination in herbal cal Report Series, No. 863).
medicinal product Sedavit, tablets were de- 3. Державна Фармакопея України /
veloped. The following procedures have been Державне підприємство «Науково-ек-
developed: HPLC procedures for identification спертний фармакопейний центр». – 1-е
of polyphenolic compounds and quantification вид. – Доповнення 2. – Харків: Державне
56
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

підприємство „Науково-експертний фар- карственных средств растительного про-


макопейний центр”, 2008. – 620 с. исхождения / С. В. Сур, О. М. Гриценко //
4. Державна Фармакопея України / Ліки України. – 2002. – № 4. – С. 47 – 49.
Державне підприємство «Науково-екс- 9. Гризодуб, А. И. Особенности фар-
пертний фармакопейний центр». – 1-е вид. макопейных подходов к количественному
– Харків: РІРЕГ, 2001. – 556 с. определению лекарственного растительного
5. Растительные лекарственные сред- сырья и суммарных фитопрепаратов / А. И.
ства / Н. П. Максютина [и др.] // К.: Здоров’я, Гризодуб, О. А. Евтифеева, К. И. Проскури-
1985. – 280 с. на // ФАРМАКОМ. – 2012. – №6. – С. 7–30.
6. Муравьева, Д. А. Фармакогнозия / Д. Адрес для корреспонденции:
А. Муравьева. – Москва.: Медицина, 1981.
– 656 с. Украина,
7. Фармацевтическая энциклопедия г. Львов, ул. Опрышковськая 6/8,
Украины / Голова ред. ради В. П. Черних. ПАО «Галичфарм»,
–2-е изд. – К.: «МОРІОН», 2010. – 1632 с. e-mail: osmalyuh@gmail.com,
8. Сур, С. В. Проблемы и перспективы Смалюх О. Г.
разработки и внедрения современных ле- Поступила 03.11.2014 г.

Н. Е. Блажеевский, О. И. Коретник

ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ D(+)-БИОТИНА


В ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ В ВИДЕ СООТВЕТСТВУЮЩЕГО
СУЛЬФОКСИДА

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина

Разработана методика количественного определения d(+)-биотина в таблет-


ках ВОЛВИТ® 5 мг методом постояннотоковой полярографии на ртутном капель-
ном электроде в виде соответствующего сульфоксида d(+)-биотина, полученного
посредством действия гидропероксомоносульфата калия в кислой среде. На фоне
0,25 моль/л Н3PO4 (рН 1,4) градуировочный график сохраняет линейный характер:
І = 1,15×104с + 0,63, r=0,996. Исследовано влияние вспомогательных веществ, а так-
же массы образца на определение d(+)-биотина разработанной методикой. При
определении d(+)-биотина в таблетках по 5 мг RSD<3%, δ=1,3% (n=5, P=0,95%). Пре-
дел обнаружения (LOD) и предел количественного определения (LOQ) равны 1,1×10-5
и 3,6× 10-5 моль/л соответственно.
Ключевые слова: d(+)-Биотин, гидропероксомоносульфат калия, полярография,
определение, таблетки.

ВВЕДЕНИЕ скую активность имеет только природный


d(+)-биотин.
d(+)-Биотин (Витамин Н) по химиче-
скому строению является гексагидро-2-
1Н-тиено[3,4-d]-имидазол-4-пентановой
кислотой – соединение, содержащее кон-
денсированную гетероциклическую си-
стему имидазолового и тиофенового колец
с остатком н-валериановой кислоты (рису-
нок 1). Благодаря наличию трех асимме-
тричных атомов углерода возможно суще-
ствование 8 оптических изомеров биотина
и четырех рацематов. Однако биологиче- Рисунок 1 – Структурная формула
d(+)-Биотина
57
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

d(+)-Биотин играет важную роль в модействие d(+)-биотина с авидином [4].


углеводном обмене: он взаимодействует с Нижний предел определения d(+)-биотина
инсулином и, тем самым, стабилизирует составляет от 0,370 нг/г до 0,5 нг/г в зави-
содержание глюкозы в крови. Кроме того, симости от типа пробы.
он принимает участие в производстве глю- Фармакопея США (USP) рекомендует
кокиназы – вещества, которое «запускает» для определения содержания основного
процесс обмена глюкозы. Глюкокиназа вы- вещества в субстанции использовать ме-
рабатывается в печени, там, где хранится тод кислотно-основного титрования 0,1
d(+)-биотин. моль/л раствором гидроксида натрия с ви-
d(+)-Биотин применяют в медицин- зуальным определением конечной точки
ской практике при комплексной терапии титрования (КТТ) по фенолфталеину [5].
и профилактике заболеваний, вызванных Согласно Европейской Фармакопее опре-
дефицитом биотина: заболевания кожи, деление осуществляют методом неводного
ногтей, волос, а также при нарушениях со потенциометрического титрования испы-
стороны пищеварительного тракта, психо- туемого образца 0,1 моль/л раствором ги-
эмоциональных расстройствах и т.д. дроксида тетрабутиламмония [6].
Для количественного определения био- Также описано большое количество
тина в ранних работах предложены колори- других методик количественного опре-
метрические методы. Один из них основан деления d(+)-биотина с использованием
на гидролизе d(+)-биотина в концентри- современных физико-химических и фи-
рованной кислоте и определении образо- зических методов: спектрофлуориметрии
вавшейся диаминокарбоновой кислоты по [7], электрохимии [8], жидкостной хрома-
цветной реакции с нингидрином [1]. В дру- тографии (ВЭЖХ) [9] в сочетании с ку-
гом способе используется специфическая лонометрическим детектированием [10],
реакция на уpеидный цикл d(+)-биотина хромато-масс-спектрометрии (ЖХ–МС)
с n-диметиламиноцинамальдегидом [2]. [11, 12], капиллярного электрофореза [13],
Нижние границы определения составляют радиоизотопным [14], кинетическим мето-
100 и 10 мкг/мл соответственно. дом [15], xемилюминесценции [16] и др.
Очень чувствительны (0,025-0,5 нг/мл) [17, 18].
микробиологические методы [3]. Разрабо- В последнее время в фармацевтиче-
тано относительно много их модификаций, ском анализе серосодержащих соединений
все они отличаются тест-организмами, распространение получили электрохими-
процедурой определения и способом из- ческие методы анализа, особенно поляро-
мерения скорости ростовой реакции. В графические и вольтамперометрические,
качестве тест-организмов используют что обусловлено их достаточно высокой
Lactobacillum planetarium 8014 ATCC, точностью и избирательностью определе-
Saccharomyces cerevisiae 7754 ATCC, ния. При оптимальных условиях поляро-
Neurospora crassa и др. Однако эти мето- графия позволяет определять отдельные
ды недостаточно избирательны, посколь- действующие вещества в различных ле-
ку микроорганизмы способны усваивать карственных формах в присутствии ряда
не только d(+)-биотин, но и некоторые его вспомогательных веществ.
аналоги и метаболиты, которые являются Так, была предложена избиратель-
неактивными для человека. Это затруд- ная методика полярографического опре-
няет определение истинного содержания деления биотина и его технологических
d(+)-биотина в биологических объектах, примесей на фоне хлорида калия и 1,25
а, следовательно, является одной из при- моль/л этанольного раствора серной кис-
чин большой вариабельности получаемых лоты соответственно, которая пригодна
результатов анализа. Кроме того, в присут- для контроля процесса производства ле-
ствии ненасыщенных кислот микробиоло- карственного средства [19]. Ограничением
гические методы могут давать неправиль- ее является невозможность использования
ные результаты. В последнее время среди для количественного определения биотина
инструментальных методов анализа для в готовых лекарственных средствах из-за
определения d(+)-биотина получил рас- низкой чувствительности (2∙10-4 моль/л).
пространение более удобный и быстрый В ранней работе [20] описана методи-
иммуноферментный метод, в основе ко- ка непрямого полярографического опре-
торого лежит высокоспецифичное взаи- деления биотина в виде соответствующе-
58
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

го нитрозо-производного при потенциале 4. Раствор серной кислоты 0,1 моль/л.


Е1/2= – 0,83 В (относительно НКЭ) на фоне Раствор серной кислоты готовили из фик-
0,1 моль/л раствора ацетата натрия. Однако санала стандарт-титра в мерной колбе вме-
она продолжительна во времени, а поэтому стимостью 500,0 мл.
непригодна для рутинных исследований. 5. Раствор фосфорной кислоты 2,5
Подытоживая, можно сделать вывод, моль/л. 13 мл концентрированной фосфор-
что существующие методики полярогра- ной кислоты «хч» переносили в мерную
фического определения биотина несовер- колбу вместимостью 100,0 мл и объем до-
шенны и требуют улучшения. Перспектив- водили до метки дважды дистиллирован-
ным направлением научных исследований ной водой при температуре +20оС.
является разработка методик количествен- Вольтамперометрические измерения
ного определения электрохимически неак- осуществляли на цифровой установке в
тивного биотина по токам восстановления триэлектродном электролизере со ртутным
электроактивных окисленных функцио- капельным индикаторным электродом
нальных производных, которые получают в постоянно токовом режиме с быстрой
в предварительной стадии анализа. разверткой (0,5 В/с). В качестве электро-
Нами предложено осуществлять коли- да сравнения использовали насыщенный
чественное определение биотина методом хлоридом калия каломельный электрод
непрямой полярографии после перевода его (н.к.э.).
в легко восстанавливаемое соединение – Значения величины рН растворов из-
соответствующий сульфоксид биотина – с меряли с помощью стеклянного электрода
помощью гидропероксомоносульфата ка- ЭСЛ–43–07 на иономере «Иономер лабо-
лия в кислой среде. раторный И–160М» (Беларусь) в паре с на-
сыщенным хлоридом калия хлорсеребря-
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ным электродом ЭВЛ–1М3.1.
Объектами исследований были суб-
1. В качестве окислителя использова- станция Биотина SHAANXI SCIPYAR
ли тройную калиеву соль кислоты Каро BIOTECNOLOGY Co., LTD, Xi’an China,
(2KHSO5·K2SO4·KHSO4) – «Оксон®». Рас- ser. WS140215, 99,12%, Tпл. 45ºС, которая
твор гидропероксомоносульфата калия, отвечала требованиям Европейской Фар-
1∙10-2 моль/л. Навеску порошка Оксона®, макопеи [6], и лекарственная форма d(+)-
которая содержит 0,615 г основного веще- Биотина – таблетки ВОЛВИТ®, покрытые
ства, количественно переносили в колбу оболочкой по 5 мг № 30 (производства
вместимостью 200,0 мл, растворяли в 100 Кусум Хелтхкер, Пвт. Лтд, Индия (Kusum
мл дважды дистиллированной воды при Heаlthcare, Pvt. Ltd, India), номер серии:
перемешивании и доводили объем дважды WA3002. Допуски: от 4,5 мг до 5,5 мг био-
дистиллированной водой до метки. Кон- тина в таблетке (90,0-110,0% от заявленно-
центрацию контролировали методом йодо- го количества). Результаты количествен-
метрического титрования. Растворы мень- ного определения (assay) по сертификату:
шей концентрации готовили путем разбав- 5,01 мг/табл. 100,29%.
ления исходного дважды дистиллирован- Приготовление раствора рабоче-
ной водой в определенное количество раз. го стандартного образца РСО биотина
2. Раствор тиосульфата натрия, 0,02 (2∙10-3 моль/л). Навеску субстанции биоти-
моль/л. Готовили раствор тиосульфата на- на, которая содержала 0,0488 г основного
трия 0,1 моль/л из фиксанала стандарт-ти- вещества, растворяли в 100 мл этанола при
тра. С помощью пипетки отбирали 20 мл температуре +20оС.
полученного раствора, переносили в мер- Приготовление модельного раствора
ную колбу вместимостью 100,0 мл и до- биотина (0,50 мг/мл). Навеску субстан-
водили объем раствора дважды дистилли- ции биотина, которая содержала 0,0500 г
рованной водой до метки при температуре основного вещества, растворяли в 100 мл
+20оС. этанола при температуре +20оС.
3. Раствор йодида калия 5%. Навеску Для создания необходимого рН рас-
5,0 г йодида калия «хч» растворяли в 50 мл твора использовали 0,25 моль/л раствор
дважды дистиллированной воды и доводи- фосфорной кислоты и 0,1 моль/л раствор
ли объем до 100,0 мл дважды дистиллиро- гидроксида калия. Все растворы изготов-
ванной водой. лены из реактивов квалификации ч.д.а.
59
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Методика полярографического опре- сида биотина не меняются. Однако жела-


деления биотина в виде его сульфоксида, тельно, чтобы концентрация гидроперок-
полученного с помощью гидропероксомоно- сомоносульфата калия в растворе не пре-
сульфата калия. Навеску порошка, 5 рас- вышала 10-4 моль/л, так как в результате
тертых таблеток, растворяли в 50 мл этано- восстановления КHSO5 (анодный участок
ла, фильтровали на фильтре с синей лентой. полярограммы) увеличивается остаточный
Отбирали 1,00 мл раствора (0,25–1,25 мл ток и несколько искажается фоновая линия
2,0∙10-3 моль/л (25,0 мг/50 мл) раствора PСО полярограммы (ее катодный участок). На
биотина при построении градуировочного полярограмме волна восстановления суль-
графика) в мерную колбу вместимостью фоксида биотина с увеличением рН смеща-
25 мл, добавляли 2,5 мл 2,5 М фосфорной ется в катодный участок и при рН>3 волна
кислоты и 1,15 мл 2∙10-3 моль/л раствора полностью сливается с волной восста-
гидропероксомоносульфата калия и выдер- новления фонового электролита (рис. 2).
живали 1 мин. Доводили до метки дважды Процесс восстановления в условиях поля-
дистиллированной водой, переносили в рографирования полностью необратимый:
электролизер, удаляли кислород в течение на анодной ветке полярограммы вообще
10 мин. и полярографировали. отсутствует волна. При рН 1,4 (раствор
0,25 моль/л фосфорной кислоты) на поля-
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ рограмме пик прослеживался при – 1,05…
– 1,1 (относительно н.к.э.) в зависимости
Установлено, что оптимальным для ко- от концентрации деполяризатора и был
личественного окисления биотина гидро- самым высоким. В условиях достаточно
пероксомоносульфатом калия в соответ- большого избытка окислителя более чем
ствующий сульфоксид является рН 1,4–1,5. за 30 мин в слабокислой среде наблюдает-
Время количественного выхода продукта – ся дальнейшее окисление образованного
сульфоксида биотина – должно быть не сульфоксида биотина до соответствующе-
менее 60 с. В пределах от 1,05 до 1,1-ра- го сульфонового производного, который
зового молярного избытка гидропероксо- в условиях полярографирования является
моносульфата калия полярографические электрохимически инертным (отсутствие
характеристики восстановления сульфок- волны).

рН: 1,2 – 3,0; 3 – 2,0; 4 – 1,4


Рисунок 2 – Влияние рН среды на высоту полярограммы восстановления сульфоксида
биотина. с(Biotin)=1∙10-4 моль/л

Линейность предложенной методики Результаты полярографического опре-


была доказана с использованием нормали- деления биотина представлены в таблицах
зованных координат согласно ГФ Украины 2-3. Методом «введено-найдено» показа-
(n=9; r=0,996) (рисунок 3, таблица 1) [21]. но отсутствие систематической ошибки
60
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

(δ<RSD). Установлено, что вспомогатель- ловый, тальк, диоксид титана, полиэтилен-


ные вещества (целактоза 80, лаурилсуль- гликоль, лецитин, понсо 4R, хинолиновый
фат натрия, кроскармелоза натрия, диок- желтый), которые входят в состав готовой
сид кремния коллоидный безводный, сте- лекарственной формы, не мешают опреде-
арат магния) и оболочка (спирт поливини- лению.

(0 – 0 (фон); 1 – 0,2; 2 – 0,4; 3 – 0,6; 4 – 0,8; 5 – 1,0)


Рисунок 3 – Концентрационная зависимость высоты полярографический волны
сульфоксида биотина. 0,25 моль/л Н3РО4 (рН 1,4). с(Biotin), 10-4 моль/л

Таблица 1 – Данные регрессионного анализа


Параметр Значение
Пределы линейности (моль/мл) (3,6–10)∙10-5
Уравнение градуировочного графика* І = 1,15×104 с + 0,63
Sb 6,131×102
±tSb 0,195×104
Sa 0,04
±tSa 0,13
LOD (моль/л) 1,1×10-5
LOQ (моль/л) 3,6×10-5
*Примечание: y = b × с + a

Таблица 2 – Результаты определения биотина в модельных растворах (n = 5, Р = 0,95)


Взято с, 10-5 , (моль/л) Найдено ( x ± Δ x )×105 % ± RSD δ (%)
6,14* 6,17 ± 0,26 102,7 ± 3,4 0,49
8,19 8,13 ± 0,28 101,6 ± 2,7 1,65
*Примечание: Содержание определено по стандартной методике [6].

Таблица 3 – Результаты количественного определения биотина в таблетках по 5 мг


Волвит® (Kusum Healthcare, Pvt. Ltd, India) (n = 5, Р = 0,95)
Содержание биотина (мг/ табл.) Найдено ( x ± x ) % ± RSD δ (%)
5,01 5,08 ± 0,18 101,6 ± 2,7 1,3
(100,29% )*
*Примечание: Задекларированное содержание биотина в сертификате, найденное по стандарт-
ной фармакопейной методике [6].
61
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Минск: Наука и техника, 1979. – 551 с.


2. Тsuda, T. Colorimetric determination
Разработана методика количественно- of biotin / T. Тsuda // Sankyo Kenkyusho
го определения биотина в таблетках по 5 Nempo. – 1968. – Vol. 20. – P. 65–69.
мг методом непрямой полярографии после 3. Determination of biotin concentration
перевода его в легко восстанавливаемое by a competitive enzyme-linked immuno-
соединение – соответствующий сульфок- sorbent assay (ELISA) method / Y. S. Chang
сид биотина – с помощью гидропероксо- [et al.] // J. Biochem. Biophys. – 1994. – Vol.
моносульфата калия в кислой среде. На 29, № 3. – Р. 321–329.
фоне 0,25 моль/л Н3PO4 (рН 1,4) градуиро- 4. Определение свободного d-биотина
вочный график сохраняет линейный харак- – сравнение инструментального и неин-
тер: І = 1,15×104с + 0,63, r=0,996. Изучено струментального методов анализа / И. С.
влияние вспомогательных веществ. При Павлова [и др.] // Биоорган. химия. – 1996.
определении биотина в таблетках по 5 мг – Т. 22, № 3. – С. 233–227.
RSD<3%, δ=1,3% (n=5, P=0,95%). Предел 5. The United States Pharmacopoeia 30,
обнаружения (LOD) и предел количествен- the National Formulary 25 US Pharmacopoeial
ного определения (LOQ) равны 1,1×10-5 и Convention: Rockville, MD; Electronic
3,6×10-5 моль/л соответственно. version, 2007.
Данное направление является пер- 6. European Pharmacopoeia. – 7th ed. –
спективным в разработке методик количе- Strasbourg: EDQM, 2010. – V. 1–2. – 3536 p.
ственного определения других серосодер- 7. Ahmed, J. Determination of d-biotin at
жащих биологически активных веществ и the microgram level / J. Ahmed, K. K. Verma
лекарственных средств. // Talanta. – 1979. – Vol. 26. – P. 1025–1026.
8. Ultrasensitive electrochemical detection
SUMMARY of biotin using electrically addressable site-
oriented antibody immobilization approach
M. Ye. Blazheyevskіy, O. I. Koretnik via aminophenyl boronic acid / Ja-an Annie
VOLTAMMETRIC DETERMINATION OF Но [et al.] // Biosens. and Bioelectr. – 2010. –
D (+)-BIOTIN IN MEDICATIONS AS THE V. 26. – P. 1021–1027.
CORRESPONDING SULFOXIDE 9. Определение водорастворимых ви-
A DC cathodic polarography procedure таминов в витаминных примиксах, био-
for the quantitative determination of d(+)-bi- логически-активных добавках и фарма-
otin as its corresponding sulphoxide obtained цевтических препаратах методом высоко-
by potassium hydrogenperoxomonosulphate эффективной жидкостной хроматографии
in tablets on 5 mg was developed. The cali- с градиентным элюированием / А. А Бен-
bration graph preserves the linear nature (0,25 дрышев [и др.] // Вестн. Московск. ун-та.
mol/L H3PO4, рН 1,4) for measurements at Сер. 2. Химия. – 2010. – Т. 51, № 4. – С.
a dropping-mercury electrode (DME): І = 315–324.
1,15×104с + 0,63, r=0,996. Parameters that 10. Using of HPLC coupled with colo-
affect the d(+)-biotin determination using this metric detector for the determination of biotin
method were investigated such as content of in pharmaceuticals / A. I. Zerzanova [et al.]
the matrix and sample size. А recovery of // J. Pharm. Biomed. Analysis. – 2007. – Vol.
d(+)-biotin in tablet 5 mg RSD<3%, δ=1,3% 45, № 5. – P. 730–735.
(n=5, P=0,95%). LOD and LOQ of 1,1×10-5 11. Simultaneous separation and analysis
and 3,6×10-5mol/L respectively were calcu- of water- and fat-soluble vitamins on multi-
lated. modal reversed-phase weak anion exchange
Keywords: d(+)-Biotin, potassium hydro- material by HPLC-UV / R. Dabre [et al.] // J
genperoxomonosulphate, DC polarography, Sep Sci. – 2011. – Vol. 34, №7. – Р. 761–772.
determination, tablets. 12. Patil Ashish. Analytical method de-
velopment and validation of biotin in a solid
ЛИТЕРАТУРА dosage form by RP-HPLC / Patil Ashish, Ra-
heja Radhika, Nangude Shantaram // Int. J. of
1. Экспериментальная витаминология: univer. pharm. and bio Sci. – 2014. – Vol. 3,
справ. руководство / Ю. М. Островский № 3. – P. 525–535.
[и др.]; под ред. Ю. М. Островского; АН 13. Electrophoretic behaviour of biotin
БССР, Отд. регуляции обмена веществ. – and biocytin in capillary electrophoresis. De-
62
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

termination of biotin in pharmaceutical for- conjugated quantum dots / R. Mittal, M.P.


mulations / T. Perez-Ruiz [et al.] // Chroma- Bruchez // Bioconjugate Chem. – 2011. – V.
togr. – 2003. – Vol. 58. – Р. 757–762. 22. – P. 362–368.
14. Determination of biotin levels in cer- 19. Devyatnin, V. A. Use of the polarograph-
ebrospiral fluid samples / E. Livanion [et al.] ic method to analyse biotin and certain interme-
// J. Pharm. Biomed. Anal. – 1999 – Vol. 21. diate products of its synthesis / V. A. Devyatnin,
– P. 875–879. I. A. Solunina, S. D. Mikhno // Khimiko-Pharm.
15. Kinetic Spectrophotometric Deter- J. – 1972. – Vol. 6, № 8. – P. 35–38.
mination of Biotin in Pharmaceutical Prepa- 20. Davidek, J. Polarographische Bestim-
rations / M.I. Walash [et al.] // Intern. J. Bi- mung von Biotin / J. Davidek // J. Naturwissen-
omed. Sci. – 2008. – V. 4, № 3. – P. 238–244. schaften. – 1961. – Vol. 48, Issue 10. – 403 p.
16. Traore Zoumana Sekou. Determina- 21. Державна фармакопея України:
tion of Biotin in Pharmaceutical Formulations Державне підприємство «Науково-експер-
by Potassium Permanganate-luminol-CdTe тний фармакопейний центр». – Доп. 1. –
Nanoparticles Chemiluminescence System Х.: РІРЕГ, 2004. – 520 с.
/ Zoumana Sekou Traore, Xing-guang Su // Адрес для корреспонденции:
Chem. Res. Chinese Universites. – 2012. –
Vol. 28, № 4. – P. 604–608. 61118, Украина,
17. Fluorometric assay for quantitation of г. Харьков ул. Блюхера, 4,
biotin covalently attached to proteins and nu- Национальный фармацевтический университет,
cleic acids / R.H. Batchelor [et al.] // Biotech- кафедра физической и коллоидной химии,
niques. – 2007. – Vol.43, № 4. – Р. 503–507. тел. (0572) 97-98-38,
е-mаіl: blazejowski@ukr.net,
18. Mittal, R. Biotin-4-fluorescein based Блажеевский Н. Е.
fluorescence quenching assay for determina-
tion of biotin binding capacity of streptavidin Поступила 08.11.2014 г.

