СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

 НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ (ГФ, ОФС, ФС,

ВФС, ФСП).
 МЕЖДУНАРОДНЫЕ И РЕГИОНАЛЬНЫЕ СБОРНИКИ
УНИФИЦИРОВАННЫХ ТРЕБОВАНИЙ И МЕТОДОВ ИСПЫТАНИЯ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ.

Стандартизация ЛС – это разработка и применение унифицированных

требований и методов исследования лекарственных форм (стандартов).

Стандарт качества ЛС – нормативный документ, содержащий перечень

нормируемых показателей и методов контроля качества лекарственных
средств, утверждаемый Министерством здравоохранения Российской
Федерации (Минздравом России).
Стандарты качества ЛС подразделяются на. две категории:

1. Государственные стандарты качества ЛС - Общая фармакопейная

статья (ОФС) и Фармакопейная статья (ФС);
2. Фармакопейная статья предприятия (ФСП).

На всех этапах создания и использования ЛС контроль его качества

осуществляют:
 отдел технического контроля предприятия-изготовителя (ОТК),
 заводские лаборатории, контрольно-аналитические лаборатории,
 в аптеке – провизоры-аналитики.

Государственная система контроля качества ЛС носит название

контрольно-разрешительной Минздрава России, которая включает две
структурные единицы:

 Департамент государственного контроля качества ЛС и медицинской

техники (Департамент)
 Управление обеспечения лекарствами и медицинскими изделиями
(Управление).

Государственная система контроля качества ЛС устанавливает нормы

качества лекарственных и вспомогательных веществ, используемых в
производстве лекарственных препаратов, которые включаются в
нормативно-техническую документацию:
- фармакопейная статья,
- фармакопейная статья предприятия,
- Государственная Фармакопея,
- ГОСТы.
 Государственная Фармакопея. Это основной документ,
регламентирующий фармацевтический анализ.

Фармакопея (pfarmakopiea) – греческое слово, содержащее два корня:

pfarmakon - лекарство и poieo – делаю (искусство приготовления лекарств).

Фармакопея – это официальное руководство для фармацевтов

(провизоров), содержащее описание свойств, проверки подлинности и
качества, условий хранения.
Фармакопея содержит обязательные общегосударственные стандарты
и положения, нормирующие качество лекарственных средств.
В России первая Государственная Фармакопея была издана в 1866 г.
Последнее полное издание ГФ X вышло в 1958 г. Действующее издание ГФ
XI (1987 — 1990) и ГФ XII в 2007 г.
ГФ состоит из общих фармакопейных статей (ОФС) и фармакопейных
статей (ФС).
Общая фармакопейная статья — это Государственный стандарт
качества ЛС. содержащий основные требования к лекарственной форме
и/или описание стандартных методов контроля качества лекарственных
средств. ОФС включает перечень нормируемых показателей или методов
испытания
для конкретной лекарственной формы, описание физических, физико-
химических, химических, биохимических, биологических,
микробиологических методов анализа ЛС, требование к используемым
реактивам, титрованным растворам, индикаторам.
Фармакопейная статья – это Государственный стандарт качества ЛС
под международным непатентованным названием (МНН), которое дает
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) для однокомпонентных ЛС
(если оно имеется), содержащий обязательный перечень показателей и
методов контроля качества (с учетом его лекарственной формы),
соответствующих требованиям ведущих зарубежных фармакопеи.
Общие фармакопейные статьи и фармакопейные статьи должны
пересматриваться Научным центром экспертизы и государственного
контроля ЛС Минздрава России не реже, чем через пять лет.
Фармакопейная статья предприятия - стандарт качества
лекарственного средства под торговым названием, содержащий перечень
показателей и методов контроля качества ЛС производства конкретного
предприятия, учитывающий конкретную технологию данного предприятия, и
прошедший экспертизу и регистрацию в установленном порядке.

