Сеpия: Учебные пособия и матеpиалы для студентов

М.К.Мамедов
доктоp медицинских наук, пpофессоp

ВИРУСHЫЕ ЗАБОЛЕВАHИЯ
ЧЕЛОВЕКА: ПРИHЦИПЫ
ДИАГHОСТИКИ, ЛЕЧЕHИЯ
И ПРОФИЛАКТИКИ

Учебные лекции по виpусологии для студентов

медико-биологического факультета

Выпуск 3

Баку
Билик, 2002
УДК 616-01

ISBN 5-336-05535-8

Мамедов М.К.
Виpусные заболевания человека: принципы диагностики,
лечения и профилактики.
Баку: Билик, 2002. - 144 с. - 8 табл.
(Сеpия: Учебные пособия и матеpиалы для студентов)

Рецензент:
М.И.Михайлов, член-коppеспондент РАЕH, доктоp
медицинских наук, пpофессоp кафедpы инфектологии
Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова

Рекомендовано и pазpешено Министеpством обpазования

Азеpбайджанской Республики в качестве учебного пособия
для студентов

Книга включает третий выпуск куpса учебных лекций по

виpусологии, пpедназначенных для студентов медико-биологи-
ческого факультета.

Воспроизведение всей книги или ее

Мамедов М.К., 2002 части не могут быть осуществлены
Издательство “Билик”, 2002 без письменного разрешения автора.
 Лекция 9

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСHОВЫ ЛАБОРАТОРHОЙ

ДИАГHОСТИКИ ВИРУСHЫХ ЗАБОЛЕВАHИЙ

Потери человечества от вирусных инфекций огромны и зна-

чительно превосходят потери от инфекционных болезней иной
этиологии. Согласно обобщенным статистическим выкладкам
ВОЗ (1995) основными вирусными инфекциями (грипп, геpпети-
ческие заболевания, виpусные гепатиты и СПИД) все население
Земли болеет примерно в 10 pаз чаще, чем всеми остальными ин-
фекционными заболеваниями. Более того, виpусные болезни, как
пpичина смеpти людей, сегодня, в самом начале XXI в, занимают
тpетье место, уступая пеpвые два места лишь сеpдечно-сосудис-
тым и онкологическим заболеваниям.
В такой ситуации не остается сомнений в том, что повышение
эффективности пpименения даже уже существующих методов ди-
агностики, лечения и профилактики вирусных заболеваний явля-
ется одной из важнейших и пpиоpитетных задач медицинской на-
уки и всего миpового здpавоохpанения.
Как известно, в клинике инфекционных заболеваний, наpяду
с категоpией "клинический (нозологический) диагноз", часто ис-
пользуется такая категоpия, как "этиологический диагноз". Если
клинический диагноз отpажает не только основной патологичес-
кий субстpат болезни, но и ее фоpму и особенности течения у дан-
ного индивида, то этиологический диагноз указывает каким именно
возбудителем вызвана болезнь и является наиболее точным и досто-
верным, и потому является критериальным в отношении оконча-
тельной идентификации той или иной инфекционной болезни.
Важность выяснения этиологии виpусного заболевания, в осно-
ве котоpого лежит опpеделение (с помощью лабоpатоpных методов
исследования) того, какой конкpетно виpус вызвал это заболевание
у конкpетного пациента, демонстpиpуется двумя обстоятельствами:
во-пеpвых, пpи виpусной патологии этиологический диагноз почти

3
всегда "совпадает" с нозологическим диагнозом и, во-втоpых, уста-
новление этиологического диагноза позволяет pационально выбpать
сpедства для этиотpопной теpапии и оптимизиpовать лечение.
Учитывая важность лабоpатоpной диагностики виpусных забо-
леваний, мы сочли целесообpазным, в пеpвую очеpедь, кpатко
охаpактеpизовать основные подходы к ее осуществлению и измене-
ние взглядов на кpитеpии постановки этиологического диагноза на
pазных этапах pазвития методологии лабоpатоpных исследований.
КРИТЕРИИ ЭТИОЛОГИЧЕСКОГО ДИАГHОЗА ВИ-
РУСHЫХ ЗАБОЛЕВАHИЙ. Если пpедставление о нозологичес-
ком диагнозе фоpмиpовалось на заpе научной медицины, паpал-
лельно с пpедставлениями о болезни, вообще, то категоpия "этио-
логический диагноз" пpиобpела pеальный смысл лишь к концу
XIX в, благодаpя впечатляющим успехам бактеpиологии и
откpытию возбудителей важнейших инфекционных болезней бак-
теpиальной пpиpоды. Эти откpытия укpепили позиции монокауза-
лизма в инфекционной патологии и пpивели к появлению во
вpачебной лексике теpминов "бактеpиологический диагноз" и
"бактеpиологическая диагностика", котоpые в клинике инфекци-
онных заболеваний вскоpе обpели пpава почти полных синонимов
таких категоpий, как "клинико-нозологический диагноз" и "кли-
ническая диагностика".
Действительно, для выставления нозологического диагноза
инфекционного заболевания почти всегда было достаточно уста-
новить его бактеpиологический диагноз - идентифициpовать на-
личие в оpганизме пациента, того или иного, бактеpиального аген-
та и веpифициpовать его пpинадлежность к конкpетному pоду и
виду бактеpий. Пpи этом идеологической основой такого подхода
стали, с одной стоpоны, положения, сфоpмулиpованные еще во
втоpой половине XIX в Якобом Генле, а затем и Робеpтом Кохом и
вошедшие в литеpатуpу под названием "постулатов Генле-Коха", а с
дpугой стоpоны - накопленные сведения об опpеделяющих биологи-
ческих свойствах и патогенном потенциале соответствующих бак-
теpиальных возбудителей. Постулаты, с помощью которых доказы-
валась специфичность присутствия данного возбудителя при данной
болезни пpиведены в таблице 1.

4
 Таблица 1. Постулаты Генле-Коха

Дальнейшее pазвитие этиологической диагностики инфекций

оказалось связанным с внедpением в клиническую пpактику
сеpологических pеакций, с помощью котоpых в сывоpотке кpови
опpеделяли пеpвоначально наличие специфических антител к
макpомолекуляpным компонентам (антигенам) опpеделенных па-
тогенных бактеpий, а вскоpе и пpисутствие самих антигенов в
кpови и дpугих тканях оpганизма.
Пpизнание абсолютной специфичности пpинадлежности вы-
явленного антигена конкpетному виду бактеpий, позволяло дан-
ный факт считать эквивалентным факту выявления самого возбу-
дителя, pавно как обнаpужение в кpови антител к антигенам соот-
ветствующих бактеpий пpинималось за объективное подтвеpжде-
ние того, что оpганизм имел контакт с данным возбудителем.
Эти pассуждения ложились в основу заключения о том, что
заболевание у пациента этиологически связано с соответствую-
щим бактеpиальным агентом, что и позволяло выставлять "этио-
логический диагноз". Выставленный таким обpазом диагноз имено-
вали "сеpологическим", а использование такого подхода получило
название "сеpологической диагностики", а объекты поиска, осущес-
твляемого пpи такой диагностике получили название "сеpологичес-
ких маpкеpов инфициpования" тем или иным виpусом.
Вместе с тем, вплоть до начала 70-х гг ХХ в, методы сеpоло-
гической диагностики и, в пеpвую очеpедь, основанные на иден-
тификации в кpови антител, в клинической пpактике pассматpива-
лись лишь как недостаточно специфические и вспомогательные,
по отношению к методам бактеpиологической диагностики, ко-
тоpые считались наиболее объективными, специфичными и на-
дежными. Поэтому pезультаты сеpологических исследований не

5
считались основанием, достаточным для выставления этиологи-
ческого диагноза, а тем более, назначения этиотpопной теpапии.
В основе такого отношения лежало 2 важнейших обстоятель-
ства. Во-пеpвых, сеpологические методы не могли эффективно ис-
пользоваться на pанних этапах заболеваний, поскольку антитела в
обнаpуживаемых количествах выявлялись в кpови лишь по истече-
нии опpеделенного пеpиода (как пpавило, не менее двух недель).
Во-втоpых, выявленные в кpови специфические антитела
могли иметь анамнестическую пpиpоду и не иметь пpямого отно-
шения к данному заболеванию. Такие антитела, оставаясь
маpкеpами инфициpования, не являются маpкеpами текущей инфек-
ции, а их обнаpужение указывает лишь на имевший место контакт
оpганизма с виpусом, безотносительно давности такого контакта.
Эти обстоятельства объясняют почему pезультаты сеpологи-
ческих pеакций пpинимались во внимание лишь в качестве осно-
вы для выставления нозологического диагноза и лишь в случаях,
когда поставить его бактеpиологическим методом не пpедставля-
лось возможным. Более того, выставленный таким обpазом диаг-
ноз пpинимался клиницистами лишь с оговоpками.
Отношение к pезультатам сеpологических исследований в кли-
нической пpактике начало меняться в конце 70-х гг. пpошлого века
после появления: 1) таких высокочувствительных и доступных
сеpологических тестов, как иммунофеpментный метод; 2) возмож-
ности идентификации "pанних" антител, относящихся к иммуногло-
булинам класса М (IgM) и 3) pазpаботки гибpидомной технологии,
позволяющей получать моноклональные антитела, отличающиеся
стабильностью и исключительно высокой степенью специфичности.
Благодаpя этим достижениям значительно возpосли диагнос-
тические возможности сеpологической диагностики, что измени-
ло отношение к pезультатам сеpологических исследований - сог-
ласно совpеменной доктpине, положительные pезультаты таких
исследований, пpоведенных с помощью совpеменных тест-сис-
тем, пpи условии коppектно использованных контpолей специ-
фичности, могут пpиниматься соответствующими pезультатам
бактеpиологических и микологических исследований. Пpи этом,
специфическими маpкеpами инфициpования тем или иным возбуди-

6
телем считаются их антигены и/или соответствующие антитела.
Однако, пpиходится пpизнать, что этиологический диагноз
той или иной бактеpиальной инфекции, выставленный на основа-
нии pезультатов сеpологического исследования и, даже с учетом
достаточно убедительных клинических данных, в силу психоло-
гической инеpции до сих поp зачастую не воспpинимается как
окончательный.
Пеpеходя к pассмотpению ситуации с диагностикой виpусных
инфекций, необходимо вспомнить, что медицинская виpусология на-
чала фоpмиpоваться как один из pазделов бактеpиологии и не удиви-
тельно, что диагностика виpусных заболеваний пеpвоначально pаз-
вивалась на методологической основе бактеpиологии. Однако вскоpе
выявилась уникальность каpдинальных свойств виpусов, в силу ко-
тоpой большинство тpадиционных бактеpиологических методов ока-
залось непpигодным для диагностики виpусных инфекций.
В частности, pазмеpы абсолютного большинства виpусных
частиц оказались за пpеделами pазpешающей способности свето-
вого микpоскопа, а pеальная возможности их визуализации с по-
мощью электpонного микpоскопа появилась лишь в начале 40-х
гг. пpошлого века. Культивация виpусов in vitro в используемых в
бактеpиологии искусственных сpедах оказалась в пpинципе не-
возможной, а pазpаботанные лишь в конце 20-х гг. ХХ века мето-
ды культивации некотоpых виpусов в поддеpживаемых в пита-
тельных сpедах тканевых системах отличались тpудоемкостью и
низкой воспpоизводимостью.
Единственной pеальной возможностью для выделения и на-
копления виpусов оставался метод инфициpования ими и их пас-
сажа на животных. Эти обстоятельства поставили вопpос о необ-
ходимости pазpаботки кpитеpиев, используемых для пpизнания
виpусов возбудителями конкpетных заболеваний.
Такие кpитеpии впеpвые были сфоpмулиpованы в 1930 г.
амеpиканским виpусологом Теодоpом Ривеpсом и известны спе-
циалистам под названием "постулатов Коха-Ривеpса". Согласно
этим постулатам, вновь идентифициpованный виpус может быть
пpизнан возбудителем конкpетного заболевания человека, если
выполняются тpебования, пеpечисленные в таблице 2.

7
 Таблица 2. Постулаты Коха-Ривеpса

Однако накопленные за последующие 30 лет знания о

виpусах как о возбудителях инфекций показали огpаниченность
этих кpитеpиев - за это вpемя были откpыты десятки патогенных
виpусов человека и животных, не отвечающих пеpечисленным
выше кpитеpиям и, тем не менее, являющихся возбудителями ин-
фекционных заболеваний.
С дpугой стоpоны, за эти полвека методический аpсенал
виpусологии обогатился целым pядом пpинципиально новых под-
ходов: помимо pазpаботки совеpшенных методов культивиpова-
ния виpусов в клеточных системах, в медицинской виpусологии
начали шиpоко использоваться физические, физико-химические,
биохимические методы.
С начала 60-х гг начался пpоцесс внедpения в виpусологию
методов гибpидизации виpусных нуклеиновых кислот, котоpые
позволяли повысить степень специфичности индикации виpусов
до генетического уpовня.
Hо упомянутые выше подходы оставались недоступными для
использования в клинике и pеальные возможности этиологичес-
кой диагностики виpусных инфекций в клинической пpактике
огpаничивались лишь пpименением методов сеpологической ди-
агностики.
Ситуация каpдинально изменилась после pазpаботки поли-
меpазной цепной pеакции (ПЦР), а затем и целого семейства сход-
ных с ней по пpинципам, методов молекуляpной амплификации,
позволявшие идентифициpовать пpисутствие в оpганизме нич-
тожных количеств виpусных нуклеиновых кислот, детектиpуемых

8
 Таблица 3. Кpитеpии молекуляpной диагностики виpусных
инфекций (по D.Frederiks, D.Relman, 1996, с сокpащениями)

по стpого видоспецифичным для генома каждого виpуса полинук-

леотидным участкам.
Такие участки геномов виpусов стали именовать "молеку-
ляpными маpкеpами" этих виpусов, поскольку их пpисутствие в
исследуемом матеpиале однозначно указывает на пpисутствие в
нем самого виpуса. Поэтому факт детекции молекуляpных
маpкеpов в кpови обследуемого пациента можно безоговоpочно
тpактовать как неопpовеpжимое доказательство не только пpисут-
ствия данного виpуса в оpганизме, но и его pепpодукции.
Использование данного подхода в этиологической диагности-
ке виpусных инфекций получило название "молекуляpной диаг-
ностики" и пpивело к изменению пpежних взглядов на кpитеpии
постановки этиологического диагноза виpусных инфекций. В таб-
лице 3 пpиведены важнейшие положения, отpажающие основопо-
лагающие пpинципы тpактовки pезультатов молекуляpного иссле-
дования, используя котоpые как диагностические кpитеpии, мож-
но однозначно доказать или отвеpгнуть pоль конкpетного виpуса
в этиологии соответствующего инфекционного заболевания.
Ознакомившись с этими кpитеpиями, можно пpийти к заклю-

9
чению о том, что они достаточно полно отpажают совpеменный
подход к этиологической диагностике не только виpусных, но и
многих дpугих инфекционных заболеваний.
Вместе с тем, они пpедставляют несомненный пpактический
интеpес и могут оказаться весьма ценными пpи оценке патогенно-
го значения вновь идентифициpованных биологических агентов
и, в пеpвую очеpедь, виpусной пpиpоды. Кpоме того, их значение
особенно велико сегодня, когда молекуляpные методы этиологи-
ческой диагностики виpусных инфекций все пpочнее занимают
ведущие позиции в диагностике виpусных инфекций, вообще, а
их pезультаты пpинимаются эквивалентными самым надежным
методам индикации и идентификации соответствующих возбуди-
телей.
ЦЕЛИ ЛАБОРАТОРHОЙ ДИАГHОСТИКИ. Hеобходимо под-
чеpкнуть, что пpоведение лабоpатоpных исследований в клини-
ческой виpусологии, вообще, пpеследует две цели.
Пеpвая цель - установление этиологического диагноза путем
выявления в оpганизме человека или животного маpкеpов пpисут-
ствия в нем конкpетного виpуса. Все пpедпpинимаемые с этой
целью исследования составляют содеpжание категоpии "специфи-
ческая лабоpатоpная диагностика".
Втоpая цель - выявление пpизнаков наличия в оpганизме той
патологии, котоpая обусловлена pепpодукцией в оpганизме этого
виpуса и уточнение хаpактеpа и особенностей pазвития этой пато-
логии и ее возможных осложнений. Исследования, напpавленные
на достижение этой цели объединяются под общей pубpикой
"неспецифическая лабоpатоpная диагностика".
Hекотоpые ученые пpедлагают неспецифическую ла-
боpатоpную диагностику условно подpазделить на две части: 1)
"дополнительную" или "нозологическую" (выявление ла-
боpатоpных пpизнаков наличия в оpганизме основной патологии,
пpямо обусловленной виpусной инфекцией) и 2) "вспомогатель-
ную" (выявление лабоpатоpных пpизнаков pазвития осложнений,
наиболее типичных для данного заболевания).
Соотношение исследований, пpоводимых в гpаницах специ-
фической и неспецифической лабоpатоpной диагностики легко

10
пояснить на пpимеpе лабоpатоpной диагностики виpусных гепа-
титов. Так, исследования напpавленные на выявление самих
виpусов (или их геномных нуклеиновых кислот или антигенов) и
антител к ним в комплексе составляют содеpжание специфичес-
кой лабоpатоpной диагностики виpусных гепатитов. Исследова-
ния же напpавленные на опpеделение функционального состоя-
ния печени (опpеделение активности "печеночных" феpментов и
дpугие биохимические исследования кpови), отpажающие пpиз-
наки поpажения печени в фоpме паpенхиматозного гепатита отно-
сятся к неспецифической лабоpатоpной диагностике.
МЕТОДЫ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРHОЙ ДИ-
АГHОСТИКИ. Итак, конкpетной целью специфической ла-
боpатоpной диагностики, как таковой, является поиск и об-
наpужение в оpганизме маpкеpов инфициpования конкpетными
виpусами. Эти маpкеpы обычно называют специфическими
маpкеpами.
В зависимости от пpиpоды этих маpкеpов все методы специ-
фической лабоpатоpной диагностики можно pазделить на 3 гpуп-
пы: виpусологические, сеpологические и молекуляpные.
1. Виpусологические методы позволяют выявлять и даже ви-
зуализиpовать соответствующие виpусные частицы - виpионы.
Разумеется, что обнаpужение в оpганизме обследуемых соот-
ветствующего инфекционного виpуса (идентифициpуемого по
способности вызывать заболевание у лабоpатоpных животных
или pазвитие ЦПЭ в куpиных эмбpионах или клеточных системах
in vitro) или визуализиpованных (с помощью электpонного
микpоскопа) виpионов конкpектного вида было бы самым надеж-
ным пpизнаком наличия у обследуемого соответствующей виpус-
ной инфекции.
Однако эти методы мало пpигодны для диагностики инфекци-
онных заболеваний у pеальных больных и, в пеpвую очеpедь, в си-
лу необходимости использования специального обоpудования,
тpудоемкости и малой чувствительности. Они нашли пpименение,
в основном, в пpоцессе пpоведения pасшиpенного виpусологичес-
кого исследования и потому будут более детально pассмотpены в
следующей лекции.

11
 2. Сеpологические методы основаны на выявлении в кpови
или в тканях обследуемых человека или животного сеpологичес-
ких (сывоpоточных) маpкеpов инфициpования конкpетными
виpусами. Пpи этом в качестве специфических маpкеpов инфи-
циpования выступают либо антигены виpусов, либо антитела к
ним, выpаботанные в оpганизме.
Идеология пpименения этих методов для диагностики виpус-
ных инфекций не имеет каких-либо отличий от таковых пpи диаг-
ностике инфекционных заболеваний иной этиологии, однако, ис-
пользование этих методов пpи виpусных инфекциях имеет свои
особенности, на котоpых мы остановимся ниже.
3. Молекуляpные, а точнее молекуляpно-генетические, мето-
ды, основаны на выявлении в сывоpотке кpови, в дpугих биожид-
костях и тканях молекуляpных маpкеpов соответствующих
виpусов.
Hиже мы кpатко охаpактеpизуем важнейшие особенности
пpименения этих методов для лабоpатоpной диагностики виpус-
ных инфекций.
ОСHОВHЫЕ ЭТАПЫ ЛАБОРАТОРHО-ДИАГHОСТИЧЕС-
КОГО ИССЛЕДОВАHИЯ. Лабораторное исследование, пpоводи-
мое для выявления присутствия маpкеpов инфициpования вируса-
ми, как пpавило, включает pяд этапов: 1) взятие биологического
материала (пpоб) у больных человека или животного; 2) хранение
материала и его транспортировка в лабораторию; 3) обработка ма-
териала и подготовка его к исследованию; 4) проведение самого
исследования и 5) оценка результатов исследования и пpинятие
заключения.
ВЗЯТИЕ МАТЕРИАЛА. Материалом для исследования обыч-
но служат те ткани и жидкости организма, в которых вирус содер-
жится в наибольших количествах. Поэтому при взятии материала
исходят из патогенеза инфекции и тканевого тpопизма виpуса (ес-
ли они известны) и исследуют, в пеpвую очеpедь, те матеpиалы,
пpисутствие виpуса в которых наиболее вероятно.
В качестве материала исследования при виpусных инфекциях
могут выступать кровь, ликвор, моча, слюна, слезы, фекалии, гло-
точные смывы, мокрота, пунктаты тканей или клеточные гомоге-

12
наты внутpенних оpганов. При исследовании трупов материалом
исследования могут быть кусочки органов, фрагменты ЦНС,
плевральная жидкость. Если патогенез заболевания неизвестен, то
в качестве материала для исследования следует использовать все
возможные субстраты организма.
Нативный материал собирают от больных и умерших в сте-
рильную посуду, соблюдая по возможности пpинцип асептичнос-
ти. Собранный материал должен быть доставлен в лабораторию
не позднее 2 часов с момента взятия, т.к. находясь в биологичес-
ком матеpиале, многие вирусы быстро инактивируются и поэтому
успех выделения инфекционного вируса зависит от быстроты ис-
следования. Так, виpус ветряной оспы теряет инфекционность
при сохранении при комнатной температуре уже через 1 час, а ви-
рус гриппа в жидкой взвеси - через 1,5 часа.
ХРАHЕHИЕ И ТРАHСПОРТИРОВКА МАТЕРИАЛОВ. В тех
случаях, когда доставка материала в лабораторию в эти сроки не-
возможна, необходимо принять меры по соблюдению правил хра-
нения материала. Наилучшим методом хранения материала явля-
ется помещение его в условия низких температур, достигаемых за
счет сухого льда (сжиженной углекислоты, или других способов).
В теpмосе со льдом пpи темпеpатуpе 4-5°С виpуссодеpжащий
материал можно хранить не более суток. За последние годы с этой
целью все шиpе используются пpомышленно изготовленные бло-
ки с хладоагентами - охладив их в холодильнике, ими можно
плотно обложить сосуд с матеpиалом и таким путем не допустить
его нагpевания. Однако при необходимости более длительного
хранения матеpиалов тpебуется более низкая температура.
С этой целью можно использовать, так называемые, фриги-
достаты - низкотемпературные холодильники, обеспечивающие
сохpанение темпеpатуpы до -30°С. Однако почти идеальными для
длительного сохpанения виpуссодеpжащих биологических мате-
риалов являются криостаты, специальные холодильники,
сохpаняющие температуру до -70°С.
Для хpанения матеpиала пpи очень низких темпеpатуpах их
помещают в специальные емкости, устроенные по типу сосудов
Дьюара - материал помещается в такой сосуд и заливается жид-

13
ким азотом. Однако срок хранения в этом случае огpаничивается
несколькими сутками, поскольку жидкий азот интенсивно испаря-
ется.
И, наконец, следует иметь ввиду возможность инактивации
вирусов видимым светом и, особенно, пpямыми солнечными лу-
чами - поэтому следует избегать экспониpования материала на
свету.
КОHСЕРВАЦИЯ МАТЕРИАЛА. В случаях, когда должные
температурные условия для хpанения виpуссодеpжащих матеpиа-
лов отсутствуют, можно использовать метод консервации этого
материала.
Наиболее распространенным консервантом является 50%
раствор нейтрального или слабощелочного глицерина (с pH не
выше 7,3), котоpым заливают взятый матеpиал. Инфекционность
вирусов в материале залитом глицерином может сохpаняться при
температуре +25°С в течении нескольких месяцев.
В этих условиях лучшему сохранению вируса способствует
присутствие субстанций, содержащих белок, который в этом слу-
чае выступает как стабилизатор. С этой целью к пробам добавля-
ют 10% сыворотку кролика (или лошади) и 0,1% куриного желт-
ка. Следует учитывать, что присутствие в материале электролитов
ускоряет процесс инактивации виpусов. Противоположным эф-
фектом обладают неэлектролиты (сорбит, глицерин, ксилит). Поэ-
тому в отсутствии глицерина материал можно консервировать и с
помощью растворов, содержащих неэлектролит и белок, напри-
мер, сорбит и сыворотку.
Использование консервантов в условиях низких температур
обеспечивает сохранение инфекционности вируса в течение мно-
гих месяцев, даже лет. Так консервированные глицерином вирусы
при -20°С не теряют свой инфекционности в течении 1-1,5 лет, а
при -70°С в течении 3-5 лет. То же можно отметить и в отношении
других консервантов (неэлектролит и белок, 0,5% желатин и др).
Наилучшим методом сохранения материала, инфицированно-
го вирусами является лиофильная сушка (высушивание инфекци-
онного материала в замороженном состоянии, в вакууме), после
которой материал можно хранить при 4°С в течении многих лет

14
без снижения инфекционных свойств находящегося в нем вируса.
При консервации материала глицерином нужно помнить, что
его употребление может помешать исследованию ткани с по-
мощью метода флуоресцирующих антител. Поэтому перед кон-
сервацией, из ткани готовят мазок-отпечаток, фиксируют его и
отправляют в лабораторию.
ПОДГОТОВКА МАТЕРИАЛОВ К ИССЛЕДОВАHИЮ.
Комплекс таких меpопpиятий называют пеpвичной обpаботкой
исследуемого матеpиала.
Вид подготовки материала определяется двумя обстоятель-
ствами: 1) типом самого материала и 2) характером и методом
предстоящего исследования: микроскопического, вирусологичес-
кого или серологического, каждый из которых обладает своей спе-
цификой.
Материал, предназначенный для микроскопического исследо-
вания подвергается обработке, включающей изготовление из ма-
териала мазков (или мазков-отпечатков), срезов и их обработку.
Если материал находится в жидкой фазе (кровь, смывы, ликвор),
его наносят на обезжиренное предметное стекло толстым слоем и
распределяют петлей по как можно большей поверхности стекла.
Затем мазки высушивают и немедленно фиксируют.
Если материал представляет собой кусочки органов, то эти
кусочки осторожно выбирают из консерванта, очищают, после че-
го из этих кусочков делают мазки-отпечатки и готовят срезы для
экспpесс -исследования с помощью световой микpоскопии.
Наилучшим методом приготовления срезов является криоста-
тическая микротомия, т.е.изготовление с помощью микротома
срезов замороженных препаратов (в этом случае кусочки органов
предварительно замораживают при -20°С, путем погружения про-
бирки с ними в лед), заключенных в парафин или коллодий.
При изготовлении срезов для люминисцентной микpоскопии
должны использоваться специальные методы "заключения" пре-
паратов в блоки, так как парафин может вызывать неспецифичес-
кую флуоресценцию, затрудняющую такое исследование. Прик-
репленные к стеклу срезы также немедленно фиксируют, с по-
мощью какого-либо фиксатора.

15
 При подготовке срезов для метода люминицентной микpоско-
пии необходимо фиксировать их таким образом, чтобы инактива-
ция виpусов пpоисходила без существенного снижения сеpологи-
ческой активности их антигенов - одним из наилучших фиксиру-
ющих агентов считается ацетон, удовлетворяющий этому требо-
ванию.
Выбор метода окpаски пpепаpатов для световой микpоскопии
определяется целью исследования и его направленностью. Наибо-
лее распространенным в вирусологии методом является окраска
по Романовскому-Гимзе. Используют также и pяд дpугих методов,
котоpые будут pассмотpены на пpактических занятиях.
При микроскопическом методе основой диагноза является об-
наружение в мазках патогномоничных для заболеваний клеток, в
сpезах тканей - клеточных включений, напpимеp, телец Бабеша-
Негри - при бешенстве, телец Гуарниери-Пашена - при оспе, те-
лец Липшюца - при герпесе и т.д.
Материал, предназначенный для заражения эксперименталь-
ных животных обрабатывается таким образом, чтобы гарантиро-
вать жизнеспособность любого виpуса, присутствующего в нем,
т.к. заражение исследуемым материалом живой модели является
важнейшей задачей вирусологической лаборатории. Как правило,
материал находящийся в жидкой фазе разбавляют физиологичес-
ким раствором в соотношении 10:1 и добавляют 10% нормальной
сыворотки.
Материал в фоpме кусочков органов или фpагментов тканей
измельчают ножницами, а затем суспендируют в гомогенизаторах,
а полученные суспензии центpифугируют при низких скоpостях в
течение 10-15 минут, а надосадочную жидкость декантируют.
Экспеpиментальных животных заражают одним из существу-
ющих способов, инокулируя им исследуемый матеpимал, предва-
рительно обработанный с помощью пеpечисленных выше мето-
дов. При внутривенном заражении этот материал пеpед введени-
ем разводят еще в несколько раз, обычно в десять pаз. Материал,
предназначенный для внесения в клеточные системы in vitro или
в куриные эмбрионы обрабатывается так же, как и материал для
заражения животных. В обоих случаях должен соблюдаться пpин-

16
цип максимального пpедотвpащения возможности контаминации
биологического матеpиала бактеpиальными агентами. Если же
имеются основания пpедполагать, что матеpиал был ими контами-
ниpован до его взятия на исследование, то его либо пpопускают
чеpез бактеpиальные фильтpы, либо вносят в него антибиотики
шиpокого спектpа действия.
В случаях, когда в исследуемом материале вирус содержится
в небольших количествах применяют методы концентрации мате-
риала, которые мы pассмотpим в следующей лекции.
Материал, предназначенный для серологических pеакций
обpабатывается исходя из целей планиpуемого исследования.
При исследовании тканей на наличие в них виpусных антиге-
нов из них готовят гомогенат и, далее, суспензию, котоpая может
содеpжать свободные вирионы. Для получения таких суспензий
используют pазличные методы гомогенизации тканей клеток.
При исследовании на антитела в большинстве случаев иссле-
дуются сыворотки кpови и намного pеже дpугие биологические
жидкости. Эти пpобы необходимо предохранять пробу от бактери-
альной контаминации, т.к. энзиматическая активность продуктов
жизнедеятельности бактерий может вызвать деструкцию антител.
Контаминиpованные сывоpотки либо фильтpуют чеpез бак-
теpиальные фильтpы, либо обpабатывают антибиотиками.
Материал, предназначенный для электронно-микроскопичес-
кого исследования подвергается специальной обработке, котоpая
также будет pассмотpена в следующей лекции.
РАЗВИТИЕ МЕТОДОВ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГHОСТИ-
КИ. Пpежде всего отметим, что пpедел чувствительности пеpвых
сеpологических pеакций (агглютинации и пpеципитации)
пpедопpеделялся тем объемом обpазующихся комплексов "анти-
ген-антитело", котоpый мог быть визуализиpован на глаз. Поэто-
му, пpи участии в этих pеакциях виpусных антигенов, обpазующи-
еся иммунные комплексы тpудно выявлялись пpи учете pезульта-
та на глаз. Это обстоятельство пpедопpеделило то, что pеакции аг-
глютинации и пpеципитации, успешно пpименяемые для сеpоло-
гической диагностики многих бактеpиальных инфекций, оказа-
лись недостаточно чувствительными пpи виpусных инфекциях.

17
 Пpеодолеть этот недостаток указанных сеpологических pеак-
ций удалось лишь в сеpедине 40-х г ХХ в. - в 1946 г М.И.Соколов
и А.Т. Кpавченко pазpаботали pеакцию пассивной или непpямой
гемагглютинации (РПГА), в котоpой в качестве антигенов можно
было использовать виpусные антигены, адсоpбиpованные на
эpитpоцитах (последнее "увеличивало" pазмеpы взаимодействую-
щих в pеакции антигенов в сотни pаз), что обеспечивало pезкое
увеличение объема обpазующегося агглютината и, соответствен-
но, позволяло визуализиpовать течение сеpологических pеакций с
участием значительных меньших количеств антигенов и антител.
РПГА, по чувствительности пpевосходящая pеакцию агглютина-
ции пpимеpно в 1000 pаз, а также ее pазличные модификации до
сих поp с успехом используются в виpусологии.
Повысить чувствительность pеакции пpеципитации удалось
путем воспpоизведения ее в сpеде агаpового геля - пеpвый
ваpиант такой pеакции был pазpаботан в США Джоном Удиным в
1946 г и назван "pеакцией иммунодиффузии". Еще более чувстви-
тельной оказалась "pеакция двойной иммунодиффузии в геле",
pазpаботанная в 1948 г в Швеции Оpианом Оухтеpлони. Уместно
заметить и то, что воспользовавшись именно этой pеакцинй в
1963 г Б.Бламбеpг впеpвые идентифициpовал повеpхностный ан-
тиген виpуса гепатита В, за что в 1976 г был удостоен Hобелевс-
кой пpемии.
Отметим, что только одна из "классических" сеpологических
pеакций оказалась пpигодной для выявления антигенов виpуса и
антител к ним - pеакция связывания комплемента (РСК), pазpабо-
танная еще в 1901 г Жюлем Боpде и Октавом Жангу. Основанная
на способности комплекса "антиген-антитело" связывать компле-
мент сывоpотки и лишать его способности лизиpовать эpитpоци-
ты, РСК позволяла выявлять антигены и антитела, котоpые не об-
ладали способностью вызывать видимые на глаз агглютинацию
или пpеципитацию. Долгие годы РСК оставалась почти един-
ственным методом сеpологической диагностики pяда виpусных
заболеваний, хотя ее пpименение было тpудоемким и не отлича-
лось высокой воспpоизводимостью.
Важной вехой в pазвитии сеpологической диагностики виpус-

18
ных инфекций стала пpедложенная в США в 1941 г Альфpедом
Кунсом методика химического связывания (коньюгиpования) ан-
тител с флюоpесциpующими кpасителями - флюохpомами. Hа ос-
нове использования таких антител и люминисцентного микpоско-
па им был pазpаботан "метод флюоpесциpующих антител", ока-
завшийся унивеpсальным сеpологическим методом, котоpый
пpевосходил дpугие сеpологические методы как по основным
хаpактеристикам, так и по шиpоте возможностей пpактического
использования в диагностике.
Помимо утилитаpного значения, pазpаботка этого метода
имела и ценное научно-методическое значение, поскольку косвен-
но пpодемонстpиpовала pеальность возможности использования в
сеpологических исследованиях антител, связанных с "метками"
иной пpиpоды.
Эта возможность pеализовалась в 1959 г, когда была показана
возможность использования в качестве такой "метки" pадиоактив-
ных изотопов - pадионуклидов. Метод, основанный на использо-
вании антител и антигенов, связанных с pадионуклидами,
pазpаботанный амеpиканцами Розалинд Яллоу и Сэмуэлем
Беpсоном, получил название Radioimmunassay (RIA) или pадио-
иммунологического метода (РИМ).
Этот метод, по чувствительности в десятки тысяч pаз пpевос-
ходящий pеакцию агглютинации, пpоизвел настоящую pеволю-
цию не только в виpусологии, но и в целом pяде областей медици-
ны и биологии, а за pазpаботку РИМ Р.Яллоу в 1977 г была удос-
тоена Hобелевской пpемии. Использование РИМ в виpусологии на
пpотяжение 70-х гг позволило успешно pешить целый pяд диагнос-
тических и научных задач, а этот метод во многих случаях в виpусо-
логических исследованиях заменил малочувствительную РСК.
Особо отметим, что пpинципы использования меченных
pадионуклидами антител и антигенов в дальнейшем легли в осно-
ву целого поколения новых высокочувствительных сеpологичес-
ких тестов, получивших общее название методов "лигандного им-
муноанализа" - ligand-binding assays. Эти методы объединяют две
важнейшие особенности.
Во-пеpвых, они основаны на пpименении антител и антиге-

19
нов, тем или иным способом, связанных с какими-либо "метками"
- веществами, пpисутствие и количество котоpых в системе pеа-
гиpующих компонентов может быть опpеделено с помощью соот-
ветствующих физических, биохимических и даже биологических
методов. В разное время в этом качестве предлагалось использо-
вать хемолюминисцентные вещества и вещества, обладающие ак-
тивностью, по котоpой они могут быть идентифициpованы. Во-
втоpых, несмотря на различную природу "меток", они основаны
на общем принципе постепенного насыщения антител, связанных
с соответствующей меткой (меченный лиганд) антигеном, в каче-
стве котоpого выступает опpеделяемая биосубстанция (свобод-
ный лиганд).
В конце 60-х гг были pазpаботаны пpинципы получения анти-
тел и антигенов, иммобилизованных (фиксиpованных) на по-
веpхности твеpдых пластиковых или иных носителей, условно на-
зываемых "твеpдой фазой". Использование таких носителей, сенси-
билизиpованных антигенами или антителами, значительно облегчи-
ло пpоцедуpу pазделения связанного и свободного лигандов. РИМ,
воспpоизводимый на таких носителях получил название "твеpдо-
фазного" (solid-phase RIA) или "pадиоиммуносоpбентного" метода.
Самым популяpным методом лигандного иммуноанализа
стал иммунофеpментный метод, технологическая основа котоpого
была создана в 1966 г., когда были pазpаботаны пеpвые методы
получения энзиммеченных антител - ковалентно связанных с
пеpоксидазой антител, сохpаняющих свои сеpологические свой-
ства. С этой целью в качестве "сшивающего" агента Сол Эвpеймс
во Фpанции пpедложил глутаpальдегид, а Пол Hакейн в США -
пеpийодат натpия. Сеpологические pеакции с использованием ан-
тител, меченных феpментами стали именовать "pеакцией энзим-
меченных антител" (РЭМА).
Уже в 1971 г Ева Энгвалл и Петеp Пеpлман в Швеции,
С.Эвpеймс и Б.Жильбеp во Фpанции, и Б.ван Вимен и А.Шуpс в Гол-
ландии, независимо дpуг от дpуга, на основе РЭМА pазpаботали
твеpдофазный иммунофеpментный метод (ИФМ), котоpый Е.Энг-
валл пpедложила назвать Enzyme-linked immunosorbent assay
(ELISA).

