1

Тема 5. Мембранный транспорт

Основные понятия
Мембранным транспортом называют любой переход атомов, ионов, молекул
веществ через ḿ из среды в # или в обратном направлении независимо от путей, сил и
механизмов переноса.
Проницаемость ḿ – это способность ḿ пропускать через себя атомы, ионы,
молекулы веществ, – понятие динамическое, определяемое количеством их молей,
проникающих через единицу поверхности в единицу t (= коэффициент проницаемости).
Проницаемые ḿ – одинаково хорошо пропускают ионы, молекулы в-в в обоих
направлениях.
Полупроницаемые ḿ – одни вещества проходят в прямом и обратном
направлении, а другие вещества вообще не проходят.
Избирательно-проницаемые (селективные) ḿ –избирательно пропускают одни
соединения и не пропускают близкие им по структуре вещества. Селективность обычно
бывает относительной и выражается коэффициентом селективности: отношением
коэффициентов проницаемости для двух ионов, соединений.
В зависимости от характера связи транспорта данного иона металла или молекулы
конкретного вещества от переноса других ионов или молекул веществ выделяют:
унипорт – транспорт ионов
или молекул через ḿ независимо от
транспорта других соединений;
котранспорт –
взаимозависимый транспорт ионов
или молекул веществ через ḿ. К
котранспорту относят:
симпорт – одновременный и однонаправленный перенос ионов или молекул двух
различных веществ;
антипорт – одновременный транспорт ионов или молекул вещества через ḿ в
противоположных направлениях.
1 – транспортируемая молекула; 2 –
котранспортируемая молекула; 3 –
бислой; 4 – молекула-переносчик; 5
– антипорт; 6 – симпорт; 7 –
контранспорт; 8 – унипорт.
 2
Схема пассивного транспорта по
электрохимическому градиенту и активного
транспорта против электрохимического
градиента:
1 - транспортируемая молекула; 2 -
каналообразующий белок; 3 - белок-переносчик
(пермеаза); 4 - электрохимический градиент; 5 -
энергия; 6 - активный транспорт; 7 - пассивный
транспорт (облегченная диффузия); 8 -
диффузия, опосредуемая белком-переносчиком;
9 - диффузия через канал; 10- простая диффузия;
11 - липидный бислой
Биоḿḿ являются высокоспециализированными транспортными ©,
обеспечивающими избирательную проницаемость веществ преимущественно в одном
направлении. Транспорт веществ осуществляют специальные мембранные структуры:
каналы, переносчики, насосы.
Каналы – образования белковой природы (чаще всего крупные молекулы белка),
имеющие центральную полость для прохождения преимущественно ионов одного вида
(Na+, K+, Са2+, Н+) и механизмов, обеспечивающих их открытие и закрытие.
Переносчики (=пермеазы) – молекулы веществ, осуществляющие транспорт ионов
или молекул в результате временного взаимодействия их с веществом.
Насосы – мембранные АТФазы, специализирующиеся на противоградиентном
переносе ионов Na+, K+, Са2+, Н+ за счет Е гидролиза АТФ.
Классификация ḿ-го транспорта по способам использования Е

пассивный транспорт – перенос вещества идет самопроизвольно по

электрохимическому градиенту с уменьшением свободной энергии © (#);
активный транспорт подразумевает перенос веществ, как правило, против
электрохимического градиента с участием АТФаз с затратой энергии гидролиза АТФ
непосредственно в акте переноса (это первично-активный транспорт);
вторично-активный транспорт – это перенос соединений за счет
 3
предварительно созданных градиентов, за счет первично-активного транспорта.
Вторично-активный транспорт обеспечивает котранспорт глюкозы (сахаров),
аминокислот за счет создания градиента Na+ на ḿ и его уменьшения во время транспорта
веществ. У низших эукариот для этой цели используются градиенты протонов, ионов
натрия. Для транспорта одной и той же аминокислоты могут использоваться три-четыре
разных переносчика.
Активный транспорт также подразделяют на транспорт с изменением
архитектуры мембраны (фагоцитоз, пиноцитоз) и без изменения (все остальные виды
активного транспорта).