Отечественная нормативная документация принимает во внимание

международные стандарты: требования, изложенные в документах ВОЗ.
Международной, Европейской, национальных Фармакопей - США, Японии и
других экономически развитых стран.
 Тесное политическое и экономическое сотрудничество государств, и, в
первую очередь, сотрудничество государств в рамках Евросоюза,
способствовало тому, что большинство европейских стран присоединились к
Европейской фармакопее. Статус наблюдателей имеют и некоторые
неевропейские государства. Таким образом, большинство европейских стран
осуществляют стандартизацию лекарственных средств на основе требований
Европейской Фармакопеи (ЕФ).
В настоящий период, для ЛС практически нет границ, т.е. субстанции и
вспомогательные вещества, как и лекарственные формы, не «принадлежат»
одной стране. В России на отечественных фармацевтических предприятиях
активно внедряются правила GMP, обязательные для Европейской
Фармакопеи.
Согласно правилам GMP. объектом контроля становится весь процесс
производства ЛС, включая помещения, персонал, документацию.
В России правила GMP появились в 1998 г. в виде отраслевого стандарта
ОСТ 42-510-98.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ

За единицу антибиотической активности принимают минимальное

количество антибиотика, способное подавить развитие или задержать
рост стандартного штамма тест-микроба в определенном объеме
питательной среды.
Величину биологической активности антибиотиков выражают обычно
в условных единицах дозы (ЕД), содержащихся в 1 мл раствора (ЕД/мл) или
в 1 мг препарата (ЕД/мг). Например,
 за единицу антибиотической активности пенициллина принято считать
минимальное количество препарата, способное задерживать рост
золотистого стафилококка стандартного штамма 209 в 50 мл
питательного бульона;
 за единицу активности стрептомицина принято считать минимальное
количество антибиотика, задерживающее рост Е. coli в 1 мл
питательного бульона.

После того как многие антибиотики были получены в чистом виде, для
некоторых из них стали выражать биологическую активность в массовых
единицах. Например, установлено, что 1 мг чистого основания
стрептомицина эквивалентен 1000 ЕД. Следовательно, 1 ЕД активности
стрептомицина эквивалентна 1 мкг чистого основания этого антибиотика.
Поэтому в настоящее время в большинстве случаев количество
стрептомицина выражают в мкг/мг или мкг/мл. Чем ближе число мкг/мг в
препаратах стрептомицина к 1000, тем, следовательно, чище препарат.
 Единица биологической активности антибиотика не всегда совпадает с
1 мкг. Например, для бензилпенициллина 1 ЕД эквивалентна примерно 0,6
мкг, так как 1 мг антибиотика содержит 1667 ЕД.
Угнетение роста микроорганизмов антибиотиками может осуществляться
только при наличии трех условий:
1. Биологически важная для жизнедеятельности бактерий система должна
реагировать на воздействие низких концентрацией препарата через
определенную точку приложения;
2. Препараты должны обладать способностью проникать в
бактериальную клетку и воздействовать на точку приложения;
3. Препарат не должен инактивироваться раньше, чем вступит во
взаимодействие с биологически активной системой бактерии.

МЕТОДЫ АНАЛИЗА АНТИБИОТИКОВ

Задача качественно анализа определить неизвестный антибиотик

встаёт как при изучении новых антибиотиков, так и в практике, если нужно
показать присутствие антибиотика в фармацевтических препаратах. Обе
задачи требуют совершенно различных методов. В отличие от некоторых
других природных соединений (алкалоиды, гликозиды) для антибиотиков не
существует общих групповых реакций. Такие реакции могут быть
использованы только для антибиотиков одного химического класса,
например для тетрациклинов или нитрофенилалкиламинов (левомицетинов).
Для идентификации антибиотиков могут быть использованы:

 различные цветные реакции на соответствующие функциональные

группы;
 спектральные характеристики в видимой, УФ- и ИК-областях спектра;
 хроматографические методы.