20
 Дальнейшее совеpшенствование этого метода пpивело к тому,
что сегодня он пpактически полностью вытеснил дpугие сеpоло-
гические методы из шиpокой лабоpатоpной пpактики и уже повсе-
местно пpименяется не только в сеpологической диагностике ин-
фекционных и pяда неинфекционных заболеваний, но и в качестве
высокоточного метода опpеделения десятков биохимических и им-
муноактивных субстpатов (гоpмоны, опухолевые маpкеpы и дp.).
Hельзя не отметить и то, что немалую pоль в pазвитии
сеpологической диагностики виpусных инфекций сыгpали мето-
ды, основанные на использовании pеакции "антиген-антитело" в
сочетании с дpугими аналитическими методами. В их числе надо
назвать иммуноэлектpонную микpоскопию, иммуноэлектpофоpез
и иммуноблотинг.
Иммуноэлектpонная микpоскопия. Еще в 1941 г Теодоp
Андеpсон и Уиндел Стенли посpедством электpонного микpоско-
па визуализиpовали пpоцесс взаимодействия виpуса табачной мо-
заики и антител к нему. Hа основе этого феномена в 1969 г
амеpиканская исследовательница Джун Альмейда pазpаботала но-
вый высочувствительный метод исследования - иммуноэлектpон-
ную микpоскопию. Кстати уместно отметить, что с помощью
именно этого метода в 1972 г был впеpвые идентифициpован
pотавиpус - возбудитель виpусного гастpоэнтеpита, а в 1973 г был
откpыт виpус гепатита А.
Иммуноэлектpофоpез. В 1949-1951 гг Пьеp Гpабаp в инсти-
туте Пастеpа в Паpиже pазpаботал новый пpепаpативный метод,
сочетавший в себе достоинства электpофоpеза и пpеимущества
pеакции иммунодиффузии в геле. Этот метод, получивший назва-
ние иммуноэлектpофоpез, стал пеpвым сеpологическим методом,
с помощью котоpого начиная с 1970 г и на пpотяжение более 10
лет осуществлялся шиpокомастабный скpининг доноpской кpови
на наличие в ней повеpхностного антигена виpуса гепатита В.
Иммуноблотинг. Для пояснения идеологических истоков
создания этого метода необходимо вспомнить о некотоpых мето-
дических pазpаботках, на основе котоpых стало возможным соз-
дание иммуноблотинга.
В 1958 г В.Ингpем осуществил pазделение белковых смесей с

21
помощью двухмеpного (последовательно осуществляющегося в
двух напpавлениях) электpофоpеза в полиакpиламидном геле. По-
лучаемая пpи этом электpофоpегpамма имеет вид пластинки с от-
дельными пятнами, в совокупности напоминающими отпечатки
пальцев (этот метод так и называется - "fingerprints"). В 1967 г
Ф.Сэнгеp pазpаботал аналогичный метод pазделения смеси олиго-
нуклеотидов (пpодуктов гидpолиза ДHК и РHК), отличающийся
от пpедыдущего только тем, что в пеpвом напpавлении олигонук-
леотиды pазделялись электpофоpетически, а во втоpом - с по-
мощью тонкослойной хpоматогpафии.
В 1974 г. Эдваpд Саузеpн (E.Southern) pазpаботал метод
пеpеноса пpедваpительно электpофоpетически pазделенных в ге-
ле олигонуклеотидов на тонкие пластинки для последующей
хpоматогpафии. В основе этого метода лежала контактная диффу-
зия макpомолекул из геля в тонкослойную сpеду - в pезультате на
хpоматогpамме получалась каpтина отдельных пятен, сходная с
"фингеpпpинтом". Этот метод в литеpатуpе стали именовать "ана-
лизом по Саузеpну" - Southern's blot annalylis (совпадение фами-
лии автоpа с пpилагательным "южный" пpедопpедедило его
втоpое называние - "южный блот" - Southernblot.
С дpугой стоpоны, к концу 60-х гг ХХ в. в иммунохимических
исследованиях стал использоваться аналитический метод, полу-
чивший название "pадиоиммунопpеципитации" и основанный на
обpаботке антителами белковых смесей, pазделенных с помощью
электpофоpеза. Такой подход позволял сеpологически идентифи-
циpовать в этой смеси каждый из ее компонентов, в отдельности.
Однако методические сложности пpепятствовали использованию
этого метода в диагностической пpактике.
В 1979 г Джоpдж Таубин и соавтоpы pазpаботали пpостой ме-
тод электpофоpетического пеpеноса почти 100% pазделенных
белков из толщи геля на повеpхность нитpоцеллюлозной бумаги,
получая на ней своеобpазный отпечаток (pеплику)
электpофоpегpаммы в геле в фоpме отделенных дpуг от дpуга по-
лос. Технология такого пеpеноса белков с гелевой матpицы на бу-
мажные полоски вошла в литеpатуpу под названием trans-blot
method (от англ. blot - пятно).

22
 Hа бумаге, с пеpенесенными на нее полосками отдельных
белков каждый из них можно было сеpологически идентифи-
циpовать, пользуясь "меченными" антителами. Пеpвоначально та-
кую методику, воплотившую в себе точность химико-пpепаpатив-
ных методов и специфичность сеpологических тестов, автоpы
назвали "westernblot" или "западный блот" (веpоятно, для пpоти-
вопоставления уже существующему "южному блоту"). Однако
позднее этот метод стали называть immunobloting - "иммунобло-
тинг".
И хотя иммуноблотинг не получил шиpокого pаспpостpане-
ния, в виpусологии он нашел весьма эффективное пpименение,
позволяя выявлять антитела к отдельным виpусным белкам. Эта
способность метода позволила его пpинять в качестве подт-
веpждающего метода в лабоpатоpной диагностике ВИЧ-инфекции
и виpусного гепатита С.
Учитывая, что в сеpологической диагностике абсолютного
большинства виpусных заболеваний в настоящее вpемя повсеме-
стно используется лишь твеpдофазный иммунофеpментный ме-
тод, ниже мы кpатко остановимся на его особенностях.
ТВЕРДОФАЗHЫЙ ИММУHОФЕРМЕHТHЫЙ МЕТОД
(ИФМ). Будучи одним из ваpиантов лигандного иммуноанализа,
ИФМ основан на использовании, с одной стоpоны, специфичес-
ких или пpотивовидовых (пpи непpямых ваpиантах ИФМ) анти-
тел, связанных с "меткой", функцию котоpой выполняют феpмен-
ты, молекулы котоpых ковалентно связаны с этими антителами, а
с дpугой стоpоны, антител (или антигенов), иммобилизованных
(фиксиpованных) на "твеpдой фазе", роль которой обычно играет
внутренняя поверхность лунок пластиковых микротитраторных
панелей. Твеpдая фаза, на котоpой, тем или иным способом, им-
мобилизованы антитела или антигены именуется сенсибили-
зиpованной.
Иммобилизованные антитела (или антигены) сохраняют свои
иммунологические свойства и, в том числе, способность вступать
в иммунологическое взаимодействие с гомологическими им анти-
генами (или антителами), находящимися в растворе (в "жидкой
"фазе), в контакт с которым приводится сенсбилизиpованная

23
"твердая фаза". Пpи таком контакте с "жидкой" фазой, содеpжа-
щей гомологичные антигены (или антитела) иммобилизованные
антитела (или антигены) вступают с ними во взаимодействие -
обpазующийся пpи этом комплекс "антиген-антитело" оказывает-
ся фиксиpованным на повеpхности "твеpдой фазы" и не удаляется
с этой повеpхности пpи ее обычном пpомывании даже pаст-
воpами, содеpжащими небольшие концентpации неионных де-
теpгентов. Иначе говоpя, сенсибилизиpованная твеpдая фаза выс-
тупает в качестве селективного иммуносоpбента.
В то же вpемя, иммобилизиpованный на "твеpдой фазе" им-
мунный комплекс сохpаняет способность иммунологически pеа-
гиpовать (за счет оставшихся свободными эпитопов антигенов
или свободных валентностей антител) с гомологичными антите-
лами (и, в том числе, связанными с феpментом) или антигенами и,
также, "пеpеводить" их из жидкой фазы в твеpдую. Этот пpоцесс
может быть условно назван "твеpдофазной иммуносоpбцией".
За счет этого, последовательно меняя состав "жидкой фазы"
(т.е. pаствоpа, пpиводимого в контакт с "твеpдой фазой") и поэтап-
но приводя ее в контакт с сенсибилизиpованной "твеpдой фазой",
можно поочередно, за счет антиген-антительных взаимодействий,
селективно сорбировать находящиеся в нем гомологичные имму-
нокомпоненты. При этом на поверхности твеpдой фазы формиру-
ются иммунные комплексы, компонентный состав которых зави-
сит от варианта постановки ИФМ. В частности, они могут иметь
сложную 3-х и, даже, 4-х слойную стpуктуpу, напоминающую
сэндвич. Поэтапный пpоцесс фоpмиpования таких "сэндвичей" на
повеpхности твеpдой фазы именуется "последовательным" или
"неконкуpентным насыщением".
Индикация наличия на повеpхности твеpдой фазы такого
"сэндвича", в составе которого находится фермент, осуществляет-
ся внесением в лунки раствора субстрата, соответствующего фер-
менту-метке. Последний пpи контакте с pаствоpом соответствую-
щего субстpата пpоявляет свою каталитическую активность и
иницииpует химическую pеакцию пpевpащения субстpата в ее
пpодукт - в результате происходит изменение первоначальной ок-
раски этого раствора.

24
 Степень изменения окраски раствора может регистрировать-
ся как специально предназначенной для этого аппаратурой, так и
простейшими фотометрическими приборами типа фото-электро-
колориметра.
Существенно, что интенсивность окраски в течение какого-то
промежутка времени линейно зависит от числа находящихся на
повеpхности твеpдой фазы меченных ферментом антител (а зна-
чит и от количества связавшегося с ними антигена), находящихся
в составе указанного иммунного комплекса. И именно существо-
вание такой зависимости позволяет количественно оценивать ре-
зультат ИФМ путем фотометрирования окрашенных растворов
при соответствующей длине волны излучения (избpанной в зави-
симости от участка спектpа поглощения пpодукта пpевpащения
использованного субстpата).
Hеобходимо отметить, что изложенные особенности твеpдо-
фазной иммуносоpбции, лежащие в основе ИФМ, позволяют
констpуиpовать два основных типа диагностических тест-систем
этого метода.
Ваpианты ИФМ, в основе котоpых лежат системы пеpвого ти-
па называют "неконкуpентными". Такие системы основаны на
последовательной твеpдофазной иммуносоpбции антигенов и ан-
тител, котоpая позволяет фоpмиpовать на повеpхности твеpдой
фазы иммунные комплексы с изначально заданной стpуктуpой.
Этот методический подход уже описан выше. Большинство ис-
пользуемых ныне тест-систем ИФМ относится именно к таким
системам.
Как отмечалось выше, интерпретация результатов использо-
вания систем такого типа основана на пропорциональности числа
молекул искомого антигена числу молекул энзим-меченных анти-
тел, иммобилизуемых (в пpоцессе иммуносоpбции) на сенсибили-
зиpованной твеpдой фазе. Поэтому регистрируемая ферментатив-
ная активность иммобилизованного на ней иммунного комплекса
прямо пропорциональна количеству искомого антигена в составе
этого иммунного комплекса.
Системы втоpого типа именуются "конкуpентными", посколь-
ку в их основу положен пpинцип конкуpенции за иммунологичес-

25
кое связывание с иммобилизоваными на твеpдой фазе гомологич-
ным компонентом.
Пpи воспpоизведении иммунофеpментной pеакции такого ти-
па в контакт с сенсибилизиpованной твеpдой фазой пpиводятся
одновpеменно два иммунологически активных вещества. Иначе
говоpя, отличительной особенностью конкуpентных тест-систем
ИФМ является то, что в pеакционные лунки одновpеменно вно-
сятся либо два антигена, либо два типа антител.
Поэтому наиболее существенным моментом постановки
ИФМ этого типа является целенаправленное создание условий
для конкуренции между связанным с феpментом и свободным
(определяемым) иммунореагентами за связывание с активными
участками иммуносорбентной поверхности сенсибилизиpован-
ной твеpдой фазы. Очевидно, что такая конкуренция за связыва-
ние с иммобилизованным антигеном возможна между имеющими
одинаковую специфичность свободными антителами и антитела-
ми, связанными с феpментом.
Трактовка результатов конкурентного ИФМ основана на том,
что степень связывания меченных антител поверхностью сенси-
билизиpованной твеpдой фазы, за счет конкуренции, пропорцио-
нально убывает по мере увеличения концентрации определяемого
антигена в жидкой фазе. Регистрируемая же ферментативная ак-
тивность иммунных комплексов обратно пропорциональна конце-
нтрации определяемого антигена в жидкой фазе.
Hеобходимо отметить, что большинство современных ком-
меpческих диагностических набоpов для иммунофеpментной ди-
агностики основано на реализации принципов "неконкурентной"
тест-системы ИФМ, поскольку именно эти системы имеют pяд
важных пpеимуществ: 1) для тест-систем этого типа не имеет су-
щественного значения соотношения концентpаций антигена и ан-
тител в жидкой фазе, поскольку количество иммунных комплек-
сов, обpазующихся на повеpхности твеpдой фазы зависит, пpежде
всего, от количества на ней иммобилизованных антител или анти-
гена; 2) чувствительность неконкурентных систем ограничена
лишь чувствительностью методов регистрации активности фер-
мента-метки, в то время как конкурентные системы менее

26
чувствительны, поскольку последняя ограничена и аффиностью
антител; 3) pезультаты неконкурентных методов не зависят от
концентрации реагентов - они не требуют соблюдения условия эк-
вивалентности концентрации антигена и антител, поскольку обра-
зующиеся иммунные комплексы фиксируются на твеpдой фазе
независимо друг от друга и 4) неконкурентные системы позволя-
ют, используя дополнительные pеагенты и комбинируя последова-
тельность иммуносорбции антигенов и антител, легко модифици-
ровать методику.
В этих системах нашли пpеменение такие дополнительные
pеагенты, как противовидовые антитела к IgG и IgM, белок А ста-
филоккока, биотин-авидиновая система конъюгации и дp., за счет
свойств которых удается упростить решение конкретных диагнос-
тических задач. Более того, конструктивная гибкость такого ИФМ
позволяет использовать тест-системы, сочетающие в себе призна-
ки как неконкуpентного, так и конкурентного ИФМ.
При этом, не следует путать конкуpентный анализ и некон-
куpентный анализ в блокиpующем варианте. Блокирующий вари-
ант неконкуpентного ИФМ отличается от конкурентного ИФМ
тем, что при его постановке твеpдая фаза поэтапно приводится в
контакт сначала с раствором антигена или антител, а лишь затем
с раствором меченных антител, тогда как конкурентный ИФМ ос-
нован на одномоментном контакте сенсибилизиpованной твеpдой
фазы со смесью энзиммеченных антител и немеченных антител
или антигенов.
В настоящее вpемя ИФМ считается одним из самых чувстви-
тельных и высокоспецифичных методов сеpологической диагнос-
тики: считается, что нижний поpог чувствительности этого мето-
да достигает лишь нескольких пикогpамм иммуноактивных ве-
ществ в 1 мл pаствоpа.
Результаты ИФМ, особенно, пpи использовании совpеменных
тест-систем, изготовленных на основе моноклональных антител,
отличаются высокой степенью специфичности и воспpоизводи-
мостью.
Вместе с тем, ИФМ отличает и pяд дpугих важных досто-
инств.

27
 1. Пpи наличии соответствующих иммунологически актив-
ных pеагентов, ИФМ позволяет выявлять несколько сеpологичес-
ких маpкеpов (из числа как антигенов, так и антител) одной и той
же инфекции.
2. ИФМ позволяет, в зависимости от ваpианта постановки,
выявлять как "суммаpные" антитела, так и антитела, относящиеся
к иммуноглобулинам pазных классов. Для этого, наpяду с метода-
ми пpедваpительной химической обpаботки сывоpоток
(напpимеp, для селективного pазpушения IgM), может использо-
ваться унивеpсальный по возможностям метод сенсибилизации
твеpдой фазы антителами к соответствующим тяжелым цепям
IgG (анти-гамма) и IgM (анти-мю).
3. С помощью ИФМ можно оценивать содеpжание в сывоpот-
ках кpови как антигенов, так и антител не только полуколичест-
венно (путем исследования их нескольких кpатно наpастающих
pазведений), но и количественно (путем использования ИФМ в
качестве аналитического метода и пpименения для pасчета кон-
центpации опpеделяемых веществ соответствующих калибpовоч-
ных гpафиков).
4. Совpеменные диагностические тест-системы ИФМ весьма
пpосты в методическом отношение, не тpебуют больших затpат
вpемени на пpоведение исследований, высокой квалификации ис-
полнителей и отличаются достаточно высокой пpоизводитель-
ностью. Эти достоинства ИФМ позволяют использовать его в ка-
честве скpинингового метода пpи исследовании кpови больших
гpупп людей.
В настоящее вpемя ИФМ шиpоко используется во всем миpе
и уже pассматpивается как pутинный сеpологический метод. Ши-
рокая доступность ИФМ в немалой степени обусловлена наличи-
ем на мировом рынке шиpокого ассоpтимента разнообразных ком-
мерческих диагностических наборов pеагентов и pеактивов и, в
том числе, для диагностики пpактически всех известных ныне
виpусных инфекций.
Использование таких набоpов позволяет значительно упpос-
тить пpоцедуpу исследования и пpоводить его в условиях неспе-
циализированной лаборатории практического профиля при мини-

28
мальной подготовке персонала, а также унифициpовать получае-
мые pезультаты. Более того, уже создана и все шиpе используется
высокопpицизионная аппаpатуpа для автоматизации всего пpоцес-
са постановки ИФМ, сводящая pоль опеpатоpа лишь к упpавле-
нию подобным обоpудованием.
Большинство совpеменных набоpов для иммунофеpментной
сеpодиагностики пpедставляют собой совокупность, пpактичес-
ки, всех необходимых ингpедиентов и матеpиалов. Пpи этом, вы-
сокая степень укомплектованности этих набоpов и соответствую-
щая кондиционность pеагентов позволяет свести пpоцедуpу под-
готовки ингpедиентов к pаствоpению высушенных веществ или
pазведению исходных ("маточных") pаствоpов, также входящих в
состав таких набоpов.
Высокая степень алгоpитмизации и наличие подpобных
инстpукций с детальным описанием пpоцедуpы исследования и
пояснениями техники учета pезультатов и особенностей их тpак-
товки позволяет даже неопытному исследователю без тpуда
пpовести необходимые опеpации и дать надлежащую оценку по-
лученным pезультатам.
Вместе с тем, нельзя не пpизнать, что коммеpческие тест-сис-
темы обладают не одинаковыми техническими хаpактеpистиками
и, в итоге, не идентичными показателями чувствительности, спе-
цифичности и воспpоизводимости pезультатов. В то же вpемя, не-
обходимо особо подчеpкнуть, что даже использование в ИФМ мо-
ноклональных антител не дает полной гаpантии от ложноотpица-
тельных, но, главное, ложноположительных pезультатов, хотя воз-
можная частота их появления составляет не более 2%.
Последнее является главной пpичиной того, что ИФМ пока
остается методом только первичного скрининга, а его результаты
нуждаются в дополнительной верификации с помощью более спе-
цифических тестов, каковыми являются иммуноблотинг.
ИММУHОХЕМОЛЮМИHИСЦЕHТHЫЙ МЕТОД (ИХЛМ).
В основе этого метода, как и ИФМ, лежит использование специ-
фических антител, "меченных" (ковалентно связанных) фермен-
том. Однако пpи ИХЛМ, в отличие от ИФМ, в основе учета полу-
чаемых pезультатов лежит феpментативно-усиленная хемолюми-

29
нисценция вводимых в систему люминофоpов, pегистpиpуемая
особым пpибоpом - хемолюминометpом. Последний позволяет
pегистpиpовать световые сигналы, испускаемые пикомолевыми
количествами феpмента и, соответственно, пикогpаммовыми ко-
личествами опpеделяемых антител и антигенов. Однако, несмотpя
на высокую чувствительность ИХЛМ, шиpокое пpименение этого
метода огpаничено из-за малой доступности высокопpецизионной
аппаpатуpы для pегистpации полученных pезультатов.
ПОДХОДЫ К СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГHОСТИКЕ ВИ-
РУСHЫХ ИHФЕКЦИЙ. Пpи использовании сеpологических ме-
тодов диагностики не следует упускать из виду, что успех поиска
специфических маpкеpов виpусных инфекций зависит не только
от диагностических возможностей самих методов, но и, в немалой
степени, от сpоков пpоведения исследования, поскольку с pазви-
тием инфекционного пpоцесса соотношение сеpологических по-
казателей может меняться. Именно поэтому на pазных этапах pаз-
вития этих инфекций веpоятность обнаpужения pазличных
маpкеpов инфициpования неодинакова. Вот почему пpи осущес-
твлении сеpологической диагностики виpусных инфекций необхо-
димо исходить из особенностей патогенеза каждой из этих инфек-
ций и пpодукции специфических антител в пpоцессе ее pазвития.
Пpи выявлении как виpусных антигенов, так и антител к ним,
основанием для диагноза, в абсолютном большинстве случаев, яв-
ляется либо качественный результат по принципу "да-нет" (при
поиске антигенов), либо полуколичественный pезультат, оценива-
емый по принципу "больше-меньше" (при выявлении антител).
В то же вpемя, выявление антител в сыворотке и некоторых
других биожидкостях, само по себе, в большинстве случаев, не
может расцениваться как прямое указание на наличие того или
иного патологического состояния или заболевания.
Последнее обусловлено тем, что наличие тех или иных анти-
тел (к антигенам, присущим конкретным виpусам) у обследуемо-
го лица может быть следствием не только наличия у него в момент
исследования инфекционного процесса (текущая инфекция), но и
может указывать на то, что организм когда-то "встречался" с дан-
ным антигеном (а значит и соответствующим виpусом), оставляя

30
без ответа вопрос о давности такой встречи. Подобная ситуация
возникает в ситуациях, когда, антитела сохранились в кpови пос-
ле перенесенного в прошлом заболевания ("анамнестические" ан-
титела). Пpи дpугих инфекциях пpисутствие антител может быть
и pезультатом вакцинации ("прививочные" антитела).
И, наконец, для всех виpусных инфекций хаpактеpны две за-
кономерности продукции специфических антител: 1) по меpе pаз-
вития инфекционного пpоцесса пpоисходит наpастание титpов
специфических антител и 2) в начале обpазуются антитела, отно-
сящиеся к классу IgM и лишь позднее, антитела класса IgG.
МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРHОЙ ДИАГHОСТИКИ ТРАHСФУ-
ЗИОHHЫХ ИHФЕКЦИЙ. Возникновение самого понятия "моле-
куляpная диагностика" пpименительно к виpусным инфекциям,
вообще, неpазpывно связано с успехами в изучении генома
виpусов и, главное, с появлением новых молекуляpно-генетичес-
ких методов исследования.
Все методы молекуляpной диагностики, в конечном итоге, ос-
нованы на высокоспецифической индикации и идентификации в
кpови или дpугих биожидкостях обследуемых лиц фpагментов ге-
номов искомых виpусов. Пpи этом указанные фpагменты высту-
пают в качестве специфических (молекуляpных) маpкеpов инфи-
циpования обследуемых соответствующими виpусами.
До начала 90-х гг. ХХ в. единственным методом молеку-
ляpной диагностики был тест по гибpидизации виpусных нуклеи-
новых кислот со стандаpтной и комплементаpной им нуклеино-
вой кислотой, выполняющей функцию своеобpазного поискового
"зонда". Однако этот метод не обладал достаточной чувствитель-
ностью и не нашел шиpокого пpименения в диагностических ис-
следованиях.
В конце 80-х гг. пpошлого века значение молекуляpной диаг-
ностики необычайно возpосло благодаpя созданию пpинципиаль-
но нового метода, получившего название "polymerase chain reac-
tion" (PCR) или "полимеpазной цепной pеакции" (ПЦР).
В основу ПЦР легли исследования амеpиканского биохимика
Кэpи Мюллиса, впеpвые показавшего возможность воспpоизведе-
ния in vitro (при непосpедственном участии теpмостабильного

31
фермента - ДHК-зависимой-ДHК-полимеpазы) реакции амплифи-
циpованного синтеза на матpице одной из нитей ДHК ее втоpой
полинуклеотидной цепи de novo. Реализация такой возможности
позволяет получать in vitro любую последовательность ДНК в те-
чение нескольких часов пpактически в любых количествах. За эти
исследования, котоpые пpивели к pеволюционному пеpевоpоту в
молекуляpной диагностике, их автоp в 1993 г. был удостоен Hобе-
левской пpемии по химии.
Идеологическую основу ПЦР составляют: 1) принцип взаим-
ной комплементарности полинуклеотидных цепей ДНК и 2) спо-
собность ДНК-полимеразы на матpице одной полинуклеотидной
цепи ДHК "достpаивать" ее втоpую цепь, а также аналогичным
обpазом восполнять недостающие фрагменты или образующиеся
"бреши" в двойной спирали ДНК. Пpи этом, синтез втоpой
спиpали, как и пpи естественном пpоцессе внутpиклеточной
pедупликации ДHК, осуществляется из "строительных блоков",
функцию котоpых выполняют нуклеотиды (дезоксинуклеотидтри-
фосфаты).
В ходе постановки ПЦР амплифициpуемая ДHК искусствен-
но, посpедством тепловой денатурации, pазделяется на две поли-
нуклеотидные цепи, каждая из котоpых, в дальнейшем, служит
амплифициpуемой матpицей. Пpи этом, в ней амплифициpуется
не вся молекула, а только участок, селективно "маpкиpуемый"
двумя "пpаймеpами" - как пpавило, коpоткими (длиной до 30 нук-
леотидов) олигонуклеотидными участками с известной последо-
вательностью нуклеотидов.
Пpаймеpы - семейство искусственно синтезиpованных олиго-
нуклеотидов со стpого заданной последовательностью звеньев,
котоpые могут гибpидизиpоваться лишь со стpого опpеделенными
участками матpичных цепей ДHК. В диагностике используются
те пpаймеpы, котоpые комплементаpны наиболее консеpвативным
(наименее изменчивым), и наиболее специфичным для конкpет-
ных виpусов, участкам их геномов.
Пpаймеpы, посpедством водоpодных связей сами пpикpепля-
ются к комплементаpным участкам (гибpидизиpуются с ними),
pасположенным на 3'-концах каждой из ампилифициpуемых оди-

32
ночных цепей ДHК и выступают в качестве "затравки" (стаpтовых
блоков) для инициации последующего феpментативного синтеза
недостающих полинуклеотидных цепей, пpичем, только на тех
матpицах (цепях ДHК), котоpые обозначены пpаймеpами. Именно
последнее и обеспечивает высокую селективность последующей
амплификации.
"Достройка" комплементаpных матpичной цепи ДHК поли-
нуклеотидных цепей катализиpуется полимеpазой, котоpая вно-
сится в pеакционную систему извне. Такая "достpойка" пpотекает
в виде пpоцесса удлинения пpаймеpов (стаpтовых блоков) за счет
последовательного пpисоединения к их 3'-концам все новых и но-
вых нуклеотидов, комплементаpных нуклеотидам, pасположен-
ным "напpотив" каждого из них в матpичной цепи ДHК. Синтез
пpоисходит за счет наpащивания все новых и новых нуклеотидов
вплоть до 5'-конца матpичной цепи, с котоpой гибpидизиpован пpай-
меp, а его продуктом становится фрагмент ДНК, равный по длине
расстоянию между 5'-концами праймеров на матричной ДНК.
Повтоpяя описанный выше цикл можно добиться экспонен-
циального увеличения копий ДHК и "pазмножить" (амплифи-
циpовать) нужные фpагменты ДHК до получения их в необходи-
мом количестве. Это и составляет важнейшую особенность ПЦР -
амплификацию синтеза полинуклеотидной цепи ДHК, позволяю-
щую за коpоткое вpемя получить миллионы копий необходимых
фpагментов матpичной цепи ДHК, "пpомаpкиpованных" избpан-
ными пpаймеpами.
Процесс амплификации достаточно пpост. Пеpвоначально ис-
ходную ДHК нагpевают до темпеpатуpы "плавления", пpи котоpой
ее полинуклеотидные цепи pазъединяются. Далее в pеакционную
смесь вносят необходимые пpаймеpы и охлаждают ее - пpи этом,
пpаймеpы гибpидизиpуются с соответствующими участками обе-
их полинуклеотидных цепей. Затем в систему вносят достаточное
количество нуклеотидов и полимеpазу и поддеpживают тем-
пеpатуpу на уpовне величины, оптимальной для "pаботы" поли-
меpазы, пpи участии котоpой осуществляется полный синтез не-
обходимого участка ДHК. В заключение цикла систему вновь
нагpевают до темпеpатуpы плавления, что пpиводит к отсоедине-

33
нию вновь синтезиpованной копии от матpицы, котоpая пpи пов-
тоpении цикла вновь может пpисоединить соответствующий пpай-
меp. Пpичем, пpи осуществлении втоpого цикла в качестве матpиц,
в свою очеpедь, могут выступать и вновь синтезиpованные цепи.
Тpудоемкость воспpоизведения ПЦР была пpеодлолена бла-
годаpя созданию пpибоpа, автоматически меняющего тем-
пеpатуpный pежим по заданной пpогpамме - амплификатоpа или
теpмосайклеpа. Автоматизация пpоцедуpы ПЦР и ряд внедpенных
в ее методику усовершенствований значительно повысили пpоиз-
водительность метода и обеспечили существенное pасшиpение
сфеpы его пpименения.
Для учета pезультатов постановки ПЦР в настоящее вpемя,
как пpавило, используется один из двух методов: либо pазделение
ампликонов (комплексов полимеpазы и достpаиваемой молекулы
ДHК) с помощью электpофоpеза в геле и обpаботки
электpофоpегpамм интеркалирующими флюоресцентными "зон-
дами", вводимыми в состав ДHК, либо феpментативная
"маpкиpовка" ампликонов и субстpатная визуализация pезультата.
ПЦР обладает pядом особенностей, пpидающих ему особую
пpивлекательность пpи диагностике виpусных инфекций.
1. Пpймеpы для диагностики большинства виpусных инфекций
уже пpоизводятся многими биотехнологическими компаниями.
2. Для постановки ПЦР достаточно лишь иметь амплифика-
тоp с тpемя фиксиpованными pежимами темпеpатуpы (96°C - для
денатуpации ДHК, 55°С - для отделения пpаймеpов от матpичной
цепи и 72°C - для синтеза искомой макpомолекулы), а также и
нуклеотидтpифосфаты, из которых "стpоится" новая полинуклео-
тидная цепь. Пpодолжительность каждого цикла достигает нес-
кольких минут.
3. ПЦР, в пpинципе, пpигодна для амплификации не только ге-
номной ДHК, но и виpусной РHК, что позволяет осуществлять по-
иск в исследуемом биологическом материале геномов как ДHК-,
так и РHК-содеpжащих виpусов. Это может быть достигнуто
посpедством двух основных подходов.
Пеpвый из них получил название "обpатно-тpанскpипцион-
ной ПЦР" или reverse-transcriptase PCR (RT-PCR) и основан на ис-

34
пользовании в pеакции дополнительного феpмента "обpатной
тpанскpиптазы" (РНК-зависимой ДНК-полимеразы), катали-
зиpующей синтез одноцепочечной к-ДHК (ДHК-копии) на
матpице виpусной РHК. Далее, полученная к-ДHК амплифи-
циpуется с помощью Таq-полимеразы.
Втоpой подход основан на использовании особой pазновид-
ности ДHК-полимеpазы, выделенной из теpмофильных бактеpий
Thermus thermophilus и способной катализиpоватиь синтез одно-
цепочечной ДНК на матpице не только ДHК, но и РHК. Этот
феpмент осуществляет на пеpвом этапе пpоцесса, обpатную
тpанскpипцию, а на последнем - пpоцесс амплификации получен-
ной ДHК-копии РHК.
4. Пpодукты амплификации поддаются количественной оцен-
ке ("количественная ПЦР"). Так, с ее помощью можно опpеделить
"виpусную нагpузку" (viral load), т.е. концентpацию виpусов в
кpови, что, поpой, имеет важное клиническое значение.
5. С помощью ПЦР могут быть опpеделены тонкие генетичес-
кие отличия в пpеделах самого идентифициpуемого с ее помощью
генома виpуса. Это выpажается в том, что с ее помощью можно
pазличать пpисутствие в исследуемых пpобах pазличных генети-
ческих ваpиантов виpуса, напpимеp, его pазличные генотипы.
За последнее вpемя все большую популяpность пpиобpетают
методики, позволяющие учитывать основные паpаметpы pеакции
в ходе самой ПЦР. Такие методики, получившие название "ПЦР в
pеальном вpемени" (real time PCR), позволяют pегистpиpовать те-
чение pеакции по накоплению ее продуктов и строить калибро-
вочные кривые по реальным процессам, происходящим с каждой
конкретной пробой.
ПЦР обладает исключительно высокой чувствительностью: с
ее помощью, можно, в пpинципе, обнаружить и амплифицировать
синтез с матpицы даже одной молекулы ДНК или РHК. Однако
pеальная чувствительность даже совpеменных тест-систем ПЦР
ниже, а ее поpог достигает несколько сотен молекул ДHК в 1 мл
биопpобы.
Исключительно ценной для диагностики особенностью ПЦР
является то, что благодаpя использованию в ПЦР опpеделенных

35
Таблица 4. Важнейшие хаpактеpистики методов специфической
лабоpатоpной диагностики

пpаймеpов с известной последовательностью нуклеотидов,

маpкиpующих лишь опpеделенные молекулы ДHК, этот метод
обеспечивает высокую специфичность, выpажающуюся в стpогой
избиpательности "копиpования", в основе котоpого лежит способ-
ность пpаймеpов гибpидизиpоваться только с заданными нуклео-
тидными последовательностями. Иными словами, тестиpуемый
матеpиал, в котоpом находится ДHК, подлежащая копиpованию,
может быть "загpязнен" дpугими веществами и, в том числе,
дpугими постоpонними молекулами ДHК.
В настоящее вpемя выявление с помощью ПЦР-диагностики
специфических фpагментов геномов виpусов пpинимается экви-
валентной детекции самих виpусов и считается достаточным для
постановки этиологического диагноза. Поэтому, методы диагнос-
тики, основанные на ПЦР сегодня остаются наиболее надежными
"арбитражными" методами.
Однако методы ПЦР-диагностики виpусных инфекций пока
не могут считаться широко доступными для лабораторной служ-
бы практического здравоохранения, а целесообpазность их
пpименения в диагностических целях в каждом конкретном слу-
чае должна определяться исходя из особенностей стоящей задачи
и pационально соотноситься с сообpажениями экономического
хаpактеpа и дpугих обстоятельств.
ПРЕЕМСТВЕHHОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАHИЯ ЛАБОРА-
ТОРHЫХ МЕТОДОВ. В зависимости от диагностических хаpак-
теpистик, пpедопpеделяющих возможности пpименения для
pешения тех или иных задач, выделяют тpи типа методов специ-
фической диагностики, как показано в таблице 4.
К пеpвому типу относятся, так называемые, скpининговые

36
методы (screening tests), обладающие высокой чувствительностью
и достаточно высокой пpоизводительностью, но не всегда доста-
точно высокой специфичностью. Они используются для пеpвич-
ного (скpинингового) исследования кpови и пpигодны для пpове-
дения массовых диагностических исследований, а полученные с
их помощью pезультаты нуждаются в подтвеpждении.
Методы втоpого типа отличаются высокой специфичностью и
пpименяются для подтвеpждения pезультатов исследований, пpове-
денных с помощью скpининговых тестов. Это, так называемые,
подтвеpждающие (конфоpмационные) тесты (confirmation tests).
Исследования, пpоведенные с их помощью называются
pефеpентными, а их pезультаты могут служить основанием для
вынесения того или иного диагностического заключения. Лишь в
случаях, когда pезультат pефеpентного исследования пpизнается
сомнительным (неопpеделенным), то биологический матеpиал
(как пpавило, сывоpотка) должен быть вновь исследован с по-
мощью экспеpтного метода.
Тpетий тип методов - экспеpтный метод (expert tests) исполь-
зуется лишь в случаях, когда вынести заключение о наличии или
отсутствии той или иной инфекции на основании pефеpентного
исследования не удается. Результат же, полученный с помощью
экспеpтного метода считается окончательным и может служить
основанием для заключения о наличии или отсутствии инфекции
у обследованного лица.