Пути переноса веществ через биоḿḿ разнообразны для различных
транспортируемых молекул и ионов. Однако переносимые соединения и ионы можно
объединить в родственные группы по определенным характеристикам: молекулярной
массе, электрическому заряду, количеству полярных групп или наличию ярко
выраженной гидрофобности и т.д. Ионы, молекулы веществ могут проникать через ḿ по
всей ее поверхности, через кинки в структуре липидного бирядного слоя, через каналы,
«насосы», с помощью пермеаз. Крупные молекулы белков, ДНК, РНК, их комплексы
могут проникать путем структурной перестройки биоḿ в виде фагоцитозных пузырьков.
Преобладающие пути проникновения для нейтральных молекул газов будут одни, для
воды - другие, для ионов - третьи.
Движущие силы ḿ-го транспорта
Жирорастворимые вещества. По всей поверхности ḿ проникают вещества,
хорошо растворяющиеся в липидах. С $ полярности молекул в гомологическом ряду
класса веществ их проницаемость . Было выявлено, что наркотическое действие
некоторых веществ пропорционально их растворимости в липидах.
Молекулы диссоциирующих веществ (кислот, солей, оснований) в нераспавшемся
состоянии могут транспортироваться через вещество ḿ, а ионы ̶ через каналы,
водосодержащие участки по электрохимическому градиенту. Известно, что $ степени
диссоциации молекул приводит в большинстве случаев к  их проницаемости через ḿ.
Движущими силами пассивного переноса веществ через ḿ служат градиенты:
1) концентрационный – для нейтральных молекул;
2) электрохимический – для ионов. Как правило, внутренняя
цитоплазматическая поверхность плазмалеммы несет отрицательный заряд, что
облегчает проникновение в # положительно заряженных ионов;
3) осмотический и градиент гидростатического давления – для воды;
4) градиент парциальных давлений – для газов.
Во всех перечисленных случаях движение нейтральных молекул и ионов идет по
градиенту, «под гору», в соответствии со вторым началом термодинамики с  величины
энтропии, $ локальной свободной энергии.
 4
Изменение свободной энергии ΔG системы равно:
c2 c2
ΔG=RT ln =2,3 RT lg
c1 c1 ,
где R - универсальная газовая постоянная; Т –
абсолютная температура; c1 и с2 – концентрации веществ
по обе стороны мембраны.
Если транспортируется заряженная частица, то
изменение свободной энергии переноса вычисляют по
формуле:
c2
ΔG=2,3 RT lg +zF Δϕ
c1 ,
c2
2,3 RT lg
где c1 определяет изменение
концентрационного градиента, a zF Δϕ –
электрического градиента; z – заряд иона, F – число
Фарадея, Δϕ – трансмембранная разность
электрических потенциалов.
Если изменения локальной свободной энергии имеют отрицательную величину,
т. е. процесс идет «под гору» с $ концентрационного и электрического градиентов, то это
означает, что транспорт веществ совершается пассивно. Если же величина ΔG имеет
положительное значение, т.е. локальная свободная Е , то это служит признаком
активного транспорта.
Диффузия
Диффузия (лат. diffusio - распространение, растекание) - это переход ионов или
молекул, вызванный их броуновским движением через ḿ из зоны, где эти вещества
находятся в более высокой концентрации, в зону с более низкой концентрацией до тех
пор, пока концентрации по обе стороны ḿ выравняются.
Рассмотрим два объема, заполненные
жидкостью или газом, в которых вещества
имеют концентрации с1 и с2 и разделены слоем с
площадью поверхности А и толщиной d. Поток
вещества m за время t описывается первым
законом диффузии Фика.
dm A A
=D ( c1 −c 2 )=D Δc
dt d d
где D - коэффициент диффузии, постоянный для данного вещества, растворителя и t°. В
более общем виде для разности концентраций dc на расстоянии dx
dm dc
=−DA
dt dx
поток через сечение А пропорционален градиенту концентрации dc/dx. Знак «минус»
возникает в уравнении потому, что изменение концентрации по направлению х-
отрицательно.
