Лекцию читает

Доктор
медицинских
наук,
профессор
Минухин
Валерий
Владимирович
ТЕМА ЛЕКЦИИ:
 П Л А Н Л Е К Ц И И:
• 1. Химический состав микробной клетки.
• 2. Метаболизм у микроорганизмов и его
особенности (катаболизм и анаболизм).
• 3. Типы питания и дыхание у микроорганизмов.
• 4. Ферменты и их классификация.
• 5. Принципы культивирования микроорганизмов.
• 6. Чистая культура и методы ее выделения.
• 7. Культивирование риккетсий и хламидий.
 Химический состав бактериальной клетки
100%
ВОДА СУХОЙ
ОСТАТОК
80 – 90%
10 – 20%
Органические Минеральные
вещества вещества
97% 3%

Белки Углеводы Липиды Нуклеино- Азот, сера,

вые кислоты фосфор, калий,
52% 17% 9% кальций, магний,
19%
железо, марганец.
РНК Микроэлементы:
16% цинк, медь,
кобальт, барий
ДНК
3%
 Метаболи́зм (от греч. μεταβολή,
«превращение, изменение»)
• набор химических реакций, которые
возникают в живом организме для
поддержания жизни. Эти процессы
позволяют организмам расти и
размножаться, сохранять свои
структуры и отвечать на воздействия
окружающей среды.
 Существует две стадии
метаболизма:
1. Катаболизм (дыхание) - сложные
органические вещества деградируют до
более простых (энергия накапливается
в виде молекул АТФ).
2. Анаболизм (питание) процесс,
сопровождающийся затратами энергии.
При этом синтезируются: белки,
сахара, липиды и нуклеиновые кислоты.
 Классификация бактерий по типам
питания и способам получения энергии
 Типы переноса питательных веществ в
бактериальную клетку:

1. Пассивный перенос:
• простая диффузия – проникновение веществ в
клетку в направлении градиента концентрации;
• облегченная диффузия – протекает с участием
белка-переносчика, но по градиенту
концентрации.
2. Активный перенос:
• с участием Na+–K+ насоса;
• транспорт с учетом ионных градиентов;
• транспорт путем векторного переноса групп.
 Дыхание бактерий
(энергетический метаболизм, катаболизм)
Облигатные аэробы – реакции окисления осуществляются
у них при участии молекулярного кислорода (микобактерии
туберкулеза и др.)
Облигатные аэробы делятся на:
 строгие аэробы – растут при нормальном парциальном
давлении кислорода в тканях и питательных средах
(холерный вибрион);
 микроаэрофилы – растут при пониженном парциальном
давлении кислорода (Helicobacter pylori).
Облигатные анаэробы – способны существовать только
в отсутствии свободного кислорода; дыхание происходит
путем ферментации субстрата с образованием небольшого
количества энергии (клостридии столбняка, ботулизма и
др.)
Факультативные анаэробы – могут размножаться как
при наличии молекулярного кислорода, так и при его
отсутствии (энтеробактерии и др.)
 Микроаэрофильные организмы
• Требуют для своего роста присутствия
кислорода в атмосфере или питательной
среде, но в пониженных концентрациях по
сравнению с содержанием кислорода в
обычном воздухе или в нормальных тканях
организма хозяина.
• Проявляют чувствительность к
антибактериальным препаратам, действие
которых имитирует действие атомарного
кислорода (повышение образования
свободных радикалов) – нитроимидазолам:
метронидазол, тинидазол.
 СХЕМА ДЫХАНИЯ МИКРОБОВ
RH2

ПИРИДИНОВАЯ ДЕГИДРАЗА-2Н
(ДЕГИДРАЗЫ АКТИВИРУЮТ И ОТЩЕПЛЯЮТ Н2, ВКЛЮЧАЯ ЕГО В
ДАЛЬНЕЙШИЙ ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ ПРОЦЕСС)
МАКРОЭРГИЧЕСКИЕ СВЯЗИ АТФ

ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ ПЕРЕНОСЧИКИ-2Н
(ЩАВЕЛЕВОУКСУСНАЯ, ЯБЛОЧНАЯ, ПИРОВИНОГРАДНАЯ,
МОЛОЧНАЯ КИСЛОТЫ

ФЛАВИНОВАЯ ДЕГИДРАЗА-2Н

ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ ПЕРЕНОСЧИКИ-2Н
(ФУМАРОВАЯ КИСЛОТА, ГЛЮТАТИОН, ЦИСТИН, АСКОРБИНОВАЯ
КИСЛОТА)