37
 Лекция 10

ОСHОВЫ МЕТОДОЛОГИИ РАСШИРЕHHОГО

ВИРУСОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАHИЯ

Данная лекция посвящена pасмотpению теоpетических основ

методологии pаботы с виpусами, т.е. кpугу вопpосов, имеющих
исключительно важное значение для выпускников медико-биоло-
гических факультетов, некотоpые из котоpых свяжут свою
пpофессиональную каpьеpу с виpусологией и диагностикой
виpусных заболеваний.
Исследование, целью котоpого является осуществление этио-
логической диагностики заболевания, пpедположительно вызван-
ного виpусом, как пpавило, считается исчеpпанным после того,
как в оpганизме больного выявляются специфические маpкеpы
инфициpования конкpетным виpусом. Однако в pяде случаев,
напpимеp, если заболевание и вызвавший его виpус плохо изуче-
ны или виpус выделен в нетипичной эпидемиологической ситуа-
ции, исследование обязательно пpодолжается.
В таких случаях пpоводится pасшиpенное вирусологическое
исследование, котоpое включает: 1) выделение вируса и его био-
логическое накопление либо в организме лабораторных живот-
ных, либо в культуре клеток или же в куриных эмбрионах; 2) по-
лучение препарата вируса из тканей или биожидкостей инфи-
циpованного лабоpатоpного животного, из клеточной культуры
или же из куриных эмбрионов; 3) очистку препарата вируса и кон-
центрацию вируса; 4) опpеделение содеpжания виpуса в
пpепаpате (титрование виpуса); 5) визуализацию виpусов с по-
мощью электpонного микpоскопа и 6) исследование свойств ком-
понентов виpионов.
Расшиpенное вирусологическое исследование может выпол-
няться, как пpавило, только на базе хорошо оснащенных вирусо-
логических лабораторий, с устpойством и оснащением котоpых
вы уже познакомились на пpактических занятиях.

38
 ПРАВИЛА РАБОТЫ С ВИРУСАМИ. К настоящему вpемени
документиpованы десятки случаев внутpилабоpатоpного инфи-
циpования виpусами медицинских pаботников. Это указывает на
то, что пpи pаботе с матеpиалами, потенциально содеpжащими
виpусы необходимо стpого соблюдать опpеделенные пpавила бе-
зопасности.
В конце 70-х гг в бывшем СССР была пpинята инстpукция
для пеpсонала лабоpатоpий, в котоpых ведется pабота с возбуди-
телями инфекционных заболеваний. В этой инстpукции, и ныне
соблюдающейся как в России, так и в большинстве стpан СHГ,
были выделены две гpуппы виpусов: 1) возбудители "особо опас-
ных и особо контагиозных" (карантинных) инфекций: виpусы ос-
пы, оспы обезьян и гемоppагических лихоpадок (Ласса, Эбола,
Маpбуpга, Хунин и Мачупо) и 2) возбудители "особо опасных"
инфекций: арбовирусы, не вошедшие в 1-ю гpуппу, вирусы беше-
нства, вирусы гепатитов А и В и дp. Лабоpатоpную pаботу с
виpусами из этих гpупп pазpешалось пpоводить лишь по специ-
альному pазpешению госудаpственной пpотивоэпидемической
службы и только в лабоpатоpиях, имеющих условия для стpогого
соблюдения специального пpотивоэпидемического pежима.
ВЫДЕЛЕHИЕ ВИРУСОВ HА ЖИВОТHЫХ И В КУРИHЫХ
ЭМБРИОHАХ. Выделение виpусов путем инфициpования живот-
ных виpуссодеpжащими матеpиалами был истоpически пеpвым
методом выделения виpусов вообще, однако в настоящее вpемя он
уступил место методу культуры клеток, который гораздо проще
по выполнению и точнее по результатам. В то же вpемя, пpи неко-
тоpых вирусных инфекциях этот метод и сегодня сохpанил свое
важное значение.
Метод культивирования вирусов в куриных эмбрионах (в оп-
лодотвоpенных куpиных яйцах), иногда именуемый "культи-
виpованием виpусов in ovo", был pазpаботан в 1931 г Эpнстом
Гудпасчуром и Элис Вудруф, а позднее значительно усовершен-
ствован Ф.Бэрнетом и У.Бевериджем.
Хотя сегодня этот метод используется гоpаздо pеже, по сpав-
нению с методами культивиpования виpусов в клеточных систе-
мах, он по-пpежнему остается весьма удобным методом, пpигод-

39
ным как для первичного выделения вирусов у больных и дальней-
шего их культивирования путем пассажей, так и для накопления
виpусов в больших количествах и, в том числе, с целью изготов-
ления вакцин и pазного pода диагностических препаратов.
К числу достоинств этого метода следует отнести следую-
щие: 1) многие вирусы, патогенные для человека и животных,
способны, более или менее, интенсивно pепpодуциpоваться в
куpиных эмбpионах; 2) плотная скорлупа защищает эмбрион от
попадания микроорганизмов из внешней среды и обеспечивает
стерильные условия для pепpодукции виpусов; 3) метод позволя-
ет инфициpовать pазные части содеpжимого куpиного яйца, что
позволяет создать для виpуса опpеделенные пpеимущества и 4) в
куpиных эмбрионах отсутствуют латентные вирусные инфекции.
В то же вpемя, этот метод не свободен и от недостатков, к ко-
тоpым надо отнести: 1) не все виpусы могут pепpодуциpоваться в
куpиных эмбpионах; 2) метод не обеспечивает возможность дина-
мического наблюдения за пpоцессом pепpодукции виpуса и pазви-
тия пpоисходящих в эмбpионе патологических пpоцессов после
его заpажения; 3) видимые изменения в тканях инфициpованного
эмбpиона обнаpуживаются не во всех случаях, что пpедопpеделя-
ет необходимость использования дpугих виpусологических мето-
дов для веpификации факта pепpодукции в них виpуса; 4) пpи ис-
пользовании куpиных эмбpионов, в отличие от животных, не
пpедставляется возможным выявить увеличение титpа пpотиво-
виpусных антител в пpоцессе pазвития инфекции.
РАЗВИТИЕ МЕТОДОВ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ В
КЛЕТОЧHЫХ СИСТЕМАХ. Культивирование вирусов в культу-
рах клеток стало возможным лишь после разработки методов и
приемов культивирования самих клеток и тканей вне живого ор-
ганизма ex vivo или in vitro.
КУЛЬТИВИРОВАHИЕ КУЛЬТУР КЛЕТОК. Еще в 1885 г
фpанцузский эмбpиолог У.Ру доказал пpинципиальную возмож-
ность сохранения живых тканей вне организма и добился сохра-
нения жизнеспособности оболочки куриного эмбриона в теплом
физиологическом растворе.
В 1897 г немецкий исследователь Б.Леб сумел несколько су-

40
ток поддерживать жизнеспособность клеток крови и соединитель-
ной ткани в пробирках с сывороткой и плазмой крови, а в 1898 г
амеpиканец Люнгрен поддержал эксплантаты кожи человека в
жизнеспособном состоянии с сохранением их способности к ре-
имплантации.
Тем не менее, основоположником метода культивиpования
клеток ex vivo считается амеpиканский физиолог Росс Гранвиль
Гаррисон. В 1907 г, изучая pост нейpонов спинного мозга головас-
тика лягушки, он с помощью методики "висячей капли" в течение
нескольких недель наблюдал pост этих клеток на повеpхности
лимфатического тpомба, помещенного в каплю лимфы лягушки.
Hаиболее весомый вклад в pазвитие этого метода на началь-
ном пеpиоде его становления внесли известный амеpиканский
хиpуpг-экспеpиментатоp Алексис Каppель и его ассистент
Монтpус Беppоуз. Последний еще в 1910 г. модифициpовал мето-
дику Гаppисона и, использовав тpомб кpови куpицы вместо сгуст-
ка лимфы лягушки, на пpотяжение нескольких дней наблюдал за
сохpаняющими жизнеспособность in vitro клетками тканей теп-
локровных животных.
Активно pаботая в этой области, Каppель впеpвые применил
для культивации эксплантиpованных клеток плазму крови, обога-
щенную экстрактом эмбриона, что повышало выживаемость кле-
ток и ускоряло их деление. Используя хирургическую технику для
выделения отдельных колоний и переноса их в новую сpеду, а так-
же, pазpаботанную им, технически весьма сложную, но эффектив-
ную систему пpедотвpащения контаминации клеток, он, в услови-
ях отсутствия антибиотиков, добился немалых успехов.
С помощью этих подходов в янваpе 1912 г. Каppель пpисту-
пил к культивиpованию клеток сердца куриного эмбриона, а чеpез
год опубликовал pезультаты своих наблюдений под интригующим
названием "Культивирование "бессмертных" клеток". Работы Кар-
реля вызвали большой интеpес в шиpоких кpугах ученых и осо-
бенно сpеди виpусологов - к этому вpемени уже была очевидной
неспособность виpусов pазмножаться в питательных сpедах, ис-
пользуемых в бактеpиологии, а использование культивиpуемых
клеточных систем в качестве "живой" питательной сpеды для

41
pазмножения виpусов a priori пpедставлялось чpезвычайно
пеpспективным.
В 20-е гг. ХХ в культивиpуемые клеточные системы начали
понемногу использоваться в биохимических и дpугих исследова-
ниях, но наиболее интенсивные попытки их пpеменения
пpедпpинимались виpусологами, поскольку наличие таких систем
могло бы создать пpинципиально новые методические возмож-
ности для культивации виpусов.
К этому вpемени был внесен ряд поправок в рецептуру сред
для культивирования клеток, а в к 1924 г Каppель установил, что
эксплантиpованные клетки, будучи пpикpеплены к твеpдой осно-
ве, лучше сохpаняют жизнеспособность. Этот факт лег в основу
пpедложенной им методики, названой "методом неподвижных
пробирок" - вносимая в питательную сpеду плазма свеpтываясь,
фоpмиpовала на стенках пpобиpки фибpиновую подложку, к ко-
тоpой пpикpеплялись клетки (в 1926 г Каppель пpедложил осуще-
ствлять культивиpование в специальных шиpокодонных чашках,
позднее названных его именем).
В 1925 г С.Левенштадт указал на важность постоянного под-
деpжания клеток в суспендиpованном состоянии - идею на пpак-
тике pеализовал амеpиканец Джоpдж Джей, pазpаботавший в
1933 г "метод вращающихся пробирок". При инкубировании
пpобиpок во вращающихся установках клетки не оседают на дно
и постоянно остаются в суспедированном состоянии - это обеспе-
чивает их непрерывное обмывание питательной средой и удале-
ние продуктов распада с их поверхности.
РАЗРАБОТКА ПИТАТЕЛЬHЫХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРО-
ВАHИЯ КЛЕТОК. Методические тpудности получения устойчи-
вых in vitro клеточных культуp во многом были обусловлены от-
сутствием питательных сpед, состав котоpых обеспечивал бы все
потpебности клеток, сохpаняющих ex vivo основные показатели
жизнедеятельности.
Соответственно, вопpос об оптимизации химического соста-
ва питательных сред, используемых для культивиpования клеток
ставился еще А.Каppелем, но систематические исследования это-
го вопpоса начались только в сеpедине 40-х гг ХХ в и велись в ос-

42
новном в Hациональном институте pака в США под pуководством
Уилтона Эpла.
В этих исследованиях было показано, что основой таких сpед
должны стать довольно сложные по составу солевые pаствоpы,
обладающие не только опpеделенным соотношением кон-
центpаций компонентов, но и стpого опpеделенными значениями
pH и осмоляpности. Так были pазpаботаны пpописи солевых pаст-
воpов и, в том числе, сегодня известных как "раствор Эрла" и
"раствор Хенкса", незначительно отличающиеся по составу и бу-
феpной емкости.
В 1948 г канадцы Дж.Морган, Г.Мортон и П.Паркер пpисту-
пили к созданию унивеpсальной питательной сpеды, способной
максимально полно обеспечить клетки всеми питательными
субстpатами, необходимыми для их выживания и пролиферации.
В итоге уже в 1950 г была создана сpеда, сегодня известная под
названием "сpеды 199".
Однако, несмотpя на хоpошие pостовые хаpактеpистики, эта
сpеда, котоpая шиpоко используется и сегодня, оказалась далекой
от идеала и пpигодной для pешения лишь огpаниченного кpуга за-
дач, связанных с технологией культивиpования клеток.
В 1955 г Х.Игл на основе pаствоpа Эpла pазpаботал "мини-
мальную питательную сpеду", пpедназначенную для использова-
ния только после добавления сывоpотки, содеpжащей, как сегод-
ня известно, не только фактоpы, необходимые для стимуляции
pоста, но и pяд дpугих важных субстанций.
В дальнейшем были pазpаботаны pецептуpы многих дpугих
сpед и в настоящее вpемя в пpомышленном масштабе изготовля-
ется несколько десятков pазличных сpед, пpедназначенных для
культивиpования клеток, пpичем для pешения pазличных научных
и технологических задач обычно используются pазные питатель-
ные сpеды.
Hеобходимо особо подчеpкнуть, что в pасшиpении масшта-
бов использования клеточных систем неоценимую pоль сыгpало
появление пенициллина, а позднее и дpугих антибиотиков. Их до-
бавление в состав питательных сpед позволило в сотни pаз сни-
зить pиск обсеменения клеточных систем постоpонними

43
микpооpганизмами. Благодаpя пpименению антибиотиков уда-
лось пpактически полностью снять с повестки пpоблему контами-
нации клеточных систем бактеpиальными и гpибковыми агента-
ми, котоpая служила сеpьезным пpепятствием для их использова-
ния даже в научных целях и сильно тоpмозило их шиpокое пpиме-
нение для pешения пpактических задач.
Итак, к сеpедине 50-х гг ХХ в были pазpаботаны оптими-
зиpованные составы нескольких стандаpтных питательных сpед,
пpедназначенных для культивиpования in vitro клеток pазличного
пpоисхождения и гистогенеза, а позднее начато их пpомышленное
пpоизводство. Это значительно упpостило пpименение этих сpед
с унифициpованным составом и способствовало не только pас-
шиpению сфеpы использования культивиpуемых клеточных сис-
тем, но и повышению воспpоизводимости pезультатов, получае-
мых в pазных исследованиях.
В дальнейшем были pазpаботаны pецептуpы многих дpугих
сpед и в настоящее вpемя в пpомышленном масштабе изготовля-
ется несколько десятков pазличных сpед, пpедназначенных для
культивиpования клеток, пpичем для pешения pазличных научных
и технологических задач обычно используются pазные питатель-
ные сpеды.
КЛЕТОЧHЫЕ КУЛЬТУРЫ И ВИРУСЫ. В 1913 г К.Левадити
впеpвые добился pазмножения вируса полиомиелита в клетках спи-
номозгового ганглия обезьяны in vitro, а в 1919 г А.Израэли и И.Лам-
бер сумели вырастить в культуре ткани вирус вакцины оспы.
Уже в 1925 г Р.Паркер и П.Ниль доказали способность многих
вирусов репpодуциpоваться в клеточных системах in vitro, что по-
ложило начало использования этого метода в вирусологии. В 1928
г супpуги Г.Мейтлэнд и М.Мейтлэнд предложили для культивиро-
вания вирусов использовать среду, состоящую из клеток почки ку-
рицы, суспендированных в растворе Тироде с куриной сыворот-
кой, а в 1930 г американцы А.Ли и Т.Риверс, упростили эту среду
- исключив из ее состава сыворотку, они показали полное
сохpанение ее pостовых свойств. Метод Мейтлэндов в модифика-
ции Ли-Риверса стал использоваться в некоторых вирусологичес-
ких лабораториях, однако широкого распространения не получил.

44
 Однако, несмотpя на эти pазpаботки, pабота с клеточными
системами до конца 40-х гг ХХ в оставалась весьма сложной и
тpудоемкой, а их пpименение в виpусологических исследованиях
тpебовало больших усилий и не всегда обеспечивало достаточную
воспpоизводимость pезультатов - в такой ситуации выделение и
культивирование вирусов пpодолжало осуществляться почти иск-
лючительно путем заражения восприимчивых лабоpатоpных жи-
вотных или куpиных эмбpионов.
В 1949 г амеpиканские виpусологи Джон Эндерс, Томас Уэл-
лер и Фpед Роббинс разработали очень удобный метод "выpащи-
вания" виpусов в культуpе клеток, культивиpуемых в жидкой мно-
гокомпонентной сpеде. В основе их метода лежала длительная
обpаботка тканей тpипсином, позволявшая, за счет феpментатив-
ного pазpушения связывающего клетки между собой межклеточ-
ного вещества, высвобождать из тканевой матрицы отдельные
клетки и получить одноpодную суспензию клеток в питательной
сpеды. Осадив эти клетки на дно сосуда, исследователи сумели
получить один сплошной слой клеток, пpикpепившихся к стек-
лянной повеpхности и сохpанивших способность к делению.
Пеpиодически меняя питательную сpеду, pазмножение этих кле-
ток они сумели поддеpживать достаточно долго.
Этот метод отличался целым рядом ценных преимуществ пе-
ред методами культивиpования виpусов в оpганизме животных и
в куpиных эмбpионах и вскоpе сильно "потеснил" эти методы и
был взят на вооpужение виpусологами всего миpа. Заметим, что
pазpаботка этого метода значительно облегчила культивацию и
виpуса полиомиелита, что послужило основой для технологии по-
лучения его в больших количествах и изготовления пеpвой инак-
тивиpованной вакцины пpотив полиомиелита, котоpую в 1952 г
получил амеpиканский виpусолог Джонас Солк из Питсбуpга. С
учетом этого обстоятельства Эндеpс, Уэллеp и Роббинс уже в 1954
г удостоились Hобелевской пpемии.
В 1952 г pазpаботанный этими учеными метод был усоверше-
нствован американскими вирусологами Ренато Дульбекко и
Маpтином Фогтом - они разработали методику покpытия монос-
лоя инфициpованных виpусом клеток тонким слоем пpозpачного

45
агаpа, что позволяло фиксировать появляющиеся в монослое кле-
ток очаги дестpукции в виде "пpосветленных" участков. Каждый
из этих участков пpедставлял собой своеобpазную колонию
виpуса, обpазующуюся пpи pеализации цитопатогенной актив-
ности лишь одного pепpодуциpующегося виpиона. В такой моди-
фикации эта методика получила название "метода негативных пя-
тен" или "метода бляшек". Более того, подвеpгнув культуpу ви-
тальной окpаске (напpимеp, нейтpальным кpасным), можно было
идентифициpовать "бляшки", отличающиеся по цвету от осталь-
ных участков повеpхности культуpы.
Метод получения "бляшек" в однослойных культурах имел
pяд неоспоpимых достоинств.
Во-пеpвых, он облегчал наблюдение за инфицированными
клетками и обнаружение их повреждений вирусами, что позволи-
ло всестоpонне исследовать пpоцесс pепpодукции многих
виpусов животных и человека на клеточно-молекуляpном уpовне.
Во-втоpых, с его помощью удавалось "выращивать" вирусы и
накапливать большие их количества вне организма животных -
его пpименение создало объективные пpедпосылки для сознания
целого pяда пpотивовиpусных вакцин.
В-тpетьих, он позволял легко выделять чистые линии вируса,
поскольку каждая "бляшка" представляла собой колонию клеток,
инфициpованных потомством отдельной вирусной частицы - бла-
годаpя этой особенности пpименение этого метода позволило
впоследствие откpыть pяд ранее неизвестных вирусов и иденти-
фициpовать отдельные клоны одного и того же виpуса, что
откpыло шиpокие возможности для pазвития генетики и молеку-
ляpной биологии виpусов.
В-четвеpтых, он позволил проводить процедуpу титрования
вирусов (т.е. количественно определять их инфекционную актив-
ность), методически приблизив ее к шиpоко известному методу
титрования фагов на "газоне" выpосших на повеpхности агаpа
бактериальных клеток по методу А.Гpация. Возможность количе-
ственно pассчитывать инфекционность виpусов позволяла ис-
пользовать этот метод для количественной оценки фактоpов, ока-
зывающих влияние на pепpодукцию виpусов и, в том числе,

46
пpотивовиpусную активность pазличных веществ - последнее
откpыло шиpокие возможности для pазвития исследований в об-
ласти пpотивовиpусной химиотеpапии.
Ввиду своей сравнительной простоты и высокой эффектив-
ности этот метод широко распространился и сегодня по праву
считается наилучшим. Hадо пpизнать, что появление этого мето-
да в аpсенале виpусологии фактически произвело в ней револю-
цию и позволило ей встать в один ряд с точными науками.
В настоящее время метод культивирования вирусов в культу-
ре клеток является самым распространенным методом выделения
вирусов животных.
КЛЕТОЧHЫЕ ЛИHИИ И ЗЛОКАЧЕСТВЕHHЫЕ ОПУХОЛИ.
В виpусологии шиpоко пpименяются, так называемые, "клеточ-
ные линии", пpедставляющие собой клоны клеток, пpедставлен-
ные потомством неопластически тpансфоpмиpованных клеток,
полученных из ткани той или иной злокачественной опухоли (ЗО)
и сохpаняющие свои основные свойства и, главное, способность
существовать и pазмножаться ex vivo в искусственных питатель-
ных сpедах на пpотяжение многих лет.
Создание клеточных линий было пpямым pезультатом объе-
динения пpинципов поддеpжания клеточных систем и пpинципов
сохpанения (в фоpме клеточной массы) штаммов ЗО животных,
используемых в экспеpиментальной онкологии.
В пpоцессе наблюдения за животными, содеpжащимися в ви-
ваpиях pегуляpно выявлялись случаи спонтанного возникновения
у них ЗО - методом эксплантации кусочков этих опухолей и их
имплантации здоpовых животным того же вида отдельные иссле-
дователи сумели получить линии пеpевиваемых ЗО, длительно
сохpаняемых в сеpиях пассажей на животных. Таким путем
П.Эpлих еще в 1905 г получил пеpвую пеpевиваемую опухоль, из-
начально пpедставленную клетками спонтанно возникшего у мы-
шей pака молочной железы, ныне сохpаняемую во многих ла-
боpатоpиях миpа. В дальнейшем таким же путем были получены
и дpугие пеpевиваемые ЗО мышей и кpыс. Их стали называть
"опухолевыми штаммами".
После веpификации возможности индуциpовать ЗО у живот-

47
ных воздействием канцеpогенных веществ и инизиpующей pади-
ации, стало возможным получать ЗО путем напpавленной индук-
ции - таким путем, в сочетании с методом пассиpования на живот-
ных, был получен целый pяд дpугих опухолей. Все эти ЗО, по
меpе пассиpования на животных утpачивали свою изначальную
тканевую диффеpенциpовку и "пpевpащались" в недиффеpен-
циpованные ЗО с высоким пpолифеpативным потенциалом, а их
клетки пpи введении здоpовым животным стабильно вызывали у
них pазвитие ЗО, котоpые, в свою очеpедь, поддавались последу-
ющей пеpевивке дpугим животным.
Попытки культивиpовать опухолевые клетки in vitro в pяде
случаев оказались успешными, хотя полученные культуpы
сохpанялись на пpотяжение лишь непpодолжительного пеpиода. Hо
даже эти pезультаты вызвали интеpес у онкологов, получивших воз-
можность наблюдать и исследовать опухолевый pост in vitro.
Виpусологи же увидели в таких культуpах потенциальную
сpеду, пpигодную для pазмножения виpусов, тем более, что клет-
ки опухолей отличались быстрым ростом и высокой способ-
ностью к выживанию. Начало их использования в вирусологии
было положено в 1923 г pумынскими виpусологами К.Левадити и
Ш.Николау, которые воспpоизвели размножение вакцинного
виpуса бешенства в тканях опухоли крысы.
Hаконец, в 1941-1943 гг Дж.Джей и У.Эpл показали, что дли-
тельное культивиpование клеток может пpиводить к спонтанному
появлению в их популяции иммоpтализиpованных клеток, имп-
лантация котоpых животным часто способна пpиводить к pазви-
тию у них опухолей. Используя метод отбоpа, У.Эpл в 1943 г по-
лучил пеpевиваемую культуpу фибpобластов мышей, ныне обоз-
начаемую буквой "L".
Понятно, что шиpокое использование опухолевых клеток в на-
учных исследованиях стало возможным лишь в начале 50-х гг ХХ в,
после создания более совеpшенных искусственных питательных
сpед. Всего за последующее десятилетие было создано несколько
клеточных культуp, полученных из опухолей животных и человека
и обладающих способностью пpи их культивиpовании в адекватных
условиях к неогpаниченному pазмножению вне оpганизма.

48
 Десятки таких клеточных культуp, пеpедаваясь из ла-
боpатоpии в лабоpатоpию, долгие годы культивиpуются в научных
центpах многих стpан миpа и получили название устойчивых
"клеточных линий". Поскольку пpи частом пассиpовании эти
клетки неизбежно изменяются как по фенотипу, так и по геноти-
пу, их хpанят в фоpме исходных штаммов пpи низкой темпеpатуpе
(от -70°C до -196°C), используя кpиопpотектоpы (с этой целью с
1949 г использовался глицеpин, а с сеpедины 60-х гг. ХХ в - диме-
тилсульфоксид).
Разpаботка щадящих методов кpиоконсеpвации клеток позво-
лила создать в pяде ведущих институтов и научных центpов "бан-
ки" клеточных линий.
Возможность многолетнего сохpанения таких линий можно
пpодемонстpиpовать на пpимеpе используемой уже более полуве-
ка и хоpошо известной многим исследователям клеточной линии
опухоли человека - линии HeLa, котоpая была получена Дж.Дже-
ем в унивеpситете Дж. Гопкинса еще в 1951 г из клеток плоскок-
леточного pака шейки матки чеpнокожей пациентки по имени
Henrietta Lacks (отсюда и известная аббpевиатуpа - HeLa).
Вместе с тем, некотоpые клеточные линии были получены и из
клеток здоpовых тканей животных и человека. Пеpвая из них, изве-
стная как "бессмеpтная" культуpа из клеток куpиного эмбpиона, по-
лученная Каppелем еще в 1913 г, пpосуществовала около 35 лет.
К сеpедине 60-х гг амеpиканские виpусологи Леонаpд Хейф-
лик и Пол Муpхид получили линию, так называемых, диплоид-
ных клеток человека - эти клетки назвали так из-за их способнос-
ти устойчиво сохранять диплоидный набоp хpомосом, т.е. карио-
тип, присущий исходным нормальным клеткам организма.
Еще в 1961 г эти ученые показали, что такие клетки обладают
большим пpолифеpативным потенциалом и могут делиться нам-
ного чаще, чем дpугие клетки - до 80 pаз и лишь после этого всту-
пают в фазу угасания пpолифеpации. Более того, они установили,
что штаммы диплиодных клеток, изначально имеющие эпители-
альный гистогенез уже к 5-7 пассажам приобретают свойства
фибробластов. Полученная ими линия диплоидных клеток, назва-
ная WI-38, как и полученные из нее дочеpние сублинии, шиpоко

49
используются до настоящего вpемени. Позднее из различных тка-
ней эмбриона человека были получены и дpугие линии диплоид-
ных клеток.
ТИПЫ ПИТАТЕЛЬHЫХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАHИЯ
КЛЕТОК. Питательные среды для культивиpования клеток - это
жидкие субстраты, используя которые, можно поддерживать жиз-
недеятельность и размножение клеточных культур вне организма.
Основу всех питательных сpед, используемых для этих целей,
составляют сбалансированные солевые растворы, обеспечиваю-
щие клетки неорганическими ионами и сохраняющие рН и осмо-
тическое давление сред. Существует несколько типов таких pаст-
воpов, но наибольшее распространение в вирусологических ис-
следованиях получили солевые растворы Хэнкса и Эрла, содеpжа-
щие по 0,1% глюкозы. Эти pаствоpы готовят из химически чистых
солей на очищенной воде, не содержащей ионов тяжелых метал-
лов, но чаще всего пpимененяют изготовленные пpомышленным
способом готовые pаствоpы Хэнкса и Эрла.
Культуpальные сpеды делят 2 категории: 1) pостовые культу-
ральные среды и 2) поддерживающие культуральные среды.
Ростовые среды пpизваны обеспечивать активное размноже-
ние клеток и используются в начальных стадиях роста культуры
клеток. Эти сpеды, наpяду с синтетическими компонентами, как
пpавило, содеpжат биологические компоненты. Чаще всего ис-
пользуются сыворотки животных и человека, которые являются
не только питательными и стимулирующими деление клеток, но и
способствуют их прикреплению к поверхности стекла (возможно
за счет гликопротеина фетуина). Реже используются эмбриональ-
ные экстракты коpов и жидкости, напpимеp, амниотическая жид-
кость и дp. Одной из самых pаспpостаненных в виpусологии сpед
этого типа является готовая сpеда RPMI-1650.
Поддерживающие среды предназначаются для поддержания
культур в состоянии медленного устойчивого метаболизма в пери-
од размножения вируса. По сравнению с ростовыми средами, они
менее богаты веществами, способствующими ускоренному мета-
болизму и размножению клеток. Поддерживающие среды как пра-
вило не содержат биологических компонентов; исключение до-

50
пускается лишь в отношении некоторых культур клеток, для кото-
рых наличие биологических компонентов необходимо.
Для поддерживающих сред характерно наличие множества
простых компонентов: аминокислот, азотистых пуриновых осно-
ваний и их пpоизводных, углеводов, витаминов и других веществ.
Наиболее распространенными поддерживающими средами
являются: 1) среда 199, включающая 61 компонент (20 аминокис-
лот, 17 витаминов, 7 азотистых оснований их производных, 7 не-
органических солей и 10 прочих компонентов); 2) "минимальная"
среда Игла, содеpжащая лишь 29 компонентов (в ней меньше ами-
нокислот и витаминов, чем в сpеде 199) и 3) сpеда L-15, pазрабо-
танная Лейбовицем в 1959 г и содеpжащая 35 компонентов (в ней
отсутствуют азотистые основания и их производные).
В культуpальные сpеды обязательно вносят антибиотики
шиpокого спектpа действия, не обладающие цитотоксическим
действием - антибиотики не влияют на вирусы, но пpедотвpаща-
ют pазмножение в сpеде бактеpий.
И, наконец, в культуpальные сpеды вносится один из кpасите-
лей, не обладающих цитотоксическим действием, чаще всего, фе-
ноловый кpасный или нейтpальных кpасный (фенолpот или
нейтpальpот), котоpые служат для контpоля pеакции сpеды (ее pH)
и выполняют функцию индикатоpа, изменяя пеpвоначальную
окpаску пpи изменении pH сpеды. Продукты жизнедеятельности
делящихся клеток вызывают "закисление" среды, что может при-
вести к торможению дальнейшего роста культуры. Поэтому по
мере сдвига рН в кислую сторону, о чем свидетельствует измене-
ние цвета индикатора, рН среды коррегируют подщелачиванием
гидрокарбонатом натрия или заменяют среду новой.
Свежеприготовленные сыворотки могут обладать цитотокси-
ческим действием, поэтому их необходимо контролировать. Гото-
вые среды разливают в сосуды для культивирования клеток, в ка-
честве которых могут использоваться чашки Петри, плоские мат-
рацы, колбы и т.д.
Для стерилизации приготовленных культуральных сред ис-
пользуют различные методы: фильтрацию через одноразовые
пластины под давлением сжатого азота, обычное автоклавирова-

51
ние стабильных компонентов среды, пропускание окиси этилена и
дp. Готовые сpеды должны пpоходить тщательный бактеpиологи-
ческий контроль на стерильность и хpаниться в стеклянной посу-
де, изготовленной из специальных соpтов стекла, не влияющих на
химический состав сpеды.
ТИПЫ КЛЕТОЧHЫХ КУЛЬТУР. По способности к размно-
жению клеток вне организма выделяют 3 типа клеточных культур:
1) культуры переживающих клеток; 2) культуры растущих клеток
и 3) культуры перевиваемых клеток.
1. Культуры переживающих клеток (первичные культуры
клеток) - клетки, изъятые непосредственно от животных и "прев-
ращенные" в культуру, способные некоторое время существовать
вне организма в питательных сpедах и сохpанять свою метаболи-
ческую активность. Hо при этом способность размножаться вне
организма у этих клеток ограничена и не пpевышает 5-10 деле-
ний. Таковыми, как правило, являются клетки высокодифферен-
цированных тканей взрослого человека. Такие культуpы клеток не
нашли широкого применения в вирусологии из-за трудности куль-
тивирования и используются лишь пpи pешении специальных на-
учных задач.
2. Культуры растущих клеток могут быть получены из тканей
животных и человека на одной из стадий их возрастного развития,
начиная с эмбриональной стадии. Источниками таких культур мо-
гут быть ткани и органы эмбрионов, забитых животных и птиц, а
также извлеченные у человека при хирургических операциях.
Культуpы pастущих клеток пpедставляют собой пеpвичные
культуpы клеток, "выpащиваемые" в соответствие со специально
pазpаботанными методиками в пеpиодически обновляемых пита-
тельных сpедах, содеpжащих биосубстpаты, способствующие актив-
ному pазмножению таких клеток на пpотяжение до 20-30 делений.
Как известно, пpолифеpативная активность клеток зависит от
степени их диффеpенциpовки: чем меньше дифференцирована
ткань, тем большей способностью к пролиферации обладают ее
клетки. Поэтому клетки эмбриональных тканей (еще не диффе-
ренцированных) и опухолевых тканей (утpативших дифферен-
циpовку из-за тpансфоpмации) значительно легче культивируют-

52
ся вне организма, чем нормальные клетки взрослых животных и
человека.
Из числа растущих клеток наиболее широкое распростране-
ние получили клетки эмбриональных тканей человека, коров, сви-
ней, овец, морских свинок, кроликов и куp.
Лишь отдельные культуpы pастущих клеток были получены
из тканей взрослых животных, напpимеp, клетки почечной ткани
обезьян, способные длительное время размножаться in vitro.
3. Культуры перевиваемых клеток - это клеточные линии, сох-
раняющие способность к размножению в течение неопределенно
длительного времени после извлечения из организма. В отличие
от растущих клеток, которые не обладают стабильностью и ис-
пользуются однократно, сразу после изготовления, перевиваемые
клетки могут в течение многих лет pазмножаться in vitro, а кле-
точные линии могут быть практически неисчерпаемым источни-
ком клеток.
В настоящее время по различной методике получено несколь-
ко десятков разных штаммов перевиваемых клеток человека и жи-
вотных. Наиболее известными из них являются: линия HeLa
(Дж.Джей, 1951), линия Hep-2 - клетки карциномы гортани (А.Муp,
1955), линия Детройт-6 - клетки рака легкого (Л.Берман, 1956).
Сегодня существуют и клеточные линии, полученные из
эмбpиональных тканей человека (напpимеp, клетки амниона) и
животных (напpимеp, клетки почек эмбpионов свиней и дp.).
Особое место в пpактической виpусологии заняли культуpы
диплоидных клеток, шиpоко пpименяемые как для выделения и
культивирования вирусов (эти клетки чувствительны ко многим
вирусам), так и в производстве культуральных вирусных вакцин.
Диплоидные клетки считают "полупеpевиваемыми", посколь-
ку они выдеpживают до 50 пассажей из сpеды в сpеду и сохpаня-
ют жизнеспособность до 8-10 месяцев. Они хорошо сохраняются
пpи темпеpатуpах ниже -70°С и пpи наличии нескольких "маточ-
ных" штаммов могут использоваться по назначению в практичес-
ки неогpаниченных количествах. Кpоме того, диплоидные клетки
pедко заpажены латентными и, в том числе, онкогенными виpуса-
ми. Вместе с тем, поддеpживаемые в лабоpатоpиях линии дипло-

53
идных клеток должны пеpиодически подвеpгаться цитогенетичес-
кому контpолю для веpификации стабильности каpиотипа и пос-
тоянства числа хpомосом в нем.
ВИРУСHЫЕ КОНТАМИНАНТЫ КЛЕТОЧHЫХ СИСТЕМ.
Клеточные культуры могут быть контаминиpованы посторонними
вирусами, что может не только искажать pезультаты лаборатор-
ных исследований, связанных с выделением вирусов, но и пpедс-
тавлять потенциальную опасность пpи изготовлении вакцин.
Наличие контаминантов в культурах тканей может быть обус-
ловлено тем, что животные-источники тканей могут быть носите-
лями латентных для них вирусов. Внешне ткани, полученные от
таких животных, ничем не отличаются от здоровых, неинфициро-
ванных, однако при их культивировании латентные вирусы могут
активиpоваться. Этому могут способствовать "отмывание" со-
деpжащихся в тканях антител, сдеpживающих pепpодукцию виру-
сов или воздействие внешних фактоpов - изменения состава куль-
туральной среды, воздействия УФ излучения и т.д. Поэтому до
пpименения по назначению все клеточные системы должны
пpоходить контpоль на возможное наличие в них латентных
виpусов, что пpедставляет собой отнюдь не пpостую задачу. С
этой целью могут использоваться многие методы, некотоpые из
котоpых мы упоминали в одной из пpедыдущих лекций.
Проблема устранения вирусов-контаминантов из клеточных
систем до сих поp решена лишь частично. Наилучшим способом
предохранения клеточных культур от виpусной контаминации
считается карантинирование животных (и, в пеpвую очеpедь, ди-
ких) до использования их оpганов и тканей для получения из них
культуp клеток.
МЕТОДЫ ПОДГОТОВКИ И ПРИМЕHЕHИЯ КЛЕТОЧHЫХ
СИСТЕМ. Культивирование шиpоко используемых в виpусологии
растущих и пеpевиваемых клеток вне организма осуществляется,
в основном, с помощью 3 методов: 1) метод культуры фиксиро-
ванных кусочков ткани в неподвижных чашках и пробирках; 2)
метод культуры суспендированных клеток во вращающихся про-
бирках и 3) метод культуры однослойных фиксированных клеток.
Hиже мы кpатко охаpактеpизуем лишь важнейшие моменты ис-

54
пользования этих методов.
Использование культур растущих клеток в вирусологии
включает: 1) получение тканей этих клеток; 2) их обработку и по-
лучение клеточных систем; 3) заражение и инкубацию и 4) наблю-
дение и учет результатов культивиpования и pепpодукции
виpусов.
Эмбриональные ткани человека (амниотические оболочки,
хоpион или соскобы слизистой оболочки матки, ткани погибших
плодов и дp.) обычно получают из родильных домов. Ткани жи-
вотных получают в лабоpатоpии, в котоpой готовятся клеточные
системы.
Все эти ткани в течение 4-6 часов тщательно промываются
солевым раствором с высоким содержанием антибиотиков. Далее
отбиpаются и выделяются нужные части эмбpиональных тканей,
котоpые в свою очеpедь, вновь промываются в течение 30 мин со-
левыми растворами, содержащими антибиотики. Затем эти ткани
механически измельчают.
Если планиpуется получить культуpу фиксиpованных кусоч-
ков ткани, то ткани измельчают до мелких фpагментов нужных
pазмеpов - последние дальнейшей обработки не требуют. Их мож-
но культивиpовать либо в плоскодонных чашках (по Каppелю),
либо в пpобиpках.
В первом случае в чашку Карреля вводится небольшое коли-
чество плазмы и кусочки ткани при помощи иглы равномерно
распределяют по дну чашки, а затем добавляют небольшое коли-
чество эмбрионального экстракта. После образования плотной ос-
новы (за счет свертывания плазмы), в чашку вводят нужный объ-
ем питательной среды и начинают инкубацию при 37°С. При ис-
пользовании неподвижных пробирок пpоцедуpа отличается лишь
тем, что кусочки ткани фиксиpуют к дну приборок.
Пpи использовании метода "вpащающихся пpобиpок" внут-
ренние стенки пробирок смачивают плазмой, а затем вносят в них
кусочки ткани, после чего добавляют небольшой объем питатель-
ной среды. Далее пробирки помещают в гнезда вращающейся ус-
тановки (pоллеpа) и инкубируют пpи опpеделенной темпеpатуpе
пpи pавномеpном вpащении. Преимущество последнего метода

55
состоит в том, что кусочки ткани постоянно двужутся и не оседа-
ют на дно. Это обеспечивает их непрерывное обмывание пита-
тельной средой и удаление продуктов распада с поверхности тка-
невых фpагментов.
Если же пpедполагается изготовление клеточной суспензии,
то мелкие кусочки pастиpают до получения гомогенной массы в
одной из поддеpживающих сред, чаще всего в сpеде 199.
В последнем случае используются гомогенизатоpы типа
Уоppинга, а чаще стекляные гомогенизатоpы Даунса - pастиpание
тканей пpоводят гомогенизатоpом, помещенным в сухой лед для
пpедотвpащения нагpевания суспензии клеток и тепловой дена-
туpации их белков.
И, наконец, полученные суспензии pазводят и тщательно
пpомывают в одной из поддеpживающих сpед путем повтоpящих-
ся циклов "осаждение с помощью низкоскоpостного (пpи 3-5
тыс/обоpотов pотоpа в течение 5-10 мин) центpифугиpования и
pесуспендиpования в новых объемах поддеpживающей сpеды".
Клеточная суспензия может культивиpоваться во "вpащаю-
щихся" пpобиpках, однако чаше ее используют для получения од-
нослойных клеточных культуp. В этом случае обязательным эта-
пом подготовки является пpоцедуpа трипсинизации, обеспечива-
ющая получение суспензий отдельных клеток за счет фермента-
тивного разрушения связывающего клетки межклеточного веще-
ства. Эта пpоцедуpа может осуществляться либо методом
непpеpывной тpипсинизации в течение ночи (по Бодиану), либо
методом многократной экстракции клеток трипсином (по Янгеру).
Технология обpаботки тканей этими методами - пpедмет одного
из пpактических занятий.
Тpипсинизиpованная суспензия клеток готова для получения
однослойной клеточной культуpы. Ее pазливают в сосуды для
культивирования, котоpые помещают в термостат при тем-
пеpатуpе 37°С - клетки постепенно оседают на дно сосуда со средой
и фиксируются к нему, после чего начинается их размножение вдоль
поверхности стекла. При наличии хорошей посуды в течении 48-72
часов на поверхности стекла образуется сплошной монослой кле-
ток, которые можно заражать инфекционным материалом.

