Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Проведение Забора Материала От Больных Для Бактериологических Исследований
Проведение Забора Материала От Больных Для Бактериологических Исследований
Правила:
Производится на 20% сывороточный агар или же на среду обогащения – 0,1% полужидкий агар. Среды
должны быть свежими: срок хранения их в холодильнике не более суток. Ликвор необходимо
собирать в стерильную пробирку и немедленно доставлять в лабораторию на исследование в водяной
бане при 37 градусах. Ликвор центрифугируют, берут 2-3 капли осадка жидкости, взятой со дна
пробирки, засевают на повехность подогретого сывороточного агара в чашку Петри. Готовится мазок
для бактериоскопического исследования, а оставшийся ликвор в пробирке заливается 5мл
стерильного полужидеого 0,1% агара с добавлением сыворотки и помещается в термостат для
накопления микробных клеток (так называемое «обогащение»). Предварительный результат посева,
получается через 1-2 дня, а окончательный – через 3-4 дня, при выделении чистой культуры
менингококка с помощью метода обогащения – через 7-8 дней.
4. Правила проведения посева на жидкие и плотные питательные среды для получения чистых культур
аэробных бактерий. Методы выделения чистых культур бактерий.
1. Посев петлей. Посевной материал втирают петлей в поверхность среды у края чашки. Избыток
снимают, поколов петлей агар, а оставшийся материал рассеивают параллельными штрихами по всей
поверхности агара.
2. Посев шпателем. Материал наносят петлей или пипеткой, а затем стеклянным или металлическим
шпателем тщательно втирают его по всей поверхности среды.
3. Посев тампоном. Тампон и исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями
втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.
4. Посев на секторы. Дно чашки делят на секторы. Посев производят зигзагообразными движениями от
края чашки к центру так, что бы штрихи с одного не переходили на другой.
5. Посев газоном. 1мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов в
физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды и тщательно распределяют по
всей поверхности. Избыток материала отсасывают пипеткой.
После посева чашки закрывают и кладут вверх дном. Надписи на чашках делают со стороны дна, на
пробирках – в верхней части.
При посеве на жидкую среду петлю слегка погружают в жидкость и растирают посевной материал по
стенке пробирки. После чего смывают его средой.
6. Правила проведения посева на питательные среды для получения чистых культур анаэробных
бактерий. Методы создания анаэробных условий.
Стерилизация сухим жаром применяется для обеспложивания стеклянной посуды, пробирок, колб,
чашек Петри и пипеток. Для этой цели используют сухожаровые шкафы (печи Пастера), в который
необходимый эффект достигается при температуре 160 градусов в течение 2 часов или при
температуре 170 градусов в течение 40 минут.
Принципиальные преимущества сухого жара заключаются в том, что при его применении не происходит
коррозии металлов и инструментов, не повреждаются стеклянные поверхности. Он пригоден для
стерилизации порошков и не содержащих воды нелетучих вязких жидкостей.
Стерилизация паром под давлением – один из наиболее эффективных методов, основанный на
сильном гидролизирущем действии насыщенного пара. Паром под давлением стерилизуют
различные питательные среды (кроме содержащих нативные белки): жидкости, приборы, резиновые
предметы, стеклянную посуду с резиновыми пробками. Для этого применяют автоклавы.
Питательные среды, перевязочные материалы и белье стерилизуют при 1атм 15-20 минут, питательные
среды с углеводами – при 0,5атм 15 минут, а патогенный материал обеззараживают при 2атм.
12. Использование реакций Аг+Ат (РА, РИГА, РП) для идентификации бактерий
РА. Проводят на предметных стеклах. Для этого на обезжиренное стекло наносят пастеровской
пипеткой несколько капель сыворотки в небольших (1:10 – 1:20) разведениях и каплю ИХН для
контроля. Для идентификации в каждую каплю сыворотки, а также в каплю контроля вносят петлю
суточной культуры испытуемого микроорганизма, взятой с поверхности плотной питательной среды.
Для выявления АТ в исследуемой сыворотке крови в нее, как и в каплю ИХН, пастеровской пипеткой
вводят по 1 капле взвеси известных микроорганизмов (диагностикума). Внесенную культуру
тщательно перемешивают до получения суспензии.
Реакция происходит при комнатной температуре. Результаты реакции учитывают невооруженным
глазом через 2-5 минут, иногда для этого используют лупу. Если предметные стекла поместить во
влажную камеру, что бы исключить испарение капель, то результаты реакции можно учитывать и
позже.
При положительной реакции в капле сыворотки отмечают появление хлопьев (крупных и мелких),
хорошо видимых на темном фоне при покачивании предметного стекла. При отрицательной реакции
жидкость остается равномерно мутной, как и в контроле.
РНГА. Применяется для идентификации бактериальных и вирусных аг а исследуемом материале, а так
же для экспресс-диагностики ряда инфекций.
В данной реакции эритроциты сенсибилизируют антителами. Частицы антительного эритроцитарного
диагностикума склеиваются при добавлении аг.
Готовят двукратные разведения исследуемого материала в стабилизирующем растворе. Вносят по одной
капле каждого разведения аг в три соседние лунки планшета (реакция занимает три параллельных
ряда лунок). В каждую лунку первого ряда вносят по 1 капле стабилизирующего раствора, второго
ряда – по одной капле гомологичной иммунной сыворотке, третьего ряда – по 1 капле
гетерологичной иммунной сыворотке. Второй и третий ряды служат контролем специфичности
реакции. Смесь оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Затем во все лунки добавляют по
1 капле 1% суспензии эритроцитарного антительного диагностикума и тщательно встряхивают
планшеты. Результаты реакции учитывают через 30-40 минут. При наличии специфического аг
гемагглютинация наблюдается в первом и третьем рядах и отсутствует во втором ряду, где аг
предварительно нейтрализован гомологичной сывороткой. Реакцию сопровождают контролями
сенсибилизированных эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации.