ЦИТОХРОМЫ а, в, с

ЦИТОХРОМОКСИДАЗА
(ГЕМИННЫЙ ФЕРМЕНТ, АКТИВИРУЕТ КИСЛОРОД О2)

Н2О
ПОЛНОЕ СЖИГАНИЕ ВОДОРОДА
 ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
• Простые: • Специальные:

• МПБ. • Элективные.
• МПА. • Дифферен-
циально-
диагности-
ческие.
 ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
• Специальные - характеризуются добавлением специфического компонента
или заменой основы.
• казеиново-угольный агар – коклюшная палочка;
• сывороточный агар – дифтерийная палочка;
• кровяной агар – для возб. столбняка;
• яичная среда Левенштейна-Йенсена – для возб. туберкулёза.

• Элективные - характеризуются получением роста только интересующего

микроорганизма.
• желточно-солевой агар (ЖСА) — для стафилококка
• пептонная вода (1 %,pH=8) — для холерного вибриона
• среда Мюллера — для сальмонелл
• селенитовая среда — для сальмонелл
• среда Леффлера — эффективна для коринебактерий дифтерии

• Дифференциально-диагностические - позволяют произвести

идентификацию отдельных типов, видов и групп бактерий по наличию
ферментов.

• среды Гисса («пёстрый ряд») – большинство бактерий;

• среда Сабуро — с добавлением антибиотика – для патогенных грибов.
 Общие требования к
питательным средам:
• 1. Наличие питательных веществ и
факторов роста в легко усваиваемой
форме. Достаточное количество воды.
• 2. Стерильность.
• 3. Изотоничность – 0,85% р-р NaCl.
• 4. Оптимальное рН.
• 5. Прозрачность.
 Чистая культура
• - совокупность (популяция) микроорганизмов
одного вида.
• Вид – популяция микроорганизмов, имеющих
одинаковый генотип, сходные биологические
свойства (морфологические, тинкториальные,
культуральные, биохимические и антигенные)
и при попадании в организм человека
вызывающие сходные патологические
изменения.
 Методы получения чистых
культур
• 1. Физические (механические).
• 2. Химические (элективные
питательные среды).
• 3. Биологические (посев по
Фортнеру, заражение
чувствительных животных).
 КОЛОНИЯ -
• это видимое изолированное скопление
представителей одного вида
микроорганизмов, образующееся при
размножении одной
колониеобразующей единицы (КОЕ) на
плотной питательной среде (на
поверхности или в глубине её).
 КОЛОНИИ
• по величине — крупные (диаметр более 4—5 мм), средние
(2—4 мм) и малые (1—2 мм)
• по форме — круглые, розеткообразные, листовидные и т.
д.
• по цвету, зависящему от пигмента — белого, ярко-синего,
красного цветов и т. д.
• по консистенции — сухие, влажные, сочные, слизистые
• по поверхности — гладкие, морщинистые, исчерченные,
плоские, выпуклые, плосковыпуклые, вдавленные
• по характеру края — с ровными, волнистыми,
бахромчатыми краями
• по структуре — могут иметь аморфную, зернистую,
волокнистую внутреннюю структуру
• характер роста - в чистой культуре, выращенной на
скошенном питательном агаре, рост может быть сухим,
влажным, ползучим, складчатым, пигментированным.
 ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ
Характер роста на плотной питательной среде:

Форма
колонии

Поверхность

Характеристика
края колонии
Морфология колоний
Чашка Петри без посева
 Юлиус Рихард Петри
• (нем. Julius Richard Petri; 11 мая 1852,
Бармен — 20 декабря 1921, Цайц) —
немецкий микробиолог, ассистент
Роберта Коха.

• Известен в истории прежде всего тем,

что, работая вместе с Робертом Кохом,
изобрёл в 1877 году лабораторную
посуду, позже названную его именем.
 Идентификация бактерий
• Метаболизм: способность вырабатывать пигменты и
гемолизировать эритроциты