Общие химические свойства обусловлены наличием в составе

молекул атомов серы в дигидротиазиновом кольце (способность к
окислению), карбоксильной группы (солеобразование) и β-лактамного
кольца (гидроксамовая реакция).
Самым надёжным методом идентификации антибиотика является
определение его инфракрасного спектра. Результаты здесь абсолютно
однозначны. Только после измерения инфракрасного спектра можно с
полной уверенностью судить об отличии или идентичности двух
антибиотиков различного происхождения. Поскольку инфракрасным
спектрофотометром оснащена не каждая лаборатория, то для идентификации
антибиотиков были разработаны системы простых химических реакций,
довольно надёжных для идентификации известных антибиотиков.
Многие антибиотики, как, например, пенициллин, стрептомицин,
эритромицин, бацитрацин, неомицин, полимиксин и т. д., не являются
химически индивидуальными веществами, а представляют собой смесь
нескольких структурно сходных веществ. Бумажная хроматография и
электрофорез на бумаге позволяют выделить эти составные части и отделить
их количественно.
Для количественного определения антибиотиков используют
биологические, химические, физико-химические методы.
Биологические методы основаны на непосредственном биологическом
действии антибиотика на применяемый тест-организм, чувствительный к
данному антибиотику. Применяемый при этом диффузионный метод основан
на способности молекул антибиотиков диффундировать в агаровых средах.
Оценивается размер зоны, в которой используемые тест-организмы не
развиваются. Этот размер зависит от химической природы антибиотика, его
концентрации, рН и состава среды, температуры эксперимента.
В основе другой разновидности биологического тестирования лежит
турбидиметрия – метод количественного анализа по интенсивности света,
поглощенного взвешенными частицами – клетками микроорганизмов. При
добавлении определенных количеств антибиотиков наблюдается задержка
роста клеток микроорганизмов (бактериостатический эффект), а затем их
гибель (бактерицидный эффект). При этом изменяется (уменьшается)
интенсивность поглощенного света. В качестве альтернативного
турбидиметрии метода может быть использован нефелометрический метод
количественного анализа по интенсивности света, рассеянного
микроорганизмами.
Для количественного определения антибиотиков применяют
различные оптические методы.

Колориметрия и спектрофотометрия в видимом свете

Основным достоинством колориметрических методов определения
являются их простота, скорость и сравнительно высокая точность,
недостатком их малая специфичность.
Для колориметрического определения антибиотики превращают в
окрашенные производные. При этом используют цветные реакции либо с
самими антибиотиками, либо с продуктами их расщепления. Например,
тетрациклиновые антибиотики образуют окрашенные комплексы с хлорным
железом в кислой среде. Стрептомицин расщепляют едким натром до
мальтола, который даёт цветную реакцию с хлорным железом или с
реактивом Фелинга. Антибиотики группы фенола или ароматических аминов
со свободным орто- или пара-положением можно обычно перевести в
азокрасителе путём реакции с диазониевыми солями. Так можно определять,
например, тетрациклиновые антибиотики.
Некоторые антибиотики можно перевести в соединения с каким-либо
красителем, затем выделить эти вещества из реакционной смеси и
определить колориметрически. Так можно определять пенициллин с
помощью N-(1-нафтил-4-азобензол)-этилендиамина.
Спектрофотометрия в ультрафиолетовом свете
Спектральный анализ имеет большие возможности, нежели
колориметрия. Большинству антибиотиков свойствен характерный спектр
поглощения в ультрафиолетовой области, и поэтому определять их
спектрофотометрически можно непосредственно. Недостатком является то,
что присутствие посторонних веществ мешает определению в значительно
большей мере, нежели при колориметрии или спектрофотометрии в видимом
свете, и поэтому определять антибиотики этим методом можно лишь в
отдельно чистых образцах.

Инфракрасная спектроскопия
Этот метод является специфичным для качественного определения
антибиотика. Его можно, однако, очень хорошо использовать и для
количественного определения. Обычно достигается точность, равная
точности спектрофотометрии в ультрафиолетовом свете, а в некоторых
случаях даже ещё более высокая (±1%). Можно производить количественный
анализ как растворов, так и твёрдых веществ. При анализе веществ в
растворах необходимо выбрать подходящий растворитель, который сам бы
не поглощал инфракрасные лучи в данной области. Обычно это бывает
сероуглерод или же галоидопроизводные углеводородов. Поэтому
антибиотик нужно иметь в такой форме, чтобы его можно было в этих
веществах растворить. Если же подходящий растворитель найти не удаётся,
можно провести спектрофотометрическое определение вещества в твёрдом
состоянии. Твёрдые вещества либо таблетируют с бромистым натрием. Либо
суспендируют в масле: измерение поглощения производят в тонких слоях
этой суспензии.