Н. Н. Бойко

КИНЕТИКА ЭКСТРАГИРОВАНИЯ НЕКОТОРЫХ НЕОРГАНИЧЕСКИХ И


ОРГАНИЧЕСКИХ КОМПОНЕНТОВ ИЗ ТРАВЫ ХВОЩА ПОЛЕВОГО

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина

В статье приведены результаты исследования по изучению процесса накопле-


ния сухого остатка, веществ–маркеров (гидроксикоричных кислот в пересчете на
кислоту хлорогеновую) и ионов калия в вытяжке на примере травы хвоща полевого.
Показано, что зависимость концентрации веществ в вытяжке от времени на-
стаивания в пределах исследуемого периода времени имеет в общей форме вид лога-
рифмического закона С = b · ln(t) + a.
Зависимость накопления концентрации веществ от времени в процессе наста-
ивания по логарифмической модели позволяет предсказывать кинетику изменения
концентрации вещества в системе минимум по двум точкам.
Показано также, что во время мацерации органические и неорганические ве-
щества экстрагируются параллельно друг с другом.
Ключевые слова: кинетика, мацерация, хвощ полевой, калий, экстрактивные
вещества, гидроксикоричные кислоты.

ВВЕДЕНИЕ ги, являются: степень измельченности,


содержание экстрактивных веществ, со-
На данный момент в технологии экс- держание целевых веществ или веществ-
тракционных препаратов одними из ос- маркеров, влажность, насыпная плот-
новных параметров растительного сырья, ность, объемная плотность, коэффициент
на которые обращают внимание техноло- поглощения экстрагента и некоторые
63
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

другие [1]. Приведенные выше параметры МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ


имеют различное значение в фитотехно-
логии, так, например, степень измельчен- Для исследований использовали рас-
ности растительного сырья значительно тительное сырье – траву хвоща полевого,
влияет на скорость перехода веществ в приобретенное в 2013 г. ООО Аптека «Ле-
экстрагент. Насыпная плотность и объ- карственные травы», г. Харьков.
емная плотность определяют размер экс- Для экстракции использовали этанол
трактора. Коэффициент поглощения экс- 40±1% об. при соотношении растительное
трагента предсказывает потери вытяжки сырье: экстрагент 1:10 (масс.: об.). Фрак-
на растительном сырье. Содержание экс- ция частиц сырья 2÷3 мм.
трактивных, целевых или веществ-мар- Отсев необходимой фракции (2-3 мм)
керов в растительном сырье определяет проводили с помощью сит лабораторных
их концентрацию в получаемой вытяжке СЛП-300, диаметр ячеек 2 и 3 мм.
[2]. Все они взаимосвязаны друг с другом Содержание экстрактивных веществ
[3–5]. Например, степень измельченности определяли по методу, описанному в рабо-
сырья значительно влияет на насыпную те с помощью гравиметрии [7, 8]. Ошибка
плотность сырья и коэффициент погло- определения при трех параллельных опре-
щения экстрагента сырьем, а также на делениях составляла не более 5%.
удельную поверхность частиц и косвенно Определение содержания суммы ги-
на скорость перехода веществ из частиц дроксикоричных кислот в пересчете на
растительного сырья в экстрагент. хлорогеновую в вытяжке из травы хвоща
До настоящего времени технологи полевого проводили по методике, описан-
практически не обращали внимания на еще ной в источниках [9, 10]. Ошибка опреде-
одну важную составляющую растительно- ления при трех параллельных определени-
го сырья – минеральный состав. Микро- и ях составляла не более 5%.
макроэлементы, которые содержатся в сы- Определение содержания ионов калия
рье, во время процесса экстракции пере- в вытяжках из растений проводили по сле-
ходят в составе экстрактивных веществ дующей методике: для анализа берут 0,5÷1
в вытяжку (настойку, экстракт) и могут мл или грамм вытяжки, помещают в мер-
привносить свою лепту в фармакологи- ную колбу вместимостью 10 мл, добавляют
ческие эффекты полученных извлечений. 1 мл или грамм 0,025 М водного раствора
Известно, что в наибольшем количестве в магния сульфата MgSO4 и доводят смесь
растениях содержится: калий ≥ кальций > дважды водой очищенной до 10 мл или
кремний > магний > натрий [6]. Причем на граммов. Раствор перемешивают и вносят в
сумму калия и кальция в среднем прихо- химический стакан для анализа, погружают
дится 65% масс и более от всех микро- и калий-селективный электрод ЭЛИС-121К
макроэлементов в растении. и электрод сравнения ЕСР 10101 с двой-
С точки зрения технологии важно по- ным солевым мостиком, который запол-
нимать, что микро- и макроэлементы, на- нен 1 мольным раствором лития сульфата
пример, катионы металлов, экстрагируются Li2SO4. Снимают показания с потенцио-
вместе с органическими веществами из рас- метра «И-160МИ». Измеряемую разность
тительного сырья в составе комплекса или потенциалов пересчитывают на концентра-
противоиона к органическим кислотам. цию ионов калия методом калибровочной
На данный момент авторами не найде- прямой или по известным формулам при
но исследований по вопросу изучения зави- постоянной ионной силе раствора. Перед
симости выхода ионов металлов, действую- началом измерения калий-селективный
щих веществ (веществ-маркеров) и сухого электрод калибруют по стандартным рас-
остатка в вытяжки во время процесса экс- творам. Ошибка определения ионов калия
тракции друг от друга, что обусловило не- при трех параллельных определениях со-
обходимость проведения подобной работы. ставляла не более 5%. На данную методику
Цель данной работы – исследовать количественного определения ионов калия
процесс перехода ионов калия в вытяжку получен патент на полезную модель [11].
из растительного сырья одновременно с
сухим остатком, веществами-маркерами РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
(гидроксикоричными кислотами) на при-
мере травы хвоща полевого. Результаты исследований по изучению
64
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

кинетики выхода экстрактивных веществ церации для фракции частиц 2-3 мм при-
в процессе мацерации для фракции частиц ведены на рисунке 2.
2-3 мм приведены на рисунке 1. Как видно из приведенных на рисун-
Как видно из приведенных на рисунке ке 2 данных, процесс накопления гидрок-
1 данных, процесс накопления экстрактив- сикоричных веществ (вещества-маркеры)
ных веществ в вытяжке практически пол- в вытяжке также практически полностью
ностью приходит к равновесному состоя- приходит к равновесному состоянию за
нию за сутки настаивания. При этом зави- сутки настаивания. При этом зависимость
симость концентрации экстрактивных ве- концентрации экстрактивных веществ
ществ в вытяжке от времени хорошо опи- в вытяжке от времени хорошо описыва-
сывается логарифмической зависимостью: ется логарифмической зависимостью:
Сэв=0,0015·ln(t)+0,0125 и R²=0,9842. Сх=0,0002·ln(t)+0,0014 и R2=0,9898.
Результаты исследований по изуче- Результаты исследований по изуче-
нию кинетики выхода веществ-маркеров нию кинетики выхода ионов калия в про-
(гидроксикоричные кислоты в пересчете цессе мацерации для фракции частиц 2–3
на хлорогеновую кислоту) в процессе ма- мм приведены на рисунке 3.

Рисунок 1 – Зависимость накопления сухого остатка в вытяжке от времени настаивания

Рисунок 2 – Зависимость накопления хлорогеновой кислоты (вещество-маркер) в


вытяжке от времени настаивания
65
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Рисунок 3 – Зависимость накопления ионов калия в вытяжке от времени настаивания

Как видно из приведенных на ри- бы ошибочно и в будущем следует прове-


сунке 3 данных, процесс накопления ио- сти дополнительные эксперименты на раз-
нов калия в вытяжке также практически ном растительном сырье и разных группах
полностью приходит к равновесному со- биологически активных веществ.
стоянию за сутки настаивания. При этом Далее на рисунке 4 показана зависи-
зависимость концентрации ионов калия мость концентрации сухого остатка от
в вытяжке от времени также хорошо опи- концентрации хлорогеновой кислоты в
сывается логарифмической зависимостью: вытяжке, при этом цифрами указано время
Ск=0,000008·ln(t)+0,0001 и R2=0,9972. настаивания, выраженное в часах.
Интересно отметить, что зависимость Как видно из рисунка 4, зависимость
накопления концентрации веществ от вре- концентрации сухого остатка и хлорогено-
мени в процессе настаивания классически вой кислоты в вытяжке от времени имеет
описывалась экспоненциальным законом прямолинейный вид, что говорит об одно-
вида: С=Ср·(1-A·еxp(-k·t)), где Ср – равно- временном выходе из растительного сы-
весная концентрация вещества в экстрак- рья в вытяжку экстрактивных веществ и
ционной системе; А – концентрация ве- веществ-маркеров (хлорогеновой кисло-
щества в вытяжке в первоначальный мо- ты) в их составе.
мент после смыва с поверхности частиц; На рисунке 5 показана зависимость
k·– константа, описывающая динамику концентрации сухого остатка от концен-
изменения концентрации вещества в си- трации ионов калия в вытяжке, при этом
стеме; t – время настаивания [12]. Основ- цифрами указано время настаивания, вы-
ной недостаток подобной модели – это раженное в часах.
необходимость обязательного нахожде- Как видно из рисунка 5, зависимость
ния равновесной концентрации вещества концентрации сухого остатка и ионов ка-
в системе, что приводит к значительному лия в вытяжке от времени также имеет
увеличению времени экспериментирова- прямолинейный вид, что говорит об одно-
ния. Использование же логарифмической временном выходе из растительного сырья
модели позволяет предсказывать кинети- в вытяжку экстрактивных веществ и мине-
ку изменения концентрации вещества в ральных веществ, в частности, ионов калия.
системе минимум по двум точкам (Сi, ti; На рисунке 6 показана зависимость
и Сi+1, ti+1). концентрации хлорогеновой кислоты от
Однако распространять подобную за- концентрации ионов калия в вытяжке, при
висимость от частного (травы хвоща поле- этом цифрами указано время настаивания,
вого) к общему (на другие объекты) было выраженное в часах.

66
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

0,018 23
14
7 10
0,016 3 4 5
2
0,014 1

Концентрация сухого остатка,


0,5
0,012
y = 7,0967x + 0,0029
0,01 R2 = 0,9965
г/г вытяжки
0,008
0,006
0,004
0,002
0
0,001 0,0012 0,0014 0,0016 0,0018 0,002 0,0022
Концентрация хлорогеновой кислоты, г/г вытяжки

Рисунок 4 – Зависимость концентрации сухого остатка от хлорогеновой кислоты в


вытяжке и времени настаивания

0,018 14
23
10
7
0,016 3 4 5
Концентрация сухого остатка,

0,014 2
1
0,012 0,5
г/г вытяжки

0,01 y = 174,76x - 0,0072


R2 = 0,9822
0,008
0,006
0,004
0,002
0
0,0001 0,00011 0,00012 0,00013 0,00014

Концентрация калия, г/г вытяжки

Рисунок 5 – Зависимость концентрации сухого остатка от ионов калия в вытяжке и


времени настаивания

0,0025
Концентрация хлорогеновой кислоты,

14 23
0,002 7 10
3 4 5
2
1
0,0015
0,5
г/г вытяжки

0,001
y = 24,639x - 0,0014
0,0005 R2 = 0,9868

0
0,0001 0,00011 0,00012 0,00013 0,00014 0,00015

Концентрация калия, г/г вытяжки

Рисунок 6 – Зависимость концентрации хлорогеновой кислоты от ионов калия в


вытяжке и времени настаивания
67
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Как видно из рисунка 6, зависимость the process of accumulation of dry residue,


концентрации хлорогеновой кислоты и marker substances (hydroxycinnamic acids
ионов калия в вытяжке от времени также equivalent to chlorogenic acid) and potassium
имеет прямолинейный вид, что говорит об ions in the extract on the example of Equiseti
одновременном выходе из растительного arvensis herb.
сырья в вытяжку веществ-маркеров (ги- It is shown that the dependence of the
дроксикоричных кислот) и ионов калия, ве- concentration of substances in the extract
роятно, в составе противоиона друг к другу. from the infusion time within the study period
Следует отметить, что из приведен- in general can be presented as a logarithmic
ных зависимостей концентраций друг от law in the following form: С=b·ln(t)+a.
друга, изображенных на рисунках 4–6, It is noted that the dependence of accu-
можно получить угол наклона одного ком- mulation of substance concentration on time
понента при знании углов наклона двух in the process of infusion by logarithmic
других. Так, например, умножая углы на- model makes it possible to predict the kinet-
клона хлорогеновой кислоты от ионов ics of changes in substance concentration in
калия 24,639 (рисунок 6) и сухого остат- the system at least by two points.
ка от хлорогеновой кислоты 7,0967 (рису- It is also shown that during maceration,
нок 4), можно получить угол наклона для organic and inorganic substances are extract-
сухого остатка от ионов калия, равного ed in parallel with each other.
24,639·7,0967=174,85, что очень близко к Keywords: kinetics, maceration, Equiseti
экспериментально найденному значению arvensis herb, potassium, extractives, hy-
174,76 (рисунок 5). droxycinnamic acids.

ВЫВОДЫ ЛИТЕРАТУРА

Проведены исследования по изучению 1. Настойки, экстракты, эликсиры и


процесса накопления сухого остатка, ве- их стандартизация / Под ред. проф. В. Л.
ществ маркеров (гидроксикоричных кис- Багировой, проф. В. А. Северцева. – СПб.:
лот в пересчете на кислоту хлорогеновую) СпецЛит, 2001. – 223 с.
и ионов калия в вытяжке на примере травы 2. Бойко, Н. Н. Изучение зависимо-
хвоща полевого. сти концентрации биологически активных
Показано, что зависимость концентра- веществ в получаемых вытяжках от соот-
ции веществ в вытяжке от времени наста- ношения экстрагент/растительное сырье
ивания в пределах исследуемого периода / Н. Н. Бойко, А. И. Зайцев // Материалы
времени имеет в общей форме вид лога- III международной научно-практической
рифмического закона С=b·ln(t)+a. конференции «Актуальные исследования
Отмечено, что зависимость накопле- гуманитарных, естественных, точных и
ния концентрации веществ от времени в общественных наук. – 25 ноября 2013 г.,
процессе настаивания по логарифмиче- Новосибирск. – С. 94–101.
ской модели позволяет предсказывать ки- 3. Гарна, С. В. Взаємозв’язок основ-
нетику изменения концентрации вещества них технологічних параметрів рослинної
в системе минимум по двум точкам. сировини / С. В. Гарна, П. П. Вєтров,
Показано также, что во время мацера- В. А. Георгіянц // Актуальні питання
ции органические и неорганические веще- фармацевтичної і медичної науки та прак-
ства экстрагируются параллельно друг с тики. – 2012. – №1(8). – С. 54–57.
другом. 4. Литвинов, В. Л. Взаимосвязь ос-
новных технологических параметров при
SUMMARY экстракции из растительного сырья / В.
Л. Литвинов, П. П. Ветров // Хим.-фарм.
N. N. Boyko журн. – 1982. – №4. – С. 81–83.
EXTRACTION KINETICS OF SOME 5. Попова, Т. П. Некоторые общие за-
INORGANIC AND ORGANIC кономерности извлечения действующих
COMPONENTS FROM THE HERB веществ из лекарственного сырья. Со-
OF EQUISETI ARVENSIS общение 2. Технологические свойства ле-
This paper presents research data on карственного растительного сырья / Т. П.
Попова, В. И. Литвиненко // Фармаком. –
68
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

1993. – № 2. – С. 8–12. G01N 27/26 Спосіб кількісного визначення


6. Универсальная энциклопедия ле- іонів калію у водно-спиртових витяжках
карственных растений / Сост. И. Путыр- з лікарської рослинної сировини / М. М.
ский, В. Прохоров. – Мн.: Книжный дом; Бойко, М. Є. Блажеєвський, О. І. Зайцев.
М.: Махаон, 2000. – 656 с. u 2014 07449; Заявл. 02.07.2014; Опубл.
7. Государственная фармакопея 10.11.2014, Бюл. № 21. – 5 с.
СССР. ХІ изд. Вып.1. Общие методы ана- 12. Бойко, М. М. Математичне опи-
лиза. – М.: Медицина, 1987. – 334 с. сання процесу екстракції біологічно ак-
8. Державна Фармакопея України / тивних сполук із рослинної сировини / М.
Державне підприємство «Науково-експер- М. Бойко, О. І. Зайцев // Український жур-
тний фармакопейний центр». – 1-е вид. – нал клінічної та лабораторної медицини. –
Х.: РІРЕГ, 2001. – Доповнення 1. – 2004. 2009. – Т. 4, № 1. – С. 38–40.
– С. 520.
9. Бойко, М. М. Обґрунтування схеми Адрес для корреспонденции:
розробки аналітичного контролю вироб-
ництва фітохімічних засобів, отримуваних 61140, Украина,
г Харьков, ул. Невского, 18,
за допомогою ультразвуку / М. М. Бойко, Национальный фармацевтический
О. І. Зайцев // Запорізький медичний жур- университет,
нал. – 2008. – № 4(49). – С. 84–88. кафедра процессов и аппаратов
10. Дослідження фенольних сполук ли- химико-фармацевтических производств,
стя евкаліпта / О. М. Кошовий [та iнш.] // тел. +38(057)7718152,
Фармаком. – 2005. – № 2/3. – С. 151–161. Boykoniknik@gmail.com
11. Пат. 94510 UA, МПК (2006.1) Бойко Н. Н.
Поступила 08.11.2014 г.

Ю. А. Шерякова, О. М. Хишова

ИДЕНТИФИКАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ


ТРИТЕРПЕНОВЫХ САПОНИНОВ СИНЮХИ МЕТОДОМ ВЭЖХ

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

Разработана методика идентификации и количественного определения три-


терпеновых сапонинов в пересчете на в-эсцин методом высокоэффективной жид-
костной хроматографии в корневищах с корнями синюхи и лекарственных средствах
на ее основе. Методика валидирована по параметрам линейность, специфичность,
правильность. Определен предел ее обнаружения и количественного определения.
Воспроизводимость результатов определения биологически активных веществ
(БАВ) синюхи составила: в таблетках RSD = 0,15%; в капсулах RSD = 0,38%.
Ключевые слова: таблетки, капсулы, корневища с корнями синюхи, в-эсцин, ва-
лидация, высокоэффективная жидкостная хроматография.