РП (реакция кольцепреципитации). В узкую пробирку (диаметр 0,5см) наливают 0,3-0,5мл
неразведенной преципитирующей сыворотки. Пастеровской пипеткой медленно наслаивают по
стенке (пробирку держат наклонно) аг в таком же объеме. Затем пробирку осторожно, что бы не
смешать жидкости, ставят вертикально. При правильном наслоении аг на сыворотку четко видна
граница между двумя жидкостями. РП должна обязательно сопровождаться контролем аг и
сыворотки. Результаты учитывают в зависимости от вида микроорганизма через 5-10 минут, 1-2
часа, 20-24 часа. В случае положительной реакции в случае в пробирке на границе между сывороткой
и исследуемым материалом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.
РП (реакия преципитации в геле). Основана на взаимодействии гомологичных аг и ат в агаровом геле
с образованием видимых полос преципитации. Аг и ат в результате встречной диффузии в гель
образуют макромолекулярные иммунные комплексы, регистрируемые визуально.
В застывшем агаре вырезают лунки, удаляя из них гель пастеровской пипеткой. В одни лунки вносят ат,
в другие – аг. И оставляют во влажной камере на несколько дней. Учитывая результаты реакции,
сравнивают локализацию и характер линий преципитации возле опытных лунок и контрольной тест-
системы.
14. Использование реакций Аг+Ат с мечеными компонентами (РИФ, ИФА, РИА) для
идентификации бактерий
15. Использование реакций Аг+Ат с мечеными компонентами (РИФ, ИФА, РИА) для обнаружения
антител в сыворотке крови.
Кишечные инфекции:
1. Брюшнотифозная моновакцина и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном –
комплексный препарат, состоящих из бактерий (инактивированных) и Vi-антигена S.Typhi, который
выполняет роль растворителя. Применяется по эпидемическим показаниям.
2. Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и
Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной
профилактики и лечения у детей.
3. Колибактерин. Содержит лиофильно высушенные живые клетки E. Coli штамма М17. Обладает
выраженными антагонистическими свойствами в отношении ряда патогенных кишечных бактерий.
Применяют для нормализации кишечной микрофлоры.
4. Холерная вакцина. Взвесь равных количеств холерных вибрионов сероваров Огава и Инаба,
классических или эльтор биоваров. Вакцина вводится подкожно взрослым и детям по эпидемическим
показаниям.
5. Ботулинический трианатоксин адсорбированный очищенный. Экзотоксины С.botulinum (серотипы А,
В и Е) обезвреживают формалином при нагревании, затем очищают от балластных веществ.
Применяют подкожно в возрасте от 16 и 60 лет.
Респираторные инфекции:
1. Коклюшная вакцина. Содержит взвесь В.Pertussis в I фазе, убитых формалином. Применяют для
обязательной активной специфической профилактики коклюша. Входит в совтав АКДС.
2. Иммуноглобулин нормальный человеческий. Получен из плацентарной или венозной крови
человека. Содержит специфические антитела против возбудителей многих инфекционных
заболеваний, в том числе возбудителей коклюша. Применяют у детей для экстренной профилактики.
3. Дифтерийный адсорбированный очищенный анатоксин. Обезвреживают формалином при
нагревании, очищают от балласта. Входит в состав АКДС.
4. Противодифтерийная антитоксическая сыворотка.
5. АКДС – коклюшно-столбнячная адсорбированная жидкая вакцина, состоит из взвеси убитых
коклюшных микробов и очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов. Вводят
внутримышечно детям с трехмесячного возраста трехкратно с интервалом 30 дней, ревакцинация
через 12-18 месяцев.
6. Менингококковые вакцины. Вакцины А и А+С отечественного производства представляет собой
капсульные специфические полисахариды менингококков соответствующих серогрупп. Выпускается
в сухом виде в ампулах. Препарат вводят детям от 1 года и взрослым однократно подкожно.
7. Поливалентная пневмококковая полисахаридная вакцина Пневмовакс 23. Смесь очищенных
капсульных полисахаридов 23 наиболее часто встречающихся серотипов пневмококка. Выпускается
о флаконах, содержащих одну дозу вакцины.
8. Вакцина БЦЖ. Живая лиофильно высушенная в 1,5% растворе глютамата натрия культура
авирулентного штамма M. Bovis BCG. Применяется однократно внутрикожно у новорожденных,
последующие ревакцинации в возрасте 6-7 и 14-15 лет при отрицательной пробе Манту.
Зоонозные инфекции:
1. Чумная живая сухая вакцина. Высушенная живая культура штамма EV. Используется однократно по
эпидемическим показаниям.
2. Туляремийная живая сухая накожная вакцина. Высушенная живая культура штамма F.tularensis
применяетс однократно накожно и внутрикожно детям с 7 лет, ревакцинация через 5 лет.
3. Бруцеллезная лечебная вакцина. Взвесь убитых нагреванием бруцелл.
4. Сибиреязвенная живая вакцина СТИ. Высушенная взвесь живых спор авирулентного бескапсульного
штамма В. Anthracis. Применяют двукратно с интервалом 21 день.
5. Противосибиреязвенный иммуноглобулин.
6. Лептоспирный иммуноглобулин. Для лечения и профилактики.
7. Лептоспирная вакцина. Культуры основных сероваров лептоспир, убитых нагреванием.
8. Вакцина Е сыпнотифозная комбинированная живая сухая. Представляет собой риккетсии Провачека
авирулентного штамма. Для профилактики сыпного тифа у лиц в возрасте 16-60 лет. Иммунитет
развивается через 3-4 недели.