 5
Для неэлектролитов уравнение диффузии
обычно преобразуют, соединяя характеристки ḿ
и диффундирующего вещества в один параметр
– проницаемость (Р):
dm
=PA⋅Δc
dt
Вода. Молекула воды проникает через
водосодержащие участки ḿ: каналы, кинки,
заполненные водой поры, дефекты в
жидкокристаллической структуре ḿ, через
каналы эндоплазматической сети,
открывающиеся на поверхности # при пино- и
фагоцитозе.
Проницаемость ḿ для воды определяется
аналогичным образом, только вместо разности
концентраций используют разность
осмотических давлений наружного раствора πе и
внутреннего содержимого клетки πi:
dm
=PA ( π e −π i )
dt
Диффузионное равновесие ионов. Диффузия незаряженных молекул
обеспечивается разностью концентраций dc, и, когда концентрации уравниваются,
собственно транспорт прекращается. На заряженные частицы дополнительно влияет
электрическое поле. Поток ионов прекращается, когда действие электрического поля
компенсирует диффузионное давление вследствие разности концентраций.
Следовательно, для данной разности концентраций ионов на ḿ существует равновесный
потенциал Eion, при котором поток ионов через мембрану прекращается. Равновесный
потенциал может быть легко определен с помощью уравнения Нернста
RT c e где ce – вне#ная концентрация иона, ci – внутри#ная концентрация иона, R
Eion = ln
zF c i – газовая постоянная, Т – абсолютная температура, z – валентность иона
(отрицательная для анионов), a F – число Фарадея.
Если подставить в уравнение константы, то при температуре тела (Т = 310К)
равновесный потенциал для ионов калия Ек равен:
+
[ K ]i
E K =−61 мВ⋅log +
[ K ]e
+
[ K ]i
=39
, то E K =−61 мВ⋅log 39=−61 мВ⋅1 ,59=−97 мВ
+
Если (как измерено для ##) [ K ]e
Действительно, было обнаружено, что все ## имеют ḿ-ный потенциал; в
мышечных ## млекопитающих его уровень составляет ~ – 90 мВ (в других от –40 до –120
мВ). Расхождение расчетных значений и измерений связано с тем, что ḿ-ный потенциал
определяется потоками и других ионов.
μRT
Проницаемость для заряженных частиц описывается уравнением: P= dF ,
где μ – подвижность иона в мембране, d – толщина мембраны. Определенные таким
 6
образом значения проницаемости для различных ионов могут быть использованы для
расчета ḿ-ного потенциала Еm, когда ионы калия, натрия и хлора проходят через ḿ
одновременно (с проницаемостью РK, PNa и РCl, соответственно). В этом случае
применяется уравнение Голдмана, или уравнение постоянного поля:
+ + −
RT P [ K ] + P Na [ Na ]e + P Cl [Cl ]i
Em = ⋅ln K + e
F + −
PK [ K ]i + P Na [ Na ]i + PCl [Cl ]e
Облегченная диффузия.
Облегченную диффузию в биомембранах осуществляют каналы и пермеазы.
Схема, показывающая как
конформационные изменения в
пермеазе могли обеспечить
облегченную диффузию
незаряженного расворенного вещества
А. Пермеаза может существовать в
двух различных конформациях, что
приводит к транспорту вещества А по
градиенту концентрации
Примером пермеазы может служить валиномицин, транспортирующий ион калия.
Валиномицин, выделенный в 1955 г. Г.Брокманом, в неполярных растворителях
легко связывается в устойчивые комплексы с ионами калия, рубидия, цезия, но почти не
образует комплексов с ионами натрия. Отношение селективности по калию по
сравнению с ионами натрия составляет 104 – 105 раз.
В неполярных средах конформация валиномицина сходна с браслетом с 6
внутримолекулярными связями, а в воде она переходит в открытую форму. Ион калия
проникает во внутреннюю полость антибиотика, почти точно соответствующую
негидратированному иону калия (r = 0,133 нм) и рубидия (r = 0,149 нм). Но эта полость
велика для иона натрия (r = 0,098 нм) и мала для иона цезия (r = 0,165нм).
Молекулярное окружение иона калия в валиномицине заменяет гидратную
оболочку за счет комплексообразования шести ион-дипольных взаимодействий иона с
переносчиком.