ВВЕДЕНИЕ объединяют под названием «эсцин». Ос-


новными среди них считаются четыре: эс-
При разработке лекарственных средств цин Ia и Ib, изоэсцин Ia и Ib [5].
(ЛС) на основе корневищ с корнями синю- В последние годы при стандартизации
хи одной из проблем стала стандартизация лекарственного растительного сырья (ЛРС)
БАВ синюхи в готовых ЛС. По данным все чаще используют инструментальные
литературы [1–4] преобладающей группой методы анализа, такие как тонкослойная
БАВ, содержащейся в синюхе, являются хроматография (ТСХ) и высокоэффектив-
тритерпеновые сапонины. В настоящее ная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
время выделено и идентифицировано око- – для идентификации БАВ, денситометрия
ло 30 индивидуальных веществ, которые (ДТСХ), УФ-спектрофотометрия (УФ) [2,
69
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

3, 6], ВЭЖХ – для количественного опре- Количественное определение БАВ си-


деления [1, 6, 7]. Использование данных нюхи проводили методом ВЭЖХ на при-
физико-химических методов предполагает боре «Agilent 1200 с диодно-матричным
применение стандартного образца – веще- детектором».
ства, имеющего постоянный химический Разрабатываемые готовые ЛС содер-
состав, установленного с необходимой жат смесь корневищ с корнями валерианы
точностью комплексом соответствующих и синюхи. С целью совместного опреде-
методов [7, 8]. ления БАВ валерианы и синюхи методом
Государственная фармакопея Респу- ВЭЖХ для экстракции тритерпеновых
блики Беларусь (ГФ РБ) для идентифика- сапонинов синюхи за основу была взята
ции тритерпеновых сапонинов в корневи- методика экстракции БАВ корневищ с кор-
щах с корнями синюхи предлагает метод нями валерианы [1]. Однако предваритель-
макро- и микроскопии, а также качествен- ные данные показали, что использование
ную реакцию пенообразования, а для ко- спирта этилового в качестве экстрагента
личественного определения действующих не подходит для извлечения тритерпено-
веществ – определение тритерпеновых вых сапонинов, а для их извлечения с це-
сапонинов в пересчете на в-эсцин мето- лью разрушения комплекса сапонинов со
дом УФ-спектрометрии в видимой области стеаринами необходима предварительная
спектра, с использованием спирта 40% и стадия обработки ЛРС хлороформом [9].
хлороформа в качестве экстрагента [1]. По сравнению с фармакопейной мето-
Метод идентификации с помощью ка- дикой в предлагаемой методике нами заме-
чественной реакции является групповым и нены способ обработки хлороформом ЛРС
неспецифичным, а метод количественного с использованием обратного холодильника
определения – трудоемким и неспецифич- на ультразвук, что соответствует совре-
ным, так как предполагает образование менным подходам к извлечению тритерпе-
окрашенных соединений продуктов гидро- новых сапонинов [5], и спирт 40% на спирт
лиза тритерпеновых сапонинов с серной 96%, как наиболее подходящий [5, 7].
кислотой с дальнейшим их спектрометри- В ходе предварительных испытаний
ческим определением [1]. нами установлено, что для полноты экс-
Целью настоящей работы явилась раз- тракции тритерпеновых сапонинов доста-
работка методики идентификации и коли- точно по 50 мл хлороформа и спирта 96%
чественного определения тритерпеновых с обработкой ультразвуком 30 мин, вместо
сапонинов корневищ с корнями синюхи двукратной экстракции хлороформом (по
методом ВЭЖХ с использованием стан- 50 мл в течение 30 мин) и спиртом 40% (по
дартного образца в-эсцина, являющегося 50 мл в течение 30 мин).
маркером при количественном определе- Ниже описана предлагаемая нами ме-
нии БАВ синюхи в присутствии сескви- тодика определения тритерпеновых сапо-
терпеновых кислот валерианы и вспомо- нинов методом ВЭЖХ.
гательных веществ, входящих в состав та-
блеток и капсул. Аналитическая методика (АМ)
Не менее 8,0 % суммы тритерпеновых
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ сапонинов в пересчете на в-эсцин в сухом
сырье [ГФ РБ, т.2].
Для анализа в качестве стандартного Приготовление буферного раствора.
образца использовали ФСО в-эсцина, ре- В 1000,0 мл воды Р устанавливали pH 3,5
активы – хлороформ Р, спирт этиловый c помощью кислоты фосфорной Р, до-
96% Р, вода Р, кислота фосфорная Р, пла- водили объем раствора водой Р до метки
цебо для таблеток и содержимого капсул и перемешивали. Полученный раствор
(крахмал, кальция стеарат, лактоза) [1, 6]. фильтровали через мембранный фильтр с
Объектами исследования были: измель- размером пор 0,45 мкм.
ченное сырье корневищ с корнями синюхи Приготовление испытуемого раство-
(5 серий) с размером частиц 0,1–0,5 мм, ра. 1,1000 г порошка растертых таблеток
таблетки и содержимое капсул (измельчен- или содержимого капсул помещали в мер-
ный порошок ЛРС корневищ с корнями ную колбу вместимостью 100 мл, прибав-
валерианы и синюхи (в соотношении 1:1), ляли 50 мл хлороформа Р, выдерживали
крахмал, кальция стеарат, лактоза). на ультразвуковой бане в течение 30 мин,
70
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

охлаждали полученный раствор до ком- полученного раствора фильтровали через


натной температуры, фильтровали через мембранный фильтр типа «Миллипор» с
ватный фильтр. Фильтр с остатком коли- диаметром пор 0,45 мкм.
чественно переносили в колбу со шлифом По 10 мкл испытуемого раствора и рас-
вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл твора стандартного образца попеременно
спирта 96% Р, присоединяли к обратно- хроматографировали на жидкостном хро-
му холодильнику и кипятили в течение 30 матографе со спектрофотометрическим
минут на водяной бане. Охлажденное до детектором, получая не менее 3 хромато-
комнатной температуры извлечение по- грамм для каждого из растворов, в следу-
мещали в мерную колбу вместимостью 50 ющих условиях:
мл, доводили спиртом 96% Р до метки и колонка размером 250×4,6 мм, типа
тщательно перемешивали. Необходимое Zorbax SB-C18, заполненная силикагелем
количество полученного раствора филь- октадецилсилильным для хроматографии
тровали через мембранный фильтр типа Р, с размером частиц 5,0 мкм или анало-
«Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм. гичная;
Приготовление раствора стандарт- скорость подвижной фазы – 0,5 мл/
ного образца. 0,0500 г ФСО в-эсцина по- мин;
мещали в мерную колбу вместимостью 25 детектирование при длине волны 210 нм;
мл, добавляли 15 мл спирта 96% Р, выдер- температура хроматографической ко-
живали около 30 минут на ультразвуковой лонки – 30 0С;
бане, охлаждали полученный раствор до длительность хроматографирования –
комнатной температуры, доводили объ- 35 мин;
ем раствора спиртом 96% Р до метки и Состав подвижной фазы меняется во
перемешивали. Необходимое количество времени (таблица 1).
Таблица 1 – Градиентный состав подвижной фазы хроматографирования при
определении тритерпеновых сапонинов в пересчете на в-эсцин
Время, мин Буферный раствор рН 3,5 (%, об/об) Ацетонитрил Р (%, об/об)
0–30 95 5
30–32 95→40 5→60
32–35 40→95 60→5

Перед проведением анализа уравно- Массу навески СО в пересчете на 100%


вешивали хроматографическую систему содержание рассчитывали по формуле (2):
подвижной фазой не менее 30 мин.
Массовую концентрацию суммы три-
терпеновых сапонинов в пересчете на (2),
в-эсцин (Х%) рассчитывали по формуле
(1): где mco – масса навески СО, в граммах;
Q – содержание в СО в пересчете на
сухое вещество, в процентах;
(1), ϕ – содержание влаги в СО, в процентах.

где S1 – сумма площадей пиков тритер- Результаты анализа считаются досто-


пеновых сапонинов в испытуемом раство- верными, если выполняются требования
ре; теста «Проверка пригодности хроматогра-
S0 – сумма площадей пиков тритерпе- фической системы».
новых сапонинов в растворе стандартного Хроматографическая система счита-
образца; ется пригодной, если на хроматограммах
m1 – масса навески лекарственного раствора стандартного образца:
средства, в граммах; – фактор ассиметрии, рассчитанный по
m1 – масса навески стандартного пикам тритерпеновых сапонинов, не менее
образца в пересчете на 100% содержание, 0,8 и не более 1,5;
в граммах; – относительное стандартное откло-
b – средняя масса таблетки (содержи- нение площадей пиков, рассчитанное по
мого капсул), г. сумме пиков тритерпеновых сапонинов,
71
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

не более 2,0%. ное содержание тритерпеновых сапонинов


Для обеспечения требований теста в пересчете на в-эсцин устанавливали как
«Проверка пригодности хроматографиче- среднее из результатов анализа пятнадцати
ской системы» допускается модификация определений (n=15). Данные обрабатыва-
хроматографических условий в соответ- ли статистически и сравнивали с критери-
ствии с ГФ РБ 2.2.46. ями по ГФ РБ [6].
Проведена валидация разработанной Критерий приемлемости: на хромато-
методики в соответствии с требованиями грамме раствора плацебо не должно быть
действующих нормативных документов пиков, совпадающих по временам выхода
[6, 10–11], доказана линейность, специ- с пиками эсцин Ia и Ib, изоэсцин Ia и Ib.
фичность и правильность методики, опре- Для определения специфичности ме-
делен предел обнаружения (ПО) – 0,2457 тодики были приготовлены следующие
мг/мл и предел количественного определе- растворы модельных смесей:
ния (ПКО) – 0,8190 мг/мл. – раствор плацебо и раствор ФСО
Изучение линейности осуществляли в-эсцина (стандартный образец) готовили
на пяти модельных растворах лекарствен- в соответствии с методикой, описанной
ной формы, которые готовили с учетом но- выше;
минальной концентрации ФСО в-эсцина – раствор для проверки специфично-
в интервале 80–120%. Каждый раствор сти: смешивали 5,00 мл раствора стандарт-
хроматографировали трижды по методи- ного образца и 5,00 мл раствора плацебо;
ке, представленной выше. Полученные ре- – растворитель (спирт этиловый 96%).
зультаты обрабатывали методом наимень-
ших квадратов для прямой yi = bxi +a. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Определение правильности аналити-
ческой методики проводили на растворах Нами проведен сравнительный анализ
пяти модельных смесей, для каждой из содержания тритерпеновых сапонинов в
которой далее готовили по 3 испытуемых пересчете на в-эсцин по фармакопейной и
раствора. Полученные растворы хромато- предлагаемой методикам. Результаты ко-
графировали три раза в соответствии с ме- личественного определения представлены
тодикой, описанной выше. Количествен- в таблице 2.
Таблица 2 – Сравнительные результаты количественного содержания тритерпеновых
сапонинов в пересчете на в-эсцин в измельченном сырье корневищ с корнями синюхи
по методике ГФ РБ и предлагаемой методике (метод ВЭЖХ)
Серия Содержание тритерпеновых сапонинов в Содержание тритерпеновых
сырья пересчете на в-эсцин, в % по методике сапонинов в пересчете на в-эсцин,
ГФ РБ, т. 2, с. 421 в % по предлагаемой методике
I 8,28 8,80
II 8,20 8,89
III 8,40 8,76
IV 8,22 8,85
V 8,35 8,78

Результаты изучения линейности со- на рисунках 2, 3, 4, 5.


держания тритерпеновых сапонинов в пе- На полученных хроматограммах вре-
ресчете на в-эсцин в модельных растворах мена выхода пиков эсцина Ia и Ib, изоэс-
представлены в таблицах 3, 4. цина Ia и Ib соответствуют литературным
Построение калибровочного графика данным [конский каштан].
проводили в нормализованных координатах Экспериментально установлено, что
(рис. 1) [2]. присутствие сесквитерпеновых кислот ва-
Результаты анализа модельных раство- лерианы (валереновой и ацетоксивалере-
ров и их статистическая обработка пред- новой) и вспомогательных веществ, кото-
ставлены в таблице 5. рые входят в состав лекарственных форм,
Специфичность методики определе- не мешали определению суммы тритерпе-
ния тритерпеновых сапонинов синюхи в новых сапонинов в корневищах с корнями
присутствии БАВ валерианы представлена синюхи и в ЛС на ее основе (рисунок 6).
72
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Времена удерживания пиков эсцина Ia и около 25,5 мин для изоэсцина Ia и около 26
Ib, изоэсцина Ia и Ib на хроматограммах мин для изоэсцина Ib (рисунки 4, 6).
испытуемого раствора при количествен- С использованием описанной выше
ном определении соответствовали време- методики были получены следующие ре-
нам удерживания пиков эсцина Ia и Ib, изо- зультаты определения содержания три-
эсцина Ia и Ib на хроматограммах раствора терпеновых сапонинов в пересчете на
сравнения и составляли около 24,5 мин в-эсцин в таблетках и содержимом капсул
для эсцина Ia, около 25 мин для эсцина Ib, (таблица 6).
Таблица 3 – Результаты изучения линейности содержания содержания тритерпеновых
сапонинов в пересчете на в-эсцин в модельных растворах
Ca, Площади пиков градуировочных графиков
n Va V мг/мл S1 S2 S3 Sср
1 3 5 1,1800 6708,8090 6715,5231 6691,6862 6705,3394
2 7 10 1,3767 8698,2412 8618,3210 8619,5975 8645,3866
3 4 5 1,5733 9670,9264 9615,0009 9603,4246 9629,7840
4 9 10 1,7700 10635,8391 10608,2147 10627,3198 10623,7912
5 1 1 1,9667 11625,2607 11602,3657 11608,9416 11612,1893

Таблица 4 – Характеристики линейной зависимости yi= bxi+a


СaSср ΣSсрCa ΣCa ΣSср C2a ΣC2a S2ср ΣS2ср (ΣCa)2 (ΣSср)2
0,9 7,91 0,06 785,30 0,000063 0,000598 11761,5 104697,30 0,003524 616699,23
1,0 0,000077   13332,8      
1,2 0,000091   15446,2      
1,3 0,000099   17091,9      
1,6 0,000124   21014,1      
1,9 0,000143   26050,8      

Рисунок 1 – График зависимости площади пика от тритерпеновых сапонинов


в пересчете на в-эсцин

73
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таблица 5 – Результаты анализа модельных растворов и их статистической обработки


№ модельной смеси 1 2 3 4 5
Исходная концентрация, мг/мл 1,1520 1,3440 1,5360 1,7280 1,9200
Полученная концентрация (среднее значение 3-х 1,0581 1,3388 1,4290 1,6237 1,7760
определений), мг/мл
Найдено, % 91,9 99,6 93,0 94,0 92,5
Относительная погрешность, % 8,15 0,38 6,96 6,03 7,50
Стандартное отклонение S 0,03129 0,0059 0,0356 0,0424 0,0480
Относительное стандартное отклонение Sr 2,96 0,44 2,49 2,61 2,71
Табличный критерий Стьюдента t (0,95;2) 4,30 4,30 4,30 4,30 4,30
Расчетный критерий Стьюдента t 4,24 1,22 4,24 3,48 4,24
t<t(0,95;2) Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.
Метрологические характеристики x = 94,2; S = 9,204; Sx = 4,12;
RSD= 9,77%: ∆x = 8,3; ε = 8,8%

Рисунок 2 – Хроматограмма раствора плацебо

Рисунок 3 – Хроматограмма раствора для проверки специфичности


74
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Рисунок 4 – Хроматограмма раствора ФСО сухого экстракта валерианы стандартизированного

Рисунок 5 – Хроматограмма растворителя (спирт этиловый 96%)

Рисунок 6 – Образец хроматограммы испытуемого раствора


(для таблеток и содержимого капсул)
75
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таблица 6 – Результаты количественного определения тритерпеновых сапонинов в


пересчете на в-эсцин в таблетках и капсулах
Сумма Сумма площадей
площадей пиков пиков тритерпеновых Найдено в Метрологические
Анализируемая тритерпеновых сапонинов в пересчете ЛФ, мг/таб. характеристики
ЛФ сапонинов в на в-эсцин в (капс.)
пересчете на в-эсцин испытуемом растворе
в растворе СО
x = 2,63
8265 8759 2,64 S = 0,008944
8212 8659 2,62 S x = 0,004
Таблетки 8301 8738 2,62 RSD= 0,15%
8259 8692 2,62 Δx = 0,01
8248 8712 2,63 ε = 0,45%
x = 2,66
8214 8566 2,70 S = 0,02291
8310 8497 2,64 S x = 0,0102
Капсулы 8314 8551 2,66 RSD= 0,38%
8279 8538 2,67 ∆x = 0,03
8305 8517 2,65 ε = 0,99%

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 50 мл в течение 30 мин).


4. Данная методика использована для
1. Впервые разработана методика составления спецификации по контролю
идентификации (подлинности) и количе- качества таблеток и капсул на основе тонко
ственного определения тритерпеновых измельченных порошков корневищ с кор-
сапонинов синюхи в пересчете на в-эсцин нями валерианы и синюхи. Воспроизво-
методом ВЭЖХ в ЛРС, таблетках и содер- димость результатов определения БАВ си-
жимом капсул в присутствии БАВ вале- нюхи составила: в таблетках RSD=0,15%,
рианы (сесквитерпеновых кислот) и вспо- в капсулах RSD=0,38%.
могательных веществ (крахмал, кальция
стеарат, лактоза) в среде спирта этилового SUMMARY
96% в качестве экстрагента, с предвари-
тельной обработкой исходного материала Y. A. Sheryakova, O. M. Khishowa
хлороформом. IDENTIFICATION AND QUANTITATIVE
Установлено, что время удерживания DETERMINATION OF TRITERPENE
пика эсцина Ia составляет около 24,5 мин, SAPONINS OF POLEMONIUM
эсцина Ib – около 25 мин, изоэсцина Ia – CAERULEUM BY HPLC
около 25,5 мин, изоэсцина Ib – около 26 The technique of identification and quan-
мин. Так как в состав готовых ЛС входит titative determination of triterpene saponins in
тонко измельченный порошок корневищ с terms of β-escin by high-performance liquid
корнями синюхи, данную методику можно chromatography in the rhizomes with roots of
использовать для идентификации тритер- Polemonium caeruleum and medicinal prod-
пеновых сапонинов и в исходном ЛРС. ucts based on it was worked out. The method
2. Проведена валидация данной мето- is validated according to the parameters of
дики, доказана ее линейность, специфич- linearity, specificity, accuracy. The limit of its
ность и правильность. Определены ПО и detection and quantification was determined.
ПКО, которые составили 0,2457 мг/мл и The reproducibility of the results of deter-
0,8190 мг/мл соответственно. mination of biologically active substances
3. Установлено, что для полноты экс- of Polemonium caeruleum was: for tablets
тракции тритерпеновых сапонинов до- RSD=0,15%; for capsules RSD=0,38%.
статочно по 50 мл хлороформа и спирта Keywords: tablets, capsules, rhizomes
этилового 96% в течение 30 минут, вместо with roots of Polemonium caeruleum, β-escin,
двукратной экстракции хлороформом (по validation, high-performance liquid chroma-
50 мл в течение 30 мин) и спиртом 40% (по tography.

76
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ЛИТЕРАТУРА 2012. – Т. 1 (II): Общие методы контроля


качества лекарственных средств. – 1217 с.
1. Государственная фармакопея Респу- 7. Сокольская, Т.А. Использование стан-
блики Беларусь : в 3-х т. / под общ.ред. А.А. дартных образцов для анализа лекарственных
Шерякова. – Молодечно : Победа. – 2008. – растительных препаратов / Т. А. Сокольская,
Т. 2: Контроль качества вспомогательных Т. Б. Шемерянкина, Т. Д. Даргаева // Ведомо-
веществ и лекарственного растительного сти НЦЭСМП. – 2011. – № 2. – С. 11–14.
сырья. – 472 с. 8. Шеряков, А. А. К вопросу приме-
2. Исследование возможности количе- нения стандартных образцов в испытании
ственного определения тритерпеновых са- лекарственных средств / А. А. Шеряков, А.
понинов методом УФ-спектрофотометрии П. Левченко, В. П. Грибанова // Вестник
/ Т. А. Брежнева [и др.] // Вестник ВГУ, Се- фармации. – 1998. – № 4. – С. 14–17.
рия: Химия. Биология. Фармация. – 2007. 9. Ладыгина, Е. Я. Химический анализ
– № 2. – С. 142–144. лекарственных растений: учеб.пособ. для
3. Методологические подходы к ис- фарм. вузов / Е. Я. Ладыгина, Л. Н. Саф-
пользованию спектрофотометрии в анали- ронич, В. Э. Отряшенкова; под. ред. проф.
зе лекарственного растительного сырья / Н.И. Гринкевич, доц. Л.Н. Сафронич. –
А. И. Марахова [и др.] // Медицина и обра- Москва «Высшая школа», 1983. – 176 с.
зование в Сибири [Электронный ресурс]. – 10. Производство лекарственных
2011. – № 5. – Режим доступа: http://www. средств. Валидация методик испытаний :
ngmu.ru/cozo/mos/site/pay/3.php ТКП 432–2012 (02041) – Введ. 01.03.2013.
4. Шерякова, Ю. А. Изучение факто- – Минск : Департамент фармацевтической
ров, влияющих на процесс извлечениях промышленности Министерства здравоох-
БАВ синюхи / Ю. А. Шерякова // III Все- ранения Республики Беларусь, 2012. – 18 с.
российская научная конференция сту- 11. Производство лекарственных
дентов и аспирантов с международным средств. Применение статистических ме-
участием «Молодая фармация – потен- тодов валидации: ТКП 438 – 2012 (02041)
циал будущего»: сборник матер. конф., – Введ. 01.03.2013. – Минск : Департамент
Санкт-Петербург, 25 – 26 апреля 2013 г. / фармацевтической промышленности Ми-
С.-Петерб. гос. хим.-фарм. академ. – СПб.: нистерства здравоохранения Республики
Изд-во СПХФА, 2013. – 384 с. Беларусь, 2012. – 27 с.
5. Совершенствование методов контро-
ля качества и критериев стандартизации Адрес для корреспонденции:
качества семян и сухого очищенного экс- 210023, Республика Беларусь,
тракта из семян конского каштана обыкно- г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
венного (Aesculus HippocastanumL.) / Т. Б. УО «Витебский государственный
Шемерянкина [и др.] // Вопросы биологи- ордена Дружбы народов
ческой, медицинской и фармацевтической медицинский университет»,
химии. – 2012. – № 3. – С. 3–10. кафедра промышленной технологии
6. Государственная фармакопея Ре- с курсом ФПК и ПК,
тел. раб.: 8 (0212) 37-00-13,
спублики Беларусь : в 3-х т. / под общ.ред. Хишова О. М.
А.А. Шерякова. – Молодечно : Победа. – Поступила 08.11.2014 г.

77
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ФАРМАКОЛОГИЯ,
КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
Е. В. Бондарев, С. Ю. Штрыголь

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РОЛИ АДРЕНО-


И ХОЛИНОРЕЦЕПТОРОВ ВО ФРИГОПРОТЕКТОРНОМ ДЕЙСТВИИ
ГЛЮКОЗАМИНА ГИДРОХЛОРИДА

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина

Лечение и профилактика острой холодовой травмы относятся к важнейшим


проблемам современной медицины и фармакологии и требуют углубленного изучения
механизмов адаптации организма к низким температурам. Для эффективного лече-
ния и профилактики холодовых травм необходим поиск новых фригопротекторных
средств. Целью данной работы стало изучение значения адрено- и холинорецепто-
ров в повышении устойчивости к острому общему охлаждению под влиянием глю-
козамина гидрохлорида в опытах на мышах. Глюкозамина гидрохлорид оказывает
выраженный фригопротекторный эффект. Блокада β1-, β2- и α1-адренорецепторов
значительно снижает устойчивость организма к общему охлаждению, но эффект
β-блокатора практически устраняется введением глюкозамина гидрохлорида, а эф-
фект α1-адреноблокатора не устраняется. Блокада М-холинорецепторов препят-
ствует фригопротекторным свойствам глюкозамина гидрохлорида, а стимуляция
α2-адренорецепторов не влияет на них.
Ключевые слова: острое охлаждение, глюкозамина гидрохлорид, атропин, про-
пранолол, клонидин, доксазозин.