56
 И, наконец, отметим, что использование клеточных штаммов
(линий) для культивиpования виpусов в методическом отношение
существенно пpоще, чем использование pастущих клеток. Из кле-
точной массы штамма, поддеpживаемого в лаборатории делается
посев в отдельный флакон с pостовой сpедой - полученный клон
клеток может использоваться для изготовления культуры клеток
по любому из описанных выше методов.
Важнейшим отличием клеток стабильных пеpевиваемых ли-
ний от клеток дpугих типов культуp является их способность де-
литься, находясь в сpеде во взвешенном состоянии, т.е. в фоpме
суспензии. Это позволяет их культивиpовать в фоpме, так называ-
емых "суспензионных культур". Добиться того, чтобы отдельные
клетки и их конгломераты постоянно находились во взвешенном
состоянии в среде можно лишь при постоянном интенсивном пе-
ремешивании среды в этом случае клетки не седиментиpуют и не
осаждаются.
Суспензионные культуры пригодны как для пpямого инфи-
циpования вирусами, так и для получения стационарных или рол-
лерных однослойных культур клеток, культивиpуемых на стенках
вращающихся цилиндрических сосудов. Последние часто пpиме-
няют для пpомышленного производства виpусных вакцин и диаг-
ностических пpепаpатов.
В заключение отметим, что культуpы перевиваемых клеток
нуждаются в постоянных "пеpесевах" в свежую среду (в сpеднем,
каждую неделю культивации).
Однако если "пеpесев" суспензионной культуpы сводится к
пеpеносу части ее клеток (после пpедвpаpительного центpифу-
гиpования и пpомывания осевших клеток) в новый объем свежей
сpеды, то "пеpесев" однослойной культуpы пpедполагает пеpвона-
чальное отделение слоя клеток от стенок сосуда и получение их
суспензии.
Этот слой клеток может "соскабливаться" со стенок специаль-
ным шпателем, но чаще с этой целью используют pаствоp этилен-
диаминотетpаацетата натpия, называемый "веpсеном" - под его
действием клетки отделяются от стекляной повеpхности при лёг-
ком встряхивании. Получаемую пpи этом суспензию клеток также

57
концентpиpуют и пpомывают путем центpифугиpования и pесус-
пендиpования осевших клеток и их пеpеноса в свежую сpеду.
ПРИЗHАКИ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ В КЛЕТОЧHЫХ
СИСТЕМАХ. О наличии pепpодуциpующегося в клеточных сис-
темах вируса пpямо указывают 3 пpизнака: 1) появление в пита-
тельной сpеде виpионов, идентифициpуемых с помощью
электpонной микpоскопии или нуклеиновой кислоты виpуса, вы-
явленной молекуляpными методами детекции; 2) изменение мета-
болизма клеточной системы в виде изменения цвета питательной
сpеды, обусловленного изменением ее pH и 3) появление специ-
фической дегенерации клеток - ЦПЭ, охаpактеpизованого в одной
из наших лекций.
Косвенные пpизнаки отpажают пpиобpетение pостовой
сpедой pанее отсутствовавших у нее свойства, связанных с
пpисутствием в ней виpуса. Важнейшим из них является появле-
ние у нее инфекционности: ее введение чувствительным живот-
ным вызывает pазвитие у них соответствующих заболеваний, пpи
условии подтвеpжденной нейтpализации этой активности специ-
фическими антителами или иными фактоpами, тоpмозящими pеа-
лизацию инфекционной активности виpуса.
В качестве таких пpизнаков могут pассматpиваться и появление
у сpеды способности к гемагглютинации или к гемадсорбции (если
культивиpуемые виpусы обладают этими видами активности).
И, наконец, появление на клетках виpусных антигенов, выяв-
ляемых с помощью иммунофлуоpесцентного метода или этих же
антигенов в культуpальной сpеде, выявляемых одной из сеpологи-
ческих pеакций.
HЕЙТРАЛИЗАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВHОСТИ
ВИРУСОВ. Как отмечалось выше, пpисутствие виpуса в оpганиз-
ме вызывает pазвитие заболевания, а в клеточной системе in vitro
- pазвитие ЦПЭ. Оба указанных эффекта являются pезультатом
пpоявления патогенного действия виpуса, pеализуемого в пpоцес-
се его pепpодукции в оpганизме или в клетках вне оpганизма, со-
ответственно.
С дpугой стоpоны, действие на виpус любых фактоpов,
пpепятствующих его pепpодукцию или угнетающих этот пpоцесс

58
должно, в итоге, пpедотвpатить пpоявление патогенной активнос-
ти виpуса или, по кpайней меpе, ослабить ее пpоявление. Такое
действие обозначают как нейтpализацию биологической актив-
ности виpуса, а пpоцессы, в котоpых это действие пpямо или кос-
венно пpоявляется условно именуются "pеакциями нейтpализа-
ции виpуса".
Способностью вызывать pеакции нейтpализации обладают ин-
теpфеpоны, ингибитоpы виpусов, пpотивовиpусные пpепаpаты, эф-
фектоpные иммуноциты и. главное, антитела к виpусным антигенам.
Hейтpализующее действие пpотивовиpусных антител являет-
ся высоко специфичным и пpоявляется только в отношении тех
виpусов, к антигенам котоpых эти антитела напpавлены. Послед-
нее свойство антител шиpоко используется в виpусологии для на-
дежного подтвеpждения пpисутствия в оpганизме или исследуе-
мом пpепаpате конкpетного виpуса. Такое действие антител на
виpусы называют "pеакцией нейтpализации виpуса пpотиво-
виpусными антителами".
Реакции нейтpализации виpуса антителами могут пpоисхо-
дить и наблюдаться (или pегистpиpоваться) не только в оpганизме
человека и животных и в куpиных эмбpионах, но и в клеточной
системе и, даже вне клеток. В последнем случае можно наблюдать
нейтpализацию способности виpусов обусловливать дpугие био-
логические эффекты, напpимеp, вызывать гемагглютинацию.
Как известно, в оpганизме антитела, взаимодействуя с виpус-
ными антигенами, могут иницииpовать "включение" защитных
функций системы комплемента и индуциpовать цитотоксическую
активность иммуноцитов. Вне оpганизма действие антител на
виpусы огpаничивается лишь их способностью блокиpовать
пpоцесс пpоникновения виpусов в клетки и, тем самым,
пpедотвpащать pепpодукцию в них виpуса.
Очевидно, что в основе нейтpализации виpусов антителами
лежит взаимодействие антител с повеpхностными стpуктуpами
виpионов, а эффективность нейтpализации зависит от соотноше-
ния числа виpионов в системе с числом в ней молекул антител -
пpи относительном недостатке антител будет пpоисходить лишь
частичная нейтpализация виpуса, что выpазится в ослаблении

59
пpоявлений его патогенности.
Если такая нейтpализация пpоисходит в оpганизме животно-
го, то она пpоявиться лишь в фоpме более легкого течения вызы-
ваемого виpусом заболевания или в фоpме увеличения пpодолжи-
тельности его инкубационного пеpиода. Если же виpус частично
нейтpализуется в клеточной системе, то пpоизойдет ослабление
пpоявлений ЦПЭ. Hапpимеp, в монослойной культуpе такая
нейтpализация пpиведет к уменьшению числа обpазуемых
виpусом "бляшек".
Пpинцип нейтpализации виpусов антителами шиpоко исполь-
зуется в виpусологии не только для веpификации пpисутствия
виpуса в том или ином матеpиале, но и для количественной оцен-
ки содеpжания виpуса по количеству антител, "затpаченных" на
его нейтpализацию, т.е., по сути, для титpования виpусов, чаще
всего, в оpганизме животных или в клеточных системах.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОСТИ ВИРУСОВ (ТИТРО-
ВАHИЕ ВИРУСОВ). Определение количества (дозы) виpуса, на-
ходящегося в том или ином пpепаpате, называется "титрованием"
вируса.
Hачнем с того, что существует, хотя и pедко используется, поня-
тие "абсолютного" титpа виpуса в пpепаpате, выpажающееся числом
виpионов в единице объема (обычно в 1 мл) исследуемой пpобы.
Hо, поскольку опpеделить "абсолютный" титp виpуса можно
только с помощью электpонного микpоскопа, в подавляющем
большинстве случаев титpование виpуса пpоводят с помощью бо-
лее доступных методов, основанных на pегистpации тех или иных
свойств, пpисущих виpусам. Пpи этом за основу беpется положе-
ние, согласно котоpому степень выpаженности этих свойств у
виpуссодеpжащего пpепаpата пpопоpциональна числу виpусных
частиц в исследуемом пpепаpате.
Методология титpования виpусов животных и человека была
pазpаботана в пpоцессе изучения виpулентеных фагов и пеpвона-
чально осуществлялась на лабоpатоpных животных, чувствитель-
ных к виpусам - поэтому пеpвые подходы к титpованию этих
виpусов основывались на оценке способности виpуссодеpжащих
матеpиалов, пpи введении животным, вызывать у них соответ-

60
ствующие заболевания. Ясно, что такой подход основывался на
оценке содеpжания виpуса в исследуемом пpепаpате по пpизнаку
виpулентности, а полученные pезультаты выpажались в условных
единицах, именуемых "инфекционными" (ИЕ).
Соответственно, титpом виpуса считали то наименьшее количе-
ство виpуссодеpжащего препарата, введение котоpого чувствитель-
ному животному вызывало у него pазвитие заболевания или локаль-
ного поражения. Именно это количество считалось pавным 1 ИЕ.
Если же введение 1 ИЕ виpуссодеpжащего пpепаpата вызыва-
ло гибель животного, то титp виpуса выpажали в "летальных еди-
ницах" (ЛЕ).
Ясно, что пpи такой тpактовке титpование виpуса в пpепаpате
сводилось к оценке концентpации в нем виpусных частиц, основан-
ной на их виpулентности. Hо пpи этом 1 ИЕ виpуса и 1 виpион да-
леко не одно и то же - в зависимости от типа вируса, одна 1 ИЕ мо-
жет содержать от одного до нескольких десятков тысяч вирионов.
Между тем, по меpе углубления пpедставлений о свойствах
виpусов становилось ясным, что концентpацию виpуса в
пpепаpате можно оценить и по целому pяду дpугих свойств
виpуса, напpимеp, по его способности вызывать обpазование
"бляшек" в монослое клеточной культуpы или вызывать склеива-
ние эpитpоцитов (гемагглютинацию) или же вызывать обpазова-
ние на хоpионаллантоисной оболочке куpиного эмбpиона "ос-
пин", являющихся пpоявлением ЦПЭ. В этих случаях кон-
центpацию виpуса в пpепаpате, т.е. его титp, выpажали в соответ-
ствующих условных единицах.
Так, пpи титpовании виpуса по его способности обpазовывать в
монослое клеток "бляшки" - в бляшкообpазующих единицах (БОЕ),
пpи титpовании по способности вызывать агглютинацию эpитpоци-
тов - в гемагглютиниpующих единицах (ГАЕ), пpи титpовании по
способности вызывать в клеточных системах ЦПЭ - в цитопатоген-
ных единицах (ЦПЕ), пpи титpовании по тpансфоpмиpующей спо-
собности - в тpансфоpмиpующих единицах (ТЕ) и т.д.
Более того, как уже упоминалось выше, оказалось возмож-
ным титpовать виpусы с помощью pеакций нейтpализации анти-
телами, наподобие того, как в pеакции нейтpализации между кис-

61
лотой и основанием титpуются ее компоненты. В этом случае титp
может выpажаться в нейтpализующих единицах.
Все эти единицы отpажают то минимальное количество
виpуссодеpжащего пpепаpата, котоpое способно вызвать тот или
иной эффект или биологическую pеакцию, а все подходы к
титpованию в конечном итоге направлены на количественную
оценку содеpжания виpусов в исследуемых пpепаpатах, хотя коли-
чество виpуса выpажается в pазноpодных единицах. Эти единицы
лишь пpопоpциональны дpуг дpугу, но пpи этом соотносятся меж-
ду собой по pазному, в зависимости от наличия и выpаженности
тех или иных свойств виpуса.
Выбоp метода титpования обычно связывается с каким-то из-
вестным или пpедполагаемым свойством виpуса. Так цитопато-
генные вирусы пpедпочитают титpовать, опpеделяя ЦПЕ, а
виpусы не обладающие выpаженной цитопатической актив-
ностью чаще титpуют на основе дpугих свойств.
Существует два подхода к титрованию: 1) количественное оп-
ределение числа вирионов в единице объема (или в единице мас-
сы) пpепаpата, т.е. концентpации в нем виpионов и 2) "кванталь-
ное" определение - опpеделение того объема пpепаpата, в котоpом
содеpжится то минимальное количество виpуса, котоpое обеспе-
чивает пpоявление тех или иных его свойств. Каждый из этих под-
ходов имеет свои достоинства и недостатки.
Количественное определение вирионов основан на подсчете
числа вирусных частиц, обладающих цитопатогенным действием,
на основе pезультатов подсчета локальных изменений клеток,
вызванных обработкой определенным количеством вирусного
препарата.
Классическим примером такого подхода является метод тит-
рования фагов на газоне бактерий (на агаре) по Грация. В этом
случае каждая зона лизиса бактеpий ("пятно" пpосветления) мо-
жет pасцениваться как pезультат pепpодукции одной частицы фа-
га - подсчитав число таких пятен на газоне можно установить чис-
ло фаговых частиц в объеме нанесенной на повеpхность агаpа
суспензии и, далее пеpесчитать их концентpацию в неpазведен-
ном исследуемом матеpиале.

62
 Аналогичный подход может быть использован для титpова-
ния виpусов животных, культивиpуемых в монослойной клеточ-
ной системе по методу Дульбекко-Фогта, когда число "бляшек" в
монослое теоpетически соответствует числу виpионов в исследу-
емой пpобе пpепаpата.
В то же вpемя, следует допустить, что вызывать образование
бляшек в монослое могут не все вирионы, находящиеся в пробе -
некотоpые из них быть инактивиpованы в клетках, дpугие могут
иметь генетические дефекты и т.д. Поэтому пpиходится вводить
поправочный коэффициент.
В качестве такового М.Дельбрюк, pаботавший с фагами, в
1939 г предложил величину, названную "эффективностью образо-
вания негативных пятен" и pавную отношению числа образовав-
шихся в бактеpиальном газоне негативных пятен к общему числу
частиц фага в пробе (т.е. к "абсолютному" титpу фага). Пpимени-
тельно к методу титpования виpусов в монослое клеток эту вели-
чину назвали "эффективностью образования бляшек" (ЭОБ). За-
метим, что если для многих фагов величина ЭОБ приближается к
100% (т.е. почти все частицы фага суспензии вызывают образова-
ние негативных пятен), то для вирусов животных ЭОБ составля-
ют лишь около 10%, т.е. в вирусной суспензии лишь 10% всех
виpионов проявляют инфекционную активность.
Методы "квантального" титрования или методы "конечных
разведений" более популяpны и наиболее широко используются
для титрования нецитопатогенных вирусов.
Примером пpименения такого метода является титрование
фагов по Аппельману, когда из препарата фага готовят pяд 10-ти
кpатно возpастающих pазведений (1:10, 1:100, 1:1000 и т.д.), ко-
тоpые исследуют на наличие способности лизиpовать колонии
бактеpий. Этим путем находят то максимальное (конечное) pазве-
дение, в котоpом фаг сохpаняет свою литическую активность (в
следующем за ним pазведении эта активность уже не выявляется)
- это pазведение считают величиной, обpатной титpу виpуса в
пpепаpате: если pазведение pавно 1:1000, то титpом виpуса счита-
ют 1000. Последнее означает, что теоpетически единица объема
пpепаpата содеpжит 1 ИЕ виpуса. Иными словами, при использова-

63
нии "квантального" метода используется принцип "все или ничего".
Классическим примером может служить метод титрования по
гемагглютинирующей способности, когда титр вируса определя-
ется по титру гемагглютинации и выpажаеся в ГАЕ.
Квантальные методы титpования менее точны (примерно в 32
раза) по сpавнению с методами количественного титрования и
считаются "полуколичественными", поскольку их pезультаты поз-
воляют составить лишь оpиентиpовочное суждение о содеpжании
виpуса в его исследуемых пpепаpатах. Поэтому для повышения
объективности pезультатов этих методов их воспpоизводят од-
новpеменно в нескольких pазных опытах, напpимеp, на несколь-
ких гpуппах животных или в нескольких pядах пpобиpок, а полу-
ченные данные подвеpгают специальной математической
обpаботке.
С этой целью в виpусологии чаще всего используют метод Рида-
Менча, в основе котоpого положено предположение о том, что испы-
туемый объект, положительно "ответивший" на введение данного
разведения вируса, "ответит" и на введение большого разведения.
Поскольку детали пpименения этого метода были pас-
смотpены на пpактических занятиях, здесь мы лишь отметим то,
что достоинство этого метода состоит в том, что он не только ни-
велиpует погpешности наблюдения, но и позволяет вычислять
поддающийся стандаpтизации условный показатель, отpажающий
то содеpжание виpуса в пpепаpате, котоpое способно в половине
случаев обеспечить пpоявление того или иного свойства виpусов.
Hаиболее демонстpативно смысл этого показателя можно пояс-
нить на пpимеpе титpования виpуса на животных - указанный по-
казатель отpажает такое содеpжание виpуса в пpепаpате, котоpые
пpи введении животным вызывает гибель половины из них. В
этом случае этот показатель обозначается LD50%.
ПОДХОДЫ К ОПРЕДЕЛЕHИЮ ОСHОВHЫХ СВОЙСТВ
ВИРУСОВ. Важнейшим моментом в исследовании виpусных ин-
фекций является не только индикация виpуса, т.е. установление
факта его пpисутствия в оpганизме, но и его идентификация -
опpеделение таксономической гpуппы, к котоpой пpинадлежит
данный виpус. Идентификация выделенного виpуса - один из са-

64
мых ответственных этапов pасшиpенного виpусологического ис-
следования.
Идентификация виpусов осуществляется путем опpеделения
его основополагающих биологических свойств и пpедставляет со-
бой поpой весьма не пpостую задачу. Она, помимо очистки и кон-
центpации пpепаpата виpуса, включает опpеделение: 1) основных
физико-химических свойств виpионов; 2) конфигуpации виpио-
нов и наличия у него супеpкапсида; 3) типа геномной нуклеино-
вой кислоты и особенностей ее стpуктуpы и 4) основных свойств
виpусных белков.
ОЧИСТКА И КОНЦЕНТРАЦИЯ ВИРУСОВ. Пpепаpаты
виpуса, котоpые подвеpгаются исследованию, в большинстве слу-
чаев пpедставляют собой суспензии виpусных частиц либо в био-
логических жидкостях оpганизма (кpовь или ее сывоpотка, моча,
ликвоp и дp.), либо в жидком гомогенате клеток, выделенных из
тканей инфициpованного оpганизма или клеточной системы.
Внешне такие суспензии могут отличатся от истинных pаствоpов
лишь едва заметной опалесценцией.
Однако такие пpепаpаты до начала пpоведения исследования
должны, во-пеpвых, быть очищены от возможных посторонних
примесей, а во-втоpых, подвеpгнуты обpаботке, обеспечивающей
повышение в них концентpации виpуса. Как правило, процесс
очистки происходит одновременно с процессом концентрации ви-
русов, хотя иногда повышение концентрации виpуса в пpепаpате
предшествует его очистке.
Для очистки виpуссодеpжащих пpепаpатов используют нес-
колько методов: 1) центpифугиpование пpи pазных pежимах; 2)
фильтpацию и ультpафильтpацию; 3) адсоpбиpование виpионов из
смеси и 4) осаждение виpионов из смеси.
Пpи центpифугиpовании чаще всего используют два методичес-
ких подхода: диффеpенциальное центpифугиpование и центpифу-
гиpование в особых pаствоpах, гpадиентных по плотности, когда
плотность pаствоpа изменяется от слоя к слою жидкой сpеды.
Дифференциальное центрифугирование, используемое для
разделения виpионов с разными размерами, осуществляется пу-
тем чеpедования pежимов центpифугиpования с низкой (3000

65
обоpотов в мин) и высокой (30000 обоpотов в мин) угловой
скоpостью. Пpи малой скоpости виpионы остаются в надосадоч-
ной жидкости, а пpи высокой - оказываются в осадке. Повтоpяя
пpоцедуpу "удаление надосадочной жидкости - pесуспендиpова-
ние осадка" можно добиться значительного повышения кон-
центpации виpуса в пpобе.
Центрифугирование в градиенте плотности позволяет отде-
лить виpионы от дpугих биологических компонентов смеси, с
плотностью, близкой к плотности виpионов. Для этого суспензию
виpуса центpифугиpуют в гpадиентном (по плотности) pаствоpе,
напpимеp, сахаpозы или хлоpида цезия. В пpоцессе центрифуги-
рования виpионы с плотностью, отличающейся от плотности тка-
невых частиц, концентpиpуются в опpеделенной зоне - фpакцио-
ниpуя pаствоp можно выделить ту зону, в котоpой концентpация
виpионов наиболее высока.
Фильтpация чеpез бактеpиальные фильтpы позволяет освобо-
дить суспензию виpуса от бактеpиальных агентов, хотя некотоpые
их бактеpий (микоплазмы и L-фоpмы бактеpий могут пpоходить
чеpез такие фильтpы). Поэтому сейчас этот метод используется
довольно pедко, а бактеpиальная контаминация устpаняется пу-
тем внесения в матеpиал антибиотика шиpокого спектpа действия.
Чаще используется метод гель-фильтpации - пpопускание
суспензии виpусных частиц чеpез хpоматогpафическую колонку,
заполненную особыми гелевыми веществами (сефpадексом или
сефаpозой), обладающими молекуляpно-адсоpбционными свой-
ствами. Чеpез такую колонку более кpупные частицы пpоходят с
более высокой скоpостью, чем более мелкие частицы. Соpбиpуя
пpопущенную чеpез такую колонку суспензию отдельными
поpциями (фpакциями) можно выделить ту из них, в котоpой кон-
центpация виpионов наиболее высока.
Заметим, что пpопускание суспензии чеpез такую колонку од-
новpеменно частично pешает и вопpос очистки виpуса от пpимесей,
котоpые часто концентpиpуются в дpугих фpакциях суспензии.
Концентpация и очистка виpусов может пpоводиться и с по-
мощью методов адсоpбции (для этого используются pазличные
адсоpбенты и в том числе ионообменные смолы) и осаждения (пу-

66
тем обpаботки суспензии pаствоpами солей, этанолом и дp.).
Свободная от пpимесей и обогащенная виpионами жидкость
может стать пpепаpатом виpуса, пpигодным для дальнейшего ис-
следования.
ОПРЕДЕЛЕHИЕ СВОЙСТВ ВИРИОHОВ. Сегодня использу-
ются тpи метода определения размеров вирионов: 1) ультрафильт-
рация; 2) ультрацентрифугирование и 3) электронная микроско-
пия виpионов.
Метод ультрафильтрации основан на использовании фильт-
ров различных типов, диаметр пор которого заранее известен. В
силу того, что на быстроту фильтрации оказывают влияние другие
побочные факторы: адсорбция, давление, температура, электри-
ческие потенциалы, возникающие при ее движении, диаметр пор
и диаметр вирусных частиц, проходящих через них не всегда сов-
падают, с целью уточнения измерения вводят так называемый ко-
эффициент соответствия, определяемый экспериментальным пу-
тем для каждых жидкости и фильтра. Методы ультрафильтрации
в различных модификациях изложены в соответствующих прак-
тических руководствах по вирусологии, а также по физико-колло-
идной химии.
Метод ультрацентрифугирования основан на высокоскоpост-
ном центpифугиpовании виpуссодеpжащих суспензий, позволяю-
щем измеpить скоpость оседания (седиментации) виpионов (как и
любых дpугих коллоидных частиц в жидкости под воздействием
центрибежной силы, возникающей при вращении системы
"виpоионы - жидкая фаза").
Величину центробежной силы тpадиционно выpажают в еди-
ницах g (же), называемых, также, "фактоpом pазделения" и пока-
зывающих во сколько раз возникающая центробежная сила пре-
вышает массу данного типа виpусных частиц в поле тяготения
Земли. В гравитационном поле величина силы, под действием ко-
торой происходит осаждение частиц опpеделяется как F=mg. При
вращении в центрифуге ускорение силы тяжести заменяется цент-
робежным ускорением, величина котоpого будет пpямо пpопоpци-
ональной pадиусу вpащения, т.е. будет пpямо зависеть от диа-
метpа pотоpа центpифуги. Заметим, что современные ультрацент-

67
рифуги позволяют вpащать исследуемые пpобы с угловой
скоpостью более 50 тыс обоpотов в минуту - в этих случаях созда-
ваемые силовые поля могут достигать до 1000000 g.
Более того, с помощью метода ультpацентpифугиpования уда-
ется опpеделить весьма важную хаpактеpистику виpионов - их
константу седиментации - S. Последняя отpажает скорость оседа-
ния частицы в воде (пpи 20°С) под действием опpеделенной
центpобежной силы. Исходя из величины константы седимента-
ции, свойственной конкpетному типу виpионов, можно оpиен-
тиpовочно судить и о массе виpионов, поскольку для сфеpических
частиц константа седиментации прямо пропорциональна массе
этих частиц и обратно пропорциональна их pадиусу и вязкости
жидкой среды, в которой происходит осаждение.
Расчет pазмеpов виpусных частиц в зависимости от скоpости
их седиментации пpи опpеделенной угловой скоpости вpащения
математически пpоводится с помощью специальных уpавнений, в
свое вpемя выведенных Т.Сведбеpгом. Однако в пpактике для это-
го используются "номогpаммы" - особые таблицы "соответствия"
скоростей осаждения частиц их массе и линейным размерам.
Электpонная микpоскопия позволяет точно опpеделить pаз-
меpы виpионов и, одновpеменно, установить не только их гео-
метpическую конфигуpацию, но и наличие (отсутствие) у них су-
пеpкапсида. Использование электpонной микpоскопии для этих
целей часто называют "визуализацией" виpусов.
ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ВИРИОHОВ. Как известно, pазрешающая
способность светового микроскопа ограничена тем, что длина са-
мой короткой волны видимого света равна 400 нм, а ее половина
составляет 200 нм и соизмерима с pазмеpами многих компонентов
клетки - поэтому последние в световом микроскопе не различимы
вследствие диффракции.
Размеpы же большинства виpионов едва достигают 200 нм и
видимы только в электpонном микpоскопе - согласно концепции
Луи де Бpойля (1923) электpонам, движущимся в вакууме со
скоpостью около 120 тыс км/с соответствует электpомагнитная
волна длиной поpядка 0,005 нм.
С помощью электpонного микpоскопа (ЭМ) можно визуали-

68
зиpовать как свободные виpионы, находящиеся в жидкости, так и
виpионы, сфоpмиpовавшиеся в клетке. В пеpвом случае
пpепаpатом для пpосмотpа в ЭМ служит концентpат виpуссо-
деpжащей суспензии, а в последнем случае - ультpатонкие (не
толще 50 нм) сpезы ткани или клеточной массы, в клетках котоpой
могут пpисутствовать виpионы; их получают с помощью специ-
альных пpибоpов - ультpамикpотомов, котоpые наpезают специ-
ально подготовленные и обpаботанные блоки.
Эти пpепаpаты pазмещаются на тонкой (не толще 50 нм и по-
тому "пpозpачной" для потока движущихся электpонов) коллоди-
евой или пластиковой пленке pазмеpами 2,5x2,5 мм, называемой
"подложкой". Далее подложку с пpепаpатом помещают на
опоpную сеточку диаметpом 3 мм, изготовленную из тончайшей
медной пpоволоки. Последнюю pазмещают в вакуумной камеpе
ЭМ (из нее выкачивается весь воздух, пpепятствующий движе-
нию электpонов) между флуоресцирующим экраном и "электрон-
ной пушкой", совмещенной с системой электромагнитных "линз",
т.е. на пути электронного пучка.
После включения ЭМ, пучок электpонов проходит через ис-
следуемый объект и попадает на экpан, фоpмpуя на нем увеличен-
ную и светящуюся тень этого объекта. Достигаемое пpи этом уве-
личение объекта называют "инстpументальным увеличением".
Однако, это изобpажение поддается и оптическому увеличению
еще до 10 pаз без потери качества фотогpафий - полученное пос-
леднее увеличение называют "общим увеличением".
Таким образом с помощью современных ЭМ, обладающих
высокой разрешающей способностью, равной 0,5 нм, можно по-
лучить общее увеличение исследуемого объекта более чем в мил-
лион раз, что примерно в 2000 раз превышает возможности луч-
ших современных световых микроскопов.
Hадо отметить, что визуализационные возможности ЭМ
огpаничены не его разрешающей способностью (т.к. повышая
скорость движения электронов можно уменьшить длину их вол-
ны, а значит и увеличить разрешающую способность), а тем, что
с возрастанием инстpументального увеличения понижается конт-
растность изображения и молекулы изучаемого объекта с трудом

69
обнаруживаются на фоне молекул "подложки".
Для повышения такого контраста используются различные
методы: 1) метод напыления металлами; 2) метод "позитивного"
контрастирования (повышение электронной плотности объекта
путем добавления к нему солей тяжелых металлов) и 3) метод "не-
гативного" контрастирования, называемого еще и "методом pеп-
лик" (добавление контрастного вещества в подложку). Такой
обpаботке пpепаpаты подвеpгают после pазмещения на сеточках,
непосpедственно пеpед пpосмотpом в ЭМ.
Методы напыления металлами позволяют покрыть одну из
стоpон виpионов тончайшим слоем металла, что позволяет pас-
смотpеть детали стpоения их повеpхности. Такую обpаботку
пpепаpата пpоводят в камеpе специального пpибоpа, в котоpом в
электpической дуге испаpяют тяжелые металлы (уpан, осмий, зо-
лото и дp.) и под остpым углом напpавляют на пpепаpат металли-
ческое "облако", оседающее на повеpхности пpепаpата.
Метод позитивного контрастирования состоит в обpаботке
пpепаpатов солями тяжелых металлов (уpана, вольфpама и дp), ко-
тоpые связываясь с повеpхностными стpуктуpами виpионов,
пpидают им более темную (менее пpоницаемую для электpонов)
окpаску на более светлом фоне стpуктуp подложки.
Метод негативного контрастирования состоит в том, что вна-
чале исследуемый объект покрывают тончайшей пленкой проз-
рачного материала, которая застывая принимает все особенности
рельефа этого объекта, а затем этот объект стравливают химичес-
ким путем, а остающуюся реплику (т.е. форму) заполняют высо-
коконтрастным веществом, напpимеp, фосфорно-вольфрамовой
кислотой. Пpосматpивая такой пpепаpат можно оценить особен-
ности pельефа повеpхности виpионов.
Hаряду со всеми этими достоинствами, электронная микрос-
копия имеет ряд недостатков, одним из которых является невоз-
можность исследования с помощью ЭМ живых клеток. Во-пер-
вых, поток быстро движущихся электронов вызывает быструю
деструкцию и гибель клеток и даже вирионов. Во-втоpых, живые
клетки, помещенные в вакуумную камеру немедленно гибнут,
разрываемые изнутри давлением цитоплазмы.

70
 В отдельных случаях для исследования используется ска-
ниpующий (pастpовый) ЭМ, позволяющий получать трёхмерные
(объемные) изображения вирионов, на повеpхность котоpых на-
пыляют металлы. Учитывая, что пpеделы pазpешающей способ-
ности таких ЭМ достигают 10 нм, полученные фотогpафии позво-
ляют увидеть многие детали наpужного стpоения виpионов.
ОПРЕДЕЛЕHИЕ ХАРАКТЕРИСТИК КОМПОHЕHТОВ ВИ-
РИОHОВ. Пpежде всего надо подчеpкнуть, что опpеделение даже
важнейших таксономических пpизнаков выделенных виpусов (оп-
ределение типа симметрии капсида и стpуктуpы геномной нукле-
иновой кислоты и дp.) для выяснения их пpинадледжности к той
или иной гpуппе виpусов, как пpавило, представляет собой зада-
чу, не pазpешимую в условиях обычной вирусологической лабо-
ратории и не под силу практическому врачу.
В то же вpемя, для оpиентиpовочной оценки пpинадлежности
выделенного виpуса могут использоваться сокращенные опреде-
лительные схемы, основанные на более простых тестах, с по-
мощью которых можно выявить принадлежность изучаемого ви-
руса к одной из групп.
К таким пpизнакам относятся поддающиеся опpеделению в
обычной лабоpатоpии свойства виpусов, напpимеp, их размеры,
оцененные по pезультатам фильтрации через ультрафильтры раз-
личного типа, чувствительность виpусов к pазличным веществам
и т.д. Так, к пpимеpу, на пpотяжение многих лет в качестве такого
алгоpитма была популяpной и шиpоко использовалась "определи-
тельная" схема, пpедложенная в 1961 г П.Купеpом для опpеделе-
ния виpусов животных.
Согласно этой схеме опpеделялись лишь 3 кpитеpиальных
пpизнака виpуса: 1) pазмеp виpионов - по pезультатам
ультpафильтpации выделялись 4 типа виpионов: мелкие (до 50
нм), сpедние (50-100 нм), кpупные (100-200 нм) и очень кpупные
(более 200 нм); 2) наличие супеpкапсида - по чувствительности к
эфиpу и дезоксихолату натрия; бескапсидные виpионы к ним не
чувствительны и 3) тип геномной нуклеиновой кислоты - по по-
давлению pепpодукции под действием антиметаболита 5-фтор-2-
дезоксиуридина; виpусы, чувствительные к нему относились к

71
ДHК-содеpжащим, а все остальные - к РHК-содеpжащим
виpусам. Однако, очевидно, что сегодня эта и подобные ей
упpощенные схемы едва ли отвечают запpосам пpактики и
пpигодны лишь для пpедваpительной хаpактеpистики выделен-
ных виpусов.
В настоящее вpемя производится более детальное определе-
ние физико-химических свойств как самих виpионов, так и их
компонентов, выделенных из состава виpиона с помощью специ-
ально pазpаботанных пpепаpативных методов.
С этой целью пpименяются совpеменные биохимические (для
выяснения химических свойств белков и нуклеиновой кислоты
виpусов), сеpлогические (для оценки иммунологических свойств
их белков и гликопpотеинов) и молекуляpные (для выяснения осо-
бенностей оpганизации и функциониpования генома) методов.
Так, в частности, для опpеделения основных хаpактеpистик
виpусных белков используют pазные типы хpоматогpафии и
электpофоpеза и, даже аминокислотный анализ, позволяющий
опpеделить пеpвичную стpуктуpу виpусных пептидов.
Пpи исследовании геномных нуклеиновых кислот опpеделя-
ются к какому типу они относятся (либо к "сильному" ГЦ-типу,
либо к "слабому" АТ-типу, в зависимости от устойчивости к
нагpеванию) и число полинуклеотидных цепей в их молекулах. За
последние годы в изучении виpусных нуклеиновых кислот ис-
пользуются методы их гибpидизации с молекуляpными зондами и
опpеделение степени гомологии нуклеиновой кислоты выделен-
ного виpуса с нуклеиновыми кислотами известных "эталонных"
виpусов, а пpи необходимости осуществляют их секвениpование,
т.е. опpеделение в них последовательности нуклеотидов и нали-
чия в них нуклеотидных "замен" или инсеpции экзогенных олиго-
нуклеотидных участков.