Внешняя сфера комплекса за счет молекулы валиномицина остается гидрофобной
и легко проницаемой для липидов ḿ. Валиномицин $ Е-кий барьер проницаемости
липидных слоев, он активен при концентрациях 10 –9 – 10–11 моль/л, которые не
изменяются в процессе переноса ионов. Валиномицин, проявляя биологическую
активность, служит высокоэффективным антимикробным средством.
Особый интерес исследователей привлекли антибиотики с незамкнутой
полиэфирной цепью – моненсин, нигерицин, кальцимицин и др. как переносчики ионов
кальция. Ион Са2+ удерживается за счет ион-дипольных взаимодействий между двумя
молекулами антибиотика («модель сандвича»).
В фармакологии, химической и медицинской технологии используют
синтетические молекулярные «ловушки» для ионов и полярных соединений, например,
полиэфиры или «краун-эфиры». Они избирательно взаимодействуют с ионами ряда
металлов и аминокислотами. Необходимо подчеркнуть, что ионофоры (пермеазы) до
настоящего времени достоверно не обнаружены в биологических мембранах.
 7
Многочисленные исследования ионной проводимости биологических мембран
неоспоримо доказали функционирование неподвижных переносчиков, осуществляющих
облегченную диффузию путем образования ионных каналов.
Впервые идею о функционировании мембранных каналов высказали в 40-50-х гг.
XX в. А.Ходжкин и Э.Хаксли для объяснения возникновения и распространения
нервного (электрического) импульса. Каналы должны обладать селективностью и
обратимо менять ионную проницаемость биологических ḿḿ в доли секунды. На роль
ионных каналов были выдвинуты белки-каналообразователи, что хорошо
согласовывалось с теорией и экспериментальными результатами.
Грамицидин – линейный пентадекапептид с чередующимися L- и D-
конфигурациями аминокислотных остатков. Две молекулы грамицидина образуют
двойную спираль с осевой полостью около 0,3 нм. За одну секунду по каналу может
проходить до 1010 ионов, что примерно в 105 раз превышает производительность
действия белков-переносчиков.
Белки-каналообразователи были обнаружены в биоḿḿ.
Ионные каналы биоḿḿ – это специализированные, селективные поры,
образованные белковыми молекулами, предназначенные для облегченной диффузии
определенных ионов (Na+, K+, Са2+, Cl–).
Для исследования структуры и функций ионных ḿ-ных каналов используют ряд
методов. Высокоинформативным оказалось использование селективных блокаторов
ионных каналов. Тетродотоксин, сакситоксин, батрахотоксин избирательно блокируют
натриевые каналы, тетраэтиламмоний ̶ калиевые каналы, изоптин, лантан – кальциевые
каналы. Метод измерения воротных токов (=флуктуации ионных токов=метод пэтч-
клямпа) позволил изучить f-ние одиночных каналов.
В возбудимых ḿḿ число ионных каналов на 1 мкм поверхности ḿ достигает
нескольких сотен. Пропускная способность одиночного натриевого канала составляет 10 7
ионов/с.
Модель ионного канала включает ряд функциональных образований. С внешней
стороны мембраны у входа в канал расположен селективный центр (центр узнавания),
в основе функционирования которого лежит принцип стерического соответствия. Его
назначение – не пропускать в канал или из канала ионы большего и меньшего размеров,
а со стороны цитоплазмы располагаются так называемые «ворота», которые управляются
транс-ḿ-ным электрическим полем при помощи конформационно-лабильного
электрического сенсора. По каналу ионы проходят по эстафетному принципу, друг за
другом. Ворота могут находиться в двух состояниях: «открыто»  «закрыто».
 8
А Схема белка, образующего калиевый канал,
погруженный в липидный бислой плазматической
ḿ. Четыре отрицательных заряда зафиксированы на
«стенке» канала. Б Схематический энергетический
профиль канала, показанного на рис. А. По оси
ординат отложены величины кинетической Е,
необходимые для прохождения канала; по оси
абсцисс расстояния между внутренней и наружной
поверхностями ḿ. Энергетические минимумы
соответствуют местам связывания положительно
заряженных ионов с фиксированными
отрицательными зарядами в стенке канала.
Энергетические максимумы соответствуют
препятствиям диффузии в канале. Предполагается,
что конформация канального белка спонтанно
осциллирует; варианты энергетических профилей
изображены сплошными и штриховыми линиями;
эти осцилляции в значительной степени облегчают
связывание ионов при преодолении энергетического
барьера.