ВВЕДЕНИЕ каны. Непосредственно или косвенно глю-


козамин играет роль в формировании су-
Одно из распространенных неблаго- ставных поверхностей, сухожилий, связок,
приятных экологических воздействий, ко- синовиальной жидкости, кожи, костной
торое испытывает человек, – это общее ткани, ногтей, клапанов сердца, кровенос-
охлаждение организма [1–3]. Оно разви- ных сосудов и слизистой оболочки пище-
вается под влиянием низких температур варительного, дыхательного и мочевого
и сопровождается нарушением жизненно тракта [7, 8, 10].
важных функций: кровообращения, термо- Глюкозамин и его производные имеют
регуляции, состояния центральной нерв- полимодальные фармакологические свой-
ной системы. Действие холода приводит к ства, в том числе церебропротекторные,
перенапряжению компенсаторных реакций, мембраностабилизирующие, противовос-
снижению уровня энергетического и пла- палительные, антиоксидантные, гастро-
стического обмена, изменениям со стороны протекторные, хондропротекторные [10].
кожи и микроциркуляции в ней [4–6]. Нами впервые выявлено выраженное
Несмотря на большое количество ис- фригопротекторное действие у Г г/х на
следований, профилактика и лечение холо- экспериментальной модели острого обще-
довой травмы остаются сложной задачей. го охлаждения [7]. Г г/х улучшает показа-
Поэтому поиск лекарственных средств с тели выживания животных, двигательную
фригопротекторным действием является активность, тонус мышц, координацию
актуальной задачей [7–9]. В решении этой движений и физическую выносливость,
задачи привлекает внимание глюкозамина нормализует функциональное состояние
гидрохлорид (Г г/х). почек в восстановительном периоде. Все
Глюкозамин является важным струк- эти преимущества обосновывают целесо-
турным компонентом, необходимым для образность углубленных исследований Г
биосинтеза таких соединений, как глико- г/х в качестве потенциального фригопро-
липиды, гликопротеины, гликозаминогли- тектора.

78
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

В регуляции чувствительности орга- кг, в/б) + холодовая травма (n=8); группа


низма к действию холода принимают уча- 10 – доксазозин (10 мг/кг, в/б) + Г г/х (50
стие адрено- и холинореактивные системы мг/кг, в/б) + холодовая травма.
[11–13, 16]. В литературе не обнаружено Использованные дозы тестирующих
данных о возможном участии отдельных средств обеспечивают соответствующие
типов адрено- и холинорецепторов во фри- адрено- и холинотропные эффекты [12].
гопротекторном действии Г г/х. При выборе эффективной фригопротек-
Цель исследования: оценить эффектив- торной дозы Г г/х (50 мг/кг) ориентирова-
ность фригопротекторного действия Г г/х лись на результаты предыдущих исследо-
при совместном применении с β1,2-адрено- ваний [7, 8].
блокатором, α1-адреноблокатором, α2-адре- Критерием эффективности фригопро-
номиметиком и М-холиноблокатором в ус- текторного действия служило время жизни
ловиях острой холодовой травмы у мышей. животных. Рассчитывали показатель фри-
гопротекторной активности – изменение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ среднего времени жизни в каждой группе к
времени жизни в контроле (%). Для стати-
Исследование выполнено в зимний стической обработки количественных дан-
период на белых рандомбредных мышах- ных использовали критерий Стьюдента.
самцах массой 28-32 г, которых содержали
согласно правилам GLP в стандартных ус- РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ловиях вивария при температуре +24–250С.
Придерживались требований Директивы На модели общего охлаждения наблю-
Совета ЕС по вопросам защиты животных, даются изменения времени жизни живот-
используемых для экспериментальных и ных, представленные в таблице.
других научных целей [14]. Анализ результатов свидетельствует,
Модель острого охлаждения воспро- что при остром охлаждении под действи-
изводили на белых мышах-самцах по экс- ем Г г/х в дозе 50 мг/кг при в/б введении
периментальной методике [9]. Для моде- время жизни мышей статистически досто-
лирования холодовой травмы животных верно повышалось в сравнении с группой
помещали в индивидуальные пластиковые контроля (холодовая травма) в среднем на
пеналы размером 8˟8˟15 см, которые не 35,6%, что подтверждает установленное
ограничивают доступ воздуха. Животных ранее фригопротекторное действие сред-
в пеналах помещали в морозильную каме- ства.
ру «Nord Inter-300» при температуре -180С. При введении атропина в дозе 1 мг/
Исследуемые средства атропин, пропрано- кг в/б на фоне острой холодовой травмы
лол, доксазозин, клонидин, глюкозамина показатель времени жизни был ниже кон-
гидрохлорид вводили в виде водного рас- трольного на 5,6%. Следовательно, блока-
твора внутрибрюшинно (в/б) в профилак- да М-холинорецепторов практически не
тическом режиме за 30 мин до холодовой влияет на чувствительность к острому ох-
травмы. лаждению. При этом продолжительность
Животные были разделены на группы жизни животных под действием атропина
в соответствии со средством, которое они была достоверно ниже, чем в группе «хо-
получали. Группа 1 – контроль + холодо- лодовая травма + Г г/х» (р<0,05).
вая травма (n=7); группа 2 – Г г/х (50 мг/кг, Тенденция к снижению устойчивости
в/б) + холодовая травма (n=11); группа 3 – к охлаждению на фоне внутрибрюшин-
атропина сульфат (1 мг/кг, в/б) + холодовая ного введения атропина, очевидно, объ-
травма (n=7); группа 4 – атропина сульфат ясняется угнетением холинореактивных
(1 мг/кг) + Г г/х (50 мг/кг, в/б) + холодовая систем и дисбалансом вегетативного то-
травма (n=7); группа 5 – пропранолол (4 нуса, что может приводить к нарушению
мг/кг, в/б) + холодовая травма (n=11); груп- вазомоторних реакций, снижению метабо-
па 6 – пропранолол (4 мг/кг) + Г г/х (50 мг/ лизма и усиленной потере тепла.
кг, в/б) + холодовая травма (n=11); группа При комбинации Г г/х и атропина пока-
7 – клонидин (10 мкг/кг, в/б) + холодовая затель времени жизни животных сохраняет-
травма (n=7); группа 8 – клонидин (10 мкг/ ся на уровне группы контроля. Это означает,
кг, в/б) + Г г/х (50 мг/кг, в/б) + холодовая что блокада М-холинорецепторов устраняет
травма (n=7); группа 9 – доксазозин (10 мг/ фригопротекторные свойства Г г/х.
79
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таблица – Изменения времени жизни и фригопротекторная активность животных в


условиях острой холодовой травмы у мышей
№ Условия опыта n Время жизни Фригопротекторная
мышей, мин активность, %
1 Контроль (холодовая травма) 7 76,4±3,72##/¤ -
2 Глюкозамина г/х (50 мг/кг, в/б) + 11 103,6±13,0 +35,6
холодовая травма ##/^^/¤
3 Атропина сульфат (1 мг/кг, в/б) + 7 72,1±2,05 -5,6
холодовая травма **/##/¤
4 Атропина сульфат (1 мг/кг) + 7 73,3±3,64 -4,0
глюкозамина г/х (50 мг/кг, в/б) + **/##/¤
холодовая травма
5 Пропранолол (4 мг/кг, в/б) + 11 57,7±2,51 */**/¤ -24,5
холодовая травма
6 Пропранолол (4 мг/кг) + 11 76,9±6,27 +0,7
глюкозамина г/х (50 мг/кг, в/б) + ##/¤
холодовая травма
7 Клонидин (10 мкг/кг, в/б) + 7 66,9±5,98 -12,4
холодовая травма **/¤
8 Клонидин (10 мкг/кг, в/б) +Г г/х 7 92,4±6,21 +20,9
(50 мг/кг, в/б) + холодовая травма */^^/##/¤
9 Доксазозин (10 мг/кг, в/б) + 8 34,8±1,92 -54,5
холодовая травма */**/^^
10 Доксазозин (10 мг/кг, в/б) + 8 35, 7±1,30 -53,3
глюкозамина г/х (50 мг/кг, в/б) + */**/^^
холодовая травма
Примечания: * – достоверно по отношению к контролю (холодовая травма), р<0,05. ** – досто-
верно по отношению к группе «холодовая травма + глюкозамина г/х (50 мг/кг, в/б)», р<0,05. ## – до-
стоверно по отношению к группе «пропранолол + холодовая травма», р<0,05. ^^ – достоверно по
отношению к группе «клонидин + холодовая травма», р<0,05. ¤ – достоверно по отношению к
группе «доксазозин + холодовая травма», р<0,05.

В группе, получавшей на фоне холо- женности защитное действие при острой


довой травмы пропранолол в дозе 4 мг/ холодовой травме, можно предположить,
кг, наблюдали достоверное уменьшение что β-адренорецепторы не вовлечены в ме-
показателя времени жизни животных по ханизм его фригопротекторного эффекта.
отношению к группе контроля на 24,5% и Клонидин снижал устойчивость к хо-
по отношению к группе (Г г/х + холодовая лоду на уровне тенденции на 12,4%, а
травма) (р<0,05). Таким образом, блокада Г г/х достоверно устранял этот эффект
β1- и β2 -адренорецепторов резко снижает (фригопротекторная активность 20,9%).
устойчивость организма к острой холодо- Механизм действия клонидина обуслов-
вой травме. В связи с такими эффектами лен стимуляцией постсинаптических α2-
β-адреноблокаторов, как снижение тонуса адренорецепторов сосудодвигательного
симпатической иннервации, работы серд- центра продолговатого мозга и перифе-
ца и АД, уменьшение интенсивности пе- рических адренореактивных структур.
риферического кровотока и обмена глюко- Возможный механизм умеренного сниже-
зы и липидов, устойчивость организма к ния устойчивости к охлаждению на фоне
охлаждению снижается, что и было уста- внутрибрюшинного введения клонидина,
новлено в эксперименте. по-видимому, объясняется взаимодей-
Г г/х в комбинации с пропранололом ствием периферических и центральних
устранял неблагоприятное действие бета- эффектов α2-адреномиметика. Возбужде-
блокатора, достоверно увеличивая продол- ние периферических α2-адренорецепторов,
жительность жизни до контрольного уровня. которое может преобладать в первой фазе
Поскольку Г г/х на фоне β1,2-адре- действия парентерально введенного кло-
ноблокаторов оказывает такое же по выра- нидина [15], способствует вазоконстрик-
80
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ции, а по мере стимуляции центральных ВЫВОДЫ


α2-адренорецепторов ослабляется симпа-
тический контроль сердечно-сосудистой 1. В эксперименте на мышах в усло-
системы со снижением работы сердца и виях острого общего охлаждения глюко-
вазодилатацией, что может способствовать замина гидрохлорид в дозе 50 мг/кг при
уменьшению интенсивности метаболизма внутрибрюшинном введении оказывает
и усиленной потере тепла. Очевидно, в ре- выраженное фригопротекторное действие,
зультате преобладания последнего время которое заключается в увеличении време-
выживания животных в условиях острого ни жизни животных.
охлаждения имело рассмотренную выше 2. Блокада М-холинорецепторов атро-
устойчивую тенденцию к снижению. пином существенно не влияет на время
Оказывая сосудорасширяющее действие, жизни животных в условиях холодовой
докзазозин в дозе 10 мг/кг в/б на фоне острой травмы, но устраняет фригопротекторный
холодовой травмы уменьшал время жизни на эффект глюкозамина гидрохлорида.
54,5%. При этом продолжительность жизни 3. Блокируя β1- и β2-адренорецепторы,
животных под действием доксазозина была пропранолол снижает устойчивость орга-
также достоверно ниже, чем в группе «хо- низма к общему охлаждению, чему пре-
лодовая травма + Г г/х 50 мг/кг в/б». Следо- пятствует глюкозамина гидрохлорид.
вательно, блокада α1-адренорецепторов по- 4. При блокаде α1-адренорецепторов
вышает устойчивость организма к острому доксазозином снижается устойчивость орга-
охлаждению, очевидно, за счет усиленной низма к острому охлаждению, данный эффект
потери тепла при вазодилатации. не устраняется глюкозамина гидрохлоридом.
При комбинации Г г/х и доксазози- 5. При стимуляции α2-адренорецепторов
на показатель времени жизни животных клонидином умеренно снижается устойчи-
также был ниже, чем в группе контро- вость организма к общему охлаждению,
ля, на 53,3%. Это означает, что блокада глюкозамина гидрохлорид препятствует
α-адренорецепторов устраняет фригопро- этому эффекту α2-адреномиметика.
текторные свойства Г г/х. 6. В механизме фригопротекторного
Обобщая комплекс полученных дан- действия глюкозамина гидрохлорида при-
ных, следует отметить, что блокада раз- нимают участие α1-адренорецепторы и
личных типов адренорецепторов (β1-, β2-, М-холинорецепторы.
α1-) повышает чувствительность организ-
ма к общему охлаждению. Это, очевидно, SUMMARY
важно учитывать пациентам, получающим
соответствующие лекарственные средства Ye. V. Bondarev, S. Yu. Shtrygol
в условиях низкой температуры окружаю- EXPERIMENTAL ANALYSIS
щего воздуха. α2- адреномиметик клонидин OF THE ROLE OF ADRENERGIC
также может несколько ухудшать холо- AND CHOLINERGIC RECEPTORS
доустойчивость. Блокада М-холинорецеп- IN GLUCOSAMINE HYDROCHLORIDE
торов почти не влияет на чувствительность FRIGOPROTECTION ACTION
к острой холодовой травме. Г г/х, который Treatment and prevention of acute cold in-
per se оказывает фригопротекторный эф- jury refer to the important problems of modern
фект, сохраняет эти свойства на фоне бло- medicine and pharmacology and require in-
кады β-адренорецепторов разных типов и depth study of the mechanisms of adaptation to
на фоне стимуляции α2-адренорецепторов. low temperatures. For the effective treatment
Однако в условиях блокады М-холи- and prevention of cold injury the search for
норецепторов или α1-адренорецепторов new frigoprotective drug is required. Objec-
фригопротекторные свойства Г г/х не про- tive of our work was to analyse the implica-
являются. Следовательно, по результатам tions of adrenergic and cholinergic receptors
фармакологического анализа можно утвер- in the increase of resistance to acute general
ждать, что М-холинореактивные и α1-адре- exposure to cold by glucosamine hydrochlo-
нореактивные структуры вовлечены в ме- ride in mice. Glucosamine hydrochloride has a
ханизм фригопротекторного эффекта Г г/х, strong frigoprotective action. Blockade of β1-,
который может, по-видимому, выступать в β2- и α1-adrenoreceptors significantly reduces
роли модулятора М-холинорецепторов и the body resistance to the total cooling but the
α1-адренорецепторов. effect of β-blocker is eliminated by adminis-
81
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

tration of glucosamine hydrochloride while the 10. Delafuente, J. C. Glucosamine in the


effect of α1-blocker persists. M-cholinergic re- treatment of osteoarthritis / J. C. Delafuente //
ceptor blockade prevents frigoprotective prop- Rheum. Dis. Soreide K:Clinical and transla-
erties of glucosamine hydrochloride, and α2- tional aspects of hypothermia in major trauma
adrenoceptor stimulation does not affect them. patients: from pathophysiology to prevention,
Key words: acute exposure to cold, glu- prognosis and potential preservation. Injury
cosamine hydrochloride, atropine, proprano- 2014,45:647–654.
lol, clonidine, doxazosin. 11. Азов, О. А. Влияние температуры
тела на сердечный ритм у крыс после бло-
ЛИТЕРАТУРА кады адрено- и холинорецепторов / О. А.
Азов, О. Г. Тихонович // Функциональные
1. Karlsen, A. M. Equipment to pre- системы организма в норме и при патоло-
vent, diagnose, and treat hypothermia: a sur- гии. Сборник научных тезисов под редак-
vey of Norwegian pre-hospital services / A. цией доктора медицинских наук, профес-
M. Karlsen // Scand J Trauma Resusc Emerg сора В. С. Улащика и доктора биологиче-
Med. – 2013, 21:63. ских наук А. Г. Чумака. – Минск: РИВШ.
2. Lapostolle, F. Risk factors for on- – 2008. – С. 56–59.
set of hypothermia in trauma victims: the 12. Мирюк, М. И. Фармакодинамика
Hypo Traum study / F. Lapostolle // Crit адренорецепторов и холинорецепторов
Care2012,16:R142. при адаптации к холоду / М. И. Мирюк //
3. Clin. North. Am. – 2000. – Vol.26. – Фундаментальная наука и клиническая ме-
P. 1–11. дицина. Тринадцатая Всероссийская меди-
4. Андреев, О. В. Диагностика и ле- ко-биологическая конференция молодых
чение локальной холодовой травмы / О. В. исследователей «Человек и его здоровье».
Андреев, Н. Н. Фисталь, Д. П. Гиодурец // – Санкт – Петербург. – 2010. – С. 127–128.
Вестник неотложной и восстановительной 13. Ананьев В. Н. Действие адаптации
медицины. – 2005. – Т. 6. – №2. – С. 247–249. к холоду на рецепторы сердечно-сосуди-
5. Афанасьева, Р. Ф. Холодовой стой системы / В. Н. Ананьев // Авиакос-
стресс, критерии оценки, прогнозирование мическая и экологическая медицина. –
риска охлаждения человека / Р. Ф. Афана- 2014. – Т. 47. – №4. – С. 5–6.
сьева // Безопасность жизнедеятельности. 14. Руководство по экспериментальному
– 2006. – №2. – С. 16–21. (доклиническому) изучению новых фарма-
6. Крылов, К. М. Холодовая трав- кологических веществ / [под ред. Р. У. Хабри-
ма: проблемы и вариант решения / К. М. ева]. – М.: Медицина, 2005. – С. 832.
Крылов, Д. А. Козулин, Д. В. Немченко // 15. Штрыголь, С. Ю. Модуляция фар-
Третья научная конференция по проблеме макологических эффектов при различных
«Холодовая травма». Сборник тезисов. – солевых режимах / С. Ю. Штрыголь. –
Санкт-Петербург. – 2002. – С. 47–48. Харьков : Ависта-ВЛТ, 2007. – 360 с.
7. Бондарєв, Є. В. Скринінгове 16. Сивков, А. В. Альфа-1-адренобло-
дослідження глюкозаміну гідрохлориду в каторы в терапии доброкачественной ги-
якості засобу фригопротекторної дії / Є. перплазии предстательной железы / А.
В. Бондарєв, С. Ю. Штриголь // Клінічна В.Сивков, О. И. Аполихин // Consilium
фармація. – 2010. – Т.14. – №4. – С. 47–49. Medicum. – 2002. – №07 [Электронный ре-
8. Бондарєв, Є. В. Вплив глюкозаміну сурс]. – Режим доступа: http://conmed.ru/
гідрохлориду на стан центральної нервової magazines/consilium_medicum/consilium_
системи та на фізичну витривалість ми- medicum-07-2002/.
шей після гострого загального охолод-
ження / Є. В. Бондарєв, С. Ю. Штриголь // Адрес для корреспонденции:
Український біофармацевтичний журнал.
– 2010. – №5(10). – С. 60–65. 61002, Украина,
9. Увеличение продолжительности г. Харьков, ул. Пушкинская, 53,
жизни мышей при остром охлаждении под Национальный фармацевтический университет,
воздействием препарата, выделенного из кафедра фармакологии,
тел. (+38099) 9571995,
Laminaria sacchara / Ю. В. Дрозд [и др.] // e-mail: jck.bond@gmail.com,
Биол.эксперим.биол.и мед. – 1991. – №4. – Бондарев Е. В.
С. 383–384. Поступила 27.10.2014 г.
82
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

И. А. Зупанец, Т. С. Сахарова, Е. В. Ветрова, Е. А. Зупанец

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛЮКОЗАМИНА НА ДОКСОРУБИЦИН-


ИНДУЦИРОВАННУЮ ГИБЕЛЬ КЛЕТОК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина

В статье представлены результаты морфологического и иммуногистохими-


ческого изучения влияния производных глюкозамина в комбинации с флавоноидом
кверцетином на процесс доксорубицин-индуцированного повреждения печени крыс.
Установлено, что внутрибрюшинное введение доксорубицина в дозе 20 мг/кг вызыва-
ет выраженные дегенеративно-дистрофические изменения в гистоструктуре пече-
ни, массированную гибель гепатоцитов вследствие индукции процессов некроза и
апоптоза. Проапоптотическое действие доксорубицина опосредовано его возмож-
ным влиянием на экспрессию антиапоптотического белка bcl-2, что иммуногисто-
химически выявляется снижением количества bcl-2-позитивных гепатоцитов. Ле-
чебно-профилактическое введение производных глюкозамина в комбинации с кверце-
тином нивелирует гепатотоксическое действие доксорубицина, способствует ре-
грессии патологических изменений в морфоструктуре печени, стимулируя процесс
регенерации и уменьшая проявления некроза и апоптоза. Показан антиапоптотиче-
ский потенциал производных глюкозамина в комбинации с кверцетином в условиях
доксорубицин-ассоциированной гепатотоксичности, что отражается достоверно
значимым увеличением количества bcl-2-позитивных гепатоцитов по сравнению с
аналогичным показателем у пораженных животных.
Ключевые слова: производные глюкозамина, кверцетин, доксорубицин, апоптоз,
bcl-2-позитивные гепатоциты.