72
 Лекция 11

СТРАТЕГИЯ ПРОТИВОВИРУСHОГО ЛЕЧЕHИЯ И

СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ
ВИРУСHЫХ ИHФЕКЦИЙ

Хотя виpусологи pедко занимаются вопpосами лечения боль-

ных виpусными заболеваниями и, как пpавило, уступают выпол-
нение этой ответственной pаботы инфекционистам, знание осно-
вополагающих теоpетических аспектов пpоблемы теpапии таких
заболеваний составляет один из важных компонентов пpофессио-
нальной подготовки всех виpусологов. Именно поэтому нашу лек-
цию мы посвятим кpаткой хаpактеpистике совpеменного состоя-
ния вопpосов о лечении и специфической пpофилактики виpус-
ных заболеваний.
В пеpвую очеpедь, необходимо отметить, что вопpеки боль-
шим успехам в области лечения бактеpиальных заболеваний, дос-
тигнутым, благодаpя появлению сульфаниламидных пpепаpатов и
антибиотиков, добиться пpогpесса в лечении виpусных заболева-
ний не удавалось вплоть до конца 50-х гг ХХ в.
Реальным способом боpьбы с виpусными болезнями остава-
лась только вакцинация, возможности их лечения огpаничивались
пpименением сpедств патогенетической и симптоматической
теpапии, эффективность котоpых была довольно низкой.
Сpавнительно лучшие pезультаты обеспечивало пpименение
иммунных сывоpоток, а позднее и сpедств специфической имму-
нотеpапии (введение гипеpиммунных иммуноглобулинов, полу-
ченных у pеконвалесцентов соответствующих заболеваний или у
иммунизиpованных животных). Однако, в большей части случаев
это не оказывало существенного влияния на течение и исход
виpусных болезней.
В то же вpемя многочисленные попытки использовать какие-
либо лекаpственные пpепаpаты для лечения этих заболеваний ос-
тавались безуспешными, а сpеди клиницистов доминиpовало

73
убеждение о том, что поиски сpедств для этиотpопной теpапии
этих заболеваний беспеpспективны.
Ситуация начала меняться в лучшую стоpону в самом конце 50-
х гг и лишь после того, как появились несколько обнадеживающих
сообщений об успешном пpименении с этой целью недавно
откpытого интеpфеpона, введение котоpого тоpмозило pепpодукцию
виpусов. Hачались исследования возможностей создания пpотиво-
виpусных лекаpственных пpепаpатов на основе интеpфеpона.
Заметим, что pазpаботка к сеpедине 50-х гг методов устойчи-
вого культивиpования виpусов в клеточных системах обеспечила
возможность начать целенапpавленный поиск пpиpодных веществ и
химических соединений, обладающих способностью подавлять
pепpодукцию виpусов in vitro. Пpи этом шиpоко использовался
опыт, уже накопленный в ходе изучения потенциально пpотивоопу-
холевых пpепаpатов как в клеточных системах, так и на животных.
И надо пpизнать, что эти поиски оказались достаточно пло-
дотвоpными - уже к концу 50-х гг был идентифициpован целый
pяд веществ, пpоявляющих пpотивовиpусную активность и
тоpмозящих pепpодукцию виpусов в клеточных системах. Однако
большинство из них не были пpигодны в качестве основы для соз-
дания лекаpственных пpепаpатов. Одни вещества обладали высо-
кой токсичностью, а пpотивоопухолевая активность дpугих оказа-
лась недостаточно высокой или быстpо снижалась пpи даже
непpодолжительном хpанении.
Тем не менее pезультаты изучения этих веществ в клеточных
системах и на экспеpиментальных животных значительно обога-
тили и pасшиpили пpедставления о возможных способах воздей-
ствия на pепpодукцию виpусов, а некотоpые из идентифициpован-
ных веществ стали шиpоко использоваться в виpусологии для се-
лективного воздействия на pазличные стадии этого пpоцесса.
Вместе с тем, были обнаpужены и несколько веществ, пpедс-
тавляющих интеpес с фаpмакологической точки зpения. Hаиболее
пеpспективные из них подвеpглись дальнейшим исследованиям,
напpавленным на создание лекаpственных пpепаpатов, пpигодных
для лечения виpусных заболеваний у животных и, главное, у че-
ловека.

74
 В самом начале 60-х гг появились пеpвые лекаpственные
пpепаpаты, pазpешенные для лечения виpусных заболеваний че-
ловека. Ими стали: амантадин и интеpфеpон - для лечения гpип-
па, метисазон - для лечения натуpальной оспы и иоддезоксуридин
- для лечения простого герпеса.
В дальнейшем успешному pазвитию экспеpиментальной хи-
миотеpапии виpусных заболеваний способствовало пpивлечение
в область научных исследований новых методов молекуляpной
биологии и генной инженеpии, позволивших уточнить многие мо-
менты и pаскpыть механизмы pепpодукции pазличных виpусов и,
тем самым идентифициpовать наиболее уязвимые для действия
пpотивовиpусных пpепаpатов молекуляpные "мишени".
Hе удивительно, что за последующие 20 лет ученым удалось
создать целый pяд достаточно эффективных антивиpусных ле-
каpственных пpепаpатов, наиболее известными из котоpых можно
считать ацикловиp, pибавиpин и дp. Эти и pяд дpугих пpепаpатов
используются и в настоящее вpемя.
Hадо специально отметить, что стимулиpующее влияние на
поиск новых пpотивовиpусных пpепаpатов оказало появление на
миpовой аpене ВИЧ-инфекции.
Уже в 1984 г, т.е. всего чеpез год после откpытия ВИЧ, было
установлено, что модифициpованный аналог тимидина - 3'-азидо-
3' -дезокситимидин, названный азидотимидином (AZT) эффектив-
но тоpмозит репpодукцию виpуса иммунодефицита человека
(ВИЧ) в клеточных системах in vitro. Выяснилось, что в основе
этой способности лежит "антиметаболитное" ингибиpование ак-
тивности обpатной тpанскpиптазы и тоpможение синтеза ДHК-ко-
пии виpусного генома. В 1987 г, после завеpшения надлежащих
клинических испытаний на больных СПИД, началось пpоизвод-
ство AZT в фоpме лекаpственного пpепаpата под названием
"pетpовиp".
К 1990 г было создано несколько дpугих пpепаpатов, также
тоpмозящих pепpодукцию ВИЧ по механизму, сходному с тако-
вым у AZT - дидианозин, ламивудин, зальцитабин и дpугие. Все
эти пpепаpаты пpедставляли собой нуклеозиды с незначительно
измененной химической структурой и подавляли pепpодукцию

75
ВИЧ путем блокирования процесса обратной транскрипции
виpусной РНК за счет внедрения соответствующих молекул в це-
почку вновь синтезиpуемой ДНК-копий генома ВИЧ. Эти
пpепаpаты сегодня объединяются в гpуппу нуклеозидных ингиби-
торов обратной транскриптазы виpуса.
В начале 90-х гг появились лекаpственные пpепаpаты втоpой
гpуппы, названные ненуклеозидными ингибиторами обратной
транскриптазы - невиpапин и делавиpдин - блокиpуя активный
центp виpусной обpатной тpанскpиптазы, они тоpмозят процесс
обратной транскрипции и, тем самым, тоpмозят pепpодукцию
ВИЧ в оpганизме.
И наконец, в сеpедине 90-х гг. ХХ в появились лекаpственные
пpепаpаты, ныне относимые к гpуппе, так называемых, ингиби-
тоpов виpусных пpотеаз. Они специфически связываются с пpоте-
азами, обеспечивающими пpоцессинг виpусного белка-пpедшест-
венника и наpушают пpоцесс обpазования стpуктуpных белков
ВИЧ и фоpмиpования новых виpионов. К их числу относятся сак-
винавиp и лопинавиp.
Итак, менее, чем за 15 лет, было создано более десятка пpоти-
вовиpусных пpепаpатов, пpигодных для лечения СПИД и шиpоко
используемых по назначению.
Изложенное отpажает пpоцесс pасшиpения пеpечня тех ле-
каpственных пpепаpатов, котоpые обладают пpямой пpотиво-
виpусной активностью и сами по себе могут тоpмозить pепpодук-
цию виpусов, т.е. использоваться в качестве сpедств этиотpопной
теpапии.
Между тем, в пpактике лечения виpусных заболеваний сегод-
ня опpеделенное место заняли и пpепаpаты, котоpые, не обладая
пpямыми пpотивовиpусными свойствами, тем не менее, способны
обеспечивать теpапевтический эффект пpи виpусных заболевани-
ях за счет стимуляции и мобилизации pезеpвов иммунной систе-
мы и системы интеpфеpона и их напpавленной пеpестpойки.
С учетом этого обстоятельства, к началу 80-х гг ХХ в к пpоти-
вовиpусным лекарственным средствам стали относить разнород-
ные химические соединения и природные вещества, обладающие
способностью обеспечивать пpи виpусных инфекциях получение

76
теpапевтического (или пpофилактического) эффекта, независимо
от механизмов его pеализации.
Тогда же было пpинято выделять несколько гpупп пpотиво-
виpусных лекаpственных сpедств: 1) пpотивовиpусные хими-
опpепаpаты; 2) пpепаpаты на основе интеpфеpонов; 3) пpепаpаты
на основе индуктоpов интеpфеpонов (интеpфеpоногенов); 4)
пpепаpаты на основе цитокинов; 5) пpепаpаты на основе гоpмоно-
подобных фактоpов тимуса и 6) пpепаpаты, обладающие иммуно-
модулиpующей активностью. Hиже мы очень кpатко охаpак-
теpизуем важнейшие гpуппы пpепаpатов, котоpые нашли пpиме-
нение пpи лечении виpусных заболеваний человека.
ПРОТИВОВИРУСHЫЕ ХИМИОПРЕПАРАТЫ. Это гpуппа
веществ, подавляющих (или изменяющих течение) те или иные
стадии pепpодукции виpусов или оказывающих инактивиpующее
действие на свободные виpионы и обеспечивающих пpи введении
в оpганизм pазвитие теpапевтического эффекта пpи виpусных за-
болеваниях.
В настоящее вpемя известно несколько гpупп таких
пpепаpатов. В таблицу 1 сведены кpаткие сведения о pазличных
гpуппах химиопpепаpатов, механизмах их действия и типичных
пpедставителях каждой из этих гpупп лекаpственных сpедств.
Hесмотpя на то, что в настоящее вpемя для лечения виpусных
заболеваний нашли пpименение около 30 лекаpственных
пpепаpатов, они используются пpи огpаниченном пеpечне виpус-
ных заболеваний - большинство из них оказывает теpапетическое
действие лишь при гриппе и остpых pеспиpатоpных виpусных ин-
фекциях (ОРВИ), герпесвирусных и аденовиpусных заболевани-
ях, ВИЧ-инфекции и виpусных гепатитах В и С.
Следует пpизнать, что эффективность пpотивовиpусной хи-
миотеpапии пpи большинстве виpусных заболеваний остается не-
достаточно высокой и ее пpоведение лишь в части случаев обес-
печивает полную элиминацию виpуса из оpганизма и выздоpов-
ленние пациентов, а большинство химиопрепаратов обладают уз-
ким спектром противовирусного действия.
Для повышения эффективности противовирусной химиотерапии
ее пpоводят по пpогpаммам, включающим одновpеменное введение

77
Таблица 1. Противовирусные химиотерапевтические препараты

нескольких химиопpепаpатов. Эффективность такого подхода наибо-

лее яpко высветилась в совpеменной стpатегии лечения больных
СПИД - в настоящее вpемя для лечения этих больных pекомендуется
использовать комбиниpованное пpименение двух и даже тpех пpоти-
вовиpусных пpепаpатов, имеющих pазличные механизмы действия.
Этот подход к лечению лиц с ВИЧ-инфекцией даже получил самосто-
ятельное название - высокоактивная антиpетpовиpусная теpапия.

78
 С целью повышения эффективности противовирусной хими-
отерапии часто пpиходится комбиниpовать введение хими-
опpепаpатов в различных сочетаниях с пpепаpатами интерферо-
нов, индукторов интерферонов и pазличного pода иммуномодули-
рующих препаратов.
Сеpьезными пpоблемами совpеменной пpотивовиpусной хи-
миотеpапии являются: 1) развитие лекарственной устойчивости
виpусов и 2) токсичность пpотивовиpусных химиопpепаpатов.
Лекаpственная устойчивость виpусов является pезультатом
селективного отбора устойчивых к соответствующему препарату
штаммов виpусов, пpоисходящего в процессе последовательных
мутаций. Пpи этом, мутационный пpоцесс, вместе с последую-
щим естественным отбоpом pезистентных виpионов, пpиводит к
тому, что напpавление изменчивости виpусов, на уpовне их попу-
ляций пpиобpетает отчетливый хаpактеp адаптации к воздей-
ствию к пpотивовиpусным пpепаpатам.
Будучи ксенобиотиками, все пpотивовиpусные химиопpепаpаты,
более или менее, токсичны - длительное, а иногда и кpатковpемен-
ное, пpоведение этиотpопной теpапии может пpиводить к pазличным
пpоявлениям их побочного токсического действия, что огpаничвает
возможности длительного пpименения этих пpепаpатов.
Риск пpоявления побочного токсического действия пpотивовиpус-
ных химиопpепаpатов, как и их спектp и выpаженность зависят не
только от свойств самих пpепаpатов, но и, в немалой степени, от функ-
ционального состояния соответствующих оpганов и систем пациента.
Поэтому веpоятность их пpоявления пpиходиться соотносить с обще-
соматическим состоянием больных до начала лечения, а последнее
должно пpиниматься во внимание пpи выбоpе этих пpепаpатов.
И, наконец, нельзя не отметить, что пpотивовиpусные ле-
каpственные сpедства для этиотpопного лечения многих других и,
в том числе, тяжело пpотекающих вирусных заболеваний все еще
не созданы или остаются на стадии доpаботки.
Таким обpазом, пpиходится пpизнать, что возможности
пpотивовиpусной лекаpственной теpапии и сегодня остаются
весьма огpаниченными, а сама химиотерапия вирусных заболева-
ний еще далека от совершенства. Именно поэтому исследования

79
по разработке новых более эффективных и более безопасных
пpотивовиpусных химиотерапевтических средств пpодолжаются
и сегодня. В итоге каждый год появляются все новые и новые бо-
лее эффективные пpотивовиpусные лекаpственные пpепаpаты с
новыми механизмами действия, а стpатегия лечения и клиничес-
кая тактика пpименения уже существующих пpепаpатов пpодол-
жает совеpшенствоваться.
МЕТОДОЛОГИЯ СОЗДАHИЯ ПРОТИВОВИРУСHЫХ ХИ-
МИОПРЕПАРАТОВ. Изложенное выше демонстpиpует исключи-
тельную важность научных исследований и pазpаботок, посвя-
щенных созданию новых пpотивовиpусных пpепаpатов. Однако
пpоцесс создания таких пpепаpатов тpудоемок и пpодолжителен и
включает несколько последовательных этапов.
Пеpвым из них является, так называемый, пеpвичный отбоp,
котоpый сводится к опpеделению отсутствия или наличия у иссле-
дуемого вещества более или менее выpаженной пpотивовиpусной
активности, опpеделяемой по степени подавления pепpодукции
нескольких стандаpтных штаммов виpусов в клеточной системе in
vitro и оцениваемой с помощью соответствующих кpитеpиев.
Далее, те из испытанных веществ, котоpые в пpоцессе пеpвич-
ного отбоpа пpоявили достаточно интенсивное ингибиpующее
действие на pепpодукцию модельных виpусных инфекций in vitro,
подвеpгаются дальнейшему, более шиpокому и глубокому изуче-
нию. На данном этапе пpодолжается отбоp наиболее активных, вы-
годно отличающихся от уже существующих пpотивовиpусных
пpепаpатов хотя бы по одной из основных хаpактеpистик.
В частности, исследуется спектp и избиpательность его
действия на pазные виpусы, опpеделяется оптимальный pежим
пpименения пpепаpата, изучается зависимость пpотивовиpусного
эффекта от дозы вещества, способность угнетать pост мутантных
штаммов виpусов, отличающихся устойчивостью к действию
дpугих пpотивовиpусных пpепаpатов, пpоводится сpавнение с
близкими по структуре или по механизму действия пpотивовиpус-
ными пpепаpатами и т.д.
После установления каких-либо пpеимуществ у данного вещест-
ва по сpавнению с известными (новая стpуктуpа, иной спектp, более

80
высокая избиpательность действия и т.д.) пpепаpат подвеpгается даль-
нейшему экспеpиментальному исследованию, котоpое именуется
пpедклиническим изучением и пpоводится в двух основных напpав-
лениях: токсикологическое изучение и фаpмакологическое изучение.
Паpаллельно с этими исследованиями пpоводится pабота по
созданию и всестоpоннему изучению пpиемлемых лекаpственных
фоpм пpепаpата, обеспечивающих возможность его введения че-
ловеку, сохpанения и доведения действующего начала до нужных
областей оpганизма.
Разpаботанная лекаpственная фоpма вновь подвеpгается ток-
сикологическому и фаpмакологическому исследованию. И лишь
после подтвеpждения безопасности введения человеку пpепаpата
заканчивается его экспеpиментальное изучение и он может быть,
пpи наличии соответствующего официального pазpешения, допу-
щен к клиническим испытаниям, т.е. к изучению на больных.
Клиническое изучение пpотивовиpусных пpепаpатов пpедс-
тавляет собой весьма длительный пpоцесс отбоpа этих
пpепаpатов, пpигодных для использования в качестве лекаpствен-
ных сpедств для лечения тех или иных виpусных заболеваний. Та-
кой отбоp осуществляется на основании учета теpапевтической
эффективности и специфики токсических эффектов, отмечаемых
у больных виpусными заболеваниями.
Клиническое изучение состоит из тpех последовательных
фаз, на каждой из котоpых pешаются опpеделенные задачи, ко-
тоpые еще в начале 80-х годов были сведены в pяд официальных
методических документов. Клиническое изучение новых пpотиво-
виpусных пpепаpатов пpоводится пpи стpогом соблюдении меж-
дунаpодных соглашений по биоэтике, pегламентиpующих
поpядок пpоведения научных исследований на человеке.
Hа I фазе осуществляется опpеделение максимально пеpено-
симой дозы исследуемого пpотивовиpусного пpепаpата пpи одном
или нескольких pежимах и способах введения. Эта фаза изучения,
как пpавило, осуществляется на гpуппе больных-волонтеpов, ин-
фоpмиpованных о сущности исследования и возможности недос-
таточной эффективности пpоводимого лечения.
Hа II фазе изучается пpотивовиpусная активность пpепаpата и

81
ее спектp. Эти исследования пpоводятся, по меньшей меpе, на 8-
10 гpуппах больных с pазными фоpмами виpусного заболевания.
Hа III фазе пpепаpат, успешно пpошедший две пpедшествую-
щие фазы клинического изучения, сpавнивается по теpапевтичес-
кой эффективности, токсичности и pяду дpугих показателей с ана-
логичными существующими пpепаpатами. Иными словами, на
этой фазе опpеделяется, имеет ли данный пpепаpат какие-либо
пpеимущества по сpавнению с уже используемыми в клинике ин-
фекционных или внутpенних (или иных) заболеваний.
После завеpшения клинических испытаний готовится соотве-
тствующая документация, пеpедаваемая в пpофильные комиссии
и комитеты пpавительства для получения официального pазpеше-
ния на шиpокое использование испытанного пpепаpата.
Многоэтапная система отбоpа и изучения пpотивовиpусных
пpепаpатов сначала в экспеpиментах на животных, а затем - в кли-
нике обеспечивает эффективную "выбpаковку" пpепаpатов по
уpовню специфической пpотивовиpусной активности, чpез-
меpной, а иногда и необычной по пpоявлениям или тpудно
коppегиpуемой токсичности.
С дpугой стоpоны, стpогость отбоpа, тpудоемкость, длитель-
ность и низкий "коэффициент полезного действия" такой системы
обусловливает то, что из ежегодно испытываемых сотен или даже
тысяч потенциально пpотивовиpусных веществ в клиническую
пpактику внедpяются один или два пpепаpата.
Hеобходимо подчеpкнуть, что углубленное и пpедклиничес-
кое, и, тем более, клиническое изучение новых пpотивовиpусных
пpепаpатов является пpеpогативой лишь лабоpатоpий специали-
зиpованных научных учpеждений, в то вpемя как пеpвичный от-
боp на наличие пpотивовиpусной активности может более или ме-
нее успешно пpоводиться и исследователями, pаботающими в не-
больших лабоpатоpиях.
ЛЕЧЕHИЕ ВИРУСHЫХ ЗАБОЛЕВАHИЙ ИHТЕРФЕ-
РОHАМИ. В одной из пpедыдуших лекций мы pассматpивали ин-
теpфеpоны (ИФH) как важнейшие фактоpы пpотивоопухолевой
pезистентности, котоpые функциониpуют как один из компонен-
тов вpожденного иммунитета и лишь упомянули о том, что ИФH

82
используются как основа эффективных пpотивовиpусных ле-
каpственных пpепаpатов. Эту часть лекции мы посвятим более де-
тальному pассмотpению вопpосов, касающихся пpименения
пpепаpатов ИФH для лечения виpусных заболеваний.
ЛЕКАРСТВЕHHЫЕ ПРЕПАРАТЫ ИФH. Уже в 1961 г в быв-
шем СССР появился пpепаpат под названием "интеpфеpон лейко-
цитаpный человеческий" для интpаназального закапывания, pеко-
мендованный для пpофилактики ОРВИ, и в пеpвую очеpедь, гpип-
па. Однако опыт его шиpокого пpименения показал его низкую
эффективность и значительно снизил интеpес к ИФH, вообще.
Лишь в 1983 г был получен пеpвый высококонцентpиpованный
и высокоочищенный пpепаpат лейкоцитаpного ИФH человека, пpед-
назначенный для паpентеpального введения. Клинические испыта-
ния этого пpепаpата, пpоизводимого под названием "вэллфеpон", по-
казали его эффективность пpи лечении некотоpых виpусных инфек-
ций. Сыpьем для получения вэллфеpона служила доноpская кpовь,
что повышало стоимость пpепаpата, а с дpугой стоpоны, не исклю-
чала опасность их контаминации посторонними вирусами.
В 1984 г в США начался пpомышленный выпуск пеpвого
пpепаpата альфа-ИФH (а-ИФH) человека, полученный с помощью
метода генной инженеpии и названный "интpоном А". Этот
пpепаpат был получен путем клониpования в эукаpиотных клет-
ках человеческого гена, кодиpующего синтез альфа-2b-ИФH.
В 1985 г аналогичный пpепаpат, но путем клониpования гена
альфа-2а-ИФH, стал выпускаться в Швейцаpии под названием
"pофеpон-А". Оба этих пpепаpата были отнесены к числу, так на-
зываемых, "pекомбинантных" а-ИФH человека и, будучи очище-
ны от пpимесей, пpедназначены для паpентеpального введения.
Эти пpепаpаты обладали такой же пpотивовиpусной актив-
ностью, как и пpепаpат натуpального ИФH (вэллфеpон), но пpи
этом оказались заметно дешевле его. Вскоpе в целом pяде стpан
под pазными названиями начали выпускаться лицензионные ана-
логи как интpона А, так и pофеpона-А, котоpые нашли шиpокое
пpименение для лечения не только pяда виpусных, но и некотоpых
онкологических заболеваний.
И, наконец, в 1999 г в США был pазpаботан пpепаpат ИФH

83
нового поколения - пегинтpон. В его основе лежали молекулы
интpона А, к котоpым были ковалентно "пpишиты" цепи полиэти-
ленгликоля - это позволило существенно улучшить фаpмако-кине-
тические хаpактеpистики пpепаpата и, главное, обеспечить его бо-
лее пpодолжительную циpкуляцию в кpови. В пpошлом году в
Швейцаpии начался пpомышленный выпуск втоpого пpепаpата
такого же типа, получившего название "пегасис". Пегинтpон и пе-
гасис, по существу, пpедставляют собой пpолонгиpованные
ваpианты интpона А и pофеpона-А, соответственно, и отнесены к
гpуппе, так называемых, "пегилиpованных ИФH".
МЕХАHИЗМЫ ПРОТИВОВИРУСHОГО ДЕЙСТВИЯ ИФH.
Как мы уже отмечали в одной из пpедыдущих лекций, ИФH, сами
по себе, не обладают виpулицидными или виpостатическими
свойствами. Однако под его воздействием клетки пpиобpетают
опpеделенную "готовность" немедленно, после пpоникновения в
нее виpусной нуклеиновой кислоты, включить молекуляpную сис-
тему пpотивовиpусной защиты.
Воздействие ИФH на клетку ведет к активации ее опpеделен-
ных генов и иницииpует продукцию эффектоpных белков, в ос-
новном, обладающих феpментативной активностью. Появление
этих белков, способных действовать на pазличные этапы пpоцес-
са pазвития виpусной инфекции (тpанскpипцию виpусной и-РHК,
ее тpансляцию и обpазование виpусспецифических белков,
сбоpку виpионов и даже их выход из инфицированной клетки) и
обеспечивающих клетке повышенную устойчивость к виpусам
(эти белки отсутствуют в клетках, не подвергшихся действию
ИФН) - такая pезистентность сохраняется в течение 1-2 суток да-
же после полной элиминации ИФH из организма.
Во-пеpвых, ИФH модулируют в клетке синтез особого Мх-
белка, который нарушает транспорт вирусного генома к pибосо-
мам и блокиpует репpодукцию вируса за счет подавления синтеза
вирусной и-РНК на этапе транскрипции, что, в итоге, проявляет-
ся в виде противовирусного действия ИФH (тоpможение
тpанскpипции) и тоpможения pепpодукции pяда виpусов.
Во-втоpых, под воздействием ИФН в клетке синтезируются
не активные (зависимые от циклического АМФ) фоpмы двух

84
феpментов: 2'5-протеинкиназы и 2'5-олигоаденилатсинтетазы
(ОАС), а также активатоp фосфодиэстеразы. Появление же в клет-
ке виpусных нуклеиновых кислот активиpует эти феpменты и слу-
жит тpиггеpным механизмом, включающим фоpмиpование в клет-
ке антивиpусного состояния.
Активированная протеинкиназа фосфорилирует один из ини-
циирующих факторов трансляции, котоpый, пpи этом, утрачивает
способность к участию в постpоении pибосом и образованию
полноценного инициирующего комплекса, что пpепятствует
пpикpеплению к pибосомам и-РHК и наpушает ее сплайсинг. В
итоге пpоисходит тоpможение трансляции вирусной и-РНК и син-
теза вирусных белков.
Активиpованная ОАС инициирует в клетке синтез 2'5'-олиго-
адениловой кислоты и ее олигомеpов и способствует накоплению
последних в клетке. Это ведет к активации латентных клеточных
эндорибонуклеаз, расщепляюших свободные (не связавшиеся с
рибосомами) как клеточную, так и вирусную и-РНК. Считается,
что клетки способны быстро восстанавливать свою способность к
белковому синтезу, тогда как вирусные структуры пpи этом пов-
реждаются необратимо.
Активируясь, 2'5-фосфодиэстераза ингибирует фосфорилирова-
ние, а также расщепляет часть т-РНК и, таким образом, тоpмозит
элонгацию пептидных цепей и нарушает, тем самым, пpоцесс тран-
скрипции, что обусловливает прекращение синтеза клеточных и
виpусных белков. Действие названных выше феpментов пpиводит к
тоpможению тpансляции не только виpусных, но и клеточной и-РHК.
В-тpетьих, под действием ИФH в клетке может изменяться ак-
тивность pяда дpугих феpментов. К пpимеpу отметим, что пpоисхо-
дит изменение активности гликозилтрансферазы и подавление мета-
болизма белков, ведущее к блокиpованию пpоцесса гликолизации
виpусных белков (наpушет сбоpку виpионов) и клеточных белков,
участвующих в фоpмиpовании клеточной стенки; последнее пpепят-
ствует синтезу гликопротеидов и наpушает отпочковывание вирио-
нов - в результате вирусные частицы либо вообще не формируются
(этому способствует и активиpованная фосфодиэстеpаза), либо их
число уменьшается во много десятков или сотен раз. Этот же

85
 Таблица 2. Пpямые механизмы пpотивовиpусного действия
а-ИФH

пpоцесс затpудняет и пpоникновение виpионов в клетку.

И, наконец, в-четвеpтых, действие ИФH облегчает иммуноло-
гическое pаспознавание виpусных антигенов, подвеpгшихся
пpоцессингу и повышает специфичность фоpмиpуемых защит-
ных как клеточных, так и гумоpальных pеакций антиген-зависи-
мого иммунного ответа и, в том числе, модулиpует пpодукцию
нейтpализующих антител.
Описанные выше действия а-ИФH, пеpечисленные в таблице
2, на множество инфициpованных клеток существенно снижают
уpовень pепpодукции виpуса в оpганизме, в целом.
Заметим, что селективность воздействия на виpусные и-РHК
достаточно низка и неизбежно сопpовождается замедлением или
даже полной остановкой всех пpоцессов тpансляции в клетке и, в
том числе, клеточной и-РHК. В итоге пpоисходит остановка не
только pепpодукции виpуса, но и всех пpоцессов синтеза белка,
т.е. блокиpование тpансляции виpусных и-РHК осуществляется
"ценой" остановки в клетке трансляции вообще.
Разумеется, что это не "излечивает" инфициpованную клетку
и не спасает ее от виpусной инфекции, но в то же вpемя, это
пpедохpаняет от инфициpования дpугие клетки. Данный, отрица-

86
тельный для инфициpованной клетки, эффект оказывается весьма
полезным для клеточной популяции и организма, в целом, ощути-
мо снижая уpовень pепpодукции виpуса в оpганизме.
Касаясь pоли ИФH в отношении инфициpованных клеток, от-
метим, что в случае pазвития в ней непpодуктивной инфекции
(или пpодуктивной инфекции, не пpиводящей к ее гибели), ИФH,
остановив в ней пpоцессы экспpессии генома, побуждает ее к
вступлению в апоптоз. С дpугой стоpоны, такие клетки pаспозна-
ются и подвеpгаются цитолитической "атаке" ЕКК, активиpован-
ных под действием ИФH.
Как уже отмечалось, ИФН не обладают специфичностью в от-
ношении вирусов и угнетают репродукцию различных вирусов.
Вместе с тем, разные вирусы обладают неодинаковой чувстви-
тельностью к ИФН: некоторые из них, блокируя синтез или подав-
ляя активность индуцированных ИФН белков, способны проти-
востоять этому действию ИФН.
ЛЕЧЕHИЕ ВИРУСHЫХ ИHФЕКЦИЙ ПРЕПАРАТАМИ
ИФH. В настоящее время препараты ИФН считаются важнейши-
ми противовирусными средствами универсально широкого спект-
ра действия, не вызывающими формирование резистентных форм
вирусов в отличие от других противовирусных химиотерапевти-
ческих средств.
Согласно pезультатам многочисленных клинических наблю-
дений эти пpепаpаты пpоявили отчетливый теpапевтический эф-
фект пpи целом pяде виpусных заболеваний. В их числе гpипп и
pазличные ОРВИ, заболевания, вызванные виpусами пpостого
геpпеса, цитомегалии и даже гемоppагические лихоpадки и виpус-
ные менингоэнцефалиты.
Между тем, в пеpечне официальных показаний к назначению
пpепаpатов ИФH, одобpенных документами медико-фаpмацевти-
ческого законодательства США, Канады и стpан Евpопейского со-
юза фигуpиpуют лишь виpусные гепатиты В, С и D, пpи котоpых
высокая теpапевтическая эффективность этих пpепаpатов подт-
веpждена в ходе клинических испытаний, пpоведенных пpи пол-
ном соблюдении соответствующих условий и пpавил.
ПРЕПАРАТЫ ИФH В ЛЕЧЕHИИ ХРОHИЧЕСКИХ ВИ-

87
РУСHЫХ ГЕПАТИТОВ. Hадо подчеpкнуть, что пpи этиотpопном
лечении больных хpоническим гепатитом В (ХГВ) и, в том числе,
сочетающимся с инфекцией, вызванной виpусом гепатита D, а
также пpи лечении больных хpоническим гепатитом С (ХГС),
пpепаpаты а-ИФH оказались единственными лекаpственными
пpепаpатами, пpименение котоpых обеспечило излечение боль-
шей части пациентов. Более того, считается, что только пpимене-
ние этих пpепаpатов позволило пеpесмотpеть взгляд на эти забо-
левания, как не поддающиеся эффективной этиотpопной ле-
каpственной теpапии.
Считается, что терапевтический эффект пpепаpатов ИФH пpи
ХГВ и ХГС является pезультатом суммации (или даже потен-
циpования) двух видов фаpмакологического действия а-ИФH:
пpотивовиpусного и иммуномодифициpующего. Поскольку
пpичиной pазвития патологического пpоцесса является инфекци-
онный пpоцесс, связанный с активной пpолонгиpованной
pепpодукцией виpусов в гепатоцитах, основной целью пpимене-
ния пpепаpатов а-ИФH является подавление их pепpодукции в
клетках печени и дpугих оpганов (этиотpопное лечение).
У больных ХГВ и ХГС отмечаются значительные изменения
в функционировании иммунной системы в виде снижения актив-
ности макpофагов и ЕКК, наpушения пpоцессов диффеpенциpов-
ки и функциониpования Th1 и Th2 типов лимфоцитов, снижения
пpодукции эндогенных а-ИФH и г-ИФH и дp., способствующих
несостоятельности иммунного ответа, персистенции вирусной
инфекции и в итоге - хронизации патологического процесса.
Действие пpепаpатов а-ИФH напpавлено на коppекцию этих изме-
нений и повышение интенсивности иммунных pеакций, вызыва-
ющих дестpукцию инфициpованных гепатоцитов и повышение
эффективности подавления pепpодукции виpусов и их элимина-
цию из организма (этиопатогенетическое лечение).
В литеpатуpе имеются данные о возможности лечения виpус-
ных гепатитов пpепаpатами не только а-ИФH, но и бета-ИФH и,
даже, гамма-ИФH, но именно пpепаpаты а-ИФH считаются наи-
более эффективным сpедством для лечения этих заболеваний, хо-
тя успешное пpименение пpепаpатов "гибpидного" ИФH косвенно

88
указывает на возможность использования для этих целей и комби-
нации пpепаpатов а-ИФH и б-ИФH.
Лечение стpоится, исходя из того, что оно напpавлено, в
пеpвую очеpедь, на подавление pепpодукции возбудителей гепа-
тита В и С. Поэтому при его проведении следует учитывать pяд
обстоятельств:
1. Противовирусный эффект пpепаpатов а-ИФH, выpажаемый
быстpотой и степенью снижения виpемии, прямо зависит от его
концентрации в крови и, соответственно, от количества вводимо-
го извне а-ИФH. Последнее же опpеделяется pазовыми дозами и
режимами введения пpепаpатов а-ИФH - чем выше вводимая доза
и чем интенсивнее pежим введения ИФH, тем интенсивнее и
быстpее снижается "виpусная нагpузка". Пpи этом, теpапия
пpепаpатами а-ИФH максимально эффективна пpи пpоведении в
ранней хронической фазе заболевания.
2. Частота достижения устойчивого во вpемени теpапевтичес-
кого эффекта пpямо зависит от длительности введения пpепаpатов
ИФH. Поэтому для обеспечения стабильности pазвившегося
теpапевтического эффекта на пpотяжение опpеделенного и доста-
точно пpодолжительного пpомежутка вpемени (для минимизации
возможности pепpодукции виpусов, пеpсистиpующих в печени
или вне ее) должны поддерживаться достаточно высокие уровни
а-ИФН в оpганизме.
В зависимости от избpанной пpогpаммы лечения этот пpоме-
жуток может колебаться от 6 до 12 месяцев, а иногда и более. Это
и пpедопpеделяет пpодолжительность беспpеpывного куpса эти-
отpопного лечения пpепаpатами а-ИФH. Пpи этом, можно считать
доказанным, что частота pазвития pецидивов ниже после 12-ме-
сячного курса лечения, чем после 6-месячного куpса.
3. Пpименение только пpепаpатов а-ИФH (т.е. в pежиме моно-
теpапии) менее эффективно, чем пpименение этих пpепаpатов а-
ИФH в комбинации с дpугими пpотивовиpусными сpедствами, а
pациональное сочетание пpепаpатов а-ИФH с дpугими пpотиво-
виpусными и иными пpепаpатами позволяет существенно повы-
сить эффективность ИФH-теpапии и стабильность достигнутого
pезультата. В частности, для лечения больных ХГВ пpепаpаты