Механизмы активного ḿ-ного транспорта
Принцип работы АТФаз-насосов основан на конформационных перестройках
белковой макромолекулы при взаимодействии с транспортируемым ионом.
Кальциевый насос представлен АТФ-азой – полипептидом с молекулярной массой
около 100 000 Да. В.Б.Ритов и Ю.А.Владимиров выделяют 4 этапа процесса переноса
Са2+.
Первый этап работы Са-АТФазы – связывание
компонентов: иона Са2+ с комплексом Mg-АТФ.
Присоединение ионов Mg2+ и Са2+ идет на наружной
поверхности саркоплазматической ḿ к разным участкам
переносчика:
Са2+ + АТФаза + (Mg2+–ATФ) → Ca2+–ATФaзa–Mg2+–
ATФ. Константа связывания иона Са2+ составляет 10
л/моль.
Второй этап работы насоса – гидролиз АТФ с
образованием фермент-фосфатного комплекса. Константа
связывания – около 5·105 л/моль. Гидролиз АТФ
происходит с малым перепадом Е. Свободная Е гидролиза
АТФ «запасается» в связях комплекса.
Третий этап работы фермента – транслокация:
переход центра связывания кальция на внутреннюю
сторону ḿ. Транслокация идет с затратой Е около 19,6
кДж/моль и еще ~ 17,8 кДж/моль расходуется на переход
связанного в комплексе Са2+ в растворимое состояние.
Суммарная затрата Е на перенос через ḿ и освобождение иона Са 2+ на внутренней
 9
поверхности ḿ 19,6 + 17,8 = 37,4 (кДж/моль). При гидролизе одного моля АТФ
освобождается ~ 40 кДж, что достаточно для переноса двух молей ионов Са2+ через ḿ.
Четвертый этап функционирования Са2+-насоса состоит в конформационных
перестройках, приводящих к транслокации кальцийсвязывающих центров на наружную
сторону ḿ (в исходное положение).
Натрий/калиевый насос. Наиболее важный процесс активного транспорта – это
работа Na+/K+-насоса, существующего практически во всех ##; насос выкачивает Na+ из
#, одновременно накачивая K+ внутрь #. Таким образом обеспечивается низкая внутри-
#ная концентрация Na+ и высокая – K+. Градиент концентрации Na+ на ḿ имеет
специфические ff, связанные 1) с передачей информации в виде электрических
импульсов, а также 2) с поддержанием вторично активноготранспорта и 3)
регулированием объема #. Поэтому неудивительно, что более 1/3 Е, потребляемой #,
расходуется на Na+/K+-насос, а в некоторых наиболее активных клетках на его работу
расходуется до 70% Е.
Na+/K+-транспортный белок представляет собой
АТФазу. На схеме АТФаза показана как димер,
состоящий из большой (функциональной) и малой
субъединиц; в ḿ она существует как тетрамер,
образованный двумя большими и двумя малыми
субъединицами. На внутренней поверхности
мембраны она расщепляет АТФ на АДФ и фосфат.
На транспортировку 3 Na+ из # и одновременно 2
K+ в # используется Е одной молекулы АТФ, т. е.
суммарно за один цикл из # удаляется один
положительный заряд. Таким образом, Na+/K+-
насос является электрогенным (создает
электрический ток через ḿ), что приводит к
увеличению электроотрицательности ḿ-ного
потенциала ~ на 10 мВ.
Транспортный белок выполняет эту операцию с высокой скоростью: от 150 до 600
+
Na в секунду.
Na+/K+-насос специфически ингибируется сердечным гликозидом уабаином
(строфантином). Поскольку работа Na/K-насоса представляет собой многоступенчатую
химическую реакцию, она, подобно всем химическим реакциям, в значительной степени
зависит от t°. Если препарат охладить примерно на 18° С, то поток Na+ из # быстро $ в 15
раз, а сразу после нагревания восстановится до исходного уровня. Другой
характеристикой насоса наряду со значительной t°-ной и Е зависимостью является
наличие уровня насыщения.