ВВЕДЕНИЕ мишеней, опосредующих такое повреж-


дение [3]. Вместе с тем, в научной лите-
Долгое время в науке существовало ратуре в настоящее время накоплены све-
мнение, что химически индуцированное дения о возможности регуляции апоптоза
повреждение и смерть клетки осущест- различными веществами синтетического
вляются главным образом путем некроза. и природного происхождения, в частно-
Однако прогрессивное развитие молеку- сти, естественными метаболитами орга-
лярной биологии и генетики позволило низма [4, 5].
установить, что гибель клетки возможна На кафедре клинической фармаколо-
и в результате другого процесса, назы- гии и клинической фармации Националь-
ваемого апоптозом [1]. По современным ного фармацевтического университета
представлениям апоптозу отводится важ- под руководством профессора И.А. Зу-
нейшая роль как в физиологических, так панца проводятся исследования по разно-
и в патологических процессах, поскольку стороннему фармакологическому изуче-
как подавление, так и неадекватная его нию производных глюкозамина и его ком-
индукция могут вызвать необратимые бинаций с различными веществами в ка-
изменения органов и тканей. Во многих честве органопротекторных средств при
случаях апоптоз инициируется УФ- и различной патологии [6–8]. Показано, что
γ-излучением, тепловым шоком, окисли- органопротекторное действие различных
тельным стрессом, вирусной инфекци- производных и комбинаций глюкозамина
ей, воздействием химических факторов, реализуется благодаря мембраностаби-
в том числе различных лекарственных лизирующему, антиоксидантному, имму-
средств [2]. нотропному, противовоспалительному и
Одной из групп лекарственных другим видам действия. Исследованиями
средств, индуцирующих апоптоз, являют- последних лет установлено, что произво-
ся противоопухолевые средства. Действие дные глюкозамина в комбинациях с квер-
большинства из них приводит к индукции цетином и парацетамолом способны ока-
апоптоза в результате повреждения моле- зывать регулирующее влияние на процесс
кулы ДНК или других внутриклеточных апоптоза хондроцитов, индуцированный
83
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

глюкокортикостероидами на модели экс- растворе забуференного нейтрального


периментального стероидного остеоар- формалина (Shandon Fixx, США) в тече-
трита у крыс [4, 5]. ние 24 часов. После дегидратации мате-
Учитывая вышеизложенное, целью риал заливали в высокоочищенный пара-
нашей работы стало изучение комбина- фин с полимерными добавками (Richard-
ции некоторых производных глюкозамина Allan Scientific, США) при температуре
с кверцетином на процесс доксорубицин- не выше 60°С. Из парафиновых блоков на
индуцированного повреждения печени ротационном микротоме Microm HM325
крыс, одним из звеньев патогенеза кото- (Carl Zeiss, Германия) делали срезы ткани
рого является активация апоптоза [9, 10]. толщиной 5 мкм. Срезы ткани помещали
на предметные стекла (Menzel, Германия),
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ затем окрашивали по стандартным мето-
дикам гематоксилином и эозином (Kaltek,
Эксперименты проведены на 30 белых Италия) и изучали с помощью традицион-
беспородных лабораторных крысах мас- ных методов световой микроскопии [14].
сой 200-250 г. Все животные содержались Для дальнейшего иммуногистохими-
в стандартных условиях вивария ЦНИЛ ческого исследования часть парафиновых
НФаУ (сертифицирована ГЭЦ МОЗ Укра- срезов помещали на покрытые адгезивом
ины как база исследований по экспери- стекла Super Frost Plus (Menzel, Германия).
ментальной фармакологии (свидетель- Исследование проводили на депарафини-
ство № 21 от 30.04.2009 г.) со свободным рованных и регидратированных срезах.
доступом к воде и пище. Животные были Для демаскирования антигенности ткани
разделены на 5 групп по 6 животных в использовали метод тепловой обработки
каждой: 1-я группа – интактная, 2-я груп- срезов в буфере Target Retrieval Solution
па – контрольные животные, получавшие High pH (DAKO, Дания) путем нагрева-
однократно внутрибрюшинно доксоруби- ния в проточной водяной бане в течение
цин (ДОКС) в дозе 20 мг/кг массы тела 40 минут при температуре 98-99°С (GFL,
на 8-й день эксперимента [11]; 3 – 5-я Германия) с учетом рекомендаций фир-
группы – крысы, которые на фоне ДОКС мы-производителя антител. После бло-
в режиме лечебно-профилактического кирования неспецифического связывания
введения получали исследуемые объекты белков протеиновым блоком (Diagnostic
ежедневно внутрижелудочно в течение Biosystems, США) наносили первичные
10 суток: 3-я – глюкозамина гидрохло- антитела bcl-2 (clone 124, RTU FLEX,
рид (ГА г/х) в условно-терапевтической DAKO, Дания). Визуализацию первич-
дозе 50 мг/кг [12]; 4-я – комбинацию ами- ных антител проводили с помощью си-
носахаров глюкозамина гидрохлорида стемы детекции DAKO EnVision FLEX+
и N-ацетилглюкозамина с флавоноидом (DAKO, Дания). Для визуализации гисто-
кверцетином (КА+Кв) в соотношении 3:1 логической структуры исследуемой ткани
в пересчете на ГА г/х в условно-терапев- обработанные иммуногистохимические
тической дозе 82 мг/кг [4]; 5-я – кверце- препараты докрашивали гематоксили-
тин (Кв) в дозе 20,5 мг/кг [4]. ном Майера (DAKO). Далее окрашенные
Через 24 часа после последнего введе- срезы помещали в заключающую среду
ния всех исследуемых соединений у крыс Eukitt (Германия). На срезы, использовав-
экстирпировали печень и брали образцы шиеся для интактного контроля, вместо
ткани для дальнейшего морфологическо- первичных антител наносили буфер для
го и иммуногистохимического исследо- разведения антител (DAKO).
вания. Все вмешательства и эвтаназию Изучение препаратов в проходящем
животных осуществляли с соблюдением свете проводили на исследовательском
принципов «Европейской конвенции о за- микроскопе Olympus AX70 (Япония) с
щите позвоночных животных, использу- цифровой видеокамерой Olympus DP50,
емых для экспериментальных и научных соединенной с персональным компью-
целей» (Страсбург, 1986) и V-го Нацио- тером. Микрофотографирование и мор-
нального конгресса по биоэтике (Киев, фометрическое изучение препаратов вы-
2013) [13]. полнено с использованием программы
Для морфологического исследования AnalySIS Pro 3.2 (фирма «SoftImaging»,
полученный материал фиксировали в 10% Германия) в соответствии с рекоменда-
84
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

циями производителя программного обе- изменения выявлялись в разных участках


спечения. Оценку апоптоза в препаратах долек цитолизом гепатоцитов (как еди-
проводили по определению количества ничных клеток, так и мелких групп) с
bcl-2-позитивных клеток, приходящихся различной стадией лизиса ядер и цито-
на 1000 гепатоцитов, и выражали в ‰. плазмы, а в части гепатоцитов была четко
Статистическую обработку полученных видна мелкокапельная инфильтрация ци-
данных проводили на персональном ком- топлазмы. Часть гепатоцитов находилась
пьютере с помощью программы Statistica в стадии, предшествующей некрозу (аци-
6.0. дофильной дегенерации) – объем клетки
уменьшался, цитоплазма была плотной,
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ интенсивно эозинофильной, ядро пикно-
тичным, и в стадии «мумификации» – вы-
На первом этапе исследования прово- талкивание ацидофильной, сморщенной
дили гистоморфологическую оценку сте- клетки в просвет синусоида. Наблюда-
пени поражения печени крыс доксоруби- лись также апоптотически измененные
цином в сравнении с органами интактных гепатоциты – фрагменты клеток, окру-
животных. Сравнительная картина гисто- женные клеточной мембраной (рис. 1 б,
структуры печени интактых и пораженных см. обложку журнала), которые в лите-
крыс проиллюстрирована рис. 1 (а и б со- ратурных источниках называют тельца-
ответственно, см. обложку журнала). Ги- ми Каунсильмена [16]. Свидетельством
стологическое строение печени интактных апоптоза гепатоцитов служили дальней-
крыс соответствовало норме: гепатоциты в шие результаты иммуногистохимическо-
различных отделах печеночных долек име- го исследования по определению количе-
ли характерную форму и размер, цитоплаз- ства bcl-2-позитивных гепатоцитов.
ма была равномерно прокрашенной, опти- Выбранные для исследования объ-
чески плотной и не содержала включений, екты в разной степени уменьшали вы-
ядра гепатоцитов были нормохромны, цен- раженность дегенеративных изменений,
трально-расположены, содержали 1, ино- вызванных действием ДОКС. В печени
гда 2 ядрышка. Количество двухъядерных большинства животных, получавших
гепатоцитов было достаточным, митозов в комбинацию КА+Кв на фоне ДОКС, за-
клетках не отмечалось (рис. 1 а, см. облож- метно уменьшались цитолитические из-
ку журнала). менения гепатоцитов и гемодинамиче-
Под влиянием ДОКС в печени жи- ские расстройства, отсутствовали призна-
вотных группы контрольной патологии ки моноцелюлярного некроза (рис. 2, см.
происходили морфофункциональные на- обложку журнала). Заметно возрастала
рушения с признаками гипопластических выраженность анизонуклеоза и числен-
процессов, отмечалась массовая гибель ность двухъядерных клеток, а в ядрах ча-
гепатоцитов путем как некроза, так и сто увеличивалось количество ядрышек
апоптоза, что согласовывается с данными до 2–3. Такие морфологические признаки
литературы [9, 15]. Морфологически это свидетельствовали об активации регене-
выявлялось утолщением соединительно- раторных процессов в печени животных.
тканной капсулы печени, разрушением На фоне введения монокомпонентов
внешней терминальной пластинки, под ГА г/х и Кв также уменьшалась выражен-
которой местами наблюдались кровоизли- ность морфологических изменений, воз-
яния. Диффузно во всех дольках обнару- никающих в печени крыс после введения
живалось отчетливое нарушение гемоди- ДОКС, однако в меньшей степени, чем
намики в виде полнокровия синусоидаль- при введении комбинации КА+Кв. В пече-
ных капилляров, центральных и порталь- ни крыс этих групп отмечались признаки
ных вен. Об определенной «истощенно- лизиса ядер, мелкокапельной вакуолиза-
сти» клеток свидетельствовало снижение ции цитоплазмы гепатоцитов, моноцелю-
пула двухъядерных гепатоцитов, а также лярного некроза клеток. У большинства
мономорфность большинства гепатоци- крыс наблюдались нарушения гемодина-
тов на разных участках долек (ядра были мики. Меньшей была выраженность ани-
отчетливо одного размера, с одинаковым зонуклеоза, содержание двухъядерных
состоянием хроматиновой субстанции, со- клеток. Изредка обнаруживались тельца
держащие одно ядрышко). Некротические Каунсильмена.
85
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таким образом, введение комбинации синтез ДНК и РНК в ядрах клеток, ин-
аминосахаров глюкозамина гидрохлори- гибирует фермент топоизомеразу II, что
да и N-ацетилглюкозамина с кверцети- приводит к образованию цитотоксиче-
ном на фоне ДОКС снижало активность ских активных форм кислорода, других
гипопластических процессов в печени, свободных радикалов и в совокупности
способствовало обновлению клеточной индуцирует апоптоз путем инициации ка-
популяции гепатоцитов, оказывая более спазного каскада [18].
существенные позитивные изменения в
гистоструктуре органа, нежели ее отдель- Таблица – Количество bcl-2-позитивных
ные компоненты. гепатоцитов в микропрепаратах
На следующем этапе нашего исследо- печени крыс с доксорубицин-
вания проводили иммуногистохимическое индуцированным повреждением на фоне
определение количества bcl-2-позитивных введения исследуемых объектов
клеток в микропрепаратах печени, что кос- Условия опыта bcl-2 -позитивные
венно отражает активность процесса апоп- клетки, ‰
тоза. Как известно, белки семейства bcl-2 Интактная группа 1,49 ± 0,20
являются одними из регуляторов процес- ДОКС (контрольная 0,55 ± 0,11*
са запрограммированной смерти клеток. патология)
Они находятся в постоянном динамиче- ДОКС + ГА г/х 3,87 ± 0,28*/**
ском равновесии, образуя гомо- и гетеро- ДОКС + (КА+Кв) 5,41 ± 0,33*/**
димеры. К настоящему времени известно, ДОКС + Кв 3,44 ± 0,25*/**
что белки семейства bcl-2 относятся либо Примечания: * – отклонение достоверное от-
к индукторам (bad, bax и др.), либо к ин- носительно интактных животных, р ≤ 0,05;
** – отклонение достоверное относительно
гибиторам апоптоза (bcl-2, bcl-X). Белок группы контрольной патологии, р ≤ 0,05.
bcl-2 ингибирует р53-зависимый и незави-
симый апоптозные метаболические пути, Лечебно-профилактическое введение
способствует образованию в митохондри- животным комбинации КА+Кв на фоне
ях ионных каналов, стабилизируя этим ДОКС способствовало достоверному по-
митохондриальную цитохром-оксидазу С, вышению количества bcl-2-позитивных
и связывает белки, участвующие в апопто- гепатоцитов почти в 10 раз относительно
зе (цитохром-оксидаза С способна иници- группы контрольной патологии (количе-
ировать активацию каскада каспаз и, как ство bcl-2-позитивных клеток находилось
следствие, деградацию ДНК и апоптоз). на уровне 5,41 ‰) (таблица). Такие изме-
Белок bcl-2 выполняет функцию негатив- нения могут свидетельствовать о повы-
ного регулятора апоптоза: уменьшение его шенной экспрессии белка bcl-2 и, следо-
концентрации приводит к апоптотической вательно, угнетении апоптоза, индуциро-
гибели клеток, тогда как сверхэкспрессия ванного ДОКС.
защищает клетки от смерти [2, 17]. Введение ГА г/х и Кв на фоне повреж-
Использованная методика позволяет дения ДОКС приводило к достоверному
выявить в препаратах печени клетки, со- увеличению количества bcl-2-позитивных
держащие антиапоптотический белок bcl- гепатоцитов соответственно в 7 и 6,3 раза
2, которые определяются как клетки с ко- относительно аналогичного показателя в
ричневоокрашенной цитоплазмой (рис. 3, группе контрольной патологии (количе-
см. обложку журнала). ство bcl-2-позитивных клеток составляло
Результаты подсчета bcl-2-позитивных соответственно 3,87 и 3,44‰) (таблица).
клеток в микропрепаратах печени крыс Количество bcl-2-позитивных гепатоци-
всех исследуемых групп представлены в тов в группах животных, которые на фоне
таблице. ДОКС получали ГА г/х и Кв, уменьша-
Как следует из данных таблицы, в лось соответственно в 1,4 и 1,6 раза по
печени интактных крыс количество bcl- отношению к группе крыс, получавших
2-позитивных гепатоцитов составляло комбинацию КА+Кв. Вместе с тем, во
1,49‰ и достоверно уменьшалось в 2,7 всех группах, получавших исследуемые
раза в группе контрольной патологии, до- объекты в лечебно-профилактическом ре-
стигая значения 0,55‰ (таблица). Про- жиме, количество bcl-2-позитивных гепа-
апоптотическое действие ДОКС прогно- тоцитов достоверно отличалось и от по-
зируемо, так как данный агент нарушает казателя интактной группы крыс.
86
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таким образом, результаты имму- кверцетином, что может обусловливаться


ногистохимического исследования под- фармакодинамическим синергизмом ее
твердили индуцирующее влияние док- компонентов.
сорубицина на апоптоз гепатоцитов, что 5. Полученные данные позволяют де-
может обусловливаться уменьшением тализировать представление о механизме
экспрессии антиапоптотического белка действия производных глюкозамина, об-
bcl-2. Исследуемые объекты в разной сте- условленном наличием регулирующего
пени выраженности снижали проапопто- влияния на процесс апоптоза в условиях
тические воздействия в условиях ДОКС- ДОКС-индуцированной гибели клеток.
индуцированного апоптоза. Наиболее эф-
фективным оказалось использование ком- SUMMARY
бинации КА+Кв, при введении которой
количество bcl-2-позитивных гепатоци- I. A. Zupanets, T. S. Sakharova,
тов, как маркеров экспрессии антиапоп- K. V. Vetrova, K. A. Zupanets
тотического белка bcl-2, увеличивалось STUDY OF THE GLUCOSAMINE
в большей степени, чем при введении ее DERIVATIVES INFLUENCE
монокомпонентов. ON DOXORUBICIN-INDUCED CELL
DEATH IN THE EXPERIMENT
ВЫВОДЫ The article presents the results of mor-
phological and immunohistochemical study
1. Внутрибрюшинное введение доксо- of glucosamine derivatives influence in com-
рубицина в дозе 20 мг/кг вызывает в пече- bination with flavonoid quercetin on the pro-
ни крыс морфофункциональные наруше- cess of doxorubicin-induced liver damage
ния с признаками гипоплазии, обуслов- in rats. It was established that the applica-
ленной массовой гибелью гепатоцитов в tion of intraperitoneal doxorubicin 20 mg/
результате индукции процессов некроза kg caused a marked degenerative-dystrophic
и апоптоза. Проапоптотические свойства changes in the liver morphostructure, mas-
доксорубицина отражаются достоверным sive death of hepatocytes due to induction
снижением количества bcl-2-позитивных of necrosis and apoptosis processes. Proa-
гепатоцитов, что свидетельствует об уг- poptotic effect of doxorubicin includes its
нетении экспрессии антиапоптотического possible influence on the expression of anti-
белка bcl-2. apoptotic bcl-2 protein, which is detected by
2. Лечебно-профилактическое введе- immunohistochemical decrease of the num-
ние отдельных производных глюкозамина ber of bcl-2-positive hepatocytes. Preventive
и их комбинации с кверцетином нивелиру- administration of glucosamine derivatives in
ет гепатотоксическое действие доксоруби- combination with quercetin decreases the
цина, способствует регрессии патологиче- hepatotoxic effects of doxorubicin, promotes
ских изменений в морфоструктуре печени, regression of these pathological changes in
стимулируя процесс регенерации и умень- the liver morphostructure, stimulates the re-
шая проявления некроза и апоптоза. generation process and reduces the appear-
3. Показан антиапоптотический по- ance of necrosis and apoptosis. It was shown
тенциал производных глюкозамина в the anti-apoptotic potential of glucosamine
комбинации с кверцетином в условиях derivatives in combination with quercetin
доксорубицин-ассоциированной гепато- at the conditions of doxorubicin-associated
токсичности, что отражается достоверно hepatotoxicity, as reflected by a significant
значимым увеличением количества bcl-2- increase of significantly amount of bcl-
позитивных гепатоцитов по сравнению с 2-positive hepatocytes compared to the same
аналогичным показателем у пораженных period in the control animals.
животных и свидетельствует об усилении Keywords: glucosamine derivatives,
экспрессии антиапоптотического белка quercetin, doxorubicin, apoptosis, bcl-
bcl-2. 2-positive hepatocytes.
4. Наиболее выраженный цитопро-
текторный эффект в условиях доксоруби- ЛИТЕРАТУРА
цин-ассоциированной гепатотоксичности
установлен для комбинации глюкозамина 1. Elmore, S. Apoptosis: A Review
гидрохлорида, N-ацетилглюкозамина с of Programmed Cell Death / S. Elmore //
87
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Toxicologic Pathology. – 2007. – Vol.35, № - induced Toxicity / L. Zhang [et al.] // In-
4. – P. 495–516. ternational Journal of Toxicology. – 2011. –
2. Вересов, В. Г. Структурная био- Vol. 30, № 2. – P. 181–189.
логия апоптоза / В. Г. Вересов. – Минск: 11. Семенов, А. Н. Изучение карди-
Белорус. наука, 2008. – 398 с. опротекторных свойств нестероидных
3. Кондрашева, И. Г. Изучение меха- противовоспалительных средств в ряду
низмов резистентности клеток меланомы производных D-(+)-глюкозамина: дис. …
человека к противоопухолевой терапии: канд. мед. наук / А. Н. Семенов. – Купав-
автореф. дис. ... канд. биол. наук: спец. на, 2001. – 198 с.
03.00.04 «Биохимия» / И. Г. Кондрашева. 12. Зупанец, И. А. Экспериментальное
– Москва, 2008. – 22 с. обоснование использования глюкозамина
4. Зупанець, К. О. Дослідження впли- и его производных в медицине: дис. ... д-ра
ву композиції на основі кверцетину та мед. наук (в форме научного доклада) / И.
похідних глюкозаміну на процеси апопто- А. Зупанец. – Купавна, 1993. – 90 с.
зу хондроцитів в умовах розвитку експе- 13. European Convention for the
риментального остеоартриту / К. О. Зупа- Protection of Vertebrate Animals used for
нець, С. К. Шебеко, І. А. Отрішко // Ліки Experimental and Other Scientific Purposes
України плюс. – 2010. – № 3. – С. 47–50. – Strasbourg, 18.III.1986.
5. Зупанец, И. А. Влияние комбина- 14. Меркулов, Г. А. Курс патологоги-
ции глюкозамина гидрохлорида с пара- стологической техники / А. Г. Меркулов.
цетамолом на апоптоз хондроцитов в ус- – М.: Медицина, Ленингр. отд-ние, 1969.
ловиях развития системного стероидного – 424 с.
артроза у крыс / И. А. Зупанец, В. А. Ту- 15. Protective effects of silymarin against
ляков, С. К.Шебеко // Экспериментальная doxorubicin-induced toxicity / E. Cecen [et
и клиническая фармакология. – 2012. – Т. al.] // Asian. Pac. J. Canc. Prev. – 2011. –
75, №4. – С. 34–37. 12(10). – P. 2697 – 2704.
6. Корекція доксорубіцин-індукова- 16. Буеверов, А. О. Апоптоз гепатоци-
ної гепатотоксичності похідними глюко- тов и лейкоцитов периферической крови
заміну та їх комбінаціями з кверцетином при хронических гепатитах В и С: дис. …
в експерименті на щурах / І. А. Зупанець д-ра мед. наук : спец. 14.00.47 «Гастро-
[та iнш.] // Клінічна фармація. – 2014. – № энтерология» / А. О. Буеверов. – Москва,
2. – С. 4–9. 2009. – 126 с.
7. Ель Аараж, Ахмад. Порівняльне 17. Bcl-2 upregulation after 3-ni-
дослідження кардіопротекторних власти- tropropionic acid preconditioning in
востей комбінацій кверцетину з похідни- warm rat liver ischemia / F. Dünschede
ми глюкозаміну в експерименті / Ахмад [et al.] // Shock. – 2008. – doi: 10.1097/
Ель Аараж, І. А. Зупанець, С. К. Шебеко SHK.0b013e31816f6562.
// Ліки України плюс. – 2012. – № 3/4. – С. 18. Yurtcu, E. Genotoxic and cytotoxic
23–25. effects of doxorubicin and silymarin on
8. Зупанець, І. А. Вивчення фармако- human hepatocellular carcinoma cells /
логічних властивостей аміноцукрів та їх E. Yurtcu, ÖD. İşeri, FI. Sahin // Human
комбінацій з диклофенаком натрію в умо- & Experimental Toxicology. – 2014. –
вах моделювання мембраннозної нефро- doi:10.1177/0960327114529453.
патії у лабораторних тварин / І. А. Зупа-
нець, С. К. Шебеко // Фармацевтичний Адрес для корреспонденции:
журнал. – 2006. – №1. – С. 92–99. 61057, Украина,
9. Silymarin modulates doxorubicin- г. Харьков, ул. Пушкинская, 27,
induced oxidative stress, Bcl-xL and p53 Национальный фармацевтический
expression while preventing apoptotic and университет,
necrotic cell death in the liver / N. Patel [et кафедра клинической фармакологии
al.] // Toxicology and Applied Pharmacol- и клинической фармации,
ogy. – 2010. – Vol. 24. – P. 143–152. тел. + 38 (057) 706-30-59,
эл. почта: vkv-katya@rambler.ru;
10. Cardioprotective Effects of Glycyr- Ветрова Е.В.
rhiza uralensis Extract Against Doxorubicin Поступила 03.11.2014 г.

