Лекция

БИОТЕХНОЛОГИЯ В ПРОИЗВОДСТВЕ ВИТАМИНОВ

Таблица 1. Классификация витаминов

Буквенное Химическое Активная форма витамина Лечебный эффект
обозначение название
Водорастворимые витамины
В1 Тиамин Тиаминпирофосфат (ТПФ), Антиневритный
кокарбокси- лаза,
тиаминтри- фосфат (ТТФ)
В2 Рибофлавин ФМН.ФАД Витамин роста
Витамин В3 Пантотеновая KoA-SH, дефосфоКоА, 4- Антидерматитный
кислота фосфопантетеин
В5(РР) Ниацин НАД* и НАДФ* Антипеллагрический
В6 Пиридоксин Пиридоксальфосфат, Антидерматитный
пиридоксаминофосфат
Витамин В12 Кобаламин Метилкобаламин, Антианемический
дезоксиаденозинкобаламин
С Аскорбиновая Аскорбиновая и Регулятор
кислота дегидроаскорбиновая метаболических
кислоты процессов,
иммуностимулятор
Жирорастворимые витамины
А Ретинол Ретинол/ретиналь Антиксерофтальмический
D Кальциферол Эргокальциферол Антирахитический
Е Токоферол а-, р-, у-, 6-токоферолы, Антиоксидантный
токотриснолы
К Филлохинон Дифарнезилнафтохинон Антигеморрагический

Витамины (Табл. 1) представляют группу незаменимых органических

соединенийразличной химической природы. Они необходимы любому
организму внебольших концентрациях с целью выполнения в нем
каталитических ирегуляторных функций. Они не являются материалом для
биосинтетическихпроцессов, они не являются источниками энергии.
Что касается источника витаминов – это в первую очередь
растения.Витамины поступают в организм человека с пищевыми
продуктами.Недостаток витаминов может привести к различным
заболеваниям (это цинга,различные анемии и так далее).
Использование витаминов:
1. это лечебные препараты
2. это компоненты сбалансированного питания
1
 3. это компоненты парфюмерной продукции
4. это биологически активные добавки
5. это компоненты для интенсификации биотехнологических
процессовпроизводства.
Известно, что высокой биологической активностью обладают, как
правило,не сами витамины, а их производные – коферменты. Открыты
такжекоферменты, для которых не обнаружено витаминных аналогов.
Коферментные формы на основе различных витаминов обладают
широкимспектром действия и эффективно используются в медицинской
практике.
Большинство витаминов либо выделяют из природных источников,
либосинтезируют химическим путем. Однако, с помощью биотехнологии
сегодняпроизводят особо сложные по строению витамины В2, В12, β-
каротин(провитамин А), РР и предшественники витамина Д (эргостерина).
Кроме того, в синтезе витамина С (аскорбиновой кислоты)
используютмикроорганизмы как селективные окислители D-сорбита в L-
сорбозу.
Получение витамина В2 (рибофлавин). Вначале этот витамин
выделяли изприродного сырья (в максимальных концентрациях он
присутствует вморкови и в печени). Затем был разработан как химический,
так имикробиологический способы промышленного синтеза. Для
рибофлавинахарактерно функционирование в коэнзимных формах:
-флавиномононуклеотид (ФМН)
-флавинадениндинуклеотид (ФАД).
К источникам рибофлавина относятся:
-высшие растения
-дрожжи
-мицелиальные грибы.
Все они способны синтезировать рибофлавин.