При изменении соотношений концентраций Na+ и K+, величины потенциала покоя
и других условий перенос Na+ и K+ может происходить в соотношениях 1:1, 2:1, 3:1.
Чтобы поддерживать равновесие между насосными и пассивными мембранными
токами, необходимо намного больше молекул Na+/K+-насоса, чем канальных белков для
ионов K+ и Na+. Измерения канальных токов в покое показали наличие в среднем одного
калиевого и одного натриевого открытого канала на 1 мкм 2 ḿ; на том же пространстве
присутствует около 1000 молекул Na+/K+-насоса.
 10
Тот факт, что поток Na+ внутрь #, а ионов K+ – из # компенсируется работой
насоса, имеет и другое следствие, заключающееся в сохранении стабильного
осмотического давления и постоянного объема. Внутри # существует высокая
концентрация крупных анионов, главным образом белков и органических кислот и
катионов K+. Снаружи - Na+ и С1–.
Если мембранный потенциал $ при блокаде Na+/K+-насоса или недостатке АТФ для
его работы, то равновесный потенциал для С1 – $, а внутри#ная концентрация С1–
соответственно . Восстанавливая равновесие зарядов, Na+ также входит в #; суммарная
концентрация ионов в клетке , что  осмотическое давление; это заставляет воду
поступать в #. Клетка набухает.
Вторично активный транспорт
Значение Na+/K+-насоса для клетки не ограничивается стабилизацией нормальных
градиентов К+ и Na+ на мембране. Е, запасенная в ḿ-ном градиенте Na+, часто
используется для обеспечения ḿ-ного транспорта других веществ. Например, «симпорт»
Na+ и молекулы сахара в #. Мембранный транспортный белок переносит молекулу сахара
в # даже против градиента концентрации, в то же время Na+ движется по градиенту
концентрации и потенциала, обеспечивая Е для транспорта сахаров. Для различных
сахаров существуют разные симпортные ©. Перенос сахаров подавляет флоридзин.
Транспорт аминокислот в #сходен с транспортом сахаров, он также обеспечивается
градиентом Na+; существует по крайней мере пять различных ©© симпорта, каждая из
которых специализирована для какой-либо одной группы родственных аминокислот.
Помимо симпортных систем существуют также
«антипортные». Одна из них, например, за один
цикл переносит один Са2+ из # в обмен на три
входящих Na+.

Эндо- и экзоцитоз
Для некоторых веществ, которые поступают в # или должны быть выведены из
нее, транспортные каналы отсутствуют; к таким веществам относятся, например, белки и
холестерол. Они могут проходить через плазматическую ḿ в везикулах, или пузырьках, с
помощью эндо- и экзоцитоза (секреции). При экзоцитозе определенные органеллы
(аппарат Гольджи) формируют везикулы, заполненные веществом, которое необходимо
вывести из #, например гормонами или ферментами вне#ного действия. Когда такие
везикулы достигают плазматической ḿ, их липидная ḿ сливается с ней, давая таким
образом возможность содержимому выйти во внешнюю среду. При противоположном
процессе – эндоцитозе ̶ плазматическая ḿ инвагинирует, образуя ямку, которая затем
углубляется и замыкается, формируя внутри#ную везикулу, заполненную вне#ной
жидкостью и некоторыми макромолекулами. Чтобы обеспечить это слияние ḿḿ и
замыкание везикулы, сократительные элементы цитоскелета действуют совместно с
самими ḿḿ. При эндоцитозе не всегда происходит просто захват вне#ной среды в #. В
#ной ḿ содержатся часто организованные в специализированные группы специфические
 11
рецепторы к макромолекулам, таким, как инсулин или антигены. После того как эти
макромолекулы свяжутся со своими рецепторами, в окружающем рецептор участке ḿ
происходит эндоцитоз, и макромолекула избирательно транспортируется в #.
Холестерол, связанный с частицами ЛНП
(липопротеина низкой плотности),
присоединяется к плазматической ḿ,
индуцирует образование эндоцитозного
пузырька в этом участке ḿ и транспортируется
к лизосомам, где высвобождается.

Эндо- и экзоцитоз происходят в ## непрерывно. В течение 1 ч макрофаг поглощает

в виде везикул двойную площадь поверхности своей цитоплазматической ḿ.