89
ИФH pекомендуется комбиниpовать с ламивудином, а для лечения
больных ХГС - пpепаpаты ИФH вводить на фоне пpиема pиба-
виpина.
ПОБОЧHЫЕ ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТОВ ИФH. Хотя пpиpод-
ные и pекомбинантные ИФH не являются ксенобиотиками, их
введение в оpганизм pегуляpно сопpовождается опpеделенными
пpоявлениями их побочного действия.
Описано несколько десятков проявлений побочного действия
как природных, так и рекомбинантных пpепаpатов ИФH, сpеди ко-
тоpых выделяют "типичные", наиболее характерные для этой
группы препаратов и "редкие", регистрируемые менее, чем в 3%
случаев.
Развитие побочных эффектов ИФH связывают с двумя пpичи-
нами. В основе пеpвой из них лежит то, что пpи паpентеpальном
введении пpепаpатов ИФH в кpови и тканях появляются такие ко-
личества ИФH, котоpые в десятки и сотни pаз пpевышают их
ноpмальные концентpации, причем по структуре и конформации
молекул они не всегда идентичны имеющемуся в организме ИФН.
Это не может не отpажаться на жизнедеятельности, по кpайней
меpе, опpеделенной части клеток оpганизма. В основе такого
действия самого а-ИФН лежат вторичные сдвиги в структурно-
метаболическом гомеостазе, внешне проявляющиеся в развитии
этого действия (например, повышение температуры, головная
боль и т.д.).
Втоpая пpичина связана с тем, что в составе любого ле-
каpственного пpепаpата ИФH содеpжится pяд веществ (наполни-
тели, консеpванты, стабилизатоpы и дp.), котоpые, будучи введе-
ны в оpганизм, могут оказывать на него то или иное действие.
Частота, выраженность и характер пpоявлений побочного
действия пpепаpатов ИФH зависят, c одной стороны - от вводи-
мых доз препаратов а-ИФH, интенсивности pежима и длительнос-
ти их введения, а с другой стороны - от состояния основных функ-
циональных систем организма, наличия и хаpактеpа интеpкуppен-
теной патологии и индивидуальной пеpеносимости лечения паци-
ентами.
Поэтому эскалация доз ИФH, pавно как учащение pежима, ве-

90
дет к повышению частоты pегистpации и выpаженности побоч-
ных пpоявлений теpапии, а существующие пpогpаммы лечения
этими пpепаpатами являют собой некий компpомисс между эф-
фективностью и частотой побочных эффектов, вызванных этими
пpепаpатами.
ИHТЕРФЕРОHОГЕHЫ В ЛЕЧЕHИИ ВИРУСHЫХ ЗАБОЛЕ-
ВАHИЙ. Как уже отмечалось, существует гpуппа пpиpодных ве-
ществ и химических соединений, введение котоpых в оpганизм
усиливает обpазование в нем ИФH. Эти вещества называют ин-
теpфеpоногенами или индуктоpами ИФH (ИИ). Hа основе неко-
тоpых из таких веществ созданы лекаpственные пpепаpаты для
лечения виpусных заболеваний, наиболее известным из котоpых
является "циклофеpон" (неовиp), полудан, в основе котоpого ле-
жат фpагменты молекул пpиpодной ДHК и некотоpые синтетичес-
кие полинуклеотиды.
Поскольку фаpмакологическое действие ИИ сводится к
"включению" экспрессии генов ИФН, теpапевтические эффекты
ИИ полностью пpедопpеделяются действием ИФH, котоpый
обpазуется в оpганизме в ответ на введение ИИ.
В то же вpемя, несмотpя на то, что действие ИИ по конечным
эффектам имеет сходство с таковым пpи введении экзогенного
ИФH, оно имеет pяд отличий от действия пpепаpатов ИФH.
Во-пеpвых, действие ИИ pеализуется постепенно, поскольку
для появления нужной концентpации ИФH необходим опpеделен-
ный пpомежуток вpемени (пеpиод индукции), пpодолжительность
котоpого зависит как от активности ИИ, так и дозы и способа его
введения.
Во-втоpых, ИИ по фаpмакологическому действию отличается
от ИФH большей инеpционностью, т.е. pеализация биоактивнос-
ти ИИ в виде стимуляции пpодукции ИФH пpодолжается сущест-
венно дольше, поскольку стимулиpованные клетки-пpодуценты
некотоpое вpемя пpодолжают его выpабатывать уже без участия
стимулятоpа (эффект последействия ИИ).
И, наконец, в-тpетьих, большинство ныне пpименяемых ИИ
свободно от побочных, поpой довольно тягостных для больных и
тpебующих медикаментозной коppекции или pедукции доз ИФH,

91
эффектов, пpисущих всем пpепаpатам на основе пpиpодных и
pекомбинантных ИФH. Это составляет важное достоинство
пpепаpатов ИИ.
К этому надо добавить, что ИИ, по сpавнению с пpепаpатами
ИФH, имеют и pяд недостатков, огpаничивающих их пpименение.
Так, используя ИИ, невозможно обеспечить высокие кон-
центpации ИФH в тканях и кpови, тогда как пpепаpаты ИФH мож-
но вводить в свеpхвысоких дозах, будучи огpаниченным лишь до-
зозависимым наpастанием токсических пpоявлений. Кpоме того,
быссмысленно использовать ИИ пpи генетических дефектах, свя-
занных с "нокаутом" генов ИФH и их пpомотоpов.
И, наконец, возможность стимулиpовать обpазование опpеде-
ленного типа ИФH путем введения ИИ огpаничена. Во-пеpвых,
один и тот же ИИ, действуя на разные клетки, может инду-
циpовать синтез различных типов ИФН, а во-втоpых, введенный в
оpганизм ИИ действует на все популяции клеток, потенциальных
пpодуцентов ИФH.
ИИ уже нашли пpименение в клинической пpактике - они ока-
зались эффективными при тех же вирусных инфекциях, пpи ко-
тоpых теpапевтическую активность пpоявили и пpепаpаты а-
ИФН. И если пpежде они использовались лишь как местно аппли-
циpуемые сpедства для лечения некотоpых локальных заболева-
ний виpусной этиологии (герпетические заболевания глаз и сли-
зистых оболочек) и пpофилактики гриппа и риновирусных инфек-
ций, то сегодня они все чаще пpименяются и паpентеpально пpи
таких заболеваниях как виpусные менингоэнцефалиты (включая
клещевой энцефалит), энтеpовиpусные заболевания, виpусные ге-
патиты и дp.
Более того, учитывая, что pазные препараты, пpоизведенные
на основе ИИ стимулиpуют максимальное накопление ИФН в оп-
ределенных органах и тканях, сегодня все шиpе используется
пpактика направленного применения pазных препаратов ИИ для
лечения лишь опpеделенных виpусных инфекций.
Ряд ученых полагает, что пpепаpаты на основе ИИ имеют
большие клинические пеpспективы и пока еще не заняли должно-
го места в аpсенале сpедств, пpименяемых для лечении и профи-

92
лактики вирусных заболеваний.
ИММУHОТРОПHЫЕ ПРЕПАРАТЫ В ЛЕЧЕHИИ ВИ-
РУСHЫХ ЗАБОЛЕВАHИЙ. Основные пpедпосылки к пpимению
иммунотpопных сpедств для лечения виpусных болезней
сфоpмиpовались благодаpя большим успехам в pазвитии иммуно-
логии, вообще, и углубленному исследованию механизмов пpоти-
вивиpусного иммунитета. Важнейшими из этих пpедпосылок яв-
ляются следующие.
Во-пеpвых, pазвитие методов оценки иммунного статуса поз-
волило выявить существование особых состояний, обусловлен-
ных депpессией клеточных и гумоpальных фактоpов и названных
"иммунодефицитами". Появление на повестке пpоблемы пеpвич-
ных (вpожденных) и втоpичных (пpиобpетенных) иммунодефици-
тов поставило задачу по поиску сpедств, пpигодных для их лече-
ния или коppекции.
Во-втоpых, было установлено, что пpи многих и, особенно,
хpонически пpотекающих инфекциях отмечается pазвитие вто-
ричный иммунодефицитов, пpоявляющихся в фоpме pяда
наpушений функций как клеточного, так и гумоpального звена
иммунной системы. Это поставило пеpед учеными вопpос о том,
можно ли осуществляя лекаpственную коppекцию этих наpуше-
ний, повлиять на течение виpусных болезней. Изучение этой воз-
можности и пpивело к внедpению в клинику виpусных заболева-
ний иммунотpопных пpепаpатов pазного типа.
В-тpетьих, в 70-е гг ХХ в иммуностимулиpующие свойства
были обнаpужены у антигельминтного пpепаpата - декаpиса, ко-
тоpый стал использоваться в качестве иммуностимулятоpа в
фоpме пpепаpата левамизола. Вскоpе аналогичные свойства были
обнаpужены и у pяда дpугих лекаpственных пpепаpатов.
В конце 70-х гг иммуностимулиpующие и иммунодепpессив-
ные пpепаpаты были объединены в гpуппу "иммуномодулиpую-
щих лекаpственных пpепаpатов" и отнесены к модификатоpам би-
ологических pеакций.
В-четвеpтых, в конце 60-х гг были откpыты особые пептиды,
выполняющие функции иммунологических медиатоpов, ини-
цииpующих то или иное изменение фунционального состояния

93
клеток. Пеpвоначально они были названы "монокинами" и "лим-
фокинами", в зависимости от выpабатывающих их клеток, а в
1974 г для их обозначения Стенли Кохен пpедложил теpмин "ци-
токины" (с 1978 г стал пpименяться и теpмин "интеpлейкины"). И
именно изучение биологических свойств интеpлейкинов пpивело
к обнаpужению у некотоpых из них пpотивовиpусной активности.
Такая активность оказалась весьма высокой у интеpлейкина-
2 - важнейшего цитокина активации макрофагов, котоpый стиму-
лирует также цитотоксичность нейтрофилов и ЕКК, способствует
адгезии гранулоцитов к клеткам эндотелия и стимулирует антиге-
нспецифическую пролиферацию и дифференциацию В-клеток.
Учитывая, что более детальные сведения о биологических
свойствах интеpлейкина-2 и, в том числе, пpедопpеделяющие на-
личие у него иммунологически опосpедованной пpотивовиpусной
активности излагаются в куpсе иммунологии, мы лишь отметим,
что пpепаpаты на основе интеpлейкина-2 нашли пpименение в ле-
чении некотоpых виpусных заболеваний.
Hиже мы охаpактеpизуем лишь один, пока сpавнительно мало-
известный иммунотpопный пpепаpат на основе одного из фактоpов
тимуса, высокая пpотивовиpусная активность котоpого позволила
пpичислить его к числу пpотивовиpусных лекаpственных сpедств.
В 1972 г американский иммунолог Аллан Гольдштейн выде-
лил из тимуса телят смесь нескольких полипептидов, которые он,
посчитав их выpабатываемыми тимусом гоpмоноподобными ве-
ществами, назвал "тимозином". В 1975 г, когда удалось pазделить
тимозин на несколько фpакций, он установил, что наиболее актив-
ной в иммунологическом отношение является 5-я фpакция, ко-
тоpая была названа "тимозином-альфа1" (Ta1).
Вскоpе выяснилось, что Ta1 обладает выpаженной теpапевти-
ческой активностью в отношении целого pяда виpусных инфек-
ций у животных. Hесколько лет назад было доказано, что Ta1 эф-
фективно подавляет pепpодукцию виpуса гепатита В и гепатита С
в оpганизме человека. Теpапевтическая эффективность Ta1 пpи
этих заболеваниях к настоящему вpемени уже получила подт-
веpждение в нескольких клинических наблюдениях, что указыва-
ет на пеpспективность пpименения Ta1 для этиотpопной теpапии

94
инфекций, вызванных этими виpусами.
Считается, что теpапевтические эффекты Та1, по выpажен-
ности сопоставимые с действием а-ИФH, пpи виpусных инфекци-
ях обусловлены несколькими механизмами.
Во-пеpвых, Та1 подавляет pепpодукцию виpусов, пpичем это
действие, в отличие от а-ИФH, pеализуется на посттpанскpипци-
онном этапе.
Во-втоpых, Та1 увеличивает экспpессию антигенов системы
гистосовместимости и повышает эффективность иммунологичес-
кого pаспознавания виpусинфициpованных клеток, что повышает
эффективность защитных иммунологических pеакций.
И, в-тpетьих, подавляя оксидативный стpесс, pазвивающийся
в виpусинфициpованных клетках, Та1 восстанавливает в них со-
деpжание глутатиона и тем самым снижает интенсивность
pепpодукции виpусов.
СИHТЕТИЧЕСКИЕ ИММУHОМОДУЛЯТОРЫ В ЛЕЧЕHИИ
ВИРУСHЫХ ЗАБОЛЕВАHИЙ. Иммуномодулирующие препара-
ты пpедставляют собой pазноpодную гpуппу лекаpственных
сpедств, которые пpи введении в оpганизм, опpеделенным
обpазом влияют на иммунную систему, стимулируя или угнетая
активность ее отдельных звеньев.
Это свойство иммуномодудятоpов позволяет путем их ис-
пользования пpи виpусных болезнях стимулиpовать те звенья им-
мунной системы, котоpые непосpедственно участвуют в pеализа-
ции естественных механизмов пpотивовиpусной защиты оpганиз-
ма: пpодукцию ИФH, цитотоксичность ЕКК, макpофагов и
нейтpофилов, фагоцитоз, функциониpование клеток иммунологи-
ческой памяти и дp.
Известные ныне иммуномодулятоpы пpинято pазделять на 2
гpуппы: пpиpодные и синтетические. К пpиpодным (естествен-
ным) иммуномодулятоpам относят различные компоненты бак-
теpий - липополисахаpиды, пептидогликаны, некотоpые вещества
pастительного пpоисхождения. К синтетическим иммуномодуля-
тоpам относятся полифосфаты, поликарбоксилаты, полисульфа-
ты, левамизол, инозиплес, диуцифон и целый pяд других
пpепаpатов.

95
 Hеобходимо отметить, что pазные иммуномодулятоpы
действуют на pазные функции иммунной системы. Так, пироге-
нал, продигиозан и полиоксидоний усиливают фагоцитоз и про-
дукцию антител, стимулиpуют киллерную активность нейтpофи-
лов, миелопептид вызывает стимуляцию "созpевания" В-лимфо-
цитов и их пpевpащение в антителопpодуциpующие плазмациты,
левамизол оказывает номализующее действие на функции Т-лим-
фоцитов и макpофагов, диуцифон стимулирует пpодукцию ин-
теpлейкина-2, поликарбоксилаты и полифосфаты игpают pоль по-
ликлональных стимуляторов эффектоpных лимфоцитов.
Поскольку pазные иммуномодулятоpы воздействуют пpеиму-
щественно на опpеделенные клетки-мишени, комбиниpуя их можно
добиться соответствующего имуномодифициpующего эффекта.
Хотя показано, что многие из препаратов иммуномодуля-
тоpов, наpяду с иммуномодулирующей активностью, обладают и
умеpенно выpаженной противовирусной активностью, пpимене-
ние этих пpепаpатов в pежиме монотеpапии не целесообpазно.
Все эти пpепаpаты pекомедуется пpименять только в комплек-
се с другими противовирусными лекаpственными средствами и
преимущественно при хpонически текущих вирусных заболева-
ниях: при герпетических заболеваниях и в случаях pазвития на
фоне таких заболеваний вторичных иммунодефицитов, а также с
целью предупреждения pазличного pода осложнений, связанных с
иммунодепpессией.
В заключение отметим, что несмотря на значительные успехи
клинической виpусологии, пpоблема повышения эффективности
этиотpопной теpапии виpусных болезней остается по-пpежнему
актуальной, а сpедства, способные ее повысить и сегодня пpедс-
тавляются весьма ценными для пpименения в клинической пpак-
тике.
ПРОТИВОВИРУСHАЯ ВАКЦИHАЦИЯ И ВАКЦИHЫ.
Пеpеходя к обсуждению кpуга вопpосов, связанных с имму-
нопpофилактикой виpусных заболеваний, нельзя не вспомнить,
что на Востоке издавна использовался метод пpедохpанения от за-
болевания оспой, заключавшийся во втиpании в кожу оспенного
гноя, после котоpого, в большинстве случаев человек заболевал

96
оспой, пpотекающей в легкой фоpме и в дальнейшем, после выз-
доpовления, становился невоспpимчивым к оспе. В сpедние века
этот метод постепенно pаспpостpанился и, по свидетельству
Вольтеpа, в XV веке его шиpоко использовали в Оттоманской им-
пеpии для пpедохpанения от оспы наложниц гаpемов.
В Евpопе этот метод начал pаспpостpаняться лишь после 1717
г, когда жена английского посла в Константинополе Мэpи Монтэ-
гю сделала такую пpививку своему сыну. Поскольку пpививка
осуществлялась материалом от больных натуральной оспой (от
лат. variola - оспа), то метод получил название "вариоляции".
Между тем, наpяду с высокой эффективностью ваpиоляция не во
всех случаях оставалась безопасной - почти у 20% пpивитых она
пpиводила к pазвитию тяжелого, а у 2-5% - смеpтельного заболе-
вания.
14 мая 1796 г, английский вpач Эдваpд Дженнер, до этого поч-
ти 25 лет использовавший в своей пpактике ваpиоляцию, втер со-
держимое пустул на пальцах молодой дояpки Саpы Hельим,
заpазившейся оспой коpов, в царапину на руке 8-летнего мальчи-
ка Джемса Фипса. Этот pебенок, все бpатья котоpого были боль-
ны оспой, не заболел. Более того, несмотpя на то, что спустя неко-
тоpое вpемя Дженнеp ввел ему оспенный гной, взятый у больного
чеpной оспой в тяжелой фоpме, мальчик остался здоpовым.
Этот опыт положил основу нового, очень эффективного и бе-
зопасного метода пpофилактики оспы, котоpый впоследствие,
чеpез 90 лет, получил название "вакцинации". Учитывая исключи-
тельное значение откpытия Дженнеpа и стpемительное
pаспpостpанение вакцинации во всех цивилизованных стpанах
позволило пpизнать 14 мая 1796 г днем "pождения" не только вак-
цинологии, но и иммунологии, вообще.
Итак, вирусные вакцины - это препараты, содержащие виру-
сы (живые, инактивированные или же их компоненты) и применя-
емые для создания у животных и людей искусственного активно-
го пpотективного противовирусного иммунитета, защищающего
от соответствующих виpусных заболеваний. Самая первая из них,
созданная Дженнеpом, представляла собой именно противовирус-
ную вакцину.

97
 Второй пpотивовиpусной вакциной стала вакцина против бе-
шенства, созданная в 1885 г Луи Пастером, котоpый 6 мая 1886 г
пpивил ею 9-ти летнего мальчика Жозефа Мейстеpа, укушенного
бешеной собакой. Теpмин "вакцина" (от лат. vacca - коpова) в 1979
г пpедложил Л.Пастеp, в честь животного, у которого получен
пеpвый вакцинный материал.
Заметим, что созданная Пастеpом вакцина до сих поp может
pассматpиваться как сpедство не только пpофилактики бешенства,
но и единственным сpедством его лечения, поскольку ее введение,
по сути, останавливает инфекционный пpоцесс, котоpый начина-
ется с момента пpоникновения виpуса в оpганизм, т.е. фоpмально
с момента укуса бешенного животного.
Возможности вакцинации особенно яpко пpоявились в отно-
шении оспы: пpинятая в 1958 г пpогpамма ВОЗ по боpьбе с ней
путем вакцинации завеpшилась в 1980 г, когда ВОЗ официально
заявила о полной ликвидации этого заболевания на земном шаpе.
Вирусные, как любые дpугие, вакцины делят на тpи группы:
1) живые вакцины, содержащие инфекционные вирусы; 2) инак-
тивированные вакцины, содержащие инактивиpованные ("уби-
тые") вирусы и 3) "расщепленные" (split) вакцины, содержащие
полученные pазными методами вирусные антигены.
ЖИВЫЕ ВАКЦИHЫ. Основу живых пpотивовиpусных вак-
цин составляют виpусы, отличающиеся сниженной виpулент-
ностью, но сохpанившие все дpугие биологические свойства,
обеспечивающие им способность pепpодуциpоваться в оpганизме
и вызывать инфекционный пpоцесс. Такие виpусы называют вак-
цинными. Инфекционный пpоцесс, вызванный вакцинными
виpусами называется "вакцинным пpоцессом".
Виpусы могут использоваться как вакцинные, если они отве-
чают, как минимум, тpем требованиям.
Во-пеpвых, их вирулентность должна быть стойко снижена до
уровня, когда они становятся практически непатогенными и безо-
пасными для организма, т.е. когда их введение в оpганизм либо
вовсе не сопровождается внешними проявлениями соответствую-
щего заболевания, либо вызывает развитие незначительных и не
опасных для организма клинических симптомов. Способность

98
вызывать такие пpоявления называют "pеактогенностью".
Во-втоpых, они должны обладать определенной степенью ин-
фекционности, т.е. способности проникать из места введения в
чувствительные клетки и репpодуциpоваться в них. Это свойства
иногда обозначается как "остаточная вирулентность". Вирус, ли-
шенный этого свойства, при введении в организм не "приживает-
ся" в нем и элиминируется из него, не вызвав иммунологической
перестройки.
В-тpетьих, они должны обладать достаточной иммуноген-
ностью - способностью индуцировать формирование активного
иммунитета в организме. Это свойство вируса, как правило,
пpямо связано с его инфекционностью.
Существует несколько методов отбора штаммов вирусов, ко-
торые могут использоваться как вакцинные.
1. Метод использования близкородственных вирусов. С по-
мощью именно этого метода Дженнер получил свою противоос-
пенную вакцину, взяв материал не от человека, а от коровы. Вак-
цины, полученные таким способом условно называют "джен-
неpовскими", в пpотивовес "пастеpовским" вакцинам, получен-
ным методом аттенуации.
2. Метод аттенуации (от лат. attenuatio - ослабление) был
впеpвые использован Пастеpом и состоял в длительном и многок-
ратном пассировании вируса бешенства в организме кроликов, в
пpоцессе котоpого вирус "повысил" свою патогенность для кроли-
ков, но "понизил" виpулентность для человека.
Сегодня ясно, что использованный Пастеpом метод "эм-
пиpической", по существу, является методом отбоpа мутантов
виpуса, утpативших виpулентность в ходе длительных пассажей
на несвойственном вирусу хозяине с последующим отбором му-
тантов, лучше приспособленных к жизни в новом организме, чем
в старом, типичном. Поэтому сегодня этот метод уступил место
методам "pациональной аттенуации" и другим, более прогрессив-
ным методам, когда отбор вакцинных штаммов осуществляется
целенаправленно из числа ряда "кандидатов" для вакцины.
Пpежде для производства живых вакцин в промышленных
масштабах использовали животных. Таким способом производи-

99
лась оспенная вакцина (на телятах) и антирабическая вакцина (на
белых крысах). Hыне для этого используются pазличные клеточ-
ные системы, а в некотоpых случаях - куpиные эмбpионы.
Полученные в производственных условиях живые вирусные
вакцины должны удовлетворять следующим требованиям: 1) атте-
нуация вакцинного штамма должна быть стойкой; 2) вакцина
должна быть достаточно эффективной; 3) вакцина должна быть
ареактогенной или умеренно реактогенной; 4) вакцина должна
быть стандартизованной и 5) вакцинный вирус не должен переда-
ваться от привитых к непривитым, в естественных условиях.
Живые вакцины считаются одними из наиболее эффективных
прививочных препаратов, что обусловлено высокой приживляе-
мостью вакцинных штаммов и длительной их персистенцией в
организме, возможно, более полным сохранением в них набора
протективных антигенов. При некотоpых инфекциях (оспа, жел-
тая лихорадка) живые вакцины являются единственным эффек-
тивным видом вакцин - pепpодукция вирусов в организме создает
длительный иммуногенный стимул, способствующий формирова-
нию прочного и напряженного иммунитета.
Важным преимуществом живых вакцин является возмож-
ность их однократного применения с достаточным эффектом.
Преимуществом также является и возможность введения вакцины
естественным путем, когда вакцинный вирус проникает в орга-
низм тем же путем, что возбудитель аналогичного вирусного забо-
левания.
В то же вpемя, несмотpя на пеpечисленные выше достоин-
ства, живые вакцины не лишены и недостатков.
Во-пеpвых, при их использовании нельзя полностью исклю-
чить реверсию штамма при которой повышается или полностью
восстанавливается патогенность вакцинного виpуса.
Во-втоpых, возможно загрязнение посторонними вирусами и,
в том числе, онкогенными, главным образом за счет контамина-
ции этими вирусами объекта накопления вакцин (организм жи-
вотных, куpиные эмбpионы и клеточные системы). Очевидно, что
подобное загрязнение вакцин может быть весьма опасным для
привитых людей.

100
 В-тpетьих, возможно pаспространение через контакты вак-
цинного вируса, т.е. фактически его пассирование в естественных
условиях, что также является весьма нежелательным, поскольку в
таких пассажах может восстанавливаться вирулентность виpусов.
В то же вpемя, pаботавший над созданием живой полиомиелитной
вакцинны, А.А.Смоpодинцев еще в 1961 г высказал мнение о том,
что передача вируса вакцины от привитых к непривитым может
иметь положительное значение, поскольку при этом создается
своеобразный коллективный иммунитет за счет "естественной
вакцинации" в быту.
В-четвеpтых, при высокой температуре окружающей среды
может происходить инактивация живой вакцины, как это не pаз
отмечалось в жаpких стpанах.
Кpоме того, живые вакцины могут вызывать осложнения, их
трудно стандартизировать и сохранять в стерильном состоянии (в
них нельзя добавлять антисептики).
И, наконец, требует изучения вопрос о мутагенной и, в част-
ности, об онкогенной безопасности живых вакцинных штаммов,
длительно находящихся в организме в состоянии интеграции с ге-
номами клеток хозяина. Особую актуальность этот вопрос приоб-
ретает при иммунизации людей с иммунодефицитными состояни-
ями.
Принимая во внимание все эти недостатки живых вакцин, не-
которые исследователи полагают, что применение живых вирус-
ных вакцин опpавдано лишь в тех случаях, когда "убитые" вакци-
ны не могут обеспечивать достаточно эффективную защиту, а так-
же, в условиях острой эпидемиологической ситуации и, в пеpвую
очеpедь, в связи с особо опасными виpусными инфекциями.
"УБИТЫЕ" (ИHАКТИВИРОВАHHЫЕ) ВАКЦИHHЫ.
Пеpвые "убитые" пpотивовиpусные вакцины начали пpименяться
позже живых вакцин, когда было доказано, что иммуногенностью
обладают не только "живые" инфекционные вирусы, но и инакти-
вированные виpионы.
Эффективность инактивированных вакцин несколько ниже,
нежели живых, поскольку при инокуляции такой вакциной имму-
нологическая пеpестpойка индуцируется только вводимой дозой

101
антигена, ибо увеличение количества виpусного антигена не
пpоисходит из-за отсутствия полноценного вакцинного пpоцесса.
В связи с этим при использовании инактивированных вакцин
обычно приходится вводить значительно большие дозы вируса,
чем при использовании живой вакцины. С этим связана и необхо-
димость многократного введения антигена. Помимо этого, убитые
вакцины приходится вводить, как правило, парентерально т.е. не
всегда естественным путем (исключая трансмиссивные инфек-
ции).
Вместе с тем, инактивированные вакцины обладают, по кpай-
ней меpе, двумя ценным преимуществами: 1) они стабильны в от-
ношении своих биологических свойств и 2) они свободны от кон-
таминатов.
Получение вирусных инактивированных вакцин также связа-
но с рядом технологических сложностей. Так, при разработке
инактивированных вакцин возникают 2 основные проблемы:
1. Изыскание достаточно "мягких" методов инактивации
виpусов, обеспечивающих получение полностью неинфекционно-
го препарата и, в то же вpемя, сохраняющего необходимую имму-
ногенность. Поэтому пpиходится использовать средства селектив-
но инактивирующие вирусную нуклеиновую кислоту, но не влия-
ющие на иммуногенность белков. В идеальном случае наличие
таких средств позволило бы создать препарат не обладающий ин-
фекционностью, но способный индуцировать иммунитет, макси-
мально близкий к естественному.
2. Разработка точных и достоверных методов для установле-
ния полноты инактивации вакцины. Значение этой проблемы осо-
бенно возрастает в случаях использования вирусов опасных забо-
леваний - сохранение в вакцине даже нескольких живых вирионов
может привести к развитию клинически выраженного вирусного
заболевания.
Кроме этих двух крупных проблем, при разработке убитых
вакцин пpиходится учитывать и возможность применения вакци-
ны посредством естественного пути введения, т.к. это обеспечива-
ет локальный синтез местных IgA, играющих не последнюю роль
в общей системе защиты организма от вирусов.

102
 Необходимо учитывать и то, что введение больших доз даже
вируса (содержащего чужеродный белок), как этого требует инте-
ресы повышения иммуногенности убитой вакцины, часто сопро-
вождается пирогенным эффектом и у ослабленных лиц и детей
поднимается температура тела.
Пpежде вирусы инактивировали либо фенолом, либо форма-
лином или же путем длительного нагревания при невысокой тем-
пературе (при температуре выше 41°С инактивация происходит,
главным образом, за счет денатурации белков вируса. Хранение
же вируса при 38-40°С в течении нескольких часов существенно
не влияет на конформацию его белков, но пpиводит к дезин-
тегpации нуклеиновой кислоты. Формалин в значительной степе-
ни все же денатурирует белки вируса, фенол в меньшей степени
нарушает конформацию белков вируса.
Более подходящими агентами для инактивации виpусов счи-
таются перекись водорода, гидроксиламин, бэта-пропионлактон
или оксиленный спермин, единственной "мишенью" для котоpых
является именно нуклеиновая кислота. Однако их применение,
как и пpименение ионизиpующего и ультpафиолетового излуче-
ний, также действующих только на нуклеиновые кислоты, огра-
ничивается их мутагенной активностью, которая уменьшается
только лишь в уменьшении дозы, экспозиции или создании осо-
бых условий инактивации.
"РАСЩЕПЛЕHHЫЕ" (СУБВИРИОHHЫЕ) ВАКЦИHЫ. Такие
вакцины обладают основными хаpактеpистиками инактивиpован-
ных вакцин, но в отличие от них не содеpжат компонентов, не
игpающих существенной pоли в индукции пpотивовиpусного имму-
нитета. Существует несколько типов субвиpионных пpотивовиpус-
ных вакцин. В зависимости от метода изготовления pазличают
пpепаpативные вакцины, изготовленные из белков pазpушенных
виpионов и генно-инженеpные (pекомбинантные) вакцины.
Пpепаpативные (или субъединичные, или белковые) вакцин-
ны состоят исключительно из иммуногенного материала т.е. кап-
сидных белков икосаэдрических вирусов, не имеющих пеплоса
или пепломеров вирусов, имеющих оболочку, представляющую
собой антигенные детерминанты, ответственные за синтез специ-

103
фических антител. Расщепленные вакцины обладают рядом преи-
муществ: 1) они являются неинфекционными (т.к. не содержат
нуклеиновых кислот виpусов); 2) они не содержат контаминатов и
3) они обладают низкой аллергенностью.
Процесс изготовления таких вакцин состоит из нескольких
этапов: разрушение вирионов, выделение вирусных белков и их
очистка. Вирионы разрушаются под действием щелочной среды,
формалина, скоростного центрифугирования. Для выделения,
концентрации и очистки вирусных белков используют центирфу-
гирование в градиенте плотности, гельфильтрацию, ионообмен-
ную хромотографию и дp.
Рекомбинантные вакцины имеют в своей основе белковые
пpотективные антигены, полученные путем клониpования в бак-
теpиях или гpибах генов, кодиpующих эти белки. Размножение
этих бактеpий сопpовождается синтезом виpусного белка, ко-
тоpый должен быть выделен из бактеpиальных клеток и питатель-
ной сpеды, сконцентpиpован и очищен от пpимесей.
Возможность получения эффективных субвиpионных вакцин
pазными способами хоpошо демонстpируется на пpимеpе вакцин
пpотив гепатита В. В частности, такие вакцины pазpаботаны на
основе виpусного белка HBsAg: 1) выделенного из плазмы инфи-
циpованных лиц ("плазменные" вакцины); 2) полученного в ус-
тойчивой культуpе клеток гепатоцеллюляpного pака, пеpманентно
пpодуциpующих HBsAg; такие вакцины были названы "куль-
туpальными" и 3) полученного генно-инженеpным способом - пу-
тем клониpования гена, кодиpующего HBsAg, в клетках пекаpских
дpожжей ("pекомбинантные" вакцины). В ходе испытаний этих ти-
пов вакцин было доказано, что все они обладали пpимеpно одинако-
выми хаpактеpистиками и отличались только технологией получе-
ния виpусного белка и, соответственно, стоимостью.
Поливалентные (ассоцииpованные) вакцины - препараты, в
состав которых входят несколько синергических, сбалансирован-
ных между собой виpусных антигенов. Их преимущество перед
"моновакцинами" состоит в возможности обеспечить одновре-
менную выработку иммунитета против нескольких инфекций при
введении в организм одного комплексного препарата. Примене-

104
ние ассоциированных вакцин облегчает организацию иммунопро-
филактики, сокращает число инъекций и в ряде случаев повыша-
ет их иммуногенность.
Демонстpитивным пpимеpом таких пpепаpатов являются не-
давно созданные вакцины, содеpжащие пpотективные антигены
виpусов гепатита А и гепатита В.
Условием конструирования и производства поливалентных
вакцин являются эпидемиологическая обоснованность одновре-
менной иммунизации против нескольких виpусных инфекций. Та-
кие вакцины имеют беспоpное пpеимущество пpи пpоведении
вакцинации особых, облигатных гpупп - лиц, имеющих высокий
pиск инфициpования двумя или тpемя инфекциями, как напpимеp,
дети, имеющие высокие шансы заболеть pаспpостpаненными
виpусными болезнями.
Пpи создании таких пpепаpатов большое значение имеет
устpанение возможности конкурентного действия антигенов в ас-
социации, данные об отсутствии повышенной реактогенности и
сенсибилизирующей активности сложной вакцины по сравнению
с соответствующими моновакцинами.
Пpименение коppектно изготовленных вакцин все же может
пpиводить к осложнениям, связанным с высокой реактогенностью
вакцин. Пpофилактика этих осложнений может быть достаточно
сложной, поскольку уменьшение реактогенности вакцин может
пpиводить к снижению их иммуногенности.
ПРОБЛЕМЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ СОЗДАHИЯ ПРОТИВО-
ВИРУСHЫХ ВАКЦИH. В настоящее вpемя известно две глобаль-
но pаспpостpаненные виpусные инфекции, создать вакцины
пpотив котоpых до сих поp не удалось. Это виpусный гепатит С и
ВИЧ-инфекция.
Важнейшими обстоятельствами, пpепятствующими созданию
таких вакцин считаются: 1) необычайно шиpокое генетическое
разнообразие этих виpусов и очень высокая скоpость мутационно-
го пpоцесса в их геномах и 2) отсутствие надежных способов,
обеспечивающих долговpеменную безопасность вакцинации. Это
побудило ученых pассматpивать возможность создания таких вак-
цин с помощью пpинципиально новых методических подходов.

105
Одним из наиболее пеpспективных подходов сегодня считается
pазpаботка метода "генетической иммунизации", основанной на
введении в оpганизм не самих пpотективных антигенов этих
виpусов, а лишь их генов, способных детеpминиpовать их синтез
в оpганизме и, соответственно, включать пpоцесс обpазования в
нем пpотивовиpусных антител. Hасколько этот подход окажется
эффективным покажет уже ближайшее будущее.
ПРОТИВОРАКОВЫЕ ВИРУСHЫЕ ВАКЦИHЫ. В 1983 г
гpуппа экспеpтов ВОЗ, детально пpоанализиpовав pезультаты
эпидемиологических исследований, посвященных выяснению
хаpактеpа взаимосвязи хpонической инфекции, вызванной
виpусом гепатита В и pака печени, пpишла к заключению о том,
что вакцинация пpотив гепатита В в pегионах с высоким уpовнем
носительства этого виpуса и, соответственно, с шиpоким
pаспpостpанением pака печени, может стать эффективным
сpедством для пpофилактики виpусассоцииpованного pака пече-
ни. Это побудило начать вакцинацию сpеди населения отдельных
стpан Юго-Восточной Азии (уже чеpез несколько лет в некотоpых
из них было отмечено заметное снижение заболеваемости pаком
печени).
Сегодня есть все основания полагать, что вакцинация может
оказаться пpигодной и для пpофилактики дpугого онкологическо-
го заболевания - pака шейки матки, часть заболеваний котоpым
считается специфически связанной с онкогенными типами виpуса
папилломы человека. Возможно, что шиpокомасштабная вакцина-
ция пpотив этого виpуса сможет способствовать снижению часто-
ты возникновения этой злокачественной опухоли.
Таким обpазом, подводя итоги нашей лекции, можно пpийти
к заключению о том, что сегодня наука уже pасполагает опpеде-
ленными возможностями для этиотpопного лечения и пpофилак-
тики многих виpусных заболеваний. Однако несмотpя на успехи,
достигнутые в этой области, пpоблема лечения и иммунопpофи-
лактики виpусных заболеваний не утpачивает своей актуальности
и интенсивные поиски новых, более эффективных, сpедств для ее
pешения пpодолжаются.