2
 Активным продуцентом рибофлавина являются культура
дрожжеподобногогриба Eremotheciumashbyii и Ashbyagossipii.
Сверхсинтез рибофлавина можно получить, если действовать на
дикиештаммы мутагенами, нарушающими механизм ретроингибирования
синтезавитамина В2,флавиновыми нуклеотидами, а также изменением
состава культуральнойсреды.
В состав среды для роста продуцентов рибофлавина входят:
-соевая мука
-кукурузный экстракт
-сахароза
-карбонат кальция
-хлорид натрия
-витамины
-технический жир.
Перед подачей в ферментер среду стерилизуют с помощью
антибиотиков иантисептиков во избежание ее инфицирования. По
завершении процессаферментации культуральную жидкость концентрируют,
высушивают исмешивают с наполнителями. В 1983 году в институте
генетики былсконструирован рекомбинантный штамм продуцента Bacillus
subtilis,способный синтезировать в три раза больше по сравнению с
Eremotheciumashbyii и этот продуцент более устойчив к экзогенной
контаминации.
Получение витамина В12
Этот витамин был открыт одновременно в США и в Англии. В 1972 г.
ВГарвадском университете был осуществлен химический синтез витамина
В12,включающий 37 стадий его получения, что лишало
возможностиорганизовать промышленное производство этого витамина. С
другой стороныэто производство было необходимо, так как витамин В12
очень важен вкоррекции определенных нарушений в организме человека и
животных. Онрегулирует углеводный и липидный обмен, участвует в
3
метаболизменезаменимых аминокислот, пуриновых и пиримидиновых
оснований,стимулирует образование гемоглобина, применяется для
лечениязлокачественной анемии, лучевой болезни, заболеваний печени и в
другихслучаях.
Сначала витамин В12 получали исключительно из природного сырья
(1тонна печени – 15 милиграмм витамина).Единственный способ его
получения в настоящее время – этомикробиологический синтез в
промышленном масштабе. Интересно, чтообнаружение витамина В12 как
побочного продукта при производствеантибиотиков стимулировало поиск
продуцентов этого витамина.
Продуцентом витамина В12 являются пропионовокислые бактерии из
родаPropionibacterium. Применение мутантов и добавление в
средупредшественника витамина В12 - 5,6 диметилбензимидазола (5,6 ДМБ)
резкоповышает продуктивность продуцента. Этому способствует также
добавлениев питательные среды кукурузного и мясного экстракта, соевой
муки, рыбноймуки. Выращивание пропионовых бактерий производится
периодическимметодом в анаэробных условиях на среде с кукурузным
экстрактом, глюкозой,солями кобальта и сульфатом аммония. Образующиеся
кислотынейтрализуются щелочью. Через 72 часа после начала ферментации
вносятпредшественники - 5,6 ДМБ. Длительность ферментации – трое суток.
Полученную массу сепарируют, стабилизируют нитритом натрия,
охлаждают,нейтрализуют, коагулируют белки и фильтруют. Очищают на
ионообменнойсмоле, кристаллизуют и проводят химическую очистку
продукта. Далееследует получение различных лекарственных форм
поливитаминныхпрепаратов. Для увеличения производства витамина В12
перспективнымявляется применение генной инженерии при получении
гибридных штаммови использовании методов иммобилизации на полимерах.

Витамин В3 (пантотеновая кислота). Способ получения –

тонкийорганический синтез и микробиологический синтез с
4
использованиемиммобилизованных клеток бактерий, актиномицетов
(основной метод).
Витамин РР. Используется биотехнологический метод, метод
экстракции измикроорганизмов, обычно из пекарских дрожжей с
добавлениемпредшественников. Используется штамм – Brevibacterium
ammoniagenes.
Аскорбиновая кислота. Здесь применяется в основном химический
синтезилишь одна стадия осуществляется биотехнологическим способом
сприменением уксусно-кислых бактерий, проводящих
реакциютрансформации D -сорбита в L-сорбозу. Для получения сорбозы
культурупродуцента Gluconobacter oxydans выращивают вферментерах
периодического действия с мешалкой, барботером, усиленнойаэрацией в
течение 20-40 часов. Выход сорбозы достигает 98% от начальногосорбита.
Питательная среда: кукурузный дрожжевой экстракт до 20%.Сорбозу
выделяют из культуральной жидкости. Развитиемикробиологического метода
получило развитие в производстве 2-кето L -гулоновой кислоты – это
промежуточный продукт синтеза витамина С.
Продуценты: Acetobacter, Erwinia,Gluconobacter. Перспективно
созданиегенноинженерных штаммов продуцентов.