88
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Е. А. Калько, С. М. Дроговоз, А. В. Кононенко, И. А. Кулиш, Э. Л. Торяник

ВЛИЯНИЕ СУТОЧНОГО И СЕЗОННЫХ БИОРИТМОВ


НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ
АКТИВНОСТИ ПЕЧЕНИ

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина


В данной статье представлены результаты исследования влияния суточного
и сезонного биоритмов на биохимические показатели функциональной активности
печени интактных крыс и на фоне острого тетрахлорметанового гепатита. Вли-
яние суточного ритма определяли, сравнивая экспериментальные данные утренних
(10 ч) и вечерних (22 ч) групп, а сезонного ритма − на основании анализа данных двух
сезонов (зима и весна).
В результате проведенного исследования установлено, что у интактных жи-
вотных в вечернее время (22 ч) прослеживается достоверно более высокая актив-
ность АлАТ (31% − зимний период и на 40% − весенний) и АсАТ (на 19% − зимний
период и на 15% − весенний) относительно данных показателей на утро (10 ч). На
фоне патологии установленная ритмика нарушается, а утреннее введение тетрах-
лометана обладает более выраженным токсическим эффектом в сравнении с вечер-
ним, что обусловлено состоянием эндогенной глюкокортикостероидной системы
организма.
Ключевые слова: печень, острый гепатит, циркадианный ритм, сезонный
ритм, крысы-самцы.

ВВЕДЕНИЕ проведении доклинических изучений бу-


дущих гепатопротекторов и перспектив их
Ритмичность биологических процес- рационального применения.
сов является фундаментальным свойством Цель данного исследования: изучение
живой материи и составляет сущность ор- влияния сезонного и суточного биоритмов
ганизации жизни. на биохимические показатели функцио-
Циркадианные (суточные) ритмы яв- нальной активности печени интактных
ляются не только ответом организма на крыс и на фоне острого тетрахлорметано-
суточные колебания внешних факторов и вого гепатита.
механизмом поддержания гомеостаза, но и
представляют эндогенные, самовозникаю- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
щие колебания, порождаемые самим орга-
низмом. Исследование проводили на крысах в
Сезонные ритмы функций организ- двух сезонах года: I серия – зимний период
ма обусловливаются сменой длительно- (с 03 по 11 февраля 2014 года); II серия – ве-
сти светового дня, количеством осадков и сенний период (с 01 по 09 апреля 2014 года).
влажностью. Кроме внешних механизмов В каждой сезонной серии было по 32
регуляции сезонных ритмов, существуют половозрелых самца массой 250-350 г. Вы-
эндогенные, главным модулятором кото- бор самцов обусловлен тем, что у самок
рых является супрахиазматические ядра гепатоксический эффект зависит от фазы
гипоталамуса. Совместно с эпифизом они эстрального цикла и овуляции [2].
играют важную роль в обмене мозговых Изучение хронологических особен-
индоламинов (мелатонин, сератонин), ко- ностей циркадианной динамики остро-
торые принимают участие в регуляции го тетрахлорметанового (ТХМ) гепатита
функций организма [1]. проводили в утренней (10 ч) и вечерней
Выяснение влияния циркадианного и (22 ч) сериях. Суточные серии каждого се-
сезонных ритмов на состояние гепатоби- зона включали по две группы животных:
лиарной системы представляет теоретиче- интактного контроля (ИК) и контрольной
ский и практический интерес, поскольку патологии (КП), по восемь крыс в каждой.
изменение ее активности в разное время Острый гепатит вызывали однократным
суток и сезон года следует учитывать при внутрижелудочным введением 50% масля-
89
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ного раствора тетрахлорметана (в дозе 10 нального конгресса по биоэтике (Киев,


мл ТХМ на 1 кг крысы), который вводили 2001) [3].
в 10 и 22 часа суток соответственно утрен- Экспериментальные данные обраба-
ней и вечерней группе [3]. тывали с помощью стандартного пакета
Забой крыс проводили через 24 часа статистических программ «Stаtіstica 6,0».
после введения ТХМ под тиопенталовым Применяли непараметрический критерий
наркозом. Печень извлекали, взвешивали и Манна-Уитни. При сравнении статистиче-
рассчитывали массовый коэффициент пе- ских показателей был принят уровень зна-
чени (МКП). В сыворотке крови определя- чимости р<0,05 [6].
ли следующие наиболее информативные
показатели, характеризующие состояние РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
печени: аланинаминотрансфераза (АлАТ),
аспартатаминотранфераза (АсАТ), щелоч- Полученные результаты показали, что
ная фосфатаза (ЩФ) (с помощью тест- циркадианный ритм не влияет на МКП
наборов «Филисит-Диагностика»), холе- интактных крыс, о чем свидетельствуют
стерол (тест-набор «СпайнЛаб»), и вычис- практически одинаковые значения коэф-
ляли коэффициент де Ритиса (соотноше- фициента утром и вечером в каждом из
ние активностей АлАТ и АсАТ) [4,5]. двух сезонов. Между сезонами прослежи-
Все вмешательства и эвтаназию жи- валась достоверная разница МКП (12% в
вотных проводили согласно биоэтическим одноименных группах), однако она не вы-
нормам обращения с лабораторными жи- ходила за рамки физиологической нормы
вотными (Страсбург, 1986 г.) и І Нацио- (рис. 1) [7].

44 * **
* **
33
22
11
00
ИК утро зима ИК вечер зима ИК утро весна ИК вечер весна
Примечание: * − отклонение весеннего показателя достоверно значимо (р<0,05) относительно
зимнего показателя; ** − отклонение утреннего показателя достоверно значимо (р<0,05) относи-
тельно вечернего показателя.

Рисунок 1 − Влияние циркадианного биоритма на показатели МКП интактных крыс


Установлено различие циркадианной тенденцию к снижению в тех же условиях
ритмической активности цитолитических (таблица 1).
ферментов у интактных крыс зимой: в ве- Повышение активности внутриклеточ-
чернее время (22 ч) прослеживается до- ных ферментов сыворотки крови интакт-
стоверное повышение активности АлАТ ных животных в вечернее время может
(на 31%) и АсАТ (на 19%) относительно быть обусловлено циркадианными особен-
утренних показателей (10 ч). В весенний ностями процесса апоптоза. Активность
период установленная закономерность процессов митоза и апоптоза регулируется
находит свое подтверждение: активность соответствующими генами, функциони-
АлАТ и АсАТ достоверно выше в вечернее рование которых, в свою очередь, контро-
время по сравнению с утром на 40% и 15% лируют гены, обеспечивающие циркади-
соответственно (таблица 1). О хронобио- анный ритм. Гены, которые обеспечивают
логических особенностях цитолиза свиде- циркадианный ритм («часовые» гены Per-1,
тельствует коэффициент де Ритиса, кото- Per-2, Per-3, Cry-1, Cry-2), и их белковые
рый весной достоверно ниже в вечерней продукты CLOCK, BMAL образуют еди-
группе относительно утра, а зимой имеет ный механизм молекулярных часов, работа
90
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таблица 1 − Влияние циркадианного и сезонных биоритмов


на состояние маркеров цитолиза у интактных крыс
Зима Весна Разница в % относительно
Время суток
АлАТ, ммоль/ч · л зимних показателей
Утро 1,46±0,17 1,1±0,06 -33%
Вечер 1,92±0,12 1,54±0,07 -25% (*)
Разница в % относительно утренних +31% (**) +40% (**)
показателей
АсАТ, ммоль/ч · л
Утро 1,34±0,05 0,95±0,04 -41% (*)
Вечер 1,60±0,04 1,09±0,02 -47% (*)
Разница в % относительно утренних +19% (**) +15% (**)
показателей
Коэффициент де Ритиса
Утро 1,01±0,12 0,88±0,03 -15%
Вечер 0,85±0,05 0,72±0,04 -18% (*)
Разница в % относительно утренних -19% -22% (**)
показателей
Примечание: * − отклонение весеннего показателя достоверно значимо (р<0,05) относительно
зимнего показателя; ** − отклонение утреннего показателя достоверно значимо (р<0,05) относи-
тельно вечернего показателя.

которого зависит от интенсивности освеще- на 41% и 47% в утренние и вечерние часы,


ния [8, 9]. То есть существует иерархия под- соответственно). В свою очередь, в обоих се-
чиненности: митоз и апоптоз → активность зонах активность ферментов вечером (22 ч)
генов, контролирующих эти процессы → выше в сравнении с утром (10 ч). Активность
«часовые гены» – контролеры циркадиан- АлАТ и АсАТ прямо пропорционально отра-
ного ритма → световое освещение. жается в значении коэффициента де Ритиса:
Данные, полученные в зимний и весен- в вечернее время показатель ниже, что свиде-
ний периоды, позволяют сделать выводы от- тельствует о повышении активности процес-
носительно влияния сезонных и циркадиан- сов цитолиза в этот период (таблица 1).
ного биоритмов на состояние цитолиза. От- Что касается влияния сезонного биорит-
мечается, что у интактных животных зимой ма на активность ЩФ интактных крыс, то
в сравнении с весной выше активность АлАТ этот показатель практически не изменяется
(достоверно на 33% – в утренние часы и на в зависимости от сезона года (таблица 2).
25% – в вечерние часы) и АсАТ (достоверно Тем не менее, прослеживается влияние

Таблица 2 – Влияние циркадианного и сезонных биоритмов на состояние


гепатобилиарной системы у интактных крыс
Разница в % относительно
Время суток Зима Весна зимних показателей
МКП
Утро 3,01±0,06 3,38±0,09 +12% (*)
Вечер 3,1±0,07 3,48±0,06 +12% (*)
ЩФ, ммоль/ч · л
Утро 3,65±0,15 3,56±0,22 −
Вечер 4,96±0,39 4,23±0,12 −
Разница в % относительно утренних +36% (**) +19% (**)
показателей
Холестерол, ммоль/л
Утро 1,53±0,11 1,56±0,08 −
Вечер 1,44±0,05 1,74±0,05 +21% (*)
Примечание: * − отклонение весеннего показателя достоверно значимо (р<0,05) относительно
зимнего показателя; ** − отклонение утреннего показателя достоверно значимо (р<0,05) относи-
тельно вечернего показателя.
91
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

циркадианного ритма на активность ЩФ, вторых, существует циркадианная зависи-


в частности, в двух сезонах отмечается до- мость развития патологического процесса.
стоверно выше активность ЩФ в вечернее Установлен неодинаковый токсиче-
время на 36% (зима) и 19% (весна), что мо- ский эффект ТХМ на активацию цитоли-
жет быть обусловлено вышеописанными за при утреннем и вечернем его введении.
процессами митоза и апоптоза (таблица 2). Согласно вышеописанному, в двух сезонах
Концентрация холестерола не имеет (зимний и весенний) в результате влияния
различия между утренними и вечерними сезонного ритма у интактных животных
показателями в обоих сезонах, за исключе- наблюдалось разное значение активности
нием достоверной разницы на +21% меж- АлАТ, АсАТ и коэффициента де Ритиса.
ду значением этого показателя в вечернее Если сравнивать увеличение активности
время суток зимнего и весеннего сезонов данных ферментов в условиях патологии,
(таблица 2). то можно проследить, что в зимний и весен-
В группе животных с острым гепатитом ний период активность АлАТ и АсАТ повы-
(контрольная патология) зимней и весенней шается практически на одном уровне (АлАТ
серии опытов, во-первых, прослеживает- утро зима/весна – 274%/285%; АлАТ вечер
ся развитие патологического процесса, о зима/весна – 200%/220%; АсАТ утро зима/
чем свидетельствует достоверное увели- весна – 220%/230%; АсАТ вечер зима/весна
чение МКП, активности маркеров цитоли- 151%/161%) относительно интактных крыс
за (АлАТ и АсАТ) и холестаза (ЩФ). Во- (таблица 3 и рисунок 2).

Таблица 3 – Влияние циркадианного и сезонных биоритмов на активность маркеров


цитолиза в условиях острого тетрахлорметанового гепатита
Зима Весна
Условия эксперимента
АлАТ, ммоль/ч · л
Утро
ИК 1,46±0,17 1,1±0,06
КП 4,00±0,16 3,14±0,04
Увеличение активности в разах 2,74 (*) 2,85(*)
ИК 1,92±0,12 1,54±0,07
Вечер
КП 3,80±0,08 3,36±0,09
Увеличение активности в разах 2,00(*) 2,2(*)
Зима Весна
Условия эксперимента
АсАТ, ммоль/ч · л
Утро
ИК 1,34±0,05 0,95±0,04
КП 2,94±0,26 2,18±0,04
Увеличение активности в разах 2,2(*) 2,3(*)
ИК 1,60±0,04 1,09±0,02
Вечер
КП 2,42±0,09 1,76±0,06
Увеличение активности в разах 1,51(*) 1,61(*)
Зима Весна
Условия эксперимента
Коэффициент де Ритиса
Утро
ИК 1,01±0,12 0,88±0,03
КП 0,64±0,04 0,70±0,01
Уменьшение коэффициента в % 58%(*) 26%(*)
ИК 0,80±0,05 0,72±0,04
Вечер
КП 0,58±0,04 0,52±0,01
Уменьшение коэффициента в % 31%(*) 38%(*)
Примечание: * – отклонение показателя достоверно значимо (р<0,05) относительно интактного
контроля.

Анализ полученных эксперименталь- мы цитолиза. Так, у интактных животных


ных данных позволяет сделать выводы в вечернее время характерна повышенная
относительно влияния циркадианного и активность АлАТ и АсАТ, тогда как в ус-
сезонных биоритмов на состояние систе- ловиях патологии данный циркадианный

92
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Активация цитолиза в % при Активация цитолиза в % при


утреннем введении ТХМ вечернем введении ТХМ
300% 250%
* *
*
250% *
* 200%
*
200%
* *
150%

150%
100%
100%

50%
50%

0% 0%
АлАТ АсАТ АлАТ АсАТ

КП ве че р зима КП ве че р ве сна
КП утро зима КП утро весна

* − отклонение показателя достоверно значимо (р<0,05) относительно интактного контроля.

Рисунок 2 – Влияние циркадианного и сезонных биоритмов на активацию процессов


цитолиза при остром однодневном гепатите

ритм маркеров цитолиза полностью ниве- темной фазы суток [10]. Общеизвестно, что
лируется. Введение ТМХ в утренние часы для глюкокортикостероидов свойственна
способствует более выраженному цито- противовоспалительная и мембраностаби-
токсическому эффекту последнего, в срав- лизирующая активность, которая и способ-
нении с введением ТХМ в вечерние часы. на уменьшать токсичность ТХМ [11].
По результатам анализа двух сезонов (зим- Выше описывалось, что активность
него и весеннего) не наблюдается влияние ЩФ интактных крыс подчиняется влия-
сезонных ритмов на степень активации нию циркадианного ритма с достоверно
маркеров цитолиза. более высокой активностью фермента в
Принимая во внимание увеличение вечернее время относительно утреннего в
МКП, нами установлена циркадианная за- обоих сезонах (таблица 2).
висимость развития воспалительного про- В эксперименте зимнего сезона на
цесса. В частности, введение ТХМ в 10 ч фоне развития патологического процесса
приводило к достоверному увеличению сохраняется тенденция повышенной ак-
МКП на 46% (зима) и на 36% (весна) по тивности ЩФ в группах вечерней серии
отношению к интактным животным, тогда относительно утренней, однако результаты
как введение в вечернее время (22 ч) при- весеннего эксперимента отражают прак-
водило к достоверному увеличению этого тически равные показатели повышения
показателя на 22% и 21% соответственно активности данного фермента в группах
вышеуказанным сезонам (таблица 4). Сле- утренней и вечерней серии – следователь-
довательно, степень развития воспалитель- но, эта тенденция нивелируется (таблица
ного процесса одинаковая в группах зимней 4). Степень повышения активности ЩФ
и весенней серии экспериментов с более в группах животных контрольной патоло-
выраженной токсичностью ТХМ при его гии относительно интактных: зима на 38%
утреннем введении. Одним из возможных (утро) и 59% (вечер); весна – на 57% (утро)
механизмов регулирования токсичности и на 26% (вечер). Следовательно, можно
последнего может быть состояние эндоген- сделать вывод: согласно полученным дан-
ной защитной системы организма, суще- ным для холестатического синдрома (мар-
ственную роль в которой играет действие кер холестаза – повышение активности
глюкокортикостероидов. Акрофаза данных ЩФ) на фоне патологии четкой тенденции
гормонов у крыс наступает в первые часы сезонной зависимости не прослеживается.

93
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Таблица 4 – Влияние циркадианного и сезонных биоритмов на состояние


гепатобилиарной системы в условиях острого однодневного тетрахлорметанового
гепатита
МКП
Условия эксперимента
Зима Весна
Утро
ИК 3,01±0,06 3,38±0,09
КП 4,39±0,16 4,6±0,13
Увеличение показателя при патологии в 1,46 (*) 1,36 (*)
разах относительно интакта
ИК 3,1±0,07 3,48±0,06
Вечер
КП 3,77±0,08 4,22±0,21
Увеличение показателя при патологии в 1,22 (*) 1,21 (*)
разах относительно интакта
ЩФ, ммоль/ч · л
Условия эксперимента
Зима Весна
Утро
ИК 3,65±0,15 3,56±0,22
КП 5,04±0,49 5,59±0,22
Увеличение активности при патологии в 38%(*) 57%(*)
% относительно интакта
ИК 4,96±0,39 4,23±0,12
Вечер
КП 7,90±0,36 5,35±0,35
Увеличение активности при патологии в 59% (*) 26%(*)
% относительно интакта
Холестерол, моль/л
Условия эксперимента
Зима Весна
Утро
ИК 1,53±0,11 1,56±0,08
КП 0,66±0,05 1,16±0,10
Уменьшение концентрации в разах при 2,3 (*) 1,34 (*)
патологии относительно интакта
ИК 1,44±0,05 1,74±0,05
Вечер
КП 1,49±0,17 0,99±0,15
Уменьшение концентрации в разах при 1,76 (*)
патологии относительно интакта
Примечание: * − отклонение показателя достоверно значимо (р<0,05) относительно интактного контроля.

Уровень концентрации холестерола ин- может быть обусловлено циркадианной за-


тактных животных утром в обоих сезонах висимостью активности эндогенной глю-
пребывает практически на одном уровне. В кокортикостероидной защитной системы
зимних исследованиях введение ТХМ при- организма.
водило к достоверному снижению данного 2. Циркадианный ритм оказывает влия-
показателя в 2,3 раза в утренней группе и не ние на процесс цитолиза интактных крыс, в
приводило к изменениям в вечерней груп- частности, это отражается разными утрен-
пе, тогда как в весенний период на фоне ними и вечерними значениями активности
патологического процесса концентрация АлАТ и АсАТ в двух сезонах. Согласно по-
холестерола достоверно снижается в 1,34 и лученным данным, в вечернее время (22 ч)
в 1,76 раза (утренняя и вечерняя группа со- прослеживается достоверно более высокая
ответственно) (таблица 4). активность АлАТ (на 31% – зимний пери-
од и на 40% – весенний) и АсАТ (на 19% –
ВЫВОДЫ зимний период и на 15% – весенний) отно-
сительно данных показателей на утро (10 ч)
1. Значение МКП не зависит от влия- (р<0,05).
ния циркадианного ритма, однако в усло- 3. Влияние сезонного ритма на состо-
виях патологии утреннее введение ТХМ яние цитолиза интактных животных от-
провоцирует более выраженный токсиче- ражается в значениях активности маркер-
ский эффект в сравнении с вечерним, что ных ферментов, в частности, зимой более

94
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

высокая активность АлАТ (достоверно на spring) and AST (19% higher in winter and 15%
33% – в утренние часы и на 25% – в ве- higher in spring) with respect to these indicators
черние часы) и АсАТ (достоверно на 41% in the morning (10 а.m.). On the background of
и 47% в утренние и вечерние часы, соот- pathology the established rhythm is disturbed,
ветственно) в сравнении с весной (р<0,05). and the morning introduction of tetrachlorme-
4. На фоне патологического процесса tane provides a more pronounced toxic effect in
отмечается нивелирование ранее установ- comparison with the night, probably due to the
ленной нами циркадианной активности endogenous steroid system condition.
АлАТ и АсАТ. Введение ТМХ в утренние Keywords: liver, acute hepatitis, circadi-
часы способствует более выраженному ци- an rhythm, seasonal rhythm, male rats.
тотоксическому эффекту последнего в срав-
нении с введением ТХМ в вечерние часы. ЛИТЕРАТУРА
5. Активность ЩФ интактных живот-
ных подчиняется влиянию циркадианного 1. Хронофармакология наглядно (Хро-
ритма с характерной особенностью: выше нофармакология в таблицах и рисунках):
активность в вечернее время суток относи- Справочник – учебное пособие / С. М.
тельно утреннего (на 36% зимой и на 19% Дроговоз [и др.]. − Х.: Титул, 2014. − 128 с.
весной) (р<0,05). 2. Мелешен, М. И. Роль биологических
6. Не прослеживалась сезонная зависи- ритмов в реализации токсических эффек-
мость влияния ТХМ на повышение актив- тов химических веществ у млекопитаю-
ности ЩФ животных с патологией, о чем щих в эксперименте: дис. ... канд. биол.
свидетельствуют практически одинаковые наук: 03.02.14 / М. И. Мелешен – Влади-
значения ЩФ в двух сезонах. кавказ, 2010. – 127 с.
7. Проведенные исследования под- 3. Доклінічні дослідження лікарських
тверждают циркадианную зависимость ток- засобів: Методичні рекомендації / За ред.:
сичности ТХМ с более выраженным провос- член-кор. АМН України О. В. Стефанова. –
палительным и цитотоксическим эффектом К.: Авіценна, 2001. – 528 с.
последнего при его утреннем введении. 4. Камышников, В. С. Справочник по
8. Полученные данные циркадианной клинико-биохимической лабораторной
зависимости токсичности ТХМ следует диагностике: в 2 т. / В. С. Камышников.−
учитывать с целью усовершенствования Мн.: Беларусь, 2000. – Т.1. – 495 с.
схем доклинического изучения гепатопро- 5. Руководство по проведению докли-
текторных лекарственных средств. нических исследований лекарственных
средств / Под ред. д-ра мед. наук А. Н. Ми-
SUMMARY ронова – М.: Гриф и К, 2012. – Ч.1. – 944 с.
6. Реброва, О. Ю. Статистический ана-
K.O. Kalko, S.M. Drogovoz, лиз медицинских данных. Применение па-
A.V. Kononenko, I.O. Kylish, E.L. Toryanik кета прикладных программ STATISTICA
THE INFLUENCE OF DAILY – 3-е изд. / О. Ю. Реброва. – М. : МедиаС-
AND SEASONAL RHYTHMS фера, 2006. – 312 с.
ON BIOCHEMICAL PARAMETERS OF 7. Дроговоз, С. М. Биоритмы – марке-
THE LIVER’S FUNCTIONAL ACTIVITY ры функционального состояния желудоч-
This article shows the results of study- но-кишечного тракта / С. М. Дроговоз, М.
ing of the influence of seasonal and circadian П. Тимофеев, Е. А. Калько // Український
biorhythms on biochemical indices of the liver біофармацевтичний журнал. − 2013. –
functional activity in intact rats and in rats with №2. – С. 4–8.
acute hepatitis induced by carbon tetrachloride. 8. Наймарк, Е. П. Наука во власти сна
The influence of the circadian rhythm was de- / Е. П. Наймарк // Что нового в науке и
termined by comparing the experimental data технике. – 2005. – №7 – 8 [Электронный
of the morning (10 a.m.) and evening (22 hrs.) ресурс]. Режим доступа: http://elementy.
groups, and the seasonal rhythms on the base of ru/lib/164545/164546. – Дата доступа:
analysis of the two seasons (winter and spring). 11.09.2014.
By the results of the investigation it was 9. Анисимов, В. Н. Хронометр жизни
determenid that the intact animals in the night / В. Н. Анисимов // Природа. – 2007. – №7
time (22 hrs.) had significantly higher activity of [Электронный ресурс]. – Режим доступа:
ALT (31% higher in winter and 40% higher in http://vivovoco.astronet.ru/VV/JOURNAL/
95
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

NATURE/07_07/MELA.HTM. – Дата до- Адрес для корреспонденции:


ступа: 14.09.2014.
10. Арушанян, Э. Б. Суточные колебания 61002, Украина,
г. Харьков, ул. Мельникова, 12,
концентрации кортикостерона в плазме и ло- Национальный фармацевтический
комоции у крыс при локальном разрушении университет,
гиппокампа / Э. Б. Арушанян, Э. В. Бейер, кафедра фармакологии,
Е. В Белик // Российский физиологический e-mail: kalko_sonkina@mail.ru,
журнал. – 1999. – № 5. – С. 616–620. тел.: +38 (057) 706 30 69,
11. Скакун, Н. П. Клиническая фарма- +38 (096) 94 317 94,
кология гепатопротекторов: монография / Калько Е. А.
Н. П. Скакун, В. В. Шманько, Л. М. Охри-
мович. – Тернополь: Збруч, 1995. – 272 с. Поступила 17.10.2014 г.