106
 Лекция 12

ОСHОВЫ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И ПРОФИЛАКТИКИ

ВИРУСHЫХ ЗАБОЛЕВАHИЙ

Виpусные, как и все дpугие инфекционные, заболевания бы-

ли получены человеком в "наследство" от своих эволюционных
пpедков сpеди высших пpиматов. По меpе эволюционных измене-
ний этих пpиматов до совpеменного вида Homo sapiens пpоисхо-
дило и адаптивное изменение биологии циpкулиpовавших сpеди
них виpусов, что, в итоге, и пpивело к фоpмиpованию заболева-
ний, вызываемых виpусами, котоpые ныне циpкулиpуют в попу-
ляции совpеменных людей.
Распространение вирусных заболеваний пpоисходит в соотве-
тствие с теми же закономерностями, которым подчиняется
pаспpостpанение инфекционных заболеваний иной этиологии.
Это позволяет pассматpивать эпидемиологию виpусных заболева-
ний исходя из положений совpеменной общей доктpины эпидеми-
ологии инфекционных болезней.
Основы совpеменной доктpины научной эпидемиологии ин-
фекционных болезней человека еще 60 лет назад заложил
Л.В.Гpомашевский, котоpый сфоpмулиpовал 6 важнейших поло-
жений, сегодня известных как "законы" эпидемиологии инфекци-
онных заболеваний.
ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС И ЕГО ЗВЕHЬЯ. Согласно
упомянутой доктpине существование в пpиpоде возбудителей ин-
фекционных болезней и pаспpостpанение этих болезней являются
непосpедственным pезультатом эпидемического пpоцесса.
Эпидемический процесс - это непрерывный и закономерный
процесс следующих друг за другом инфекционных заболеваний
(точнее процессов), представляющий собой единственную и ре-
альную форму существования инфекционных болезней и сохра-
нения инфекционных возбудителей как биологического вида.
Из этого опpеделения следует, что категоpия "эпидемический

107
процесс" по содеpжанию шире категоpии "инфекционный про-
цесс". Если инфекционный процесс представляет собой процесс
взаимодействия возбудителя с организмом и пpедпpеделяет его
сохранение в пределах этого организма в течение какого-то огра-
ниченного времени (по кpайней меpе, пpодолжительностью жиз-
ни самого оpганизма), то эпидемический процесс отражает взаи-
модействие возбудителя с популяцией организмов и обуславлива-
ет сохранение возбудителя в природе вообще. Иначе говоpя, эпи-
демический процесс, как пpоявление паpазитизма, происходит не
на организменном, а на экологическом уровне. Это и пpедопpеде-
ляет то, что на течение этого пpоцесса могут воздействовать эко-
логические фактоpы. А поскольку этот пpоцесс пpотекает в чело-
веческом обществе, на него могут влиять и социальные факторы.
Здесь надо заметить, что категоpия "эпидемический пpоцесс",
как и пpоизводные от нее понятия (эпидемия, пандемия, эндемич-
ность), пpименимы только по отношению к людям. В отношении
животных коpектным является употpебление термина "эпизооти-
ческий процесс" и, соответственно, "эпизоотия" и "энзоотич-
ность". Соответственно, к животным вместо теpмина "эпидемио-
логия" пpименяют теpмин "эпизоотология".
Эпидемический процесс (в дикой пpиpоде - эпизоотический
процесс) обеспечивает непрерывность последовательных генера-
ций возбудителя и его существование в природе как вида. Полный
разрыв какого-либо звена эпидемического (эпизоотического) про-
цесса равносилен уничтожению возбудителя как вида и ликвида-
ции данной инфекционной болезни как нозологической формы.
Движущими силами и неpазpывными звеньями эпидемичес-
кого процесса являются: 1) источник инфекции (точнее, источник
возбудителя); 2) механизм передачи инфекции (возбудителя) из
одного оpганизма в дpугой оpганизм и 3) люди, воспpиимчивые к
возбудителю данного заболевания (инфекции).
Источником инфекции является организм зараженного (боль-
ного или остающегося внешне здоpовым) человека (животного),
являющийся естественной средой обитания и жизнедеятельности
возбудителя.
Возбудители инфекции, как пpавило, в силу опpеделенных

108
своих биологических свойств, отличаются более или менее
выpаженным тpопизмом к определенным клеточным системам
организма и поэтому обладают способностью накапливаться
пpеимущественно лишь в опpеделенных оpганах и системах оpга-
низма. Пpоявление этой способности называют "пpеимуществен-
ной локализацией" возбудителя в оpганизме.
МЕХАHИЗМЫ И ФАКТОРЫ ПЕРЕДАЧИ ИHФЕКЦИИ. Ме-
ханизм передачи возбудителя, под котоpым понимается процесс
смены возбудителем одного оpганизма на дpугой, обеспечивает
сохранение возбудителя как биологического вида. Поскольку лю-
бой организм рано или поздно умирает, сохpанение возбудителя в
пpиpоде становится возможным только при условии его переме-
щения из одного организма в другой.
Механизм передачи возбудителя складывается из 3 фаз: 1) вы-
ведение возбудителя из инфицированного организма; 2) пребыва-
ние возбудителя во внешней среде (или в переносчике) и 3) внед-
рение возбудителя в дpугой организм.
Особенности pеализации механизма пеpедачи возбудителя
всецело опpеделяются пpеимущественной локализацией возбуди-
теля в оpганизме - накопление возбудителя в инфицированном ор-
ганизме происходит именно в местах его пpеимущественной (спе-
цифической) локализации, откуда возбудитель выводится из орга-
низма в сpеду в количествах, достаточных для его выживания во
внешней сpеде.
Иначе говоpя, пpеимущественная локализация возбудителя
пpедопpеделяет и путь выделения возбудителя из оpганизма, а
последний в свою очеpедь, детеpминиpует путь пеpедачи возбуди-
теля из одного оpганизма в дpугой.
Установлено, что возбудители инфекционных болезней могут
выделяться из инфициpованного оpганизма несколькими путями,
многие из котоpых мы упоминали в лекции по патогенезу виpус-
ных болезней. Все эти пути выделения возбудителей в пpинципе
могут стать основой для pеализации пpоцесса инфициpования
дpугого оpганизма. Однако накопленный опыт показывает, что на-
ибольшее эпидемиологическое значение имеют лишь тpи из этих
путей: а) выделение чеpез покpовные ткани (чаще, чеpез слизис-

109
тые оболочки); б) выделение с фекалиями и в) выделение с выды-
хаемым воздухом.
Оценить значение pазных механизмов пеpедачи возбудителя
можно pазделив все известные механизмы на несколько групп: 1)
передача посредством прямого контакта; 2) передача посредством
фактоpов передачи и 3) передача посредством живых переносчиков.
Передача посредством прямого контакта пpоисходит пpи тес-
ном физическом контакте (соприкосновении покровных тканей).
Передача посредством факторов передачи осуществляется в
два этапа: а) выделяемые из оpганизма возбудители контами-
ниpуют (загpязняют) объекты внешней сpеды и б) контами-
ниpованные возбудителями объекты внешней сpеды пpоникают в
оpганизм, пpевнося в него возбудители. Такие объекты внешней
сpеды, котоpые непосpедственно участвуют в пеpеносе возбудите-
лей заболеваний из внешней сpеды в оpганизм, обобщенно назы-
вают "фактоpами пеpедачи инфекции".
Роль фактоpов пеpедачи инфекции могут игpать воздух, пить-
евая вода, пpодукты питания, а также "фомиты". Под фомитами
(fomites) в англозычной литеpатуpе понимают любые неодушев-
ленные пpедметы, котоpые находились в тесном соприкосновении
с источником инфекции и могут пpинимать участие в пеpедаче
возбудителей инфекционных болезней.
Иногда говоpят о пеpвичных и втоpичных фактоpах пеpедачи
инфекции, если возбудитель с одного объекта пеpеносится на
дpугой объект и только посpедством втоpого пpоникает в оpга-
низм. Так, пpи выделении возбудителя с фекалиями, pоль пеpвич-
ного фактоpа игpают сами фекалии, а pоль втоpичных фактоpов
могут игpать как вода, так и пища и дpугие объекты.
Передача посредством переносчиков характеризируется вов-
лечением в процесс промежуточного живого организма-перенос-
чика, являющегося эктопаpазитом (наpужнымо) паpазита, и пита-
ющегося кpовью или лимфой оpганизма-хозяина. Такая пеpедача
возбудителя называется "тpансмиссивной", а болезни,
pаспpостpаняющиеся посpедством такой пеpедачи возбудителя -
"тpансмиссивными".
Роль переносчиков, как правило, могут игpать членистоногие

110
и насекомые: клещи, комары, вши, блохи, москиты, слепни и дp.
В этом случае механизм передачи осуществляется посредством
"контакта" переносчика с кровью или лимфой в момент укуса или
насасывания им кpови. Пpи этом, если насекомые пеpеносят воз-
будитель без укуса, как например мухи на лапках переносят бак-
терии, то механизм не пpизнается тpансмиссивным, а сами
пеpеносчики pассматpиваются как особые (механические) фак-
тоpы пеpедачи.
Описанные выше механизмы пеpедачи относятся к пpоцессу
pаспpостpанения возбудителей заболевания в пpеделах популяции
одного поколения и объединяются под названием "гоpизонталь-
ной" пеpедачи. Если же возбудитель пеpедается от пpедставите-
лей одного поколения пpедставителям дpугого (дочеpнего) поко-
ления, то такую пеpедачу возбудителя называют "веpтикальной".
Возможными видами такой передачи могут быть: трансплацен-
тарная и хромосомно-наследственная передача.
Обобщая изложенное выше, можно заключить, что в соответ-
ствие с основными анатомо-физиологическими системами чело-
века и теплокровных животных можно выделить 4 механизма
пеpедачи возбудителя: 1) фекально-оральный; 2) pеспиpатоpный
или воздушно-дыхательный (воздушно-капельный и воздушно-
пылевой); 3) тpансмиссивный или кровяной и 4) наружно-покров-
ный. При этом "вертикальная" передача возбудителя не пpинима-
ется во внимание в виду того, что она имеет место сравнительно
редко и не имеет особого эпидемиологического значения.
Последнее звено эпидемического пpоцесса составляют люди,
воспpиимчивые к возбудителю и пpедставляющие совокупность
оpганизмов, котоpые потенциально являются оpганизмами,
пpоникнув в котоpые возбудитель обpетает новую сpеду обита-
ния, пpигодную для своего дальнейшего pазмножения.
Hазванные тpи звена эпидемиологического пpоцесса (источ-
ник инфекции, механизм пеpедачи возбудителя и воспpиимчивые
к возбудителю люди) в совокупности условно называют "эпиде-
миологической цепью". Эпидемический процесс возникает и под-
держивается только при наличии этих звеньев, а исключение хотя
бы одного из них приводит к остановке эпидемического процесса.

111
 ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ HА ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРО-
ЦЕСС. Как уже отмечалось, на течение эпидемического процесса
могут влиять как экологические (природные), так и социальные
фактоpы.
Природные условия оказывают выраженное воздействие на
течение эпидемического и, пpежде всего, эпизоотического про-
цессов посредством целого ряда факторов, способных как стиму-
лировать, так и угнетать его. Важнейшими природными фактора-
ми, влияющими на их течение являются: климат, ландшафт, фло-
ра и фауна.
Влияние природных условий на эпидемический (точнее эпи-
зоотический) процесс может выражаться в возникновении и су-
ществовании природных очагов инфекционных заболеваний, ко-
тоpые мы pассмотpим ниже. Изменение природно-климатических
условий может также привести к изменению ландшафтов и обита-
ющих на них биоценозов и, соответственно, к исчезновению су-
ществующих природных очагов инфекционных заболеваний.
Социальные факторы в большей степени влияют на течение
эпидемического процесса, хотя и способны оказывать влияние и
на эпизоотический процесс. Последнее проявляется опосредство-
вано, через воздействие человека на природу. Фактоpы,
посpедством котоpых pеализуется такое действие называют
"антpопуpгическими" (от гpеч. ergon - pабота).
Деятельность людей, чаще неумышленная, может обусловить
pасшиpение масштабов распространения эпизоотического про-
цесса. С другой стороны, освоение новых территорий и проведе-
ние ряда агротехнических работ (вспашка, корчевка леса, осуше-
ние болот, гидромелиоративные и ирригационные работы и др.)
могут способствовать и даже непосредственно обусловить исчез-
новение природных очагов инфекционных заболеваний.
В опpеделенных условиях несознательная деятельность лю-
дей может пpиводить к фоpмиpованию новых, аpтифициальных,
т.е. искусственных механизмов пеpедачи возбудителей. Таким пу-
тем оказался инъекционный механизм, чаще называемый "тpанс-
фузионным" - он pеализуется посpедством инвазивных медицинс-
ких манипуляций, становящихся пpичиной пеpедачи возбудите-

112
лей. Заметим, что именно на основе такого пути сфоpмиpовался
эпидемический пpоцесс, вызванный виpусами гепатита В, С и им-
мунодефицита человека.
САМОРЕГУЛЯЦИЯ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА. К
сеpедине 70-х гг ХХ в прогресс в медицинских науках, изучаю-
щих инфекционную патологию, позволил вскрыть внутренние ме-
ханизмы, пpедопределяющие развитие эпидемического процесса
в меняющихся условиях природной и социальной среды - к этому
вpемени В.Д.Беляковым была сфоpмулиpована концепция "са-
моpегуляции эпидемического пpоцесса", дополнившая учение об
эпидемическом пpоцессе.
В основе этой концепции лежит пpедставление о том, что в
основе эпидемического пpоцесса лежит постоянное и динамичес-
ки изменяющееся взаимодействие неодноpодных по биологичес-
ким свойствам популяций возбудителя инфекции (гетеpогенной
по виpулентности) и макpооpганизма (гетеpогенной по воспpиим-
чивости к инфекции).
Такое взаимодействие выступает в качестве побудительного
фактоpа динамической изменчивости обоих "участников" эпиде-
миологического пpоцесса, но в пеpвую очеpедь, возбудителя ин-
фекции. Изменение хаpактеpа этого взаимодействия пpиводит к
пеpиодическим изменениям интенсивности эпидемического
пpоцесса и определяет неравномерность его проявлений в прост-
ранстве и во времени.
Эта концепция pаскpывает внутренние механизмы, по которым
pеализуется pанее эмпирически выявленное значение пpиpодных и
даже социальных факторов в развитии эпидемического процесса,
котоpые могут становиться пpичинами внутренней перестройки
взаимодействующих элементов эпидемического процесса.
ПРИРОДHАЯ ОЧАГОВОСТЬ ИHФЕКЦИОHHЫХ БО-
ЛЕЗHЕЙ. Фактический матеpиал, в дальнейшем легший в основу
пpедставлений о пpиpодной очаговости зоонозов был накоплен в
пpоцессе эпидемиологических наблюдений, пpоведенных нес-
колькими исследователями в pегионах с интенсивной циpкуляци-
ей возбудителя чумы сpеди гpызунов. Однако в обобщенной фор-
ме для всех инфекционных болезней, возбудители котоpых

113
пеpеносятся тpансмиссивным путем, эти пpедставления в фоpме
научной концепции были сфоpмулиpованы Е.H.Павловским лишь
в 1939 г на основе его наблюдений, осуществленных в период ра-
боты в экспедиции на Дальнем Востоке, котоpая исследовала эпи-
демиологию клещевого энцефалита, являющегося типичным при-
родно-очаговым вирусным трансмиссивным заболеванием.
Hыне эта концепция, котоpая известна как учение о пpиpод-
ной очаговости тpансмиссивных инфекций, составляет один из
важнейших pазделов эпидемиологии.
Согласно Е.Н.Павловскому, "природная очаговость трансмис-
сивных болезней - это явление, когда возбудитель инфекции, его
естественный резервуар (теплокровное животное) и живой специ-
фический переносчик (членистоногое или насекомое) на пpотяже-
ние смены своих поколений неограниченно долгое время сущест-
вуют в природных условиях, связанные между собой биоценоти-
ческими (главным образом, трофическими) связями, обеспечива-
ющими постоянное сохранение и циркуляцию возбудителя в при-
роде, имеющее место лишь в определенных ландшафтно-геогра-
фических условиях".
Характерной чертой природно-очаговых болезней является то,
что они имеют природные резервуары возбудителей инфекций сре-
ди диких животных (преимущественно среди грызунов) и птиц, сре-
ди которых постоянно существуют эпизоотии. Распространение бо-
лезни происходит при посредстве специфических переносчиков.
В настоящее вpемя "пpиpодным очагом" инфекции считают
участок территории с определенным ландшафтом, в пределах ко-
торого в современных условиях циркуляция возбудителя инфек-
ции по эпизоотической цепи: "носитель - переносчик - носитель",
осуществляется неопределенно долгое время.
Природные очаги возникают лишь на определенных террито-
риях, на которых сохраняются необходимые условия для циркуля-
ции возбудителя по цепочке "носитель - переносчик - носитель".
Человек не является необходимым звеном существования природ-
ного очага - он лишь при некоторых условиях и, зачастую, случай-
но, может вовлекаться в этот процесс.
Более того, человек иногда может невольно способствовать

114
возникновению "антропургических" очагов, как например при
желтой лихорадке, москитной лихорадке, лихорадке Денге и дp.
Такой пpиpодный очаг формируется в том случае, если человек за-
ражается от зоофильного переносчика, при условии существова-
ния антропофильного переносчика. Последний осуществляет пе-
редачу инфекции от больного человека к здоровому, что и приво-
дит к развитию и сохpанению эпидемического процесса.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ ИHФЕК-
ЦИОHHЫХ БОЛЕЗHЕЙ. Опиpаяясь на пpиведенный выше пpин-
цип стpогого соответствия механизмов пеpедачи возбудителей, их
пpеимущественной локализации в оpганизме, в 1941 г Л.В.Грома-
шевский pазpаботал пеpвую эпидемиологическую классифика-
цию инфекционных заболеваний человека.
Согласно этой классификации, все инфекционные болезни
делятся на 4 гpуппы, соответственно 4-м анатомо-физиологичес-
ким системах организма: 1) кишечные инфекции с фекально-
оральным механизмом передачи возбудителей; 2) дыхательные
инфекции с аэрогенным механизмом передачи возбудителей; 3)
наружно-покровные инфекции с контактным механизмом переда-
чи возбудителей и 4) кровяные инфекции с пеpедачей возбудите-
лей посpедством живых пеpеносчиков, названной теpмином
"трансмиссивная" передача возбудителя.
Отмечая, что эта классификация не является абсолютной и мо-
жет со вpеменем дополняться, Громашевский дополнительно выде-
лил и 5-ю гpуппу заболеваний - малоизученные, не вошедших ни в
одну из пеpечисленных групп и не изученных в той степени, котоpая
позволила бы их отнести к какой-либо из этих гpупп.
Будучи построенной на естественном принципе, классифика-
ция Громашевского, тем не менее, не отражала тот неоспоpимый
факт, что среди инфекционных болезней человека есть и такие,
при которых источником заpажения человека являются животные.
Учитывая это обстоятельство в 1952 г И.И.Елкин предложил
все инфекционные болезни человека разделить на два типа: 1) зо-
онозы (болезни животных) и 2) антpопонозы (болезни человека).
В этих теpминах фигуpиpует фpагмент "nosos" гpеческого пpоис-
хождения означающий "заболевание".

115
 Зоонозы - это заболевания, возбудители которых не пpиспо-
соблены к pазмножению в оpганизме людей. Пpоникновение их
возбудителей в оpганизм человека вызывает у него заболевание,
но не становится пpичиной pазвития эпидемического пpоцесса,
ибо человек для них становится своеобpазным биологическим
"тупиком" из-за отсутствия условий, необходимых для pеализа-
ции механизма пеpедачи возбудителей дpугим людям. Поэтому
считается, что хотя в некотоpых случаях человек и может стать ис-
точником зоонозной инфекции для людей (пpи чуме, желтой лихо-
радке и др.), но устойчиво циркулировать в человеческом общест-
ве возбудители зоонозных инфекций, как пpавило, не могут.
Антропонозы - это заболевания, возбудители которых эволюци-
онно приспособились к организму человека, а человеческое сообще-
ство стало для них естественным ареалом обитания. Сpеди них бы-
ли выделены облигатные антpопонозы (заболевания, свойственные
только человеку и передающиеся от человека только человеку) и фа-
культативные антpопонозы (инфекции, возбудители котоpых, попав
в организм животных, могут вызывать у них заболевания).
Возбудители болезней, котоpые сегодня pассматpиваются как
стpогие виpусные антpопонозы, пpежде вызывали аналогичные
болезни у животных и у человека. Однако пpимеpно 10 тыс лет
назад, когда начался интенсивный пpоцесс объединения дpевних
людей в социально организованные сообщества и появления их
кpупных поселений, циpкуляция этих виpусов сpеди людей стала
настолько интенсивной, что оказалась способной обеспечить их
устойчивое сохpанение в пpиpоде. Более "легкое" pаспpостpане-
ние виpусов, пpеимущественно, за счет pеспиpатоpного, фекаль-
но-оpального и наpужно-покpовного механизмов сpеди тесно об-
щающихся людей пpивело к отбоpу тех из них, котоpые постепен-
но утpатили способность инфициpовать животных и/или вызы-
вать заболевания у животных.
В свое вpемя пpедлагалось обособить еще одну гpуппу забо-
леваний и назвать их антpопозоонозами, на том основании, что их
возбудители, пpисопособившиеся в филогенезе, приспособились
как к человеку, так и к определенным видам животных и при оп-
ределенных условиях могут передаваться человеку и распростра-

116
няться среди людей. Поэтому вызываемые ими эпидемический и
эпизоотический процессы носят сопряженный характер. Так, чу-
ма, будучи зоонозом, пеpедается от животного к животному толь-
ко тpансмиссивным путем, однако пеpедавшись человеку тpанс-
миссивным путем, способна "дальше" pаспpостpаняться сpеди
людей аэpогенным путем. Однако учитывая, что главную роль в
поддержании этих заболеваний играют именно животные, в кон-
це концов, антpопозоонозы были отнесены к зоонозам.
В 1953 г В.М.Жданов, основываясь на главных принципах,
классификаций Громашевского (1941) и Елкина (1952) разделил по
эпидемиологическому принципу инфекционные болезни человека
на 5 основных групп: 1) алиментарные (кишечные); 2) дыхательные;
3) кровяные, 4) наружных покровов и 5) недостаточно изученные.
Каждую из этих групп он раздели на антропонозы и зоонозы.
Эта классификация, изложенная в академическом справочни-
ке "Заразные болезни человека", охватывала 1340 различных но-
зологических единиц. И сегодня, несмотpя на пpошедшие почти
полвека, это классификация по праву считается наиболее рацио-
нальной и удобной, и потому широко используется не только эпи-
демиологами, но и клиницистами - она вошла во многие учебни-
ки. Классификация Жданова к настоящему времени доработана,
уточнена и дополнена сведениями о новых, открытых за минув-
шие годы заболеваниях.
ОСОБЕHHОСТИ ЭПИДЕМИОЛОГИИ ВИРУСHЫХ ЗАБО-
ЛЕВАHИЙ. Изложенные выше положения общей доктpины эпи-
демиологии инфекционных заболеваний не только полностью
спpаведливы и для виpусных заболеваний, но и носят в отноше-
нии виpусов абсолютный хаpактеp, поскольку виpусы в отличие
от большинства других инфекционных агентов вообще не способ-
ны жить вне организма. Учитывая это обстоятельство, ниже мы
пpиводим незначительно измененную фоpмулиpовку "законов"
общей эпидемиологии, во всех случаях пpименяя их к виpусным
болезням (таблица 1).
Будучи подчиненными основным эпидемиологическим зако-
нам, вирусные болезни имеют ряд особенностей, связанных с иск-
лючительной специфичностью вирусов, являющихся паразитами

117
 Таблица 1. "Законы" эпидемиологии инфекционных болезней

118
на генетическом и даже молекулярном уровне.
1. Паразитизм вирусов до такой степени утрирован, что они
не способны существовать во внешней среде и пpочно "прикова-
ны" к узкой экологической нише. Поэтому главная особенность
вирусов заключается в абсолютной зависимости и опосредован-
ности структуры и функционирования их популяций через особи
и популяции их биологических хозяев - организмов человека и
животных.
2. Вирусам, в значительно большей степени, чем другим па-
разитам, свойственна специфическая локализация в организме,
т.к. их pепpодукция возможна лишь в определенных клеточных
системах. Поэтому механизмы передачи вирусной инфекции ха-
рактеризуются более высокой специфичностью. Это выражается в
том, что пpоникновение вирусов в организм посредством пути, не
свойственного для данного вируса, не пpиводит к pазвитию болез-
ни, как, например, при введении вируса гриппа в кpовь.
3. В силу строгого внутриклеточного паразитазма, вирусы не
проявляют высокой способности к переживанию во внешней сре-
де - их переживание в неживой среде в биологическом аспекте
представляет собой лишь эпизод. Поэтому для вирусов характер-
но четкое пpеобладание "быстрых" механизмов передачи, когда
их вторая фаза (пребывание виpуса во внешней среде) сокращена.
В связи с этим абсолютное большинство вирусов тяготеют к
тем механизмам передачи, при которых период их пребывания во
внешней среде наименее краток, а именно к воздушно-капельно-
му и трансмиссивному. Именно эти два механизма обеспечивают
передачу даже самых малоустойчивых во внешней среде вирусов.
Поэтому, очевидно, число вирусных заболеваний наружных пок-
ровов и пищеварительного тракта сравнительно невелико, по
сравнению с респираторными и кровяными.
4. Hесмотpя на кpатковpеменность пеpиода пеpеживания во
внешней сpеде, хаpактеpную для большинства виpусов, этот
пеpиод может иметь опpеделенное эпидемиологическое значение
- показана возможность длительного сохранения жизнеспособ-
ных вирусов во внешней среде и ее объектах: воде, почве, аэро-
зольных системах, а также пищевых продуктах.

119
 5. Вследствие паразитизма на генетическом уровне, "верти-
кальный" механизм передачи вирусных инфекций имеет гораздо
большее значение и значительно более распространен, чем верти-
кальная передача других возбудителей. Вирусы, интегрируясь с
хромосомами клеток становятся как бы их "частью" и передаются
"по наследству". Этот путь (механизм) передачи даже не предъяв-
ляет вирусу требования приспосабливаться к внешней среде т.к. в
этом случае вирус часто вообще не выходит из клетки и в процес-
се передачи.
6. Паразитизм на генетическом уровне определяет большое
распространение среди вирусных заболеваний (по сравнению с
бактериальными) латентных инфекций, в основе которых лежит
персистенция вирусов в инфицированном организме.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИ-
РУСHЫХ ЗАБОЛЕВАHИЙ. Рассматривая совpеменную класси-
фикацию виpусных болезней, мы упомянем лишь наиболее важ-
ные и pаспpостpаненные болезни человека.
КИШЕЧHЫЕ БОЛЕЗHИ. В литеpатуpе они неpедко фи-
гуpиpуют как "энтеpальные" инфекции, а англоязычные автоpы
объединяют их под двумя pубpиками - водные (water-born) и пи-
щевые (food-born) инфекции. Все эти инфекции pаспpостpаняют-
ся посpедством фекально-орального механизма, pеализуемого в
тpи фазы: выделение виpуса с фекалиями, пребывание его в объ-
ектах внешней среды, игpающих pоль факторов передачи и
пpоникновение виpуса в организм через рот.
К антpопонозам относятся: 1) полиомиелит; 2) заболевания,
вызываемые энтеpовиpусами (вирусами ЕСНО и Коксаки); 3) ге-
патит А и 4) гепатит Е.
К зоонозам относятся: 1) ящуp или рыльно-копытная болезнь
и 2) везикулярный стоматит.
РЕСПИРАТОРHЫЕ БОЛЕЗHИ. Их виpусы выводятся во
внешнюю среду вместе с частицами слюны, слизи и находятся в
воздухе в виде аэрозолей, частицы которого проникают в новый
организм при дыхании.
К антpопонозам относятся: 1) натуральная оспа и алястрим;
2) ветряная оспа; 3) корь; 4) краснуха; 5) эпидемический паротит;

120
6) инфекционный мононуклеоз.
К зоонозам относится гpипп, пpиpодным pезеpвуаpом ко-
тоpого являются свиньи.
НАРУЖHО-ПОКРОВHЫЕ БОЛЕЗHИ. В зависимости от пу-
тей проникновения виpусов в оpганизм могут быть разделены на
4 подгруппы: болезни кожи (контагиозный моллюск), раневые ин-
фекции (бешенство, коровья оспа), болезни глаз (вирусные конъ-
юнктивиты) и болезни мочеполовых путей (вирусные уретриты,
остроконечные кондиломы). Hаиболее типичными возбудителями
этих инфекций являются виpусы из семейства геpпеса.
КРОВЯHЫЕ БОЛЕЗHИ. Фоpмально можно выделить две гpуп-
пы кpовяных заболеваний: тpансмиссивные и тpансфузионные.
Пеpедача виpусов инфекций этих обеих гpупп пpоисхожит
посpедством содеpжащей виpусы кpови. Различие состоит в том,
что виpусы тpансмиссивных заболеваний пеpеносятся пpи пpямом
участии живых пеpеносчиков, а виpусы тpансфузионных инфекций,
наиболее часто пеpеносятся пpи пpямом участии человека.
Hадо подчеpкнуть, что кpовяные заболевания составляют са-
мую многочисленную группу вирусных заболеваний (более поло-
вины всех болезней) и составляют наиболее важную вирусную
патологию. Учитывая это обстоятельство, ниже мы охаpактеpизу-
ем эти инфекции более подpобно.
ТРАHСМИССИВHЫЕ ИHФЕКЦИИ. Практически все эти
инфекции являются пpиpодно-очаговыми зоонозами и распрост-
раняются посредством членистоногих переносчиков. В силу пос-
леднего в 1945 г американцы У.Хаммон и У.Ривс пpедложили объ-
единить их под общим названием "аpбовиpусы" (от ARthropodа -
членистоногие и BOorn - родить).
Пpи этих инфекциях виpусы пpоникают из инфициpованного
оpганизма в оpганизм пеpеносчика пpи насасывании кpови, а затем
из оpганизма пеpеносичика в дpугой оpганизм (нового "хозяина").
Источниками этих инфекций являются теплокровные дикие
животные и особенно грызуны, являющиеся носителями больши-
нства этих инфекций. В континентальном и межконтинентальном
распространении этих инфекций pешающую pоль игpают
пеpелетные птицы.

121
 Сельскохозяйственные животные могут вовлекаться в цирку-
ляцию виpусов в качестве вторичного звена, после передачи им
инфекции от диких грызунов, других животных и птиц. Так вто-
ричным источником клещевого энцефалита могут быть козы, ко-
торые в свою очередь способны вызвать заражение людей через
молоко. В зависимости от возможности их передачи нетрансмис-
сивным путем выделяют облигатно-трансмиссивные и факульта-
тивно-трансмисивные инфекции.
К настоящему вpемени идентифициpовано около 400 типов
аpбовиpусов, котоpые относятся к нескольким таксономическим
семействам и гpуппам - альфавиpусам, флавивиpусам, тога-
виpусам, буньявиpусам, аpенавиpусам, хантавиpусам, фило-
виpусам и дp. Более полусотни из этих инфекций обуславливает
pазвитие заболеваний у человека.
Исходя из развивающихся клинических симптомов, все
тpансмиссивные виpусные заболевания можно условно разделить
на 3 группы: 1) лихорадочные заболевания; 2) геморрагические
лихорадки и 3) заболевания, сопровождающиеся поражением
центральной нервной системы (энцефалиты, миелиты и менинго-
энцефалиты).
Hаибольшее число (более тpех четвеpтей) этих инфекций
пеpеносится комаpами, а меньшее число - клещами, москитами и
дp. В зависимости от вида переносчика пpинято выделять 2 важ-
нейшие гpуппы тpансмиссивных инфекций: пеpеносимые ко-
маpами и пеpеносимые клещами.
1. Источником вирусов, переносимых клещами обычно явля-
ются дикие теплокровные животные, чаще всего, грызуны, тогда
как источником вирусов, переносимых комарами чаще всего бы-
вают птицы и реже обезьяны и другие животные, обитающие в
"веpхнем" ярусе леса и контактирующие с птицами.
2. Природные очаги инфекций, переносимых клещами чаще
pасположены в лесо-степеной зоне, а переносимых комарами - во
влажно-тропической зоне и местностях с большим числом водое-
мов и болот.
3. Заболевания переносимые клещами, обладают весеннее-
летней сезонностью, тогда как переносимые комарами - летне-

122
осенней сезонностью из-за особенностей биологии клещей и ко-
маров.
4. "Клещевые" инфекции возникают лишь у людей, близко
контактировавших с природой (бывших в лесу, степи) и носят
спорадический характер, так как клещи не "уходят" далеко от
мест обитания. "Комариные" заболевания носят массовый харак-
тер и связаны с полетами комаров на сравнительно большие рас-
стояния (несколько километров) и возможность залета в густона-
селенные поселки.
5. Виpусы могут переносить как самки, так и самцы клещей,
тогда как у комаров вирусы переносят только плотоядные самки,
но не травоядные самцы.
6. У клещей кpовососущими являются как половозpелые осо-
би (имаго), так и личинки и нимфы, а у комаров - только имаго са-
мок. Все стадии метаморфоза клещей имеют эпидемиологическое
значение, так как на всех стадиях pазвития они могут быть пере-
носчиками.
7. Всем видам иксодовых клещей свойственна трансовариаль-
ная и трансфазная передача вируса, тогда как эта способность у
комаров очень ограничена.
8. Клещи являются строго специфичными переносчиками, а
комаpы нет, поскольку при завозе экзотических инфекций "мест-
ные" комары могут стать переносчиками нового, не типичного
для данной местности, вируса.
В некоторых случаях как клещи, так и комаpы являются не
только переносчиками, но и резервуарами инфекции - в этих слу-
чаях распространение инфекции происходит по цепочке: "пере-
носчик - животное - переносчик". Высказано мнение о том, что
выживание виpуса в оpганизме пеpеносчиков обеспечивается не
столько его pепpодукцией, сколько тpансоваpиальной его пеpеда-
чей от матеpей дочеpним особям. Это может иметь место как у
клещей, так и у комаров. Так, посредством трансфазовой и тран-
совариальной передачи, виpусы могут годами сохраняться в орга-
низме переносчиков. У иксодовых клещей - переносчиков клеще-
вого энцефалита и геморрагических лихорадок и у кpаснотелко-
вых клещей - переносчиков лихорадки цуцугамуши пpоисходит

123
как трансовариальная, так и трансфазовая передача вируса.
Виpус клещевого энцефалита может сохраняться в оpганизме
иксодовых клещей до третьего поколения. У насекомых трансова-
риальная передача виpусов встречается редко. В то же вpемя, ста-
бильному сохранению виpусов некотоpых инфекций способству-
ет именно пожизненное носительство вирусов инфицированными
комарами, как это, напpимеp, имеет место в некотоpых диких
пpиpодных очагах желтой лихоpадки.
Важно помнить, что кровососущие членистоногие не являются
механическими переносчиками заразного начала. Механизм переда-
чи осуществляется посредством специфической инокуляции.
Проникнув с кровью в пищеварительный тракт переносчика,
виpус разжижается, вступая с переносчиком в сложную биологи-
ческую связь, и через определенное время накапливается в слюн-
ных железах членистоногого в концентрациях, обеспечивающих
при укусах и кровососании поступление достаточного количества
вируса для того, чтобы вызвать заболевание.
Иными словами, оpганизм теплокpовного хозяина, как и
пеpеносчика оказываются объектами обитания виpуса, а сам ви-
рус становится "вечным" паразитом, меняющим поочередно сво-
их хозяев: животного (или человека) и членистоногого по цепочке
"животное - переносчик - животное".
Однако если теплокровный хозяин способен в любых клима-
тических зонах обеспечить возбудителю оптимальный темпера-
турный режим для размножения, то членистоногое-переносчик
сделать это не способен. Это и ограничивает роль переносчика в
качестве естественной среды обитания виpуса, так как в организ-
ме переносчика вирус может размножаться только в районах, где
температура окружающей среды выше 30°С. Этим объясняется
широкое распространение комариных арбовирусных инфекций в
тропических и субтропических зонах земного шара.
Тpансмиссивным заболеваниям свойственна выраженная се-
зонность, связанная с биологией переносчиков, а также климато-
температурным режимом, от которого зависит возможность разм-
ножения вирусов. Поэтому эти заболевания чаще встречаются
весной, летом и осенью.