Жирорастворимые витамины.
Эргостерин (витамин Д 2)
Эргостерин – это основной компонент стеринов дрожжеподобных
грибоврода Candida, использующих углеводы. Есть несколько
вариантоввыращивания дрожжей – продуцентов эргостерина.
Продуценты – это дрожжи, плесени, особенно Saccharomyces cerevisiae.
Питательная среда должна содержать источники углерода, азота,
фосфора.

5
 Ферментация идет в аэробных условиях около 12-20 часов. Для
получениякристаллического витамина Д2, биомассу гидролизуют,
охлаждают,фильтруют, делают спиртовые экстракты, которые омыляют
(обрабатываютщелочью), кристаллизуют, очищают, растворяя в эфире,
удаляют эфир, азатем эргостериноблучают ультрафиолетовыми лучами (УФ-
облучение), так как витамин Д2из эргостерина образуется только после
ультрафиолетового облучения(УФ-облучения).
Источником получения эргостерина может служить и мицелий
грибов,который остается как отход (побочный продукт)
антибиотическойпромышленности. Микроорганизмы Cryptoccocus curvatus
на средах сотходами молочной промышленности и при переработке хлопка
синтезируютзначительные количества эргостерина. Это все относится к
вопросурентабельности и экологичности биотехнологического производства.
β-каротин. Каротиноиды (политерпены) – это природный пигмент.
Общийпуть биосинтеза из изопреновых единиц. Источник – это высшие
растения,водоросли, микроорганизмы. Получение - это тонкий органический
синтез(химический способ) и биотехнология (использование мицелиальных
грибов).
Питательная среда – кукурузно-соевая среда. Процесс
получениямногостадийный. β-каротин экстрагируется подсолнечным маслом
ииспользуется в виде масляных препаратов. Если используют химический
синтез, то болеерентабельно после экстракции егокристаллизовать.
Витамин РР – в его производстве используется биотехнологический
метод,применяя способ экстракции из микроорганизмов, обычно это
пекарскиедрожжи. В качестве штамма используется Brevibacterium
ammoniagenes.
Убихиноны (коферменты Q) – 2,3 диметокси, 5-метилбензохинон.
Эти соединения синтезируются в организме животных и человека.

6
 Участие убихинона в метаболических процессах проявляет
регуляторныйэффект, он же принимает участие в тканевом дыхании,
октслительномфосфолирировании, в переносе электронов.
Получение убихинонв – это биотехнология на основе каллусных
культурриса или опухолевой ткани. Продуценты – бактерии, дрожжи
идрожжеподобные микроорганизмы. Сухая масса грибов рода
Candidaсодержит смесь убихинонов. Это один из примеров, когда
биотехнологиясовмещает в едином процессе получение убихинонов и
эргостерина измикробных липидов. Применение убихинонов – при
ишемической болезнисердца и при повышенных нагрузках.
Уксуснокислые бактерии, используемые при окислении сорбита в
сорбозу (при получении витамина С) содержат убихинонQс десятью
изопреновымиединицами в боковой цепи, который является коферментом
организмачеловека.
Заключение.
1. Применение генной инженерии при синтезе витамина В2 и витамина
С– открыло новые возможности селекции высокоактивных продуцентов.
2. Внедрение непрерывного способа ферментации в производстве
сорбозыувеличило скорости образования этого сахара почти в два раза.
3. Дробная подача компонентов в питательные среды обеспечило
высокийуровень ферментации в производстве витамина В12 и сорбозы.
4. Применение иммобилизованных клеток при получении витаминов
В12и В3 привело к разработке новых конструкций биореакторов.
5. Утилизация различных промышленных отходов существенно
снижаетсебестоимость получаемой продукции – витаминов В2 , В12 и β-
каротина, улучшает экологию производства.
Таким образом, получение этих важных биологически активных
веществ(БАВ) свидетельствует о существенном вкладе биотехнологии и в
этомсекторе фармацевтической промышленности.