В. М. Ёршик

ПРОТИВОВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ
ИЗВЛЕЧЕНИЙ ЛИМОННИКА КИТАЙСКОГО

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

Оптимизированы условия оценки жизнеспособности клеток почки быка с по-


мощью MTT-теста. Исследована противовирусная активность экстрактов и во-
дного извлечения семян лимонника китайского. Установлено, что СО2 и спиртовой
экстракты семян лимонника китайского обладают противовирусной активностью
in vitro по профилактической и лечебной схеме. Противовирусная активность во-
дного извлечения выражена в значительно меньшей степени.
Ключевые слова: лимонник китайский, МТТ, противовирусная активность.

ВВЕДЕНИЕ воспалительный эффект, основанный на


конкурентном антагонизме компонентов
Лимонник китайский (Schisandra chi- с фактором активации тромбоцитов [7].
nensis (Turсz) Baill.) – древесная вьющаяся Компоненты лимонника китайского уси-
лиана из семейства лимонниковых ливают потребление кислорода клетками
(Sсhisandraceae). В народной медицине и стимулируют углеводно-фосфорный
лимонник широко используется как стиму- обмен [8]. В работе [9] показано, что ком-
лирующее и тонизирующее средство [1]. поненты экстрактов лимонника обладают
Основными действующими компо- антигиперпролиферативной и противовос-
нентами лимонника китайского являются палительной активностью за счет ингиби-
лигнаны такие, как схизандрин, деоксис- рования циклооксигеназы 2.
хизандрин, схизандрол B, деоксисхизан- Таким образом, компоненты лимонни-
дрин, гамма-схизандрин и ряд других [2, ка оказывают множественное действие на
3]. Углекислотные экстракты и спиртовые живые организмы.
экстракты имеют подобный состав [4]. Цель работы: исследовать противо-
В литературных данных отражена ан- вирусную активность извлечений и экс-
тиоксидантная активность, антистрессор- трактов лимонника китайского в модели
ная активность продуктов из лимонника вируса везикулярного стоматита и клеток
китайского [5]. Показана также биологи- почки быка.
ческая активность по отношению к куль-
туре клеток и изолированным органам. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Например, установлено, что компоненты
лимонника могут ингибировать выделе- Материалом исследования являлись се-
ние медиатора воспаления лейкотриена мена лимонника китайского, заготовленные
B4 макрофагами [6]. Доказан противо- в 2013 г на опытном поле в д. Улановичи,
96
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

углекислотный экстракт семян лимонника MTT-реагента с клетками и способа обсче-


китайского производства НИЦ ЭР «ГОРО», та аналитического сигнала, получаемого на
Ростов на Дону. Водные и спиртовые из- планшетном спектрофотометре. Для это-
влечения лимонника китайского готовили го по 100 мкл клеточной суспензии (2×108
следующим образом: в пенициллиновые клеток / мл) в четырех повторностях по-
флаконы помещали по 0,5 г измельченных мещали в лунки культурального планшета.
семян, прибавляли 5,0 мл воды или 70% Методом последовательных разбавлений в
раствора этилового спирта, укупоривали 2 раза разбавляли суспензию до содержа-
под обкатку, взвешивали и нагревали на ния клеток 9,8×104. Через 24 часа сменяли
кипящей водяной бане в течение 30 минут. культуральную среду и вносили по 25 мкл
Затем флаконы охлаждали, взвешивали и МТТ-реагента (2 мг/мл). Клетки культиви-
если масса флакона оставалась неизмен- ровали в течение 1, 2 и 4 часов. Затем удаля-
ной, то надосадочную жидкость использо- ли культуральную среду и вносили по 100
вали для дальнейших исследований. Стан- мкл лизирующего реактива (10% раствор
дартизацию экстрактов проводили в соот- натрия додецилсульфата в 0,01М растворе
ветствии с [10] по схизандрину. Затем СО2 хлористоводородной кислоты). Через сутки
экстракт и спиртовой экстракт разбавляли измеряли значение оптической плотности с
так, чтобы концентрация схизандрина в по- помощью планшетного спектрофотометра
лученных растворах была близка к концен- при длинах волн 540 и 620 нм.
трации схизандрина в водном извлечении. Оценку вирулицидной активности
Для этого 5 мл спиртового экстракта упари- проводили следующим образом: по 50 мкл
вали до конечного объема примерно 1,5 мл, исследуемых экстрактов лимонника раз-
прибавляли 250 мкл диметилсульфоксида и бавляли в 10 раз поддерживающей куль-
разбавляли водой для инъекций до 5 мл. 60 туральной средой. Затем смешивали по 50
мкл CO2 экстракта смешивали с 250 мл ди- мкл полученного разведения с 50 мкл ви-
метилсульфоксида и разбавляли водой для русной суспензии и инкубировали в тече-
инъекций до 5 мл. ние одного часа. Параллельно проводили
Исследование проводили на культуре контрольный опыт с чистой культуральной
клеток почки быка, полученной в Научно- средой, не содержащей соединения ли-
исследовательском институте вирусологии монника. Через 1 час готовили серию де-
им. Д.И. Ивановского, и вирусе везикуляр- сятикратных разведений суспензии вируса
ного стоматита. и вносили в лунки планшета с суточным
Культивирование клеток осуществля- монослоем клеток. Через сутки оценивали
ли в монослое в матрасах объемом 75 мл степень поражения монослоя клеток с по-
в среде RPMI-1640, содержащей 10% эм- мощью МТТ-теста.
бриональной телячьей сыворотки, 4 мМ Оценку токсичности соединений ли-
L-глютамина, 1,5 г/л гидрокарбоната на- монника проводили путем инкубирования
трия, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл по 100 мкл десятикратных разведений экс-
стрептомицина, при температуре 37˚С во трактов лимонника в поддерживающей
влажной атмосфере с 5% СО2. среде в лунках планшета, содержащих по
В качестве поддерживающей среды 4000 клеток в течение 3 суток.
использовали RPMI-1640, содержащую Оценку противовирусной активности
5% эмбриональной телячьей сыворотки, 4 по профилактической схеме проводили
мМ L-глютамина, 1,5 г/л гидрокарбоната следующим образом: растворы экстрактов
натрия, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/ лимонника разбавляли в 10 раз поддержи-
мл стрептомицина. вающей культуральной средой (содержание
Оценку противовирусной активно- схизандрина около 50 мкг/мл). В культу-
сти проводили путем оценки жизнеспо- ральные 96 луночные планшеты с моносло-
собности клеток при культивировании ем клеток вносили по 100 мкл полученных
после обработки частицами вируса. Ко- растворов и инкубировали в течение 1 часа.
личество жизнеспособных клеток опре- Затем растворы из лунок удаляли и прибав-
деляли с помощью MTT-теста (теста с ляли по 100 мкл десятикратных разведений
3-4,5-диметилтиазол-2-ил-2,5-дифенил- вирусной суспензии. Инкубировали в тече-
тераразолом) [11]. Предварительно прово- ние 1 часа, затем культуральную среду с ви-
дили оптимизацию [12] условий проведе- русом удаляли. Лунки трижды промывали
ния МТТ-теста – времени инкубирования Дюльбекко-фосфатным солевым буфером.
97
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Затем в лунки вносили по 100 мкл поддер- поддерживающей культуральной средой


живающей среды. Через 24–48 часов оце- (содержание схизандрина около 50 мкг/
нивали степень поражения монослоя кле- мл). В лунки вносили по 100 мкл получен-
ток с помощью МТТ-теста (время инкуби- ных растворов и инкубировали в течение
рования подбирали таким образом, чтобы 1 часа. Затем содержимое удаляли, лунки
наблюдалась максимальная визуальная раз- трижды промывали Дюльбекко-фосфат-
ница степени поражения монослоя клеток в ным солевым буфером, вносили по 100
лунках с разным титром вируса). мкл поддерживающей среды. Через 24–48
Оценку противовирусной активности часов оценивали степень поражения моно-
по лечебной схеме проводили следующим слоя клеток с помощью МТТ-теста.
образом: в лунки со сформировавшимся
монослоем клеток почки быка вносили РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
по 0,1 мл десятикратных разведений су-
спензии вируса везикулярного стомати- На рисунке 1 представлены результаты
та. Инкубировали в течение 1 часа, затем исследования зависимости значений опти-
культуральную среду с вирусом удаляли. ческой плотности от количества жизнеспо-
Лунки трижды промывали Дюльбекко- собных клеток, измеренные при различных
фосфатным солевым буфером. Растворы длинах волн после инкубирования клеток с
экстрактов лимонника разбавляли в 10 раз MTT-реактивом в течение 1, 2 и 4 часов.

А
1
0,4
2
3 0,6
0,3 4

0,4
0,2

0,1 0,2

0 0
0,E+00 5,E+06 1,E+07
Содержание клеток

1 – время инкубирования 1 час (A540-A620); 2 – время инкубирования 2 часа (A540-A620);


3 – время инкубирования 4 часа (A540-A620); 4 – время инкубирования 2 часа (A540)
Рисунок 1 – Зависимость значения оптической плотности в лунках планшета
от количества жизнеспособных клеток

Оптимальное время инкубирования со- Исследование показало, что экстракты


ставляет 2 часа, при котором зависимость лимонника не обладают прямой вирулицид-
величины аналитического сигнала от коли- ной активностью: не обнаружено разницы
чества клеток в лунке носит прямолинейный в значениях оптической плотности между
характер. Использование в качестве анали- контрольными и исследуемыми лунками.
тического сигнала разности значений опти- На рисунке 3 представлена зависи-
ческой плотности при длинах волн 540 и 620 мость разностей оптической плотности,
нм позволяет исключить погрешность, свя- измеренной при 540 и 620 нм (DА), от
занную с рассеиванием света в лунке. степени разведения вируса в лунках, об-
При оценке токсичности соединений работанных извлечениями лимонника, и
лимонника в течение трех суток не наблю- в контрольных лунках при исследовании
далась деградация монослоя, что указыва- противовирусной активности по профи-
ет на отсутствие токсичности в используе- лактической схеме.
мых концентрациях. Как видно, спиртовой и CO2 экстракты
На рисунке 2 (см. обложку журнала) достоверно (р<0,05) увеличивают степень
представлены микрофотографии нормаль- устойчивости клеток к действию вируса ве-
ного и пораженного монослоя клеток. зикулярного стоматита как в области высо-
98
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

∆A 1
0,6 2
3
4
0,4

0,2

0,0
1 2 3 4
Разведения вируса

1 – водное извлечение, 2 – спиртовой экстракт, 3 – CO2 экстракт, 4 – контроль.


Рисунок 3 – Исследование противовирусной активности извлечений лимонника
по профилактической схеме

ких, так и в области низких разведений ви- (р<0,05). Водный экстракт лимонника ки-
руса по сравнению с контролем. В области тайского достоверно (р<0,05) увеличивает
высоких разведений вируса наблюдается степень устойчивости клеток только в об-
более высокая устойчивость клеток к дей- ласти высоких разведений вируса.
ствию вируса в присутствии CO2 экстрак- На рисунке 4 представлена зависи-
та по сравнению со спиртовым экстрактом мость разностей оптической плотности,

∆A 1
0,6 2
3
4
0,4

0,2

0,0
1 2 3 4
Разведения вируса

1 – водное извлечение, 2 – спиртовой экстракт, 3 – CO2 экстракт, 4 – контроль.


Рисунок 4 – Исследование противовирусной активности извлечений лимонника
по лечебной схеме

измеренной при 540 и 620 нм (DА), от области низких разведений. Водный экс-
степени разведения вируса в лунках, об- тракт лимонника китайского достоверно
работанных извлечениями лимонника, и (р<0,05) увеличивает степень устойчиво-
в контрольных лунках при исследовании сти клеток только в области самых высо-
противовирусной активности по лечебной ких разведений вируса.
схеме.
Как видно, спиртовой и CO2 экстракты ВЫВОДЫ
достоверно (р<0,05) увеличивают степень
устойчивости клеток к действию вируса 1. СО2 и спиртовой экстракты семян
везикулярного стоматита по сравнению с лимонника китайского обладают противо-
контролем как в области высоких, так и в вирусной активностью in vitro по профи-

99
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

лактической и лечебной схеме. Противо- by high-performance liquid chromatography /


вирусная активность водного извлечения J. Hu [et al.] // Phcog Mag. – 2013. – Vol. 9, I.
выражена в значительно меньшей степени. 34. – P. 155–161.
2. Положительное действие экстрактов 4. Composition and biological activity
и извлечения из семян лимонника китай- of different extracts from Schisandra sphen-
ского выявлено в тесте восстановления anthera and Schisandra chinensis / C. Huyke
клетками МТТ, что указывает на клеточ- [et al.]  // Planta med. – 2007. – Vol. 73, I. 10.
ный механизм противовирусного эффекта, – P. 1116–1126.
выражающийся в усилении резистентно- 5. Lu, H. Antioxidant activity of diben-
сти клеток к цитопатическому действию zocyclooctene lignans isolated from Schisan-
вируса. draceae / H. Lu, G. T. Liu // Planta Medica.
3. Несмотря на то, что содержание – 1992. – Vol. 58. – P. 311–313.
схизандрина – одного из маркерных сое- 6. Effect of gomisin A (TJN-101) on ara-
динений, по которому оценивают качества chidonic acid cascade in macrophages. / Y.
сырья и экстрактов – было примерно оди- Ohkura [et al.] // Japanese Journal Pharma-
наково в экстрактах и водном извлечении, cology. – 1990. – Vol. 52. – P. 331–336.
противовирусный эффект водного извле- 7. Lignans with platelet activating factor
чения значительно ниже. antagonist activity from Schisandra chinensis
Работа поддержана грантом БРФФИ (Turcz.) Baill / K. Y. Jung [et al.] // Phyto-
№М13М-086. medicine. – 1997. – Vol. 4. – P. 229–231.
8. Белоносов, И. С. Влияние китай-
SUMMARY ского лимонника на фосфорный обмен  /
И. С. Белоносов // Тр. Хабар. мед. ин-т. –
V. М. Yorshyk 1957. – Вып. 15. – С. 84–91.
ANTIVIRAL ACTIVITY OF SCHISANDRA 9. Composition and biological activity
CHINENSIS EXTRACTS of different extracts from Schisandra sphen-
The conditions of assessing of bovine anthera and Schisandra chinensis / С. Huyke
kidney cells viability using the MTT-test are [et al.] // Planta Med. – 2007. – Vol. 73, I. 10.
optimized. There is investigated the antiviral – P. 1116–1126.
activity of extracts and the aqueous recovery 10. Ершик, В. М. Валидация методики
of Schisandra chinensis seeds. It is found that количественного определения схизандри-
CO2 and the alcohol extracts of Schisandra на в извлечениях лимонника китайского /
chinensis seeds have antiviral activity in vi- В. М. Ершик, В. И. Фадеев, А. Д. Пету-
tro for prophylactic and therapeutic scheme. хова // Бюлл. Брянского отделения РБО,
Antiviral activity of aqueous recovery is ex- физиология и биохимия растений. – 2014.
pressed in the much lesser extent. – № 2. – С. 64–68.
Keywords: Schisandra chinensis, MTT, 11. Niks, M. Towards an optimized MTT
antiviral activity. assay / M. Niks, M. Otto // Journ. of Immun.
Methods. – 1990. – Vol. 130. – P. 149–151.
ЛИТЕРАТУРА 12. Оптимизация критических пара-
метров МТТ-теста для оценки клеточной
1. Кротова, И. В. Исследование хи- и лекарственной цитотоксичности. / В.С.
мического состава плодов лимонника ки- Черепович [и др.] // Белорусский меди-
тайского / И. В. Кротова, А. А. Ефремов // цинский журнал. – 2006. – Т. 16, № 2. –
Химия растительного сырья. – 1999. – №. С. 106 –108.
4. – С. 131–133. Адрес для корреспонденции:
2. Validation of a method for the simul-
taneous determination of four Schisandra 210023, Республика Беларусь,
lignans in the raw herb and commercial dried г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
aqueous extracts of Schisandra chinensis УО «Витебский государственный
(Wu Wei Zi) by RP-LC with DAD / C.W. ордена Дружбы народов
Halstead [et al.] // Journal of Pharmaceutical медицинский университет»,
кафедра токсикологической и
and Biomedical Analysis. – 2007. – Vol. 45. – аналитической химии,
P. 30–37. тел. раб.: 8 (0212) 25-42-13,
3. Simultaneous determination of eleven Ёршик В. М.
characteristic lignans in Schisandra chinensis Поступила 09.01.2015 г.

100
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

Я. А. Бутко1, С. М. Дроговоз1, Г. И. Губина-Вакулик2, Т. В. Горбач2

ДИНАМИКА УРОВНЯ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ ПРИ


ОЖОГОВОЙ ТРАВМЕ У КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ КЕРАМИДОВ И ИХ
КОМБИНАЦИИ С ДЕКСПАНТЕНОЛОМ

Национальный фармацевтический университет,


1
2
Харьковский национальный медицинский университет, г. Харьков, Украина

Проведено изучения влияния кремов с керамидами и их комбинации с декспан-


тенолом на динамику уровня провоспалительных цитокинов (IL и TNF) при ожо-
говой травме у крыс. Установлено, что ожоговая травма у крыс сопровождается
значительным повышением провоспалительных цитокинов, высокий уровень кото-
рых в течение всего периода наблюдений задерживает ее заживление. Результаты
исследования показали, что применение кремов с керамидами и их комбинации с дек-
спантенолом на протяжении всего периода наблюдения способствовало заживле-
нию ожоговых ран и достоверному снижению уровня изучаемых провоспалительных
цитокинов и по отношению к контрольной патологии и лекарственному средству
сравнения, что подтверждает выраженную эффективность местного лечения ожо-
говых ран. Следует отметить, что использование исследуемых средств с различным
механизмом ранозаживляющего действия вызывает однотипные изменения цито-
кинового профиля в крови и очага ожоговой раны. Перспективным является даль-
нейшее исследование данных кремов с целью изучения их механизмов влияния на про-
цессы репарации.
Ключевые слова: крем, керамиды, декспантенол, ожоговая травма, цитокины.

