ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НАНОАНТИТЕЛ ПРОТИВ

ВИРУСА БЕШЕНСТВА

PhD докторант: Баянды Гүлшат Асхатқызы, 2-курс.

Научный руководитель: Бисенбаев Амангельды Куанбаевич, доктор биологических
наук, профессор, академик НАН РК, НАО «КазНУ им.аль-Фараби».
1
• Бешенство- острое инфекционное заболевание, возникающее после укуса зараженного животного,
протекающее с тяжелым поражением нервной системы и заканчивающееся, как правило,
смертельным исходом.

• Возбудитель бешенства - вирус Neuroiyctes rabid, относится к группе миксовирусов рода

Lyssavirus семейства Rhabdovtridae. Имеет форму винтовочной пули, размеры от 90-170 до 110-200
нм, содержит однонитевую РНК.

• Источниками инфекции  для 60% заболевших бешенством служат собаки, для 24% - лисицы, для
10% - кошки, для 3% - волки и для 3% - другие животные (летучие мыши).

Бешенство передается через слюну зараженного

Больной бешенством
животного
2
 Glycoprotein Matrix protein

1. Вирус в организме распространяется по

нервным волокнам

Nucleoprotein Polymerase Phosphoprotein

2. Сначала он попадает в спинной мозг
Строение вируса бешенство

3. Затем вирус проникает в головной мозг,

G гликопротеин связывается со следующими рецепторами:
- ацетилхолин; развивая его воспаления
- Молекула адгезии клетки;
- Низкоаффинный нейротропный рецептор.

Репродукция вируса бешенство тельца Бабеша — Негри 

3
 Традиционные антитела, IgG

Терапия нанотелами в настоящее время считается очень перспективной альтернативой для лечения сложных вирусных
инфекций. Наноантитела представляют собой наименьшие функциональные фрагменты (15 кДа) антител, состоящих только из
тяжелых цепей, встречающихся в природе у Camelidae, и представляют собой антигенсвязывающий вариабельный домен.
Наноантитела имеют ряд преимуществ, в том числе экономичность и простоту производства в больших количествах в бактериях,
хорошую растворимость, устойчивость к значительным колебаниям температуры и рН, лучшее проникновение в ткани в условиях
in vivo. Исходя из этих особенностей, наноантитела становятся более перспективным инструментом для диагностики и лечения
различных заболеваний, в том числе бешенства, по сравнению с обычными антителами .
4
ОБЩАЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ НАНОАНТИТЕЛ

5
 ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНТИГЕНА ДЛЯ ИММУНИЗАЦИИ

Антиген изготовлена из культуральной

Образец с культурой клеток ВНК-21,зараженная
с инактивированным антигеном, без признаков
ЦПД
Образец культуры клеток ВНК-21, зараженная
штаммом CVS-11 вируса бешенства, с признаками
ЦПД.
жидкости перевиваемой линии клеток
ВНК-21 clone C-13 (АТСС CCL 10),
инфицированных вирусом бешенства
референс-штаммом "CVS-11" (VR 959,
ANSES, Франция), иннактивированных
с конечной концентрации 0,15%-
димерэтиленимином, с добавлением
5%-ного полимерного адъюванта
«POLYGEN™» (MVP adjuvants®, США).

Контрольный образец с культурой Образец культуры клеток ВНК-21, зараженная

клеток ВНК-21, окрашенный методом штаммом CVS-11 вируса бешенства, окрашенный
РИФ.
методом РИФ.
Контроль специфичности полученного вируссодержащего материала методом
МФА 6
 ИММУНИЗАЦИЯ ВЕРБЛЮДОВ
СХЕМА ИММУНИЗАЦИИ
Животные Интервал гипериммунизации/ антиген см3
1.12.22 8.12.22 15.12.22 22.12.22 29.12.22 05.01.23 10.01.23

1-верблюд 10 см3 15 см3 15 см3 20 см3 20 см3 20 см3 Взятие крови из

яремный вены
2 -верблюд 10 см3 15 см3 15 см3 20 см3 20 см3 20 см3

Иммунизация верблюдов инактивированным вирусом бешенства (На базе НПП «Антиген»)

7
 Выделение мононуклерных клеток крови

Выделение лимфоцитов из периферической крови верблюдов

методом центрифугирование

Проверка специфичности сыворотки верблюдов к вирусу

бешенства методом иммунодиффузией 8
 Получение к ДНК из тотальной РНК

ПЦР на матрице VHH-CH домена с 447 пн.

ПЦР кДНК с праймерами к VHH-CH домену (675 пн.) 675 пн
праймерами к VHH домену (447 пн.)
9
Отбор специфических нанантител к вирусу бешенство
методом фагового дисплея Рестрикция вектора pBSKII_PelB_cVHH по сайтам
NcoI/EcoRI

Рестрикция вектора pET 28c по сайтам NcoI/EcoRI

10
 Оптимальные параметры для индукции VHH: 0,5 мМ
ИПТГ, ОП-0,8, ночь, 30С.

Вестерн-блоттинг моновалентного Аффинная хроматографическая

нанотела очистка моновалентного нанотела 11