Staphylococcus
aureus

Micrococcus Изучение типа

roseus гемолиза
 ПРИЗНАКИ РОСТА БАКТЕРИЙ НА
ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
• В жидкой питательной среде одни
бактериальные культуры дают:
• диффузное помутнение;
• Образуют придонный осадок;
• Дают пристеночный рост.
• Некоторые культуры образуют плёнки
на поверхности среды, осадок на дне
пробирки, диффузное помутнение и т.д.
 Пигменты
• Биологическая роль пигментов у
бактерий состоит:
• 1. В защите бактериальной клетки от
действия ультрафиолетового
излучения.
• 2. В участии в процессах метаболизма:
инактивируют токсические
окислительные радикалы, обладают
антибиотическими свойствами.
 Классификация пигментов
• 1. Каротиноидные (красный, оранжевый или
желтый цвет) – жирорастворимые
/стафилококки, микбактерии/.
• 2. Хиноновые (желтый цвет) – пигмент фтикол
микобактерий туберкулёза.
• 3. Меланиновые (черный или коричневый
цвет) – бактероиды /не растворимы в воде/.
• 4. Пироловые (красный цвет) продигиозан
серраций.
• 5. Феназиновые (синий/зеленый) – пиоцианин
синегнойной палочки /водорастворимый/.
 ФЕРМЕНТЫ
(энзимы, от греч. закваска)

• — обычно белковые молекулы или молекулы РНК

(рибозимы) или их комплексы, ускоряющие
(катализирующие) химические реакции в живых
системах.

• Реагенты в реакции, катализируемой ферментами,

называются субстратами, а получающиеся вещества
— продуктами.
• Ферменты специфичны к субстратам.

• Ферментативная активность может регулироваться

активаторами и ингибиторами (активаторы —
повышают, ингибиторы — понижают).
 Классификация ферментов-1
• Оксидоредуктазы, катализирующие окисление или
восстановление. Пример: каталаза.
• Трансферазы, катализирующие перенос химических
групп с одной молекулы субстрата на другую. Среди
трансфераз особо выделяют киназы, переносящие
фосфатную группу, как правило, с молекулы АТФ.
• Гидролазы, катализирующие гидролиз химических
связей. Пример: эстеразы, пепсин, трипсин, амилаза.
• Лиазы, катализирующие разрыв химических связей
без гидролиза с образованием двойной связи в
одном из продуктов.
• Изомеразы, катализирующие структурные или
геометрические изменения в молекуле субстрата.
• Лигазы, катализирующие образование химических
связей между субстратами за счет гидролиза АТФ.
Пример: ДНК-полимераза.
Классификация ферментов-2
• Эндоферменты – в цитоплазме, ЦП
мембране, цитоплазматическом
простанстве.
• Экзоферменты – выделяются во
внешнюю среду для расщепления
субстратов /в т.ч. ферменты агрессии/.
Классификация ферментов-3
• 1. Конститутивные – стандартное всегда
оптимальное количество.
• 2. Адаптивные – количество определяется
условиями внешней среды:
• Индуцибельные – выработка индуцируется
определенным субстратом;
• Репресибельные – их синтез ингибируется
в результате избыточного накопления
продуктов реакции, катализируемой
ферментами.
• СПАСИБО ЗА
ВНИМАНИЕ!
РОСТ И РАЗМНОЖЕНИЕ
МИКРООРГАНИЗМОВ
ПРИЗНАКИ РОСТА НА ЖИДКОЙ
ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
• В жидкой питательной среде одни
бактериальные культуры дают:
• диффузное помутнение,
• Образуют придонный осадок,
пристеночный рост.
• Некоторые культуры образуют плёнки
на поверхности среды, другие — осадок
на дне пробирки.
РАЗМНОЖЕНИЕ
БАКТЕРИЙ
• Грамположительные бактерии синтезируют
поперечную перегородку от периферии к центру при
участии мезосом.
• Грамотрицательные - делятся путём перетяжки: на
месте деления обнаруживается постепенно
увеличивающееся искривление ЦПМ и клеточной
стенки внутрь.

• У некоторых бактерий кроме размножения

наблюдается половой процесс, но в самой
примитивной форме. Половой процесс бактерий
отличается от полового процесса эукариот тем, что у
бактерий не образуются гаметы и не происходит
слияния клеток. Однако главнейшее событие
полового процесса, а именно обмен генетическим
материалом, происходит генетическая
рекомбинация.
 Особенности физиологии
вирусов
• Наличие только одного из двух видов
нуклеиновых кислот.
• Отсутствие собственных белок-
синтезируемых систем.
• Представляют собой генетических
паразитов.
• Вирусы не растут, а только
репродуцируются (размножаются).
 Культивирование вирусов,
риккетсий и хламидий
(паратрофов)
• 1. Организм экспериментальных
животных.
• 2. Куриный эмбрион (10-12
суточный).
• 3. Культура клеток.
СХЕМА РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ГРИППА

Нейраминидаза
Гемагглютинин
СХЕМА РЕПРОДУКЦИИ ПИКОРНАВИРУСОВ