ВВЕДЕНИЕ повышает образование белков острой фазы


воспаления (С-реактивного белка, гапто-
Ожоговая травма является одним из глобина и др.) [6]. IL-1α – это конститу-
самых распространенных травматических тивный эпидермальный цитокин, который
повреждений в мире [1, 2]. При ожогах в производится кератиноцитами эпидермиса
первую очередь повреждается кожный по- нормальной кожи. Нарушение целостно-
кров, и именно его повреждение считают сти поверхности кожи немедленно увели-
главным в развитии ожоговой болезни. Ди- чивает продукцию IL-1α и подтверждает
намические процессы, которые возникают факт наличия массивного разрушения ке-
в ответ на термическое повреждение, соче- ратиноцитов [7]. Следует отметить, что IL
тают в себе стрессовую реакцию системы и TNF играют ключевую роль в миграции
крови с активацией симпатоадреналовой и активации раневых фибробластов, про-
системы, развитие неспецифической вос- дуцирующих субстанции (протеогликаны,
палительной реакции с переходом в струк- эластин, коллаген, энзимы), необходимые
турно-метаболические нарушения орга- для заживления ран.
нов, тканей и систем [3, 4]. В реализации В настоящее время в терапии повреж-
воспаления важное место занимают мо- дений кожи актуальными являются мето-
лекулы межклеточной сигнализации – ци- ды, направленные на замещение кожного
токины, в частности, провоспалительные дефекта новообразованным эпидермисом,
интерлейкины IL-1, IL-6, IL-8, и фактор в основе которых лежит стимуляция про-
некроза опухоли TNFα, которые продуци- лиферации эпидермиса, что дает лучшие
руются в ответ на повреждение тканей и косметические результаты. В связи с этим
стимулируют развитие местной воспали- новые перспективы открывают раноза-
тельной реакции, направленной на зажив- живляющие лекарственные средства (ЛС),
ление ожоговой травмы [5]. TNFα – это которые созданы с учетом биологического
полипептидный цитокин, который иници- ресурса кожи и содержат пластический ма-
ируется при патологических процессах, териал для реконструкции эпидермиса (на-
обладает возможностью активировать пример, керамиды).
апоптоз, вызывает активацию в клеточной Керамиды содержат концентрирован-
мембране активных форм кислорода и NO, ные и высокоочищенные гликокерамиды,
101
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

аналогичные керамидам кожи человека, тром 2,5 см. Время экспозиции нагретой
являются продуктами природного проис- до 2000С контактной пластинки составило
хождения. Благодаря специфическому био- 10 сек. [10]. Этот метод позволил получить
логическому действию в верхних слоях стандартные ожоги по площади и глубине
эпидермиса они действуют как гликокера- поражения кожи, отвечающие IIIА степени
миды – усиливают, удерживают и восста- клинической классификации ожогов.
навливают поврежденные или ослабленные Экспериментальные животные были
бислои липидов и эндогенных керамидов разделены на 5 групп: І – интактный кон-
(расположенных между корнеоцитами), а троль (ИК) (n = 6), ІІ – контрольная патоло-
также усиливают очень чувствительные к гия, животные с ожоговыми ранами, кото-
внешним факторам липидные ламелляр- рых не лечили (КП) (n = 24), ІІІ – опытная
ные системы межклеточного пространства группа, животные с ожоговыми ранами,
и улучшают терминальную дифференциа- которых лечили кремом «Керамиды» (n =
цию эпидермиса [8]. Керамиды восполняют 18), ІV – группа, которую лечили кремом
дефицит природных керамидов, заполняют «Декспантенол с керамидами» (n = 18). В
пространство между мертвыми клетками V группе животных лечили ЛС сравнения
рогового слоя эпидермиса, скрепляют их, – кремом «Бепантен» («Bayer», Германия)
восстанавливают целостность кожного по- (n = 18), который был выбран как аналог
крова, поддерживают баланс влажности, по лекарственной форме, частично по со-
повышают эластичность и упругость кожи, ставу действующих компонентов, фарма-
способствуют восстановлению барьерной кологическому действию и показанию к
функции кожи и повышению её устойчиво- применению. Лечение ожоговых ран на-
сти к токсинам [9]. чинали на следующий день после их мо-
Для повышения эффективности мест- делирования и до полного заживления, ЛС
ного лечения ран под руководством проф. наносили 1 раз в день в эмпирической дозе
Н. А. Ляпунова были разработаны кре- 15 мг/см2 [10].
мы с керамидами и их комбинации с дек- Клинические наблюдения за процес-
спантенолом, которые проявляют широ- сом заживления ожоговых ран у живот-
кий спектр фармакологического действия ных проводили каждый день. В эти сроки
(за счет действующих компонентов об- оценивали состояние раны, площади ожо-
ладают репаративным, метаболическим, говой раны (S) и регистрировали сроки
противовоспалитель­ным, антиоксидант- полного заживления ожогов. Для количе-
ным действием, восполняют дефицит эн- ственного определения в периферической
догенных керамидов эпидермиса, повы- крови провоспалительных цитокинов IL-
шают эластичность и барьерные функции 1α и TNF-α использовали метод иммуно-
кожи) для применения во ІІ-ІІІ фазах ране- ферментного ана­лиза с помощью наборов
вого процесса. тест-систем фирмы «Bender Medsystems»
Целью данной работы было изучение (США) и иммуноферментного анализато-
динамики уровня провоспали­тельных ци- ра «Libline-90» (Австрия). Изучение уров-
токинов в крови и в коже эксперименталь- ня цитокинов проводили на 2-й день после
ных животных с ожоговой травмой ІІІ сте- моделирования ожогов, а также на 9-й и
пени под влиянием керамидов и их комби- 18-й день лечения ран, что соответствует
нации с декспантенолом. срокам течения всех фаз раневого процес-
са (гнойно-воспалительная фаза, фаза гра-
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ нуляции, фаза эпителизации).
Для дальнейшего иммуногистохими-
Эксперименты на модели ожоговой ческого исследования ожоговой раны был
травмы проводили на 84 белых беспород- выбран цитокин IL-1α, который непосред-
ных крысах массой 200-240 г. Животным ственно принимает участие в процессах
под тиопенталовым наркозом на депили- формирования и функционирования кожи.
рованном участке кожи спины, отступив от Исследования клеток-продуцентов IL-1α
позвоночника 1,5 см, моделировали ожог. проводили на 9-й день лечения ожогов
Для этого использовали прибор с установ- (фаза грануляции) с помощью иммуно-
ленной температурной шкалой и электро- гистофлуоресцентной реакции по методу
паяльником, на конце которого крепится Brozman на парафиновых срезах кожи [11].
круглая металлическая пластина диаме- Иммунные клетки дифференцировали с
102
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

помощью моноклональных антител к IL- были неактивными и имели плохой ап-


1α. Исследовали микропрепараты на лю- петит. Следует отметить, что на протяже-
минесцентном микроскопе «Axioscop-40» нии всего эксперимента гибели животных
(Zeiss, ФРН). Фотографировали участки вследствие развития ожоговой болезни,
микропрепаратов с использованием циф- как в экспериментальных, так и в группе
ровой фотокамеры «Pixera». Количествен- контрольной патологии не наблюдали.
но оценивали наличие клеток-продуцентов Исходная площадь ожоговых ран у жи-
IL-1α с помощью программы Photoshop-7 вотных в разных группах была размером
и специальной программы для морфоме- от 574,8 ± 36,49 мм2 до 731,5 ± 47,37 мм2.
трии «Видеотест» (Санкт-Петербург). Развитие ожогов у крыс на 2-й день экс-
Все вмешательства и эвтаназию живот- перимента сопровождалось значительным
ных осуществляли с соблюдением прин- повышением содержания цитокинов по
ципов «Европейской конвенции о защите сравнению с интактным контролем: IL-1α
позвоночных животных, которые исполь- в 32 раза (рисунок 1), TNFα в 15 раз (рису-
зуются для экспериментальных и научных нок 2), что свидетельствует об активации
целей» (Страсбург, 1986) и рекомендаций иммунного ответа и каскада последующих
І-го Национального конгресса по биоэтике реакций: гиперактивации фагоцитирую-
(Киев, 2001). Полученные результаты об- щих клеток, вовлечении эпителиальных и
рабатывали по программе Statistica 6.0 на эндотелиальных клеток, связанных с де-
основе однофакторного дисперсионного струкцией тканей.
анализа с использованием критериев Кру- Дальнейшее наблюдение за динамикой
скала-Уолиса, Ньюмена-Кейлса при уров- заживления показало, что в группе кон-
не значимости р < 0,05. трольной патологии на 9-й день площадь
ожогов уменьшалась на 53,5% по сравнению
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ с исходной площадью, и в течение несколь-
ких дней произошло отслоение струпа. В
Воспроизведение ожоговой травмы на дальнейшем процесс заживления ускорялся:
коже у крыс сопровождалось образовани- к 18-у дню площадь ожогов уменьшалась на
ем плотного струпа темно-бурого цвета с 89,5%, а полное заживление происходило на
четко ограниченной зоной некроза и вос- 25-й день эксперимента. Изучение уровня
палением окружающих тканей. В первые провоспалительных цитокинов в динами-
дни после ожоговой травмы животные ке показало, что на 9-й день эксперимента
нг/мл

80 71,23*
70
60 46,88*/@
50 30,11*/@/#
40 19,33*/@/#/$

30 13,88*/@/#/$ */@
13,25
20 12,83*/@ */@/#/$
4,93
10 2,22 2,09@/#/$

0
Интакт 2-й день 9-й день 18-й день
Контрольная патология Бепантен Керамиды Декспантенол с керамидами
Примечание: * – показатели достоверны по отношению к группе интактного контроля; @ – по от-
ношению к пику патологии (2-й день эксперимента); # – по отношению к группе контрольной
патологии; $ – по отношению к препарату сравнения, р < 0,05.

Рисунок 1 – Динамика уровня цитокина IL-1a в крови животных с ожоговой травмой


под влиянием керамидов и их комбинации с декспантенолом
103
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

*
250 236,51

пкг/мл
200
147,14*/@
150 108,25*/@/#
98,4*/@/#
100 71,0*/@/#

28,17*/@
19,18@/# @/#
50 17,34
16,23
10,51@/#/$

0
Интакт 2-й день 9-й день 18-й день
Контрольная патология Бепантен Керамиды Декспантенол с керамидами

Примечание: * – показатели достоверны по отношению к группе интактного контроля; @ – по от-


ношению к пику патологии (2-й день эксперимента); # – по отношению к группе контрольной
патологии; $ – по отношению к препарату сравнения, р < 0,05.

Рисунок 2 – Динамика уровня цитокина TNFa в крови животных с ожоговой травмой


под влиянием керамидов и их комбинации с декспантенолом

наблюдалось снижение IL-1α и TNFα в 1,6 уменьшался под влиянием кремов «Дек-
раза, а на 18-й день уровень IL-1α снижался спантенол с керамидами» и «Керамидами»
в 5,4 раза, а TNFα – в 8,4 раза по отношению на 9-й день – в 3,3 раза и 2,4 раза, на 18-й – в
к пику патологии (на 2-й день эксперимен- 22,5 раза и 13,6 раза соответственно, а под
та). Несмотря на значительное снижение действием крема «Бепантен» – на 9-й день
уровня цитокинов в крови, их показатели – в 2,2 раза, на 18-й – в 12,3 раза по отноше-
достоверно превышали уровень показателей нию к пику патологии.
животных интактного контроля. Следующим этапом работы было про-
При лечении ожоговых ран динамика ведение иммуногистохимического иссле-
заживления имела следующую тенденцию: дования провоспалительных цитокинов
на 9-й день при лечении кремом «Декспан- в очаге термического воспаления. Оце-
тенол с керамидами» площадь ран по от- нивали содержание клеток-продуцентов
ношению к исходным данным уменьша- IL-1α, которые характеризуют активность
лась на 72,9%, кремом «Керамиды» – на формирования воспалитель­ной реакции,
63,2%, а кремом «Бепантен» – на 65%, на необходимой для утилизации некроти-
18-й день – на 99,8%, 98,7% и 98,5%, со- ческих масс в очаге повреждения. При
ответственно. Полное заживление ран при оценке иммуногистохимической реак-
лечении кремом «Декспантенол с керами- ции на интерлейкин установлено, что
дами» происходило на 19-й день, что на 6 на 9-й день наблюдения после термиче-
дней раньше, чем в группе контрольной ского повреждения кожи у животных,
патологии, а при лечении кремами «Кера- которых не лечили, в глубине раны, на
миды» и «Бепантен» – на 21-й день экспе- уровне образующихся грануляций, IL-
римента, что на 4 дня раньше, чем в группе 1α-экспрессирующие клетки встречались
контрольной патологии. относительно редко – только в пределах
Изучение содержания провоспалитель- просвета и стенок сосудов (рисунок 3 а,
ных цитокинов показало, что под действи- см. обложку журнала). В глубине грануля-
ем кремов «Декспантенол с керамидами» и ционной ткани единичные IL-1α-клетки-
«Керамиды» уровень цитокина IL-1α на 9-й продуценты оказывались и вне сосудов, и
день уменьшался в 5 раз и 3,7 раза, на 18-й на периферии раны. Однако под сохранен-
– в 34 раза и 14,5 раза соответственно, а при ным эпидермисом можно было увидеть
лечении кремом «Бепантен» на 9-й день – в более многочисленные группы таких кле-
2,4 раза, а на 18-й – в 5,6 раза по отношению ток (рисунок 3 б, см. обложку журнала).
к пику патологии. Уровень цитокина TNFα Относительное количество клеток-про-
104
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

дуцентов интерлейкина в коже у крыс со- 1,2 и 1,1 раза, чем в группе контрольной
ставляло 0,406±0,006 у.е. (таблица). патологии и в группе леченных препара-
Обработка ожоговой раны кремом том сравнения (таблица). Эти клетки вы-
«Керамиды» обеспечивает более вы- являлись как в просвете тонкостенных со-
раженную васкуляризацию грануляци- судов грануляционной ткани, так и вне со-
онной ткани. Общее количество IL-1α- судов, в более глубоких слоях периферии
экспрессирующих клеток было больше в раны (рисунок 3 в, см. обложку журнала).

Таблица – Относительное количество клеток-продуцентов IL-1 α в коже с термическим


ожогом у крыс при лечении исследуемыми средствами в поле зрения х 400
(в перерасчете на 100 клеток)
Группы эксперимента На 9-й день лечения
Контрольная патология 0,406 ± 0,006
Крем «Керамиды» 0,478 ± 0,010*/**
Крем «Декспантенол с керамидами» 0,783 ± 0,008*/**
Крем «Бепантен» 0,449 ± 0,004*
Примечание: * – отклонения достоверны по отношению к группе контрольной патологии; ** – по отно-
шению к препарату сравнения, р < 0,05.

Лечение ожоговой раны кремом «Декса- и их комбинации с декспантенолом способ-


пантенол с керамидами» также способство- ствовало достоверному снижению уровня
вало повышению образования и миграции изучаемых провоспалительных цитокинов
IL-1α-экспрессирующих клеток, но преиму- и по отношению к контрольной патологии,
щественно на периферии раны, т.е. в пери- и при использовании ЛС сравнения, что
фокальном воспалительном инфильтрате, а подтверждает выраженную эффективность
не в грануляционной ткани. Измерение ин- местного лечения ожоговых ран. Следует
тенсивности свечения клеток-продуцентов отметить, что использование исследуемых
IL-1α показало резкое увеличение свечения, препаратов с различным механизмом ра-
а, следовательно, и активности интерлейки- нозаживляющего действия вызывает одно-
на IL-1α (рисунок 3 г, д, см. обложку журна- типные изменения цитокинового профиля
ла). Уровень свечения клеток-продуцентов в крови и в очаге ожоговой раны. По сте-
при использовании крема «Декспантенол с пени выраженности нормализации уровня
керамидами» был в 1,9 раза выше, чем у не- провоспалительных цитокинов у крыс пре-
леченных животных, и в среднем в 1,7 раза параты можно расположить в следующей
выше по сравнению с кремом «Бепантен» и последовательности: крем «Декспантенол
кремом «Керамиды» (таблица). с керамидами» > крем «Керамиды» > крем
При использовании крема «Бепантен» «Бепантен».
для лечения термического ожога у крыс ко-
личество IL-1α-экспрессирующих клеток ЗАКЛЮЧЕНИЕ
в капиллярах грануляционной ткани мало
отличалось (в 1,1 раза) от их количества у 1. Развитие раневого процесса у крыс
животных из группы контрольной патоло- с ожогами ІІІА степени сопровождается
гии (таблица). Немногочисленные клетки- многократным повышением уровня про-
продуценты IL-1α занимали пристеночное воспалительных цитокинов в крови (IL-1α
положение в тонкостенных сосудах грануля- и TNFα) и в ткани (IL-1α). В ходе спонтан-
ционной ткани. Только глубоко в ране обна- ного заживления через 18 дней их уровень
руживалось большее количество этих клеток снижается, однако не достигает интактных
как в сосудах, так и вне их (рисунок 3 е, см. значений, что свидетельствует о тяжести
обложку журнала). характера ожоговой травмы и увеличивает
Таким образом, проведенные исследо- сроки заживления.
вания показали, что ожоговая травма у крыс 2. Лечение ожоговых ран кремами «Ке-
сопровождается значительным повышени- рамиды» и «Декспантенол с керамидами»
ем провоспалительных цитокинов в крови и способствует положительной динамике
в ране, высокий уровень которых в течение уровня цитокинов (IL-1α и TNFα), восста-
всего периода наблюдений задерживает ее новлению их интактных значений, ускоря-
заживление. Применение ЛС с керамидами ет и сокращает сроки заживления на 4–6
105
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

дней. Полученные результаты свидетель- 2. Фисталь, Э.Я. Комбустиология /


ствуют о важной роли провоспалительных Э.Я. Фисталь, Г.П. Козинец, Г.Е. Самой-
цитокинов при заживлении ожоговых ран ленко. – Донецк. 2006.– 236 с.
и эффективности местного лечения. По 3. Козинец, Г. П. Ожоговая интоксика-
выраженности ранозаживляющего дей- ция. Патогенез, клиника, принципы лече-
ствия исследуемые препараты превышают ния / Г. П. Козинец, С. В. Слесаренко, Б.С.
эффективность препарата сравнения. Шейман. – Киев.: Фенікс. – 2004. – 272 с.
3. Перспективным является дальнейшее 4. Velnar, T. The wound healing process:
доклиническое изучение спектра фармако- an overview of the cellular and molecular
логического действия керамидов и их ком- mechanisms / T. Velnar, T. Bailey, V. Smrkolj
бинаций с декспантенолом с целью повыше- // J. Int. Med. Res. – 2009. – Vol. 37, N 5. – Р.
ния эффективности местного лечения ожо- 1528–1542.
говых ран на ІІ-ІІІ фазах раневого процесса. 5. Динамика изменения активности
цитокинов и функций нейтрофилов в кро-
SUMMARY ви крыс после термического ожога кожи /
В. И. Коненков [и др.] // Цитокины и вос-
Ya. A. Butko, S. M. Drogovoz, паление. – 2007. – № 3. – С. 57–62.
G. I. Gubina-Vakulik, T. V. Gorbach 6. Кетлинский, С. А. Цитокины /
DYNAMICS OF PRO-INFLAMMATORY С. А. Кетлинский, А. С. Симбирцев – СПб.:
CYTOKINES LEVEL IN BURN INJURY ООО Изд-во «Фолиант», 2008. – 552 с.
IN RATS UNDER THE INFLUENCE 7. Use of gene-modified keratinocytes
OF CERAMIDES AND THEIR and fibroblasts to enhance regeneration in
COMBINATION WITH DEXPANTHENOL a full skin defect / J. A. Lohmeyer [et al.] //
The influence of creams with ceramides Langenbecks Arch Surg. – 2011. – Vol. 2,
and their combination with dexpanthenol on N 3. – P. 76–79.
the dynamics of pro-inflammatory cytokines 8. Thermal dependence of Raman de-
level (IL and TNF) was studied on the model scriptors of ceramides. Part II: effect of chains
of burn injury in rats. It was found, that burn lengths and head group structures / E. Guil-
injury in rats is accompanied by significant in- lard [et al.] // Anal Bioanal Chem. – 2010. –
crease in pro-inflammatory cytokines, which Vol. 3, N 399. – Р. 1201–1214.
high level throughout the whole period of ob- 9. Ceramides stimulate caspase-14 ex-
servation delays the healing of wound. Study pression in human keratinocytes / Y. J. Jiang
results have shown that application of prepa- [et al.] // Exp. Dermatol. – 2013. – Vol. 2,
rations with ceramides and their combination N 22. – Р. 113–118.
with dexpanthenol during the whole period of 10. Експериментальне вивчення нових
observation promoted burn wounds healing, препаратів для місцевого лікування ран:
and significantly decreased the level of pro-in- метод.рекомендації ДЕЦ МОЗ України /
flammatory cytokines, compared to the control Л. В. Яковлєва [та iнш.] – Х.: Вид-но НФаУ,
pathology and reference-drug, which confirms 2013. – 52 с.
expressed efficiency of burn wounds local 11. Патент на корисну модель №46489.
treatment. It should be noted that application Спосіб кількісного визначення вмісту ан-
of investigational preparations with various тигену в біологічних тканинах / Г. І. Губіна-
mechanisms of wound healing action causes Вакулик, І. В. Сорокіна, В. Д. Марковсь-
similar changes in cytokine profile in blood and кий, О. В. Кихтенко, Л. С. Купріянова, Р.
burn wound lesion. Therefore, further study of В. Сидоренко // Опубл. 25.12.2009, Бюл. №
these creams is promising in order to examine 4. – 4 с.
their mechanism of action on repair processes. Адрес для корреспонденции:
Keywords: cream, ceramides, dexpanthe-
nol, burn injury, cytokines. 61002, Украина,
г. Харьков, ул. Мельникова, 12,
ЛИТЕРАТУРА Национальный фармацевтический
университет,
1. Ткачева, О. В. Ожоги кожных по- кафедра фармакологии,
кровов: классификация и методы лечения тел. (8057)706-30-69,
е-mail: yaroslavabutko79@mail.ru,
/ О. В. Ткачева, Я. А Бутко // Провизор. – Бутко Я.А.
2008. – № 2. – С. 23–28. Поступила 21.11.2014 г.
106
Вестник фармации №1 (67) 2015 Научные публикации

ОБЗОРЫ
Н. И. Михайлова, Г. А. Хуткина

МАРКЕТИНГ ПЕРСОНАЛА: ИСТОРИЧЕСКОЕ РАЗВИТИЕ


И СОДЕРЖАНИЕ ПОНЯТИЯ

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

В статье представлен анализ литературных данных, трактующих возникно-


вение и развитие понятия «маркетинг персонала». Приводятся этапы зарождения,
подходы к интерпретации данного термина, характеристика элементов маркетин-
га персонала, его видов. В работе также отражены основная роль, функции, главные
цели и задачи, направления деятельности маркетинга персонала. По результатам
исследования определены приоритетные компоненты программы маркетинга пер-
сонала аптечной организации.
Ключевые слова: персонал, маркетинг, управление, кадры, ресурсы, потребность.

ВВЕДЕНИЕ управления коллективом людей, что позво-


лит обосновать подход к разработке про-
Эффективное управление кадровы- граммы маркетинга персонала в аптечной
ми ресурсами любой организации имеет организации.
большое значение. В динамично разви-
вающейся и сложной среде фармацевти- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ческого рынка квалифицированный пер-
сонал является основным конкурентным С использованием методов рефери-
преимуществом аптеки, повышающим ее рования, группировки, сопоставления и
рыночную устойчивость. Для достиже- обобщения данных проанализированы от-
ния наилучших результатов деятельности ечественные и зарубежные литературные
необходима эффективная политика в об- источники, трактующие понятие «марке-
ласти управления персоналом, стимули- тинг персонала», его виды, цели, задачи и
рующая участников трудового процесса. компоненты, с 1968 по 2013 год.
Ведь именно «человеческие ресурсы» яв-
ляются основным резервом, необходимым РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
для усовершенствования работы организа-
ции [1, 2]. В современной литературе для Специализация человеческой деятель-
определения деятельности по управлению ности в области управления персоналом
персоналом используется различная тер- началась с 1900-го года. Ранее функции
минология. Встречаются такие близкие по управления персоналом были прерогати-
значению термины, как «управление тру- вой руководителя, которы