Флюорометрия
Это один из наиболее чувствительных методов определения
антибиотиков, приближающийся по своей чувствительности к
биологическим методам. Главной областью его применения являются
тетрациклиновые антибиотики, которые сами по себе флюоресцируют
жёлтым светом в умеренной щелочной среде; однако обычно измеряется
синяя флюоресценция их продуктов разложения в щелочной среде.
Хлортетрациклин инактивируют щелочами, например 0,2 М
тринатрийфосфатом, оставив смесь стоять в течение 30 минут при комнатной
температуре, в то время как тетрациклин кипятят при этом в течение более
продолжительного времени.
Антибиотики, которые сами по себе не флюоресцируют и не образуют
флюоресцирующих продуктов разложения, можно тем не мене определять
флюорометрически путём соединения с подходящим флюоресцирующим
веществом и выделения подходящего дополнительного соединения.
Оптическое вращение

Поляриметрические методы дают очень надёжные результаты

применительно к концентратам оптически активных антибиотиков, если
только они не слишком сильно окрашены. Вследствие удобства работы они
получили очень широкое применение как обычные методы контроля, в
особенности при выделении стрептомицина. Для определения антибиотиков
в культуральной жидкости они непригодны, поскольку в этих случаях они
малочувствительны.

Электрохимические методы
Антибиотики, являющиеся кислотами или основаниями, можно
титровать потенциометрически. Эти методы применяют сравнительно редко,
поскольку с такими антибиотиками редко приходится иметь дело в этих
формах. Исключение составляет, например, пенициллин. Хлоргидраты
тетрациклиновых антибиотиков имеют сильно кислотные свойства,
напротив, основность этих антибиотиков очень слаба. Поэтому хлоргидраты
можно титровать непосредственно алкалиметрически. Намного большую
точность и значительно более широкие возможности имеет
потенциометрическое титрование в неводных растворителях. Так, например,
слабоосновные антибиотики, как тетрациклины, а также эритромицин и
карбомицин, можно определять с помощью титрованного раствора
хлористой кислоты в диоксане. Напротив, антибиотики с кислотными
свойствами, пусть даже и очень слабыми, удаётся титровать в среде
безводных оснований, например, в триэтаноламине.

Полярография
Антибиотики, содержащие в своей молекуле восстанавливающиеся
группы например, нитрогруппы, кетогруппы, примыкающие к одной или
более двойной связи, альдегидные группы, карбоксильные группы,
примыкающие к двойным связям либо имеющие хиноподобную структуру,
могут быть восстановлены на ртутном капельном электроде и могут поэтому
определяться полярографически. Сюда относятся прежде всего хлорамникол,
далее все тетрациклиновые антибиотики, стрептомицин, все хиноновые
антибиотики, цитринин.
Другие антибиотики, напротив, окисляются на ртутном капельном
электроде и могут поэтому давать анодную волну, которая также может
служить для их количественного определения. Примером является
гентизиловый спирт, производное гидрохинона.
Антибиотики, которые сами по себе полярографически неактивны,
можно перевести несколькими способами в полярографически активные
вещества. Так, например, пенициллин гидролизуется сначала щёлочью или
пенициллиназой и далее в кислой среде до диметилцистеина. Эта
аминокислота, содержащая группу SH, даёт хорошо измеряемую волну в
кобальтовом растворе Брдички.
Радиоактивные изотопы в анализе антибиотиков
В области антибиотиков сфера применении радиоактивных и тяжёлых
изотопов необычайно широка. Меченые препараты можно одинаково
широко применять как для аналитического контроля производства, так и для
решения основных проблем действия антибиотиков на микроорганизм и
макроорганизм, для объяснения механизмов всасывания, циркуляции,
накопления и выделения антибиотиков в теле. В области фармакологии и
биохимии антибиотиков с помощью изотопов были достигнуты ценные
результаты.

Химические методы используются для анализа антибиотиков очень редко.

Практически это будет лишь несколько методов, применяемых для
пенициллина. Они основаны на поглощении йода продуктами гидролиза
пенициллина. Пенициллин можно определять также ацидометрически после
его расщепления до пенициллоиновой кислоты, при этом из β-лактамного
кольца пенициллина освобождается одна свободная карбоксильная группа,
которую можно титровать; β-лактамное кольцо пенициллина можно
расщепить либо щёлочью, либо пенициллиназой. Этот метод, однако, нельзя
применять для нативного раствора, который содержит множество
посторонних веществ, делающих точное ацидометрическое титрование
невозможным.