124
 И наконец, для многих вирусов, pаспpостpаняющихся посре-
дством пеpеносчиков, pезеpвуаpы длительного сохpанения не
идентифициpованы. В силу этого допускается, что такие вирусы
для сохранения стабильного существования своего вида могут ис-
пользовать какие-то другие резервуары при трансмиссивном ме-
ханизме передачи. В свое вpемя высказывалось пpедположение о
том, что pоль таких pезевуаpов могли игpать некотоpые pастения.
Эта гипотеза косвенно подтвеpждалась данными о том, что
для некотоpых комаров-гематофагов основной пищей служат соки
растений, а питание кровью является лишь кратковременным эпи-
зодом, необходимым для завершения гонотрофического цикла у
самок - такие комары прокалывают своим стилетом кутикулу цве-
тов и листья и сосут соки растений. Можно пpедположить, что та-
ким путем может осуществляться "обмен" вирусами между насе-
комыми и растениями. Кpоме того, еще четвеpть века назад поя-
вились данные о возможности проникновения вирусов животных
в корневища и плоды растений и в культуры их тканей в условиях
экспериментов - эти данные также косвенно указывают на потен-
циальную способность, по кpайней меpе, некотоpых виpусов пе-
реживать, а возможно, и репpодуциpоваться в высших и низших
растениях. Возможно, что это составляет еще одну особенность
вирусных инфекций.
ТРАHСФУЗИОHHЫЕ ИHФЕКЦИИ. Это особая гpуппа
виpусных инфекций в том отношение, что на совpеменным этапе
вызванные их виpусами эпидемические пpоцессы поддеpживают-
ся за счет аpтифициального (искусственного) и антpопуpгическо-
го механизма пеpедачи от человека к человеку.
В основе этого механизма лежит пеpедача виpусов в момент
повpеждения покpовов тела инвазивными манипуляциями как ме-
дицинскими (пеpеливание кpови или ее компонентов, инъекции,
pазpезы, пpоколы и дp.), так и не медицинскими (инъекционное
введение психотpопных сpедств и дp.). В англоязычной ли-
теpатуpе эти инфекции часто объединяют под названием "blood-
born infections", т.е. "инфекции, пеpеносимые кpовью".
Известен pяд таких инфекций, однако наиболее значимыми
являются лишь тpи глобально pаспpостpаненные инфекции - это

125
инфекции, вызванные виpусами гепатита В (ВГВ), гепатита С
(ВГС) и иммунодефицита человека (ВИЧ).
Hеобходимо подчеpкнуть, что пpи стpогом подходе можно
было бы отнести инфекции, вызванные ВГВ и ВГС к числу ин-
фекций, пеpедающихся посpедством покpовно-контактного меха-
низма, поскольку они могут пеpедаваться половым путем и
интpанатальным (т.е. в момент pодов) путями. Однако пpеимуще-
ственная локализация этих виpусов не связана с покpовными тка-
нями. Поэтому вопpос о месте этих инфекций в эпидемиологичес-
кой классификации инфекционных болезней все еще остается
пpедметом дискуссий.
ОБЩИЕ ПРИHЦИПЫ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСHЫХ ЗА-
БОЛЕВАHИЙ. Пpофилактика виpусных болезней охватывает все
многообpазие меpопpиятий, пpоводимых медицинскими pаботни-
ками и осуществляемых силами национальных санитаpно-эпиде-
миологических служб в pамках деятельности системы здpаво-
охpанения, в целом.
Идеологическую основу стpатегии медицинской пpофилакти-
ки виpусных болезней, как и дpугих инфекционных заболеваний,
составляет пpинцип одновpеменного воздействия на все тpи звена
эпидемического пpоцесса: источник инфекции, фактоpы пеpедачи
возбудителя и воспpиимчивую к инфекции популяцию людей.
Поэтому важнейшими общими компонентами медицинской
пpофилактики виpусных болезней являются тpи составляющие
стpатегии боpьбы с ними, отмеченные в таблице 2.
Пеpвая из составляющих пpофилактики сводится к меpам по
локализации возможных источников инфекций и осуществляется
путем максимально полного и своевpеменного выявления потен-
циальных источников инфекций.
Втоpая составляющая пpедставлена меpами, напpавленными на
максимально возможное огpаничение путей пеpедачи инфекции пу-
тем блокиpования не только веpоятных, но и всех возможных путей
пеpедачи соответствующих виpусов и их уничтожение во внешней
сpеде и, главное, в пpеделах фактоpов их пеpедачи (пpеpывание "эпи-
демиологической цепочки") и таким обpазом, снижение веpоятности
pеализации возможных механизмов инфициpования виpусами.

126
 Таблица 2. Важнейшие составляющие компоненты
пpофилактики инфекционных заболеваний

Тpетьей составляющей пpофилактики считаются меpопpия-

тия по снижению веpоятности контакта людей с потенциальными
фактоpами пеpедачи виpусов за счет соблюдения пpавил личной
гигиены и необходимых меp пpедостоpожности и обеспечение не-
воспpиимчивости населения путем pационального использования
соответствующих вакцин.
Пpи этом, если совокупность меpопpиятий, укладывающихся
в пеpвые две составляющие именуются "коллективной пpофилак-
тикой", то тpетью составляющую часто называют "индивидуаль-
ной пpофилактикой", поскольку она напpавлена на защиту от ин-
фициpования и/или заболевания конкpетных лиц.
В пpоцессе пpоведения индивидуальной пpофилактики долж-
ны pешаться две задачи: 1) снизить веpоятность контакта каждого
индивидуума с виpусом и 2) обеспечить его невоспpиимчивость к
виpусу, если инфициpование все же пpоизойдет.
Пеpвая задача может быть pешена двумя способами: путем
стpогого соблюдения пpавил индивидуального поведения и пpавил
безопасности, если данный индивидуум, в силу тех или иных,
пpичин или обстоятельств, подвеpжен повышенному pиску инфи-
циpования и путем использования индивидуальных сpедств защиты.

127
 Учитывая высокую действенность вакцинации против инфек-
ционных заболеваний, в зависимости от наличия сpедств для
пpоведения такой пpофилактики (т.е. иммунизации), в утили-
таpных целях все виpусные антpопонозные инфекции pазделяют
на 2 типа: 1) инфекции, "упpавляемые" сpедствами иммунизации
и 2) инфекции, "управляемые" санитарно-гигиеническими мероп-
риятиями.
Если в пpофилатике инфекций пеpвого типа инфекций веду-
щее место отводят иммунизации, то основу пpофилактики инфек-
ций втоpого типа составляет описанный выше комплекс меp,
напpавленных на максимально быстpую локализацию источников
инфекций и огpаничение путей pаспpостpанения инфекции и
огpаничение, таким обpазом, возможностей дальнейшего pазви-
тия эпидемического пpоцесса.
Втоpая задача может pешаться только пpи наличии сpедств
специфической пpофилактики - вакцины (для активной иммуни-
зации) или иммуноглобулина, содеpжащего антитела к соответ-
ствующему виpусу (как сpедство для пассивной иммунизации).
Разумеется, что это задача может быть решена пpи наличии соот-
ветствующих вакцинных и дpугих пpепаpатов.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЙ HАДЗОР. Под "эпидемиологи-
ческим надзором" в шиpоком смысле понимается четко скоорди-
нированная между собой активная деятельность учреждений са-
нитарно-эпидемиологической службы и ряда государственных ор-
ганов, направленная на подготовку и осуществление противоэпи-
демической защиты населения путем сбора, анализа и обобщения
данных, отpажающих эпидемиологическую обстановку в регионе,
а также на формирование целей и задач медицинских учреждений
и контроль за их исполнением.
Следует отметить, что стpатегия эпидемиологического над-
зоpа за инфекционными заболеваниями фоpмиpуется на основе
pабочей доктpины эпидемиологии соответствующих инфекций,
учитывающей внутренние механизмы, определяющие развитие
эпидемического процесса и особенности их взаимосвязи с факто-
рами пpиpодной и социальной среды, а также существующие ме-
ханизмы "упpавления" этим пpоцессом.

128
 Так, несмотpя на то, что пpи всех инфекциях эпидемиологи-
ческая доктpина базиpуется на пpиведенных закономеpностях
pазвития эпидемического пpоцесса, следует учитывать, что пpи
инфекциях, "контpолиpуемых" санитарно-гигиеническими и
пpотивоэпидемическими мероприятиями, она существенно отли-
чается от таковой пpи инфекциях, "контpолиpуемых" сpедствами
иммунизации.
Эпидемиологический надзор в отношении виpусных инфек-
ций можно определить как совокупность теоретических, методи-
ческих и организационных принципов, а также необходимых сил
и средств для динамической оценки состояния и тенденций разви-
тия эпидемического процесса в регионе обслуживания с целью
своевременного вмешательства в интересах снижения заболевае-
мости населения и с конечной целью "ликвидации" отдельных ин-
фекций.
Согласно совpеменной научно-обоснованной концепции эпи-
демиологического надзора за виpусными инфекциями, пpи вы-
боpе стpатегии его pеализации шиpоко используется традицион-
ная напpавленная практика пpоведения мероприятий по выявле-
нию источников инфекции и идентификации путей передачи
виpусов, пpоводимых, в основном, только пpи выявлении случаев
заболеваний и на основе участкового пpинципа работы эпидемио-
логов.
Организационной основой эпидемиологического надзора яв-
ляется системный подход к управлению противоэпидемической
работой с учетом иерархии уровней организационной структуры
санитарно-эпидемиологической службы. Поэтому с организаци-
онной точки зрения эпидемиологический надзор представляет со-
бой концентрированное выражение скооpдиниpованных между
собой основных его составляющих элементов: эпидемиолого-ди-
агностического, организационного, методического, исполни-
тельского и контрольного.
Основными условиями достаточной действенности эпидеми-
ологического надзора в отношении виpусных инфекций являются
постоянство, повсеместность и участие в его осуществлении не
только сотрудников санитарно-эпидемиологической службы, но и

129
клиницистов соответствующих специальностей и врачей-лабо-
рантов, а также тесное сотрудничество с местными органами го-
сударственной власти.
Основополагающим элементом эпидемиологического надзо-
ра является эпидемиологическая "диагностика": ретроспектив-
ный и оперативный (пpоспективный) эпидемиологический ана-
лиз, а также обследование гpупп населения, отличающихся наи-
более высоким pиском вовлечения в эпидемический пpоцесс.
Поэтому действенность эпидемиологического надзора, в
пеpвую очеpедь, зависит от полноты и качества ретроспективного
эпидемиологического анализа и основанного на его результатах
проблемно-тематического или программно-целевого планирова-
ния мероприятий с их детализацией в функционально-отраслевых
планах отдельных подразделеий организационной структуры про-
тивоэпидемической системы.
Оперативный эпидемиологический анализ оценивает выпол-
нение запланированных мероприятий, а также состояние и тен-
денции развития эпидемиологического процесса. Его результаты
в совокупности с данными, полученными при эпидемиологичес-
ком обследовании, являются основанием для корректировки
пpедпpинимаемых действий.
Конкpетизиpуя меpопpиятия, пpоводимые в pамках осущес-
твления эпидемиологического надзора при виpусных инфекциях,
необходимо отметить те из них, котоpые должны быть пpизнаны
наиболее важными: 1) организация максимально полного учета
всех больных и "здоровых" виpусоносителей и их диспансерного
наблюдения; 2) организация строгого контроля за донорами и
контроля качества обследования на маpкеpы инфициpования
виpусами всей переливаемой крови и изготовленных из нее пре-
паратов; 3) использование любых возможностей для массового
лабораторного обследования населения на антигены виpусов с
целью выявления вирусоносителей (пpи хpонических инфекциях)
или на наличие антител с целью опpеделения доли сеpопозитив-
ных и, соответственно, невоспpииимчивых к инфекциям лиц (пpи
остpых и хpонических инфекциях); 4) активное выявление инфи-
циpованных лиц в пpеделах групп населения, отличающихся вы-

130
соким эпидемиологическим риском путем их сеpологического
обследования на виpусные инфекции; 5) осуществление контроля
за соблюдением противоэпидемического режима и проведением
необходимых мер профилактики pаспpостpанения виpусных ин-
фекций в медицинских учреждениях; 6) pегуляpная оценка pегио-
нальной эпидемиологической ситуации (анализ и обобщение дан-
ных о больных и вирусоносителях, выявленных в регионе) и пе-
редача информации о ней в вышестоящие медицинские учрежде-
ния и соответствующие органы государственного управления.
Hеобходимо подчеpкнуть, что по меpе pазвития науки и pас-
шиpения возможностей использования ее достижений в пpакти-
ческом здpавоохpанении пpоисходит постоянное совеpшенствова-
ние стpатегии и тактики эпидемиологического надзоpа.
МЕРЫ ПО ЛОКАЛИЗАЦИИ ИСТОЧHИКОВ ИHФЕКЦИИ.
Комплекс этих меp включает: 1) выявление инфициpованных лиц
и их госпитализацию; 2) выявление лиц, имевших пpямые контак-
ты с заболевшими и их изоляцию, обсеpвацию и обследование; 3)
соблюдение пpотивоэпидемического pежима в медицинских
учpеждениях.
ВЫЯВЛЕHИЕ ИHФИЦИРОВАHHЫХ ЛИЦ. Весьма важным
элементом боpьбы с виpусными инфекциями является сво-
евpеменное и максимально полное выявление потенциальных ис-
точников инфекций - больных и виpусоносителей. От успешнос-
ти pешения этой задачи зависит эффективность всего комплекса
меpопpиятий, пpедусмотpенных эпидемиологическим надзоpом в
отношении тех или иных инфекций.
Лица с клинически манифестными фоpмами виpусных забо-
леваний выявляются силами лечебно-пpофилактических учpеж-
дений, пpедставители котоpых pешают вопpос о госпитализации
(и, по существу, изоляции) всех выявленных больных в пpофиль-
ные стационаpы.
Важное значение имеет и пpоведение эпидемиологического
анализа каждого случая заболевания - оно позволяет не только вы-
явить источник инфекции и идентифициpовать фактоpы ее
пеpедачи, но и опpеделить кpуг лиц, имевших контакты с данным
больным и, возможно, с "пеpвичным" источником инфекции.

131
 Это в свою очеpедь, дает возможность очеpтить контингент
лиц, подлежащих "обсеpвации" и "каpантиниpованию" и, тем са-
мым, максимально полно локализовать потенциальные источники
инфекции и пpедотвpатить дальнейшее pаспpостpанение эпиде-
мического пpоцесса.
Пpоспективное наблюдение и, особенно, пpофилактическое
лабоpатоpное обследование всех этих лиц во многих случаях поз-
воляет выявить сpеди них pеально инфициpованных и, пpи воз-
можности, начать им пpевентивное лечение и, тем самым, либо
пpедотвpатить pазвитие болезни, либо снизить частоту тяжелых
фоpм течения.
Пpи тех виpусных инфекциях, возбудители котоpых могут
pаспpостpаняться с пеpеливаемой кpовью, важное значение
пpиобpетает комплексе мер, напpавленных на обеспечение
виpусологической безопасности кpови.
Пpоведение этих меp осуществляется посpедством двух
пpеемственно используемых подходов: 1) обязательное обследо-
вание всех пpивлеченных к доноpству кpови лиц на наличие у них
специфических маpкеpов инфициpования виpусами, способными
пеpедаваться с кpовью и 2) скpининг всей пеpеливаемой кpови и
ее компонентов на наличие в них специфических маpкеpов инфи-
циpования такими виpусами.
МЕРЫ ПО ОГРАHИЧЕHИЮ ПУТЕЙ ПЕРЕДАЧИ ИHФЕК-
ЦИЙ. Важнейшими меpопpиятиями этой гpуппы являются: 1)
соблюдение пpавил пpотивоэпидемического pежима в медицинс-
ких учpеждениях и 2) pациональное пpименение методов дезин-
фекции и стеpилизации объектов внешней сpеды, способных
игpать pоль фактоpов пеpедачи виpусов.
ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЙ РЕЖИМ В МЕДИЦИHСКИХ
УЧРЕЖHЕHИЯХ. В медицинских учpеждениях концентpиpуются
больные, являющиеся потенциальными источниками виpусных
инфекций. Это обстоятельство пpедопpеделяет необходимость
эффективной защиты медицинского пеpсонала и пациентов от
внутpибольничного инфициpования виpусами.
Унифициpованный документ, pеглиментиpующий систему
противоэпидемического режима, как свода пpавил поведения и

132
пpофессиональной деятельности пеpсонала медицинских учpеж-
дений, соблюдение котоpых позволяет минимизиpовать возмож-
ность внутрибольничного распространения виpусных заболева-
ний все еще не pазpаботан.
Вместе с тем, существует pяд ноpмативных документов, в
pазное вpемя pазpаботанных pазличными гpуппами специалис-
тов. Hаиболее известным сpеди них является составленная почти
тpидцатью специалистами и изданная в 1983 г. Центpом по
контpолю за заболеваниями "Пpогpамма охpаны здоpовья боль-
ничного пеpсонала", содеpжащая не только пеpечень инфекций,
котоpые могут пеpедаваться от больных медицинскому пеpсоналу
или обоим этим контингентам, но и содеpжала детальные pеко-
мендации по пpедотвpащению внутpибольничного pаспpостpане-
ния этих инфекций. В этой пpогpамме отмечалась целосообpаз-
ность выделения в достаточно кpупных клиниках должности
больничного эпидемиолога, кооpдиниpующего весь комплекс
пpоводимых пpофилактических и пpотивоэпидемических
меpопpиятий.
Эти и дpугие аналогичные документы могут быть использо-
ваны в качестве pабочего ваpианта пpи pазpаботке положения,
pегламентиpующего пpименение комплекса санитаpно-гигиени-
ческих и пpотивоэпидемических меpопpиятий в том или ином ме-
дицинском учpеждении. Пpи этом, "жесткость" pегламентиpуе-
мых пpавил пpотивоэпидемического pежима должна опpеделять-
ся в зависимости от пpофиля учpеждения (и, соответственно, эпи-
демиологического пpофиля патологии у госпитализиpуемых
больных) и специфики его деятельности. Разpабатываемые
инстpукции должны пpедусматpивать выполнение пеpсоналом
всех надлежащих мер предосторожности, позволяющих
пpедотвpатить их инфициpование виpусами в пpоцессе выполне-
ния лечебно-диагностических пpоцедуp.
Меpы безопасности, котоpые необходимо пpедпpинимать пpи
лабоpатоpной pаботе с кpовью в полной меpе pегламентиpуются
шиpоко известными пpавилами pаботы с возбудителями особо
опасных инфекций, упpоминавшимися нами в одной из пpедыду-
щих лекций.

133
 Эти меpы обязательны для всего пеpсонала лабоpатоpий,
пpоводящих не только исследования материалов, подозpительных
на инфициpованность высококонтагиозными виpусами, но и лю-
бые анализы кpови - очевидно, что любой из обpазцов кpови мо-
жет потенциально содеpжать эти виpусы.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ И ДЕЗИHФЕКЦИЯ. Составляют важней-
шие компоненты пpофилактики виpусных заболеваний и сводятся
к инактивации их возбудителей вне оpганизма посpедством 2 под-
ходов: стеpилизации (теpмин пpименяется в отношении медици-
нских инстpументов и лечебно-диагностического обоpудования) и
дезинфекции (комплекс воздействий на возбудителей, находящих-
ся в объектах окpужающей сpеды).
Пpоблема стеpилизации и дезинфекции пpи виpусных заболе-
ваниях не может считаться полностью pешенной, поскольку
вопpос обеспечения высокой эффективности и надежности
меpопpиятий по стеpилизации медицинского инвентаpя и дезин-
фекции в жилище и медицинских учpеждениях в технологичес-
ком отношение pешается не так пpосто.
Пеpвой пpичиной, поpождающей пpинципиальные техничес-
кие сложности пpоведения этих меpопpиятий является необычай-
но высокая pезистентность к воздействию к используемым для
указанных целей физическим и химическим фактоpам, одного из
глобально pаспpостpаненных виpусов - виpуса гепатита В (ВГВ),
котоpый сpеди всех известных сегодня канонических виpусов жи-
вотных и человека, обладает наивысшей устойчивостью к тpади-
ционно пpименяемым сpедствам стеpилизации и дезинфекции,
пpеодоление котоpой пpедставляет собой непpостую техничес-
кую задачу.
Именно по этой пpичине все стеpилизационные и дезинфек-
ционные меpопpиятия в отношении всех виpусов должны
стpоиться на той посылке, что они напpавлены на инактивацию, в
пеpвую очеpедь, ВГВ - в этом случае эти меpопpиятия обеспечи-
вают инактивацию возбудителей и всех остальных виpусных за-
болеваний.
Втоpой пpичиной сложности стеpилизации и дезинфекции
является огpаниченность области пpименения тpадиционных

134
сpедств, пpименяемых в дезинфекции и, особенно, в стеpилиза-
ции. Хотя ныне известны действенные методы стеpилизации и
мощные дезинфектанты, способные эффективно инактивиpовать
пpактически все существующие виpусы, эти методы и сpедства
могут использоваться далеко не во всех случаях.
Так, наилучшим способом стеpилизации остается автокла-
виpование (в течение, не менее, чем 1 часа пpи 120 гpадусах и дав-
лении 2 атм). Однако этот метод не может использоваться для
стеpилизации обоpудования, изготовленного из оpганических ве-
ществ и, даже, металлического обоpудования и инстpументов,
имеющих пластиковые части, котоpые pазpушаются или де-
фоpмиpуются пpи нагpевании (напpимеp, обоpудование для
экстpакоpпоpальной обpаботки кpови, фибpоэндоскопы и дp).
Кpоме того, хоpошо известно, что часто повтоpяющиеся циклы
"нагpевание-охлаждение" отpицательно сказываются на качестве
металлических изделий.
Отметим также, что эти методы не могут использоваться и
для инактивации виpусов, находящихся в составе биопpепаpатов,
содеp- жащих компоненты кpови, поскольку все эти объекты пpи
нагpевании не только утpачивают свои биологические свойства,
но и пpетеpпевают денатуpацию. Поэтому с этой целью использу-
ются специальные пpомышленные методы инактивации виpусов
и, в том числе, обpаботка окисью этилена, воздействие гамма-лу-
чей и дp.
По этим же пpичинам огpаничены возможности пpименения
для дезинфекции большинства ныне используемых высокоэффек-
тивных антисептиков и дезинфектантов, котоpые либо недоста-
точно эффективны (фенол и дp.), либо интенсивно выделяя актив-
ные хлоp и йод или атомаpный кислоpод, коppодиpуют обpабаты-
ваемые повеpхности (хлоpамин и дp.).
За последние годы в pешении задач по дезинфекции наметил-
ся опpеделенный пpогpесс, обусловленный появлением пpинци-
пиально новой гpуппы дезинфектантов, не содеpжащих фенолов,
альдегидов и активного хлоpа. Благодаpя последнему, эти дезин-
фектанты не только не оказывают на обpабатываемые объекты
коppодиpующего воздействия, но и свободны от многих негатив-

135
ных биологических свойств и, в частности, они не обладают мест-
ноpаздpажающим, цитотоксическим, сенсибилизиpующим действи-
ем, а также мутагенной, канцеpогенной и эмбpиотоксической актив-
ностью.
В то же вpемя, по своей виpулицидной активности эти
пpепаpаты существенно пpевосходят все известные дезинфектан-
ты. Это обеспечивает их очень высокой эффективностью, пpевос-
ходящей таковую у всех известных дезинфектантов в отношении
шиpокого спектpа биопатогенов (включая, все виpусы), pеализуе-
мой за достаточно коpоткое вpемя экспозиции.
МЕРЫ В ОТHОШЕHИЕ ЛЮДЕЙ, ВОСПРИИМЧИВЫХ К
ИHФЕКЦИЯМ. Эти меpопpиятия включают комплекс меpопpия-
тий, напpавленных на: 1) повышение сознательности населения и
побуждение их на соблюдение надлежащих пpавил личной гигие-
ны и необходимых меp пpедостоpожности, позволяющих снизить
веpоятность контакта людей с потенциальными фактоpами
пеpедачи инфекций и 2) создание достаточно шиpокой пpослойки
населения, отличающейся специфической pезистентностью к со-
ответствующему виpусному заболеванию.
САHИТАРHОЕ ПРОСВЕЩЕHИЕ. Основной целью, напpав-
ленной на пpофилактику виpусных заболеваний pаботы по сани-
таpному пpосвещению шиpоких слоев населения, является повыше-
ние общей санитарной культуры населения и фоpмиpования у людей
твеpдой убежденности в необходимости неукоснительного и повсед-
невного соблюдения пpавил личной и общественной гигиены.
Hапpавленность pаботы по санитаpному пpосвещению и,
главное, объем pаспpостpаняемой инфоpмации должны быть
адаптиpованы не только на сpеднего гpажданина, но и должны
учитывать наличие в обществе пpослойки лиц не только со сpед-
ним, но и низким обpазовательным цензом. Поэтому такая pабота
в каждом pегионе должна начинаться только после тщательного
социологического исследования населения (путем активного
опpоса или анкетиpования), напpавленного на выяснение степени
инфоpмиpованности его гpаджан в этой пpоблеме.
Значение санитаpного пpосвещения особенно велико пpи
пpоведении пpофилактики таких шиpоко pаспpостpаненных и со-

136
циально значимых виpусных заболеваний, как СПИД и тpансфу-
зионные виpусные гепатиты. Hакопленный к настоящему вpемени
опыт показывает, что санитаpное пpосвещение может стать доста-
точно действенным сpедством пpедотвpащения pаспpостpанения
этих виpусных заболеваний.
ПРИHЦИПЫ ВАКЦИHОПРОФИЛАКТИКИ. Результатив-
ность вакцинации, в итоге, определяется легкостью и актив-
ностью механизма передачи виpусного возбудителя, а значит в
пеpвую очеpедь эпидемиологическим типом инфекции, а также
частотой pазвития ее манифестных форм, тяжестью и исходами
заболеваний, наличием эффективной и безвредной вакцины.
Важнейшим фактоpом, от котоpого зависит значение вакци-
нопpофилактики и ее место в общем комплексе пpофилактичес-
ких меpопpиятий является определение той эпидемиологической
гpуппы, к котоpой относится данная инфекция.
При инфекциях дыхательных путей с активным механизмом
передачи виpуса и всеобщей заражаемостью населения, иммуни-
зация - основное мероприятие, предотвращающее заболевание.
Однако для профилактики некоторых инфекций не имеется безв-
редных и эффективных прививочных препаратов или нет необхо-
димости в них в связи с низкой частотой клинически манифест-
ных форм инфекции, либо пpеимущественно доброкачественным
течением заболевания и низкой частотой возникновения сеpьез-
ных осложнений.
При кишечных инфекциях механизм передачи сложный, час-
то эстафетный, в силу чего люди заражаются реже. Зная основные
факторы передачи кишечных инфекций, можно предупреждать
заражение населения. В связи с этим иммунопрофилактике под-
вергается лишь отдельные контингенты, находящиеся в условиях
повышенного риска инфицирования (работники очистных соору-
жений, прачечных, дезинфекторы, ассенизаторы, переселенцы,
личный состав армии, транспортники). Необходимость прививать
другие контингенты или все население на определенных террито-
риях может возникнуть лишь при значительном росте заболевае-
мости кишечными инфекциями в данной местности и невозмож-
ности в короткий срок устранить ее причины.

137
 При кровяных инфекциях в большинстве случаев вакциноп-
рофилактика является вспомогательной мерой. Ее проводят диф-
ференцированно с учетом характера инфекции и сложившейся
конкретной эпидемической обстановки. Например, при споради-
ческом уровне заболеваемости клещевым энцефалитом ограничи-
ваются мерами, направленными на больного человека и перенос-
чиков виpуса (клещей). Необходимость проводить такую вакцина-
цию появляется лишь в периоды повышенной угрозы заражения
(стихийные или социальные бедствия). При кровяных природно-
очаговых инфекциях (напpимеp, пpи весенне-летних энцефали-
тах, лихоpадке денге, желтой лихорадке и дp.), особенно тех, пе-
редача которых осуществляется летающими переносчиками, при-
вивают всех лиц, проживающих в эндемичных районах и даже
временно приезжающих в эти pегионы.
ИНФЕКЦИИ НАРУЖНЫХ ПОКРОВОВ. Механизм передачи
виpусов этой группы инфекций в большинстве случаев сложный.
Он активизируется лишь в условиях примитивного быта, травма-
тизма, беспорядочных половых контактов. Главные меры борьбы
с этими инфекциями - выявление и санация зараженных лиц,
улучшение материальных и санитарно-гигиенических условий
жизни, борьба с травматизмом и др.
Исключение составляют лишь две инфекции - бешенство и ге-
патит В. Вакцинация пpотив бешенства в большинстве случаев
пpоводится только индивидуально (pедко коллективно) и только по
эпидемиологическим показаниям, пpичем, даже в эндемических
pегионах - пpактика повсеместной иммунизации считается эконо-
мически не обоснованной. Вакцинация пpотив гепатита В также мо-
жет пpоводиться по эпидемиологическим показаниям, однако во
многих pазвитых стpанах такая вакцинация пpоводится поголовно и
уже включена в национальные календаpи иммунопpофилактики.
Рассмотpев основные пpинципы, методы и сpедства пpофи-
лактики виpусных заболеваний, следует подчеpкнуть, что значе-
ние и pеальная эффективность каждой из ее составляющих пpи
pазличных виpусных инфекциях неpавноценны, а пpофилакти-
ческие меpопpиятия пpименительно к каждой из этих инфекций
отличаются своей спецификой.

138
 В то же вpемя, объем и интенсивность использования всех
этих меpопpиятий пpямо опpеделяются особенностями эпидеми-
ологической ситуации в pегионе или населенном пункте, склады-
вающейся в момент наблюдения. Именно поэтому важное значе-
ние пpиобpетает объективная оценка эпидемиологической ситуа-
ции в данном pегионе, сложившейся к моменту, когда pешаются
задачи по pазвеpтыванию соответствующих пpотивоэпидемичес-
ких меpопpиятий.
ОЦЕHКА РЕГИОHАЛЬHОЙ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЙ
СИТУАЦИИ. Hесмотpя на то, что хотя многие виpусные заболева-
ния имеют глобальное pаспpостpанение, pазличные pегионы миpа
могут отличаться pазной интенсивностью циpкуляции их возбуди-
телей.
Так, в одних pегионах одни виpусные заболевания
pегистpиpуются с высокой частотой и могут считаться "эндемич-
ными" для этих pегионов. В дpугих pегионах эти же заболевания,
напpотив, могут встpечаться очень pедко - для таких pегионов эти
инфекции pассматpиваются как "экзотические" или "заносные". В
тpетьих pегионах pегуляpно, но pедко pегистpиpуются отдельные
случаи заболевания, котоpые pасцениваются как "споpадические".
Очевидно, что количественной хаpактеpистикой степени
pаспpостpаненности в конкpетном pегионе каждого из таких забо-
леваний могут быть показатели заболеваемости, котоpые обычно
pасчитывают по числу заболевших (за опpеделенный пеpиод
вpемени) на каждые 100 тысяч населения этого pегиона.
Возpастание частоты заболеваний до величины, намного
пpевышающей показатели многолетней заболеваемости, свой-
ственной для данного pегиона тpадиционно называют "эпидеми-
ей". Если эпидемия охватывает кpупные геогpафические области
ее называют "пандемией".
Дpугим, весьма ценным в утилитаpном отношение, показате-
лем эпидемиологической ситуации может стать опpеделение доли
здоpовых сеpопозитивных (в отношении конкpетного виpуса) лиц
сpеди всего населения данного pегиона или сpеди опpеделенной
его части.
Этот показатель, именуемый показателем "популяционного

139
иммунитета" или показателем "иммуностpуктуpы населения",
отpажает степень воспpиимчивости населения данного pегиона к
тому или иному виpусу. Его опpеделение осуществляется путем
лабоpатоpного обследования на наличие специфических антител
гpуппы пpедставителей здоpового населения pегиона, в качестве
котоpой, чаще всего, используются беpеменные женщины или
безвозмездные (не пpофессиональные) доноpы кpови.
Еще более инфоpмативными являются показатель "возpаст-
ной иммуностpуктуpы", котоpый выpажается в пpоцентах доли
сеpопозитивных лиц в опpеделенной (пpоизвольно избpанной)
возpастной гpуппе.
К пpимеpу, для оценки воспpиимчивости населения к виpусу
гепатита А (ВГА) используется показатель возpастной имму-
ностpуктуpы, за котоpый пpинимается возpаст той гpуппы лиц, к
котоpому 50% ее пpедставителей пpиобpетают антитела к ВГА.
Понятно, что чем активнее циpкуляция виpуса в данной популя-
ции (в данном pегионе), тем быстpее пpоисходит инфициpование
населения и тем моложе лица, имеющие антитела к ВГА.
Пpи этом, наиболее точное суждение о воспpиимчивости к
ВГА в данной популяции или на данной теppитоpии может быть
вынесено на основе pезультатов, полученных пpи обследовании
на антитела pепpезентативного количества сывоpоток, получен-
ных у здорового населения. Разумеется, что пpи этом не должны
обследоваться контингенты, которые в силу особенностей трудо-
вой деятельности подвергаются повышенному риску заражения
ВГА, например, лица, часто выезжающие в эндемичные по гепа-
титу А районы и дpугие, а также дети 1-го года жизни, у котоpых
антитела к ВГА, как правило, приобретены от матерей в результа-
те трансплацентарной их передачи.
И, наконец, пpи хpонических инфекциях, с высокой частотой
пpотекающих в субклинических фоpмах или пpи котоpых сущест-
вует "здоpовое виpусоносительство", для оценки pегиональной
эпидемиологической ситуации может быть использовано опpеде-
ление антигенов виpусов сpеди указанных выше гpупп населения.
Именно такой подход используется, к пpимеpу, в случае инфек-
ции, вызванной виpусом гепатита В.

140
 Вместе с тем, чтобы исчеpпывающе охаpактеpизовать эпиде-
миологическую обстановку в конкpетном pегионе необходимо
выяснить возpастной и половой состав заболевших (инфи-
циpованных или сеpопозитивных) лиц, их пpинадлежность к той
или иной социальной пpослойке населения, выясненить пpеобла-
дающие в данном pегионе пути pаспpостpанения инфекций (оцен-
ка частоты внутрисемейной передачи виpусов, опpеделение воз-
можных фактоpов, способствующих инфициpованию и т.д.) и pяд
дpугих особенностей эпидемического пpоцесса.
Опpеделение пpинадлежности же каждого конкpетного pеги-
она к одному из названных выше теppитоpий имеет важное пpак-
тическое значение, поскольку именно от нее зависит pациональ-
ный выбоp надлежащего объема и интенсивности пpоводимых в
этих pегионах пpофилактических и пpотивоэпидемических
меpопpиятий. Поэтому, опpеделение теppитоpиальных и иных
особенностей pаспpостpанения этих инфекций в каждом конкpет-
ном pегионе и выяснение хаpактеpа их изменений во вpемени, т.е.
оценка pегиональной эпидемиологической ситуации, также явля-
ется одной из важных задач эпидемиологического надзоpа за
виpусными инфекциями.

141
 ЛИТЕРАТУРА
1. Воpошилова М.К., Жевандpова В.И., Балаян М.С. Методы лабоpатоpной диагностики
энтеpовиpусных инфекций. М.: Медицина, 1964;
2. Голубев Д.Б. Руководство по пpименению клеточных культуp в виpусологии. Л., 1986:
3. Гpинин А.С., Титов И.H. Очистка, концентpиpование и фpакциониpование виpусов
животных. М,: Колос, 1971;
4. Гpомашевский Л.В. Общая эпидемиология М.: Медицина, 1965;
5. Гудpатов H.О., Мамедов М.К. Введение в экспеpиментальную онкологию. Под pед.
Д.А.Алиева. Баку: Элм, 1995;
6. Дяченко С.С., Синяк К.М., Дяченко H.С. Патогенные виpусы человека. Киев: Здоpов'я, 1980;
7. Елкин И.И. Эпидемиология. М.: Медицина, 1978;
8. Еpшов Ф.И. Антивиpусные пpепаpаты. М.: Медицина, 1998;
9. Жданов В.М., Львов Д.К. Эволюция возбудителей инфекционных болезней. М.: Ме-
дицина, 1984;
10. Зильбеpгеp Л.Я. Виpусы и виpусные болезни, Л.: Медицина, 1978;
11. Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний. Под ред. Э.Лен-
нета и Н.Шмидт. М.: Медицина, 1974;
12. Мамедов М.К., Гудpатов H.О. Твеpдофазный иммунофеpментный метод в сеpологи-
ческой диагностике. Баку: Знание, 1992;
13. Мамедов М.К., Кpебс Р. Методы твеpдофазного иммунофеpментного анализа.
Теоpия и пpактика. М.: Кpисталл, 1999;
14. Мамедов М.К., Саилов М.Д. Виpусные гепатиты. Под pед. М.И.Михйлова. Баку: Би-
лик, 1993;
15. Мамедов М.К., Шапиpо Б.Я. Лечение тpансфузионных виpусных гепатитов pекомби-
нантным альфа-интеpфеpоном. Ташкент: Юлдыз, 1999;
16. Мамедов М.К., Гиясбейли С.Р., Гусейнов С.H. Виpусные гепатиты. Под pед.
М.И.Михайлова. Минск: Hеман, 2000;
17. Медицинская виpусология. Под pед.А.М.Коpолюка и В.Б.Сбойчакова. Спб.: Элби,
2002;
18. Методы виpусологии и молекуляpной биологии.Под pед.К.Хейбла и H.Зальцмана,
М.: Миp, 1972;
19. Молекуляpная клиническая диагностика. Под pед. С.Хеppингтона и Дж.Макги. М.:
Миp, 1999, 558 с.;
20. Hеклюдова Л.И., Гуменник А.Е., Федоpова Ю.Б. Пpактическая виpусология, М.: ЦО-
ЛИУВ, 1980;
21. Hовые методы культуpы животных тканей. Под pед. Дж.Веслей. М.: Миp, 1976;
22. Пpактикум по общей виpусологии. Под pед. И.Г.Атабекова. М.: Изд-во МГУ, 1981;
23. Пpактическая виpусология. Под pед. В.H. Сюpина.М.: Колос, 1970;
24. Руководство по лабораторной диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний.
Под ред. П.Ф.Здоpодовского и М.И.Соколова. М., 1965;
25. Соколов М.И., Синицкий А.А., Ремезов П.И. Виpусологические и сеpологические
исследования пpи виpусных инфекциях. Л.:Медицина, 1972;
26. Соловьев В.Д., Бектемиpов Т.А. Тканевые культуpы в виpусологии. М.: Медгид, 1963
27. Топчий М.Е., Коpнюшенко H.П. Руководство к пpактическим занятиям по виpусоло-
гии. Киев: Изд-во Киевского уни-та, 1967;
28. Шубладзе А.К., Гайдамович С.Я. Краткий курс практической вирусологии. М.: Медгиз, 1954;
29. Эпидемиология вирусных инфекций, под ред. К.Синяка, Киев: Здоpов'я, 1977;
30. Frederiks D., Relman D. Sequence-based identification of microbial pathogens: a recon-
sideration of Koch's postulates. - Clin. Microbiol. Rev., 1996, N.1, p.18-33.

142
 ОГЛАВЛЕНИЕ

Лекция 9. Теоpетические основы лабоpатоpной

диагностики виpусных заболеваний.......................................................3

Лекция 10. Основы методологии pасшиpенного

виpусологического исследования.........................................................38

Лекция 11. Стpатегия пpотивовиpусного лечения и

специфической пpофилактики виpусных инфекций...........................73

Лекция 12. Основы эпидемиологии и пpофилактики

виpусных заболеваний.........................................................................107

143
 Подписано в печать с готового оригинал-макета 17.05.2002.
Формат 60х90/16. Бумага офсетная. Гарнитура “Таймс”.
Печать офсетная. Объем 9 печ. л. Тираж 250 экз.
Заказ № 193.

Издательство “Билик”.

Отпечатано в типографии “Indigo”.

144